CN111150881A - 一种医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,属于皮肤损伤敷料与皮肤修复技术领域。本发明提供的水凝胶主要由重组胶原蛋白、透明质酸,氯化钠,甘油,对羟基苯甲酸酯,苯氧乙醇和磷酸二氢钠,磷酸氢二钠缓冲液复合而成。本发明制备的医用重组胶原蛋白喷雾具有良好的保湿性,为伤口提供持续湿润环境,能促进创面愈合和保护创面新生组织,重建皮肤屏障功能,改善局部干燥、疼痛、瘙痒症状。本医用重组胶原蛋白喷雾生产工艺简单,生产成本低,适用于大规模生产。且本发明喷雾相比于其他形式的敷料、药膏等具有易于携带,无需棉签涂抹,使用安全方便的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,具体涉及于皮肤损伤敷料与皮肤修复技术领域。
背景技术
胶原蛋白是细胞外基质的主要组成成分,也是动物体内含量最多的蛋白,所有的多细胞动物都含有丰富的胶原,因此胶原蛋白具有良好的生物相容性。胶原蛋白具有独特的组织结构和生物功能,对维护细胞,组织,器官的正常生理功能和损伤修复有重要作用及其具有较大的亲和力,良好的生物降解安全性,可降解吸收,作为一种性能优良的生物材料,已经得到广泛的应用在医学领域。常见的胶原蛋白是从牛骨、牛皮、鱼鳞、鱼皮、猪皮等动物组织中分离提取而来,存在动物病毒隐患、应用于人体时会产生异体或异种的排异反应且分子量不确定、分布范围广等缺点和不足。本发明人的前期研究成果很好的克服了这些缺陷:利用基因重组技术生产的人源胶原蛋白取代天然胶原。该重组胶原是以III型胶原为模板,体外构建六串联序列并连入pPIC9K形成类人胶原蛋白基因六串联体表达载体pPIC9KG6。将该表达载体导入毕赤酵母后进行高密度发酵,并通过分离纯化,得到高纯度RHC,作为本发明的原料。
由于胶原是一种纤维状蛋白,并能与体能蛋白多糖、糖蛋白等成分结合,这些都使得胶原很难溶于一般的溶液,使其加工工艺复杂困难。而本发明人通过前期研究发现,RHC具有很好的水溶性,可以很好地克服上述问题。透明质酸(HA)是一种酸性粘多糖,是由两个双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的天然高分子聚合物,分子量可以高达1-2000000Da。透明质酸具有良好的生物可吸收性,生物相容性,粘弹性和保水性,是一种效果优良的保湿成分,因此被广泛应用于医学,美容等领域。临床上,在医学领域透明质酸可用于外科整形,抗粘附手术,眼科,皮肤病学,伤口和愈合以及心血管等方面。透明质酸由于其具有良好的保湿作用被广泛应用于美容化妆品中,人类皮肤含有大量的透明质酸,因此皮肤成熟和老化过程也随着透明质酸的含量和新陈代谢而变化,透明质酸可以改善皮肤营养代谢,使皮肤柔嫩,光滑,去皱,增加弹性,防止衰老。
皮肤是人体最大的器官,由表皮和真皮组成,是维持人体环境稳定和阻止化学物质、微生物等侵入人体的屏障。皮肤伤口会对人体皮肤的完整性和连续性造成破坏。临床上皮肤伤口的愈合主要包括炎症反应、创面重建、创面的上皮化和创面重塑四个阶段。研究发现湿润的愈合环境下伤口表皮细胞的迁移速度比暴露的创面要快。同时湿润的环境下伤口不易产生结痂,结痂会阻碍表皮细胞迁移从而延长了愈合时间。(秦益民.功能性医用敷料[M].中国纺织出版社,2007.)喷雾可以给皮肤提供湿润环境,增加皮肤含水量、调节皮肤pH值及油脂,重建皮肤微环境。喷雾可用于皮肤微环境失调引起的皮肤干燥、脱屑、红血丝、红斑、粉刺、丘疹、脓包以及其他皮肤损伤的修复。
发明内容:
本发明的目的是提供一种工艺简单与快捷的生产方法。另外,本发明还提供了由该法方法制备的医用胶原蛋白喷雾液体。
具体而言,本发明提供了一种医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其包括:
(1)称取一定量的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠溶解于去离子水中配置缓冲液。再将重组胶原蛋白,透明质酸(HA),氯化钠,甘油在37℃条件下搅拌溶解于所配的缓冲液,得到了透明溶液。
(2)称取一定量对羟基苯甲酸酯溶于苯氧乙醇中,于37℃水浴完全溶解。
(3)将步骤(2)的混合溶液加入步骤(1)的透明溶液中。搅拌均匀后超声去气泡获得了喷雾溶液,于4℃冰箱保存。
在本文中,重组胶原蛋白优选为重组人源胶原蛋白(RHC)。例如,本发明的重组人源胶原蛋白可以是中国专利ZL 200610098297.5所公开的方法获得的重组人源胶原蛋白,更优选的是,通过中国专利ZL 201110327865.5提供的高密度发酵和纯化方法,利用通过不同重复数同向串联基因重组质粒所构建的巴氏毕赤酵母基因工程菌(菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为:CGMCC NO.5021)而生产的重组人源胶原蛋白。人源胶原蛋白比起动物(尤其是非哺乳动物)胶原蛋白而言,对人体的使用安全性更为可靠。
在本发明的制备方法中,步骤(1)磷酸二氢钠的含量为1~1.5%(W/V),磷酸氢二钠的含量为3.9~4.5%(W/V),缓冲液pH值为6.5~7.5。
在本发明的制备方法中,步骤(1)重组胶原蛋白的含量为0.01~0.5%(W/V)。
在本发明的制备方法中,步骤(1)透明质酸的含量为0.01~0.025%(W/V)。
在本发明的制备方法中,步骤(1)甘油的含量为0.1~5.5%(V/V)。
在本发明的制备方法中,步骤(1)氯化钠的含量为0.67~0.9%(W/V)。
在本发明的制备方法中,步骤(2)尼伯金甲酯的含量为0.01~0.4%(W/V),尼伯金乙酯的含量为0.01~0.4%(W/V),苯氧乙醇的含量为0.1~0.5%(V/V)。
在本发明的制备方法中所使用的重组胶原蛋白的类型可为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ与G-X-Y重复序列型或其他小分子量胶原;重组胶原蛋白可来自微生物表达系统(大肠杆菌、链球菌、汉森酵母、酿酒酵母、毕赤酵母等)、哺乳动物表达系统(转基因鼠、人胚肾上皮细胞等)、昆虫表达系统(昆虫细胞、转基因蚕等)和植物表达系统(转基因烟草、大麦种子、玉米等);所使用的重组胶原蛋白分子量为2~500Kd;重组胶原蛋白类型包括:重组人源胶原蛋白(RHC)、重组类人源胶原蛋白及其它类型重组胶原蛋白。
本发明具有以下优点:本发明采用的原料中,透明质酸与甘油具有很好的保湿能力,可以为皮肤伤口提供湿润环境,加速表皮细胞迁移,减少结痂的产生,从而减少伤口愈合时间促进伤口修复。重组人源胶原蛋白是一种很好的可被人体降解吸收的生物材料,并且可促进伤口愈合。单一使用透明质酸、甘油、重组人源胶原蛋白的产品功能单一,无法满足现实需求。本发明的医用重组胶原蛋白喷雾能为伤口提供持续的湿润环境促进伤口痊愈,同时保护创面新生组织,重建皮肤屏障功能,改善局部干燥、疼痛、瘙痒症状,具有广阔的实用价值。且喷雾相比于其他形式的敷料、药膏等具有易于携带,无需棉签涂抹,使用安全方便的优点。
为了便于理解,下面将通过具体的实施例和附图对本发明进行详细地描述。需要特别说明的是,具体实施例仅是为了说明,并不构成对本发明范围的限制。显然,本领域及相关领域的普通技术人员均可以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变或丰富应用领域,这些修正和改变或在其他领域的应用也纳入本发明的范围。
附图说明:
图1为本发明医用重组胶原蛋白喷雾制备方法的流程图。
图2为本发明医用重组胶原蛋白喷雾的实物图。
具体实施方式:
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1医用重组胶原蛋白喷雾的制备1
称取7.164g磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)溶于100ml去离子水。称取3.121g磷酸二氢钠(NaH2PO4.2H2O)溶于100ml去离子水。取61ml磷酸氢二钠水溶液与39ml磷酸二氢钠水溶液混匀,得pH7.0的0.2M/L缓冲液。称取0.07g重组人源胶原蛋白,0.01g透明质酸,0.9g氯化钠,5.42ml甘油加入94.18ml缓冲液中,于磁力搅拌器1000r/min,37℃条件下充分溶解。称取0.06g尼泊金甲酯,0.01g尼泊金乙酯溶于400ul苯氧乙醇,于37℃水浴完全溶解。将溶有尼泊金甲酯、尼泊金乙酯的苯氧乙醇加入之前所配置的重组人源胶原蛋白与透明质酸溶液中充分搅拌均匀,之后超声去气泡于4℃冰箱保存。
实施例2医用重组胶原蛋白喷雾的制备2
称取7.164g磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)溶于100ml去离子水。称取3.121g磷酸二氢钠(NaH2PO4.2H2O)溶于100ml去离子水。取61ml磷酸氢二钠水溶液与39ml磷酸二氢钠水溶液混匀,得pH7.0的0.2M/L缓冲液。称取0.1g重组人源胶原蛋白,0.02g透明质酸,0.9g氯化钠,3.24ml甘油加入96.396ml缓冲液中,于磁力搅拌器1000r/min,37℃条件下充分溶解。称取0.03g尼泊金甲酯,0.03g尼泊金乙酯溶于364ul苯氧乙醇,于37℃水浴完全溶解。将溶有尼泊金甲酯、尼泊金乙酯的苯氧乙醇加入之前所配置的重组人源胶原蛋白与透明质酸溶液中充分搅拌均匀,之后超声去气泡于4℃冰箱保存。
实施例3医用重组胶原蛋白喷雾的制备3
称取7.164g磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)溶于100ml去离子水。称取3.121g磷酸二氢钠(NaH2PO4.2H2O)溶于100ml去离子水。取61ml磷酸氢二钠水溶液与39ml磷酸二氢钠水溶液混匀,得pH7.0的0.2M/L缓冲液。称取0.1g重组人源胶原蛋白,0.022g透明质酸,0.9g氯化钠,4.10ml甘油加入95.52ml缓冲液中,于磁力搅拌器1000r/min,37℃条件下充分溶解。称取0.01g尼泊金甲酯,0.06g尼泊金乙酯溶于380ul苯氧乙醇,于37℃水浴完全溶解。将溶有尼泊金甲酯、尼泊金乙酯的苯氧乙醇加入之前所配置的重组人源胶原蛋白与透明质酸溶液中充分搅拌均匀,之后超声去气泡于4℃冰箱保存。
Claims (9)
1.一种医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于:所述喷雾溶液由重组胶原蛋白,透明质酸(HA),甘油,磷酸二氢钠,磷酸氢二钠,氯化钠,对羟基苯甲酸酯,苯氧乙醇和去离子水复合而成。
2.根据要求1所述的医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)称取一定量的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠溶解于去离子水中配置缓冲液。再将重组胶原蛋白,透明质酸(HA),氯化钠,甘油在37℃条件下搅拌溶解于所配的缓冲液,得到了透明溶液。
(2)称取一定量对羟基苯甲酸酯溶于苯氧乙醇中,于37℃水浴完全溶解。
(3)将步骤(2)的混合溶液加入步骤(1)的透明溶液中。搅拌均匀后超声去气泡获得了喷雾溶液,于4℃冰箱保存。
3.根据要求2所述的医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于:磷酸二氢钠的含量为1~1.5%(W/V),磷酸氢二钠的含量为3.9~4.5%(W/V),缓冲液pH值为6.5~7.5。
4.根据要求2所述的医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于:重组胶原蛋白的含量为0.01~0.5%(W/V)。
5.根据要求2所述的医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于:透明质酸的含量为0.01~0.025%(W/V)。
6.根据要求2所述的医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于:甘油的含量为0.1~5.5%(V/V)。
7.根据要求2所述的医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于:氯化钠的含量为0.67~0.9%(W/V)。
8.根据要求2所述的医用重组胶原蛋白喷雾及其制备方法,其特征在于:尼伯金甲酯的含量为0.01~0.4%(W/V),尼伯金乙酯的含量为0.01~0.4%(W/V),苯氧乙醇的含量为0.1~0.5%(V/V)。
9.根据权利要求2所述的制备方法中所使用的重组胶原蛋白的类型可为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ与G-X-Y重复序列型或其他小分子量胶原;重组胶原蛋白可来自微生物表达系统(大肠杆菌、链球菌、汉森酵母、酿酒酵母、毕赤酵母等)、哺乳动物表达系统(转基因鼠、人胚肾上皮细胞等)、昆虫表达系统(昆虫细胞、转基因蚕等)和植物表达系统(转基因烟草、大麦种子、玉米等);所使用的重组胶原蛋白分子量为2~500Kd;重组胶原蛋白类型包括:重组人源胶原蛋白(RHC)、重组类人源胶原蛋白及其它类型重组胶原蛋白。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20200515 |
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