CH653990A5

CH653990A5 - ANTI-VIRAL ACTIVITY COMPOUND, PROCEDURE FOR ITS PREPARATION AND RELATED PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS.

Info

Publication number: CH653990A5
Application number: CH6269/82A
Authority: CH
Inventors: Vincentiis Leonardo De
Original assignee: Ausonia Farma Srl
Priority date: 1982-03-01
Filing date: 1982-10-27
Publication date: 1986-01-31
Also published as: FR2522327A1; ES516854A0; GR77687B; GB2115816A; IT8219901A0; JPS58164560A; FR2522327B1; PT75751A; LU84443A1; DE3245188A1; ES8308533A1; NL8204175A; BE894802A; IN155559B; DE3245188C2; PT75751B; IT1150209B

Description

L'invenzione ha per oggetto un composto ad attività antivirale, e precisamente il fosfonacetato di l-N-[2-(2-dimetiIammi-noetossi)acetil-ammino]adamantano di formula (I) The invention relates to a compound with antiviral activity, namely the phosphonacetate of 1-N- [2- (2-dimethylamethoxy) acetyl-amino] adamantane of formula (I)

NH-CO-CH -O-CH.-CH -N(CH.) NH-CO-CH -O-CH.-CH -N (CH.)

3 2 3 2

hooc-ch2-po3h2 HOOC-ch2-po3h2

(I) (THE)

L'invenzione riguarda inoltre un procedimento per la preparazione del fosfonacetato di tromantadina, caratterizzato dal fatto che si fanno reagire acido fosfonacetico e tromantadina, in rapporto molare pari a 1 : 2, in solventi polari come acqua o 5 — di preferenza — alcoli inferiori, e che si isola il sale così formatosi per evaporazione della soluzione o aggiunta di nonsolventi dello stesso. The invention also relates to a process for the preparation of tromantadine phosphonacetate, characterized in that phosphonacetic acid and tromantadine are reacted, in a molar ratio of 1: 2, in polar solvents such as water or 5 - preferably - lower alcohols, and that the salt thus formed by evaporation of the solution or addition of non-solvents thereof is isolated.

La reazione si effettua a temperatura ambiente. L'esempio che segue illustra il procedimento secondo l'invenzione. The reaction takes place at room temperature. The following example illustrates the process according to the invention.

io I

Esempio a) I-N-(2-Cloroacetil-ammino)adamantano Example a) I-N- (2-Chloroacetyl-amino) adamantane

Si introducono 50 g di cloridrato di 1-amminoadamantano is in una soluzione acquosa al 10% in peso/volume di 21,3 g di idrossido di sodio; quindi sotto agitazione magnetica e raffreddando con ghiaccio al di sotto di 5°C, vi si aggiunge una soluzione di 21,5 mi di cloroacetilcloruro in 100 mi di CH2CI2. La miscela di reazione viene lasciata in agitazione vorticosa per cir-20 ca due ore; si separa la fase organica, la si lava con acqua, si secca su MgSC>4 e si evapora il solvente a pressione ridotta. Il residuo viene ricristallizzato da diisopropiletere: isopropanolo 80 : 20 (v/v). Si ottiene con resa dell'80% il prodotto desiderato, p.f. 122-123 °C. 50 g of 1-aminoadamantane is hydrochloride are introduced in an aqueous solution at 10% by weight / volume of 21.3 g of sodium hydroxide; then under magnetic stirring and cooling with ice below 5 ° C, a solution of 21.5 ml of chloroacetyl chloride in 100 ml of CH2CI2 is added. The reaction mixture is left in a swirling stirring for about two hours; the organic phase is separated, washed with water, dried on MgSC> 4 and the solvent is evaporated under reduced pressure. The residue is recrystallized from diisopropyl ether: isopropanol 80: 20 (v / v). The desired product is obtained with 80% yield, m.p. 122-123 ° C.

25 b) l-N-[2-(2-dìmetilamminoetossi)acetil-ammino]adamantano 25 b) 1-N- [2- (2-di-methylaminoethoxy) acetylamino] adamantane

(tromantadina) (Tromantadine)

Alla soluzione di 31,3 g (0,35 moli) di dimetilamminoeta-nolo in 150 mi di tetraidrofurano anidro si aggiungono, sotto 30 agitazione e mantenendo la temperatura a 15-20°C, 8,4 g (0,35 moli) di NaH. Terminato lo sviluppo di idrogeno si aggiungono 40 g (0,17 moli) di l-N-(2-cloroacetil-ammino)adamantano, e si scalda a ricadere per 15 ore, quindi si versa in ghiaccio, si estrae la fase organica con etere etilico, la si lava con acqua e la 35 si secca su K2CO3. Si evapora il solvente a pressione ridotta e si purifica il residuo per cromatografia su silice, eluendo prima con dietiletere, poi con etanolo. Il prodotto puro (olio paglierino denso) viene isolato con resa del 53%. To the solution of 31.3 g (0.35 moles) of dimethylaminoethylene in 150 ml of anhydrous tetrahydrofuran, 8.4 g (0.35 moles) are added under 30 stirring and maintaining the temperature at 15-20 ° C of NaH. Once the hydrogen development is complete, 40 g (0.17 mol) of lN- (2-chloroacetyl-amino) adamantane are added, and the mixture is heated to reflux for 15 hours, then poured into ice, the organic phase is extracted with ethyl ether , washed with water and 35 dried on K2CO3. The solvent is evaporated under reduced pressure and the residue is purified by chromatography on silica, eluting first with diethyl ether, then with ethanol. The pure product (dense straw oil) is isolated with a 53% yield.

40 40

c) Fosfonacetato di tromantadina (I) c) Tromantadine phosphonacetate (I)

Si sciolgono in 120 mi di etere assoluto 20 g (0,142 moli) di acido fosfonacetico e 80 g (0,285 moli) di tromantadina. La soluzione ottenuta viene evaporata a secchezza sotto vuoto. Si ottiene un solido cristallino bassofondente (p.f. ~33-40°C), mol-45 to igroscopico, solubilissimo in acqua metanolo, etanolo. Analisi elementare per C34H61PO9 (PM = 700,83) 20 g (0.142 mol) of phosphonacetic acid and 80 g (0.285 mol) of tromantadine are dissolved in 120 ml of absolute ether. The obtained solution is evaporated to dryness under vacuum. A low melting crystalline solid (m.p. ~ 33-40 ° C), very hygroscopic, very soluble in methanol water, ethanol is obtained. Elemental analysis for C34H61PO9 (PM = 700.83)

È nota da tempo l'attività antivirale dell'acido fosfonacetico nei confronti dell'herpes vaccinico, dell'herpes di tipo 1 e dell'herpes di tipo 2. [Si veda in proposito: N.L. Shipkowitz e altri, Appi. Microb. 26, 264-267 (1973); J.E. Sugar e altri, Invest. Ophtalmol. 12, 532-534 (1973); D.D. Gerstein e altri, Antimicrob. Agents and Chemoth. 7, 285-288 (1975); R.F. Meyer, ibid. 9, 308-311 (1976)]. The antiviral activity of phosphonacetic acid against vaccine herpes, type 1 herpes and type 2 herpes has been known for some time. [See in this regard: N.L. Shipkowitz and others, Appi. Microb. 26, 264-267 (1973); J.E. Sugar and others, Invest. Ophtalmol. 12, 532-534 (1973); D.D. Gerstein and others, Antimicrob. Agents and Chemoth. 7, 285-288 (1975); R. F. Meyer, ibid. 9, 308-311 (1976)].

Altresì è descritta l'attività dell'l-N-[2-(2-dimetilammino-etossi)acetil-ammino]adamantano — noto anche con il nome di tromantadina — verso gli stessi virus [D. Peteri e W. Sterner, Arzneimittelforsch. 23, 577 (1973); G. May e D. Peteri, ibid. 23, 718 (1973)]. The activity of l-N- [2- (2-dimethylamino-ethoxy) acetyl-amino] adamantane - also known by the name of tromantadine - towards the same viruses is described [D. Peteri and W. Sterner, Arzneimittelforsch. 23, 577 (1973); G. May and D. Peteri, ibid. 23, 718 (1973)].

Si è ora trovato che il composto (I), o fosfonacetato di tromantadina, presenta sui virus erpetici un'attività sorprendentemente esaltata rispetto ai due composti sopra citati, con una attività dello stesso ordine di grandezza sul virus vaccinico. It has now been found that compound (I), or tromantadine phosphonacetate, exhibits a surprisingly enhanced activity on herpetic viruses compared to the two compounds mentioned above, with an activity of the same order of magnitude on the vaccine virus.

Costituiscono pertanto oggetto della presente invenzione anche composizioni farmaceutiche ad attività antivirale contenenti il composto (I) in qualità di principio attivo. Therefore, the subject of the present invention are also pharmaceutical compositions with antiviral activity containing the compound (I) as an active principle.

calc.%: C 58,26 H 8,77 N 7,99 trov.%: C 57,78 H 9,04 N 7,82 calc.%: C 58.26 H 8.77 N 7.99 found%: C 57.78 H 9.04 N 7.82

Spettro IR (nujol muli; i valori delle bande di assorbimento sono espressi in cm"1): IR spectrum (nujol muli; the values of the absorption bands are expressed in cm "1):

Stretch N - ] Stretch N -]

O OR

55 Stretch C = 55 Stretch C =

C C

bande allargate enlarged bands

3550-2500 3550-2500

1 All U1 1 All U1

r-H> r-H>

-H/ -H /

O acido I banda allargata 1700-1670 = O amidico ) O acid 1st band 1700-1670 = O starch)

Spettro H1 NMR (registrato in CDCI3, riferimento interno TMS; i valori dei chemical shifts sono espressi in ô): 2,4 [s, 12H, 2(CH3)2]; 2,6-3 [m, 4H, 2(CH2-N)]; 3,3-3,9 [m, 10H, 60 2(C0-CH2-0); 2(CH2-0); P-ÇH2-COOH]; 6,8 (s, IH, COH mobile); 8,3 (s, 4H, NH mobili). H1 NMR spectrum (recorded in CDCI3, internal reference TMS; the values of the chemical shifts are expressed in ô): 2.4 [s, 12H, 2 (CH3) 2]; 2.6-3 [m, 4H, 2 (CH2-N)]; 3.3-3.9 [m, 10H, 60 2 (C0-CH2-0); 2 (CH2-0); P-CH2-COOH]; 6.8 (s, IH, COH mobile); 8.3 (s, 4H, NH mobile).

Le proprietà tossico-farmacologiche del fosfonacetato di tromantadina (d'ora in poi definito per brevità con la sigla 65 AFP 723) sono riassunte qui di seguito. The toxicological and pharmacological properties of tromantadine phosphonacetate (hereafter defined for brevity with the abbreviation 65 AFP 723) are summarized below.

Tossicità cellulare Cellular toxicity

È stata utilizzata la metodica dell'incorporazione di rosso The method of incorporating red was used

neutro, la quale è in grado di fornire una indicazione della vitalità delle cellule messe a contatto con il farmaco. neutral, which is able to provide an indication of the viability of the cells put in contact with the drug.

Per una determinazione più precisa del tipo sia dell'ampiezza dell'inibizione sono stati anche valutati i seguenti parametri: For a more precise determination of the type and extent of the inhibition, the following parameters were also assessed:

a) tempo di crescita e capacità di divisioni cellulari; a) growth time and capacity of cell divisions;

b) incorporazione del DNA di Timidina 3H; b) incorporation of the DNA of Thymidine 3H;

c) incorporazione nell'RNA di Uridina 3H; c) incorporation into Uridine 3H RNA;

d) incorporazione nelle proteine di Leucina 14C. d) incorporation in Leucine 14C proteins.

I risultati ottenuti hanno dimostrato un'assenza di tossicità fino a valori di 250 jig di farmaco/ml di terreno. The results obtained demonstrated an absence of toxicity up to values of 250 jig of drug / ml of medium.

Al di sopra di tale concentrazione si nota una graduale diminuzione nell'incorporazione dei traccianti radioattivi utilizzati, con un blocco di circa il 50% della sintesi proteica al di sopra dei 500 ng/ml. Above this concentration there is a gradual decrease in the incorporation of the radioactive tracers used, with a blockade of about 50% of the protein synthesis above 500 ng / ml.

Molto meno drastica sembra essere l'inibizione del DNA, la quale viene ridotta del 50% solo a concentrazioni di circa 1000 Hg/ml. Much less drastic seems to be DNA inhibition, which is reduced by 50% only at concentrations of about 1000 Hg / ml.

Sono state utilizzate cellule in coltura primarie o secondarie umane diploidi (WI-38), e cellule in coltura continua di rene di scimmia. Human diploid primary or secondary cultured cells (WI-38), and continuous cultured monkey kidney cells were used.

I valori di tossicità sopra citati, considerata l'altra attività farmacologica descritta successivamente al paragrafo «attività antivirale» si tramutano in un molto favorevole coefficiente terapeutico. The toxicity values mentioned above, given the other pharmacological activity described after the "antiviral activity" paragraph, turn into a very favorable therapeutic coefficient.

Tolleranza locale Local tolerance

È stata determinata impiegando sia una soluzione acquosa al 5% (peso/volume) del composto sia un unguento al 5% (peso/volume). in vaselina bianca. It was determined using both a 5% (weight / volume) aqueous solution of the compound and a 5% (weight / volume) ointment. in white petroleum jelly.

Sia la soluzione acquosa sia l'unguento sono stati applicati due volte al giorno per 4 settimane sul dorso di conigli New Ze-aland, depilati con rasoio elettrico. La valutazione di eventuali eritemi ed edemi è stata fatta giornalmente; solo verso il 20° giorno di trattamento, su una bassa percentuale (10%) dei conigli trattati con la soluzione acquosa, è comparso un leggero eritema transitorio, che non è aumentato nei giorni successivi fino alla fine dell'esperimento. Both the aqueous solution and the ointment were applied twice a day for 4 weeks on the back of New Ze-aland rabbits, depilated with an electric razor. The evaluation of any rashes and edemas was made daily; only towards the 20th day of treatment, on a low percentage (10%) of the rabbits treated with the aqueous solution, a slight transient erythema appeared, which did not increase in the following days until the end of the experiment.

Assenza di effetti sistemici Absence of systemic effects

Sono stati utilizzati gli stessi conigli dell'esperimento precedente. Alla fine delle 4 settimane di trattamento sono stati valutati gli eventuali effetti su circolo e respiro. In più sono stati determinanti i principali parametri ematochimici e biochimici. Gli organi principali sono stati prelevati ed è stata effettuata una ricerca istologica. The same rabbits from the previous experiment were used. At the end of the 4 weeks of treatment, the possible effects on circulation and breathing were evaluated. In addition, the main blood and biochemical parameters were decisive. The main organs were removed and histological research was carried out.

Nessun effetto è stato evidenziato su circolo e respiro; i parametri ematochimici e biochimici sono risultati nella norma e la ricerca istologica non ha evidenziato nessuna alterazione patologica. No effect was noted on the circulation and breath; the hematochemical and biochemical parameters were normal and histological research did not reveal any pathological alteration.

653 990 653 990

Attività antivirale Antiviral activity

Sono state utilizzate cellule umane diploidi (WI 38) e cellule di rene di scimmia cresciute in capsule di Petri. Come virus infettante sono stati utilizzati tre virus a DNA (Virus Vaccinico, Herpes 1, Herpes 2) e tre virus a RNA (Virus Influenzale A, Polio virus, Virus Sinovis). Human diploid cells (WI 38) and monkey kidney cells grown in Petri dishes were used. Three DNA viruses (Vaccinic Virus, Herpes 1, Herpes 2) and three RNA viruses (Influenza Virus A, Polio virus, Sinovis Virus) were used as the infectious virus.

Il composto AFP 723 inibisce i virus a DNA, vaccinico ed erpetici, a concentrazione di 1-5 e rispettivamente 100 mcg/ml con una TCID50 di circa 50 jig/ml. The AFP 723 compound inhibits DNA, vaccine and herpetic viruses, at a concentration of 1-5 and 100 mcg / ml respectively with a TCID50 of approximately 50 jig / ml.

Pretrattando le cellule per 15 ore con 5 di AFP 723, la caduta dell'infettività è del 99,9% (da IO6 a < IO3). By pretreating the cells for 15 hours with 5 of AFP 723, the drop in infectivity is 99.9% (from IO6 to <IO3).

L'azione antivirale del composto si esplica a livello intracellulare su una tappa intermedia della morfogenesi virale, come evidenziato dagli esami in microscopia elettronica. The antiviral action of the compound takes place intracellularly on an intermediate stage of viral morphogenesis, as evidenced by electron microscopy examinations.

A concentrazione di 50-100 ng/ml, il composto AFP 723 blocca il virus vaccinico allo stadio di forma immatura, e i virus Herpes 1 e Herpes 2 allo stadio capsidico intranucleare, la concentrazione di 10-50 (Xg/ml inibisce totalmente la produzione di virus infettante dalle placche. At a concentration of 50-100 ng / ml, the AFP 723 compound blocks the vaccine virus at the immature stage, and the Herpes 1 and Herpes 2 viruses at the intranuclear capsidic stage, the concentration of 10-50 (Xg / ml totally inhibits production of plaque-infecting virus.

La seguente tabella raffigura schematicamente i dati sopra citati, in confronto a dosi equimolecolari di acido fosfonacetico (PPA) e tromantadina. The following table schematically depicts the above data, in comparison with equimolecular doses of phosphonacetic acid (PPA) and tromantadine.

Virus infettante Infecting virus

Vaccinico vaccinia

Herpes 1 Herpes 1

Herpes 2 Herpes 2

AFP 723 AFP 723

+++ +++

+++++ +++++

PPA PPA

+++ +++

++ ++

Tromantadina tromantadine

+++ +++

L'attività antivirale di AFP 723 sui virus erpetici risulta sorprendentemente esaltata rispetto a quella dei farmaci di confronto, mentre l'attività sul virus vaccinico è dello stesso ordine di grandezza. The antiviral activity of AFP 723 on herpetic viruses is surprisingly enhanced compared to that of comparator drugs, while the activity on the vaccine virus is of the same order of magnitude.

Tali caratteristiche suggeriscono per AFP 723 un impiego terapeutico elettivo nel trattamento delle infezioni virali da Herpes e più specificamente da Herpes labiale, Herpes genitale e Herpes corneale. These features suggest for AFP 723 an elective therapeutic use in the treatment of viral herpes infections and more specifically of cold sores, genital herpes and corneal herpes.

La presente invenzione si riferisce anche a tutti gli aspetti industrialmente applicabili connessi all'impiego di AFP 723 come agente per il trattamento delle infezioni virali da Herpes. Pertanto, un aspetto essenziale dell'invenzione è costituito da formulazioni farmaceutiche contenenti quantità predeterminate di AFP 723. Tale composto può essere somministrato per via topica, ad esempio sotto forma di creme, o gel, o stick, o soluzioni, di concentrazione compresa tra lo 0,5% e il 5% (peso/peso) di principio attivo. The present invention also relates to all industrially applicable aspects related to the use of AFP 723 as an agent for the treatment of viral herpes infections. Therefore, an essential aspect of the invention is constituted by pharmaceutical formulations containing predetermined quantities of AFP 723. This compound can be administered topically, for example in the form of creams, or gels, or sticks, or solutions, with a concentration comprised between 0.5% and 5% (weight / weight) of active principle.

3 3

5 5

10 10

15 15

20 20

25 25

30 30

35 35

40 40

45 45

50 50

V V

Claims

653 990

2. Process for the preparation of compound (I), characterized in that phosphonacetic acid and lN- [2- (2-dimethylaminoethoxy) acetyl-amino] adamantane (tromantadine) are reacted in a molar ratio of 1: 2, in polar solvents, and the salt thus formed is isolated.

2

CLAIMS 1. As a compound, the l-N- [2- (2-dimethyl-aminoethoxy) acetyl-amine] adamantane phosphonacetate of formula (I)

nh-co-ch2-o-ch2-ch2-n (ch3)

iiooc-CH2 "PO3H2

(THE)

3. Process according to claim 2, characterized in that the solvent is water or a lower alcohol.

4. Process according to claims 2 and 3, characterized in that the salt is isolated by evaporation of the solution or addition of non-solvents thereof.

5. Pharmaceutical compositions for the treatment of Herpes infections, containing the compound (I) according to claim 1, as active ingredient.

Pharmaceutical compositions according to claim 5 for the treatment of cold sores, genital herpes and corneal herpes.