DE2658406C2

DE2658406C2 - Verfahren zur Herstellung wasserlöslicher Arzneimittelzubereitungen, enthaltend N↑4↑-Acylcytosin-arabinosid

Info

Publication number: DE2658406C2
Application number: DE19762658406
Authority: DE
Inventors: Torao Fuji Ishida
Original assignee: Asahi Kasei Kogyo KK
Current assignee: Asahi Kasei Corp
Priority date: 1975-12-31
Filing date: 1976-12-23
Publication date: 1984-04-26
Also published as: SE445011B; CA1063937A; SE7614755L; DE2658406A1; CH619471A5; HU180646B

Description

Cytosinarabinosid ist als Arzneimittel im Handel, jedoch ist seine pharmazeutische Wirkung nicht lang anhaltend. Daher wurden Versuche gemacht, seine N⁴-Stcllung zu acylieren. Versuche an Mäusen, denen N⁴-Acylcytosinarabinosidc intraperitoneal injiziert wurden, haben ergeben, daß die Dauer der pharmakologischen Wirkung von NH-Aeylcytosinarabinosiden gegen intrapcritoneale Erkrankungen verbessert wird und die Acylcytosinarabinosidc gegen die Enzyme, die das Cytosinarabinosid deaktivieren, beständig bleiben. Diese Verbesserung ist unterschiedlich in Abhängigkeit von der Zahl der C-Atome im Acylrest der N⁴-Acylcytosinarabinosidc. Es ist bekannt, daß die Verbesserung im allgemeinen höher ist. wenn die Zahl der C-Aiomc im Acylrest 5 oder mehr beträgt, und besonders hervorragend ist, wenn der Acylrest 14 bis 24 C-Atome enthält. Wenn jedoch N⁴-Acylcytosinarabinosiden mit 5 oder mehr C-Atomen im Acylrest als or.il zu verabreichende Mittel, als lnjeklionslösungen beispielsweise für intravenöse Injektionen und als äußerlich anzuwendende Mittel. /. B. Suppositorium. \erwendet werden, sind ihre Wirkungen schwächer als die Wirkung, die bei intraperitoncaler Injektion beobachtet wird, bedingt wahrscheinlich dadurch, daß der Grad der Ausnutzung durch den lebenden Körper gering ist.

Aus der DE-OS 24 23 811 ist die Herstellung einer gut löslichen Zubereitung von Cyclocytidin (2,2'-Anhydrol-ß-D-arabinofuranosylcytosir.) durch Gefriertrocknen bekannt. Hierbei handelt es sich um eine wasserlösliche Substanz, welche bei längerer Lösung in Wasser eine Ringöffnung erleidet, daher in wäßriger Lösung instabil ist. Zusätze zum gefriergetrockneten Produkt dienen der schnelleren und vollständigen Wiederauflösung. Im Gegensatz hierzu sind N^Acylcytosin-arabinoside

ίο nicht wasserlöslich. Wäßrige Lösungen können daher auch nicht durch bloßes Vermischen mit den genannten Zusätzen hergestellt werden.

Aus W. A. Ritschel, Angewandte Biopharmazie, Stuttgart 1973, S. 318 und 323, ist eine Reihe von Sorptionsvermittlern bekannt, von denen viele (urdie vorliegende Erfindung absolut ungeeignet sind. Es handelt sich auch nicht um das Problem der Sorptionsvermittlung, sondern um die Möglichkeit, wasserunlösliche Substanzen wasserlöslich zu machen, sowie die so wasserlöslich gemachten Substanzen pharmakologisch zur Wirkung zu bringen.

Aus dem gleichen Lehrbuch, S. 315 bis 326, geht weiterhin hervor, daß oberflächenaktive Substanzen für Arzneimittel verwendet werden können, die durch die Haut oder Schleimhaut resorbiert werden sollen. Hierdurch werden unlösliche und schwerlösliche Verbindungen kolloidal dispergicrt (»solubilisiert«). Hieraus geht weiterhin her\ or, daß bei weitem nicht alle Tenside in gleicher Weise als Sorptionsvermittlcr für einen

jo bestimmten Arzricistoffin Frage kommen. Es sind auch zahlreiche Fälle bekannt, bei denen die Absorption durch ein Tcnsid sogar vermindert wird, insbesondere wenn der Arzncistoffmit dem Tensid reagiert und Komplexe bildet. Aus diesem Grunde ist stets eine eingehendc Inkompatibilitätsstudic erforderlich; vcrgl. S. 317, rechts oben. Selbst ein und dasselbe Tcnsid kann mit ein und demselben Wirkstoff unterhalb einer begrenzenden Assoziierungskonzentration keinen oder kaum einen Einfluß auf die Wirksamkeit des Arzneistoffes ausüben, oberhalb eines bestimmten Konzentrationsberciches jedoch sogar die Wirksamkeit des ArzneistolTcs vermindern; vcrgl. S. 318, links oben.

Aus J. Anschel, Lösungsmittel und Lösungsvermittler in Injektionen, Pharm. Ind. 27, 1965, S. 781 bis 787, kann entnommen werden, daß oberflächenwirksame Substanzen auch in Lösungen für Injektionen verwendet werden können. Gleichzeitig wird aber davor gewarnt, daß derartige Präparate häufig pharmakologisch nicht unbedenklich sind und außerdem im Grunde nicht nur das Tensid, sondern auch die Kombination mit dem Wirkstoff getestet werden muß.

Aus Cancer Research 36, 1976, S. 2726, ist bekannt, daß Twccn 80 für N'-Acylcytosin-arabinosid prinzipiell geeignet ist. Der Mitautor. Tora ο Ishida, ist Miterfinder der vorliegenden Erfindung.

Die Erfindung hat sich die Aufgabe gestellt, ein Verfahren zu entwickeln, durch welches die Löslichkeit und Wirksamkeit von N⁴-Acylcytosin-arabinosid erheblich verbessert werden kann. Diese Aufgabe wird gelöst durch den obenstchcnden Patentanspruch 1. Bevorzugte Auslührungsformen sind Gegenstand der Ansprüche 2 bis .V

Mit steigender Zahl der C-Atome i'n Acylrest werden die N'-Acylo tosinarabinosidc immer schwerer in Was-

b5 scr löslich. Verbindungen mit 5 oder mehr C-Atomen im Acylrcst sind in Wasser sehr schwer löslieh, und diese Schwerlöslichkcit wird besonders stark bei Verbindungen mit 14 oder mehr C-Atomen.

Wenn Arzneimittel, die unter normalen Bedingungen nicht sehr löslich sind, zusammen mit oberflächenaktiven Mitteln verwendet werden, werden im allgemeinen ihre Auflösungsgeschwindigkeit, ihre Dispergierbarkeit im Blut und ihr Kontaktwinkel mit der Haut oder Schleimhaut oder mit der Wand der Speiseröhre besser bzw. höher, jedoch wird die Geschwindigkeit ihrer Resorption aus der Haut, Schleimhaut oder Wand der Speiseröhre geringer, und ihre Konzentration im Blut wird durch den Stoffwechsel oder die Ausscheidung durch die Nieren usw. verringert. Es wurde daher angenommen, daß ihre Wirkung gegen peritoneale Läsionen bei oraler Verabreichung oder intravenöser Injektion schlechter ist als bei intraperitonealer Injektion, die unmittelbar auf die Läsionen einwirkt.

Sofern der Zusatzstoff eine Polyoxyäthylengru):pe enthält [im Falle (a), (b) und (c)], sind vorzugsweise durchschnittlich 10 bis 200 Mol, insbesondere 20 bis \00 Mol Oxyäthylen in der PolyoxyälhyJenkomponente polymerisiert, wenn der Zusatzstoffeinen Fettsäurerest [im Falle von (b)] oder einen Hydroxyfettsäurerest [im Falle von (a)] enthält, werden Fettsäurereste oder Hydroxyfcttsäurereste mit 10 bis 20 C-Atomen (z. B. Caprinsäure, Hydroxycaprinsäure, Stearinsäure, Hydroxystcarinsäurc, Eicosansäure, Hydroxyeicosansäurc usw.) bevorzugt.

Von den erfindungsgemäß verwendeten Zusatzstoffen werden Gallensäuren (d) und Ester von Glycerin mit Ilydroxyfcttsäuren mit 10 bis 20 C-Atomen (,·. B. !lydroxycaprinsäure, Hydroxylaurinsiiure, Hydroxymyristinsüurc, Hydroxy palm itinsäure, hydroxymargarinsäurc, Hydroxystcarinsäure, Ilydroxyeicocansäure und Ricinolsäure), an die Polyoxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 10 bis 200 Mol, vorzugsweise 40 bis 100 MoI gebunden ist, besonders bevorzugt. Von den letzteren werden wiederum hydriertes Rizinusöl, an das Polyoxyä'hylcn mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 40 bis 100 Mol angelagert ist, und Ester von Glycerin mit Hydroxystcarinsäurc, an die Polyoxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 40 bis 100 Mol gebunden ist, besonders bevorzugt.

Als Gallensäuren eignen sich Gallensäuren und ihre Salze, z. B. Desoxycholsäure, Dchydrocholsäure, Cholsiiure, Lithocholsäure, Chenodcsoxycholsäurc, Lagodesoxycholsäure, Hyocholsäurc und Phocaecholsäurc sowie Salze dieser Gallensäuren. Hiervon werden Desoxycholsäure und Dchydrocholsiiure sowie Salze dieser Säuren besonders bevorzugt. Als Salze der Gallensäuren werden Alkalisalze und Ammoniumsalze bevorzugt. Die Natriumsalze, Kaliumsalze, Ammoniumsalze, Triinethylammonimnsalze und Procainsalze werden besonders bevorzugt. Ganz besonders bevorzugt werden die Natriumsalze. Von den bevorzugten Salzen der Gallensäuren werden wiederum Natriumdesoxycholat und Natriumdchydrocholat besonders bevorzugt. Bevorzugt als Zusatzstoffe werden demgemäß Natriumdesoxycholat, Natriumdehydrocholat, hydriertes Rizinusöl, an das Oxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 40 bis 100 Mo! gebunden ist, und Ester von Glycerin mit Hydroxystearinsiiure. an die Oxyäthylen mit einem minieren Polymerisationsgrad von 40 bis 100 Mol gebunden ist. Besonders bevorzugt wird hydriertes Rizinusöl, an das Oxyälhylen gebunden ist.

Als llill'szusal/sloff werden Monosaccharide. z.B. Kihose, Arabinose, Glucose. Fructose. Sorbit, Mannit, \\lose und Galactose, Disaccharide, z. B. Lactose und Saccharose, und. nur für die orale Verabreichung, Polysaccharide wie Cellulose bevorzugt. Besonders bevorzugt wird Glucose.

Als Beispiele aliphatischer Polyole sind Glycerin,

Propylenglykol und Polyäthylenglykol zu nennen. GIy-

) cerin und Propylenglykol werden besonders bevorzugt.

Von den anorganischen Chloriden und Bromiden

werden die Chloride und Bromide von Alkalimetallen und Erdalkalimetallen bevorzugt. Besonders bevorzugt von den Chloriden werden NaCl, CaC^ und MgGi, an

in das sich KCl anschließt. Andererseits wird als anorganisches Sulfat MgSO₄ besonders bevorzugt.

Als Beispiele geeigneter aromatischer Carbonsäuren sind Benzoesäure und Salicylsäure zu nennen, die vorzugsweise in Form von Alkalisalzen, Erdalkalisalzen

is und Ammoniumsalzen verwendet werden. Besonders bevorzugt werden die N3triumsalze, von denen wiederum Natriumsalicylat am vorteilhaftesten ist.

Der Zusatzstoff bzw. Hilfszusatzstoff wird in einer Menge von 0,1 bis 20 Gew.-Teilen pro Gew.-Teil

2» N^Acylcytosinarabinosid verwendet. Wenn die Menge unter 0,1 Gew.-Teil liegt, wird die gewünschte Wirkung nicht erzielt. Andererseits wird mit Mengen von mehr als 20 Gew.-Teilen keine besondere Wirkung erzielt. Diese hohen Mengen sind unwirtschaftlich, weil die

.r> Konzentration des N^Acylcytosinarabinosids geringer ist.

Die Arzneimittelzuhereitungen, die aus dem N⁴-Acylcytosinarabinosid, dem Zusatzstoff und dem Hilfszusatzstoff bestehen, können durch gleichmäßiges

jo Mischen dieser drei Bestandteile hergestellt werden. Vorzugsweise erfolgt die Herstellung durch Zugabe einer wäßrigen Lösung des Hilfszusatzstoffs zu einem Stoffgemisch, das aus dem N⁴-Acylcytosinarabinosid und dem Zusalzstoffbesteht. Wenn das Wasser nach der

V) Bildung der Losung abgedampft wird, wird das Stollgemisch fest und läßt sich leicht transportieren. Besonders bevorzugt zur Überführung des Stollgemisches in die feste Form wird jedoch die Gefriertrocknung. Ein solches Testes Stoffgcmisch läßt sich einfach in eine beständige Flüssigkeit überführen, indem es lediglich vordem Gebrauch mit Wassergemischt wird, wobei die Ziele und Vorteile der Erfindung erreicht werden.

Die zur Auflösung des N⁴-Acylcytosinarabinosids und des Zusatzstoffs verwendete Menge des Lösungsmittels ist nicht besonders wichtig, liegt jedoch im allgemeinen im Bereich von 10 bis 1000 Gew.-Teilen pro Gew.-Teil N⁴-Acylcytosinarabinosid. Die Wässermenge, die zusammen mit dem Hilfszusatzstoff verwendet wird, ist ebenfalls nicht begrenzt. Im allgemeinen

so beträgt die Wassermenge vorzugsweise 50 bis 1000 Gew.-Teile pro Gew.-Teil N⁴-Acylcytosinarabinosid.

Die gleichmäßige Vermischung des N⁴-Acylcytosinarabinosids mit dem Zusatzstoff und vorzugsweise weiter mit dem Hilfszusatzstoff kann unter den nachstehend

« genannten Druck-, Temperatur- und Zeitbedingungen erfolgen. Das N⁴-Acylcylosinarabinosid und der Zusatzstoffwerden in einem Lösungsmittel für diese Materialien unter einem Druck von I bis 2 Atm. und bei einer Temperatur von - 20° C bis zum Siedepunkt des

W) Lösungsmittels, vorzugsweise auf 40 bis 100⁰C (bis /um Siedepunkt, wenn dieser unter 1OfI⁰C liegt) während einer Zeil von I Minute bis 2(1 Stunden, vorzugsweise 5 Minuten bis 2 Stunden gelöst. Das Lösungsmittel wird dann unter einem Druck von 0.001 bis I Alm.

(ή bei einer Temperatur von 0^& bis /um Siedepunkt dos Lösungsmittels, vor/ugsweise bei 40 bis X()° C Ibis zum Siedepunkt, wenn dieser unter SO⁰C liegt) wahrend einer Zeit von ί Minuten bis 20 Stunden, vorzugsweise

10 Minuten bis 4 Stunden, abgedampft. Falls erforderlich, wird das Gemisch dann unter einem Druck von 0,0Cl bis 0,5 Atm. und bei einer Temperatur von 10 bis 30° C 4 bis 100 Stunden getrocknet.

Zur Herstellung einer wäßrigen Lösung des N⁴-Acylcytosinarabinosids, die ein organisches Lösungsmittel enthält, wird zunächst eine wäßrige Lösung des N"-Acylcytosinarabinosids, die kein organisches Lösungsmittel enthält, hergestellt, worauf das organische Lösungsmittel zur wäßrigen Lösung gegeben wird. Man kann auch so arbeiten, daß man eine wäßrige Lösung, die das organische Lösungsmittel enthält, zum N^Acylcytosinarsbinosid gibt und das Gemisch erhit2:t und die erhaltene Lösung anschließend schnell kühlt. Bei einer anderen Verfahrensweise, die zuweilen schwierig durchzuführen ist, wenn die Menge des zuzusetzenden organischen Lösungsmittels gering ist, wird das organische Lösungsmittel dem N⁴-Acylcytosinarabinosid und dem Zusatzstoff zugesetzt, aas Gemisch erhitzt und Wasser zu einer wäßrigen Lösung des HilfszusatzstofTs entweder direkt oder nach Abkühlung des Gemisches auf Raumtemperatur gegeben, wobei ein·; das organische Lösungsmittel enthaltende wäßrige Lösung des NH-Acylcytosinarabinosids gebildet wird. Eine weitere Möglichkeit besteht darin, eine wäßrige Lösung des Zusatzstoffs oder sowohl des ZusatzstolTs als auch des Hilfszusatzstoffs zu einem organischen Lösungsmittel, das das NH-Acylcytosinarabinosid enthält, zu geben. Ferner ist es möglich, eine wäßrige Lösung, die den Zusatzstoff oder sowohl den Zusrtzstoff als auch den HilfszusatzstolTenthält, und ein organisches Lösungsmittel dem NH-Acylcytosinarabinosid zuzusetzen.

Als Lösungsmittel, die das N-'-Acylcytosinarabinosid und den Zusatzstoff zu lösen vermögen, eignen sich beispielsweise Ketone, ζ. B. Aceton und Methyläthylketon, Ester, ζ. B. Äthylacetat und Butylacetat, aliphatische Äther, z. B. Diäthyläther und Methyläthyläther, cyclische Äther, z. B. Tetrahydrofuran, Tetrahydropyran und Dioxan, Amide, ζ. B. Dimethylacetamid. Dimethylformamid und Diäthylacetamid, Sulfoxyde, z. B. Dimethylsulfoxyd, Alkohole, ,-. B. Methanol, Äthanol, n-Propanol und Isopropanol, Basen, z. B. Pyridin und Triäthanolamin, und Säuren, z. B. Ameisensäure und Essigsäure. Hiervon werden die Ketone, Ester, cyclischen Äther, aliphatischen Äther, Amide und Sulfoxyde bevorzugt, weil sie das N'-Acylcytosinarabinosid nicht zersetzen. Die Ketone, Ester, aliphatischen Äther, cyclischen Monoäther und Alkohole werden bevorzugt, weil sie leicht verdampfen. Die Ketone. Amide und Äthanol werden auf Grund ihrer geringen Toxizität bevorzugt. Besonders bevorzugt werden die Ketone auf Grund ihrer sehr hohen Beständigkeit und Verdampfbarkeit sowie ihrer niedrigen Toxizität. Da die cyclischen Monoäther in bezug auf Beständigkeit, Verdampfbarkeit und Löslichkeit überlegen · sind, werden sie als Ketone bevorzugt, wenn sie nach dem Gebrauch vollständig abgedampft werden. Da Äthanol leicht verdampfbar und löslich ist und geringe Toxizität aufweist, wird es ebenso wie die Ketone bevorzugt, wenn die Zeit seiner Berührung mit dem N⁴-Acylcytosinarabinosid verkür/t wird. Die vollständige Verdampfung der Amide und Sulfoxyde ist zeitraubend, aber im übrigen werden sie an nächster Stelle als Lösungsmittel auf Grund ihrerguten Beständigkeit und Löslichkeit sowie geringen Toxi/ität bevorzugt.

Die erfindungsgemäß hergestellten Stoffgemisehe können /u Medikamenten für die innere Anwendung (oral zu verabreichende Arzneimittel), z. B. Tabletten, Trouches, bukkalen Mitteln, Präparaten zum Kauen, Kapseln, Kachets, Pulvern, Granulat, Pillen, Extrakten, flüssigen Extrakten, Lösungen, Elixieren, in Alkohol eingearbeiteten Präparaten, Sirupen, Limonaden, Präparaten mit aromatischem Wasser als Träger, Emulsionen oder Suspensionen, formuliert werden, indem nach Bedarf Träger, Bindemittel, Spreizmittel, Überzugsmittel, Lösungsmittel, Korrigentien, pH-Einstellmittel, ίο Verdickungsmittel, Stabilisatoren, Netzmittel, Antischaummittel, Gleitmittel, Farbstoffe, Farbinhibitoren, Mittel, die die Medikamente feuchtigkeitsfest machen, Geschmacksstoffe usw. eingearbeitet werden. Die Stoffgemische können ferner zu Präparaten für die äußere Anwendung, z. B. Salben, Cremes, Pasten, Linimenten, Pflastern, Augensaiben, Suppositorien (für die rektale und urethrale Anwendung), Lotionen, Gelees, Flüssigkeiten (Augentropfen, Nasentropfen, Spülmitlein und Bädern), Stäubemitteln (Spray und Puder), Tabletten, Aerosolen u. dgl. durch Zusatz von Grundlagen, Verdikkungsmitteln, Schaumverhütungsmitteln, Stabilisatoren, Geschmacksstofien, Farbstoffen, Lösungsmitteln, Mitteln, die Isotonie verleihen. Puffern oder schmerzlindernden oder schmerzstillenden Mitteln formuliert werden. Falls erforderlich, können die StofTgemische zu Injektionslösungen auf Basis von Wasser oder Öl unter Zusatz von schmerzlindernden oder schmerzstillenden Mitteln, Mitteln, die Isotonie verleihen. Puffern, Streckmitteln oder Lösungsmitteln formuliert werden. Ferner können sie durch Zusatz von Lösungsmitteln zu Inhalationsmitteln in Aerosolform verarbeitet werden.

N-'-Acylcytosinarabinoside mit 14 bis 24 C-Atomen im Acylrest an der N⁴-Stellung werden besonders bevorzugt, weil sie in hohem Maße pharmakologisch wirksam sind. Günstige Wirkungen weisen N⁴-Acylcytosinarabinoside auf, in denen der Acylrest ein gesättigter oder ungesättigter, substituierter oder unsubstituierter Acylrest aus der Gruppe Myristoyl, Palmitoyl, Margaroyl, Stearoyl, Nonadecanoyl, Arachidoyl, Heneicosanoyl, Behenoyl, Tricosanoyl, Lignoceroyl, Oleoyl, 5-Methylnonadecanoyl, 2-Chlorstearoyl, 18-Hydroxysteroyl und 2-Mcrcaptostearoyl ist. Hiervon zeigen N⁴-Stearoylcytosinarabinosid und N⁴-Behenoylcytosinarabinosid besonders ve ;eilhafte Wirkungen. Die N⁴-Acylcytosinarabinoside mit 14 bis 24 C-Atomen im Acylrest sind in Wasser nahezu unlöslich (löslich in einer Konzentration von weniger als 0,00001 Gew.-%). werden jedoch in einer Menge von 0,02 bis 4 Gew.-% wasserlöslich wenn ihnen 0,1 bis 20 Gew.-%des speziellen ZusatzstolTs und vorzugsweise außerdem der Hilfszusatzstoff in der gleichen Menge zugesetzt werden. Da die erwünschte Konzentration des Arabinosids in Injektionslösungen Tür klinische Zwecke 0,01 bis 1 Gew.-% beträgt (Verabreichung vorzugsweise in einer Dosis von 0,1 bis 1000 mg. vorzugsweise 1 bis 100 mg täglich für den Erwachsenen), haben erfindungsgemäß hergestellte wäßrige Lösungen der Arabinoside eine genügend hohe Konzentration, um als Injektionslösungen verwendet zu werden.

Sämtliche Zusatzstoffe, die erfindungsgemäß für die Bildung der Stoffgemische auf Basis der N⁴-Acylcytosinarabinoside verwendet werden, sind bekannt und im Handel erhaltlich.

Die N-'-Acylcytosinarabinoside werden bcispiclsweise durch Umsetzung von Cytosinarabinosid mit Säureanhydriden in Gegenwart von Wasser hergestellt. Beispielsweise kann NH-Behenoylcylosinarabinosid wie folgt hergestellt werden:

Nr. Zusat/slofi'

1,23 mMol Cytosinarubinosid werden in 2 ml Wasser Tabelle gelöst. Zur Lösung werden 30 ml Dioxan und 2,47mMol Behcnsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird zur Auflösung der Füllung auf 80° C erhitzt. Nach 5stündigcm Rühren bei 80° C wird das Gemisch der Abkühlung überlassen und die Fällung abfiltriert. Die Fällung wird mit Wasser gut gewaschen und getrocknet. Zur getrockneten Fällung wird n-Hcxan gegeben, worauf das Gemisch am Rückflußkühler erhitzt wird. Das Produkt wird gekühlt und abfiltriert. Es wird dann mit Benzol und anschließend mit Toluol gewaschen. Durch Umkristallisation aus Äthylacetat wird N⁴-Behenoylcytosinarabinosid (AS-22) in einer Ausbeute von 82,5% erhalten.

Andere N⁴-Acylcytosinarabinoside werden unter Verwendung der den Acylresten der gewünschten Produkte entsprechenden Säureanhydride an Stelle von Behensäureanhydrid hergestellt.

Die pharmakologische Wirkung der Verbindungen gemäß der Erfindung wird unter Verwendung von Mäusen ermittelt, denen Leukämiezellen L-1210 injiziert werden. Die L-1210-Leukämie der Maus dient als Standard zur Beurteilung der Antikrebswirkung beim Cancer Institute des National Institute of Health, USA, und beim Krebs-Chemotherapiezentrum der japanischen Stiftung für Krebsforschung, weil von den experimentellen Krebsarten die L-1210-Leukämie bei Mäusen am besten die pharmakologischen Wirkungen des Arzneimittels gegen Krebs beim Menschen voraussagt.

Im einzelnen wird der Test wie folgt durchgeführt: Ein N^Acylcytosinarabinosid wird Gruppen von je 10 Mäusen der CDF_rStamms intraperitoneal mit 10⁶ (pro Maus) L-1210-Leukämiezellen injiziert. Die mittlere Überlebenszeit (T) der Mäuse in den Versuchsgruppen und die mittlere Überlebenszeit (C) der Mäuse in den Kontrollgruppen werden bestimmt. Die pharmakologische Wirkung der N⁴-Acylcytosine wird durch den Prozentsatz von T, bezogen auf C (T/C %), ausgedrückt.

Die aktute Toxizität der N⁴-Acylcytosinarabinoside wird durch die Dosis (pro kg Körpergewicht der Maus) der N^Acylcytosinarabinoside ausgedrückt, die den Tod von fünf Mäusen aus einer Gruppe von 10 männlichen Mäusen des Stamms CDF, verursacht. Diese Toxizität wird als LD₅₀ in mg/kg angegeben.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele ausführlich erläutert.

Gewicht (g)

10

11

12

13

Beispiel 1

I g N⁴-Behenoyicyiosinarabinosiu und die in Tabelle 1 genannten Zusatzstoffe in den ebenfalls genannten Mengen wurden zu 100 g Dioxan gegeben. Das Gemisch wurde bei 1 Atm. 10 Minuten auf 8O⁰C erhitzt, worauf das Dioxan bei 0,1 Atm. 4 Stunden bei 60° C abgedampft wurde.

Der Rückstand und jeweils einer der in Tabelle 2 genannten Hilfszusatzstoffe (die Nummern entsprechen den Nummern in Tabelle 1) wurden in den genannten Mengen jeweils zu 200 g Wasser gegeben. Das Gemisch wurde bei 1 Atm. 20 Minuten unter Rühren auf 95° C erhitzt, in Eiswasser gekühlt und dann gefriergetrocknet.

Die in Tabelle 3 genannten Präparate (deren Nummern ebenfalls den Nummern in den Tabellen 1 und 2 entsprechen) wurden in Form von weißen amorphen Pulvern (die Präparate Nr. 2 und 6 waren weiße Halbflüssigkeiten) in den angegebenen Ausbeuten erhalten.

50

55

60

65 HCO-10 [Polyoxyäthylen(lO)-

hydriertes Rizinusöl]

HCO-10

HCO-60 |Polyoxyäthylen(60)-

hydriertes Rizinusöl]

HCO-60

HCO-200 [Polyoxyäthylen(200)-

hydriertes Rizinusöl

HCO-200

Polyoxyäthylen(60) · glycerin-

trihydroxycaprat

Polyoxyäthylen(60) · glycerin-

trihydroxycaprat

Polyoxyäthylen(60) · glycerin-

dihydroxyarachidat

Polyoxyäthylen(60) ■ glycerin-

dihydroxyarachidat

Polyoxyäthylen(60) · glycerin-

trihydroxystearat/Glycerin-

tristearat-Gemisch (3:1)

Polyoxyäthylen(60) · glycerin-

trihydroxystearat/Glycerin-

tristearat-Gemisch (3:1)

HCO-60/Natriumdesoxycholat (1 :

HCO-öO/Natriumdesoxycholat (70

HCO-60/Natriumdesoxycholat (35

HCO-60/Kaliumdesoxycholat (25

Desoxycholsäure

Natriumdesoxycholat

Kaliumdesoxycholat

Dehydrocholsäure

Natriumcholat

Natriumlithocholat

Chenodesoxycholsäure

Ursodesoxycholsäure

UrsüdcSöxychölsäure

Natriumhyodesoxycholat

Natriumlagodesoxycholat

Natriumhyocholat

Natriumphocaecholat

Ammoniumdesoxycholat

Trimethylammoniumdesoxycholat

Procaindesoxycholat

HCO-60

0,1

20 0,1

20

0,1 20

0.1

20

1)

0,2 1) 7,1 1)7,2 1) 5,2 0,1 20

0,1 20 0,1 20

0,1 20

0,1 in

0,1

20,1

0,1 20,0

0,1 20

0,1 20,0 0,1 20

Fortsetzung

Nr. Zusatzstoff

Gewicht (g) Nr. Hilf'szusat^stoll

Gewicht (g)

50 HCO-60 5

51 HCO-60 5

52 HCO-60 5

53 HCO-60 5

54 HCO-60 5

55 HCO-öO/Natriumdcsoxycholat (35 : 1) 7,2

56 HCO-60/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

57 HCO-60/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

58 HCO-oO/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

59 HCO-oO/Natriumdesoxychcial (35 : 1) 7,2

60 HCO-60/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

61 HCO-60/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

62 HCO-60/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

63 HCO-oO/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

64 HCO-60/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

65 HCO-60/Natriumdesoxycholat (35 : 1) 7,2

66 HCO-60/Natriumdehydrocholat(35 : 1) 7,2

67 HCO-oO/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

68 HCO-oO/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

69 HCO-60/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

70 HCO-60/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

71 HCO-öO/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

72 HCO-60/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

73 HCO-60/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

74 HCO-60/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

75 HCO-oO/Natriumdehydrocholat (35 : 1) 7,2

76 HCO-oO/Nalriurndehydrochoiat (35 : 1) 7,2

Tabelle 2

Nr. HilfszusatzstofT

1	Gylcerin
2	Glycerin
3	Glucose
4	Glucose
5	Glucose
6	Propylenglykol
7	Propylenglykol
8	Ribose
9	Ribose
i0	Arabinose
1 1 i i	/AfäuinOSc
12	Fructose
!3	Fructose
14	Sorbit
15	Sorbit
16	Mannit
17	Mannit
18	Lactose
19	Lactose
20	Saccharose
21	Saccharose
22	NaCI
23	NaCl
24	KCl
25	KCl
26	CaCl₂
27	CaCl₂

51

Gewicht (g) 52

53

54
55

28 MgCl₂ 20

29 MgCI, 0,1

30 Benzoesäure 20

31 Benzoesäure 0,1

32 Natriumbenzoat 20 33 Natriumbenzoat 0,1

34 Kaliumbenzoat 20

35 Kaliumbenzoat 0,1

36 Salicylsäure 20 _1b 37 Salicylsäure 0,1

38 Natriumsalicylat 20

39 Natriumsalicylat 0,1

40 Kaliumsalicylat 20

41 Kaliumsalicylat 0,1 42 Gemisch von Glucose und 5,5

CaCl₂ (10 : 1)

43 Gemisch von Glucose und 5,5 MgCI₂ (10: 1)

44 Gemisch von Glucose und 5,1 Natriumbenzoat (50 : 1)

45 Gemisch von Glucose und 5,1 Natriumsalicylat (50 : 1)

46 Gemisch von NaCI und CaCl₂ (1 : 1) 1

47 Gemisch von NaCI und MgCl₂ (1:1) 1

48 Gemisch von Glucose und 5,5 CaCl₂ (10: 1)

49 Gemisch von Glucose und 5,5 MgCl₂ (10 : 1)

50 Gemisch von Glucose und 5,1 Natriumsalicylat (50 : 1)

CaCl₂ 1

MgCl₂ 1

NaCl 1

KCl 1

Gemisch von Glucose und 5,5 CaCI₂ (10: 1)

Gemisch von Glucose und 5,5 MgCl₂ (10: 1)

Gemisch von Glucose und 5,1 Natriumbenzoat (50 : 1)

Gemisch von Glucose und 5,1 Natriumsalicylat (50 : 1)

59 Glucose 5

25

30

56

57

58

50

61 CaCl₂ 1

62 MgCl₂ 1

63 Natriumsalicylat 0,1 64 Fructose 5

65 Lactose 5

66 Gemisch von Glucose und 5,5 CaCl₂(IOrI)

67 Gemisch von Glucose und 5,5 MgCl₂(IO:!)

68 Gemisch von Glucose und 5,1 Natriumbenzoat (50 :1)

69 Gemisch von Glucose und 5,1 Natriumsalicylat (50 : 1)

70 Glucose 5

71 NaCl 1

72 CaCl₂ 1

60

65

	Π	Fortsetzung	Hiirs7.usut7stolT	Zusammensetzung	26	58	5	0/	1 5	406	12	Fortsetzung	Zusammensetzung	<jiu : i_ai_b	Ausbeute ^£.
	Nr.	MgCl₂								Nr.	Be-C: DeoxT: GIu : SaINa		98
	73	Natriumsalicylat	Be-C: HCO-10 : GIy (1 :01 : 20)					45	(1 : 20 : 5 : 0.1)	GIu : MgCl₂
	74	Fructose	Be-C: HCÜ-10 : Uly (1 : 20 :0.1)	Gewicht (g)				Be-C : DeoxPr : NaCl : CaCl₂		97
	75	Lactose	Be-C: HCÜ-60 : GIu (1 :0.1 :5)	1			46	(1 :0.1 :0.5 :0.5)	GIu : SaINa
	76		Be-C: HCO-60 : GIu (1 :5 :5)	0,1	10	20		Be-C : DeoxPr: NaCI : MgCI₂		07
		Tabelle 3	Be-C:HCO-60 : GIu (1 : 20 :5)	5			47	(1 :20 :0.5 :0.5)	CaCI₂ (1 :5 : 1)
		Be-C : HCO-200 : Pro (1 :0.1 : 20)	5		Λ O	Be-L : HLU-6U	MgCi₂ (I :5 : 1)	97
	Nr.	Be-C : HCO-200 : Pro (I : 20 : 0.1)			48	(1:5:5 :0.5)	NaCl (1:5:1)
		Be-C:Cap-60 : Rib (1 :0.1 : 20)				Be-C : HCO-60	KCI (1:5:1)	97
	1	Be-C:Cap-60 : Rib (I : 20: 0.1)		25	49	(1:5:5 :0.5)	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : GIu :
	2	Be-C: Ara-60 : Ära (I :0.1 :20)	Ausbeute			Be-C : HCO-60	CaCI₂ (t : 7 :0.2 : 5 :0.5)	98
	3	Be-C : Ara-60 : Ära (1 : 20 : 0.1)			50	(I :5 :5 :0.1)	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : GIu :
	4	Be-C : Ste-60 : Fm (1 :0.1 : 20)	98			Be-C : HCO-60	MgCN (1 ■ 7 0 ~> ■ 5 -0 S)	97
	5	Be-C:Ste-60 : Fru (1 : 20 : 0.1)	98	30	51	Be-C : HCO-60	Be-C : HCO-60 DeoxNa : GIu :	97
P	6	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Sor	98		52	Be-C : HCO-60	BenNa (1:7 :0._ .5 : 0.1 >	97
r. '■	7	(1 :0.1 :0.1 : 20)	98		53	Be-C : HCO-60	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : GIu :	97
Sv.	8	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Sor	98		54	SaINa (1 : 7 : 0.2 : 5 :0.1)	97
';'■	9	(1 -7 0 1 -0 1)	98		55	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : GIu
tv	10	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Man	98	35		(1 : 7 : 0.2 : 5)	97
μ	Π	(1 :7 :0.2 : 20)	97		56	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : NaCl
	12	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Man	97			(I :7 :0.2 : 1)	98
ti	;3	(1 -70201)	97		57	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : CaCl₂
B	14	Be-C : DeoxH : Lac .(I :0.l :20)	97			(1 : 7 : 0.2 : 1)	98
[4		Be-C: DeoxH : Lac (1 : 20 : 0.1)	97	40	58	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : MgCl₂
te	15	Be-C: DeoxNa : Sac (1 :0.1 : 20)	97			(1 : 7 : 0.2 : 1)	97
ί		Be-C: DeoxNa : Sac (1 : 20 :0.l)	97		59	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : SaINa
ir. if	16	Be-C : DeuxK : NaCl (1 : Oi : 20)				(1 :7 :0.2 :0.1)	97
kr-		Be-C: DeoxK: NaCI (1 : 20 :0.1)	97		60	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Fru
ψ.	17	Be-C:DehH : KCI (1 :0.1 : 20)		45		(I :7 :0.2 :5)	97
I		Be-C: DehH : KCl (1 : 20 :0.l)	97		61	Be-C : HCO-60 : DeoxNa : Lac
,1	18	Be-C: CNa : CaCl; (1 : 0.1 : 20)				(1 :7 :0.2 :5)	97
	19	Be-C: CNa : CaCl₂ (1 : 20 : 0.1)	97		62	Be-C : HCO-60 : DehNa : GIu : CaCI₂
	20	Be-C: LiNa : MgCN (1 :0.1 :20)		50		(1 :7 :0.2 :5 :0.5)	98
\|ί	21	Be-C: LiNa : MgCl₂ (1 : 20 :0.1)	97		63	Be-C : HCO-60 : DegNa : GIu : MgCl₂
ξ*;	22	Be-C:CheH : BenH (1 :0.1 : 20)	97			(1 : 7 : 0.2 : 5 .0.5)	97
	23	Be-C CheH : BenH (1 : 20 :0.1)	97		64	Be-C : HCO-60 : DehNa : GIu :
ft	24	Be-C: UmH : HenNa (1 :0.1 : 20)	97			BenNa (1 : 7 · 0.? · S ■() 1 )	97
	25	Be-C: UmH: BenNa (1 :20:0.I)	97	55	65	Be-C : HCO-60 : DehNa : GIu :
	26	Be-C : HyodNa : BenK (1 :0.1 : 20)	97			SaINa (1 : 7 : 0.2 : 5 :0.1)	97
i	27	Be-C : HyodNa : BenK (1 : 20 : 0.1)	97		66	Be-C : HCO-60 : DehNa : GIu
	28	Be-C:LagodNa : SaIH (1 :0.1 : 20)	97			(1 :7 :0.2 :5)	97
*i-,ΐ:* ':·ί	29	Be-C:LagodNa : SaIH (I : 20: 0.1)	97		67	Be-C : HCO-60 : DehNa : NaCl
•Λ* M	30	Be-C : HyoNa : SaINa (1 :0.1 : 20)	97	60		(1 :7:0.2:1)	98
	31	Be-C : HyoNa : SaINa (1 : 20:0.1)	97		68	Be-C : HCO-60 : DehNa : CaCl₂
	32	Be-C :PhoNa: SaIK(I :0.1 :20)	97			(1 : 7:0.2:1)	98
	33	Be-C :PhoNa: SaIK(I : 20:0.1)	97		69	Be-C : HCO-60 : DehNa : MgCl₂
ft? Ii	34	Be-C : DeoxNH, : GIu : CaCl₂	9S	65		(1 : 7 :0.2 :1)	97
r-r.	35	(1 : 0.1 : 5 :0.5)	98		70	Be-C : HCO-60 : DehNa : SaINa
*l^:;*	36	Be-C : DeOxNH₄ : GIu : MgCl₂	98			(1 :7:0.2 :0.1)	97
JS	37	(1 :20:5 :0.5)	98		71	Be-C : HCO-60 : DehNa : Fm
P	38	Be-C : DeoxT : GIu : BenNa	98		(1 :7:0.2:5)	97
P ■	39	(1 : 0.1 : 5 :0.1)	98	72	Be-C : HCO-60 : DehNa : Lac
	40	98		Π : 7:0.2 :5)	97
	41	98	73
	42	98			98
		98	74
	43	98			97
		97	75
	44			97
		97	76

	98

rl
S
i
I

I
I
I
S
1
1

14

Die in den Tabellen 1, 2 und 3 und in der übrigen Beschreibung gebrauchten Abkürzungen haben die folgenden Bedeutungen:
Be-C": N⁴-Behenovlcvtosinarabinosid

HCO-10:

HCO-60:

HCO-200:

Cap-60:

Ara-60:

Ste-60:

DeoxNa:

DeoxH:

DeoxK:

DehH:

DehNa:

CheH:

UruH:

HyodNa:

LagodNa:

HyoNa:

PhoNa:

DeoxNFL,

DeoxT:

DeoxPr:

BenH:

BenNa:

SaINa:

Hydriertes Rizinusöl, an das Polyoxväthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 10 gebunden ist.

Hydriertes Rizinusöl, an das Polyoxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 60 gebunden ist.

Hydriertes Rizinusöl, an das Polyoxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 200 gebunden ist.

Glycerintrihydroxycaprat, an das PoIyoxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 60 gebunden ist.

Glycerindihydroxyarachidat, an das PoIyoxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 60 gebunden ist.

Glycerintrihydroxystearat, an das PoIyoxyäthylen mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 60 gebunden ist. Natriumdesoxycholat Desoxycholsäure
Kaliumdesoxycholat
Dehydrocholsäure
Natriumdehydrocholai Natriumcholat
Natriumlithocholat
Chenodesoxychol säure Ursodesoxychol säure Natriumhyodesoxycholat Natrium lagodesoxycholat Natriumhyocholat
Natriumphocaecholat Am moni um desoxy cholat Trimethylammoniumdesoxycholat Procaindesoxycholat
Glycerin
Glucose
Propylenglykol
Ri böse
Arabinose
Fructose
Sorbit
Mannit

Die mittlere Überlebenszeit der Mäuse (T) wurde ermittelt und durch die mittlere Liberlebenszeit (C) von Kontrollgruppen dividiert, denen nicht die Arzneimittel injiziert worden waren, wobei die in Tabelle genannten Werte für T/C % ermittelt wurden.

Die Toxizität der Arzneimittel gemäß der Erfindung und von N⁴-Behenoylcytosinarabinosid bei intravenöser Injektion wurde als LD₅₀ in mg/kg, d. h. als die Menge des in jedem Präparat enthaltenen N⁴-Behenoylcytosinarabinosids ermittelt, die fünf von zehn männlichen Mäusen des CDF|-Stammes in einer Gruppe tötete. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle genannt.

Tabelle 4

Präparat Nr.

Saccharose

Benzoesäure

Natriumbenzoat

Kaliumbenzoat

Salicylsäure

Natriumsalicylat

Kaliumsalicylat

Um die Wirkung der Arzneimittel gemäß der Erfindung und von N⁴-Behenoylcytosinarabinosid allein als Mittel gegen Krebs bei intravenöser Injektion zu ermitteln, wurden Gruppen von je 10 Mäusen des Stammes CDF₁ 10⁶ L-1210-Leukämiezellen pro Maus intravenös zusammen mit einer wäßrigen Lösung, die jeweils 100 mg (gerechnet als N⁴-Behenoylcytosinarabinosid) der Arzneimittel bzw. 100 mg N⁴-Behenoylcytosinarabinosid allein enthielt, einmal am 2. und 6. Tag injiziert.

Antikrebswirkung
(T/C %)

20 1	300
2	300
3	380
4	380
	380
²⁵ 6	300
7	300
8	300
9	300
10	300
³⁰ 11	300
12	380
13	380
14	380
35 15	380
16	380
"17	380
18	300
19	300
40 20	380
21	380
22	300
23	300
45 ²⁴	300
⁴⁵ 25	300
26	300
27	300
28	300
so 29	300
30	300
31	300
32	300
33	300
55 34	300
35	300
36	300
37	300
« ³⁸	300
⁶⁰ 39	300
40	300
41	300
42	300
65 43	300
44	300
45	300
46	300

Toxizität (LD₅₀ mg/kg)

400

15

Fortsetzung Präparat Nr.

Antikretswirkung (T/C %)

47 300

43 380

49 380

50 380

51 380

52 380

53 380

54 380

55 380

56 380

57 380

58 380

59 380

60 380

61 380

62 380

63 380

64 380

65 380

66 380

67 380

68 380

69 380

70 380

71 380

72 380

73 380

74 380

75 380

76 380 N⁴-Behenoyl*

CA 150

♦) NMiehcnoylcytosinarabinosid in 0,5% Methylcellulosc suspendiert.

Toxizität (LD₅₀ mg/kg)

400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400

400

gcr wässriger Lösung von Toxizität (LD50 in mg/kg) wurden auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 7 genannt.

Tabelle 5 Nr. N⁴-Acylcytosinarabinosid

77 N^Nonadecanoylcytosinarabinosid

78 N^Arachidoylcytosinarabonisid

79 N⁴-Heneicosanoylcytosinarabinoid

80 N⁴-Tricosanoylcytosinarabinosid

81 N⁴-Lignoceroylcytosinarabinosid

82 NMi-MethylnonadecanoyOcytosinarabinosid

Tabelle 6

Die Ergebnisse in Tabelle 4 zeigen, dal.! die AnIikrebswirkung (T/C%) von N⁴-Behenoylcytosinarabinosid allein bei intravenöser Injektion 150% betrug, jedoch die Arzneimittel gemäß der Erfindung einen Anstieg der Wirkung auf 300 bis 380% zeigten.

Beispiel

Je 1 g der in Tabelle 5 genannten N⁴-Acylcytosinarabinoside und 7 g HCO-60 wurden zu 1 kg Aceton gegeben. Das Gemisch wurde bei 1 Atm. 10 Minuten auf 55° C erhitzt, worauf das Aceton von der Lösung abgedampft wurde, indem diese 4 Stunden bei 0,1 Atm. auf 40° C erhitzt wurde.

Der Rückstand und 5 g Glucose wurden zu 500 g Wasser gegeben. Das Gemisch wurde 20 Minuten bei 1 Atm. und 95° C gerührt und dann in Eiswasser gekühlt. Es wurde dann gefriergetrocknet. Hierbei wurden die in Tabelle 6 genannten Präparate (die Nummer entsprechen den Nummern in Tabelle 5) in Form von weißen amorphen Pulvern in den in Tabelle 6 angegebenen Ausbeuten erhalten.

Die Antikrehswirkung (T/C %) jedes erhaltenen Präparats und der N'-Acylcytosmarabinoside allein in 0,5%iger wäßriger Lösung von Methylccllulose bei intravenöser Injektion (l00nig/kg zweimal) und die

Nr. Zusammensetzung

Aus beute (%

77 N⁴-Nonad?canoy) CA : HCO-60 : GIu 97 (1:7:5)

78 N⁴-Arachidoyl CA : HCO-60 : GIu 97 (1 :7 :5)

79 N⁴-Heneicosanoyl CA : HCO-60 : GIu 97 (1 :7 :5)

80 N⁴-Tricosanoyl CA : HCO-60 : GIu 97 (1 :7 :5)

81 N⁴-Lignoceroyl CA : HCO-60 : GIu 97 (1 :7 :5>

82 N⁴-(5-Methylnonadecanoyl) 97

CA: HCO-60 : GIu (1 :7 :5) 35

CA: Cytosinarabinosid

HCO-60 & GIu: wie in Beispiel 1 definiert.

Tabelle 1 Präparat Nr.

LD₅₁, (mg/kg

77

78
79
80
81

82
50

350	400
350	400
350	400
350	400
350	400
350	400

Fortsetzung

Verbindung

LD50 (nig/kj

N⁴-Nonadecanoylcytosin-	150	400
arabinosid
N⁴-Arachidoylcytosin-	150	400
arabinosid
NMIeneicosanoylcytosin-	150	400
arabinosid
N⁴-Tricosanoyleytosin-	150	400
arabinosil
.-, N⁴-Lignoceroylcyiosin-	!20	400
arahinosid
N"'-(5-Methy!nonadecanoyl )-	150	400
cvtosin-arabinosid

Beispiel 3

Je 1 g der in Tabelle 8 genannten N⁴-AcyIcytosin-arabinoside und die in Tabelle 9 genannten Zusatzstoffe wurden in den angegebenen Mengen zu 200 g Äthanol gegeben. Das Gemisch wurde 20 Minuten bei 1 Atm. ?uf 60° C erhitzt, worauf das Äthanol während 4 Stunden bei 40° C und 0,1 Atm. abgedampft wurde.

Der Rückstand und die in Tabelle 10 genannten Hilfszusatzstoffe in den angegebenen Mengen wurden zu 1 kg Wasser gegeben. Das Gemisch wurde 20 Minuten bei 1 Atm. unter Rühren auf 95° C erhitzt, in Eiswasser gekühlt und dann gefriergetrocknet. Hierbei wurden die in Tabelle 11 genannten Arzneimittel (die Nummern in Tabelle 11 entsprechen den Nummern in den Tabellen 8 bis 10) in Form von weißen amorphen Pulvern in den in Tabelle 11 genannten Ausbeuten erhalten.

Die Antikrebswirkung (T/C %) und die Toxizität LD₅₀ (mg/kg) bei oraler Verabreichung wurden für diese Präparate auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise bestimmt, wobei jedoch eine wäßrige Lösung von je 400 mg/kg Körpergewicht der Maus jedes Präparats (gerechnet als N'-Acylcytosin-arabinosid) bzw. je 400 mg der N⁴-Acylcytosin-arabinoside allein (auf der gleichen Basis) in 0,5%iger wäßriger Lösung von Methylcellulose den mit L-1210-Leukämie geimpften Mäusen oral dreimal (am 3., 5. und 7. Tag) verabreicht wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 12 genannt.

Tabelle 8

Nr. NH-Acylcytosin-arabinosid

83 N⁴-Stearoylcytosin-arabinosid

84 N-'-Stearoylcytosin-arabinosid

85 N⁴-Stearoylcytosin-arabinosid

86 N^Stearoylcytosin-arabinosid

87 N⁴-Myristoylcytosin-arabinosid

88 N'-Palmitoylcytosin-arabinosid

89 N⁴-Margaroylcytosin-arabinosid

90 N⁴-(2-chlorostearoyl)cytosin-arabinosid

91 N⁴-(18-Hydroxystearoyl)cytosin-arabinosid

92 N⁴-(2-Mercaptostearoyl)cytosin-arabinosid

93 N⁴-Margaroylcytosin-arabinosid

94 N⁴-Margaroylcytosin-arabinosid

95 N⁴-Margaroylcytosin-arabinosid

96 N^Valeroylcytosin-arabinosid

97 N⁴-Stearoylcytosin-arabinosid

Tabelle 9

Nr. Zusatzstoff

Gewicht (g)

83	HCO-60	(1:	5
84	HCO-60	(1:	5
S 5	HCO-60	(1:	5
S6	Natriumdesoxyeholat	(1:	5
87	HCO-60 /Na triumdcsoxycholat	(1:	) 4
88	HCO-60/Natriumdesoxycholat	(1:	) 4
89	HCO-60/Natriunidesoxycholat		) 4
90	HCO-öO/Natriumdesoxycholat		) 4
I 4]	HCO-60/Natriumdeso.\ychoiat		) 4
	HCO-tiO/Natriumdcsoxvcholat		) 4
	Mvs-45		5
a 44	TW-30	5
■ι 45	HCO-60	5
ί 46	HCO-60	5
-; 47	HCO-W)

Tabelle 10

Nr. Hilfszusatzstoff

Gewicht (g)

5 83	Glucose	5
84	Glucose und MgCl₂ (1 : 2)	15
85	Glucose und CaCl₃ (1 : 2)	15
86	Glucose	5
87	Glucose	5
¹⁰ 88	Glucose	5
89	Glucose	5
90	Glucose	5
91	Glucose	5
15 ⁹²	Glucose	5 1
¹⁵ 93	Glucose	5 I
94	Glucose	⁵ I
95	MgSo₄	10 1
96	Glucose	5 !
20 97	NaBr	0,1 ',·

Tabelle

Nr. Zusammensetzung

Ausbeute (%)

83 St-CA : HCO-60 : GIu (1 : 5 : 5) 97

84 St-CA : HCO-60 : GIu : MgCl₂ 97 (1:5:5: 10)

85 St-CA : HCO-60 : GIu : CaCI₂ 97 (1:5:5: 10)

86 St-CA : DcoxNa : GIu (1 :5 :5) 97

87 My-CA : HCO-60 : DeoxNa : GIu 97 (1 :2 .2 : 10)

88 Pa-CA : HCO-60 : DeoxNa : GIu 97 (1 :2:2 :5)

89 Ma-CA : HCO-60 : DcoxNa : GIu 97 (1:2:2:5)

90 2-Cl-St-CA : HCO-60 : DeoxNa : GIu 97 (1:2:2:5)

91 18-Hy-St-CA : HCO-60 : DeoxNa : Glu97 (1 :2:2:5)

92 2-Mc-St-CA
(1 :2:2:5)
Ma-CA
Ma-CA

Ma-CA : HCO-60
Va-CA : HCO-60 :

HCO-60 : DeoxyNa : GIu97

so 96
97
Vergleich Va-CA

Mys45 :Glu (1:5:5) TW-30 :Glu (1:5:5)

MgSO₄ (1 GIu (1 :5

: 5 : 10)

5)

St-CA : HCO-60 : NaBr (I : 5 :0.1)

97 97 97 97 97

Tabelle 12

Präparat

LD₅,, (mg/kg)

300
380
38(1
350
350
290
290
290
290

über 1600 über 1600 über 1600 über 1600 1600

über 1600 über 1600 über 1600 über 1600

Fortsetzung

Präparat

LD₅₀ (mg/kg) Verbindung Nr.

LD₅₀ (mg/kg)

92	290
93	250
94	250
95	350
96	140
97	280
Vergleichsprodukte
ST-CA	150
My-CA	150
Pa-CA	150
Ma-CA	150
2-Cl-St-CA	150
18-Hy-St-CA	150
2-Me-St-CA	150
Va-CA	110

über 1600 1600 1600

über 1600 über 1600 über 1600

über 1600 1600

über 1600 über 1600 über 1600 über 1600 über 1600 über 1600

Die Abkürzungen in den Tabellen 9 bis 12 haben die folgenden Bedeutungen:

St-CA: N⁴-Stearoylcytosin-arabinosid

My-CA: N⁴-Myristoylcytosin-arabinosid

Pa-CA: NH-Palmitoylcytosin-arabinosid

Ma-CA: N⁴-MargaroyIcytosin-arabinosid

2-CI-St-CA: N⁴-(2-Chlorostearoyl)cytosin-

arabinosid
18-Hy-St-CA: N⁴-(18-Hydroxystearoyl)cytosin-

arabinosid
2-Me-St-CA: N⁴-(2-Mercaptosiearoyl)cytosin-

arabinosid
Mys45: Ester von Stearinsäure und Polyoxyäthy-

len mit einem mittleren Polymerisationsgrad von 45
TW-30: Lanolin, an das Polyoxyäthylen mit

einem mittleren Polymerisationsgrad

von 30 gebunden ist. Va-CA: N⁴-Valeroylcytosin-arabinosid

Die Ergebnisse in Tabelle 12 zeigen, daß die Antikrebswirkung (T/C %) der N⁴-Acylcytosin-arabinoside allein bei oraler Verabreichung 150% beträgt, jedoch die Wirkung der Präparate, die die N⁴-Acylcytosin-arabinoside enthalten, auf 300 bis 380% steigt.

Beispiel 4

Anstatt oral wie in Beispiel 3 wurden pro kg Körpergewicht der Maus je 400 mg (gerechnet als N⁴-Acylcytosinarabinosid) der Präparate in Pulverform bzw. eines Gemisches jedes N⁴-Acylcytosin-arabinosids mit Methylcellulose (2 : 1) in Form kleiner Suppositorien verfestigt und rektal dreimal (je einmal am 3., 5. und 7. Tag) verabreicht. Die Antikrebswirkung (T/C %) und die LD50-Werte (mg/kg) wurden für die rektale Anwendung bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 13 genannt.

Die Ergebnisse zeigen, daß die Wirkung sowohl bei

5	85	380	1 5	über 1600
	86	350	über 1600
	87	350	1600
	88	280	über 1600
	89	280	über 1600
10	90	280	über 1600
	91	280	über 1600
	92	280	über 1600
	93	250	1600
	94	250	1600
15	95	350	über 1600
	96	140	über 1600
	97	300	über 1600
	Vergleichsprodukte
20	St-CA	150	über 1600
	My-CA	150	1600
	Pa-CA	150	über 1600
	Ma-CA	150	über 1600
	2-Cl-St-CA	150	über 1600
25	18-Hy-St-CA	150	über 1600
	2-Me-St-CA	150	über 1600
	Va-CA	110	über 1600
		B e i s ρ i e

1 g N⁴-Behenoylcytosin-arabinosid (nachstehend als AS-22 bezeichnet) und jeder der in Tabelle 14 genannten Zusatzstoffe in den angegebenen Mengen wurden zu 400 ml Aceton gegeben. Das Gemisch wurde 10 Minuten bei 1 Atm. auf 55° C erhitzt, worauf das Aceton durch Erhitzen für 2 Stunden auf 55° C bei 0,2 Atm. abgedampft wurde. Der Rückstand wurde im Vakuum-Exsiccaior 20 Stunden bei 0,1 Atm. und 20°C getrocknet. Hierbei wurden wasserlösliche Präparate, die AS-22 enthielten, in Ausbeuten von 95 bis 99% erhalten

Die Löslichkeit der AS-22 enthaltenden wasserlöslichen Feststoffe wurde wie folgt bestimmt: Wenn eine klare wäßrige Lösung durch Zugabe von 100 ml einer 0,9%iigcn wäßrigen Natriumchloridlösung zum wasserlöslichen Feststoff, der 1 g AS-22 enthält. Rühren des Gemisches im heißen Wasserbad bei 90° C und schnelles Kühlen der erhaltenen wäßrigen Lösung in einem Eiswasserbad erhalten werden kann, wird eine Löslichkeitdes wasserlöslichen Feststoffs von mehr als 1 g/100 ml angenommen. Wenn unter den vorstehend genannten Bedingungen eine Fällung gebildet wird, werden weitere 100 ml derO,9%igen wäßrigen Natriumchloridlösung zugesetzt, worauf erneut in der oben beschriebenen Weise erhitzt und schnell gekühlt wird. Die Löslichkeit wird in diesem Fall als die Menge AS-22 gerechnet, die pro 100 ml Wasser gelöst ist. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 14 genannt.

oraler als gleich w:ir. Tabelle 13	auch bei	rektaler	Anwendung weitgehend	60 Tabelle 14	h5	98 Polyo.\yäthylen(4(>>- hvdriertes Rizinusöl (HCO-40)	Gewicht Ig)	win	hchkcit as·:: Ki ml
Verbindung	Nr.	T/C" Γ	■■■I 1.DiM (mg/kg)	Nr. Zusat/stoll
83 84		300 380	über 1600 über 1600	1.8 2 100	II.

Fortsetzung

Nr. Zusatzstoff

Gewicht (B)

Löslichkeit von AS-22 g/100 ml

98	Polyoxyäthylen(40)- hydriertes Rizinusöl (HCCMO)	1,8 2 100	0,5
99	Polyoxyäthylen(50)- hydriertes Rizinusöl (HCO-50)	1,8 2 100	0,5
100	Polyoxyäthylen(60)- hydriertes Rizinusöl (HCO-60)	1,8 2 100	0,5
101	Polyoxyäthylen(80)- hydriertes Rizinusöl (HCO-80)	1,8 2 100	0,5
102	Polyoxyäthylen(lOO)- hydriertes Rizinusöl (HCO-100)	1,8 2 100	0,5
103	Polyoxyäthylen(40)- Rizinusöl (CO-40TX)	1,8 2 100	0,5
104	Polyoxyäthylen(60)- Rizinusöl (CO-60TX)	1,8 2 100	0,5
105	Polyoxyäthylen(30)- Lanolin (TW-30)	1,8 2 100	0,5
106	Polyoxyäthylen(40)- stearat (MYS-40)	1,5 2 100	0.5
107	Polyoxyäthylen(45)- stearat	1.5 2 100	0,5
108	Polyoxyäthylen(55)- stearat (MYS-55)	1,5 2 100	0,5
109	Natriumdesoxycholat	2 ς	0,5
		j 100
110	AS-22 allein ist ohne Zusatzstoff suspendiert.	0	0

10

15

20

25

30

35

40

45

50

In der vorstehenden Tabelle sind die Abkürzungen in 55 Klammern die Handelsbezeichnungen der Produkte (unter dem Warenzeichen Nikkol) der Nikko Chemicals Co., Ltd. Es ist anzunehmen, daß Produkte mit gleicher Zusammensetzung von anderen Herstellern (z. B. Nissan Chemical Co. und Atlas Co.) im wesentlichen die 60 gleiche Löslichkeit haben.

Beispiel 6

Zu Ig AS-22 wurden 2g Polyoxyiithylen (60)-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60. für die Verweil- 65 dung in Arzneimitteln bestimmtes Produkt der Nikko Chemicals Co.. Ltd.). 0.1 g Polyoxyäthylcn(40)-stearat (Nikkol MYS-40) und 50 ml Äthanol gegeben. Das

Gemisch wurde 5 Minuten auf 75° C erhitzt. Das Äthanol wurde 30 Minuten bei 55° C und 0,2 Atm. abgedampft und der Rückstand 4 Stunden bei 20° C und 0,1 Atm. getrocknet, wobei 3,1 g eines wasserlöslichen Feststofis erhalten wurden. Zu diesem Feststoff, der AS-22 enthielt, wurden 100 ml einer0,8%igen wäßrigen Natriumchloridlösung gegeben. Das Gemisch wurde im heißen Wasserbad auf 90° C erhitzt, wobei eine Lösung gebildet wurde, die im Eisbad schnell gekühlt wurde. Hierbei wurde eine fast farblose klare l%ige wäßrige Lösung von AS-22 erhalten. Die wäßrige Lösung wurde durch ein Millipore-Filter (Porengröße 0,45 μ)gegeben, wobei eine l%ige Injektionslösung von AS-22 erhalten wurde.

Beispiel 7

Zu 1 g AS-22 wurden 2 g Polyoxyäthy!en(60)-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) und 50 ml Tetrahydrofuran gegeben. Das Gemisch wurde 10 Minuten auf 50° C erhitzt. Zur erhaltenen Lösung wurden 0,8 g Natriumchlorid in Pulverform gegeben, worauf das Tetrahydrofuran 30 Minuten bei 50° C und 0,2 Atm. abgedampft wurde. Der Rückstand wurde in einem Exisiccalor 20 Stunden bei 20° C und 0,1 Atm. getrocknet, wobei ein wasserlöslicher, klebriger weißer Feststoff der Zusammensetzung AS-22. HCO-60.NaCl erhalten wurde. Dem weißen Feststoff wurden 100 ml Wasser zugesetzt. Das Gemisch wurde im heißen Wasserbad auf 90° C erhitzt, wobei eine Lösung gebildet wurde, die in einem Eiswasserbad schnell gekühlt wurde, wobei eine 1 %ige wäßrige Lösung von AS-22 erhalten wurde. Die wäßrige Lösung wurde durch ein Millipore-Filter der in Beispiel 6 genannten Art filtriert, wobei eine l%ige wäßrige Injektionslösung von AS-22. die 1% AS-22, 2% HCO-60 und 0,8% NaCl enthielt, erhalten wurde.

Beispiel 8

2 ml Dimethylacetamid wurden zu 1 g AS-22 und 4 g Polyoxyäthylen(60(-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) gegeben. Das Gemisch wurde zur Bildung einer Lösung 10 Minuten auf 90° C bei 1 Atm. erhitzt. Durch Abkühlenlassen der Lösung auf Raumtemperatur wurde sie zu einem weißen Feststoff. Dem Feststoff wurden 100 ml Wasser züge ctzt. Das Gemisch wurde zur Auflösung des Feststofis 2 Stunden bei 90° C kräftig gerührt. Die Lösung wurde in Eiswasscr getaucht und unter kräftigem Rühren gekühlt. Hierbei wurde eine l%ige wäßrige Lösung von AS-22 erhalten.

Beispiel 9

2 ml Dimethylacetamid wurden zu 1 g AS-22 gegeben. Das Gemisch wurde 10 Minuten Liei Normaldruck auf 90° C erhitzt. Zur Lösung wurden 100 ml einer 4%igen wäßrigen Lösung von Polyoxyäthylen(60)-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) gegeben, worauf sie auf 90° C erhitzt wurde. Das Gemisch wurde 2 Stunden bei 90° C kräftig gerührt. Hierbei löste sich ein Teil des AS-22. Das Gemisch wurde mit Eiswasser schnell gekühlt und zur Entfernung des unlöslichen Teils des AS-22 filtriert, wobei eine 0,1 %ige wäßrige Lösung von AS-22 erhalten wurde.

Beispiel K)

F.ine wäßrige Lösung, die 2'Ί. Dimethylacetamid und 4':.. l'olyoxyäthylenldOl-hydiiertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) enthielt, wurde /u 0.1 g AS-22 gegeben. Das Gemisch wurde auf 90° C erhitzt, wobei sich ein Teil des AS-22 löste. Das Gemisch wurde mit F.iswasscr schnell

gekühlt und dann zur Entfernung des ungelösten AS-22 filtriert, wobei eine 0,02%ige wäßrige Lösung von AS-22 erhalten wurde.

Beisp iel 11

100 ml Wasser wurden zu 0,3 g, 1,5 g bzw. 3,0 g des aufdie in Beispiel 5 beschriebene Weise aus 1 Teil AS-22 und 2 Teilen Po!yoxyäthylen(60(-hydriertes Rizinusöl erhaltenen wasserlöslichen Feststoffs gegeben. Die Gemische wurden 2 Stunden auf 90° C erhitzt. Die Lösungen wurden der Abkühlung auf Raumtemperatur überlassen.

Getrennt hiervon wurden 100 ml Wasser zu 0,3 gl,5 g bzw. 3,0 g des aus 1 Teil AS-22 und 2 Teilen PoIyoxyäthylen(60)-hydriertes Rizinusöl hergestellten wasserlöslichen Feststoffs gegeben. Die Gemische wurden 2 Stunden auf 90° C erhitzt. Die Lösungen mit Eiswasser schnell gekühlt.

Es wurde festgestellt, daß die schnell gekühlten wäßrigen Lösungen, die 0,1 g, 0,5 g und 1,0 g AS-22 enthielten, sämtlich klar waren, während die der Abkühlung überlassenen wäßrigen Lösungen, die 0,1 g und 0,5 g AS-22 enthielten, ebenfalls klar waren, jedoch die 1,0 g AS-22 enthaltende wäßrige Lösung trübe war, ein Zeichen, daß das AS-22 sich nicht vollständig löste. Schnell gekühlte Proben waren nach Lagerung für eine Woche bei Raumtemperatur noch transparent, während in Proben, die der Abkühlung überlassen worden waren, eine weiße Fällung gebildet wurde, wenn sie nur einen Tag bei Raumtemperatur gehalten wurden.

12

25

30

B e i s ρ i e

40 ml Äthanol wurden zu 1 g AS-22 und 2 g Polyoxyäthylen(60)-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) gegeben. Das Gemisch wurde auf 60° C erhitzt. Das Äthanol wurde unter vermindertem Druck bei 60° C von der Lösung abgedampft. Der Rückstand wurde in einem Vakuum-Exsiccator getrocknet, wobei 3 g eines weißen wasserlöslichen Feststoffs erhallen wurden. Zum Feststoff wurden 100 ml einer 0.8%igen wäßrigen Nalriumchloridlösung gegeben. Das Gemisch wurde im heißen Wasserbad 2 Stunden bei 90° C gehalten. Die Lösung wurde in einem Eisbad schnell gekühlt und durch ein Millipore-Filter mit einer Porengröße von 0,45 μ zur Entfernung vorhandener Mikroorganismen filtriert. Hierbei wurde eine Injektionslösung erhalten, die 1% AS-22, 2% HCO-60 und 0,8% NaCI enthielt.

Beispiel 13

Die in Tabelle 15 genannten organischen Lösungsmittel wurden in den genannten Mengen jeweils zu 1 g AS-22 und 2 g Polyoxyäthylen(60(-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) gegeben. Jedes Gemisch wurde 10 Minuten bei 1 Atm. aufdie in Tabelle 15 genannten Temperaturen erhitzt. Das Lösungsmittel wurde von den erhaltenen Lösungen bei 0,2 Atm. und den in Tabelle 15 genannten Temperaturen abgedampft. Der Rückstand wurde im Vakuum-Exsiccator 20 Stunden bei 25° C getrocknet. Die zur Auflösung der erhaltenen wasserlöslichen Feststoffe erforderliche Wassermenge wurde bestimmt. Es wurde gefunden, daß alle diese Feststoffe sich in 50 ml Wasser lösten. Unterschiede wurden nicht festgestellt.

Zum Vergleich wurde der vorstehend beschriebene Versuch unter Verwendung von 100 ml Hexan durchgeführt, das das AS-22 nicht zu lösen vermag. Hierbei wurde festgestellt, daß durch Zugabe des Hexans zu einem Gemisch von AS-22 und Polyoxyäthylen(60)-hydriertes Rizinusöl nur das Poiyäthylen-hydriertes Rizinusöl in Wasser gelöst wurde, während das AS-22 im Wasser fast ungelöst blieb.

Tabelle 15

Lösungsmittel

Menge
(ml)

Auflösungstcmperatur (⁰C ) Verdampfungstemperatur
(⁰C)

Löslichkeit
von AS-22
(g/100 ml)

Methanol	200	75	50	2
Äthanol	50	75	50	2
n-Propanol	50	60	60	2
Isopropanol	50	60	60	2
Tetrahydrofuran	20	50	50	2
Tetrahydropyran	20	50	50
Dioxan	50	80	80	2
Aceton	200	50	50	2
Methyläthyl keton	200	50	50	2
Dimethylacetamid	20	80	80	2
Dimethylformamid	20	80	80	2
Dimethylsulfoxyd	20	80	80	2
Diäthylacetamid	20	80	80	2
Äthylacetat	500	50	40	2
Butylacetat	500	50	40	2
Diäthyläther	500	35	40	2
Methyläthyläther	500	35	40	2
Pyridin	50	40	40	2
Triäthanolamin	50	40	40	2
Essigsäure	50	40	50	2
n-Hexan	1000	50	50	<0,02

Beispiel 14

50 ml Aceton wurden zu 1 g AS-22 und 4 g PoIyoxyäthylen-(60)-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) gegeben. Das Gemisch wurde bei Normaldruck 2 Stunden auf 55° Cerhit7t. Vollständige Auflösung fand nicht statt. Das Aceton wurde 2 Stunden bei 55° C und 0,2 Mm. vom Gemisch abgedampft, worauf 100 ml Wasser zugesetzt wurden. Das Gemisch wurde auf 90° C erhitzt. Die erhaltene Lösung wurde im Eisbad schnell gekühlt, wobei eine wäßrige Lösung, die 1% AS-22 und 4% HCO-60 enthielt, erhalten

Beispiel 15

Je 1 g der in Tabelle 16 genannten N⁴-Acylcytosinarabinoside und 10 g Polyoxyäthylen(60)-hydriertes Rizinusöl (Nikkol HCO-60) wurden in 200 ml Aceton gelöst, indem 10 Minuten auf 55° C bei 1 Atm. erhitzt wurde. Das Aceton wurde 2 Stunden bei 55° C und 0,2 Atm. abgedampft. Der Rückstand wurde im Vakuum-Exsiccator 20 Stunden bei 20° C und 0,1 Atm. getrokknet, wobei ein wasserlöslicher Feststoff, der jeweils die N⁴- Acylcytosin-arabinoside enthielt, in einer Ausbeute von 99% erhalten wurde. Zu je 1 g der wasserlöslichen Feststoffe, diejeweilsausden N⁴-Acylcytosinarabinosiden und Polyoxyäthylen(60)-hydriertes Rizinusöl im Verhältnis von 1 : 10 bestanden, wurden 100 ml Wasser gegeben. Die Gemische wurden im heißen Wasserbad bei 90° C gerührt. Die erhaltenen wäßrigen Lösungen wurden im Eiswasserbad schnell gekühlt. Hierbei wurden klare Lösungen in einer Ausbeute von 99% erhalten.

Tabelle 16

Beispiel 16

Ver	Acylrest im N⁴-Acyl-	AS : HCO-60-	Anteile
bin	cytosinarabinosid	Verhältnis	von AS und
dung		im wasser	HCO-60 in
Nr.		löslichen	wäßriger
		Feststoff	Lösung

111 Valeryl 1 : 10 0,1% 1%

112 Lauroyl I : 10 0,1% 1%

113 Palmitoyl i. : 10 0,1% 1%

114 Stearoyl 1 : 10 0,1% 1%

115 Arachidoyl 1 : 10 0,1% 1%

16 Heneicosanoyl 1:10 0,1% 1%

17 Erucoyl ' 1 : 10 0,1% 1%

18 Behenoyl 1 : 10 0,1% 1%

19 Lignoceroyl 1:10 0,1% 1%

20 Hexatriacontanoyl 1:10 0,1% 1%

121 2-Chlorstearoyl 1:10 0,1% 1%

122 18-Hydroxystearoyl 1:10 0,1% 1%

123 2-MercaptostearoyI 1:10 0,1% 1%

124 5-MethyInonadecanoyl 1 :10 0,1% 1%

125 Benzoyl 1 : 10 0,1% 1%

126 Phenylbutyryl 1:10 0,1% 1%

127 p-Nitrobenzoyl 1 : 10 0,1% 1%

AS = N'-Acylcytosin-arabinosid

I) Die Wasserlöslichkeit eines aus einem N⁴-Acylcytosin-arabinosid, einem Zusatzstoff und einem Hillszusatzstoff bestehenden Präparats (als Dreikomponenten-Präparat zu bezeichnen), II) die Löslichkeit eines aus N⁴-Acylcytsinarabinosid und einem Zusatzstoff bestehenden Präparats (als Zweikomponenten-Präparat zu bezeichnen) in ίο einer wäßrigen Lösung eines Hilfszusatzstoffs und

III) die Wasserlöslichkcit des Zwcikomponenten-Präparats wurden unter den folgenden drei Bedingungen ermittelt:

A) Das Gemisch wird 10 Minuten bei Raumtempcratur gerührt.

B) Das Gemisch wird 10 Minuten bei 90° C gerührt und dann unter Rühren der Abkühlung auf Raumtemperatur überlassen.

C) Das Gemisch wird 10 Minuten bei 90° C gerührt,· dann unter Rühren in Eiswasser

schnell gekühlt und anschließend wieder auf Raumtemperatur gebracht.

Im einzelnen wurde wie folgt gearbeitet: Je 1 g (ge-

rechnet als N"-Behenoylcytosinarabinosid, nachstehend als AS-22 bezeichnet) der gemäß Beispiel 1 hergestellten Dreikomponenten-Präparate Nr. 1 bis 76 wurde zu 100 ml Wasser gegeben. Das Gemisch wurde 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dann durch ein Millipore-Filter (Porengröße 0,45 μ) gegeben. Die wäßrige Lösung wurde 4 Stunden bei 50° C und 0,02 Atm. destilliert. Der Rückstand wurde 24 Stunden bei 0,001 Atm. und 20° C getrocknet. Durch Ermittlung des Gewichts des getrockneten Rückstandes wurde die Löslichkeit des Präparats unter diesen Bedingungen (IA) bestimmt. In der gleichen Weise wurden die Löslichkeiten der Präparate unter den Bedingungen B und C (IB und IC) ermittelt. Die Löslichkeiten sind als Gewicht in Gramm AS-22, das in 100 ml Wasser gelöst ist, ausgedrückt. Wenn sich das AS-22 (1 g) vollständig löste, wurde weiterhin das vorstehend genannte Präparat der erhaltenen Lösung zugesetzt, um festzustellen, ob sich mehr als 1 g AS-22 unter den gleichen Bedingungen löste.

Anschließend wurde je 1 g (gerechnet als AS-22) der gemäß Beispie! 1 durch Behandlung mit Dioxan erhaltenen Zweikomponenten-Präparate Nr. Γ bis 76' (bestehend jeweils aus 1 g AS-22 und den in Tabelle 1 genannten Zusatzstoffen in den in Tabelle 1 angegebenen

so Mengen, wobei die Präparate 1' bis 76' den Präparaten Nr. 1 bis 76 entsprechen) zu einer wäßrigen Lösung gegeben, die aus 100 ml Wasser und jeweils den in Tabelle 2 genannten Hilfszusatzstoffen in den in Tabelle 2 angegebenen Mengen bestand. In der oben beschriebe-

nen Weise wurden die Löslichkeiten unter den Bedingungen A, B und C (IIA, IIB und HC) ermittelt.

Schließlich wurde je 1 g (gerechnet als AS-22) der Zweikomponenten-Präparate Nr. 1' bis 76' zu 100 ml Wasser gegeben. In der vorstehend beschriebenen

Weise wurden die Löslichkeiten unter den Bedingungen A, B und C (HIA, HIB und HIC) ermittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 17 genannt

Tabelle

27

28

Präparat

Präparat Nr. Ill B

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58

ο,	ο,ι	0,1	1'	0,05
	>1	>1	2'	0,3
0,	0,1	0,1	3'	0,05
1	>1	>1	4'	0,4
	>1	>1	5'	0,4
0,	0,1	0,1	6'	0,05
		>1	7'	0,3
1	0,1	0,1	8'	0,05
1	>1	>1	9'	0,3
0,	0,i	0,i	iO'	0,05
1	>1	>1	ir	0,3
0,	0,1	0,1	12'	0,05
1	>1	>1	13'	0,3
ο,:	\ 0,2	0,2	14'	0,1
1	>1	>1	15'	0,5
1	>1	>1	16'	0,5
1	>1	>1	17'	0,5
0,	0,1	0,1	18'	0,05
1	>1	>1	19'	0,3
0,	0,1	0,1	20'	0,05
1	>1	>1	21'	0,3
0,	0,1	0,1	22'	0,05
1	>1	>1	23'	0,3
0,	0,1	0,1	24'	0,05
1	>1	>1	25'	0,3
0,	0,1	0,1	26'	0,05
1	>I	>I	27'	0,3
0,	0,1	0,1	28'	0,05
1	>1	>1	29'	0,3
0,	0,1	0,1	30'	0.05
1	>\|	>1	3Γ	0,3
0,	0,1	0,1	32'	0,05
1	>1	>1	33'	0,3
0,	0,1	0,1	34'	0,05
	>1	>]	35'	0,3
0,	0,1	0,1	36'	0.05
1	>1	>1	37'	0,3
0,	0,1	0,1	38'	0,05
1	>1	>1	39'	0,3
0,	0,1	0,1	40'	0,05
1	>]	>1	4Γ	0,3
0,	0,1	0,1	42'	0,05
1	>1	>1	43'	0,3
0,	0,1	0,1	44'	0,05
1	>1	>]	45'	0,3
ο,	1 0,1	0,1	46'	0,05
1	>1	>1	47'	0,3
1	>1	>1	48'	0,4
	>1	>1	49'	0,4
	>1	>1	50'	0,4
	>1	>1	51'	0,4
	>1	>1	52'	0,4
	>1	>1	53'	0,4
	>1	>1	54'	0,4
	>1	>1	55'	0,5
	>1	>1	56'	0,5
	>1	>1	57'	0,5
	>1	>]	58'	0,5

0,1 0,1 >1 >1
0,1 0,1

0,1 0,1

0,1

0,1 0,1 >1 >1
0,2 0,2

0,1 0,1

0,1 0.1

>1 >1

0,1 0,i

>1 >1

0,1 0,1

ο,ι o;i

>1 >1
0,1 0,1

>1 >1
0,1 0,!

0,1 0,1 0,1 0,1

0,0!	0,05	0.1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0.1
0,01	0.4	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0.1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0,1	0,2
0,01	0,5	>1
0,01	0,5	>1
0,01	0,5	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0.1
.01	0,3	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0.05	0,1
0,01	0,3	>i
0.01	0.05	0,1
0.01	0.3	>1
0.01	0,05	0.1
0.01	0,3	>1
0.01	0,05	0.1
0.01	0.3	>1
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0,01	0.3	>1
0,0 i	0,05	0,1
0.01	0.3	>]
0.01	0.05	0.1
0,01	0,3	>1
0.01	0,05	0.1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0.01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0,05	0,1
0,01	0,3	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,4	>1
0,01	0,5	>1
0,01	0,5	>1
0,01	0,5	>1
0.01	0.5	>i

29

Fortsetzung

Präparat Nr.

Präparat

Nr.

	in
A	B
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5
0,01	0,5

59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76

59'	0,5
60'	0,5
61'	0,5
62'	0,5
63'	0,5
64'	0,5
65'	0,5
66'	0,5
67'	0,5
68'	0,5
69'	0,5
70'	0,5
TV	0,5
72'	0,5
73'	0,5
74'	0,5
75'	0,5
76'	0,5

Die Ergebnisse in Tabelle 17 zeigen, daß unter den Arbeitsbedingungen C, bei denen das Gemisch 10 Minuten bei 90° C gerührt, das gerührte Gemisch in Eiswasser schnell gekühlt und dann wieder auf Raumtempera- tür gebracht wird, die Gemische, die den Hilfszusatzstoff enthalten, und die Gemische, die den Hilfszusatzstoff nicht enthalten, die gleiche Löslichkeit haben, daß jedoch unter den Bedingungen B, bei denen die Gemische nach dem Rühren für 10 Minuten bei 90° C der Abkühlung auf Raumtemperatur überlassen werden, die Gemische, die die Hilfszusatzstoffe enthalten, eine höhere Löslichkeit haben als die Gemische, die die Hilfszusatzstoffe nicht enthalten.

Andererseits haben unter den Bedingungen A, bei denen 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt wird, die Dreikomponenten-Gemische, die die Hilfszusatzstoffe von vornherein enthalten, eine höhere Löslichkeit als die Zweikomponenten-Gemische, denen der Hilfszusatzstoff später in Form von wäßrigen Lösungen zugesetzt wird.

Claims

Patentanspruch:

1. Verfahren zur Herstellung wasserlöslicher Arzneimittelzubereitungen, enthaltend N⁴-Acylcytosinarabinosid, dadurch gekennzeichnet, daß man

A) 1 Gew.-Teil N⁴-Acylcytosin-arabinosid

B) 0,1 bis 20 Gew.-Teile eines Zusatzstoffes aus der Gruppe

a) polyäthoxylierte Ester von Hydroxyfettsäuren und Glycerin,

b) polyäthoxylierie Ester von Fettsäuren,

c) polyäthoxyliertes Lanolin und

d) Gallensäuren und

C) 0,1 bis 20 Gew.-Teile eines Hilfszusatzstoffesaus der Gruppe von Sacchariden, aliphatischen Polyolen, anorganischen Chloriden, anorganischen Bromiden, anorganischen Sulfaten und aromatischen Carbonsäuren und deren Salzen mischt.

2. Verfahren zur Herstellung von Arzneimittelzubereitungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man (A) und (B) in den vorbestimmten Mengenverhältnissen mischt, in einem Lösungsmittel löst, d;is Lösungsmittel abdampft und dann den Hilfszusatzstoff(C) und Wasserzum Rückstand gibt.

3. Verfahren nach den Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Acylrest in den N⁴-Acylcytosin-arabinosiden 14 bis 24 C-Atome enthält.

4. Verfahren nach den Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß es als Gallensäure Natriunidcsoxycholat oder Natriumdehydrocholat enthält.

5. Verfahren nach den Ansprüchen I oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als Lösungsmittel für die Bestandteile (A) und (B) Ketone, Ester, aliphatische Äther, cyclische Äther, Amide, Sulfoxydc, Alkohole. Basen oder Säuren verwendet.