CN104450506B - 厌氧血培养基、培养瓶及培养瓶的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种厌氧血培养基、由此种培养基配制的培养瓶以及该培养瓶的培养方法，本发明在培养基中新增加了葡萄糖氧化酶和过氧化物酶这两种物质，该物质能去除培养基中的氧气以及代谢过程中产生的对细菌有毒害的过氧化氢及其它细胞毒性物质，解决了传统方法中存在的阳性检出率低，生产复杂，成本高的问题。

Description

厌氧血培养基、培养瓶及培养瓶的制备方法
技术领域
本发明涉及医药化学领域，具体地，涉及一种厌氧血培养基、由此种培养基合成的培养瓶以及该培养瓶的培养方法。
背景技术
传统厌氧血培养瓶是通过气体置换、培养基中添加还原剂的方法来除去血培养瓶的氧，降低氧化还原电势，创造厌氧菌良好的生长环境。传统方法生产的血培养瓶氧含量依然偏高、添加的部分还原剂对厌氧菌有不同程度的抑制作用导致阳性检出率偏低，生产成本较高等。本法系在培养基中添加葡萄糖氧化酶以及过氧化氢酶用于去除培养基中的氧气以及代谢过程中产生的对细菌有毒害的过氧化氢等代谢产物。此法生产的培养基中氧含量极低、对细菌几乎无抑制作用，故厌氧菌阳性检出率高，生产过程简单，无需大型设备，生产成本低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种厌氧血培养基、由此种培养基合成的培养瓶以及该培养瓶的培养方法，采用这种培养基制备出来的培养瓶解决了上述传统方法存在的阳性检出率低，生产复杂，成本高的问题。
本发明解决上述问题所采用的技术方案是：
厌氧血培养瓶的培养基，培养基的成分包括A、B两大组份：A组的重量组份为酪蛋白酶水解物10-20份，酵母浸粉5-15份，大豆蛋白胨3-10份，葡萄糖3-20份，磷酸氢二钠2-10份，磷酸二氢钾1-4份，枸橼酸钠2-5份，还原性铁粉1-4份，琼脂粉2-5份，碳酸氢钠1-4份，硫乙醇酸钠1-2.5份；B组的重量组份为聚茴香脑磺酸钠0.1-0.4份，对氨基苯甲酸0.03-0.12份，葡萄糖氧化酶0.005-0.02份，过氧化氢酶0.005-0.02份,氯化血红素0.02-0.05份，氧化性辅酶Ⅰ0.02-0.05份。
进一步的，培养基A的重量组份为：酪蛋白酶水解物13-17份，酵母浸粉8-12份，大豆蛋白胨5-8份，葡萄糖7-12份，磷酸氢二钠4-6份，磷酸二氢钾2-3份，枸橼酸钠3-4份，还原性铁粉2-3份，琼脂粉3-4份，碳酸氢钠2-3份，硫乙醇酸钠1.5-2份；
B的重量组份为：聚茴香脑磺酸钠0.2-0.3份，对氨基苯甲酸0.06-0.09份，葡萄糖氧化酶0.01-0.015份，过氧化氢酶0.01-0.015份,氯化血红素0.03-0.04份，氧化性辅酶Ⅰ0.03-0.04份。
培养基的A组份的pH值在室温下为7.2±0.2。
包括前面所述的培养基和将培养基溶解的蒸馏水。蒸馏水的添加量只需要将培养基溶解即可。所述蒸馏水为双蒸水。
一种厌氧血培养瓶的培养方法，包括以下几个步骤：
（1）将A组用蒸馏水溶解后经92-110kPa蒸汽灭菌后冷却到32℃-40℃待用；
（2）将B组用蒸馏水溶解后经0.22μm孔径的滤膜无菌过滤后待用；
（3）将上述处理后的A组和B组同时分别分装到培养瓶中，并立即具塞密封。
酪蛋白酶水解物、酵母浸粉、多价蛋白胨、大豆蛋白胨、葡萄糖、氯化血红素、氧化性辅酶Ⅰ等提供细菌生长所需的氮源、碳源和生长因子；氨基苯甲酸、聚茴香脑磺酸钠可以中和标本中的抗生素，提高厌氧菌阳性检出率，枸橼酸钠、聚茴香脑磺酸钠能防止血液标本凝血，磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成的缓冲体系能防止细菌生长代谢过程中培养基PH发生较大变化，硫乙醇酸钠作为无氧指示剂，碳酸氢钠可为细菌生长提供必要二氧化碳，葡萄糖氧化酶可氧化葡萄糖生成过氧化氢和葡糖酸，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下进一步分解成氧气和水，过氧化氢酶还能分解细胞毒性物质。若结合传感技术及荧光技术可生产自动血培养仪专用血培养瓶，缩短检出时限。
本发明在培养基中新增加了葡萄糖氧化酶和过氧化物酶这两种物质，而这两种物质能去除培养基中的氧气以及代谢过程中产生的对细菌有毒害的过氧化氢及其它细胞毒性物质，解除代谢抑制，其他除氧剂不具有此项功能。在添加这两种物质的基础上，将各种营养成分合理搭配，经过无数次搭配创新实验，在保证含有各种细菌生长必须的生长因子以促进细菌生长的同时，还能够中和标本中的抗生素解除抗生素的干扰（聚茴香脑磺酸钠和对氨基苯甲酸的作用），具有突出的实质性特点和显著的进步性。
综上，本发明的有益效果是：
1、本发明在培养基中新增加了葡萄糖氧化酶和过氧化物酶这两种物质，该物质能去除培养基中的氧气以及代谢过程中产生的对细菌有毒害的过氧化氢及其它细胞毒性物质，解决了传统方法中存在的阳性检出率低，生产复杂，成本高的问题。
2、本发明的厌氧血培养瓶比传统厌氧血培养瓶氧含量低50%以上，并且稳定，阳性检出率比传统厌氧血培养瓶高20%以上。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
厌氧血的培养基A组分为：酪蛋白酶水解物10g，酵母浸粉5g，大豆蛋白胨3g-，葡萄糖3g，磷酸氢二钠2g，磷酸二氢钾1g，枸橼酸钠2g，还原性铁粉1g，琼脂粉2g，碳酸氢钠1g，硫乙醇酸钠1g；
Ｂ组分为：聚茴香脑磺酸钠（SPS）0.1g，对氨基苯甲酸（PABA）0.03g，葡萄糖氧化酶（gOD）5.0mg，过氧化氢酶（CAT）5.0mg,氯化血红素20.0mg，氧化性辅酶Ⅰ（NAD）20.0mg。
实施例1制得的厌氧血培养瓶的氧含量为200-400ppm，比传统厌氧血培养瓶氧含量（市面上的为400-1000ppm）低50%以上，并且稳定，阳性检出率比传统厌氧血培养瓶高20%以上。
实施例2
厌氧血的培养基A组分为：酪蛋白酶水解物20g，酵母浸粉15g，大豆蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氢二钠10g，磷酸二氢钾4g，枸橼酸钠5g，还原性铁粉4g，琼脂粉5g，碳酸氢钠4g，硫乙醇酸钠2.5g；
Ｂ组分为聚茴香脑磺酸钠（SPS）0.4g，对氨基苯甲酸（PABA）0.12g，葡萄糖氧化酶（gOD）10.0g，过氧化氢酶（CAT）10.0g,氯化血红素50.0mg，氧化性辅酶Ⅰ（NAD）50.0mg。
实施例2制得的厌氧血培养瓶的氧含量为200-400ppm，比传统厌氧血培养瓶氧含量（市面上的为400-1000ppm）低50%以上，并且稳定，阳性检出率比传统厌氧血培养瓶高20%以上。
实施例3
厌氧血的培养基A组分为：酪蛋白酶水解物13g酵母浸粉8g，大豆蛋白胨5g，葡萄糖7g，磷酸氢二钠4g，磷酸二氢钾2g，枸橼酸钠3g，还原性铁粉2g，琼脂粉3g，碳酸氢钠2g，硫乙醇酸钠1.5g；
Ｂ组分为：聚茴香脑磺酸钠（SPS）0.2g，对氨基苯甲酸（PABA）0.06g，葡萄糖氧化酶（gOD）20.0mg，过氧化氢酶（CAT）20.0mg,氯化血红素30.0mg，氧化性辅酶Ⅰ（NAD）30.0mg。
实施例3制得的厌氧血培养瓶的氧含量为200-400ppm，比传统厌氧血培养瓶氧含量（市面上的为400-1000ppm）低50%以上，并且稳定，阳性检出率比传统厌氧血培养瓶高20%以上。
实施例4
厌氧血的培养基A组分为：酪蛋白酶水解物酪蛋白酶水解物17g，酵母浸粉12g，大豆蛋白胨8g，葡萄糖12g，磷酸氢二钠6g，磷酸二氢钾3g，枸橼酸钠4g，还原性铁粉3g，琼脂粉4g，碳酸氢钠3g，硫乙醇酸钠2g；
Ｂ组分为：聚茴香脑磺酸钠（SPS）0.3g，对氨基苯甲酸（PABA）0.09g，葡萄糖氧化酶（gOD）15.0mg，过氧化氢酶（CAT）15.0mg,氯化血红素40.0mg，氧化性辅酶Ⅰ（NAD）40.0mg。
实施例4制得的厌氧血培养瓶的氧含量为200-400ppm，比传统厌氧血培养瓶氧含量（市面上的为400-1000ppm）低50%以上，并且稳定，阳性检出率比传统厌氧血培养瓶高20%以上。
实施例5
一种厌氧血培养瓶，包括实施例1-实施例4的培养基和将培养基溶解的蒸馏水，蒸馏水为双蒸水。
厌氧血培养瓶的培养方法：
将A组份加入900mL蒸馏水加热搅拌使其充分溶解，通过往溶液中添加酸性（HCL）或者碱性物质（NaOH）调整pH值使其在25℃下最终PH值为7.2±0.2，再通过90-110kPa高压蒸汽灭菌，冷却到32-40℃待分装；
将B组份加入100mL蒸馏水完全溶解后经装有0.22um孔径的滤膜无菌过滤器过滤后转移到无菌容器中待分装；
分装：需要在超净工作台内进行，A组与B组分别用分装装置同步分装到无菌培养瓶中，用此培养基配方及培养瓶生产工艺生产的厌氧血培养瓶如实施例1-实施例4的氧含量（200-400ppm）均比传统厌氧血培养瓶氧含量（经测试为400-1000ppm）低50%以上，并且稳定，阳性检出率能达到91%比传统厌氧血培养瓶高20%以上。同步分装A、B两组份而不需经过分别分装增加工序和污染的可能。
如上所述，可较好的实现本发明。

Claims (6)

1.厌氧血培养瓶的培养基，其特征在于，培养基的成分包括A、B两大组份：A组的重量组份为酪蛋白酶水解物10-20份，酵母浸粉5-15份，大豆蛋白胨3-10份，葡萄糖3-20份，磷酸氢二钠2-10份，磷酸二氢钾1-4份，枸橼酸钠2-5份，还原性铁粉1-4份，琼脂粉2-5份，碳酸氢钠1-4份，硫乙醇酸钠1-2.5份；B组的重量组份为聚茴香脑磺酸钠0.1-0.4份，对氨基苯甲酸0.03-0.12份，葡萄糖氧化酶0.005-0.02份，过氧化氢酶0.005-0.02份,氯化血红素0.02-0.05m份，氧化性辅酶Ⅰ0.02-0.05份。
2.根据权利要求1所述的厌氧血培养瓶的培养基，其特征在于，培养基A的重量组份为：酪蛋白酶水解物13-17份，酵母浸粉8-12份，大豆蛋白胨5-8份，葡萄糖7-12份，磷酸氢二钠4-6份，磷酸二氢钾2-3份，枸橼酸钠3-4份，还原性铁粉2-3份，琼脂粉3-4份，碳酸氢钠2-3份，硫乙醇酸钠1.5-2份；
B的重量组份为：聚茴香脑磺酸钠0.2-0.3份，对氨基苯甲酸0.06-0.09份，葡萄糖氧化酶0.01-0.015份，过氧化氢酶0.01-0.015份,氯化血红素0.03-0.04份，氧化性辅酶Ⅰ0.03-0.04份。
3.根据权利要求1所述的厌氧血培养瓶的培养基，其特征在于，培养基的A组份的pH值在室温下为7.2±0.2。
4.一种厌氧血培养瓶，其特征在于，包括权利要求1或2或3所述的培养基和将培养基溶解的蒸馏水。
5.根据权利要求4所述的一种厌氧血培养瓶，其特征在于，所述蒸馏水为双蒸水。
6.如权利要求5所述的一种厌氧血培养瓶的培养方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
（1）将A组用蒸馏水溶解后经92-110kPa蒸汽灭菌后冷却到32℃-40℃待用；
（2）将B组用蒸馏水溶解后经0.22μm孔径的滤膜无菌过滤后待用；
（3）将处理后的上述A组和B组同时分别分装到培养瓶中，并立即具塞密封。
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