CA1251000A - Dipeptides, leur preparation et les medicaments qui les contiennent - Google Patents

Abstract

L'invention concerne de nouveaux dipeptides répondant à la formule générale: <IMG> (I) dans laquelle R-CO représente un reste d'acide gras et les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (substitué le cas échéant par un radical phényle ou nitrophényle), étant entendu que l'alanine est sous forme L et que l'acide glutamique et ses dérivés sont sous forme D, ainsi que leurs sels métalliques pharmaceutiquement acceptableset leurs sels d'addition avec les bases azotées pharmaceutiquement acceptables. Ces nouveaux dipeptides sont des adjuvants immunologiques et des immunostimulants.

Description

.5~
La présente invention concerne de nouveaux d~peptides et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, ainsi qu'un procédé pour leur préparation.
Les parois bactériennes, par exemple les parois de mycobactéries, sont constituées essentiellement d'un pepti-doglycane formé dlacide N-acétylmuramique sur lequel sont fixés des peptides renfermant l'enchainement L Ala-D Glu-DAP. Par ailleurs, les parois bactériennes sont très riches en lipic1es dont certains sont libres et extractibles et d'autres sont liés à la structure de la paroi et sont constitués par des acides mycoliques (acides gras géants, ~-ramifiés et ~-hydroxylés).
L'ensemble des constituants de la paroi cellulaire forme une structure covalente composée d'un peptidoglycane et d'un mycolate d'arabinogalactane liés en~re eux par des liaisons phospho-diesters. Ces parois bactériennes présentent la plupart des propriétés bioLogiques des cellules entières lorsqu'elles sont associées à une huile minérale ou végétale et administrees après mise en suspension dans du solute physiologique.
Dans les brevets belges 821 385, 852 34a et 852 349 sont décrits des peptides, couplés avec l'acide N-acétylmura-mique, qui contiennent l'enchaInement L Ala-D Glu ou L Ser-D
Glu et qui sont efficaces comme adjuvants immunologiques et comme agents antiinfectieux.
Dans le brevet français 75~Z4440, publié sous le numéro 2 320 107, sont décrits des produits de couplage entre un acide gras et un saccharide heptapeptide isolé à partir d'une mycobactérie contenant une cire "D" et qui peuvent etre représentés par la formule suivante NAG - NIM ------~ NAG - N~M
Ala Ala Glu Glu (R COOH)n DAP DAp Ala m dans laquelle, en particulier:
NAG = N-acétylglucosamine; NAM = acide N-acétyl-muramique; et R = radical alcoyle contenant 9 à 17 atomes de carbone.
Ces produits sont des adjuvants immunologiques de la production d'anticorps et de l'hypersensibilité retardée capables d'agir seuls,- c'est-à-dire sans qu'il soit nécessaire de les - administrer en solution huileuse.
Tous ces produits se caractérisent par la présence d'acide N-acétylmuramique clui, d'après KASUMOTO et al., Tetrahedron Letters, 49, 4899 (1978), est consideré comme lié
à l'activité immunologique.
Il a maintenant été trouvé que les peptides répondant à la formule générale (I);
R - CO - NH - f~ co NH - CH - CO - Rl (I) CH3 CH2CH2 - CO Rl présentent, malgré l'absence~d'acide N-acétylmuramique, des propriétés adjuvantes et immunostimulantes remarquables. Par ailleurs ces composés, qui sont bien définis, peuvent être obtenus aisément avec la pureté suEEisante requise pour l'emploi en thérapeutique.
Dans la formule géné~rale (I), R-CO représente un reste d'acide gras et les symboles R1, identiques ou di~férents, représentent un radical hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant l à 4 atomes de carbone (substitué le cas échéant par un radical phényle ou nitrophényle), étant entenclu que l'alanine ~NH2-CI-I(CH3)COOHJ est sous forme L et que l'acide glutamique fNH2-CH(CH2CH2COOH)COOH~ ou ses dérlvés (amides, esters) sont sous forme D.
Dans le reste d'acide gras R-CO, R représente cle pré-férence un atome d'h~drogène ou un radical alcoyle contenant l à 44 atomes de carbone (substitué le cas échéant par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle), un radical alcényle contenant

2 à 29 atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une doub].e liaison ou un reste dlacide mycolique tel que rencontré dans la structure de la paroi bactérienne des mycobactéries, de Nocardia ou de corynébactéries.
Selon la présente invention, les nouveaux dipeptides de formule générale (I) peuventêtre obtenus selon les méthodes gënéralement utilisées en chimie peptidique. Les différentes réactions sont mises en jeu~après blocage par des groupements protecteurs convenables des fonctions amine ou ac.ide qui ne doivent pas participer à la réaction et sont suivies éventuel-lement du déblocage de ces fonctions.
Généralement, les nouveaux dipeptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un acide de formule générale:
R - COOH (II) dans laquelle R est défini comme précédemment ou d'un dérivé
activé de cet acide, sur un dipeptide de formule genérale:
H2N - ~H - CO - NM - ~H - CO - Rl (III) . CH3 ~H2CH2 - CO Rl dans Iaquelle les symboles Rl, identiques ou différents, sont définis comme précédemment, suivie le cas échéant, en fonction des signifi.cations de Rl, du remplacement d'un ou des radicaux Rl par un radical hydr-oxy ou amino.
Lorsque dans la Eormule générale (III), les radicaux : Rl, identiques ou différents, représentent un radical amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éven-tuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, la condensation de l'acide de formule générale (II) sur le dipeptide de formule générale (III) peut être effectuée en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexyl-carbodiimide en opérant dans un solvant organique tel que le chl.orure de méthylène ou le diméthylormamide a une température comprise entre -10 et ~30C.
Lorsque dans la formule genérale (III), les radicaux Rl représentent chacun un radical hydroxy ou bi.en l'un des radicaux Rl représente un radical hydroxy, l'autre représentant un radical amino ou alcoyloxy défini comme précédemment, il est nécessaire d'activer l'acide de formule générale (II) préa-lablement à son action sur le dipeptide de formule générale ~III).
Comme acide activé, il est particulièrement avantageux d'utiliser un halogénure d'acide ou un anhydride mixte qui est généralement préparé in situ par action d'un halogénoformiate d'alcoyle (de préférence, le chloroformiate d'isobutyle) sur l'acide de formule générale (II) en présence d'une base.
- Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale (II) sous forme d'un halogénure, plus particulièrement le chlorure, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que l'éther diéthylique ou le chlorure de méthylène, en présence d'une base ~minérale telle que la soude, ou organique, telle que la trié-thylamine), à une tempé~rature comprise entre ~ et 30C. Géné-ralement, le dipept.ide de formule générale (III) est utilisé
sous forme d'un sel tel que le chlorhydrate.
Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale ~II) sous forme d'un anhydride mi.xte, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le chloroEorme, le toluène ou le diméthylformamide ou dans un milieu hydroorganique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre -10 et ~30C. Généralement, le dipeptide de formule générale (III) est utilisé sous forme d'un sel tel que le chlorhydrate.
Les nouveaux dipeptides de formule générale (1), dans laquelle les symboles Rl, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, peuvent etre obtenus à partir d'un dipeptide de formule générale (I) dans laquelle l'un des symboles Rl représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy défini comme précédemment et l'autre représen-te un radical hy-droxy ou alcoyloxy défini comme précédemment, selon les méthodes habituelles qui permettent de transformer soit un groupement ester en groupement carboxyou carbamoyle soit un groupement carboxy en groupement carbamoyle.
Généralement, la transformation d'un groupement ester en groupement carboxy peut s'effectuer soit par saponification dans des conditions douces soit par h~drogénolyse, en particulier lorsque l'un au moins des symboles RI représente un radical benzyloxy ou nitrobenzyloxy.
Lorsque l'on effectue une hydrogénolyse au moyen de l'hydrogène, on opère généralement dans un solvant organique approprié tel que l'acide acétique (éventuellement en mélange ave~ un autre solvant organique ~el que le méthanol) ou dans un milieu hydroorganique en présence d'un catalyseur, tel que le palladium, par e~emple le palladium sur noir, en opérant à une température voisine de 20C et sous une pression voisine de 760 mm de mercure.
Généralement, la transformation d'un groupement ester ou carboxy en groupement carbamoyle s'effectue au moyen de l'ammoniac anhydre en solution dans un solvant organiqué. Lorsque l'on fait réagir l'ammoniac sur un produit de formule générale (I) dans laquelle l'un au moins des symboles Rl représente un radical alcoyloxy défini comme précédemmentl la réaction s'effectue avantageusement en opérant dans le méthanol. L,orsque --5~

~ 2~9~0 ~ ~

l'on fait réagir l'ammoniac sur un produit de formule générale (I) dans laquelle l'un au moins des symboles Rl représente un radical hydroxy, il est nécessaire d'activer préalablement la ou les fonctions acide, généralement sous forme d'un ar.hydride mixte préparé in situ par action d'un halogénoformiate d'alcoyle tel que le chloroformiate d'isobutyle~ puis d'opérer dans les conditions décrites ci-dessus pour l'action d'un dérivé activé
d'un acide de formule générale (II), sous forme d'anhydride mixte, sur le dipeptide de formule générale ~I.II).
Le dipeptide de formule générale (III) peut être obtenu selon des méthodes connues par condensation de la L-alanine dont la fonction amine est protégée sur l'acide D-glutamlque dont les fonctions acides sont éventuellement pro-tégées, puis élimination du groupement protecteur de fonction amine~ .
- . Selon l'inventi.on, les nouveaux dipeptides de ~ormule générale (I) peuvent être ég~alement obtenus par aation d'un dérivé de la L-alanine de formule générale:
R - CO - NH - ~H - COOH (IV) ~1-13 dans laquelle R est défini comme précédemment, sur un dérivé
de l'acide D-glutamique de formule générale:
H N CH CO R (V) CH2CH2 - CO Rl dans laquelle les symboles Rl, ident:iques ou différents, sont déflnis comme précédemment, suivie le cas échéant, selon les significations de Rl, du remplacement d'un ou des radicaux Rl par un radical hydroxy ou amino.
Il est particulièrement avantageux d'activer la fonction acide du dérivé de la L-alanine de formule générale (IV), généralement sous forme d'un anhydride mixte préparé in situ ~'~5~

préalablement à l'action sur le produit de form~lle ~énérale (V), en particulier si l'un au moins des symboles ~1 représente un radical hydroxy. Lorsque les fonctions acides de l'acide D-glutamique sont protégées, c'est-à-dire si les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical amino ou alcoyloxy défini comme précédemment, la condensation de l'acide de formule générale (IV~ sur le dérivé de l'acide D-glutamique de formule générale (V~ peut etre effectuée en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide.
Généralement, la condensation du dérivé de la L-alanine de formule générale (IV) sur le dérivé de l'acide D-glutamique de formule générale (V) s'effectue dans les conditions décrites ci-dessus pour la condensation de l'acide de formule générale ~II) sur l'aminoacide de formule générale (III).
Le dérivé de la L-alanine de formule générale (IV) peut être obtenu par action d'un acide de formule générale ~II) ou d'un dérivé activé de cet~acide sur la L-alanine don~ la fonction acide est éventuellement protégée sous Eorme d'ester, suivie le cas écheant de l'élimination du groupement protecteur de la fonction acide.
~Lorsque la fonction acide de la L-alanine est protégée, .~ .
la condensation de l'acide de formule générale (II) est géné-ralement effectuée en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide en opérant dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène ou le diméthylforma-mide à une température comprise entre -10 et -~ 30C.
Lorsque la fonction acide de la L-alanine est libre, il est nécessaire d'activer llacide de ormule générale (II) préalablement à son action sur la L-alanine. Comme dérivé
activé de l'acide de formule yénérale (II), il est particulière-ment avantageux d'utiliser un halogénure d'acide ou un anhydride ~æ~

mixte. On opère alors dans le~ conditions décrites précédem-ment pour l'action d'un acide de formule générale (II) sur un dipeptide de formule générale (III).
Selon l'invention, les nouveaux produits de ~ormule générale (I) dans laquelle les symboles Rl, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étantun radical hydroxy et R est.défini comme précé-demment peuvent être obtenus par synthèse peptidique de Mer-rifield en phase solide.
Selon l'invention, les produits de formule générale (I) tels que définis ci-dessus peuvent être obtenus en réalisant la succession des phases suivantes:
1) fixation du groupement a- ou ~- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction amine est protégée et dont la fonction ~- ou ~- carboxylique, selon le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester, sur un support approprié, 2) élimination du groupement protecteur de la fonction am.ine sans toucher à la liaison acide glutamique-support et, éven-tuellement, à la fonction ester du deuxième groupement carboxy-lique de l'acide D glutamique,

3) condensation de la L alanine dont la fonction amine est protégée par un gro~pement protecteur convenabl.e sur l'acide D glutamique fixé sur son support,

4) élimination du groupement protecteur de la fonction amine du reste L alanine sans toucher à la liaison acide D glutamique-support et, éventuellement, à la fonction ester du deuxième groupement carboxylique de l'acide D glutamique,

5) condensation de l'acide gras sur le dipeptide-suppor~ obtenu,

6) coupure de la liaison acide D glutamique-support avec éven-tuellement élimination du groupement protecteur de la fonction ~- ou ~- carbox~lique de l'acide glutamique, et o~

7) séparation du dipeptide de formule générale (I) ainsi obtenu.
Les supports qui conviennent particullèrement bien sont les copolymères styrène-divinylbenzène chloromé-thylés ou hydroxyméthylés. De préférence, les copolymères styrène-divinylbenzène (98~2 ou 99~1) chlorométhylés sont utilisés.
La fixation de l'acide D glutamique convenablement protégé sur le support chlorométhylé s'effectue selon les méthodes habituelles en faisant réagir llaminoacide, en solution dans un solvant organique tel que l'éthanol, sur la résine en présence d'une base organique telle que la triéthylamine.
Il est particulièrement avantageux de chauffer le mélange réac-tionnel jusqu'à une température voisine de la température d'ébullition du solvant.
Les groupements protecteurs de la fonc-tion amine et, éventuellement, d'une des fonctions acides de llacide D
glutamique doivent être choisis de telle manière que l'elimina-tion du groupement protecteur cle la fonction amine s~efEectue sans toucher ni à la liaison aminoacide-support ni au groupement protecteur de la fonction acide.
Généralement, la fonction acide de l'acide D glutamique qui doit être protégée, est sous la forme d'ester benzy~ique qui s'élimine en milieu acide au moyen, par exemple, d'un mélange acide bromhydrique-acide trifluoroacétique anhydre et le groupe-ment protecteur de la fonction amine est le radical t.-butyloxy-carbonyle qui s'élimine, par exemple, au moyen d'un mélange acide trifluoroacétique-chlorure de méthylène.
~ La L alanine, dont la fonction amine est protégée, de préférence par un groupement t.-butyloxycarbonyle, est condensée sur l'acide D glutamique-support selon les méthodes habituelles utilisées en chimie peptidique.

~.51~

, Généralement, la réaction est effec-tuée en présence d'un agent de condensation tel qwe le dicyclohexylcarbodiimide dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène.
L'élimination du groupement protecteur de la fonction amine du reste L alanyle ~'effectue dans les conditions indi-quées précédemment pour~l'élimination du groupement protecteur de la fonction amine de l'acide D glutamique.
L'acide gras est conde~nsé sur le dipeptide-support ainsi obtenu selon les méthodes habituelles et en particulier selon celle qui est indiquée précédemment pour la condensation de la L-alanine sur l'acide D glutamique-support.
La coupure de la liaison acide D glutamique-support, qui est de nature ester benzylique, et éventuelIement l'élimi-nation du groupement protecteur de la fonction carboxylique de l'acide D glutamique sont généralement effectuées simul-tanément. De préférence, on utilise un mélange acide bromhy-drique-acide trifluoroacétiqlie anhydre.
Le produit de formule générale (I) est séparé c1u mélange réactionnel selon les méthodes habituelles. ~e support est separé par filtration ek le dipeptide de forrnule générale (I) est séparé du filtrat après concentration à sec et après purification selon les méthodes physicochimiques.
Selon une variante du procédé décrit ci-dessus, il est possible de condenser sur l'acide D glutamique-support la L alanine dont la fonction amine est protégée par un reste d'acide gras tel que défini précédemment. Dans ces conditions, la condensation de la L alanine sur l'acide D glutamique-support conduit directement au produit de formule genérale (I) qui est séparé après coupure de la liaison acide D glutamique-support et élimination éventuelle du groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D glutamique.

Selon une autre varianke du procédé décrit ci-dessus, il est possible de fixer sur un support approprié le dipeptide provenant de la condensation de la L alanine sur l'acide D
glutamique puis de condenser l'acide gras sur le dipeptide ainsi fixé et enfin séparer le produit obtenu. Lors de la fixation du dipeptide sur le support, il est nécessaire de protéger la fonction amine du reste L alanyle et éventuellement la fonction a-acide de l'acide ~ glutamique en utilisant de préfé-rence les groupements protecteurs indiqués précédernment. Dans ces conditions, la condensation de l'acide gras sur le dipeptide fixé sur son support, dont le groupement protecteur de la fonc-tion amine a été ~liminé, conduit directement au produit de formule générale (I) qui est séparé après coupure de la liaison acide D glutamique-support et élimination éventuelle du grou-pement protecteur de la fonction acide de l'acide D glutamique.
Les nouveaux dipeptides de formule générale (I) peuvent être éventuellement purifiés par des méthodes physiques telles que la cristallisation ou la chromatographie.
Les nouveaux pro~uits selon l'invention peuvent etre transformés en -sels métalliques ou en sels d'addition avec les bases azotées selon la nature du substituant Rl~
Les~sels métalliques et les sels d'addition avec les bases organiques peuvent être obtenus par action des nouveaux composés sur des bases dans un solvant approprié. Généralement, on solubllise le produitdans l'eau par addition de la quantité
théorique de base pUiS on lyophilise la solution obtenue.
Les nouveaux composés selon la présente invention sont des adjuvants etdés stirnulants de l'imrnunité: ils augmentent les réactions d'hypersensibilité et/ou la production d'anticorps circulants vis-à-vis des antigènes avec lesquels ils sont administrés et ils stimulent de maniere non spécifique des o~

réactions de déense contre certaines inections (par exemple l'infection de la souris par la bactérie intracellulaire Listeria monocytogenes).
In vitro, ils sont actifs à des concentrations molaires gén~ralement comprises entre 10-3 et 10 8, en parti-culier dans les tests suivants:
- stimulation de la synthèse de llADN (pouvoir mitogène) selon la technique de G. MARCHAL~ ~nn. Immunol. (Inst. Pasteur), l2S C, 519 (1974j;
- stimulation de la réaction aLlogénique (réaction d'histo-incompatibilité) selon la technique de R.W. DUTTON, J. çxp.
Med., 122; 759 (1966) et A.B. PECK et F.H. BACH, J. Immunol.
Methods, 3, 147 (1973);
- stimulation de la production d'anticorps selon la technique de P.H. KE~ESIUS, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. (N~Y.), 135, 155 (1970) et H. VAN DIJK et N. BLOKSMA, J. Immunol. Methods, 14r 325 (1977);
- augmentation du nombre de macrophage~ phagocytaires ~elon la technique de J. MICH~ et coll., J. exp. Med.~ ~4~, 1465 (1976);
- stimulation de l'activlté phosphatase acide et N-acétylylu-cosamidinase (enzymes lysosomiales des macrophages) en l'absence d'une augmentation de la déshydrogénase lactique selon la technique de P. DAVIES et coll.l J. exp. Med., 139, 1262 (1974).
In vivo, chez la sourisr à des doses comprises entre l et 30 mg/kg,-ils augmentent l'hypersensibilité retardée et la production d'anticorps en particulier selon la technique de T.E. MILLER et coll., J. Nath. Cancer Inst., 51, 1669 (1973).
Chez le cobaye, ils aug~entent la réaction d'hypersen-sibilité et la production d'anticorps contre la gammaglobuline ~5~CI10 bovine couplée avec l'haptène ~initrophénol selon la technique de F. FLOC'H et coll., Immunol. Communic., 7, 41 (1978).
Chez la souris, ils stimulent les réactions de défense contre l'infection de la souris à Listeria monocytogenes à des doses comprises entre 1 et 100 mg/kg selon la technique de R.M. FA W E et B. HEVIN, C.R. Acad. Sci. (D), 285, 1589 (1977).
Chez la souris, ils stimulent le pouvoir d'élimination du carbone co]lo~dal par le système réticulo-endothélial selon la technique de B.N. HALPERN et coll., Ann. Institut Pasteur,

8~, 582 (1951).
Chez le lapin, à des doses généralement comprises entre 0,1 et 3 mg/kg, ils stimulent~la formation d'anticorps sériques anti-virus grippal selon la technique de G.H. WERNER
et coll., Biomedicine, 22~ 440 (1975).
D'un intérêt tout particulier sont les produits de formule générale (I) dans laquelle les symboles R~, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino ou un radical benzyloxy et R-CO représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone.
Les exemples suivants,donnés a titre non limitatif, montrent comment l'invention peut être mise en pratique.
Les produits obtenus peuvent former des complexes avec les métaux alcalins et alcalino-terreux; il en résulte que les résultats de l'analyse élémentaire des produits peuvent sensiblement s'écarter des valeurs théoriques. Cependant la structure des produits est confirmée par le rapport C/N qui est en accord avec la théorie, par la teneur en aminoacides et par leur homogénéité en chromatographie sur couche mince de silicagel~
Exemple 1 -~, ~13-.. . . .

~LZ~O~

A une solution de 12,75 g de chlorhydrate de L
alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 75 cm3 de soude lN~ on ajoute simultanément en 37 minutes f 8 g de chlorure de lauroyle dissous dans 75 cm3 d'éther et 37,4 cm3 desoude lN de facon à malntenir le pH du mélange réactionnel compris entre 8 et 9~
Le mélange est agité pendant l heure Z0 minutes. Après décan-tation, la phase aqueuse est acidifiée à pH 2 par addition d'acide chlorhydri~ue lN (~0 cm3) et extraite 3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques réunis sont lavés par 25 cm3 d'eau, séchés sur du sulfate de sodium anhydre et concentrés à sec ~ous pression réduite (20 mm de mercure) à 45C. On obtient ainsl 7,4 g d'un solide blanc que l'on chromatographie sur 80 g de gel de silice neu-tre contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue suc-cessivement par 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8/2 en volumes) et 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (l/l en volumes), e~ recueillant des fractions de 50 cm3. La fraction 1 est concentrée à sec sous pre~sion réduite (20 mm de mercure) à 45C. On obtient ainsi 2 g de N-lauroyl L alanyl-~-D glutamate de benzyle Eondant à 130C.
Les fractions 2 à 4 sont de meme concentrées à sec et chroma-tographiées sur 100 g de gel de silice neutre (0,063 0,20 mm) contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue par 250 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions l et 2 sont concentrées à sec sous pression reduite (20 mm de mercure) à 45C. On obtient ainsi 4,07 g de N-lauroyl L alanyl-a D glutamate de benzyle fondant à 130C dont les caractéristiques sont les suivantes:
Rf = 0,9 ~silicagel; n-butanol~pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)J

Analyse calc. % C = 66,10 H = 8,63 N = 5,71 tr. 66,3 8,8 5,6 ~x~

Le chlo~hydrate de L alanyl-~-D glutamate de benzyJ.e peut être préparé de la fa~on suivante:
On dissout 97,16 g de N-t.-butyloxycarbonyl L
alanyl-~-D glutamate de benzyle dans 970 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7N dans l'acide acéti~ue. On agite pendant 2 heures, puis on ajou~e rapidement 3,8 litres d'éther anhydre et on laisse.reposer pendant 2 heures à 0C.
Le précipité huileux qui s'est formé, séparé du surnageant par . décantation, est dissous dans 500 cm3 d'acétone; la solution ainsi obtenue est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C. On obtient ainsi 88,9 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle.
Le N-t-.-butyloxycarbonyl ~ alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé selon la méthode de E. BRICAS et coll., Biochemistry 9, 823 (1970).
Exemple 2 -. On.ajoute 31 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à une température voi~ine de 10C, de 47~7$ g d'acide lau.rique dans 3 litres de dioxan.ne et 33,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 10C, puis on ajoute en 10 minutes une solutlon, refroidie à 10C, de 88,95 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle, dans un mélange de 1 litre de dioxanne, de 476 cm3 d'eau et de 476 cm3 de soude lN. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à loQC, puis pendant 18 heures a une température voisine de 20C; il est ensuite dilué par addition de 4 litres d'eau, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique lN (environ 475 cm3) et conservé pendant 2 heures à 0C. Le précipite obtenu est séparé par filtration, lavé successivement par 500 cm3 d'eau et 500 Gm3 dléther, puis séché sous pression réduite ~20 mm de mercure) à 20C~ Le produit e.st mis en suspension ~zr?~

dans 800 cm3 d'éther, agité pen~ant 1 heure, séparé par ~
tration et lavé 2 f~is par 200 cm3 a~ total d'éther. Après séchage sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20C, on obtient 71,79 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 130C.
Rf = 0,77 ~ilicagel; acetate d ' éthyle-méthanol' (4/1 en volumes)~.
Exemple 3 -On ajoute goutte à goutte en 30 minutes 5,49 g de chlorure de la~royle dissous dans 150 cm3 de chlorure de méthylène à un mélange, re,froid.i vers 5C, de 8,46 g de chlorhy-drate de L alanyl-D glutaminate de benzyle dans 300 cm3 de chlorure de méthylène et 4,3 cm3 de triéthylamine. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures 1/4 à 20C environ, puis on l'extrait 3 foi.s par 1500 cm3 au total d'eau. On concentre la phase organique à 100 cm3 environ sous pression réduite (20 m~ de mercure) à~40C. Le précipité formé dans le concentrat est séparé par ~iltration et séché. On obt:ient ainsi 5,3 g d'une poudre blanche à laquel}e on joint 0,8 g d'un produit préparé.dans les memes conditions. Le mélange est dissous dans 100 cm3 de méthanol bouillant et la solution ob-tenue est laissée'au repos pendant 3 heures à 0C. Les cristaux formés s.ont SépaLéS par filtration et séchés sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50C. On,obtient ainsi 4,64 g de N-lauroyl L alanyl-D glutaminate de benzyle fondant à
182C, Rf = 0,80 ~ ilicagel; acétate dléthyle-méthanol (1/1 en volumes ~
Analyse: Calc. % = C 66,23 H 8,~5 N 8,58 . Tr. = 66,1 8,8 8,4 Le chlorhydrate de L alanyl-D glut,aminate de benzyle ~O~

peut être préparé de la façon suivante:
On dissout 5,2 g de N-t.-hutyloxyca~bonyl L alanyl-D
glutaminate de benzyle dans 60 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7N dans l'acide acétique. On agite pendant 1 heure, puis on verse le mélange réactionnel dans 300 cm3 d'éther. On décante la phase éthérée. On ajoute 1 litre d'éther sur la gomme restante que l'on triture, on décante de nouveau la phase éthérée et on reprend le résidu par 200 cm3 de méthanol. I.a solution obtenue est concentrée à sec sous pression réduite ~20 mm de mercure, puis 0,2 mm de mercure) à
50~. On obtient ainsi 4,3 g de chlorhydrate de L alanyl-D
glutaminate de benzyle sous forme de meringue.
Le N-t.-butyloxycarbonyl L alanyl-D glutaminate de benzyle peut être préparé selon la méthode de S. KUSUMOTO
et coll., Bull. Chem. Soc. Japan, 49, 553 (1976).
- Exemple 4 -On dissout 3,7 g de N-lauroyl L alanyl-D glutaminate de benzyle dans un mélange de 1 litre de méthanol, de 400 ~m3 d'acide acétique et de 40 cm3 d'eau. On ajoute 3,7 g de pal-ladium sur noir tà 3 ~ de palladlum) et on ~ait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. On filtre le mélange réactionnel et le filtrat est diIué par addition de 3 litres d'eau. On sépare I'insoluble par filtration et le sèche sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C. On obtient ainsi 2,3 g de N-lauroyl L alanyl-D glutamine fondant à 170-172C.
Rf = 0,83 ~ ilicagel; méthano~
Analyse: Calc. % = C 60,12 H 9,33 N 10,52 Tr. = 60,1 -8,8 10,5 Exemple 5 -On dissout 500 mg de N-lauroyl L alanyl-~-D glutamate de benzyle dans 25 cm3 d'un mélange méthanol-acide acétique-eau oo~

(25/l/l en volumes). On ajoute 500 mg de palladiu~ sur noir (à 3 ~ de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hy-drogène pendant 2 heures. On filtre le mélange réactionnel et le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercurej à 45C. On obtient ainsi 460 mg d'un solide blanc-crème auquel on ajoute 690 mg de produit préparé dans les mêmes conditions. ~e mélange est dissous dans 10 cm3 de méthanol bouillant et, à la solution ainsi obtenue, on ajoute 5 cm3 d'eau.
Après 20 heures de repos à 20C environ, les cristaux blancs apparus sont séparés par filtration, lavés par 5 cm3 d'un mélange méthanol-eau (2/l en volumes) puis séchés sous pression réduite (0,2 m~ de mercure) à 50C. On obtient ainsi 770 mg d'acide N-lauroyl L alanyl~D glutamique fondant à 138-142C.
Rf = 0,61 ~silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)~
Analyse: Calc. % = C 59,98 H 9,06 N 6,99 O 23,97 Tr. ~= 59,7 9,0 7,3 24,1 Exemple 6 -On ajoute 2,54 cm3 de chloroformiate dlisobutyle dans une solution, maintenue à 0C, de 3,9 g d'acide laurique dans 156 cm3 de toluène anhydre et 2,7 cm3 de triéthylamine. ~e mélange est agité pendant 20 minutes à 0C, puis on ajoute - une solution, refroidie à 0C, de 6,7 g de chlorhydrate de L alanyl-D isoglutaminate de benzyle dans 52 cm3 d'eau et 2,7 cm3 de triéthylamine. Le mélan~e réactionnel est agité
pendant 65 heures à une température voisine de 20C. On obtient unemasse réactionnelle d'aspect gélatineux à laquelle on ajoute 150 cm3 d'acétate d'éth~le. Le précipité est séparé par fil-tration, lavé par 30 cm3 d'eau puis séché. On obtient 7,6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle sous forme d'une poudre blanche. La phase aqueuse du filtrat précédent aoo est extraîte 2 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'é~hyle, cette phase acétate d'éthyle est réunie avec la phase organique du filtrat, lavée par 125 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N, 120 crn3 d'eau, séchée sur sul~ate de magnésium puis concentrée à
sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C. On obtient à nouveau 1,5 g de N-lauroyl L aIanyl-D isoglutaminate de benzyle. Le produit (7,6 g et 1,5 g) est recristallisé dans 120 cm3 de méthanol. On obtient ainsi 6,6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle fondant à 169C.
Rf = 0,13 ~silicagel; acétate d'éthyl~
Le chlorhydrate de L-alanyl-D-isoglutaminate de benzyle peut être préparé selon le procédé de S. KUSUMOTO, Bull. Chem. Soc. Japon 49, 533 (1976).
Exemple 7 -On dissout 6,6 g de N-lauroyl I, alanyl-D isoglutaminate de benzyle dans 330 cm3 d'acide acétique. On ajoute 6,6 g de palladium sur noir (à 3 ~de palladium) puis on fai-t passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après ~ tration du mélange réactionnel, on verse le Eiltrat dans 3 litres d'eau.
Après 2 heures de repos à 0C, le précipité apparu est séparé
par filtration, lavé 2 fois par 80 cm3 au total d'eau, puis séché. On obtient ainsi 5,16 g de produit auquel on ajoute 0,5 g d'un produit obtenu dans des conditions analogues. Ce mélange est dissous dans 90 cm3 de méthanol bouillant et à
la solution obtenue on ajoute 45 cm3 d'eau. Apres 2 heures de repos à une température voisine de 20C, les cristaux apparus sont séparés par filtration, lavés 2 fois par 60 cm3 au total d'eau et séchés sous pression réduite (20 mm de mercure). On obtient ainsi 5,1 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine fonda~lt à 163C.

Rf = 0,1~ ~ ilicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4/1 en volumes)~
Analyse: Calc~ % = C 60,12 H 9,33 N 10,52 Tr. = 60,2 9,5 10,9 Exemple 8 -On ajoute 0,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dansune solution, maintenue à -10C, de ~ g de N-laurOyl L alanyl-~-D glutamate de benzyle dans 20 cm3 de chloroforme et 0,57 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 15 minutes entre -10C et -2C, puis on fait passer un courant d'ammoniac dans le mélange réactionnel pendant environ 6 heures. On laisse ensuite reposer pendant 68 heures à 20C environ. On concentre à sec le mélange réactionnel sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C. On reprend le résidu par 50 cm3 d'isopropanol bouillant.- Un très léger insoluble est séparé par filtration.
Après refroidissement du filtrat pendant 2 heures à 0C, le précipité appà~u est ~éparé par filtratlon puis séché. On obtient 0,6g g de N-lauroyl L alanyl-D glutamamide fondant à
226-228C.
Rf = 0,75 ~silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (1/1 en volumes)~7 Analyse: Calc~ ~ = C 60,27 H 9,61 N ]4,06 Tr. = 59,3 9,6 14,1 Exemple 9 -On ajoute 0,79 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, ~naintenue vers -5C, de 1,09 g d'acide phényl-5 valérique dans un mélange de 50 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,86 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 35 minutes à une température voisine de -5C, puis on ajoute une solution, re-froidie à 0C, de 2,1 g de chlorhydrate de L
alanyl-~-D glutamate de benzyle dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne, 10 cm3 d'eau et 1,72 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à 20C environ, puis concentré à
sec sous pression réduite (20 mm de merc~re) à 40C. Le résidu obtenu est dissous dans 100 cm3 d'eau et la solution obtenue est acidifiée à pH 2 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique lN. Le précipité apparu est séparé par filtra-tion, lavé 2 fois par 50 cm3 au total d'eau et 2 fois par 50 cm3 au total d'éther. Après séchage, on obtient ainsi 1,98 g de N-(phényl-5 valéryl) L alanyl-~-D glutamate de benzyle fondant à 128~C.
Rf = O,72 f~silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes~7 Exemple 10 -On dissout 1,8 g de N-(phényl-5 valéryl) L alanyl-~-D
glutamate de benzyle dans 100 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,8 g de palladium sur noir (à 3 ~ de palladium) et on fait passer un courant d'hydrogène pendant 4 heures. On filtre le mélange réactionnel. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite ~20 mm de mercure) à 60C. Le résidu est repris par 100 cm3 d'acetate d'éthyle bouillant; l'insoluble est éliminé par filtration. I,e filtrat obtenu est dilué par addition de 400 cm3 d'oxyde d'isopropyle. Après 2 heures de repos à 0C, les cristaux apparus sont séparés par filtration et séchés. On obtient ainsi 0,66 g d'acide N-~phényl-5 valéryl) L alanyl-D glutamlque fondant entre 135C et 140 C (fusion pâteuse).
Rf = 0,55 ~silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes~J
Analyse: Calc. % = C 60,31 H 6,93 N 7,40 Tr. - 60,3 7,1 7,4 Exemple.11 -On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate dlisobutyle dans .

av une solution, maintenue à -1C, de 3,95 g d'acide octanoique dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine.
I,e mélange est agité pendant 20 minutes à~ -1 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0C, de g,45 g de chlorhydrate de L
alanyl-~-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3 de soude lN et 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité
pendant 1 heure à -1C puis pendant 20 heures à 20C environ.
Il est ensuite acidifié à pH l par addition d'acide chlorhy-drique lN. Le té~rahydrofuranne est évaporé sous pression réduite ~20 mm de mercure) à 45C, puis le concentrat est extrait par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique ainsi obtenue est lavée 2 fois par 50 cm3 au total d'acide chlorhydrique lN et par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45C. On obtient ainsi 10 g d'une huile jaune pâle qui est chromatographiée sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue avec de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractiorls de 100 cm3. Les fractions 7 à 9 réunies sont concentrées a sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'un mélange éther-éther de pétrole (P.E. = 35-G0 C) (l/4 en volumes), séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 3,27 g de N-octanoyl L alanyl-~-D
glutamate de benzyle sous forme d'une poudre blanche.
Rf = 0,56 ~silicagel; acétate d'éthyle-méthanol ~8/2 en volumes Exemple 12 -On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 0C, de 7,03 g d'acide palmitique dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine.
Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0 C, puis on ajoute ~la~o une solution, refroidie à 0C, de 9,45 g de chlorhydrate de L
alanyl-~-D ~lu~amate de bel~zyle dans un mélange de 54/8 cm3 de soude lN et de 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité
pendant 1 heure à 0C, puis pendant 18 heures à 20C environ;
il est ensuite acidifié à pH 1 par addition de 70 cm3 d'acide chlorhydrique lN. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 5 fois par 200 cm3 au total d'eau et séché On obtient ainsi 12,11 g d'une poudre blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successivement par 200 cm3 d'acétate d'éthyle, 300 cm3 diun mélange acétate d'éthyIe-méthanol (9/1 en volumes), 1,6 litre d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8/2 en volumes), 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (6/4 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les Eractions 5 à 23 réunies sont concentrées à
sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45C~ On obtient ainsi 5,18 g d'un solide que l'on triture dans 50 cm3 d'éther bouillant pendant 1/2 heure. Après refroidissement à une température voisine de 20C, l'insoluble est séparé par fil-tration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'éther puis séché.
On obtient ainsi 2,94 g de N-palmitoyl L alanyl-~-D glutamate de benzyle.
Rf = 0,77 ~silicagel; acétate d'éthyle~
Exemple 13 --On ajoute 0,48 cm3 de chloroformiate d'isobutyle àune solution, ~aintenue à -5C, de 1,12 g d'acide arachidonique dans 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,5~ cm3 de triéthylamine.
Le mélange est agité pendant 35 minutes entre -5C et 8C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0C, de 0,93 g de 3a chlorhydrate d'acide L alanyl-D glutamique dans un mélange de 20 cm3 de tétrahydrofuranne, 15 cm3 d'eau et 1,55 cm3 de trié-v thylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant l heure à une température voisine de -3C, puis pendant 20 heures à
une température voisine de 20C; il est dilué ensuite par addi-tion de 50 cm3 d'eau, acidifié à pH 2 par addition d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique lN, et extrait 3 fois par 75 cm3 au total d'éther. Les phases éthérées réunies sont concentrées à sec sous-pression réduite (20 mm de mercure~ à
30C. On obtient ainsi 2,5 g d'une huile jaune qui est chro-matographiée sur une colonne de 2,4 cm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,06~mm). On élue avec de l'acétate d'éthyle. On obtient ainsi 0,32 g d'acide N-arachidonoyl L alanyl-D glutamique fondant vers 90C (fusion pâteuse).
Rf = 0,70Csilicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)~
Le chlorhydrate de l'acide L alanyl-D glutamique peut être préparé selon la méthode de H. NGUYEN-HU~ et coll., ~ur.
J. Biochem., 66, 79 (1976).
Exemple 14 -On ajoute 0,48 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, maintenue à -10C, de 0,94 g d'acide palmitique dans 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,52 cm3 de triéthylamine.
- Le mélan~e est agité pendant 50 minutes entre -6 C et -8 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0C, de 0,93 g de chlorhydrate d'acide L alanyl-D glutamique dans un mélange de 20 cm3 de tétrahydrofuranne, 15 cm3 d'eau et 1,55 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agi-té pendant l heure à une température voisine de -6~'C puis pendant 2a heures à une température voisine cle 20 C; il-est acidifié ensuite à pH 2 par adclition d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 4N et dilué par addition de 300 cm3 d'eau. Le précipité forme est séparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 du total -2~-d'éther et séché. On obtient ainsi 1,08 g d'une poudre blanche que l'on dissout dans 120 cm3 d'acétate d'éthyle bouillant, filtre à chaud. Après 20 heures de repos à 4C environ, on sépare le précipité formé par filtration, le lave 2 fois par 20 cm3 au total d'acétate d'éthyle et le sèche à l'air. On obtient ainsi 0,93 g d'une poudre blanche que l'on dissout dans 15 cm3 d'acide acétique bouillant, filtre a chaud. Après 64 heures de repos à 4C environ, le précipité formé est séparé
par filtration, lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'acétate d'éthyle et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50C.
On obtient ainsi 0,5 9 d'acide N-palmitoyl L alanyl-D glutamique ~ondant à 155C.
Rf = 0,62 ~silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)7 Analyse: Calc. ~ = C 63,13 H 9,71 N 5,14 Tr. = 63,0 9,3 6,2 Exemple lS -On ajoute 1,93 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, maintenue à 25C, de 5,19 g d'acide docosanoique dans un mélange de 150 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2,1 crn3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à
25C, puis on ajoute une solution de 5,69 g de chlorhydrate de L alanyl-~-D glutamate de benzyle dans un mélange de 33 cm3 de soude lN et 17 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité
pendant 30 minutes vers 30C puis pendant 18 heures vers 20C
environ. Ensuite, on ajoute 100 cm3 d'eau et on acidifie à
pH l par addition de 35 cm3 d'acide chlorhydrique lN. On obtient un précipité que l'on sépare par filtration, lave 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20C. On obtient ainsi 6,53 g d'une poudre blanche.
On dissout 6 g de cette poudre dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne o~

contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (~0 mm de mercure) à 50C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 180 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par:
- 1300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1/1 en volumes), - 600 cm3 d'acéta~e d'éthyle, - 500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (95/5 en volumes), - 900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne ~9/l en volumes), - 800 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne ~8/2 - en volumes), - 1000 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (6/4 en volumes), - 900 cm3 d'un mélange aCéta~e d'éthyle-tétrahyclrouranne (4/6 en volumes), - 500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydroEuranne (2/8 en volumes), et 600 cm3 de tétrahydroEuranne en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 17 à 68 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C. On obtient ainsi 3,31 g de N-docosanoyl L alanyl-~-D
glutamate de benzyle.
Rf = 0,54 Csilicagel; acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (8/2 en volumes)~
~xemple 16 -On ajoute 3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -5C, de 3,605 g d'acide cyclohexyl-3 propionique dans un mélange de 100 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,23 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendan~ 20 ~2S;~

minutes à -5C, pUi8 on ajoute une solution, refroidie à 5C, de 7,96 g de chlorhydrate de L alanyl ~~D gl~tamte de benzyle dans un mélange de 46,2 cm3 de soude lN et 13,8 cm3 d'eau.
Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes à 0 C, puis pendant 2 jours à 20C environ. On évapore ensuite le~
tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à
50C. Le concentrat est extrait 2 fois par 80 cm3 au total d'éther, acidi~ié à pH 1 par addition de 50 cm3 d'acide chlor-hydrique lN. L'huile qui décante du milieu réacti~nnel est extraite4 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de magné-sium anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite ~20 mm de mercure) à 50C, on obtient une huile qui cristallise spontanément. Ces cristaux (7,3 g) sont dissous dans 40 cm3 d'acide acétique contenant 20 g de yel de silice neutre ~0,04-0,063 mm). On concentre à s~c le mélange et on charge l'ensembl0 sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 50 g de yel de ~ silice neutre ~0,04-0,063 mm). On élue par de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 100 cm3. La 4ème fraction est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à
45C. On obtient ainsi 1,86 g de N-lcyclohexyl-3 propionyl) L-alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 126-128C. Les fractions 3 et 5 sont réunies et concentrées à sec. Le solide amorphe est chromatographié sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 68 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 520 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1/1 en volumes) et 520 cm3 d'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 11 à 28 réunies, sont concentrées à sec sous pression rédui-te (20 mm de mercure) a 45C. On obtient ainsi ~,37 y de N-(cyclohexyl-3 OO

propionyl) L alany.l~~-D glutamate de benzyle fondant à 128-Rf = 0,14 ~silicagel; acétate d'éthyle~
Exemple 17 -On ajoute 4,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle àune solution, maintenue à 6C, de 7,59 g de N-(triméthyl-3l5,5 hexanoyl) L alanine dans un mélange de 400 cm3 de tétrahydro-furanne et 4,63 cm3 de triëthylamine. Le mélange est agité
pendant 20 minutes à -6C, puis on ajoute une solution refroidie lo à 3C de 9,06 g de chlorhydrate de ~-D glutamate de benzyle dans un mélange de 66,2 cm3 de soude lN et 14 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 minutes vers -5C~ puis penda.nt 66 heures vers 18C environ; il est ensuite acidifié a pH l par addition de 75 cm3 d'acide chlorhydrique lN. On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C~ Le concentrat est extrait 5 ~ois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle.- Les phases acétate d'éthyle, réunies, sont lavées par 40 cm3 d'acide chlorh~drique 0,1N et séchées sur sulfate de magnésium. Après Eiltration et concen-tration à sec ~ous pression réduite (20 mmd~ mercure) à 50C, on obtient 14,8 9 d'huile que l'on dissout dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle contenant 30 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).
On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C et on charge llensemble sur une colonne de 2~8 cm de diamètre contenant 280 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement.par 2 1 de cyclohexane, 1 l d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (95/5 en volumes), 1,5 1 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (90/10 en volumes) r 5 1 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (80/20 en volumes), 1,5 l d'un mélange cyclohexane~acétate d'éthyle (70/30 en volumes) et 3,5 1 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (50/50 ~5~0~

en volumes) en recueillant des fractions de 500 cm3. Les fractions 23 à 29 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm.de mercure) à 50C. On obtient ains.i 10,86 g de N-(triméthyl~3r5,S hexanoyl) L-alanyl-a-D glutamate de benzyle sous forme d'huile qui cristailise.
Rf = 0,37 ~sillcagel; acétate d'éthyle~
La N-~triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanine peut être préparée de la ~açon suivante.
On ajoute 6,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, maintenue à -5C, de 7,912 ~ d'acide triméthyl-.
3,5,5 hexano.~que dans un mélange de 125 cm3 de técrahydrofuranne et de 7 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant -20 minutes à -5C, puis on ajoute une solution, refroidie à
5C, de 4,495 g de L alanine dans 50 cm3 de soude lN. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers 0C, puis pendant 18 heures à 25C environ. On évapore ensuite le tétra-hydrofuranne sous pression r~duite (20 mm de mercure) a 50 C.
Le concentrat est extrai.t 2 foi.s par 40 cm3 au tota.l d'éther, acidifié à p~l 1 par addition de 55 cm3 d'acide chlorhydrique lN. Le précipité huileux qui se orme est extrait 5 fois par 250 cm3 au tota.l d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle sont réunies, lavées par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de magnésium.
Après filtration et concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C, on obtient 11,79 g d'huile ~ue l'on dissout dans 40 cm3 d'acétate d'éthyle contenant 20 g de gel de silice neutre (0,063-0i20 mm~. On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 12~ g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successive-ment par 600 cm3 de cyclohexane, 300 cm3 d'un mélange cyclohexane-o acétate d'éthyle (9S/5 en volumes), 300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d:éthyle ~90/10 en volumes), 300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (80/20 en volumes), 700 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (50/50 en volumes~, 300 cm3 d'acétate d'éthyle et 300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (90/10 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 17 à 28 ~éunies sont concentrées à
- sec sous pression réduite (20 mm de mercure~ à 4SC. On obtient ainsi 10,16 g d'huile que l'on dissout dans 25 cm3 d'éther.
Par addition de 150 cm3 d'éther de pétrole, on obtient une huile que l'on sépare par décantation. Après séchage sous pression réduite (0,2 mm de mercure), on obtient 7,59 g de N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanine.
Rf = 0,43 ~silicagel; acétate d'éthyle7 Exemple 18 -On ajoute en 1 heure 10 minutes 27,5 g de n-pentyl~2 hydroxy-3 nonanoate de succinimide dissous dans 644 cm3 de diméthoxy-1,2 éthane à une solution, maintenue à 7C, de 27,8 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 245 cm3 d'eau et 22,9 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est conservé à 20C pendant 20 heures puis à 60C pendant 5 heures. On évapore ensuite le diméthoxy-1,2 éthane sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C; le concentrat est acidifié à pH 1 par addition de 150 cm3 d'acide chlorhydrique lN et extrait 5 fois par 1,5 1 au total dlacétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois par 750 cm3 au total d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à
60C. On obtient ainsi 38,6 g d'huile que l'on dissout dans 200 cm3 d'acétate d'éthyle. On ajoute 13 g de dicyclohexylamine.
Après un repos de 20 heures à 4C, le solide b]anc formé est 30~

~ Zr 1000 séparé par filtration,.lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'acétate d'éthyle et 2 fois par 200 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20C. On obtient ainsi 22,4 g de poudre blanche auxquels on ajoute 1,9 g obtenus dans une opération similaire. On dissout ce mélange dans 500 cm3 d'eau; on ajoute à la solution aqueuse 200 cm3 d'acétate dléthyle-et 150 cm3 d'une solution saturée d'acide citrique. On sépare la phase organique, extrait la phase aqueuse 2 fois par 4Q0 cm3 au total d'acétate d'éthyle. .Les phases acétate d'éthyle réunies sont lavées 2 fois par 200 cm3 au total d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentr~es à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 60C. On obtient ainsi 17,4 g de N-~n-pentyl-2 hydroxy-3 nonanoyl) L alanyl-a-D glutamate de benzyle sous forme de pate beige.
Rf = 0,25 ~silicagel; acétate d'éthyle~
Le n-p0ntyl-2 hydroxy-3 nonanoate de succinimide peut être préparé de la façon suivante:
On ajoute erl 40 minutes, 27 g de dicyclohexylcarbodiimide dissous dans 300 cm3 de diméthoxy-1,2 éthane à une solution, maintenue à 0C, de 29,1 g d'acide n-pentyl-2 hydroxy~3 nona-. noique et 14,1 g de N-hydroxysuccinimide dans 300 cm3 de diméthoxy-1,2 éthane. Le mélange réactionne.l est agité à 0C
pendant 3 heures, puis conservé à 4C pendant 21 heures. Le.
précipité formé est séparé par filtration et lavé 2 fois par 100 cm3 au total de diméthoxy-1,2 éthane~ Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à
50C. Le concentrat est repris par un mélange de 300 cm3 d'oxyde d'isopropyle et 3 cm3 d'acide acétique. Après 2 heures de repos à 20C, le précipité formé est séparé par filtration et lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'oxyde dlisopropyleu Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de ,1~ 0~ , mercure) à 50C. On obtient ainsi 42r6 g de n-pentyl-2 hydroxy-3 nonanoate de succinimide sous forme d'huile Jaune~
L'acide n-pentyl-2 hydroxy-3 nonano~que peut etre préparé selon la méthode de E. LEDERER et coll., Bull. Soc.
Chim~ 1952, 413.
Exemple 19 -A une solution de 6,07 g de N-t-butyloxycarbonyl a-D glutamate de benzyle dans 70 cm3 d'éthanol, on ajoute'12,5 g de copolymere styrène-divinylbenzène (98-2) chlorométhylé con-tenant 1,2 milliéquivalent de chlore par gramme. On agite le mélange réactionnel pendant 1/4 heure à 28C. On aioute alors 2,25 cm3 de triéthylamine et on agite le mélange réactionnel pendant 65 heures à 78C. Le polymère est filtré, lavé s'uc-cessivement par 3 fois 300 cm3 au total dléthanol et 3 fois 300 cm3 au total de chlorure de méthylène, puis séché sous pression réduite (20 mm de'mercure) à ~0C. On obtient ainsi 17 g de Ol-benzyl N-t.'-butyloxycarbonyl D glutamyl-polymere.
L'alanine est condensée sur le Ol-benzyl N t.-butyloxycarbonyl D glutamyl-polymère en e~feckuant la suite d'opérations sulvantes dans un réacteur muni d~un agitateur et, à sa base, d'un filtre en verre fritt'é.
1) On e~fectue 3 lavages successifs du polymère par 100 cm3 de chlorure de méthylène à chaque fois. Chaque addition de ~solvant est suivie d'une agitation pendant 3 minutesj puis d'un essorage.
2) Le groupement protecteur t.-butyloxycarbonyle de l'acide glutamique est ensuite éliminé par addition de 100 cm3 d'un mélange acide trifluoroacétique-chlorure de méthylène (1/1 en volumes), puis agitation pendant 20 minutes et enfin essorage.

3) La résine est alors lavée successivement par:
a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène, b) 3 fois 100 cm3 de méthanol, ~3L25$~

c) 3 ~ois lO0 cm3 de chlorure de méthylene en agitant pendant 3 minu~es après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.
4) On neutralise alors le polymère par addition de 100 cm3 d'un mélange chlorure de méthylène-N-méthylmorpholine (9/1 en - volumes), agitation pendant 10 minutes puis essorage.
S) La résine est lavée ensuite par:
3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.
6) On a~oute alors successivement:
a) 3,78 g de N-t.-butyloxycarbonyl L alanine en solution dans 50 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 10 minutes;
b) 4,13 g de dicyclohexylcarbodiimide en solution dans 50 cm3 de chlorure de méthylène, on agite pendant 20 heures et essore. -7) On lave la résine successivement par:
a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène b) 3 fois 100 cm3 d'acide acétique c) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène - en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.
On obtient ainsi le Ol-benzyl N-(t.-butyloxycarbonyl L-alanyl)-D-glutamyl-polymère.
L'acide heptadécanoique est condensé sur le dipeptide-polymère en répétant les opérations 1, 2, 3, 4, 5, 6 et 7.
L'opération n6 est modifiée comme suit:
On ajoute successivement:
a) 5,4 g d'acide heptadécanoque en solution dans 50 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 10 minutes;

~ ~ 5 ~

b) 4,13 g de dicyclohexylcarbodiimide en solution dans 50 cm3 de chloruré de méthylène,~ on agite pendant 20 heure~
et on essore.
On obtient ainsi le Ol-benzyl-N-(N-heptadécanoyl L
alanyl)-D glutamyl-polymère.~
Ce polymère est mis en suspension dans 100 cm3 d'acide trifluoroacétique contenu dans un réacteur muni d'un agitateur et, à sa base, d'un filtre en verre fritté. Dans cette ~us-pension, on fait passer un courant d'acide bromhydrique pendant 90 minutes. Ensuiter on essore la résine et on la lave 3 fois par 300 cm3 au total d'aclde acétique en agitant pendant 3 minutes après chaque addîtion de l'acide acétique et en esso-rant à chaque fois. Les filtrats sont réunis et concentrés à sec sous pression réduite ~20 mm de mercure) à 50C.
Le résidu ainsi obtenu est mis en suspension dans 30 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par ~iltration, lavé 2 fois par 60 cm3 au total d'éther et séché. On obtient ainsi 1,97 g de solide que l'on chromatographie sur une col.onne de 2,2 cm de diamètre contenant 40 g de yel de silice neutre (0,04-0,063 mm).
On élue successivement par 350 cm3 d'un ~élange cyclohexane-acétate d'éthyle (1/l envolumes), 400 cm3 d'acétate d'éthyle, 700 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95/5 en volumes), 950 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90/10 en voIumes); 750 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (80/20 en volumes) et 1,6 litre d'acide acétique en recueillant des fractions de 50 cm3~ Les fractions 65 à 94 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C.- On obtient ainsi 0,B8 g d'acide N-heptadécanoyl-L alanyl-D glutamique Rf = 0,61 ~ ilicagel;n-butanol-pyridine acide acétique-~s~aoo eau ~50/20/6/24 en volumes),;7 AnaIyse: calculé %: C 63,~0 H 9,85 N 5,95 I~r. g6: 60,1 9,3 5,8 Ccndres su _ur ~ques: 5, 6 % .

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Claims (27)

Les réalisations de l'invention, au sujet desquelles un droit exclusif de propriété ou de privilège est revendiqué, sont définies comme il suit:

1. Procédé de préparation des dipeptides répondant à la formule générale:
(I) dans laquelle R-CO représente un reste d'acide gras et les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (substitué le cas échéant par un radical phényle ou nitrophényle), étant entendu que l'alanine est sous forme L et que l'acide glutamique et. ses dérivés sont sous forme D, ainsi que de leurs sels métalliques pharmaceutiquement accep-tables et de leurs sels d'addition avec les bases azotées pharmaceutiquement acceptables, caractérisé en ce que:
a) l'on fait réagir un acide de formule générale:
R - COOH (II) dans laquelle R-CO est défini comme ci-dessus, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dipeptide de formule générale (III) dans laquelle les symboles R1 sont définis comme précédemment, puis remplace, le cas échéant, en fonction des significations de R1, le ou les radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino; ou b) l'on fait réagir un dérivé de la L alanine de formule générale:
(IV) dans laquelle R-CO est défini comme précédemment, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dérivé de l'acide glutamique de formule générale:

(V) dans laquelle R1 est défini comme précédemment, puis remplace, le cas échéant, en fonction des significations de R1, le ou les radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino; ou c) pour préparer un dipeptide de formule générale (I) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, on traite un produit de formule générale:
(VI) dans laquelle R-CO est défini comme précédemment et un des symboles R1 représente un radical hydroxy ou amino ou alcoyloxy et l'autre représente un radical hydroxy ou alcoyloxy, de façon à
transformer soit un groupement ester en groupement carboxy ou carbamoyle soit un groupement carboxy préalablement activé en groupement carbamoyle; ou d) pour préparer un dipeptide de formule générale (I) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy, - soit on fixe sur un support approprié le groupement .alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction amine est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.- carboxylique, selon le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester, élimine le groupement protecteur de la fonction amine, condense la L alanine dont la fonction amine est protégé sur l'acide D
glutamique-support, puis élimine le groupement protecteur de la fonction amine du reste L alanyle, et condense un acide gras de formule générale (II) définie précédemment sur le dipeptide-support, coupe la liaison dipeptide-support et élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D glutamique, - soit on fixe sur un support approprié le dipeptide provenant de la condensation de la L alanine sur l'acide D
glutamique, la fonction amine du reste L alanyle et, le cas échéant, la fonction .alpha.-acide de l'acide D glutamique étant protégée, élimine le groupement protecteur de la fonction amine, puis condense un acide gras de formule générale (II) définie précédemment sur le dipeptide ainsi fixé, coupe la liaison dipeptide-support et élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D-glutamique, - soit on fixe sur un support approprié le groupement .alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.- carboxylique, selon le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester, élimine le groupement protecteur de la fonction amine, puis condense un dérivé de la L alanine de formule générale (IV) définie précé-demment sur l'acide D glutamique-support, coupe la liaison acide D glutamique-support et élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D glu-tamique, - puis sépare le dipeptide de formule (I) obtenu; et e) le cas échéant, on transforme le dipeptide de formule générale (I) ainsi obtenu en un sel métallique pharmaceutiquement accep-table ou en un sel d'addition avec une base azotée pharmaceuti-quement acceptable.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale (II), (IV) ou (VI) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 à 44 atomes de carbone, substitué le cas échéant par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle, alcényle contenant 2 à 29 atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une double liaison, ou un reste d'acide mycolique.

3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'on fait réagir un acide de formule générale:
R - COOH (II) dans laquelle R-CO est défini comme dans la revendication 1, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dipeptide de formule générale:
(III) dans laquelle les symboles R1 sont définis comme dans la revendication 1, puis remplace, le cas échéant, en fonction des significations de R1, le ou les radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino.

4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'on fait réagir un dérive de la L alanine de formule générale:
(IV) dans laquelle R-CO est défini comme dans la revendication 1, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dérivé de l'acide glutamique de formule générale:
(V) dans laquelle R1 est défini comme dans la revendication 1, puis remplace, le cas échéant, en fonction des significations de R1, le ou les radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino.

5. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale (III) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino.

6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale (V) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino.

7. Procédé selon la revendication 1, pour la prépa-ration d'un dipeptide de formule générale (I) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, caractérisé en ce que l'on traite un produit de formule générale:
(VI) dans laquelle R-CO est défini comme dans la revendication 1 et un des symboles R1 représente un radical hydroxy ou amino ou alcoyloxy et l'autre représente un radical hydroxy ou alcoyloxy, de façon à transformer soit un groupement ester en groupement carboxy ou carbamoyle soit un groupement carboxy préalablement activé
en groupement carbmoyle.

8. Procédé selon la revendication 3, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale (III) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy.

9. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale (V) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy.

10. Procédé selon la revendication 1, pour la prépa-ration d'un dipeptide de formule générale (I) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy, caractérise en ce que:
- soit on fixe sur un support approprié le groupement .alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction amine est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.- carboxylique, selon le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester, élimine le groupement protecteur de la fonction amine, condense la L alanine dont la fonction amine est protégée sur l'acide D
glutamique-support, puis élimine le groupement protecteur de la fonction amine du reste L alanyle, et condense un acide gras de formule générale (II) telle que définie dans la revendication 1 sur le dipeptide-support, coupe la liaison dipeptide support et élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la fonc-tion acide de l'acide D glutamique, - soit on fixe sur un support approprié le dipeptide provenant de la condensation de la L alanine sur l'acide D
glutamique, la fonction amine du reste L alanyle et, le cas échéant, la fonction .alpha.-acide de l'acide D glutamique étant protégées, élimine le groupement protecteur dé la fonction amine, puis condense un acide gras de formule générale (II) telle que définie dans la revendication 1 sur le dipeptide ainsi fixé, coupe la liaison dipeptide-support et élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D-glutamique, - soit on fixe sur un support approprié le groupement .alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.-carboxylique, selon le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester, élimine le groupement protecteur de la fonction amine, puis condense un dérivé de la L alanine de formule générale (IV) telle que définie dans la revendication 1 sur l'acide D-glutamique-support, coupe la liaison acide D glutamique-support et élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D glu-tamique, - puis sépare le dipeptide de formule (I) obtenu.

11. Procédé selon la revendication 5, caractérisé
en ce que l'on traite le dipeptide de formule générale (III) par un acide de formule générale (II) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone.

12. Procédé selon la revendication 6, caractérisé
en ce que l'on traite le dérivé de l'acide glutamique de formule générale (V) par un dérivé de la L alanine de formule générale (IV) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone.

13. Procédé selon la revendication 7, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale (VI) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone.

14. Procédé selon la revendication 10, caractérisé
en ce que l'on utilise un réactif de formule générale (II) ou (IV) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone.

15. Procédé selon la revendication 3, caractérisé
en ce que l'on fait réagir un acide de formule générale (II) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone, sur un dipeptide de formule générale (III) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy, amino ou benzyl-oxy.

16. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de la L alanine de formule générale (IV) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone, sur un dérivé
de l'acide glutamique de formule générale (V) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy, amino ou benzyloxy.

17. Les dipeptides répondant à la formule générale:
(I) dans laquelle R-CO représente un reste d'acide gras et les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (substitué le cas échéant par un radical phényle ou nitrophényle), étant entendu que l'alanine est sous forme L et que l'acide glutamique et ses dérivés sont sous forme D, ainsi que de leurs sels métalliques pharmaceutiquement accep-tables et de leurs sels d'addition avec les bases azotées pharmaceutiquement acceptables, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 1 ou ses équivalents chimiques manifestes.

18. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 à 44 atomes de carbone, substitué le cas échéant par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle, alcényle contenant 2 à 29 atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une double liaison, ou un reste d'acide mycolique, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 2 ou ses équivalents chimiques manifestes.

19. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon les revendicatications 3 ou 4, ou leurs équivalents chimiques manifestes.

20. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon les revendications 5 ou 6, ou leurs équivalents chimiques manifestes.

21. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 7 ou ses équivalents chimiques manifestes.

22. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon les revendications 8 ou 9, ou leurs équivalents chimiques manifestes.

23. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy, chaque fois qu'il sont obtenus par un procédé selon la revendication 10 ou ses équivalents chimiques manifestes.

24. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone et les symboles R1, identiques ou différents, repré-sentent un radical hydroxy ou amino, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon les revendications 11 ou 12, ou leurs équivalents chimiques manifestes.

25. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone et les symboles R1, identiques ou différents, repré-sentent un radical hydroxy ou amino, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 13 ou ses équi-valents chimiques manifestes.

26. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone et les symboles R1, identiques ou différents, repré-sentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé
selon la revendication 14 ou ses équivalents chimiques manifestes.

27. Les dipeptides de formule générale (I) telle que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de car-bone et les symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy, amino ou benzyloxy, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon les revendications 15 ou 16 ou leurs équivalents chimiques manifestes.