CH628005A5

CH628005A5 - Process for producing heteropolyanion compounds containing tungsten combined with antimony

Info

Publication number: CH628005A5
Application number: CH1480377A
Authority: CH
Inventors: Jean-Claude Chermann; Claude Jasmin; Gilbert Herve; Andre Teze
Original assignee: Anvar
Priority date: 1976-12-03
Filing date: 1977-12-02
Publication date: 1982-02-15
Also published as: FR2372633B2; DE2753312A1; GB1575940A; FR2372633A2; CA1124989A; JPH0212933B2; JPS6221732B2; DE2760338A1; BE861233A; JPS61165336A; JPS5392400A

Description

L'invention concerne des procédés de préparation de nouveaux composés d'hétéropolyanions contenant du tungstène combiné à de l'antimoine.

Ces nouveaux composés sont utiles comme agents actifs dans le traitement des infections virales chez l'homme et l'animal ainsi que des processus pathologiques dus aux virus.

On rappellera que le brevet FR N° 73.27536 est relatif à des hétéropolyanions possédant des propriétés antivirales, en particulier à un composé du tungstène et d'antimoine désigné par la référence HPA23.

D'une façon générale, pour l'obtention du composé HPA23 sous la forme de son sel d'ammonium, on fait réagir à chaud une solution aqueuse contenant l'ion SBm sur une solution 1M de tungstate de sodium et on maintient le milieu réactionnel sensiblement à neutralité par addition d'hydroxyde d'ammonium concentré en quantité suffisante pour rendre le milieu incolore, ce qui entraîne la précipitation du sel d'ammonium désiré qu'on récupère par filtration et traite ultérieurement de façon usuelle.

La température de la réaction est inférieure à la température d'ébullition du milieu réactionnel, par exemple voisine de 80° C. La solution aqueuse contenant l'ion Sbm est avantageusement préparée en dissolvant SbCl3 dans une solution saturée de NH4C1.

Ainsi que des études ultérieures l'ont montré, le produit HPA23 est un hétéropolyanion répondant à la formule:

[NaSb9W21086]18_

Sous la forme de son sel d'ammonium, le produit a pour formule:

[Na Sb9W21086](NH4)18

et il peut se présenter sous diverses formes, notamment d'un hydrate à huit molécules d'eau.

Selon la présente invention, on obtient de nouveaux composés d'hétéropolyanions dans lesquels la place de l'atome de sodium du composé HPA23 est vide ou occupée par d'autres ions métalliques.

Le procédé selon la revendication 1 conduit aux composés de formules II et VI, tandis que le procédé selon la revendication 8 conduit aux composés de formule III.

L'invention concerne donc notamment la préparation du sel d'ammonium de formule (II):

[Sb9 W2 ! O 8 6](NH4)j 9 PI)

Le spectre IR du composé (II) est représenté à la fig. 1, qui a été scindée en fig. la et lb pour les besoins de la présentation (concentration 6/600 mg, phase KBr, appareil Perkin-Elmer 225).

Pour préparer le composé (II), on peut partir d'une solution aqueuse de tungstate d'ammonium qu'on additionne à chaud (60 à 80°C) d'une solution de Sb203 dans HCl (ou SbCl3 dans NH4C1 saturé), l'addition d'ammoniaque concentrée provoquant alors,

après élimination d'une partie insoluble, la précipitation du sel d'ammonium désiré.

La solution aqueuse de tungstate d'ammonium peut être préparée en attaquant, à l'ébullition, de l'anhydride tungstique W03 par l'ammoniaque.

Les proportions molaires entre W03 et Sb203 sont de préférence 4,5 à 5 mol de W03 par mole de Sb203.

D'autres composés contenant l'hétéropolyanion de formule (I) répondent à la formule (III):

[MSbpW21Osfl]M'18 (III)

formule dans laquelle M représente un métal alcalin ou alcalino-terreux autre que le sodium, tel que le potassium, le calcium, le magnésium, et M'est un métal alcalin tel que le césium, le rubidium ou le potassium, ou alcalino-terreux, tel que le calcium ou le baryum, ou bien l'ammonium ou l'ammonium quaternaire.

En particulier, le nouveau composé répondant à la formule (III) dans laquelle M est le potassium peut être considéré comme un composé 9-antimonio-III-21-tungsto-VI-potassique. Il peut se présenter sous forme de sels d'ammonium ou de métaux alcalins ou alcalino-terreux. Un exemple typique est le sel d'ammonium de formule:

[KSb986"](NH4)18 (V)

Un autre exemple particulièrement avantageux est le sel de potassium de l'hétéropolyanion (IV), ce sel répondant à la formule (VI):

[KSb9W21086]K18 (VI)

Le composé (VI) se décompose au-delà de 340°C. Son spectre IR est représenté à la fig. 2 des dessins annexés, qui a été scindée en fig. 2a et en fig. 2b pour les besoins de la présentation.

Le spectre IR obtenu a été réalisé sur un spectrophotomètre Beckmann IR-12 avec une pastille KBr.

Le spectre Raman du composé (VI) est représenté à la fig. 3. Les données suivantes ont été utilisées:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

3

628005

composé (VI) sous forme de poudre 5145 Â 400 mW filtre interférentiel PM 720 V résolution 4 cm ~1 vitesse 50 cm" '/min spectromètre Coderg PHO

Le composé de polyanion (II) peut être mis en œuvre en tant que tel sous forme de solution dans l'eau distillée. La structure polyanio-nique est cependant instable en présence d'ions métalliques présents dans la solution aqueuse, et cette constatation permet de préparer selon un premier procédé d'autres composés de l'invention. On notera à cet égard que le composé HPA23 décrit au brevet FR N° 73.27536 peut être obtenu par traitement du polyanion (II) en solution aqueuse à l'aide d'une solution de NaCl 0,5M.

Le composé (V) peut être obtenu à partir du polyanion (II) par traitement de celui-ci en solution aqueuse à l'aide d'une solution de KCl, par exemple 0,5M.

D'autres composés (III) peuvent être préparés d'une manière analogue par traitement du composé de polyanion (II) à l'aide d'une solution d'un sel du métal que l'on désire introduire dans l'édifice ionique. A titre d'exemples, on peut citer le composé de magnésium obtenu par traitement du composé de polyanion (II) avec une solution de MgCl2 0,5M.

Les nouveaux produits sus-décrits peuvent exister sous la forme de nombreux hydrates; la préparation de toutes les formes hydratées desdits produits entrent dans le cadre de la présente invention.

Le polyanion du composé (II) se compose d'une cavité bicyclique centrale formée de chaînes Sb—O—W—O—Sb ayant en son centre un ion M1, par exemple K+. Autour de cette cavité, il existe d'autres atomes de W et Sb, le rapport global r = W/Sb étant voisin de 2,4.

L'invention couvre également la préparation de toutes les formes isomères des hétéropolyanions en cause.

Ainsi qu'on l'a noté précédemment, le composé hétéropolyanion (II) n'est pas stable en solution aqueuse. Pour le stabiliser, il convient de le mettre en solution aqueuse en présence d'ions métalliques capables de s'introduire à l'intérieur du complexe, ces ions étant préférablement des ions sodium, potassium, magnésium ou calcium.

En milieu aqueux contenant des ions potassium, en particulier une solution aqueuse diluée de chlorure de potassium, le composé (II) fournit le composé V (sel d'ammonium).

Le composé HPA23 peut également être soumis à une réaction d'échange ionique au cours de laquelle le potassium vient occuper la place des ions sodium et ammonium. Cela peut être réalisé simplement en dissolvant le composé HP A23 dans une solution aqueuse concentrée de chlorure de potassium. On obtient ainsi un mélange des composés HPA23, (V) et (VI).

Il est cependant avantageux de préparer le composé (VI) par un procédé direct en partant de SbCl3, KCl et K2W04.

Selon ce procédé, on prépare une première solution, contenant l'ion Sb111, en dissolvant à chaud SbCl3 dans une solution aqueuse saturée de KCl, on ajoute ladite première solution à une deuxième solution consistant en une solution aqueuse de K2W04, la température de réaction étant de 60 à 90° C, en particulier de 80° C environ, et on introduit à la fin de la réaction une solution saturée de bicarbonate de potassium jusqu'à ce que le milieu réactionnel soit incolore et que son pH soit voisin de 7.

Le composé (VI) précipite au cours de la réaction et continue à se déposer lors du refroidissement. En vue de la purification, le précipité est filtré, puis lavé avec une solution de KCl, par exemple 0,5M, et enfin recristallisé dans l'eau distillée.

Les proportions des constituants de la réaction sont choisies pour qu'on obtienne l'hétéropolyanion correspondant au composé (VI). A cet effet, on utilise 1 partie en poids de SbCl3 pour 3,4 parties de K2W04. On utilise par exemple une solution aqueuse molaire de K2W04 et on calcule la quantité correspondante de SbCl3 qui doit être dissoute dans la solution de KCl saturée.

Les exemples qui suivent illustrent l'invention.

Exemple 1:

Préparation de [Sb9 W2iOS6J( NHA )lg: composé de formule (II).

Une solution aqueuse de tungstate d'ammonium est préparée en attaquant à ébullition 81g d'anhydride tungstique (W03) par NH3 (11 d'ammoniaque 1,2M). A cette solution, on ajoute à 80°C et progressivement une solution obtenue en dissolvant 21,8 g de trioxyde d'antimoine (Sb203) dans 100 ml d'HCl 6M.

En fin d'opération, on ajoute environ 20 ml de NH312M. Un précipité insoluble se forme et est filtré rapidement à chaud. Le sel d'ammonium [Sb9W2 j086](NH4)19 cristallise au cours du refroidissement de la solution surnageante.

Les cristaux obtenus sont filtrés, puis lavés avec une solution de NH4C1 saturée.

Exemple 2:

Préparation du composé [K Sb9 W2iOH6JKla, composé de formule (VI).

Une solution contenant 12,2 g de SbCl3 dissous à chaud dans 50 ml d'une solution de KCl saturée est ajoutée progressivement à 125 ml d'une solution aqueuse molaire de K2W04 préalablement portée à 80°C. En fin d'opération, on ajoute 20 ml environ d'une solution saturée de bicarbonate de potassium, de manière que le mélange soit incolore et son pH voisin de 7.

Le sel de potassium de l'hétéropolyanion précipite au cours de la préparation et continue de se déposer lors du refroidissement. Le précipité est filtré puis lavé avec une solution de KCl 0,5M et enfin recristallisé dans l'eau distillée. On obtient ainsi environ 25 g du composé (VI) de formule indiquée dans le titre. Ses spectres IR et Raman sont représentés aux fig. 2 et 3 respectivement.

Dans les premiers essais pharmacologiques rapportés ci-après, le composé d'hétéropolyanion mis en œuvre est le produit de formule (VI) désigné par la référence abrégée HPA39. On a comparé l'activité du HPA39 au composé sodique de formule:

[NaSb9W21086](NH4)18

ce dernier composé étant désigné par l'abréviation HPA23. Les essais ont porté sur le traitement des virus de la leucémie de Friend.

Essais pharmacologiques:

On a utilisé dans les expériences des souris DBA2, mâles ou femelles, âgées de 2 à 3 mois, d'un poids voisin de 20 g.

On a utilisé une souche polycythémiante du virus de Friend (VFP) entretenue depuis plusieurs années au laboratoire. Le stock viral est constitué d'un surnageant acellulaire obtenu par centrifuga-tion d'un broyât de rates leucémiques, effectué dans une solution de PBS-saccharose 0,5M. Le titrage du stock se fait in vivo, selon la méthode de Reed et Muench («American Journal of Hygiene», 1938, 27,493-497). Le titre est exprimé en SD50 (spleen enlarging dose 50%).

Protocole expérimental:

Le virus de Friend est injecté à la souris par voie intrapéritonéale. L'animal développe alors une splénomégalie caractéristique. La mortalité apparaissant trois semaines après l'inoculation virale, aux doses employées habituellement, on a sacrifié les animaux le jour +21 après l'infection, pour l'étude de la splénomégalie. Les rates sont prélevées, puis pesées individuellement. Toute rate dont le poids dépasse 250 mg est considérée comme pathologique.

Les hétéropolyanions HPA23 et HPA39 sont dilués le plus couramment dans du sérum physiologique ou de l'eau distillée.

Ils sont administrés, comme le virus, par voie intrapéritonéale en dose unique ou en doses répétées à des temps variés par rapport à l'inoculation virale.

Résultats:

1. Effet protecteur de VHPA39 contre la leucémie de Friend.

Le tableau I résume les résultats de deux expériences consécutives où les souris, inoculées avec 20 SDÎ0 de VFP, ont reçu une seule dose de HPA39 allant de 0,5 mg à 2 mg, le même jour que le virus.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

628005

4

choisies: du J + 3 au J + 7, du J +10 au J + 14, du J + 17 au J + 21. Afin de connaître le stade de la maladie au début de chaque traitement, on a sacrifié 10 animaux témoins aux jours +10 et +17.

Parallèlement, on a étudié la toxicité de ce traitement sur des 5 animaux non leucémiques. Bien que la toxicité à brève échéance semble très faible, il faut noter que, 60 d après la fin du traitement, 50% de ces animaux sont morts.

Le tableau III donne la valeur moyenne des poids de rate 21 d après l'infection, ainsi que le poids moyen des rates au début de io chaque traitement.

4. Essai comparatif de HPA23 et de HPA39 sur la splénomégalie induite par le VFP.

Le tableau IV résume les résultats obtenus avec une injection unique de 1 mg de chacun de ces produits sur la splénomégalie 15 induite par le VFP 21 d après l'injection de 20 SDso.

Tableau I

Effet du HPA39 sur la leucémie de Friend:

Dose HPA39 injectée

Moyenne poids des rates (g) J + 21

Valeurs limites (g)

% survie (J + 62)

Toxicité (*)

0

exp 1 = 1,349 exp 2 = 0,897

0,402 - 2,63 0,390 - 1,598

NF 40

0,5 mg par souris IP

exp 1 = NF exp 2 = 0,711

NF

0,221 - 2,036

NF 70

0

1 mg par souris IP

exp 1 = 0,322 exp 2 = 0,258

0,252 - 0,443 0,190 -► 0,348

NF 100

0

2 mg par souris IP

exp 1 = 0,308 exp 2 = 0,262

0,225 - 0,405 0,208 -» 0,291

NF 100

0

* La toxicité représente le pourcentage de mortalité dans des groupes de 10 animaux non leucémiques traités aux doses indiquées.

Tableau II

Relation dose-effet du HPA39 vis-à-vis du VFP

Inoculum viral

(ip)

HPA39 injecté (mg ip)

Moyenne poids des rates (g)

Valeurs limites (g)

5 SDso

0

2

0,619 0,253

0,228 -» 1,552 0,158 -► 0,310

10 SD50

0 2

0,726 0,269

0,323 - 0,979 0,160 -► 0,331

20 SDjo

0 2

1,052 0,409

0,239 - 1,989 0,233 - 0,412

50 SD5q

0 2

1,651 0,350

1,328 - 2,180 0,113-»0,721

Le pourcentage de survie a été établi le 62e jour après l'injection virale.

2. Etude de la réponse à VHPA39 en fonction de la dose virale inoculée.

On a étudié, du point de vue de la splénomégalie, l'effet d'une injection unique de 2 mg de HPA39 dans le cas où les animaux sont inoculés avec des doses croissantes de VFP, allant de 5 à 50 SD50 par animal.

Les résultats sont résumés dans le tableau II.

3. Essai de traitement de la leucémie de Friend par des injections répétées de HPA39.

Dans cette expérience, on a utilisé des animaux préalablement inoculés avec 20 SD50 de VFP. On a étudié l'effet de traitements de 5 d comprenant une injection journalière de 0,5 mg de HPA39.

Le jour 0 (J0) étant le jour de l'infection, trois périodes ont été

5 628005

Tableau III

Effet du HPA39 en traitement de la leucémie de Friend

Période de traitement (5 x 0,5 mg)

Moyenne poids des rates au début du traitement

Moyenne poids des rates (g) le J + 21

Valeurs limites (g)

0

1,202

0,408 - 2,594

J+3-J+7

non effectué

0,610*

0,204 - 1,577

J + 10 - J + 14

0,240

0,656*

0,250 -♦ 1,250

J + 17 -» J + 21

0,500

0,532**

0,263 - 0,988

* L'augmentation du poids de la rate traduit la poursuite du développement de la leucémie. ** Arrêt de la leucémie.

Tableau IV

Effet antiviral comparé du HPA23 et du HPA39

Traitement

Moyenne poids des rates

Valeurs limites

(1 mg-ip)

(g)

0

1,426

0,740 -» 2,063

HPA23

0,320

0,222 - 0,391

HPA39

0,294

0,259 -» 0,335

Les résultats consignés dans le tableau IV montrent que les produits HPA23 et HPA39 entraînent une très forte diminution de la 35 splénomégalie, ce qui démontre leur efficacité pour inhiber le développement de la leucémie de Friend. En outre, le HPA39 manifeste une activité supérieure à celle du HPA23.

Dans leur ensemble, les résultats ci-dessus font apparaître que le 40 HPA39, administré à des souris infectées par le virus de la leucémie de Friend, ne présente aucun effet de toxicité. Le HPA39 arrête le développement de la leucémie: ainsi, une dose de 2 mg de HPA39 par souris permet, pour 100% des souris infectées, la survie jusqu'au 62e jour, jour où elles ont été sacrifiées. 45

On a également mis en évidence une propriété avantageuse du • produit HPA39, à savoir que ce produit possède une action synergique lorsqu'il est administré en même temps que l'interféron.

Pour prouver cette synergie HPA39-interféron, on a utilisé quatre 50 groupes de souris et les produits essayés ont été administrés dans les conditions suivantes:

Résultats au jour 15:

Interféron: prétraitement de 6 h avant l'infection - voie intrapéritonéale 5000 U/souris.

HPA39:3 mg/souris - voie intrapéritonéale immédiatement après l'inoculation du virus.

Virus encéphalomyocardite de la souris - 50 dose létale/souris; inoculation voie sous-cutanée (se).

Groupe 1:10 souris reçoivent le virus et servent de témoin.

Groupe II: 10 souris reçoivent l'interféron et, 6 h après, le virus.

Groupe III: 10 souris reçoivent le virus voie se et le HPA39 voie intrapéritonéale.

Groupe IV: 10 souris reçoivent l'interféron puis, 6 h après, le virus et le HPA 39.

Mortalité

Groupe I:

Témoin

8/10

Groupe II:

Interféron seul

8/10

Groupe III:

HPA39 seul

8/10

Groupe IV:

HPA39 + interféron

3/10

Les résultats rapportés ci-dessus montrent clairement la supério-45 rité de l'association HPA39 + interféron par rapport aux résultats obtenus avec l'un des produits seulement.

D'autres essais in vivo ont été réalisés pour tester divers produits de l'invention et divers produits de comparaison de l'art antérieur pour leur activité préventrice de la leucémie viro-induite de Friend 50 chez la souris DBA2 (selon la technique décrite ci-dessus).

A titre de comparaison, on a testé le HPA23 et deux cryptâtes organiques:

Cryptofix 222 (Merck): formule C18H3(SN206 (PM: 376). 55 Cryptofix 211 (Merck): formule C14H29N204 (PM: 288,35).

On a administré à des groupes de 10 souris DBA2, préalablement inoculées par le virus de Friend, chacun des produits décrits à raison de 1 mg par souris. Le groupe témoin ne reçoit que le virus.

Les souris ont été sacrifiées 21 d après l'inoculation du virus. Les 60 rates ont été prélevées puis pesées individuellement. Toute rate pesant plus de 250 mg est considérée comme leucémique. Les résultats de ces expériences sont rassemblés dans le tableau V. Comme le montre ce tableau, tous les produits de l'invention sont capables de réduire chez la souris la splénomégalie induite par le 65 virus de Friend, alors que les cryptâtes connus sont inactifs, voire même toxiques.

Par ailleurs, le composé (VI), ou HPA39, est plus actif que le HPA23.

1 Polyanion (II): signifie le polyanion [Sb9W210S6] (NH4)19 en solution dans l'eau distillée, le métal M étant absent.

2 Synthétisé signifie un composé préparé par synthèse directe, par opposition au composé analogue préparé par traitement du polyanion (II) à l'aide d'une solution contenant un ion métallique tel que K ou Mg.

628005 6

Tableau V

Activité des produits sur la leucémie de Friend in vivo

Traitement (1 mg/sourisip)

Procédé de préparation

Moyenne poids des rates 21 d après infection (g)

Valeurs limites (g)

Toxicité du produit

0 (témoin)

1,426 ± 0,461

0,740 2,063

0

Cryptofix 222 (comparaison)

synthétisé

1,3417 ± 0,700

0,3983 2,200

±

Cryptofix 211 (comparaison)

synthétisé

1 animal survivant 1,6439

+ + +

Polyanion (II)1

Polyanion (II) + eau distillée

0,342 ± 0,097

0,243 0,573

0

HPA23 (comparaison)

synthétisé2

0,310 ± 0,050

0,222 0,391

0

HPA23 (comparaison)

Polyanion (II) + NaCl 0,5 M

0,312 + 0,082

0,174 0,415

0

HPA39 (Polyanion VI)

synthétisé2

0,294 ± 0,022

0,259 0,335

0

Polyanion (V)

Polyanion (II) + KCl 0,5 M

0,263 ± 0,030

0,205 0,291

0

Polyanion avec Mg

Polyanion (II) + MgCl2 0,5 M

0,400 ± 0,094

0,266 0,602

0

Des essais pharmacologiques complémentaires ont porté sur l'activité du HPA39 in vivo.

I. Leucémie de Friend:

La leucémie de Friend est induite chez la souris DBA2 par la souche polycythémiante du virus.

Les critères choisis pour suivre l'évolution de la maladie ont été la splénomégalie et la survie.

Les animaux sont sacrifiés 21 d après l'injection du virus. Les rates sont prélevées et pesées individuellement.

Effet du HPA39 sur la splénomégalie:

Comme le montre le tableau VI, le HPA39, injecté en dose unique par la voie intrapéritonéale le même jour que le virus (20 SD50), réduit considérablement la splénomégalie. Dans cette expérience, les doses testées étaient de 1 à 5 mg. Ces trois doses ont sensiblement la même activité. On note cependant une certaine toxicité à 5 mg.

Le tableau VII résume une expérience où le HPA39 a été testé, dans les mêmes conditions que précédemment, contre des doses so croissantes de virus. Il est clair que, quel que soit l'inoculum viral, le HPA39 conserve toute son activité.

Effet du HPA39 sur la survie:

On a étudié la survie de groupes d'animaux (20) inoculés par 20 SD5o de virus et traités le même jour par une dose unique de HPA39 de 0,5,1 et 2 mg.

La moyenne de survie du groupe témoin a été de 56 d, celle du groupe traité par 0,5 mg de 128 d, celle du groupe traité par 1 mg de 151 d et, enfin, celle du groupe traité par 2 mg de 108 d.

200 d après le début de l'expérience, 25% des animaux traités par 1 ou 2 mg vivaient encore.

Temps d'action du HPA39:

Le tableau VIII présente les résultats d'essais de traitement par le HPA39 sur la splénomégalie.

65 Les animaux ont tous reçu, le jour 0 de l'expérience, 20 SDso de virus de Friend. Dans la première partie du tableau sont rapportés les essais de traitements séquentiels de 5 injections de 0,5 mg/d de HPA39.

55

60

7 628 005

Tableau VI

Effet du HPA39 sur la splénomégalie induite par le virus de Friend

Traitement

Nombre de souris

Mortalité J0 - J + 21

Moyenne poids des rates ± écart type (g)

Valeurs limites (g)

% rates > 0,250 g

0 (témoin)

10

0

1,349 + 0,790

0,235 2,636

90%

1 mg

9

0

0,324 ± 0,060

0,252 1,436

100%

2 mg

10

0

0,308 ± 0,053

0,225 0,405

90%

5 mg

10

3 au J + 7

0,286 ± 0,043

0,237 0,315

70%

Tableau VII

HPA39: effet sur la splénomégalie induite par différentes doses de virus de Friend

Virus de Friend

HPA39

Moyenne poids des rates (g)

Limites (g)

5 SDso

0

0,619 ± 0,427

0,228 1,551

2 mg

0,253 ± 0,043

0,158 0,310

IOSDjo

0

0,697 ± 0,268

0,318 1,120

2 mg

0,269 ± 0,050

0,160 0,331

20 SD50

0

1,102 + 0,644

0,239 1,909

2 mg

0,409 ± 0,298

0,233 1,241

50SDso

0

1,651 ± 0,535

0,286 2,014

2 mg

0,350 ± 0,155

0,278 0,406

Tableau VIII enfin de brevet

Dans ces conditions, le HPA39 conserve une activité notable sur la splénomégalie, mais moins importante qu'après une injection unique de produit le même jour que le virus. Dans la deuxième partie du tableau VIII, on a testé l'effet d'une dose unique de 2 mg de produit injectée à différents jours par rapport à l'inoculation virale.

Seule une injection 2 j après le virus conserve une certaine efficacité, mais cependant le taux de protection obtenu est inférieur à celui obtenu lors d'injections effectuées le même jour que le virus.

Effet du HPA39 sur le taux de virus intraplénique:

On a comparé le taux de virus dans la rate des animaux témoins à celui trouvé dans la rate d'animaux traités au jour 0 par une dose de HPA39. Bien que les animaux traités aient un poids de rate très inférieur aux témoins, le taux de virus est comparable dans les deux groupes. La technique utilisée avait été le titrage S+L des broyats de rates.

II. Encéphalomyocardite:

On a également testé l'effet du HPA39 sur la létalité du virus de 60 l'encéphalomyocardite de la souris. On a utilisé les souches V77 L3 et S3 (passage en culture pour la souche L3 et in vivo pour la souche S3), VR129 L3 et S3.

Le produit a été injecté en une dose unique (3 mg) par voie intrapéritonéale 30 min avant l'inoculation de 50 LDJ0 de virus qui, 65 elle, est faite par voie sous-cutanée.

On a constaté une nette augmentation du nombre d'animaux survivants par rapport aux animaux témoins n'ayant pas reçu d'injection de HPA39.

628005 8

Tableau Vili

HPA39: effet de différents traitements sur la splénomégalie induite par le virus de Friend

Traitement

Dose

Poids de rate moyen + écart type (g)

Valeurs limites

0

1,202 ± 0,643

0,488-2,5943

J+3 -+ J+7 5 x 0,5 mg

0,610 ± 0,440

0,204-1,577

J+ io J+m5 x 0,5 mg

0,658 ± 0,299

0,250-1,250

J+i7-*J+2i5 x 0,5 mg

0,532 ± 0,289

0,263-0,988

0

1,438 ± 0,550

0,727-2,493

Jo

2 mg

0,244 ± 0,040

0,185-0,308

J-7

2 mg

1,488 ± 0,443

0,762-2,033

J-4

2 mg

1,827 ± 0,304

1,221-2,170

J-2

2 mg

1,668 ± 0,569

0,764-2,233

J+2

2 mg

0,560 ± 0,378

0,202-1,270

J+4

2 mg

1,179 ± 0,548

0,257-1,748

J+7

2 mg

1,170 ± 0,740

0,390-2,402

R

5 feuilles dessins

Claims

628005

2

REVENDICATIONS

1. Procédé pour l'obtention de composés d'hétéropolyanions de formule:

[Sb9 W21 086] (NH4)19 ou [K Sb, W21 086] K1S (II) (VI)

caractérisé en ce qu'il consiste:

1. à additionner à une solution aqueuse de tungstate d'ammonium ou de potassium une solution contenant l'ion Sbm;
2. à ajouter ensuite de l'ammoniaque concentrée ou une solution saturée d'un sel de potassium;
3. à récupérer le composé de formule II ou VI qui précipite.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la solution contenant l'ion Sbm est une solution de SbCl3 dans NH4C1 ou KCl.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la solution contenant l'ion Sbm est une solution de Sb203 dans HCl et la solution aqueuse de tungstate est une solution de tungstate d'ammonium, et que l'on obtient, après addition d'ammoniaque concentrée, le composé d'hétéropolyanion de formule II.
4. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que, dans l'étape 1, la solution de l'ion SbIlr est une solution de SbCl3 dans KCl, la solution de tungstate est une solution aqueuse de K2W04; en ce que, dans l'étape 2, on ajoute une solution saturée de bicarbonate de potassium jusqu'à ce que le milieu réactionnel soit incolore et que son pH soit voisin de 7, et que l'on obtient le composé d'hétéropolyanion de formule VI.
5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'on utilise de 1 à 3,4 parties de SbCl3 par rapport à une solution aqueuse molaire de K2W04.
6. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape 1 a lieu à une température de 60 à 100°C, en particulier de 80°C environ.
8. Procédé de préparation des composés d'hétéropolyanions de formule:

[M Sb9 W21 086] M'ls (III)

dans laquelle M est un métal alcalin autre que le sodium ou est un métal alcalino-terreiix et M'est un métal alcalin ou alcalino-terreux ou bien l'ammonium ou bien l'ammonium quaternaire, caractérisé en ce que l'on prépare un composé d'hétéropolyanion de formule II par le procédé selon la revendication 1 et que l'on traite le composé obtenu avec une solution aqueuse contenant un ion alcalin ou alcalino-terreux autre que le sodium.