BRPI1103910A2 - Produção de isomaltooligossacarídeos e usos dos mesmos - Google Patents

Abstract

Produção de isomaltooligossacarídeos e usos dos mesmos. São aqui descritos métodos para a preparação de isomaltooligossacarideos ("imos") a partir de um substrato de carboidrato e usos dos mesmos. Na presença de uma enzima maltogênica e precursores de imo adicionais, uma invertase de aspergillus sp. É capaz de produzir imos a partir de uma pasta de amido. A capacidade da invertase funcionar como uma enzima tranaglucosidase gera um mecanismo simultâneo para sacarificação de imo.

Description

PRODUÇÃO DE ISOMALTOOLIGOSSACARÍDEOS E USOS DOS MESMOS

PRIORIDADE

Este pedido reivindica prioridade do Pedido Provisório dos EUA n ° 61/376, 545, depositado em 24 de agosto de 2010, todo o conteúdo do mesmo é aqui incorporado por referência em sua totalidade.

CAMPO TÉCNICO A tecnologia atual, se refere, geralmente, a métodos para a produção de isomaltooligossacarídeos com invertase derivada de Aspergillus niger e/ou Aspergillus oryzae e usos dos mesmos. Os métodos produzem isomaltooligossacarídeos a partir de um substrato de carboidrato.

ANTECEDENTES A descrição a seguir é fornecida para ajudar a compreensão do leitor. Nenhuma das informações prestadas ou referências citadas são admitidas como sendo estado da técnica.

Isomaltooligossacarídeos ("IMO" ou "IMOs") são oligossacarídeos de ligação mistos, tendo misturas de 1 igações ο.-(1,4)- e / ou o.- (1,6) -glicosxdicas.. IMOs incluem isomaltose, Panose, isomaltotriose, isomaltotetraose, isopanose, e outros oligossacarídeos ramificados superiores, tais como, frutooligossacarídeos, galacto-oligosacarídeos xilooligosacarídeos e gentiooligosacarídeos. A produção de IMO ocorre através de um processo complexo enzimãtico, através do qual um material inicial bruto e convertido em um substrato de maltose, por exemplo, xarope de milho. Posteriormente, IMOs são sintetizados por uma reaçao transglicosídica catalisadas por enzimas. IMOs pertencem a um grupo de oligossacarídeos classificados como oligossacarídeos de alimentos funcionais de saúde ("FHFO"). IMOs têm sido associados a um aumento na saúde quando consumidos em uma base regular, e são por vezes referidos como "prebióticos". Prebióticos são definidos como substâncias não digeríveis, fibras, por exemplo, na dieta, que exercem algum efeito biológico em um indivíduo através da estimulação do crescimento de microorganismos comensais ou benéficos. IMOs podem ser usados como um produto edulcorante que pode ser utilizado em alimentos e bebidas.

SUMÁRIO

Em um aspecto, a divulgação atual fornece um método para fabricação de uma composição compreendendo isomaltooligossacarídeo: (a) contatar uma pasta de amido com uma enzima de liquefação, e (b) contatar o produto de (a) com uma enzima maltogênica e uma invertase, onde a invertase e a enzima maltogênica sao contatadas separadamente, sequencialmente ou simultaneamente para produzir isomaltooligossacarídeos.

Em uma modalidade, a invertase e a enzima maltogênica são contatados simultaneamente. Em uma modalidade, a pasta é composta por de 15% a 45% em peso de amido. Em uma modalidade, a invertase é de pelo menos 0,0009% em peso de todos os reagentes de (b). Em uma modalidade, a invertase é inferior a 2% em peso de todos os reagentes de (b) . Em uma modalidade, (b) ocorre em um pH acima de 2 e abaixo de 10. Em uma modalidade, (b) ocorre a uma temperatura acima de 10°C e abaixo de 85°C.

Em um aspecto, os isomaltooligossacarídeos são selecionados do grupo consistindo de isomaltose, glicose ramificada, DP3 glicose, panose, isomaltotriose, isomaltotetraose, isomaltopentaose, isomaitohexaose e isomaltoheptose, ou qualquer combinação destes. Em uma modalidade, pelo menos 10% do isomaltooligossacarídeo produzido é panose. Em uma modalidade, o método compreende ainda a purificação de isomaltooligossacarídeos.

Em uma modalidade, a enzima de liquefação é uma alfa-amilase. Em uma modalidade, a enzima maltogênica é uma beta-amilase. Em uma modalidade, a invertase tem atividade de transglucosidase. Em uma modalidade, a invertase é uma invertase de Aspergillus. Em uma modalidade, a invertase de Aspergillus é uma invertase de Aspergillus niger. Adicionalmente ou alternativamente, em algumas modalidades, a invertase de Aspergillus é uma invertase de Aspergillus Oryza.

Em uma modalidade, a pasta é formada a partir de um ou mais amidos e líquidos. Em uma modalidade, um ou mais amidos são selecionados a partir do grupo consistindo em amido de milho, amido de arroz, amido de trigo, tapioca, amido de batata, amido de batata doce, amido de sagu, amido de cevada, amido tratado com calor/ãcido, amido de pérola, amido de milho ceraceo, amido de sorgo, amido de milho de alta amilase, dextrose líquida, e suas combinações. Em uma modalidade, o amido é amido de milho.

Em um aspecto, uma composição de isomaltooligossacarídeo é produzida por um método para fazer uma composição de isomaltooligossacarídeo compreendendo: (a) contatar uma pasta de amido com uma enzima de liquefação, e (b) contatar o produto de (a) com uma enzima maltogênica e uma invertase, onde a invertase e a enzima maltogênica são contatadas separadamente, sequencialmente ou simultaneamente.

Em um aspecto, um aditivo alimentar que compreende isomaltooligossacarídeos é produzido por um método para fazer uma composição de isomaltooligossacarideo compreendendo: (a) contatar uma pasta de amido com uma enzima de liquefação, e (b) contatar o produto de (a) com uma enzima maltogênica e uma invertase, em que a invertase e a enzima maltogênica são contatadas separadamente, sequencialmente ou simultaneamente.

Em um aspecto, um produto alimentício compreendendo pelo menos um ingrediente alimentar e isomaltooligossacarídeos é produzido por um método para fazer uma composição de isomaltooligossacarideo compreendendo: (a) contatar uma pasta de amido com uma enzima de liquefação, e (b) contatar o produto de (a) com uma enzima maltogênica e uma invertase, em que a invertase e a enzima maltogênica são contatadas separadamente, sequencialmente ou simultaneamente.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Fig. 1 é um gráfico que descreve as reações de sacarifxcaçao convencional e sxmultanea. A Fig. 2 é um gráfico que descreve a mudança no teor de IMO durante as reações sacarificação convencional e simultânea.

DESCRIÇÃO São divulgados aqui métodos para produzir oligossacarídeos, particularmente IMOs. Adicionalmente divulgados aqui são métodos, etapas e reações para a produção comercial de IMOs usando as etapas que geram um método melhorado para a fabricação de IMO adequado.

Na descrição detalhada a seguir, as modalidades ilustrativas descritas na descrição detalhada, figuras e reivindicações não são destinadas a ser limitante. Outras modalidades podem ser utilizadas, e outras alterações podem ser feitas, sem se afastar do conceito inventivo ou escopo do objeto em aqui questão. Na descrição que se segue, uma série de termos são usados extensivamente. Os termos descritos abaixo são plenamente melhor compreendidos por referência à especificação como um todo. Unidades, prefixos e símbolos podem ser denotados em sua forma aceita pelo SI.

Os termos "um" e "uma", usado aqui significa "um (uma) ou mais" a menos que o singular seja expressamente especificado. Assim, por exemplo, a referência a "um carboidrato" inclui uma mistura de dois ou mais carboidratos, bem como um carboidrato simples.

Como usado aqui, o termo "cerca de" será compreendido por pessoas habilitadas de forma comum na técnica e irá variar até certo ponto, dependendo do contexto em que ele é usado. Se houver usos do termo que não são claros para pessoas habilitadas de forma comum na técnica, dado o contexto em que ele é usado, "cerca de" significa até, mais ou menos 10% do termo particular.

Como usado aqui, o termo "carboidratos" será entendido por uma pessoa habilitada na técnica por incluir poliidróxi-aldeídos ou -cetonas e compostos derivados dos mesmos. Carboidratos podem incluir compostos compreendendo pelo menos uma unidade básica de monossacarídeo. Eles podem ser classificados como carboidratos simples e carboidratos complexos. Os carboidratos simples são os monossacarldeos e dissacarídeos. Os carboidratos complexos são os polissacarídeos, ou grandes moléculas compostas por cadeias comuns ou ramificadas de monossacarldeos.

Como usado aqui, o "xarope de liquefação" termo ou "xarope liquidificante" refere-se a um substrato de carboidratos, por exemplo, amido, que tenha sido reagido com uma enzima de liquefação, tal como, mas não limitado a, uma α-amilase. Um xarope de liquefação é produzido através de uma reaçao de liquefação.

Como usado aqui, o termo "reação de liquefação" se refere a uma reação enzimática ou química que reduz a viscosidade e/ou aumenta a fluidez de um ou mais carboidratos em uma mistura.

Como usado aqui, o termo "transglicosídica" ou "transglucosidase", refere-se a enzima ou atividade que catalisa reações hidroliticas e/ou de transferência para formar novas ligações a-1,6. Essas enzimas incluem, mas não estão limitadas a, transglucosidases e invertases.

Como usado aqui, o termo "enzima de liquefação" ou "enzima liquidificante" pode ser um das muitas a-amilases ou outras amilases. Enzimas de liquefação tem efeito na fluidez ou viscosidade do amido, ou seja, na fluidização de amido. Enzimas de liquefação de amido de exemplo incluem a-amilases.

Como usado aqui, uma "enzima maltogênica" refere-se a uma enzima que catalisa a produção de maltose a partir de um polímero de carboidrato maior. Uma enzima maltogênica pode ser uma das muitas β-amilases ou outras amilases. A reação maltogênica produz maltose.

Como usado aqui, o termo "invertase" ou "invertases" refere-se a uma classe de enzimas que catalisa reações hidrolíticas e de transferência para formar novas ligações a-1,6. Invertases catalisam a síntese de açúcares através da transferência de monossacarídeos através de uma reação transglicosilação. Por exemplo, uma invertase útil nos métodos presentes possui atividade transglucosidase, ou seja, catalisa a hidrólise de sacarídeos hidrolisando ligações glicosídicas. Uma invertase pode ser uma invertase de planta, animal, bactéria, ou fungo. Em uma modalidade, a invertase é uma invertase de Aspergillus sp. . A título de exemplo, mas não por meio de limitação, em algumas modalidades, invertases são derivadas de Aspergillus niger e/ou Aspergillus oryza. Como usado aqui, "uma invertase com atividade transglucosidase" ou "uma invertase da tecnologia atual" refere-se a uma invertase, que é capaz de catalisar uma reação de sacarificação.

Como usado aqui, uma "reação de sacarificação" ou "sacarificação" refere-se ao processo de conversão de um xarope de liquefação a IMOs via reações maltogênicas e transglicosídicas, As reações de sacarificação aqui descritas podem ocorrer em uma ou mais etapas ou reações, onde as etapas ou reações ocorrem separadamente, sequencialmente ou simultaneamente.

Métodos de Produção de IMO A tecnologia presente abrange um método melhorado para a produção de IMO. O método melhorado de produção IMO ocorre quando um substrato de carboidratos é reagido com uma enzima de liquefação, em adição a reações de sacarificação separadas, seqüenciais ou simultâneas, para produzir um produto de IMO.

Em um aspecto, a tecnologia presente proporciona um método para fazer uma composição de isomaltooligossacarídeo compreendendo as etapas de: (a) contatar uma pasta de amido com uma enzima de liquefação, e (b) contatar o produto da etapa (a) com uma enzima maltogênica e uma invertase, em que a invertase e a enzima maltogênica são contatadas separadamente, sequencialmente ou simultaneamente para produzir isomaltooligossacarídeos.

Em algumas modalidades, os métodos aqui presentes incluem uma primeira reação de sacarificação e uma segunda reação de sacarificação, ou uma reação de sacarificação simultânea. Em uma modalidade, a primeira reação de sacarificação resulta na produção de um produto maltogênico, ou seja, maltose ou um xarope de maltose. A segunda reação de sacarificação inclui a aplicação de uma ou mais enzimas, como a invertase com atividade transglicosidica, para o produto maltogênico, através da qual algum ou todo produto maltogênico é convertido em IMOs. Em uma modalidade, a conversão da matéria-prima, ou seja, pasta de amido, em maltose ocorre durante uma primeira reação de sacarificação, ou seja, uma reação maltogênica. A produção de IMO ocorre durante uma segunda reaçao de sacarificaçao, ou seja, a reação transglicosidica, onde a invertase com atividade transglicosidica é empregada durante a reação.

Substratos Os métodos atuais utilizam um substrato de carboidrato. Conforme descrito aqui, o termo "carboidrato" ou "substrato de carboidrato" refere-se, mas não se limita a, amido, amido natural não modificado, amido de milho, amido de trigo, amido de tapioca, amido de batata, amido de batata doce, amido de sagu, amido de cevada, amido de arroz, amido tratado com calor/ácido (dextrina), amido de pérolas, amido de milho ceráceo, amido de sorgo, amido de milho com alto teor de amilose, dextrose líquida de alto teor de sólidos e suas combinações.

Em uma modalidade, o substrato de carboidratos é um substrato de amido. O substrato de amido pode ser, mas não se limitando a, amido de milho. Em uma modalidade, o substrato de carboidratos é uma pasta de amido. Como descrito aqui, o termo "pasta" se refere a uma mistura aquosa contendo componentes insolúveis, tais como, mas não limitado a, grânulos de amido. Às vezes os termos "pasta" ou "xarope" ou "suspensão" são utilizados alternadamente neste documento. Como descrito aqui, o "substrato de amido" ou "pasta de amido" se refere a uma solução líquida em combinação com um amido, em que um amido é qualquer material composto de carboidratos complexos de polissacarídeos com a fórmula (C6Hi0O5)x, onde X pode ser qualquer número. O líquido pode ser qualquer solvente aquoso, a água, por exemplo.

Em uma modalidade, a pasta de amido inclui uma ou mais formas diversas de amido. Conforme descrito na Patente dos EUA n° 7.638.151, uma forma de amido é, amilose, um polissacarídeo de cadeia linear. Outras formas de amido incluem amilopectina, um polissacarídeo de cadeia ramificada. Amilose contém longas cadeias não-ramificadas em que todas as unidades D-glicose são ligadas por ligações a-(1,4), ou seja, "ligações a-(1,4)" ou "Ligações 1,4-a-D-glicosil". Amilopectina é altamente ramificada, onde as ligações glicosidicas da estrutura são ligações a-(1,4), no entanto, os pontos de ramificação também fornecem ligações a-(1,6) . Como usado aqui, o termo "ligação" ou "ligações" se refere ao número de porções de carbono ao qual uma glicose ou outra molécula está ligada. Os prefixos α (alfa) e β (beta) denotam se a ligação é axial ou equatorial ao anel de carbono, respectivamente. Assim, as ligações alfa são equatoriais em relação ao anel e as ligações beta são axiais.

Em uma modalidade, a quantidade ou concentração de substrato de amido, ou seja, a concentração da pasta de amido, pode ser uma pasta aquosa com uma concentração entre 1-60%, 5-45%, 10-40%, 20 - 40%, ou 25-35% de sólidos solúveis ("ds"). Como descrito aqui, o termo "sólidos solúveis" ou "ds" refere-se à porcentagem de sólidos, ou seja, amido, que é suspensa em solução.Em uma modalidade, o pH da pasta está entre 1,0 e 9,0, 2,0 e 8,0, 3,0 e 7,5, 4,0 e 6,5, ou 4,5 e 6,0. Em outra modalidade, o pH da pasta está entre 5,8 e 6,1. Em um aspecto, a tecnologia atual prevê a concentração ou densidade de uma pasta de amido entre 5 e 25, 10 e 25, 15 e 23, ou 18 e 22 Be. Em uma modalidade, a densidade da pasta está entre 19 e 22°Be. Como usado aqui, "° Be" ou densidade "Baumé" é medida em função da gravidade específica de uma pasta de amido em uma temperatura específica.

Reação de liquefação Em uma modalidade, a pasta de amido é posta em contato com uma enzima de liquefação, produzindo assim um xarope de liquefação. Em uma modalidade, a liquefação pode incluir a hidrólise enzimática dos componentes principais de amido. Em uma modalidade, a amilose pode ser hidrolisada por α-amilases, por exemplo, α-{1,4)-glucano-4 glucanohidrolase. As α-amilases hidrolisam ligações a-(1,4) para produzir uma mistura de glicose, maltose, maltotriose e açúcares superiores. Veja, por exemplo, a Patente dos EUA n° 4113509. A amilose também pode ser hidrolisada por uma β-amilase. β-amilases quebram sucessivas unidades iniciais de maltose a partir da extremidade não redutora para render quantitativamente maltose. As a- e β-amilases também hidrolisam amilopectina. Nem a a- nem a β-amilase, podem hidrolisar as ligações a-(1,6) nos pontos de ramificação de amilopectina. O produto final da ação exaustiva de J3-amilase sobre amilopectina é uma dextrina de limite β ou núcleo grande, altamente ramificado. A enzima desramificadora, por exemplo, pululanases, α-(1,6)-glucano-6-glucanohidrolase, ou α-(1,6)-glucosidase, podem hidrolisar as ligações a-(1,6) nos pontos de ramificaçao. Como usado aqui, o termo "enzima desramificadora" refere-se às enzimas que catalisam a hidrólise de ligações a-(1,6). Uma enzima desramificadora de exemplo é uma pululanase, também conhecida como a-dextrina-endo-(1,6)-α-glucosidase, dextrinase limite, enzima desramificadora, ou (1,6)-glucanohidrolase, Ver, por exemplo, Schülein, et al. , Characterization of a New Class of Thermophilic Pullulanases from Bacillus acidopullulyticus, Annals of the New York Academy of Sciences (Anais da Academia de Ciências de Nova Iorque), Vol. 434, Edição 1, pp. 271-74 (2006).

Em um aspecto, a enzima de liquefação é uma enzima derivada, isolada, ou extraída de uma bactéria, planta, fungo, ou outra fonte. Em uma modalidade, a fonte de bacteriana ê uma α-amilase de Bacillus sp. . Em uma modalidade, a α-amilase é derivada de um Bacillus sp. incluindo aquelas derivadas de pelo menos uma fonte bacteriana selecionada partir de B. subtilis, B. licheniformis, B. stearothermophilus, B. coagulans, B. amyloliquefaciens e B. lentus. Em uma modalidade, uma a-amilase de B. licheniformis ou B. stearothermophilus é a enzima de liquefação. Em outra modalidade, amilases que não α-amilase são usadas como uma enzima de liquefação. Em uma modalidade, amilases caracterizadas pela oxidação ou termoestabilidade aumentadas, incluindo amilases mutantes, geneticamente modificadas, ou amilases variantes conforme descrito na Patente dos EUA n°s 5.763.385, 5.824.532, 5.958.739, e 6.008.026, são contempladas. Em uma modalidade, a enzima de liquefação é uma α-amilase estável ao calor.

Em uma modalidade, a enzima de liquefação é posta em contato com uma pasta de amido para reduzir a viscosidade do amido liquefeito ou solubilizado. Os componentes do amido insolúvel são convertidos em material solúvel via dextrinização. Como usado aqui, o termo "dextrinização" refere-se à conversão de amido em polissacarídeos ou oligossacarídeos solúveis. Em uma modalidade, uma ou mais enzimas de liquefação são adicionadas a uma pasta de amido. A enzima de liquefação pode ser adicionada à pasta manualmente ou automaticamente, nas quantidades de 0,0001-10%, 0,001-5%, ou 0,01-1% (p/p/ds). Em uma modalidade, a enzima de liquefação pode ser adicionada à pasta nas quantidades de 0,40-0,70%, 0,50-0,60%, ou 0,55% (p/p/ds). Em uma modalidade, a enzima de liquefação pode ser adicionada à pasta nas quantidades de 0,55% (p/p/ds).

Em uma modalidade as concentrações da enzima de liquefação estão entre 0,0001 e 10%, 0,001 e 5%, ou 0,005 e 1% (p/p/ds) de enzima de liquefação para ds de pasta de amido. Em uma modalidade, as concentrações de enzima de liquefação estão entre 0,015 e 0,035% ou 0,022 e 0,025% (p/p/ds) de enzima de liquefação para ds de pasta de amido. Em outra modalidade, as concentrações de enzima de liquefação entre 0,04 e 0,07%, 0,05 e 0,06%, ou 0,04 e 0,05% (p/p/ds) são empregados. Em uma modalidade, a concentração da enzima de liquefação é de 0,045% (p/p/ds) de enzima de liquefação para ds pasta de amido.

Em uma modalidade, uma enzima de liquefação é reagida com uma pasta de amido por 15-210 minutos ("min"), 60-210 min, 90-18 0 min, ou 12 0-150 min, a uma temperatura adequada. Em uma modalidade, uma enzima de liquefação é reagida com uma pasta de amido por cerca de 13 0 min a uma temperatura adequada. A enzima de liquefação pode ser adicionada à pasta manualmente ou automaticamente, em temperaturas entre 90 e 125 °C, 95 e 115 °C, 100 e 110 °C, ou 100 e 108 °C. Em uma modalidade, o pH da reação de liquefação é mantido em uma faixa entre 4,0 e 8,0, 5,0 e 7,0, ou 5,8 e 6,1. Um técnico habilitado na técnica irã reconhecer que o pH da reação de liquefação pode ser mantido através do uso e aplicação de quantidades adequadas de um ácido ou uma base, por exemplo, ácido clorídrico ("HC1") ou hidróxido de sódio ("NaOH"), quando necessário . Em uma modalidade, um xarope de liquefação contendo precursores de IMO é produzido através de uma reação de liquefação.

Reação Maltogênica Em uma modalidade, uma pasta de amido é posta em contato com uma enzima de liquefação e, em seguida, uma enzima maltogênica, produzindo maltose. Em uma modalidade, uma pasta de amido é posta em contato com uma enzima de liquefação contendo funcionalidades enzimáticas maltogênicas, produzindo assim um xarope de liquefação contendo maltose. Como usado aqui, o termo "enzima maltogênica" se refere a uma enzima que converte carboidratos à maltose e seus derivados. Enzimas maltogênicas de exemplo incluem, mas não estão limitadas a, fúngicas, bacterianas, vegetais e derivadas de α-amilases e β-amilases. O termo "maltose", como utilizado aqui, refere-se a um dissacarídeo ter dois resíduos de glicose ligados por uma ligação α-(1,4)-D-glicosídica. Em uma modalidade, a maltose é produzida a partir de uma pasta ou xarope rico em maltose, ou seja, um xarope de liquefação.

Em algumas modalidades, as reações de sacarificação incluem a hidrólise de substratos carboidratos liquefeitos, ou seja, o xarope de liquefação. As reações incluem uma reação de sacarificação maltogênica e uma reação transglicosídica, onde as reações podem ocorrer isoladamente, seqüencialmente ou simultaneamente. As reações de sacarificação são geralmente realizadas, pela adição de uma ou mais enzimas de sacarif icação para o xarope de liquefação. Em uma modalidade, uma ou mais enzimas selecionadas do grupo de β-amilase, transglucosidase, invertase, pululanase, e suas combinações, são reagidas com o xarope de liquefação para produzir precursores de IMOs ou IMO. Como usado aqui, "precursores de IMO" refere-se a uma composição contendo qualquer componente constituinte de um IMO que é necessário para formar IMOs. Em uma modalidade, um precursor de IMO é uma maltose ou seus derivados.

Em algumas modalidades, a hidrólise de um xarope de liquefação ocorre na presença de uma enzima maltogênica. Em uma modalidade, a enzima maltogênica é uma p- amilase. Enquanto algumas α-amilases são maltogênicas, na medida em que quando contatam α-amilases com um substrato de amido podem produzir maltose, o uso de p-amilases é benéfico na medida em que seu contato com vários amidos fornece uma quantidade elevada de precursores de IMO, ou seja, maltose, para a exclusão de outros sacarídeos, como a glicose, Ver, por exemplo, as patentes dos EUA noS 4.970.158 e 4.647.538. Em uma modalidade, a p-amilase é uma p-amilase de planta, enzimas microbianas, ou bacteriana termoestável. Será perceptível para o técnico habilitado na técnica que a p-amilase adequada pode ser de ocorrência natural, bem como p-amilases recombinantes e mutantes. Como usado aqui, o termo "p-amilase" refere-se às enzimas que catalisam a hidrólise de ligações α-(1,4)-glicosídicas, liberando assim as unidades de maltose. p-amilases também tem sido descritas como enzimas que realizam a hidrólise de ligações (1,4)-α-D-glicosldicas em polissacarideos assim como podem remover unidades de maltose sucessivas a partir da extremidade não redutora de cadeias de sacarídeos, Ver, por exemplo, Patente dos EUA N°. 7.638.151.

Em uma modalidade, a reação maltogênica é conduzida por pelo menos 12, 20, 72 ou 120 horas ("h"). Em uma modalidade, uma reação maltogênica é realizada em temperaturas variando de 40 °C, e 50 °C, 55 °C, 60 °C e 65 °C, a 90 °C. Em uma modalidade, a reação maltogênica ocorre a uma temperatura entre 60 e 65 ° C. Em uma modalidade, uma reação maltogênica ocorre em um pH alcalino entre 4,0-, 5,0-, 5,5-, 6.0-, e 7.0. Em uma modalidade, o pH da reação maltogênica está entre 5,0 e 5,5. Um técnico habilitado na técnica irá reconhecer que o pH da reação maltogênica pode ser mantido através do uso e aplicação de quantidades adequadas de um ácido ou uma base, por exemplo, ácido clorídrico ("HC1") ou hidróxido de sódio ("NaOH"), quando necessário.

Em algumas modalidades, os métodos atuais incluem uma quantidade adequada de enzima maltogênica aplicada durante uma reação maltogênica em função da quantidade de maltose dissolvida presente em um xarope de liquefação. Para este fim, após a liquefação do carboidrato, ou seja, amido, o teor de maltose dissolvido do xarope de liquefação é determinado e uma quantidade adequada de enzima maltogênica é aplicada a uma reação maltogênica. A quantidade de enzima maltogênica varia de 0,0001 a 10% (p/p) , ou 0,0005 a 1% (p/p) , ou de 0,001% a 0,25% (p/p), dependendo da enzima maltogênica específica a ser adicionada, e do peso total do xarope de liquefação, ou seja, o teor de sólidos do xarope.

Em uma modalidade, entre 0,0001 a 10% (p/p) de pululanase é aplicado a uma reação de sacarificação durante a reação maltogênica. Em uma modalidade, entre 0,001 e 1% (p/p) de pululanase é aplicado a uma reação de sacarificação durante a reação maltogênica. Em outra modalidade, de 0,05 a 0,1% (p/p) de pululanase é aplicado a uma reação de sacarificação durante a reação maltogênica.

Em uma modalidade, uma enzima maltogênica e / ou pululanase pode ser adicionada a uma primeira reação de sacarificação ou uma reação maltogênica em uma concentração entre 0,001 e 1% (p/p) com uma densidade relativa grau Brix entre 3 5 e 4 0 °Bx. Como descrito aqui, o termo "densidade relativa grau Brix", "Brix", ou "°Bx", refere-se a uma escala de hidrômetro bem conhecida para medir o teor de açúcar de uma solução a uma dada temperatura. Assim, a unidade °Bx, refere-se a uma medida dos açúcares dissolvidos em solução. A escala Brix mede o número de gramas de açúcar presente em 100 gramas de solução aquosa de açúcar (o teor total de sólidos dissolvidos). Por exemplo, uma medida de 1,0 ° Bx refere-se a lOmg/ml de açúcar em solução. Em uma modalidade, entre 0,01-0,1% (p/p) de enzima maltogênica e / ou pululanase é aplicada a uma primeira reação de sacarificação de 35-40 ° Bx ou uma reação maltogênica. Em uma modalidade, β-amilase é uma enzima maltogênica aplicada à primeira reação de sacarificação. Em uma modalidade, tanto β-amilase e pululanase são aplicadas a uma primeira reação de sacarificação.

Em uma modalidade, β-amilase é aplicada a uma primeira reaçao de sacarificação de 35-40 °Bx ou uma reação maltogênica, na presença ou ausência de pululanase, em uma concentração entre 0,005-5%, 0,01-1%, ou 0,02-0,05% (p/p).

Em outra modalidade, pululanase é aplicada a uma primeira reação de sacarif icação de 3 5-40 ° Bx ou uma reação maltogênica, a uma concentração entre 0,005 e 5%, 0,01 e 1%, ou 0,02 e 0,05% (p/p) . Em uma modalidade, pululanase é aplicada a uma primeira reação de sacarificação de 35-40 ° Bx ou uma reação maltogênica, em uma concentração de 0,025% (p/p).

Em algumas modalidades, a reação maltogênica segue por 1-10 horas ("h"). Em uma modalidade, a reação maltogênica segue por 15-3Oh. Em uma modalidade, a reação maltogênica segue por 20-24h. Em uma modalidade, a reação maltogênica ocorre a uma temperatura entre 50 e 70 °C. Em outra modalidade, a reação maltogênica ocorre a uma temperatura entre 55 e 65 °C. Em uma modalidade, a reação maltogênica ocorre em um pH alcalino. Em uma modalidade, o pH da reação maltogênica está entre 4,0 e 7,0. Em outra modalidade, a reação maltogênica ocorre em um pH entre 5,5 e 5,8. Um técnico habilitado na técnica irá reconhecer que o pH da reação maltogênica pode ser mantido através do uso e aplicação de quantidades adequadas de um ácido ou uma base, por exemplo, ácido clorídrico ("HCl") ou hidróxido de sódio ("NaOH"), quando necessário .

Reação Transglicosídica A transferência de porções de glicose, e seus derivados, pode ocorrer na presença de uma enzima transglicosídica. A reação maltogênica e reação transglicosídica podem ocorrer isoladamente, seqüencialmente ou simultaneamente, dependendo das enzimas de sacarificação que são aplicadas a uma reação específica. Em uma modalidade, uma reação de sacarificação simultânea ocorre na presença de uma invertase. Em uma modalidade, a reação de sacarificação simultânea inclui a reação maltogênica e a reação transglicosídica. Por exemplo, a reação transglicosídica pode ocorrer concomitantemente com a reação maltogênica, assim, fornecendo uma reação de sacarificação simultânea. Como usado aqui, uma "reação de sacarificação simultânea" refere-se a uma primeira reação de sacarificação e uma segunda reação de sacarificação que ocorrem em proximidade temporal e espacial. Em uma reação de sacarificação simultânea o produto da primeira reação de sacarificação está imediatamente disponível para uso como substrato, em uma segunda reação de sacarificação. Em uma modalidade, a reação de sacarificação simultânea ocorre na presença de uma enzima maltogênica e uma invertase com atividade transglicosídica. Outro aspecto da tecnologia atual revela uma invertase que reage com um substrato maltogênico. Em uma modalidade, uma invertase com atividade transglicosídica reage com um substrato maltogênica.

Em uma modalidade, a reação transglicosídica é realizada seqüencialmente, adicionando uma ou mais enzimas de sacarificação ao produto da reação maltogênica. Em uma modalidade, uma ou mais enzimas são selecionadas a partir do grupo de β-amilase transglucosidase, invertase, pululanase, e suas combinações, são reagidas com um xarope de liquefação ou o produto da reação maltogênica para produzir IMOs durante uma reação transglicosídica. Em uma modalidade, a invertase é a enzima transglicosídica reagida com o xarope de liquefação para produzir IMOs durante a reação transglicosídica. Em outra modalidade, uma invertase de Aspergillus sp. é a enzima transglicosídica reagida com o xarope de liquefação para produzir IMOs durante a reação transglicosídica.

Em uma outra modalidade, a reação transglicosídica é catalisada por duas ou mais enzimas. Por exemplo, uma combinação de uma invertase com atividade de transglucosidase e uma transglucosidase ("TG") pode ser usada na reação de sacarificação. Em uma modalidade, a enzima transglicosidica é uma TG de Aspergillus sp.. Em uma modalidade, a enzima transglicosidica é uma TG de Aspergillus niger. Enquanto TG, conforme descrito anteriormente neste documento, pode funcionar como uma transglucosidase, o uso de uma invertase é benéfico na medida em que seu contato com vários substratos à base de amido e maltose em fornecer para a produção IMO elevada quando comparada aos métodos convencionais que usam TG.

Em uma modalidade, a reação transglicosidica, ou seja, a segunda reação de sacarificação, é realizada por 10-lOOh. Em uma modalidade, a segunda reação de sacarificação ocorre por 30-90h. Em uma modalidade, a segunda reação de sacarificação ocorre por 48-72h. Em uma modalidade, a segunda reação de sacarificação é aquecida por 10-100h, 30-9Oh ou 48-72h a uma temperatura entre 50-70 ° C. Em outra modalidade, a segunda reação de sacarificação é aquecida por 10-100h, 30-90h ou 48-72h a uma temperatura entre 55-65 °C. Em uma modalidade, a segunda reação de sacarificação ocorre em 60-65 °C. Em uma modalidade, a reação ocorre em um pH alcalino entre 4,0, 5,0, 5,5, 6.0, e 7.0. Em uma modalidade, o pH da segunda reação de sacarificação está entre 5,0-5,5. Um técnico habilitado na técnica irá reconhecer que o pH da segunda reação de sacarificação pode ser mantido através do uso e aplicação de quantidades adequadas de um ácido ou uma base, por exemplo, ácido clorídrico ("HC1") ou hidróxido de sódio ("NaOH"), quando necessário.

Em algumas modalidades, uma quantidade adequada de invertase é aplicada a uma reação de sacarificação simultânea em função da quantidade de substrato no xarope de liquefação. A este ponto, depois de liquefação do carboidrato, ou seja, o amido, o teor de maltose dissolvido do xarope pode ser determinado e uma quantidade adequada de enzima é aplicada para uma reação de sacarificação simultânea. A quantidade de enzima irá variar dependendo do peso total do xarope de liquefação, ou seja, do teor sólido seco. Além de aplicar invertase, uma ou mais enzimas maltogênicas também são aplicadas à reação de sacarificação simultânea.

Em uma modalidade, entre 0,0001 e 10% (p/p) de invertase é aplicado como uma enzima de sacarificação à reação de sacarificação. Em uma modalidade, entre 0,001 e 5% (p/p) de invertase é aplicado como uma enzima de sacarificação para a reação de sacarificação. Em uma modalidade, entre 0,01 e 1% (p/p) de invertase é aplicado à reação de sacarificação. Em uma modalidade, entre 0,05 e 0,5% (p/p) de invertase é aplicada para a reação de sacarificação. Em outra modalidade, 0,16% (p/p) de invertase ê aplicado à reação de sacarificação.

Enzimas de sacarificação podem ser aplicadas a uma reação de sacarificação simultânea manualmente ou automaticamente, sozinha ou em combinação, em concentrações descritas anteriormente, onde a densidade de Brix do xarope de liquefação está entre 35 e 40 ° Bx. Em uma modalidade, a densidade de Brix do xarope de liquefação é 36 ° Bx. Em um aspecto, a reação de sacarificação converte parte ou a totalidade do produto maltogênica para IMOs.

Purificação de IMO e usos dos mesmos Em algumas modalidades, os métodos atuais incluem uma etapa de remoção de materiais estranhos das reações de IMO. Materiais estranhos incluem, mas não estão limitados a, que matérias-primas não reagidas e proteínas desnaturadas, carboidratos e amido. Em algumas modalidades, a purificação inclui, mas não está limitada a, filtração, sedimentação e coagulação, incluindo variações e combinações dos mesmos. Em uma modalidade, o xarope de IMO é filtrado através do uso de um dispositivo de filtração. Dispositivos de filtração, que imprensa e ajuda na filtragem, incluem: filtros de tambor; filtros de tambor rotativo; perlite; celite; e suas combinações.

Em algumas modalidades, os métodos incluem uma etapa de descoloração. Descoloração é conseguida através do tratamento dos produtos de IMO ou xarope de IMO com um material capaz de remover o material de indução de cor, como um carvão ativo granular. Em uma modalidade, o xarope de IMO é passado através de uma coluna de carbono que é carregada com carvão ativo granular a uma temperatura entre 60-90 ° C ou entre 70-75 ° C. Em uma modalidade, o xarope de IMO podem ser passado através de uma coluna de carbono por 10 min a 15h a 36 ° Bx. Em uma modalidade, o xarope de IMO pode ser passado através de uma coluna de carbono por l-15h a 36 ° Bx. Em outra modalidade, o xarope de IMO pode ser passado através de uma coluna de carbono por 5-10h a 36 ° Bx.

Em algumas modalidades, os métodos incluem a separação de componentes iônicos do xarope de IMO. Um primeiro meio de separação capaz de remover espécies iônicas do xarope de IMO inclui, mas não limitado a, resinas de troca iônica, ultrafiltração, osmose reversa, e outras técnicas cromatogrãficas que serão devidamente conhecidas por um técnico habilitado na técnica. Em uma modalidade, uma primeira etapa de separação é conduzida a uma temperatura entre 40 e 75 ° C ou entre 55 e 60 ° C.

Em uma modalidade, o primeiro meio para a separação ainda inclui resinas de troca catiônica, resinas de troca aniônica, ou combinações das mesmas. Volumes adequados de resina catiônica incluem 0,1-100% (v / v) ou 1-5% (v / v) com base no volume de xarope de IMO. Em uma modalidade, as resinas aniônicas de troca podem ser usadas. Volumes adequados de resina aniônica incluem 0,1-100% (v / v) ou 2-10% (v / v) com base no volume do xarope de IMO.

Em uma modalidade, de troca iônica pode ser realizada pela passagem de xarope de IMO através de uma coluna de troca iônica. Em uma modalidade, a coluna de troca iônica contém uma resina de troca catiônica, resina de troca aniônica, ou ambas. Em uma modalidade, a taxa de fluxo do xarope de IMO na coluna de troca iônica está entre 0,1 ml/min e 10001/min ou entre 10 e 501/min.

Em uma modalidade, o xarope de IMO é processado usando resinas de troca separadas. Para este fim, o xarope de IMO é primeiro passado através de uma resina de troca catiônica e, posteriormente, passado através de uma resina de troca aniônica. Em uma modalidade, o xarope de IMO é adicionalmente, ou em alternativamente, passado através de uma resina que contém tanto espécies de resinas catiônicas quanto aniônicas. Em uma modalidade, uma bomba de transporte é usada para passar o xarope de IMO através das resinas de troca aqui descritas. Em uma modalidade, cromatografia de troca iônica é realizada a 40-75 ° C. Em uma modalidade, a cromatografia de troca iônica é realizada a 55-60 ° C.

Em algumas modalidades, os métodos incluem concentrar o xarope de IMO a um teor de sólidos ou umidade desejados. Em uma modalidade, o xarope de IMO é concentrado a 30-75°Bx, 40-50 °Bx, ou 45-50 °Bx. Para este fim, o xarope de IMO é processado através de um meio para a remoção de umidade para se concentrar o xarope de IMO. Em uma modalidade, um meio para a remoção de umidade é a evaporação. Em uma modalidade, um Recompressor de Vapor Mecânico ("MVR") continuo ou não contínuo pode ser usado. Outros dispositivos de evaporação ou vapor conhecidos na técnica, como um evaporador triplo, também podem ser usados e serão prontamente conhecido pelo técnico habilitado na técnica.

Em uma modalidade, após o xarope de IMO ser concentrado, a hidrogenação catalítica de IMO é realizada. Em uma modalidade, catalisadores incluem os metais do grupo da platina, como platina, paládio, ródio e rutênio. Catalisadores de metais não-preciosos, tais como, níquel, ligas de níquel, níquel Raney e níquel Urushibara podem ser usados como catalisadores para a tecnologia atual.

Em um aspecto, a tecnologia atual oferece IMOs que são produzidos usando os métodos descritos neste documento. Os métodos podem ser usados para produzir vários IMOs. Em uma modalidade, glicose ramificada, glicose DP3, Panose, isomaltotriose, isomaltotetraose, isomaltoheptose, ou suas combinações, são produzidas.

Em uma modalidade, os IMOs produzidos usando os métodos atuais podem ser utilizados como aditivos alimentares ou adoçantes. Em uma modalidade, através da concentração e secagem do xarope de IMO, pasta, componentes insolúveis separados, e / ou os componentes solúveis separados, farinha ou outro pó seco podem ser obtidos. O pó resultante ou farinha pode ser incorporado em composições nas quais a presença de IMOs é desejada, por exemplo, em produtos alimentícios, isto é, cereais matinais, massas, ou aditivos alimentares, e produtos assados. Como descrito aqui, o termo "aditivo alimentar" ou "aditivos alimentares" se refere ao uso de um IMO ou IMOs como um material para polvilhar, como um ingrediente para uso na fabricação de outros alimentos, e / ou um ingrediente adicionado na superfície de alimentos e / ou líquidos.

Em uma outra modalidade, o pó seco pode ser incorporado em suplementos alimentares. A incorporação do pó seco em um suplemento alimentar pode ser fornecida em qualquer suplemento ou forma aceitável. Os suplementos dietéticos podem ser formulados para a administração oral em uma matriz, por exemplo, pós de fãrmacos, cristais, grânulos, pequenas partículas (que incluem partículas de tamanho da ordem de micrômetros, como microesferas e microcápsulas), as partículas (que incluem partículas de tamanho na ordem de milímetros), esferas, microesferas, péletes, pílulas, microcomprimidos, comprimido ou comprimidos triturados, comprimidos moldados ou comprimido triturados, e em cápsulas, que são ou duro ou mole e contem a composição como um pó, partículas, contas, solução ou suspensão. O suplemento alimentar também pode ser formulado para a administração oral como uma solução ou suspensão em um liquido aquoso, como um liquido incorporado em uma cápsula de gel ou como qualquer outra forma conveniente para a administração ou para a administração retal, como um supositório, enema ou outras formas convenientes. Os IMOs também podem ser fornecidos como um sistema de liberação controlada.

EXEMPLOS A tecnologia atual é ainda ilustrada pelos seguintes exemplos, que não devem ser interpretados como limitadores de forma alguma. Os exemplos descritos abaixo ilustram métodos para a produção e fabricação de IMOs que dizem respeito â tecnologia atual. Nos exemplos, uma invertase de Aspergillus niger foi empregada para produzir Imos a partir de um substrato com base em maltose (xarope de milho) . Entende-se que uma invertase derivada de outra fonte, por exemplo, a partir de Aspergillus oryzae, também poderia ser empregada. Hidrólise e transglicosilação de maltose são essenciais para a produção de IMO. A produção de IMO convencional é realizada através de um processo de sacarificação de duas etapas. As duas reações incluem reações maltogênica e transglicosídica separadas ou seqüenciais. Usando o método convencional, β-amilase foi primeiro reagida com um xarope de liquefação para produzir maltose, e transglucosidase, ou seja, TG, foi posteriormente adicionada para produzir IMOs. No entanto, utilizando o método melhorado simultâneo conforme descrito abaixo, é agora possível adicionar concomitantemente invertase, na presença de β-amilase, a um xarope de liquefação para a produção de IMO. Assim, os exemplos abaixo demonstram que uma invertase de Aspergillus niger tem a capacidade funcional de produzir IMOs partir de um substrato maltose através de um mecanismo transglicosidico anteriormente desconhecido.

Exemplo 1 - Método convencional para a produção de IMO A pasta de amido foi preparada pela adição de 1 kg de amido de milho e 1,5 kg de água em um recipiente para uma concentração final de 19-22°Be. A enzima de liquefação, 0,04-0,05% (p/p/ds) de α-amilase termoestãvel de Bacillus lichemiformis (Novo Nordsik, Dinamarca), foi adicionada à pasta a 105 °C por 10 min em um pH de 5,8-6,1. O xarope liquefeito foi posteriormente submetido a uma segunda via de processo de liquefação passando o xarope através de tanques de lavagem por 2 horas, assim, produzindo um xarope de equivalente de dextrose de 10-12 final ("DE") . A pasta liquefeita foi então submetida a uma primeira reação de sacarificação adicionando-se 0,052% (p/p) de β-amilase de cevada (Genencor, Rochester, NY) , e 0,07% (p/p) de pululanase de Bacillus lichemiformis (Amano Pharmaceuticals, Japão), em 60-65 °C, em um pH entre 5,0-5,5, por 48-72 horas. Uma segunda reação de sacarificação foi realizada por adição de uma solução 0,1% (p/p) de transglucosidase de Aspergillus niger (Genencor, Rochester, NY) e reagindo a mistura a 55-60 ° C durante 48-72 horas. Materiais que não reagiram foram removidos da solução sacarifiçada por filtração e a solução sacarificada foi tratada com carvão ativo para remover a cor. A solução sacarificada foi passada por uma coluna de carbono carregada com carvão ativo granular a uma temperatura entre 60-75 ° C por de aproximadamente 30 minutos a 3 horas. Resinas de troca de cátion, ânion, e de leito misto (Samyang Genex, Korea) foram empregadas para separar cromatograficamente componentes iônicos da solução a uma taxa de fluxo de 5-10 m3/h a 30-50 °C. Por fim, o xarope de IMO foi concentrado para cerca de 75 °Bx através de um evaporador MVR.

Exemplo 2 - método simultâneo para produção de IMO com invertase Uma pasta de amido foi preparada pela adição de 1 kg de amido de milho e 1,5 kg de água em um recipiente para uma concentração final de 19-22°Be. A enzima de liquefação, 0,04-0,05% (p/p/ds) de α-amilase termoestável (conforme listado no Exemplo 1), foi adicionada à pasta a 100-108 °C por 2-2,5 horas em um pH de 5,8-6,1. A pasta liquefeita foi posteriormente submetida a uma etapa única de sacarificação. Aqui, 0,052% (p/p) de β-amilase de cevada (Genencor, Rochester, NY) , 0,07% (p/p) de pululanase de Bacillus lichemiformis (Amano Pharmaceuticals, Japão), e 0. 16% (p/p) de invertase de Aspergillus niger foram adicionados à pasta liquefeita para uma concentração final de 35-40°Bx em pH 5,0-5,5. A mistura de sacarificação foi reagida a 60-65 ° C durante 48-72 horas. Materiais que não reagiram foram retirados da solução sacarificada por filtração. A solução sacarificada foi tratada com carvão ativo para remover a cor, como descrito acima no Exemplo 1. Resinas de troca iônica foram utilizadas para separar componentes iônicos da solução, como descrito acima no Exemplo 1. Por fim, o xarope de IMO foi concentrada a 75 °Bx através de um evaporador MVR. Ver FIG. 1.

Exemplo 3 - Comparação dos métodos convencional e simultâneo para produção de IMO

Este exemplo comparou a mudança no teor de IMO durante sacarificação. Para os métodos convencional e simultâneo, as reações foram realizadas como descrito acima. A FIG. 2 demonstra que o percentual de base seca (% de DB) de oligossacarídeos é idêntico para os métodos convencional e simultâneo. A abscissa delineia o espaço de tempo em horas para uma reação de sacarif icação completa, e a % de DB é representada na ordenada. Ver FIG. 2.

Exemplo 4 - Comparação dos perfis de açúcar para os métodos convencional e simultâneo Em experimentos separados, os perfis de açúcar de IMO foram comparados para os métodos convencional e simultâneo. Conforme demonstrado na Tabela 1, os perfis de produção de IMO total foram idênticos para os métodos convencional e simultâneo. Como mostrado na Tabela 1, a produção total de IMO inclui: isomaltose; glicose ramificada; DP3 glicose; Panose; isomaltotriose; isomaltotetraose e isomaltoheptaose.

Tabela 1: Perfis de Açúcar para o método convencional e simultâneo Assim, como demonstrado pelos exemplos anteriores, uma invertase isolada de Aspergillus niger possui atividade transglucosidase. Esta invertase nova contém a característica inesperada de ter a capacidade de contatar e reagir com um substrato de maltose. Esta invertase nova surpreendente e inesperadamente melhora o método convencional para a produção de IMOs por catalisação de uma reação de sacarificação simultânea de única etapa. Este novo método irã reduzir os custos da fabricação de IMO, diminuindo o tempo e a energia necessária para produzir IMOs . A divulgação atual não deve ser limitada em termos de modalidades particulares descritas no presente pedido. Muitas modificações e variações podem ser feitas sem se afastar do conceito inventivo e escopo do pedido, como será evidente para aqueles habilitados na técnica. Métodos e aparelhos funcionalmente equivalentes no escopo da divulgação, além dos aqui enumerados, serão evidentes para aqueles habilitados na técnica a partir das descrições anteriores. Tais modificações e variações são destinadas a cair dentro do escopo das reivindicações anexas. A divulgação atual é para ser limitada apenas aos termos das reivindicações anexas, junto com o escopo inteiro de equivalentes aos quais essas reivindicações são designadas. É preciso entender que esta divulgação não se limita a determinados métodos, reagentes, composições ou compostos ou sistemas biológicos, os quais podem, é claro, variar. Também é preciso ser entendido que a terminologia utilizada aqui é com o propósito de descrever modalidades particulares apenas, e não se destina a ser um fator limitante.

Além disso, onde as características ou aspectos da divulgação são descritos em termos de grupos Markush, aqueles habilitados na técnica vão reconhecer que a divulgação também é assim descrita em termos de qualquer membro individual ou subgrupo de membros do grupo Markush.

Como será compreendido por um técnico no assunto, para qualquer e todo fim, especialmente em termos de proporcionar uma descrição por escrito, todas as faixas divulgadas aqui também abrangem toda e qualquer subfaixa possível e combinações de subfaixas dos mesmos. Qualquer faixa listada pode ser facilmente reconhecida como suficientemente descritiva e permissiva de que a mesma seja dividida em pelo menos duas metades iguais, terços, quartos, quintos, décimos, etc. Como um exemplo, não limitante, cada intervalo discutido aqui pode ser facilmente dividido em um terço inferior, terço médio e terço superior, etc. Como também será compreendido por um técnico no assunto todos os termos, incluindo mas não limitado a, por exemplo, "até", "pelo menos", "maior que", "menor que", e similares incluem o número recitado e referem-se às faixas que podem ser posteriormente divididas em subfaixas como discutido acima. Finalmente, como será compreendido por um técnico no assunto, a faixa inclui cada membro individual. Assim, por exemplo, um grupo compreendendo 1-3 componentes refere-se a grupos que têm 1, 2 ou 3 componentes. Da mesma forma, um grupo com 1-5 componentes refere-se a grupos que tem 1, 2, 3, 4 ou 5 componentes, e assim por diante.

Apesar de vários aspectos e modalidade terem sido divulgados aqui, outros aspectos e modalidades serão aparentes para aqueles Inabilitados na técnica. Os vários aspectos e modalidades divulgados neste documento sao apenas para fins de ilustração e não pretendem ser um fator limitante, com o verdadeiro escopo e conceito inventivo sendo indicados pelas reivindicações seguintes.

Claims (22)

1. Método para fabricação de uma composição de isomaitooligossacarideo caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (A) contatar uma pasta de amido com uma enzima de liquefação e (B) contatar o produto da etapa (a) com uma invertase e uma enzima maltogênica, em que a invertase e a enzima maltogênica são contatadas separadamente, sequencialmente ou simultaneamente para produzir isomaltooligossacarideos ("IMO").

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a invertase e a enzima maltogênica são contatadas com o produto da etapa (a) simultaneamente para produzir IMO.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a pasta compreende de 15s a 45% em peso de amido.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a invertase é pelo menos 0,0009% do peso de todos os reagentes da etapa (b).

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a invertase é inferior a 2% do peso de todos os reagentes da etapa (b).

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa (b) ocorre em um pH acima de 2 e abaixo de 10.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa (b) ocorre a uma temperatura acima de 10°C e abaixo de 85 °C.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os isomaltooligossacarideos são seXecionados do grupo consistindo de isomaitose, giicose ramificada, DP3 giicose, giicose DP3 possuindo Xigações a-1,4 e/ou a-1,6, panose, isomaltotriose, isomaltotetraose, isomaltopentaose, isomaXtohexaose e isomaltoheptose, ou quaiquer combinação destes.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado peio fato de que peXo menos 10s dos isomaXtooiigossacarldeos produzidos são panose.

10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a purificação do isomaltooligossacarideo.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a enzima de liquefação é uma alfa-amilase.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a enzima maltogenica é uma beta-amilase ou uma α-amilase fúngica.

13. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a invertase tem atividade de transglucosidase.

14. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a invertase é uma invertase de Aspergillus.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a invertase de AspGirgíllus e uma invertase de Aspergillus niger ou uma invertase de Aspergillus oryzae.

16. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a pasta é formada a partir de um ou mais amidos e líquidos.

17. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a adição de pululanase para a etapa (b).

18. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um ou mais amidos sao selecionados a partir do grupo consistindo em amido de milho, amido de arroz, amido de trigo, tapioca, amido de batata, amido de batata doce, amido de sagu, amido de cevada, amido tratado com calor / ácido, amido de pérola, amido de milho ceráceo, amido de sorgo, amido de milho com alto teor de amilose, dextrose líquida, e suas combinações.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o amido é amido de milho.

20. Composição de isomaltooligossacarídeo caracterizada pelo fato de ser produzida de acordo com o Método da reivindicação 1.

21. Aditivo alimentar caracterizado pelo fato de que compreende os isomaltooligossacarídeos produzidos de acordo com o Método da reivindicação 1.

22. Produto alimentício caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos um ingrediente alimentar e os isomaltooligossacarídeos da reivindicação 1.