CH619471A5

CH619471A5 - Water-soluble compositions, with the exception of medicinal products, containing an N<4>-acylcytosine arabinoside, process for preparing them and use of these compositions

Info

Publication number: CH619471A5
Application number: CH1637276A
Authority: CH
Inventors: Torao Ishida
Original assignee: Asahi Chemical Ind
Priority date: 1975-12-31
Filing date: 1976-12-28
Publication date: 1980-09-30
Also published as: DE2658406C2; CA1063937A; SE445011B; SE7614755L; DE2658406A1; HU180646B

Description

La présente invention se rapporte à des compositions hydroso-lubles, à l'exception des médicaments, contenant un N4-acylcyto-sine-arabinoside, au procédé pour la préparation de ces compositions et à l'utilisation de celles-ci, notamment comme additifs 35 alimentaires pour favoriser la croissance des animaux.

On sait que les N4-acyIcytosine-arabinosides sont utiles, en plus de leur application comme médicaments à effet thérapeutique anticancer, dans plusieurs autres types de compositions, notamment comme additifs alimentaires pour favoriser la croissance des 40 animaux, comme agents d'absorption des rayons ultraviolets, comme stabilisants thermiques, etc.

On sait également que les N4-acylcytosine-arabinosides deviennent d'autant plus difficiles à dissoudre dans l'eau que le nombre d'atomes de carbone dans le groupe acyle augmente. 45 Lorsque ce groupe comporte 5 atomes de carbone et plus, le composé n'est que très faiblement soluble dans l'eau, alors que la solubilité est pratiquement nulle lorsque le groupe acyle comporte 14 atomes de carbone et plus.

Or, dans la plupart des utilisations des N4-acylcytosine-50 arabinosides, il est souhaitable pour faciliter cette utilisation et la rendre plus efficace que ces composés soient présents en solution aqueuse. Le but de cette invention consiste donc à fournir une composition hydrosoluble, à l'exception de médicaments, contenant un N4-acylcytosine-arabinoside.

55 La composition, objet de la présente invention et visant à atteindre le but précité, se caractérise par le fait qu'elle comporte, en plus dudit arabinoside, au moins un additif choisi parmi les esters d'acides gras, hydroxy ou non, liés à du polyoxyéthylène et les acides biliaires.

6o Un second objet de cette invention consiste en un procédé pour la préparation des compositions hydrosolubles ci-dessus, qui se caractérise par le fait qu'on dissout le N4-acylcytosine-arabino-side et l'additif dans un solvant, puis que le solvant est évaporé.

Enfin, un troisième objet de cette invention consiste en l'utili-65 sation des compositions hydrosolubles ci-dessus comme additifs alimentaires pour favoriser la croissance des animaux.

Il convient en outre de noter que les compositions hydrosolubles contenant un N4-acylcytosine-arabinoside peuvent être

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utilisées également comme médicaments à effet thérapeutique anticancer, comme agents d'absorption des rayons UV, comme stabilisants thermiques, etc.

L'additif utilisé dans la composition selon l'invention est au moins l'un des composés choisi parmi le groupe comprenant: a) des glycérine-esters d'acides gras hydroxy liés au polyoxyéthylène, b) des esters d'acides gras polyoxyéthylène, c) de la lanoline liée au polyoxyéthylène, et d) des acides biliaires. Lorsque l'additif contient un groupe polyoxyéthylène [dans le cas de a), b) et c)], il est préféré que 10 à 200 mol, de préférence 20 à 100 mol, en moyenne, d'oxyéthylène soient polymérisées à la partie polyoxyéthylène. Lorsque l'additif contient un reste d'acide gras [dans le cas de b)] ou un reste acide gras hydroxy [dans le cas de a)], les restes acides gras ou les restes acides gras hydroxy contenant de 10 à 20 atomes de carbone (par exemple les acides caprique, hydroxycaprique, stéarique, hydroxystéarique, eicosanoïque, hydroxyeicosanoïque, etc.) sont préférés.

Parmi les additifs mentionnés ci-dessus, les acides biliaires et les esters-glycérines d'acides gras hydroxy contenant de 10 à 20 atomes de carbone (par exemple les acides hydroxycaprique, hydroxylaurique, hydroxymyristique, hydroxypalmitique, hydroxymargarique, hydroxystéarique, hydroxyeicosanoïque, ricinoléique, etc.) auxquels est lié un polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 10 à 200 mol, de préférence de 40 à 100 mol, sont plus spécialement préférés. Parmi ces derniers, l'huile de castor hydrogénée à laquelle est ajouté un groupe polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 40 à 100 mol, et un glycérine-ester de l'acide hydroxystéarique lié à un polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 40 à 100 mol, sont plus spécialement préférés.

Les acides biliaires désignent ici les acides biliaires et leurs sels, et comprennent, par exemple, des acides tels que les acides déoxy-cholique, déhydrocholique, cholique, lithocholique, chénodéoxy-cholique, lagodéoxycholique, hyocholique et phocascholique, ainsi que les sels de ces acides. Parmi ceux-ci, l'acide déoxycholique et l'acide déhydrocholique, et les sels de ceux-ci sont plus spécialement préférés. Comme sels d'acides biliaires, les sels de métaux alcalins et les sels d'ammonium sont préférés. Les sels de sodium, de potassium, d'ammonium, de triméthylammonium et de pro-caïne sont particulièrement préférés, les sels de sodium étant supérieurs. Comme acides biliaires, on préfère donc le déoxycho-late de sodium et le déhydrocholate de sodium.

En conséquence, les additifs préférés sont le déoxycholate de sodium, le déhydrocholate de sodium, l'huile de castor hydrogénée liée à un oxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 40 à 100 mol, et un glycérine-ester de l'acide hydroxystéarique lié à un oxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 40 à 100 mol. L'huile de castor hydrogénée liée à un oxyéthylène est plus spécialement préférée.

En outre, pour améliorer encore la solubilité dans l'eau des N4-acylcytosine-arabinosides, un ou plusieurs additifs auxiliaires peuvent être ajoutés à la composition selon l'invention. Ces additifs auxiliaires consistent en au moins un composé choisi parmi les saccharides, les polyols aliphatiques, les chlorures inorganiques, les bromures inorganiques, les sulfates inorganiques et les acides carboxyliques aromatiques ou leurs sels.

Les saccharides préférés sont les monosaccharides tels que ribose, arabinose, glucose, fructose, sorbitol, mannitol, xylose et galactose, les disaccharides tels que lactose et saccharose, les Polysaccharides tels que la cellulose, le glucose étant plus spécialement préféré.

Des exemples de polyols aliphatiques sont le glycérol, le propylèneglycol et le polyéthylèneglycol. Le glycérol et le propylè-neglycol sont plus particulièrement préférés.

Les chlorures ou bromures inorganiques préférés sont les chlorures de métaux alcalins ou alcalino-terreux, et les bromures de métaux alcalins ou alcalino-terreux. Les chlorures plus spécialement préférés sont le NaCl, CaCh et MgCh, puis le KCl.

D'autre part, le MgSC>4 est plus particulièrement préféré comme sulfate inorganique.

Les acides carboxyliques aromatiques sont, par exemple, l'acide benzoïque et l'acide salicylique, et sont de préférence utilisés sous forme de sels de métaux alcalins, de sels de métaux alcalino-terreux, et de sels d'ammonium. Les sels de sodium sont spécialement préférés, et le salicylate de sodium est le meilleur parmi ceux-ci.

La quantité de l'additif, respectivement de l'additif auxiliaire, est comprise de préférence entre 0,1 et 20 parties en poids par partie en poids du N4-acylcytosine-arabinoside. Si la quantité est inférieure à 0,1 partie en poids, l'effet désiré n'est pas obtenu. D'autre part, des quantités excédant 20 parties en poids ne produisent aucun résultat supplémentaire particulier, et ne sont pas économiques, à cause du fait que la concentration en N4-acylcyto-sine-arabinoside décroît.

La composition contenant le N4-acylcytosine-arabinoside et l'additif peut être préparée par mélange uniforme de ces ingrédients. Afin de mélanger ceux-ci de façon uniforme, il est généralement pratique de les dissoudre dans un solvant, lequel solvant est ensuite éliminé par évaporation de la solution, cela aboutissant à la formation de la composition désirée. La composition consistant en un N4-acylcytosine-arabinoside et en un additif est vendue sous la forme d'un solide, et peut être utilisée après addition d'une solution aqueuse d'un additif auxiliaire.

La composition comprenant le N4-acylcytosine-arabinoside, un additif et un additif auxiliaire, peut être préparée par mélange uniforme de ces trois ingrédients. De préférence, cette composition est préparée par addition d'une solution aqueuse de l'additif auxiliaire à la composition comprenant le N4-acylcytosine-arabi-noside et l'additif. Lorsque l'eau est évaporée après formation de la solution, la composition devient solide et est aisément transportable. Une lyophilisation, toutefois, est plus spécialement préférée afin de rendre cette composition solide. Une telle composition solide est très facilement transformée en une solution stable par simple mélange avec de l'eau avant l'utilisation.

En d'autres termes, afin de solubiliser le N4-acylcytosine-arabinoside pour atteindre le but de cette invention, il suffit de mélanger ce N4-acylcytosine-arabinoside avec un des additifs mentionnés précédemment, de préférence en ajoutant en outre un additif auxiliaire.

Pour que le mélange soit uniforme, il convient généralement de dissoudre le N4-acylcytosine-arabinoside et l'additif dans un solvant, puis d'évaporer le solvant de la solution. De préférence, l'additif auxiliaire et l'eau, ou une solution aqueuse de l'additif auxiliaire, est ajoutée à la composition comprenant le N4-acylcy-tosine-arabinoside et l'additif, et le mélange est chauffé afin de former une solution, puis, si désiré, en évaporant l'eau de la solution.

Dans la dissolution du N4-acylcytosine-arabinoside et de l'additif, la quantité de solvant utilisée n'est pas particulièrement critique, mais elle se situe généralement entre 10 et 1000 parties en poids par partie en poids de N4-acylcytosine-arabinoside. La quantité d'eau utilisée avec l'additif auxiliaire n'est pas non plus restreinte. Généralement, la quantité est de préférence comprise entre 50 et 1000 parties en poids par partie en poids de N4-acylcy-tosine-arabinoside.

Pour mélanger uniformément le N4-acylcytosine-arabinoside et l'additif, avec de préférence l'additif auxiliaire, les conditions de pression, de température et de durée présentées ci-dessous peuvent être utilisées. Le N4-acylcytosine-arabinoside et l'additif sont dissous dans un solvant à une pression de 1 à 2 atm et à une température de — 20° C jusqu'au point d'ébullition du solvant, de préférence entre 40 et 100°C (ou le point d'ébullition lorsque celui-ci est inférieur à 100°C), pendant 1 mn à 20 h, de préférence pendant 5 mn à 2 h. Ensuite, le solvant est évaporé à une pression de 0,001 à 1 atm et à une température de 0°C jusqu'au point d'ébullition du solvant, de préférence entre 40 et 80° C (ou le point

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d'ébullition lorsque celui-ci est inférieur à 80° C), pendant 5 mn à 20 h, de préférence pendant 10 mn à 4 h. Si cela est requis, le mélange est alors séché à une pression de 0,001 à 0,5 atm et à une température de 10 à 30° C pendant 4 à 100 h.

De préférence, l'eau ou l'additif auxiliaire et l'eau, ou une solution aqueuse de l'additif auxiliaire est ajoutée au solide hydrosoluble mentionné précédemment (comprenant le N4-acylcyto-sine-arabinoside et l'additif), et le mélange est chauffé à 1-1,5 atm et à 60-120° C pendant 1 mn à 4 h, afin de former une solution. Lorsque l'additif auxiliaire n'est pas ajouté, on ne laisse pas refroidir spontanément la solution, mais celle-ci est rapidement refroidie jusqu'à —40 à +20°C avec de l'eau courante, un mélange de glace et d'eau, ou un mélange de glace sèche et d'acétone, etc. Cela a pour effet d'augmenter encore la solubilité du solide. Lorsque l'additif auxiliaire est ajouté, les ingrédients se dissolvent suffisamment sans que cette opération de refroidissement rapide soit nécessaire.

Afin de préparer une solution aqueuse du N4-acylcytosine-arabinoside contenant un solvant organique, une solution aqueuse du N4-acylcytosine-arabinoside ne contenant pas du tout de solvant organique est d'abord préparée, et le solvant organique est ensuite ajouté à la solution aqueuse. Alternativement, une solution aqueuse contenant le solvant organique est ajoutée au N4-acylcytosine-arabinoside, et le mélange est chauffé, puis la solution obtenue est rapidement refroidie. Selon une autre alternative, qui est quelquefois difficile à réaliser lorsque la quantité de solvant organique à ajouter est faible, on ajoute le solvant organique au N4-acylcytosine-arabinoside et à l'additif, on chauffe le mélange et on ajoute de l'eau à une solution aqueuse de l'additif auxiliaire soit directement, soit après refroidissement du mélange jusqu'à la température ambiante, afin de former une solution aqueuse du N4-acylcytosine-arabinoside contenant le solvant organique. Une autre méthode possible consiste à ajouter une solution aqueuse de l'additif ou de l'additif et de l'additif auxiliaire à un solvant organique contenant le N4-acylcytosine-arabi-noside. Il serait également possible d'ajouter une solution aqueuse contenant l'additif, ou l'additif et l'additif auxiliaire, et un solvant organique au N4-acylcytosine-arabinoside.

Des exemples de solvants capables de dissoudre le N4-acylcy-tosine-arabinoside et l'additif comprennent des cétones telles que l'acétone et la méthyléthylcétone, des esters tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des éthers aliphatiques tels que le diéthyléther et le méthyléthyléther, des éthers cycliques tels que le tétrahydrofuranne, le tétrahydropyranne et le dioxanne, des amides tels que le diméthylacétamide, le diméthylformamide et le diéthylacétamide, des sulfoxydes tels que le diméthylsulfoxyde, des alcools tels que le méthanol, l'éthanol, le n-propanol et l'iso-propanol, des bases telles que la pyridine et des triéthanolamines, et des acides tels que l'acide fornique et l'acide acétique. Parmi ces solvants, les cétones, les esters, les éthers cycliques, les éthers aliphatiques, les amides et les sulfoxydes sont préférés, à cause du fait qu'il ne décomposent pas le N4-acylcytosine-arabinoside. Les cétones, les esters, éthers aliphatiques, monoéthers cycliques et alcools sont préférés à cause de leur facilité d'évaporation. Les cétones, amides et éthanol sont préférés à cause de leur faible toxicité. En conséquence, les cétones sont particulièrement préférées à cause de leur stabilité supérieure, de leur évaporabilité et de leur faible toxicité. Etant donné que les monoéthers cycliques sont supérieurs en stabilité, en évaporabilité et en solubilité, ils sont préférés aux cétones s'ils peuvent être complètement évaporés après usage. Comme l'éthanol possède de bonnes caractéristiques d'évaporabilité, de solubilité et de faible toxicité, il est préféré aux cétones lorsque la durée de contact avec le N4-acylcytosine-arabinoside peut être diminuée. L'évaporation complète des amides et des sulfoxydes est longue, sinon ils seraient préférés à cause de leurs caractéristiques supérieures de stabilité, de solubilité et de faible toxicité.

Les N4-acylcytosine-arabinosides ayant de 14 à 24 atomes de carbone dans le groupe acyle sont tout à fait insolubles dans l'eau (solubles en une concentration inférieure à 0,00001% en poids), mais deviennent solubles dans l'eau en une quantité de 0,02 à 4% en poids par addition de 0,1 à 20% en poids de l'additif spécifique, et de préférence également de la même quantité de l'additif auxiliaire.

Tous les additifs utilisés pour former avec le N4-acylcytosine-arabinoside la composition selon l'invention sont connus et commercialement disponibles.

Les N4-acylcytosine-arabinosides sont obtenus, par exemple, par réaction du cytosine-arabinoside avec des anhydrides d'acides en présence d'eau. Par exemple, le N4-béhénoylcytosine-arabino-side peut être obtenu de la manière suivante:

1,23 mmol de cytosine-arabinoside est dissoute dans 2 ml d'eau et 30 ml de dioxanne et 2,47 mmol d'anhydride béhénique sont ajoutés. Le mélange est chauffé jusqu'à 80°C afin de dissoudre le précipité. Après agitation à 80° C pendant 5 h, le mélange réactionnel est refroidi et le précipité est recueilli par filtration. Le précipité est alors lavé complètement avec de l'eau et séché. A ce précipité séché est ajouté du n-hexane, et le mélange est chauffé au reflux. Le produit est refroidi et recueilli par filtration, puis lavé avec du benzène et du toluène. Une recristallisation dans l'acétate d'éthyle permet d'obtenir du N4-béhénoylcytosine-arabinoside (AS-22) avec un rendement de 82,5%.

D'autres N4-acylcytosine-arabinosides sont synthétisés en utilisant des anhydrides d'acides correspondant aux groupes acyle des produits désirés à la place de l'anhydride béhénique.

Les exemples suivants illustrent quelques compositions selon l'invention, ainsi que leur procédé de préparation et leur utilisation.

Exemple 1 :

1 g de N4-béhénoylcytosine-arabinoside et chacun des additifs présentés dans le tableau 1 dans les quantités indiquées dans celui-ci ont été ajoutés à 100 g de dioxanne. Le mélange a été chauffé à 1 atm et à 80° C pendant 10 mn, puis le dioxanne a été évaporé à 0,1 atm et à 60° C pendant 4 h.

Le résidu et chacun des additifs auxiliaires mentionnés dans le tableau 2 (les chiffres correspondent à ceux du tableau 1) dans les quantités indiquées ont été ajoutés à 200 g d'eau. Le mélange a été chauffé à 95° C et sous 1 atm pendant 20 mn avec agitation, puis refroidi dans un mélange d'eau et de glace, puis lyophilisé.

Les compositions montrées dans le tableau 3 (les chiffres correspondent également à ceux des tableaux 1 et 2) ont été obtenus sous forme de poudres blanches amorphes (les compositions N® 2 et 6 étaient sous forme semi-fluide, blanches, avec les rendements indiqués).

Tableau 1

N°

Additif

Poids (g)

1

HCO-IO [polyoxyéthylène-(10)-huile de castor

hydrogénée]

0,1

2

HCO-IO

20

3

HCO-60 [polyoxyéthylène-(60)-huile de castor

hydrogénée]

0,1

4

HCO-60

5

HCO-60

20

6

HCO-200 [polyoxyéthylène (200)-huile de castor

hydrogénée]

0,1

8

Polyoxyéthylène (60)-trihydroxycaprate de

glycérine

0,1

9

Polyoxyéthylène (60)-trihydroxycaprate de

glycérine

20

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Tableau 1 (suite)

N°

Additif

Poids (g)

10

Polyoxyéthylène (60)-dihydroxyarachidate de

glycérine

0,1

11

Polyoxyéthylène (60)-dihydroxyarachidate de

glycérine

20

12

Polyoxyéthylène (60) -mélange de trihydroxystéa-

rate et de tristéarate de glycérine (3:1)

0,1

13

Polyoxyéthylène (60)-mélange de trihydroxy-

stéarate et de tristéarate de glycérine (3:1)

20

14

HCO-60/déoxycholate de sodium (1:1)

0,2

15

HCO-60/déoxycholate de sodium (70:1)

7,1

16

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

17

HCO-60/déoxycholate de potassium (25:1)

5,2

18

Acide déoxycholique

0,1

19

Acide déoxycholique

20

Déoxycholate de sodium

0,1

21

Déoxycholate de sodium

20

22

Déoxycholate de potassium

0,1

23

Déoxycholate de potassium

20

24

Acide déhydrocholique

0,1

25

Acide déhydrocholique

20

26

Cholate de sodium

0,1

27

Cholate de sodium

20

28

Lithocholate de sodium

0,1

29

Lithocholate de sodium

20

30

Acide chénodéoxycholique

0,1

31

Acide chénodéoxycholique

20

32

Acide ursodéoxycholique

0,1

33

Acide ursodéoxycholique

20

34

Hyodéoxycholate de sodium

0,1

35

Hyodéoxycholate de sodium

20

36

Lagodéoxycholate de sodium

0,1

37

Lagodéoxycholate de sodium

20

38

Hyocholate de sodium

0,1

39

Hyocholate de sodium

20

40

Phocaecholate de sodium

0,1

41

Phocaecholate de sodium

20

42

Déoxycholate d'ammonium

0,1

43

Déoxycholate d'ammonium

20

44

Déoxycholate de triméthylammonium

0,1

45

Déoxycholate de triméthylammonium

20

46

Déoxycholate de procaïne

0,1

47

Déoxycholate de procaïne

20

48

HCO-60

5

49

HCO-60

5

50

HCO-60

5

51

HCO-60

5

52

HCO-60

5

53

HCO-60

5

54

HCO-60

5

55

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

56

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

57

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

58

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

59

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

60

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

61

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

62

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

63

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

64

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

65

HCO-60/déoxycholate de sodium (35:1)

7,2

66

HCÓ-60/déhydrocholate de sodium (35:1)

7,2

67

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35:1)

7,2

619 471

Tableau 1 (suite)

N°

Additif

Poids

(g)

68

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

69

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

70

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

71

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

72

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

73

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

74

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

75

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

76

HCO-60/déhydrocholate de sodium (35

1) 7,2

Tableau 2

N°

Additif auxiliaire

Poids

(g)

1

Glycérol

20

2

Glycérol

0,1

3

Glucose

5

4

Glucose

5

Glucose

5

6

Propylèneglycol

20

7

Propylèneglycol

0,1

8

Ribose

20

9

Ribose

0,1

10

Arabinose

20

11

Arabinose

0,1

12

Fructose

20

13

Fructose

0,1

14

Sorbitol

20

15

Sorbitol

0,1

16

Mannitol

20

17

Mannitol

0,1

18

Lactose

20

19

Lactose

0,1

20

Saccharose

20

21

Saccharose

0,1

22

NaCl

20

23

NaCl

0,1

24

KCl

20

25

KCl

0,1

26

CaCl2

20

27

CaCl2

0,1

28

MgCl2

20

29

MgCl2

0,1

30

Acide benzoïque

20

31

Acide benzoïque

0,1

32

Benzoate de sodium

20

33

Benzoate de sodium

0,1

34

Benzoate de potassium

20

35

Benzoate de potassium

0,1

36

Acide salicylique

20

37

Acide salicylique

0,1

38

Salicylate de sodium

20

39 Salicylate de sodium 0,1

40 Salicylate de potassium 20

41 Salicylate de potassium 0,1

42 Mélange de glucose et de CaCl2 (10:1) 5,5

43 Mélange de glucose et de MgCl2 (10:1) 5,5

44 Mélange de glucose et de benzoate de sodium

(50:1) 5,1

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

619 471

Tableau 2 (suite)

6

Tableau 3 (suite)

N°

Additif auxiliaire

Poids

(g)

45

Mélange de glucose et de salicylate de sodium

(50:1)

5,1

46

Mélange de NaCl et de CaCl2 (1:1)

1

47

Mélange de NaCl et de MgCl2 (1:1)

1

48

Mélange de glucose et de CaCl2 (10:1)

5,5

49

Mélange de glucose et de MgCl2 (10:1)

5,5

50

Mélange de glucose et de salicylate de sodium

(50:1)

5,1

51

CaCl2

1

52

MgCl2

1

53

NaCl

1

54

KCl

1

55

Mélange de glucose et de CaCl2 (10:1)

5,5

56

Mélange de glucose et MgCl2 (10:1)

5,5

57

Mélange de glucose et de benzoate de sodium

(50:1)

5,1

58

Mélange de glucose et de salicylate de sodium

(50:1)

5,1

59

Glucose

5

60

NaCl

1

61

CaCl2

1

62

MgCl2

1

63

Salicylate de sodium

0,1

64

Fructose

5

65

Lactose

5

66-

Mélange de glucose et de CaCl2 (10:1)

5,5

67

Mélange de glucose et de MgCl2(10:l)

5,5

68

Mélange de glucose et de benzoate de sodium

(50:1)

5,1

69

Mélange de glucose et de salicylate de sodium

(50:1)

5,1

70

Glucose

5

71

NaCl

1

72

CaCl2

1

73

MgCl2

1

74

Salicylate de sodium

0,1

75

Fructose

5

76

Lactose

5

Tableau 3 :

N°

Composition

Rende

ment (%)

1

Be-C :HCO-10 :Gly (1:0,1:20)

98

2

Be-C :HCO-10 :Gly (1:20:0,1)

98

3

Be-C :HCO-60 : Glu (1:0,1:5)

98

4

Be-C:HCO-60:Glu (1:5:5)

98

5

Be-C : HCO-60 : Glu (1:20:5)

98

6

Be-C : HCO-200: Pro( 1:0,1:20)

98

7

Be-C : HCO-200: Pro (1:20:0,1)

98

8

Be-C : Cap-60 : Rib (1:0,1:20)

97

9

Be-C : Cap-60 : Rib (1:20:0,1)

97

10

Be-C :Ara-60: Ara (1:0,1:20)

97

11

Be-C: Ara-60: Ara (1:20:0,1)

97

12

Be-C:Ste-60:Fru (1:0,1:20)

97

13

Be-C:Ste-60: Fru (1:20:0,1)

97

14

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Sor (1:0,1:0,1:20)

97

15

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Sor (1:7:0,1:0,1)

97

N°

Composition

Rende

5

ment (%)

16

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Man (1:7:0,2:20)

97

17

Be-C:HCO-60:DeoxNa:Man (1:7:0,2:0,1)

97

io 18

Be-C : DeoxH : Lac (1:0,1:20)

97

19

Be-C :DeoxH: Lac (1:20:0,1)

97

20

Be-C : DeoxNa : Sac (1:0,1:20)

97

21

Be-C: DeoxNa: Sac (1:20:0,1)

97

22

Be-C : DeoxK : NaCl (1:0,1:20)

97

15 23

Be-C : DeoxK : NaCl (1:20:0,1)

97

24

Be-C :DehH: KCl (1:0,1:20)

97

25

Be-C:DehH:KCl (1:20:0,1)

97

26

Be-C : CNa : CaCl2 (1:0,1:20)

97

27

Be-C:CNa:CaCl2 (1:20:0,1)

97

20 28

Be-C : LiNa : MgCl2 (1:0,1:20)

97

29

Be-C : LiNa : MgCl2 (1:20:0,1)

97

30

Be-C:CheH:BenH (1:0,1:20)

98

31

Be-C:CheH:BenH (1:20:0,1)

98

32

Be-C : UruH : BenNa (1:0,1:20)

98

25 33

Be-C : UruH : BenNa (1:20:0,1)

98

34

Be-C : HyodNa : BenK (1:0,1:20)

98

35

Be-C : Hy odNa : BenK (1:20:0,1)

98

36

Be-C : LagodNa : SalH (1:0,1:20)

98

37

Be-C :LagodNa: SalH (1:20:0,1)

98

3o 38

Be-C : HyoNa : SalNa (1:0,1:20)

98

39

Be-C : HyoNa : SalNa (1:20:0,1)

98

40

Be-C : PhoNa : SalK (1:0,1:20)

98

41

Be-C : PhoNa : Salk (1:20:0,1)

98

42

Be-C:DeoxNH4:Glu:CaCl2 (1:0,1:5:0,5)

97

35 43

Be-C: DeoxNH4:Glu:MgCl2 (1:20:5:0,5)

97

44

Be-C:DeoxT:Glu:BenNa (1:0,1:5:0,1)

98

45

Be-C : DeoxT : Glu : SalNa (1:20:5:0,1)

98

46

Be-C : DeoxPr : NaCl : CaCl2 (1:0,1:0,5:0,5)

97

47

Be-C : DeoxPr : NaCl : Mgl2 (1:20:0,5:0,5)

97

40 48

Be-C : HCO-60 : Glu : CaCl2 (1:5:5:0,5)

97

49

Be-C : HCO-60 : Glu : MgCl2 (1:5:5:0,5)

97

50

Be-C:HCO-60:Glu:SalNa (1:5:5:0,1)

98

51

Be-C : HCO-60 : CaCl2 (1:5:1)

97

52

Be-C : HCO-60 : MgCl2 (1:5:1)

97

45 53

Be-C: HCO-60:NaCl (1:5:1)

97

54

Be-C: HCO-60: KCl (1:5:1)

97

55

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Glu : CaCl2

(1:7:0,2:5:0,5)

97

56

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Glu : MgCl2

50

(1:7:0,2:5:0,5)

97

57

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Glu: BenNa

(1:7:0,2:5:0,1)

98

58

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Glu : SalNa

(1:7:0,2:5:0,1)

98

55 59

Be-C:HCO-60:DeoxNa:Glu (1:7:0,2:5)

97

60

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : NaCl (1:7:0,2:1)

97

61

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : CaCl2 (1:7:0,2:1)

97

62

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : MgCl2 (1:7:0,2:1)

97

63

Be-C:HCO-60:DeoxNa:SalNa (1:7:0,2:0,1)

98

60 64

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Fru (1:7:0,2:5)

97

65

Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Lac (1:7:0,2:5)

97

66

Be-C : HCO-60 : DehNa : Glu : CaCl2

(1:7:0,2:5:0,5)

97

67

Be-C : HCO-60 : DehNa : Glu : MgCl2

65

(1:7:0,2:5:0,5)

97

68

Be-C : HCO-60 : DehNa : Glu : BenNa

(1:7:0,3:5:0,1)

98

7

619 471

Tableau 3 (suite)

N°

Composition

Rende

ment (%)

69

Be-C : HCO-60 : DehNa : Glu : SalNa

(1:7:0,2:5:0,1)

98

70

Be-C : HCO-60 : DehNa : Glu (1:7:0,2:5)

97

71

Be-C : HCO-60 : DehNa : NaCl (1:7:0,2:1)

97

72

Be-C:HCO-60:DehNa:CaCl2 (1:7:0,2:1)

97

73

Be-C : HCO-60 : DehNa : MgCl2 (1:7:0,2:1)

97

74

Be-C:HCO-60:DehNa:SalNa (1:7:0,2:0,1)

98

75

Be-C : HCO-60 : DehNa : Fru (1:7:0,2:5)

97

76

Be-C:HCO-60:DehNa:Lac (1:7:0,2:5)

97

Les abréviations utilisées notamment dans les tableaux 1, 2 et 3 ont les significations suivantes:

Be-C : N4-Béhénoylcytosine-arabinoside HCO-IO : Huile de castor hydrogénée liée à du polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 10 HCO-60 : Huile de castor hydrogénée liée à du polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 60 HCO-200 : Huile de castor hydrogénée liée à du polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 200 Cap-60: Trihydroxycaprate de glycérine liée à du polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 60

Ara-60 : Dihydroxyarachidate de glycérine liée à du polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 60

Ste-60 : Trihydroxystéarate de glycérine liée à du polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 60

DeoxNa : Déoxycholate de sodium

DeoxH : Acide déoxycholique

DeoxK: Déoxycholate de potassium

DehH: Acide déhydrocholique

DehNa: Déhydrocholate de sodium

CNa: Cholate de sodium

LiNa: Lithocholate de sodium

ChEH: Acide chénodéoxycholique

UruH : Acide ursodéoxycholique

HyodNa: Hyodéoxycholate de sodium

LagodNa: Lagodéoxycholate de sodium

HyoNa: Hyocholate de sodium

PhoNa : Phocaecholate de sodium

DeoxNH»: Déoxycholate d'ammonium

DeoxT : Déoxycholate de triméthylammonium

DeoxPr: Déoxycholate de procaïne

Gly: Glycérine

Glu: Glucose

Pro: Propylèneglycol

Rib: Ribose

Ara: Arabinose

Fra: Fructose

Sor: Sorbitol

Man : Mannitol

Lac: Lactose

Sac: Saccharose

BenH: Acide benzoïque

BenNa : Benzoate de sodium

BenK: Benzoate de potassium

SalH : Acide salicylique

SalNa: Salicylate de sodium

SalK: Salicylate de potassium

Exemple 2:

1 g de chacun des N4-acylcytosine-arabinosides mentionnés dans le tableau 4 et 7 g de HCO-60 ont été ajoutés à 1 kg d'acétone. Le mélange a été chauffé à 55° C et sous 1 atm pendant 10 mn, puis l'acétone a été évaporée de la solution par chauffage à 40° C et sous 0,1 atm pendant 4 h.

Le résidu et 5 g de glucose ont été ajoutés à 500 g d'eau et le mélange a été chauffé sous agitation à 95° C et sous 1 atm pendant 20 mn, puis refroidi dans un mélange eau/glace. Ce mélange a ensuite été lyophilisé. Ainsi, les compositions présentées dans le tableau 5 (les chiffres correspondent à ceux du tableau 4) ont été obtenues sous forme de poudres amorphes blanches avec les rendements indiqués dans le tableau 5.

Tableau 4

N°

N4-Acylcytosine-arabinoside

77

N4-Nonadécanoylcytosine-arabinoside

78

N4-Arachidoylcytosine-arabinoside

79

N4-Héneicosànoylcytosine-arabinoside

80

N4-Tricosanoylcytosine-arabinoside

81

N4-Lignocéroylcytosine-arabinoside

82

N4-(5-Méthylnonadécanoyl)cytosine-arabinoside

Tableau 5

N°

Composition

Rende

ment (%)

77

N4-Nonadécanoyl CA:HCO-60:Glu (1:7:5)

97

78

N4-Arachidoyl CA:HCO-60:Glu (1:7:5)

97

79

N4-Héneicosanoyl CA : HCO-60 : Glu (1:7:5)

97

80

N4-Tricosanoyl CA:HCO-60:Glu (1:7:5)

97

81

N4-Lignocéroyl CA : HCO-60 : Glu (1:7:5)

97

82

N4-(5-Méthylnonadécanoyl) CA : HCO-60 : Glu

(1:7:5)

97

CA: Cytosine arabinoside.

HCO-60 & Glu: Les mêmes que définis dans l'exemple 1.

Exemple 3:

1 g de chacun des N4-acylcytosine-arabinosides indiqués dans le tableau 6 et chacun des additifs mentionnés dans le tableau 7 dans les quantités indiquées ont été ajoutés à 200 g d'éthanol. Le mélange a été chauffé à 60° C et sous 1 atm pendant 20 mn, puis l'éthanol a été évaporé par chauffage à 40° C et sous 0,1 atm pendant 4 h.

Le résidu et chacun des additifs auxiliaires mentionnés dans le tableau 8 dans les quantités indiquées ont été ajoutés à 1 kg d'eau. Le mélange a été chauffé à 95° C sous 1 atm pendant 20 mn avec agitation, et refroidi dans un mélange eau/glace, puis ce mélange a été lyophilisé.

Ainsi, les compositions mentionnées dans le tableau 9 (les chiffres correspondent à ceux des tableaux 6 à 8) ont été obtenues sous forme de poudres amorphes blanches avec les rendements indiqués dans le tableau 9.

Tableau 6

N° N4-Acylcytosine-arabinoside 83 N4-Stéaroylcytosine-arabinoside

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

619 471

8

Tableau 6 (suite)

N"

N4-Acylcytosine-arabinoside

84

N4-Stéaroylcytosine-arabinoside

85

N4-Stéaroylcytosine-arabinoside

86

N4-Stéaroylcytosine-arabinoside

87

N4-Myristoylcytosine-arabinoside

88

N4-Palmitoylcytosine-arabinoside

89

N4-Margaroylcytosine-arabinoside

90

N4-(2-Chlorostéaroyl)cystosine-arabinoside

91

N4-(18-Hydroxystéaroyl)cytosine-arabinoside

92

N4-(2-Mercaptostéaroyl)cytosine-arabinoside

93

N4-Margaroylcytosine-arabinoside

94

N4-Margaroylcytosine-arabinoside

95

N4-Margaroylcytosine-arabinoside

96

N4-Valéroylcytosine-arabinoside

97

N4-Stéaroylcytosine-arabinoside

Tableau 7

N°

Additif

Poids

(g)

83

HCO-60

5

84

HCO-60

5

85

HCO-60

5

86

Déoxycholate de sodium

5

87

HCO-60: déoxycholate de sodium (1:1)

4

88

HCO-60-.déoxycholate de sodium (1:1)

4

89

HCO-60:déoxycholate de sodium (1:1)

4

90

HCO-60: déoxycholate de sodium (1:1)

4

91

HCO-60: déoxycholate de sodium (1:1)

4

92

HCO-60: déoxycholate de sodium (1:1)

4

93

Mys-45

5

94

TW-30

5

95

HCO-60

5

96

HCO-60

5

97

HCO-60

5

Tableau 8

N°

Additif auxiliaire

Poids

(g)

83

Glucose

5

84

Glucose : MgCl2 (1:2)

15

85

Glucose :CaCl 2 (1:2)

15

86

Glucose

5

87

Glucose

5

88

Glucose

5

89

Glucose

5

90

Glucose

5

91

Glucose

5

92

Glucose

5

93

Glucose

5

94

Glucose

5

95

MgS04

10

96

Glucose

5

97

NaBr

0,1

Tableau 9

N°

Composition

Rende

ment (%)

83

St-CA : HCO-60 : Glu (1:5:5)

97

84

St-CA : HCO-60 : Glu : MgCl2 (1:5:5:10)

97

85

St-CA : HCO-60 : Glu : CaCl2 (1:5:5:10)

97

86

St-CA : DeoxNa : Glu (1:5:5)

97

87

My-CA : HCO-60 : DeoxNa :Glu (1:2:2:5)

97

88

Pa-CA : HCO-60 : DeoxNa : Glu (1:2:2:5)

97

89

Ma-CA : HCO-60 : DeoxNa : Glu (1:2:2:5)

97

90

2-Cl-St-C A : HCO-60 : DeoxNa : Glu (1:2:2:5)

97

91

18-Hy-St-CA : HCO-60 : DeoxNa : Glu (1:2:2:5)

97

92

2-Me-St-CA : HCO-60 : DeoxyNa : Glu (1:2:2:5)

97

93

Ma-CA : Mys-45 : Glu (1:5:5)

97

94

Ma-CA : TW-30 : Glu (1:5:5)

97

95

Ma-CA : HCO-60 : MgS04 (1:5:10)

97

96

Va-CA:HCO-60:Glu (1:5:5)

97

St-CA : HCO-60 : NaBr (1:5:0,1)

97

Com

parai

son

Va-CA

Les abréviations utilisées dans les tableaux 7 à 9 ont les significations suivantes:

St-CA: N4-Stéaroylcytosine-arabinoside

My-CA : N4-Myristoylcytosine-arabinoside

Pa-CA : N4-Palmitoylcytosine-arabinoside

Ma-CA : N4-Margaroylcytosine-arabinoside 2-Cl-St-CA : N4-(2-Chlorostéaroyl)cytosine-arabinoside 18-Hy-St-CA : N4-(l 8-Hydroxystéaroyl)cytosine-arabinoside 2-Me-St-CA : N4-(2-Mercaptostéaroyl)cytosine-arabinoside Mys-45 : Ester d'acide stéarique de polyoxyéthylène avec un degré moyen de polymérisation de 45 TW-30 : Lanoline liée à un polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 30 Va-CA : N4-ValéroyIcytosine-arabinoside

Exemple 4:

1 g de N4-béhénoylcytosine-arabinoside (AS-22) et chacun des additifs mentionnés dans le tableau 10 dans les quantités indiquées ont été ajoutés à 400 ml d'acétone. Le mélange a été chauffé à 55° C et sous 1 atm pendant 10 mn, puis l'acétone a été évaporée de la solution par chauffage à 55° C et sous 0,2 atm pendant 2 h. Le résidu a été séché dans un dessiccateur à 20° C et sous 0,1 atm pendant 20 h. Ainsi, les compositions hydrosolubles contenant de 1'AS-22 ont été obtenues avec des rendements de 95 à 99%.

La solubilité de chacun des solides ainsi obtenu a été déterminée de la manière suivante. Lorsqu'une solution aqueuse claire peut être obtenue par addition de 100 ml d'une solution aqueuse 0,9% de chlorure de sodium à un solide contenant 1 g de AS-22, par agitation du mélange dans un bain d'eau chaude à 90° C et par refroidissement rapide de la solution aqueuse obtenue dans un bain de glace/eau, la solubilité du solide est déterminée comme étant supérieure à 1 g/100 ml. Lorsqu'un précipité se forme dans les conditions ci-dessus, 100 ml d'une solution aqueuse 0,9% de chlorure de sodium est ajoutée, et la procédure de chauffage et de refroidissement rapide est répétée de façon à former une solution. La solubilité dans ce cas est calculée comme la quantité de AS-22 dissoute par 100 ml d'eau. Des résultats sont également présentés dans le tableau 10.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

9

619 471

Tableau 10

N°

Additif

Poids (g)

Solubilité de AS-22 (g/100 ml)

98

Polyoxyéthylène (40) huile de castor

1,8

0,5

hydrogénée

2

>1

(HCO-40)

100

>1

99

Polyoxyéthylène (50) huile de castor

1,8

0,5

hydrogénée

2

>1

(HCO-50)

100

>1

100

Polyoxyéthylène (60) huile de castor

1,8

0,5

hydrogénée

2

>1

(HCO-60)

100

>1

101

Polyoxyéthylène (80) huile de castor

1,8

0,5

hydrogénée

2

>1

(HCO-80)

100

>1

102

Polyoxyéthylène (100) huile de castor

1,8

0,5

hydrogénée

2

>1

(HCO-lOO)

100

>1

103

Polyoxyéthylène (40) huile de castor

1,8

0,5

(CO-40TX)

2

>1

100

>1

104

Polyoxyéthylène (60) huile de castor

1,8

0,5

(CO-6OTX)

2

>1

100

>1

105

Polyoxyéthylène (30) lanoline (TW-30)

1,8

0,5

2

>1

100

>1

106

Polyoxyéthylène (40) stéarate

1,5

0,5

(MYS-40)

2

>1

100

>1

107

Polyoxyéthylène (45) stéarate (MYS-45)

1,5

0,5

2

>1

100

>1

108

Polyoxyéthylène (55) stéarate (MYS-55)

1,5

0,5

2

>1

100

>1

109

Désoxycholate de sodium

2

0,5

5

>1

100

>1

110

AS-22 seul en suspension sans additif

0

Dans le tableau 10, les abréviations entre parenthèses sont des chiffres de référence des produits (sous la marque Nikkol) de Nikko Chemical Co., Ltd. Il est à prévoir que des produits de compositions similaires fabriqués par d'autres firmes telles que Nissan Chemical Co., Ltd ou Atlas Company auraient pratiquement les mêmes solubilités.

Exemple 5:

A 1 g de AS-22 ont été ajoutés 2 g d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60, un produit utilisé dans des médicaments par Nikko Chemicals Co., Ltd), 0,1 g de stéarate de polyoxyéthylène (40) (Nikkol MYS-40) et 50 ml d'éthanol. Le mélange a été chauffé à 75° C pendant 5 mn, et l'éthanol a été évaporé à 55° C sous 0,2 atm pendant 30 mn, le résidu étant séché à 20° C sous 0,1 atm pendant 4 h, de façon à obtenir environ 3,1 g d'un solide hydrosoluble. A ce solide contenant de l'AS-22 ainsi obtenu, 100 ml d'une solution aqueuse 0,8% de chlorure de sodium ont été ajoutés, et le mélange a été chauffé dans un bain d'eau chaude à 90° C pour former une solution qui a été rapidement refroidie dans un bain eau/glace, de façon à obtenir une solution aqueuse 1 % claire et presque incolore de AS-22. La solution aqueuse a été passée à travers un filtre millipore (avec une dimension des pores de 0,45 n) pour donner une solution injectable à 1% de AS-22.

Exemple 6:

A 1 g de AS-22 ont été ajoutés 2 g d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60) et 50 ml de tétrahy-drofuranne, et le mélange a été chauffé à 50° C pendant 10 mn. A la solution obtenue a été ajouté 0,8 g de chlorure de sodium sous forme de poudre, puis le tétrahydrofuranne a été évaporé à 50° C sous 0,2 atm pendant 30 mn. Le résidu a été séché dans un dessiccateur à 20° C et sous 0,1 atm pendant 20 h pour obtenir une solution blanche collante hydrosoluble de AS-22 • HCO-60 • NaCl. De l'eau (100 ml) a été ajoutée au solide blanc, et le mélange chauffé sur un bain d'eau chaude à 90° C pour former une solution qui a été rapidement refroidie dans un bain glace/eau pour donner une solution aqueuse 1% de AS-22. Cette solution aqueuse a été filtrée au moyen d'un filtre millipore du type décrit dans l'exemple 6 pour obtenir une solution aqueuse injectable à 1% de AS-22 (contenant 1% de AS-22, 2% de HCO-60 et 0,8% de NaCl).

Exemple 7:

2 ml de diméthylacétamide ont été ajoutés à 1 g de AS-22 et 4 g d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60), et le mélange a été chauffé à 90° C et sous 1 atm pendant 10 mn pour former une solution. Après l'avoir laissé refroidir à la température ambiante, la solution s'est transformée en un solide blanc. De l'eau (100 ml) a été ajoutée au solide, et le mélange a été chauffé à 90° C pendant 2 h avec agitation vigoureuse pour dissoudre le solide. La solution a été plongée ensuite dans un mélange glace/eau, et refroidie sous agitation vigoureuse. Ainsi, une solution aqueuse 1 % de AS-22 a été obtenue.

Exemple 8:

2 ml de diméthylacétamide ont été ajoutés à 1 g de AS-22, et le mélange a été chauffé à 90° C et sous 1 atm pendant 10 mn. A la solution ont été ajoutés 100 ml d'une solution aqueuse 4% d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60) chauffée à 90° C. Puis le mélange a été vigoureusement agité à 90° C pendant 2 h, et une partie de l'AS-22 a été dissoute. Le mélange a été rapidement refroidi avec un mélange eau/glace, et filtré pour éliminer la partie insoluble de l'AS-22 et obtenir ainsi une solution aqueuse 0,1% de AS-22.

Exemple 9:

Une solution aqueuse contenant 2% de diméthylacétamide et 4% d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60) a été ajoutée à 0,1 g de AS-22, et le mélange chauffé à 90° C. Une partie de l'AS-22 s'est dissoute, et le mélange a été rapidement refroidi avec un mélange eau/glace, puis filtré pour éliminer l'AS-22 insoluble et obtenir ainsi une solution aqueuse à 0,02% de AS-22.

Exemple 10:

De l'eau (100 ml) a été ajoutée à 0,3 g, 1,5 g ou 3,0 g d'un solide hydrosoluble obtenu de la même manière que dans l'exemple 5 à partir d'une partie de AS-22 et de deux parties d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60). Chacun des mélanges obtenus a été chauffé à 90° C pendant 2 h, et la solution a été refroidie jusqu'à la température ambiante.

D'autre part, 100 ml d'eau ont été ajoutés à 0,3 g, 1,5 g ou 3,0 g d'un solide hydrosoluble préparé à partir d'une partie de AS-22 et de deux parties d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60), et chacun des mélanges a été chauffé à 90° C pendant 2 h. La solution a été rapidement refroidie dans un mélange glace/eau.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

619 471

10

On a trouvé que, par refroidissement rapide, les solutions aqueuses contenant 0,1 g, 0,5 g et 1,0 g de AS-22 étaient toutes claires, mais que, par refroidissement spontané, les solutions aqueuses contenant 0,1 et 0,5 g de AS-22 étaient claires alors que les solutions aqueuses contenant 1,0 g de AS-22 n'étaient pas transparentes, indiquant ainsi que l'AS-22 ne s'était pas complètement dissous. Les échantillons soumis au refroidissement rapide étaient toujours transparents après un stockage pendant 1 semaine à température ambiante, alors que les échantillons refroidis spontanément présentaient des précipités blancs qui s'étaient développés pendant le stockage de 1 jour seulement à température ambiante.

Exemple 11:

40 ml d'éthanol ont été ajoutés à 1 g de AS-22 et 2 g d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60), et le mélange a été chauffé à 60° C. L'éthanol a été évaporé de la solution à 60° C sous pression réduite. Le résidu a été séché dans un dessiccateur sous vide pour donner 3 g d'un solide blanc hydrosoluble. A ce solide ont été ajoutés 100 ml d'une solution aqueuse, 0,8% de chlorure de sodium, et le mélange a été chauffé sur un bain d'eau chaude à 90° C pendant 2 h. La solution a ensuite été refroidie rapidement dans un bain de glace, et filtrée au moyen d'un filtre millipore ayant une dimension des pores de 0,45 jj., afin d'éliminer les micro-organismes présents. Ainsi, une solution injectable de AS-22 contenant 1% de ce dernier, 2% de HCO-60 et 0,8% de NaCl a été obtenue.

Exemple 12:

Chacun des solvants organiques mentionnés dans le tableau 11 a été ajouté dans les quantités indiquées à 1 g de AS-22 et 2 g d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60). Chacun des mélanges a été chauffé à la température indiquée sur le tableau 11 sous 1 atm et pendant 10 mn. Le solvant a été évaporé de la solution obtenue à chacune des température également indiquées sur le tableau 11 et sous 0,2 atm. Le résidu a été séché à 25° C pendant 20 h dans un dessiccateur sous vide. La quantité d'eau requise pour dissoudre les solides hydrosolubles obtenus a été ensuite déterminée. On a trouvé que tous ces solides se dissolvaient dans 50 ml d'eau et aucune différence n'a été observée entre eux.

Comme contrôle, la même procédure que ci-dessus a été effectuée en utilisant 100 ml d'hexane incapable de dissoudre l'AS-22. Il a été trouvé que l'addition d'hexane à un mélange de AS-22 et d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) aboutissait à la dissolution de l'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène seule dans l'eau, l'AS-22 restant presque non dissous dans l'eau.

( Tableau en tête de la colonne suivante)

Exemple 13:

50 ml d'acétone ont été ajoutés à 1 g de AS-22 et à 4 g d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60), et le mélange a été chauffé à 55° C sous 1 atm pendant 2 h, une dissolution complète n'étant pas obtenue. L'acétone a ensuite été évaporée du mélange à 55° C sous 0,2 atm et pendant 2 h, puis de l'eau a été ajoutée en une quantité de 100 ml. Le mélange a alors été chauffé à 90° C, et la solution obtenue a été rapidement refroidie dans un bain de glace afin d'obtenir une solution aqueuse contenant 1% de AS-22 et 4% de HCO-60.

Exemple 14:

1 g de chacun des N4-acylcytosine-arabinosides mentionnés dans le tableau 12 et 10 g d'huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) (Nikkol HCO-60) a été dissous dans 200 ml d'acétone par chauffage à 55° C et sous 1 atm pendant 10 mn. L'acétone a été ensuite évaporée à 55° C sous 0,2 atm et pendant 2 h. Le résidu

Tableau 11

Solvant

Quantité

Tempé

Solubilité

(ml)

rature rature d'AS-22

de dis d'évapo-

(g/100 ml)

solution ration

(°C)

(°c)

Méthanol

200

75

50

2

Ethanol

50

75

50

2

n-Propanol

50

60

2

Isopropanol

50

60

2

Tétrahydrofuranne

20

50

2

Tétrahydropyranne

20

50

2

Dioxanne

50

80

2

Acétone

200

50

2

Méthyléthylcétone

200

50

2

Diméthylacétamide

20

80

2

Diméthylformamide

20

80

2

Diméthylsulfoxyde

20

80

2

Diéthylacétamide

20

80

2

Acétate d'éthyle

500

50

40

2

Acétate de butyle

500

50

40

2

Diéthyléther

500

35

40

2

Méthyléthyléther

500

35

40

2

Pyridine

50

40

2

Triéthanolamine

50

40

2

Acide acétique

50

40

50

2

n-Hexane

1000

50

inf. à 0,02

a été séché dans un dessiccateur à 20° C et sous 0,1 atm pendant 20 h afin d'obtenir une solution aqueuse contenant chacun des N4-acylcytosine-arabinosides avec un rendement de 99%. 100 ml d'eau ont alors été ajoutés à 1 g de chacun des solides hydrosolubles comprenant chacun un N4-acylcytosine-arabinoside et une huile de castor hydrogénée polyoxyéthylène (60) dans un rapport de 1:10 et le mélange a été agité sur un bain d'eau chaude à 90° C. La solution aqueuse obtenue a été rapidement refroidie sur un bain d'eau glacée. Ainsi, des solutions claires ont été obtenues avec un rendement de 99%.

( Tableau en tête de la colonne suivante)

Exemple 15:

La solubilité (I) dans l'eau d'une composition comprenant un N4-acylcytosine-arabinoside, un additif et un additif auxiliaire (composition à trois constituants), la solubilité (II) dans une solution aqueuse d'un additif auxiliaire d'une composition comprenant un N4-acylcytosine-arabinoside et un additif (composition à deux composants), et la solubilité (III) dans l'eau de la composition à deux constituants ont été déterminées dans les trois conditions suivantes :

A) sous agitation à température ambiante pendant 10 mn;

B) par agitation à 90° C pendant 10 mn, puis le mélange agité étant laissé refroidir jusqu'à la température ambiante, et

C) par agitation à 90° C pendant 10 mn, le mélange agité étant ensuite rapidement refroidi dans de l'eau glacée, puis sa température étant normalement ramenée à la température ambiante.

Les procédures spécifiques étaient les suivantes: 1 g, calculé sur la base du N4-béhénoylcytosine-arabinoside (AS-22), de chacune des compositions à trois composants Nœ 1 à 76 obtenues dans l'exemple 1, a été ajouté à 100 ml d'eau, et le mélange a été agité à température ambiante pendant 10 mn, puis filtré au moyen d'un filtre millipore (dimension des pores de 0,45 |i). La solution aqueuse a été distillée à 50° C et sous 0,02 atm pendant 4 h, le résidu étant séché sous 0,001 atm et à 20° C pendant 24 h.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Tableau 12

Composé

Groupe acyle dans le

Rapport

Proportions

N°

N4-acylcytosine-

AS/HCO-60

d'AS et de

arabinoside dans le solide

HCO-60

hydrosoluble dans la

solution

aqueuse (%)

111

Valéryle

1

10

0,1 1

112

Lauroyle

1

10

0,1 1

113

Palmitoyle

1

10

0,1 1

114

Stéaroyle

1

10

0,1 1

115

Arachidoyle

1

10

0,1 1

116

Héneicosanoyle

1

10

0,1 1

117

Erucoyle

1

10

0,1 1

118

Béhénoyle

1

10

0,1 1

119

Lignocéroyle

1

10

0,1 1

120

Hexatriacontanoyle

1

10

0,1 1

121

2-Chlorostéaroyle

1

10

0,1 1

122

18-Hydroxystéaroyle

1

10

0,1 1

123

2-Mercaptostéaroyle

1

10

0,1 1

124

5-Méthylnonadécanoyle

1

10

0,1 1

125

Benzoyle

1

10

0,1 1

126

Phénylbutyryle

1

10

0,1 1

127

p-Nitrobenzoyle

1

10

0,1 1

* AS : N4-acylcy tosine-arabinoside.

Par mesure du poids du résidu séché, la solubilité de la composition dans la condition (IA) est obtenue. De façon similaire, les solubilités des compositions dans les conditions B et C (IB et IC) ont été mesurées. Les solubilités ont été exprimées par le poids en grammes de l'AS-22 dissous dans 100 ml d'eau. Lorsque l'AS-22 (1 g) a été complètement dissous, les compositions ci-dessus ont été encore additionnées à la solution obtenue afin de voir si l'AS-22 se dissout au-delà de 1 g dans les mêmes conditions. Ensuite, 1 g (calculé comme AS-22) de chacune des compositions à deux composants NM l'à 76' obtenus dans l'exemple 1 par traitement au dioxanne (comprenant chacun 1 g de AS-22 et chacun des additifs mentionnés dans le tableau 1 dans les quantités mentionnées dans ce tableau 1 ; les compositions 1' à 76' correspondent aux NK 1 à 76) a été ajouté à une solution aqueuse comprenant 100 ml d'eau et chacun des additifs auxiliaires mentionnés dans le tableau 2 dans les quantités indiquées dans ce -tableau 2. De la même manière que décrit ci-dessus, les solubilités dans les conditions A, B et C (IIA, IIB et IIC) ont été mesurées.

Finalement, 1 g (calculé comme AS-22) de chacune des compositions à deux constituants Nos l'à 76' a été ajouté à 100 ml d'eau et, de la même manière que précédemment, les solubilités dans les conditions A, B et C (IIIA, HIB et IIIC) ont été mesurées.

Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 13.

Tableau 13

Com

I

Com

II

III

posi

tion N°

A

B

C

tion N°

A

B

C

A

B

C

1

0,1

1'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

2

1

>1

2'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

3

0,1

3'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

4

1

>1

4'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

619 471

Tableau 13 (suite)

Com

I

Com

II

III

posi

tion N°

A

B

c tion N°

A

B

c

A

B

C

5

1

>1

5'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

6

0,1

6'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

7

1

>1

T

0,3

>1

0,01

0,3

>1

8

1

0,1

8'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

9

1

>1

9'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

10

0,1

10'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

11

1

>1

11'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

12

0,1

12'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

13

1

>1

13'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

14

0,2

14'

0,1

0,2

0,01

0,1

0,2

15

1

>1

15'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

16

1

>1

16'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

17

1

>1

17'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

18

0,1

18'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

19

1

>1

19'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

20

0,1

20'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

21

1

>1

21'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

22

0,1

22'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

23

1

>1

23'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

24

0,1

24'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

25

1

>1

25'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

26

0,1

26'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

27

1

>1

27'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

28

0,1

28'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

29

1

>1

29'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

30

0,1

30'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

31

1

>1

31'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

32

0,1

32'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

33

1

>1

33'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

34

0,1

24'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

35

1

>1

35'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

36

0,1

36'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

37

1

>1

37'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

38

0,1

38'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

39

1

>1

39'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

40

0,1

40'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

41

1

>1

41'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

42

0,1

42'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

43

1

>1

43'

0,3

>1

1 0,1

0,01

0,3

>1

44

0,1

44'

0,05

0,1

, 0,1

0,01

0,05

0,1

45

1

>1

45'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

46

0,1

46'

0,05

0,1

0,01

0,05

0,1

47

1

>1

47'

0,3

>1

0,01

0,3

>1

48

1

>1

48'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

49

1

>1

49'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

50

1

>1

50'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

51

1

>1

51'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

52

1

>1

52'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

53

1

>1

53'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

54

1

>1

54'

0,4

>1

0,01

0,4

>1

55

1

>1

55'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

56

1

>1

56'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

57

1

>1

57'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

58

1

>1

58'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

59

1

>1

59'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

60

1

>1

60'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

61

1

>1

61'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

62

1

>1

62'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

63

1

>1

63'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

64

1

>1

64'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

65

1

>1

65'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

11

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

619 471

12

Tableau 13 (suite)

Com

I

Com

II

III

posi

tion N° A

B

C

tion N°

A

B

C

A

B

C

66 1

>1

66'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

67 1

>1

67'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

68 1

>1

68'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

69 1

>1

69'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

70 1

>1

70'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

71 1

>1

71'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

72 1

>1

72'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

73 1

>1

73'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

74 1

>1

74'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

75 1

>1

75'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

76 1

>1

76'

0,5

>1

0,01

0,5

>1

Il ressort du tableau 13 que, dans la condition C — dans laquelle, après agitation pendant 10 mn à 90° C, le mélange est rapidement refroidi dans un bain de glace puis ramené à la température ambiante — les compositions contenant des additifs auxiliaires et celles n'en contenant pas avaient les mêmes solubilités, mais que, dans la condition B — dans laquelle, après agitation pendant 10 mn à 90° C, le mélange agité a été laissé spontanément refroidir à la température ambiante — les compositions contenant les additifs auxiliaires présentaient une solubilité supérieure à celles ne contenant pas de tels additifs auxiliaires.

D'autre part, dans la condition A, — dans laquelle une agitation a été effectuée pendant 10 mn à température ambiante — les compositions à trois composants qui contenaient donc les additifs auxiliaires depuis le départ, présentent une solubilité supérieure à celle des compositions à deux constituants auxquelles les additifs auxiliaires ont été ajoutés subséquemment sous la forme d'une solution aqueuse.

Exemple 16:

Des solutions aqueuses 1% de N4-myristoylcytosine-arabino-

side et de N4-béhénoylcytosine-arabinoside ont été dissoutes dans un aliment ou fourrage traditionnel pour animaux à des concentration de 5,10, 20, 50 et 100 ppm, et l'effet sur la croissance de poussins nourris avec cet aliment a été observée. Les résultats 5 obtenus sont donnés dans le tableau 14. Le poids mentionné dans ce tableau représente un poids moyen de corps sur 20 poussins après 9 semaines.

io Tableau 14

Quantité N4-Myristoyl-ara-C N4-Béhénoyl-ara-C additionnée

(ppm)

Compo

sition sition sition sition

N° 1

N° 2

N° 3

N° 4

(g/poussin)

5

1540

1380

1640

1380

10

1720

1400

1750

1400

20

1610

1390

1650

1390

50

1680

1380

1690

1380

100

1645

1380

1650

1380

0(contrôle)

1380

25

Composition N° 1 : solution aqueuse contenant 1% de N4-myris-toylcytosine-arabinoside, 5% de HCO-60 et 0,9% de NaCl. 30 Composition N° 2: suspension de 1% de N4-myristoylcytosine-arabinoside et de 1% de méthylcellulose.

Composition N° 3: solution aqueuse contenant 1% de N4-béhé-noylcytosine-arabinoside, 5% de HCO-60 et 0,9% de NaCl. Composition N° 4: suspension de 1% de N4-béhénoylcytosine-3J arabinoside et de 1% de méthylcellulose.

Il ressort clairement du tableau 14 que les compositions solubilisées dans l'eau présentent un effet favorisant la croissance supérieur à celui obtenu avec des compositions identiques non solubilisées dans l'eau.

R

Claims

619 471

1. Composition hydrosoluble, à l'exception des médicaments, contenant un N4-acylcytosine-arabinoside, caractérisée par le fait qu'elle comporte, en plus dudit arabinoside, au moins un additif choisi parmi les esters d'acides gras, hydroxy ou non, liés à du polyoxyéthylène et les acides biliaires.

2. Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que l'additif est choisi parmi les glycérine-esters d'acides gras hydroxy liés au polyoxyéthylène, les composés formés par de la lanoline liée au polyoxyéthylène et les acides biliaires.

2

REVENDICATIONS

3. Composition selon la revendication 2, caractérisée par le fait que l'additif est un composé choisi parmi le groupe comprenant les acides biliaires et les glycérine-esters d'acides gras hydroxy contenant de 10 à 20 atomes de carbone liés à un polyoxyéthylène ayant un degré moyen de polymérisation de 10 à 200 mol.

4. Composition selon la revendication 3, caractérisée par le fait que l'acide biliaire est le déoxycholate de sodium ou le déhy-drocholate de sodium.

5. Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait qu'elle comporte, en plus, au moins un additif auxiliaire choisi parmi le groupe comprenant les saccharides, les polyols aliphatiques, les chlorures inorganiques, les bromures inorganiques, les sulfates inorganiques et les acides carboxyliques aromatiques ou les sels de ceux-ci.

6. Composition selon la revendication 5, caractérisée par le fait que l'additif auxiliaire est au moins un composé choisi parmi le groupe comprenant le glucose, le NaCl, le CaCh, le MgCh, le MgSC>4 et le salicylate de sodium.

7. Composition selon la revendication 5, caractérisée par le fait que l'additif auxiliaire est au moins un saccharide choisi parmi les monosaccharides et les disaccharides.

8. Composition selon la revendication 5, caractérisée par le fait que l'additif auxiliaire est au moins un halogénure inorganique choisi parmi le groupe comprenant les chlorures de métaux alcalins, les chlorures de métaux alcalino-terreux, les bromures de métaux alcalins et les bromures de métaux alcalino-terreux.

9. Composition selon la revendication 5, caractérisée par le fait que l'additif auxiliaire est au moins un acide carboxylique aromatique ou un sel de celui-ci, choisi parmi le groupe comprenant l'acide benzoïque, les benzoates de métaux alcalins, le ben-zoate d'ammonium, les benzoates de métaux alcalino-terreux, l'acide salicylique, les salicylates de métaux alcalins et les salicy-lates de métaux alcalino-terreux.

10. Procédé pour la préparation de la composition selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on dissout le N4-acylcy-tosine-arabinoside et l'additif dans un solvant, puis que le solvant est évaporé.

11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé par le fait que le N4-acylcytosine-arabinoside et l'additif sont dissous dans un solvant, que le solvant est évaporé, puis que l'additif auxiliaire et de l'eau, ou une solution aqueuse de l'additif auxiliaire, sont ajoutés au résidu.

12. Procédé selon la revendication 10 ou la revendication 11, caractérisé par le fait que le solvant est choisi parmi le groupe comprenant les cétones, les esters, les éthers aliphatiques, les éthers cycliques, les amides, les sulfoxydes, les alcools, les bases et les acides.

13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait que le solvant est choisi parmi le groupe comprenant l'acétone, la méthyléthylcétone, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle, le diéthy-léther, le méthyléthyléther, le tétrahydrofuranne, le tétrahydropy-ranne, le dioxanne, le diméthylacétamide, le diméthylformamide, le diéthylacétamide, le diméthylsulfoxyde, le méthanol, l'éthanol, le n-propanol, l'isopropanol, la pyridine, la triéthanolamine, l'acide formique et l'acide acétique.

14. Procédé selon la revendication 10 ou la revendication 11, caractérisé par le fait que l'on ajoute ledit additif, respectivement ledit additif auxiliaire, en une quantité de 0,1 à 20 parties en poids par partie en poids du N4-acylcytosine-arabinoside. 5

15. Procédé selon la revendication 10, caractérisé par le fait qu'on dissout le N4-acylcytosine-arabinoside et l'additif dans un solvant sous ime pression de 1 à 2 atm et à une température comprise entre — 20° C et le point d'ébullition du solvant utilisé, pendant 1 mn à 20 h, puis qu'on évapore le solvant sous une io pression de 0,001 à 1 atm et à une température comprise entre 0°C et le point d'ébullition du solvant, pendant 5 mn à 20 h, et, si désiré, que le mélange est ensuite séché sous une pression de 0,001 à 0,5 atm, à une température de 10 à 30° C et pendant 4 à 100 h, et par le fait qu'on ajoute ensuite de l'eau, qu'on chauffe le mélange 15 sous une pression de 1 à 1,5 atm, à une température de 60 à 120° C et pendant 1 mn à 4 h, puis qu'on laisse refroidir spontanément la solution obtenue ou qu'on refroidit rapidement celle-ci jusqu'à —40 à +20°C au moyen d'un agent réfrigérant.

16. Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait 20 qu'on ajoute de l'eau et un additif auxiliaire ou une solution aqueuse d'un additif auxiliaire au solide hydrosoluble obtenu, et qu'on chauffe le mélange sous une pression de 1 à 1,5 atm, à une température de 60 à 120° C et pendant 1 mn à 4 h.

17. Utilisation de la composition hydrosoluble selon la reven-2s dication 1 comme additif alimentaire pour favoriser la croissance des animaux.