CH653990A5

CH653990A5 - Composto ad attivita antivirale, procedimento per la sua preparazione e relative composizioni farmaceutiche.

Info

Publication number: CH653990A5
Application number: CH6269/82A
Authority: CH
Inventors: Vincentiis Leonardo De
Original assignee: Ausonia Farma Srl
Priority date: 1982-03-01
Filing date: 1982-10-27
Publication date: 1986-01-31
Also published as: DE3245188A1; PT75751B; IT8219901A0; GR77687B; BE894802A; GB2115816A; NL8204175A; DE3245188C2; JPS58164560A; FR2522327A1; IT1150209B; FR2522327B1; LU84443A1; PT75751A; IN155559B; ES8308533A1; ES516854A0

Description

L'invenzione ha per oggetto un composto ad attività antivirale, e precisamente il fosfonacetato di l-N-[2-(2-dimetiIammi-noetossi)acetil-ammino]adamantano di formula (I)

NH-CO-CH -O-CH.-CH -N(CH.)

3 2

hooc-ch2-po3h2

(I)

L'invenzione riguarda inoltre un procedimento per la preparazione del fosfonacetato di tromantadina, caratterizzato dal fatto che si fanno reagire acido fosfonacetico e tromantadina, in rapporto molare pari a 1 : 2, in solventi polari come acqua o 5 — di preferenza — alcoli inferiori, e che si isola il sale così formatosi per evaporazione della soluzione o aggiunta di nonsolventi dello stesso.

La reazione si effettua a temperatura ambiente. L'esempio che segue illustra il procedimento secondo l'invenzione.

io

Esempio a) I-N-(2-Cloroacetil-ammino)adamantano

Si introducono 50 g di cloridrato di 1-amminoadamantano is in una soluzione acquosa al 10% in peso/volume di 21,3 g di idrossido di sodio; quindi sotto agitazione magnetica e raffreddando con ghiaccio al di sotto di 5°C, vi si aggiunge una soluzione di 21,5 mi di cloroacetilcloruro in 100 mi di CH2CI2. La miscela di reazione viene lasciata in agitazione vorticosa per cir-20 ca due ore; si separa la fase organica, la si lava con acqua, si secca su MgSC>4 e si evapora il solvente a pressione ridotta. Il residuo viene ricristallizzato da diisopropiletere: isopropanolo 80 : 20 (v/v). Si ottiene con resa dell'80% il prodotto desiderato, p.f. 122-123 °C.

25 b) l-N-[2-(2-dìmetilamminoetossi)acetil-ammino]adamantano

(tromantadina)

Alla soluzione di 31,3 g (0,35 moli) di dimetilamminoeta-nolo in 150 mi di tetraidrofurano anidro si aggiungono, sotto 30 agitazione e mantenendo la temperatura a 15-20°C, 8,4 g (0,35 moli) di NaH. Terminato lo sviluppo di idrogeno si aggiungono 40 g (0,17 moli) di l-N-(2-cloroacetil-ammino)adamantano, e si scalda a ricadere per 15 ore, quindi si versa in ghiaccio, si estrae la fase organica con etere etilico, la si lava con acqua e la 35 si secca su K2CO3. Si evapora il solvente a pressione ridotta e si purifica il residuo per cromatografia su silice, eluendo prima con dietiletere, poi con etanolo. Il prodotto puro (olio paglierino denso) viene isolato con resa del 53%.

40

c) Fosfonacetato di tromantadina (I)

Si sciolgono in 120 mi di etere assoluto 20 g (0,142 moli) di acido fosfonacetico e 80 g (0,285 moli) di tromantadina. La soluzione ottenuta viene evaporata a secchezza sotto vuoto. Si ottiene un solido cristallino bassofondente (p.f. ~33-40°C), mol-45 to igroscopico, solubilissimo in acqua metanolo, etanolo. Analisi elementare per C34H61PO9 (PM = 700,83)

È nota da tempo l'attività antivirale dell'acido fosfonacetico nei confronti dell'herpes vaccinico, dell'herpes di tipo 1 e dell'herpes di tipo 2. [Si veda in proposito: N.L. Shipkowitz e altri, Appi. Microb. 26, 264-267 (1973); J.E. Sugar e altri, Invest. Ophtalmol. 12, 532-534 (1973); D.D. Gerstein e altri, Antimicrob. Agents and Chemoth. 7, 285-288 (1975); R.F. Meyer, ibid. 9, 308-311 (1976)].

Altresì è descritta l'attività dell'l-N-[2-(2-dimetilammino-etossi)acetil-ammino]adamantano — noto anche con il nome di tromantadina — verso gli stessi virus [D. Peteri e W. Sterner, Arzneimittelforsch. 23, 577 (1973); G. May e D. Peteri, ibid. 23, 718 (1973)].

Si è ora trovato che il composto (I), o fosfonacetato di tromantadina, presenta sui virus erpetici un'attività sorprendentemente esaltata rispetto ai due composti sopra citati, con una attività dello stesso ordine di grandezza sul virus vaccinico.

Costituiscono pertanto oggetto della presente invenzione anche composizioni farmaceutiche ad attività antivirale contenenti il composto (I) in qualità di principio attivo.

calc.%: C 58,26 H 8,77 N 7,99 trov.%: C 57,78 H 9,04 N 7,82

Spettro IR (nujol muli; i valori delle bande di assorbimento sono espressi in cm"1):

Stretch N - ]

O

55 Stretch C =

C

bande allargate

3550-2500

1 All U1

r-H>

-H/

O acido I banda allargata 1700-1670 = O amidico )

Spettro H1 NMR (registrato in CDCI3, riferimento interno TMS; i valori dei chemical shifts sono espressi in ô): 2,4 [s, 12H, 2(CH3)2]; 2,6-3 [m, 4H, 2(CH2-N)]; 3,3-3,9 [m, 10H, 60 2(C0-CH2-0); 2(CH2-0); P-ÇH2-COOH]; 6,8 (s, IH, COH mobile); 8,3 (s, 4H, NH mobili).

Le proprietà tossico-farmacologiche del fosfonacetato di tromantadina (d'ora in poi definito per brevità con la sigla 65 AFP 723) sono riassunte qui di seguito.

Tossicità cellulare

È stata utilizzata la metodica dell'incorporazione di rosso

neutro, la quale è in grado di fornire una indicazione della vitalità delle cellule messe a contatto con il farmaco.

Per una determinazione più precisa del tipo sia dell'ampiezza dell'inibizione sono stati anche valutati i seguenti parametri:

a) tempo di crescita e capacità di divisioni cellulari;

b) incorporazione del DNA di Timidina 3H;

c) incorporazione nell'RNA di Uridina 3H;

d) incorporazione nelle proteine di Leucina 14C.

I risultati ottenuti hanno dimostrato un'assenza di tossicità fino a valori di 250 jig di farmaco/ml di terreno.

Al di sopra di tale concentrazione si nota una graduale diminuzione nell'incorporazione dei traccianti radioattivi utilizzati, con un blocco di circa il 50% della sintesi proteica al di sopra dei 500 ng/ml.

Molto meno drastica sembra essere l'inibizione del DNA, la quale viene ridotta del 50% solo a concentrazioni di circa 1000 Hg/ml.

Sono state utilizzate cellule in coltura primarie o secondarie umane diploidi (WI-38), e cellule in coltura continua di rene di scimmia.

I valori di tossicità sopra citati, considerata l'altra attività farmacologica descritta successivamente al paragrafo «attività antivirale» si tramutano in un molto favorevole coefficiente terapeutico.

Tolleranza locale

È stata determinata impiegando sia una soluzione acquosa al 5% (peso/volume) del composto sia un unguento al 5% (peso/volume). in vaselina bianca.

Sia la soluzione acquosa sia l'unguento sono stati applicati due volte al giorno per 4 settimane sul dorso di conigli New Ze-aland, depilati con rasoio elettrico. La valutazione di eventuali eritemi ed edemi è stata fatta giornalmente; solo verso il 20° giorno di trattamento, su una bassa percentuale (10%) dei conigli trattati con la soluzione acquosa, è comparso un leggero eritema transitorio, che non è aumentato nei giorni successivi fino alla fine dell'esperimento.

Assenza di effetti sistemici

Sono stati utilizzati gli stessi conigli dell'esperimento precedente. Alla fine delle 4 settimane di trattamento sono stati valutati gli eventuali effetti su circolo e respiro. In più sono stati determinanti i principali parametri ematochimici e biochimici. Gli organi principali sono stati prelevati ed è stata effettuata una ricerca istologica.

Nessun effetto è stato evidenziato su circolo e respiro; i parametri ematochimici e biochimici sono risultati nella norma e la ricerca istologica non ha evidenziato nessuna alterazione patologica.

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Attività antivirale

Sono state utilizzate cellule umane diploidi (WI 38) e cellule di rene di scimmia cresciute in capsule di Petri. Come virus infettante sono stati utilizzati tre virus a DNA (Virus Vaccinico, Herpes 1, Herpes 2) e tre virus a RNA (Virus Influenzale A, Polio virus, Virus Sinovis).

Il composto AFP 723 inibisce i virus a DNA, vaccinico ed erpetici, a concentrazione di 1-5 e rispettivamente 100 mcg/ml con una TCID50 di circa 50 jig/ml.

Pretrattando le cellule per 15 ore con 5 di AFP 723, la caduta dell'infettività è del 99,9% (da IO6 a < IO3).

L'azione antivirale del composto si esplica a livello intracellulare su una tappa intermedia della morfogenesi virale, come evidenziato dagli esami in microscopia elettronica.

A concentrazione di 50-100 ng/ml, il composto AFP 723 blocca il virus vaccinico allo stadio di forma immatura, e i virus Herpes 1 e Herpes 2 allo stadio capsidico intranucleare, la concentrazione di 10-50 (Xg/ml inibisce totalmente la produzione di virus infettante dalle placche.

La seguente tabella raffigura schematicamente i dati sopra citati, in confronto a dosi equimolecolari di acido fosfonacetico (PPA) e tromantadina.

Virus infettante

Vaccinico

Herpes 1

Herpes 2

AFP 723

+++

+++++

PPA

+++

++

Tromantadina

+++

L'attività antivirale di AFP 723 sui virus erpetici risulta sorprendentemente esaltata rispetto a quella dei farmaci di confronto, mentre l'attività sul virus vaccinico è dello stesso ordine di grandezza.

Tali caratteristiche suggeriscono per AFP 723 un impiego terapeutico elettivo nel trattamento delle infezioni virali da Herpes e più specificamente da Herpes labiale, Herpes genitale e Herpes corneale.

La presente invenzione si riferisce anche a tutti gli aspetti industrialmente applicabili connessi all'impiego di AFP 723 come agente per il trattamento delle infezioni virali da Herpes. Pertanto, un aspetto essenziale dell'invenzione è costituito da formulazioni farmaceutiche contenenti quantità predeterminate di AFP 723. Tale composto può essere somministrato per via topica, ad esempio sotto forma di creme, o gel, o stick, o soluzioni, di concentrazione compresa tra lo 0,5% e il 5% (peso/peso) di principio attivo.

3

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

V

Claims

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2. Procedimento per la preparazione del composto (I), caratterizzato dal fatto che si fanno reagire acido fosfonacetico e l-N-[2-(2-dimetilamminoetossi)acetil-ammino]adamantano (tromantadina) in rapporto molare pari a 1 : 2, in solventi polari, e che si isola il sale così formatosi.

2

RIVENDICAZIONI 1. Come composto, il fosfonacetato di l-N-[2-(2-dimetiI-amminoetossi)acetil-ammìno]adamantano di formula (I)

nh-co-ch2-o-ch2-ch2-n(ch3)

iiooc-CH2"PO3H2

(I)
3. Procedimento secondo la rivendicazione 2, caratterizzato dal fatto che il solvente è acqua o un alcol inferiore.
4. Procedimento secondo le rivendicazioni 2 e 3, caratterizzato dal fatto che si isola il sale per evaporazione della soluzione o aggiunta di non-solventi dello stesso.
5. Composizioni farmaceutiche per il trattamento di infezioni di Herpes, contenenti il composto (I) secondo la rivendicazione 1, in qualità di principio attivo.
6. Composizioni farmaceutiche secondo la rivendicazione 5 per il trattamento di Herpes labiale, Herpes genitale e Herpes corneale.