CN102925534A - 油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌nr-sob的检测方法 - Google Patents

油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌nr-sob的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法。本发明属于微生物检测技术领域。油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，包括以下步骤：1）材料清洗：将玻璃器皿、橡胶塞和铝箔盖清洗干净；2）配制NR-SOB测试培养基；3）灭菌：将配制的NR-SOB测试培养基装于器皿中，纱布封口，用蒸汽灭菌锅灭菌；4）除氧、加硫、分装：除氧：将灭菌后的培养基置于厌氧工作站中除氧；Na2S·9H2O母液加入培养基中；分装：用移液器分装进洗净的玻璃瓶内。5）NR-SOB菌检测：采用绝迹稀释法，检测待测水样中细菌的数目。本发明具有操作简单，配制方便，测试便捷，数据准确，可靠性强，经济实用，快速准确，方便用于油田微生物的检测等优点。

Description

油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法
技术领域
本发明属于微生物检测技术领域，特别是涉及一种油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法。
背景技术
目前，在微生物治理油藏硫化氢过程中，一般关注硝酸盐还原菌，利用生物竞争抑制原理，来消除油藏生物成因的硫化氢。随着科技的发展，发现有些油藏含有硫元素代谢相关的其他微生物，如NR-SOB菌，NR-SOB属于一种厌氧微生物，其功能为还原硝酸盐的同时氧化硫离子，故其不仅能消除生物成因的硫化氢，亦能对非生物成因硫化氢进行消除。但其存在培养条件中对氧气含量要求比较苛刻，不解决NR-SOB菌的检测问题就无法解决优化油藏硫化氢治理剂等技术问题。
发明内容
本发明为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法。
本发明的目的是提供一种具有操作简单，配制方便，测试便捷，数据准确，可靠性强，经济实用，快速准确，方便用于油田微生物的检测等特点的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法。
本发明油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是：
油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特点是：检测方包括以下步骤：
1）材料清洗
将玻璃器皿、橡胶塞和铝箔盖清洗干净，空干残水，待用；
2）培养基配制
配制NR-SOB测试培养基：R-SOB培养基中包括组份及其含量：NaHCO3 1.6-2.1g/L，乙酸钠0.6－0.8g/L，KNO3 0.8－1.2g/L，NH4Cl 0.01－0.03g/L，（NH4）2SO4 0.1－0.2g/L，KH2PO4 0.5-0.7g/L，Na2HPO4 0.6-0.8g/L，NaCl 6-8g/L，CaCl2·2H2O 0.2－0.4g/L，MgSO4·7H2O 0.7－0.9g/L，FeCl3 0.0002-0.0003g/L，刃天青0.0005-0.002g/L，半胱氨酸盐酸盐0.4－0.6g/L，微量营养液0.5mL；
微量营养液组成：MnSO4·H2O 2－3g/L，ZnSO4·7H2O 0.4－0.6g/L，CuSO4·5H2O 0.02－0.03g/L，Na2MoO4·2H2O 0.02－0.03g/L，CoCl2·6H2O 0.04－0.05g/L，H2SO40.4-0.6mL/L；
3）灭菌
将配制的NR-SOB测试培养基装于器皿中，纱布封口，用蒸汽灭菌锅灭菌；
4）除氧、加硫、分装
除氧：将灭菌后的培养基置于厌氧工作站中，除氧1h，直至培养基颜色由粉色变为无色；
加硫：1M Na2S·9H2O母液用0.22μm滤膜过滤除菌，加入培养基中，使S2-终浓度为80ppm；
分装：用移液器以9mL/瓶的量装进洗净的玻璃瓶内，盖上橡胶塞和铝箔盖，再用压盖器将其压紧密封；
5）NR-SOB菌检测
测定待测水样中的NR-SOB菌的菌数时，采用绝迹稀释法，将待测水样置于厌氧工作站中，平衡至不含氧气，用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌的数目。
本发明油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法还可以采取如下技术方案：
油田水样中硝酸盐还原所述的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特点是：NR-SOB测试培养基加入NaOH调节溶液pH值7.0-7.5。
所述的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特点是：灭菌时，将配制的培养基装于三角瓶中，用4－8层纱布封口，用高温蒸汽灭菌锅在110－130℃条件下进行高温灭菌20－40分钟。
所述的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特点是NR-SOB菌检测的过程：
（1）将待检测水样置于厌氧工作站，气体置换20-30h，至样品中不含氧气；
（2）准备数支无菌注射器，置于厌氧工作站中备用；
（3）取上述n个检测瓶为一排，依次编上序号1、2、3……；
（4）用上述准备好的注射器取待测水样并注入到1号测试瓶中，充分震荡；
（5）另取一支无菌注射器从震荡后的1号测试瓶内取出液体注入到2号测试瓶内，充分震荡，以此类推到最后一个测试瓶中；
（6）将注入油田水样的NR-SOB菌检测瓶置于厌氧工作站中按规定温度进行培养；
（7）培养过程中，若小瓶中培养基颜色由无色变为红色，说明其中有NR-SOB进行生长；
（8）按照MPN法对NR-SOB的数量进行计算。
本发明具有的优点和积极效果是：
油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法由于采用了本发明全新的技术方案，与现有技术相比，具有以下特点：
（1）本发明所述的用于油田水样中NR-SOB的检测方法，生产过程简单，可靠性强，经济实用。
（2）本发明所生产的NR-SOB测试瓶能够快速准确地测定NR-SOB菌的数量，使用操作简单，方便用于油田微生物的检测。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并详细说明如下：
实施例1
油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，包括以下步骤：
1.NR-SOB菌检测瓶制作：
（1）材料清洗
将10mL玻璃瓶在洗衣粉水中清洗两次，橡胶塞和铝箔盖在洗衣粉水中清洗一次，然后用清水漂清至没有泡沫，再用蒸馏水将玻璃瓶、橡胶塞、铝箔盖清洗干净，空干残水，待用。
（2）培养基配制
在常温常压下，按下表中NR-SOB测试培养基配制说明配制培养基：
NR-SOB培养基（g/L）：NaHCO3 1.9，乙酸钠0.68，KNO3 1，NH4Cl 0.02，（NH4）2SO40.13，KH2PO4 0.6，Na2HPO4 0.7，NaCl 7，CaCl2·2H2O 0.27，MgSO4·7H2O 0.78，Na2S·9H2O 0.6（灭菌后加），0.29g/L FeCl3 1mL，微量营养液0.5mL，刃天青（0.1%w/v）1mL，半胱氨酸盐酸盐0.5。
微量营养液（g/L）：H2SO4 0.5mL，MnSO4·H2O 2.28，ZnSO4·7H2O 0.5，CuSO4·5H2O 0.025，Na2MoO4·2H2O 0.025，CoCl2·6H2O 0.045。
调节溶液的pH值，使其达到7.0-7.5即可。
（3）灭菌
将配制的培养基装于100ml三角瓶中，六层纱布封口，用高温蒸汽灭菌锅在121℃条件下进行高温灭菌30分钟。
（4）除氧、加硫、分装
除氧：将灭菌后的培养基置于厌氧工作站中，除氧1h，直至培养基颜色由粉色变为无色。
加硫：1M Na2S·9H2O母液用0.22μm滤膜过滤除菌，加入培养基中，使S2-终浓度为80ppm。
分装：用移液器以9mL/瓶的量装进洗净的玻璃瓶内，盖上橡胶塞和铝箔盖，再用压盖器将其压紧密封。
完成后即可用于油田水样中NR-SOB的检测。
2.NR-SOB菌检测瓶使用：
采用NR-SOB菌检测瓶测定待测水样中的NR-SOB菌的菌数时，可采用绝迹稀释法原理，将待测水样置于厌氧工作站中，平衡24h，至不含氧气，用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌的数目。可采用以下的方法和步骤：
（1）将待检测水样置于厌氧工作站，气体置换24h，确保样品中不含氧气；
（2）准备数支无菌1mL注射器，置于厌氧工作站中备用；
（3）取上述n个检测瓶为一排，依次编上序号1、2、3……；
（4）用上述准备好的注射器取1mL待测水样并注入到1号测试瓶中，充分震荡50下；
（5）另取一支无菌注射器从震荡后的1号测试瓶内取出1mL液体注入到2号测试瓶内，充分震荡50下，以此类推到最后一个测试瓶中；
（6）将注入油田水样的NR-SOB菌检测瓶置于厌氧工作站中按规定温度进行培养；
（7）培养过程中，若小瓶中培养基颜色由无色变为红色，说明其中有NR-SOB进行生长；
（8）按照MPN法对NR-SOB的数量进行计算。

Claims (4)

1.油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特征是：检测方包括以下步骤：
1）材料清洗
将玻璃器皿、橡胶塞和铝箔盖清洗干净，空干残水，待用；
2）培养基配制
配制NR-SOB测试培养基：NR-SOB培养基中包括组份及其含量：NaHCO3 1.6－2.1g/L，乙酸钠0.6－0.8g/L，KNO3 0.8－1.2g/L，NH4Cl 0.01－0.03g/L，（NH4）2SO4 0.1－0.2g/L，KH2PO4 0.5－0.7g/L，Na2HPO4 0.6－0.8g/L，NaCl 6－8g/L，CaCl2·2H2O 0.2－0.4g/L，MgSO4·7H2O 0.7－0.9g/L，FeCl3 0.0002-0.0003g/L，刃天青0.0005-0.002g/L，半胱氨酸盐酸盐0.4－0.6g/L，微量营养液0.5mL；
微量营养液组成：MnSO4·H2O 2－3g/L，ZnSO4·7H2O 0.4－0.6g/L，CuSO4·5H2O0.02－0.03g/L，Na2MoO4·2H2O 0.02－0.03g/L，CoCl2·6H2O 0.04－0.05g/L，H2SO40.4-0.6mL/L；
3）灭菌
将配制的NR-SOB测试培养基装于器皿中，纱布封口，用蒸汽灭菌锅灭菌；
4）除氧、加硫、分装
除氧：将灭菌后的培养基置于厌氧工作站中，除氧1h，直至培养基颜色由粉色变为无色；
加硫：1M Na2S·9H2O母液用0.22μm滤膜过滤除菌，加入培养基中，使S2-终浓度为80ppm；
分装：用移液器以9mL/瓶的量装进洗净的玻璃瓶内，盖上橡胶塞和铝箔盖，再用压盖器将其压紧密封；
5）NR-SOB菌检测
测定待测水样中的NR-SOB菌的菌数时，采用绝迹稀释法，将待测水样置于厌氧工作站中，平衡至不含氧气，用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌的数目。
2.按照权利要求1所述的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特征是：NR-SOB测试培养基加入NaOH调节溶液pH值7.0-7.5。
3.按照权利要求1所述的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特征是：灭菌时，将配制的培养基装于三角瓶中，用4－8层纱布封口，用高温蒸汽灭菌锅在110－130℃条件下进行高温灭菌20－40分钟。
4.按照权利要求1所述的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特征是：NR-SOB菌检测的过程：
（1）将待检测水样置于厌氧工作站，气体置换20－30h，至样品中不含氧气；
（2）准备数支无菌注射器，置于厌氧工作站中备用；
（3）取上述n个检测瓶为一排，依次编上序号1、2、3……；
（4）用上述准备好的注射器取待测水样并注入到1号测试瓶中，充分震荡；
（5）另取一支无菌注射器从震荡后的1号测试瓶内取出液体注入到2号测试瓶内，充分震荡，以此类推到最后一个测试瓶中；
（6）将注入油田水样的NR-SOB菌检测瓶置于厌氧工作站中按规定温度进行培养；
（7）培养过程中，若小瓶中培养基颜色由无色变为红色，说明其中有NR-SOB进行生长；
（8）按照MPN法对NR-SOB的数量进行计算。
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