BRPI0710796A2 - 12-imidazolil-1-dodecanol e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, uso dos mesmos na produção de preparação farmacêutica, e preparação farmacêutica compreendendo os referidos compostos e sais - Google Patents

Abstract

<B>12-IMIDAZOLIL-1-DODECANOL E SEUS SAIS FARMACEUTICAMENTE ACEITáVEIS, USO DOS MESMOS NA PRODUçãO DE PREPARAçãO FARMACêUTICA, E PREPARAçãO FARMACêUTICA COMPREENDENDO OS REFERIDOS COMPOSTOS E SAIS <D>A presente invenção refere-se a um composto da fórmula A-R-X ou a sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo que podem ser usados para a produção de uma preparação farmacêutica, que serve para a prevenção ou tratamento de doenças de câncer, conseqúências patológicas do al-coolismo, hepatite viral, esteato-hepatite, pancreatite aguda e crónica, doenças renais tóxicas, resistência hepática à insulina no diabetes. mellitus, lesões hepáticas no morbus Wilson e sideroses, lesões isquêmicas de reperfusão, como antídotos contra venenos do meio ambiente e intoxicação medicamentosa, para o prolongamento do tempo de permanência de medicamentos no organismo ou para o combate de efeitos colaterais tóxicos na administração de quimioterápicos. Na fórmula, R é um radical C6- a C40- hidrocarboneto alifático ou aromático, que apresenta uma extremidade A hidrófila e X é pelo menos um par de elétrons livre de um átomo de carbono ou heteroátomo e/ou um radical que apresenta <227>-elétrons.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "12-IMIDA-ZOLIL-1 -DODECANOL E SEUS SAIS FARMACEUTICAMENTE ACEITÁ-VEIS, USO DOS MESMOS NA PRODUÇÃO DE PREPARAÇÃO FARMA-CÊUTICA, E PREPARAÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO OSREFERIDOS COMPOSTOS E SAIS".Descrição

A presente invenção refere-se ao uso de compostos da fórmulaA-R-X ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis para a produção de umapreparação farmacêutica para a prevenção ou tratamento de doenças oucondições indesejáveis, especialmente no ser humano, bem como essaspróprias preparações.

Consumo de álcool excessivo permanente leva freqüentemente auma doença hepática, a chamada esteatose hepática, que pode progredir atéuma inflamação hepática ou hepatite e no estágio seguinte para a cirrose he- pática. Nesse caso, o risco e a extensão da respectiva lesão hepática depen-de diretamente da quantidade e duração do consumo de álcool, sendo que orisco varia individualmente. Uma inflamação do fígado induzida pelo álcool(hepatite alcoólica) representa uma doença ameaçadora à vida, que pode es-tar associada à febre, icterícia, bem como um aumento dos leucócitos. Taisinflamações hepáticas induzidas pelo álcool são curáveis através de abstinên-cia total de álcool, com exceção de cicatrizações na cirrose hepática.

Além dessa chamada hepatite de esteatose hepática induzidapelo álcool ou esteato-hepatite alcoólica (ASH), formam-se também tipos dehepatites em pessoas, que não praticam o alcoolismo ou que de modo al-gum tomam álcool. Tais tipos de hepatites são induzidas, por exemplo, atra-vés de venenos ambientais, por exemplo, no trabalho em trabalhos de reves-timento de Iaca e/ou também através de medicamentos.

Sabe-se, que processos de oxidação no metabolismo são reali-zados com auxílio de citocromos. No caso dos citocromos, trata-se de umsem-número de diferentes enzimas, cujo centro ativo apresenta uma estrutu-ra de inibição. Em um sem-número de reações de oxidação e hidroxilação,elas catalisam a transferência de eletrodos para um receptor.Os citocromos da família P450 (CYP-450), por exemplo, têm umpapel importante. Nesse caso, trata-se de monooxigenases, que são ubiqui-tárias e pertencem às mais importantes enzimas do metabolismo de subs-tâncias hidrófobas estranhas ao corpo e da modificação de hormônios hidró-fobos, os esteróides.

Um dos objetivos principais das enzimas de citocromo-P450 ésolubilizar substâncias estranhas ao corpo através de hidroxilação e dessamaneira, conduzi-las para a excreção renal. Portanto, as enzimas de cito-cromo-P450 têm um papel importante na desintoxicação.

Avalia-se, que cerca da metade de todos os fármacos atuais sãohidroxilados pelas enzimas de citocromo-P450 do fígado. Portanto, o períodode permanência de muitos fármacos no corpo, em parte, é consideravelmen-te reduzido pela atividade de enzimas de citocromo-P450. A quantidade pre-ponderante de citocromo P450 nos mamíferos encontra-se no fígado, vistoque este representa o órgão desintoxicante central. Em geral, o citocromoP450 está presente em forma ligada à membrana do retículo endoplasmáti-co.

As enzimas de citocromo-P450 têm um papel-chave também naintermediação da resistência de insetos contra inseticidas e das plantas con-tra herbicidas.

Em sua estrutura básica, o citocromo P450 apresenta um grupode inibição coordenado seis vezes, no qual é catalisada uma reação do se-guinte esquema

RH + O2 + 2H+ + 2 e ^ ROH + H2O.

Neste caso, os dois elétrons necessários para esta reação sãodisponibilizados, por exemplo, pelo NADPH-citocromo P450-redutase, quesão associados ao complexo enzimático. Dessa maneira, formam-se noP450, entre outros, também espécies de oxigênio citotóxicas, reativas(ROS).

Sabe-se, que a síntese do citocromo P450-2E1 é induzida tantono consumo de álcool, quanto também na hepatite de esteatose hepáticanão-alcoólica, quanto também na pancreatite. A função e o modo de açãodessa isoforma muito diferente de outros citocromos são descritos, por e-xemplo, por Μ. H. Wang et al, em Archives of Biochemistry and Biophysics,(1995), vol. 317, página 299 até 304. Depois, a enzima apresenta um canalcom cerca de 15 Á de comprimento, em cuja extremidade o centro reativoestá posicionado com um anel inibidor que apresenta um átomo de ferrocentral.

Há muito tempo, presumiu-se que também quimioterápicos, taiscomo são usados na terapia do câncer, são degradados através de enzimasde citocromo P450.

Em um estudo mais recente de Jiang et al, ("Cytochrome P4502J2 Promotes the Neoplastic Phenotype of Carcinoma Cells and is Up-regulated in Human Tumors" em Câncer Res. 2005, 65: 4707-4715), contu-do, foi demonstrado primeiramente, que o citocromo P450 pode ter atémesmo um efeito promotor de câncer.

Foi demonstrado, que a expressão genética de citocromo P4502J2 em tumores humanos é altamente regulada. No caso do citocromo P4502J2, trata-se de uma epoxigenase, que converte o substrato ácido araquidô-nico para quatro diferentes ácidos epoxieicosatrienóides isômeros (EET). Oestudo mostrou, além disso, que EET apresenta um efeito inibidor da apop-tose, visto que eles protegem as células do tumor contra o efeito de fatoresde necrose do tumor e dessa maneira, aumentam o tempo de vida das célu-las cancerígenas. Além do mais, eles promovem a mitose, bem como a proli-feração de células tumorais.

Do mesmo modo, foi demonstrado, que EETs promovem a angi-ogênese, isto é, a formação de novos vasos sangüíneos. Este procedimentotem um papel importante no crescimento de tumores (Pozzi A. et al, "Cha-racterization of 5,6- and 8,9-epoxieicosatrienoic Acids (5,6- and 8,9-EET) asPotent em "Vivo Angiogenic Lipids", J. Biol. Chem. 280:27138-27146, 2005).

Em um estudo de Schattenberg et al, ("Hepatocyte CYP2E1 ove-rexpression and steatohepatitis Iead to impaired hepatic insulin signalling"em J. Biol. Chem. 2005; 280: 9887-9894), ao contrário, liga-se primeiramen-te uma superexpressão de citocromo P450 ao diabetes.Müller-Enoch et al, descrevem em Z. Naturforsch. (2001) 56c,páginas 1082 até 1090, a inibição de citocromo-P450 2B1 do rato por meiode lisofosfatidilcolinas, lisofosfatidilinositol, bem como ácidos araquidônico eoléico ou por meio de monoacilgliceróis, monooleilgliceróis e monopalmitoil-gliceróis.

Além disso, T. Haehner, D. Müller-Enoch et al, descrevem em Z.Naturforschung (2004) 59c, páginas 599 até 605, a influência de moléculasde lipídios de uma cadeia sobre a atividade da isoforma citocromo P 4502B1 do rato.

O objetivo da presente invenção é disponibilizar agentes para aprodução de uma preparação farmacêutica, que é adequada para a preven-ção ou tratamento de doenças de câncer, conseqüências patológicas do al-coolismo, hepatite viral, esteato-hepatite, pancreatite aguda e crônica, doen-ças renais tóxicas, resistência hepática à insulina no diabetes mellitus, Ie-sões hepáticas no Morbus Wilson e sideroses, lesões de reperfusão por is-quemia, para o uso como antídoto contra venenos do meio ambiente e into-xicação medicamentosa, para o prolongamento do tempo de permanênciade medicamentos no organismo ou para o combate de efeitos colaterais tó-xicos na administração de quimioterápicos.

Este objetivo é preenchido com um composto de acordo com ascaracterísticas definidas nas reivindicações.

É que verificou-se surpreendentemente, que as doenças men-cionadas acima podem ser tratadas com tais compostos. Esses compostosinibem a formação de espécies de oxigênio reativo (ROS), especialmenteradicais de oxigênio, tal como o ânion de superóxido (O2-), bem como peró-xido de hidrogênio (H2O2), que em uma reação redox direta não são consu-midos no citocromo P450, especialmente nas isoformas da família genética2, especialmente 2E1, bem como 2J2.

Do mesmo modo, foi verificado, que esse composto também ini-be a transformação de ácido araquidônico para ácidos epoxieicosatrienóidesisômeros. Além disso, foi demonstrado, que também a hidroxilação de subs-tâncias estranhas ao corpo pode ser inibida na administração de um talcomposto.

Os compostos utilizados de acordo com a invenção, apresentama fórmula

A-R-X.

Alternativamente, é possível utilizar também seus sais farmaceu-ticamente aceitáveis.

Nesse caso, R representa um radical hidrocarboneto alifático ouaromático, preferivelmente com 6 a 40 átomos de carbono, que apresentaum radical A especialmente terminal, que é hidrófilo ou é hidrogênio e X re-presenta um radical que apresenta pelo menos um par de carbono livre oude heteroelétrons e/ou π-elétrons. O radical R é especialmente lipofílico.

Normalmente, o radical R é um radical alquila. Dessa maneira,ele pode ser em cadeia linear ou ramificada, apresentar ligações simples,duplas ou triplas e ser substituído. Normalmente, ele apresenta um esquele-to alifático com 6 a 26, especialmente 8 a 22 átomos de carbono. Cadeias dehidrocarboneto com um esqueleto de 10 a 15, especialmente 10 a 13 áto-mos de carbono são convenientes. Se R é um radical hidrocarboneto alicícli-co ou aromático, que pode ser condensado e/ou Iipofilicamente substituído,então ele apresenta normalmente, pelo menos, 5 ou 6 e no máximo, 40 ouno máximo, 25 átomos de carbono.

Outros comprimentos mínimos convenientes são 7 ou 8 átomosde carbono e outros comprimentos máximos convenientes são 22 ou 20 á-tomos de carbono.

Radicais X convenientes são heterociclos, bem como radicaisalquinila. Os heterociclos são especialmente heterociclos contendo nitrogê-nio, oxigênio e/ou enxofre. Os heterociclos podem ser aromáticos e/ou não-aromáticos e normalmente, apresentam 5 ou 6 átomos de anel. Em casosadequados, X também pode ser um heterociclo condensado. Exemplos detais heterociclos são imidazol, pirrol, pirazol, piridina, pirazina, indol, isoindol,indazol. Heterociclos preferidos são anéis que apresentam 6 e especialmen-te 5 átomos com um, dois ou três heteroátomos. Outros heterociclos ade-quados são, por exemplo, tiazóis, triazóis, furanos.Alquinas preferidas apresentam a estrutura -C=C-R12, em queR12 é um hidrogênio ou um radical C1- até C15- ou, no máximo, C10-alquilaeventualmente substituído, que pode apresentar outra vez eventualmenteligações duplas ou triplas. Normalmente, contudo, R12 apresenta, no máxi- mo, 5, especialmente, no máximo, 3 átomos de carbono. Em uma outra con-cretização conveniente de acordo com a invenção, o radical X representa,por exemplo,

- aminas primárias, secundárias e terciárias,

- funções diazo substituídas ou não-substituídas, tais como, por exemplo, hidrazinas e hidrazonas,

- nitrila, isonitrila,

- grupos funcionais contendo S, tais como, por exemplo, tio- eisotiocianatos, sulfetos de alquila, sulfóxidos, grupos tiol,

- funções metilenodióxi,

- éter alquílico e tioéter alquílico.

Os radicais X são convenientemente radicais, que coordenamcom o grupo de inibição prostético.

A extremidade hidrófila A da molécula a ser utilizada de acordocom a invenção, pode ser uma função hidrófila desejada farmaceuticamente adequada e ser especialmente um grupo -OH, -COOH, um grupo fosfato,éster de fosfato, grupo sulfato, um grupo amina, um SH, bem como um ami-noácido ou um poliálcool, uma carnitina (ácido Y-N-trimetilamino-p-hidróxi-butírico), cabeça de esfingosina (radical 1,3-dihidróxi-2-amino-propila). Se Aé um hidrogênio, então, na verdade, A não é uma extremidade hidrófila, con-tudo, também este composto pode ser utilizado como preparação farmacêu-tica de acordo com a invenção. Aminoácidos preferidos são especialmenteaqueles com radicais carregados positiva ou negativamente, tais como, porexemplo, lisina, arginina, histidina, ácido asparagínico, ácido glutâmico, glu-tamina, asparagina, homocisteína, serina, homosserina e/ou citrulina. Poliál- coois preferidos são especialmente glicerina. Tanto a glicerina, quanto tam-bém os açúcares podem ser eventualmente substituídos. Uma substituiçãoconveniente é, por exemplo, a troca de um grupo OH por um grupo amina ouSH, respectivamente, grupo fosfato ou sulfato. Em uma concretização parti-cularmente conveniente, A é um radical glicerina da fórmula

H2C-B-R2

HC-B-R3

H2C-B-R4

em que pelo menos um dos radicais R2 a R4 é o radical RX definido acima eB é um oxigênio, enxofre, selênio ou selenato, um grupo amina, um grupofosfato ou sulfato. Em uma outra concretização de acordo com a invenção,um outro radical do R2 a R4 é um radical fosfatidilcolina, um radical fosfatidi-letanolamina, um radical fosfatidilserina ou um radical fosfatidilinositol. Ou-tros radicais adequados são, por exemplo, os aminoácidos já mencionadosacima, especialmente aqueles com radicais carregados positiva ou negati-vãmente.

No caso dos derivados de ácido 1,2-diacil-sn-glicerin-3-fosfórico,o uso de acordo com a invenção, abrange também a estrutura básica dascefalinas, ceramidas, Iecitinas e fosfolipídios correspondentes, que apresen-tam uma extremidade X tal como definido acima.

Representantes X-R ou BR2.4 não ramificados, saturados e não-substituídos apresentam, por exemplo, as seguintes fórmulas:

a) radical alcanol: HO-CH2-(CH2)a-X

b) radical sulfato de alquila: O3SO-CH2-(CH2)a-X

c) radical alquil-CoA: CoA-S-CO-(CH2)a-X

d) radical de ácido alcanóico: HOOC-(CH2)a-X,

em que a representa preferivelmente, pelo menos, 6 e especialmente, pelomenos, 7. De modo particularmente preferido, a é, pelo menos, 8, sendo 9muito particularmente preferido. Valores máximos preferidos para a são 40,especialmente 26, sendo preferidos 22, especialmente 12. 11 e especial-mente 10 são particularmente preferidos.

As fórmulas correspondentes para representantes ramificados,insaturados ou substituídos são acessíveis pelo técnico sem problemas epor isso, não necessitam de uma representação especial.

Outros exemplos de radicais R alifáticos são, por exemplo, umradical dodecano, um radical octadecanol, um radical sulfato de undecanila,um radical palmitil-CoA ou um radical de ácido láurico.

Em uma forma de concretização alternativa, os π-elétrons doradical X são especialmente aqueles de ligações duplas ou triplas olefínicas,especialmente acetilênicas, que normalmente são terminais. Radicais parti-cularmente convenientes são um radical imidazol ligado através de um áto-mo de nitrogênio ou um radical etinila (-C^C-).

Demonstrou-se, que no caso do uso de acordo com a invenção,dos compostos definidos acima, especialmente daqueles, que contêm comoticularmente eficazes in vitro, tal como, por exemplo, 17-octadecinil-1 -ácido,o tempo de permanência de muitas substâncias ativas no sangue pode seressencialmente prolongado, em que se substitui a extremidade carbóxi deuma tal molécula, por exemplo, por um radical sulfato ou em que se substituium esqueleto alifático adjacente à extremidade carbóxi, isto é, 1-3 átomosde carbono (posição α,β,γ), pela adição de 2 grupos metila ou por um radicalalifático ou aromático. Dessa maneira, a atividade in-vivo melhora em rela-ção à atividade in-vitro.

Dessa maneira, por exemplo, o ácido 2,2-dimetil-11-dodecinílicoe sulfato de 10-undecinila apresentam in vitro uma inibição comparativamen-te elevada da atividade do citocromo-P450, tal como o ácido 10-undecinílico,ao contrário do que, in vivo, eles são muito superiores.

Nesse caso, prevê-se preferivelmente, que o comprimento doesqueleto alifático compreenda 6 a 26, especialmente 9 a 20 ou 19 átomosde carbono, quando, no caso de R1, se tratar de um radical imidazol. Umrepresentante deste grupo preferido é, por exemplo, o 12-imidazolil-dodecanol ou o 1-imidazolil-dodecano. Com respeito às fórmulas estruturaisdessas e de outras substâncias, é feita referência aos desenhos anexos.

De acordo com uma concretização de acordo com a invenção,prevê-se, além disso, que o comprimento do esqueleto alifático compreenda6 a 26 átomos de carbono, quando, no caso de R1, se tratar de um radicaletinila. Um representante deste grupo preferido, por exemplo, é 17-octadecinil-1 -ácido.

De acordo com uma outra concretização, o comprimento do es-queleto alifático compreende 9-13 átomos de carbono, quando, no caso deR1, se trata de um radical etinila. Representantes deste grupo preferido são,por exemplo, ácido 2,2-dimetil-11-dodecinílico, sulfato de 10-undecinila, áci-do 10-undecinílico ou 10-undecinol.

Esses compostos apresentam uma série de vantagens. Inicial-mente, uma vez que eles não são diretamente acessíveis para enzimas dometabolismo de β-oxidação e portanto, não são imediatamente metaboliza-dos por estes.

Fosfoglicerídios bem como triglicerídios de acordo com a defini-ção acima, que em dois pontos do radical glicerina são substituídos com umradical da fórmula -R-X, por exemplo, com um radical alifático etinilado ouimidazolado, são inicialmente hidrolisados após a absorção no intestino e, naverdade, de modo tal, que um dos dois radicais alifáticos é dissociado. Des-sa maneira, são produzidos monoglicerídios etinilados ou imidazolados, quecom base em sua solubilidade, também são designados como lisolipóides eque com auxílio de lipoproteínas, isto é, agregados não-covalentes de lipí-dios e proteínas, que formam as partículas semelhantes aos micélios e ser-vem para o transporte de lipídios hidroinsolúveis no sangue, são transporta-dos para os locais de ação no corpo.

O mesmo é válido, ademais, também para monoglicerídios etini-lados ou imidazolados de acordo com a definição acima, que já foram admi-nistrados como tais.

Visto que certos tecidos patogênicos, tais como, por exemplo,tumores, têm uma alta conversão de energia e através do esvaziamento defatores de crescimento (VEGF, PDGF), promovem a própria vascularização,as lipoproteínas carregadas com os monoglicerídios etinilados ou imidazola-dos mencionados migram com a corrente sangüínea preferivelmente paraesses tecidos. A "embalagem" dos compostos alifáticos etinilados ou imida-zolados na forma de lisolipídios possibilita, portanto, um transporte visadodos mesmos para os tecidos patogênicos mencionados.No emprego de acordo com a invenção, os compostos mostramum efeito na terapia do câncer, sendo que, entre outros, a transformação deácido araquidônico para ácidos epoxieicosatrienóides é inibida. Os últimospromovem a divisão e proliferação celular e inibem a apoptose de células tumorais. Do mesmo modo, ao aplicar um tal composto, a hidroxilação dequimioterápicos, que a longo prazo leva à sua excreção e, com isso, à suainativação, é inibida. Um tal composto pode ser usado, com isso, tanto parauma terapia tumoral direta, quanto também para uma adjuvante. Por estemotivo, a forma de concretização preferida mencionada acima, que possibili- ta um transporte visado para o tecido patogênico, é particularmente promis-sora.

De acordo com a invenção, prevê-se, além disso, uma prepara-ção farmacêutica, contendo um composto de acordo com a invenção, em umexcipiente farmaceuticamente aceitável.

Possíveis indicações para um composto de acordo com a inven-ção, ou para sua preparação farmacêutica, são encontradas, além disso, notratamento das conseqüências do alcoolismo. Essas são especialmente le-sões hepáticas ou também outros processos inflamatórios, induzidos peloálcool. Além das lesões hepáticas induzidas puramente pelo alcoolismo, os fatores induzidos pela alimentação e os endócrinos, tais como, por exemplo,obesidade, mas também diabetes melitus e hiperlipidemia, do mesmo modoindependentes do álcool, também provocam um grave dano ao fígado, queatravés de uma hepatite de esteatose hepática (esteato-hepatite não-alcoólica = NASH), pode se estender até a cirrose hepática. Tais doenças de esteatose hepática alcoólicas e não-alcoólicas são freqüentemente associa-das a uma infecção viral do fígado. Nesse caso, pode ocorrer um avançomuito rápido da doença. Foi demonstrado, que todas as doenças menciona-das acima ou suas origens ou conseqüências são tratáveis com os compos-tos de acordo com a invenção.

Foi verificado, também, que essas substâncias são bem ade-quadas para o tratamento de inflamações do pâncreas. Tais inflamações oupancreatitides podem ser provocadas também por substâncias tóxicas, alémdo alcoolismo. Nessas incluem-se, especialmente, venenos ambientais, taiscomo produtos químicos industriais ou também medicamentos. Infecçõesvirais ou fatores endócrinos metabólicos também podem provocar tais infla-mações do pâncreas, sendo que em espécies de oxigênio reativo participamem todos os casos da formação da doença e no avanço da doença.

O fármaco de acordo com a invenção provou-se como adequadotambém no tratamento de diabetes melitus, tanto do diabetes melitus tipo 2,quanto também tipo 1.

Doenças renais tóxicas, bem como outras doenças, tais comosão provocadas, por exemplo, através de efeitos colaterais durante a admi-nistração de quimioterápicos, especialmente venenos celulares, tais comocomplexos de metais, como cisplatina, carboplatina, dicloreto de titanocenoou complexos de ouro, podem ser tratadas com o medicamento de acordocom a invenção. Nesse caso, foi especialmente demonstrado, que a organo-toxicidade de complexos de metais ou também de outros agentes tóxicos,tais como hidrocarbonetos halogenados e, na verdade, tanto hidrocarbone-tos mono- quanto também polihalogenados, entre estes também anestésicosvaporizadores do tipo halotano, bem como hidrocarbonetos aromáticos cor-respondentes, nitrosaminas, acrilamida ou medicamentos, tais como parace-tamol, metotrexato, isoniazida ou antibióticos de aminoglorida ou contrastespara raios X, pode ser evitada. Dessa maneira, o medicamento de acordocom a invenção, também é adequado para o tratamento da organotoxicidadede venenos ambientais, especialmente como antídoto para esse fim em ór-gãos, tais como fígado, rim, sistema nervoso central, pâncreas e outros.

Dessa maneira, por exemplo, este possibilita também uma do-sagem mais elevada de citostáticos na terapia do câncer e de encontro aesse fundamento como terapia adjuvante, pode aumentar também a pers-pectiva de êxito da quimioterapia.

De modo muito particular, foi provado como adequado, evitarlesões, que se formam através da reperfusão de tecidos biológicos, tais co-mo, por exemplo, após infartos de órgãos, especialmente do coração, bemcomo do cérebro (infarto cardíaco, acidente vascular cerebral). Dessa ma-neira, por exemplo, foi possível mostrar em experimentos animais, que taislesões de reperfusão contribuem em 60 a 80 % da destruição cerebral ouque a extensão da morte de tecidos pode diminuir em torno deste fator. Hámuito tempo, sabe-se que os radicais oxigênio são uma causa principal delesões de reperfusão, que são formados durante a isquemia.

Dessa maneira, o agente de acordo com a invenção é tambémparticularmente adequado para impedir lesões de reperfusão em órgãostransplantados. Tais órgãos são mantidos em uma solução nutritiva resfriadaaté seu transplante para o corpo de um novo receptor. Após o transplante,estes órgãos, depois de ligados ao sistema circulatório do receptor, são, en-tão, novamente percorridos por líquidos corpóreos, o que leva a lesões dereperfusão. Através de uma administração do agente de acordo com a in-venção, antes e durante a armazenagem, bem como pouco antes do implan-te para o organismo receptor, também é possível solucionar esse importanteproblema de transplante.

Um acúmulo do metal de transição ferro (ou de cobre em M. Wil-son) provoca uma potencialização das lesões oxidativas provocadas pelocitocromo P450. Além da sobrecarga de ferro no âmbito de sideroses, sabe-se, que no caso de lesões de reperfusão por isquemia ocorre um nítido au-mento da concentração intracelular de ferro livre. Um aumento intracelularde ferro também é provocado por compostos tóxicos, tais como, por exem-plo, cisplatina ou hidrocarbonetos halogenados ou também por hepatitidesvirais. O principal atingido é o fígado, mas também, por exemplo, no caso dacisplatina, que é eliminada por via renal, o rim. A reação de Fenton represen-ta a base bioquímica das lesões oxidativas através do metal de transiçãoferro (ou no cobre de M. Wilson).

H2O2 + Fe2+ Fe3+ + HO + HO

A H2O2 formada no âmbito do ciclo de reação do citocromo P450(potencial redox + 0,32 volt), é convertida, nesse caso, para o radical hidroxi-la HO extreme fortemente oxidante (potencial redox + 2,31 volt).

Um aumento da concentração de ferro livre no âmbito da nefro-patia induzida pela cisplatina é descrita, por exemplo, no estudo de Baliga etal, ("role of cytochrome P450 as a source of catalytic iron in cisplatin-inducednephrotoxicity", Kidney Int. 1998; 54: 1562-1569). Um aumento de ferro emlesões de reperfusão por isquemia ou na hepatite viral é descrito, por exem-plo, por Paller et al, ("Cytochrome P450 mediates tissue damaging hydroxylradical formation during reoxygenation of the kidney", Proc. Natl. Acad. Sei.USA 1994; 91:7002-7006) ou por Chapoutot et al, (Liver iron excess in pati-ents with hepatotocellular carcinoma developed on viral C cirrhosis", Gut2000; 46:711-714).

As substâncias de acordo com a invenção provaram-se especi-almente como inibidoras das isoformas humanas da família genética 2 docitocromo P450 e, na verdade, especialmente das isoformas 2E1 e 2J2 edas doenças causadas por estas.

Em uma concretização particularmente conveniente da inven-ção, prevê-se, que a preparação farmacêutica está ligada aos lisossomas.Com base no fato, de que os compostos que servem de base à preparaçãoapresentam radicais alifáticos longos, sua ligação em Iipossomas é umaforma de administração muito adequada. Tais Iipossomas prestam-se parauma administração intravenosa, intramuscular, intraperitonial, percutânea outambém oral. A administração como aerossol também é adequada.

Contudo, os compostos de acordo com a invenção também po-dem ser administrados diretamente como tais. Também neste caso, são a-dequados os modos de administração mencionados acima.Processos de Síntese

A seguir, são mostrados vários processos para a síntese de dife-rentes compostos de acordo com a invenção:1. Síntese de ácido 12-imidazolil-1-dodecanóico

a) O ácido 12-imidazolil-1-dodecanóico é sintetizado de acordo com um pro-cesso descrito no estudo de Alterman et al, ("Fatty acid discrimination andomega-hydroxylation by cytochorme P450 4A1 and a cytochromeP4504A1/NADPH-P450 reduetase fusion protein", Archives of Biochemistryand Biophysics 1995, 320:289-296).

Para isso, o 12-bromo-1-dodecanol é oxidado com reagente deJones para ácido 12-bromo-1-dodecanóico. Em seguida, o ácido sólidobranco é esterificado com diazometano para o éster metílico corresponden-te. O éster metílico é diretamente adicionado ao imidazol e reagido para oéster metílico de ácido 12-imidazolil-1-dodecanóico a 80°C por cinco horas.

A massa espessa obtida dessa maneira é separada entre água e diclorome-tano, a fase orgânica é secada sobre Na2SO4 e evaporada. O resíduo oleosoé cromatograficamente purificado em sílica-gel e, em seguida, dissolvido emuma mistura de metanol e tetrahidrofurano (3:4), adicionado ao LiOH H2O ea mistura é aquecida ao refluxo por duas horas. Após evaporar o solvente, oresíduo branco é novamente dissolvido em água, extraído com diclorometa-no, acidificado para pH 5-6 e novamente extraído com acetato de etila. Oextrato de acetato de etila é secado sobre Na2SO4, filtrado e evaporado. Oresíduo branco sólido é recristalizado a partir de metanol/éter e fornece oácido 12-imidazolil-1 -dodecanóico.b) 12-imidazolil-1-dodecanol e 1-imidazolildodecano são sintetizados de a-cordo com um processo descrito no estudo de Lu et al, ("Heme-coordinatinganalogs of Iauric acid as inhibitors of fatty acid ω-hydroxylation", Archives ofBiochemistry and Biophysics 1997, 337:1-7).

Para isso, o 12-bromo-1-dodecanol e imidazol na proporção mo-lar de 1:3 são aquecidos a 80°C por cinco horas. O produto bruto é divididoentre água e diclorometano. A fase orgânica é secada sobre Na2SO4 e eva-porada. O 12-imidazolil-1-dodecanol é recristalizado a partir de benzeno/n-hexano.

c) 1-imidazolildodecano é produzido a partir de 1-bromododecano e imidazolna proporção molar de 1:3 sob agitação e aquecimento a 85°C. O produtobruto é dissolvido em diclorometano e extraído três vezes com água por agi-tação. A fase orgânica é secada sobre Na2SO4 e evaporada. O resíduo deevaporação oleoso é levado à cristalização a partir de n-hexano e fornece 1 -imidazolildodecano.

2. Síntese de 12-imidazolil-1-fosfatidilcolina

Fosfatidilcolina é reagida sob condições ácidas na presença dediciclohexilcarbodiimida para uma O-fosforilisouréia. À mistura de reaçãoacrescenta-se 12-imidazolil-1-dodecanol, que se agarra de maneira nucleófi-Ia ao grupo fosforila e com este forma uma ligação éster, de modo que seforma a 12-imidazolil-1 -fosfatidilcolina. Nesse caso, a diciclohexiluréia preci-pita. Para a realização dessa reação, necessita-se de 4-dietilamino-piridinacomo catalisador.

O mecanismo da reação é semelhante ao da esterificação deSteglich, na qual é utilizada diciclohexilcarbodiimida, para esterificar um áci-do orgânico com um álcool.

3. Síntese de 1-palmitoil-2-imidazolil-glicero-3-fosfatidilcolina

O princípio para a síntese de um diglicerídio de fosfatidilcolina,que porta um ácido graxo não modificado bem como um ácido graxo qualifi-cado (isto é, no presente caso, um etinilado ou imidazolado), é descrito porEibl et al, ("Synthesis of Iabeled phospholipids in high yield", Methods Enzy-mol. 1983; 98:623-32).

3a. Síntese do 1,2-dipalmitoil-3-benzil-qlicerídio

Para esse fim, a 1,2-isopropiliden-sn-glicerina é dissolvida em p-xileno e agitada com adição de terc-butilato de potássio e cloreto de benzila.Após a conclusão da reação, acrescentam-se água bem como éter diisopro-pílico em partes iguais e efetua-se uma separação de fases. A 3-benzil-sn-glicerina obtida na fase superior é obtida através de evaporação e submetidaa outros estágios de purificação.

Em seguida, a 3-benzil-sn-glicerina purificada é dissolvida comum ácido graxo, por exemplo, palmitato, em tetracloreto de carbono. Por meiode adição de 4-dietilamino-piridina e diciclohexilcarbodiimida formam-se Iiga-ções éster entre os grupos de álcool da 3-benzil-sn-glicerina e os grupos car-boxila dos ácidos graxos, sendo que a diciclohexiluréia precipita. Esse meca-nismo de reação também é designado como "esterificação de Steglich".

A diciclohexiluréia precipitada é removida e o solvente, evapora-do. Após outros estágios de purificação, obtém-se o 1,2-dipalmitoil-3-benzil-sn-glicerídio como produto.

3b. Síntese do 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio.

O 1,2-dipalmitoil-3-benzil-sn-gliceridio e dissolvido em tetrahidro-furano e hidrogenolisado na presença de um catalisador (10 % de Pd/C) comhidrogênio elementar. Nesse caso, o radical benzila é substituído por umátomo de hidrogênio e forma-se o 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio.

3c. Fosforilacão do 1,2-dipalmitoil-sn-qlicerídio.

O tricloreto de fosforila é adicionado à trietilamina dissolvida emtetrahidrofurano e agitado com gelo. Em seguida, acrescenta-se 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio por gotejamento ao tetrahidrofurano dissolvido. Nes-se caso, forma-se inicialmente o dicloridrato de 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio-3-fosforila.

Em seguida,acrescenta-se novamente trietilamina dissolvida emtetrahidrofurano, acrescenta-se às gotas bromoetanol dissolvido em tetrahi-drofurano e eleva-se a temperatura para 25°C. Nesse caso, forma-se princi-palmente monocloreto de éster 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio-3-fosforil-bromoetílico apenas em pequena proporção, como subproduto, o éster di-bromoetílico correspondente.

A mistura é purificada, resfriada, adicionada ao carbonato desódio e hexano e extraída por agitação. Nesse caso, a ligação entre o radicalfosfato e o cloreto é hidrolisada. O sal de sódio do éster 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio-3-fosforil-bromoetílico forma-se como produto.

Os sais de sódio do éster de 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio-3-fosforil-(N-butoxicarbonil)-etanolamina bem como o éster 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio-3-fosforil-(N-butoxicarbonil)-terc.-butilserina são representados demaneira semelhante.

3d. Hidrolisação do éster 1.2-dipalmitoil-sn-qlicerídio-3-fosforil-fosfoalquílico

O éster 1,2-dipalmitoil-sn-glicerídio-3-fosforil-bromoetílico ou umdos ésteres fosfoalquílicos citados, representados alternativamente, é dis-solvido em uma mistura de éter dietílico e água destilada, que contém Ca-CI2-2H20.

O pH é ajustado para 7,5 através da adição de tampão Palitzsch.Em seguida, acrescenta-se a enzima fosfolipase A2 e agita-se a 35°C por 60minutos. Nesse caso, a ligação éster é hidrolisada na posição 2 do radicalglicerina e forma-se o éster 1-palmitoil-sn-glicerídio-3-fosfoalquílico corres-pondente, que porta um grupo OH na posição 2, bem como um ácido graxolivre.

A molécula obtida só pode ser esterificada na posição 2 do radi-cal glicerina visadamente com um ácido graxo qualificado, por exemplo, comum ácido graxo imidazolado ou etinilado. Do mesmo modo, o éster fosfoal-quílico pode ser transesterificado na posição 3 com um álcool adequado, porexemplo, colina, serina, etanolamina ou inositol.

3e. Esterificação com um ácido graxo qualificado na posição 2

O éster 1-palmitoil-sn-glicerídio-3-fosfoalquílico obtido é dissolvi-do em tetraclorometano, é acrescentado um ácido graxo imidazolado ou eti-nilado e a mistura é agitada.

No caso do ácido graxo acrescentado, pode tratar-se, por exem-plo, de ácido 17-octadecílico, obtenível pela Sigma Aldrich. Do mesmo, podetratar-se de ácido 12-imidazolil-1-dodecanóico, que pode ser sintetizado talcomo descrito em 1.

Em seguida, efetua-se novamente uma "esterificação de Stegli-ch", a cuja mistura acrescentam-se 4-dietilaminopiridina e diciclohexilcarbo-diimida. Nesse caso, forma-se uma ligação éster entre o grupo OH rema-nescente no radical glicerina e no grupo carboxila do ácido graxo qualificado.

A diciclohexiluréia precipitada é removida e o solvente é evapo-rado. Após outros estágios de purificação, obtém-se como produto um éster1-palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosfoalquílico.

3f. Transesterificação do éster fosfoalquílico na posição 3 do radical glicerinaO éster 1-palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosforil-bromoetílico édissolvido em clorofórmio. Em seguida, acrescenta-se 2-propanol-trimetilamina. O recipiente de reação é incubado a 50°C, em seguida, o sol-vente é evaporado com nitrogênio. O produto de reação é purificado e dessamaneira, é obtida uma 1-palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosfatidilcolina qualifi-cada.

Para produzir 1-palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosfatidilserina, oéster 1-palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosforil-(N-butoxicarbonil)-etanolaminaqualificado produzido tal como citado acima, é dissolvido em CH2CI2 e a-crescentados ácido trifluoracético bem como ácido perclórico. Em seguida, éagitado no frio e lavado com água e metanol. Após uma separação de fases,a fase inferior é extraída com Na2CO3 e evaporada. Após acrescentar meta-nol, formam-se cristais, no caso dos quais se trata de 1-palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosfatidil-etanolamina qualificada.

Para produzir 1 -palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosfatidilserina,processa-se de maneira semelhante. Neste caso, o material de partida é oéster 1-palmitoil-2-acil-sn-glicerídio-3-fosforil-(N-butoxicarbonil)-terc-butilse-rínico qualificado produzido tal como citado acima.

Tabelas

Nas tabelas anexas estão listados alguns compostos exemplifi-cados de acordo com a invenção.

As tabelas 1 a 3 mostram, por exemplo, compostos utilizados deacordo com a invenção, da fórmula A-R-X de acordo com a reivindicação 1.

Nesse caso, o técnico reconhece imediatamente, que um sem-número de outros compostos pode ser subsomado às respectivas reivindica-ções. Dessa maneira, os radicais alifáticos podem ser eni cadeia linear ouramificada, apresentar ligações simples, duplas ou triplas e ser substituídose apresentar um esqueleto alifático com 9 a 19 átomos de carbono. Domesmo modo, o esqueleto de hidrocarbonetos pode ser formado com áto-mos de carbono alicíclicos e/ou aromáticos, sendo que aqui, devido as estru-turas do anel, podem ser necessários até 40 átomos de carbono. Como radi-cais hidrófilos tomam-se em consideração também outros álcoois, tais comoinositol ou etanolamina ou seus glicerídios.

Toxicidade

A toxicidade aguda de 12-imidazolil-1-dodecanol (substância 1)e 12-(1)-imidazolil-dodecano (substância 2) foi testada em ratos CD machos.Nesse caso, para o 12-imidazolil-1-dodecanol resultou uma LD50 (14 dias)de 1000 mg/kg b.w., p.o. e para o 12-(1)-imidazolil-dodecano resultou umaLD50 (14 dias) de 1000mg/kg b.w., p.o.

Primeira reação de intolerância: substância 1: 1000 mg/kg b.w. p.o.substância 2: 500 mg/kg b.w., p.o.Nenhum efeito com dose elevada: substância 1: 500 mg/kg b.w., p.o.substância 2: 250 mg/kg b.w., p.o.

Determinação do efeito antineoplástico de 12-imidazolil-1-dodecanol

Para esse fim, quatro linhas de células cancerígenas foram se-meadas respectivamente em "placas com 24 cavidades" e deixadas paracrescer por 24 horas. Em seguida, acrescentaram-se às suspensões de cé-lulas diferentes concentrações da substância do teste 12-imidazolil-1-dodecanol, dissolvido em DMSO. A concentração de DMSO no meio celularimportou, em cada caso, em 0,1 %. Essa concentração de DMSO provou-secomo não-tóxica no ensaio de controle, as contagens das células foram efe-tuadas, em cada caso, após um período de incubação de quatro dias. Emtodos os casos, foi verificada uma forte inibição da proliferação das célulascancerígenas.

Foram determinadas as seguintes concentrações inibidoras se-mimáximas, valores IC50 de 12-imidazolil-1-dodecanol:

HepG2 (células hepáticas) 50 nM

Panc-1 (células do pâncreas) 50 nM

PC-3 (células da próstata) 50 nM

SW620 (células do intestino grosso) 100 nM.

Em todas as linhas de células cancerígenas foi verificado umforte efeito antineoplástico do inibidor.

Avaliação da citotoxicidade de 12-imidazolil-1-dodecanol

A citotoxicidade semimáxima de 12-imidazolil-1-dodecanol foideterminada com o teste de citotoxicidade LDH.

Nesse caso, foram medidos os seguintes valores:

MRC-5 (células de fibroblastos de pulmão) = 500 μΜ

Panc-1 (células do pâncreas) = 500 μΜ

Uma comparação da citotoxicidade semimáxima de 500 μΜ comas constantes inibidoras semimáximas IC50=50 μΜ para Panc-1, fornece umfator diferencial de 10.000. Daí pode ser concluído, que o 12-imidazolil-1-dodecanol é um inibidor altamente eficaz da proliferação de células cancerí-genas com citotoxicidade relativamente baixa.Em outras palavras, as substâncias de acordo com a invençãopossuem uma ampla janela terapêutica.

Inibicão da atividade motora das células HepG2 através do 12-imidazolil-1-dodecanol

Condições do teste de migração: células cancerígenas do fígadoHepG2 foram incorporadas em uma matriz de colágeno. 30 células individu-ais foram continuamente fotograficamente controladas durante 900 minutos.Foi determinada a porcentagem média das células migratórias.

Resultado 1: Células HepG2 de controle não-tratadas apresen-tam uma atividade de migração média de 15 %. Ao adicionar 1 μΜ ou 10 μΜde 12-imidazolil-1-dodecanol ao meio da matriz, a atividade de migração dascélulas diminuiu em 50 % ou 75 %.

Resultado 2: Visto que as células HepG2 apresentam uma forteexpressão de receptores insulina, a influência da insulina sobre a atividadede miqração foi determinada com e sem 12-imidazolil-1-dodecanol.

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A insulina causa um aumento 2,5 vezes maior da atividade demigração. A substância ativa bloqueia esse aumento completamente após450 minutos. Tempo de observação (primeira metade do tempo de observa-ção). Após 900 minutos (segunda metade do tempo de observação), o au-mento é negativo. A atividade de migração média é, então, 13 % abaixo dado controle.

Claims (7)

1. Uso do 12-imidazolil-1-dodecanol ou de um sal farmaceutica-mente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para produção deuma preparação farmacêutica.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fatode ser na prevenção ou tratamento de doenças de câncer, conseqüênciaspatológicas do alcoolismo, hepatite viral, esteato-hepatite, pancreatite agudae crônica, doenças renais tóxicas, resistência hepática à insulina no diabetesmellitus, lesões hepáticas no morbus Wilson e sideroses, lesões isquêmicasda reperfusão, como antídotos contra venenos do meio ambiente e intoxica-ção medicamentosa, para o prolongamento do tempo de permanência demedicamentos no organismo ou para o combate de efeitos colaterais tóxicosna administração de quimioterápicos.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fatode ser no tratamento de hiperlipidemia.

4. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fatode ser na prevenção de lesões de reperfusão em órgãos transplantados,especialmente antes e durante a armazenagem, bem como pouco antes doimplante para o organismo receptor.

5. Preparação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que con-tém 12-imidazolil-1-dodecanol ou um sal farmaceuticamente aceitável domesmo em um excipiente farmaceuticamente aceitável.

6. Preparação farmacêutica de acordo com a reivindicação 5,caracterizada pelo fato de que a preparação está incorporada em Iiposso-mas.

7. Composto, caracterizado pelo fato de que é 12-imidazolil-1-dodecanol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.