BRPI0711045A2

BRPI0711045A2 - compostos de tetraidropiridotienopirimidina e métodos de uso destes

Info

Publication number: BRPI0711045A2
Application number: BRPI0711045-6A
Authority: BR
Inventors: Chengzhi Zhang; Kanwar Sidhu; Mario Lobell; Gaetan H Ladouceur; Qian Zhao; Kristen Allegue; Chetan P Darne; Jason Newcom
Original assignee: Bayer Healthcare Ag
Priority date: 2006-03-20
Filing date: 2007-03-20
Publication date: 2012-06-26
Also published as: NZ571326A; US8501755B2; US20100298297A1; DE602007011906D1; WO2007109279A3; ATE495179T1; PE20080144A1; TW200804397A; EP2001890A2; CA2647036A1; AR059901A1; CN101448840B; CN101448840A; CR10304A; EP2001890B1; IL194028A0; ECSP088749A; UY30220A1; GT200800187A; TNSN08370A1

Abstract

COMPOSTOS DE TETRAIDROPIRIDOTIENOPIRIMIDINA, COMPOSIçãO FARMACêUTICA COMPREENDENDO OS MESMOS, PROCESSO DE PREPARAçãO E USO DOS MESMOS. Esta invenção refere-se compostos de fórmula (1), em que as variáveis são como descritas no relatório, às composições farmacêuticas contendo-os, aos métodos de preparação dos compostos e composições farmacêuticas, e aos métodos de utilização dos compostos e composições farmacêuticas para tratamento ou prevenção de distúrbios, em particular câncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS- TOS DE TETRAIDROPIRIDOTIENOPIRIMIDINA, COMPOSIÇÃO FARMA- CÊUTICA COMPREENDENDO OS MESMOS, PROCESSO DE PREPA- RAÇÃO E USO DOS MESMOS".

Pedidos Relacionados

Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisó- rio dos Estados Unidos N0. de Série 60/784.146, depositado em 20 de março de 2006, o teor do qual é incorporado aqui por referência.

Campo da Invenção

Esta invenção refere-se a novos compostos e processos para sua preparação, métodos de tratar doenças, particularmente câncer, com- preendendo administrar os referidos compostos, e métodos de preparar composições farmacêuticas para o tratamento ou prevenção de distúrbios, particularmente câncer.

Antecedentes da Invenção

Câncer é uma doença resultando de um crescimento anormal de tecido. Certos cânceres têm o potencial de invadir em tecidos locais e tam- bém metastatizar para órgãos distantes. Esta doença pode desenvolver em uma ampla variedade de diferentes órgãos, tecidos e tipos de célula. Portan- to, o termo "câncer" refere-se a uma coleção acima de mil doenças diferen- tes.

Mais de 4,4 milhões de pessoas mundialmente foram diagnosti- cadas com câncer de mama, cólon, ovário, pulmão, ou próstata em 2002 e mais de 2,5 milhões de pessoas morrerem destas doenças devastadoras (Globocan 2002 Report). Nos Estados Unidos apenas, mais de 1,25 milhão de novos casos e mais de 500.000 mortes de câncer foram supostas em 2005. A maioria destes novos casos será cânceres do cólon 100.000), pulmão (~ 170.000), mama (~ 210.000) e próstata 230.000). Tanto a inci- dência quanto a prevalência de câncer são preditas aumentar em aproxima- damente 15% durante os próximos dez anos, refletindo uma taxa de cresci- mento médio de 1,4% (American Câncer Society, Câncer Facts and Figures 2005). Tratamentos de câncer são de dois principais tipos, curativo ou paliativo. As principais terapias curativas para câncer são cirurgia e radiação. Estas opções são geralmente bem-sucedidas apenas se o câncer for desco- berto em um estágio localizado precoce. Uma vez que a doença progrediu para câncer localmente avançado ou câncer metastático, estas terapias são menos eficazes e o objetivo da terapia tem em vista paliação de sintoma e manter boa qualidade de vida. Os protocolos de tratamento mais prevalentes em qualquer método de tratamento envolvem uma combinação de cirurgia, terapia por radiação e/ou quimioterapia.

Fármacos citotóxicos (também conhecidos como agentes citor- redutores) são utilizados no tratamento de câncer, como um tratamento cu- rativo ou com o objetivo de prolongar a vida ou paliar os sintomas. Citotóxi- cos podem ser combinados com radioterapia e/ou cirurgia, como tratamento neoadjuvante (quimioterapia inicial objetivada em redução do tumor, desse modo tornando terapia local tal como cirurgia e radiação mais eficazes) ou como quimioterapia adjuvante (utilizada em conjunto ou após cirurgia e/ou terapia localizada). Combinações de diferentes fármacos são freqüentemen- te mais eficazes do que fármacos sozinhos: elas podem fornecer uma van- tagem em certos tumores de resposta realçada, desenvolvimento reduzido de resistência ao fármaco e/ou sobrevivência aumentada. É por estas razões que o uso de regimes citotóxicos combinados no tratamento de muitos cân- ceres é muito comum.

Agentes citotóxicos em uso atual empregam diferentes meca- nismos de bloquear proliferação e induzir morte celular. Eles podem ser ge- ralmente categorizados nos seguintes grupos com base em seus mecanis- mos de ação: os moduladores de microtúbulo que interferem com a polimeri- zação ou despolimerização de microtúbulos (por exemplo, docetaxel, pacli- taxel, vimblastina, vinorelbina); antimetabólitos incluindo análogos de nucle- osídeo e outros inibidores de séries de reação metabólicas celulares essen- ciais (por exemplo, capecitabina, gencitabina, metotrexato); agentes que in- teragem diretamente com DNA (por exemplo, carboplatina, ciclofosfamida); intercaladores de DNA de antraciclina que interferem com DNA polimerase e Topoisomerase II (por exemplo, doxorrubicina, epirrubicina); e os inibidores de não antraciclina de atividade enzimática de Topoisomerase Il e I (por e- xemplo, topotecan, irinotecan, e etoposídeo). Mesmo que diferentes fárma- cos citotóxicos ajam por meio de diferentes mecanismos de ação, cada qual geralmente leva à pelo menos diminuição transitória de tumores.

Agentes citotóxicos continuam a representar um componente importante em um arsenal de oncologista de armas para uso no combate ao câncer. A maioria dos fármacos atualmente passando por experiências clíni- cas de Fase Il e Fase Ill tardias está focalizada em mecanismos conhecidos de ação (agentes de ligação à tubulina, antimetabólitos, processamento de DNA), e em melhoras incrementais em classes de fármaco conhecidas (por exemplo, os taxanos ou as camptotecinas). Um pequeno número de fárma- cos citotóxicos baseados em novos mecanismos tem recentemente emergi- do. Modos de ação para estes citotóxicos incluem inibição de enzimas en- volvidas na modificação de DNA (por exemplo, histona desacetilase (HDAC)), inibição de proteínas envolvidas em movimento de microtúbulo e progressão de ciclo celular (por exemplo, cinesinas, aurora cinase), e novos indutores da série de reação apoptótica (por exemplo, inibidores de bcl-2).

Mesmo que agentes citotóxicos permaneçam em primeiro plano de métodos para tratar pacientes com tumores sólidos avançados, sua efi- cácia limitada e indíces terapêuticos estreitos resultam em efeitos colaterais significantes. Além disso, pesquisa básica em câncer tem levado à investi- gação de terapias menos tóxicas baseadas nos mecanimos específicos cen- trais para progressão de tumor. Tais estudos podem resultar em terapia efi- caz com melhora da qualidade de vida para pacientes de câncer. Desse mo- do, uma nova classe de agentes terapêuticos tem emergido, referida como citostáticos. Citostáticos direcionam sua ação sobre estabilização de tumor e são geralmente associados com um perfil de efeito colateral mais limitado e menos agravante. Seu desenvolvimento tem resultado da identificação de alterações genéticas específicas envolvidas em progressão de câncer e um entendimento das proteínas ativadas em câncer tal como tirosina cinases e serina/treonina cinases. Além de comandarem inibição de alvos de célula de tumor, fár- macos citostáticos estão sendo desenvolvidos para bloquear o processo de angiogênese de tumor. Este processo supre o tumor com vasos sangüíneos novos e existentes para sustentar nutrição continuada e portanto ajuda a promover crescimento do tumor. Receptores de tirosina cinase chaves inclu- indo Receptor de Fator de Crescimento Endotelial Vascular 2 (VEGFR2), Fator de Crescimento de Fibroblasto 1 (FGFR1) e Tie2 foram mostrados re- gular angiogênese e têm emergido como alvos de fármaco altamente atrati- vos.

Diversos novos fármacos que são direcionados a vários alvos moleculares foram aprovados durante os últimos cinco anos para o trata- mento de câncer. Imatinib é um inibidor da Abl tirosina cinase e foi o primeiro inibidor de tirosina cinase de molécula pequena a ser aprovado para o tra- tamento de leucemia mielóide crônica (CML). Com base na atividade adicio- nal de imatinib contra o receptor de tirosina cinase ativado em tumores es- tromais gastrointestinais (GIST), c-KIT, ele foi subseqüentemente aprovado para o tratamento de GIST avançados. Erlotinib, um inibidor de molécula pequena de EGFR, foi aprovado no final de 2004 para o tratamento de car- cinoma de pulmão de célula não pequena (NSCLC). Sorafenib, um inibidor de múltiplas cinases incluindo c-Raf e VEGFR2 foi aprovado para o trata- mento de carcinoma de célula renal avançado (RCC) em Dezembro de 2005. Recentemente em Janeiro de 2006, Sunitinib, um inibidor de múltiplas cinases foi aprovado para o tratamento de GIST resistentes ou refratários e RCC avançado. Estes inibidores de molécula pequena demonstram que mé- todos alvejados são bem-sucedidos para o tratamento de diferentes tipos de cânceres.

Sumário da Invenção

Em um aspecto, a invenção fornece um composto de fórmula (I)

<formula>formula see original document page 5</formula> em que

m é O, 1, ou 2;

η é O, 1, 2, ou 3;

q é O ou 1;

R1 representa H,(C1-OOaIquiIa, ou halo;

R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1- C4)alquila, -0(C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila;

R3 é selecionado do grupo consistindo em H1 halo, -CN1 (C1- C4)alquila, etinila, propargila, e '-O(CH2)pAr, em que ρ é O, 1, ou 2, e Ar re- presenta fenila, piridila, tiazolila, tiofenila, ou pirazinila, e em que Ar opcio- nalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; ou

R2 e R3 podem ser unidos, e empregados juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, formam um carbociclo satu- rado ou insaturado de cinco ou seis membros fundido, ou formam um hete- rociclo fundido em que os grupos R2 e R3 combinados são representados pela fórmula

<formula>formula see original document page 6</formula>

em que Ar' e Ar" cada qual representa fenila, piridila, tiazolila, tienila, ou pirazinila e em que Ar' e Ar" cada qual opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consis- tindo em (C1-C4)alquila e halo;

R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, (C1- C4)alquila, -0(Ci-C4)alquila, halo, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila;

R5 representa H ou halo;

quando η é O, R7 é H;

quando η é 1, 2 ou 3, R7 representa:

H;

hidroxila;

-NR12R13 em que

R12 representa H ou (C1-C6)alquila que opcionalmente transporta 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino; e R13 representa Η, (C1-C6)BlquiIal ou (C3-C6)cicloalquila, os referi- dos grupos alquila e cicloalquila opcionalmente transportando 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino;

<formula>formula see original document page 7</formula>

em que R14 é hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1- C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila;

<formula>formula see original document page 7</formula>

N—' que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcoxi, ou mono- ou di- ((C1- C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que r é 0, 1, ou 2;

<formula>formula see original document page 7</formula>

N—' que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de (C1-C4)alquila, cada substituinte de alquila sucessivamente e opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que

X representa O, S(O)s, ou NR15, em que s é 0, 1 ou 2; e

R15 representa (C1-C4)alquila;

<formula>formula see original document page 7</formula>

quando η = 2, R7 e R9 podem ser unidos, e empregados junta- mente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados e os átomos de carbono intermediários, formam um anel de estrutura R16 em que R16 representa (C1-C4)alquila;

R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila;

R9 representa H ou -CH2-Y, em que Y é mono- ou di- ((C1- C4)alquil)amino, ou N—/ ; R10 representa Η;

ou

R9 e R10 podem ser empregados juntos para formar uma ligação, resultando em uma ligação acetilênica;

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Em certas modalidades, m é 0. Em certas modalidades, η é 1. Em certas modalidades, q é 0.

Em certas modalidades, R1 é hidrogênio ou fluoro; R2 é selecio- nado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1-C4)alquila, e (C2- C4)alquinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e *- O(CH2)pAr1 em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode op- cionalmente ser substituído com 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, e halo; R5 é hidrogênio; e R7 é -NR12R13 em que R12 representa H ou (CrC6)alquila, e R13 representa H ou (C1-C6)alquila.

Em certas modalidades, R1 é H; R2 é selecionado do grupo con- sistindo em H, halo, e etinila; R é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, metila, e *-0(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; R é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e (C1- C4)alquila; R5 é hidrogênio; e R7 é um grupo mono- ou di- ((C1- C4)alquil)amino. Em certas modalidades, R2 é etinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e *-O(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; e R4 é hidrogênio,

Em certas modalidades, R2 é halo; e R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e MD(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazi- nila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halo- gênios, e em que ρ é 0 ou 1. Em certas modalidades, R3 é halo.

Em outro aspecto, a invenção fornece um composto selecionado do grupo consistindo em: N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-[(2E)-4- (dietilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4- amina; N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2- enoil]-5,67,8-tetraidropirido[4\3^4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro- 4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8- tetraidropirido[4,,3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)- 7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4,,3,:4,5]tieno[2,3- d]pirimidin-4-amina; 7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-N-(3-etinilfenil)- 5,6,7,8- tetraidropirido[4,)3l:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; 7-[(2E)-4- (dimetilamino)but-2-enoil]-N-(3-etinilfenil)-5,6,7,8- tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)- 7-{(2E)-4-[isopropil(metil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8- tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)- 7-{(2E)-4-[etil(isopropil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8- tetraidropirido[4,,3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3,4-diclorofenil)-7- [(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3- d]pirimidin-4-amina; e N-(3,4-diclorofenil)-7-{(2E)-4- [isopropil(metil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3- d]pirimidin-4-amina.

Em outro aspecto, a invenção fornece um processo para prepa- rar um composto de fórmula (I), compreendendo

(i) reagir um composto de fórmula (7)

<formula>formula see original document page 9</formula>

em que R1 a R5, R8, m e q têm os significados indicados acima, com um composto de fórmula (10)

<formula>formula see original document page 9</formula>

em que R7, R9 e R10 e η têm os significados indicados acima, e X é hidróxi, cloro ou bromo; ou (ii) reagir um composto de fórmula (9)

<formula>formula see original document page 10</formula>

em que R1 a R5, R8 a R10,m, η e q têm os significados indicados acima, e LG é um grupo de saída, com um composto de fórmula R7-H, em que R7 tem o significado indicado acima; ou

(iii) reagir um composto da fórmula (14):

<formula>formula see original document page 10</formula>

em que R7 - R10, m e η têm os significados indicados acima, e LG é um gru- po de saída,

com um composto da fórmula (15):

<formula>formula see original document page 10</formula>

em que R1 a R5, η e q têm os significados indicados acima, e LG é um grupo de saída,

sob condições de modo que um composto de fórmula (I) seja preparado.

Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição farma- cêutica compreendendo um composto como definido acima, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, a compo- sição farmacêutica é fornecida em uma forma adequada para administração intravenosa.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um processo para preparar uma composição farmacêutica. O processo inclui a etapa de com- preendendo combinação de pelo menos um composto como definido acima com pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável, e transportando a combinação resultante em uma forma de administração adequada.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece o uso de um com- posto como definido acima para fabricação de uma composição farmacêuti- ca para o tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular. Em certas modalidades, o distúrbio proliferativo celular é câncer.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um composto de fórmula (7)

<formula>formula see original document page 11</formula>

em que

m é 0,1, ou 2;

q é 0 ou 1;

R1 representa H, (C1-C4)alquila, ou halo;

R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1- C4)alquila, -O(C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila ;

R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, (C1- C4)alquila, etinila, propargila, e MD(CH2)pAr, em que ρ é 0, 1, ou 2, e Ar re- presenta fenila, piridila, tiazolila, tiofenila, ou pirazinila, e em que Ar opcio- nalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; ou

R2 e R3 podem ser unidos, e empregados juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, formam um carbociclo satu- rado ou insaturado de cinco ou seis membros fundido, ou formam um hete- rociclo fundido em que os grupos R2 e R3 combinados são representados

<formula>formula see original document page 11</formula>

pela fórmula ou , em que Ar' e Ar" cada qual represen- ta fenila, piridila, tiazolila, tienila, ou pirazinila e em que Ar' e Ar" cada qual opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consis- tindo em (C1-C4)alquila e halo;

R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, (C1- C4)alquila, -O(C1-C4)alquila, halo, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila;

R5 representa H ou halo; e

R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila.

Em ainda um outro aspecto, a invenção fornece um composto de fórmula (9)

<formula>formula see original document page 12</formula>

em que

mé 0,1, ou 2;

η é 0, 1, 2, ou 3;

q é 0 ou 1;

R1 representa H, (C1-C4)alquila, ou halo;

R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, (C1- C4)alquila, etinila, propargila, e "-O(CH2)pAr, em que ρ é 0, 1, ou 2, e Ar re- presenta fenila, piridila, tiazolila, tiofenila, ou pirazinila, e em que Ar opcio- nalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; ou

<formula>formula see original document page 13</formula>

,em que Ar' e Ar" cada qual representa fenila, piridila, tiazolila, tienila, ou pirazinila e em que Ar' e Ar" cada qual opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consis- tindo em (C1-C4)alquila e halo;

R4 é selecionado do grupo consistindo em H1 -CN1 (C1-C4)alquila, -0(C1-C4)alquila, halo, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila;

R5 representa H ou halo;

R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila;

R9 representa H ou -CH2-Y, em que Y é mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, ou di-((C1C4)alquil)amino,ou

<formula>formula see original document page 13</formula>

R10 representa H;

ou

R9 e R10 podem ser empregados juntos para formar uma ligação, resultando em uma ligação acetilênica; e

LG é um grupo de saída.

Em ainda outra modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula (14):

<formula>formula see original document page 13</formula>

em que

mé 0,1, ou 2;

η é 0, 1, 2, ou 3;q é 0 ou 1;

quando η é 0, R7 é H;

quando η é 1, 2 ou 3, R7 representa:

H;

hidroxila;

-NR12R13 em que R representa H ou (C1-C6)alquila que opcionalmente transporta 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino; e

R13 representa H, (C1-C6)alquila, ou (C3-C6)cicloalquila, os referi- dos grupos alquila e cicloalquila opcionalmente transportando 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino;

<formula>formula see original document page 14</formula>

N—' que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1- C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que r é 0, 1, ou 2;

<formula>formula see original document page 14</formula>

que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de (C1-C4)alquila, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que

X representa O, S(O)s, ou NR15, em que s é 0, 1 ou 2; e

R15 representa (C1-C4)alquila;

<formula>formula see original document page 14</formula>

R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila; R9 representa H ou -CH2-Y, em que Y é mono- ou di- ((C1- C4)alquil)amino, ou

<formula>formula see original document page 15</formula>

;

R10 representa H;

ou

LG é um grupo de saída.

Em outra modalidade, a invenção fornece um método de tratar um distúrbio proliferativo celular em um paciente em necessidade de tal tra- tamento, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um composto como acima. Em certas modalidades, o distúrbio proliferativo celular é câncer.

Descrição Detalhada da Invenção

A menos que de outra maneira estabelecido, as seguintes defi- nições aplicam-se às expressões técnicas utilizadas em toda esta especifi- cação e reivindicações:

Sais para os propósitos da invenção são preferivelmente sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção. Por exemplo, veja S. M. Berge, e outro. "Pharmaceutical Salts," J. Pharm. Sei. 1977, 66, 1-19.

Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição de ácido de ácidos minerais, ácidos carboxílicos e ácidos sulfônicos, por exem- plo, sais de ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossulfônico, áci- do benzenossulfônico, ácido naftalenodissulfônico, ácido acético, ácido pro- piônico, ácido lático, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumári- co, ácido maléico e ácido benzóico.

Sais farmaceuticamente aceitáveis também incluem sais de ba- ses habituais, tais como por exemplo, e preferivelmente sais de metal de álcali (por exemplo, sais de sódio e potássio, sais de metal alcalino-terroso (por exemplo, sais de cálcio e magnésio) e sais de amônio derivados de a- mônia ou aminas orgânicas tendo 1 a 16 átomos de carbono, tais como ilus- trativamente e preferivelmente etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiiso- propilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, dicicloexila- mina, dimetilaminoetanol, procaína, dibenzilamina, N-metilmorfolina, diidro- abietilamina, arginina, lisina, etilenodiamina e metilpiperidina.

Alquila representa um radical alquila de cadeia linear ou ramifi- cada tendo geralmente 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 3 átomos de carbono, ilustrativa- mente representando metila, etila, n-propila, isopropila, ferc-butila, n-pentila e n-hexila.

Alquilamino representa um radical alquilamino tendo um ou dois substituintes (independentemente selecionados) de alquila, ilustrativamente representando metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, terc- butilamino, n-pentilamino, n-hexilamino, N,N-dimetilamino, N,N-dietilamino, N-etil-N-metilamino, N-metil-N-[n-propilamino, N-isopropil-N-n-propilamino, N- t-butil-N-metilamino, N-etil-N-n-pentilamino e N-n-hexil-N-metilamino. A lin- guagem "mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino" refere-se a um radical alquilami- no tendo um ou dois substituintes (independentemente selecionados) de C1- C4alquila.

Halo representa flúor, cloro, bromo ou iodo.

Um asterisco próximo a uma ligação denota o ponto de ligação na molécula.

O termo "distúrbio proliferativo celular" inclui distúrbios envol- vendo a proliferação indesejada ou incontrolada de uma célula. Compostos podem ser utilizados para inibir, bloquear, reduzir, diminuir, etc., proliferação celular e/ou divisão celular, e/ou produzir apoptose. Este método compreen- de administrar a um indivíduo em necessidade deste, incluindo um mamífe- ro, incluindo um ser humano, uma quantidade de um composto desta inven- ção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, isômero, polimorfo, metabólito, hidrato, solvato ou éster deste; etc. que é eficaz para tratar o distúrbio. Dis- túrbios proliferativos celulares ou hiperproliferativos incluem porém não são limitados a, por exemplo, psoríase, quelóides, e outras hiperplasias que afe- tam a pele, hiperplasia prostática benigna (BPH), tumores sólidos, tais como cânceres da mama, trato respiratório, cérebro, órgãos reprodutores, trato digestivo, trato urinário, olhos, fígado, pele, cabeça e pescoço, tireóide, para- tireóide e suas metástases distantes. Aqueles distúrbios também incluem linfomas, sarcomas, e leucemias.

Exemplos de câncer de mama incluem, porém não são limitados a carcinoma ductal invasivo, carcinoma Iobular invasivo, carcinoma ductal in situ, e carcinoma lobulàr in situ.

Exemplos de cânceres do trato respiratório incluem, porém não são limitados a carcinoma de pulmão de célula pequena e célula não peque- na, bem como adenoma brônquico e blastoma pleuropulmonar.

Exemplos de cânceres cerebrais incluem, porém não são limita- dos a tronco cerebral e glioma hipoftálmico, cerebelar e astrocitoma cerebral, meduloblastoma, ependimoma, bem como tumor neuroectodérmico e pineal.

Tumores dos órgãos reprodutores masculinos incluem, porém não são limitados a câncer de próstata e testicular. Tumores dos órgãos re- produtores femininos incluem, porém não são limitados a câncer endometri- al, cervical, de ovário, vaginal, e vulvar, bem como sarcoma do útero.

Tumores do trato digestivo incluem, porém não são limitados a cânceres anal, cólon, colorretal, esofágico, de vesícula biliar, gástrico, pan- creático, retal, intestino delgado, e glândula salivar.

Tumores do trato urinário incluem, porém não são limitados a cânceres de bexiga, peniano, rim, pelve renal, ureter, uretral e renal papilar humano.

Cânceres oculares incluem, porém não são limitados a melano- ma intraocular e retinoblastoma.

Exemplos de cânceres hepáticos incluem, porém não são limita- dos a carcinoma hepatocelular (carcinomas de célula hepática com ou sem variante fibrolamelar), colangiocarcinoma (carcinoma de dueto biliar intra- hepático), e colangiocarcinoma hepatocelular misto.

Cânceres de pele incluem, porém não são limitados a carcinoma de célula escamosa, sarcoma de Kaposi, melanoma maligno, câncer de pele de célula Merkel, e câncer de pele não melanoma.

Cânceres de cabeça e pescoço incluem, porém não são limita- dos a câncer laríngeo, hipofaríngeo, nasofaríngeo, orofaríngeo, câncer de lábio e cavidade oral e célula escamosa. Linfomas incluem, porém não são limitados a Iinfoma relacionado à AIDS, Iinfoma de não Hodgkin, Iinfoma de célula T cutânea, Iinfoma de Burkitt, doença de Hodgkin, e Iinfoma do siste- ma nervoso central.

Sarcomas incluem, porém não são limitados a sarcoma do teci- do mole, osteossarcoma, histiocitoma fibroso maligno, linfossarcoma, e rab- domiossarcoma.

Leucemias incluem, porém não são limitados à leucemia mielói- de aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, leuce- mia mielógena crônica, e leucemia de célula pilosa.

Estes distúrbios foram bem caracterizados em seres humanos, porém também existem com uma etiologia similar em outros animais, inclu- indo mamíferos, e podem ser tratados por administração de composições farmacêuticas da presente invenção.

O termo "tratar" ou "tratamento" como estabelecido em todo este documento é utilizado convencionalmente, por exemplo, o controle ou cuida- do de um indivíduo para o propósito de combater, aliviar, reduzir, abrandar, melhorar a condição de, etc., uma doença ou distúrbio, tal como um carci- noma.

O termo "indivíduo" ou "paciente" inclui organismos que são ca- pazes de sofrer de um distúrbio proliferativo celular ou que podem de outra maneira beneficiar-se da administração de um composto da invenção, tal como seres humanos e animais não humanos. Seres humanos preferidos incluem pacientes humanos sofrendo de ou propensos a sofrer de um dis- túrbio proliferativo celular ou estado associado, como descrito aqui. O termo "animais não humanos" inclui vertebrados, por exemplo, mamíferos, por e- xemplo, roedores, por exemplo, camundongos, e não mamíferos, tais como primatas não humanos, por exemplo, ovelha, cachorro, vaca, frangos, anfí- bios, répteis, etc.

Em todo este documento, devido à simplicidade, o uso de lin- guagem singular é dado preferência sobre linguagem plural, porém é geral- mente pretendida incluir a linguagem plural se não estabelecido de outra maneira. Por exemplo, a expressão "Um método de tratar uma doença em um paciente, compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1" é pretendida incluir o tratamento simultâneo de mais do que uma doença bem como a adminis- tração de mais do que um composto de acordo com a reivindicação 1.

invenção podem existir em formas estereoisoméricas (enantiômeros ou dias- tereômeros). A invenção portanto refere-se aos enantiômeros ou diastereô- meros e a suas respectivas misturas. Tais misturas de enantiômeros ou di- astereômeros podem ser separadas em constituintes estereoisomericamente unitários de uma maneira conhecida. Além disso, alguns dos compostos desta invenção têm uma ou mais ligações duplas, ou um ou mais centros assimétricos. Tais compostos podem ocorrer como racematos, misturas ra- cêmicas, enantiômeros simples, diastereômeros individuais, misturas diaste- reoméricas, e formas isoméricas duplas eis ou trans ou E ou Z. Todas as tais formas isoméricas destes compostos são expressamente inclusas na pre- sente invenção.

Dependendo de sua estrutura, os compostos de acordo com a

Em um aspecto, a invenção fornece um composto de fórmula (I)

<formula>formula see original document page 19</formula>

em que

m é 0, 1, ou 2;

η é 0, 1, 2, ou 3;

q é 0 ou 1;

R1 representa H, (Ci-C4)alquila, ou halo;

R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1-

C4)alquila, -0(C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila;

R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, (C1- C4)alquila, etinila, propargila, e '-O(CH2)pAr, em que ρ é 0, 1, ou 2, e Ar re- presenta fenila, piridila, tiazolila, tiofenila, ou pirazinila, e em que Ar opcio- nalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; ou

<formula>formula see original document page 20</formula>

pela fórmula y, em que Ar' e Ar" cada qual represen- ta fenila, piridila, tiazolila, tienila, ou pirazinila e em que Ar' e Ar" cada qual opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consis- tindo em (C1-C4)alquila e halo;

R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, (C1- C4)alquila, -O(C1-C4)-alquila, halo, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila;

R5 representa H ou halo;

quando η é 0, R7 é H;

quando η é 1, 2 ou 3, R7 representa:

H;

hidroxila;

-NR12R13 em que

R12 representa H ou (C1-C6)alquila que opcionalmente transporta 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino; e

<formula>formula see original document page 20</formula>

em que R14 é hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1- C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente e opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; <formula>formula see original document page 21</formula>

Ν—' que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1- C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente e opcionalmen- te transportando um substituinte de hidroxila; e em que r é 0, 1, ou 2;

<formula>formula see original document page 21</formula>

X representa O, S(O)s, ou NR151 em que s é 0, 1 ou 2; e R15 representa (C1-C4)alquila;

<formula>formula see original document page 21</formula>

quando η = 2, R7 e R9 podem ser unidos, e empregados junta- C1-C4mente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados e os átomos de carbono intermediários, formam um anel de estrutura R16 em que R16 representa (C1-C4)alquila;

R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila;

R9 representa H ou -CH2-Y, em que Y é mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, ou R10 representa H;

ou

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Em certas modalidades de fórmula (I), m é 0. Em certas modali- dades, η é 1. Em certas modalidades, q é 0. Em certas modalidades de fórmula (I), R1 é hidrogênio ou fluoro; R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1-C4)alquila, e (C2-C4)alquinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e *- O(CH2)pAr1 em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode op- cionalmente ser substituído com 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é O ou 1; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, e halo; R5 é hidrogênio; e R7 é -NR12R13 em que R12 representa H ou (C1-C6)alquila, e R13 representa H ou (C1-C6)alquila.

Em certas modalidades de fórmula (I), R1 é H; R2 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e etinila; R3 é selecionado do grupo consis- tindo em H, halo, -CN, metila, e MD(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e (C1-C4)alquila; R5 é hidrogênio; e R7 é um grupo mono- ou di- ((Cr C4)alquil)amino. Em certas modalidades, R2 é etinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e MD(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; e R4 é hidrogênio.

Em certas modalidades de fórmula (I), R2 é halo; e R3 é selecio- nado do grupo consistindo em H, halo, e MD(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1. Em certas modalidades, R3 é halo.

Em certas modalidades, R9 e R10 não são tomados juntos para formar uma ligação acetilênica; em vez disso, R9 representa H ou -CH2-Y,

<formula>formula see original document page 22</formula>

em que Y é mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, ou ; e R10 representa H.

Em certas modalidades, R9 e R10 são tomados juntos para for- mar uma ligação, resultando em uma ligação acetilênica. Nestas modalida- des, os compostos da invenção podem ser representados pela Fórmula (Ia): <formula>formula see original document page 23</formula>

em que m, n, q, e R1 - R51 e R7 - R8 são como definidos acima para a Fór- mula (I), exceto que R7 não pode ser unido com R9 (nestas modalidades, R9 e R10 de fórmula (I) foram unidos, resultando em uma ligação tripla carbono- carbono, como mostrado na Fórmula (Ia)).

do grupo consistindo em: N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-[(2E)-4- (dietilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4- amina; N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2- enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro- 4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-

tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)- 7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3- d]pirimidin-4-amina;7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-N-(3-etinilfenil)- 5,6,7,8- tetraidropirido[4,,3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; 7-[(2E)-4- (dimetilamino)but-2-enoil]-N-(3-etinilfenil)-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-{(2E)-4-[isopropil(metil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8- tetraidropirido[4,,3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)- 7-{(2E)-4-[etil(isopropil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8- tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3,4-diclorofenil)-7- [(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3- d]pirimidin-4-amina;eN-(3,4-diclorofenil)-7-{(2E)-4- [isopropil(metil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3- d]pirimidin-4-amina.

Em outro aspecto, a invenção fornece um composto selecionado (i) reagir um composto de fórmula (7) <formula>formula see original document page 24</formula>

<formula>formula see original document page 24</formula>

em que R7, R9 e R10 e η têm os significados indicados acima, e X é hidróxi, cloro ou bromo; ou

(ii) reagir um composto de fórmula (9)

<formula>formula see original document page 24</formula>

em que R1 a R5, R8 a R10, m, η e q têm os significados indicados acima, e LG é um grupo de saída, com um composto de fórmula R7-H, em que R7 tem o significado indicado acima; ou

(iii) reagir um composto da fórmula (14):

<formula>formula see original document page 24</formula>

com um composto da fórmula (15): <formula>formula see original document page 25</formula>

sob condições de modo que um composto de fórmula (I) seja preparado.

Compostos (7), (9), e (14) como descritos acima são intermediá- rios úteis para preparar um composto de fórmula (I). Por esta razão, eles são também parte da presente invenção.

Será também entendido que materiais de partida são comerci- almente disponíveis ou facilmente preparados por métodos padrão bem co- nhecidos na técnica. Tais métodos incluem, porém não são limitados às transformações listadas aqui.

Se não mencionado de outra maneira, as reações são habitual- mente realizadas em solventes orgânicos inertes que não mudam sob as condições reacionais. Estes incluem éteres, tal como éter dietílico, 1,4- dioxano ou tetraidrofurano, hidrocarbonetos halogenados, tal como dicloro- metano, triclorometano, tetracloreto de carbono, 1,2-dicloroetano, tricloroe- tano ou tetracloroetano, hidrocarbonetos, tal como benzeno, tolueno, xileno, hexano, cicloexano ou frações de óleo mineral, álcoois, tal como metanol, etanol ou iso-propanol, nitrometano, dimetilformamida ou acetonitrila. É tam- bém possível utilizar misturas dos solventes.

As reações são geralmente realizadas em uma faixa de tempe- ratura de 0°C a 150°C, preferivelmente de O0C a 70°C. As reações podem ser realizadas sob pressão atmosférica, elevada ou reduzida (por exemplo, de 50 a 500 kPa (0,5 a 5 bar)). Em geral, elas são realizadas sob pressão atmosférica de ar ou gás inerte, tipicamente nitrogênio.

Os compostos da invenção podem ser preparados por uso de procedimentos e reações químicas conhecidas. Apesar disso, os seguintes métodos preparativos gerais são apresentados para ajudar ao leitor na sín- tese dos referidos compostos, com exemplos particulares mais detalhados sendo apresentados abaixo na seção experimental descrevendo os exem- plos. A preparação de um composto da presente invenção pode ser ilustrada por meio do seguinte esquema sintético (I):

Esquemas (I) e (II) descrevem a síntese de certos compostos de fórmula (I).

Esquema Sintético (I)

<formula>formula see original document page 26</formula>

Como mostrado no Esquema I, piperidinona (1) é acoplada com um éster cianoacético apropriado (ii) na presença de enxofre elementar e uma base tal como morfolina, preferivelmente em temperatura ambiente, para produzir o éster aminotiofeno de fórmula (2) de acordo com o procedi- mento de Gewald, J. Heterocvclic Chem., 1999, 36, 333-345. O éster de a- minotiofeno (2) é em seguida convertido em um composto de fórmula (3) por reação com um reagente contendo formamida tal como formamida pura, ou acetato de formamidina, em um solvente polar tal como DMF, com aqueci- mento, preferivelmente a 100°C ou acima. Aquecimento do composto de fórmula (3) com um reagente tal como oxicloreto fosforoso fornece o com- posto (4) que pode ser reagido com uma variedade de anilinas substituídas (5), cada das quais é facilmente disponível ou pode ser sintetizada por mé- todos bem conhecidos na técnica, na presença de uma quantidade catalítica de ácido concentrado, tal como HCl, e um solvente prótico, tal como etanol, álcool isopropílico para produzir o composto (6). Desproteção do grupo de proteção sob condições acídicas fornece o composto de fórmula (7) que re- age com o reagente (10) sob condições bem estabelecidas clássicas para fornecer o composto de fórmula (I) em que o R7 é como especificado acima.

Alternativamente, o composto de fórmula (7) pode reagir com o reagente (8) que contém o grupo de saída (LG) ou grupo funcional convertível em LG pa- ra fornecer o composto (9). Deslocamento do grupo de saída na Fórmula (9) com R7-H em seguida fornece o composto de fórmula (I).

Esquema Sintético (II)

Como mostrado no Esquema II, o composto (4) foi tratado com condições acídicas para desproteger o grupo Boc e o intermediário resultan- te (11) foi acoplado com o aminoácido (12) (preparado de acordo com WO 2004066919) para fornecer o composto (13) que pode ser reagido com uma variedade de anilinas substituídas (5), cada das quais é facilmente disponí- vel ou pode ser sintetizada por métodos bem conhecidos na técnica, na pre- sença de uma quantidade catalítica de ácido concentrado, tal como HCl, e um solvente prótico, tal como etanol, álcool isopropílico para produzir o com- posto de fórmula (I).

Composições Farmacêuticas e Métodos de Tratamento

Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição farma- cêutica compreendendo um composto de fórmula (I) como definido acima, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável. Em certas modali- dades, a composição farmacêutica é fornecida em uma forma adequada pa- ra administração intravenosa.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um processo para preparar uma composição farmacêutica. O processo inclui a etapa de com- preendendo combinação de pelo menos um composto de fórmula (I) como definido acima com pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável, e transportando a combinação resultante em uma forma de administração a- dequada.

Em outra modalidade, a invenção fornece um método de tratar um distúrbio proliferativo celular em um paciente em necessidade de tal tra- tamento, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) como acima. Em certas modalidades, o distúrbio proliferativo celular é câncer.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece o uso de um com- posto de fórmula (I) como definido acima para fabricação de uma composi- ção farmacêutica para o tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferati- vo celular. Em certas modalidades, o distúrbio proliferativo celular é câncer.

Quando os composto(s) da invenção são administrados como produtos farmacêuticos, a seres humanos e animais, eles podem ser forne- cidos por si próprios ou como uma composição farmacêutica contendo, por exemplo, 0,1 a 99,5% (mais preferivelmente, 0,5 a 90%) de ingrediente ativo em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.

Independente da rotina de administração selecionada, o com- posto da(s) invenção(ões), que pode ser utilizado em uma forma hidratada adequada, e/ou as composições farmacêuticas da presente invenção, são formuladas em formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis por méto- dos convencionais conhecidos por aqueles versados na técnica.

Níveis de dosagem reais e o curso de tempo de administração dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas da invenção podem ser variados a fim de obter uma quantidade do ingrediente ativo que é eficaz para alcançar a resposta terapêutica desejada para um paciente particular, composição, e modo de administração, sem ser tóxica ao paciente. Uma fai- xa de dose exemplar é de 0,1 a 10 mg/kg por dia ou 0,1 a 15 mg/kg por dia.

Em certas modalidades, o composto da invenção pode ser utili- zado em terapia de combinação com quimioterapêuticos de câncer conven- cionais. Regimes de tratamento convencionais para leucemia e para outros tumores incluem radiação, fármacos, ou uma combinação de ambos.

Determinação de uma quantidade antiproliferativa terapeutica- mente eficaz ou uma quantidade antiproliferativa profilaticamente eficaz do composto da invenção, pode ser facilmente feita pelo médico ou veterinário (o "clínico assistente"), como alguém versado na técnica, pelo uso de técni- cas conhecidas e por observação de resultados obtidos sob circunstâncias análogas. As dosagens podem ser variadas dependendo das necessidades do paciente no diagnóstico do clínico assistente; da severidade da condição sendo tratada e do composto particular sendo empregado. Na determinação da dose ou quantidade antiproliferativa terapeuticamente eficaz, e a dose ou quantidade antiproliferativa profilaticamente eficaz, diversos fatores são con- siderados pelo clínico assistente, incluindo, porém não limitados a: o distúr- bio proliferativo celular específico envolvido; características farmacodinâmi- cas do agente particular e seu modo e via de administração; o curso de tem- po desejado de tratamento; a espécie de mamífero; seu tamanho, idade, e saúde geral; a doença específica envolvida; o grau de ou envolvimento ou a severidade da doença; a resposta do paciente individual; o composto parti- cular administrado; o modo de administração; as características de biodispo- nibilidade da preparação administrada; o regime de dose selecionado; o tipo de tratamento concomitante (isto é, a interação do composto da invenção com outros terapêuticos coadministrados); e outras circunstâncias relevan- tes.

O tratamento pode ser iniciado com dosagens menores, que são menos do que a dose ideal do composto. Por conseguinte, a dosagem pode ser aumentada por pequenos incrementos até o efeito ideal sob as circuns- tâncias ser alcançado. Por conveniência, a dosagem diária total pode ser dividida e administrada em porções durante o dia se desejado. Uma quanti- dade terapeuticamente eficaz e uma quantidade antiproliferativa profilatica- mente eficaz de um composto da invenção podem ser esperadas variar de cerca de 0,1 miligrama por quilograma de peso corporal por dia (mg/kg/dia) a cerca de 100 mg/kg/dia.

Uma dose preferida do composto da invenção para a presente invenção é o máximo que um paciente pode tolerar e não desenvolver sérios efeitos colaterais. Ilustrativamente, o composto da invenção da presente in- venção é administrado em uma concentração de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal, cerca de 0,01 - cerca de 10 mg/kg ou cerca de 0,1 mg/kg - cerca de 10 mg/kg de peso corporal. Fai- xas intermediárias aos valores relacionados acima são também pretendidas fazer parte da invenção.

A. Exemplos

Abreviações e Acrônimos

Quando as seguintes abreviações são utilizadas em toda a des- crição, elas têm os seguintes significados:

CDCI3-Of clorofórmio-d

CD2CI2-CZ2 cloreto de metileno-d2

Celite® marca comercial registrada de Celite Corp. marca de terra dia-tomácea

CH3CN acetonitrila

DCM cloreto de metileno

DIPEA diisopropiletilamina

DMF N,N-dimetil formamida DMSO-d6 dimetilsulfóxido-c/e

EtOAc acetato de etila

equiv equivalente(s)

h hora(s)

1HRMN ressonância magnética nuclear por próton

HCl ácido clorídrico

Hex hexanos

HPLC cromatografia líquida de desempenho elevado

IPA álcool isopropílico

LCMS cromatografia líquida / espectroscopia de massa

MeOH metanol

min minuto(s)

MS espectrometria de massa

Na2C03 carbonato de sódio

NaHCOs bicarbonato de sódio

Na2SO4 Sulfato de Sódio

NMP N-Metilpirrolidinona

Rf fator de retenção de TLC

rt temperatura ambiente

RT tempo de retenção (HPLC)

satd saturado

TFA ácido trifluoroacético

THF tetraidrofurano

TLC cromatografia de camada fina

Procedimentos Analíticos Gerais

A estrutura de compostos representativos desta invenção foi confirmada utilizando-se os seguintes procedimentos.

Espectros de massa de eletrovaporização-cromatografia líquida de pressão elevada (LC-MS) foram obtidos utilizando-se um dos três siste- mas de LC/MS analíticos (BRLCQ1, 2 e 5) com condições especificadas a- baixo:

(A) BRLCQ1 & 2: Hewlett-Packard 1100 HPLC equipado com uma bomba quaternária, um detector de comprimento de onda variável esta- belecido em 254 nm, uma coluna Waters Sunfire C18 (2,1 χ 30 mm, 3,5 uM), um autoamostrador Gilson e um espectrômetro de massa de captura de íon Finnigan LCQ com ionização por eletrovaporização. Espectros foram esca- neados de 120-1200 amu utilizando-se um tempo de íon variável de acordo com o número de íons na fonte. Os eluentes foram A: 2% de acetonitrila em água com 0,02% de TFA e B: 2% de água em acetonitrila com 0,018% de TFA. Eluição gradiente de 10% de B para 95% durante 3,5 minutos em uma taxa de fluxo de 1,0 mL/min foi utilizada com um controle inicial de 0,5 minu- to e um controle final em 95% de B de 0,5 minuto. Tempo de realização total foi 6,5 minutos,

ou

(B) BRLCQ5: espectros de massa por eletrovaporização - HPLC (HPLC ES-MS) foram obtidos utilizando-se um sistema de HPLC Agilent 1100. O sistema de HPLC Agilent 1100 foi equipado com um autoamostra- dor Agilent 1100, bomba quaternária, um detector de comprimento de onda variável estabelecido em 254 nm. A coluna de HPLC utilizada foi uma Wa- ters Sunfire C18 (2,1 χ 30 mm, 3,5 uM). O eluente de HPLC foi diretamente acoplado sem divisão em um espectrômetro de massa de captura de íon Finnigan LCQ DECA com ionização por eletrovaporização. Espectros foram escaneados de 140-1200 amu utilizando-se um tempo de íon variável de acordo com o número de íons na fonte. Os eluentes foram A: 2% de acetoni- trila em água com 0,02% de TFA e B: 2% de água em acetonitrila com 0,02% de TFA. Eluição gradiente de 10% de B para 90% de B durante 3,0 minutos em uma taxa de fluxo de 1,0 mL/min foi utilizada com um controle inicial de 1,0 minuto e um controle final em 95% de B de 1,0 minuto. Tempo de realização total foi 7,0 minutos.

Espectroscopia de RMN unidimensional de rotina é realizada em espectrômetros de 300 MHz Varian® Mercury-plus ou de 400 MHz Varian® Mercury-plus. As amostras foram dissolvidas em solventes deuterados obti- dos de Cambridge Isotope Labs®, e transferidas para tubos de RMN ID Wil- mad® de 5 mm. Os espectros foram adquiridos em 293 K. Os deslocamentos químicos foram registrados na escala de ppm e foram referenciados para os sinais de solvente apropriados, tais como 2,49 ppm para DMSO-d6, 1,93 ppm para CD3CN-d3, 3,30 ppm para CD3OD-d4, 5,32 ppm para CD2CI2-Cf4 e 7,26 ppm para CDCI3-d para espectros de 1H. Os espectros de RMN foram compatíveis com as estruturas químicas mostradas.

Os produtos finais foram algumas vezes purificados por HPLC utilizando-se as seguintes condições:

Sistema de HPLC Gilson® equipado com duas bombas Gilson 333/334, um Autoamostrador Gilson 215, um detector de disposição de dio- do Gilson® UV modelo 155 (comprimento de onda dual), uma coluna de 5 mícrons de 75 χ 30 mm fenomenex Gemini. Os eluentes foram A: água com 0,1% de NH4OH e B: acetonitrila. Eluição gradiente de 10% de B para 90% de B durante 14 minutos em uma taxa de fluxo de 100 mL/min. Coleção dis- parada por UV em 220 nm com sensibilidade 0,5.

Preparação de Materiais de Partida

Preparação de brometo de 4-Bromo-but-2-enoíla

<formula>formula see original document page 33</formula>

A uma solução de ácido 4-Bromo-crotônico (700 mg, 4,24 mmols) em DCM (10 mL)/ DMF (1 gota) foi adicionado brometo de oxalila (2 M em DCM, 2,33 mL, 4,67 mmols, 1,1 equiv). A mistura reacional foi aqueci- da a 40°C durante 6 h. A reação foi deixada resfriar em temperatura ambien- te em seguida concentrada em vácuo. O material bruto foi utilizado na pró- xima etapa de reação sem outra purificação. 1H RMN (CD2CI2-d2) δ 7,22 (m, 1H), 6,28 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 1,3, 7,2 Hz, 2H).

Preparação de 3-cloro-4-(3-fluoro-benzilóxi)-fenilamina

<formula>formula see original document page 33</formula>

A 90 mL de CH3CN foi adicionado 2-cloro-4-nitrofenol (15 g, 86,4 mmols) seguido por carbonato de potássio (17,9 g, 129,6 mmols). À suspen- são em agitação foi adicionada por meio de funil de gotejamento uma solu- ção de CH3CN de 10 mL de 3-fluoro-benzilbrometo (16,3 g, 86,4 mmols). Os conteúdos foram agitados e aquecidos a 70°C durante 18 h, após cujo tem- po a mistura amarela clara foi deixada resfriar em temperatura ambiente. Os conteúdos amarelos foram vertidos em água (200 mL) e agitados, em que a formação de sólido ocorre. O sólido foi filtrado e a massa filtrante lavada com água adicional (50 mL). O sólido coletado foi secado em vácuo, produzindo 2-cloro-1-(3-fluoro-benzoilóxi)-4-nitro-benzeno (23 g, 94%) como um sólido branco.

2-Cloro-1-(3-fluoro-benzoilóxi)-4-nitro-benzeno (10 g, 35,5 mmols) foi suspenso em 50 mL de ácido acético e 150 mL de EtOAc em um frasco de 500 mL. Ferro (9,9 g, 177,5 mmols) foi adicionado a esta suspen- são, e a mistura agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada fina de Celite®. O filtrado foi concentrado em vácuo e neutralizado com solução aquosa de Na2C03 satu- rada, seguido por extração de EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na2S04, e concentrada em vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia instantânea eluindo com 15% de EtOAc/hexanos produzindo 3-cloro-4-(3-fluoro-benzilóxi)-fenilamina como um sólido marrom [8,5 g, 95%, TLC Rf = 0,4, 30% de EtOAc/Hex. (3:7)]. 1H- RMN (DMSO-Ci6) δ 4,94 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 6,40 (dd, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,87 (d, 1H), 7,10 - 7,18 (m, 1H), 7,20 - 7,28 (m, 2H), 7,37 - 7,44 (m, 1H).

Preparação de 3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamina

<formula>formula see original document page 34</formula>

2-cloro-4-nitro fenol (10 g, 57,6 mmols, 1 equiv), cloreto de hi- drogênio de cloreto de 2-picolila (9,45 g, 57,6 mmols, 1 equiv), carbonato de césio (41,3 g, 126,8 mmols, 2,2 equiv) e iodeto de sódio (8,64 g, 57,6 mmols, 1 equiv) foram suspensos em 200 mL de acetonitrila. A mistura reacional foi agitada a 60°C durante 5 h. A suspensão resultada foi filtrada e lavada com água (400 mL), produzindo 2-(2-cloro-4-nitro-fenoximetil)-piridina (8 g, 52%) como um sólido vermelho. 2-(2-cloro-4-nitro-fenoximetil)-piridina (8 g, 30,2 mmols, 1 equiv) e ferro (8,44 g, 151,1 mmols, 5 equiv) foram misturados em ácido acético (100 mL ) e EtOAc (50 mL) e foram agitados em temperatura ambiente du- rante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de Celite®. O filtrado foi concentrado em vácuo e neutralizado com solução de Na2CO3 saturada. A solução foi extraída com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com salmoura e concentrada em vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia instantânea eluindo com EtOAc/hexano (3:7) para fornecer 3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamina (3,2 g, 52%) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCI3-d) δ 5,18 (s, 2H), 6,50 (dd, 1H), 6,76 (d, 1H),. 6,80 (d, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,73 (td, 1H), 8,55 (m, 1H); LCMS RT = 0,89 min, [M+H]+ = 235,1.

Preparação de 5-amino-1-N-(3-fluorobenzil) indazol

<formula>formula see original document page 35</formula>

5-nitroindazol (15 g, 92 mmols, 1 eq), 3-fluorobenzilbrometo (14,7 mL, 119,5 mmols, 1,3 eq) e carbonato de potássio (25,4 g, 184 mmols, 2 equiv) foram suspensos em 150 mL de acetonitrila. A mistura reacional foi agitada a 70°C durante 12 h, e em seguida deixada resfriar em temperatura ambiente. O sólido resultante foi filtrado e lavado com CH2Cb, e o filtrado concentrado em vácuo. A mistura bruta de produtos regioisoméricos foi puri- ficada por cromatografia de coluna (5:1 a 4:1 de Hex/EtOAc), produzindo 5- nitro-1-N-(3-fluorobenzil) indazol (7,9 g, 32%) e 5-nitro-2-N-(3-fluorobenzil) indazol (9,2 g, 37%) como sólidos amarelos.

5-nitro-1-N-(3-fluorobenzil) indazol (7,9 g, 29,1 mmols, 1 equiv) e ferro (8,13 g, 145,6 mmol, 5 equiv) foram misturados em 200 mL de ácido acético e 50 mL de EtOAc1 e foram agitados em temperatura ambiente du- rante 36 h. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de Celi- te®. O filtrado foi concentrado em vácuo para volume de 10 mL. Os conteú- dos foram diluídos com água (10 mL) e neutralizados com solução de Na2CO3 saturada. A solução foi extraída com EtOAc (3 χ 500 mL), as cama- das orgânicas combinadas secadas sobre MgSO4, filtradas, e concentradas em vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia de co- luna eluindo com hexanos/EtOAC (4:1 a 3:1) para fornecer 5-amino-1-N-(3- fluorobenzil) indazol (5,32 g, 76%) como um sólido marrom-claro. 1H-RMN (DMSO-Cf6) δ 7,72 (s, 1H), 7,22 - 7,36 (m, 2H), 6,87 - 7,05 (m, 3H), 6,70 - 6,77 (m, 2H), 5,48 (s, 2H), 4,78 (br s, 2H); LCMS RT = 1,66 min; [M+Hf = 242,2.

1-Piridin-2-ilmetil-1H-indazol-5-ilamina foi preparado utilizando- se o mesmo método descrito acima e os reagentes apropriados; LC/MS RT = 1,03 min; [M+H]+= 225,2.

Preparação de 3-cloro-4-l"(6-metilpiridin-2-il)metóxi1anilina

<formula>formula see original document page 36</formula>

A 35 mL de CH3CN foi adicionado (6-Metil-piridin-2-il)-metanol (3,5 g, 28,4 mmols), seguido por carbonato de potássio (17,9 g, 129,6 mmols), e 2-Cloro-1-fluoro-4-nitrobenzeno (6,48 g, 36,9 mmols). A suspen- são foi agitada e aquecida a 70°C durante 30 h, após cujo tempo a mistura amarela clara foi deixada resfriar em temperatura ambiente. Os conteúdos foram resfriados em temperatura ambiente, filtrados, e lavados com CHhCl2.

O filtrado foi concentrado em vácuo para um sólido amarelo claro que foi triturado com Hex/EtOAc (5:1), produzindo 2-[(2-cloro-4-nitrofenóxi)metil]-6- metilpiridina (4,87 g, 61%) como um sólido branco.

2-[(2-cloro-4-nitrofenóxi)metil]-6-metilpiridina (4,87 g, 17,5 mmols) e pó de ferro (4,87 g, 87,4 mmols) foram misturados em 150 mL de ácido acético, e foram agitados em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de Celite®, e lavada com EtOAc. O filtrado foi concentrado em vácuo e neutralizado com solução de Na2CO3 saturada. Os conteúdos foram extraídos com EtOAc (5 χ 300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, se- cadas sobre MgSO4, filtradas, e concentradas em vácuo. O material bruto resultante foi triturado com Hex/EtOAc (2:1) para fornecer 3-cloro-4-[(6- metilpiridin-2-il)metóxi]anilina (3,84 g, 88%) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO) δ 7,70 (dd, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 6,88 (d, 1H), 6,65 (d, 1H), 6,44 (dd, 1H), 5,01 (s, 2H), 4,93 (s, 2H), 2,46 (s, 3H); LCMS RT = 0,25 min; [M+Hf = 249,2.

Exemplo 1

Preparação de 1-(4-r3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino1-5,8-diidro-6H-9- tia-1,3,7 triaza-fluoren-7-ilM-morfolin-4-il-but-2-en-1-ona

<formula>formula see original document page 37</formula>

Etapa 1. Preparação de éster 3-etílico de éster 6-terc-butílico de ácido 2- Amino-4,7-diidro-5H-tienor2,3-clpiridina-3,6-dicarboxílico

<formula>formula see original document page 37</formula>

A uma solução de 1-Boc-4-piperidona (25,0 g, 123 mmols) em etanol (100 mL) foram adicionados cianoacetato de etila (14,2 g, 123 mmols, 1 equiv), dietilamina (12,72 mL, 123 mmols, 1 equiv), e enxofre (4,14 g, 129 mmols, 1,05 equiv). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h em seguida filtrada e lavada com etanol (25 mL) para obter um sólido branco (33,11 g, 102 mmols, 83%). 1H RMN (DMSO-cfe) δ 7,31 (s amplo, 2H), 4,22 (s, 2H), 4,13 (q, 2H), 3,49 (t, 2H), 2,63 (t, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,23 (t, 3H); LCMS RT = 3,49 min, [M+H]+ = 326,7.

Etapa 2. Preparação de éster terc-butílico de ácido 4-Qxo-3,5,6,8-tetraidro- 4H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoreno-7-carboxílico

<formula>formula see original document page 37</formula>

A uma solução de éster 3-etílico de éster 6-terc-butílico de ácido 2-Amino-4,7-diidro-5H-tieno[2,3-c]piridina-3,6-dicarboxílico (5,0 g, 15 mmols) em DMF (50 mL) foi adicionado acetato de formamidina (2,39 g, 23 mmols, 1,5 equiv). A mistura foi aquecida a 100°C em um banho de óleo durante a noite. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente e em segui- da concentrada em vácuo. Acetato de etila (50 mL) foi adicionado à mistura sólida reacional e agitado em temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi em seguida filtrada, enxaguada com acetato de etila (25 mL). O sólido foi colocado em um forno a vácuo e secado durante a noite para produzir um sólido branco (4,17 g, 90,6%). 1H RMN (CD3OD-Cf4) δ 8,05 (s, 1H), 4,57 (s, 2H), 3,61 (t, 2H), 2,92 (t, 2H), 1,42 (s, 9H); LCMS RT = 2,78 min, [M+H]+ =308,0.

Etapa 3. Preparação de éster terc-butílico de ácido 4-Cloro-5,8-diidro-6H-9- tia-1,3,7-triaza-fluoreno-7-carboxílico

<formula>formula see original document page 38</formula>

trietilamina (30 mL) durante 15 minutos a O0Csob argônio. Éster terc-butílico de ácido 4-oxo-3,5,6,8-tetraidro-4H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoreno-7-carboxílico (4,20 g, 14 mmols) foi em seguida adicionado ao frasco. A mistura reacional foi agitada a O0C durante 30 minutos em seguida aquecida a 65°C durante 2 h. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente antes de ser concentrada em vácuo. O resíduo foi coevaporado com tolueno (2 χ 200 mL). DCM (50 mL) foi adicionado ao resíduo sólido e a mistura reacional foi saciada com gelo/NaHC03 aquoso saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM (3 χ 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas em vácuo para produzir 4,08 g (12,5 mmols, 89%) de um sólido amarelo claro. 1H-RMN (CD2Cl2-Cfe) δ 8,74 (s, 1H), 4,74 (s, 2H), 3,78 (t, 2H), 3,19 (t, 2H), 1,49 (s, 9H); LCMS RT = 3,53 min, [M+H]+ = 326,0.

Etapa 4. Preparação de éster terc-butílico de ácido 4-[3-Cloro-4-(piridin-2- ilmetóxi)-fenilamino1-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoreno-7-carboxílico <formula>formula see original document page 39</formula>

A uma solução de éster terc-butílico de ácido 4-Cloro-5,8-diidro- 6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoreno-7-carboxílico (3,08 g, 9,40 mmols, 1,05 equiv) em 40 mL de álcool isopropílico foi adicionado 3-Cloro-4-(piridin-2- ilmetóxi)fenilamina (2,10 g, 9,0 mmols, 1 equiv) em temperatura ambiente. 4 N de HCI em dioxano (0,1 mL) foram adicionados à mistura reacional para acelerar a reação. A mistura reacional foi aquecida a 80°C durante 16 h. A mistura foi deixada resfriar em temperatura ambiente em seguida filtrada e lavada com IPA (50 mL). DCM (100 mL) e bicarbonato de sódio sat. (100 mL) foram adicionados ao sólido. A mistura foi agitada em temperatura am- biente durante 1 h antes das camadas serem separadas. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo para pro- duzir 4,50 g de material bruto. O material bruto foi purificado por cromatogra- fia instantânea (50 % de THF/DCM) para produzir um amarelo claro (3,60 g, 6,87 mmol, 76%) como produto. 1H-RMN (DMSO-CZ6) δ 9,32 (s amplo, 1H), 8,67 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,05 (t, 1H), 7,79 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,53 (t, 1H), 7,24 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 5,35 (s, 2H), 4,66 (s, 2H), 3,66 (t, 2H), 3,19 (t, 2H), 1,43 (s, 9H); LCMS RT = 3,39 min, [M+H]+ = 524,0.

Etapa 5. Preparação de f3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenil1-(5,6,7.8-tetraidro- 9-tia-1,3.7-triaza-fluoren-4-il)-amina

<formula>formula see original document page 39</formula>

A uma solução de éster terc-butílico de ácido 4-[3-Cloro-4- (piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino]-5,8-diidro-6H-9-tia-1,37-triaza-fluore carboxílico (3,6 g, 6,87 mmols) em DCM (45 mL) foi adicionado TFA (5,2 mL, 68,7 mmols, 10 equiv). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambi- ente durante 8 h. A mistura de solução foi concentrada em vácuo. Ao resí- duo foi adicionada solução de NaHCO3 sat. e agitado em temperatura ambi- ente durante 1,5 h. A mistura foi em seguida filtrada e lavada com água. O sólido úmido foi colocado em um forno a vácuo e secado durante a noite pa- ra produzir um sólido amarelo (2,0 g, 67%). 1H RMN (DMSO-d6) δ 9,41 (s amplo, 2H), 8,71 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,11 (t, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,57 (m, 1H), 7,53 (dd, J = 2,7, 9,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 5,35 (s, 2H), 4,48 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 3,41 (m, 2H); LCMS RT = 2,11 min, [M+Naf = 446,1.

Etapa 6. Preparação de 3-Bromo-1-{4-f3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)- fenilamino1-5.8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il)-propenona

<formula>formula see original document page 40</formula>

A uma solução de [3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenil]-(5,6,7,8- tetraidro-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-4-il)-amina (266 mg, 0,63 mmol) em THF (4 mL)/NMP (0,8 mL) foi adicionado DIPEA (0,13 mL, 0,75 mmol, 1,2 equiv) e a solução foi resfriada para O0C. À mistura reacional foi adicionada gota a gota solução de brometo de 4-Bromo-but-2-enoíla (217 mg, 0,75 mmol, 1,2 equiv) em THF (2 mL). A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h. A mistura reacional foi dividida entre NaHCO3 sat. (25 mL) e EtOAc (50 mL). A camada orgânica foi lavada com água (25 mL) e salmoura (25 mL), secada sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada em vácuo. O material bruto foi utilizado para a próxima etapa de reação sem outra purificação. LCMS RT = 2,89 min, [M+H]+ = 571,8.

Etapa 7. Preparação de 1-(4-[3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino]-5,8- diidro-6H-9-tia-1,3,7 triaza-fluoren-7-il)-4-morfolin-4-il-but-2-en-1-ona

<formula>formula see original document page 41</formula>

A uma solução de 3-Bromo-1-{4-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)- fenilamino]-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il}-propenona (50 mg, 0,09 mmol, 1 equiv) em DMF (0,5 mL) foram adicionados iodeto de sódio (14 mg, 0,09 mmol, 1 equiv), morfolina (76 mg, 0,9 mmol, 10 equiv). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 3 dias. A mistura reacional foi concentrada em vácuo em seguida re-suspensa em DCM (10 mL) e tratada com NaHCO3 saturado (10 mL) para gerar duas fases claras.

Extraiu-se a camada aquosa com DCM (2x10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio, filtradas, concentradas em vácuo. O material bruto resultante foi purificado por TLC prep (10% de meta- nol/DCM) para fornecer um sólido amarelo (12,4 mg, 0,02 mmol, 24%). 1H- RMN (CD2CI2 -d2) δ 8,50 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,69 (t, 1H), 7,54 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,32 (s amplo, 1H), 7,18 (m, 1H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,78 (m, 2H), 6,43 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 4,78 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 3,60 (m, 4H), 3,08 (m, 4H), 2,37 (m, 4H); LCMS RT = 2,18 min, [M+Hf = 577,2.

Exemplo 7

Preparação de N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]- 5,6,7.8-tetraidropirido[4',3':4.5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina triaza-fluoren-4-il)-amina

<formula>formula see original document page 41</formula>

Etapa 1. Preparação de (3-Cloro-4-fluoro-fenil)-(5,6,7,8-tetraidro-9-tia-1,3,7- triaza-fluoren-il)-amina <formula>formula see original document page 42</formula>

A uma mistura de éster terc-butílico de ácido 4-Cloro-5,8-diidro- 6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoreno-7-carboxílico (6,86 g, 0,021 mol) e 3-cloro-4- fluoroanilina (3,2 g, 0,022 mol) em 2-propanol (96 ml) foram adicionados 4 N de HCI em Dioxano (0,27 ml) e a mistura aquecida para 80-85°C durante a noite. LCMS e TLC (5% de MeOH/DCM) indicaram que nenhum SM (SM Boc-protegido) estava presente. 4 N de HCI em Dioxano (10,5 ml, 0,042 mol) adicionados e o aquecimento continuou até LCMS indicar nenhum produto Boc-protegido presente. Resfriada em temperatura ambiente e conc. até a secura. A mistura foi em seguida suspensa em diclorometano (200 ml) e agi- tada com 1 N de NaOH (200 ml) durante 30 min. Camadas bifásicas claras obtidas. Camadas separadas e a aquosa lavada com diclorometano (100 ml). Camadas orgânicas combinadas lavadas com água (2 χ 100 ml), em seguida com salmoura (100 ml). Secada a camada orgânica com sulfato de sódio, filtrada e conc. até a secura. Secada sob vácuo para fornecer 6,61 g (94%) do produto como indicado por LCMS e HNMR. 1H RMN (DMSO-CZ6) δ 8,41 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,92 (m, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,39 (t, J = 9,4 Hz, 1H), 3,94 (s amplo, 1H), 3,32 (m, 2H), 3,05 (m, 2H), 3,01 (m, 2H); LCMS RT = 2,13 min, [M+Hf = 335.

Etapa 2. 4-Bromo-1-f4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7- triaza-fluoren-7-il1-but-2-en-1-ona

A uma solução de ácido 4- Bromo crotônico (2,07 g, 0,012 mol) em diclorometano (48 ml) a 0-5°C foi adicionado cloroformiato de isobutila (1,70 ml, 0,013 mol) seguido por 4-metilmorfolina (1,40 ml, 0,013 mol) sob nitrogênio. Esta mistura foi agitada nesta temperatura durante uma hora. A suspensão resultante foi adicionada a uma solução resfriada de (3-Cloro-4- fluoro-fenil)-(5,6,7,8-tetraidro-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-4-il)-amina (4,0 g, 0,012 mol) em diclorometano (200 ml) durante um período de 10 min. Esta mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1,5 hora. TLC (10% de MeOH/DCM) mostra nenhum material de partida presente. A mistura foi utili- zada como tal em outra reação. LCMS RT = 3,55 min, [M+Hf = 483,04.

Etapa 3. N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8- tetraidropirído[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirímidin-4-amina

<formula>formula see original document page 43</formula>

Preparação de N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-((2E)-4-[isopropil(metil)e enoil)-5,6,7.8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina <formula>formula see original document page 44</formula>

A uma solução resfriada por banho de gelo de 4-Bromo-1-[4-(3- cloro-4-fluoro-fenilamino)-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3]-triaza-fluoren-7-il]-but-2- en-1-ona (0,14 g, 0,291 mmol) em diclorometano (4,0 ml) foi adicionado iso- propilmetilamina (0,121 ml, 1,16 m mol) seguido pela adição de DIEA (0,056 ml, 0,32 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. TLC (10% de MeOH/Diclorometano) indica nenhum material de partida presente. A mistura bruta foi tratada por evaporador rotativo até a secura, dissolvida em DMF e submetida a condições de HPLC [H2O (con- tendo 0,1% de NH4(DH)-MeCN] para fornecer o produto desejado (26 mg, 19%). 1H- RMN (DMSO-Ci6) δ 8,46 (m, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,42 (t, 1H), 6,67 (m, 1H), 3,94 (m, 2H), 3,87 (m, 4H), 2,75 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 0,96 (d, 6H); LCMS RT = 2,53 min, [M+H]+ = 474,1.

Utilizando-se os métodos descritos acima e os materiais de par- tida apropriados, os Exemplos 2-131, 186 e 188-210 foram similarmente preparados e listados na Tabela 1, juntamente com seus dados analíticos e nomes IUPAC.

Exemplo 132

Preparação de N-f3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenin-7-(5-piperidin-1 -ilpent-2- inoil)-5,6,7,8-tetraidropiridoí4',3':4.51tieno[2.3-d1pirimidin-4-amina

<formula>formula see original document page 44</formula>

A uma suspensão de [3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenil]-(5,6,7,8- tetraidro-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-4-il)amina (0,051 g, 0,00028 mol), ácido 5- Piperidin-1-il-pent-2-inóico (0,100 g, 0,00023 mol), tetrafluoroborato de O- (Benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (0,091g, 0,00028 mol) em mistu- ra de diclorometano/tetraidrofurano (1,2/1,2 ml) foi adicionado diisopropileti- lamina (0,123 ml, 0,001 mol) lentamente durante 15 min. A mistura agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. A reação foi julgada completa por TLC (Eluente: 10% de MeOH/DCM). A mistura reacional foi concentrada até a secura sob vácuo, dissolvida em MeOH (1,5 ml), filtrada e submetida à pu- rificação por HPLC de fase reversa para fornecer o produto desejado (0,087 g, 62,81%). 1H-RMN (CD2CI2) 88,60 (d, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,63 (d, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,04 (m, 2H), 5,25 (s, 2H), 4,98 (d, 2H), 4,05 (dd, 2H), 3,10 (d, 2H), 2,60 (m, 4H), 2,40 (m, 4H), 1,62 (m, 4H), 1,45 (m, 2H); LCMS RT = 2,37 min; [M+H]+ = 587,1.

Condições de separação por HPLC:

Column - Fenomenex gemini 75 χ 30 mm, 5 microns

Amostra dissolvida em 1,5 ml de metanol

Eluente - água/acetonitrila/0,1% de hidróxido de amônio @ 30

ml/min.; Gradiente 10-90 durante 20 minutos

Sensibilidade 0,25

Utilizando-se o método descrito acima e os materiais de partida apropriados, os Exemplos 133-142 foram similarmente preparados e listados na Tabela 1, juntamente com seus dados analíticos e nomes IUPAC.

Exemplo 143

Preparação de N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-(2- [(dietilamino)metil]acriloil}-5,6,7,8-tetraidropirido[4,3,4,5]tieno[2,3-d]pirimidin- 4-amina

<formula>formula see original document page 45</formula>

A uma suspensão de [3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenil]-(5,6,7,8- tetraidro-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-4-il)amina (0,053 g, 0,00034 mol), ácido 2- Dietilaminometil-acrílico (0,12 g, 0,00028 mol), tetrafluoroborato de O- (Benzotriazol-1-il)-N,N,N',N,-tetrametilurônio (0,109 g, 0,00033 mol) em mis- tura de diclorometano/tetraidrofurano (1,2,/1,2 ml) foi adicionado diisopropile- tilamina (0,148 ml, 0,001 mol) lentamente durante 15 min. A mistura foi agi- tada em temperatura ambiente durante 16-18 horas. A reação foi julgada completa por TLC (Eluente: 10% de MeOH/DCM). A mistura reacional foi concentrada até a secura sob vácuo, dissolvida em MeOH (1,5 ml), filtrada e submetida à purificação por HPLC de fase reversa para fornecer o produto desejado (0,0173 g, 11,0 %). 1H-RMN (CD2CI2) 58,60 (d, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,63 (d, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,04 (m, 2H), 5,38 (d, 2H), 5,25 (s, 2H), 4,85 (s, 2H), 4,05 (m, 2H), 3,20 (m, 4H), 2,52 (br, d, 4H), 0,98 (br, d, 6H); LCMS RT = 2,32 min; [M+H]+ = 563,1.

Condições de separação por HPLC: Coluna - Fenomenex gemini 75 χ 30 mm, 5 mícrons

Amostra dissolvida em 1,5 ml de metanol. Eluente - á- gua/acetonitrila/0,1% de hidróxido de amônio @ 30 ml/min.; Gradiente 20-80 durante 20 minutos. Sensibilidade 0,1.

Utilizando-se o método descrito acima e os materiais de partida apropriados, os Exemplos 144- 149 foram similarmente preparados e lista- dos na Tabela 1, juntamente com seus dados analíticos e nomes IUPAC.

Exemplo 150

Preparação de 1-(4-[3-Cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino1-5,8-diidro-6H-9- tia-1,3.7 triaza-fluoren-7-il)-4-morfolin-4-il-but-2-en-1-ona

<formula>formula see original document page 46</formula>

Etapa 1: Síntese de 2-but-3-enilóxi-tetraidro-pirano

<formula>formula see original document page 46</formula>

Em um frasco de base redonda de 1000 ml foram colocados 3- buten-1-ol (7,21 g, 100,00 mmols), 3,4-diidro-2H-pirano (12,62 g, 150,00 mmols) e p-toluenossulfonato de piridínio (2,51 g, 10,00 mmol) em 350 ml de diclorometano anidroso. A mistura reacional foi agitada em temperatura am- biente durante 4h. Em seguida a mistura reacional foi concentrada e o resí- duo foi purificado por coluna com Hexano/Acetato de etila= 100/5 para for- necer 13,90 g do produto desejado como um óleo (89,0%). 1H-RMN (DMSO- cfe) δ 5,851 - 5,742 (m, 1H), 5,103 - 5,011 (d, 1H), 4,997 - 4,985 (d, 1H), 4,555 - 4,537 (t, 1H), 3,745 - 3,611 (m, 2H), 3,433 - 3,347 (m, 2H), 2,290 - 2,236 (m, 2H), 1,698 -1,675 (m, 2H), 1,611 -1,566 (m, 4H).

Etapa 2: Síntese de ácido 5-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-pent-2-enóico

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em um frasco de base redonda de 500 ml foram colocados ácido acrílico (2,85 g, 39,6 mmols) e catalisador Grubbs (1,68 g, 1,98 mmol) em diclorometano anidroso (200 ml). A esta solução foi adicionado 2-but-3- enilóxi-tetraidro-pirano (7,73 g, 49,50 mmols) e aquecida ao refluxo durante 12 horas. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado sobre uma colu- na com Hexano/Acetato de etila = 100/5 para remover 2-but-3-enilóxi- tetraidro-pirano inalterado. Em seguida a coluna foi eluída com Acetato de etila/ Metanol = 100/1 para fornecer 6,66 g de um óleo preto (84%). 1H-RMN (DMSO-Ci6) δ 12,190 (s, 1H), 6,845 - 6,771 (m, 1H), 5,846 - 5,800 (d, 1H), 4,565 - 4,548 (t, 1H), 3,739 - 3,674 (m, 2H), 3,468 - 3,398 (m, 2H), 2,481 - 2,395 (m, 2H), 1,689 -1,609 (m, 2H), 1,501 - 1,259 (m, 4H).

Etapa 3: Síntese de 1-[4-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino]-5,8-diidro- 6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il]-5-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-pent-2-en-1-ona

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em um frasco de base redonda de 100 ml foram colocados [3- cloro-4-(piridina-2-ilmetóxi)-fenil]-(5,6,7,8-tetraidro-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren- 4-il)-amina (2,0, 4,71 mmols), ácido 5-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-pent-2-enóico (0,94 g, 4,71 mmols) e 0-(Benzotriazol-1-il)-N,N,N,,N'-tetrafluoroborato (1,81 g, 5,66 mmols) em diclorometano anidroso / THF (15 ml/15 ml) e resfriados a 0°C. A esta suspensão resfriada foi lentamente adicionado diisopropiletilami- na (1,83 g, 14,15 mmols) (2,5 ml) durante 15 minutos. Em seguida a mistura reacional foi aquecida em temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante 12 horas. A mistura reacional foi concentrada em temperatura ambiente (nenhum aquecimento) para remover diclorometano. Ao resíduo foi adicionado água e sólido branco acinzentado precipitado foi filtrado e lavado com água. O sólido branco acinzentado foi também suspenso em álcool metílico, sonicado, filtrado e secado para fornecer 2,26 g de sólido branco acinzentado (80,0%). Ele será transportado para a próxima etapa de reação sem qualquer purificação. 1H-RMN (DMSO-d6) δ 8,593 - 8,575 (m, 1H), 8,391 (s, 1H), 8,191 (s, 1H), 7,872 - 7,868 (m, 1H), 7,769 (s, 1H) 7,571 -7,498 (m, 2H), 7,369 - 7,329 (m, 1H), 7,236 - 7,214 (d, 1H), 6,779 - 6,607 (m, 2H), 5,274 (s, 2H), 4,946 - 4,835 (d, 2H), 4,572 (s, 1H), 3,928 - 3,730 (m, 2H), 3,504 - 3,402 (m, 2H), 3,313 - 3,204 (m, 4H), 1,673 - 1,434 (m, 8H). MS m/e 605,9 (M+H), RT = 3,02 min

Etapa 4: Síntese de 1-[4-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino]-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il]-5-hidróxi-pent-2-en-1-ona

<formula>formula see original document page 48</formula>

Em um frasco de base redonda de 250 ml foram colocados 1-[4-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino]-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il}-5-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-pent-2-en-1-ona (2,26 g, 3,73 mmols) e p-toluenossulfonato de piridínio (0,18 g, 0,74 mmol) em álcool etanol (100 ml). A mistura reacional foi aquecida a 80°C durante 12 horas. Álcool etílico foi evaporado e ao resíduo foi adicionado álcool metílico, sonicado e sólido não totalmente branco foi filtrado e lavado com álcool metílico, secado para fornecer 1,72 g de sólido não totalmente branco (88,40%). 1H-RMN (DMSO-d6) δ 8,587 - 8,578 (m, 1H), 8,396 (s, 1H), 8,182 (s, 1H), 7,887 - 7,849 (t, 1H), 7,769 (s, 1H), 7,570 - 7,501 (m, 2H), 7,368 - 7,356 (t, 1H), 7,231 - 7,209 (d, 1H), 6,779 - 6,607 (m, 2H), 5,271 (s, 2H), 4,944 (s, 1H), 4,834 (s, 1H), 4,661 (s, 1Η), 3,925 - 3,848 (d, 2Η), 3,519 (m, 2H), 3,245 - 3,206 (m, 2H), 2,360 (m, 2H). MS m/e 522,0 (M+H), RT = 2,54 min

Etapa 5: Síntese de éster 5-(4-r3-cloro-4-(piridina-2-ilmetóxi)-fenilamino1-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il)-5-oxo-pent-3-enílico de ácido meta-5 nossulfônico

<formula>formula see original document page 49</formula>

Em um frasco de base redonda de 250 ml foram colocados 1-[4- [3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino]-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il}-5-hidróxi-pent-2-en-1-ona (1,00 g, 1,91 mmol) em THF (80 ml) e à solução foi adicionado trietilamina (0,58 g, 5,74 mmols) (0,80 ml) seguido 10 por cloreto de metanossulfonila (0,54 g, 4,79 mmols) a O0C. A mistura rea-cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. THF foi evaporado e ao resíduo foi adicionada água e pequena quantidade de álcool metí-lico, sonicado. O sólido precipitado não totalmente branco foi filtrado, lavado com álcool metílico e secado para fornecer 0,63 g de sólido não totalmente 15 branco. (55%) 1H-RMN (DMSO-d6) δ 8,601 - 8,585 (m, 1H), 8,394 (s, 1H), 8,196 (s, 1H), 7,906 - 7,864 (m, 1H), 7,769 (s, 1H), 7,584 - 7,564 (d, 1H), 7,523 - 7,501 (d, 1H), 7,388 - 7,357 (m, 1H), 7,239 - 7,216 (d, 1H), 6,765 -6,703 (m, 2H), 5,280 (s, 2H), 4,957 (s, 1H), 4,843 (s, 1H), 4,366 - 4,337 (m, 2H), 3,940 - 3,860 (m, 2H), 3,255 - 3,189 (m, 6H), 2,655 - 2,626 (m, 2H). MS 20 m/e 600,0 (M+H), RT = 2,78 min

Etapa 6: Síntese de 1-[4-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)-fenilamino1-5, 8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il)-5-dimetilamino-pent-2-en-1-ona

<formula>formula see original document page 49</formula> Em um frasco de base redonda de 25 ml foram colocados éster

544-[3-cloro-4-(piridina-2-ilmetóxi)-fenilamino]-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-7-il}-5-oxo-pent-3-enílico de ácido metanossulfônico (0,15 g, 0,25mmol) em DMF (5,0 ml) e à solução foi adicionado carbonato de césio (0,16 g, 0,5 mmol) seguido por dimetilamina (0,5 ml de solução a 2 M em THF) e aquecida a 50°C durante a noite. A solução amarela foi purificada por HPLC duas vezes para fornecer 27,5 mg de sólido marrom claro (20,0%). 1H-RMN (DMSO-d6) δ 8,592 - 8,574 (m, 1H), 8,378 (s, 1H), 8,181, (s, 1H), 7,890 - 7,847 (m, 1H), 7,781 - 7,752 (m, 1H), 7,572 - 7,552 (d, 1H), 7,514 -7,492 (m, 1H), 7,372 - 7,341 (m, 1H), 7,237 - 7,207 (m, 1H), 5,271 (s, 2H), 4,942 - 4,761 (m, 2H), 3,922 - 3,781 (m, 2H), 3,282 - 3,169 (m, 4H), 2,343 (m, 2H), 2,127 - 1,977 (m, 8H). MS m/e 549,1 (M+H), RT = 2,26 min

Utilizando-se o método descrito acima e os materiais de partida apropriados, os Exemplos 151- 159 foram similarmente preparados e listados na Tabela 1, juntamente com seus dados analíticos e nomes IUPAC.

Exemplo 165

Preparação de N-(3,4-diclorofenil)-7-((2E)-4-risopropil(metil)aminolbut-2-enoil)-5,6,7,8-tetraidropirido [4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

<formula>formula see original document page 50</formula>

Etapa 1: Preparação de 4-cloro-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 50</formula>

A uma solução de 4-cloro-5,8-diidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidina-7(6H)-carboxilato de terc-butila (3500 mg, 10,7 mmols) em THF (100 mL) foram adicionados 4 N de HCl em 1,4-dioxano (4 N, 6 mL). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 24 h. O precipitado branco foi coletado e secado sob pressão reduzida e forneceu 2000 mg (82%) do produto desejado. LCMS RT = 0,21 min, [M+1]+ = 226. Etapa 2: Preparação de (2E)-4-(4-cloro-5.8-diidropirido[4'.3':4.5]tieno[2,3- d]pirimidin-7(6HVil)-N.N-dimetil-4-oxobut-2-en-1-amina

<formula>formula see original document page 51</formula>

A uma solução de 4-cloro-5,6,7,8- tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidina (1000 mg, 4,0 mmols, 90% pura) 5 em THF (20 mL) foram adicionados cloridrato de ácido (2E)-4-(dimetilamino)but-2-enóico (730 mg, 4,4 mmols), EDCI (840 mg, 4,4 mmol), DMAP (97 mmol, 0,8 mmol) e diisopropiletilamina (120 mg, 8,0 mmols). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi em seguida concentrada até a secura sob pressão reduzida. O resí-10 duo foi purificado por ISCO utilizando-se 20% de acetato de etila em metanol para obter 1100 mg (82%) do produto desejado. LCMS RT = 1,51 min, [M+1]+ = 337.

Etapa 3: Preparação de N-(3.4-diclorofenil)-7-f(2E)-4-fisopropil(metihamino1but-2-enoil)-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4.5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

<formula>formula see original document page 51</formula>

A uma solução de (2E)-4-(4-cloro-5,8-diidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3- d]pirimidin-7(6H)-il)-N,N-dimetil-4-oxobut-2-en-1-amina (50 mg, 0,15 mmol) em etanol (2 mL) foram adicionados HCI em 1,4-dioxano (4 N, 0,02 ml) e 3 bromoanilina (26 mg, 0,16 mmol). A reação foi aquecida (80°C) durante 4 h e em seguida resfriada em temperatura ambiente. A mistura foi extraída com acetato de etila (2 mL) e o extrato foi concentrado até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em uma mistura de metanol e acetonitrila e purificado por HPLC utilizando-se 70% de acetonitrila em água para obter 9 25 mg (13%) do produto desejado. 1H- RMN (CD3OD-d3) δ 8,42 (s, 1H), 7,99 (m, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,46 (m, 1H), 6,80 (m, 1H), 4,93 (m, 2H), 4,04 (t, 2H), 3,20 (m, 4Η), 2,31 (s, 3Η), 2,29 (s, 3H); LCMS RT = 2,60 min, [M+1]+ = 462,3.

Utilizando-se o método descrito acima e os materiais de partida apropriados, os Exemplos 161-164 e 166-185 foram similarmente prepara-5 dos e listados na Tabela 1, juntamente com seus dados analíticos e nomes IUPAC.

Exemplo 187

Preparação de N-(3,4-diclorofenil)-7-((2E)-4-risopropil(metil)aminolbut-2-enoil)-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2.3-d]pirimidin-4-amina

<formula>formula see original document page 52</formula>

Etapa 1. Preparação de (3,4-dicloro-fenil)-(5,6,7,8-tetraidro-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-4-il)-amina

<formula>formula see original document page 52</formula>

Seguindo o mesmo procedimento como descrito no Exemplo 7, etapa 1 utilizando-se éster terc-butílico de ácido 4-Cloro-5,8-diidro-6H-9-tia-1,3,7-triaza-fluoreno-7-carboxílico (3,5 g, 0,011 mol), 3,4-dicloroanilina (1,9 g, 0,012 mol), 4 N de HCI em Dioxano (1,3 ml) em 2-propanol (72 ml) e forneceu o produto desejado (3,0 g, 72%). LCMS RT = 2,77 min, [M+H]+ = 351,8.

Etapa 2. Preparação de N-(3,4-diclorofenil)-7-((2E)-4-fisopropil(metil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

<formula>formula see original document page 52</formula> Ao ácido 4-Bromo-but-2-enóico (638 mg, 3,87 mmols) em CH2Cl2 foi adicionado isopropilmetiamina (1,1 ml, 10,3 mmols), a mistura foi agitada durante 2 horas seguida por adição de (3,4-dicloro-fenil)-(5,6,7,8-tetraidro-9-tia-1,3,7-triaza-fluoren-4-il)-amina (1,0 g, 2,57 mmols), EDCI (4935 mg, 2,58 mmols), DIPEA (1,8 ml, 10,3 mmols). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Solventes foram removidos e o resíduo foi purificado por HPLC para fornecer o composto desejado (500 mg, 13%). 1H- RMN (DMSO-Ci6) δ 8,46 (m, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,42 (t, 1H), 6,67 (m, 1H), 3,94 (m, 2H), 3,87 (m, 4H), 2,75 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 0,96 (d, 6H); LCMS RT = 2,72 min, [M+1]+ = 490,3. Dados analíticos para os Exemplos selecionados

Os seguintes dados analíticos foram encontrados para os Exemplos:

Exemplo 2: N-r3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil1-7-f(2E)-4-(dietilamino)but-2-15 enoil1-5.6.7,8-tetraidropiridof4'.3':4,51tienor2.3-dlpirimidin-4-amina

1H-RMN (CD2CI2-Of2) δ 8,50 (d, J = 4,50 Hz, 1H), 8,36 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7,68 (td, J = 7,63, 1,37 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 7,33 (s amplo, 1H), 7,19 (m, 1H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,79 (m, 2H), 6,42 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 4,81 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,12 (m, 2H), 2,49 (m, 4H), 0,97 (m, 6H); LCMS RT = 2,37 min, [M+H]+ = 563,2.

Exemplo 3: N-f3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil1-7-r(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoin-5.6.7.8-tetraidropiridof4'.3':4.51tienor2.3-dlpirimidin-4-amina

1H -RMN (CD2Cl2-d2) δ 8,50 (d, J = 4,70 Hz, 1H), 8,36 (s, 1 H), 7.75 (s, 1H), 7,69 (td, J = 7,68, 1,27 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,18 (m, 1H), 6,96 (d, J = 8,80 Hz, 1H), 6,79 (m 2H), 6,43 (m, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,82 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 3,10 (m, 4H), 2,24 (s, 3 H), 2,17 (s, 3H); LCMS RT = 2,31 min, [M+H]+ = 536,2.

Exemplo 4: N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil1-7-f(2E)-4-piperidin-1 -ilbut-2-enoin-5.6.7,8-tetraidropiridor4',3':4.51tienor2,3-dlpirimidin-4-amina

1H- RMN (CD2CI2-CZ2) δ 8,50 (d, J = 4,70 Hz, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,75 (d, J = 1,76 Hz, 1H), 7,69 (td, J = 7,68, 1,66 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,18 (m, 1H), 6,96 (d, J = 8,80 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,75 (s, 1 Η), 6,42 (m, 1Η), 5,19 (s, 2Η), 4,81 (m, 2Η), 3,91 (m, 2Η), 3,11 (m, 4Η), 2,39 (m, 4Η), 1,56 (m, 4Η), 1,37 (m, 2H); LCMS RT = 2,39 min, [Μ+Η]+ = 575,2.

Exemplo 5: N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-[(2E)-4-(4-metilpiperazin-1-il)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4,3,4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

<formula>formula see original document page 54</formula>

1H- RMN (CD3OD-Cf3) δ 8,55 (d, J = 4,50 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,91 (t, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,70 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 7,41 (m, 2H), 7,10 (d, J = 9,00 Hz, 1H), 6,82 (m, 1H), 6,43 (m, 1H), 5,23 (s, 2H), 5,00 (m, 4H), 4,02 (t, 2H), 3,24 (m, 4H), 2,75 (m, 2H), 2,29 (m, 4H), 2,04 (s, 3H); LCMS RT = 2,32 min, [M+H]+= 590,2.

Exemplo 6: N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-morfolin-4-ilbut-2-enoil]-5,6.7,8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirímidin-4-amina

<formula>formula see original document page 54</formula>

1H- RMN (CD2Cl2-CZ2) δ 8,49 (s, 1H), 7,93 (m, 1H), 7,46 (m, 1H), 7,18 (t, 1H), 6,84 (m, 1H), 6,65 (m, 2H), 4,89 (m, 2H), 4,00 (m, 2H), 3,68 (m, 4H), 3,17 (m, 4H), 2,46 (m, 4H); LCMS RT = 2,40 min, [M+H]+ = 488,1.

Exemplo 8: N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(4-metilpiperazin-1-il)but-2-enoil]-5,6,7,8 tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

<formula>formula see original document page 54</formula>

1H- RMN (CD3OD-CZ3) δ 8,36 (s, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,22 (t, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,78 (m, 1H), 4,02 (t, 2H), 3,27 (m, 4H), 3,22 (m, 2H), 2,75 (m, 4H), 2,64 (m, 4H), 2,47 (s, 3H); LCMS RT = 2,32 min, [M+H]+ = 501,1.

Exemplo 9: N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

1H- RMN (CD3OD-d3) δ 8,39 (s, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,54 (m, 1H), 25 7,24 (t, 1H), 7,13 (dd, J = 15,0, 37,0 Hz, 1H), 6,80 (m, 1H), 4,06 (t, 2H), 3,93 (t, 2H), 3,30 (m, 4H), 3,16 (m, 4H), 1,31 (t, 6H); LCMS RT = 2,52 min, [M+H] = 474,1.

Exemplo 10: N-(3-cloro-4-[(3-fluorobenzil)óxi]fenil)-7-[(2E)-4-morfolin-4-ilbut-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

1H- RMN (CD2Cl2-d2) δ 8,45 (s, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 7,06 (td, J = 8,48, 2,34 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,77 Hz, 1H), 6,84 (m, 2H), 6,55 (m, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,88 (m, 2H), 4,03 (m, 2H), 3,69 (m, 4H), 3,17 (m, 4Η), 2,46 (m, 4H); LCMS RT = 2,86 min, [M+H]+ = 594,3.

Exemplo 11: N-(3-cloro-4-[(3-fluorobenzil)óxilfenil)-7-[(2E)-4- (dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,84etraidro^ 4-amina

1H- RMN (DMSO-Cf6) δ 8,38 (s, 1H), 8,19 (m, 1H), 7,76 (d, J = 7,60 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,96 Hz, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,32 - 7,15 (m, 5H), 6,77 (m, 1H), 5,23 (s, 2H), 3,90 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,32 (m, 4H), 2,51 (s, 6H); LCMS RT = 2,83 min, [M+Hf = 552,2.

Exemplo 12: N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-piperidin-1-ilbut-2-enoil1-10 5,6.7.8-tetraidropiridoí4',3':4.5Hienor2,3-d1pirimidin-4-amina 1H- RMN (DMSO-CZ6) δ 8,42 (s, 1H), 8,34 (m, 1H), 7,86 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,39 (t, 1H), 6,69 (m, 2H), 4,94 (s, 1H), 4,83 (s, 1H), 3,87 (m, 2H), 3,23 (m, 2H), 3,06 (m, 2H), 2,31 (m, 4H), 1,47 (m, 4H), 1,36 (m, 2H); LCMS RT = 2,55 min, [M+H]+ = 486,2.

Exemplo 13: N-{3-cloro-4-[(3-fluorobenzil)óxi]fenil}-7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoin-5,6,7,8-tetraidropirido[4'.3':4.5]tieno]2,3-d]pirimidin-4-amina

1H- RMN (DMSO-d6) δ 8,40 (s, 1H), 8,20 (m, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,46 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 7,43 (m, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,21 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,16 (t, 1H), 6,72 (m, 2H), 5,24 (s, 2H), 4,96 (s, 1 H), 4,86 (s, 1 H), 3,88 20 (m, 2H), 3,28 (m, 8H), 0,97 (m, 6H); LCMS RT = 2,89 min, [M+H]+ = 580,2.

Exemplo 14: N-(3-cloro-4-[(3-fluorobenzil)óxilfenil}-7-[(2E)-4-(4- metilpiperazin-1-il)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropiridoí4',3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

1H- RMN (DMSO-CZ6) δ 8,40 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,78 (m, 1H), 25 7,54 (d, J = 8,61 Hz, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,34 (m, 2H), 7,24 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,20 (t, 1H), 6,73 (m, 2H), 5,27 (s, 2H), 4,97 (s, 1H), 4,87 (s, 1H), 3,94 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,26 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 2,37 (m, 8H); LCMS RT = 3,00 min, [M+H]+ = 607,3.

Exemplo 15: N-(3-etinilfenil)-7-r(2E)-4-morfolin-4-ilbut-2-enoill-5,6.7,8tetraidropiridof4'.3':4,51tienor2,3-d1pirimidin-4-amina 1H- RMN (CD2CI2-CZ2) δ 8,50 (s, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,36 (t, 1H), 7,27 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 38,9 Hz, 1H), 6,86 (m, 1H), 6.55 (m, 1 Η), 4,89 (m, 2Η), 4,00 (m, 2Η), 3,70 (m, 4Η), 3,21 (s, 1Η), 3,18 (m, 4Η), 2,47 (m, 4H); LCMS RT = 2,29 min, [Μ+Η]+ = 460,2.

Exemplo 16: 7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoin-N-(3-etinilfenil)-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

1H- RMN (CD2Cl2-d2) δ 8,49 (s, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,36 (t, 1H), 7,27 (d,J = 7,6 Hz, 1H), 7,05 (d,J = 38,9 Hz, 1H), 6,90 (m, 1H), 6.56 (m, 1H), 4,89 (m, 2H), 4,00 (m, 2H), 3,23 (m, 4H), 3,21 (s, 1H), 2,55 (m, 4H), 1,05 (m, 6H); LCMS RT = 2,32 min, [M+H]+ = 446,1.

Exemplo 17: 7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-N-(3-etinilfenil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3',4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina

1H- RMN (CD3OD-Cf3) δ 8,37 (s, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,32 (t, 1H), 7,22 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,89 - 6,70 (m, 2H), 4,02 (t, 2H), 3,52 (s, 1H), 3,27 (m, 2H), 3,20 (m, 4H), 2,29 (s, 6H); LCMS RT = 2,27 min, [M+H]+ = 418,1.

Os nomes, estruturas e certos dados de caracterização para os compostos exemplares desta invenção são mostrados na Tabela 1 abaixo. <table>table see original document page 57</column></row><table> <table>table see original document page 58</column></row><table> <table>table see original document page 59</column></row><table> <table>table see original document page 60</column></row><table> <table>table see original document page 61</column></row><table> <table>table see original document page 62</column></row><table> <table>table see original document page 63</column></row><table> <table>table see original document page 64</column></row><table> <table>table see original document page 65</column></row><table> <table>table see original document page 66</column></row><table> <table>table see original document page 67</column></row><table> <table>table see original document page 68</column></row><table> <table>table see original document page 69</column></row><table> <table>table see original document page 70</column></row><table> <table>table see original document page 71</column></row><table> <table>table see original document page 72</column></row><table> <table>table see original document page 73</column></row><table> <table>table see original document page 74</column></row><table> <table>table see original document page 75</column></row><table> <table>table see original document page 76</column></row><table> <table>table see original document page 77</column></row><table> <table>table see original document page 78</column></row><table> <table>table see original document page 79</column></row><table> <table>table see original document page 80</column></row><table> <table>table see original document page 81</column></row><table> <table>table see original document page 82</column></row><table> <table>table see original document page 83</column></row><table> <table>table see original document page 84</column></row><table> <table>table see original document page 85</column></row><table> <table>table see original document page 86</column></row><table> <table>table see original document page 87</column></row><table> <table>table see original document page 88</column></row><table> <table>table see original document page 89</column></row><table> <table>table see original document page 90</column></row><table> <table>table see original document page 91</column></row><table> <table>table see original document page 92</column></row><table> <table>table see original document page 93</column></row><table> <table>table see original document page 94</column></row><table> <table>table see original document page 95</column></row><table> <table>table see original document page 96</column></row><table> <table>table see original document page 97</column></row><table> <table>table see original document page 98</column></row><table> <table>table see original document page 99</column></row><table> <table>table see original document page 100</column></row><table> <table>table see original document page 101</column></row><table> <table>table see original document page 102</column></row><table> <table>table see original document page 103</column></row><table> <table>table see original document page 104</column></row><table> <table>table see original document page 105</column></row><table> <table>table see original document page 106</column></row><table> <table>table see original document page 107</column></row><table> <table>table see original document page 108</column></row><table> <table>table see original document page 109</column></row><table> <table>table see original document page 110</column></row><table> <table>table see original document page 111</column></row><table> <table>table see original document page 112</column></row><table> Tabela 1 (continuacao)

<table>table see original document page 113</column></row><table> <table>table see original document page 114</column></row><table> <table>table see original document page 115</column></row><table> <table>table see original document page 116</column></row><table> <table>table see original document page 117</column></row><table> Tabela 1 (continuacao)

<table>table see original document page 118</column></row><table> <table>table see original document page 119</column></row><table> <table>table see original document page 120</column></row><table> Tabela 1 (continuacao)

<table>table see original document page 121</column></row><table> <table>table see original document page 122</column></row><table> <table>table see original document page 123</column></row><table> <table>table see original document page 124</column></row><table> <table>table see original document page 125</column></row><table> <table>table see original document page 126</column></row><table> <table>table see original document page 127</column></row><table> <table>table see original document page 128</column></row><table> <table>table see original document page 129</column></row><table> <table>table see original document page 130</column></row><table> <table>table see original document page 131</column></row><table> <table>table see original document page 132</column></row><table> <table>table see original document page 133</column></row><table> <table>table see original document page 134</column></row><table> <table>table see original document page 135</column></row><table> <table>table see original document page 136</column></row><table> <table>table see original document page 137</column></row><table> <table>table see original document page 138</column></row><table> <table>table see original document page 139</column></row><table> <table>table see original document page 140</column></row><table> <table>table see original document page 141</column></row><table> Β. Atividade Fisiológica

A utilidade dos compostos da presente invenção pode ser ilustrada, por exemplo, por sua atividade in vitro no ensaio de proliferação celular de tumor in vitro descrita abaixo. A ligação entre atividade em ensaios de proliferação celular de tumor in vitro e atividade antitumor no ambiente clínico foi muito bem estabelecida na técnica. Por exemplo, a utilidade terapêutica de taxol (Silvestrini e outro. Stem Cells 1993, 11(6), 528-35), taxotero (Bissery e outro. Anti Câncer Drugs 1995, 6(3), 339), e inibidores de topoi-somerase (Edelman e outro. Câncer Chemother. Pharmacol. 1996, 37(5), 385-93) foi demonstrada com o uso de ensaios de proliferação de tumor in vitro.

Muitos dos compostos e composições descritos aqui, exibem atividade antiproliferativa com IC50 < 50 μΜ em qualquer uma das seguintes linhagens celulares especificadas e são desse modo úteis para prevenir ou tratar os distúrbios associados com hiperproliferação. O seguinte ensaio é um dos métodos pelo qual a atividade do composto relacionada ao tratamento dos distúrbios identificados aqui pode ser determinada.

O ensaio de proliferação celular de tumor utilizado para testar os compostos da presente invenção envolve uma leitura chamada Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente Cell Titer-Glow® desenvolvida por Prome-ga® (Cunningham, BA "A Growing lssue: Cell Proliferation Assays, Modern kits ease quantification of cell growth" The Scientist 2001, 75(13), 26, e Crouch, SP e outro, "The use of ATP bioluminescence as a measure of cell proliferation and cytotoxicity" Journal of Immunological Methods 1993, 160, 81-88), que avalia a inibição de proliferação celular. Geração de um sinal Iuminescente corresponde à quantidade de ATP presente, que é diretamente proporcional ao número de células metabolicamente ativas (proliferação). Ensaio de proliferação celular de tumor in vitro em linhagens de célula A431 e BT474

Células A431 [carcinoma epidermóide humano, ATCC # HTB-20, superexpressando HER1 (EGFR, ErbBI)] e N87 [carcinoma gástrico humano, ATCC # CRL-1555, superexpressando HER2 (ErbB2) e HER, (EGFR, ErbB1)] foram colocadas em uma densidade de 2,5 χ 10^3 células/cavidade em placas de cultura de tecido de base transparente-preta de 96 cavidades em meios RPMI com 10% de Soro Bovino Fetal e incubadas em 2>1°C. Vinte e quatro horas depois, compostos de testes são adicionados em uma faixa de concentração final de tão alta quanto 100pm a tão baixa quanto 64pM dependendo das atividades dos compostos testados em diluições seriais em uma concentração de DMSO final de 0,1%. As células foram incubadas durante 72 horas a 37°C em meios de desenvolvimento completos após adição do composto teste. Após 72 horas de exposição ao fármaco, as placas foram equilibradas em temperatura ambiente durante aproximadamente 30 min. Em seguida, utilizando-se um kit de ensaio Promega Cell Titer Glo Lumines-cent®, tampão de Iise contendo 100 microlitros da enzima luciferase e seu substrato, mistura de luciferina, foi adicionado a cada cavidade. As placas foram misturadas durante 2 min em agitador orbital para garantir lise celular e incubadas durante 10 min em temperatura ambiente para estabilizar o sinal de luminescência. As amostras foram lidas em VICTOR 2 utilizando-se protocolo de Luminescência, e analisadas com software Analyzeõ para gerar valores de IC50· Compostos representativos desta invenção mostraram inibi-ção de proliferação celular de tumor neste ensaio.

Atividades em linhagens de célula A431: Exemplos 1 - 7, 9-22, 26, 59, 92, 105-108, 110, 114, 115, 118, 123, 124, 126, 150, 157-158, 160, 194-199, 205, e 206 têm IC50 abaixo de 200 nM; Exemplos 8, 24, 25, 36, 40, 41, 46, 47, 49, 51, 54, 56, 60-69, 85, 87, 93-95, 97-104, 109, 111-113, 116, 117, 119-122, 125, e 125-129, 132-135, 138-143, 147, 149, 159, 161-165, 25 170, 172, 176, 180, 182-192, 200-204, e 207-209 têm IC50 na faixa de 200-1000 nM; 23, 27-39, 42-45, 48, 50, 52, 53, 57, 58, 70, 72-84, 86, 88, 89, 90, 91, 96, 136, 137, 144-146, 148, 151-155, 166-169, 171, 173-175, 177-179, 181, e 193 têm IC50 na faixa de 1 uM-10 uM.

Atividades em linhagens de célula N87: Exemplos 1-22, 24-28, 32, 33, 36, 37, 39-51, 53-70, 72-129, 131-144, 146-150, 152-165, e 167-210 têm IC50 abaixo de 200 nM; Exemplos 23, 29, 30, 31, 35, 38, 52, 145, 151, e 166 têm IC50 na faixa de 200-5000 nM. Ensaio de proliferação celular de tumor in vitro em células H1975

Células H1975 [carcinoma de pulmão de célula não pequena humano, ATCC # CRL-5908, expressando HER1 mutante [(EGFR1 ErbBI)(L858R, T790M] foram colocadas em uma densidade de 3 χ 10^3 células/cavidade em placas de cultura de tecido de base transparente-preta de 96 cavidades em meios RPMI com 10% de Soro Bovino Fetal e incubadas a 37°C. Vinte e quatro horas depois, compostos testes são adicionados em uma faixa de concentração final de tão alta quanto 10 μm a tão baixa quanto 64 pM dependendo das atividades dos compostos testados em diluições seriais em uma concentração de DMSO final de 0,1%. As células foram incubadas durante 72 horas a 37°C em meios de desenvolvimento completos após adição do composto teste. Após 72 horas de exposição ao fármaco, as placas foram equilibradas em temperatura ambiente durante aproximadamente 30 min. Em seguida, utilizando-se um kit de ensaio Promega Cell Titer Glo Luminescent®, tampão de Iise contendo 100 microlitros da enzima Iucife-rase e seu substrato, mistura de luciferina, foi adicionado a cada cavidade. As placas foram misturadas durante 2 min em agitador orbital para garantir Iise celular e incubadas durante 10 min em temperatura ambiente para estabilizar o sinal de luminescência. As amostras foram lidas em VICTOR 2 utilizando-se protocolo de Luminescência, e analisadas com software Analyzeõ para gerar valores de IC50. Compostos representativos desta invenção mostraram inibição de proliferação celular de tumor neste ensaio.

Atividades em linhagens de célula H 1975: Exemplos 21, 24, 26, 28, 36, 59, 65, 70, 92, 93, 98, 107, 110, 1114, 115, 117, 118, 122-124, 126, 129, 135, 150, 160, 165, 183, 187, 194, 195, 199, 205, e 206 têm IC50 abaixo de 200 nM; Exemplos 1, 3, 4, 7, 12, 16, 17, 20, 22, 25, 27, 40, 45-47, 49, 50, 54-57, 60-64, 66-69, 72, 75, 77, 79, 81-83, 85-91, 94-97, 99-101, 104-106, 108, 109, 111-113, 116, 119, 121, 125, 127, 128, 132-134, 139-143, 149, 157-159, 161, 163, 164, 172, 176, 186, 188-190, 192, 196-198, 200-202, 204, 207, 208, e 209 têm IC50 na faixa de 200-1000 nM; Exemplos 2, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 13-15, 19, 23, 29, 30-35, 37-39, 41-44, 48, 51-53, 58, 73, 74, 76, 78, 80, 84, 102, 103, 136-136, 144-148, 151-156, 162, 166-171, 173-175, 177-182, 184, 185, 191, 193, e 203 têm IC50 na faixa de 1 uM-10 uM.

As descrições de cada e todos de patente, pedido de patente e publicação citados aqui são pelo presente incorporadas aqui por referência em sua totalidade.

Embora a invenção tenha sido descrita com referência às modalidades específicas, é evidente que outras modalidades e variações da invenção podem ser planejadas por outros versados na técnica sem afastar-se do real espírito e escopo da invenção. As reivindicações destinam-se a ser construídas para incluir todas as tais modalidades e variações equivalentes.

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I) em que m é 0, 1, ou 2; η é 0, 1, 2, ou 3; q é 0 ou 1; R1 representa H, (C1-C4)alquila, ou halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1-C4)alquila, -O(C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila ; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, (C1-C4)alquila, etinila, propargila, e "-O(CH2)pAr, em que ρ é 0, 1, ou 2, e Ar representa fenila, piridila, tiazolila, tiofenila, ou pirazinila, e em que Ar opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; ou R2 e R3 podem ser unidos, e empregados juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, formam um carbociclo saturado ou insaturado de cinco ou seis membros fundido, ou formam um heterociclo fundido em que os grupos R2 e R3 combinados são representados CH2-Ar' CH2-Ar" <formula>formula see original document page 146</formula> pela fórmula x ,em que Ar' e Ar" cada qual representa fenila, piridila, tiazolila, tienila, ou pirazinila e em que Ar1 e Ar" cada qual opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, (C1-C4)alquila, -O(C1-C4)alquila, halo, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila; R5 representa H ou halo; quando η é 0, R7 é H; quando η é 1, 2 ou 3, R7 representa: H; hidroxila; -NR12R13 em que R12 representa H ou (C1-C6)alquila que opcionalmente transporta 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((CrC^alquiOamino; e R13 representa H, (C1-C6)alquila, ou (C3-C6)cicloalquila, os referidos grupos alquila e cicloalquila opcionalmente transportando 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino; em que R14 é hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1- <formula>formula see original document page 147</formula> C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; <formula>formula see original document page 147</formula> que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que r é 0, 1, ou 2; <formula>formula see original document page 147</formula> que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de (C1-C4)alquila, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que X representa O, S(O)s, ou NR15, em que s é 0, 1 ou 2; e R15 representa (C1-C4)alquila; <formula>formula see original document page 147</formula> ou quando η = 2, R7 e R9 podem ser unidos, e empregados junta- mente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados e os átomos de carbono intermediários, formam um anel de estrutura R16 em que R16 representa (C1-C4)alquila; R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila; R9 representa H ou -CH2-Y1 em que Y é mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, ou N—/ ; R10 representa H; ou R9 e R10 podem ser empregados juntos para formar uma ligação, resultando em uma ligação acetilênica; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que m é 0, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que η é 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que q é 0, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

5. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é hidrogênio ou fluoro; R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1-C4)alquila, e (C2-C4)alquinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e *-O(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode opcionalmente ser substituído com 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, e halo; R5 é hidrogênio; R7 é -NR12R13 em que R12 representa H ou (C1-C6)alquila; e R13 representa H ou (C1-C6)alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é H; R2 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e etinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, metila, e *-O(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com O, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é O ou 1; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e (C1-C4)alquila; R5 é hidrogênio; e R7 é um grupo mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R2 é etinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e *-O(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; e R4 é hidrogênio; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é halo; e R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, e *-O(CH2)pAr, em que Ar é fenila, piridila, ou pirazinila, e em que Ar pode alternativamente ser substituído com 0, 1 ou 2 halogênios, e em que ρ é 0 ou 1; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

9. Composto de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que R3 é halo; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

10. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo em N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4,,3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-[3-cloro-4-(piridin-2-ilmetóxi)fenil]-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but- - 2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4,,3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-- 4-amina; - 7-[(2E)-4-(dietilamino)but-2-enoil]-N-(3-etinilfenil)-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; - 7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-N-(3-etinilfenil)-5,6,7,8-tetraidropirido[4,,3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-{(2E)-4-[isopropil(metil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3,:4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-{(2E)-4-[etil(isopropil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8-tetraidropirido[4,,3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; N-(3,4-diclorofenil)-7-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-5,6,7,8-tetraidropirido[4',3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina; e N-(3,4-diclorofenil)-7-{(2E)-4-[isopropil(metil)amino]but-2-enoil}-5,6,7,8-tetraidropirido[4,,3':4,5]tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina.

11. Processo para preparar um composto como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende (i) reagir um composto de fórmula (7) <formula>formula see original document page 150</formula> em que R1 a R5, R8, m e q têm os significados indicados na reivindicação 1, com um composto de fórmula (10) <formula>formula see original document page 151</formula> em que R7, R9 e R10 e n têm os significados indicados na reivindicação 1, e X é hidróxi, cloro ou bromo, ou (ii) reagir um composto de fórmula (9) <formula>formula see original document page 151</formula> em que R1 a R5, R8 a R10, m, n e q têm os significados indicados na reivindi- cação 1, e LG é um grupo de saída, com um composto de fórmula R7-H, em que R7 tem o significado indicado na reivindicação 1; ou (iii) reagir um composto da fórmula (14): <formula>formula see original document page 151</formula> em que R7 - R10, m e n têm os significados indicados na reivindicação 1, e LG é um grupo de saída, com um composto da fórmula (15): <formula>formula see original document page 151</formula> em que R1 a R5, n e q têm os significados indicados na reivindicação 1, e LG é um grupo de saída, sob condições de modo que um composto como definido na reivindicação 1 seja preparado.

12. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido na reivindicação 1, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável.

13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que está em uma forma adequada para administração intravenosa.

14. Processo para preparar uma composição farmacêutica, caracterizado pelo fato de que compreende combinar pelo menos um composto como definido na reivindicação 1, com pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável, e transformar a combinação resultante em uma forma de administração adequada.

15. Uso de um composto como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é para fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular.

16. Uso de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o distúrbio proliferativo celular é câncer.

17. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (7) R1 representa H, (C1-C4)alquila, ou halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1-C4)alquila, -0(C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, (C1-C4)alquila, etinila, propargila, e "-O(CH2)pAr, em que ρ é 0, 1, ou 2, e Ar representa fenila, piridila, tiazolila, tiofenila, ou pirazinila, e em que Ar opcio- em que m é 0, 1, ou 2; q é 0 ou 1; nalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; ou R2 e R3 podem ser unidos, e empregados juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, formam um carbociclo saturado ou insaturado de cinco ou seis membros fundido, ou formam um hete-rociclo fundido em que os grupos R2 e R3 combinados são representados <formula>formula see original document page 153</formula> pela fórmula y ,em que Ar' e Ar" cada qual representa fenila, piridila, tiazolila, tienila, ou pirazinila e em que Ar' e Ar" cada qual opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, (C1-C4)alquila, -O(C1-C4)alquila, halo, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila; R5 representa H ou halo; e R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila.

18. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (9) <formula>formula see original document page 153</formula> em que m é 0, 1, ou 2; η é 0, 1, 2, ou 3; q é 0 ou 1; R1 representa H, (C1-C4)alquila, ou halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, halo, (C1-C4)alquila, -O(C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila ; R3 é selecionado do grupo consistindo em H, halo, -CN, (C1-C4)alquila, etinila, propargila, e '-O(CH2)pAr, em que ρ é 0, 1, ou 2, e Ar re- presenta fenila, piridila, tiazolila, tiofenila, ou pirazinila, e em que Ar opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; ou R2 e R3 podem ser unidos, e empregados juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, formam um carbociclo saturado ou insaturado de cinco ou seis membros fundido, ou formam um heterociclo fundido em que os grupos R2 e R3 combinados são representados <formula>formula see original document page 154</formula> pela fórmula x y,em que Ar' e Ar" cada qual representa fenila, piridila, tiazolila, tienila, ou pirazinila e em que Ar' e Ar" cada qual opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes selecionados do grupo consistindo em (C1-C4)alquila e halo; R4 é selecionado do grupo consistindo em H, -CN, (C1-C4)alquila, -O(C1-C4)alquila, halo, (C2-C4)alquenila, e (C2-C4)alquinila; R5 representa H ou halo; R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila; R9 representa H ou -CH2-Y, em que Y é mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, ou N—/ ; R10 representa H; ou R9 e R10 podem ser empregados juntos para formar uma ligação, resultando em uma ligação acetilênica; e LG é um grupo de saída.

19. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (14): <formula>formula see original document page 154</formula> em que m é 0, 1, ou 2; η é 0, 1, 2, ou 3; q é 0 ou 1; quando η é O1 R7 é H; quando η é 1, 2 ou 3, R7 representa: H; hidroxila; -NR12R13 em que R12 representa H ou (C1-C6)alquila que opcionalmente transporta -1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino; e R13 representa H, (C1-C6)alquila, ou (C3-C6)cicloalquila, os referidos grupos alquila e cicloalquila opcionalmente transportando 1 ou 2 grupos hidroxila ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino; , em que R14 é hidroxila, (C1-C6alquila, (C1-C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; <formula>formula see original document page 155</formula> que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de hidroxila, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, ou mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que r é 0, 1, ou 2; <formula>formula see original document page 155</formula> que opcionalmente transporta 1 ou 2 substituintes de (C1-C4)alquila, cada substituinte de alquila sucessivamente opcionalmente transportando um substituinte de hidroxila; e em que X representa O, S(O)s, ou NR15, em que s é 0, 1 ou 2; e R15 representa (C1-C4)alquila; <formula>formula see original document page 155</formula> OU quando η = 2, R7 e R9 podem ser unidos, e empregados juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados e os átomos de <formula>formula see original document page 156</formula> carbono intermediários, formam um anel de estrutura R16 em que R16 representa (C1-C4)alquila; R8 representa halo, hidroxila, ou (C1-C4)alquila; R9 representa H ou -CH2-Y, em que Y é mono- ou di- ((C1-C4)alquil)amino, ou / ; R10 representa H; ou R9 e R10 podem ser empregados juntos para formar uma ligação, resultando em uma ligação acetilênica; e LG é um grupo de saída.

20. Método de tratar um distúrbio proliferativo celular em um paciente em necessidade de tal tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um composto como definido na reivindicação 1.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o distúrbio proliferativo celular é câncer.