CN111450267A - 一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法 - Google Patents

一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111450267A
CN111450267A CN202010317321.XA CN202010317321A CN111450267A CN 111450267 A CN111450267 A CN 111450267A CN 202010317321 A CN202010317321 A CN 202010317321A CN 111450267 A CN111450267 A CN 111450267A
Authority
CN
China
Prior art keywords
adriamycin
ferroferric oxide
microsphere
gelatin
microspheres
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010317321.XA
Other languages
English (en)
Inventor
李洁
纪建松
杜永忠
徐民
陈敏江
翁巧优
吴徐璐
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lishui Central Hospital
Original Assignee
Lishui Central Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lishui Central Hospital filed Critical Lishui Central Hospital
Priority to CN202010317321.XA priority Critical patent/CN111450267A/zh
Publication of CN111450267A publication Critical patent/CN111450267A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1821—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1824—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles
    • A61K49/1827—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle
    • A61K49/1866—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle the nanoparticle having a (super)(para)magnetic core coated or functionalised with a peptide, e.g. protein, polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0052—Thermotherapy; Hyperthermia; Magnetic induction; Induction heating therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及微球制备技术领域，具体为一种能实现阿霉素的缓释微球及其制备技术。一种阿霉素四氧化三铁纳米粒共载微球，主要由四氧化三铁纳米粒、阿霉素、明胶组成，利用高压静电喷雾法制备可控粒径的阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球，从而满足临床精准栓塞的要求。阿霉素与四氧化三铁纳米粒微球可实现阿霉素的缓释，其与肿瘤细胞共孵育之后，阿霉素能从微球中释放杀伤肿瘤细胞，同时通过微波加热提高肿瘤局部温度，协同杀伤肿瘤细胞，显著提高肿瘤细胞的抑制率，以及手术后的无创检查。

Description

一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法
技术领域
本发明涉及微球制备技术领域，具体为一种能实现缓释阿霉素和磁共振成像的微球及其制备技术。
背景技术
肝细胞肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，并且具有肝癌细胞快速浸润、肝硬化和转移等不良后果。然而，大多数患者确诊时多为肝癌中晚期，无法进行手术切除。在欧洲和美国官方治疗指南中，局部区域治疗法例如肝动脉化疗栓塞。肝动脉化疗栓塞术是通过导管选择性或超选择性地插入到肿瘤供血靶动脉，以适当的速度注入适量的栓塞剂，阻断肿瘤血管，从而引起肿瘤组织的缺血坏死，将抗癌药物和栓塞剂混合进行栓塞即可起到化疗性栓塞作用。在传统的肝动脉化疗栓塞方案中，化疗药物直接进入血液，引起血液中的化疗药物浓度过高，导致全身不良反应。将化疗药物包载于微球中进行栓塞，通过微球骨架的降解实现化疗药物的缓慢释放，降低了化疗药物的全身血药浓度，从而减少化疗药物不良反应的发生。
当前，药物磁性微球作为一种新型靶向给药剂型在肿瘤的靶向治疗中越来越受重视。将包载化疗药物的磁性微球选择性地注入肿瘤动脉，并通过外加磁场将药物固定于肿瘤部位，利用微球骨架的降解，药物以缓控释放的方式持续作用于肿瘤局部，而减少对周围其他正常组织的毒副作用。同时，磁性微球可以吸收微波产生热量，提高肿瘤局部温度，不仅可以促进肿瘤细胞对化疗药物的吸收，而且能直接杀伤肿瘤细胞，从而达到抗肿瘤的目的。
明胶是一种天然的高分子材料,其结构与生物体组织结构相似,因此具有良好的生物相容性。同时，明胶作为一种天然的水溶性的生物可降解高分子材料,其降解产物易被吸收而不产生炎症反应，为理想的微球制备材料。明胶分子中含有的氨基可与戊二醛的醛基进行反应，形成较高密度的交联键而固化成微球。
阿霉素是一种常用的蒽环类广谱抗肿瘤药物，具有细胞毒性和神经毒性，适用于急性白血病、肝癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌等疾病。将阿霉素包载到磁性微球内，微球通过磁场可富集到肿瘤部位，实现肿瘤局部的阿霉素缓释。
目前，明胶微球的传统制备方法为乳化交联法。乳化交联法制备的微球粒径偏小且不均匀，无法实现微球粒径的控制，不能满足精准栓塞的要求。本实验使用高压静电喷雾法制备阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球，即在高压电场中将液体分散成微米级的雾滴而后交联成微球，只需更换不同直径的针头，即可控制微球粒径。阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球可靶向控制栓塞部位，并在肿瘤部位缓释阿霉素发挥抗肿瘤作用。同时，磁性微球不仅可吸收微波使肿瘤部位升温而杀伤肿瘤，并且能实现磁共振成像。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，本发明的第一目的是提供一种能实现阿霉素和四氧化三铁纳米粒共载并缓释的微球，此微球可实现阿霉素的缓释及磁共振T2加权成像显影。第二目的是提供一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，此方法可以进一步应用于磁共振T2加权成像显示TACE手术期间栓塞的精确位置。
为实现本发明之第一目的，采用以下技术方案予以实现：
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球，包括四氧化三铁纳米粒、阿霉素和明胶，具体通过以下方法获得：
1）将盐酸阿霉素和明胶溶解于水中，制得阿霉素明胶溶液；
2）将四氧化三铁纳米粒超声分散于阿霉素明胶溶液中，制得混合溶液；
3）将戊二醛和司盘80分散于液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中；
4）通过微量注射泵将混合溶液匀速滴入快速搅拌的油相中，在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器；
5）不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，逐渐形成微球；
6）步骤5的微球经过抽滤，所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，自然干燥，收集固体得到阿霉素和四氧化三铁纳米粒共载微球；
7）将步骤6收集到的微球称重，测得回收率约68.5-78.9%。
作为优选方案，各组分质量百分比如下：四氧化三铁纳米粒 4.3-5.5%，阿霉素1.6-1.8%，明胶92.7-94.1%。
为实现本发明之第二目的，采用以下技术方案予以实现
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，称取步骤6的微球中加二甲亚砜，使包载的阿霉素游离，用紫外分光光度法测得微球中阿霉素负载量为1.6-1.8%。
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，称取步骤6的微球，加1mL王水，使包载的四氧化三铁纳米粒游离，用ICP-MS法测得微球中四氧化三铁纳米粒负载量约为4.3-5.5%。
与现有技术相比较，本发明的有益效果是：使用高压静电喷雾法制备阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球，即在高压电场中将液体分散成微米级的雾滴而后交联成微球，只需更换不同直径的针头，即可控制微球粒径。阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球可靶向控制栓塞部位，并在肿瘤部位缓释阿霉素发挥抗肿瘤作用。同时，磁性微球不仅可吸收微波使肿瘤部位升温而杀伤肿瘤，并且能实现磁共振成像。提供阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球制备方法，并在肿瘤治疗中的应用，阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球可实现阿霉素缓释，阿霉素与四氧化三铁纳米粒微球与肿瘤细胞共孵育之后，阿霉素能从微球中释放杀伤肿瘤细胞，同时通过微波加热提高肿瘤局部温度，协同杀伤肿瘤细胞，显著提高肿瘤细胞的抑制率，以及手术后的无创检查。
附图说明
图1为发明专利微球中阿霉素的体外释放情况图；
图2为本发明专利微球的体外抗肿瘤效果图。
具体实施方式
本发明用以下实施例予以解释，这些实施例的目的只是为了解释而不是以任何方式限制本发明。
实施例1
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，包括10mg盐酸阿霉素、5mg/mL的四氧化三铁纳米粒溶液3mL和200mg明胶。阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备如下：
步骤1将10mg盐酸阿霉素和200mg明胶溶解于7mL水中，制得阿霉素明胶溶液；
步骤2将5mg/mL 的四氧化三铁纳米粒溶液3mL超声分散于阿霉素明胶溶液中，制得混合溶液；
步骤3将200μL25%戊二醛溶液和200μL司盘80分散于15mL液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中；
步骤4通过微量注射泵将混合溶液以3mL/h的流速缓慢地滴入均速搅拌的油相中，同时在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器；
步骤5不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，逐渐形成微球；
步骤6所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，抽滤干燥，收集固体得到阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球；
将步骤6收集到的微球称重，测得回收率为68.5-78.9%。
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，称取10mg微球置于10mL二甲亚砜中，超声使其完全溶解，使包载的阿霉素游离，用紫外分光光度法测得微球中阿霉素负载量约为1.6-1.8%。
称取5mg微球，加1mL王水破坏，使包载的四氧化三铁纳米粒游离，用ICP-MS测得微球中四氧化三铁纳米粒负载量约为4.3-5.5%。
利用荧光倒置显微镜观察微球形态并进行粒径测定，微球粒径约为160.3-275.1μm。
实施例2
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，包括10mg盐酸阿霉素、5mg/mL的四氧化三铁纳米粒溶液3mL和100mg明胶。
阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备如下：
步骤1将10mg盐酸阿霉素和100mg明胶溶解于10mL水中，制得阿霉素明胶溶液。
步骤2将5mg/mL的四氧化三铁纳米粒溶液3mL超声分散于阿霉素明胶溶液中，制得混合溶液。
步骤3将200μL25%戊二醛溶液和200μL司盘80分散于15mL液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中。
步骤4通过微量注射泵将混合溶液以3mL/h的流速缓慢地滴入均速搅拌的油相中，同时在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器。
步骤5不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，。
步骤6所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，抽滤干燥，收集固体得到阿霉素/四氧化三铁纳米粒共载微球。
利用荧光倒置显微镜观察微球形态，制得微球易出现拖尾现象，较柔软，说明明胶含量低时固化效果不佳。
实施例3
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，包括10mg盐酸阿霉素、5mg/mL的四氧化三铁纳米粒溶液3mL和300mg明胶。
阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备如下：
步骤1将10mg盐酸阿霉素和300mg明胶溶解于10mL水中，制得阿霉素明胶溶液。
步骤2将5mg/mL的四氧化三铁纳米粒溶液 3mL超声分散于阿霉素明胶溶液中，制得混合溶液。
步骤3将200μL25%戊二醛溶液和200μL司盘80分散于15mL液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中。
步骤4通过微量注射泵将混合溶液以3mL/h的流速缓慢地滴入均速搅拌的油相中，同时在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器。
步骤5不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，。
步骤6所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，抽滤干燥，收集固体得到阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球。
利用荧光倒置显微镜观察微球形态，制得微球成球性好，但明胶含量较高时溶液粘度较高易堵塞针头。
实施例4
一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，包括10mg盐酸阿霉素、5mg/mL的四氧化三铁纳米粒溶液3mL和200mg明胶。
阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备如下：
步骤1将10mg盐酸阿霉素和100mg明胶溶解于10mL水中，制得阿霉素明胶溶液。
步骤2将5mg/mL 的四氧化三铁纳米粒溶液3mL超声分散于阿霉素明胶溶液中，制得混合溶液。
步骤3将100μL25%戊二醛溶液和200μL司盘80分散于15mL液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中。
步骤4通过微量注射泵将混合溶液以3mL/h的流速缓慢地滴入均速搅拌的油相中，同时在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器。
步骤5不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，。
步骤6所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，抽滤干燥，收集固体得到阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球。
利用荧光倒置显微镜观察微球形态，制得微球成球率低，且易破裂，说明戊二醛含量低时固化效果不佳。
实施例5
一种阿霉素明胶微球的制备方法，包括10mg盐酸阿霉素和200mg明胶。
阿霉素明胶微球的制备如下：
步骤1将10mg盐酸阿霉素和200mg明胶溶解于水中，制得阿霉素明胶溶液。
步骤2将200μL25%戊二醛和200μL司盘80分散于15mL液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中。
步骤3通过微量注射泵将混合溶液以3mL/h的流速缓慢地滴入均速搅拌的油相中，同时在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器。
步骤4不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，逐渐形成微球。
步骤5所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，抽滤干燥，收集固体得到阿霉素明胶微球。
将步骤5收集到的微球称重，测得回收率约为60.2-72.0%。
称取10mg微球置于10mL二甲亚砜中，超声使其完全溶解，使包载的阿霉素游离，用紫外分光光度法测得微球中阿霉素负载量约为2.1-2.3%。
利用荧光倒置显微镜观察微球形态并进行粒径测定，微球粒径约为139.0-282.6μm。
实施例6
一种明胶微球的制备方法，包括200mg明胶。
明胶微球的制备如下：
步骤1将200mg明胶溶解于水中，制得明胶溶液。
步骤2将200μL25%戊二醛和200μL司盘80分散于15mL液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中。
步骤3通过微量注射泵将溶液以3mL/h的流速缓慢地滴入均速搅拌的油相中，同时在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器；
步骤4不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，逐渐形成微球；
步骤5所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，抽滤干燥，收集固体得到明胶微球。
将步骤5收集到的微球称重，测得回收率约为59.61-77.51%。
利用荧光倒置显微镜观察微球形态并进行粒径测定，微球粒径约为132.2-314.4μm。
微球中阿霉素缓释效果评价
精密称取实施例1所制得的阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球和实施例5所制得的阿霉素明胶微球各10mg，置于含有10mL磷酸缓冲盐溶液的释放管中，37℃，100rpm恒温振荡。在预设的时间点取样，每次取10mL上清液并加入10mL新鲜释放介质。用紫外分光光度法测定样品中的阿霉素浓度，测得微球中阿霉素的体外释放情况。由附图1可知，通过微球包载后，阿霉素能缓慢从微球中释放，并且持续释放达到26天以上。因此，微球能有效延缓阿霉素的释放。
微球的体外抗肿瘤效果评价
将VX 2肿瘤细胞常规消化，以5×104个（1mL）/孔，接种于12孔板Transwell细胞板，每孔体积约1mL。孵育过夜，在Transwell小室中分别加入10mg的实施例1所制得的阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球、实施例5所制得的阿霉素明胶微球和实施例6所制得的明胶微球，未加微球的细胞作为空白对照，每孔设置3个平行组。微球和细胞共孵育48h之后，将浓度为5mg/ml的MTT以每孔200μL加入12孔板中，放入培养箱中继续培养4h。弃去上清液，每孔加入1mL 二甲亚砜以溶解紫色的沉淀物甲瓒，放入水浴恒温振荡器中，振荡15min。从12孔板中，每孔吸取200μL，加入96孔板中，每孔重复2次。将96孔板放入酶标仪中，测定在波长570nm处各孔吸光度A值。以未装有微球的细胞作为对照，求出各组肿瘤细胞的细胞存活率。
细胞存活率(%)= (AT/AC )×100%
式中AT为实验组570 nm处的吸光值，AC为空白对照组570 nm处的吸光值。根据吸光度值计算各实验组细胞存活率。
在此基础上，增设体外微波热疗组，在加入微球后分别对所有组进行微波照射（25W，1h），之后继续孵育48小时，MTT法考察对VX2细胞增殖的抑制效果。
由附图2可知，阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球和阿霉素明胶微球在体外都能杀伤肿瘤细胞。值得注意的是，当结合体外微波治疗时，阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的抗肿瘤作用明显增强。

Claims (4)

1.一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球，其特征在于，包括四氧化三铁纳米粒、阿霉素和明胶，具体通过以下方法获得：
1）将盐酸阿霉素和明胶溶解于水中，制得阿霉素明胶溶液；
2）将四氧化三铁纳米粒超声分散于阿霉素明胶溶液中，制得混合溶液；
3）将戊二醛和司盘80分散于液体石蜡中，制得油相，并置于4℃冰水浴中；
4）通过微量注射泵将混合溶液匀速滴入快速搅拌的油相中，在注射器针头与液面之间接入高压静电发生器；
5）不断搅拌1h，液滴表面的明胶与戊二醛交联成键，逐渐形成微球；
6）步骤5的微球经过抽滤，所得的固体分别用5-10mL异丙醇和15-30mL石油醚洗涤，自然干燥，收集固体得到阿霉素和四氧化三铁纳米粒共载微球；
7）将步骤6收集到的微球称重，测得回收率约68.5-78.9%。
2.根据权利要求1所述的阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球，其特征在于，各组分质量百分比如下：四氧化三铁纳米粒 4.3-5.5%，阿霉素1.6-1.8%，明胶92.7-94.1%。
3.根据权利要求1所述的一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，其特征在于，称取步骤6的微球中加二甲亚砜，使包载的阿霉素游离，用紫外分光光度法测得微球中阿霉素负载量为1.6-1.8%。
4.根据权利要求1所述的一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球的制备方法，其特征在于，称取步骤6的微球，加1mL王水，使包载的四氧化三铁纳米粒游离，用ICP-MS法测得微球中四氧化三铁纳米粒负载量约为4.3-5.5%。
CN202010317321.XA 2020-04-21 2020-04-21 一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法 Pending CN111450267A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010317321.XA CN111450267A (zh) 2020-04-21 2020-04-21 一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010317321.XA CN111450267A (zh) 2020-04-21 2020-04-21 一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111450267A true CN111450267A (zh) 2020-07-28

Family

ID=71672003

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010317321.XA Pending CN111450267A (zh) 2020-04-21 2020-04-21 一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111450267A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114129724A (zh) * 2020-09-03 2022-03-04 天津大学 一种微波激发的靶向杀菌纳米粒子、制备方法及其应用
CN114225094A (zh) * 2021-11-17 2022-03-25 丽水市中心医院 含纳米碳酸钙的明胶复合栓塞微球、其制备方法及载药栓塞微球
CN115463250A (zh) * 2022-08-31 2022-12-13 武汉理工大学 一种促成骨的明胶包覆四氧化三铁磁性微球及其制备方法与应用
CN115581672A (zh) * 2022-10-25 2023-01-10 北京冠合医疗科技有限公司 一种用于栓塞剂的明胶-淀粉复合微球及制备方法和药物组合物

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1509595A (zh) * 2002-12-26 2004-07-07 诚 张 纳米材料能使局部产热增加的方法
CN1686087A (zh) * 2005-03-30 2005-10-26 深圳市人民医院 纳米磁性药物微球及其制备方法和应用
CN102585258A (zh) * 2012-03-31 2012-07-18 北京大学 一种明胶栓塞微球及其制备方法和应用
CN107011704A (zh) * 2017-03-27 2017-08-04 汕头大学 一种微波发热涂料

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1509595A (zh) * 2002-12-26 2004-07-07 诚 张 纳米材料能使局部产热增加的方法
CN1686087A (zh) * 2005-03-30 2005-10-26 深圳市人民医院 纳米磁性药物微球及其制备方法和应用
CN102585258A (zh) * 2012-03-31 2012-07-18 北京大学 一种明胶栓塞微球及其制备方法和应用
CN107011704A (zh) * 2017-03-27 2017-08-04 汕头大学 一种微波发热涂料

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
施锋等: "磁性阿霉素纳米微球的制备及在高频磁场中的发热研究", 《生物医学工程学杂志》 *
梅建国等: "纳米微球在生物医药领域的应用", 《材料导报》 *
黄佳英: "阿霉素磁性明胶微球的制备、表征及体外释放性能的研究", 《万方学位论文》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114129724A (zh) * 2020-09-03 2022-03-04 天津大学 一种微波激发的靶向杀菌纳米粒子、制备方法及其应用
CN114225094A (zh) * 2021-11-17 2022-03-25 丽水市中心医院 含纳米碳酸钙的明胶复合栓塞微球、其制备方法及载药栓塞微球
CN115463250A (zh) * 2022-08-31 2022-12-13 武汉理工大学 一种促成骨的明胶包覆四氧化三铁磁性微球及其制备方法与应用
CN115581672A (zh) * 2022-10-25 2023-01-10 北京冠合医疗科技有限公司 一种用于栓塞剂的明胶-淀粉复合微球及制备方法和药物组合物

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111450267A (zh) 一种阿霉素与四氧化三铁纳米粒共载微球及制备方法
Rao et al. Chitosan-decorated doxorubicin-encapsulated nanoparticle targets and eliminates tumor reinitiating cancer stem-like cells
Ren et al. Sequential co-delivery of miR-21 inhibitor followed by burst release doxorubicin using NIR-responsive hollow gold nanoparticle to enhance anticancer efficacy
Xu et al. Highly stable and biocompatible hyaluronic acid-rehabilitated nanoscale MOF-Fe 2+ induced ferroptosis in breast cancer cells
Xu et al. A reactive oxygen species (ROS)-responsive low molecular weight gel co-loaded with doxorubicin and Zn (ii) phthalocyanine tetrasulfonic acid for combined chemo-photodynamic therapy
Zhao et al. Gold nanoparticles modified hollow carbon system for dual-responsive release and chemo-photothermal synergistic therapy of tumor
He et al. Localized multidrug co-delivery by injectable self-crosslinking hydrogel for synergistic combinational chemotherapy
CN113018463B (zh) 一种含放射性核素的医用天然高分子微球及其制备方法和用途
Yang et al. NIR-activated self-sensitized polymeric micelles for enhanced cancer chemo-photothermal therapy
Jiang et al. Zoledronate and SPIO dual-targeting nanoparticles loaded with ICG for photothermal therapy of breast cancer tibial metastasis
Gong et al. Triformyl cholic acid and folic acid functionalized magnetic graphene oxide nanocomposites: Multiple-targeted dual-modal synergistic chemotherapy/photothermal therapy for liver cancer
Jin et al. Hollow gold nanoshells-incorporated injectable genetically engineered hydrogel for sustained chemo-photothermal therapy of tumor
Ma et al. Polyacrylic acid functionalized Co0. 85Se nanoparticles: An ultrasmall pH-responsive nanocarrier for synergistic photothermal-chemo treatment of cancer
He et al. Spatiotemporally controlled O 2 and singlet oxygen self-sufficient nanophotosensitizers enable the in vivo high-yield synthesis of drugs and efficient hypoxic tumor therapy
Zhu et al. Facile synthesis and characterization of multifunctional cobalt-based nanocomposites for targeted chemo-photothermal synergistic cancer therapy
He et al. Near-infrared light-controllable bufalin delivery from a black phosphorus-hybrid supramolecular hydrogel for synergistic photothermal-chemo tumor therapy
Zhang et al. Dual-phase injectable thermosensitive hydrogel incorporating Fe3O4@ PDA with pH and NIR triggered drug release for synergistic tumor therapy
Liu et al. Targeted and pH-facilitated theranostic of orthotopic gastric cancer via phase-transformation doxorubicin-encapsulated nanoparticles enhanced by low-intensity focused ultrasound (LIFU) with reduced side effect
Hou et al. Dual-responsive polyphosphazene as a common platform for highly efficient drug self-delivery
Chen et al. Polyvalent spherical aptamer engineered macrophages: X-ray-actuated phenotypic transformation for tumor immunotherapy
CN115381965A (zh) 一种γδT细胞功能化的磁性微球、制备方法及其用途
Chen et al. Injectable hydrogel for synergetic low dose radiotherapy, chemodynamic therapy and photothermal therapy
Ding et al. Efficient starvation therapy with three-pathway blocking in combination with PTT/CDT for TME reversal and tumor apoptosis
Xing et al. Engineering near-infrared laser-activated gold nanorod vesicles with upper critical solution temperature for photothermal therapy and chemotherapy
CN112656944B (zh) 一种齐墩果酸纳米凝胶的制备方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination