BRPI0716270A2

BRPI0716270A2 - bandagem de ferida seca e sistema de distribuiÇço de fÁrmaco

Info

Publication number: BRPI0716270A2
Application number: BRPI0716270-7A
Authority: BR
Inventors: Clyde Raymond Goodheart
Original assignee: Rexaderm Inc
Priority date: 2006-08-28
Filing date: 2007-08-28
Publication date: 2013-08-13
Also published as: EP2059206B8; WO2008027904A3; US20090325861A1; EP2059206A4; EP2489338B1; WO2008027904A2; US8377468B2; EP2059206B1; EP2059206A2; EP2489338A1

Abstract

BANDAGEM DE FERIDA SECA E SISTEMA DE DISTRIBUIÇçO DE FÁRMACO Bandagens secas incorporam sistemas de distribuição de fármacos para agentes anti-infecciosos, fatores de crescimento, fibronectina ou outras substâncias para aumentar a cicatrização tecidual. Uma composição farmacêutica inclui hialuronato, polivinilpirrolidona (PVP), maltodextrina e hidroxietilcelulose e glicerina na forma de um material tipo wafer membranoso depois de ser liofilizada.

Description

Relatório da Patente de Invenção para: uBANDAGEM DE FERIDA SECA E SISTEMA DE DISTRIBUIÇÃO DE FÁRMACOS".

CAMPO DE INVENÇÃO

Esta invenção se refere a bandagens secas que incorporam sistemas de distribuição de fármacos para agentes anti-infecciosos, fatores de crescimento, fibronectina ou outras substâncias para intensificar a cura tecidual.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Certos tipos de feridas são difíceis de curar, por

exemplo, úlceras na perna e pé de pacientes diabéticos, úlceras de estase venosa, úlceras nervosas e queimaduras severas. Bandagens incorporando agentes para auxiliar na cura tais como, fibronectinas, ou para controlar infecções, tais como, antibióticos e antimicrobianos, é uma abordagem de uso na dificuldade de cura de feridas. Entretanto, o armazenamento dessas "bandagens úmidas" geralmente requer agentes conservantes, os quais não são bons para colocar em feridas. RESUMO DA INVENÇÃO

Uma composição farmacêutica inclui hialuronato, polivinilpirrolidona (PVP), maltodextrina,

hidroxietilcelulose e glicerina na forma de um material tipo wafer membranoso depois de ser liofilizada (Iiofilizada) (crio-dessecação).

Outros ingredientes opcionalmente incluem fibronectina celular humana (cFN), fatores de crescimento, agentes microbianos e um sistema tamponante.

Uma bandagem para feridas seca incluindo a composição

farmacêutica é utilizada para o tratamento de abrasões, úlceras, queimaduras e feridas traumáticas e cirúrgicas.

A bandagem pode ser na forma de uma tira adesiva.

A bandagem é utilizada para cobrir feridas orais, mucosite ou estomatite resultante de quimioterapia, terapia de radiação, suportes dentários, úlceras aftosas ou terapia de células tronco, para úlceras crônicas, tais como úlceras diabéticas, úlceras nervosas e úlceras de estase venosa.

Estomatite, ou outras feridas que poderiam se beneficiar das propriedades de cicatrização da fibronectina, se beneficia do uso de bandagens para distribuir fibronectina. A incidência de adesões pós- operatórias é reduzida.

Um método para distribuir agentes, tais como fibronectina a uma ferida inclui as etapas de:

(a) obter uma solução concentrada de um agente, tal como fibronectina;

(b) combinar o agente com a bandagem de ferida seca; e

(c) aplicar a bandagem na ferida. Uma composição adequada é feita, antes da Iiofilização, a partir de cerca de 0,04% até cerca de 15% em peso/volume de ácido hialurônico, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, com um peso molecular de cerca de 500.000 Daltons até cerca de 2,2 milhões de Daltons; de cerca de 1% até cerca de 5% em peso/volume de uma polivinilpirrolidona K60 a KlOO.

Outros ingredientes opcionalmente incluem um agente antibacteriano, um agente desinfetante, um agente antifúngico, um agente antiviral, analgésico, antiinflamatório, emoliente ou um anestésico local.

Uma composição usada para tratar ou prevenir inflamação em um paciente inclui a administração a um paciente necessitado da mesma de uma quantidade eficaz de uma composição feita, antes da Iiofilização, (i) de cerca de 0,01 até cerca de 5 por cento em peso de ácido hialurônico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um peso molecular de cerca de 500.000 até cerca de 2,2 milhões de Daltons; (ii) de cerca de 0,04% até cerca de 15% em peso/volume de polivinilpirrolidona K60 a K100; e (iii) de cerca de 86 a cerca de 98% de água.

Uma composição usada para tratar ou prevenir inflamação na cavidade oral de um paciente inclui a administração à cavidade oral de um paciente necessitado da mesma de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo, antes da Iiofilização, (i) de cerca de 0,01 até cerca de 5 por cento em peso de ácido hialurônico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um peso molecular de cerca de 500.000 até cerca de 2,2 milhões de Daltons; (ii) de cerca de 0,04% até cerca de 15% em peso de polivinilpirrolidona K60 a K100;

Uma composição usada para tratar ou prevenir mucosite em um paciente inclui uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo, antes da Iiofilização, (i) de cerca de 0,01 até cerca de 5 por cento em peso de ácido hialurônico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um peso molecular de cerca de 500.000 até cerca de 2,2 milhões de Daltons; (ii) de cerca de 0,04% até cerca de 15% em peso de polivinilpirrolidona K60 a K100;

Uma composição usada para tratar dor resultante de cirurgia oral em um paciente inclui uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo, antes da Iiofilização, (i) de cerca de 0,01 até cerca de 5 por cento em peso de ácido hialurônico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um peso molecular de cerca de 500.000 Daltons até cerca de 2,2 milhões de Daltons; (ii) de cerca de 0,04% até cerca de 15% em peso de polivinilpirrolidona K60 a K100. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS FIG 1-6 são uma série de 6 figuras tomadas seqüencialmente depois do tratamento de uma úlcera da perna, a qual persistiu por mais de 6 meses sem cicatrização, usando a bandagem seca descrita aqui que continha fibronectina celular humana (cFN) . A FIG. 1 é a aparência da lesão (cerca de 12 - 15 mm) depois da ferida ter sido tratada com Bactobran por duas semanas. A FIG. 2 foi tirada depois de dois tratamentos de 48 horas cada com a bandagem seca. A FIG. 3 mostra a bandagem de cFN aplicada à ferida. A FIG. 4 foi tirada depois de dez dias de tratamento, a figura FIG. 5 depois de duas semanas e a FIG. 6 depois de aproximadamente um mês. A bandagem de cFN foi fixada ou com uma esponja de 4x4 e fita ou com um BAND-AID™ (bandagem adesiva).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Composições farmacêuticas aqui descritas incluem o sal de sódio do ácido hialurônico (também conhecido como hialuronato de sódio ou hialuronano), polivinilpirrolidona (PVP), hidroxietilcelulose, maltodextrina, glicerina e um sistema tamponante, as quais várias outras substâncias e medicamentos podem ser adicionados dependendo do uso tencionado da composição. Por exemplo, para uso intra-oral, um flavorizante e adoçante adequado pode ser adicionado ■i 6

para intensificar o sabor. Entretanto, conservantes não são necessários, uma vez que a composição é liofilizada. Os ingredientes das composições foram aprovados pelo Food and Drug Administration Americano (FDA) para uso em alimentos ou em outros usos farmacêuticos.

As composições farmacêuticas proporcionam bandagens para feridas secas, sistemas de distribuição de fármacos para administrar medicamentos ou outras substâncias para ajudar na cicatrização de feridas, ou para administrar medicações em áreas limitadas do corpo. As composições, nas quais material adicional é misturado antes da liofilização para formar uma membrana ou material tipo wafer, podem ser preparadas em uma variedade de espessuras com uma espessura especifica apropriada para um determinado uso pretendido. A espessura pode ser de menos de um milímetro até um centímetro, com a espessura preferida para a maioria dos propósitos de cerca de 2 milímetros.

A formulação também pode ser feita em configurações específicas, pelo seu congelamento em um molde de forma apropriada e tamanho antes da liofilização. Por exemplo, ela pode ser feita em uma forma de um plugue para se ajustar em uma cavidade do dente após extração, ou em uma peça curvada na forma de uma unha ou unha de dedo do pé, para ser aplicada à camada de pele abaixo da unha, depois J-

da extração da unha. Em outra forma, depois da Iiofilização, o material tipo wafer é facilmente triturado em um pó, cujo pó pode ser pulverizado na área a ser tratada, ou ele pode ser misturado com água ou outro liquido para reconstitui-lo em um material tipo pasta para aplicação na ferida.

Um material carreador para aplicação de fibronectina às feridas foi pensado para fazer uso da eficácia bem conhecida da fibronectina na cicatrização de feridas. Fibronectina é conhecida como sendo instável em solução, porém ela é estável por anos no estado liofilizado, e é difícil de incorporá-la em um líquido ou gel. Consequentemente, uma bandagem ou carreador foi pensado que pudesse conter fibronectina e que pudesse ser liofilizado. Depois da testagem de uma variedade de alternativas, foi descoberto que a composição aqui descrita atendia ao objetivo de proporcionar tal carreador. Surpreendentemente, foi também descoberto que a composição descrita poderia ser usada como uma bandagem para feridas e como um carreador ou sistema de distribuição de fármaco para uma variedade de outros materiais farmacêuticos que também estão envolvidos de várias formas no tratamento de feridas.

Uma composição farmacêutica é descrita que pode ser usada sem outros ingredientes ("básica"), ou ela pode incluir um ou mais dos ingredientes adicionais listados aqui. A composição farmacêutica básica é preparada através da dissolução em água purificada, tudo em temperatura ambiente com mistura continua dos ingredientes a seguir: ácido hialurônico ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, preferivelmente o sal de sódio (também conhecido como hialuronano) , com um peso molecular maior do que 500.000 Daltons, preferivelmente de 2,2 milhões de Daltons ou mais (o qual pode ser obtido de Lifecore Biomedical, Inc., Chaska, Minnesota, dentre outros fornecedores) de 0,01% a 5,0% p/v; maltodextrina (Aldrich Chemical número do catálogo 419672, equivalente de dextrose de 4,0 a 7,0) 0,5% a 5% p/v; PVP (polivinilpirrolidona) Fluka Chemical número de catálogo 81440; peso molecular de cerca de 360.000 Daltons, 0,04% a 15% p/v; e hidroxietilcelulose (Spectrum Chemicals número de catálogo H1236; 5.000 cps) 0,1% a 3% p/v; e glicerina (grau reagente de glicerina pode ser obtido a partir de qualquer uma das muitas companhias químicas fornecedoras). Uma composição farmacêutica consiste essencialmente dos seguintes ingredientes: 0,01 a cerca de 5 por cento em peso de ácido hialurônico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um peso molecular de cerca de 500.000 até cerca de 2,2 milhões de Daltons; (ii) de cerca de 0,04 até cerca de 15% em peso de uma polivinilpirrolidona K60 a KlOO.

Além dos ingredientes indicados, um sistema tampão é desejável para a maioria dos propósitos. Por exemplo, para a formulação básica a ser usada para feridas bucais, um pH de cerca de 7,4 (6,8 a 7,8) pode ser alcançado com um tampão fosfato, preferivelmente de dureza de 10 mM (5 mM a 50 mM), com 0,0312% p/v de fosfato monossódico monoidratado e 0,2075% p/v de fosfato dissódico heptaidratado. As fórmulas para calcular os tampões fosfato de outras durezas e outros valores de pH são prontamente disponíveis. Um pH similar poderia ser apropriado para formulações de matriz para serem usados no olho, no qual as lágrimas têm um pH de cerca de 7,4 a 7,5. Outros sistemas tampões, incluindo tampões orgânicos, podem ser usados ao invés dos sistemas citrato e fosfato.

Para composições de matrizes que são aplicadas na pele é prefer ível ter o pH da matriz como aproximadamente igual ao da pele, o qual em seres humanos o pH é cerca de 5,5. Um tampão citrato, preferivelmente de dureza 10 mM (5 mM a 50 mM) pode ser usado para obter esse pH, consistindo de 0,0506% p/v de ácido cítrico anidro e 0,2233% p/v de citrato de sódio diidratado. As fórmulas para calcular tampões citrato de outras dureza e outros valores de pH estão prontamente disponíveis. «

Outros ingredientes farmacêuticos ativos podem ser incorporados na mistura conforme desejado. Além disso, um ou mais dos ingredientes listados podem ser omitidos, para alcançar várias consistências da formulação para diferentes propósitos tencionados.

Depois de completada a mistura, por exemplo, a mistura é espalhada em um recipiente de fundo plano até uma profundidade de cerca de 2 mm e congelada. A profundidade da mistura pode ser aumentada ou diminuída, caso desejado, para formar um wafer de maior ou menor espessura, dependendo do uso proposto. Embora uma variedade de recipientes possa ser usada, poliestireno é preferido, uma vez que foi descoberto que a matriz libera mais prontamente da superfície do que outros plásticos ou de vidro. Os recipientes da mistura congelada são, a seguir, colocados em um liofilizador e secos diretamente do estado congelado. O material resultante depois da liofilização é uma membrana clara, fofa e branca de material tipo wafer, muito parecida com mata-borrão. Dependendo do uso proposto, a membrana pode ser comprimida por rotação para formar uma membrana fina, porém mais resistente.

Quando a composição é colocada em uma ferida, ela rapidamente absorve umidade e adere firmemente à superfície, formando uma cobertura protetora. Embora a bandagem seja aderente depois que ela absorve a umidade, opcionalmente ela pode ser revestida com fita ou fixada no local com gaze ou uma bandagem elástica. Antibióticos ou outros ingredientes farmacêuticos ativos incorporados no material são liberados na ferida. As composições ou bandagens farmacêuticas podem ser estéreis, por exemplo, pelo uso de ingredientes de filtração e por manuseio asséptico.

A seguir existe uma lista de um número de possíveis aplicações à composição. Essa lista de 20 exemplos é com o intuito de exemplificar a grande quantidade de usos do material, e não é tencionada a restringir os usos em potencial somente aos exemplos na lista.

Para lesões orais, incluindo úlceras aftosas, úlceras resultantes de dentaduras ou suportes dentários, ou úlceras ou estomatite resultantes de quimioterapia, radiação, terapias de células tronco ou outras causas, a membrana ou wafer é colocado na boca e deixado para dissolver e revestir a área afligida. A formulação também pode ser usada em uma forma líquida, pela mistura do material seco (tipo wafer ou pó) com água, e usada para tratar faringite, esofagite e gastrite, e pode ser administrada retalmente para tratar proctite, colite e condições similares. A membrana tipo wafer, na qual medicações de alívio, incluindo hidrocortisona, foram incorporadas, podem ser aplicadas externamente às hemorróidas.

Na cavidade abdominal, as composições podem ser usadas pós-operatoriamente (por exemplo, resseção intestinal, explorações e semelhantes) para reduzir o risco de adesões, reduzirem o risco de infecções, melhorar a cicatrização cirúrgica e ganhar outros efeitos terapêuticos, tais como sua ação antiinflamatória.

Usos oftálmicos incluem o tratamento da conjuntivite e queratite, e pós operativamente para quaisquer procedimentos envolvendo o olho anterior e, possivelmente, o posterior, seja como bandagens formes ou líquidas. Por exemplo, no evento de queratite traumática ou viral, a colocação de uma pequena peça de membrana apropriadamente moldada no saco conjuntival permite a distribuição de fármacos por 12 a 24 horas, assim como a adição de "suavidade" à lacrimação natural. Isto também é adequado para tratar queratoconjuntivite de sicca (síndrome de Sjogren). Fibronectina celular (cFN) pode ser incorporada no material colocado no olho para tratar úlceras córneas não-cicatrizantes.

No trato genitourinário, a formulação pode ser usada na bexiga ou uretra, como uma bandagem líquida, ou como uma solução de lavagem. Após as separações de uma unha ou unha do pé, o material tipo wafer pode ser usado para manter a integridade da camada de pele abaixo da unha desnudada. A bandagem de biomaterial é umedecida a cada 6 horas para proporcionar uma câmara de umidade para a camada de pele abaixo da unha e serve como um veiculo de distribuição de fármaco, para antibióticos ou para cFN para proteger a camada de pele abaixo da unha e ajudar na sua cicatrização.

Para feridas da pele superficiais, incluindo queimaduras, abrasões, úlceras diabéticas, úlceras de estase venosa, úlceras nervosas e feridas cirúrgicas ou traumáticas, a membrana ou material tipo wafer é colocado sobre a área a ser tratada. As feridas podem ser aquelas formadas no decorrer dos procedimentos cirúrgicos, incluindo as feridas causadas pela renovação de uma verruga ou câncer de pele, as feridas resultantes de procedimentos cirúrgicos Mohs, e feridas resultantes da remoção da pele para transplante. Para esse propósito, o wafer pode ter cFN e/ou um ou mais fator(es) de crescimento, tal como o fator de crescimento epidérmico, incorporado nele. A unidade da ferida, na forma de sangue ou exsudato da ferida, umedece a membrana ou material tipo wafer, fazendo com que este seja aderido firmemente à ferida. Salina ou água pode ser usada para umedecer a área antes de colocar a membrana se houver umidade insuficiente da ferida. Em outra modalidade, o wafer pode ser tornar aderente a uma fita adesiva, como em um Band-Aid™, o qual irá segurá-lo na ferida. Dessa forma, a composição pode distribuir à ferida, agentes para combater infecção, e outras substâncias para intensificar a cicatrização, tal como cFN.

A membrana ou material tipo wafer, ao qual cFN foi adicionado, pode ser usado para revestir superfícies cortadas de tecidos após a cirurgia para cânceres, tal como câncer de mama, para ajudar a reduzir a incidência de recorrência local do câncer, conforme descrito em Murthy et al. (1993) e na Patente Americana US 5.354.269.

Várias substâncias podem ser incorporadas na mistura antes da liofilização para aumentar as propriedades de cicatrização da membrana; a medicação ou substância específica a ser adicionada depende do uso para aquele produto particular. Alternativamente, a membrana pode ser usada sem materiais adicionais. Materiais ou medicações a serem incorporados na membrana incluem, como exemplos, vários antibióticos, anti-infecciosos e antimicrobianos, tais como sulfato de neomicina, penicilina, estreptomicina; prata, sulfadiazina ou nitrato de cério; fibronectina; fatores de crescimento, tais como fator de crescimento epidérmico; fator de crescimento de queratinócito ou fator de crescimento de fibroblasto; agentes anestésicos tópicos; hormônios; quimioterapêuticos, tais como bleomicina ou 5- fluoruracil (5-FU); ou suas misturas. Uma lista de aplicações potenciais das composições está na Tabela 1, os quais são tencionados somente como exemplos, e não são tencionados para limitar a composição àqueles exemplos. EXEMPLO 1; Preparação de Bandagens de Feridas Secas Básicas Uma amostra do material básico foi preparada como se segue. Cinqüenta mL de água destilada foram colocados em um béquer de 250 mL equipado com uma barra de agitação, em um aparelho de agitação magnética. Maltodextrina (Aldrich 419672; Lote 10910PD; Equivalente de dextrose de 4,0 - 7,0) 1,25, foi adicionada a qual se dissolveu rapidamente. Adição de PVP (polivinilpirrolidona) (Fluka 81440; Lote 1195730 51006177; PM - 360.000) 1, 80 g, a qual requereu cerca de 45 minutos para dissolver. Adição de hidroxietilcelulose (Spectrum Chemicals H 1236; Lote V00782; 5.000 cps) 0,30 g, a qual se dissolveu rapidamente, com agitação. Adição de hialuronato de sódio (Lifecore #81; Lote Dev 00453; PM 1,8 milhões) 0,05 g, o qual requereu várias horas para se dissolver, e a solução neste momento foi extremamente viscosa. A seguir 0,5 mL de glicerina grau reagente foi adicionado. Para o tampão em pH 5,5, citrato de sódio diidratado (EM Chemicals, número de catálogo SX0445-1, lote 126351-113264) 0,1116 g e ácido cítrico anidro (Sigma C-2404, Lote 080K1054) 0,0232 foram adicionados. Depois de todos os componentes terem se dissolvido, a mistura foi colocada em frascos de plástico de fundo plano, os quais foram colocados em um freezer para endurecer, e foram a seguir Iiofilizados. O produto final consistiu de uma matriz ou wafer tipo esponja, uniforme, seco, o qual podia ser quebrado ou cortado facilmente. Um resumo da composição preferida, e faixas dos vários ingredientes para diferentes propósitos da invenção estão estabelecidos na Tabela 2.

EXEMPLO 2: Bandagem de ferida seca com Fibronectina

Uma preparação de 1 mg de fibronectina celular humana liofilizada foi reconstituída (Patente Americana US No. 5.750.378) usando 1,5 mL de água destilada. A seguir 4,5 mL da mistura concentrada descrita no Exemplo 1 foi misturada na solução de fibronectina. 0 conjunto foi espalhado no fundo de um recipiente plástico de fundo plano, congelado e liofilizado juntamente com as amostras no Exemplo 1. Essa preparação lembrou as composições sem a fibronectina, exceto que ela mostrou-se ser menos friável. EXEMPLO 3. Bandagens de ferida seca dos Exemplos 1 e 2 em uma ferida da perna

Este é um relatório de caso de um homem branco de 72 anos de idade o qual tinha uma úlcera diabética na perna que persistiu por um ano. Alguns meses depois de ocorrer à lesão, um dermatologista obteve uma amostra da biópsia, e a úlcera foi infectada, resultando em uma lesão maior que foi muito inflamada. A lesão foi tratada com Avelox™. Ele aparentou curar-se em alguns meses, quando o paciente removeu o que aparentou ser pele morta. A lesão abriu novamente, e o paciente tratou com Neosporina, iodo e Mertiolate. O dermatologista tomou um swab da lesão. Depois de o paciente usar Bactro-Ban (Muciprocina) recomendado pelo dermatologista por duas semanas, a ferida piorou de modo que o paciente a fechou com Mertiolate. Uma lesão com sangramento do tamanho de uma moeda persistiu. O paciente iniciou o tratamento com bandagem de ferida cFN do Exemplo 2 aproximadamente duas semanas depois, mudando a bandagem a cada 48 horas, exceto no primeiro dia (a primeira troca foi em 24 horas). Pelos primeiros 4 dias, o material foi fixado à ferida com uma almofada de gaze 4x4 e uma bandagem ACE, a seguir com um Band-Aid. Depois de 6 dias, a lesão que começou como uma lesão bruta, exsudativa e serosa do tamanho de uma moeda (15 mm) diminuiu até o diâmetro de uma borracha caneta (4 a 5 mm) . Depois de aproximadamente 1 semana de tratamento cFN, somente restou um ponto < do que 2 mm. 0 tratamento foi descontinuado por algumas semanas, e It 18

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a seguir a lesão cicatrizou completamente depois de outra aplicação do material da matriz contendo cFN. As figuras da lesão no decurso em cada mudança são mostradas nas FIGs. 1- 6.

EXEMPLO 4: Avaliação da atividade microbiana

A atividade antimicrobiana in vitro da composição foi testada usando o método padrão Kirby-Bauer. As amostras designadas "Base" foram o material da matriz básica sem antimicrobianos adicionados. A amostra designada "Base + Prata" continha adicionalmente sulfadiazina de prata na concentração de pré-liofilização de 1% p/v. A amostra designada "Base + cério" continha adicionalmente nitrato de cério em uma concentração de pré-liofilização de 0,4% p/v, e a amostra designada "Base + prata + cério" continha adicionalmente ambos os compostos nas concentrações acima. RESULTADOS:

Amostra 1: Base da bandagem Microrganismo Resultado Salmonella choleraesuis■ (ATCC 10708) Não satisfatório * Staphylococcus aureus (ATCC 6538) Não satisfatório * Amostra 2: Bandagem - base + prata Microrgani smo Resultado Salmonella choleraesuis (ATCC 10708) Satisfatório** Staphylococcus aureus (ATCC 6538) Satisfatório** Amostra 3: Bandagem - base + cério Microrganismo Resultado Salmonella choleraesuis (ATCC 10708) Satisfatório** Staphylococcus aureus (ATCC 6538) Satisfatório** Amostra 4: Bandagem - base + prata + cério Microrganismo Resultado Salmonella choleraesuis (ATCC 10708) Satisfatório** Staphylococcus aureus (ATCC 6538) Satisfatório**

* Não satisfatório: Ausência de formação de zona

límpida de inibição no Agar ao redor da amostra, não indicando atividade bacteriostática.

** Satisfatório: Formação de zona límpida de inibição no Agar ao redor da amostra, indicando atividade bacteriostática.

CONCLUSÕES: As amostras analisadas foram

satisfatórias, conforme mostrado pela atividade bacteriostática nos microrganismos testados acima, com exceção da amostra 1 (base). A atividade bacteriostática foi mais pronunciada na amostra 3 (base + cério). EXEMPLO 5: Avaliação da irritação da pele.

As amostras do material da matriz contendo nitrato de cério foram testadas para uma possível irritação da pele em um laboratório de contrato independente no Brasil, usando um protocolo padronizado apropriado. A tradução do seu relatório está a seguir:

EXEMPLO 6: Estudos de toxicidade

A: Irritação cutânea primária em coelhos (com bandagens contendo nitrato de cério)

Esses testes foram efetuados de acordo com as regras da ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária, a equivalente brasileira da Food and Drug Administration Americana).

Animais: 6 coelhos (Onyctolagus cuniculus), 3 machos e 3 fêmeas, adultos jovens, não grávidas, pesando de 2 a 5 Kg.

24 horas antes do teste duas áreas de 6 cm2 foram raspadas, uma em cada flanço, sem lesões na pele.

Cada bandagem foi aplicada, coberta com gaze e fixada com um emplastro adesivo hipoalergênico (flanco direito).

Depois de 4 horas as bandagens foram removidas com água purificada e os animais foram examinados depois de 24 e 72 horas. As áreas foram comparadas com as do controle (flanco esquerdo).

0 grau de vermelhidão e edema foi avaliado com uma

escala padronizada de 0 a 4 e, a seguir, os valores médios foram computados.

Após os resultados obtidos a bandagem foi considerada como "não-irritante".

B. Toxicidade dérmica aguda em ratos

Esses testes foram efetuados de acordo com o método OECD (Organization for Economic Cooperation and Development) n° 402, adotado em 1987, e com as regras da ANVISA.

Animais: 10 ratos Wistar: 5 machos, 5 fêmeas, adultos

jovens, pesando de 200 a 300 g.

24 horas antes do procedimento os animais foram raspados.

A substância foi aplicada sobre um pedaço de gaze e a * 22

seguir na pele do animal e fixada com um emplastro adesivo hipoalergênico. Os animais foram observados pelos 14 dias seguintes e dados como morbidez, morte e observações patológicas macroscópicas foram registrados.

Não houve sintomas, reações ou morte relacionadas com

a substância aplicada. De acordo com os resultados obtidos, a bandagem com nitrato de cério apresenta DL50 dérmica maior do gue 2000 mg/Kg de peso.

C. Avaliação da irritação cutânea repetida em coelhos (com bandagens contendo nitrato de cério)

Esses testes foram efetuados de acordo com as regras da ANVISA.

Animais: 6 coelhos (Onyctolagus cuniculus), todos machos, adultos, pesando de 2 a 3 Kg. 24 horas antes do teste duas áreas de 6 cm2 foram

raspadas, nas costas dos animais sem lesões cutâneas.

Cada bandagem foi aplicada, coberta com gaze e fixada com um emplastro adesivo hipoalergênico (flanço direito).

Depois de 4 horas as bandagens foram removidas com água purificada. A bandagem foi aplicada diariamente por dez dias consecutivos. Os animais foram examinados depois de 24 e 72 horas depois da última aplicação da bandagem. As áreas foram comparadas com as do controle (flanço esquerdo). O grau de vermelhidão e edema foi avaliado com uma escala padronizada de 0 a 4 e, a seguir, os valores médios foram computados.

Considerando os resultados encontrados e os métodos empregados, o indice de irritação cutânea repetido dessa bandagem foi zero, sendo classificado como "produto não- irritativo".

Tabela I

Matriz: Adições efetivas Indicação proposta Simples (sem medicações) Mucosite, separação das unhas Simples, porém hiarulonano aumentado Para prevenir adesões na cirurgia abdominal Tratar queratoconjuntivite sicca Fibronectina celular (cFN) Cicatrização de feridas (feridas limpas, cirurgia de Mohs, eg) Úlceras da córnea Inibe recorrência local de câncer Penicilina Infecções da pele (impetigo, eg) Esterptomicina Infecções da pele (impetigo, eg) Sulfadiazina de prata (Ag) Infecção da pele (geralmente, especialmente MRSA) Nitrato de cério (Ce) Queimaduras, especialmente infectadas) Ag + Ce Infecção da pele Ag + cFN Infecção da pele Ce + cFN Queimaduras, com perda de pele Ag + Ce + cFN Queimaduras severamente infectadas com perda de pele (trauma, especialmente feridas de campo de batalha) Efetivamente fizeram um "BandAid" com isso como uma almofada Matriz: Adições propostas Sulfato de neomicina Feridas da pele superficiais, com infecção Antivirais Chagas frias (herpes simplex, ou herpes genital) Úlceras da córnea devido à infecção viral; também podem conter cFN Hidrocortisona Hemorróidas, hera venenosa Agentes antifúngicos Pé de atleta, infecções da unha fúngicas, infecções cutâneas Fatores de crescimento Feridas não-cicatrizantes BMP ± VEGF Fraturas não-unidas, reduções abertas Revestimento para implantes ortopédicos e dentários Anestésicos tópicos Feridas dolorosas

TABELA 2

COMPOSIÇÃO DA MATRIZ BÁSICA Pós- Iiofilização Pré-Iiofilização Preferido Quantidade preferida Faixa INGREDIENTE % p/p g ou mL Baixa Alta Água purificada 0, 00% 100, 0 100,00 100,00 PVP (poliviniIpirrol idona) 46,15% 3, 6 2, 50 4, 50 Maltodextrina 32,05% 2,5 1, 60 3,80 Glicerina 12,82% 1,0 0, 50 3, 00 Hidroxietilcelul ose 7, 69% 0, 6 0,20 1,80 Hialuronato de Na 1,28% 0,1 0,01 5, 00 100,00% 7,8 Exemplos de tampões, para 100 mL Tampão citrato, 10 mM, pH 5,5 Ácido citrico 0,0463 Citrato de Na 0,2233 Tampão fosfato, 10 mM, H 7,4 Na (PO4) 2-H2O 0,0311 Na3PO4. 7H20 0,2075

MATERIAIS E MÉTODOS

Formulação da composição

A fibronectina celular humana (cFN) foi preparada conforme descrito na Patente Americana US 5.750.378.

Fibroblastos do prepúcio humano foram obtidos de Cambrex Bioscience (agora parte de Lonza Group Ltd., Basel, Suiça) e cresceram até a confluência em meio MCDB 105 (Sigma Chemical) suplementado com 5% de soro bovino fetal) ; outros meios de crescimento de fibroblasto também poderiam ter sido usados.

Depois de expandir a população celular até o resultado em células confluentes em várias garrafas cilíndricas (Tufrol, BD Falcon, Becton, Dickinson and Company, Franklin Lane, New Jersey) , o meio foi trocado para um meio de produção compreendido de meio de cultura celular padrão 199 (obtido como um pó seco da JRH Biosciences) preparado em água destilada grau de cultura tecidual. 0 meio foi suplementado com (g/L p/v) de hidrolisato de lactalbumina (Sigma Chemical, St. Louis, Missouri) 5 g; glicose (American Bioanalytical, Natick, Massachusetts) 3 g; tampão HEPES, sal de sódio (American Bioanalytical) 1,735 g; tampão HEPES, ácido (Sigma Chemical) 0,7943 g; dexametasona (Sigma Chemical) 0,02 mg; penicilina G (Sigma Chemical 100,000 unidades; sulfato de estreptomicina (Sigma Chemical) 0,1 g; bicarbonato de sódio 2,2 g; insulina (Sigma Chemical) 10 mg. Note que nenhum soro é adicionado ao meio de produção.

A primeira adição do meio de produção foi descartada das garrafas cilíndricas depois de dois dias, e foi substituída com meio de produção fresco (100 mL/garrafa). Esse meio condicionado foi coletado a cada 3 a 4 dias e substituído com meio de produção fresco. Depois da coleta, o meio condicionado foi filtrado através de um filtro de fibra de vidro para remover quaisquer células ou fragmentos celulares, e foi bombeado através de uma coluna de gelatina-sefarose (GE Healthcare, Uppsala, Suécia). Depois de rinsar o leito da coluna com um tampão fosfato diluído para remover proteínas não-ligadas, a fibronectina aderente foi eluída com tampão CAPS (Sigma Chemical) em pH 11,0 contendo uréia (American Bioanalytical) 4 mol/L. As frações dos picos, determinadas por espectrometria a 280 nm, foram reunidas e adicionalmente purificadas passando através de uma coluna Sephedex G-25 (Sigma Chemical) para remover uréia e sais, e para trocar o tampão para um tampão fosfato diluído. As frações dos picos foram reunidas e tampão concentrado foi adicionado de modo que o tampão final pudesse ser fisiológico após a Iiofilização. A solução foi esterilizada passando através de um filtro de 0,22 μπ\ estéril e foi dispensada em frascos estéreis em um volume contendo 1 mg de fibronectina por frasco. Os frascos foram congelados e Iiofilizados.

Claims

1. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato que compreende hialuronato, polivinilpirrolidona (PVP), maltodextrina, hidroxietilcelulose e glicerina na forma de um material tipo wafer membranoso depois de ser Iiofilizada.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que ainda compreende um ou mais agentes quimioterapêuticos.

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato que ainda compreende cFN.

4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato que compreende ainda fatores de crescimento.

5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato que compreende ainda um agente anti-microbiano.

6. Bandagem para ferida seca caracterizada pelo fato que compreende a composição farmacêutica da reivindicação 1.

7. Bandagem para ferida seca, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que as feridas são selecionadas de um grupo consistindo de abrasões, úlceras, queimaduras, férias traumáticas e cirúrgicas.

8. Bandagem para ferida seca, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de estar na forma de uma tira adesiva.

9. Uso da bandagem conforme definido pela reivindicação 6 caracterizado pelo fato de ser como uma cobertura para feridas selecionadas do grupo consistindo de feridas orais, mucosite ou estomatite resultante de quimioterapia, terapia com radiação, aparelhos ortodônticos, úlceras aftosas e/ou terapia com células tronco.

10. Uso da bandagem para ferida seca conforme definido pela reivindicação 6 caracterizado pelo fato de ser para tratar úlceras crônicas, tais como úlceras diabéticas, úlceras nervosas e úlceras de estase venosa.

11. Uso da composição conforme definido reivindicação 3 caracterizado pelo fato de tratar úlcera crônica, estomatite ou outras feridas que poderiam se beneficiar das propriedades cicatrizantes da fibronectina.

12. Uso da composição, conforme definido pela reivindicação 1 caracterizado pelo fato de diminuir a incidência de adesões pós-operatórias.

13. Método para distribuir fibronectina a uma ferida, o método sendo caracterizado pelo fato de compreender: (a) obter uma solução concentrada de fibronectina; (b) combinar a fibronectina com a bandagem de ferida seca da reivindicação 6; e (c) aplicar a bandagem na ferida.

14. Composição caracterizada pelo fato de compreender de cerca de 0,01% até cerca de 5% em peso/volume de ácido hialurônico, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, com peso molecular de cerca de 500.000 Daltons até cerca de 2,2 milhões de Daltons; de cerca de 0,04% até cerca de 15% em peso/volume de polivinilpirrolidona K60 a K100, na forma de um material tipo wafer membranoso.

15. Composição, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de compreender ainda um agente antibacteriano, um agente desinfetante, um agente antifúngico, um analgésico, um antiinflamatório, um emoliente ou um anestésico local.

16. Composição usada para tratar ou prevenir inflamação num paciente, caracterizada pelo fato de compreender uma guantidade eficaz (i) de cerca de 0,01 até cerca de 5 por cento em peso de ácido hialurônico, ou de um sal farmaceuticamente aceitável seu, com peso molecular de cerca de 500.000 até cerca de 2,2 milhões de Daltons; (ii) de cerca de 0,04% até cerca de 15% em peso/volume de polivinilpirrolidona K60 a K100; e (iii) de cerca de 86 até cerca de 98% de água, na forma de um material tipo wafer membranoso.

17. Composição, de acordo com a Reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que a inflamação está na cavidade oral do paciente.

18. Composição de acordo com a Reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que o paciente tem mucosite oral.

19. Composição usada para tratar ou prevenir mucosite num paciente, caracterizada pelo fato de compreender uma quantidade eficaz de ácido hialurônico ou de um sal farmaceuticamente aceitável seu; e polivinilpirrolidona na forma de um material tipo wafer membranoso.

20. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de ser usada para tratar dor resultante de cirurgia oral.