BRPI0809359A2 - Desumidificador - Google Patents

Description

DESUMIDIFICADOR

Aspecto Técnico

A presente invenção relata para um desumidificador que contém um ácido nucléico, o qual codifica para uma proteína heat shock, como um ingrediente ativo ou um umidifícador para aquele ácido nucléico.

Retrospecto

Uma Proteína Heat Shock (no presente pedido, “HSP”) é uma substancia protéica, cuja expressão é induzida de acordo com o estresse de alta temperatura e é conhecida como um grupo de substâncias protéicas 10 denominadas chaperonas moleculares. Sabe-se que as HSP estão amplamente presentes em várias espécies de organismos, de um procarioto a um eucarioto, e, por exemplo, (I) HSP pequeno que apresenta um peso molecular de cerca de 15 kDa a aproximadamente 30 kDa, (2) proteína HSP60 ou proteína GroEL (o nome “HSP60” é destinado ao eucarioto e o 15 nome “GroEL” é destinado ao procarioto) que apresenta um peso molecular de cerca de 60 kDa e (3) proteína HSP70 ou a proteína DnaK (o nome “HSP70” é destinado para um eucarioto e o nome “DnaK” é destinado a um procarioto) que apresenta um peso molecular de cerca de 70 kDa são conhecidos.

Com respeito à função das HSP, a relação à tolerância a alta temperatura é observada, mas ainda está sob pesquisa até agora e não foi completamente resolvida.

Toma-se evidente a partir de exemplos de pesquisa para a função das HSP em vegetais que, no tabaco, um fenótipo anormal aparece se a expressão das proteínas HSP60 for suprimida por um método de antisense (consulte Literatura sem Patente 1) e em Arabidopse, um fenótipo anormal aparece se a expressão das proteínas HSP70 for suprimida pelo método de anti-sense (consulte Literatura sem Patente 2). Além disso, tomou-se conhecido que em Arabidopse, a quantidade de expressão das proteínas HSP70 aumenta se um gene que controla a transcrição de um gene heat 5 shock for suprimido, através disto pode-se obter uma Arabidopse que apresente uma tolerância a alta temperatura (consulte Literatura Sem Patente 3). Ainda mais, tomou-se conhecido que se a codificação de um gene para uma HSP pequena de uma castanha for introduzida em um colibacilo e a proteína anterior é expressa naquele colibacilo, o colibacilo 10 obtém uma tolerância a alta temperatura (consulte Literatura Sem Patente

4)·

Com respeito à relação entre os estresses ambientais (por exemplo, ambiente com alta concentração de sal, secura ou luz forte) exceto a tolerância a alta temperatura e a chaperona molecular, por exemplo, DnaK e HSP70 são relevantes para a tolerância à salinidade, a resistência a seca e semelhantes (consulte Literatura com Patente 1).

A Literatura com Patente 2 revela que a HSP70 apresenta uma função importante sob um ambiente no qual nenhum estresse específico é aplicada ao corpo vegetal. Entretanto, não é encontrado na Literatura com Patente 2 20 que revele ou sugira que o efeito da transpiração da água não seja promovida pela HSP70, ainda que a HSP70 apresente afeitos de suprimir qualquer transpiração de água pelo vegetal e promoção considerável da síntese fotônica.

[Literatura sob Patente 1] Publicação Aberta para Pedido de Patente Japonesa [.Japanese Patent Application Laid-Open Publication] No. 2001-78603 [Literatura sem Patente 1] Plant J., 6, de 425 a 432 (1994)

[Literatura sem Patente 2] Mol. Gen. Genet, 252, de 11 a 19 (1996) [Literatura sem Patente 3] Plant J., 8, de 603 a 612 (1995)

[Literatura sem Patente 4] Plant Physiol., 120, de 521 a 528 (1999)

5 Divulgação da Invenção

Problema a ser Solucionado pela Invenção A água é necessária para o cultivo de vegetais e um esquema de melhora da eficácia do consumo de água é desejado, especificamente, no campo do agronegócio.

Meios para a Solução do Problema

Para resolver o problema, o inventor da presente invenção submeteu um exame minucioso e surpreendentemente encontrou que, em comparação com um vegetal que não tinha sido submetida a uma recombinação, um vegetal sob recombinação na qual HPS são introduzidas suprime qualquer 15 aumento da ação da transpiração ainda que a ação da síntese fotônica seja consideravelmente promovida e realizada na presente invenção usando HPS como desumidificador.

Abaixo é apresentado um resumo da presente invenção.

1. Um desumidificador que contém um ácido nucléico como um ingrediente ativo que codifica por uma proteína heat shock.

2. O desumidificador de acordo com o número 1 no qual a proteína heat shock é uma proteína ou uma proteína HSP70.

3. O desumidificador de acordo com o número 2 no qual a proteína heat shock é uma proteína ou uma proteína.

4. Um desumidificador que contém um ácido nucléico como um ingrediente ativo que codifica uma proteína que contém as seguintes seqüências de aminoácido descritas de (a) a (d).

(a) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 1 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2.

5 (b) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 116 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2.

(c) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 164 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na

seqüência de número 2.

(d) uma seqüência de aminoácido que apresenta substituição, deleção, inserção ou transição de um ou mais aminoácidos nas seqüências de (a) a

(c).

5. O desumidificador de acordo com qualquer um dos números de 1 a 4, que contenham um ácido nucléico que codifique pelo menos uma

proteína selecionada de um grupo de uma proteína/enzima que relaciona a um controle de síntese fotônica, uma proteína/enzima que controle o tamanho do corpo do vegetal, uma proteína/enzima que promova a extensão de uma raiz, uma proteína/enzima que promova o crescimento de 20 um corpo vegetal, uma proteína/enzima que melhore a estabilidade de um RNA ou de um ácido nucléico compreendido de uma seqüência antisense considerada.

6. O desumidificador de acordo com qualquer um dos números de 1 a 5, no qual o ácido nucléico é um ácido desoxirribonucléico.

7. Um método do uso de um ácido nucléico, que codifique uma proteína heat shock como um desumidificador. 8. Um método do uso de um ácido nucléico, que codifique uma proteína DnaK ou uma proteína HSP70 como um desumidificador.

9. O método de acordo com o número 8, no qual a proteína DnaK é uma proteína DnaK de uma cianobactéria tolerante ao sal.

5 10. Um método de uso de um ácido nucléico, que codifica uma proteína que contém as seguintes seqüências de aminoácidos descritas de (a) a (d), como um desumidificador.

(a) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 1 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na

seqüência de número 2.

(b) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 116 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2.

(c) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 164 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na

seqüência de número 2.

(d) uma seqüência de aminoácido que apresenta substituição, deleção, inserção ou transição de um ou mais aminoácidos nas seqüências de (a) a

(c).

11. Um método de uso do desumidificador de acordo com quaisquer dos números de 1 a 6 para tomar a síntese fotônica mais eficiente.

12. Um método de supressão da transpiração para um vegetal que compreende:

a introdução de um ácido nucléico, que codifique uma proteína heat shock em uma genoma de uma célula vegetal; e

o cultivo de uma célula vegetal que contenha o genoma no qual o ácido nucléico é introduzido.

Nota-se que um “vegetal” significa um vegetal quando os seres vivos são divididos em três categorias: organismo microscópico; vegetal; e animal, e inclui um corpo vegetal (isto é, o “Vegetal inteiro” e uma parte 5 considerada (por exemplo, flor, folha, caule, raiz, semente ou tecido). Uma "célula vegetal” inclui, por exemplo, uma célula vegetal não diferenciada ou uma cultura de tecido vegetal não diferenciada, ou um protoplasto, um calo (aglomerado de células) , um embrião adventício, um broto adventício, e ainda para uma célula/tecido vegetal já diferenciado.

Ainda, a palavra "linhagem" significa cultivo, incubação e semelhantes, e representa uma ação de crescimento da célula vegetal, tal como reprodução, diferenciação, ampliação e prolongamento.

Efeito da Invenção A presente invenção fornece um pedido de novo uso das HSP como um desumidificador.

Breve Descrição das Ilustrações A FIG. 1 é um diagrama que apresenta a síntese fotônica do arroz sobre o qual um desumidificador da presente invenção age e um arroz comparativo, ambos comparados com base nas quantidades de fixação de 20 dióxido de carbono, na qual “Amostra” representa o arroz no qual o desumidificador age, “Controle” representa o arroz comparativo e o eixo vertical representa as quantidades de fixação de dióxido de carbono (unidade de área, uma quantidade de dióxido de carbono fixada pelo tempo); e

A FIG. 2 é um diagrama que apresenta a velocidade de transpiração do arroz no qual o desumidificador da presente invenção age e um arroz comparativo de uma maneira comparativa, na qual “Amostra” representa o arroz no qual o desumidificador da presente invenção age; “Controle” representa o arroz comparativo, e o eixo vertical representa a velocidade de transpiração (unidade de área, número de mols de moléculas de água dissipada para o ar pelo tempo).

Melhor Maneira de Realizar a Invenção A presente invenção será explicada através da melhor maneira para realização da presente invenção.

1. Desumidificador da Presente Invenção O desumidificador da presente invenção contém um ácido nucléico, que codifica um HSP, como um ingrediente ativo.

Exemplos da “HPS” no desumidificador da presente invenção são pequenas HPS (por exemplo, uma proteína HSP17.4 ou uma proteína HSPl8.2 ou semelhante descritos na Mol. Gen. Genet., 219, de 365 a 372 (1989)), proteína HSP60 (por exemplo, uma proteína HSP60 descrita em Plant Mol. Biol., 18, de 873 a 885), uma proteína GroEl (por exemplo, uma proteína CPNlO descrita em Plant J., 10, de 1119 a 1125 (1996)), uma proteína HSP70 (por exemplo, uma proteína HSC70 descrita em Plant Mol. Biol., 25, de 577 a 583 (1994), uma proteína HSP70-1, uma proteína HSP70-2 e uma v HSP70-3 descrita em Plant Physilo., 88, de 731 a 740 (1988), e uma proteína BiP descrita em Plant Cell Physiol., 37, de 862 a 865 (1996)), proteína DnaK, HSP 90 (uma proteína HSP81-1, uma proteína HSP81-2 e uma proteína HSP81-3 descritas em Plant Physiol., 99, de 383 a 390 (1992), uma proteína HSP81-4, Proteína HSP88.1 e proteína HSP89.1 descritas em Plant Mol. Biol., 35, de 955 a 961 (1997), ou semelhantes) e uma HSPlOO (uma proteína HSPlOl descrita em Plant Cell, 6, de 1899 a 1909 (1994)), mas é recomendado que a proteína DnaK e a proteína HSP70 devem ser utilizadas. E preferível que a proteína DnaK seja utilizada, em especial prefere-se uma proteína DnaK de cianobactéria ou bactéria tolerantes ao sal.

Um exemplo da proteína HSP70 é uma proteína HSP70 de um eucarioto, e, por exemplo, uma proteína HSP70 de um animal, um vegetal ou um miceto (por exemplo, fungo, levedura, fungos) é exemplificado.

Uma proteína DnaK de cianobactéria tolerante ao sal é especialmente preferível entre tais proteínas. A cianobactéria tolerante ao sal não se limita a qualquer uma específica, contanto que tenha uma tolerância ao sal, mas por exemplo, uma cianobactéria tolerante ao sal que pode ser cultivada sob uma condição, na qual a concentração de NaCl seja de 0,25 mol/L a 3 mol/L, ou seja, uma Aphanothece halophytica é exemplificada. A proteína DnaK da Aphanothece halophytica, que é um tipo de cianobactéria tolerante ao sal, é compreendida de setecentos e vinte e um resíduos de aminoácido, e diferente da proteína DnaK de um procarioto (por exemplo, colibacillus ou cianobactéria de água doce ou a proteína HSP70 de um eucarioto, há seqüências extra de aminoácidos que compreende cerca de cem resíduos de aminoácidos na extremidade do grupo carboxila (C terminal). Sabe-se que a proteína DnaK de Aphanothece halophytica apresenta uma característica de intervenção para provocar que outras proteínas realizem a montagem corretamente em uma concentração alta de sal. A seqüência de aminoácidos da proteína DnaK de Aphanothece halophytica está apresentada com a seqüência número 2. Se uma codificação de ácido nucléico para cada proteína de DnaK é introduzida no genoma de uma célula vegetal, o efeito de supressão da transpiração avaliada por um método de verificação do efeito da supressão da transpiração deve ser discutida depois de aumentos maiores ou iguais a 20% em comparação com um vegetal no qual o desumidificador da presente invenção é usado. Prefere-se que um ácido nucléico utilizado 5 como o ingrediente ativo do desumidificador da presente invenção deve apresentar o efeito de supressão da transpiração maior ou igual a 50%, preferencialmente, maior ou igual a 65% e, ainda mais preferencialmente, maior ou igual a 80%.

Enquanto isso, com respeito à proteína presente em toda a natureza, além do polimorfismo e da mutação de um DNA que codifique portanto, mutação, como um deslocamento, deleção, inserção ou transição de um aminoácido em uma seqüência de aminoácido ocorre devido a uma reação de modificação em uma célula de uma proteína depois da criação ou durante a purificação. Sem levar em consideração tal mutação, há conhecimento de uma proteína que apresenta substancialmente a mesma ação fisiológica e biológica como aquela de uma proteína que não apresenta uma mutação. Uma proteína que apresenta uma ligeira diferença na constituição, mas não apresenta grande diferença na função, portanto, está contido em uma seqüência de aminoácido para o qual um ácido nucléico serve como um ingrediente ativo do desumidificador do código da invenção. O mesmo é verdade para um caso, no qual a mutação precedente é introduzida de maneira artificial na seqüência de aminoácido de uma proteína, e neste caso, é possível criar vários tipos de variantes. Por exemplo, sabe-se que um polipeptídeo que apresente um resíduo de cisteína em uma seqüência de aminoácido de interleucina humana substituída por serina garante uma atividade do IL-2 (Science, 224, 1431 (1984)). Além disso, sabe-se que uma proteína de um tipo apresenta um domínio peptídeo que não é necessário para uma atividade. Os exemplos, portanto, é um único peptídeo presente em uma proteína secretada para fora da célula e uma pró-seqüência, a qual pode ser observada no precursor ou como uma 5 protease, e a maioria dos domínios, portanto, são removidos depois da tradução ou quando convertidos a uma proteína ativa. Tais proteínas estão presentes com uma estrutura primária, mas apresentam a mesma função no final.

Da mesma maneira, com respeito à proteína DnaK e à proteína HSP70, é desnecessário dizer que uma proteína DnaK e proteína HSP70 naturais são incluídas, e uma proteína variante, recombinante obtida através de engenharia genética e uma proteína variante que apresenta uma seqüência de aminoácidos na qual um ou mais (preferencialmente, um ou vários) aminoácidos são apagados, substituídos ou adicionados em uma seqüência de aminoácidos de uma proteína DnaK ou uma proteína HSP70 são também incluídas. Observe que a expressão "várias” na especificação significa um número inteiro de 7% do número de aminoácidos na seqüência de aminoácidos inteira, preferencialmente, um número inteiro de 5% e, ainda mais preferencialmente, um número inteiro de 3%. Por exemplo, no caso de uma seqüência de aminoácidos que apresente setecentos e vinte e um aminoácido, cinqüenta, preferencialmente, trinta e seis, e mais preferencialmente, vinte e um corresponde àquela expressão.

Enquanto isso, sabe-se que β-l ,4-galactosiltransferase contém dois códons ATG em uma posição (Nakagawa, K. et al. (1988), J.Biochem, 104, de 165 a 168, Shaper, N. et al. (1988), J. Biol. Chem., 263, de 10420 a 10428). Shaper et al. divulga que a β-l,4-galactosiltransferase apresenta ambas as formas de uma mais longa e uma mais curta sintetizada junto como um resultado do início da tradução das duas porções. Como explicado, sabe-se que existem proteínas que apresentam tamanhos diferentes mesmo que essas proteínas sejam originadas dos mesmos genes 5 em aminoácidos na natureza. Da mesma maneira, para uma DnaK, por exemplo, existe uma possibilidade de que uma pluralidade de funções de códons ATG como códons de iniciação. Nenhum assunto no qual o códon seja um códon de iniciação, é verdade que como um códon codifica uma proteína DnaK citado anteriormente e um ácido nucléico de iniciação com 10 o segundo e terceiro códon ATG pode ser usado como o desumidificador da presente invenção. Conseqüentemente, além da seqüência de aminoácido que apresenta aminoácidos de números de 1 a 721 entre as seqüências de aminoácidos de uma Aphacenothece halophytuca, uma seqüência de aminoácido que apresenta aminoácidos dos números de 116 a 15 721 e uma seqüência de aminoácido que apresenta os números de aminoácido de 164 a 721 pode ser incluída.

Exemplos do “ácido nucléico” no desumidificador da presente invenção são um ácido desoxirribonucléico deve ser um DNA, uma vez que a estabilidade da preservação do desumidificador da presente invenção 20 e a estabilidade considerando quando está em uso se toma superior. Não é limitado que o ácido nucléico seja fita única (por exemplo, para uma DNA, tanto uma fita sense da HSP citado anteriormente ou a fita antisense considerada) ou fita dupla (pareamento da fita sense com a fita antisense), mas a fita dupla é preferível uma vez que a estabilidade do ácido nucléico 25 se toma superior. Um exemplo da seqüência de base que codifica a seqüência de aminoácido (descrita na seqüência de número 2) da aphanothece halophytica citado anteriormente é uma seqüência base que apresenta base de números de 1 a 2166 entre as seqüências de base descritas na seqüência número 1. Além disso, um exemplo da seqüência de base que codifica a seqüência de aminoácido que apresenta aminoácido de 5 números dell6a721na seqüência número 2 é a seqüência de base que apresenta os números de base de 245 a 2166 entre as seqüências de base descritas na seqüência numero 1. Ainda, um exemplo da seqüência de base que codifica a seqüência de aminoácido que apresenta aminoácido de números de 164 a 721 na seqüência número 2 é a seqüência de base que 10 apresenta os números de base de 490 a 2166 entre as seqüências de base descritas na seqüência numero 1. Observe que é bem conhecido para o técnico no assunto que há códons plurais (seqüência de base que correspondem a aminoácido) que correspondem a um aminoácido. Portanto, é facilmente compreendido pelo técnico no assunto que a seqüência de base 15 que codifica a seqüência de aminoácido descrita, por exemplo, na seqüência número 2 não se limitam à seqüência de base descrita na seqüência número 1.

O ácido nucléico (por exemplo, DNA) compreendido como uma seqüência base pode ter o deslocamento, deleção, inserção ou transição de 20 uma ou mais bases na seqüência de bases que constitui o ácido nucléico. Mesmo que tais mutações ocorram, dificilmente afetam uma seqüência de aminoácidos para as quais a seqüência de bases codifica, e até o efeito de supressão da transpiração do desumidificador da presente invenção é mantida (é preferível que seja maior ou igual a 30% do nível de 25 crescimento completo de uma medição do peso de bruto deve ser mantido), uma seqüência de aminoácido pode ter uma mutação. Um exemplo de como uma seqüência de bases é um ácido nucléico que hibridiza com respeito a um ácido nucléico (DNA ou RNA) compreendida pela seqüência de bases descritas na seqüência número 1 sob uma condição adversa.

Observe que “condição adversa” significa uma condição que dezesseis 5 horas de incubação é realizada em uma temperatura de 42°C e, então, limpeza sucessiva por 1 x SSPE que contém 0,1% de SDS (sulfato dodecil de sódio) e 0,1 x SSPE que contém 0,1% SDS é realizado em uma temperatura de 55°C na presença de, por exemplo, 50% de formamida, 5 x SSPE (solução de água em pH 7.4 que contém 20 x SSPE: NaCl a 2,97 10 mol/L, NaH2PO4-H2O a 0,2 mol/L, EDTA (etileno diamino tetraacetato) a

0,025 mol/L), 5 x solução liquida de denhart (solvente água para 100 x solução de denhart: 1 g de ficoll (feito por Pharmacia Co., Ltd), 1 g de pirolidona de polivinil (PVP-360, feito pela Sigma Co. Ltd) e I g de BSA fração V (albumina bovina sérica: Sigma Co., Ltd) são dissolvidas em 50 15 ml de água) e 0,5 de SDS ou uma condição que apresente a mesma função em hibridização de um ácido nucléico. A intenção é que sob tais condições, um DNA compreendida de uma seqüência de base que hibridiza com algum DNA apresenta, pelo menos, mais ou igual a 70% de homologia com aquele DNA e, por exemplo, em um DNA composto por 2166 bases, 20 as seqüências de base maiores ou iguais a 1527 estão em comum.

Como um ácido nucléico pode ser utilizado como o desumidificador (tal uso é denominado “uso da presente invenção”).

Prefere-se que o desumidificador da presente invenção deve conter mais um ácido nucléico que codifique uma proteína exceto uma HSP. Isto é, devido à invenção ser feita para melhorar a falha em um vegetal geneticamente modificado, espera-se que o desumidificador seja utilizado quando um ácido nucléico que codifique uma proteína exceto um HSP seja simultaneamente introduzido em um genoma. Exemplos de como uma “proteína exceto uma HSP” são um gene semelhante a uma enzima que promova a síntese fotônica (por exemplo carboxicinase ácida 5 fosfoenolpirúvica (consulte Publicação Aberta do Pedido de Patente Japonês no. H10-248419)), uma seqüência antisense que resulta na esterilidade (Bgpl (Publicação Internacional W09413809), MS2 (U.S. Patent No. 5932784), ou semelhantes), um gene que controla o tamanho de um vegetal (BON1 (Publicação Aberta do Pedido de Patente dos EUA No. 10 2002/0194639), BAPl Publicação Aberta do Pedido de Patente dos EUA No. 2002/0194639, ou semelhantes), um gene relacionado com a extensão de uma raiz (gene do fator de transporte da prolina (ProT: por exemplo, Plant Cell Physiol., 42 (11), de 1282 a 1289 (2001)), uma frutose 1.6 aldolase bifosfato (Patente dos EUA No. 6441277), um gene que promove 15 o crescimento do corpo do vegetal (gene da ciclina (Patente dos EUA no. 6166293) e um gene para uma proteína que melhora a estabilidade de um RNA (mRNA) (gene do HVDl (Publicação Aberta do Pedido de Patente Não Examinada Japonesa no. 2002-34576) e todos podem ser usados. Como uma “proteína exceto uma HSP” pode ser constituída de tal maneira 20 para desenvolver uma proteína de fusão com uma HSP ou pode ser constituída de tal maneira para desenvolver uma outra proteína.

O ácido nucléico citado anteriormente contido no desumidificador da presente invenção pode estar presente como um ácido nucléico monolítico, mas para melhorar a estabilidade do ácido nucléico, prefere-se que o ácido nucléico deva estar presente em um estado no qual o ácido nucléico é introduzido em um vetor recombinante. Exemplos de como um vetor recombinante é o vetor binário pBI121 (descrito em Methods Enzymol., 118, 6270640 (1986)), pCIA MBIA e pE21-Q-MCS, além de vetores

r

recombinantes convencionais que podem ser usados. E possível para o técnico no assunto selecionar de maneira adequada e usar um vetor recombinante em consideração da eficiência da introdução para o genoma de um vegetal que é promovido para crescer com o desumidificador da presente invenção.

No caso no qual um ácido nucléico é introduzido em um vetor recombinante, prefere-se que um promotor e um finalizador, cuja função 10 dentro das respectivas células vegetais alvo deve ser inseridas a montante e a jusante do ácido nucléico a ser inserido e, prefere-se inserir um DNA adequado como um marcador selecionado, o qual é eficaz quando um vegetal transformado é obtido.

Um exemplo do promotor é um promotor 35 S de um vírus mosaico de couve-flor. Um exemplo de finalizador é um finalizador que se origina da enzima de síntese de opalina (NOS). Mais exemplos do marcador selecionado são um gene resistente a camamicina (ΝΡΤΠ) e um gene resistente a higromicina (gene do HPT).

O desumidificador da presente invenção está disponível em várias formas, como líquido, pó e pasta, mas outras formas podem ser empregadas contanto que a estabilidade do ácido nucléico contido no desumidificador da invenção não seja interrompida e o desumidificador pode ser usado como no exemplo discutido a seguir.

2. Método de Supressão da Transpiração da Presente Invenção O método da supressão da transpiração da invenção introduz um ácido nucléico que codifica uma HSP no genoma de uma célula vegetal e cultiva a célula vegetal que contém o genoma no qual o ácido nucléico é introduzido.

A “HPS” e o “ácido nucléico” do método de supressão da transpiração são as mesmas daquelas explicadas “1. Desumidificador da Presente Invenção”.

A “célula vegetal” do método de supressão da transpiração pode ser uma célula de uma angiosperma ou gimnosperma, pode ser uma célula de uma dicotiledônea ou monocotiledônea e, ainda, pode ser de uma gramínea ou de uma lenhosa. Um exemplo de gramínea é um vegetal de grão de 10 cereal, um gramado ou uma verdura e um exemplo de uma lenhosa é uma arvore de folhas grandes perene ou uma árvore caducifoliada.

Um exemplo de gramado é um gramado gramíneo [por exemplo, subfamília eragrostis (por exemplo grupo de gramínea ou grupo de grama sempre-verde), uma subfamília festuca (por exemplo, grama agróstis, grupo 15 da grama azul, grupo da azévem) ou subfamília do painço], uma grama da família cyperaceae ou da família do crisântemo. Um exemplo de vegetal de grão cereal é uma é um vegetal gramíneo, por exemplo, arroz, centeio, cevada, trigo, painço, sorgo comum, cana-de-açúcar, milho /milho para pipoca ou aveia. Ainda, um exemplo de verdura ou legume é um vegetal 20 solanaceae (por exemplo, tabaco, berinjela, batata, tomate ou pimenta vermelha), um vegetal chenopodiáceas (por exemplo, espinafre, beterraba), um vegetal papilionáceos (por exemplo, soja, feijão azuki, ervilha (pisum sativum), um vegetal brassicáceos (por exemplo, canola, rúcula) ou um vegetal pedaliaceaeous (por exemplo, gergelim).

Um exemplo da árvore com folhas largas perenes é o eucalipto, a acácia ou o café. Um exemplo de árvore de folhas largas decíduas é o álamo, o carvalho, salgueiro, um vidoeiro branco japonês ou uma quercus serrata.

O método de promoção da presente invenção também é útil para os vegetais geralmente conhecidos como plantas caseiras (por exemplo, 5 vegetais agavaceae, araceae, palmaceae, araliaceae, moraceae, asclepiadaceae, acanthaceae, apocynaceae, marantaceae, cupressaceae, rutaceae, Bombacaceae, pandanaceae, musaceae, euphorbiaceae, oleaceae, commelinaceae, bromeliaceae, crassulaceae, família da dracaena, e salicaceae e pteridófitas).

Em tais células vegetais, vegetais gramíneas, vegetais chenopodiaceous, vegetais leguminosae, vegetais brassicaceous, eucaliptos, acácia e choupo são preferidos e, em especial, as células de cana-de-açúcar, beterraba de açúcar, soja, canola, gergelim, eucalipto e choupo são mais preferidos, mas a presente invenção não se limita a tais vegetais contanto 15 que o crescimento de um vegetal seja promovido.

Adotado como um método de introdução de uma célula nucléica no genoma de como uma célula vegetal é um método que causa que um tecido vegetal seja infectado com uma agrobactéria que apresenta um vetor que contem, por exemplo, um gene alvo usando um vetor bem conhecido (por 20 exemplo, pBI121), um método do processo de polietileno glicol, um método de eletropermeabilização um processo de pulso elétrico sobre um protoplasto ou um método de bombardeamento de partícula de sobreposição do vetor sobre uma partícula de ouro e da introdução dele em um tecido vegetal.

Uma célula vegetal que foi submetida a uma transformação genética pelo método citado acima é cultivada em um meio de cultura adequado (por exemplo,Murashige and Skoog media, Plant Physiol., 15, 473 to 497 (1962)) e é reproduzido para obter um vegetal transformado. Neste momento, se um agente antibiótico adequado (por exemplo, canamicina) que corresponde a um marcador selecionado é adicionado a um meio de cultura, é possível selecionar um corpo transformado.

Por exemplo, no caso no qual um DNA que codifica uma proteína DnaK ou uma proteína HSP70 é introduzida em uma gramínea (por exemplo grama de folhas rugosas ou agróstis), o método da presente invenção pode ser realizado através dos seguintes procedimentos.

A introdução completa do método do processo com polietileno glicol citado anteriormente pode ser realizado, por exemplo, como a seguir. De 1 a 100 μ$'ηιΙ. do vetor e de IO5 a IO6 unidades/ml de protoplasto são suspensos em um liquido de um fluido tampão que contém de 0,4 a 0,6 mol/L de mannitol como um agente de ajuste de pressão osmótica. Uma 15 solução de polietileno glicol é adicionada a isto de uma forma que a concentração final se tome de 10 a 30%, o liquido é deixado em temperatura ambiente por 5 a 30 minutos e, então, o polietileno glicol é diluído, através disto é introduzido um gene no protoplasto.

A introdução completa do método de eletropermeabilização citado 20 anteriormente pode ser realizado, por exemplo, como a seguir. De 1 a 100 μg/mL do vetor e de IO5 a IO6 unidades/ml de protoplasto são suspensos em um líquido de um tampão, ou semelhante, que contenha de 0,4 a 0,6 mol/L de mannitol como um agente de ajuste de pressão osmótica. Os pulsos elétricos que apresentam um campo magnético de 300 a 600 V/cm e 25 um tempo constante de 10 a 50 ms são aplicados ao Uquido para aplicar pulsos elétricos, através disto introduzindo o gene no protoplasto. A introdução completa do método de bombardeamento de partícula citado anteriormente pode ser realizado, por exemplo, como a seguir. Uma aglomeração de células (de 0,3 a 0,5 mL aproximadamente) é uniformemente espalhado e adsorvido sobre um papel filtro. As partículas 5 de metal que apresentam uma diâmetro de 0,1 a 5 μιη no qual o vetor é adsorvido usando cloreto de cálcio e espennidina são preparados, colididos e introduzidos no conglomerado de células por um bombardeamento de partícula em uma pressão do ar de 800 a 1500 PSI ou uma pressão quando explosivos são ativados. Tungstênio ou ouro podem ser usados como as 10 partículas de metal.

O protoplasma que foi submetido ao processo de introdução de gene é cultivado em um meio de cultura de tecido vegetal líquido ou sólido, por exemplo meio de cultura N6, um meio de cultura R2, um meio de cultura K8p ou um meio AA, no qual o materiais de ajuste de cultivo da planta, tal 15 como uma auxina como ácido 2,4-diclorofenoxiacético ou ácido acético naftaleno, ou uma citoquinina como a cinetina é adicionada. O cultivo é realizado em local escuro e prefere-e que a temperatura deve estar de 20 a 30 0C. Uma aglomeração de célula é formada a partir do protoplasma no qual o gene é introduzido pelo cultivo.

A aglomeração de células em um estado de diferenciação depois do processo de introdução de gene é cultivada em um meio de cultura de tecido vegetal líquido ou sólido, por exemplo, meio de cultura N6, um meio de cultura R2, um meio de cultura K8p ou um meio AA, no qual o materiais de ajuste de cultivo da planta, tal como uma auxina como ácido 25 2,4-diclorofenoxiacético ou ácido acético naftaleno, ou uma citoquinina como a cinetina é adicionada. O cultivo é realizado em local escuro e prefere-e que a temperatura deve estar de 20 a 30 °C. Além disso, o cultivo é continuado com cultivo contínuo em meio de cultura fresca em um intervalo de 14 a 40 dias. Prefere-se que o cultivo seja realizado em local escuro. Depois de 24 a 48 dias do início do cultivo, um embrião adventício ou um broto adventício pode ser obtido.

O embrião adventício ou o broto adventício é cultivado em um meio de cultura de reprodução de corpo vegetal, como um meio de cultura N6, um meio de cultura R2, um meio de cultura MS ou um meio de cultura LS no qual o material de ajuste de cultivo de vegetal, tal como uma auxina 10 como ácido 2,4-diclorofenoxiacético ou ácido acético naftaleno ou uma citocina como a cinetina seja adicionados. O cultivo é continuado com cultivo contínuo em meio de cultura fresca em um intervalo de 14 a 40 dias. Prefere-se que o cultivo seja realizado em local escuro. Depois de 24 a 48 dias do início do cultivo, um corpo vegetal transformado pode ser obtido.

O corpo vegetal obtido desta maneira apresenta um efeito de supressão da transpiração quando um nível de cultivo é comparado através do seguinte método com um corpo vegetal cultivado sem o método de supressão da transpiração da presente invenção sob a condição de cultivo normal.

O efeito do método de supressão da transpiração da invenção pode ser verificado através, por exemplo, do seguinte método.

Que é um método de cultivo vegetal com alvo negativa no qual um vetor que não contém uma HSP é incorporado e um vegetal submetido à supressão da transpiração e de medida das absorções de água dos vegetais depois do mesmo período de cultivo, ou um método de obtenção do corpo completo vegetal ou de parte dele para medir a quantidade de emissão de vapor para o ar, e de comparação dos resultados pode ser considerado.

De acordo com o método de supressão da transpiração da presente invenção, quando o controle negativo e a amostra são provocados a uma síntese fotônica sob as mesmas condições, a atividade de síntese fotônica 5 aumenta mais ou igual a 10% (preferencialmente, maior ou igual a 15%, e mais preferencialmente, maior ou igual a 20%) e o aumento do efeito da transpiração é suprimido a menos ou igual a 10% (preferencialmente, menos ou igual a 5%, e mais preferencialmente, menos ou igual a 3%).

Em relação a tal medida, a medição precisa se toma possível através do método explicado no exemplo.

3. Como Usar o Desumidificador da Presente Invenção?

O desumidificador da presente invenção pode ser usado pela introdução dele no genoma de uma célula vegetal e pelo cultivo ou edificação do corpo vegetal que contém o genoma que foi submetido à introdução.

A introdução do desumidificador da presente invenção no genoma de uma célula vegetal pode ser simplesmente realizada através de um método bem conhecido. Exemplos de tal método são o método que provoca no tecido vegetal a infecção com agrobatéria, o método do processo de 20 polietileno glicol, método de eletropermeabilização e o método de bombardeamento de partícula, todos os quais são explicados em “2. Método de Supressão da Transpiração da Presente Invenção”. Todos aqueles métodos usam um vetor recombinante.

Em um caso no qual uma HSP, na qual um ácido nucléico deve ser codificado, é inserido em um vetor recombinante é usado como o desumidificador da presente invenção, um vetor recombinante no qual o ácido nucléico é incorporado ou um vetor preparado com um vegetal submetido a uma promoção de crescimento (a qual pode ser obtida pelo corte ou separação de um "ácido nucléico que codifique uma HSP” através de um método bem conhecido e pela introdução em um vetor recombinante 5 selecionado de acordo com um vegetal submetido a uma promoção do crescimento) pode ser usado.

Um vegetal usado para o desumidificador da presente invenção é um vegetal descrito em “2. Método de Supressão da Transpiração da Presente Invenção”.

A introdução do vetor recombinante em uma célula vegetal pode ser verificada usando um sistema de expressão como um gene marcador incorporado em um vetor recombinante antes (por exemplo, gene resistente a canamicina (NPTII), gene resistente à higromicina (gene HPT)). Por exemplo, no caso no qual um gene resistente a agente antibacteriano como

um NPTII é usado como gene marcador, uma célula vegetal é cultivada em um meio de cultura que contem um agente antibacteriano que corresponde ao gene resistente depois da recombinação, e uma célula vegetal deve ser cultivada no meio de cultura é selecionado, através disto obtendo-se uma linhagem na qual o gene está introduzido no genoma.

Aqueles técnicos no assunto podem cultivar a linhagem selecionada sob as condições adequadas.

Exemplo

A presente invenção será explicada em mais detalhes através de exemplos.

Exemplo de Medida 1:

1. Extração de Açúcar e Amido A extração de um açúcar foi realizada através do método de Rufity et al (Rufty, T.W. e Huber, S.C. 1983, Plant Physiol. 72, de 474 a 480).

O fracionamento do açúcar foi extraído pela redução de uma folha que apresentava peso fresco (0,2 g) a pó com nitrogênio líquido e ebulição com 5 5 mL de 80% (v/v) de etanol durante uma hora em temperatura de 100°C. Foi submetido à centrifugação durante cinco minutos em 3000 x g e um sobrenadante foi adquirido. Ainda, um processo de adição de 2,5 mL de 80% (v/v) de etanol ao resíduo e suspensão desses, centrifugação deles durante cinco minutos a 3000 x g para obter um sobrenadante foi repetido 10 duas vezes. O fracionamento do açúcar com o etanol a 80% (v/v) continha sacarose, hexose, pentose e oligossacarídeo solúvel.

Com relação à extração do fracionamento do amido, 1 mL de hidreto de potássio a 0,2 mol/L foi adicionado ao depósito, foi processado durante uma hora em uma temperatura de 100°C e deacidifícado pela adição de 0,2 15 mL de tampão de ácido acético a 1 mol/L (pH 5.5). Ainda, esses foram digeridos durante 16 horas em uma temperatura de 37°C com 10 mL de amino glicosidase (originário do Bacillus subtilis: feito por Wako Pure Chemical Industries, Ltd, 35 U/mL em tampão de ácido acético a 50 mmol/L, pH 5.5). O açúcar solubilizado foi obtido como um fracionamento 20 do amido.

2. Quantificação do Açúcar

A quantificação de açúcar foi realizada através do método de antrona (Roe, J. H. 1955, J. Biol. Chem. 212: de 335 a 343). De 20 a 100 μΐ de líquido de extração de açúcar obtido em 1. foi adicionado a 1 mL de reagente de teste de antrona (0.05% de antrona em 66% de H2SO4) e provocou a reação durante quinze minutos em uma temperatura de IOO0C. Posteriormente, a absorbância de 620 nm foi medida com referência à glicose.

Exemplo de Medida 2: Medida da Atividade de Síntese Fotônica

Com relação à fixação do dióxido de carbono e a velocidade da transpiração, o sistema de fotossíntese HCM-1000 (Heinz Walz GmbH, Alemanha) foi usado sob condições onde o CO2 era de 350 pp, a temperatura era de 25°C e a umidade era de 60%. A medida foi realizada em um período entre 11 da manhã e 1 da tarde (13 horas).

Exemplo 1: Produção de Desumidificador da Presente Invenção Uma porção de Xbal/BamHI que contém um gene DnaK (isto é, uma porção de DNA obtida por digestão com enzima restritiva XbaI e BamHI) foi cortado do plasmídeo pEADKl que apresenra um gene DnaK de aphanothece halophytica [Plant Mol. Biol., 35, de 763 a 775 (1997)], e foi introduzido no sítio de reconhecimento Xbal/BamHI de um vetor binário pBI121. Através desta operação, o pBI121-ADK no qual o gene DnaK de aphanothece halophytica foi introduzido entre o promotor 35S de um virus mosaico de couve-flor em um vetor binário e um finalizador que se originou da enzima de síntese de xenopalina. Este plasmídeo pBI121-ADK apresentava um gene resistente a canamicina (ΝΟΤΠ) que se origina de um vetor binário pBI121 como um marcador selecionado.

O pBI121-ADK obtido foi usado como um desumidificador 1 da presente invenção para o produto liofílizado.

O pBI121-ADK pode ser usado para o desumidificador da presente invenção com ampla aplicação para um vegetal gramíneo, como arroz ou trigo, vegetal solenáceo, como o tabaco, grama semelhante a grama-esmeralda, e outros vários vegetais (incluindo plantas domésticas). Um desumidificador 2 da presente invenção pode ser obtido pela ligação de um gene HVDl, ligado ao terminal de aderência do XabI, à montante de um gene DnaK antes da inserto no pBI121 e congelamento seco do pBI121-ADKHD obtido pela introdução ao pB121. Além disso, 5 através de método semelhante, um desumidificador 3 da presente invenção que usa um gene ProT pode ser obtido.

Pelo mesmo sinal, o desumidificador 2 da presente invenção que contem o pBI121-SH no qual uma pequena HSP (sHSP) que se originou de uma cianobactéria obtida de Kazsa DNA Res. Inst., é incorporada e o desumidificador 3 da presente invenção que contém pBI121-H6 no qual o HSP60 está incorporado pode ser preparado.

Exemplo 2: Uso do Desumidificador da Presente Invenção em Arroz

O desumidificador 1 da presente invenção obtido através do exemplo 1 foi mantido em uma agrobactéria da linhagem tumefaciens EHAlOl através do método de eletropermeablização. Neste momento, pCAMBIA [[Nucleic Acid Res., 12, de 8711 a 8721 (1984)] foi usado como um vetor binário. Posteriormente, o processo de transformação genética foi realizado em um arroz (calo de embrião adventício que se originou de um embrião de uma semente de oryza sativa L. Notohikari) usando a agrobactéria tumefaciens que continha o desumidificador da presente invenção. Foi cultivada em um meio de ágar de Murashige e Skoog [Plant Physiol., 15, de 473 a 497 (1962)] que continha 3% de sacarose e 50 μg/ml de higromicina em um ambiente biologicamente limpo e duzentos e cinqüenta plantas foram obtidas. Quinze tipos de transfectantes (FO) independentes foram selecionados daquelas plantas e as sementes delas foram coletadas. Entre os quinze tipos de Fl, quatro tipos daquelas que apresentavam uma biologicamente limpo e duzentos e cinqüenta plantas foram obtidas. Quinze tipos de transfectantes (FO) independentes foram selecionados daquelas plantas e as sementes delas foram coletadas. Entre os quinze tipos de Fl, quatro tipos daquelas que apresentavam uma grande quantidade de 5 expressão de mRNA de DnaK foram selecionadas e as sementes delas foram coletadas. Os quatro tipos de transfectantes (F2) essencialmente tinham o mesmo fenótipo.

Este tabaco e um tabaco (tabaco selvagem) nem usar o desumidificador 1 da presente invenção foram comparados, para que o efeito da supressão da transpiração do tabaco pudesse ser verificado.

Exemplo 4: Uso do Desumidificador da Presente Invenção para Grama-esmeralda

O desumidificador 1 da presente invenção preparado através do exemplo 1 foi usado para o protoplasto de uma grama-esmeralda (zoysia 15 japonica) e a grama-esmeralda que se apresentava submetida a tal processo foi cultivada. Essa grama foi comparada com a grama-esmeralda (grama-esmeralda selvagem) sem o uso do desumidificador 1 da presente invenção, para que o efeito da supressão da transpiração da grama-esmeralda pudesse ser verificado.

Exemplo 5: Uso do Desumidificador da Presente Invenção para Agróstis

O protoplasto de um agróstis crespo (agrostis stolonifera) foi processado com o desumidificador 2 da presente invenção obtido através do exemplo 1 e este agróstis crespo foi cultivado. O crescimento deste agróstis crespo foi comparado com o crescimento do agróstis crespo no 25 qual a expressão do vetor pBI121, no qual apenas um gene de HVDl foi incorporado, introduzido, para que o efeito da supressão da transpiração do grande quantidade de expressão de mRNA de DnaK foram selecionadas e as sementes delas foram coletadas. Os quatro tipos de transfectantes (F2) essencialmente tinham o mesmo fenótipo. No presente pedido, um daqueles tipos foi usado para análise.

Uma planta de arroz no qual apenas pBI121 foi introduzido e o qual foi cultivado durante cinco semanas foram usados para comparação (consulte FIG. 1).

Como um resultado, tomou-se evidente que o arroz que usou o desumidificador 1 da presente invenção aumentou a síntese fotônica em mais ou igual a 20% em comparação com o controle comparativo, quando a atividade da síntese fotônica foi verificada de acordo com a medida do exemplo.

Por outro lado, quando o efeito da transpiração foi medido de acordo com a medida do exemplo, o aumento foi de menos de 3% para ambos os casos (consulte a FIG. 2).

Exemplo 3: Uso do Desumidificador da Presente Invenção para Tabaco

O desumidificador 1 da presente invenção obtido através do exemplo 1 foi mantido em uma agrobactéria da linhagem tumefaciens LBA4404 através do método de eletropermeablização. Neste momento, pCAMBIA [[Nucleic Acid Res., 12, de 8711 a 8721 (1984)] foi usado como um vetor binário.

Posteriormente, uma porção de folha circular cortada da folha do tabaco (Nicotiana tabacum PetitHavaba SRl) foi processada usando a agrobactéria tumefaciens que suportava o desumidificador 1 da presente invenção. Foi cultivada em um meio de ágar de Murashige e Skoog que continha 3 % de sacarose e 50 μ©^ηι1 de canamicina em um ambiente desumidificador 2 da presente invenção pudesse ser verificado.

Exemplo 6: Uso do Desumidificador da Presente Invenção para Choupo O desumidificador 2 da presente invenção obtido através do exemplo 1 foi mantido em uma agrobactéria da linhagem tumefaciens LBA4404 através do método de eletropenneablização. Neste momento, ρΕ2113-Ω[PsJucleic Acid Res., 12 , de 8711 a 8721 (1984)] foi usado como um vetor binário.

Posteriormente, um eixo embrionário cortado da muda de um choupo (Populus tremula) em uma condição biologicamente limpa foi encharcado com a solução de agrobactéria tumefaciens que mantinha o desumidificador 2 da presente invenção durante sete minutos. Posteriormente, o eixo embrionário foi colocado em um meio de cultura LS e cultivado durante dois dias em local escuro. O eixo embrionário foi, então, removido e cultivado em um meio CIM (meio de indução de calo: meio de cultura LS que continha 0,1 μιηοΙ/L de 4PPU, 50 pg/mL de canamicina, 300 pg/ml de carbenicilina e 0,3% de Iito gel). Quando um broto foi formado, a calha foi cortada, transferida para um meio RIM (meio de introdução de raiz: meio de cultura LS que continha 4 μιηοΙ/L de ácido indoleacético, 50 μg/ml de canamicina, 300 μg/ml de carbenicilina e 0,3% de Iito em gel) e foi cultivado. Quando a raiz se dividiu e a planta cresceu em alguma extensão, a planta foi submetida à aclimatação, transferida para um vaso e cultivada, para que os corpos vegetais fossem obtidos. Sete tipos de transfectantes (FO) independentes foram selecionados daqueles corpos vegetais e as sementes delas foram coletadas. Entre os cinco tipos de Fl, quatro tipos de transfectantes que apresentavam uma grande quantidade de expressão de mRNA de DnaK foram selecionados. Os transfectantes (F2) obtidos essencialmente tinham o mesmo fenótipo.

Este choupo foi comparado com um choupo (choupo selvagem) sem uso de desumidificador 2 da presente invenção, para que o efeito da supressão da transpiração do choupo pudesse ser verificado.

Claims (12)

1. Desumidificador, caracterizado pelo fato de conter um ácido nucléico como um ingrediente ativo que codifica por uma proteína heat shock.

2. Desumidificador, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato da proteína heat shock ser uma proteína DnaK ou uma proteína HSP70.

3. Desumidificador, de acordo com a reivindicação 2. caracterizado pelo fato da proteína DnaK ser uma proteína DnaK de uma cianobactéria tolerante ao sal.

4. Desumidificador, caracterizado pelo fato de conter um ácido nucléico como um ingrediente ativo que codifica uma proteína, contendo as seguintes seqüências de aminoácido descritas de (a) a (d). (a) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 1 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2. (b) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 116 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2. (c) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 164 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2. (d) uma seqüência de aminoácido que apresenta substituição, deleção, inserção ou transição de um ou mais aminoácidos nas seqüências de (a) a (c).

5. Desumidificador, de acordo com qualquer uma das reivindicações de I a 4, caracterizado pelo fato de conter um ácido nucléico que codifica pelo menos uma proteína selecionada de um grupo de uma proteína/enzima que relaciona a um controle de síntese fotônica, uma proteína/enzima que controle o tamanho do corpo da planta, uma proteína/enzima que promova a extensão de uma raiz, uma proteína/enzima que promova o crescimento do corpo vegetal, uma proteína/enzima que melhore a estabilidade de um RNA ou de um ácido nucléico compreendido de uma seqüência antisense considerada.

6. Desumidificador, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizado pelo fato do ácido nucléico ser um ácido desoxirribonucléico.

7. Método do uso de um ácido nucléico, caracterizado pelo fato de codificar uma proteína heat shock como um desumidificador.

8. Método do uso de um ácido nucléico, caracterizado pelo fato de codificar uma proteína DnaK ou uma proteína HSP70 como um desumidificador.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato da proteína DnaK ser uma proteína DnaK de uma cianobactéria tolerante ao sal.

10. Método de uso de um ácido nucléico, caracterizado pelo fato de codificar uma proteína que contém as seguintes seqüências de aminoácidos descritas de (a) a (d), como um desumidificador. (a) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 1 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2. (b) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 116 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2. (c) uma seqüência de aminoácido que apresenta os aminoácidos de número de 164 a 721 entre as seqüências de aminoácidos descritas na seqüência de número 2. (d) uma seqüência de aminoácido que apresenta substituição, deleção, inserção ou transição de um ou mais aminoácidos nas seqüências de (a) a (c).

11. Método de uso do desumidificador, de acordo com quaisquer das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo fato de tornar a síntese fotônica mais eficiente.

12. Método de supressão da transpiração para uma planta, caracterizado pelo fato de compreender: a introdução de um ácido nucléico, que codifique uma proteína heat shock em uma genoma de uma célula vegetal; e o cultivo de uma célula vegetal que contenha o genoma no qual o ácido nucléico é introduzido.