CN100344277C - 纳米磁性药物微球及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明是一种磁性高分子药物微球及其制备方法。在反相微乳液中一步直接制备出具有良好磁相应性的，载药量可达10%，释药半衰期为7d，粒径在200～800nm的磁性阿霉素药物微球。药物含量可以由加入药物的质量，交联剂的体积来控制；其粒径大小可由混悬液的浓度，交联剂的量，乳化剂的量及油相的选择来调节。本发明具有操作方法简单，药物含量可控，微球粒径可调节，药物长期释放等特点。本发明可用于恶性肿瘤的靶向定位治疗。

Description

纳米磁性药物微球及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药学领域，具体涉及具有磁性的纳米药物微球及其制备方法以及含有这种纳米磁性药物微球的药物组和物，同时，本发明还涉及这种纳米磁性药物微球在制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用。

背景技术

阿霉素(英文名称为doxorubicin或adriamycin)是阻碍癌细胞中核酸合成的一种广谱抗癌药。它具有强效的抗癌活性，但临床应用毒副作用大，对正常组织和器官产生严重损伤(Omelyanenko V，Kopeckova P，Geniry C，et alTargetable HPMA copolymer-adriamycin conjugatesRecognition，internalization，and subcellular fate.J ControlRel，1998，53(1-3)：25-37)。为了提高其药物效果，减小毒副作用，人们对其超微粒子控释、靶向体系进行探索，将它负载于脂质体，纳米微粒，聚合物结合体和聚合物胶束等一系列药物载体系统。控释体系所用的载体材料须是可生物降解或生物相容性好的聚合物，可生物降解的聚合物包括天然和合成两类。天然可生物降解的高分子材料主要包括血清蛋白、血红蛋白骨胶原、明胶、壳聚糖等；合成类的可生物降解聚合物，如脂肪族聚酯、聚氰基丙烯酸烷基酯、聚原酸酯、聚己内酯、聚尿烷、聚氨基酸等(张蜀，谭载友，陈济民.聚乳酸类缓释、控释注射剂的研究进展。《中国药学杂志》，2002，37(11)：810-812)。天然的高分子材料，具有良好的生物相容性，且明胶、壳聚糖等材料的价格又低廉，是比较理想的可降解载体材料。磁性抗癌微粒是新一代靶向给药系统，在足够强的外磁场作用下，药物微球可滞留于局部组织，缓慢释放高浓度抗癌药物，实现药物的定位释放，从而产生靶向的、高效低毒的药物效应(陶凯雄，陈道达，田源，吴在德，虎风仙，抗癌药物磁性微球靶向给药的药代动力学研究，实用癌症杂志，7(2000)，347-349)。其优点是，可以避免被网状内皮系统的巨噬细胞吞噬(朱盛山，药物新制剂，北京，人民卫生出版社，1993)。将这两项技术有机的结合在一起，得到的磁性壳聚糖，明胶等药物载体。一方面可对药物起到缓释、控释作用，另一方面，可对病变部位靶向给药。使阿霉素在病变部位聚集，具有靶向性；同时载药量大且有缓释药物的特点，提高药物治疗效果，降低药物对正常组织的毒副作用。为抗肿瘤药物治疗提供新的具有靶向功能的药物。

近年来，人们对各种载体及其制备进行了大量的研究。早在1978年，widder等就开始利用白蛋白制备亚微米级的药物控释粒子。作为药物载体，白蛋白是一种优良的天然高分子材料。但早期制备的白蛋白微球，粒径偏大，临床应用会引起栓塞，限制了其进一步的应用(Wedder KJ，Senyei AE，Scarpelli DGMagnetic microspheres：A model system for site specific drug delivery in vivo.ProcExp Bio Med，1978，158(1)：141-146)。在药学和生物学领域，由于涉及的微粒通常都包含一些较大空间体积的生物物质，颗粒平均直径小于1000nm的微粒都可称为纳米微球。

张阳德等将阿霉素，人体血清白蛋白按一定比例混合，通过在棉仔油中超声乳化，加热变性，乙醚清洗等工艺，制备出粒径为100-1000nm的阿霉素磁性白蛋白微球，并用荧光方法测定其阿霉素含量为57.5μg/g(张阳德，龚连声.磁性阿霉素白蛋白纳米粒的研制.中国现代医学杂志，2001，11(3)：1-4)。该微球具有磁性稳定，靶向性强，药物包含率高，释药速率可控制的特点。

谭家驹等改进传统的方法，采用反相微乳液的方法，以油酸作为油相，斯番-85为表面活性剂，通过形成水相含有白蛋白和磁粉的反相微乳液，加热固化等步骤，制备出磁性白蛋白纳米粒子的粒径在200nm左右(谭家驹，张春富，冯彦林等.靶向治疗用Fe₃O₄及其白蛋白包被磁性纳米粒子的制备，中国医学工程杂志，2003，11(6)：30-32)。适合靶向治疗癌症的进一步研究。

Tadahiko等应用逆相蒸发法(reverse-phase evaporation method)制备磁性阿霉素脂质体治疗大鼠骨肉瘤，脂质体平均直径146nm。在肿瘤内植入磁场的引导下，静脉注射磁性阿霉素脂质体后其肿瘤内阿霉素浓度比静脉注射同剂量的游离阿霉素高出4倍，而心脏、肾脏内的阿霉素浓度要比静脉注射同剂量的游离阿霉素低(Tadahiko K，Takashi S，Shoji S，et al.Targeted systemic chemotherapyusing magnetic liposomes with incorporated adriamycin for osteosarcoma inhamsters.Int.J Oncology，2001，18：121)。

石可瑜等以DextranT-40水溶液和FeCl₃.6H₂O及FeCl₂.4H₂O水溶液混合均匀作为前驱物，加入氨水溶液，发生水解反应，制备葡聚糖磁性纳米微粒。再将所制备的DextranMNPs进行羧甲基化处理制备羧甲基葡聚糖磁性毫微粒(CMDMNPs)，与ADR(阿霉素)药物分子通过Schiffs′反应偶联，制备ADR-CMDMNPs微粒。得到的葡聚糖磁性纳米微粒粒径小，在水中的分散性好(石可瑜，李朝兴，何炳林.磁导向阿霉素-羧甲基葡聚糖磁性毫微粒的研究.生物医学工程学杂志，2000，17(1)：21-24)用共沉淀法制备葡聚糖磁性纳米微粒(DextranMNPs)。

上述制备纳米磁性药物微球的方法中，白蛋白微球所用材料价格高，且所得微球分离清洗繁琐。共沉淀方法得到的磁性药物微球，性质不稳定，形状不规则，不利于实际应用。目前，已有研究者对价廉易得的壳聚糖微球的作为药物载体进行研究，也有一些对明胶作为药物载体进行了研究。

由于细胞膜本身带负电荷，所以容易接近并且吸收带正电荷的物质，所以带正电荷的壳聚糖既具有良好的生物相容性，又具有良好的细胞膜穿透性，且容易被血浆中的溶解酵素降解。不少研究者对其作为药物载体进行了研究。

Kevin等利用壳聚糖化学键合阿霉素，再结合用阿霉素孵育过的聚磷酸或硫酸葡聚糖酯，沉积成球。得到粒径在600-700nm，药物包裹率在4wt.％的壳聚糖药物微球，药物的活性得到很好保持(Kevin AJ，Marie PF，Ana M，Angels F，etal.Chitosan nanoparticles as delivery systems for doxorubicin.J Control Rel，2001，73：255-267)。

Emir等采用两步法制备磁性壳聚糖微球，先制备出粒径1～5um的磁性四氧化三铁粉末，悬浮交联的方法制备出100～250um的磁性壳聚糖微球。得到可避免外界污染的无空的磁性载体微球。，磁性试验表明：磁饱和强度在8～12kG之间，适合应用于各种磁性载体技术中。(Magnetic chitosan microspheres：preparation andCharacterization，Emir Baki Denkbas，Ebru Kilicay，CengizBirlikseven，Eylem Ozturk，Reactive&Functional Polymers 50(2002)225-232)

Eliana Leo等用戊二醛交联技术，合成了阿霉素明胶纳米微球，该纳米微球粒径在100-200nm之间，药物负载率为42％。由于交联技术使得部分阿霉素以共价键形式结合于明胶微球中，可能影响阿霉素的药效。通过与空白微球的比较，得到微球中自由阿霉素的含量为8％，蛋白酶进一步分解后阿霉素的释放率达到15％(Eliana L，Maria AV i，Riccardo C，et al.Doxorubicin-loaded gelatinnanoparticles stabilized by glutaraldehyde：Involvement of the drug in thecross-linking process.Int J Pharm，1997，155：75-82)。

董聿生等用反相悬浮包埋技术合成了粒径在43～295μm之间的磁性琼脂糖微球。(董聿生，梁峰，余向阳，常建华，郭立安，磁性琼脂糖亲和吸附剂的合成与应用，2001，31(2)：121-123)Fe₃O₄含量5.5％，形状规则，表面光滑，具有良好的磁响应性。

上述的制备方法中，没有磁性的微球，粒径小，达到纳米级，但载药量都不高，在加入磁粉后，微球的粒径变得很大，达到几百微米，从而阻碍了进一步的应用。

发明专利申请公开说明书(公开号：CN 1328064A；国别：中国；公开日：2001年12月26日)就公开了一种磁性聚合物纳米微球，其中采用采用苯乙烯单体引发聚合反应，生成高分子化合物。其一般不能用于药学或生物领域。

发明内容：

为了克服上述技术的缺点，本发明的目的是提出一种可生物降解的，粒径在20～800nm左右的纳米磁性药物微球及其制备方法，这种纳米磁性药物微球具有良好的磁响应性。本发明还公开了一种用于治疗恶性肿瘤的药物组合物以及所述的纳米磁性药物微球在制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用。

具体的技术方案如下：

一种纳米磁性药物微球，其中以交联的壳聚糖(壳聚糖的化学交联物)为包裹层，包裹层内还包含缓释药物和纳米磁性材料，纳米磁性药物微球的平均粒径大小在20～800nm左右。较好的平均粒径200--800nm，较好的平均粒径300--700nm。更好的平均粒径为400-600nm。更好的平均粒径为450--550nm。最好的平均粒径为480--520nm，此时，其粒径分布范围在200--800nm。

所述的纳米磁性药物微球，其中所述的缓释药物含量占整个微球重量的0---19％(w/w，w/w代表质量百分比，俗称重量比，本文中未特别说明部分的百分含量都是指质量百分比)，但是缓释药物的含量不等于0。较好的，所述的纳米磁性药物微球，其中所述的缓释药物含量占整个微球重量的0---15％(w/w)，但是缓释药物的含量不等于0，最好为10-15％。本发明制得的纳米磁性微球的缓释药物半衰期为1-180D，较好的范围为7-40D(D的含义为day，即“天”)。缓释药物的半衰期表达的是一个药物有效治疗时间，时间太短，药物释放太快，将不能达到持久的治疗作用。时间太长，将导致药效的下降，同样也不能对病体造成显著的影响。所述的缓释药物选自水溶性的化疗药物。所述的水溶性的化疗药物选自阿霉素、顺铂、表阿霉素的一种或其组和。所述的水溶性的化疗药物选自阿霉素。

一般说来，当缓释药物的含量大于一个固定值时，其将达到饱和，也就是将不能与微球形成稳定的体系。所以，药物的含量都具有一个合适的范围。例如0-19％。超过这个范围之后，将会出现药物不能稳定的与高分子包裹层和磁性纳米材料交联结合。

所述的纳米磁性药物微球中，交联的壳聚糖的含量占整个微球重量的50-95％(w/w，w/w代表质量百分比)，较好的，其含量占整个微球重量的75-90％(w/w，w/w代表质量百分比)。

所述的纳米磁性药物微球，所述的纳米磁性材料为纳米碳包铁粉末、纳米纯铁粉末、纳米四氧化三铁的之一或其组合，其含量占整个微球重量的5-30％(w/w)，较好的，其含量占整个微球重量的5-10％(w/w)。所述的纳米碳包铁粉末平均粒径为1-300纳米，较好的平均粒径为1--100纳米，更好的为20---60纳米。更好的为20-30纳米。最好为25nm，此时该粉末的粒径大小在20～60nm之间，最大不超过60nm。最好采用深圳市尊业纳米材料有限公司生产的碳包铁粉末，具有较好的效果。此时粒径的大小，会严重影响最终形成的磁性纳米微球的稳定性。粒径太大，最终形成的微球将不能稳定的形成胶体溶液。外边包覆几纳米后的碳膜，磁响应性好，性质稳定，不易被氧化。

最终，本产品的组成在于包括下述物质：

纳米磁性材料      5-30％(w/w)

缓释药物          0-19％w/w)，但是缓释药物的含量不等于0

交联的壳聚糖      50-95％(w/w)

其它杂质为余量，微球的粒径在200---800纳米。

较佳的，本产品的组成在于包括下述物质：

纳米碳包铁        5-10％(w/w)

阿霉素            10-15％w/w)

交联的壳聚糖      75-90％(w/w)

其它杂质为余量，微球的粒径在400-600纳米。

所述的其他杂质，主要指反应中遗留的反应物，如水、交联剂、有机溶剂等等，其含量为痕量。由于反应的不完善，其他杂质含量也可以增多。

关于纳米磁性药物微球中磁粉的含量，较好的，可采用原子吸收光谱法测定。具体步骤可以是：准确称取20mg的纳米磁性药物微球，先后加入浓盐酸和浓硝酸溶解，稀释后，原子吸收光谱测定含量。然后根据所测铁的含量在折算出碳包铁粉末或四氧化三铁的量(如果采用纳米纯铁粉末，无需折算)。具体的取用量可根据实际情况变动。

药物含量的测定，较好的，可采用吸光光度法测定。具体步骤可以如下：称取一份20mg的磁性药物微球和一份质量相同的空白微球，用相同量的浓盐酸溶解完全。最后200ml的容量瓶定容，分光光度计测定吸光度，用标准曲线换算药物含量。具体的取用量可根据实际情况变动。

纳米磁性药物微球的磁性性能实验测定，较好的采用透光率法。具体步骤可以如下：取10mg的阿霉素磁性微球超声分散在20ml蒸馏水中，取上清液。在1T的磁场中，2.5cm距离内，测定随时间变化的透光率。具体的取用量可根据实际情况变动。

有关检测方法的参考文章，为邱广亮，李咏兰，邱广明等，《肺靶向顺铂磁性白蛋白微球的制备及性质》，中国医药工业杂志，2001，32(12)：544-546页。

所述的纳米磁性药物微球的制备方法，其包括以下步骤：

(1)形成微乳液：将壳聚糖、纳米磁性材料、缓释药物和交联剂分散在酸性或中性的水溶液中，并加入由乳化剂和有机溶剂组成的微乳体系，混合均匀至成为反相微乳液，其中乳化剂占整个体系重量的5～40％，酸性或中性的水溶液的量占整个体系重量的1-15％，高分子材料占整个体系重量的0.02-0.2％，交联剂的用量占整个体系重量的0.03-0.3％，纳米磁性材料占整个体系重量的0.02-0.2％，缓释药物为0-0.6％(其含量不等于0)，较好为0.02-0.6％，其余为溶剂；

较好的比例为，其中乳化剂占整个体系重量的10～30％，酸性或中性的水溶液的量占整个体系重量的2-8％，壳聚糖占整个体系重量的0.03-0.15％，交联剂的用量占整个体系重量的0.05-0.15％，纳米磁性材料占整个体系重量的0.03-0.15％，缓释药物为0.02-0.4％，其余为溶剂；

(2)固化反应：将步骤(1)所制得的反相乳液在室温下，混合0.1～5小时。所述的混合较好的采用超声搅拌。

需要注意的是，所述乳化剂、壳聚糖、交联剂、纳米磁性材料、缓释药物都是指以其本身作为计算基准的含量，而酸性或中性的水溶液的含量是以“酸性或中性的水溶液”为计算的基准，而不是以其中的溶质作为计算的基准。例如醋酸水溶液，是以“醋酸水溶液”作为计算的基准，而不是以“醋酸”作为计算的基准。而如果交联剂采用戊二醛，通常戊二醛是以水溶液的形态存在，这时，计算含量的基准仍以“戊二醛”为准，而不是以“戊二醛溶液”。

对于形成能够顺利进行反应的微乳液这一步骤，其关键的调控因素在于控制好不同时间内高分子材料与交联剂的加入比例与加入量，使之能够平顺的反应，在每一个油包水的微相上形成需要的纳米磁性微球。较好的方案是高分子材料壳聚糖溶液(可以是水溶液或醋酸溶液)浓度为0.5～1％，交联剂戊二醛水溶液的浓度在5～20％。这种情况下，有利于固化时间控制在0.1---5小时。

其中(1)所述的将含有壳聚糖、纳米磁性材料、缓释药物和交联剂分散在酸性或中性的水溶液中，并滴入由乳化剂和有机溶剂组成的微乳体系，混合均匀至成为反相微乳液，比较好的方式可主要采用(包括)下列具体步骤：

A、把壳聚糖溶于酸性或中性的水溶液中，形成初步的高分子溶液。在此步骤中，较好的选择，其醋酸溶液或水溶液的浓度在0.5～1％。

B、把缓释药物加入上述高分子溶液中，至完全溶解均匀。

C、然后加入磁粉，混合均匀，形成匀相体系。较好的混合方法是采用超声搅拌。

D、在加入部分稀释的交联剂，混合成均匀的磁性高分子混悬液。由于已加入部分交联剂。此时磁性高分子混悬液放置的时间不能过久，例如在10min以内为宜。

E、将乳化剂和溶剂混合均匀，然后将上述的磁性高分子混悬液滴入乳化剂和溶剂的混合液中，形成均匀的反相乳液体系。

F、在加入剩余的大部分交联剂，不断混合均匀，较好的混合方法是采用超声搅拌。

需要说明的是，其中(1)所述形成微乳液仍然可以采用除上述方法以外的其他具体步骤来实现，而上述具体步骤是一种较佳的方式。

此时，经过固化反应，溶液中已形成纳米磁性药物微球，通常，为了进一步制备成品，还包括以下步骤：

(3)清洗。

(4)对清洗之后的磁性药物微球进行干燥。

由于考虑到产品是用作药品，公知的，一般采用乙醇或其他易挥发的溶剂，进行磁性分离清洗。经过清洗所制得的产品，已具备基本使用功能。然而，由于在实际的使用过程中，对药物的含量需要有一个准确的确定，并且，清洗之后的产品容易结块，而且含有很多杂质。因此，需要对清洗之后的纳米磁性药物微球进行干燥。较好的，采用冷冻干燥。

上述方法中的酸性或中性的水溶液中选自醋酸水溶液、水、盐酸水溶液、硫酸水溶液之一或其组合。本发明中，所用的溶剂为醋酸水溶液。一般说来，醋酸水溶液的浓度在3～6％(w/w)。

所述方法中的缓释药物选自水溶性的化疗药物。所述的水溶性的化疗药物选自阿霉素、顺铂、表阿霉素的一种或其组和。较好的，所述的水溶性的化疗药物为阿霉素。

所制得纳米磁性微球的高分子层可以是多种材料的复合体。具体使用中，较好的是选用浓度为0.5～1％(w/w，代表质量体积比)的壳聚糖水溶液或壳聚糖醋酸水溶液。

所述方法的纳米磁性材料为纳米碳包铁粉末、纳米纯铁粉末、纳米四氧化三铁的之一或其组合。

所述的纳米磁性药物微球，所述的纳米碳包铁粉末平均粒径为0.8-300纳米，较好的平均粒径为0.8---100纳米，更好的为20---60纳米。更好的为20-30纳米。最好为25nm，此时该粉末的粒径大小在20～60nm之间，最大不超过60nm。此时粒径的大小，会严重影响最终形成的磁性纳米微球的稳定性。粒径太大，最终形成的微球将不能稳定的形成胶体溶液。外边包覆几纳米后的碳膜，磁相应性好，性质稳定，不易被氧化。更小纳米磁性材料，有利于形成更小的磁性药物微球。

所述方法中所用的交联剂选自戊二醛或三聚磷酸钠。一般来说，戊二醛是以水溶液的形态存在。而较好的，具体使用中，采用交联剂为浓度在5～20％(w/w)戊二醛水溶液(由市售戊二醛稀释而得)。

所述方法中的所提到的混合，较好的为超声搅拌方式。所述的超声搅拌，就是为超声波和搅拌同时进行。

所述的方法中，固化的时间控制在0.5～5h内为好。时间太长，对于实际生产而言无意义。

用于治疗恶性肿瘤的药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的纳米磁性药物微球和药学上可接受的载体。所述的药物组合物，一般是采用本发明的纳米磁性药物微球制作成注射用的药剂。所述的药学上可接受的载体，主要是指与纳米磁性药物微球相配伍的生理盐水以及其他的一些常用的药学助剂。

本发明的另一目的，是公开了所述的纳米磁性药物微球在制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用。由于采用本发明所生产的纳米磁性药物微球具有良好的磁响应性，表面平整，药物含量在10％以上，并且为亲水性的产品，能够与药学上可接受的载体载体形成稳定的溶胶体系，并可配合固定导向的磁场，进行恶性肿瘤的靶向治疗。

目前，国际上磁性药物微球主要侧重于疏水高分子组成的微米或亚微米微球。比较而言，本发明用反相微乳液交联制备的磁性高分子磁性药物微球具有以下特点：(1)制备的磁性高分子药物微球粒径范围在200～800nm，而平均粒径也可在达到200-800纳米。(2)微球的粒径可以由乳化剂的用量和油相的选择来调节。(3)高分子微球由亲水性的交联的壳聚糖组成，因此本发明产品具有良好的亲水性，并且相对于过去的产品(参见发明专利申请公开说明书，公开号：CN 1328064A；国别：中国；公开日：2001年12月26日，公开了一种磁性聚合物纳米微球，其中采用采用苯乙烯单体引发聚合反应，生成高分子化合物)，具有良好的生物相容性，可用于医学和生物领域。(4)药物可控，可根据投入药物的质量和交联剂的体积来调节，可达10％以上。(5)缓释时间长，半衰期可达7天，甚至达到7-40天。(6)制备方法简单，重现性好。

附图说明

图1是实施例1原料中的磁性碳包铁粉透射电镜图。

图2是实施例1的磁性壳聚糖阿霉素微球透射电镜图

图3是实施例1的磁性壳聚糖阿霉素微球粒径及分布图。

图4是实施例1的磁性壳聚糖阿霉素微球磁响应性试验图。

具体实施方式：

实施利1：取34.8mg碳包铁铁磁粉(深圳市尊业纳米材料有限公司生产，型号为JY-FeC，平均粒径为25nm，最大粒径为60nm)，磁性碳包铁粉透射电镜图见图1。32.4mg的阿霉素(日本产，深圳万乐药业公司提供，含量98.4％)，31.0mg壳聚糖(济南海得贝海洋生物工程公司提供，脱乙酰度＞95.7％)溶于3mlHAC(5％)中，超声混匀，放置除去气泡，然后加入0.6ml的5％戊二醛水溶液，超声混匀，形成水性混悬液。将上述混悬液滴入30ml甲苯中，其中包含12gAOT(所述的AOT，为气溶胶OT，分子式为C₂₀H₃₇NaO₇S，分子量为444.56，由上海巨枫化学科技有限公司采购，嘉善巨枫化工厂生产，皂价为220-225)。2小时后，再加入0.6ml，5％的戊二醛水溶液，2小时后停止搅拌。用适量的乙醇，磁性分离清洗6～7遍，真空干燥备用。实验结果所得磁粉的含量为8.98％，药物的含量为2.8％。

磁性药物微球中磁粉的含量用原子吸收光谱法测定，具体步骤为：准确称取20mg的磁性药物微球，先后加入浓盐酸和浓硝酸溶解，稀释后，原子吸收光谱测定含量，在折算出碳包铁的含量。

药物含量的测定采用以下方法：称取一份20mg的磁性药物微球和一份质量相同的空白微球，用相同量的浓盐酸溶解完全。最后用200ml的容量瓶定容，分光光度计测定吸光度，用标准曲线换算药物含量。

剩下是交联的壳聚糖的含量，因为杂质含量不高，估计它占了89％。透射电镜观察其形貌见图2，磁性微球以弥散行分布于药物微球中；激光散射仪测定其粒径分布见图3，平均粒径510nm，分布范围在300～700nm。

取10mg的阿霉素磁性微球超声分散在20ml蒸馏水中，取上清液。在1T的磁场中，2.5cm距离内，用紫外-可见分光广度计测定磁场中微球的透光率随时间的变化，得到磁响应性曲线见图4，4min内，在1T的磁场下，5cm距离内的微球得以完全分离。1代表磁分离曲线，2代表自然沉积曲线。

注意，以下实施例未提及部分与实施例1相同。

实施利2：取35.2mg磁粉，32.8mg的阿霉素，61.6mg壳聚糖溶于3mlHAC(5％)中，超声混匀，放置除去气泡，然后加入0.6ml的5％戊二醛，超声混匀，形成水性混悬液。将上述混悬液滴入30ml甲苯(包含12gAOT)，2小时后，再加入0.6ml，5％的戊二醛水溶液，2小时后停止搅拌。用适量的乙醇，磁性分离清洗6～7遍，真空干燥备用。实验结果所得磁粉的含量为9％，药物的含量为4.5％，剩下是交联的壳聚糖的含量，它约占了86.5％。

实施利3：取34.4mg磁粉，33.6mg的阿霉素，90.4mg壳聚糖溶于3mlHAC(5％)中，超声混匀，放置除去气泡，然后加入0.6ml的5％戊二醛，超声混匀，形成水性混悬液。将上述混悬液滴入30ml甲苯(包含12gAOT)，2小时后，再加入0.6ml，5％的戊二醛水溶液，2小时后停止搅拌。用适量的乙醇，磁性分离清洗6～7遍，真空干燥备用。实验结果所得磁粉的含量为9.6％，药物的含量为7.1％，剩下是交联的壳聚糖的含量，它约占了83.3％。

实施利4：取35.6mg磁粉，33.0mg的阿霉素，122.4mg壳聚糖溶于3mlHAC(5％)中，超声混匀，放置除去气泡，然后加入0.6ml的5％戊二醛，超声混匀，形成水性混悬液。将上述混悬液滴入30ml甲苯(包含12gAOT)，2小时后，再加入0.6ml，5％的戊二醛水溶液，2小时后停止搅拌。用适量的乙醇，磁性分离清洗6～7遍，真空干燥备用。实验结果所得磁粉的含量为9.1％，药物的含量为10.6％，剩下是交联的壳聚糖的含量，它约占了80.2％。

实施利5：取17.8mg磁粉，16.5mg的阿霉素，16.4mg壳聚糖溶于3mlHAC(5％)中，超声混匀，放置除去气泡，然后加入0.6ml的20％的戊二醛，超声混匀，形成水性混悬液。将上述混悬液滴入30ml甲苯(包含12gAOT)，2小时后，再加入0.6ml，5％的戊二醛水溶液，2小时后停止搅拌。用适量的乙醇，磁性分离清洗6～7遍，真空干燥备用。实验结果所得磁粉的含量为5.6％，药物的含量为5.2％，剩下是交联的壳聚糖的含量，它约占了89.2％。

Claims (22)

1.一种纳米磁性药物微球，其中以交联的壳聚糖为包裹层，包裹层内还包含缓释药物和纳米磁性材料，药物微球的平均粒径大小在20～800nm，其中所述的缓释药物选自水溶性的化疗药物。

2.根据权利要求1所述的纳米磁性药物微球，其中所述的平均粒径300--700nm。

3.根据权利要求2所述的纳米磁性药物微球，其中所述的平均粒径为400-600nm。

4.根据权利要求1所述的纳米磁性药物微球，其中所述的缓释药物含量占整个微球重量的0---19％(w/w)，但是缓释药物的含量不等于0。

5.根据权利要求4所述的纳米磁性药物微球，其中所述的缓释药物含量占整个微球重量的0---15％(w/w)，但是缓释药物的含量不等于0。

6.根据权利要求1、4或5任一所述的纳米磁性药物微球，其中所述的水溶性的化疗药物选自阿霉素、顺铂、表阿霉素的一种或其组和。

7.根据权利要求6所述的纳米磁性药物微球，其中所述的水溶性的化疗药物选自阿霉素。

8.根据权利要求1-5任一所述的纳米磁性药物微球，其中所述的交联的壳聚糖含量占整个微球重量的50-95％。

9.根据权利要求1-5任一所述的纳米磁性药物微球，其中所述的包裹层内的纳米磁性材料为纳米碳包铁粉末、纳米纯铁粉末、纳米四氧化三铁的之一或其组合，其含量占整个微球重量的5-30％(w/w)。

10.一种权利要求1-9任一所述的纳米磁性药物微球的制备方法，其包括以下步骤：

(1)形成微乳液：将壳聚糖、纳米磁性材料、缓释药物和交联剂分散在酸性或中性的水溶液中，并加入由乳化剂和有机溶剂组成的体系，混合均匀至成为反相微乳液，其中乳化剂占整个体系重量的5～40％，酸性或中性的水溶液的量占整个体系重量的1-15％，壳聚糖占整个体系重量的0.02-0.2％，交联剂的用量占整个体系重量的0.03-0.3％，纳米磁性材料占整个体系重量的0.02-0.2％，缓释药物为0-0.6％，其余为溶剂，其中所述的缓释药物选自水溶性的化疗药物，但是缓释药物的含量不等于0；

(2)固化反应：将步骤(1)所制得的反相乳液在室温下，不断均匀混合0.1-5小时。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其进一步包括如下步骤：

(3)清洗；

(4)对清洗之后的磁性药物微球进行干燥。

12.根据权利要求10或11任一所述制备方法，其中所述的在酸性或中性的水溶液中选自醋酸水溶液、水、盐酸水溶液、硫酸水溶液之一或其组合。

13.根据权利要求12所述制备方法，其中所述的酸性或中性的水溶液中选自醋酸水溶液，醋酸水溶液的浓度在3～6％(w/w)。

14.根据权利要求10或11任一所述的制备方法，其中所述的水溶性的化疗药物选自阿霉素、顺铂、表阿霉素的一种或其组和。

15.根据权利要求14所述的制备方法，其中所述的水溶性的化疗药物选自阿霉素。

16.根据权利要求10或11任一所述的制备方法，其中所述的纳米磁性材料为纳米碳包铁粉末、纳米纯铁粉末、纳米四氧化三铁粉末的之一或其组合。

17.根据权利要求16所述的制备方法，其中所述的纳米磁性材料为纳米碳包铁粉末，其平均粒径为0.8---100纳米。

18.根据权利要求10或11任一所述的制备方法，其中所述的交联剂是戊二醛或三聚磷酸钠。

19.根据权利要求10或11任一所述的制备方法，其中所述的乳化剂为气溶胶OT，所述的有机溶剂为二甲苯。

20.根据权利要求10或11任一所述的制备方法，其中所述的混合为超声搅拌。

21.一种用于治疗恶性肿瘤的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1--9任一所述的磁性药物微球和药学上可接受的载体。

22.权利要求1--9任一所述的纳米磁性药物微球在制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用。

Images