CN100348730C - 一种医用胶原蛋白粉剂的制备方法 - Google Patents
一种医用胶原蛋白粉剂的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种医用胶原蛋白粉的制备方法，其特点是采用纯化猪皮为原料，经预处理、分割、冻干、粉碎、浸酸，在温度为4-15℃，用0.5-4.0wt%的复合酶皮胶原处理剂E消化4-12h，得到胶原蛋白的粗制品，再经精制、分级、干燥，获得高纯度的医用胶原蛋白粉剂。这种医用胶原蛋白粉剂用于制备敷料膜、止血海绵、组织工程支架材料、药物缓释载体和医用纤维。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种医用胶原蛋白粉剂的制备方法，属于生物医学材料的制备领域。
二、背景技术
胶原蛋白是一种细胞外基质，属于结构蛋白质，约占哺乳动物蛋白质总量的1/3，是构成皮肤、韧带、软骨、肌腱等结缔组织或器官的主要成分。目前确认的胶原蛋白有26型，其中以I型含量最多(Pace James M，Corrado Marcella，MisseroCaterina.Identification，characterization and expression analysis of a newfibrillar collagen gen.Matrix Biology，2003，1(22)：3-14)。胶原蛋白所具有的特殊的四级结构决定了其独特的理化性质和优良的生物相容性、可降解性、低免疫原性以及细胞适应性、细胞增殖和促进血凝等性能(但卫华，王坤余，曾睿，等，胶原的医学应用及其发展前景，《生物医学工程与临床》.2004，8(1)：45-48)。
近年来在国内外，胶原蛋白的研究主要集中在新型胶原蛋白的发现及性能研究、胶原蛋白的分离工艺以及提高胶原制品的纯度、胶原蛋白的化学修饰、交联以及复合胶原蛋白材料的开发和利用等方面(周文常，但卫华，廖隆理，等.胶原蛋白及其与高聚物形成的复合材料在医学中的应用.皮革科学与工程，2004，2(14)：30-34)。随着对胶原以增殖细胞为首的许多生物功能的认识，使得胶原基生物医学材料格外引人注目，在医学领域，除外科用敷料膜、止血海绵、手术缝合线、止血剂外，国外研究者主要集中于研究利用胶原蛋白制备对人体软组织具有扩张功能的胶原注射液，胶原基药物输送系统，皮肤、骨骼、心血管、食管、气管的替代材料等，目前国外已有较多胶原基医学材料的研究和专利报道(陈静涛，徐政，顾其胜.胶原蛋白研发的最新进展.《上海生物医学工程》杂志，2004，25(2)：52-55，47)，而国内的研究论证与临床应用还处于起步阶段(穆畅道.胶原蛋白的提取及其生物膜材料研究.四川大学博士后论文，2003)。
医用胶原蛋白的制备具有广阔的市场前景。据统计报道，胶原蛋白仅就医用材料方面的应用，2003年销售已超过40亿美金，而且每年正在以12％的速率增长。胶原蛋白的独特性能以及其广阔的市场应用前景将促使人们对胶原蛋白及其制品进行广泛深人的研究，胶原蛋白将会更广泛地造福人类。
医用胶原蛋白生产关键技术包括原料的选取、胶原蛋白的提取、纯化、改性等。胶原蛋白制备技术的历史较长，早在1929年就有以磷酸溶解动物骨组织提取胶原的专利技术(徐新宇.胶原的提取、改性、交联及其应用.透析与人工器官，2004，3(15)：38-47)。到目前为止，胶原制备仍以从新鲜组织中提取为主。根据国内外的大量文献报道，到目前为止应用于商业上的胶原制备仅为I型胶原，且只有从动物的皮肤或跟腱中提取出的I型胶原的价格人们才可以接受。其它类型的胶原仅在研究中制备，由于价格昂贵都不宜于大量生产。
由于胶原不溶于水，要将它从生物组织中分离并提取是非常困难的。尤为重要的是，在提取过程中需要很好地保持胶原的三股螺旋结构，不致因过度处理使胶原进一步分解为明胶而丧失胶原所具备的机械强度，这就使得胶原提取的难度更大。
综上所述，现有技术存在以下不足：
1.仅考虑了以牛皮、牛肌腱及鼠尾腱为原料，其资源有限，且存在携带疯牛病病毒的风险；
2.单一采取酶法提取的居多，提取工艺复杂、周期长；
3.产率低，一般在16％以下(干重计)；
4.生产成本高。
三、发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种医用胶原粉剂的制备方法，其特点是以价廉易得的纯化猪皮为原料，经前处理后，将纯化猪皮冻干、粉碎，再采用复合酶皮胶原处理剂E进行提取、精制和干燥，得到医用胶原粉剂。
本发明的目的由以下技术措施实现，其中所述原材料份数除特别说明外，均为重量份数。
医用胶原蛋白的制备方法含有以下步骤：
(1)预处理：取纯化猪皮100重量份，放入转鼓中，加入温度为32-40℃的去离子水300-600重量份，氯化钠3-10重量份，转动20-150min；控干废液，加入温度为32-40℃的去离子水300-600重量份，平平加1-5重量份，转动20-150min；控干废液，加入去离子水300-600重量份，转动30-40min；控干废液，加入去离子水300-600重量份，转动30-40min；
(2)分割：从转鼓中取出预处理过的皮坯，离心机脱水，然后分割成2-6×2-6cm的小块；
(3)冻干：将小皮块放入冻干机中，降温参数定为下降2℃/min，直至冷阱温度降至-34℃，抽真空至45-150mbar保持24h，然后缓慢升温8-15h，使冷阱温度升至15-30℃，完成冻干过程；
(4)粉碎：在碎皮机上将小皮块粉碎成小皮粒，其粒度要求为：0.5-1.0×0.5-1.0mm；
(5)浸酸：取100重量份的干燥小皮粒放于转鼓中，加入1000-5000重量份的三羟甲基氨基甲烷-盐酸盐，pH为7.4的缓冲液，用冰块调节鼓内温度达到4-15℃，间歇转动，转动3min/30min×2-9次，然后连续转动10min，再间歇转动，转动3min/30min×1-6次，静置30min，用耐酸真空泵吸出转鼓中上层清液，再向转鼓中加入HAc，调节pH＝1.8-2.8，转鼓内温度为4-15℃，静置浸泡1-4h；
(6)酶消化：调节并保持转鼓内温度达到4-15℃，加入0.5-4.0重量份的复合酶皮胶原处理剂E，连续转动4-12h；
(7)一次盐析：用耐酸真空泵将酶消化液泵入离心机中进行离心分离，并用耐酸真空泵将上清液泵入转鼓中，用NaOH溶液调整清液的pH值至7.2-8.2，转动中，缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到0.8-1.8mol/L，静置6-14h；
(8)酸溶解：用耐酸真空泵将盐析液泵入离心机中进行离心分离，取离心机中的沉淀物，弃上清液，并将离心机中的沉淀物移入转鼓中的事先已经配制好的0.1-1.2MHAc溶液中，转动10-40min，获得粗制胶原蛋白溶液；
(9)二次盐析：将粗制胶原蛋白溶液用酸调节pH为1.8-2.8，在离心机中离心分离，用耐酸真空泵将此清液泵入另一转鼓中，转动中，向转鼓中的清液中缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到0.8-1.8mol/L，然后，用NaOH溶液调整清液的pH值至6.8-7.4，静置8-18h；
(10)酸溶解：用耐酸真空泵泵出上清液，弃之，留取沉淀物；转动中，从转鼓轴孔缓慢加入0.2-0.8 M HAc溶液100-300重量份，转动10-40min；
(11)分级：将所得到的胶原蛋白溶液用去离子水稀释1-5倍，通过0.2μm的微孔滤膜除去微粒，然后采用凝胶过滤色层分离法进行分级；
(12)透析：分别将不同级分的胶原蛋白溶液倒入36mm透析袋，透析分子量10kD，先对0.04mol/L和0.02mol/L的磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液透析2天，再对蒸馏水透析3天；
(13)喷雾干燥：分别将不同级分的胶原蛋白溶液用0.2-0.8M HAc溶液溶解成浓度小于0.5wt％的稀溶液，在温度低于60℃的条件下喷雾干燥，称重包装后密封干燥保存。
复合酶皮胶原处理剂E的配比为：5万单位的3350酸性蛋白酶3.2重量份，0.4万单位的胃蛋白酶0.8重量份，0.4万单位的木瓜蛋白酶1.2重量份，膨润土1.8重量份，麦麸5.5重量份。
微孔滤膜为混合纤维素酯制作的微孔滤膜。
转鼓是悬挂式木制转鼓或不锈钢转鼓。
透析袋为化学纤维制作。
采用本发明的方法处理得到的医用胶原蛋白粉剂，其主要性能如下：
1.外观：白色粉末，无肉眼可见之杂质；
2.水分：≤10％(m/m)；
3.重金属含量：≤10μg/g(m/m)；
4.吸水量：应不小于粉剂材料自身重量的2.0倍；
5.灰分：≤1％(m/m)；
6.无菌试验：应无菌，无菌有效期应不少于1年；
7.纯度：≥90％(m/m)；
8.pH值：5.0-7.0
9.氨基酸分析：应不含有半胱氨酸和色氨酸；
10.羟脯氨酸分析：含量应不小于总蛋白含量的8％(m/m)；
11.生物学性能：
胶原蛋白粉剂应按照GB/T 16886.1的要求进行生物学评价，应不释放出对人体有不良作用的物质。
(1)细胞毒性试验：细胞毒性反应不大于1级。
(2)致敏试验：无致敏反应。
(3)皮内反应试验：原发性皮肤刺激指数(PII)为0.0。
(4)肌肉植入试验：植入4周后组织反应与阴性对照无显著差异。
采用本发明的方法处理得到的医用胶原蛋白粉剂，用于：
1.制备生物医用膜材料；
2.制备医用纤维材料；
3.药物缓释材料；
4.止血材料。
本发明与现有技术相比，具有以下优点：
1.直接利用价廉易得、来源广泛的猪皮为原料制备医用胶原蛋白，克服了采用牛腱、鼠尾腱制备医用胶原蛋白的资源匮乏的问题，也可以避免采用牛皮为原料制备医用胶原蛋白可能携带疯牛病病毒的风险；
2.采用复合酶皮胶原处理剂对猪皮进行酶消化，反应速度快，产率高，能够得到预期分子量及其分布的胶原蛋白，提高了消化过程的可控性；
3.整个过程在较低的温度下进行，最大限度地维持了胶原蛋白的生物活性；
4.操作简单，工艺条件易于满足，运行成本低，生产周期短；
5.提取过程无“三废”产生，生产过程属于环境友好型。
四、具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是，本实施例只用于对本发明进行进一步说明，而不能理解为对本发明的保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述发明的内容作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
(1)预处理：取纯化猪皮100重量份，放入转鼓中，加入温度为32℃的去离子水300重量份，氯化钠4重量份，转动60min；控干废液，加入温度为32℃的去离子水300重量份，平平加1重量份，转动60min；控干废液，加入去离子水300重量份，转动30min；控干废液，加入去离子水300重量份，转动30min；
(2)分割：从转鼓中取出预处理过的皮坯，离心机脱水，然后分割成2-6×2-6cm的小块；
(3)冻干：将小皮块放入冻干机中，降温参数定为下降2℃/min，直至冷阱温度降至-34℃，抽真空至45-150mbar保持24h，然后缓慢升温8h，使冷阱温度升至15℃，完成冻干过程；
(4)粉碎：在碎皮机上将小皮块粉碎成小皮粒，其粒度要求为：0.5-1.0×0.5-1.0mm；
(5)浸酸：取100重量份的干燥小皮粒放于转鼓中，加入2000重量份的三羟甲基氨基甲烷-盐酸盐，pH为7.4的缓冲液，用冰块调节鼓内温度达到6℃，间歇转动，转动3min/30min×4次，然后连续转动10min，再间歇转动，转动3min/30min×2次，静置30min，用耐酸真空泵吸出转鼓中上层清液，再向转鼓中加入HAc，调节pH＝2.2，转鼓内温度为6℃，静置浸泡2h；
(6)酶消化：调节并保持转鼓内温度达到6℃，加入1.0重量份的复合酶皮胶原处理剂E，连续转动8h；
(7)一次盐析：用耐酸真空泵将酶消化液泵入离心机中进行离心分离，并用耐酸真空泵将上清液泵入转鼓中，用NaOH溶液调整清液的pH值至7.2，转动中，缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到1.0mol/L，静置6h；
(8)酸溶解：用耐酸真空泵将盐析液泵入离心机中进行离心分离，取离心机中的沉淀物，弃上清液，并将离心机中的沉淀物移入转鼓中的事先已经配制好的0.6MHAc溶液中，转动20min，获得粗制胶原蛋白溶液；
(9)二次盐析：将粗制胶原蛋白溶液用酸调节pH为2.2，在离心机中离心分离，用耐酸真空泵将此清液泵入另一转鼓中，转动中，向转鼓中的清液中缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到1.0mol/L，然后，用NaOH溶液调整清液的pH值至7.0，静置10h；
(10)酸溶解：用耐酸真空泵泵出上清液，弃之，留取沉淀物；转动中，从转鼓轴孔缓慢加入0.2M HAc溶液100重量份，转动20min；
(11)分级：将所得到的胶原蛋白溶液稀释1倍，通过0.2μm的微孔滤膜除去微粒，然后采用凝胶过滤色层分离法进行分级；
(12)透析：分别将不同级分的胶原蛋白溶液倒入36mm透析袋，透析分子量10kD，先对0.04mol/L和0.02mol/L的磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液透析2天，再对蒸馏水透析3天；
(13)喷雾干燥：分别将不同级分的胶原蛋白溶液用0.2M HAc溶液溶解成浓度小于0.5wt％的稀溶液，在温度低于60℃的条件下喷雾干燥，称重包装后密封干燥保存。
实施例2
(1)预处理；取纯化猪皮100重量份，放入转鼓中，加入温度为36℃的去离子水450重量份，氯化钠7重量份，转动120min；控干废液，再加入温度为36℃的去离子水450重量份，平平加3重量份，转动120min；控干废液，加入去离子水450重量份，转动35min；控干废液，加入去离子水450重量份，转动35min；
(2)分割：从转鼓中取出预处理过的皮坯，离心机脱水，然后分割成2-6×2-6cm的小块；
(3)冻干：将小皮块放入冻干机中，降温参数定为下降2℃/min，直至冷阱温度降至-34℃，抽真空至45-150mbar保持24h，然后缓慢升温12h，使冷阱温度升至22℃，即完成冻干过程；
(4)粉碎：在碎皮机上将小皮块粉碎成小皮粒，其粒度要求为：0.5-1.0×0.5-1.0mm；
(5)浸酸：取100重量份的干燥小皮粒放于转鼓中，加入3500重量份的三羟甲基氨基甲烷-盐酸盐，pH为7.4的缓冲液，用冰块调节鼓内温度达到11℃，间歇转动，转动3min/30min×6次，然后连续转动10min，再间歇转动，转动3min/30min×4次，静置30min，用耐酸真空泵吸出转鼓中上层清液，再向转鼓中加入HAc，调节pH＝2.4，转鼓内温度为11℃，静置浸泡3h；
(6)酶消化：调节并保持转鼓内温度达到11℃，加入3.0重量份的复合酶皮胶原处理剂E，连续转动10h；
(7)一次盐析：用耐酸真空泵将酶消化液泵入离心机中进行离心分离，并用耐酸真空泵将上清液泵入转鼓中，用6MNaOH溶液调整清液的pH值至7.6，转动中，缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到1.4mol/L，静置10h；
(8)酸溶解：用耐酸真空泵将盐析液泵入离心机中进行离心分离，取离心机中的沉淀物，弃上清液，并将离心机中的沉淀物移入转鼓中的事先已经配制好的0.9MHAc溶液中，转动30min，获得粗制胶原蛋白溶液；
(9)二次盐析：将粗制胶原蛋白溶液用酸调节pH为2.5，在离心机中离心分离，用耐酸真空泵将此清液泵入另一转鼓中，转动中，向转鼓中的清液中缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到1.4mol/L，然后，用NaOH溶液调整清液的pH值至7.2，静置14h；
(10)酸溶解：用耐酸真空泵泵出上清液，弃之，留取沉淀物；转动中，从转鼓轴孔缓慢加入0.5M HAc溶液200重量份，转动30min；
(11)分级：将所得到的胶原蛋白溶液稀释3倍，通过0.2μm的微孔滤膜除去微粒，然后采用凝胶过滤色层分离法进行分级；
(12)透析：分别将不同级分的胶原蛋白溶液倒入36mm透析袋，透析分子量10kD，先对0.04mol/L和0.02mol/L的磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液透析2天，再对蒸馏水透析3天；
(13)喷雾干燥：分别将不同级分的胶原蛋白溶液用0.5M HAC溶液溶解成浓度小于0.5wt％的稀溶液，在温度低于60℃的条件下喷雾干燥，称重包装后密封干燥保存。
实施例3
(1)预处理：取纯化猪皮100重量份，放入转鼓中，加入温度为40℃的去离子水600重量份，氯化钠10重量份，转动150min；控干废液，再加入温度为40℃的去离子水600重量份，平平加5重量份，转动150min；控干废液，加入去离子水600重量份，转动40min；控干废液，加入去离子水600重量份，转动40min；
(2)分割：从转鼓中取出预处理过的皮坯，离心机脱水，然后分割成2-6×2-6cm的小块；
(3)冻干：将小皮块放入冻干机中，降温参数定为下降2℃/min，直至冷阱温度降至-34℃，抽真空至45-150mbar保持24h，然后缓慢升温8-15h，使冷阱温度升至30℃，即完成冻干过程；
(4)粉碎：在碎皮机上将小皮块粉碎成小皮粒，其粒度要求为：0.5-1.0×0.5-1.0mm；
(5)浸酸：取100重量份的干燥小皮粒放于转鼓中，加入5000重量份的三羟甲基氨基甲烷-盐酸盐，pH为7.4的缓冲液，用冰块调节鼓内温度达到15℃，间歇转动，转动3min/30min×9次，然后连续转动10min，再间歇转动，转动3min/30min×6次，静置30min，用耐酸真空泵小心吸出转鼓中上层清液，再向转鼓中加入HAc，调节pH＝2.8，转鼓内温度为15℃，静置浸泡4h；
(6)酶消化：调节并保持转鼓内温度达到15℃，加入4.0重量份的复合酶皮胶原处理剂E，连续转动12h；
(7)一次盐析：用耐酸真空泵将酶消化液泵入离心机中进行离心分离，并用耐酸真空泵将上清液泵入转鼓中，用NaOH溶液调整清液的pH值至8.2，转动中，缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到1.8mol/L，静置14h；
(8)酸溶解：用耐酸真空泵将盐析液泵入离心机中进行离心分离，取离心机中的沉淀物，弃上清液，并将离心机中的沉淀物移入转鼓中的事先已经配制好的1.2MHAc溶液中，转动40min，获得粗制胶原蛋白溶液；
(9)二次盐析：将粗制胶原蛋白溶液用酸调pH为2.8，在离心机中离心分离，用耐酸真空泵将此清液泵入另一转鼓中，转动中，向转鼓中的清液中缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到1.8mol/L，然后，用NaOH溶液调整清液的pH值至7.4，静置18h；
(10)酸溶解：用耐酸真空泵泵出上清液，弃之，留取沉淀物；转动中，从转鼓轴孔缓慢加入0.8M HAc溶液300重量份，转动40min；
(11)分级：将所得到的胶原蛋白溶液适当稀释，通过0.2μm的微孔滤膜除去微粒，然后采用凝胶过滤色层分离法进行分级；
(12)透析：分别将不同级分的胶原蛋白溶液倒入36mm透析袋，透析分子量10kD，先对0.04mol/L和0.02mol/L的磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液透析2天，再对蒸馏水透析3天；
(13)喷雾干燥：分别将不同级分的胶原蛋白溶液用0.8M HAC溶液溶解成浓度小于0.5wt％的稀溶液，在温度低于60℃的条件下喷雾干燥，称重包装后密封干燥保存。
注：本发明所用的皮胶原处理剂E为成都迪澳胶原高技术有限公司生产，微孔滤膜为浙江海宁圣华滤材厂生产，透析袋和其它的化学试剂为市场购买。
Claims (4)
1.一种医用胶原蛋白粉剂的制备方法，其特征在于该制备方法含有以下步骤：
(1)预处理：取纯化猪皮100重量份，放入转鼓中，加入温度为32-40℃的去离子水300-600重量份，氯化钠3-10重量份，转动20-150min；控干废液，加入温度为32-40℃的去离子水300-600重量份，平平加1-5重量份，转动20-150min；控干废液，加入去离子水300-600重量份，转动30-40min；控干废液，加入去离子水300-600重量份，转动30-40min；
(2)分割：从转鼓中取出预处理过的皮坯，离心机脱水，然后分割成2-6×2-6cm的小块；
(3)冻干：将小皮块放入冻干机中，降温参数定为下降2℃/min，直至冷阱温度降至-34℃，抽真空至45-150mbar保持24h，然后缓慢升温8-15h，使冷阱温度升至15-30℃，完成冻干过程；
(4)粉碎：在碎皮机上将小皮块粉碎成小皮粒，其粒度要求为：0.5-1.0×0.5-1.0mm；
(5)浸酸：取100重量份的干燥小皮粒放于转鼓中，加入1000-5000重量份的三羟甲基氨基甲烷～盐酸盐，pH为7.4的缓冲液，用冰块调节鼓内温度达到4-15℃，间歇转动，转动3min/30min×2-9次，然后连续转动10min，再间歇转动，转动3min/30min×1-6次，静置30min，用耐酸真空泵吸出转鼓中上层清液，再向转鼓中加入HAc，调节pH＝1.8-2.8，转鼓内温度为4-15℃，静置浸泡1-4h；
(6)酶消化：调节并保持转鼓内温度达到4-15℃，加入0.5-4.0重量份的复合酶皮胶原处理剂E，连续转动4～12h；
(7)一次盐析：用耐酸真空泵将酶消化液泵入离心机中进行离心分离，并用耐酸真空泵将上清液泵入转鼓中，用NaOH溶液调整清液的pH值至7.2-8.2，转动中，缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到0.8-1.8mol/L，静置6-14h；
(8)酸溶解：用耐酸真空泵将盐析液泵入离心机中进行离心分离，取离心机中的沉淀物，弃上清液，并将离心机中的沉淀物移入转鼓中的事先已经配制好的0.1-1.2MHAc溶液中，转动10-40min，获得粗制胶原蛋白溶液；
(9)二次盐析：将粗制胶原蛋白溶液用酸调节pH为1.8-2.8，在离心机中离心分离，用耐酸真空泵将此清液泵入另一转鼓中，转动中，向转鼓中的清液中缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到0.8-1.8mol/L，然后，用NaOH溶液调整清液的pH值至6.8-7.4，静置8-18h；
(10)酸溶解：用耐酸真空泵泵出上清液，弃之，留取沉淀物；转动中，从转鼓轴孔缓慢加入0.2-0.8M HAc溶液100-300重量份，转动10-40min；
(11)分级：将所得到的胶原蛋白溶液用去离子水稀释1-5倍，通过0.2μm的微孔滤膜除去微粒，然后采用凝胶过滤色层分离法进行分级；
(12)透析：分别将不同级分的胶原蛋白溶液倒入36mm透析袋，透析分子量10kD，先对0.04mol/L和0.02mol/L的磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液透析2天，再对蒸馏水透析3天；
(13)喷雾干燥：分别将不同级分的胶原蛋白溶液用0.2-0.8M HAc溶液溶解成浓度小于0.5wt％的稀溶液，在温度低于60℃的条件下喷雾干燥，称重包装后密封干燥保存。
其中，复合酶皮胶原处理剂E的配比为：5万单位的3350酸性蛋白酶3.2重量份，0.4万单位的胃蛋白酶0.8重量份，0.4万单位的木瓜蛋白酶1.2重量份，膨润土1.8重量份，麦麸5.5重量份。
2.按照权利要求1所述医用胶原蛋白粉剂的制备方法，其特征在于微孔滤膜为混合纤维素酯制作的微孔滤膜。
3.按照权利要求1所述医用胶原蛋白粉剂的制备方法，其特征在于转鼓是悬挂式木制转鼓或不锈钢转鼓。
4.按照权利要求1所述医用胶原蛋白粉剂的制备方法，其特征在于透析袋为化学纤维制作。
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Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 610065 NO.5, GAOPENG AVENUE, NEW + HIGH-TECHNOLOGY ZONE, CHENGDU CITY, SICHUAN PROVINCE TO: 611430 NO.36, XINGYUANSHI ROAD, A ZONE, INDUSTRY PARK, XINJIN COUNTY, CHENGDU CITY, SICHUAN PROVINCE |
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| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Assignee: Beijing Weide Medical Devices Co.,Ltd. Assignor: BAILEJIU BIOLOG SCIENCE TECHNO Contract record no.: 2010510000049 Denomination of invention: Method for preparing medical collagen protein powder Granted publication date: 20071114 License type: Exclusive License Open date: 20060809 Record date: 20100720 |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20100810 Address after: 611430, No. ten, No. 36, Xing Yuan Road, A District, Xinjin County Industrial Park, Sichuan, Chengdu Patentee after: Beijing Weide Medical Devices Co.,Ltd. Address before: No. 5 high tech Zone Gaopeng road in Chengdu city of Sichuan Province in 610065 Patentee before: BAILEJIU BIOLOG SCIENCE TECHNO |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20071114 Termination date: 20211202 |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |