BRPI0815547B1

BRPI0815547B1 - Composição farmacêutica compreendendo depsipeptídeos cíclicos, e seus usos

Info

Publication number: BRPI0815547B1
Application number: BRPI0815547-0A
Authority: BR
Inventors: Philipp Krastel; Brigitta-Maria Liechty; Josef Gottfried Meingassner; Esther Schmitt; Erwin Paul Schreiner
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2007-08-17
Filing date: 2008-08-14
Publication date: 2020-09-15
Also published as: CN103298827B; ES2632392T3; PE20091007A1; CU20130063A7; EP2183273B1; KR20100044893A; CR11251A; PE20141199A1; TW200922613A; MX2010001849A; ZA201000776B; CA2696570A1; CU23943B1; AU2008290567A1; EP2183273A1; AR068343A1; BRPI0815547A2; TN2010000074A1; WO2009024527A1; EA017735B1

Abstract

depsipeptídeos cíclicos, seu uso e processo de produção, bem como disposição farmacêutica compreendendo os referidos depsipeptídeos cíclicos. a presente invenção refere-se a depsipeptídeos cíclicos, ou derivados destes, possuindo a estrutura de fórmula (i), e usos destes, por exemplo, como inibidores de calicreína 7 e elastase de neutrófilo humano.

Description

Campo da Invenção

[0001] A presente invenção se refere a depsipeptídeos cíclicos, ou derivados dos mesmos.

Antecedentes da Invenção

[0002] Calicreína 7 é uma S1 serina protease da família de gene de calicreína apresentando uma atividade tipo de quimiotripsina. Calicreína 7 humana (hK7, KLK7 ou enzima quimiotríptica de estrato córneo (SCCE), Swissprot P49862) desempenha um importante papel na fisiologia da pele (1, 2, 3). Ela é principalmente expressa na pele e foi relatado desempenhar um importante papel em fisiologia da pele. hK7 está envolvida na degradação das estruturas coesivas intercelulares em epitélios escamosos cornificados no processo de descamação. O processo de descamação é bem-regulado e delicadamente equilibrado com a produção de novo de corneócitos para manter uma espessura constante do estrato córneo, a camada mais externa da pele criticamente envolvida na função de barreira da pele. A este respeito, hK7 é relatado ser capaz de clivar as proteínas corneodesmossômicas corneodesmosina e desmocolina 1 (4, 5, 6). A degradação de ambas as corneodesmossomas é necessária para descamação. Além disso, muito recentemente foi mostrado que as duas enzimas de processamento de lipídeo β-glicocerebrosidase e esfingomielinase acídica podem ser degradas por hK7 (7). Ambas as enzimas de processamento de lipídeo são cossecretadas com seus substratos glicosilceramidas e esfingomielina e processam estes precursores de lipídeo polares em seus produtos mais não polares, por exemplo, ceramidas, que são subsequentemente incorporados nas membranas lamelares extracelulares. A arquitetura de membrana lamelar é crítica para uma barreira de pele funcional. Finalmente, hK7 foi mostrada ativar precursor de lnterleucina-1β (IL-1 β) a sua forma ativa in vitro (8). Uma vez que ceratinócitos expressam IL-1 β, mas não a forma ativa da enzima de conversão de IL-1β específica (ICE ou caspase 1), é proposto que ativação de IL-1β na epiderme humana ocorra por meio de outra protease, um candidato potencial sendo hK7.

[0003] Recentes estudos ligam uma atividade aumentada de hK7 a doenças de pele inflamatórias tipo dermatite atópica, psoríase ou síndrome de Netherton. Isto poderia resultar em uma degradação descontrolada de corneodesmossomas resultando em uma descamação erroneamente regulada, uma degradação realçada de enzimas de processamento de lipídeo resultando em uma arquitetura de membrana lamelar atrapalhada ou uma ativação descontrolada da citocina proinflamatória IL-1 β. O resultado da rede seria uma função de barreira da pele prejudicada e inflamação (veja também WO-A- 2004/108139).

[0004] Devido ao fato de que a atividade de hK7 é controlada em diversos níveis, vários fatores poderiam ser responsáveis por uma atividade de hK7 aumentada em doenças de pele inflamatórias. Primeiramente, a quantidade de protease sendo expressa poderia ser influenciada por fatores genéticos. Uma tal ligação genética, um polimorfismo no 3’-UTR no gene de hK7, foi recentemente descrita (9). Os autores levantam a hipótese de que a inserção de 4 pares de base descrita no 3’-UTR do gene de calicreína 7 estabiliza o mRNA de hK7 e resulta em uma superexpressão de hK7. Em segundo lugar, uma vez que hK7 é secretada por meio de corpos lamelares ao espaço extracelular de estrato córneo como zimogênio e ela não é capaz de se autoativar, ela precisa ser ativada por outra protease, por exemplo, hK5 (5). Atividade descontrolada de uma tal enzima de ativação poderia resultar em uma superativação de hK7. Em terceiro lugar, hK7 ativada pode ser inibida por inibidores naturais tipo LEKTI, ALP ou elafina (10, 11). A expressão diminuída ou a falta de tais inibidores poderia resultar em uma atividade realçada de hK7. Recentemente foi constatado que mutações no gene spinkõ, codificando para LEKTI, são causadoras de síndrome de Netherton (12) e uma mutação de ponto único no gene está ligada à dermatite atópica (13, 14). Finalmente, outro nível de controle da atividade de hK7 é o pH. hK7 possui um ideal de pH neutro a levemente alcalino (2) e há um gradiente de pH de neutro a acídico das camadas mais internas às mais externas na pele. Fatores ambientais tipo sabão poderiam resultar em um aumento de pH nas camadas mais externas do estrato córneo na direção do ideal de pH de hK7 desse modo aumentando a atividade de hK7.

[0005] A hipótese de que uma atividade aumentada de hK7 esteja ligada a doenças de pele com uma barreira de pele prejudicada incluindo doenças de pele inflamatórias e hiperproliferativas é suportada pelos seguintes estudos: Primeiramente, pacientes de síndrome de Netherton mostram um aumento dependente de fenótipo na atividade de serina protease, uma diminuição em corneodesmossomas, uma diminuição nas enzimas de processamento de lipídeo β-glicocerebrosidase e esfingomielinase acídica, e uma função de barreira prejudicada (15, 16). Em segundo lugar, um camundongo transgênico superexpressando calicreína 7 humana mostra um fenótipo de pele similar àquele encontrado em pacientes com dermatite atópica (17, 18, 19). Em terceiro lugar, na pele de pacientes de dermatite atópica e psoríase níveis elevados de hK7 foram descritos (17, 20). Além disso, atividade aumentada de K7 e desta forma disfunção de barreira epitelial podem também desempenhar um importante papel na patologia de outras doenças epiteliais tais como doença inflamatória do intestino e doença de Crohn.

[0006] Por esse motivo, hK7 é considerada como sendo um alvo potencial para o tratamento de doenças envolvidas com disfunção epitelial tal como doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tipo dermatite atópica, psoríase, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como doença inflamatória do intestino e doença de Crohn e há uma necessidade por moduladores específicos (agonistas ou inibidores) destes.

[0007] Elastase de neutrófilo humano (HNE, também conhecida como elastase de leucócito humano, HLE) pertence à família de quimiotripsina de serina proteinases. Sua atividade catalítica é ideal em torno de pH 7, e o sítio catalítico é composto de três resíduos de aminoácido ligados a hidrogênio: His57, Asp102, e Ser195 (em numeração de quimiotripsina), os quais formam a assim chamada tríade catalítica. A enzima é composta de uma cadeia de peptídeo único de 218 resíduos de aminoácido e quatro pontes de dissulfeto. Ela mostra identidade de seqüência de 30 a 40% com outras serina proteinases elastinaolíticas ou não elastinaolíticas. HNE preferencialmente cliva a cadeia de insulina B oxidada com Vai na posição P1, mas ela também hidrolisa ligações com Ala, Ser, ou Cys na posição P1.

[0008] HNE está localizada nos grânulos azurofílicos de leucócitos polimorfonucleares (PMNLs), onde a concentração de HNE é bastante alta (3 pg de enzima/106 células). A principal função fisiológica é digerir bactérias e complexos imunes e tomar parte no processo de defesa de hospedeiro. Auxiliares de HNE na migração de neutrófilos do sangue a vários tecidos tais como as vias aéreas em resposta a fatores quimiotáticos. HNE também toma parte em cicatrização de ferida, reparo de tecido, e na apoptose de PMNLs.

[0009] Além de elastina (componente altamente flexível e altamente hidrofóbico de tecido conjuntivo de pulmão, artérias, pele, e ligamentos), HNE cliva muitas proteínas com importantes funções biológicas, incluindo diferentes tipos de colágenos, proteínas de membrana, e proteoglicanos de cartilagem. HNE também indiretamente favorece a decomposição de proteínas de matriz extracelular por ativação de procolagenase, prostromelisina, e progelatinase. HNE inativa vários inibidores de proteinase endógena tais como α2-antiplasmina, a1-antiquimiotripsina, antitrombina, e tecido inibidor de metaloproteinases.

[00010] Atividade de elastase extracelular é rigorosamente controlada no sistema pulmonar por inibidor de α1-protease (α1 PI), responsável por proteção das vias aéreas inferiores de lesão elastolítica, enquanto que o inibidor de proteinase de leucócito secretório protege principalmente as vias aéreas superiores. Em vários estados patofisiológicos pulmonares, por exemplo, enfisema pulmonar, bronquite crônica, e fibrose cística, inibidores de elastase endógena são ineficientes em regulação de atividade de HNE.

[00011] HNE é considerada como sendo a fonte primária de lesão de tecido associada a doenças inflamatórias tais como enfisema pulmonar, sindrome da angústia respiratória do adulto (ARDS), bronquite crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), hipertensão pulmonar, e outras doenças inflamatórias assim como displasia broncopulmonar em neonatos prematuros. HNE está envolvida na patogênese de secreções de via aérea aumentada e anormal comumente associadas a doenças inflamatórias da via aérea. Desta forma, fluido de lavagem broncoalveolar (BAL) de pacientes com bronquite crônica e fibrose cística possui atividade de HNE aumentada. Além disso, elastase excessiva foi proposto contribuir não apenas para estas doenças inflamatórias crônicas, mas também para doenças inflamatórias agudas tais como ARDS e choque séptico.

[00012] Por esse motivo, HNE é considerada como sendo um alvo potencial para o tratamento de doenças envolvidas com atividade de HNE tais como doenças inflamatórias tais como enfisema pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto (ARDS), bronquite crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), hipertensão pulmonar, e outras doenças inflamatórias assim como displasia broncopulmonar em neonatos prematuros, e doenças envolvidas com secreções de via aérea aumentada e anormal assim como doenças inflamatórias agudas. Desta forma há uma necessidade por moduladores específicos (agonistas ou inibidores) no caso de HNE.

[00013] O tratamento pode ser por aplicação local ou sistêmica de tais cremes, unguentos e supositórios ou por aplicação oral ou sc ou iv ou por inalação, respectivamente.

[00014] Chondromyces é um gênero na família Polyangiaceae, que pertence ao gênero Myxococcales dentro das Delta-proteobactérias. Bactérias do gênero Myxococcales, também chamadas mixobactérias, são bactérias em forma de bastão gram-negativas com duas características distinguindo-as da maioria das outras bactérias. Elas enxameiam em superfícies sólidas usando um mecanismo de deslizamento ativo e agregam-se para formar corpos de frutificação na falta de alimentação (Kaiser (2003)). Os presentes inventores identificaram depsipeptídeo cíclico produzido por Chondromyces que são capazes de especificamente modular calicreína 7.

Sumário da Invenção

[00015] Em um aspecto, a presente invenção se refere a depsipeptídeos cíclicos, ou derivados destes, apresentando a estrutura de Fórmula (I):

[00016] em que a ligação de éster é encontrada entre o grupo carbóxi de A7 e o grupo hidróxi de A2, em que X e Ai são cada um independentemente opcionais, e em que X é qualquer resíduo químico, em que Ai é um aminoácido padrão que não é ácido aspártico ou um derivado do referido aminoácido padrão, em que A2 é treonina ou serina, em que A3 é um aminoácido padrão não básico ou um derivado não básico deste, em que A4 é Ahp, desidro-AHP, prolina ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, em que As é isoleucina ou valina, em que Aβ é tirosina ou um derivado do mesmo e em que A7 é leucina, isoleucina ou valina.

[00017] Alternativamente, os depsipeptídeos cíclicos da invenção, ou derivados destes, podem ser representados de acordo com a Fórmula (I’):

[00018] em que X e Ai são tal como definido nas reivindicações, e em que

[00019] R2 é H ou metila

[00020] R3 a cadeia lateral de um aminoácido não básico ou um derivado não básico deste

[00021] R5 é a cadeia lateral do aminoácido isoleucina ou valina

[00022] R6 é a cadeia lateral de tirosina ou um derivado da mesma

[00023] R7 é a cadeia lateral do aminoácido leucina, isoleucina ou valina

[00024] Y é ou hidrogênio ou um grupo metila,

[00025] e em que Ahp pode ser substituída por desidro-AHP, Ahp-I, Ahp-ll, prolina ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos.

[00026] A presente invenção também se refere a um sal farmaceuticamente aceitável de um tal depsipeptídeo cíclico ou um derivado do mesmo.

[00027] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, X pode ser H ou um resíduo de acila, por exemplo, CH3CH2CH(CH3)CO, (CH3)2CHCH2CO OU (CH3)2CHCO.

[00028] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A1 pode ser glutamina, ácido glutâmico, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, por exemplo, uma nitrila glutámica ou um éster de ácido glutâmico.

[00029] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A2 pode ser treonina ou um derivado da mesma.

[00030] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A3 pode ser leucina.

[00031] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A6 pode ser tirosina.

[00032] Em algumas modalidades dos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A4 pode ser o derivado de Ahp 3-amino-piperidin-2-ona, Ahp-I ou Ahp-ll.

[00033] Em algumas modalidades do depsipeptídeos cíclicos, ou derivados destes, da invenção, X é (CH3)2CHCO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é Ahp ou um derivado da mesma, As é isoleucina ou valina, Aβ é tirosina ou um derivado do mesmo e A7 é isoleucina ou valina.

[00034] Em outras modalidades de depsipeptídeo cíclico, ou derivados deste, da invenção, X é CH3CH2CH(CH3)CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é Ahp ou um derivado da mesma, As é isoleucina, Ae é tirosina ou um derivado do mesmo, e A7é isoleucina.

[00035] Em ainda outras modalidades de depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, X é CH3CH2CH(CH3)CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é desidro-Ahp ou um derivado da mesma, As é isoleucina, Aβ é tirosina ou um derivado do mesmo, e A? é isoleucina.

[00036] Em modalidades adicionais de depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, X é (CH3)2CHCH2CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é desidro-AHP, Ahp ou um derivado da mesmas, As é isoleucina, As θ tirosina ou um derivado do mesmo, e A7 é isoleucina.

[00037] A presente invenção além do mais também se refere a depsipeptídeos cíclicos, ou derivados destes, apresentando a estrutura de Fórmula (I)

[00038] em que a ligação de éster é encontrada entre 0 grupo carbóxi de A7 e 0 grupo hidróxi de A2, em que X é (CH3)2CHCH2CO, em que Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, em que A2 é treonina, em que A3 é leucina, em que A4 é Ahp ou prolina, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, em que As é fenilalanina, em que As é tirosina ou um derivado do mesmo, e em que A? é valina.

[00039] Em modalidades particulares destes, X é (CH3)2CH CH2CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é Ahp, ou um derivado da mesma, As é fenilalanina, A6 é tirosina ou um derivado do mesmo, e A7 é valina.

[00040] Em outras modalidades destes, X é (CHs^CH CH2CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é prolina, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, As é fenilalanina, AΘ é tirosina ou um derivado do mesmo, e A7 é valina. Nestas modalidades, o átomo de nitrogênio da ligação de amida entre A5 e A6 pode ser substituído com uma metila.

[00041] No depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, A1, A2, A3, A5, A6 e A7 podem ser L-aminoácidos. Além do mais, A4 pode ser 3S,6R Ahp.

[00042] A presente invenção também se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento. Por exemplo, para 0 tratamento de câncer, em particular câncer ovariano, ou para 0 tratamento de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano, fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma.

[00043] Em uma modalidade, a presente invenção se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento para o tratamento de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, syndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano.

[00044] Em outra modalidade, a presente invenção se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento para o tratamento de fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma.

[00045] Em ainda outra modalidade a presente invenção se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento para o tratamento de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso.

[00046] A presente invenção também abrange processos para produção do depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, por exemplo, por cultivo de uma cepa de Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em um meio adequado, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido, ou por expressão dos genes de biossíntese de uma cepa Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em uma cepa de hospedeiro microbiano heterólogo, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido.

[00047] Estes processos da invenção podem ser desempenhados com as cepas Chondromyces crocatus (DSM 19329) ou Chondromyces robustus (DSM 19330) ou Chondromyces apiculatus (DSM 21595).

[00048] A presente invenção em consequência também se refere a micro-organismos Chondromyces isolados depositados sob o número de acesso DSM 19329 ou DSM 19330 ou DSM 21595 e a depsipeptídeos cíclicos, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, produzido por estes micro-organismos Chondromyces isolados.

Descrição das Figuras

[00049] Figura 1: Espectro de 1 H-RMN do composto de Fórmula (II) (600 MHz, de-DMSO)

[00050] Figura 2: Espectro de 13C-RMN do composto de Fórmula (II) (150 MHz, de-DMSO)

[00051] Figura 3: Espectro de 1H-RMN do composto de Fórmula (VIII) (600 MHz, de-DMSO)

[00052] Figura 4: Espectro de 13C-RMN do composto de Fórmula (VIII) (150 MHz, de-DMSO).

[00053] Figura 5: Espectro de 1 H-RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em que a Ahp foi convertida em 3-amino-piperidin-2-ona (Exemplo 4).

[00054] Figura 6: Espectro de 1H RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 5. (500 MHz, de- DMSO)

[00055] Figura 7: Espectro de 1 H-RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 19. (500 MHz, de- DMSO)

[00056] Figura 8: Espectro de 1 H-RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 21. (500 MHz, dβ- DMSO)

[00057] Figura 9: Espectro de 1H RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 26. (500 MHz, dβ- DMSO)

[00058] Figura 10: Espectro de 1 H-RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 32. (500 MHz, dβ- DMSO)

[00059] Figura 11: Espectro de 1 H-RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 44. (500 MHz, dβ- DMSO)

[00060] Figura 12: Espectro de 1 H-RMN de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 45. (500 MHz, de- DMSO)

Descrição Detalhada da Invenção

[00061] Tal como descrito aqui acima e nas reivindicações, a presente invenção se refere em um aspecto a depsipeptídeos cíclicos, ou derivados destes, apresentando a estrutura de Fórmula (I):

[00062] em que a ligação de éster é encontrada entre o grupo carbóxi de A7 e o grupo hidróxi de A2, em que X e Ai são cada um independentemente opcionais, e em que X é qualquer resíduo químico, em que Ai é um aminoácido padrão que não é ácido aspártico, em que A2 é treonina ou serina, em que A3 é um aminoácido padrão não básico ou um derivado não básico deste, em que A4 é Ahp, desidro-AHP, prolina ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, em que As θ isoleucina ou valina, em que Ae é tirosina ou um derivado do mesmo e em que A7 é leucina, isoleucina ou valina.

[00063] Alternativamente, os depsipeptídeos cíclicos da invenção, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, podem ser representados de acordo com a Fórmula (I’):

[00064] em que X e Ai são tal como definido nas reivindicações, e em que

[00065] R2 a cadeia lateral do aminoácido treonina ou serina

[00066] R3 a cadeia lateral de um aminoácido não básico ou um derivado não básico deste

[00067] R5 é a cadeia lateral do aminoácido isoleucina ou valina

[00068] R6 é a cadeia lateral da tirosina ou um derivado da mesma

[00069] R7 é a cadeia lateral do aminoácido leucina, isoleucina ou valina

[00070] Y é ou hidrogênio ou um grupo metila,

[00071] e em que Ahp pode ser substituída por desidro-AHP, Ahp-I, Ahp-ll, prolina ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos.

[00072] A presente invenção também se refere a um sal farmaceuticamente aceitável de um tal depsipeptídeo cíclico ou um derivado do mesmo.

[00073] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, o átomo de nitrogênio da ligação de amida entre A5 e A6 pode ser substituído com uma metila.

[00074] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, X pode ser H ou um resíduo de acila, por exemplo, CH3CH2CH(CH3)CO, (CH3)2CHCH2CO OU (CH3)2CHCO.

[00075] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A1 pode ser glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos.

[00076] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A2 pode ser treonina.

[00077] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A3 pode ser leucina.

[00078] Nos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A6 pode ser tirosina ou um derivado da mesma.

[00079] Em algumas modalidades dos depsipeptídeos cíclicos da invenção, A4 pode ser o derivado de Ahp 3-amino-piperidin-2-ona, Ahp-I ou Ahp-ll.

[00080] Em algumas modalidades de depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, X é (CHs^CHCO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é Ahp ou um derivado da mesma, As θ isoleucina ou valina, As é tirosina ou um derivado do mesmo e A7 é isoleucina ou valina.

[00081] Em outras modalidades de depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, X é CH3CH2CH(CH3)CO Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é Ahp ou um derivado da mesma As é isoleucina, Aβ é tirosina ou um derivado do mesmo, e A7é isoleucina.

[00082] Em ainda outras modalidades de depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, X é CH3CH2CH(CH3)CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é desidro-Ahp ou um derivado da mesma, A5 é isoleucina, Ae é tirosina ou um derivado do mesmo, e A? é isoleucina.

[00083] Em modalidades adicionais de depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, X é (CH3)2CHCH2CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é desidro-Ahp ou um derivado da mesma, As é isoleucina, Ae é tirosina ou um derivado do mesmo, e A7 é isoleucina.

[00084] A presente invenção além do mais também se refere a depsipeptídeos cíclicos, ou derivados destes, apresentando a estrutura de Fórmula (I)

[00085] em que a ligação de éster é encontrada entre 0 grupo carbóxi de A7 e 0 grupo hidróxi de A2, em que X é (CH^CHCHaCO, em que Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, em que A2 é treonina, em que A3 é leucina, em que A4 é Ahp ou prolina, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, em que As é fenilalanina, em que Ae é tirosina ou um derivado do mesmo, e em que A7 é valina.

[00086] Em modalidades particulares destes, X é (CH3)2CH CH2CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é Ahp, ou um derivado da mesma, A5 é fenilalanina, A6 é tirosina ou um derivado do mesmo, e A7 é valina.

[00087] Em outras modalidades destes, X é (CHs^CH CH2CO, Ai é glutamina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos A2 é treonina, A3 é leucina, A4 é prolina, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, As é fenilalanina, Aε θ tirosina ou um derivado do mesmo, e A7 é valina. Nestas modalidades, 0 átomo de nitrogênio da ligação de amida entre A5 e A6 pode ser substituído com uma metila.

[00088] No depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção A1, A2, A3, A5, A6 e A7 podem ser L-aminoácidos. Além do mais, A4 pode ser 3S,6R Ahp.

[00089] A5 representa isoleucina, fenilalanina ou valina. A5 é em particular isoleucina ou valina, e de preferência isoleucina.

[00090] Em outra modalidade, A5 pode ser fenilalanina em particular quando A4 não é Ahp, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00091] Em outra modalidade, A4 é 5-hidroxiprolina e A5 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00092] Em outra modalidade, A4 é Ahp e A5 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00093] Em outra modalidade, A4 é Ahp-I e A5 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00094] Em outra modalidade, A4 é Ahp-ll e A5 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00095] Em outra modalidade, A4 é Ahp, A5 e A7 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00096] Em outra modalidade, A4 é Ahp-I, A5 e A7 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00097] Em outra modalidade, A4 é Ahp-ll, A5 e A7 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00098] Em outra modalidade, A4 é 5-hidroxiprolina, A5 e A7 é isoleucina, e as variáveis restantes são tal como definido na reivindicação 1.

[00099] Tal como usado aqui, A1 é uma glutamina, ácido glutâmico, ornitina, ou um derivado de glutamina tal como, por exemplo, nitrila glutâmica, éster de ácido glutâmico tal como éster de Ci-i2alquila (por exemplo, éster de metila de ácido glutâmico) ou tal como éster de Ce- 24arila (por exemplo, éster de fenila ou benzila de ácido glutâmico).

[000100] A presente invenção também se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento. Por exemplo, para o tratamento de câncer, em particular câncer ovariano, ou para o tratamento de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, sindrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite.

[000101] Em uma modalidade, a presente invenção se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento para o tratamento de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, sindrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano.

[000102] Em outra modalidade a presente invenção se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento para o tratamento de fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma.

[000103] Em ainda outra modalidade, a presente invenção se refere ao uso dos depsipeptídeos acima descritos, e derivados destes, como um medicamento para o tratamento de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso.

[000104] A presente invenção também abrange processos para produção do depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, da invenção, por exemplo, por cultivo de uma cepa de Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em um meio adequado, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido, ou por expressão dos genes de biossíntese de uma cepa de Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em uma cepa de hospedeiro microbiano heterólogo, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido.

[000105] Estes processos da invenção podem ser desempenhados com as cepas Chondromyces crocatus (DSM 19329) ou Chondromyces robustus (DSM 19330) ou Chondromyces apiculatus (DSM 21595).

[000106] A presente invenção em consequência também se refere a micro-organismos Chondromyces isolados depositados sob o número de acesso DSM 19329 ou DSM 19330 ou DSM 21595 e a depsipeptídeos cíclicos, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, produzido por estes micro-organismos Chondromyces isolados.

[000107] A presente invenção fornece:

[000108] Um depsipeptídeo cíclico, ou um derivado do mesmo, apresentando a estrutura de Fórmula (I):

[000109] em que uma ligação de éster é formada entre o grupo carbóxi de A7 e o grupo hidróxi de A2,

[000110] em que X e Ai são cada um independentemente opcionais,

[000111] e em que

[000112] X é H ou uma porção de modificação de grupo amino e pode ser tipicamente selecionados de um resíduo de carbonila de arila ou de um resíduo de acila,

[000113] Ai é glutamina, ornitina, ácido glutâmico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos;

[000114] A2 é treonina ou serina,

[000115] A3 é leucina,

[000116] A4 é Ahp, 3-amino-piperidina-2-ona, desidro-AHP, Ahp-I, Ahp-ll, prolina, 5-hidróxi-prolina ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos, em que o ponto de fusão (com A3 e As) está no átomo de nitrogênio e no oxigênio de carboxila (em virtude da substituição de um átomo de hidrogênio por uma ligação) da prolina, e 5-hidroxiprolina,

[000117] em que Ahp, 3-amino-piperidina-2-ona, desidro-AHP, Ahp-I, e Ahp-ll, são tal como definido abaixo, e em que o ponto de fusão (com A3 e As) está nos átomos de nitrogênio dos referidos compostos (em virtude da substituição de um átomo de hidrogênio por uma ligação): 3-amino-6-hidróxi-piperidin-2-ona (Ahp) Ahp-I, e Ahp-II, são tal como definido abaixo, e em que o ponto de fusão (com A3 e A5) está nos átomos de nitrogênio dos referidos compostos (em virtude da substituição de um átomo de hidrogênio por uma ligação):

[000118] em que X é O ou uma ligação, eRé uma porção orgânica ou é um radical tal como definido na reivindicação 3,

[000119] As é isoleucina, fenilalanina ou valina,

[000120] Ae é tirosina, N-Me-tirosina ou um derivado da mesma,

[000121] A7 é leucina, isoleucina ou valina,

[000122] ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[000123] O depsipeptídeo da reivindicação 1 em que X é CH3CH2CH(CH3) CO, (CH3)2CHCH2CO, (CH3)2CHCO, CH3CO OU Fenil- CO.

[000124] O depsipeptídeo da reivindicação 1 em que o átomo de nitrogênio da ligação de amida entre A5 e A6 é substituído com uma metila e o grupo OH da tirosina é OR, em que R é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (Ci-i2)alquila, (C2-i2)alquenila, (C2- i2)alquinila, halo(Ci-i2)alquila, halo(C2-i2)alquenila, halo(C2-i2)alquinila, (Ci-i2)alcoxicarbonila, (Ci-i2)alcóxi-carbonil(Ci-i2)alquila, (Ci- i2)alquilaminocarbonila, não substituído ou também substituído por arila, arilalquila, arilalquenila ou arilalquinila, heterociclila e heterociclilalquila.

[000125] O depsipeptídeo da reivindicação 1 em que A4 é o derivado de Ahp 3-amino-piperidin-2-ona, Ahp-I ou Ahp-ll, em que R é selecionado do grupo consistindo em (Ci-i2)alquila, (C2-i2)alquenila, (C2-i2)alquinila, halo(Ci-i2)alquila, (Ci-i2)alcóxi(Ci-i2)alquila, (Ci-i2)alcóxi(Ci-i2)alcóxi(Ci-i2)alquila, hidróxi(Ci-i2)alquila, fenila e fenil(Ci-6)alquila.

[000126] O depsipeptídeo da reivindicação 1 em que o resíduo de acila X é CH3CH2CH(CH3)CO ou (CH3)2CHCO,

[000127] Ai é glutamina, ácido glutâmico, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos,

[000128] A2 é treonina,

[000129] A3é leucina,

[000130] A4 é Ahp, 3-amino-piperidina-2-ona, prolina, 5-hidróxi- prolina ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos,

[000131] As é isoleucina,

[000132] Ae é tirosina, N-Me-tirosina ou um derivado da mesma,

[000133] A? é isoleucina ou valina, de preferência isoleucina.

[000134] O depsipeptídeo de quaisquer das reivindicações anteriores em que A4 é Ahp, Ahp-I, 3-amino-piperidina-2-ona, prolina, ou 5- hidróxi-prolina, de preferência Ahp, Ahp-I, 3-amino-piperidina-2-ona, ou 5-hidróxi-prolina, também de preferência Ahp, Ahp-I ou 5-hidróxi- prolina, mais preferivelmente Ahp.

[000135] Um depsipeptídeo da reivindicação 1, que é um composto de acordo com as Fórmulas A ou B,

[000136] em que X e Ai são tal como definido na reivindicação 1, e em que

[000137] R2 a cadeia lateral do aminoácido treonina ou serina,

[000138] R3 a cadeia lateral de leucina,

[000139] R5 é a cadeia lateral do aminoácido isoleucina ou valina, em particular R5 representa isoleucina,

[000140] R6 é a cadeia lateral de tirosina opcionalmente derivada, em particular opcionalmente derivada em seu grupo hidroxila tal como definido na reivindicação 3,

[000141] R7 é a cadeia lateral do aminoácido leucina, isoleucina ou valina, em particular R7 representa isoleucina,

[000142] Y é ou hidrogênio ou uma metila, e Y é em particular metila.

[000143] O depsipeptídeo cíclico de quaisquer das reivindicações anteriores em que A1, A2, A3, A5, A6 e A7 são L-aminoácidos.

[000144] O depsipeptídeo cíclico de quaisquer das reivindicações anteriores em que A4 é 3S,6R Ahp.

[000145] O depsipeptídeo cíclico de quaisquer das reivindicações anteriores em que A1 é uma glutamina, ornitina, ou um derivado de glutamina tal como descrito em quaisquer dos exemplos da descrição, e é, por exemplo, selecionado de nitrila glutâmica, éster de ácido glutâmico tal como éster de Ci-i2alquila (por exemplo, éster de metila de ácido glutâmico) ou tal como éster de Ce^arila (por exemplo, éster de fenila ou benzila de ácido glutâmico).

[000146] Uma composição farmacêutica compreendendo um depsipeptídeo cíclico de quaisquer das reivindicações anteriores em conjunção com um veículo e/ou ingrediente aceitável farmacêutico.

[000147] O depsipeptídeo cíclico de quaisquer das reivindicações anteriores para uso como um medicamento, em particular para uso tal como descrito nos métodos para tratamento de um paciente, tal como reivindicações 13 a 15, e o uso dos referidos depsipeptídeos na fabricação de um medicamento para o tratamento em uma doença ou distúrbio tal como descrito nas referidas reivindicações do método.

[000148] Um método de tratamento de um sujeito sofrendo de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano, fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma, compreendendo administração ao referido sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1 a 10.

[000149] Um método de tratamento de um sujeito de acordo com a reivindicação 13, em que o sujeito sofre de queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano.

[000150] Um método de tratamento de um sujeito de acordo com a reivindicação 14, em que o sujeito sofre de queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida.

[000151] Um método de tratamento de um sujeito de acordo com a reivindicação 13, em que o sujeito sofre de fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma.

[000152] Um processo para produção do depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1 a 10 compreendendo cultivo de uma cepa de Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em um meio adequado, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido.

[000153] Um processo para produção do depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1 a 10 compreendendo expressão dos genes de biossíntese de uma cepa de Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em uma cepa de hospedeiro microbiano heterólogo, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido.

[000154] O processo de reivindicações 17 ou 18 em que a cepa é Chondromyces crocatus (DSM 19329) ou Chondromyces robustus (DSM 19330) ou Chondromyces apiculatus (DSM 21595).

[000155] Um micro-organismo Chondromyces isolado produzindo o depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1 a 10, depositado sob o número de acesso DSM 19329 ou DSM 19330 ou DSM 21595.

[000156] Um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, produzido pelo micro-organismo Chondromyces isolado da reivindicação 20 ou obtido por um processo de acordo com as reivindicações 17 a 18.

[000157] Um processo para a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 que compreende alternativamente: a) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000158] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000159] com um ácido orgânico ou inorgânico, ou um ácido de Lewis em uma temperatura entre -78°C e 150°C; b) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000160] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000161] com hidrogênio molecular ou fonte deste na presença de um catalisador em um solvente em uma temperatura entre -50 e 100°C; c) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000162] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000163] com um ácido orgânico ou inorgânico ou um ácido de Lewis, na presença de um agente redutor em uma temperatura entre - 78°C e 150°C; ou d) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000164] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000165] com um alcanol substituído ou não substituído e um ácido orgânico ou inorgânico, ou um ácido de Lewis, em uma temperatura entre-78°C e 150°C; e) - a preparação de compostos em que A1 é

[000166] em que n = 1,2 e A4 é

[000167] em que R preferencialmente é H, alquila, alquila substituída, através de tratamento de um composto em que A1 é Gin ou Asn e A4 é

[000168] em que R de preferência é H, alquila, alquila substituída, com um alcanol substituído ou não substituído e um ácido orgânico ou inorgânico ou um ácido de Lewis em um solvente ou sem um solvente em uma temperatura entre -78°C e 150°C; f) - a preparação de compostos em que A1 é

[000169] em que R de preferência é H, OH, O-alquila, O-alquila substituída, O-acila, através de tratamento de um composto em que A1 é Gin ou Asn e A4 é

[000170] com um agente de desidratação em um solvente ou sem um solvente em uma temperatura entre -78°C e 150°C; g) - a preparação de compostos em que A4 é e A6 é

[000171] em que R de preferência é alquila, alquila substituída, acila, alcoxicarbonila através de tratamento de um composto em que A4 é

[000172] e A6 é Tyr, com um agente de alquilação ou um agente de acilação em um solvente ou sem um solvente em uma temperatura entre-78°C e 150°C.

[000173] Um depsipeptídeo cíclico, ou um derivado do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em particular e essencialmente tal como descrito na descrição e/ou nos exemplos de trabalho.

[000174] Modalidades específicas de depsipeptídeos cíclicos da invenção são:

[000175] Os depsipeptídeos cíclicos de Fórmula (II) a (VII), (XI) a (XIV) e (XVII) podem ser produzidos pela cepa Chondromyces crocatus da invenção (DSM 19329).

[000176] Outras modalidades específicas de depsipeptídeos cíclicos da invenção são:

[000177] Os depsipeptídeos cíclicos de Fórmula (VIII) a (X) podem ser produzidos pela Chondromyces robustus da invenção (DSM 19330).

[000178] Outras modalidades específicas de depsipeptídeos cíclicos da invenção são:

[000179] Os depsipeptídeos cíclicos de Fórmula (XV) a (XVI) podem ser produzidos pela Chondromyces apiculatus da invenção (DSM 21595). Lista de abreviações Ahp 3-amino-6-hidróxi-2-piperidona DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH hK7 Calicreína 7 humana HPLC Cromatografia líquida de alto desempenho/pressão HTS Análise de Alta Produtividade IC Cultura intermediária ID Identificação MB Mixobactérias MC Cultura principal PC Pré-cultura PO2 Pressão parcial de oxigênio em caldo de cultura (100% = saturação com ar) rpm Rotações por minuto SCCE Enzima quimiotríptica de estrato córneo SPEX Extração de fase sólida vvm Taxa de aeração (Volume de ar por volume de cultura e por minuto)

[000180] Um "resíduo químico" pode ser qualquer porção química orgânica ou não orgânica. A expressão "resíduo químico" inclui, mas não está limitado a grupo alifático substituído ou não substituído, por exemplo, C1-C3 alquila, CI-CΘ alquila, ou C1-C12 alquila, arila substituída ou não substituída, arilalquila substituída ou não substituída, heteroarila substituída ou não substituída, ou halogênio. Por exemplo, um resíduo químico tal como definido nas reivindicações pode ser quaisquer dos grupos químicos descritos aqui abaixo.

[000181] A expressão "resíduo químico" inclui, mas não está limitado a aminoácidos, peptideos, polipeptídeos, proteínas e outros mais.

[000182] Exemplos de porção química não orgânica são, por exemplo, halogênios, tais como Br ou Cl.

[000183] Um "grupo alifático" é porção não aromática que pode conter qualquer combinação de átomos de carbono, átomos de hidrogênio, átomos de halogênio, oxigênio, nitrogênio ou outros átomos, e opcionalmente conter uma ou mais unidades de insaturação, por exemplo, ligações duplas e/ou triplas. Um grupo alifático pode ser de cadeia linear, ramificado ou cíclico e de preferência contém entre cerca de 1 e cerca de 24 átomos de carbono, mais tipicamente entre cerca de 1 e cerca de 12 átomos de carbono. Além de grupos de hidrocarboneto alifático, grupos alifáticos incluem, por exemplo, polialcoxialquilas, tais como polialquileno glicóis, poliaminas, e poliiminas, por exemplo. Tais grupos alifáticos podem ser também substituídos.

[000184] Os termos "C1-C3 alquila", "CI-CΘ alquila," ou "C1-C12 alquila," tal como usado aqui, referem-se a radicais de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada saturada contendo entre um e três, um e doze, ou um e seis átomos de carbono, respectivamente. Exemplos de radicais de C1-C3 alquila incluem radicais de metila, etila, propila e isopropila; exemplos de radicais de Ci-Ce alquila incluem, mas não estão limitados a, radicais de metila, etila, propila, isopropila, n-butila, terc-butila, sec-butila, n-pentila, neopentila e n-hexila; e exemplos de radicais de C1-C12 alquila incluem, mas não estão limitados a, radicais de etila, propila, isopropila, hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodecila e outros mais.

[000185] O termo "alquila substituída," tal como usado aqui, se refere a uma alquila, tal como um grupo C1-C12 alquila ou CI-CΘ alquila, substituída por um, dois, três ou mais substituintes alifáticos.

[000186] Substituintes alifáticos adequados incluem, mas não estão limitados a,—F,--CI,--Br,--l,--OH, hidróxi protegido, éteres alifáticos, éteres aromáticos, oxo,--NO2,--CN,--Ci-Ci2-alquila opcionalmente substituída com halogênio (tal como per-halo-alquilas), C2-C12- alquenila opcionalmente substituída com halogênio,--C2-Ci2-alquinila opcionalmente substituída com halogênio,--NH2, amino protegido,--NH- -Ci-Ci2-alquila,-NH~C2-Ci2-alquenila,-NH-C2-Ci2-alquenila,--NH--C3- Ci2-cicloalquila,-NH-arila,--NH-heteroarila,-NH-heterocicloalquila,- dialquilamino,-diarilamino, -diheteroarilamino,--O--Ci-Ci2-alquila,--O-- C2-Ci2-alquenila,-O-C2-Ci 2-alquinila,-O-C3-Ci2-cicloalquila,-O- arila,--O-heteroarila,--O-heterocicloalquila,--C(O)--Ci-Ci2-alquila,-- C(O)--C2-Ci2-alquenila,-C(O)--C2-Ci2-alquinila,-C(O)--C3 -C12- cicloalquila,--C(O)-arila,-C(O)-heteroarila,--C(O)-heterocicloalquila,- CONH2,--CONH--Ci-Ci2-alquila,-CONH-C2-Ci2-alquenila,-CONH--C2- Ci2-alquinila,~CONH--C3 -Ci2-cicloalquila,-CONH-arila,-CONH- heteroarila,-CONH-heterocicloalquila,-CO2--Ci-Ci2 -alquila,-CO2--C2- Ci2-alquenila,~CO2--C2-Ci2-alquinila,-CO 2--C3-Ci2-cicloalquila,--Cθ2- arila,~CO 2-heteroarila,-CO2-heterocicloalquila,--OCO2--Ci-Ci2- alquila,-OCO2--C2-Ci2-alquenila,--OCO2--C2-Ci2-alquinila,-OCO2~C3- Ci2-cicloalquila,-OCO2-arila,-OCO2-heteroarila,-O∞2- heterocicloalquila,--OCONH2,--OCONH--Ci-Ci2-alquila,--OCONH--C2- Ci2-alquenila,-OCONH--C2-Ci2-alquinila,--OCONH-C3-C 12- cicloalquila,-OCONH-arila,--OCONH-heteroarila,-OCONH- heterocicloalquila,--N HC(O)--Ci-Ci2-alquila,--NHC (O)--C2-Ci2- alquenila,--NHC(O)--C2-Ci2 -alquinila,-NHC(O)--C3-Ci2 -cicloalquila,-- NHC(O)-arila,-NHC(O)-heteroarila,-NHC(O)-heterocicloalquila,- NHCO2-Ci-Ci2-alquila, -NHCO2-C2-Ci2-alquenila,-NHCO2-C2-Ci2- alquinila,-NHCO2-C3-Ci2-cicloalquila,-NHCO2-arila,-NH CO2- heteroarila,-NHCO2-heterocicloalquila,--NHC(O)NH2, NHC(O)NH--Ci- Ci2-alquila,-NHC(O)NH-C2-Ci2-alquenila,-NHC(O)NH-C2-Ci 2- alquinila,-NHC(O) NH-C3-Ci2-cicloalquila,--NHC(O)NH-arila,- NHC(O)NH-heteroarila,--NHC(O)NH-heterocicloalquila, NHC(S)NR2, NHC(S)NH-Ci-Ci2-alquila,-NHC(S)NH-C2-Ci2-alquenila,-NHC(S)NH- -C2-Ci 2-alquinila,-NHC(S)NH-C3-Ci2-cicloalquila,-NHC(S)NH-arila,- NHC(S)NR-heteroarila,--NHC(S)NH-heterocicloalquila,~NHC(NH)NH2, NHC(NH)NH-Ci-Ci2-alquila,-NHC(NH) NH-C2-C1 2-alquenila,~ NHC(NH)NH-C2-Ci2-alquinila,-NHC(NH)NH-C3-Ci2-cicloalquila,- NHC(NH)NH-arila,-NHC(NH)NH-heteroarila,-NHC(NH)NH-he- terocicloalquila, NHC(NH)--Ci-Ci2-alquila,--NHC(NH)--C2-Ci2- alquenila,--NHC(NH)--C2-Ci2-alquinila,--NHC(NH)--C3-Ci2-cicloalquila,- -NHC(NH)-arila,-NHC(NH)-heteroarila,~NHC(NH)-heterocicloalquila, - C(NR)NH-Ci-Ci2-al-quila,-C(NH)NH-C2-Ci2-alquenila,-C(NR)NH- C2-Ci2 -alquinila,-C(NH)NH-C3-Ci2-cicloalquila,-C(NH)NH-arila,- C(NH)NH-heteroarila,-C(NH)NH-hete-rocicloalquila,--S(O)--Ci-Ci2- alquila,-S(O)-C2-Ci2-alquenila,-S(O)--C2-Ci2-alquinila,-S(O)-C3-Ci2- cicloalquila,-S(O)-arila,-S(O)-heteroarila,-S(O)-heterocicloalquil- Sθ2NH2,--Sθ2NH-Ci-Ci2-alquila,-Sθ2NH-C2-Ci2-alque-nila,-S O2NH- -C2-Ci2-alquinila,~SO2NH-C 3-Ci2-cicloalquila,-SO2NH-arila,-SO2NH- heteroarila ~Sθ2NH-heterocicloalquila,--NHSθ2--Ci-Ci2-alquila,-- NHSθ2--C2-Ci2-alquenila,-NHSθ2 ~C2-Ci2-alquinila,-NHSθ2--C3-Ci2- ciclo-alquila,-NHSθ2-arila,-NHSθ2-heteroarila,-NHSO2- heterocicloalquila,--CH2 NH2,--CH2SO2CH3,-arila,-arilalquila,- heteroarila,-heteroarilalquila,-heteroci-cloalquila,-C3-Ci2-cicloalquila, polialcoxialquila, polialcóxi,-metoximetóxi,-metoxietóxi,--SH,--S--Ci- Ci2-alquila,--S--C2-Ci2-alquenila,--S--C2-Ci2-alqui-nila,--S--C3-Ci2- cicloalquila,--S-arila,--S-heteroarila,-S-heterocicloalquila, ou metiltiometila. É entendido que as arilas, heteroarilas, alquilas e outros mais podem ser também substituídas.

[000187] Os termos "C2-C12 alquenila" ou "C2-C6 alquenila," tal como usado aqui, denotam um grupo monovalente derivado de uma porção de hidrocarboneto contendo de dois a doze ou dois a seis átomos de carbono apresentando pelo menos uma ligação dupla de carbono- carbono pela remoção de um átomo de hidrogénio único. Grupos alquenila incluem, mas não estão limitados a, por exemplo, etenila, propenila, butenila, 1 -metil-2-buten-1-ila, alcadienos e outros mais.

[000188] O termo "alquenila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo "C2-C12 alquenila" ou "C2-C6 alquenila" tal como previamente definido, substituído por um, dois, três ou mais substituintes alifáticos.

[000189] Os termos "C2-C12 alquinila" ou "C2-C6 alquinila," tal como usado aqui, denotam um grupo monovalente derivado de uma porção de hidrocarboneto contendo de dois a doze ou dois a seis átomos de carbono apresentando pelo menos uma ligação tripla de carbono- carbono pela remoção de um átomo de hidrogênio único. Grupos alquinila representativos incluem, mas não estão limitados a, por exemplo, etinila, 1 -propinila, 1 -butinila, e outros mais.

[000190] O termo "alquinila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo "C2-C12 alquinila" ou "C2-C6 alquinila" tal como previamente definido, substituído por um, dois, três ou mais substituintes alifáticos.

[000191] O termo "Ci-Ce alcóxi," tal como usado aqui, se refere a um grupo CI-CΘ alquila, tal como previamente definido, ligado à porção molecular de origem por um átomo de oxigênio. Exemplos de CI-CΘ- alcóxi incluem, mas não estão limitados a, metoxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, n-butóxi, sec-butóxi, terc-butóxi, n-pentóxi, neopentóxi e n- hexóxi.

[000192] Os termos "halo" e "halogênio," tal como usado aqui, referem-se a um átomo selecionado de flúor, cloro, bromo e iodo.

[000193] O termo "arila," tal como usado aqui, se refere a um sistema de anel carbocíclico mono-ou bicíclico apresentando um ou dois anéis aromáticos incluindo, mas não limitado a, fenila, naftila, tetrahidronaftila, indanila, idenila e outros mais.

[000194] O termo "arila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo arila, tal como previamente definido, substituído por um, dois, três ou mais substituintes aromáticos.

[000195] Substituintes aromáticos incluem, mas não estão limitados a,-F,-Cl,--Br,-1,-OH, hidróxi protegido, éteres alifáticos, éteres aromáticos, oxo,-NO2,--CN,-Ci-Ci2-alquila opcionalmente substituída com halogênio (tal como per-halo-alquilas), C2-Ci2-alquenila opcionalmente substituída com halogênio,—C2-Ci2-alquinila opcionalmente substituída com halogênio,-NH2, amino protegido,-NH- -Ci-Ci2-alquila,-NH-C2-Ci2-alquenila,-NH-C2-Ci2- alquenila,-NH-C3- Ci2-cicloalquila,-NH-arila,-NH-heteroarila,-NH-heteroci-cloalquila,- dialquilamino,-diarilamino, -diheteroarilamino,-O--Ci-Ci2-alquila,--O-- C2-Ci2-alquenila,--O--C2-Ci 2-alquinila,--O--C3-Ci2-cicloalquila,--O- arila,--O-heteroarila,--O-heterocicloalquila,--C(O)--Ci -Ci2-alquila,— C(O)-C2-Ci2-alquenila,~C(O)-C2-Ci2-alquinila,-C(O)-C3 -C12- cicloalquila,-C(O)-arila,-C(O)-heteroarila,-C(O)-heterocicloalquila,-- CONH2,--CONH~CI -Ci2-alquila,-CONH-C2-Ci2-alquenila,-CONH-- C2-Ci2-alquinila,-CONH--C3 -Ci2-cicloal-quila,--CONH-arila,-CONH- heteroarila,--CONH-heterocicloalquila,--CO2--Ci-Ci2 -alquila,--CO2--C2- Ci2-alquenila,--CO2--C2-Ci2-alquinila,--CO 2--C3-Ci2-cicloalquila,--CO2- arila,--CO 2-heteroarila,--CO2-heterocicloalquila,--OCO2--Ci-Ci2- alquila,-0C02--C2-Ci2-alquenila,-0C02--C2-Ci2-alquinila,-0C02-C3- Ci2-cicloalquila,-OCθ2-arila,-OCθ2-heteroarila,-OCθ2- heterocicloalquila,--OCONH 2,-OCONH--Ci-Ci2-alquila,--OCONH--C2- Ci2-alquenila,-OCONH~C2-C i2-alquinila,-OCONH-C3-Ci 2- cicloalquila,-OCONH-arila,-OCONH-heteroarila,-OCONH- heterocicloalquila,--NH C(O)--Ci-Ci2-alquila,--NHC( O)--C2-Ci2- alquenila,-NHC(O)--C2-Ci2-alquinila,-NHC(O)--C3-Ci2-cicloalquila,-- NHC(O)-arila,-NHC(O)-heteroarila,-NHC(O)-heterocicloalquila,- NHCO2--Ci-Ci2-alquila,- -NHCθ2--C2-Ci2-alquenila,-NHCθ2--C2-Ci2- alquinila,—NH Cθ2--C3-Ci2-cicloalquila,--NHCO2-arila,-NHCθ2- heteroarila,-NHCO2-hetero-cicloalquila,-NHC(O)NH2, NHC(O)NH-Ci- Ci2-alquila,-NHC(O)NH-C2-Ci2-alquenila,-NHC(O)NH-C2-Ci 2- alquinila,-NHC(O)NH-C3-Ci2-cicloalquila,-NHC(O)NH-arila,- NHC(O)NH-heteroarila,-NHC(O)NH-heterocicloalquila, NHC (S) NH2, NHC(S)NH-Ci-Ci2-alquila,-NHC(S)NH-C2-Ci2-alquenila,-NHC(S)NH- -C2-C12-alquinila,-NHC (S) NH-C3-Ci2-cicloalquila,-NHC(S)NH-arila,- NHC(S)NH-heteroarila,-NHC(S)NH-heterocicloalquila,-NHC(NH)NH2, NHC(NH)NH-Ci-Ci2-alquila,--NHC(NH)NH-C2-Ci 2-alquenila,- NHC(NH)NH-C2-Ci2-alquinila,-NHC(NH) NH-C3-Ci2-cicloalquila,- NHC(NH )NH-arila,-NHC(NH)NH-heteroarila,-NHC(NH)NH- heterocicloalquila, NHC(NH)--Ci-Ci2-alquila,--NHC(NH)--C2-Ci2- alquenila,--NHC(NH)--C2-Ci2-alquinila,--NHC(NH)--C3-Ci2-cicloalquila,- -NHC(NH)-arila,-NHC(NH)-heteroarila,--NHC(NH)-heterocicloalquila, - C(NH)NH-Ci-Ci2-alquila,-C(NH)NH-C2-Ci2-alquenila,-C(NH)NH--C2- C12 -alquinila,-C(NH)NH-C3-Ci2-cicloalquila,-C(NH)NH-arila,- C(NH)NH-heteroarila,-C(NH)NH-heterocicloalquila,-S(O)~Ci-Ci2- alquila,-S(O)-C2-Ci2-alquenila,-S(O)--C2-Ci2-alquinila,-S(O)--C3-Ci2- cicloalquila,-S(O)-arila,-S(O)-heteroarila,-S(O)-heterocicloalquil- S02NH2,--S02NH-Ci-Ci2-alquila,-S02NH-C2-Ci2-alquenila,-S O2NH- C2-Ci2-alquinila,-SO2NH-C 3-Ci2-cicloalquila,--SO2NH-arila,--SO2NH- heteroarila,--SO2NH-heterociclo-alquila,--N HSO2--Ci-Ci2-alquila,-- NHSθ2--C2-Ci2-alquenila,~NHSθ2 ~C2-Ci2-alquinila,-NHSO2--C3-Ci2- cicloalquila,-NHSO2-arila,-NH SO2-hetero-arila,-NHSO2- heterocicloalquila,-CH2NH2,~CH2SO2CH3,-arila,-arilalquila,- heteroarila,-heteroarilalquila,-heterocicloalquila,--C3-Ci2-cicloalquila, polialco-xialquila, polialcóxi,-metoximetóxi,-metoxietóxi,--SH,--S--Ci- C12 -alquila,--S--C2-Ci2-alquenila,--S--C2-Ci2-alquinila,--S--C3-Ci2- cicloalquila,--S-arila,--S-he-teroarila,--S-heterocicloalquila, ou metiltiometila. É entendido que as arilas, heteroarilas, alquilas e outros mais podem ser também substituídas.

[000196] O termo "arilalquila," tal como usado aqui, se refere a um grupo arila ligado ao composto origem por meio de um resíduo de Ci- C3 alquila ou Ci-Ce alquila. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, benzila, fenetila e outros mais.

[000197] O termo "arilalquila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo arilalquila, tal como previamente definido, substituído por um, dois, três ou mais substituintes aromáticos.

[000198] O termo "heteroarila," tal como usado aqui, se refere a um radical aromático mono-, bi-, ou tricíclico ou anel apresentando de cinco a dez átomos de anel dos quais pelo menos um átomo de anel é selecionado de S, O e N; zero, um ou dois átomos de anel são heteroátomos adicionais independentemente selecionados de S, O e N; e os átomos de anel restantes são carbono, em que qualquer N ou S contido dentro do anel pode ser opcionalmente oxidado. Heteroarila inclui, mas não está limitado a, piridinila, pirazinila, pirimidinila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, tiazolila, oxazolila, isooxazolila, tiadiazolila, oxadiazolila, tiofenila, furanila, quinolinila, isoquinolinila, benzimidazolila, benzooxazolila, quinoxalinila, e outros mais. O anel heteroaromático pode estar ligado à estrutura química por um carbono ou heteroátomo.

[000199] O termo "heteroarila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo heteroarila tal como previamente definido, substituído por um, dois, três ou quatro substituintes aromáticos.

[000200] O termo "C3-Ci2-cicloalquila," tal como usado aqui, denota um grupo monovalente derivado de um anel carbocíclico saturado monocíclico ou bicíclico composto pela remoção de um átomo de hidrogênio único. Exemplos incluem, mas não limitado a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, biciclo[2.2.1 ]heptila, e biciclo[2.2.2]octila.

[000201] O termo "C3-Ci2-cicloalquila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo C3-Ci2-cicloalquila tal como previamente definido, substituído por um, dois, três ou mais substituintes alifáticos.

[000202] O termo "heterocicloalquila," tal como usado aqui, se refere a um anel de 5, 6 ou 7 membros não aromático ou um sistema fundido por grupo bi-ou tricíclico, onde (i) cada anel contém entre um e três heteroátomos independentemente selecionados de oxigênio, enxofre e nitrogênio, (ii) cada anel de 5 membros possui 0 a 1 ligação dupla e cada anel de 6 membros possui 0 a 2 ligações duplas, (iii) os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados, (iv) o heteroátomo de nitrogênio pode opcionalmente ser quaternizado, (iv) quaisquer dos anéis acima podem ser fundidos a um anel de benzeno, e (v) os átomos de anel restantes são átomos de carbono que podem ser opcionalmente oxo-substituídos. Grupos heterocicloalquila representativos incluem, mas não estão limitados a, [1,3]dioxolano, pirrolidinila, pirazolinila, pirazolidinila, imidazolinila, imidazolidinila, piperidinila, piperazinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, morfolinila, tiazolidinila, isotiazolidinila, quinoxalinila, piridazinonila, e tetraidrofurila.

[000203] O termo "heterocicloalquila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo heterocicloalquila, tal como previamente definido, substituído por um, dois, três ou mais substituintes alifáticos.

[000204] O termo "heteroarilalquila," tal como usado aqui, para um grupo heteroarila ligado ao composto origem por meio de um resíduo C1-C3 alquila ou Ci-Ce alquila. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, piridinilmetila, pirimidiniletila e outros mais.

[000205] O termo "heteroarilalquila substituída," tal como usado aqui, se refere a um grupo heteroarilalquila, tal como previamente definido, substituído por substituição independente de um, dois, ou três ou mais substituintes aromáticos.

[000206] O termo "Ci-Cs-alquilamino," tal como usado aqui, se refere a um ou dois grupos Ci-Cs-alquila, tal como previamente definido, ligado à porção molecular de origem por um átomo de nitrogênio. Exemplos de Ci-Cs-alquilamino incluem, mas não estão limitados a, metilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino, e propilamino.

[000207] O termo "alquilamino" se refere a um grupo apresentando a estrutura--NH(Ci-Ci2 alquila) onde C1-C12 alquila é tal como previamente definido.

[000208] O termo "dialquilamino" se refere a um grupo apresentando a estrutura-N(Ci-Ci2 alquila) (C1-C12 alquila), onde C1-C12 alquila é tal como previamente definido. Exemplos de dialquilamino são, mas não limitado a, dimetilamino, dietilamino, metiletilamino, piperidino, e outros mais.

[000209] O termo "alcoxicarbonila" representa um grupo éster, isto é, um grupo alcóxi, ligado à porção molecular de origem por um grupo carbonila tal como metoxicarbonila, etoxicarbonila, e outros mais.

[000210] O termo "carboxaldeído," tal como usado aqui, se refere a um grupo de Fórmula--CHO.

[000211] O termo "carbóxi," tal como usado aqui, se refere a um grupo de Fórmula--COOH.

[000212] O termo "carboxamida," tal como usado aqui, se refere a um grupo de Fórmula--C(O)NH(Ci-Ci2 alquila) ou--C(O)N(Ci-Ci2 alquila) (C1-C12 alquila),-C(O)NH2, NHC(O)(CI-CI2 alquila), N(CI-CI2 alquila)C(O)(Ci-Ci2 alquila) e outros mais.

[000213] O termo "grupo de proteção de hidróxi" tal como usado aqui, se refere a uma porção química lábil que é conhecida na técnica proteger um grupo hidroxila contra reações indesejadas durante procedimentos sintéticos. Depois do(s) referido(s) procedimento(s) sintético(s), 0 grupo de proteção de hidróxi tal como descrito aqui pode ser seletivamente removido. Grupos de proteção de hidróxi tal como conhecido são descritos geralmente em T. H. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999). Exemplos de grupos de proteção de hidroxila incluem benziloxicarbonila, 4-nitrobenziloxicarbonila, 4- bromobenziloxicarbonila, 4-metoxibenziloxicarbonila, metoxicarbonila, terc-butoxicarbonila, isopropoxicarbonila, difenilmetoxicarbonila, 2,2,2- tricloroeto-xicarbonila, 2-(trimetilsilil)etoxicarbonila, 2- furfuriloxicarbonila, aliloxicarbonila, acetila, formila, cloroacetila, trifluoroacetila, metoxiacetila, fenoxiacetila, benzoila, metila, t-butila, 2,2,2-tricloroetila, 2-trimetilsililetila, 1,1-dimetil-2-propenila, 3-metil-3- butenila, alila, benzila, para-metoxibenzil-difenilmetila, trifenilmetila (tritila), tetraidrofurila, metoximetila, metiltiometila, benziloximetila, 2,2,2-tricloroetoximetila, 2-(trimetilsilil)etoximetila, metanossulfonila, para-toluenossulfonila, trimetilsilila, trietilsilila, triisopropilsilila, e outros mais. Grupos de proteção de hidroxila preferidos para a presente invenção são acetila (Ac ou--C(O)CH3), benzoila (Bn ou--C(O)C6Hs), e trimetilsilila (TMS ou--Si(CH3)3).

[000214] O termo "hidróxi protegido", tal como usado aqui, se refere a um grupo hidróxi protegido com um grupo de proteção de hidróxi, tal como definido acima, incluindo grupos benzoíla, acetila, trimetilsilila, trietilsilila, metoximetila, por exemplo.

[000215] O termo "grupo de proteção de amino", tal como usado aqui, se refere a uma porção química lábil que é conhecida na técnica proteger um grupo amino contra reações indesejadas durante procedimentos sintéticos. Depois do(s) referido(s) procedimento(s) sintético(s), o grupo de proteção de amino tal como descrito aqui pode ser seletivamente removido. Grupos de proteção de amino tal como conhecido são descritos geralmente em T. H. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999). Exemplos de grupos de proteção de amino incluem, mas não estão limitados a, t-butoxicarbonila, 9- fluorenilmetoxicarbonila, benziloxicarbonila, e outros mais.

[000216] O termo "amino protegido", tal como usado aqui, se refere a um grupo amino protegido com um grupo de proteção de amino tal como definido acima.

[000217] O termo "acila" inclui resíduos derivados de ácidos, incluindo mas não limitado a ácidos carboxílicos, ácidos carbâmicos, ácidos carbônicos, ácidos sulfônicos, e ácidos fosforoso. Exemplos incluem carbonilas alifáticas, carbonilas aromáticas, sulfonilas alifáticas, sulfinilas aromáticas, sulfinilas alifáticas, sulfonilas aromáticas, sulfamilas alifáticas, sulfamilas aromáticas, fosfatos aromáticos e fosfatos alifáticos.

[000218] Um "aminoácido" é uma molécula que contém ambos os grupos funcionais amina e carboxila com a Fórmula geral NH2CHRCOOH. O termo aminoácido inclui aminoácidos padrões e aminoácidos não padrões.

[000219] "Aminoácidos padrão" são alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, e valina.

[000220] Um "aminoácido padrão que não é ácido aspártico" é selecionado do grupo consistindo em alanina, arginina, asparagina, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, e valina. No caso de glutamina ou ácido glutâmico, um "derivado do mesmoderivado dos mesmos" é, por exemplo, uma nitrila ou um éster, tal como, por exemplo, glutamina-nitrila, éster de ácido glutâmico.

[000221] "Aminoácidos não padrão" são aminoácidos (moléculas que contêm ambos os grupos funcionais amina e carboxila) que não são um dos aminoácidos padrão. Exemplos destes são selenocisteína (incorporada em algumas proteínas em um códon UGA), pirrolisina (usada por algumas bactérias metanogênicas em enzimas para produzir metano e codificado com o códon UAG), lantionina, ácido 2- aminoisobutírico, desidroalanina, 3-amino-6-hidróxi-2-piperidona, ácido gama-aminobutírico, ornitina, citrulina, homocisteína, dopamina ou hidroxiprolina.

[000222] "Aminoácidos padrão não básicos" são alanina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, e valina.

[000223] "Ahp" (3-amino-6-hidróxi-piperidin-2-ona) é um aminoácido não padrão encontrado, por exemplo, em cianobactérias. "Derivados de Ahp" incluem, mas não estão limitados a 3-amino-3,4-di-hidro-1H- piridin-2-ona (desidro-AHP), 3-amino-piperidin-2-ona e "derivados de éter e éster de AHP. Derivados de Ahp preferidos são 3-amino- piperidin-2-ona, ou Ahp-I ou Ahp-ll tal como representado abaixo em que R é selecionado do grupo consistindo em (Ci-i2)alquila, (C2- i2)alquenila, (C2-i2)alquinil halo(Ci-i2)alquila, (Ci-i2)alcóxi(Ci-i2)alquila, (Ci-i2)alcóxi(Ci-i2)alcóxi(Ci-i2)alquila, hidróxi(Ci-i2)alquila, fenila e fenil(Ci-e)alquila.

[000224] Diferentes membros desta família de aminoácidos não padrão são: 3-amino-6-hidróxi-piperidin-2-ona (Ahp)

[000225] Derivado de prolina inclui, por exemplo, 5-hidroxiprolina.

[000226] "Derivados de aminoácido" incluem, mas não estão limitados a, O-alquila, O-arila, O-acila, S-alquila, S-arila, S-S-alquila, alcoxicarbonila, O-carbonil-alcóxi, carbonato, O-carbonil-arilóxi, O- carbonil-alquilamino, O-car-bonil-arilamino, N-alquila, N-dialquila, N- trialquilamônio, N-acila, N-carbonil-alcóxi, N-carbonil-arilóxi, N- carbonil-alquilamino, N-carbonil-arilamino, N-sulfonilalquila, ou N- sulfonilarila.

[000227] "Derivados de aminoácido padrão não básico" incluem, mas não estão limitados a, O-alquila, O-arila, O-acila, S-alquila, S-arila, S- S-alquila, alcoxicarbonila, O-carbonil-alcóxi, carbonato, O-carbonil- arilóxi, O-carbonil-alquilamino, O-carbonil-arilamino, N-alquila, N- dialquila, N-trialquilamônio, N-acila, N-carbonil-alcóxi, N-carbonil- arilóxi, N-carbonil-alquilamino, N-carbonil-arilamino, N-sulfonilalquila, ou N-sulfonilarila.

[000228] "Derivado de tirosina" incluem, mas não estão limitados a, - O-alquila, O-arila, O-heteroarila, O-acila, O-PO3H e O-SO3H, assim como halogenação, na posição orto ou meta.

[000229] O grupo OH da tirosina pode ser OR, em que R é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (Ci-i2)alquila, (C2- i2)alquenila, (C2-i2)alquinila, halo(Ci-i2)alquila, halo(C2-i2)alquenila, halo(C2-i2)alquinila, (Ci-i2)alcoxicarbonila, (Ci-i2)alcoxicarbonil(Ci- i2)alquila, (Ci-i2)alquilaminocarbonila, não substituída ou também substituída por arila, arilalquila, arilalquenila ou arilalquinila, heterociclila e heterociclilalquila.

[000230] "Derivado de depsipeptídeo" incluem, mas não estão limitados a, depsipeptídeos modificados tal como descrito aqui e àqueles especificamente descritos nos exemplos abaixo. Os referidos derivados podem ser preparados usando métodos bem-conhecidos na técnica.

[000231] A invenção, além disso, se refere a sais farmaceuticamente aceitáveis e derivados dos compostos da presente invenção e a métodos para obtenção de tais compostos. Um método de obtenção do composto é por cultivo de uma cepa de Chondromyces da invenção, ou um mutante ou uma variante destes, sob condições adequadas, de preferência usando o protocolo de fermentação descrito aqui abaixo.

[000232] "Sais" de compostos da presente invenção apresentando pelo menos um grupo formador de sal podem ser preparados de uma maneira conhecida de per se. Por exemplo, sais de compostos da presente invenção apresentando grupos ácidos podem ser formados, por exemplo, através de tratamento dos compostos com compostos de metal, tais como sais de metal de álcali de ácidos carboxílicos orgânicos adequados, por exemplo, o sal de sódio de ácido 2- etilhexanoico, com compostos de metal alcalinoterroso ou de metal de álcali orgânico ou, tais como os correspondentes hidróxidos, carbonatos ou carbonatos de hidrogênio, tais como hidróxido de sódio ou potássio, carbonato ou hidrogenocarbonato , com correspondentes compostos de cálcio ou com amónia ou uma amina orgânica adequada, quantidades estequiométricas ou apenas um pequeno excesso do agente formador de sal de preferência sendo usado. Sais de adição de ácido de compostos da presente invenção são obtidos de maneira costumeira, por exemplo, através de tratamento dos compostos com um ácido ou um reagente de permuta de ânions adequado. Sais internos de compostos da presente invenção contendo grupos formadores de sal ácido e básico, por exemplo, um grupo carbóxi livre e um grupo amino livre, podem ser formados, por exemplo, pela neutralização de sais, tais como sais de adição de ácido, ao ponto isoelétrico, por exemplo, com bases fracas, ou por tratamento com permutadores de íon.

[000233] Sais podem ser convertidos de maneira costumeira nos compostos livres; sais de metal e amónio podem ser convertidos, por exemplo, por tratamento com ácidos adequados, e sais de adição de ácido, por exemplo, por tratamento com um agente básico adequado.

[000234] Misturas de isômeros obteníveis de acordo com a invenção podem ser separadas de uma maneira conhecida de per si nos isômeros individuais; diastereoisômeros podem ser separados, por exemplo, por divisão entre misturas de solvente polifásico, recristalização e/ou separação cromatográfica, por exemplo, sobre sílica-gel ou através de, por exemplo, cromatografia líquida de média pressão sobre uma coluna de fase reversa, e racematos podem ser separados, por exemplo, pela formação de sais com reagentes formadores de sal opticamente puros e separação da mistura de diastereoisômeros assim obteníveis, por exemplo, por meio de cristalização fracionária, ou através de cromatografia sobre materiais de coluna opticamente ativos.

[000235] Intermediários e produtos finais podem ser processados e/ou purificados de acordo com métodos padrão, por exemplo, usando métodos cromatográficos, métodos de distribuição, (re-) cristalização, e outros mais.

[000236] Os depsipeptídeos cíclicos da invenção podem inibir proteases tipo quimiotripsina. Exemplos de proteases tipo quimiotripsina são elastases e calicreína 7. Em particular, os depsipeptídeos cíclicos da invenção são excelentes inibidores de calicreína 7.

[000237] Um "inibidor" é um depsipeptídeo cíclico que inibe uma reação enzimática com uma medida de ICso de menos do que 100 pM, por exemplo, 50 pM, 30 pM, 20 pM ou 10 pM. Particularmente preferidos são depsipeptídeos cíclicos com uma ICso de menos do que 30 pM para calicreína 7 humana, por exemplo, depsipeptídeos cíclicos com uma ICso de menos do que 10 pM, 1 pM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, ou menor. Por exemplo, compostos dos exemplos 5, 19 e 33 mostram valores de IC50 de 0,009pM, 0,007pM, 0,005pM, respectivamente. ICso para calicreína humana pode ser medida usando o substrato extinguido por fluorescência Ac-Glu- Asp(EDANS)-Lys-Pro-lle-Leu-PheAArg-Leu-Gly-Lys(DABCYL)-Glu-NH2 (onde A indica a ligação divisível, identificada por análise de MS) que pode ser adquirido de Biosyntan (Berlin, Germany). Reações enzimáticas são conduzidas em tampão de citrato de sódio a 50 mM em pH 5,6 contendo NaCI a 150 mM e CHAPS a 0,05 % (p/v). Para a determinação de valores de ICso o ensaio é desempenhado em temperatura ambiente em placas de 384 cavidades. Todos os volumes de ensaio final são 30 pl. Compostos de teste são dissolvidos em DMSO /água a 90 % (v/v) e diluídos em água (contendo CHAPS a 0,05 % (p/v)) a 3 vezes a concentração de ensaio desejada. As 11 concentrações do composto final são: 0,3 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 pM, 3 pM, 10 pM e 30 pM. Para cada ensaio, 10 pl de água/CHAPS (± composto de teste) são adicionados por cavidade, seguido por 10 pl de solução de protease (diluídos com 1,5x tampão de ensaio). A concentração de protease em solução de ensaio final é 0,2 nM (de acordo com as concentrações de enzima determinadas pelo método de Bradford). Depois de 1 hora de incubação em temperatura ambiente, a reação é iniciada por adição de 10 pl de solução de substrato (substrato dissolvido em 1,5x tampão de ensaio, concentração final é 2 pM). O efeito do composto na atividade enzimática é obtido das curvas de progresso linear e determinado de duas leituras, a primeira, uma tirada diretamente depois da adição de substrato (t = 0 min) e a segunda, uma depois de 1 hora (t = 60 min). O valor de ICso é calculado da plotagem de porcentagem de inibição vs. concentração de inibidor usando software de análise de regressão não linear (XLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, UK).

[000238] "Doenças" e "distúrbios" que podem em consequência ser tratados ou prevenidos usando os depsipeptídeos cíclicos, são doenças conhecidas estarem relacionadas com proteases do tipo quimiotripsina. Mais preferidas são doenças conhecidas estarem relacionadas à atividade de elastases ou calicreína 7. Igualmente preferidas são doenças conhecidas estarem relacionadas à elastase de neutrófilo humano. Doenças e distúrbios que podem em consequência ser tratados ou prevenidos usando os depsipeptídeos cíclicos da invenção incluem dor, inflamação aguda, inflamação crônica, artrite, articulações inflamadas, bursite, osteoartrite, artrite reumatóide, artrite reumatóide juvenil, artrite séptica, fibromialgia, lúpus eritematoso sistêmico, flebite, tendinite, brotoeja, psoríase, acne, eczema, eczema seborréico facial, eczema das mãos, rosto ou pescoço, infecções de prepúcio, pé de atleta, infecções de fístulas, úlceras tópicas infectadas, infecções de umbigo em recém-nascidos, rugas, cicatrizes, queloides, furúnculos, verrugas e prurido alérgico, hemorroidas, feridas, infecções de ferida, feridas de queimaduras, uma infecção fúngica e um distúrbio imunológico incluindo uma doença autoimune. Doenças preferidas que podem ser tratadas ou prevenidas usando os depsipeptídeos cíclicos da invenção incluem doença pulmonar obstrutiva crônica (incluindo enfisema pulmonar e bronquite crônica), pneumonia intersticial crônica e aguda, pneumonia intersticial idiopática (IIP), panbronquiolite difusa, fibrose de pulmão cística, lesão pulmonar aguda (ALI)/ síndrome da angústia respiratória aguda (ARDS), bronquiectasia, asma, pancreatite, nefrite, hepatite (insuficiência hepática), artrite reumatóide crônica, artrosclerose, osteroartrite, psoríase, doença periodontal, aterosclerose, rejeição de transplante de órgão, lesão de tecido causada por isquemia/reperfusão, choque, septicemia, coagulopatia do sangue incluindo coagulação intravascular disseminada (DIC) e trombose de veia profunda, conjuntivite, ceratite, úlcera da córnea, doença de Crohn, lúpus eritematoso sistêmico. Doenças e distúrbios mais preferidos que podem ser tratados ou prevenidos usando os depsipeptídeos cíclicos da invenção são "disfunção epitelial" ou "doença epitelial" incluindo, mas não estão limitados a, doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, sindrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, sindrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatoide, IBD, psoríase, asma. Em outra modalidade preferida, os depsipeptídeos cíclicos da invenção podem ser usados para tratar câncer, em particular câncer ovariano.

[000239] Doenças e distúrbios que podem em consequência ser de preferência tratados ou prevenidos usando os depsipeptídeos cíclicos da invenção incluem doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, sindrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano, fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, sindrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatoide, IBD, psoríase, e asma.

[000240] Doenças e distúrbios que podem em consequência ser mais preferivelmente tratados ou prevenidos usando os depsipeptídeos cíclicos da invenção incluem queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano.

[000241] Doenças e distúrbios que podem em consequência ser igualmente de preferência tratados ou prevenidos usando os depsipeptídeos cíclicos da invenção incluem fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma.

[000242] Doenças e distúrbios que podem ser até mais preferivelmente tratados ou prevenidos usando os depsipeptídeos cíclicos da invenção incluem queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso, assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida.

[000243] Calicreína 7 humana (hK7) é uma enzima com atividade de serina protease localizada na pele humana. Ela foi primeiramente descrita como enzima quimiotríptica de estrato córneo (SCCE) e pode desempenhar um papel em descamação de estrato córneo por clivagem de proteínas do estrato córneo (por exemplo, corneodesmosina e placoglobina). O estrato córneo é a camada de formação de barreira mais externa da epiderme e consiste em células epiteliais cornificadas circundadas por lipídeos altamente organizados. Ele está continuamente sendo formado por diferenciação epidérmica e em epiderme normal, a espessura constante do estrato córneo é mantida por um equilíbrio entre a proliferação dos ceratinócitos e descamação. Expressão realçada de SCCE em doença de pele inflamatória pode ser de significância etiológica (Hansson, e outros (2002)). Camundongos transgênicos expressando calicreína 7 humana em ceratinócitos epidérmicos foram constatados desenvolver mudanças de pele patológicas com espessura epidérmica aumentada, hiperceratose, inflamação dérmica, e prurite severa. Uma associação genética entre uma inserção de 4 bp (AACC) no 3'UTR do gene de enzima quimiotríptica de estrato córneo e dermatite atópica foi relatada (Vasilopoulos, e outros (2004)), sugerindo que a enzima pode possuir um importante papel no desenvolvimento de dermatite atópica. Dermatite atópica é uma doença com uma barreira de pele prejudicada que afeta 15% a 20% das crianças.

[000244] Calicreína 7 é uma serina protease S1 da família de gene de calicreína apresentando uma atividade tipo de quimiotripsina. Calicreína 7 humana (hK7, KLK7 ou enzima quimiotríptica de estrato córneo (SCCE), Swissprot P49862) desempenha um importante papel na fisiologia da pele (1, 2, 3). Ela é principalmente expressa na pele e foi relatada desempenhar um importante papel na fisiologia da pele. hK7 está envolvida na degradação das estruturas coesivas intercelulares em epitélios escamosos cornificados no processo de descamação. O processo de descamação é bem-regulado e delicadamente equilibrado com a produção de novo de corneócitos para manter uma espessura constante do estrato córneo, a camada mais externa da pele criticamente envolvida em função de barreira da pele. A este respeito, hK7 é relatada ser capaz de clivar as proteínas corneodesmossômicas corneodesmosina e desmocolina 1 (4, 5, 6). A degradação de ambas as corneodesmossomas é requerida para descamação. Além disso, muito recentemente foi constatado que as duas enzimas de processamento de lipídeo β-glicocerebrosidase e esfingomielinase acídica podem ser degradas por hK7 (7). Ambas as enzimas de processamento de lipídeo são co-secretadas com seus substratos glicosilceramidas e esfingomielina e processam estes precursores de lipídeo polares em seus produtos mais não polares, por exemplo, ceramidas, que são subsequentemente incorporados nas membranas lamelares extracelulares. A arquitetura de membrana lamelar é crítica para uma barreira de pele funcional. Finalmente, hK7 foi constatada ativar precursor de lnterleucina-1β (IL-1 β) a sua forma ativa in vitro (8). Uma vez que ceratinócitos expressam IL-1 β, mas não a forma ativa da enzima de conversão de IL-1β específica (ICE ou caspase 1), é proposto que ativação de IL-1β na epiderme humana ocorra por meio de outra protease, um candidato potencial sendo hK7.

[000245] Estudos recentes ligam uma atividade aumentada de hK7 a doenças de pele inflamatórias tipo dermatite atópica, psoríase ou sindrome de Netherton. Isto poderia resultar em uma degradação descontrolada de corneodesmossomas resultando em uma descamação malregulada, uma degradação realçada de enzimas de processamento de lipídeo resultando em uma arquitetura de membrana lamelar atrapalhada ou uma ativação descontrolada da citocina pró- inflamatória IL-1 β. O resultado da rede seria uma função de barreira da pele prejudicada e inflamação (veja também WO-A-2004/108139).

[000246] Devido ao fato de que a atividade de hK7 é controlada em diversos níveis, vários fatores poderiam ser responsáveis por uma atividade de hK7 aumentada em doenças de pele inflamatórias. Primeiramente, a quantidade de protease sendo expressa poderia ser influenciada por fatores genéticos. Uma tal ligação genética, um polimorfismo no 3’-UTR no gene de hK7, foi recentemente descrito (9). Os autores levantam a hipótese de que a inserção de 4 pares de base descrita no 3’-UTR do gene de calicreína 7 estabiliza o mRNA de hK7 e resulta em uma super-expressão de hK7. Em segundo lugar, uma vez que hK7 é secretada por meio de corpos lamelares ao espaço extracelular de estrato córneo como zimogênio e ela não é capaz de se auto-ativar, ela precisa ser ativada por outra protease, por exemplo, hK5 (5). Atividade descontrolada de uma tal enzima de ativação poderia resultar em uma super-ativação de hK7. Em terceiro lugar, hK7 ativada pode ser inibida por inibidores naturais tipo LEKTI, ALP ou elafin (10, 11). A expressão diminuída ou a falta de tais inibidores poderia resultar em uma atividade realçada de hK7. Recentemente foi constatado, que mutações no gene spinkõ, codificando para LEKTI, são causadoras de síndrome de Netherton (12) e uma mutação de ponto único no gene está ligada a dermatite atópica (13, 14). Finalmente, outro nível de controle da atividade de hK7 é o pH. hK7 possui um ideal de pH neutro a levemente alcalino (2) e há um gradiente de pH de neutro a acídico das camadas mais internas às mais externas na pele. Fatores ambientais tipo sabão poderiam resultar em um aumento de pH nas camadas mais externas do estrato córneo na direção do ideal de pH de hK7 desse modo aumentando a atividade de hK7.

[000247] Uma atividade aumentada de hK7 está ligada a doenças de pele com uma barreira de pele prejudicada incluindo doenças de pele inflamatórias e hiperproliferativas. Primeiramente, pacientes de síndrome de Netherton mostram um aumento dependente de fenótipo em atividade de serina protease, uma diminuição em corneodesmossomas, uma diminuição nas enzimas de processamento de lipídeo β-glicocerebrosidase e esfingomielinase acídica, e uma função de barreira prejudicada (15, 16). Em segundo lugar, uns camundongos transgênicos superexpressando calicreína 7 humana mostram um fenótipo de pele similar àquele encontrado em pacientes com dermatite atópica (17, 18, 19). Em terceiro lugar, na pele de pacientes de dermatite atópica e psoríase, níveis elevados de hK7 foram descritos (17, 20). Além disso, atividade aumentada de K7 e desta forma disfunção de barreira epitelial podem também desempenhar um importante papel na patologia de outras doenças epiteliais tais como doença inflamatória do intestino e doença de Crohn.

[000248] Por esse motivo, hK7 é considerada como sendo um alvo potencial para o tratamento de doenças envolvidas com disfunção epitelial tais como doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, sindrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano, e há uma necessidade por moduladores específicos (agonistas ou inibidores) destes.

[000249] Elastase de neutrófilo humano (HNE, também conhecida como elastase de leucócito humano, HLE) pertence à família de quimiotripsina de serina proteinases. Sua atividade catalítica é ideal em torno de pH 7, e o sítio catalítico é composto de três resíduos de aminoácido ligados a hidrogênio: His57, Asp102, e Ser195 (em numeração de quimiotripsina), que formam a assim chamada tríade catalítica. A enzima é composta de uma cadeia de peptídeo único de 218 resíduos de aminoácido e quatro pontes de dissulfeto. Ela mostra identidade de sequência de 30 a 40% com outras serina proteinases elastinaolíticas ou não elastinaolíticas. HNE preferencialmente cliva a cadeia de insulina B oxidada com Vai na posição P1, mas ela também hidrolisa ligações com Ala, Ser, ou Cys na posição P1.

[000250] HNE está localizada nos grânulos azurofílicos de leucócitos polimorfonucleares (PMNLs), onde a concentração de HNE é bastante alta (3 pg de enzima/106 células). A principal função fisiológica é digerir bactérias e complexos imunes e tomar parte no processo de defesa de hospedeiro. Auxiliares de HNE na migração de neutrófilos do sangue a vários tecidos tais como as vias aéreas em resposta a fatores quimiotáticos. HNE também toma parte em cicatrização de ferida, reparo de tecido, e na apoptose de PMNLs.

[000251] Além de elastina (componente altamente flexível e altamente hidrofóbico de tecido conjuntivo de pulmão, artérias, pele, e ligamentos), HNE cliva muitas proteínas com importantes funções biológicas, incluindo diferentes tipos de colágenos, proteínas de membrana, e proteoglicanos de cartilagem. HNE também indiretamente favorece a decomposição de proteínas de matriz extracelular por ativação de procolagenase, prostromelisina, e progelatinase. HNE inativa vários inibidores de proteinase endógena tais como inibidor de o2-antiplasmina, a1-antiquimiotripsina, antitrombina, e tecido de metaloproteinases.

[000252] Atividade de elastase extracelular é rigorosamente controlada no sistema pulmonar por inibidor de α1-protease (α1 PI), responsável por proteção das vias aéreas inferiores de lesão elastolítica, enquanto que o inibidor de proteinase de leucócito secretório protege principalmente as vias aéreas superiores. Em vários estados patofisiológicos pulmonares, por exemplo, enfisema pulmonar, bronquite crônica, e fibrose cística, inibidores de elastase endógena são ineficientes em regulação de atividade de HNE.

[000253] HNE é considerada como sendo a fonte primária de lesão de tecido associada com doenças inflamatórias tais como enfisema pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto (ARDS), bronquite crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), hipertensão pulmonar, e outras doenças inflamatórias assim como displasia broncopulmonar em neonatos prematuros. HNE está envolvida na patogênese de secreções de via aérea aumentada e anormal comumente associada com doenças inflamatórias da via aérea. Desta forma, fluido de lavagem broncoalveolar (BAL) de pacientes com bronquite crônica e fibrose cística possui atividade de HNE aumentada. Além disso, elastase excessiva foi proposto contribuir não apenas para estes doenças inflamatórias crônicas, mas também para doenças inflamatórias agudas tais como ARDS e choque séptico.

[000254] Por esse motivo, HNE é considerada como sendo um alvo potencial para o tratamento de doenças envolvidas com atividade de HNE tais como doenças inflamatórias tais como enfisema pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto (ARDS), bronquite crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), hipertensão pulmonar, e outras doenças inflamatórias assim como displasia broncopulmonar em neonatos prematuros, e doenças envolvidas com secreções de via aérea aumentada e anormal assim como doenças inflamatórias agudas. Desta forma há uma necessidade por moduladores específicos (agonistas ou inibidores) no caso de HNE.

[000255] Tratamento pode ser por aplicação local ou sistêmica de tais cremes, unguentos e supositórios ou por aplicação oral ou sc ou iv ou por inalação, respectivamente, de uma maneira bem-conhecida na técnica.

[000256] Em um aspecto, os depsipeptídeos de acordo com a invenção são obtidos por cultivo de uma cepa de Chondromyces crocatus que foi depositada em 24th April 2007 com o DSMZ (DSM 19329) ou são obtidos por cultivo de uma cepa de Chondromyces robustus que foi depositada em 24th April 2007 com o DSMZ (DSM 19330) ou são obtidos por cultivo de uma cepa de Chondromyces apiculatus que foi depositada em 23rd June 2008 com o DSMZ (DSM 21595).

[000257] O depósito das cepas foi feito sob os termos do Budapest Treatry on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for Purposes of Patent Procedure. As cepas depositadas serão irrevogavelmente e sem restrição ou condição liberadas ao público na emissão de uma patente. As cepas depositadas são fornecidas meramente como conveniência àqueles versados na técnica e não são uma admissão de que um depósito é requerido para capacitação.

[000258] Deve ser entendido que a presente invenção não está limitada a cultivo das cepas particulares Chondromyces crocatus e Chondromyces robustus e Chondromyces apiculatus. De preferência, a presente invenção contempla o cultivo de outros organismos capazes de produção de depsipeptídeos, tais como mutantes ou variantes das cepas que podem ser derivadas deste organismo por métodos conhecidos tais como irradiação de raios X, irradiação de ultravioleta, tratamento com mutagênicos químicos, exposição de fago, seleção de antibiótico e outros mais.

[000259] Os depsipeptídeos da presente invenção podem ser biossintetizados por vários micro-organismos. Micro-organismos que podem sintetizar os compostos da presente invenção incluem mas não estão limitados a bactérias do gênero Myxococcales, também referido como mixobactérias. Exemplos não limitantes de membros pertencentes aos gêneros de mixobactérias incluem Chondromyces, Sorangium, Polyangium, Byssophaga, Haploangium, Jahnia, Nannocystis, Koffleria, Myxococcus, Corallococcus, Cystobacter, Archangium, Stigmatella, Hyalangium, Melittangium, Pyxicoccus. A taxonomia de mixobactérias é complexa e referência é feita a Garrity GM, Bell JY, Lilburn TG (2004) Taxonomic outline of the prokaryotes, Bergey’s manual of systematic bacteriology, 2nd edition, release 5.0 May 2004. (http://141.150.157.80/bergeysoutline/main.htm).

[000260] Os compostos de Fórmulas estruturais (l-XVII) são produzidos pela fermentação aeróbica de um meio adequado sob condições controladas por meio de inoculação com uma cultura de Chondromyces crocatus ou Chondromyces robustus ou Chondromyces apiculatus. O meio adequado é de preferência aquoso e contém fontes de carbono, nitrogênio, e sais inorgânicos assimiláveis.

[000261] Meios adequados incluem, sem limitação, os meios de crescimento mencionados abaixo nos exemplos 1 e 2. A fermentação é conduzida durante cerca de 3 a cerca de 20 dias em temperaturas variando de cerca de 10°C a cerca de 40°C; no entanto para resultados ideais é preferido conduzir a fermentação em cerca de 30°C. O pH do meio de nutriente durante a fermentação pode ser cerca de 6,0 a cerca de 9,0.

[000262] Os meios de cultura inoculados com os micro-organismos produzindo depsipeptídeos podem ser incubados sob condições aeróbicas usando, por exemplo, um agitador giratório ou um fermentador de tanque agitado. A aeração pode ser obtida pela injeção de ar, oxigênio ou uma mistura gasosa apropriada aos meios de cultura inoculados durante incubação. Assim que uma quantidade suficiente dos compostos de depsipeptídeo tiver acumulado, eles podem ser concentrados e isolados da cultura de maneira convencional e usual, por exemplo, através de métodos de extração e cromatográficos, precipitação ou cristalização, e/ou de uma maneira descrita aqui. Como um exemplo para extração, a cultura pode ser misturada e agitada com um solvente orgânico adequado tal como n- butanol, acetato de etila, ciclohexano, n-hexano, tolueno, acetato de n- butila ou 4-metil-2-pentanona, os compostos de depsipeptídeo na camada orgânica podem ser recuperados por remoção do solvente sob pressão reduzida. O resíduo resultante pode opcionalmente ser reconstituído com, por exemplo, água, etanol, metanol ou uma mistura destes, e reextraído com um solvente orgânico adequado tal como hexano, tetracloreto de carbono, diclorometano ou uma mistura destes. Em seguida à remoção do solvente, os compostos podem ser também purificados, por exemplo, através de métodos cromatográficos. Como um exemplo para cromatografia, fases estacionárias tais como sílica- gel ou óxido de alumínio podem ser aplicadas, com solventes de eluição orgânica ou misturas destes, incluindo éteres, cetonas, ésteres, hidrocarbonetos halogenados ou álcoois, ou cromatografia de fase reversa em sílica-gel modificada apresentando vários grupos funcionais e eluição com solventes orgânicos ou misturas aquosas destes, tipo acetonitrila, metanol ou tetra-hidrofurano em pH diferente. Outro exemplo é cromatografia de partição, por exemplo, no modo sólido-líquido ou no líquido-líquido. Também cromatografia de exclusão por tamanho pode ser aplicada, por exemplo, usando Sephadex LH-20 (Sigma-Aldrich) e eluição com diferentes solventes, de preferência com álcoois.

[000263] Tal como é usual neste campo, a produção assim como o processo de recuperação e purificação pode ser monitorada por uma variedade de métodos analíticos, incluindo bioensaios, TLC, HPLC ou uma combinação destes, e aplicação de diferentes métodos de detecção, para TLC tipicamente luz de UV, vapor de iodo ou pulverização de reagentes corantes, para HPLC tipicamente luz de UV, métodos de dispersão de luz ou sensível à massa. Por exemplo, uma técnica de HPLC é representada por uso de uma coluna de fase reversa com uma sílica-gel funcionalizada e aplicação de um eluente que é uma mistura de gradiente linear de um solvente miscível em água polar e água em um pH específico, e um método de detecção com luz de UV em diferentes comprimentos de onda e um detector sensível a massa.

[000264] Os depsipeptídeos biossintetizados por micro-organismos podem opcionalmente ser submetidos a modificações químicas aleatórias e/ou diretas para formar compostos que são derivados ou análogos estruturais. Tais derivados ou análogos estruturais apresentando atividades funcionais similares estão dentro do escopo da presente invenção. Depsipeptídeos podem opcionalmente ser modificados usando métodos bem-conhecidos na técnica e descritos aqui.

[000265] Por exemplo, derivados dos depsipeptídeos da invenção podem ser preparados por derivação de depsipeptídeos cíclicos de Fórmula

[000266] que compreende a) - a preparação de compostos em que A4 é

[000267] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000268] com um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo, ácido trifluoroacético, ácido sulfúrico, ácido clorídrico, ou um ácido de Lewis, por exemplo, eterato de borotrifluoreto em um solvente, por exemplo, diclorometano, THF, ou sem um solvente em uma temperatura entre - 78°C e 150°C, preferencialmente entre -30°C e temperatura ambiente. b) - a preparação de compostos em que A4 é

[000269] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000270] com hidrogênio molecular ou fonte deste, por exemplo, ciclo-hexeno, formiato de amónio, na presença de um catalisador, por exemplo, paládio em um solvente, por exemplo, 2-propanol em uma temperatura entre -50 e 100°C, preferencialmente em temperatura ambiente. c) - a preparação de compostos em que A4 é

[000271] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000272] com um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo, ácido sulfúrico, ácido clorídrico ou um ácido de Lewis, por exemplo, eterato de borotrifluoreto na presença de um agente redutor, por exemplo, trietilsilano, um solvente, por exemplo, diclorometano, THF, ou sem um solvente em uma temperatura entre -78°C e 150°C, preferencialmente entre -50°C e temperatura ambiente. d) - a preparação de compostos em que A4 é

[000273] através de tratamento de um composto em que A4 é K O

[000274] com um alcanol substituído ou não substituído e um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo, ácido trifluoroacético, ácido sulfúrico, ácido clorídrico, ou um ácido de Lewis, por exemplo, sais de metal em um solvente, por exemplo, alcanóis substituídos e não substituídos, THF, diclorometano, preferencialmente alcanóis substituídos e não substituídos, ou sem um solvente em uma temperatura entre -78°C e 150°C, preferencialmente entre -30°C e 50°C. e) - a preparação de compostos em que A1 é

[000275] em que n = 1,2 e A4 é

[000276] em que R de preferência é H, alquila, alquila substituída, através de tratamento de um composto em que A1 é Gin ou Asn e A4 é

[000277] em que R de preferência é H, alquila, alquila substituída, com um alcanol substituído ou não substituído e um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo, ácido trifluoroacético, ácido sulfúrico, ácido clorídrico, ou um ácido de Lewis, por exemplo, eterato de borotrifluoreto em um solvente, por exemplo, alcanóis substituídos e não substituídos, THF, diclorometano, preferencialmente alcanóis substituídos e não substituídos, ou sem um solvente em uma temperatura entre -78°C e 150°C, preferencialmente entre -30°C e temperatura ambiente. f) - a preparação de compostos em que A1 é

[000278] em que n = 1,2 e A4 é

[000279] em que R preferencialmente é H, OH, O-alquila, O-alquila substituída, O-acila, através de tratamento de um composto em que A1 é Gin ou Asn e A4 é

[000280] com um agente de desidratação, por exemplo, anidrido de ácido trifluoroacético na presença de uma base, por exemplo, di- isopropiletilamina (DIPEA), em um solvente, por exemplo, diclorometano ou sem um solvente em uma temperatura entre -78°C e 150°C, de preferência entre -30°C e temperatura ambiente. g) - a preparação de compostos em que A4 é

[000281] eA6é

[000282] em que R de preferência é alquila, alquila substituída, acila, alcoxicarbonila através de tratamento de um composto em que A4 é

[000283] e A6 é Tyr

[000284] com um agente de alquilação, por exemplo, iodeto de metila, brometo de benzila, brometo de proargila ou um agente de acilação, por exemplo, cloroformiato de etila ou um isocianato de alquila ou arila na presença de uma base, por exemplo, carbonato de sódio em um solvente, por exemplo, DMF ou sem um solvente em uma temperatura entre -78°C e 150°C, preferencialmente entre -30°C e temperatura ambiente, de preferência promovido por ultra-som.

[000285] A não ser que de outra forma indicado, todos os números expressando quantidades de ingredientes, propriedades tais como peso molecular, condições de reação, ICso e assim por diante usados no relatório descritivo e reivindicações devem ser entendidos como sendo modificados em todos os exemplos pelo termo "cerca de". Por conseguinte, a não ser que indicado ao contrário, os parâmetros numéricos apresentados no presente relatório descritivo e reivindicações anexas são aproximações. Por muito pouco que seja, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina de equivalentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deve pelo menos ser interpretado à luz do número de figuras significantes e por aplicação de técnicas de arredondamento ordinárias. A despeito de que as faixas numéricas e parâmetros apresentando o amplo escopo da invenção são aproximações, os valores numéricos estabelecidos nos exemplos, Tabelas e Figuras são relatados tão precisamente quanto possível. Quaisquer valores numéricos podem inerentemente conter certos erros resultantes de variações em experimentos, medições de teste, análises estatísticas e tal.

[000286] A não ser que de outra forma definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui possuem o mesmo significado como comumente entendido por aquele versado na técnica ao qual esta invenção pertence. Ainda que métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes, e outras referências mencionadas aqui são incorporados por referência em sua totalidade. Em caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, terá o controle. Além disso, os materiais, métodos, e exemplos são ilustrativos apenas e não pretendem ser limitantes.

Exemplos Exemplo 1 Produção dos compostos Exemplo 1.1 Produção dos compostos de Fórmula (II) a (VII), (XI) a (XIV) e (XVII)

[000287] Cepa: A cepa de Chondromyces crocatus foi isolada de uma amostra ambiental, madeira podre de uma nogueira, nos laboratórios da requerente.

[000288] A cepa foi inambiguamente identificada como uma Chondromyces crocatus com base na morfologia dos corpos de frutificação assim como na sequência parcial do gene 16S-RNA. C. crocatus foi designado ao grupo de risco biológico 1 pelo DSMZ (DSMZ (2007)). Chondromyces é um gênero na família Polyangiaceae, que pertence ao gênero Myxococcales dentro das Delta- proteobactérias. Bactérias do gênero Myxococcales, também chamadas mixobactérias, são bactérias em forma de bastão gram- negativas com duas características distinguindo-as da maioria das outras bactérias. Elas enxameiam em superfícies sólidas usando um mecanismo de deslizamento ativo e agregam-se para formar corpos de frutificação na falta de alimentação (Kaiser (2003)).

[000289] A cepa de Chondromyces crocatus da invenção foi depositada no DSMZ sob o número de acesso 19329.

[000290] A cepa de Chondromyces crocatus da invenção não é viável como uma cultura pura e não pode ser mantida sem uma cepa companheira. A cepa companheira pode ser obtida e mantida como um cultura pura por estriamento de uma alíquota de uma cocultura de fermentação em placas de ágar (meio de LB). Uma observação similar foi feita pelo grupo Reichenbach (Jacobi, e outros (1996), Jacobi, e outros (1997)). Com base em uma sequência de DNA parcial do gene 16S-rRNA da cepa companheira de Chondromyces crocatus desta invenção, o par mais próximo é Bosea thiooxidans do gênero Rhizobiales dentro das Alfa-proteobactérias. O fragmento de sequência de 424 bp 16S-rRNA investigado possui cerca de identidade de 98% (permuta de pelo menos 8 nucleotídeos) para sequência AF508112 (S. thiooxidans) de genebank. B. thiooxidans foi isolada de amostras de solo coletadas de diferentes campos agrícolas em torno de Calcutá, índia. Ela é capaz de oxidar compostos de enxofre inorgânico reduzidos na presença de alguns substratos orgânicos e foi descrita como uma nova espécie e um novo gênero em 1996 (Das, e outros (1996)). Um derivado de árvore de filogenética das sequências 16S- RNA parciais de todas as 5 espécies de Bosea descritas indica uma posição separada para a cepa companheira de Bosea isolada de C. crocatus.

[000291] Cultivo: culturas de fermentador de 100L foram desempenhadas de acordo com o seguinte protocolo:

[000292] Pré-culturas foram iniciadas por inoculação de 5 mL (=10%) de uma cultura líquida de cepa de Chondromyces crocatus da invenção em 50 mL de meio MD1 (adaptado após Bode e outros 2003, veja tabela 6) em um frasco de agitação tampado de 200 ml. Depois de 11 dias de incubação em 30°C e 120 rpm em um agitador giratório, uma 1a cultura intermediária foi iniciada por inoculação de 10 mL cada (=10%) da pré-cultura em 5x 100 mL de meio MD1 em frascos de agitação tampados de 500 ml. Depois de 7 dias de incubação em 30°C e 120 rpm em um agitador giratório, uma 2a cultura intermediária foi iniciada por inoculação de 25 mL cada (=5%) da 1a cultura intermediária em 19x 500 mL de meio MD1 em frascos de agitação não tampados de 2L. Depois de 6 dias de incubação em 30°C e 150 rpm em um agitador giratório, a 2a cultura intermediária inteira (9,5 litros = 9,5%) foi usada para inocular 100 litros de meio de produção POL1 (adaptado após Kunze e outros 1995, veja tabela 7).

[000293] Esta cultura principal de 100 L foi realizada em um fermentador de tanque de aço de escala de 100 L. Temperatura foi controlada em 30°C, aeração foi 20 l/min (= 0,2 vvm) e velocidade de agitação foi 50 rpm. Uma ligeira superpressão de 0,5 bar foi mantida dentro do vaso do fermentador. O pH de cultura foi mantido em 6,9 a 7,1 por adição controlada de H2SO4 a 3N ou NaOH a 3N. Depois de uma fase latência de cerca de 1 dia, 0 consumo de oxigênio acelerou durante cerca de 4 dias indicando crescimento exponencial da cultura. Durante os últimos 2 dias, 0 consumo de oxigênio foi levemente reduzido indicando uma fase estacionária da cultura. Depois de 7 dias, a cultura foi colhida com uma titragem de 5,3 mg/l de um depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula II.

[000294] Extração: O caldo de fermentação inteiro foi transferido em um vaso de aço de 1600 I e decantado durante 1 hora. O pélete celular úmido (200 g) foi colhido da fração do fundo por filtragem através de um filtro de papel. O pélete celular foi extraído 3 vezes centrifugando-o 30 minutos cada um com 10 I de acetato de etila. Em seguida a água residual foi separada da fase de solvente. A fase de solvente foi lavada com 5 I de água e em seguida evaporada para obter um extrato seco referido como ‘extrato celular’.

[000295] O filtrado de cultura foi extraído com 200 I de acetato de etila. Depois de tempo de contato de 2 horas, incluindo 1 hora de “turaxing”, a fase orgânica foi separada, lavada com 20 I de água e finalmente evaporada para obter um extrato seco referido como ‘extrato filtrado de cultura’.

[000296] Isolamento do composto: O extrato filtrado de cultura (4,4 g) foi dissolvido em 80 mL de Metanol. Os ingredientes insolúveis foram removidos por centrifugação e 0 sobrenadante foi evaporado até a secura rendendo em 3,3 g de extrato. O extrato foi dissolvido em 7,5 mL de MeOH, 3 mL de DMSO e 0,5 mL de diclorometano e purificado através de cromatografia de fase reversa (Waters Sunfire RP18 10pm, 30x150 mm) usando ácido fórmico a 0,01% (solvente A), e acetonitrila contendo ácido fórmico a 0,1% (solvente B) como solventes. A taxa de fluxo foi 50 mL/min. O gradiente é mostrado na Tabela 1. O material foi purificado em 7 ciclos cromatográficos. De cada ciclo, as frações coletadas foram analisadas através de HPLC, frações contendo o depsipeptídeo cíclico de acordo com a invenção foram combinadas e evaporadas em vácuo até a secura. A cromatografia rendeu em 134 mg de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) com uma pureza de >97% e 80 mg com uma pureza de 90%. Tabela 1 Gradiente de HPLC usado para purificação do

Tabela 2 Gradiente usado para separação de fase normal

[000297] O extrato celular (6,67 g) foi dissolvido em 4:1 de diclorometano/metanol. A solução foi filtrada e o filtrado foi adsorvido em diátomo (2g de diátomo/1 g de extrato, Isolute®, International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, UK) seguido por evaporação. O resíduo sólido foi carregado em uma coluna de sílica- gel pré-acondicionada (4x18cm, 90 g de sílica-gel 40-63) e eluído com um gradiente de ciclo-hexano, acetato de etila e metanol. O gradiente é mostrado na Tabela 2, a taxa de fluxo foi 28 ml/min. Volumes de frações de 28 mL foram coletados. As frações foram combinadas de acordo com os picos visíveis no traço de UV rendendo em 12 frações reunidas (A-L). Frações contendo os depsipeptídeos (H-J) foram também purificadas usando cromatografia de fase reversa. O método cromatográfico e procedimento de preparação são idênticos ao método de purificação descrito para o filtrado de cultura. No total, 46,1 mg de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II),17,9 mg de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (III) e 6,1 mg de uma mistura de 1:1 dos depsipeptídeos de acordo com a Fórmula (VI) e (VII) foram isolados. A designação das estruturas do composto (VI) e (VII) é com base em MS de alta resolução e a comparação dos dados de 1 H-RMN da mistura do composto (VI) e (VII) com os dados de 1H- RMN do composto (II).

[000298] Outro depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) foi também encontrado em uma concentração inferior no extrato celular. Entre estes outros depsipeptídeos cíclicos estavam aqueles de acordo com a Fórmula (IV), (V) e (XI) a (XV) e (XVII).

Caracterização de compostos:

[000299] Dados físicos do composto de Fórmula (II)

[000300] IR (pélete KBr): 3337, 3297, 3062, 2966, 2936, 2877, 1736, 1659, 1533, 1519, 1464, 1445, 1410, 1385, 1368, 1249, 1232, 1205, 989, 832 cm 1

[000301] FT-MS (9,4 T APEX-III): 951,5165; calc, para C46H72N8Oi2+Na: 951,5162

[000302] 1H RMN (600 MHz, d6-DMSO) δH:. -0-1° (3H, d- J =7-° Hz)’ 0,65 (4H, m), 0,78 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,82 (3H, t, J = 7,2 Hz), 0,85 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,89 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,02 (1H, m), 1,03 (6H, 2 x d, J = 7,0 Hz), 1,10 (1H, m), 1,21 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,25 (1H, m), 1,40 (1H, m), 1,52 (1H, m), 1,76 (6H, m), 1,84 (1H, m), 1,93 (1H, m), 2,15 (2H, m), 2,48 (1H, m), 2,59 (1H, m), 2,69 (1H, m), 2,72 (3H, s), 3,17 (1H, m), 4,32 (2H, m), 4,44 (2H, m), 4,64 (1H, d, J = 9,5 Hz), 4,71 (1H, m), 4,94 (1H, s), 5,06 (1H, m), 5,49 (1H, m), 6,08 (1H, d, J = 2,2 Hz), 6,65 (2H, d, J = 8,4), 6,74 (1H, s), 7,00 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,27 (1H, s), 7,36 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,66 (1H, d, J = 10,2 Hz), 7,74 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,02 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,43 (1H, d, J = 8,1 Hz), 9,19 (1H, s).

[000303] 13C RMN (150 MHz) d6-DMSO δc: 10,35, CH3; 11,22, CH3; 13,79, CH3; 16,00, CH3; 17,63, CH3; 19,49, 2 xCH3; 20,83, CH3; 21,72, CH2 ; 23,30, CH3; 23,70, CH2 ; 24,16, CH; 24,41, CH2 ; 27,35, CH2; 29,74, CH2; 30,07, CH3; 31,44, CH2; 33,13, CH; 33,19, CH2; 33,68, CH; 37,39, CH; 39,05, CH2; 48,75, CH; 50,59, CH; 52,01, CH; 54,11, CH; 54,65, CH; 55,24, CH; 60,60, CH; 71,86 CH; 73,89, CH; 115,28, 2 x CH; 127,31, Cq; 130,35, 2 x CH; 156,25, Cq; 169,09, Cq; 169,25, Cq; 169,34, Cq; 169,74, Cq; 170,60, Cq; 172,41, Cq; 172,52, Cq; 173,78, Cq; 176,32, Cq

[000304] Dados físicos do composto de Fórmula (III)

[000305] FT-MS (9,4 T APEX-III): Encontrado: 965,5318; calc, para C47H74N8Oi2+Na: 965,5318

[000306] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH: -0,10 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,64 (4H, m), 0,78 (3H,d, J = 7,0 Hz), 0,82 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,83 (3H, t j = 7 3 Hz), 0,85 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,89 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,01 (3H, d, J = 7,1 Hz), 1,04 (1H, m), 1,10 (1H, m), 1,21 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,25 (1H, m), 1,32 (1H, m), 1,40 (1H, m), 1,53 (2H, m), 1,77 (6H, m), 1,84 (1H, m), 1,92 (1H, m), 2,12 (1H, m), 2,16 (1H, m), 2,28 (1H, m), 2,59 (1H, m), 2,68 (1H, m), 2,72 (3H, s), 3,17 (1H, m), 4,32 (1H, m), 4,38 (1H, m), 4,43 (1H, d, J = 10,2 Hz), 4,46 (1H, m), 4,63 (1H, d, J = 9,5 Hz), 4,71 (1H, m), 4,94 (1H, m), 5,06 (1H, m), 5,49 (1H, m), 6,11 (1H, s, amplo), 6,65 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,73 (1H, s), 7,00 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,27 (1H, s), 7,37 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,66 (1H, d, J = 10,2 Hz), 7,75 (1H, d, J = 9,7 Hz), 8,07 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,45 (1H, d, J = 8,8 Hz), 9,24 (1H, amplo)

[000307] Dados físicos do composto de Fórmula (IV)

[000308] FT-MS (9,4 T APEX-HI): Encontrado: 947,5196; calc, para C47H72N80ii+Na: 947,5213

[000309] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH: 0,08 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,68 (3H, t, J = 7,2 Hz), 0,71 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,78 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,83 (3H, t, J = 7,3 Hz), 0,84 (1H, m), 0,87 (3H, t, J = 7,2 Hz), 0,88 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,99 (3H, d, J = 7,1 Hz), 1,08 (1H, m), 1,17 (3H, d, J = 6,7 Hz), 1,18 (1H, m), 1,31 (2H, m), 1,43 (1H, m), 1,51 (1H, m), 1,54 (1H, m), 1,76 (2H, m), 1,90 (1H, m), 1,94 (1H, m), 2,01 (1H, m), 2,10 (1H, m), 2,16 (1H, m), 2,26 (1H, m), 2,46 (2H, m), 2,73 (1H, m), 2,74 (3H, s), 3,19 (1H, m), 4,34 (1H, m), 4,36 (1H, m), 4,51 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,66 (1H, d, J = 10,0 Hz), 4,79 (1H, d, J = 11,0 Hz), 5,19 (1H, m), 5,28 (1H, m), 5,44 (1H, m), 6,25 (1H, d, J = 7,3 Hz), 6,33 (1H, d, J = 8,8 Hz), 6,68 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (1H, s), 7,04 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,28 (1H, s), 7,32 (1H, d, J = 8,8 Hz), 7,91 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,05 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,57 (1H, d, J = 8,9 Hz), 9,38 (1H, amplo)

[000310] Dados físicos do composto de Fórmula (V)

[000311] FT-MS (9,4 T APEX-HI): Encontrado: 933,5053; calc, para C46H7oNsOn+Na: 953,5056

[000312] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH: 0,08 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,68 (3H, t, J = 7,2 Hz), 0,71 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,79 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,83 (1H, m), 0,88 (3H, t, J = 7,2 Hz), 0,89 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,01 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,03 (3H, d, J = 7,0 Hz) 1,08 (1H, m), 1,17 (3H, d, J = 6,7 Hz), 1,20 (1H, m), 1,31 (1H, m), 1,42 (1H, m), 1,54 (1H, m), 1,74 (2H, m), 1,91 (2H, m), 2,02 (1H, m), 2,10 (1H, m), 2,15 (1H, m), 2,46 (3H, m), 2,75 (3H, s), 2,76 (1H, m), 3,19 (1H, m), 4,32 (1H, m), 4,34 (1H, m), 4,51 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,66 (1H, d, J = 9,5 Hz), 4,79 (1H, d, J = 11,0 Hz), 5,19 (1H, m), 5,28 (1H, m), 5,43 (1H, m), 6,25 (1H, d, J = 7,0 Hz), 6,33 (1H, d, J = 8,5 Hz), 6,68 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (1H, s), 7,04 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,28 (1H, s), 7,31 (1H, d, J = 8,8 Hz), 7,90 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,99 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,52 (1H, d, J = 8,8 Hz), 9,30 (1H, amplo)

[000313] Dados físicos do composto de Fórmula (XI)

[000314] ESI-MS: modo pos.: m/z = 951,5 (M+Na), Modo neg.: m/z = 927,5 (M-H); MW monoisotópico 928,5, C46H72N8O12

[000315] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH: -0,11 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,64 (4H, m), 0,77 (3H,d, J = 6,6 Hz), 0,83 (3H, m), 0,85 (3H, m), 0,87 (3H, m), 0,89 (3H, m), 1,01 (3H, m), 1,10 (1H, m), 1,21 (3H, d, J = 5,9 Hz), 1,32 (1H, m), 1,40 (1H, m), 1,52 (2H, m), 1,75 (5H, m), 1,84 (1H, m), 1,91 (1H, m), 2,05 (1H, m), 2,15 (2H, m), 2,27 (1H, m), 2,59 (1H, m), 2,68 (1H, m), 2,73 (3H, s), 3,16 (1H, m), 4,31 (1H, m), 4,37 (1H, m), 4,43 (1H, m), 4,45 (1H, m), 4,63 (1H, d, J = 8,8 Hz), 4,69 (1H, m), 4,94 (1H, m), 5,05 (1H, m), 5,50 (1H, m), 6,15 (1H, s, amplo), 6,65 (2H, d, J = 8,1 Hz), 6,75 (1H, s), 7,00 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,29 (1H, s), 7,37 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,64 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,78 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,09 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,49 (1H, d, J = 9,5 Hz), (OH de tirosina não visivel)

[000316] Dados físicos do composto de Fórmula (XII)

[000317] ESI-MS: modo pos.: m/z = 923,5 (M+Na), Modo neg.: m/z = 899,5 (M-H); MW monoisotópico 900,5, C44H68N8O12

[000318] 1H RMN (500 MHz) d6-DMSO δH: -0,11 (3H, d, J = 6,4 Hz), 0,63 (4H, m), 0,75 (3H, d, J = 6,4 Hz), 0,83 (6H, d, J = 7,0 Hz), 0,87 (3H, d, J = 6,4 Hz), 1,03 (1H, m), 1,10 (1H, m), 1,20 (3H, d, J = 6,4 Hz), 1,25 (1H, m), 1,38 (1H, m), 1,50 (1H, m), 1,73 (1H, m), 1,75 (2H, m), 1,77 (1H, m), 1,79 (3H, m), 1,85 (3H, s), 1,85 (1H, m), 2,12 (1H, m), 2,16 (1H, m), 2,55 (1H, m), 2,67 (1H, m), 2,70 (3H, s), 3,13 (1H, m), 4,30 (1H, m), 4,40 (1H, m), 4,43 (2H, m), 4,59 (1H, d, J = 9,5 hz), 4,71 (1H, m), 4,92 (1H, m), 5,02 (1H, m), 5,46 (1H, m), 6,08 (1H, s, amplo), 6,62 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,71 (1H, s), 6,97 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,22 (1H, s), 7,34 (1H, d, J = 9,2 Hz), 7,64 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,93 (1H, d, J = 9,2 Hz), 8,06 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,39 (1H, d, J = 8,5 Hz), 9,06 (1H, s, amplo)

[000319] Dados físicos do composto de Fórmula (XIII)

[000320] FT-MS (9,4 T APEX-III): Encontrado: 961,5039; calc, para C49H7oNδOi2+Na: 985,5005

[000321] 1H RMN (500 MHz) d6-DMSO δH: -0,12 (3H, d, J = 6,4 Hz), 0,62 (4H, m), 0,75 (3H, d, J = 6,4 Hz), 0,81 (4H, m), 0,87 (3H, d, J = 6,4 Hz), 1,08 (1H, m), 1,20 (3H, m), 1,22 (3H, m), 1,38 (1H, m), 1,46 (1H, m), 1,50 (1H, m), 1,71 (1H, m), 1,73 (2H, m), 1,76 (2H, m), 1,82 (1H, m), 1,94 (1H, m), 2,01 (1H, m), 2,23 (2H, m), 2,56 (1H, m), 2,66 (1H, m), 2,69 (3H, s), 3,13 (1H, m), 4,30 (1H, m), 4,41 (2H, m), 4,55 (1H, m), 4,65 (1H, d, J = 9,5 Hz), 4,70 (1H, m), 4,92 (1H, m), 5,04 (1H, m), 5,48 (1H, m), 6,09 (1H, s, amplo), 6,64 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,81 (1H, s), 6,97 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,33 (1H, s), 7,35 (1H, d, J = 9,2 Hz), 7,46 (2H, t, J = 7,3 Hz), 7,53 (1H, t, J = 7,3 Hz), 7,66 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,88 (2H, d, J = 7,3 Hz), 7,95 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,46 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,71 (1H, d, J = 7,3 Hz); (OH de tirosina não visível)

[000322] Dados físicos do composto de Fórmula (XIV)

[000323] ESI-MS: modo pos.: m/z = 927,5 (M+H), Modo neg.: m/z = 925,5 (M-H); MW monoisotópico 926,5, C47H74N8O11

[000324] 1H RMN (500 MHz) d6-DMSO δH: 0,00 (1H, m), 0,48 (3H, t, J = 7,5 Hz), 0,70 (3H,d, J = 7,0 Hz), 0,73 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,76 (3H, d, J = 7,3 Hz), 0,79 (3H, t, J = 7,3 Hz), 0,83 (6H, d, J = 6,4 Hz), 0,89 (1H, m), 0,95 (1H, m), 0,98 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,04 (3H, d, J = 6,1 Hz), 1,09 (1H, m), 1,17 (1H, m), 1,28 (1H, m), 1,31 (1H, m), 1,36 (1H, m), 1,38 (1H, m), 1,55 (1H, m), 1,61 (1H, m), 1,68 (1H, m), 1,79 (1H, m), 1,82 (1H, m), 1,95 (2H, m), 2,15 (3H, m), 2,25 (1H, m), 2,66 (3H, s), 2,76 (1H, m), 3,14 (1H, m), 3,40 (1H, m), 3,42 (1H, m), 4,33 (1H, m), 4,36 (1H, m), 4,45 (2H, m), 4,55 (2H, m), 4,69 (1H, m), 5,06 (1H, m), 6,63 (2H, d, J = 8,2 Hz), 6,71(1 H, s, amplo), 7,01 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,27 (1H, s, amplo), 7,36 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,00 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,17 (1H, d, J = 4,00 Hz), 8,22 (1H, d, J = 7,3 Hz), 8,53 (1H, d, J = 9,5 Hz), 9,14 (1H, s, amplo)

[000325] Dados físicos do composto de Fórmula (XVII)

[000326] ESI-MS: modo pos.: m/z = 985,4 (M+Na), Modo neg.: m/z = 961,5 (M-H); MW monoisotópico 962,5, C45H70N8O13S

[000327] 1H RMN (600 MHz) dδ-DMSO δH:).D δH: nenhuma designação de desvios químicos (mistura de dois diastereômeros), designação de estrutura por comparação com outros compostos relacionados, por exemplo, composto (II)

Exemplo 1.2: Produção do composto de Fórmula (VIII, IX, X)

[000328] Cepa: A cepa Chondromyces robustus foi isolada de uma amostra de esterco. A cepa de Chondromyces robustus da invenção foi identificada como uma Chondromyces robustus com base na morfologia dos corpos de frutificação assim como na sequência parcial do gene 16S-RNA. C. robustus foi designada ao grupo de risco biológico 1 pelo DSMZ (DSMZ (2007)). Chondromyces é um gênero na família Polyangiaceae, que pertence ao gênero Myxococcales dentro das Delta-proteobactérias. Bactérias do gênero Myxococcales, também chamadas mixobactérias, são bactérias em forma de bastão gram- negativas com duas características distinguindo-as da maioria das outras bactérias. Elas enxameiam em superfícies sólidas usando um mecanismo de deslizamento ativo e agregam-se para formar corpos de frutificação na falta de alimentação (Kaiser (2003)).

[000329] A cepa de Chondromyces robustus da invenção foi depositada no DSMZ sob o número de acesso 19330.

[000330] Cultivo: Culturas de fermentador de 100L foram realizadas de acordo com o seguinte protocolo:

[000331] Pré-culturas foram iniciadas por inoculação de 20 mL cada (=20%) de uma cultura líquida da cepa de Chondromyces robustus da invenção em 6x 100 mL de meio MD1 (adaptado após Bode e outros 2003) em frascos de agitação tampados de 500 ml. Depois de 1 dia de incubação em 30°C e 120 rpm em um agitador giratório, uma 1a cultura intermediária foi iniciada por inoculação de 100 mL cada (=25%) da pré-cultura em 6x 400 mL de meio MD1 em frascos de agitação tampados de 2L. Depois de 3 dias de incubação em 30°C e 120 rpm em um agitador giratório, uma 2a cultura intermediária foi iniciada por inoculação de 3 litros (=20%) da 1a cultura intermediária em um fermentador de tanque de aço de 20 L contendo 15 litros de meio MD1. A temperatura foi controlada em 30°C, aeração foi 20 l/min (= 1,0 vvm) e velocidade de agitação foi 80 rpm. Uma ligeira superpressão de 50 kPa (0,5 bar) foi mantida dentro do vaso do fermentador. Ainda que não houvesse nenhum controle de pH, o pH da cultura diminuiu apenas levemente de pH 6,95 no início até pH 6,88 no dia 7. Depois de 7 dias, a 2a cultura intermediária inteira (18 litros = 20%) foi usada para inocular 90 litros de meio de produção POL1 (adaptado após Kunze e outros 1995) (volume de partida = 108 litros). A cultura principal foi desempenhada em um fermentador de tanque de aço de escala de 100 L. A temperatura foi controlada em 30°C, aeração foi 30 l/min (= 0,3 vvm) e velocidade de agitação foi no início 50 rpm e depois de 4 dias 80 rpm. Uma ligeira superpressão de 50 kPa (0,5 bar) foi mantida dentro do vaso do fermentador. O pH de cultura foi mantido em 6,8 a 7,2 por adição controlada de H2SO4 a 2N ou NaOH a 1,5N. Depois de 14 dias, a cultura foi colhida com uma titulação de 3 mg/l.

[000332] Extração: O caldo de fermentação inteiro foi transferido em um vaso de aço de 1600 I e decantado durante 1 hora. O pélete celular úmido (cerca de 200 g) foi colhido da fração do fundo por filtragem através de um filtro de papel. O pélete celular foi extraído 3 vezes por turaxing dela 30 minutos cada com 10 I de acetato de etila. Em seguida a água residual foi separada da fase de solvente. A fase de solvente foi lavada com 5 I de água e em seguida evaporada para obter 11,9 g de extrato seco referido como ‘extrato celular’.

[000333] O filtrado de cultura foi extraído com 200 I de acetato de etila. Depois de tempo de contato de 2 horas, incluindo 1 hora de turaxing, a fase orgânica foi separada, lavada com 20 I de água e finalmente evaporada para obter 12,5 g de extrato seco referido como ‘extrato filtrado de cultura’.

[000334] Isolamento do composto: Cada extrato (de micélio e filtrado de cultura) foi dissolvido em 4:1 de diclorometano/metanol. A solução foi filtrada e 0 filtrado foi adsorvido em diátomo (2g de diátomo/1 g de extrato, Isolute®, International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, UK) seguido por evaporação. O resíduo sólido foi carregado em uma coluna de sílica-gel pré-acondicionada (4x18cm, 100 g sílica-gel 40-63) e eluído com um gradiente de ciclo-hexano, acetato de etila e metanol. O gradiente é mostrado na Tabela 4, a taxa de fluxo foi 28 ml/min. Volumes de frações de 28 mL foram coletados. As frações foram combinadas de acordo com os picos visíveis no traço de UV. A fração contendo 0 depsipeptídeo cíclico da invenção foi também purificada usando cromatografia de fase reversa (Waters Sunfire RP18 10pm, 30x150 mm) usando ácido fórmico a 0,01% (solvente A), e acetonitrila contendo ácido fórmico a 0,1% (solvente B) como solventes. A taxa de fluxo foi 50 mL/min. O gradiente é mostrado na Tabela 5. Para injeção, o material foi dissolvido em 1:1 de MeOH/DMSO (200mg/mL de concentração). As frações coletadas foram analisadas através de HPLC, frações contendo o depsipeptídeo cíclico da invenção foram combinadas e evaporadas em vácuo até a secura. A cromatografia do extrato rendeu em 52 mg de (>97%) depsipeptídeo cíclico puro de acordo com a Fórmula (VIII). Um total de 85 mg de depsipeptídeo cíclico puro de acordo com a Fórmula (VIII) pode ser isolado dos extratos combinados.

[000335] Outro depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (VIII) foi também encontrado em uma concentração inferior no extrato celular. Entre estes outros depsipeptídeos cíclicos estavam aqueles de acordo com a Fórmula (IX) e (X). Tabela 4 Gradiente usado para separação de fase normal

Tabela 5 Gradiente de HPLC usado para purificação de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (VIII)

Meios (Ajustados a pH 7,0 com HEPES a 50mM) Tabela 6 MD1 (meio de pré-cultura)

Tabela 7 P0L1 (meio de produção)

Caracterização de compostos:

[000336] Dados físicos do composto de Fórmula (VIII)

[000337] FT-MS (9,4 T APEX-III): Encontrado: 985,5007; cale, para C49H7oN8Oi2+Na: 985,5005.

[000338] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO õH: 0,74 (6H, d, J = 7,0 Hz), 0,85 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,88 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,89 (6H, d, J = 7,0 Hz), 1,18 (3H, d, J = 6,7 Hz), 1,32 (1H, m), 1,46 (1H, m), 1,57 (2H, m), 1,72 (3H, m), 1,81 (1H, m), 1,88 (1H, m), 1,98 (1H, m), 2,02 (2H, m), 2,11 (3H, m), 2,42 (1H, m), 2,73 (1H, m), 2,77 (3H, s), 2,87 (1H, m), 3,12 (1H, m), 3,64 (1H, m), 4,23 (1H, m), 4,40 (1H, m), 4,58 (1H, d, J = 9,5 Hz), 4,75 (2H, m), 4,93 (1H, m), 5,07 (1H, s), 5,40 (1H, m), 6,03 (1H, s), 6,74 (1H, s), 6,79 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,84 (2H, d, J = 7,8 Hz), 7,02 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,10 (1H, d, J = 9,3 Hz), 7,14 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,19 (2H, t, J = 7,8 Hz), 7,26 (1H, s), 7,42 (1H, d, J = 9,8 Hz), 7,89 (1H, d, J = 9,2 Hz), 8,03 (1H, d, J = 7,9 Hz), 8,38 (1H, d, J = 8,9 Hz), 9,40 (1H, s)

[000339] 13C RMN (150 MHz) d6-DMSO δc: 17,13, CH3; 17,63, CH3; 19,32, CH3; 20,90, CH3; 21,64, CH2; 22,34, CH3; 22,34, CH3; 23,32, CH3; 24,10, CH; 25,63, CH; 27,63, CH2; 29,30, CH2; 30,37, CH3; 30,86, CH; 31,52, CH2; 32,83, CH2; 35,33, CH2; 38,98, CH2; 44,42, CH2; 48,52, CH; 50,19, CH; 50,24, CH; 51,99, CH; 54,62, CH; 55,63, CH; 60,90, CH; 71,86 CH; 73,70, CH; 115,32, 2 x CH; 126,21, CH; 127,50, Cq; 127,74, 2 x CH; 129,42, 2 x CH; 130,43, 2 x CH; 136,72, Cq; 156,23, Cq; 168,93, Cq; 169,18, Cq; 169,18, Cq; 170,18, Cq; 170,39, Cq; 171,72, Cq; 171,96, Cq; 172,50, Cq; 173,82, Cq

[000340] Dados físicos do composto de Fórmula (IX)

[000341] FT-MS (9,4 T APEX-III): Encontrado: 969,5058; calc, para C49H7oNsOii+Na; 969,5056.

[000342] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH:): 0,53 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,73 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,74 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,81 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,86 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,08 (3H, d, J = 6,5 Hz), 1,20 (1H, m), 1,33 (3H, m), 1,52 (1H, m), 1,64 (1H, m), 1,80 (2H, m), 2,01 (1H, m), 2,04 (2H, m), 2,15 (4H, m), 2,25 (1H, m), 2,30 (1H, m), 2,74 (3H, s), 2,83 (1H, m), 3,12 (1H, m), 3,32 (1H, m), 3,38 (1H, m), 4,14 (1H, m), 4,27 (1H, m), 4,40 (1H, m), 4,59 (1H, m), 4,61 (1H, m), 4,94 (1H, m), 4,99 (1H, m), 5,10 (1H, m), 6,42 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (1H, s), 7,04 (2H, d, J = 8,8 Hz),7,10 (1H, t, J = 7,3 Hz), 7,15 (2H, t, J = 7,3 Hz), 7,23 (2H, d, J = 7,3 Hz), 7,30 (1H, s), 7,41 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,05 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,23 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,47 (1H, d, J = 4,4 Hz), 8,71 (1H, d, J = 10,2 Hz), (sinal de próton de grupo hidróxi de tirosina não visivel)

[000343] Dados físicos do composto de Fórmula (X)

[000344] FT-MS (9,4 T APEX-HI): Encontrado: 955,4896; calc, para C48H68NβOi 1+Na:955.4900.

[000345] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH:).D δH: nenhuma designação de desvios químicos (mistura de rotâmeros, designação de estrutura com base em comparação de dados de RMN (grupo de N- metila ausente) com dados de RMN do composto (IX).

Exemplo 1.3: Produção de compostos de Fórmula (XV a XVI)

[000346] Cepa: A cepa Chondromyces apiculatus foi isolada de uma amostra de solo. A cepa de Chondromyces da invenção foi identificada como uma Chondromyces apiculatus com base na sequência parcial do gene 16S-RNA. C. apiculatus foi designado ao grupo de risco biológico 1 pelo DSMZ (DSMZ (2007)). Chondromyces é um gênero na família Polyangiaceae, que pertence ao gênero Myxococcales dentro das Delta-proteobactérias. Bactérias do gênero Myxococcales, também chamadas mixobactérias, são bactérias em forma de bastão gram- negativas com duas características distinguindo-as da maioria das outras bactérias. Elas enxameiam em superfícies sólidas usando um mecanismo de deslizamento ativo e agregam-se para formar corpos de frutificação na falta de alimentação (Kaiser (2003)).

[000347] A cepa de Chondromyces robustus da invenção foi depositada no DSMZ sob o número de acesso DSM 21595.

Cultivo:

[000348] Pré-culturas foram iniciadas por inoculação de 20 mL cada (=20%) de uma cultura líquida da cepa de Chondromyces apiculatus da invenção em 10x 100 mL de meio MD1 (adaptado após Bode e outros 2003) em frascos de agitação tampados de 500 ml. Depois de 6 dias de incubação em 30°C e 120 rpm em um agitador giratório, as culturas com volume total de 1 L foram transferidas em um saco Wave® de 50L junto com 5 L de meio MD1. Depois de 7 dias de incubação em um reator BioWave 200 SPS (Wave Biotec AG, Suíça), 40 L de meio M7/14 foram adicionados ao saco para iniciar a produção. A cultura foi colhida depois de 19 dias.

Extração:

[000349] Para colheita, o ar no topo livre do saco ondulado foi removido com vácuo e o saco foi pendurado para permitir sedimentação da resina e das células. Depois de 1 hora de sedimentação, 43 I de sobrenadante foram removidos e descartados. Os 7 I residuais contendo as células e a resina foram congelados durante a noite. Depois de descongelamento, células e resina foram obtidas por filtragem através de um filtro de papel. O filtrado foi descartado. O pélete celular/resina (aproximadamente 3 kg de peso úmido) foi transferido para um vaso de metal e extraído duas vezes com 15 I de acetato de etila, com 5 minutos de turaxing durante a primeira extração. As misturas de ambas as bateladas foram separadas através de uma filtragem por papel e os filtrados em seguida unificados. Depois de separação da fase de solvente orgânico da fase de água, a fase de solvente foi lavada com 2 I de água pura e em seguida evaporada até que secasse. As fases de água foram descartadas.

[000350] Isolamento do composto: O extrato (5g) foi dissolvido em 4:1 de diclorometano/metanol. A solução foi filtrada e o filtrado foi adsorvido em diátomo (2g de diátomo/1 g de extrato, Isolute®, International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, UK) seguido por evaporação. O resíduo sólido foi carregado em uma coluna de sílica-gel pré-acondicionada (4x18cm, 100 g sílica-gel 40-63) e eluído com um gradiente de ciclo-hexano, acetato de etila e metanol. O gradiente é mostrado na Tabela 2, a taxa de fluxo foi 28 ml/min. Volumes de frações de 28 mL foram coletadas. As frações foram combinadas de acordo com os picos visíveis no traço de UV. A fração contendo os depsipeptídeos cíclicos da invenção foi também purificada usando cromatografia de fase reversa (Waters Sunfire RP18 10pm, 30x150 mm) usando ácido fórmico a 0,01% (solvente A), e acetonitrila contendo ácido fórmico a 0,1% (solvente B) como solventes. A taxa de fluxo foi 50 mL/min. O gradiente é mostrado na Tabela 1. Para injeção, o material foi dissolvido em 1,6 mL de 1:1 de MeOH/DMSO. As frações coletadas foram analisadas através de HPLC, frações contendo os depsipeptídeos cíclicos da invenção foram combinadas e evaporadas em vácuo até a secura. A cromatografia do extrato rendeu em 7 mg de depsipeptídeo cíclico puro de acordo com a Fórmula (XV) e 1,2 g de depsipeptídeo cíclico puro de acordo com a Fórmula (XVI). Meios Tabela 8

[000351] (Ajustados a pH 7,0 com HEPES a 50mM) Tabela 9 M7/14 (meio de produção)

[000352] (Ajustados a pH 7,4)

Caracterização de compostos:

[000353] Dados físicos do composto de Fórmula (XV)

[000354] FT-MS (9,4 T APEX-III): Encontrado: 1014,5272; calc. para C5oH73N9Oi2+Na: 1014,5276.

[000355] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH: 0,72 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,82 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,85 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,01 (1H, m), 1,02 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,17 (3H, d, J = 6,6 Hz), 1,21 (1H, m), 1,31 (1H, m), 1,36 (2H, m), 1,42 (1H, m), 1,49 (1H, m), 1,54 (1H, m), 1,56 (1H, m), 1,69 (3H, m), 1,79 (1H, m), 1,81 (1H, m), 2,40 (1H, m), 2,48 (1H, m), 2,73 (1H, m), 2,76 (3H, s), 2,87 (1H, m), 2,91 (1H, m), 2,98 (1H, m), 3,10 (1H, m), 3,63 (1H, m), 4,22 (1H, m), 4,42 (1H, td, J = 8,1, 5,1 Hz), 4,58 (1H, m), 4,75 (2H, m), 4,90 (1H, m), 5,06 (1H, m), 5,38 (1H, m), 5,42 (2H, amplo), 5,96 (1H, t, J = 5,5 Hz), 6,06 (1H, s, amplo), 6,78 (2H, d, J = 8,1 Hz), 6,83 (2H, d, J = 7,3 Hz), 7,00 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,10 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,14 (1H, t , J = 7,3 Hz), 7,19 (2H, t, J = 7,3 Hz), 7,46 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,77 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,97 (1H, d , J = 8,1 Hz), 8,37 (1H, d, J = 8,8 Hz), 9,50 (1H, s, amplo)

[000356] Dados físicos do composto de Fórmula (XVI)

[000357] ESI-MS: modo pos.: m/z = 1004,4 (M+Na), Modo neg.: m/z = 976,5 (M-H); MW monoisotópico 977,5, C49H71N9O12

[000358] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH: 0,72 (6H, d, J = 6,6 Hz), 0,85 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,87 (3H, d, J = 6,6 Hz), 1,01 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,17 (3H, d, J = 6,6 Hz), 1,30 (1H, m), 1,35 (2H, m), 1,43 (1H, m), 1,48 (1H, m), 1,56 (1H, m), 1,57 (1H, m), 1,69 (1H, m), 1,71 (2H, m), 1,79 (1H, m), 2,08 (1H, m), 2,41 (1H, m), 2,48 (1H, m), 2,77 (3H, s), 2,87 (1H, m), 2,92 (1H, m), 2,98 (1H, m), 3,09 (1H, m), 3,63 (1H, m), 4,22 (1H, m), 4,42 (1h, td, J = 8,1, 5,1 Hz), 4,57 (1H, m), 4,74 (1, m), 4,76 (1H, m), 4,91 (1H, m), 5,06 (1H, s), 5,39 (1H, m), 5,43 (2H, s, amplo), 5,96 (1H, t, J = 5,5 Hz), 6,07 (1H, s, amplo), 6,78 (2H, d, J = 8,1 Hz), 6,84 (2H, d, J = 7,3 Hz), 7,00 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,11 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,15 (1H, t, J = 7,3 Hz), 7,19 (2H, t, J = 7,3 Hz), 7,42 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,78 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,98 (1H, d , J = 8,1 Hz), 8,39 (1H, d, J = 8,8 Hz), 9,52 (1H, s, amplo)

Exemplo 2: Determinação de Atividade biológica in vitro

[000359] Os compostos da presente invenção, por exemplo, incluindo um composto de Fórmula ll-X, exibem atividade farmacológica e são, por esse motivo, úteis como produtos farmacêuticos. Por exemplo, os compostos da presente invenção são constatados inibir atividade de Calicreína-7 e atividade de HNE.

[000360] Compostos da presente invenção possuem valores de IC50 entre 1 nM e 10 pM tal como determinado no seguinte ensaio:

Exemplo 2.1: Atividade inibidora de Calicreína-7 in vitro Materiais e tampões

[000361] O substrato extinguido por fluorescência Ac-Glu- Asp(EDANS)-Lys-Pro-lle-Leu-PheAArg-Leu-Gly-Lys(DABCYL)-Glu-NH2 (onde A indica a ligação divisível, identificada por análise de MS) é adquirido de Biosyntan (Berlim, Alemanha) e guardado como uma solução de matéria-prima a 5 mM em DMSO em -20°C. Todos os outros produtos químicos são de grau analítico.

[000362] Reações enzimáticas são conduzidas em tampão de citrato de sódio a 50 mM em pH 5,6 contendo NaCl a 150 mM e CHAPS a 0,05 % (p/v).

[000363] Todas as soluções contendo proteína e peptídeo são manipuladas em tubos siliconizados (Life Systems Design, Merenschwand, Suíça). As soluções de composto assim como as soluções de enzima e as de substrato são transferidas às placas de 384 cavidades (black Cliniplate; cat. no. 95040020 Labsystems Oy, Finland) por meio de uma pipeta de 96 canais CyBi-WelI (CyBio AG, Jena, Alemanha).

Instrumentação para medições de Fl

[000364] Para medições de intensidade de fluorescência (Fl), uma leitora Ultra Evolution (TECAN, Maennedorf, Suíça) é usada. O instrumento é equipado com uma combinação de um filtro passa-faixa de 350 nm (20 nm de largura de faixa) e um de 500 nm (25 nm de largura de faixa) para excitação de fluorescência e aquisição de emissão, respectivamente. Para aumentar a relação de sinakbase, um espelho dicroico apropriado é empregado. Os filtros ópticos e o espelho dicroico são adquiridos de TECAN. Os fluoróforos em cada cavidade são excitados por três flashes por medição.

Determinação de valores de ICso

[000365] Para a determinação de valores de ICso, o ensaio é desempenhado em temperatura ambiente em placas de 384 cavidades. Todos os volumes de ensaio finais foram 30 pl. Compostos de teste são dissolvidos em DMSO/água a 90 % (v/v) e diluídos em água (contendo 0,05 % (p/v) CHAPS) a 3 vezes a concentração de ensaio desejada. As 11 concentrações de composto finais são: 0,3 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 pM, 3 pM, 10 pM e 30 pM. Para cada ensaio, 10 pl de água/CHAPS (± composto de teste) são adicionados por cavidade, seguido por 10 pl de solução de protease (diluídos com 1,5x tampão de ensaio). A concentração de protease em solução de ensaio final é 0,2 nM (de acordo com as concentrações de enzima determinadas pelo método de Bradford). Depois de 1 hora de incubação em temperatura ambiente, a reação é iniciada por adição de 10 pl de solução de substrato (substrato dissolvido em 1,5x tampão de ensaio, concentração final foi 2 pM). O efeito do composto na atividade enzimática é obtido das curvas de progresso linear e determinado de duas leituras, a primeira, uma tirada diretamente depois da adição de substrato e a segunda, uma depois de 1 hora. O valor de ICso é calculado da plotagem de porcentagem de inibição vs. concentração de inibidor usando software de análise de regressão não linear (XLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, UK).

[000366] Os depsipeptídeos cíclicos inibiu hCalicreína7 com valores de IC50 tal como indicado na tabela 11. Tabela 10

Tabela 11

Exemplo 2.2: Atividade inibidora de HNE in vitro Materiais e tampões

[000367] Elastase de neutrófilo humano (cat. no. SE563) é adquirida de Elastin Products Company, Inc. (EPC, Owensville, USA). O pó seco (pureza > 95 % estabelecida pelo fornecedor) foi dissolvido em tampão de acetato de sódio a 20 mM, pH 5,0, glicerol a 50 % (v/v), e congelado em - 80°C em alíquotas.

[000368] O substrato extinguido por fluorescência (DABCYL-Ser-Glu- ValAAsn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-EDANS, onde A indica a ligação divisível, identificada por análise de MS) foi adquirido de Bachem AG (Bubendorf, Suíça), e guardado como uma solução de matéria-prima a 5 mM em DMSO em - 20°C.

[000369] Todos os outros produtos químicos foram de grau analítico.

[000370] Reações enzimáticas foram conduzidas em tampão de Tris/HCI a 100 mM em pH 7,5, contendo NaCl a 500 mM, e CHAPS a 0,05 % (p/v).

[000371] Todas as soluções contendo proteína e peptídeo são manipuladas em tubos siliconizados (Life Systems Design, Merenschwand, Suíça).

[000372] As soluções de composto assim como as soluções de enzima e as de substrato são transferidas às placas de 384 cavidades (black Cliniplate; cat. no. 95040020 Labsystems Oy, Finland) por meio de uma pipeta 96 canais CyBi-Well (CyBio AG, Jena, Alemanha).

[000373] Instrumentação para medições de Fl

[000374] Para medições de intensidade de fluorescência (Fl), uma leitora Ultra Evolution (TECAN, Maennedorf, Suíça) é usada. O instrumento é equipado com uma combinação de um filtro passa-faixa de 350 nm (20 nm de largura de faixa) e um de 500 nm (25 nm de largura de faixa) para excitação de fluorescência e aquisição de emissão, respectivamente. Para aumentar a relação básica de sinal, um espelho dicroico apropriado é empregado. Os filtros ópticos e o espelho dicroico são adquiridos de TECAN. Os fluoróforos em cada cavidade são excitados por três flashes por medição.

[000375] Os depsipeptídeos cíclicos inibiram elastase de neutrófilo humana com valores de IC50 tal como indicado na tabela 11.

[000376] Além disso, os depsipeptídeos cíclicos inibiram quimiotripsina humana com um IC50 variando de 0,001 pM a 0,02 pM.

[000377] A atividade biológica do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (VIII) foi determinada com calicreína 7. Este depsipeptídeo cíclico da invenção inibe calicreína 7 humana com um ICso de menos do que 3 nM. Este depsipeptídeo cíclico inibiu quimiotripsina humana e elastase de neutrófilo humana com um IC50 em torno de 0,004 pM e em torno de 0,0025 pM, respectivamente.

Exemplo 3: Determinação de atividade inibidora de Calicreína-7 in vivo A) Teste em recuperação de ruptura de barreira de pele em camundongos

[000378] Método: Ruptura de barreira de pele foi obtida em grupos de camundongos SKH1 sem cabelo com extração repetida da pele com discos de amostragem de pele S-Sqame®. O procedimento foi concluído quando perda de água transepidérmica (TEWL) alcançou > 40 mg/cm2/h. A TEWL foi avaliada com um Tewameter TM210 (Courage Khazaka, Cologne, DE). Imediatamente depois de ruptura de barreira, 30 pl do composto de teste foram aplicados em concentração de 10 mM. Animais de controle foram tratados similarmente com 0 solvente (etanol/propileno glicol, 3/7 (v/v)) sozinho. A TEWL foi medida antes, imediatamente depois, e em 3 horas depois de ruptura de barreira. Em cada animal, a recuperação em porcentagem foi calculada usando a Fórmula: ( 1- [TEWL em 3 h - TEWL de referência]/[TEWL imediatamente depois de extração - TEWL de referência]) x 100%.

Resultados:

[000379] Uma única aplicação do composto de teste (o Depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula II) acelerou reparo de barreira em 57% comparado a reparo em camundongos tratados com o solvente sozinho (p < 0,05), Tabela 12. Tabela 12

B) Teste em atividade anti-inflamatória em modelo de murino de dermatite de contato alérgica (ACD)

[000380] Método: Camundongos Crl:RMNI foram sensibilizados no abdômen raspado com 50 pl de oxazolona a 2% no dia 1 e desafiados com 10 pl de oxazolona na superfície interna da orelha direita no dia 8. As orelhas esquerdas não desafiadas serviram como controles normais e dermatite foi avaliada da diferença em peso auricular (tomada como uma medida de tumefação inflamatória) no dia 9. Os animais foram tratados topicamente com 10 pl de composto de teste ou o solvente apenas 30 min depois do desafio. A eficácia do tratamento foi calculada como a inibição em porcentagem de tumefação auricular inflamatória relativa a animais tratados com o veículo sozinho.

[000381] Resultados: Uma única aplicação do composto de teste (o Depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula II) inibiu tumefação inflamatória em ACD em 40% a 10 mM) e em 46% em concentração a 30 mM (p < 0,001 vs animais tratados por solvente (Tabela 13/14). Tabela 13

[000382] +: mistura de dimetilacetamida/etanol/acetona (1/2/2) Tabela 14

C) Teste em atividade anti-inflamatória em modelo de suíno de dermatite de contato alérgica (ACD) Tabela 15 Classificação de sinais clínicos de sítios de

[000383] Oito dias antes da obtenção do ACD, 500 pl de 2,4- dinitrofluorobenzeno a 10% (DNFB, dissolvido em DMSO/acetona/azeite de oliva [1/5/3, v/v/v]) foram aplicados epicutaneamente em volumes divididos com base em ambas as orelhas e em ambas as virilhas (100 pl/sítio) para sensibilização. As reações de desafio foram obtidas com 15 pl de DNFB (1,0%) em sítios de teste contralateral (7 cm2 de tamanho cada um) das costas dorsolaterais raspadas. Para tratamento, o composto de teste e o placebo (solvente apenas) foram aplicados contralateralmente a 2 sítios de teste em cada animal 0,5 e 6 h depois do desafio. Os sítios de teste foram clinicamente examinados 24 h depois do desafio quando a inflamação chegou ao máximo. As mudanças foram classificadas em uma escala de 0 a 4 (Tabelai 5), permitindo um escore máximo combinado de 12 por sítio designado. Avermelhamento de pele foi medido reflectometricamente usando valores a*. Tabela 15 Classificação de sinais clínicos de sítios de teste afetados com ACD

[000384] Resultados: Tratamento de sítios de teste afetados com ACD duas vezes com uma solução a 1% do composto de teste (o Depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula II) inibiu mudanças inflamatórias clínicas em 30% (p < 0,01) e mediu vermelhidão de pele em 27% ( p < 0,05) (Tabela 16) Tabela 16

[000385] +: 2 sítios de teste cada um em 4 animais

Exemplo 4: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000386] a) Procedimento de uma etapa: A uma solução de 20 mg de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) e 0,027 mL de trietilsilano em 2 mL de diclorometano/acetonitrila (1:1) em -50°C, 0,014 mL de eterato de trifluoreto de boro foi lentamente adicionado. A mistura de reação foi deixada esquentar até -5°C e mantida nesta temperatura durante 30 minutos adicionais, vertida em uma solução de NaHCOs saturada, e foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio e o solvente foi removido em vácuo. Purificação do resíduo obtido através de HPLC (XTerra [5cm]; tampão de acetonitrila/carbonato de amónio pH10 gradiente) forneceu 9,8 mg de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em que a Ahp foi convertida em 3-amino-piperidin-2-ona. ESI MS: 935,36 [M+Na]+.

[000387] b) Procedimento de duas etapas: A uma solução de 1 g de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em 300 mL de diclorometano/acetonitrila (1:1) em -50°C, 0,68 mL de eterato de trifluoreto de boro foi lentamente adicionado. A mistura de reação foi deixada esquentar até -20°C. Em seguida 0,68 mL adicionais de eterato de trifluoreto de boro foram lentamente adicionados à mistura de reação mantida nesta temperatura até que mais nenhum material de partida possa ser observado (HPLC). Em seguida, a mistura de reação foi vertida em uma solução de NaHCOs saturada, e foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e o solvente foi removido em vácuo fornecendo um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em que a Ahp foi convertida em 3- amino-3,4-di-hidro-1H-piridin-2-ona. ESI MS: 933,28 [M+Na]+.

[000388] O material bruto foi dissolvido em 400 mL de 2-propanol, 115 mg de Pd/C (10%) foram adicionados e a mistura foi hidrogenada sob pressão atmosférica até que o material de partida fosse consumido (HPLC). O resíduo obtido foi purificado através de cromatografia (SÍO2; cHex/EtOAc (1:1) + MeOH a 10%) fornecendo 684 mg do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em que a Ahp foi convertida em 3-amino-piperidina-2-ona.

Exemplo 5: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000389] A uma solução de 75 mg (0,081 mmol) de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em 5 mL de 1-PrOH, 30pL de ácido sulfúrico foram adicionados e a mistura de reação foi agitada em r.t. durante 48 horas. Para a preparação, a mistura de reação foi diluída com diclorometano e lavada com solução de bicarbonato sat.. Depois de secagem da camada orgânica sobre sulfato de sódio, 0 solvente foi removido e o resíduo obtido purificado através de cromatografia em sílica-gel (cHex/EtOAc (1:1) + MeOH a 10%). Rendimento: 65 mg (83%) de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em que a Ahp foi convertida em 3-amino-6- propóxi-piperidin-2-ona. ESI MS: 993,37 [M+Na]+.

[000390] Similarmente, tratamento com o correspondente álcool forneceu os seguintes compostos:

Tabela 17

[000391] Simultaneamente, compostos do seguinte tipo foram obtidos sob as mesmas condições:

Table18

Exemplo 21: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000392] Uma solução de 25 mg (0,027 mmol) de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em 2 mL de diclorometano foi resfriada até 0°C. Em seguida DIPEA e anidrido de ácido trifluoroacético (TFAA) foram adicionados. A mistura de reação foi lentamente esquentada até temperatura ambiente e agitada durante 4 horas adicionais. Para a preparação, a mistura de reação foi diluída com diclorometano e lavada com ácido clorídrico e solução de bicarbonato sat.. Depois de secagem sobre sulfato de sódio, o solvente foi removido e o resíduo obtido purificado através de cromatografia em sílica-gel (cHex/EtOAc (1:1) + MeOH a 10%). Rendimento: 14 mg (57%) de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em que a amida na cadeia lateral de A1 foi convertida em um nitrila. ESI MS: 933,30 [M+Na]+.

[000393] Similarmente, compostos do seguinte tipo foram obtidos:

Table 19

Exemplo 26: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000394] Uma solução de 25 mg (0,027 mmol) de um depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em 2 mL de diclorometano (MC) foi resfriada até 0°C. Em seguida 24 pL de DIPEA e 14 pL de cloroformiato de hexila foram lentamente adicionados. A mistura de reação foi deixada esquentar até rt e agitada durante 4 horas adicionais. Para a preparação, a mistura de reação foi diluída com diclorometano e lavada com ácido clorídrico e solução de bicarbonato sat, e salmoura. Depois de secagem sobre sulfato de sódio o solvente foi removido e o resíduo obtido purificado através de cromatografia em sílica-gel (cHex/EtOAc (1:1) + MeOH a 10%). Rendimento: 20 mg (70%) de um derivado do depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) em que a porção de fenol de A6 foi transformada no correspondente éster de hexila de ácido carbônico. ESI MS: 1079,41 [M+Na]+.

[000395] Analogamente, usando um composto descrito no Exemplo 4 como material de partida, os seguintes compostos foram obtidos:

Tabela 20

Exemplo 32: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000396] A uma mistura de 200 mg (0,21 mmol) de depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 5, 57,5 mg (0,41 mmol) de K2CO3 em 2 mL de acetona seca, 60,5 mg (0,31 mmol) de brometo de (E)-3-fenil- 2-propenila foram adicionados e tratados com ultra-som durante a noite (temperatura eleva a cerca de 50°C). Para a preparação, a mistura de reação foi diluída com diclorometano e lavada com água. Depois de secagem da camada orgânica sobre sulfato de sódio, 0 solvente foi removido e 0 resíduo obtido purificado através de HPLC (15 cm Zorbax; acetonitrila/ tampão de NH4OAC aqu.: 20—>95%). Rendimento: 100 mg (45%) de um derivado de depsipeptídeo cíclico de acordo com 0 Exemplo 5 apresentando O-((E)-3-fenil-2-propen-1-il)-L-tirosina em A6. ESI MS: 1109,37 [M+Na]+.

[000397] Analogamente, tratamento de depsipeptídeos cíclicos de acordo com 0 Exemplo 4 ou 5 com 0 agente de alquilação apropriado fornece os seguintes compostos:

Table 21

Exemplo 42: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000398] A uma mistura de 200 mg (0,21 mmol) de depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 5, 46,5 mg (0,31 mmol) de iodeto de sódio, e 57,5 mg (0,41 mmol) de K2CO3 em 2 mL de acetona seca, 44 mg (0,31 mmol) de 3-(clorometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol foram adicionados e tratados com ultra-som durante a noite (temperatura eleva a cerca de 50°C). Para a preparação, a mistura de reação foi diluída com diclorometano e lavada com água. Depois de secagem da camada orgânica sobre sulfato de sódio, o solvente foi removido e o resíduo obtido purificado através de HPLC (15 cm Zorbax; acetonitrila/ tampão de NH4OAC aqu.: 20—>95%). Rendimento: 90 mg (40,5%) de um derivado de depsipeptídeo cíclico de acordo com 0 Exemplo 5 apresentando O-(1,5-dimetil-1 H-pirazol-3-il)metil-L-tirosina em A6. ESI MS: 1101,39 [M+Na]+.

Exemplo 43:

[000399] Analogamente, tratamento de depsipeptídeo cíclico de depsipeptídeo cíclico de acordo com a Fórmula (II) com 3-(clorometil)- 1,5-dimetil-1 H-pirazol fornece um composto apresentando O-(1,5- dimetil-1 H-pirazol-3-il)metil-L-tirosina em A6. ESI MS: 1059,19 [M+Na]+. Exemplo 44: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000400] A uma solução de 17 mg (0,0165 mmol) de depsipeptídeo cíclico de acordo com o Exemplo 33 em 2 mL de diclorometano, 845 pL de ácido trifluoroacético foram adicionados e agitados em r.t. durante 4 horas. A mistura de reação foi diluída com tolueno e o solvente foi removido em vácuo fornecendo 22,5 mg do correspondente ácido bruto.

[000401] 20 mg do ácido acima mencionado, 6,81 mg (0,031 mmol) de terc-butiléster de ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico, e 15,8 mg (0,041 mmol) de HATU foram dissolvidos em 2 mL de DMF seca e 11 pL de DIEPA foram adicionados e agitados em r.t. durante a noite. Para a preparação, a mistura de reação foi diluída com EtOAc e lavada com soluções de NaHSO4 e NaHCOs sat. e salmoura. Depois de secagem da camada orgânica sobre sulfato de sódio, o solvente foi removido e o resíduo obtido purificado através de HPLC (15 cm Zorbax; acetonitrila/ tampão NH4OAC aqu.: 20—>95%). Rendimento: 7 mg (29%) do composto do título. ESI MS: 1194,32 [M+Na]+.

terc-Butiléster de ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico

[000402] 100 mg (0,226 mmol) de terc-butiléster de ácido 8-(9-fluore- nilmetoxicarbonilamino)-3,6-dioxaoctanoico em 1 mL de DMF seca foram tratados com piperidina (89,5 pL; 0,862 mmol) em r.t. durante 3 horas. O solvente foi evaporado e 0 resíduo purificado através de cromatografia em sílica-gel com um gradiente cHex—>EtOAc—>EtOAc/MeOH(1:1) + MeOH a 3%. Rendimento: 12 mg (24%) do composto do título. ESI MS: 220,08 [M+H]+.

terc-Butiléster de ácido 8-(9-fluorenilmetoxicarbonilamino)- 3,6-dioxaocta-noico

[000403] Uma solução de 150 mg (0,389 mmol) de ácido 8-(9- Fluorenilmetoxicarbonilamino)-3,6-dioxaoctanoico, 546 mg (9,73 mmol) isobutileno, e 4,3 pL de H2SO4 a 95 até 98% foi agitada em r.t. durante 3 dias. Para a preparação, a solução de reação foi diluída com diclorometano e lavada com solução de bicarbonato sat.. Depois de secagem sobre sulfato de sódio, o solvente foi removido e o resíduo obtido purificado através de cromatografia em sílica-gel com um gradiente de cHex/EtOAc fornecendo 145 mg (84,4% ) do composto do título. ESI MS: 464,12 [M+Na]+. Exemplo 45: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000404] A uma mistura de 101 mg (0,1 mmol) de um composto de Exemplo 41 e 40 mg de Cul em 11 mL de tolueno/DMF (10:1), 50 L de DIEPA e 1 mL de uma solução a 1M de 1-azido-2-[2-(2-azido-etóxi)- tóxi]-etano foram adicionados e agitados em 45°C durante 6 horas. Em seguida a mistura de reação foi lavada com uma solução de NaH2PO4 sat., seca sobre sulfato de sódio, e o solvente foi evaporado. O resíduo obtido foi purificado através de cromatografia (SÍO2; cHex/EtOAc (1:1) + MeOH a 20%) fornecendo 14 mg (11,7%) d° composto do título. ESI MS: 1231,34 [M+Na]+. Exemplo 46: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000405] Uma solução de 25 mg de depsipeptídeo de acordo com a Fórmula (II) em 25 mL água foi agitada em temperatura ambiente. Nesta solução um pico adicional foi observado em análise de HPLC, o que forma um equilíbrio com o depsipeptídeo de acordo com a Fórmula (II). Depois de 20 dias, a solução foi seca usando liofilização e o pico adicional foi isolado usando cromatografia de fase reversa tal como descrito no Exemplo 1. Isto forneceu 0,75 mg de depsipeptídeo cíclico de acordo com o exemplo 46, em que Ahp foi convertida em 5- hidroxiprolina.

[000406] ESI-MS: modo pos.: m/z = 951,5 (M+Na), Modo neg.: m/z = 927,4 (M-H); MW monoisotópico 928,5, C46H72N8O12

[000407] 1H RMN (600 MHz) d6-DMSO δH: 0,00 (1H, m), 0,50 (3H, t, J = 7,3 Hz), 0,71 (3H, m), 0,76 (3H, t, J = 7,0 Hz), 0,76 (3H, d, J = 7,3 Hz), 0,85 (6H, d, J = 6,6 Hz), 0,88 (1H, m), 1,00 (1H, m), 1,03 (3H, d, J = 6,6 Hz), 1,06 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,10 (1H, m), 1,16 (1H, m), 1,26 (1H, m), 1,36 (1H, m), 1,43 (1H, m), 1,51 (2H, m), 1,79 (1H, m), 1,83 (1H, m), 1,97 (1H, m), 1,99 (1H, m), 2,17 (2H, t, J = 7,7 Hz), 2,39 (1H, m), 2,48 (1H, m), 2,67 (3H, s), 2,78 (1H, m), 3,43 (1H, m), 4,32 (1H, m), 4,33 (1H, m), 4,45 (1H, m), 4,48 (1H, m), 4,58 (1H, m), 4,61 (1H, m), 4,67 (1H, m), 5,09 (1H, m), 5,47 (1H, m), 6,66 (2H, d, J = 8,1 Hz), 6,74 (1H, s, amplo), 7,03 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,31 (1H, s, amplo), 7,33 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,04 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,17 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,23 (1H, d, J = 2,9 Hz), 8,43 (1H, d, J = 9,5 Hz), 9,25 (1H, s, amplo), (grupo OH de hidroxiprolina não visível). Exemplo 47: Derivação de um depsipeptídeo cíclico da invenção

[000408] Uma solução de 100 mg de depsipeptídeo de acordo com a Fórmula (II) em 25 mL de HCI a 0,5 N foi agitada em 50°C durante 24 h. Para a preparação, o pH da mistura de reação foi ajustado a pH 7 com NaOH a 5 N e foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo obtido foi purificado através de cromatografia de fase reversa (mesmo condições tal como descrito no exemplo 1) fornecendo 17 mg de depsipeptídeo cíclico de acordo com o exemplo 47, em que glutamina em A1 foi substituída por ácido glutâmico.

[000409] ESI-MS: modo pos.: m/z = 952,8 (M+Na), Modo neg.: m/z = 928,5 (M-H); MW monoisotópico 929,5, C46H71N7O13

[000410] 1H RMN (600 MHz, d6-DMSO) õH:. -0,11 (3H, d, J =6,6 Hz), 0,64 (4H, m), 0,77 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,81 (3H, t, J = 7,3 Hz), 0,84 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,88 (3H, d, J = 6,6 Hz), 1,02 (6H, m), 1,05 (1H, m), 1,10 (1H, m), 1,19 (3H, d, J = 5,9 Hz), 1,24 (1H, m), 1,40 (1H, m), 1,51 (1H, m), 1,75 (1H, m), 1,78 (5H, m), 1,85 (2H, m), 2,10 (2H, m), 2,45 (1H, m), 2,60 (1H, m), 2,67 (1H, m), 2,71 (3H, s), 3,20 (1H, m), 4,28 (1H, m), 4,29 (1H, m), 4,44 (2H, m), 4,63 (1H, d, J = 9,5 Hz), 4,69 (1H, m), 4,93 (1H, m), 5,04 (1H, m), 5,47 (1H, m), 6,24 (1H, s, amplo), 6,64 (2H, d, J = 8,8), 6,99 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,37 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,69 (1H, d, J = 9,5 Hz), 7,80 (1H, d, J = 9,5 Hz), 8,51 (1H, d, J = 8,8 Hz), 8,57 (1H, d, J = 5,1 Hz), grupo OH de Tirosina e ácido glutâmico não visível)

[000411] A presente invenção também fornece: 1. Um depsipeptídeo cíclico, ou um derivado do mesmo, apresentando a estrutura de Fórmula (I):

[000412] em que a ligação de éster é encontrada entre o grupo carbóxi de A7 e o grupo hidróxi de A2,

[000413] em que X e Ai são cada um independentemente opcionais,

[000414] e em que

[000415] X é qualquer resíduo químico

[000416] A1 é um aminoácido padrão que não é ácido aspártico,

[000417] A2 é treonina ou serina,

[000418] A3 é um aminoácido padrão não básico ou um derivado não básico deste,

[000419] A4 é Ahp, desidro-AHP, prolina ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos,

[000420] A5 é isoleucina ou valina,

[000421] A6 é tirosina ou um derivado do mesmo

[000422] A7 é leucina, isoleucina ou valina,

[000423] ou um sal farmaceuticamente aceitável de depsipeptídeo cíclico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos. 2. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, da reivindicação 1 em que o átomo de nitrogênio da ligação de amida entre A5 e A6 é substituído com uma metila. 3. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de qualquer da reivindicação 1 ou 2 em que X é H ou um residuo de acila. 4. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de qualquer da reivindicação 1 a 3, em que X é CH3CH2CH(CH3)CO, (CH3)2CHCH2CO OU (CH3)2CHCO. 5. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de qualquer da reivindicação 1 a 4, em que A1 é glutamina. 6. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de qualquer da reivindicação 1 a 5, em que A2 é treonina. 7. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de qualquer da reivindicação 1 a 6, em que A3 é leucina. 8. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de qualquer da reivindicação 1 a 7, em que A6 é tirosina. 9. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de qualquer da reivindicação 1 a 8, em que A4 é o derivado de Ahp 3-amino-2 piperidona. 10. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 4, em que X é (CH3)2CHCO

[000424] A1 é glutamina,

[000425] A2 é treonina,

[000426] A3 é leucina,

[000427] A4 θ Ahp ou um derivado da mesma,

[000428] A5 θ isoleucina ou valina,

[000429] A6 θ tirosina ou um derivado do mesmo

[000430] A7 θ isoleucina ou valina. 11. 0 depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 4, em que X é CH3CH2CH(CH3)CO

[000431] A1 é glutamina,

[000432] A2 é treonina,

[000433] A3 é leucina,

[000434] A4 θ Ahp ou um derivado da mesma,

[000435] A5 é isoleucina,

[000436] A6 θ tirosina ou um derivado do mesmo

[000437] A7 é isoleucina. 12. O depsipeptídeo cíclico ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 4, em que X é CH3CH2CH(CH3)CO

[000438] A1 é glutamina,

[000439] A2 é treonina,

[000440] A3 é leucina,

[000441] A4 é desidro-Ahp ou um derivado da mesma,

[000442] A5 é isoleucina,

[000443] A6 é tirosina ou um derivado do mesmo

[000444] A7 é isoleucina. 13. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 4, em que X é (CH3)2CHCH2CO

[000445] A1 é glutamina,

[000446] A2 é treonina,

[000447] A3 é leucina,

[000448] A4 é desidro-Ahp ou um derivado da mesma,

[000449] A5 é isoleucina,

[000450] A6 é tirosina ou um derivado do mesmo

[000451] A7 é isoleucina. 14. Um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, apresentando a estrutura de Fórmula (I):

[000452] em que a ligação de éster é encontrada entre o grupo carbóxi de A7 e o grupo hidróxi de A2,

[000453] e em que

[000454] X é (CH3)2CHCH2CO

[000455] Ai é glutamina,

[000456] A2 é treonina,

[000457] As é leucina,

[000458] A4 é Ahp ou prolina, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos,

[000459] As é fenilalanina,

[000460] Ae é tirosina ou um derivado do mesmo,

[000461] Az é valina,

[000462] ou um sal farmaceuticamente aceitável de depsipeptídeo cíclico ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos. 15. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, da reivindicação 14, em que

[000463] X é (CH3)2CH CH2CO

[000464] A1 é glutamina,

[000465] A2 é treonina,

[000466] A3 é leucina,

[000467] A4 θ Ahp, ou um derivado da mesma,

[000468] A5 é fenilalanina,

[000469] A6 θ tirosina ou um derivado do mesmo,

[000470] A7 é valina. 16. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, da reivindicação 14, em que

[000471] X é (CH3)2CH CH2CO

[000472] A1 é glutamina,

[000473] A2 é treonina,

[000474] A3 é leucina,

[000475] A4 é prolina, ou um derivado do mesmoderivado dos mesmos,

[000476] A5 é fenilalanina,

[000477] A6 é tirosina ou um derivado do mesmo,

[000478] A7 é valina. 17. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, da reivindicação 14 em que o átomo de nitrogênio da ligação de amida entre A5 e A6 é substituído com uma metila. 18. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 17, em que A1, A2, A3, A5, A6 e A7 são L-aminoácidos. 19. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 18, em que A4 é 3S,6R Ahp. 20. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 19, para uso como um medicamento. 21. O depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmoderivado dos mesmos, de quaisquer das reivindicações 1 a 21, para uso como um medicamento para o tratamento de câncer, em particular câncer ovariano, ou para o tratamento de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, sindrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano. 22. Uma composição farmacêutica compreendendo um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1 a 19. 23. Um método de tratamento de um sujeito sofrendo de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psioríase pustular, rosácea, sindrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano, compreendendo administração ao referido sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1 a 20. 24. Um processo para produção do depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1 a 19 compreendendo cultivo de uma cepa de Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em um meio adequado, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido. 25. Um processo para produção do depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1-19 compreendendo expressão dos genes de biossíntese de uma cepa de Chondromyces, uma variante ou um mutante desta, em uma cepa de hospedeiro microbiano heterólogo, e derivação opcionalmente química do depsipeptídeo cíclico assim produzido. 26. O processo de reivindicações 24 ou 25 em que a cepa é Chondromyces crocatus (DSM 19329) ou Chondromyces robustus (DSM 19330). 27. Um micro-organismo Chondromyces isolado produzindo o depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de quaisquer das reivindicações 1-19, depositados sob o número de acesso DSM 19329 ou DSM 19330. 28. Um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, produzido pelo micro-organismo Chondromyces isolado da reivindicação 27 ou obtido por um processo de acordo com as reivindicações 24 a 26. 29. Um processo para a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 que compreende alternativamente: a) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000479] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000480] com um ácido orgânico ou inorgânico, ou um ácido de Lewis em uma temperatura entre -78°C e 150°C; b) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000481] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000482] com hidrogênio molecular ou fonte deste na presença de um catalisador em um solvente em uma temperatura entre -50 e 100°C; c) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000483] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000484] com um ácido orgânico ou inorgânico ou um ácido de Lewis, na presença de um agente redutor em uma temperatura entre - 78°C e 150°C; ou d) - a preparação de um derivado de um depsipeptídeo cíclico, ou derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 em que A4 é

[000485] através de tratamento de um composto em que A4 é

[000486] com um alcanol substituído ou não substituído e um ácido orgânico ou inorgânico, ou um ácido de Lewis, em uma temperatura entre -78°C e 150°C. Referências: [Bode HB, Zeggel B, Silakowski B, Wenzel SC, Reichenbach H, Müller R (2003)] Steroid biosynthesis in prokaryotes: identification of myxobacterial steroids and cloning of the first bacterial 2,3(S)-oxidosqualene cyclase from the myxobacterium Stigmatella aurantiaca. Mol Microbiol 47:471-481 [Das SK, Mishra AK, Tindall BJ, Rainey FA, Stackebrandt E (1996)] Oxidation fo thiosulfate by a new bacterium, Bosea thiooxidans (strain BI-42) gen. nov., sp. nov.: Analysis of phylogeny based on chemotaxonomy and 16S ribosomal DNA sequencing. Int J Syst Bacteriol 46:981-987 [Dictionary of Natural Products (2007)] Dictionary of Natural products on CD-ROM, version 15.2, 2007, Hampen Data services Ltd. [DSMZ (2007)] Description of biological risk group fo Chondromyces strains available on the website http://www.dsmz.de/ [Gerth K, Pradell A, Perlova O, et al. (2003)] Myxobacteria: proficient producers fo novel natural products with various biological activities - past and future biotechnological aspects with the focus on the genus Sorangium. J Biotechnol 106:233-253 [Hansson L, Backman A, Ny A, Edlund M, Ekholm E, Ekstrand Hammarstrom B, Tornell J, Wallbrandt P, Wennbo H, Egelrud T (2002)] Epidermal overexpression of stratum corneum chymotryptic enzyme in mice: a model for chronic itchy dermatitis. J Invest Dermatol 118:444-449 [Ishida K, Matsuda H, Murakami M, Yamaguchi K (1996)] The Absolute Stereochemistry of micropeptin 90. Tetrahedron letters 37:51-52. [Jacobi CA, Reichenback H, Tindall BJ, Stackebrandt E (1996)] "Candidates comitans," a bacterium living in coculture with Chondromyces crocatus (Myxobacteria). Int J Syst Bacteriol 46:119- 122 [Jacobi CA, Assmus B, Reichenbach H, Stackebrandt E (1997)] Molecular evidence for association between the Sphingobacterium-like organism "Candidates comitans" and the myxobacterium Chondromyces crocatus. Appl Environ Microbiol 63:719-723 [Jansen R, Kunse B, Reichenbach H, Hõfle G (2002)] The ajudazols A and B, novel isochromanones from Chondromyces crocatus (Myxobacteria): Isolation and structure elucidation. Eur J Org Chem 2002:917-921 [Kaiser D (2003)] Coupling cell movement to multicellular development in myxobacteria. Nature Reviews Micobiol 1:45-54 [Kunze B, Jansen R, Sasse F, et al. (1995)] Chondramides A ~ D, new antifungal and cytostatic depsi peptides from Chondromyces crocatus (Myxobacteria): Production, physicochemical and biological properties. J Antibiotics 48:1262-1266 [La Scola B, Mallet M-N, Grimont PAD, Raoult D (2003)] Bosea eneae sp. nov., Bosea massiliensis sp. nov. and Bosea vestrisii sp. nov., isolated from hospital water supplies, and emendation of the genus Bosea (Das etal. 1996). Int J Syst Evol Microbiol 53:15-20 [Lee AY, Smitka TA, Bonjouklian R, Clardy J (1994)] Atomic structure of the trypsin- A90720A complex: a unified approach to structure and function. Chemistry & Biology 1:113-117 [Matern U, Schleberger C, Jelakovic S, Weckesser J, Schulz GE (2003)] Binding structure of elastase inhibitor scyptolin A. Chemistry & Biology 10:997-1001 [Rahid S, et al. (2006)] Molecular and biochemical studies of chondramide formation - highly cytotoxic natural products from Chondromyces crocatus Cm c5. Chem & Biol 14:667-681 [Rouhiainen L, Paulin L, Suomalainen S, Hyytiãinen H, Buikema W, Haselkorn R, Sivonen K (2000)] Genes encoding for synthetases of cyclic depsipetides, anabaenopeptilides, in Anabaena strain 90. Molecular Microbiology 37:156-167. [Vasilopoulos Y, Cork MJ, Murphy R, et al. (2004)] Genetic association between an AACC insertion in the 3'UTR of the stratum corneum chymotryptic enzyme gene and atopic dermatitis. J Invest Dermatol 123:62-66.

Claims

1. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um depsipeptídeo cíclico, ou um derivado do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre:

nas quais R é selecionado dentre:

na qual R e R2 são selecionados dentre:

na qual R1 é selecionado dentre:

na qual R3 é selecionado dentre:

na qual R1 e R4 são selecionados dentre:

em conjunção com um veículo e/ou ingrediente aceitável farmacêutico.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o depsipeptídeo cíclico é selecionado dentre:

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o depsipeptídeo cíclico é selecionado dentre:

4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o depsipeptídeo cíclico é selecionado dentre:

5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o depsipeptídeo cíclico é selecionado dentre:

6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o depsipeptídeo cíclico é selecionado dentre:

7. Uso de uma composição farmacêutica, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento em uma doença ou distúrbio selecionado de doenças de pele pruriginosas e inflamatórias e/ou hiperproliferativas tais como queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano, fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que é para tratamento de queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida, doença inflamatória do intestino e doença de Crohn, assim como pancreatite, ou de câncer, em particular câncer ovariano.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que é para tratamento de queloides, cicatrizes hipertróficas, acne, dermatite atópica, psoríase, psoríase pustular, rosácea, síndrome de Netherton ou outras dermatoses pruriginosas tais como prurigem nodular, prurido inespecífico do idoso assim como outras doenças com disfunção de barreira epitelial tais como pele envelhecida.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que é para tratamento de fibrose cística (CF), doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar, síndrome da angústia respiratória do adulto, bronquite crônica, enfisema hereditário, artrite reumatóide, IBD, psoríase, asma.

11. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 10, caracterizado pelo fato de que o tratamento é por aplicação local ou sistêmica tal como cremes, unguentos e supositórios ou por aplicação oral ou sc ou iv ou por inalação, respectivamente.