CN104326790A - 一种野外食用菌菌种组织分离的培养基及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明为一种用于野外食用菌菌种组织分离的培养基及制备方法，按照以下配方配制基础培养基：按照质量比计算，20~30份葡萄糖、5~7份蛋白胨、2~5份磷酸二氢钾、1~3份硫酸镁、15~20份琼脂粉和1000份水；在基础培养基中，按照重量百分比浓度，使得培养基中还含有0.05％～0.20％的抗霉菌药物；加入抗霉菌药物且经过灭菌后冷却的基础培养基中，按照每升培养基中还分别含有500单位~10000单位的两种抗生素；搅拌均匀后在无菌条件下趁热分装带盖塑料试管，冷却备用。通过本发明培养基采集的野生种源材料返回实验室后活力强，带杂菌少，易于提纯，是野外食用菌资源获得的可靠有效技术手段，具有极强的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及北冬虫夏草加工领域，具体地来说为一种用于野外食用菌菌种组织分离的培养基及制备方法。
背景技术
食用菌菌种是重要的战略资源，野生食用菌资源是获得新品种的重要来源，组织分离技术是获得野外食用菌种源的常用方法，由于没有无菌操作条件，在操作过程中经常发生细菌及霉菌污染，常常把通过作用于细菌的某个或某些代谢环节而发挥选择性抑菌或杀菌的作用。食用菌组织分离技术获得的菇体组织块带回实验室后出现腐烂、霉变，根本无法提纯，难以获得菌种菌丝的现象，使野外食用菌种源无法获得有效的提取和保存。
发明内容
针对现有技术中存在的野生食用菌组织分离后出现腐烂、霉变，根本无法提纯，难以获得菌种菌丝的现象，本发明要解决的技术问题在于提供一种野外食用菌菌种组织分离的培养基及制备方法。
本发明采用如下的技术方案：
一种野外食用菌菌种组织分离的培养基，按照质量比计算，培养基中含20~30份葡萄糖、5~7份蛋白胨、2~5份磷酸二氢钾、1~3份硫酸镁、15~20份琼脂粉和1000份水；按照重量百分比浓度，每升培养基中还含有0.05％～0.20％的抗霉菌药物，每升培养基中含500单位~10000单位的青霉素和500单位~10000单位的链霉素。
优选地，按照质量计算，所述培养基含20份葡萄糖、5份蛋白胨、2份磷酸二氢钾、1份硫酸镁、18份琼脂粉和1000份水。
进一步地，抗霉菌药物选自多菌灵。
本发明还提供了一种野外食用菌菌种组织分离的培养基的制备方法，包括以下步骤：
1）按照以下配方配制基础培养基：按照质量比计算，20~30份葡萄糖、5~7份蛋白胨、2~5份磷酸二氢钾、1~3份硫酸镁、15~20份琼脂粉和1000份水；
2）在基础培养基中，按照重量百分比浓度，使得培养基中还含有0.05％～0.20％的抗霉菌药物；
3）在加入抗霉菌药物且经过灭菌后冷却的基础培养基中，培养基中再分别加入青霉素和链霉素，其中青霉素和链霉素在培养基中的浓度均为每升含500单位~10000单位；
4）搅拌均匀后在无菌条件下趁热分装带盖塑料试管，每管装总容积的三分之一，扣盖、摆斜面，冷却备用。
进一步地，步骤2）中，添加了抗霉菌药物的基础培养基在温度121℃,经60分钟灭菌。
进一步地，步骤3）中等待基础培养基冷却到40℃~35℃时快速加入抗生素。
进一步地，所述抗霉菌药物选自多菌灵。
本发明具有如下的优点及有益效果：
1、本发明所添加的青霉素和链霉素对大多数细菌具有明显杀灭和抑制作用；所添加的多菌灵对青霉﹑木霉、链孢霉等主要霉菌抑菌能力显著，且此范围内对大部分食用菌菌落生长及敏感性无显著影响 ；
2、本发明在专利在培养基制作方法所选用的条件上充分考虑了药物的有效性和稳定性，由于多菌灵耐热能力强，因此，采取在培养基灭菌前加入方法，添加多菌灵药物的培养基在灭菌温度121℃,经60分钟灭菌。由于青霉素和链霉素对培养基热稳定性差，灭菌后待培养基冷却到40℃~35℃时快速加入青霉素和链霉素，过早会导致抗生素过热分解失效，过晚培养基会因温度低而凝固无法使药物均匀混入。
3、本专利产品经多位野外采集人员赴西藏雅鲁藏布大峡谷科考中实地检验，效果良好，采集的野生种源材料返回实验室后活力强，带杂菌少，易于提纯，是野外食用菌资源获得的可靠有效技术手段，具有极强的应用价值 。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细地说明：
实施例1
步骤1）按照以下配方配制基础培养基：按照质量计算，取20克葡萄糖、5g蛋白胨、2克磷酸二氢钾、1克份硫酸镁、18克琼脂粉和1000克水；充分混合后待用；
步骤2）在基础培养基中，按照重量百分比浓度，使得最终培养基中还含有0.05％的抗霉菌药物加入多菌灵；使得多菌灵在培养基中的重量百分比浓度为0.05%，添加了抗霉菌药物的基础培养基在温度121℃，经60分钟灭菌；
步骤3）等待基础培养基冷却到40℃时快速加入抗生素，培养基中再分别加入青霉素和链霉素，在每升培养基中分别加入等量的500单位（U，国际单位）的青霉素和链霉素；
步骤4）搅拌均匀后在无菌条件下趁热分装带盖塑料试管，每管装总容积的三分之一，扣盖、摆斜面，冷却备用。
采用了带盖子的20毫升耐高温塑料管，管子封闭性好，不破碎、携带方便，特别适合野外使用。
经多位野外采集老师赴西藏雅鲁藏布大峡谷科考中实地检验，效果良好，采集的野生种源材料返回实验室后活力强，带杂菌少，易于提纯，是野外食用菌资源获得的可靠有效技术手段，具有极强的应用价值。
实施例2
步骤1）按照以下配方配制基础培养基：按照质量计算，取30克葡萄糖、7g蛋白胨、5克磷酸二氢钾、3克份硫酸镁、20克琼脂粉和1000克水；充分混合后待用；
步骤2）在基础培养基中，按照重量百分比浓度，使得培养基中还含有0.20％的抗霉菌药物加入多菌灵；添加了抗霉菌药物的基础培养基在温度121℃，经60分钟灭菌
步骤3）等待基础培养基冷却到35℃时快速加入抗生素，在每升培养基中分别加入等量的5000单位（U，国际单位）的青霉素和链霉素；
步骤4）搅拌均匀后在无菌条件下趁热分装带盖塑料试管，每管装总容积的三分之一，扣盖、摆斜面，冷却备用。
采用了带盖子的20毫升耐高温塑料管，管子封闭性好，不破碎、携带方便，特别适合野外使用。
经多位野外采集老师赴西藏雅鲁藏布大峡谷科考中实地检验，效果良好，采集的野生种源材料返回实验室后活力强，带杂菌少，易于提纯，是野外食用菌资源获得的可靠有效技术手段，具有极强的应用价值。
实施例3
与实施例1的不同之处在于，步骤1）按照以下配方配制基础培养基：按照质量计算，取25克葡萄糖、6g蛋白胨、4克磷酸二氢钾、2克份硫酸镁、15克琼脂粉和1000克水；充分混合后待用；
步骤2）在基础培养基中，按照重量百分比浓度，使得培养基中还含有0.10％的抗霉菌药物加入多菌灵；添加了抗霉菌药物的基础培养基在温度121℃，经60分钟灭菌
步骤3）等待基础培养基冷却到38℃时快速加入抗生素，在每升培养基中分别加入等量的10000单位（U，国际单位）的青霉素和链霉素；
步骤4）搅拌均匀后在无菌条件下趁热分装带盖塑料试管，每管装总容积的三分之一，扣盖、摆斜面，冷却备用。
采用了带盖子的20毫升耐高温塑料管，管子封闭性好，不破碎、携带方便，特别适合野外使用。
经多位野外采集老师赴西藏雅鲁藏布大峡谷科考中实地检验，效果良好，采集的野生种源材料返回实验室后活力强，带杂菌少，易于提纯，是野外食用菌资源获得的可靠有效技术手段，具有极强的应用价值。
Claims (7)
1.一种野外食用菌菌种组织分离的培养基，其特征在于，按照质量比计算，培养基中含20~30份葡萄糖、5~7份蛋白胨、2~5份磷酸二氢钾、1~3份硫酸镁、15~20份琼脂粉和1000份水；按照重量百分比浓度，每升培养基中还含有0.05％～0.20％的抗霉菌药物，每升培养基中含500单位~10000单位的青霉素和500单位~10000单位的链霉素。
2.按照权利要求1所述的野外食用菌菌种组织分离的培养基，其特征在于，按照质量计算，所述培养基含20份葡萄糖、5份蛋白胨、2份磷酸二氢钾、1份硫酸镁、18份琼脂粉和1000份水。
3.按照权利要求1或2所述的野外食用菌菌种组织分离的培养基，其特征在于，抗霉菌药物选自多菌灵。
4.一种权利要求1所述的野外食用菌菌种组织分离的培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）按照以下配方配制基础培养基：按照质量比计算，20~30份葡萄糖、5~7份蛋白胨、2~5份磷酸二氢钾、1~3份硫酸镁、15~20份琼脂粉和1000份水；
2）在基础培养基中，按照重量百分比浓度，使得培养基中还含有0.05％～0.20％的抗霉菌药物；
3）在加入抗霉菌药物且经过灭菌后冷却的基础培养基中，培养基中再分别加入青霉素和链霉素，其中青霉素和链霉素在培养基中的浓度均为每升含500单位~10000单位；
4）搅拌均匀后在无菌条件下趁热分装带盖塑料试管，每管装总容积的三分之一，扣盖、摆斜面，冷却备用。
5.按照权利要求4所述的野外食用菌菌种组织分离的培养基的制备方法，其特征在于，步骤2）中，添加了抗霉菌药物的基础培养基在温度121℃,经60分钟灭菌。
6.按照权利要求4所述的野外食用菌菌种组织分离的培养基的制备方法，其特征在于，步骤3）中等待基础培养基冷却到40℃~35℃时快速加入抗生素。
7.按照权利要求4或5所述的野外食用菌菌种组织分离的培养基的制备方法，其特征在于，所述抗霉菌药物选自多菌灵。
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