CN107115297B - 一种负载双药的杂合前药纳米组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种负载双药的杂合前药纳米组合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种负载双药的杂合前药纳米组合物及其制备方法与应用。所述的纳米组合物包含两亲性聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇，亲水性药物与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺共价结合形成的两亲性前药，和包裹于上述两种两亲性材料形成的杂合的纳米胶束核中的疏水药物。本发明所得的负载双药的杂合前药纳米组合物能够在血液循环中稳定存在，并且特异性聚集在肿瘤部位。到达肿瘤部位后在肿瘤软组织之间有较好的渗透性，能渗透到肿瘤内部。并且可以有效地聚集在耐药肿瘤细胞内部不被排出，可控地将所负载的药物在肿瘤细胞内释放出来，从而增强药物杀伤力，降低毒副作用。

Description

一种负载双药的杂合前药纳米组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于纳米药物领域，尤其涉及一种负载双药的杂合前药纳米组合物及其制备方法。
背景技术
近几十年来，纳米科学得到了飞速的发展，在生物医药等领域掀起了巨大的变革。纳米 药物的迅猛发展，对传统小分子药物在体内的传输产生了深远的影响。广义的说，纳米药物 是指利用纳米技术，将药物活性成分装载到纳米材料中，制备出尺度为纳米级的药物，这些 纳米药物可以输送药物活性成分至体内靶点位置，进而释放药物发挥其活性作用。相对小分 子药物来说，纳米药物既提高了药物疗效，又降低了药物的毒副作用。
化疗药物联合治疗能提高单一药物的治疗效果,是目前临床肿瘤治疗的主要模式,但由于 化疗药物特异性差、不良反应较大,限制了其临床应用。纳米给药系统共递送化疗药物能够联 合多种治疗药物同时作用于靶点,发挥药物间的协同作用,提高疗效并对抗肿瘤细胞的耐药性。 纳米给药系统能够实现药物对肿瘤细胞的靶向传递,大大提高治疗效果并有效减轻不良反应, 改善患者预后，具有广阔的前景。但在设计、制备以及控制同步释放等问题上仍面临着诸多 挑战。
纳米药物载体在肿瘤中的分布直接影响其负载药物的治疗效果，纳米药物在血液循环中 容易被免疫系统所识别进而排除体外，只有在血液循环中稳定存在的纳米颗粒才有可能通过 渗透滞留效应靶向到肿瘤部位。聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种安全,无毒,水溶性 较高的，广泛用于生物医药高分子化合物,其重复单元为氧乙烯基,呈线性或支化链状结构. 聚乙二醇聚合物是迄今为止已知聚合物中蛋白和细胞吸收水平最低的聚合物,能够避免免疫 系统的识别。并且，肿瘤独特的生理病理学特点限制了纳米材料在肿瘤中的深入渗透，限制 纳米药物载体向内部的渗透，阻碍其均匀分布。在众多的纳米颗粒中，小粒径的纳米粒子在 渗透方面表现出更强的优势。因为其在肿瘤基质中，有较弱的渗透阻碍，因而表现出较强的 肿瘤穿透能力。以磷脂为疏水端的两亲性材料形成的纳米胶束粒径极小，并且具有较高的稳 定性。然而，在一个理想的给药系统中，给药系统通过对外界环境的细微刺激做出响应，并 产生相应的物理结构或化学性质的变化来达到控释目的。两亲性磷脂类聚合物所形成的胶束 在使用中药物控释性不良，而且亲水性与疏水性的药物的共同递送能力较差，因此其应用被 限制。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种负载双药的杂合前药纳米组合物及其 制备方法与应用。
本发明将亲水药物的结构适当通过化学敏感键进行亲脂化修饰，合成既亲水又亲脂的两 亲性前药，进而制备环境响应的两亲性前药的纳米制剂，并且通过共组装制备PEG化的载双 药的环境敏感型小粒径纳米药物。
一方面，本发明提供一种负载双药的杂合前药纳米组合物，其包含：两亲性的二硬脂酰 基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，亲水性药物与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)共价结合(例 如通过pH裂解的苯甲酰亚氨键)形成的两亲性前药(简称前药)，和包裹于由上述两者即所 述两亲性前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇形成的杂合的纳米胶束核中的疏水药物。
本发明所述亲水性药物与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)共价结合(例如通过pH裂 解的苯甲酰亚氨键)形成的两亲性(即亲水性和亲油性)的前药，该前药可在体内环境(pH 值5.0-6.8)中裂解苯甲酰亚氨键，从而释放亲水性药物。
所述亲水性药物可选用带有氨基且能与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺共价结合(例如通过pH 裂解的苯甲酰亚氨键连接)的亲水药物，例如抗癌药物阿霉素(DOX)、吉西他滨等。
当所述亲水性药物选用阿霉素时，阿霉素与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺共价结合(通过pH 裂解的苯甲酰亚氨键)形成二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-阿霉素，其结构式如下所示：
Figure BDA0001258169560000021
本发明所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的结构式如下：
Figure BDA0001258169560000022
优选地，所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中聚乙二醇链段的重均分子量为 2000Da。
本发明所述疏水药物可选用紫杉醇、粉防己碱(TET)等。
在本发明一个具体实施方式中，所述亲水药物为阿霉素，所述疏水药物为粉防己碱；在本 发明另一个具体实施方式中，所述亲水药物为吉西他滨，所述疏水药物为粉防己碱；在本发 明另一个具体实施方式中，所述亲水药物为吉西他滨，所述疏水药物为紫杉醇。
本发明所述负载双药的杂合前药纳米组合物中所述两亲性前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇的摩尔比为1:0.5-1:2，例如1:0.6,1:0.8,1:1,1:1.2,1:1.6或1:1.8，优选为1:1。
本发明所述负载双药的杂合前药纳米组合物中所述亲水药与疏水药的质量比为1:1-5:1， 例如1:1,2:1,3:1或4:1，优选为4:1。
在本发明所述负载双药的杂合前药纳米组合物中亲水药的包封率为70.00-95.00％，例如 73.75％、74.60％、80.89％、83.00％、84.00％、87.92％、82.00％、84.17％、90.00％、92.00％ 或95.00％，优选为85.43％。
在本发明所述负载双药的杂合前药纳米组合物中疏水药的包封率为60.00-85.00％，例如 63.75％、64.60％、60.89％、63.00％、64.00％、67.92％、72.00％、74.17％、80.00％、82.00％ 或85.00％，优选为76.48％。
本发明所述包封率是指杂合的纳米胶束中亲水药或疏水药的含量占原始投药量的比率。 主要是指被杂合的纳米胶束包进去的药物含量与初始投药量之比。
本发明所述负载双药的杂合前药纳米组合物(形成的纳米粒子)的粒径分布为15-40nm， 平均粒径为28nm。
另一方面，本发明提供了上述负载双药的杂合前药纳米组合物的制备方法，包括以下步 骤：
1)将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与对苯二甲醛发生缩合反应(缩合反应后进行浓缩，沉淀， 过滤，干燥等处理)，得到活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺；反应历程如下所示：
Figure BDA0001258169560000031
2)将所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与所述亲水药物反应(所述亲水药物中的氨基 与所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺中的醛基基团反应生成苯甲酰亚氨键，反应后进 行透析，冻干等处理)，制成两亲性的前药；
3)将所得两亲性的前药、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺溶液-聚乙二醇和疏水药物溶于有机 溶剂，旋膜，水化，即得负载双药的杂合前药纳米组合物。
上述制备方法步骤1)中，
优选地，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与对苯二甲醛的摩尔比为1:5-1:50，进一步优选为1:20；
优选所述缩合反应的溶剂为无水二氯甲烷；
优选所述缩合反应温度为25-50℃，进一步优选为40℃；
优选所述缩合反应时间为4-48小时，进一步优选为24小时；
优选采用旋转蒸发浓缩(所用仪器为旋转蒸发仪)；
优选所述沉淀使用乙醚为沉淀剂。
上述制备方法步骤2)中，
优选地，所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与所述亲水药物(例如阿霉素)的摩尔比 为1:1＝1:1.5，进一步优选为1:1.2；
优选所述反应温度为25-50℃，进一步优选为40℃；
优选所述反应时间为4-48小时，进一步优选为24小时；
优选地，所述反应溶剂为二甲基亚砜；
优选地透析所用试剂首先为甲醇，然后改成中性去离子水。
所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与阿霉素反应生成二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-阿霉素 (DSPE-DOX)，其反应历程如下所示：
Figure BDA0001258169560000041
上述制备方法步骤3)中，
所述有机溶剂优选为三氯甲烷和/或三氟乙醇，进一步优选为三氯甲烷/三氟乙醇(v:v＝2:1)。
所述三氟乙醇即2,2,2-三氟乙基乙醇。
所述旋膜所用仪器为旋转蒸发仪；
所述水化溶剂为PBS缓冲液或去离子水。
优选地，所述水化时间为10分钟-2小时，进一步优选为0.5小时。
所述两亲性的前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的摩尔比为1:0.5-1:2，例如 1:0.6,1:0.8,1:1,1:1.2,1:1.6或1:1.8，优选为1:1。
所述亲水药与包裹的疏水药的质量比为1:1-5:1，例如1:1,2:1,3:1或4:1，优选为4:1。
本发明还包括上述负载双药的杂合前药纳米组合物在制备小尺寸的具有强组织渗透功能 的药物中的应用。
本发明还包括含有上述负载双药的杂合前药纳米组合物的药物。进一步地，所述药物还 包括药学上可用的辅料、载体或助剂。
本发明所述负载双药的杂合前药纳米组合物能够在血液循环中稳定存在，延长血液循环 时间，并且特异性聚集在肿瘤部位。到达肿瘤部位后在肿瘤软组织之间有较好的渗透性，能 渗透到肿瘤内部。并且可以有效地聚集在耐药肿瘤细胞内部不被排出，可控地将所负载的药 物在肿瘤细胞内释放出来，从而增强药物杀伤力，降低毒副作用。
本发明制备的负载双药的杂合前药纳米组合物具有较高的血液循环稳定性，能够完全实 现对肿瘤的高度靶向，在肿瘤中的均匀扩散，以及肿瘤细胞高效摄取功能的统一，并能在靶 向部位智能释放所负载的药物。使用不同类型药物的共投递，实现药物治疗的协同作用，进 一步提高治疗效果。
附图说明
图1为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子的透射电镜图；
图2为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子的粒径分布图；
图3为实施例1中活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的核磁共振氢谱图；
图4为实施例1中活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的红外谱图；
图5为实施例1中二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-阿霉素的核磁共振氢谱图；
图6为实施例1中二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-阿霉素的红外谱图；
图7为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子的稳定性评价图；
图8为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子在荷瘤小鼠体内的分布图；
图9为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子的3D肿瘤球渗透图；
图10为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子的肿瘤组织间隙分布图；
图11为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子的细胞摄入效果图；
图12为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子的细胞外排作用图；
图13为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子中亲水药DOX的释放图；
图14为实施例1中负载双药的杂合前药纳米组合物粒子中疏水药TET的释放图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或 条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或 仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
主要仪器及试剂:
旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂，型号：RE52CS-2；
透射电子显微镜：日本电子公司，型号为JEM-200CX；
激光粒度仪：马尔文仪器有限公司，Zetasizer Nano ZS，英国；
核磁共振氢谱仪：瑞士，布鲁克公司，型号为AV400；
红外光谱仪：美国珀金-埃尔默公司，型号为Spectrum one；
紫外分光光度计：美国热电公司，Heλiosβ；
液相色谱仪：美国沃特斯公司，2796；
激光共聚焦显微镜：美国蔡司公司，LSM 510 DUO confocal unit；
流式细胞仪：美国应用生物系统公司，Life Technologies。
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇购自上海前尘生物科技有 限公司，其中聚乙二醇链段的重均分子量为2000Da，阿霉素购自北京华奉联博化学材料有 限公司；吉西他滨购自北京百灵威科技有限公司，粉防己碱购自上海阿拉丁生化科技股份有 限公司。
本发明通过旋膜法制备负载双药的杂合前药纳米组合物纳米粒，其中的疏水链段二硬脂 酰基磷脂酰乙醇胺由于疏水相互作用而聚集形成粒子的内核，可以负载疏水药物。
实施例1
将100mg的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与362mg的对苯二甲醛溶解于20mL无水二氯甲 烷，在40℃条件下搅拌24小时。将所得溶液用减压旋转蒸发仪进行浓缩。将浓缩后的溶液 用乙醚进行分散，在0℃下结晶。对混合物进行过滤，烘干，得到活化的二硬脂酰基磷脂酰 乙醇胺。
称取85mg活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和75mg阿霉素溶于20ml无水二甲基亚砜， 在40℃条件下搅拌24小时。将所得溶液在甲醇中透析12小时，然后再在pH中性的去离子 水中透析24小时，用冻干机冻干，得到苯甲酰亚胺键连接的前药(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 -阿霉素，DSPE-DOX)。
利用核磁共振氢谱仪和红外光谱仪表征所得到的前药(DSPE-DOX)分子的化学结构。 图3为实施例1中的活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的核磁共振氢谱图，图4为实施例1中 的活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的红外光谱图，图5为实施例1中的二硬脂酰基磷脂酰乙 醇胺-阿霉素的核磁共振氢谱图，图6为实施例1中的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-阿霉素的红 外光谱图。
将1mL浓度为10mg/mL的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-阿霉素的三氯甲烷/三氟乙醇溶液， 0.4mL浓度为120mg/mL的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的三氯甲烷/三氟乙醇溶液与 100ul浓度为12mg/mL的粉防己碱的三氯甲烷/三氟乙醇溶液混合，使用旋转蒸发仪旋膜，然 后加入5ml去离子水超声乳化0.5小时。得到负载双药的杂合前药纳米组合物纳米粒子。以 上溶剂三氯甲烷/三氟乙醇(v:v＝2:1)。
对制备得到的负载双药的杂合前药纳米组合物纳米粒子的性质进行检测：
通过标准曲线法分别用可见紫外分光光度计和液相色谱仪测定包入纳米粒子的阿霉素和 粉防己碱的浓度，根据公式EE％＝包入纳米粒子的药物总质量/总药物质量×100％，考察载双 药杂合前药纳米组合物纳米粒的包封率。
利用透射电子显微镜观察所得到的负载双药型杂合前药纳米粒子，初步确定纳米粒径的 分布情况，如图1所示。图1表明制备的负载双药型杂合前药纳米粒子为球形粒子，这些粒 子分散均匀，且无团聚现象。
利用激光粒度仪检测所得到的负载双药型杂合前药纳米粒子，测定纳米粒的粒径分布， 如图2所示。图2表明制备的负载双药型杂合前药纳米粒子的粒径分布较窄，分散性好，平 均粒径为28.82nm。
将本实施例制备的负载双药型杂合前药纳米粒子放置7天，利用激光粒度仪每天监测其 纳米粒径，以确定所制备的负载双药型杂合前药纳米粒子的稳定情况，结果如图7所示，从 结果可以得出，制备的负载双药型杂合前药纳米粒子具有较高的稳定性。
通过小动物活体荧光成像仪观察不同时间点本实施例制备的负载双药型杂合前药纳米粒 子在荷瘤小鼠体内的分布，从而测定该纳米粒子的肿瘤靶向效果。结果如图8所示，从结果 可以得出，随着时间的推移，肿瘤部位(黑色虚线圈内)的荧光强度越强，而其他部位的荧 光强度逐渐消失，说明制备的负载双药型杂合前药纳米粒子具有较高的肿瘤靶向性。
通过体外构建3D肿瘤球模型来评价本实施例制备的负载双药型杂合前药纳米粒子的渗 透能力。结果如图9所示，通过使用激光共聚焦显微镜对肿瘤球进行层扫，发现50mm深的 时候，肿瘤球内部依然有较强的荧光信号，说明制备的负载双药型杂合前药纳米粒子具有较 高的渗透性，能有效渗透到肿瘤球内部。
通过免疫组化荧光染色对离体的肿瘤组织进行染色，分析本实施例制备的负载双药型杂 合前药纳米粒子的在肿瘤组织间隙的分布。结果如图10所示，从结果可以得出，制备的负载 双药型杂合前药纳米粒子的荧光不仅分布在肿瘤血管中，而且还分布在肿瘤组织各个部位， 说明了制备的负载双药型杂合前药纳米粒子能有效逸出血管渗透到肿瘤组织其他部位，具有 较高的渗透性。。
通过流式细胞仪定量分析本实施例制备的负载双药型杂合前药纳米粒子的细胞内吞效 果。结果如图11所示，从结果可以得出，制备的负载双药型杂合前药纳米粒子能有效地进入 肿瘤细胞。
通过流式细胞仪定量分析本实施例制备的负载双药型杂合前药纳米粒子的细胞外排情 况。结果如图12所示，从结果可以得出，制备的负载双药型杂合前药纳米粒子能抑制耐药肿 瘤细胞的外排能力从而有效地聚集在肿瘤细胞内部。
通过体外模拟生理条件(pH7.4，37℃)和细胞内溶酶体的酸性条件(pH5.0，37℃)来 评估本实施例制备的负载双药型杂合前药纳米粒子在体内的阿霉素控制释放性能。结果如图 13所示，从结果可以得出，制备的负载双药型杂合前药纳米粒子pH控制释放特性。
通过体外模拟生理条件和细胞内溶酶体的酸性条件来评估本实施例制备的负载双药型杂 合前药纳米粒子在体内的粉防己碱控制释放性能。结果如图14所示，从结果可以得出，制备 的负载双药型杂合前药纳米粒子pH控制释放特性。
实施例2
在本实施例中通过以下方法来制备两亲性前药分子，该方法包括以下步骤：
将100mg的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与400mg的对苯二甲醛溶解于20mL无水二氯甲 烷，在40℃条件下搅拌24小时。将所得溶液用减压旋转蒸发仪进行浓缩。将浓缩后的溶液 用乙醚进行分散，在0℃下结晶。对混合物进行过滤，烘干，得到活化的二硬脂酰基磷脂酰 乙醇胺。
称取85mg活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和100mg吉西他滨溶于20ml无水二甲基亚 砜，在40℃条件下搅拌24小时。将所得溶液在甲醇中透析12小时，然后再在pH中性的去离子水中透析24小时，用冻干机冻干，得到苯甲酰亚胺键连接的前药(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-吉西他滨)。
与实施例1的测试相同，利用核磁共振氢谱仪和红外光谱仪表征所得到的前药分子的化 学结构。
在本实施例中通过以下方法来制备负载双药型杂合前药纳米粒子，该方法包括以下步骤： 将1mL浓度为10mg/mL的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-吉西他滨的三氯甲烷/三氟乙醇溶液， 0.8mL浓度为120mg/mL的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的三氯甲烷/三氟乙醇溶液与 100ul浓度为12mg/mL的粉防己碱的三氯甲烷/三氟乙醇溶液混合，使用旋转蒸发仪旋膜，然 后加入5ml去离子水超声乳化0.5小时。得到负载双药的杂合前药纳米组合物纳米粒子。。以 上溶剂三氯甲烷/三氟乙醇(v:v＝2:1)。
通过与实施例1相同的测试可知，本实施例制备的负载双药型杂合前药纳米粒子具有规 整的圆球形结构，得到的纳米粒子的平均粒径为28.4nm。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明 基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不 偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (11)

1.一种负载双药的杂合前药纳米组合物，其特征在于，包含：两亲性的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，亲水性药物与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺共价结合形成的两亲性前药，和包裹于由所述两亲性前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇形成的杂合的纳米胶束核中的疏水药物；
所述亲水性药物为带有氨基且能与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺共价结合的亲水药物，具体为阿霉素或吉西他滨；
所述疏水药物为粉防己碱；
所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中聚乙二醇链段的重均分子量为2000Da；
所述负载双药的杂合前药纳米组合物中所述两亲性前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的摩尔比为1:0.5-1:2；
所述负载双药的杂合前药纳米组合物中所述亲水药与疏水药的质量比为1:1-5:1；
所述负载双药的杂合前药纳米组合物的制备方法包括以下步骤：
1)将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与对苯二甲醛发生缩合反应，得到活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺；反应历程如下所示：
Figure FDA0002291993070000011
2)将所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与所述亲水药物反应，制成两亲性的前药；
3)将所得两亲性的前药、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和疏水药物溶于有机溶剂，旋膜，水化，即得负载双药的杂合前药纳米组合物。
2.根据权利要求1所述的负载双药的杂合前药纳米组合物，其特征在于，所述负载双药的杂合前药纳米组合物中所述两亲性前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的摩尔比为1:1；
所述负载双药的杂合前药纳米组合物中所述亲水药与疏水药的质量比为4:1。
3.根据权利要求1或2所述的负载双药的杂合前药纳米组合物，其特征在于，所述负载双药的杂合前药纳米组合物中亲水药的包封率为70.00-95.00％；
和/或，所述负载双药的杂合前药纳米组合物中疏水药的包封率为60.00-85.00％。
4.根据权利要求3所述的负载双药的杂合前药纳米组合物，其特征在于，所述负载双药的杂合前药纳米组合物中亲水药的包封率为85.43％；
和/或，所述负载双药的杂合前药纳米组合物中疏水药的包封率为76.48％。
5.根据权利要求1或2所述的负载双药的杂合前药纳米组合物，其特征在于，所述负载双药的杂合前药纳米组合物的粒径分布为15-40nm，平均粒径为28nm。
6.根据权利要求1、2或4任一项所述的负载双药的杂合前药纳米组合物，其特征在于，所述亲水药物为阿霉素，所述疏水药物为粉防己碱；或，所述亲水药物为吉西他滨，所述疏水药物为粉防己碱。
7.权利要求1-6任一项所述负载双药的杂合前药纳米组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与对苯二甲醛发生缩合反应，得到活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺；反应历程如下所示：
Figure FDA0002291993070000021
2)将所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与所述亲水药物反应，制成两亲性的前药；
3)将所得两亲性的前药、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和疏水药物溶于有机溶剂，旋膜，水化，即得负载双药的杂合前药纳米组合物。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与对苯二甲醛的摩尔比为1:5-1:50；
和/或，步骤2)中，所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与所述亲水药物的摩尔比为1:1-1:1.5；
和/或，步骤3)中，所述有机溶剂为三氯甲烷和/或三氟乙醇；和/或，所述两亲性的前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的摩尔比为1:0.5-1:2；和/或，所述亲水药与疏水药的质量比为1:1-5:1。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与对苯二甲醛的摩尔比为1:20；
和/或，步骤2)中，所述活化的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与所述亲水药物的摩尔比为1:1.2；
和/或，步骤3)中，所述两亲性的前药与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的摩尔比为1:1；和/或，所述亲水药与疏水药的质量比为4:1。
10.权利要求1-6任一项所述负载双药的杂合前药纳米组合物或权利要求7-9任一项所述方法制备的负载双药的杂合前药纳米组合物在制备小尺寸的具有组织渗透能力药物中的应用。
11.含有权利要求1-6任一项所述负载双药的杂合前药纳米组合物或含有权利要求7-9任一项所述方法制备的负载双药的杂合前药纳米组合物的药物。
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