CN114752646A - 硫酸盐还原菌的检测方法 - Google Patents

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宋文文
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王�华
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Abstract

本发明涉及一种硫酸盐还原菌的检测方法，包括：将待测样品放入装有培养基的测试瓶形成混合液，密封；对所述放入待测样品的测试瓶灭菌后恒温培养至少14天，通过测试瓶中混合液颜色变化判断待测样品是否含硫酸盐还原菌；所述培养基的组成为：乳酸钠、NH4Cl、CaCl2、K2HPO4、MgSO4、酵母浸膏、(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O，该方法能有效检测出待测样品中的硫酸盐还原菌，且简单易操作。

Description

硫酸盐还原菌的检测方法
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种硫酸盐还原菌的检测方法。
背景技术
硫酸盐还原菌(Sulfate-Reducing Bacteria，简称SRB)是一种腐蚀性微生物，其可通过自身的代谢过程将硫酸根离子或亚硫酸根离子还原为硫离子，产生的硫离子可促进钢铁的腐蚀，对与之接触的金属材料造成严重的损失和威胁，因此，实现对硫酸盐还原菌的有效检测是必要的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种硫酸盐还原菌的检测方法，能有效检测出待测样品中的硫酸盐还原菌，且简单易操作。
本发明的一方面，提供一种硫酸盐还原菌的检测方法，包括：
将待测样品放入装有培养基的测试瓶，密封；
对放入待测样品的测试瓶灭菌后恒温培养至少14天，通过测试瓶中培养基颜色变化判断待测样品是否含硫酸盐还原菌；
培养基的组成为：乳酸钠、NH4Cl、CaCl2、K2HPO4、MgSO4、酵母浸膏、(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O。
本发明通过调整培养基的组成，使得本发明提供的检测方法对硫酸盐还原菌具有较好的检测能力。
具体地，通过测试瓶中培养基颜色变化判断待测样品是否含硫酸盐还原菌的方法为：观察测试瓶内混合液的颜色变化，如果待测样品中含有硫酸盐还原菌，硫酸盐还原菌会在测试瓶内生长代谢产生H2S气体，产生的H2S气体与培养基中的Fe2+反应生成黑色沉淀使测试瓶内混合液变黑，通过观察经培养后的测试瓶内混合液是否变色可以判断待测样品中是否有硫酸盐还原菌。
根据本发明的研究，培养基的pH可以为7.0-7.4，有利于硫酸盐还原菌在培养基中的生长，利于有效检测出样品中的硫酸盐还原菌并缩短培养时间。
根据本发明的进一步研究，培养基中，以质量计：乳酸钠：NH4Cl：CaCl2：K2HPO4：MgSO4：酵母浸膏：(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O＝35:10：1:5:20:10:20，利于保证硫酸盐还原菌的营养环境并使其代谢产物与Fe2+更好的反应，同时控制培养基透明，利于及时观察到测试瓶中培养基的颜色变化。
在本发明的一实施方式中，待测样品在所述培养基中的比例可以为0.14mg/mL-0.14g/mL，在一优选的实施方式中，待测样品在所述培养基中的比例可以为0.14g/mL，利于提高检测的准确性。
根据本发明的研究，待测样品可以为固态，例如可以是油井管管壁的腐蚀产物，能有效检测出井油管管壁腐蚀产物中的硫酸盐还原菌，利于及时采取应对措施，防止油管腐蚀扩大。
为进一步保证硫酸盐还原菌生长的厌氧环境，在将培养基装入测试瓶之前，还包括对测试瓶中的培养基进行除氧。具体地，可以通过通入氮气的方式进行除氧。
在本发明的一实施方式中，测试瓶中培养基的体积占测试瓶体积的0.7倍以下，利于保证硫酸盐还原菌有足够的生长养分，同时为待加入的待测样品预留足够空间。
在本发明的一实施方式中，灭菌可以采用高温灭菌法，灭菌温度可以为120℃以上，灭菌时间不少于15min，优选地，灭菌时间不少于30min。
为保证硫酸盐还原菌在培养基中更好的生长，恒温培养的温度可以为30-38℃。
本发明的实施方案，至少具有如下有益效果：
本发明提供的硫酸盐还原菌的检测方法，能有效检测出待测样品中的硫酸盐还原菌，且简单易操作。
附图说明
图1为装有培养基的测试瓶的示意图；
图2为刚加入待测样品时的测试瓶示意图；
图3为未加入待测样品的测试瓶培养14天后测试瓶的示意图；
图4为加入了待测样品的测试瓶培养14天后测试瓶的示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例和附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例所测定的待测样品为从金属材料(油管)表面直接刮取的腐蚀产物。该腐蚀产物中硫酸盐还原菌的检测过程如下：
(1)制备培养基：①称量3.5g乳酸钠、1g NH4Cl、0.1g CaCl2、0.5g K2HPO4、2gMgSO4、1.0g酵母浸膏、2g(NH4)2Fe(SO4)2.6H2O；②将上述试剂溶解在去离子水中，定容为1000mL，形成混合液；③用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节混合液pH至7.2±0.2；④将混合液分装在500mL广口瓶中，每瓶不超过350mL，瓶口塞上已打孔的橡胶塞；⑤对装入广口瓶中的混合液通氮气连续除氧2小时；
(2)向测试瓶中盛装培养基：①将7mL制备好的培养基加入到容积为10mL的测试瓶内；②用恒温箱将测试瓶加热120℃灭菌15分钟；③将灭菌的测试瓶冷却至常温备用，制备好的测装有培养基的测试瓶如图1所示；
(3)硫酸盐还原菌检测：①将待测样品(1g)加入到上述装有培养基的测试瓶内，加入待测样品后的测试瓶如图2所示；②将加入待测样品后的测试瓶放入恒温(30±1℃)生化培养箱中连续培养14天；
取出培养后的测试瓶，观察混合液颜色，测试瓶内混合液变为了黑色(如图4所示)，说明所检测的腐蚀产物中含有硫酸盐还原菌；
按照上述过程，共测试3次，该3次测定结果一致。
对比例1
该对比例1与实施例1的区别在于，步骤(3)中，没有向测试瓶中加待测样品，其余步骤及条件与实施例1相同。培养14天后测试瓶内的颜色变化情况如图4所示，可以看到，该对比例中的只装有培养基的测试瓶没有颜色变化。
最后应说明的是：以上各实验例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实验例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实验例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实验例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种硫酸盐还原菌的检测方法，其特征在于，包括：
将待测样品放入装有培养基的测试瓶形成混合液，密封；
对所述放入待测样品的测试瓶灭菌后恒温培养至少14天，通过测试瓶中混合液颜色变化判断待测样品是否含硫酸盐还原菌；
所述培养基的组成为：乳酸钠、NH4Cl、CaCl2、K2HPO4、MgSO4、酵母浸膏、(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述培养基的pH为7.0-7.4。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述培养基中，以质量计：乳酸钠：NH4Cl：CaCl2：K2HPO4：MgSO4：酵母浸膏：(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O＝35:10:1:5:20:10:20。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品在所述培养基中的比例为0.14mg/mL-0.14g/mL。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，待测样品为固态。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在将培养基装入测试瓶之前，还包括对测试瓶中的培养基进行除氧。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述测试瓶中培养基的体积占测试瓶体积的0.7倍以下。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述灭菌采用高温灭菌法，灭菌温度为120℃。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述灭菌时间为不少于15min。
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述恒温培养的温度为30-38℃。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN110577889A (zh) * 2018-06-08 2019-12-17 艾斯丘莱普股份公司 参考测试体、用途、测试室和方法

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