KR102055395B1 - 염증 질환의 예방 및 치료 - Google Patents

염증 질환의 예방 및 치료 Download PDF

Info

Publication number
KR102055395B1
KR102055395B1 KR1020147001610A KR20147001610A KR102055395B1 KR 102055395 B1 KR102055395 B1 KR 102055395B1 KR 1020147001610 A KR1020147001610 A KR 1020147001610A KR 20147001610 A KR20147001610 A KR 20147001610A KR 102055395 B1 KR102055395 B1 KR 102055395B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
group
type
cells
hepatitis
liver
Prior art date
Application number
KR1020147001610A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20140048939A (ko
Inventor
비핀 쿠마르 차투르베디
Original Assignee
쥐알아이 바이오,아이엔씨.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 쥐알아이 바이오,아이엔씨. filed Critical 쥐알아이 바이오,아이엔씨.
Publication of KR20140048939A publication Critical patent/KR20140048939A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102055395B1 publication Critical patent/KR102055395B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7032—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a polyol, i.e. compounds having two or more free or esterified hydroxy groups, including the hydroxy group involved in the glycosidic linkage, e.g. monoglucosyldiacylglycerides, lactobionic acid, gangliosides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/07—Retinol compounds, e.g. vitamin A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/203—Retinoic acids ; Salts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4436—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7024—Esters of saccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

본 구현예들은 염증 질환, 예를 들어, 알코올성 간질병(ALD)의 예방 및 치료 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 구현예들은 레티노산 수용체(RAR) 효능제의 투여를 통한 ALD의 예방 및 치료에 관한 것이다. 일부 구현예들은 알코올-유도 간손상, 알코올-관련 간질병, 지방간 질환, 간 지방증, 알코올성 간염 또는 알코올성 간경변증의 예방 및 치료에서의 타자로텐의 용도에 관한 것이다.

Description

염증 질환의 예방 및 치료{Prevention and treatment of inflammatory conditions}
본 구현예는 간의 염증 질환의 예방 및 치료에서, 레티노산 수용체(RAR)를 조절하는 조성물 및 방법에 관한 것이다.
과도한 알코올 사용은 서양에서 간 질병의 주요 원인이다. 간 손상의 증거는 하루에 4잔 이상의 알코올 음료(남성에 있어서 12 온스 맥주 4잔, 와인 4잔 또는 4 온스의 증류주 또는 여성에 있어서 이 양의 절반)를 마시는 개체에서 관찰된다. 알코올이 어떻게 간을 손상시키는지는 충분히 알려져 있지 않지만, 만성의 알코올 소비는 전염증성 사이토카인(TNF-알파, IL6 및 IL8)의 분비, 산화 스트레스, 지질 과산화 및 아세트알데히드 독성을 야기하여, 간 세포의 염증, 아폽토시스(apoptosis)를 야기하며, 결국 간 세포의 섬유증을 야기한다.
알코올성 간질병(ALD)은 3가지의 주요 단계를 갖는다: 알코올성 지방간 질환, 알코올성 간염 및 간경변증. 알코올성 지방간 질환은 간에서의 지방산의 축적을 특징으로 하며, 이는 통상 징후가 없고, 개체가 몇주 동안 금주하면, 회복될 수 있다. 중증의 경우에, 쇠약, 구역, 복통, 식욕 부진 및 불안을 경험할 수 있다. 대부분의 과음자가 어느 정도의 지방간 질환을 나타내지만, 과음 욕구가 오직 1주 미만의 소정의 기간에 걸쳐 매일 발생하는 일부 경우, 5명의 과음자 중 오직 1명에서 알코올성 간염이 발병하며, 4명 중 1명에서 간경변증이 발병한다. 알코올성 간염은 간 세포의 염증을 특징으로 하며, 일반적으로 금주에 의해 회복된다. 간경변증은 염증, 섬유증(세포 경화) 및 신체의 화학물질의 해독을 막는 손상된 막을 특징으로 하며, 흉터형성 및 괴사로 종결되고, 일반적으로 비가역적이다.
알코올성 간질병에서 간 조직 손상의 상이한 단계의 근원적인 세포 및 분자 기작은 잘 알려져 있지 않다. 몇몇 영역에서 진전이 이루어졌지만, 이러한 질병을 중단시키는 효과적인 치료 방법은 여전히 없다. 이는 부분적으로는 간이 면역학적으로뿐 아니라 해부학적으로 독특한 기관이라는 사실 때문이다. 예를 들어, 간실질세포(hepatic parenchymal cell)는 대사 기능을 갖지만, 비-실질 세포는 면역학적 기능을 수행한다. 간은 간실질세포에 더하여, 몇몇 비실질세포, 예를 들어, LSEC, 쿠퍼(Kupffer) 세포, 수지상 세포, NK 세포 및 NKT 세포를 포함하며, 이들 모두는 면역성에 참여할 수 있다. 면역 반응이 어떻게 알코올-유도 손상에 대한 관용 또는 면역성 중 어느 하나를 제공하도록 조직되는지는 알려져 있지 않다.
본 구현예는 일반적으로 염증 질환과 관련된 조직 손상을 예방하고 치료하기 위해 선천성 면역계를 조절하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 몇몇 구현예들은 선천성 면역계의 조절에 의한 알코올성 간질병(ALD)의 예방 및 치료에 관한 것이다.
본 명세서에 기재된 몇몇 구현예들은 간에 대한 염증-관련 손상을 치료하거나, 완화시키거나 예방하기 위해 I형 NKT 세포와 II형 NKT 세포의 활성, I형과 II형 NKT 세포 간의 상호작용 및 이들의 다른 간 세포와의 상호작용을 조작하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 일부 구현예들에서, 염증-관련 손상은 알코올-유도 간 손상이다. 일부 구현예들에서, 알코올-유도 간 손상은 알코올-관련 간 질병, 지방간 질환, 간 지방증(hepatic steatosis), 알코올성 간염 또는 알코올성 간경변증이다.
몇몇 구현예들은 I형 NKT 세포 활성의 저해에 의한 과도한 알코올 소비 후의 염증 유도 간 손상의 예방, 완화 또는 치료 방법에 관한 것이다. 일부 구현예들에서, 전-염증성 I형 NKT 세포 활성은 ATRA, 레티놀, 9-시스-RA 또는 13-시스-RA, 트레티노인(tretinoin), AM580, AC55649, CD1530 및 타자로텐(Tazarotene)으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 RAR 효능제(agonist)에 의해 저해된다. 일부 구현예들에서, 전-염증성 I형 NKT 세포 활성은 하나 이상의 폴리올레핀계 레티노이드, 예를 들어, 아이소트레티노인(isotretinoin) 및 아시트레틴(acitretin)에 의해 저해된다. 일부 구현예들에서, 전-염증성 I형 NKT 세포 활성은 에트레티네이트(etretinate), 아시트레틴 및 아이소트레티노인으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 RAR 효능제에 의해 저해된다. 몇몇 구현예들은 타자로텐, 타자로텐산(tazarotenic acid) 또는 이들의 혼합물에 의한 전염증성 I형 NKT 세포 활성의 저해에 관한 것이다. 일부 구현예들에서, 전-염증성 I형 NKT 세포 활성은 2형 NKT 세포의 활성화에 의해 저해된다. 일부 구현예들에서, 염증성 I형 NKT 세포 활성은 하나 이상의 설파티드에 의해 저해된다.
본 개시내용의 일부 구현예들은 알코올 소비 후에, 이와 관련하여 또는 이에 의해 야기되는 간 손상을 초래하는 선천성 면역 기작에 관한 것이다. 일부 구현예들은 천연적으로 소화관-유래 또는 대사물질-유래 항원에 대한 관용을 제공함과 동시에 비-자가 확인 병원체에 대한 면역성을 제공하는 이들 세포 간의 상호작용의 조작에 관한 것이다.
일부 구현예들은 염증 질환과 관련된 조직 손상을 치료하거나 예방하거나 완화시키기 위한 효과적인 치료제의 개발을 위해 I형 및 II형 NKT 세포 둘 모두를 표적화하는 병용 치료 방법에 관한 것이다. 일부 구현예들에서, RAR 효능제를 사용하여 I형 NKT 세포 활성을 직접 저해하고 설파티드를 사용하여 II형 NKT 세포 활성을 활성화시킨다.
일부 구현예들은 올 트랜스 레티노산(all trans retinoic acid; ATRA)의 투여를 통한 ALD와 관련된 조직 손상의 예방 및 치료에 관한 것이다. 몇몇 구현예들은 알코올-유도 간손상, 알코올-관련 간질병, 지방간 질환, 간 지방증, 알코올성 간염 또는 알코올성 간경변증의 예방 및 치료에서의 ATRA의 용도에 관한 것이다.
일부 구현예들은 타자로텐, 타자로텐산 또는 이들의 혼합물의 투여를 통한 ALD와 관련된 조직 손상의 예방 및 치료에 관한 것이다. 몇몇 구현예들은 알코올-유도 간손상, 알코올-관련 간질병, 지방간 질환, 간 지방증, 알코올성 간염 또는 알코올성 간경변증의 예방 및 치료에서의 타자로텐, 타자로텐산 또는 이들의 혼합물의 용도에 관한 것이다.
일부 구현예들은 하나 이상의 설파티드의 투여를 통한 염증과 관련된 조직 손상의 예방 및 치료에 관한 것이다. 몇몇 구현예들은 알코올-유도 간 손상, 알코올-관련 간 질병, 지방간 질환, 간 지방증, 알코올성 간염 또는 알코올성 간경변증의 예방 및 치료에서의 설파티드의 용도에 관한 것이다. 일부 구현예들에서, 설파티드는 하기의 화학 구조를 갖는다:
Figure 112014006101917-pct00001
상기 식에서, R1은 결합, 수소, C1 내지 C30 알킬, C1 내지 C30 치환된 알킬, C1 내지 C30 알케닐, C1 내지 C30 치환된 알케닐 및 C5 내지 C12 당으로 구성된 군으로부터 선택되고; R2는 수소, 하이드록시기, 메톡시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되며; R3은 수소, 하이드록시기, 메톡시기, 에톡시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되고; R4는 수소, 하이드록시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되며; R5는 수소, 하이드록실, 카르보닐, 알콕시 및 결합으로 구성된 군으로부터 선택되고; R6은 C1 내지 C40 알킬, C1 내지 C40 치환된 알킬, C1 내지 C40 알케닐, C1 내지 C40 치환된 알케닐 및 C1 내지 C40 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; R7은 C1 내지 C40 알킬, C1 내지 C40 치환된 알킬, C1 내지 C40 알케닐, C1 내지 C40 치환된 알케닐 및 C1 내지 C40 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; R8은 수소, 하이드록실기, 카르보닐, 알콕시기 및 결합으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예들에서, 설파티드는 하기의 화학 구조를 갖는다:
Figure 112014006101917-pct00002
.
일부 구현예들은 활성화된 설파티드-반응성 II형 NKT 세포에 의한 I형 NKT 세포의 조절에 관한 것이다. 몇몇 구현예들은 자가면역 질병으로부터의 보호 및 항종양 면역성의 억제를 매개함에 있어서, I형 NKT 세포에 대한 활성화 설파티드-반응성 II NKT 세포의 조절 역할에 관한 것이다.
상세한 설명
간은 쿠퍼 세포, 자연 살해(NK) 세포, 자연 살해 T(NKT) 세포 및 수지상 세포를 포함하는 선천성 면역계의 다수의 특수화된 세포를 지닌다. NKT 세포는 이들이 NK 세포(예를 들어, NK1.1)의 세포 표면 수용체를 공유하며, 또한 T 세포 수용체(TCR)를 발현하여, 이들이 CD1d 분자의 맥락에서 지질 항원을 인식하고, 선천성 면역 반응을 획득 면역성(adaptive immunity)에 연결될 수 있게 한다는 점에서 독특하다. NKT 세포는 조직의 염증 및 관련 세포 손상에 기여하는 다른 세포의 활성을 조절하는 능력을 갖는다. NKT 세포는 활성화시에, 다량의 IFN-γ, IL-4, 과립구-대식구 콜로니-자극 인자뿐 아니라 다수의 다른 사이토카인 및 케모카인을 빠르게 분비한다. NKT 세포가 Th1 및 Th2 사이토카인 둘 모두를 분비할 수 있기 때문에, 생체내 NKT 세포 활성화의 결과를 예측하는 것은 어렵다. 맥락에 따라, NKT 세포 활성화는 상이한 면역 반응을 촉진시키거나 저해하는 사건의 캐스케이드(cascade)를 촉발시킨다. 일부 맥락에서, NKT 세포의 활성화는 NK 세포, 수지상 세포(DC) 및 B 세포의 활성화를 야기한다.
NKT 세포는 단일형(monomorphic) MHC 클래스 I-유사 분자, CD1d에 관하여 제시되는 지질 항원을 인식한다. CD1d-제한 NKT 세포는 I형 및 II형으로 분류되며, 이는 CD1d 분자에 의해 제시되는 상이한 지질 항원을 인식한다. 둘 모두의 NKT 세포 서브셋(subset)이 주로 NK1.1+(마우스) 또는 CD161+/CD56+(인간)인 한편, 이들의 상대 개수는 마우스와 인간에서 상이하며; 이에 따라, I형 NKT 세포는 마우스에서 우세하고, II형 NKT 세포 서브셋은 인간에서 우세하다.
불변성 NKT 세포로도 공지되어 있는 I형은 마우스에서 Vα14-Jα18 및 Vβ8.2, Vβ7 또는 Vβ2를 특징으로 하거나, 인간에서 Vα24-JαQ 및 Vβ11을 특징으로 하는 반-불변성 T 세포 수용체(TCR)를 발현하며, 해면-유래 당지질 α-갈락토실 세라미드(αGalCer)와 강력하게 반응성이며, 유세포분석에서 αGalCer/CD1d-테트라머에 의해 동정된다. I형 NKT 세포는 또한 지질계 항원, 예를 들어, 박테리아-유래 지질 및 자가-당지질, 아이소글로보트라이헥소실 세라미드(iGb3)를 인식한다. I형 NKT 세포는 메모리 마커를 디스플레이하며, 사이토카인에 대한 사전형성된 mRNA의 저장이 독특하다. Jα18 유전자가 결여된 마우스(Jα18 마우스)는 오직 I형 NKT 세포에서만 결함이 있다.
I형 NKT 세포와 상이한 II형 NKT 세포는 I형 NKT 세포를 포함하는 몇몇 다른 세포 서브셋의 활성을 조절할 수 있는 조절 세포이다. II형 NKT 세포는 마우스 및 인간 둘 모두에서 자가-당지질, 설파티드(3'-설포갈락토실 세라미드)를 인식한다. 유세포분석에서 설파티드/CD1d-테트라머를 사용하여 동정될 수 있는 II형 NKT 세포의 주요 서브셋은 주로 Vβ8.1/Vβ3.1-Jβ2.7 및 Vα1/Vα3-Jα7 유전자 세그먼트(segment)를 사용하며, 설파티드에 대하여 반응성이다. 후보 작용제에 대한 II형 NKT 세포의 시험관 내 증식 반응을 평가할 뿐 아니라, IFN-γ, IL-4 또는 IL-13에 대한 리얼-타임(real-time) PCR 또는 세포내 사이토카인 염색에 의해 C069 발현 및 사이토카인 분비 프로파일을 평가함으로써 II형 NKT 세포의 활성화를 평가할 수 있다. 또한, αGalCer/CO 1 d-테트라머 세포의 CF8E-희석 분석 및 세포내 사이토카인 염색을 사용한 αGalCer(I형 NKT 세포에 대한 강력한 활성화제)에 대한 I형 NKT 세포의 증식 반응을 평가함으로써, I형 NKT 세포를 아네르기화시키는(anergize) 활성화 II형 NKT 세포의 능력을 평가할 수 있다.
허혈성 재관류 손상 및 콘카나발린 ( Concanavalin ) A-유도 간염 후의 간에서의 I형 및 II 형 NKT 세포 활성
재관류 손상은 소정의 기간의 허혈 후에 혈류가 기관 또는 조직에 복구되는 경우 발생한다. 간 재관류 손상은 일반적으로 수술 또는 외상과 관련되어 발생하며, 간 이식 후에 이식 조직의 질과 기능에서 주요 역할을 수행한다. 허혈성 재관류 손상(IRI)의 발병은 적어도 2개 단계로 발생한다: 초기(재관류 약 1 내지 약 6시간 후)는 쿠퍼 세포 활성화, 반응성 산소 화학종의 방출, CD4+ 세포 동원 및 전염증성 사이토카인의 분비가 가장 두드러지며, 후기(초기 이후로부터 재관류 약 6 내지 약 48시간 후)는 호중구 축적 및 괴사의 유도를 특징으로 한다. 도 2a에 나타낸 바와 같이, 야생형(WT) 마우스에서, 골수(CD11b+) 세포 서브셋, CD11b+Gr-1int는 골수 전구 세포 및 단핵구를 포함하며, 허혈 및 재관류 손상의 조기 단계에 재관류된 조직으로 동원된다. 호중구 이외의 골수 세포, 예를 들어, CD11b+Gr-1int 서브셋의 동원은 손상이 재관류된 조직으로의 염증성 단핵구의 동원에 의해 증진됨을 시사한다.
I형 NKT 세포는 또한 허혈성 재관류 후에 활성화되고 IFN-γ를 분비하게 된다. 도 2c를 참조한다. 야생형(WT) 및 Jα18-/- 마우스의 간을 비교함으로써 IRI에서의 I형 NKT 세포의 역할을 평가하였으며, Jα18-/- 마우스에는 I형 NKT 세포가 결여되어 있으나, 정상 수준의 II형 NKT 세포를 갖는다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 90분의 허혈 및 24시간의 재관류 후에, WT 마우스의 두부측 간엽은 큰 괴사 영역을 갖는 한편, I형 NKT 세포 결함 마우스(Jα18-/- 마우스)에서의 괴사 영역은 비교하여 현저하게 감소되었다. 이는 간 허혈 및 재관류 손상을 매개하는 데에서의 I형 NKT 세포에 대한 발병 역할을 나타낸다.
NKT -1 세포에 대한 설파티드 -활성화 NKT -2 세포의 효과
전문이 본 명세서에 참조로 포함되는 미국 특허 제8044,029호 및 미국 특허 출원 제12/938,315호에 기재된 바와 같이, 자가-당지질 리간드, 설파티드뿐 아니라 합성 설파티드 유사체의 투여에 의해, I형 및 II형 NKT 세포의 활성이 조절된다. 설파티드의 CD1d-의존적 인식은 II형 NKT 세포 및 주로 형질세포성 수지상 세포(plasmacytoid dendritic cell, pDC)를 활성화시키나 일반적인 수지상 세포(conventional dendritic cell, cDC) 집단(보통 I형 NKT 세포에 의해 활성화됨)은 활성화시키지 않아서, IL-12 및 MIP2-의존적 방식으로 I형 NKT 세포의 간으로의 신속한 동원을 야기한다. 그러나, 동원된 I형 NKT 세포는 활성화되지 않으며, 사이토카인을 분비하지 않으며, 아네르기가 된다.
생체내 설파티드 투여 후의 면역조절 기작에 수반되는 세포 사건은 도 1에 나타나 있다. 설파티드의 투여는 a) αGalCer에 의한 자극에 반응하여 I형 NKT 세포의 시험관 내 증식을 억제하고(도 1b), b) 세포질내 IFN-γ 염색을 사용한 설파티드/CD1d-테트라머+ 세포의 백분율을 증가시킨다(도 1c).
조기 단계의 허혈 및 재관류 손상 동안 간의 I형 NKT 세포에 의한 IFN-γ의 분비는 미처리 동물에 비하여 설파티드를 제공받은 마우스에서 상당히 감소된다. 도 2c를 참조한다. 추가로, Jα18-/- 마우스에서의 I형 NKT 세포의 부재와 마찬가지로, 허혈/재관류 후의 간 손상은 설파티드로 처리된 마우스에서 상당히 감소된다. 도 4를 참조한다. 이는 간의 허혈 및 재관류 손상의 매개에서의 I형 NKT 세포에 대한 발병 역할을 나타낸다. I형 NKT 세포에 의한 IFN-γ 분비의 역할은 허혈성 기관 손상의 통상적인 특징일 수 있는데, 이는 신장 허혈 및 재관류 손상도 또한 1형 NKT가 결여된 Jα18-/- 마우스에서 약화되기 때문이다.
설파티드 투여는 IRI와 유사하게, 감소된 간세포 괴사에 의해 나타나는 바와 같이 콘카나발린 A(ConA)-유도 간염에 대하여 보호하며(도 1d 참조), 간세포 손상의 마커인 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 및 아스파르트산염 아미노 트랜스퍼라제(AST)의 혈청 수준을 감소시킨다(도 1e 참조). 이는 ConA-유도 간염에서의 I형 NKT 세포에 대한 발병 역할을 나타낸다.
집합적으로, 둘 모두의 간 손상, IRI 및 ConA-유도 간염의 모델로부터의 데이터는 다양한 원인으로부터 야기되는 간 염증에서 I형 NKT 세포가 유해한 역할을 수행하고, 설파티드-반응성 II형 NKT 세포가 보호 역할을 수행하는 면역조절 경로와 일치한다. 이러한 보호는 I형 NKT 세포에 의한 사이토카인 분비의 저해(저해된 표현형) 및 미성숙 골수 세포(CD11b+Gr-1+) CD11b+Gr-1- 및 NK 세포의 간 동원의 상당한 감소와 관련이 있다. I형 NKT 세포에서의 저해는 또한 일반적인 수지상 세포(cDC)의 관용유도 또는 변형와 관련이 있으며, 이들은 저해된 I형 NKT 세포와 함께, 후천성 Th1/Th17 CD4+/CD8+ T 세포의 활성화/증식을 저해한다. 이는 설파티드의 투여가 II형 NKT 세포의 활성을 자극하며, 차례로 I형 NKT 세포 활성과, I형 NKT 세포-매개의 염증에 의해 야기되는 간 손상을 저해하는 모델을 야기한다. 도 3을 참조한다.
알코올성 간질병에서의 NKT 세포의 역할
알코올성 간질병(ALD)은 과도한 알코올 소비에 의해 야기되는 간 세포에 대한 손상의 결과로 발병한다. ALD의 임상적 징후(manifestation)가 관찰되기 전에, 다수의 발작이 필요할 수 있다. 그러나, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 상당히 증가된 수의 I형 NKT 세포(αGalCer/CD1d-테트라머+ 세포), CD4+ 세포 및 CD11b+Gr-1+ 골수 세포가 만성 알코올 소비 후에 간에서 관찰되나 II형 NKT 세포 또는 CD11b+Gr-1- 세포는 관찰되지 않는다. 실시예 6 및 도 5를 참조한다. CD69 마커의 증가된 발현은 추가로, I형 NKT 세포가 부분적으로 활성화됨을 나타낸다. 따라서, 심지어 질병의 임의의 임상 징후의 부재 하에(비임상 단계), 염증 반응을 매개하는 세포가 과도한 알코올 소비 후에 간에서 축적된다. I형 NKT 세포의 부재 하에(Jα18-/- 마우스), 만성 알코올 소비 후의 간에서의 CD11b+Gr-1+ 골수종 세포의 축적이 상당히 감소된다. 실시예 6 및 도 5를 참조한다. 이들 데이터에 의해, I형 NKT 세포가 ALD의 비임상 단계를 매개하는데 수반됨이 제시된다.
ALD의 비임상 단계에서의 I형 NKT 세포에 대한 역할을 뒷받침하는 데이터와 일치하게, 과도한 알코올 소비 후의 간 손상의 임상 징후는 예를 들어, I형 NKT 세포 결핍(Jα18-/-) 마우스에서 조직학 및 간 효소 분석으로 측정시 상당히 감소된다. 실시예 6 및 도 6 및 7을 참조한다. 이들 데이터에 의해, I형 NKT 세포가 간에 대한 알코올성 손상에서 중요한 역할을 수행하는 것이 시사된다.
NKT 세포는 이들이 CD1d 분자의 맥락에서 지질 항원을 인식할 수 있게 하는 T 세포 수용체를 발현한다. 특정 이론에 구속하고자 하지 않고, I형 NKT 세포는 CD1d-발현 항원 제시 세포(APC)에 의한 산화된 자가-지질의 국소 제시에 의해 에탄올 소비 후에 간에서 활성화된다. 이어서, 활성화된 I형 NKT 세포는 쿠퍼 세포 활성화, 과립구의 동원/활성화에 이어서 간세포에 대한 염증 손상을 야기하는 다단계 과정을 개시한다.
알코올 소비 후에 NKT 세포 하위유형 간의 상호작용은 간 손상에 대한 단계, 심각한 경우에는 알코올성 간질병(ALD)을 만든다. 본 명세서에 기재된 몇몇 구현예들은 알코올 소비 후에 간에 대한 손상을 치료하거나, 완화시키거나, 예방하기 위한, I형 NKT 세포 및 II형 NKT 세포의 반대 역할과, 이들의 다른 간 세포와의 상호작용의 조작 방법 및 이를 위한 조성물에 관한 것이다.
본 명세서에 기재된 몇몇 구현예들은 간에 대한 알코올-유도 손상을 치료하거나 완화시키거나 예방하기 위한 NKT 세포 하위유형(subtype)의 활성의 조절에 관한 것이다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 설파티드 또는 레티노산 수용체(RAR) 효능제의 투여는 알코올-유도 간 손상을 저해한다. 예를 들어, 만성 알코올 소비 동안, 에탄올 폭음 전에, 설파티드 또는 레티노산 수용체(RAR) 효능제, 올-트랜스 레티노산(ATRA)의 주사는 조직학 시험 및 혈청 중의 간 효소 수준의 분석에 의해 나타낸 바와 같이 보호 효과를 가졌다. 실시예 7 및 도 6 및 7을 참조한다.
몇몇 구현예들은 설파티드에 반응성인 II형 NKT 세포의 주요 서브셋에 대한 알코올 유도 간 손상에서의 보호 역할에 관한 것이다. 설파티드에 의한 이러한 NKT 세포 서브셋의 활성화는 과도한 알코올 소비 후에 I형 NKT 세포-매개의 손상을 저해한다. 설파티드-매개의 보호는 II형 NKT 세포의 활성화 및 간의 I형 NKT 세포에 의한 IFN-γ 분비의 저해 및 골수 세포, 예를 들어, CD11b+Gr-1int 및 Gr-1- 서브셋 및 NK 세포의 간으로의 I형 NKT 세포-매개의 동원의 억제와 관련이 있다.
설파티드 처리는 과도한 알코올 소비 후에 간 손상으로부터의 거의 완전한 보호를 야기한다. 도 6 및 7을 참조한다. 특정 이론에 구속시키고자 하지 않고, 설파티드의 보호 효과는 I형 NKT 세포 및 cDC에 대하여 저해 효과를 가하는 II형 NKT 세포의 직접적인 활성화를 통해 매개된다.
2명의 건강한 공여자의 말초 혈액 림프구(PBL) 유래의 T 세포주를 αGalCer 또는 설파티드 중 어느 하나로의 시험관 내 자극 후에 생성하고 유세포분석에 의해 분석하였다. 대략 2%의 T 세포가 2 사이클의 자극 후에 이러한 세포주에서 설파티드/hCD1d-테트라머로 염색된다. 뮤린(murine)계와 유사하게, 이들 세포는 불변의 Vα24-Vα11 TCR을 사용하지 않는다. 이들 데이터는 건강한 개체에서의 설파티드-반응성 II형 NKT 세포의 존재를 보여주며, 알코올성 간질병에서 인간 II형 NKT 세포의 특성화에서의 설파티드/인간CD1d-테트라머 사용의 유효성을 나타낸다.
일부 구현예들에서, 설파티드는 예를 들어, 시그마 인코포레이티드(Sigma Inc.)(Chicago, IL, USA)로부터 수득되는 약 20가지의 상이한 종의 혼합물인 소의 뇌-유래의 설파티드일 수 있다. 다른 구현예들에서, 설파티드는 반합성이며, 단일 종의 설파티드, 예를 들어, 마이트레야 인코포레이티드(Maitreya Inc)(Pleasant Gap, PA, USA)로부터 수득되는 시스-테트라코세노일 설파티드(cis-tetracosenoyl sulfatide) 또는 리소설파티드(lysosulfatide)이다. 또 다른 구현예들에서, 설파티드는 완전 합성 설파티드일 수 있다.
소의 뇌 미엘린으로부터 유래된 설파티드는 C19에 불포화가 존재하는 포화/불포화 주 아실 사슬(C24)의 2:1 혼합물로 이루어진다. 몇몇 구현예들은 합성 설파티드 유사체, 예를 들어, 포화 아실 사슬(C24) 및 불포화 사슬(C24:1)이 있는 유사체뿐 아니라, 지방산 또는 스핑고신 모이어티에서 상이한 길이의 아실 사슬(보다 더 짧을 뿐 아니라 보다 더 긴, 예를 들어, C18, C32)로 구성된 유사체 및 갈락토스 모이어티상의 3' 대 4'-황산화 기가 있는 위치 이성질체(3'-803 대 4'-803)의 용도에 관한 것이다.
일부 구현예들에서, 설파티드는 하기의 화학식 I을 갖는다:
Figure 112014006101917-pct00003
상기 식에서, R1은 결합, 수소, C1 내지 C30 알킬, C1 내지 C30 치환된 알킬, C1 내지 C30 알케닐, C1 내지 C30 치환된 알케닐 및 C5 내지 C12 당으로 구성된 군으로부터 선택되고; R2는 수소, 하이드록시기, 메톡시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되며; R3은 수소, 하이드록시기, 메톡시기, 에톡시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되고; R4는 수소, 하이드록시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되며; R5는 수소, 하이드록시기, 카르보닐, 알콕시기 및 결합으로 구성된 군으로부터 선택되고; R6은 C1 내지 C40 알킬, C1 내지 C40 치환된 알킬, C1 내지 C40 알케닐, C1 내지 C40 치환된 알케닐 및 C1 내지 C40 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; R7은 C1 내지 C40 알킬, C1 내지 C40 치환된 알킬, C1 내지 C40 알케닐, C1 내지 C40 치환된 알케닐 및 C1 내지 C40 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; R8은 수소, 하이드록시기, 카르보닐, 알콕시기 및 결합으로 구성된 군으로부터 선택된다.
다른 구현예들에서, 설파티드는 하기의 화학식 II를 갖는다:
Figure 112014006101917-pct00004
상기 식에서, R1은 C1 내지 C40 알킬, C1 내지 C40 치환된 알킬, C1 내지 C40 알케닐, C1 내지 C40 치환된 알케닐 및 C1 내지 C40 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; R2는 수소, 하이드록실기, 카르보닐, 알콕시기 및 결합으로 구성된 군으로부터 선택된다.
다른 구현예에서, 설파티드는 하기의 화학 구조를 갖는다:
Figure 112014006101917-pct00005
.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "알킬"이라는 용어는 임의의 비분지형 또는 분지형, 포화 탄화수소를 의미한다. "치환된 알킬"이라는 용어는 임의의 비분지형 또는 분지형, 치환된 포화 탄화수소를 의미한다. 환형 화합물, 환형 탄화수소 및 헤테로원자(heteroatom)를 갖는 환형 화합물 둘 모두는 "알킬"의 의미 내에 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "치환된"이라는 용어는 수소 원자의 작용기로의 임의의 치환을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "작용기"라는 용어는 이의 통상의 정의를 가지며, 바람직하게는 할로겐 원자, C1 내지 C20 알킬, 치환된 C1 내지 C20 알킬, 과할로겐화 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 벤질, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시아노 및 니트로로 구성된 군으로부터 선택되는 화학적 모이어티를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "할로겐" 및 "할로겐 원자"라는 용어는 원소 주기율표의 17족의 방사성-안정성 원자, 예를 들어, 플루오르, 염소, 브롬 또는 요오드 중 임의의 것을 지칭하며, 플루오르 및 염소가 특히 바람직하다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "알케닐"이라는 용어는 임의의 비분지형 또는 분지형, 치환된 또는 비치환된, 불포화 탄화수소를 의미한다. "치환된 알케닐"이라는 용어는 하나 이상의 작용기로 치환된 임의의 비분지형 또는 분지형, 치환된 불포화 탄화수소를 의미하며, 비분지형 C2 내지 C6 알케닐 2차 아민, 치환된 C2 내지 C6 이차 알케닐 아민 및 비분지형 C2 내지 C6 알케닐 3차 아민이 "치환된 알킬"의 정의 내에 있다. 환형 화합물, 불포화 환형 탄화수소 및 헤테로원자를 갖는 환형 화합물이 "알케닐"의 의미 내에 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "알콕시"라는 용어는 임의의 비분지형 또는 분지형, 치환된 또는 비치환된, 포화 또는 불포화 에테르를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "설파티드"라는 용어는 이의 일반적인 익숙한 의미를 보유하며, 분자의 당 부분에 하나 이상의 설페이트기를 함유하는 세레브로시드 황산 에스테르를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "세레브로시드"라는 용어는 당을 함유하며, 일반적으로 뇌 및 신경 조직에서 통상적으로 관찰되는 유형의 임의의 지질 화합물을 지칭한다.
화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물은 이의 약제학적으로 허용가능한 비독성 염의 형태일 수 있다. 화학식 (I), (II) 및 (III)의 염은 산 부가염, 예를 들어, 무기산(예를 들어, 염산, 황산, 질산 및 인산)과의 염 또는 유기산(예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 말레산, 올레산, 팔미트산, 시트르산, 석신산, 타르타르산, 푸마르산, 글루탐산, 판토텐산, 라우릴설폰산, 메탄설폰산 및 프탈산)과의 염을 포함한다.
화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물은 이의 용매화물(예를 들어, 수화물)의 형태일 수 있다.
화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물은 설파티드를 합성하기 위한 임의의 유의적 방법에 의해 생성될 수 있다.
화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물은 또한 천연의 생성물(예를 들어, 생물학적 유기체)로부터 단리되고 컬럼 크로마토그래피 등에 의해 정제될 수 있다.
일 구현예에서, 설파티드는 다음의 화학식을 갖는다: (2S, 3R, 4E)-N-네르보닉-1-[-D-(3-설페이트)-갈락토피라노실]-2-아미노-옥타데센-3-올. 이러한 화학식은 또한 시스-테트라코세노일 설파티드로도 지칭된다.
일부 구현예들에서, 환자에게 투여되는 설파티드의 특정량은 치료할 질병 또는 질환뿐 아니라 치료될 환자의 연령, 체중 및 성별에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 예를 들어, 장 또는 혈액에서 이러한 최종 농도를 달성하기 위하여, 본 구현예들의 단일 용량 조성물 중의 설파티드 분자의 양은 일반적으로 약 0.1 밀리그램 내지 약 100 밀리그램, 바람직하게는 약 2.0 밀리그램 내지 약 60 밀리그램, 더욱 바람직하게는 약 20 밀리그램 내지 약 50 밀리그램일 것이다. 이와 같이, 본 구현예의 단일 경구 용량 조성물 중의 이차 치료 화합물의 양은 일반적으로, 약 0.01 밀리그램 내지 약 1000 밀리그램, 더욱 바람직하게는 약 0.1 밀리그램 내지 약 100 밀리그램의 범위일 것이다. 명백하게, 정확한 용량은 치료될 질병 또는 장애에 따라 달라질 것이며, 바람직한 범위가 용이하게 결정될 수 있다.
일 구현예에서, 0.1 내지 10 ㎎/㎏(체중)의 설파티드가 환자에게 투여된다. 더욱 바람직하게는, 1 내지 10 ㎎/㎏(체중)의 설파티드가 투여된다. 바람직하게는, 용량은 필요에 따라 매일 반복된다.
NKT 세포 활성에 대한 레티노산 수용체( RAR ) 효능제의 효과
본 명세서에 기재된 바와 같이, 레티노산 수용체(RAR) 효능제, 올 트랜스 레티노산(ATRA)의 투여는 알코올 소비에 의해 야기되는 간 손상을 상당히 저해한다. 에탄올 섭취는 간 레티닐 에스테르를 고갈시키고, 올 트랜스 레티노산(ATRA), 많은 생물학적 기능을 지원하는 비타민 A의 생물학적 활성 형태의 생리학적 수준을 변경시키며, 심지어 IL-6의 존재 하에서 FoxP3+ Treg로의 나이브 CD4+ T 세포 분화의 생성, 안정성 및 기능을 증진시킬 수 있다. 본 명세서에 기재된 몇몇 구현예들은 ATRA가 I형 NKT 세포에 의한 사이토카인 분비를 억제하는 것을 포함하여, I형 NKT 세포 이펙터 기능을 저해한다는 관찰에 관한 것이다. 실시예 8, 9 및 11, 및 도 8, 10 및 11을 참조한다. 추가로, ATRA는 I형 NKT 세포 활성에 대한 직접적인 저해 효과를 가져, 항원-제시 세포의 부재 하에서 이의 저해 효과를 가한다. 실시예 11, 도 11을 참조한다. 또한, ATRA는 단백질 항원, 예를 들어, 미엘린 염기성 단백질 또는 MBPAc1-9를 인식하는 통상의 MHC-제한 CD4+ T 세포의 활성을 직접 저해하지 않는다. 특정 이론에 구속하고자 하지 않고, 이들 데이터는 ATRA가 I형 NKT 세포를 저해함으로써 과도한 알코올 소비에 의해 야기되는 간 손상에 대하여 보호하는 것을 나타낸다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, RAR 효능제는 I형 NKT 세포에서 저해를 유도한다. 도 12, 14 및 15 내지 17을 참조한다. 추가로, 과도한 알코올 소비로부터 야기되는 I형 NKT 세포 매개의 염증에 의해 야기되는 간 손상은 RAR, 효능제의 투여에 의해 예방되거나, 감소되거나 또는 완화될 수 있다. 간은 다양한 상이한 이유로, 염증이 생길 수 있다. 예를 들어, 간 염증은 박테리아 또는 바이러스 감염, 손상 또는 그 자체의 면역계로부터의 공격에 의해 야기될 수 있다. 염증이 통상 보호 반응이고, 치유 과정의 필요한 단계이기 때문에, 지속 또는 만성 염증은 손상을 야기할 수 있다. 본 명세서에 기재된 일부 구현예들은 염증 후에, 염증과 관련하여, 또는 염증에 의해 야기되는 간 손상을 초래하는 선천 면역 기작의 RAR 효능제 매개의 조절에 관한 것이다. 일부 구현예들은 선천 면역계의 성분 간의 상호작용을 조절하여, 비-자가 확인 병원체에 대한 선천 면역 반응에 영향을 주지 않거나, 최소의 영향을 주면서, 소화관-유래의 또는 대사물질-유래의 항원에 대한 관용을 제공하는 I형 NKT 세포 활성의 RAR 효능제 매개의 저해를 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.
RAR 효능제가 I형 NKT 세포를 직접 아네르기화시킬 수 있기 때문에, RAR 효능제를 사용하여, I형 NKT 세포가 발병 역할을 수행하는 임의의 징후를 치료할 수 있다. 본 개시내용의 구현예들에 의해 치료할 수 있는 질병의 일부 예에는 알코올 유도 간염, 비-알코올성 지방증 간염, 간경변증, 전격성(fulminating) 간경변증, 특발성 간염, 바이러스-유도 간염(A, B, C 및 기타), 간-담도 암종과 관련된 염증성 간염, 다발경화증, 1형 당뇨병, 허혈성 재관류 손상, 고형 장기 이식(solid organ transplantation), 전신 홍반성 낭창, 류마티스 관절염, 근위축성 측삭 경화증 및 염증성 장 질병(크론 및 대장염)이 포함된다.
일부 구현예들에서, 자가면역 또는 면역 관련 질병 또는 장애의 다양한 징후는 I형 NKT 세포 활성의 RAR 효능제 매개의 저해에 의해 치료되거나, 예방되거나 완화된다. 특히, 본 구현예의 일 태양은 유효량의 RAR 효능제를 사용한, 자가면역 또는 면역 관련 질병 또는 장애, 예를 들어, 다발경화증, 전신 홍반성 낭창, AIDS, 알츠하이머병, 류마티스 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 자가면역 간염, 천식 및 셀리악병(celiac disease)의 증후(symptom)를 앓고 있는 환자의 치료 방법에 관한 것이다. 일부 구현예들에서, I형 NKT 세포 활성의 RAR 효능제 매개의 저해는 천식 증후를 치료하거나, 예방하거나 완화시킨다.
일부 구현예들은 RAR 효능제를 투여함에 의한, 허혈성 재관류 후의 I형 NKT 세포 매개의 염증의 저해 또는 예방 방법에 관한 것이다. I형 NKT 세포는 질환, 예를 들어, 허혈 및 재관류 손상에서 발병 역할을 수행한다. 재관류 손상은 허혈 기간 후에 혈액 공급이 복구되는 경우, 다양한 조직에서 발생할 수 있다. 예에는 압궤 손상(crush injury) 후의 골격근 조직, 심근경색증 또는 심장 수술 또는 허혈성 심장 질병과 관련된 심근, 뇌졸중 또는 뇌 외상과 관련된 신경 조직, 및 수술 또는 외상과 관련된 간 및 신장 조직이 포함된다. 또한, 허혈성 재관류 손상은 기관 이식에서 이식편 조직의 질과 기능에서 주요 역할을 수행한다. 허혈 및 재관류 손상은 입원 기간의 증가 및 장기간 이식편 생존 감소에 대한 주요 원인이다. 일부 구현예들에서, I형 NKT 세포 활성의 RAR 효능제 매개의 저해는 수술 또는 외상과 관련된 간의 허혈성 재관류 손상을 저해하거나 예방한다.
본 명세서에 기재된 구현예들은 하나 이상의 레티노산 수용체(RAR) 효능제에 의한 I형 NKT 세포 활성의 저해에 관한 것이다. 레티노산 수용체는 3가지 주요 하위유형을 포함한다: RARα, RARβ, 및 RARγ 일부 구현예들은 하나 이상의 pan-활성 RAR 효능제, 이러한 pan-활성 RAR 효능제의 전구체 및 이들의 혼합물에 의한 I형 NKT 세포 활성의 저해에 관한 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "pan-활성 RAR 효능제"라는 용어는 실질적으로 동일하게 또는 비선택적으로 RARα, RARβ, 및 RARγ에 영향을 미치는, 예를 들어, 이들을 활성화시키는 RAR 효능제를 지칭한다. 일부 구현예들은 RARα에 비하여 선택적으로 또는 심지어는 특이적으로 RARβ 및 RARγ 중 적어도 하나, 바람직하게는 둘 모두에 영향을 미치는, 예를 들어, 활성화시키는데 효과적인 하나 이상의 활성 RAR 효능제, 이러한 활성 RAR 효능제의 전구체 및 이들의 혼합물에 의한 I형 NKT 세포 활성의 저해에 관한 것이다. 이러한 문맥에 사용되는 바와 같이, "선택적으로"라는 용어는 RAR 효능제, RAR 효능제의 전구체 및 이들의 혼합물이 RARα에 비하여 RARβ 및 RARγ 중 적어도 하나, 바람직하게는 둘 모두에 영향을 미치는데, 바람직하게는 적어도 약 10 또는 적어도 약 100배 내지 약 1000배 이상 더 효과적인 것을 의미한다. 일부 구현예들은 하나 이상의 하위유형-선택적 RAR 효능제, 이러한 하위유형-선택적 RAR 효능제의 전구체 및 이들의 혼합물에 의한 I형 NKT 세포 활성의 저해에 관한 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "하위유형-선택적 RAR 효능제"라는 용어는 하나의 RAR 하위유형에 선택적으로 영향을 미치는, 예를 들어, 이를 활성화시키는 RAR 효능제를 말한다. RARα, RARβ, 및 RARγ-선택성을 갖는 레티노이드 화합물은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조로 포함되는 미국 특허 제6,534,544호 및 제6,025,388호에 개시되어 있다.
몇몇 구현예들은 하나 이상의 레티노산 수용체(RAR) 효능제를 투여함에 의한 전염증성 I형 NKT 세포 활성의 저해 방법에 관한 것이다. RAR 효능제의 예에는 표 1에 열거된 RAR 효능제가 포함되나 이들에 한정되지 않는다.
Figure 112014006101917-pct00006
Figure 112014006101917-pct00007
Figure 112014006101917-pct00008
Figure 112014006101917-pct00009
일부 구현예들에서, 전-염증성 I형 NKT 세포 활성은 ATRA, 레티놀, 9-시스-RA 또는 13-시스-RA, 트레티노인, AM580, AC55649, CD1530 또는 타자로텐으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 RAR 효능제에 의해 저해된다. 일부 구현예들에서, 전염증성 I형 NKT 세포 활성은 하나 이상의 폴리올레핀계 레티노이드, 예를 들어, 아이소트레티노인 및 아시트레틴에 의해 저해된다. 일부 구현예들에서, 전염증성 I형 NKT 세포 활성은 에트레티네이트, 아시트레틴 및 아이소트레티노인으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 RAR 효능제에 의해 저해된다.
몇몇 구현예들은 타자로텐, 타자로텐산 또는 이들의 혼합물에 의한 전염증성 I형 NKT 세포 활성의 저해에 관한 것이다. 타자로텐은 상응하는 유리산, 타자로텐산으로 대사되는 에틸 에스테르 전구약물이다. 타자로텐은 올-트랜스-레티노산, 레티노산 수용체(RAR)에 대한 천연의 리간드에 비하여 제한된 입체형태적 유연성을 제공하는 경질 고리-로킹 구조(rigid ring-locked structure)를 갖는다. 이러한 구조 변화는 타자로텐산에게 RAR에 대한 특이성 및 RARβ 및 RARγ에 대한 선택성을 제공한다.
RAR 효능제의 예에는 추가로 시스- 및 트랜스-레티노산의 에스테르, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 아이소-프로필, 부틸, 아이소-부틸, 헥실, 헵틸, 에틸헥실, 옥틸, 노닐, 라우릴, 올레일, 스테아릴, 하이드록시에틸, 하이드록시프로필, 벤질, 알파-메틸벤질, 알파-프로필페닐, 아밀, 아이소-아밀, 아니실, 세틸, 멘틸, 시나밀, 피나콜, 푸릴 또는 미리스틸을 포함하나 이들에 한정되지 않는 일차, 이차 또는 삼차 알코올이 포함된다.
또한, RAR 효능제의 약제학적으로 허용가능한 염을 사용하여, I형 NKT 세포 활성을 저해할 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물은 충분히 산성이거나, 충분히 염기성이거나 둘 모두의 작용기를 지니며, 이에 따라, 임의의 다수의 유기 또는 무기 염기, 및 무기 및 유기산과 반응하여, 염을 형성할 수 있다.
염기성 기를 사용하여 RAR 효능제로부터 산 부가염을 형성하기 위해 사용될 수 있는 산의 예에는 무기산, 예를 들어, 염산, 브롬산, 요오드산, 황산, 인산 등, 및 유기산, 예를 들어, p-톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 옥살산, p-브로모페닐-설폰산, 탄산, 석신산, 시트르산, 벤조산, 아세트산 등이 포함된다. 이러한 염의 예에는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설피트, 바이설피트, 포스페이트, 모노하이드로겐포스페이트, 다이하이드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브롬화물, 아이오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 아이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레에이트, 부틴-1,4-다이오에이트, 헥신-1,6-다이오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 다이니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 설포네이트, 자일렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 감마-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등이 포함된다.
산성 기를 사용하여 RAR 효능제로부터 염기 부가염을 형성하기 위해 사용될 수 있는 염기의 예에는 알칼리 금속, 예를 들어, 나트륨 칼륨 및 리튬의 하이드록시드; 알칼리 토금속, 예를 들어, 칼슘 및 마그네슘의 하이드록시드; 기타 금속, 예를 들어, 알루미늄 및 아연의 하이드록시드; 암모니아 및 유기 아민, 예를 들어, 비치환된 또는 하이드록시-치환된 모노-, 다이- 또는 트라이알킬아민; 다이사이클로헥실아민; 트라이부틸 아민; 피리딘; N-메틸, N-에틸아민; 다이에틸아민; 트라이에틸아민; 모노-, 비스- 또는 트리스-(2-하이드록시-하급 알킬 아민), 예를 들어, 모노-, 비스-, 트리스-(2-하이드록시에틸)아민, 2-하이드록시-tert-부틸아민 또는 트리스-(하이드록시메틸)메틸아민, N,N-다이-저급 알킬-N-(하이드록시 저급 알킬)-아민, 예를 들어, N,N-다이메틸-N-(2-하이드록시에틸)아민 또는 트라이-(2-하이드록시에틸) 아민; N-메틸-D-글루카민; 및 아미노산, 예를 들어, 아르기닌, 라이신 등이 포함되나 이들에 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "환자"라는 용어는 치료적 처치의 수여자를 말하며, 동물계 내의 모든 유기체를 포함한다. 바람직한 구현예들에서, 동물은 포유류과, 예를 들어, 인간, 소, 양, 돼지, 고양이, 물소, 개, 염소, 말, 당나귀, 사슴 및 영장류 내에 존재한다. 가장 바람직한 동물은 인간이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 각각 "예방하다 "예방하는" 및 "예방"을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 작용제의 "유효량"이라는 용어는 전-염증성 I형 NKT 세포 활성으로부터 야기되는 간 손상을 치료하거나, 저해하거나 예방하기에 충분한 양이다.
일부 구현예들은 ALD의 임상 징후 전에, 설파티드 및/또는 RAR 효능제를 사용한 환자의 전처리에 관한 것이다. 몇몇 구현예들에서, 환자를 알코올 폭음 소비 전에 유효량의 설파티드 및/또는 RAR 효능제로 처치한다. 일부 다른 구현예들에서, 환자를 알코올 폭음 소비 약 0.5시간 내지 약 18시간 전에, 유효량의 설파티드 및/또는 RAR 효능제로 처치한다. 일부 다른 구현예들에서, 환자를 만성 알코올 소비 기간 동안 유효량의 설파티드 및/또는 RAR 효능제로 처치한다.
일부 구현예들에서, 환자에게 투여되는 RAR 효능제의 특정량은 치료 중인 질병 또는 질환뿐 아니라 치료 중인 환자의 연령, 중량 및 성별에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 예를 들어, 장 또는 혈액 중에서 이러한 최종 농도를 달성하기 위하여, 본 구현예들의 단일 용량 조성물 중의 RAR 효능제의 양은 일반적으로 약 0.1 밀리그램 내지 약 100 밀리그램, 바람직하게는 약 2.0 밀리그램 내지 약 60 밀리그램, 더욱 바람직하게는 약 20 밀리그램 내지 약 50 밀리그램일 것이다. 적절한 용량의 예에는 약 0.1 내지 약 10 ㎎/일; 약 0.5 내지 약 2 ㎎/일; 약 0.01 내지 100 ㎎/일; 약 1 내지 약 50 ㎎/일; 약 0.1 ㎎/일 내지 약 1.0 ㎎/일; 약 1.0 ㎎/일 내지 약 5.0 ㎎/일; 약 5.0 ㎎/일 내지 약 10.0 ㎎/일; 약 10.0 ㎎/일 내지 약 15 ㎎/일; 약 15.0 ㎎/일 내지 약 20.0 ㎎/일; 약 20.0 ㎎/일 내지 약 25.0 ㎎/일; 약 30.0 ㎎/일 내지 약 35.0 ㎎/일; 약 35.0 ㎎/일 내지 약 40.0 ㎎/일; 약 40.0 ㎎/일 내지 약 45.0 ㎎/일; 약 45.0 ㎎/일 내지 약 50.0 ㎎/일; 약 50.0 ㎎/일 내지 약 55.0 ㎎/일; 약 55.0 내지 약 60.0 ㎎/일; 약 60.0 ㎎/일 내지 약 65.0 ㎎/일; 약 65.0 ㎎/일 내지 약 70.0 ㎎/일; 약 70.0 ㎎/일 내지 약 75.0 ㎎/일; 약 75.0 ㎎/일 내지 약 80.0 ㎎/일; 약 80.0 ㎎/일 내지 약 85.0 ㎎/일; 약 85.0 내지 약 90.0 ㎎/일; 약 85.0 ㎎/일 내지 약 90.0 ㎎/일; 약 90.0 ㎎/일 내지 약 95.0 ㎎/일; 약 95.0 ㎎/일 내지 약 100.0 ㎎/일이 포함된다. 명백하게, 정확한 용량은 치료 중인 질병 또는 장애에 따라 달라질 것이며, 바람직한 범위는 용이하게 결정될 수 있다.
타자로텐이 I형 NKT 세포 활성의 감소를 시행하기 위해 경구 투여되는 경우, 타자로텐의 1일 용량은 바람직하게는 약 0.3 ㎎/일 내지 약 7 ㎎/일 또는 약 8 ㎎/일의 범위, 더욱 바람직하게는 약 0.6 ㎎/일 내지 약 6.5 ㎎/일 또는 약 7 ㎎/일의 범위이다. 일부 구현예들에서, 경구 투여되는 타자로텐은 0.4 ㎎/일, 0.75 ㎎/일, 1.5 ㎎/일, 2.8 ㎎/일, 3 ㎎/일, 4.5 ㎎/일, 6 ㎎/일 및 6.3 ㎎/일을 포함하는 타자로텐의 1일 용량으로 투여된다.
구현예들에 따르면, RAR 효능제는 환자의 증후를 완화시키기 위해 투여되거나 장애 그 자체의 기작을 없애기 위해 투여될 수 있다. 특정 구현예들에서, RAR 효능제는 예방 조치로 투여될 수 있다. 일부 구현예들에서, 다수의 용량의 RAR 효능제가 투여된다. 이들 치료 목적이 종종 관련이 있으며, 치료가 다양한 인자에 기초하여 특정 환자에 대해 맞춤화될 수 있음이 당업자에 의해 인식될 것이다. 이들 인자는 환자의 연령, 성별 또는 건강, 및 자가면역 또는 면역 관련 질병 또는 장애의 진행을 포함할 수 있다. 이에 따라, 환자를 위한 치료 방법은 용량, 투여 시간, 투여 경로, 및 다른 치료법의 동시 또는 순차적 시행을 위해 맞춤화될 수 있다.
일부 구현예들에서, 하나 이상의 RAR 효능제 화합물은 단독으로 또는 다른 치료 화합물과 병용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 RAR 효능제 화합물은 설파티드와 병용하여 투여될 수 있다. 알코올성 간질병, 염증성 질병, 자가면역 질병 또는 재관류 손상의 치료에 사용되는 현재 공지되어 있는 임의의 치료 화합물이 사용될 수 있다. 일부 구현예들에서, RAR 효능제는 황화수소(H2S)와 병용하여 투여될 수 있다. 일부 구현예들에서, RAR 효능제는 산화방지제와 병용하여 투여될 수 있다. 일부 구현예들에서, RAR 효능제는 예를 들어, 코르티코스테로이드, 생물물질(biology)(예를 들어, 항-TNF-알파 및 항-IL-6), 면역조절제(예를 들어, RU-486), 질병 변경 항-류마티스 약물(DMARDS, 예를 들어, 레플루노미드), COX-2 저해제(셀레콕시브(celecoxib)), 비스테로이드성 항염증 약물(NSAIDS, 예를 들어, 나프록센), 경구 항당뇨병제(OAD, 예를 들어, 메트포르민(metformin) 또는 (시타글리프텐(sitaglipten)), GLP-1 효능제, 인슐린, PPAR 효능제/길항제, EGF 매개체(항암제), 간암을 치료하는데 유효한 다른 작용제, 간암을 위한 세포 기반의 치료법; C형 간염을 위한 인터페론(IFN), 다발경화증 또는 홍반성 낭창; 및 LFA-1 길항제와 병용하여 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 RAR 효능제 화합물 및 설파미드 화합물은 약제학적 조성물로 혼입되는 활성 성분으로 사용될 수 있다. 일부 구현예들에서, 약제학적 조성물은 단일의 활성 성분을 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 약제학적 조성물은 2, 3, 4, 5가지 이상의 활성 성분을 포함할 수 있다. 모든 투여 방식. 예를 들어, 경구, 직장, 비경구, 국소 또는 정맥내, 근육내, 흉골내 또는 피하 주사에 의한 또는 흡입에 의한 적절한 형태가 고려된다. 제형은 적절한 경우, 편리하게 개별 용량 단위로 제시될 수 있으며, 약제의 분야에 널리 공지되어 있는 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 활성 성분은 공지되고 확립된 실행에 따라, 통상적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제와 함께 제형화될 것이다. 따라서, 약제학적 조성물은 액체, 분말, 엘릭시르(elixir), 주사가능한 용액, 현탁액, 좌제 등으로 제형화될 수 있다.
일부 구현예들에 따른 활성 성분은 분말 형태의 활성 성분을 포함하는 정제, 경질 젤라틴 캡슐, 연질 젤라틴 캡슐, 부형제와의 배합물, 액체 또는 용액, 현탁액, 고용체로서의 경구 투여를 위해 투여용으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예들에 따른 활성 성분은 고체 투여형, 예를 들어, 급속 용해 또는 발포정, 박막, 협측 웨이퍼(buccal wafer)로서 또는 액체 또는 반고체 형태, 예를 들어, 겔, 용액, 에멀젼, 현탁액으로서 구강내 투여(설하 또는 협측)를 위한 투여용으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예들에 따른 활성 성분은 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 또는 에멀젼으로서의 주사를 위한 투여용으로 제형화될 수 있다. 오일계 용액 및 현탁액은 천연 및/또는 합성 오일, 예를 들어, 대두유, 면실유, 광유, 참기름, 피마자유, 수소화 식물유, 밀랍의 혼합물을 포함한다. 일부 구현예들에 따른 활성 성분은 크림, 겔, 에멀젼, 수계 용액, 오일계 용액, 현탁액, 막, 패치, 폼(foam)으로서, 경피 투여를 위한 투여용으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예들에 따른 활성 성분은 분말, 현탁액, 용액, 에멀젼으로서 비강내 투여를 위한 투여용으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예들에 따른 활성 성분은 미분된(micronized) 분말로서 폐 전달을 위한 투여용으로 제형화될 수 있다. 경구 투여는 일차 통과 대사(first pass metabolism)뿐 아니라 대사 효소의 유도와 관련이 있다. 따라서, 경구 투여되는 레티노산의 용량 세기 및 투여 요법은 최적의 효과를 위해 맞춤화될 수 있다. 대안적인 전달 경로, 예를 들어, 설하, 협측, 주사, 폐 및 경피가 경구 투여보다 바람직할 수 있다. 대안적인 투여 경로, 예를 들어, 기재된 바와 같은 것들은 일차 통과 대사 및 GI 흡수를 방지하며, 보다 적은 효소 유도가 나타나며, 고정된 반복 투여 약동학을 제공한다.
본 구현예들에 따른 약제학적 제형은 즉시 방출형 또는 변형 방출형(예를 들어, 지속 방출형, 박동성 방출형, 제어 방출형, 지연 방출형, 서방형)일 수 있다. 이것이 즉시 활성형이기 때문에, 경구 투여되는 약리학적 양의 레티노이드 이성질체는 부작용을 가질 수 있다. 이들 부작용은 치료법에서 경구 레티노이드의 이용에 심각한 한계가 되어 왔다. 국소 도포되는 레티노이드가 기형발생 법적책임을 거의 갖지 않지만, 피부 자극을 포함하여 이들의 용도를 제한하는 이러한 투여 경로와 관련된 다른 독성이 존재한다. 경구 및 국소 독성 둘 모두에 대한 주요 이유는 레티노이드가 투여 시에 완전히, 그리고 즉시 이용가능하기 때문이다. 레티노이드가 생체 내에서 보다 느리게, 그리고 더욱 지속적으로 이용가능하게 될 수 있는 과정은 레티노이드의 이용률의 피크(peak)와 밸리(valley)를 방지하여, 이에 의해, 보다 연장된 기간에 걸쳐 화합물의 생체내 유효 수준을 제공하고, 또한 종종 과량의 기질의 갑작스런 이용가능성으로부터 야기되는 독성을 방지하거나 실질적으로 감소시킬 것이다. 레티놀, 레티놀의 에스테르 및 특히, 레티놀의 지방 에스테르, 레티노산 또는 레티노산 에스테르의 오일 기반의 주사가능한 제형은 주 기준으로, 근육 내로 투여될 수 있으며, 이러한 원리에 따른 전신 서방형 전달을 제공한다.
일부 구현예들에서, 올-트랜스-레티노산 tert-부틸 에스테르의 제제는 하기와 같다. 0℃에서, 무수 에테르 중의 올-트랜스 레티노산(100 ㎎, 0.33 mmol)의 용액에, 염화옥살릴(42.3 ㎎, 0.333 mmol)을 첨가하고, 상기 온도에서 30분 동안 교반하고, 피리딘(28.7 ㎎, 0.363 mmol), 2-메틸-2-프로판올(26.8 ㎎, 0.363 mmol)을 첨가하고, 암 중에서 실온에서 교반하고, 이후에 TLC에 의해 나타내는 경우, 반응이 완료되었다. 이어서, 반응 혼합물을 물로 켄칭하고(quenched), 에테르(3 X 10 ㎖), 포화 중탄산 용액(3 X 5 ㎖)으로 추출하고, 물(3 X 5 ㎖)로 다시 추출하고, 건조시키고(MgSO4), 증발시켰다. 농후한 잔류물을 헥산 중에 재용해시키고, 실리카 셉-팍(silica Sep-Pak) 카트리지(2 g) 상에 적용하였다. 헥산/에틸 아세테이트(9.7:0.3)를 사용한 용리에 의해, 레티노산의 부틸 에스테르가 제공되었다. 헥산/아이소프로판올(90:10) 용매계를 사용하여 HPLC(10 ㎜ X 5 ㎝ 조르박스-실(Zorbax-Sil) 컬럼, 4 ㎖/분)에 의해 최종 정제를 달성하였다. 순수한 올-트랜스 레티노일 부티레이트 2(98 ㎎, 82.6%)를 농후한 오일로서 용리시켰다.
일부 구현예들은 하기 기재되는 바와 같은 주사를 위한 부틸-레티노산 에스테르의 제형에 관한 것이다. 10g 부틸-레티노산 에스테르 용액을 약간 고온에서, 무균 조건 하에 고-전단 혼합으로, 0.1g 부틸화 하이드록시아니솔 및 10g 벤질 알코올을 함유하는 73g의 면실유의 혼합물 중에 용해시켰다. 혼합물을 멸균 여과하고, 이후의 사용을 위해 주사기를 채운다. 근육내 주사에 의해 투여되기 위한 것이다. 일부 구현예들은 근육내 주사를 위한 상기와 같은 면실유 중의 레티놀 팔미테이트의 제형에 관한 것이다.
일부 구현예들은 하기 기재된 바와 같은 본 구현예들의 하나 이상의 활성 성분의 경구 투여형의 제형에 관한 것이다. 10g의 레티노산을 약간 고온에서, 고-전단 혼합을 사용하여, 밀랍, 부틸화 하이드록시아니솔, 에데테이트 다이소듐, 수소화 대두유 플레이크, 수소화 식물유 및 대두유 알코올의 혼합물 중에 용해시킨다. 혼합물을 경구 투여를 위해 2㎎, 5㎎ 및 10㎎의 용량 세기에서 연질-젤라틴 캡슐내로 밀봉한다.
일부 구현예들은 본 구현예들의 하나 이상의 활성 성분을 함유하는 생접착성(bioadhesive) 협측 정제의 제형에 관한 것이다. 24%의 활성 성분, 21%의 HPMC, 18%의 옥수수 전분, 24%의 락토스, 1%의 실리카, 2.5%의 폴리카르보필(노베온(Noveon)), 7.5%의 카보머(Carbomer) 974P, 1.2%의 활성 및 0.7%의 스테아르산마그네슘을 함유하는 부형제의 배합물을 제조한다. 배합물을 직경이 대략 1㎝인 정제로 압축하였다.
일부 구현예들은 본 구현예들의 하나 이상의 활성 성분을 함유하는 설하 필름의 제형에 관한 것이다. 3g의 메토셀(Methocel) E5, 5g의 메토셀 E50, 1g의 클루셀(Klucel), 1g의 말토덱스트린(Maltodextrin), 1g의 시트르산, 3g의 수크랄로스, 5g의 오렌지 향미료, 0.2g의 파라벤, 0.1 에데테이트 나트륨 및 5g의 소르비톨(Sorbitol)을 50g의 물에 혼합하고, 1g의 레티노산을 첨가하고, 혼합물을 교반과 함께 탈기시킨다. 조성물은 폴리에스테르 필름 지지체를 가로질러 얇게 스프레딩시키고, 분해를 피하기 위하여 임의의 직접적인 광의 부재 하에 공기 중에 건조되게 한다. 이어서, 필름을 2 내지 10㎎의 용량을 생성하기 위한 크기로 절단한다.
일부 구현예들은 키트에 관한 것이며, 이는 하나 이상의 설파티드, RAR 효능제 또는 이들의 조합을 바람직하게는 약제학적 조성물로서 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 시스-테트라코세노일이 약제학적으로 허용가능한 담체 중에 제공된다. 일부 구현예들에서, ATRA는 약제학적으로 허용가능한 담체 중에 제공된다. 일부 구현예들에서, 타자로텐은 약제학적으로 허용가능한 담체 중에 제공된다. 몇몇 구현예들에서, 황화수소(H2S)가 선택적으로 제공될 수 있다. 몇몇 구현예들에서, 하나 이상의 산화방지제가 선택적으로 제공될 수 있다. 몇몇 구현예들에서, 키트는 적절한 포장 및/또는 사용에 대한 지시사항을 추가로 포함할 수 있다. 키트는 또한 하나 이상의 설파티드, RAR 효능제 또는 이들의 임의의 조합의 전달을 위한 수단, 예를 들어, 흡입기, 스프레이 디스펜서(spray dispenser)(예를 들어, 비강 스프레이), 주사용 주사기, 주사바늘, IV 백 또는 캡슐, 정제, 좌제를 위한 유압 팩(pressure pack)을 포함할 수 있다. 하나 이상의 설파티드, RAR 길항제 또는 이들의 임의의 조합은 건조 또는 동결건조 형태 중에, 또는 용액, 특히 멸균 용액 중에 존재할 수 있다. 건조 형태의 경우, 키트는 액체 제형을 제조하기 위한 약제학적으로 허용가능한 희석제를 포함할 수 있다. 키트는 주사기, 피펫, 경피 패치 또는 흡입기를 포함하나 이들에 한정되지 않는 조성물의 투야 또는 분배를 위한 디바이스(device)를 포함할 수 있다. 일부 구현예들은 연장된 기간, 예를 들어, 1주, 2주, 3주, 4주, 6주 또는 8주 이상 동안 개체에 효과적인 치료를 제공하기위해 충분한 용량의 화합물 또는 조성물을 함유하는 키트에 관한 것이다.
한 예시적인 구현예에서, 처방 약물 또는 약물 남용으로부터 화학적 간 손상의 위험이 있는 70 ㎏ 성인 환자에는 간 손상을 치료하기 위하여 1.0 ㎖의 인산염 완충 염수 중의 7 ㎎의 타자로텐의 매일의 근육내 주사가 제공된다. 이러한 용량은 치료 결과 및 주치의의 판단에 기초하여 조절될 수 있다. 치료는 바람직하게는 적어도 약 1 또는 2주, 바람직하게는 적어도 약 1 또는 2개월 동안 계속되며, 만성 기반으로 계속될 수 있다.
다른 예시적인 구현예에서, 처방 약물 또는 약물 남용으로부터 화학적 간 손상의 위험이 있는 70 ㎏ 성인 환자에는 I형 NKT 세포의 활성을 저해하기에 충분한 경구 용량의 RAR 효능제가 제공된다. 간 손상은 혈청 간 효소 수준에 의해 모니터링될 수 있다. RAR 효능제의 용량은 간 기능 시험의 결과 및 주치의의 판단에 기초하여 조정될 수 있다. 치료는 바람직하게는 적어도 약 1 또는 2주, 바람직하게는 적어도 약 1 또는 2개월 동안 계속되며, 만성 기반으로 계속될 수 있다. 일부 구현예들에서, 치료 기간은 화학적 간 손상 위험이 있는 환자를 배치하는 거동의 기간과 일치한다. 일부 구현예들에서, RAR 효능제는 ATRA 및 타자로텐으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예들에서, 환자에는 II형 NKT 세포를 활성화시키기에 충분한 용량의 설파티드가 추가로 투여된다.
상기 기재된 설명이 당업자가 본 명세서에서 이의 최적의 방식인 것으로 고려되는 것을 사용하고 제조할 수 있지만, 당업자는 본 명세서에서 변이의 존재, 조합 및 특정 실시형태의 균등물, 방법 및 실시예를 이해하고 인식할 것이다. 따라서, 본 구현예들은 상기 기재된 구현예, 방법 및 실시예에 의해서가 아니라 본 구현예들의 범위와 범주 내의 모든 구현예 및 방법에 의해 제한되어야 한다.
도 1a는 간에서의 I형 NKT에 대한 설파티드의 효과를 결정하는 방법을 도시한 것이다. 도 1b는 10 ng/㎖ IL-2의 존재 또는 부재 하에 αGalCer를 사용한 시험관 내 시험감염(challenge)에 대하여 반응하는 세포 증식을 측정하는 2개의 독립적인 실험의 대표적인 데이터를 보여준다. 도 1c는 20 ㎍ 설파티드로의 주사 후에, IFN-γ+ 세포를 동정하기 위한 간 내의 설파티드/CD1d-테트라머+ 및 테트라머- 집단의 세포질내 염색의 결과를 보여준다. 괄호 위의 수는 PBS 또는 설파티드-주사 마우스에서의 양성 세포%를 나타낸다. 도 1d는 단독의 ConA(윗줄) 또는 ConA + 소의 뇌 설파티드 설파티드(아랫줄)로의 처리 후 12 내지 96시간에 마우스로부터 취한 대표적인 헤마톡실린 및 에오신(H&E)-염색 간 섹션의 현미경 사진(x200)을 보여준다. 하부 좌측은 설파티드를 단독으로 주사한 대조군 마우스로부터의 H&E-염색된 간 섹션의 대표적인 현미경 사진을 보여준다. 도 1e는 ConA(흑색 기호) 또는 ConA + 설파티드(백색 기호) 주사 후의 상이한 시점에 IL-12p40+/+ 마우스에서의 알라닌 아미노 트랜스퍼라제(ALT) 및 아스파르테이트 아미노 트랜스퍼라제(AST) 수준을 도시한 그래프를 보여준다. 값은 그룹당 5마리 마우스의 평균±SD이다. P < 0.001.
도 2a는 모의(sham) 수술 또는 허혈성 재관류 손상(IRI)으로 처리된 야생형(WT), Jα18-/- 돌연변이체 및 설파티드-처리 WT 마우스의 두부측 간엽으로부터 단리된 Gr-1/CD11b 발현 세포의 플로우 플롯(flow plot)을 보여준다. 사각형은 도 2b에 분석된 Gr-1high 및 Gr-1int 집단을 보여준다. 사각형 옆의 수는 간 백혈구 간의 양성 세포 백분율을 보여준다. 도 2b는 유세포분석을 요약한 막대 그래프를 보여준다. 좌측의 패널은 Gr-1high 및 Gr-1int 집단의 백분율을 도시한 것이고, 우측 패널은 이의 무명수를 도시한 것이다. 값은 평균±SEM이다. *P < 0.005. 도 2c는 IRI, 모의 및 설파티드-처리 IRI 마우스의 간에서의 IFN-γ+αGalCer/CD1d-테트라머+ 세포%를 도시하는 그래프를 보여준다. 값은 평균±SEM이다. P < 0.01.
도 3은 I형 및 II형 NKT 세포 활성의 설파티드 매개에 대한 모델을 도시한 것이다. 모델에 따르면, 설파티드는 II형 NKT 세포의 활성화를 촉진하며, 이는 차례로, I형 NKT 세포를 불활성화시킨다. I형 NKT 세포의 저해는 IFN-γ 분비의 저해에 의해 예시되며, 이는 골수 세포, 과립구의 간 동원 감소 및 결과적으로 간세포 및 내피 세포 손상의 감소를 야기한다.
도 4는 90분의 간 허혈에 이어서, 24시간의 재관류(IRI)로 처리된 마우스(윗줄) 및 모의 수술(sham)로 처리된 마우스(아랫줄)의 두부측 간엽 유래의 H&E 염색 조직의 100X 배율에서의 대표적인 현미경 사진을 보여준다. 좌측에서 우측으로, 패널은 미처리 WT, 미처리 Jα18-/-, 설파티드-처리 WT 및 설파티드 처리 Jα18-/- 마우스 유래의 조직을 보여준다.
도 5는 5% 에탄올을 함유하는 Lieber-Decarli 유동식 또는 유사한 수의 칼로리를 함유하는 대조군 식이의 5주의 섭식 후의 수컷 BL/6 WT 또는 Jα18-/- 마우스의 그룹(각각 4마리)으로부터 단리된 간 MNC의 유세포분석을 요약한 그래프를 보여준다. P 값 <0.005. 활성화된 I형 NKT 세포 및 CD11b+Gr-1+ 골수 세포의 축적이 WT의 간에서 관찰되었으나, Jα18-/- 마우스의 간에서는 관찰되지 않았다.
도 6은 20 마이크로그램/마우스의 설파티드(1일 및 10일)(수평선으로 표시된 막대(설파티드)), 0.3 밀리그램/동물의 ATRA(6일 내지 10일)(수직선으로 표시된 막대(atRA)) 또는 비히클/DMSO(흑색으로 채워진 막대(EtOH))를 주사(복강내)하고 알코올을 함유하는 Lieber-Decarli 유동식을 섭식시킨 WT(B6) 및 Jα18-/- 마우스에서의 혈청 ALT 수준을 도시하는 막대 그래프를 보여준다. 대조군(표시가 없는 막대)에는 같은 칼로리의 대조군 식이를 섭식시켰다. P 값 < 0.05.
도 7은 만성 + 에탄올 폭음 섭식 후에, 비히클/DMSO, 설파티드 및 ATRA 처리 마우스로부터 수집한 간 조직의 대표적인 현미경 사진(x200)을 보여준다. 비히클/DMSO 마우스 유래의 간 조직은 간의 지방간염(지방간 질환)의 증거를 보이는 한편 설파티드 및 ATRA 처리 마우스로부터 수득된 간 조직은 상대적으로 정상인 것으로 나타났다.
도 8a는 단독의 αGalCer, 단독의 ATRA 또는 증가하는 수준의 ATRA와 함께 αGalCer와 인큐베이션시킨 신선하게 단리된 I형 NKT 비장 세포의([3H]-티미딘 혼입으로 측정시의) 증식을 도시하는 막대 그래프를 보여준다. 도 8b는 단독의 αGalCer 또는 αGalCer 및 증가하는 ATRA 수준에 대하여 반응한, I형 NKT 세포(Hy1.2)에 의한 IL-2 사이토카인 분비의 수준을 도시하는 그래프를 보여준다. 도 8c는 DMSO 또는 ATRA를 주사한 마우스로부터 수득하고, 시험관 내에서 αGalCer과 인큐베이션시킨 I형 NKT 간 세포에 의한 IFN-γ, IL-4, IL-13, IL-6, IL-10 및 IL-12 사이토카인 분비의 수준을 도시하는 그래프를 보여준다. 나타낸 데이터는 2개의 개별 실험의 대표이다.
도 9a는 만성(10일의 Lieber-DeCarli 유동식 중의 5% 에탄올) 또는 만성 + 폭음 섭식(10일의 만성 유동식의 제공에 이어서, 단일의 5 g/㎏의 에탄올의 위관영양) 후의 수컷 BL/6 및 Jα18-/- 마우스로부터 수집된 H&E 염색 간 조직의 대표적인 현미경 사진(x200)을 보여준다. 도 9b는 만성 또는 만성 + 폭음 섭식 후의 에탄올을 섭식시킨 수컷 BL/6 및 Jα18-/- 마우스 또는 대조군에서의 혈청 ALT 수준을 도시하는 그래프를 보여준다.
도 10은 단독의 MBPAc1-9 또는 MBPAc1-9 및 단계 농도의 ATRA(0.15, 1.2, 18.8 ㎍/㎖)로의 자극에 반응하는 나이브(naive) B10.PL Vβ8.2 TCR 트랜스제닉 마우스로부터 단리된 신선하게 단리된 미엘린 염기성 단백질 MBPAc1-9-반응성 CD4+ T 세포의 ([3H]-티미딘 혼입으로 측정시의) 증식을 도시하는 막대 그래프를 보여준다.
도 11은 24시간 동안 단계 농도의 지질 항원, αGalCer 및 0, 5 또는 10 ㎍/㎖의 ATRA와 함께 시험관 내에서 배양된 I형 NKT 세포(Hy1.2)에 의해 분비되는 IL-2의 수준을 도시하는 그래프를 보여준다.
도 12는 αGalCer 및 단계 농도의 ATRA, RARα 효능제(AM580), RARβ2의 효능제(AC55649) 또는 RARγ의 효능제(CD1530)의 존재 하에 배양된 신선하게 단리된 I형 NKT 비장 세포의 ([3H]-티미딘 혼입으로 측정시의) 증식을 도시하는 그래프를 보여준다.
도 13은 αGalCer 및 단계 농도의 PPAR-γ의 효능제(로지글리타존(rosiglitazone)) 또는 PPAR-γ의 길항제(GW9662)의 존재 하에 배양된 신선하게 단리된 I형 NKT 비장 세포의 ([3H]-티미딘 혼입으로 측정시의) 증식을 도시하는 그래프를 보여준다.
도 14는 αGalCer 및 단계 농도의 ATRA, 상이한 레티노산 유사체, 레티놀 또는 비타민 A의 존재 하에 배양된 신선하게 단리된 I형 NKT 비장 세포의 ([3H]-티미딘 혼입으로 측정시의) 증식을 도시하는 그래프를 보여준다.
도 15는 최적의 농도의 αGalCer(10 ng/㎖) 및 최적의 농도의 ATRA, 트레티노인(Tretinoin), RARα 효능제(AM580), RARβ2의 효능제(AC55649) 또는 RARγ 효능제(CD1530)의 존재 하에 배양된 신선하게 단리된 I형 NKT 비장 세포(좌측) 또는 I형 NKT 세포 하이브리도마(1.2 Hyb)의 ([3H]-티미딘 혼입으로 측정시의) 증식을 도시하는 막대 그래프를 보여준다. 그래프는 3가지 독립적인 실험의 데이터의 대표이다.
도 16은 증가하는 농도의 ATRA 또는 선택적 RARγ 효능제 타자로텐의 존재 하에서 최적의 농도의 αGalCer(10 ng/㎖)와 배양된 신선하게 단리된 비장세포(상부 패널)의 시험관 내 증식 또는 I형 NKT 세포 하이브리도마(1.2 Hyb)(하부 패널)의 사이토카인 방출 검정의 결과를 도시하는 그래프를 보여준다. 타자로텐은 ATRA보다 I형 NKT 세포의 더 나은 저해를 보인다.
도 17은 타자로텐, ATRA 또는 DMSO(대조군)로 처리되고 적정된 농도의 αGalCer로 자극된 마우스로부터 단리된 I형 NKT 세포의 증식 검정에서의 생체외 결과를 도시하는 그래프를 보여준다.
도 18은 유세포분석에 의한, ATRA, 타자로텐 또는 DMSO(대조군)가 주사되고, αGalCer/CD1d-테트라머 및 pan-항-TCRβ 쇄 항체로 염색된 마우스의 간으로부터 단리된 단핵 세포의 분석을 보여준다. I형 NKT 세포는 사각형으로 표시되어 있다. 대조군 대 ATRA 또는 타자로텐 투여 동물에서 I형 NKT 세포의 개수(사각형 옆에 나타냄)에는 유의미한 차이가 없었다.
하기의 실시예는 예시의 목적으로 제시되며, 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1
설파티드는 I형 NKT 세포의 저해를 매개하면서 설파티드 / CD1d - 테트라머 + 세포를 활성화시킨다 .
20 ㎍의 설파티드의 용량을 마우스에 복강내로 주사하였다. 설파티드 주사 후에, 간 유래의 MNC를 단리하고 CFSE로 표지하였다. 세포를 10 ng/㎖의 사이토카인 IL-2의 존재 또는 부재 하에서 96시간 동안 αGalCer(10 ng/㎖)와 배양하였다. 세포를 대조군으로서 단독의 10 ng/㎖ IL-12와 배양하였다. 세포를 배양 후에 수집하고, 항-TCRβ mAb 및 αGalCer/CD1d-테트라머로 염색하였다. FACs 분류(sorted) 및 CFSE 희석 분석을 αGalCer/CD1d-테트라머+(I형 NKT) 세포 상에서 수행하였다. 도 1a를 참조한다. 도 1b에 나타낸 바와 같이, 설파티드의 투여 후에, I형 NKT 세포는 αGalCer로의 시험관 내 시험감염에 대한 반응으로 증식할 수 없었다.
PBS 또는 20 ㎍ 설파티드 주사된 마우스로부터 단리된 간 세포를 설파티드/CD1d-테트라머+ 및 테트라머- 집단으로 분류하고, 세포질내 IFN-γ+에 대하여 염색하였다. 도 1c에 나타낸 바와 같이, 설파티드-주사된 마우스는 가장 큰 IFN-γ 양성 세포%를 갖는다.
설파티드의 투여는 I형 NKT 세포 증식의 저해 및 IFN-γ 양성 세포%의 증가 둘 모두를 야기한다. 특정 이론에 구속시키지 않고, 설파티드 투여가 pDC 및 II형 NKT 세포 둘 모두를 활성화시키며, 이는 사이토카인 및 케모카인을 분비하고, 이러한 상호작용이 I형 NKT 세포에서 cDC-매개의 저해 유도를 야기하는 것이 제시되었다.
실시예 2
설파티드 투여에 의해 ConA -유도 간염에 대하여 보호된다.
암컷 C57BL/6 마우스를 8.5 ㎎/㎏의 콘카발린 A(ConA)(발열원 미함유 인산염 완충 염수, PBS 중에 용해)로 정맥내(i.v.)로 처치하였으며, 이는 간염에 의해 야기되는 것과 유사한 간 손상을 유도한다. ConA 주사 직후에, 마우스에 20 ㎍(1㎎/㎏/m)의 소의 뇌 설파티드 또는 PBS를 복강내(i.p.)로 주사하였다.
간에 대한 손상은 간 기능 시험으로 검출가능한 숨길 수 없는 이상(간 질병을 시사)으로 이어진다. 예를 들어, 바이러스성 간염은 손상된 간 세포에서 알라닌 아미노 트랜스퍼라제(ALT) 및 아스파르트산염 아미노 트랜스퍼라제(AST) 효소가 혈류로 확산되게 하여 혈액 중의 이들의 수준을 증가시킬 수 있다. 간 손상에 대하여 시험하기 위하여, 혈청을 수집하고, 혈청 효소, ALT 및 AST의 수준을 ConA 또는 ConA + 설파티드 주사 후 0, 6, 12, 24, 48 및 72시간에 측정하였다. 혈청 효소 수준을 미국 검사 협회(Laboratory Corporation of America)(San Diego, CA)의 도움으로 측정하였다. 도 1e에 나타낸 바와 같이, 유사한 수준의 혈청 효소가 ConA 또는 ConA + 설파티드 주사 후 6시간에 관찰되었으나, ALT 및 AST 혈청 수준 둘 모두는 12, 24 및 48시간에 ConA 및 설파티드 둘 모두를 주사한 마우스에서 더 낮았다. ConA(?) 주사 마우스에서, 혈청 ALT 및 AST는 대략 12시간에 최대였으며(ALT
Figure 112014006101917-pct00010
15.8x103 IU/L 및 AST
Figure 112014006101917-pct00011
22.7x103 IU/L), 48시간까지 기준선으로 복귀되었다. 대조적으로, ConA + 설파티드(?)의 조합물의 주사 후에, 12시간까지 ALT 및 AST의 혈청 수준의 상당한 감소(ALT
Figure 112014006101917-pct00012
2.5x103 IU/L 및 AST
Figure 112014006101917-pct00013
5.4x103 IU/L)가 기록되었으며, 24시간까지 기준선으로 복귀되었다. 값은 그룹당 5마리 마우스의 평균±SD이다. P < 0.001.
마우스를 처리 후 12, 24, 48, 72 및 96시간에 희생시키고, 이들의 간을 수집하였다. 간 조직을 10% 포름알데히드 용액 중에 고정시키고 사용시까지 실온에 보관하였다. 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색을 사용한 조직학 시험을 패시픽 패솔로지 인코포레이티드(Pacific Pathology Inc.)(San Diego, CA)에서 수행하였다.
도 1d에 나타낸 바와 같이, H&E 염색에 의해, 단독의 ConA로 처리된 마우스에 비해 ConA + 소의 뇌 설파티드 처리된 마우스에서 현저하게 향상된 간의 조직학이 입증되었다. 조직학 시험에 의해, ConA 주사 마우스 후의 지정된 시점에 미만성 및 엄청나게 큰 침윤과, 중증의 괴사가 나타났다(도 1d, 상측 패널). 대조적으로, 설파티드 + ConA 주사는 12시간 내지 48시간 간 섹션에 보다 적은 침윤 및 보다 적은 괴사의 면에서 경증의 손상과 관련이 있었으며, 조직학은 72시간에 정상으로 회복되었다(도 1d, 하측 패널).
실시예 1 및 실시예 2로부터 수득된 결과를 함께 취하여, (a) 설파티드가 간에서 I형 NKT 세포의 저해를 매개하며, (b) 설파티드 투여가 설파티드/CD1d-테트라머+ 세포를 활성화시키며, ConA-유도 간염에 대하여 보호하는 것이 나타났다. 이는 관용화된 cDC 및 아네르기화된 I형 NKT 세포가 집합적으로, 유해한 염증 캐스케이드의 상당한 저해를 야기하는 것을 나타낸다.
실시예 3
CD11b + Gr -1+ 세포 집단의 조성 상의 간 허혈 및 재관류 손상에 대한 면역 반응의 효과의 분석
간 허혈 및 재관류 손상 모델을 문헌[Shen XD, Ke B, Zhai Y, et al]에 기재된 바와 같이 확립하고, CD154-CD40 T-세포 공동자극 경로가 간 허혈/재관류 손상의 기작에 필요하며, 이의 차단이 헴(heme) 옥시게나제-1 매개의 세포보호를 용이하게 하고, 이에 좌우된다. 문헌[Transplantation 2002, 74:315-9]이 일부 변형과 함께 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
WT 마우스 및 I형 NKT 세포가 결여되어 있으나, 정상의 수준의 II형 NKT 세포를 갖는 Jα18-/- 마우스(3 내지 5마리 마우스/그룹) 또는 이전에 20 ㎍ 설파티드/마우스로 3시간 처치된 WT 마우스(2 내지 3마리의 마우스/그룹)를 60 ㎎/㎏ 펜토바비탈나트륨의 복강내 주사에 의해 마취시켰다. 중심선 개복 후에, 비외상성 클립(atraumatic clip)을 3개의 두부측 간엽의 간삼조(hepatic triad)(간동맥, 문맥, 담관)에 적용하였다. 꼬리 방향 엽은 혈류를 온전하게 유지하여, 장정맥울혈을 방지하였다. 배막을 폐쇄하고, 마우스를 가열 패드(약 37℃)에 배치하였다. 주위 온도는 25 내지 26℃ 범위였다. 90분의 간의 부분 온 허혈(partial hepatic warm ischemia) 후에, 클립을 제거하여, 재관류를 개시하였으며, 복벽을 봉합하였다. 마우스를 6시간의 재관류 후에 안락사시키고, 혈액 및 두부측 간엽을 수집하였다. 모의 대조군은 동일한 절차이나 혈관 폐색 없이 수행하였다.
세포 준비. 백혈구를 문헌[Haider RC, Aguilera C, Maricic I, et al, Type II NKT cell-mediated anergy induction in type I NKT prevents inflammatory liver disease. J Clin Invest 2007, 117:2302-12]에 기재된 바와 같이, 기계적 분쇄(mechanical crushing)에 이어서, 퍼콜(Percoll) 구배 분리 및 RBC 용해를 사용하여 마우스의 두부측 간엽으로부터 단리하였다.
유세포분석. 백혈구를 FACS 완충제(0.02% NaN3 및 2% FCS를 함유하는 PBS) 중에 현탁화시키고, 블로킹하고(항-마우스 FcR-γ, 비디 파민젠(BD Pharmingen)(San Diego, CA)), 나타낸 바와 같이 로딩된 mCD1d-테트라머-PE 또는 PE-, FITC- 또는 PE-Cy5-표지된 항-마우스 항체(비디 파민젠(San Diego, CA) 또는 이바이오사이언스 인코포레이티드(eBioscience Inc.)(San Diego, CA))로 염색하였다. 간 단핵 세포(MNC)의 세포내 사이토카인 염색(ICCS)을 문헌[Haider RC, Aguilera C, Maricic I, et al., type II NKT cell-mediated anergy induction in type I NKT prevents inflammatory liver disease. J Clin Invest 2007, 117:2302-12]에 기재된 바와 같이 수행하였다. CellQuest 소프트웨어(버전 4.0.2, BD, Franklin Lakes, NJ)를 사용하여 FACSCalibur 기기 상에서 분석을 수행하였다. Gr-1high 및 Gr-1int 집단을 게이팅시켰다(gated). 도 2a를 참조한다.
통계. 데이터는 각 그룹에 대한 평균±SEM로 표현되어 있다. P<0.005. 그룹들 간의 통계적 차이는 GraphPad Prism 소프트웨어(버전 5.0a, 그래프패드 소프트웨어 인코포레이티드(GraphPad Software Inc.)(La Jolla, CA))를 사용하여 언페어드, 원-테일드 스튜던츠 t 검정(unpaired, one-tailed Student's t test)에 의해 평가하였다.
결과. Gr-1int 세포의 서브셋은 주로 단핵구 및 골수 전구체로 이루어진다. 허혈 및 재관류 손상(IRI) 후에, Gr-1int 세포는 WT 마우스의 간에서 모의시험에 비하여 약 3.5배(p < 0.005) 증가한 한편, Jα18-/- 마우스에서는 허혈 및 재관류 손상 후에 증가가 관찰되지 않았다. 도 2b, 상측 패널을 참조한다. 따라서, 허혈 및 재관류 손상 동안 골수 세포 서브셋의 간 동원은 Jα18-/- 마우스에서 결여되어 있는 I형 NKT 세포의 존재에 따라 달라진다.
미처리 마우스에 비하여, Gr-1int 세포 서브셋은 IRI 후에 설파티드-처리된 마우스에서 약 50%까지 감소하였다. 이는 I형 NKT 세포의 골수 세포 동원 활성이 설파티드 처리 후에 감소되었음을 시사한다.
주로 과립구로 이루어진 Gr-1high 세포 서브셋은 모의 대조군과, 허혈 및 재관류 손상-유도 마우스의 간 사이에 유의미하게 상이하지 않았다. 도 2b, 하부 패널을 참조한다.
실시예 4
허혈 및 재관류 손상 유도 전의 설파티드 투여는 I형 NKT 세포에 의한 IFN -γ 분비를 유의미하게 저해한다.
한 그룹의 WT 마우스(n=3)에 허혈 유도 3시간 전에 설파티드(20 ㎍/마우스 i.p.)를 주사하고(Sulf. IRI), 다른 그룹(IRI(n=3), 모의(n=2))은 처리하지 않았다. 간 허혈 및 재관류 손상(90분의 허혈 및 6시간의 재관류) 및 모의 수술을 실시예 3에 기재된 바와 같이 수행하였다.
세포 준비. 백혈구를 문헌[Haider RC, Aguilera C, Maricic I, et al, Type II NKT cell-mediated anergy induction in type I NKT prevents inflammatory liver disease. J Clin Invest 2007, 117:2302-12]에 기재된 바와 같이, 기계적 분쇄에 이어서, 퍼콜 구배 분리 및 RBC 용해를 사용하여 설치류의 두부측 간엽으로부터 단리하였다.
유세포분석. 백혈구를 FACS 완충제(0.02% NaN3 및 2% FCS를 함유하는 PBS) 중에 현탁화시키고, 블로킹하고(항-마우스 FcR-γ, 비디 파민젠(San Diego, CA)), αGalCer 로딩된 mCD1d-테트라머-PE 항-마우스 항체(비디 파민젠(San Diego, CA) 또는 이바이오사이언스 인코포레이티드(San Diego, CA))로 염색하였다. CellQuest 소프트웨어(버전 4.0.2, BD, Franklin Lakes, NJ)를 사용하여 FACSCalibur 기기 상에서 분석을 수행하였다.
통계. 데이터는 각 그룹에 대한 평균±SEM로 표현되어 있다. P<0.01. 그룹들 간의 통계적 차이는 GraphPad Prism 소프트웨어(버전 5.0a, 그래프패드 소프트웨어 인코포레이티드(La Jolla, CA))를 사용하여 언페어드, 원-테일드 스튜던츠 t 검정에 의해 평가하였다.
결과. 허혈 및 재관류 손상 유도 후에, I형 NKT 세포는 모의 수술로부터의 I형 NKT 세포에 비하여 증가된 IFN-γ 생성을 갖는 한편 허혈 및 재관류 손상 3시간 전의 설파티드의 투여는 I형 NKT 세포에 의한 IFN-γ 분비를 유의미하게 감소시켰다. 도 2c를 참조한다.
실시예 5
I형 NKT 세포의 억제는 IRI 후에 감소된 간 괴사를 야기한다.
마트레야 인코포레이티드(Pleasant Gap, PA)로부터 구매한 정제된 소의 미엘린-유래 설파티드(90% 초과의 순도)를 비히클(0.5% 폴리소르베이트-20(Tween-20) 및 0.9% NaCl 용액)에 용해시키고, PBS에 희석하였다. BL/6 마우스(WT 설파티드) 및 Jα18-/- 마우스(Jα18-/- 설파티드)의 그룹을 허혈 유도 3 내지 48시간 전에 복강내로 설파티드(20 ㎍/마우스) 또는 모의 수술로 처리하였다. 간 허혈 및 재관류 손상 및 모의 수술을 설파티드 처리 및 미처리 WT 및 Jα18-/- 마우스 상에서 실시예 3에 기재된 바와 같이 행하였다. 90분의 허혈 및 24시간의 재관류 후에, 간 조직(두부측 엽)을 10% 포르말린에서 고정시키고, 파라핀에 포매(embedded)시키고, 섹션을 조직학 분석(아이덱스 래보러터리즈 인코포레이티드(IDEXX Laboratories Inc.)(Westbrook, Maine))을 위하여 헤마토톡실린 및 에오신으로 염색하였다.
설파티드로 전처리된 WT 마우스(WT 설파티드) 및 Jα18-/- 마우스에는 IRI 후에 오직 최소의 간 괴사가 발병하지 않거나 간 괴사가 발병하지 않은 한편, 큰 괴사 영역이 미처리(WT) 마우스의 두부측 간엽에서 관찰되었다. 도 4, 상측 패널을 참조한다. 모의 대조군은 괴사를 보이지 않았다. 도 4, 하측 패널을 참조한다. 조직학 분석에 의해, IRI 후에 괴사가 I형 NKT 세포가 결여된 마우스(Jα18-/- 마우스) 및 I형 NKT 세포의 활성을 설파티드의 처리에 의해 억제시킨 마우스의 간에서 감소됨이 나타났다.
실시예 6
WT 및 I형 NKT 세포-고갈(Jα18-/-) 마우스에서의 알코올성 간질병의 유도
1주 동안 영양학적으로 적당한 Lieber-DeCarli 유동식으로의 적응 후에, 6 내지 8주령 수컷 C57BL/6J 마우스(B6), 및 1형 NKT 세포가 결여되어 있으나, 2형 NKT 세포는 그렇지 않은 Jα18-/- 마우스가 5% 에탄올을 함유하는 유동식 또는 덱스트린 말토스-함유 식이(Bio-Serv, NJ)에 자유롭게 접근하게 하였다. 멸균된 먹이통에서 오토클레이브된(autoclaved) 물을 사용하고, 매일 먹이를 교체하여, 식이를 매일 신선하게 준비하도록 주의하였다.
에탄올-함유 식이를 제공받은 B6 및 Jα18-/- 마우스를 2의 그룹으로 나누었다: 만성 에탄올 섭식 그룹 및 만성 + 에탄올 폭음 섭식 그룹. 만성 에탄올 섭식 그룹의 마우스에는 최대 4 내지 5주 동안 5% 에탄올을 함유하는 유동식을 먹였다. 만성 + 에탄올 폭음 섭식 그룹의 마우스에는 10일 동안 5% 에탄올을 함유하는 유동식을 먹인 후, (11일에) 단일의 고용량의 에탄올(5 g/㎏(체중))을 위관영양시켰다. 대조군의 마우스에는 같은 칼로리의 덱스트린 말토스를 위관영양시켰다. 위관영양 후에, 마우스를 온도 조절된 가온 패드에 유지시키고, 모니터링하였다. 고용량의 위관영양 에탄올을 제공받은 대부분의 마우스는 처음에는 이동이 느리지만, 수시간 내에 정상의 거동을 회복하였다. 마우스를 위관영양 8 내지 9시간 후에 안락사시켰다.
H&E 염색을 10일 또는 4 내지 5주의 만성 에탄올 섭식 또는 만성 + 폭음 에탄올 섭식 후에, 에탄올-섭식된 수컷 B6 및 Jα18-/- 마우스로부터 수득된 간엽 조직상에서 수행하였다. 도 9a(상측 패널)에 나타낸 바와 같이, 조직학적 분석에 의해, 10일 동안 만성 에탄올 섭식으로 처리된 B6 또는 Jα18-/- 마우스에서 간 손상이 나타나지 않았다. 추가로, 4 내지 5주 동안 만성 에탄올 섭식으로 처리된 B6 및 Jα18-/- 마우스의 간 조직의 조직학적 분석에 의해 간 손상이 관찰되지 않았다(데이터 미도시). 그러나, 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 B6 마우스 유래의 간 조직의 조직학적 분석은 유의미한 손상을 보여주었다. 도 9a, 하부 좌측 패널을 참조한다. 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 Jα18-/- 마우스 유래의 간 조직이 상대적으로 거의 손상을 보이지 않았다. 도 9a, 하부 우측 패널을 참조한다.
혈청 ALT 수준을 대조군 B6 및 Jα18-/- 마우스, 및 에탄올이 섭식된 B6 및 Jα18-/- 마우스에서 10일 또는 4 내지 5주의 만성 에탄올 섭식 및 만성 + 폭음 섭식 후에 측정하였다. 도 9b, 좌측 패널에 나타낸 바와 같이, 만성 에탄올은 혈청 ALT 수준의 유의미한 증가를 야기하지 않았다. 혈청 ALT 수준은 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 B6 마우스에서 유의미하게 증가하였으며, 대조군에 비하여 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 Jα18-/- 마우스에서보다 적은 정도로 증가하였다. 도 9b, 우측 패널을 참조한다.
조직학 또는 ALT/AST 혈청 수준으로 예시되는 바와 같은 최대 간 손상(무-에탄올 대조군에 비한)을 고용량의 에탄올 위관영양 6 내지 8시간 후에 B6 및 Jα18-/- 마우스에서 관찰하였다. 만성 + 에탄올 폭음 섭식을 제공받은 그룹들 간에, 1형 NKT 세포가 결여되어 있는 Jα18-/- 마우스는 보다 적은 간 손상을 나타내었다.
10일 또는 4 내지 5주 동안의 만성 에탄올 섭식이 조직학적 분석으로 예시되는 바와 같이 임의의 유의미한 간 손상을 야기하지 않고, 혈청 ALT/AST 수준의 유의미한 변화를 야기하지 않기 때문에, 이는 비임상 또는 하위임상(subclinical) 단계 ALD로 지칭된다. 임상 단계 ALD는 제2 단계 만성-에탄올 폭음 섭식 후에 유도되었다.
간 단핵 세포(MNC)를 수컷 B6 및 Jα18-/- 마우스의 그룹(각각의 그룹에서 4마리)으로부터 5% 에탄올을 함유하는 Lieber-Decarli 유동식(만성 에탄올 섭식) 또는 유사한 칼로리수를 함유하는 대조군 식이로의 5주의 섭식 후에 단리하였다. 단리된 간 MNC를 다양한 세포 표면 항체로 염색하고, 유세포분석으로 분석하였다. 활성화된 I형 NKT 세포 및 CD11b+Gr-1+ 골수 세포의 축적이 비임상 ALD 단계에서 B6의 간에서 관찰되었으나, Jα18-/- 마우스에서는 그렇지 않았다. 도 5를 참조한다.
실시예 7
설파티드 또는 올-트랜스 레티노산(ATRA)에 의한 알코올-유도 간 손상의 예방
7주령 B6(WT) 및 Jα18-/- 수컷 마우스의 그룹에 1일 및 10일에 20 마이크로그램/마우스의 설파티드; 6 내지 10일에 0.3 밀리그램/마우스의 ATRA, 또는 비히클/DMSO를 주사하고(i.p.); 10일 동안 5% 에탄올을 함유하는 유동식에 이어서, (11일에) 단일의 고용량의 에탄올(5 g/㎏(체중))의 위관영양(만성 + 에탄올 폭음 섭식 그룹) 또는 같은 칼로리의 덱스트린 말토스-함유 식이에 이어서, 같은 칼로리의 덱스트린 말토스의 위관영양(대조군) 중 어느 하나를 섭식시켰다. 위관영양 후 6 내지 8시간에 마우스를 안락사시키고, 혈청 및 간 조직을 수집하였다.
각 마우스 그룹에 대하여 혈청 ALT 수준을 측정하였다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 혈청 ALT 수준은 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 비히클/DMSO 주사 B6 마우스에서 상당히 증가하는 한편(흑색 막대), 설파티드(수직-줄 막대) 또는 ATRA(수평-줄 막대) 주사 중 어느 하나를 제공받은 만성 + 에탄올 폭음 섭식 B6 마우스는 대조군 섭식 B6 마우스(줄이 없는 막대)의 것과 유사하였다. 혈청 ALT 수준은 대조군 섭식된 Jα18-/- 마우스(줄이 없는 막대)에 비하여 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 비히클/DMSO 주사 Jα18-/- 마우스(흑색 막대)에서 증가하였지만, 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 비히클/DMSO 주사 Jα18-/- 마우스는 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 비히클/DMSO 주사 B6 마우스에 비하여 감소된 혈청 ALT 수준을 가졌다. 도 6을 참조한다.
간의 지방간염(지방간 질환)에 대한 조직학적 시험을 만성 + 에탄올 폭음 섭식 후에 비히클/DMSO, 설파티드 또는 ATRA 주사 B6 마우스로부터 수집한 간 조직 상에서 수행하였다. 도 7에 나타낸 바와 같이, 비히클/DMSO 주사 B6 마우스로부터의 간 조직은 만성 + 에탄올 폭음 섭식 후에 유의미한 손상의 징후를 나타내었다. 그러나, 설파티드 또는 ATRA 주사 B6 마우스로부터 수득한 간 조직은 지방간 질환의 징후를 거의 나타내지 않았다.
조직학 및 혈청 간 효소 분석에 의해, 설파티드 또는 레티노산 수용체(RAR) 효능제, ATRA 중 어느 하나의 투여가 과도한 알코올 소비에 의해 야기되는 간 손상에 대한 보호를 제공할 수 있음을 시사한다.
실시예 8
ATRA 에 의한 I형 NKT 세포 증식의 저해
I형 NKT 세포를 나이브 B6 마우스의 비장으로부터 단리하고, [3H]-티미딘 및 최적의 농도의 단독의 αGalCer, 최적의 농도의 αGalCer + 0.15 ㎍/㎖, 1.2 ㎍/㎖ 또는 18.8 ㎍/㎖ ATRA, 또는 단독의 ATRA와 함께 시험관 내에서 배양하였다. 1형 NKT 세포의 증식을 [3H]-티미딘 혼입에 의해 측정하였다. 도 8a에 나타낸 바와 같이, 0.15 ㎍/㎖ ATRA 및 αGalCer 또는 단독의 αGalCer에서 성장시킨 1형 NKT 세포에 대하여 세포 증식이 유사하였으며, 비교하여, 1.2 ㎍/㎖ 또는 18.8 ㎍/㎖ ATRA 및 αGalCer에서 성장시킨 1형 NKT 세포에 대하여 증식이 감소되었다. αGalCer-유도 1형 NKT 세포 증식의 가장 큰 저해가 18.8 ㎍/㎖ ATRA에 대하여 관찰되었다. 단독의 ATRA에서 성장시킨 1형 NKT 세포에 대하여 증식이 관찰되지 않거나 최소의 증식이 관찰되었다.
실시예 9
ATRA 에 의한 I형 NKT 세포 활성의 저해
αGalCer로의 시험관 내 시험감염에 대하여 반응하는 I형 NKT 세포에 의한 IL-3 사이토카인 분비에 대한 ATRA의 효과를 16시간의 기간 동안 ATRA(0.15 ㎍/㎖, 1.2 ㎍/㎖ 또는 18.8 ㎍/㎖)의 존재 또는 부재 하에, 최적의 농도의 αGalCer와 함께, 시험관 내에서 NKT 세포(Hy1.2) 및 조사된 항원-제시 세포(APC)를 공동-배양함으로써 시험하였다. 상청액을 수집하고, 분비된 IL-2 수준을 IL-2 샌드위치 ELISA를 사용하여 측정하였다.
IL-2 분비 수준은 0.15 ㎍/㎖ ATRA에 의해 상당하게 영향을 받지 않았으나, IL-2 분비의 상당한 감소가 1.2 ㎍/㎖ 또는 18.8 ㎍/㎖ ATRA의 존재 하에 배양된 I형 NKT 세포에 대하여 관찰되었다. IL-2 분비의 가장 큰 감소가 18.8 ㎍/㎖ ATRA에 의해 달성되었다. 도 8b를 참조한다.
ATRA 투여 후에 I형 NKT 세포의 기능 변화를 추가로 시험하였다. 2가지 독립적인 실험에서, 블랙(Black) 6(WT) 마우스의 그룹에 0.3 ㎎/동물(약 15 ㎎/㎏(체중)) ATRA 또는 비히클(DMSO)을 5일의 기간 동안 매일 복강내로 주사하였다. I형 NKT 세포를 정제하고, 시험관 내에서 증가하는 농도의 αGalCer와 함께 배양하였다. 세포 증식을 측정하고, 상청액을 수집하였다. αGalCer로의 시험관 내 시험감염 후의 단리된 I형 NKT 세포의 사이토카인 반응을 IFN-γ, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 및 IL-13에 대하여 샌드위치 ELISA에 의해 측정하였다. ATRA 주사 마우스로부터 단리된 I형 NKT 세포는 αGalCer 자극에 반응하여 증식하지 않았다(미도시). 도 8c에 나타낸 바와 같이, 비히클(DMSO) 주사 마우스로부터 단리된 I형 NKT 세포는 αGalCer 자극에 반응하여 IFN-γ, IL-4 및 IL-13을 분비하였으나, IL-6, IL-10 또는 IL-12는 그렇지 않았다. αGalCer 자극에 반응한 IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-12 또는 IL-13의 분비가 ATRA 주사 마우스로부터 단리된 I형 NKT 세포로부터 검출되지 않았다. αGalCer 자극에 반응한 IL-4 분비 수준의 감소가 ATRA 주사 마우스로부터 단리된 I형 NKT 세포로부터 관찰되지 않았다. 도 8c를 참조한다.
실시예 10
ATRA 는 클래스 II MHC -제한 통상의 CD4 T 세포를 저해하지 않는다.
나이브 B10.PL Vβ8.2 TCR 트랜스제닉 마우스로부터 미엘린 염기성 단백질 MBPAc1-9-반응성 CD4+ T 세포를 단리하고, 세포를 시험관 내에서 단계 농도의 ATRA(0.15, 1.2, 18.8 ㎍/㎖)의 존재 또는 부재 하에 [3H]-티미딘 및 최적의 농도의 MBPAc1-9와 함께 배양함으로써 클래스 II MHC-제한 일반 CD4 T 세포에 대한 ATRA의 효과를 시험하였다. MBPAc1-9-반응성 CD4+ T 세포의 증식을 [3H]-티미딘 혼입에 의해 측정하였다. MBPAc1-9-자극된 증식의 저해가 ATRA 처리된 배양물에서 관찰되지 않았다. 도 10을 참조한다. 이는 ATRA가 MHC-제한 CD4+ T 세포의 활성을 직접 저해함을 시사한다.
실시예 11
항원-제시 세포의 부재 하의 ATRA 처리에 의해 1형 NKT 세포 기능이 저해된다.
항원-제시 세포의 부재 하에 I형 NKT 세포에 대한 ATRA 처리의 효과도 또한 측정하였다. I형 NKT 하이브리도마 세포(Hy1.2)를 시험관 내에서 ATRA 없이, 또는 5 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 또는 20 ㎍/㎖ ATRA와 함께 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 세포를 3회 세척하고, 단계 농도의 지질 항원, αGalCer의 존재 하에 조사된 비장세포(APC)와 공동-배양하였다. 상청액을 16시간 후에 수집하고, IL-2 샌드위치 ELISA를 사용하여 IL-2 수준을 측정하였다. 도 11에 나타낸 바와 같이, I형 NKT 하이브리도마 세포(Hy1.2)의 ATRA로의 처리에 의해, IL-2 분비가 저해된다. 이는 항원-제시 세포의 부재 하에서 ATRA 처리가 I형 NKT 세포의 이펙터 기능을 저해하는 것을 시사한다.
실시예 12
서브타입-특이적 RAR 효능제에 의한 I형 NKT 세포 활성의 저해
레티노산 수용체(RAR)는 3가지 주요 서브타입을 포함한다: RARα, RARβ, 및 RARγ.RAR 효능제 ATRA는 특정 서브타입에 대하여 선택적이지 않다. I형 NKT 세포 활성의 저해에 대한 RAR 서브타입의 기여를 다음과 같이 서브타입-선택적 RAR 효능제로 시험하였다. 비장 세포를 나이브 B6(WT) 마우스로부터 단리하고, [3H] -티미딘, 최적의 농도의 αGalCer 및 단계 농도의 pan-RAR 효능제 ATRA, RARα 효능제 AM580, RARβ2 효능제 AC55649 또는 RARγ 효능제 CD1530의 존재 하에서 시험관 내에서 배양하였다. αGalCer 자극에 대하여 반응하는 I형 NKT 세포의 증식을 [3H] -티미딘 혼입에 의해 측정하였다.
ATRA, AM580 및 CD1530의 존재 하에 배양된 I형 NKT 세포는 101 ㎍/㎖의 농도까지 유사한 수준의 세포 증식을 나타내었다. 도 12를 참조한다. 101 ㎍/㎖ ATRA 또는 CD1530의 존재 하에 배양된 세포는 낮은 또는 최소의 증식을 나타내는 한편, 101 ㎍/㎖ AM580에서 배양된 세포에 대해서는 증식이 유지되었다. 다른 RAR 효능제에 비하여 감소된 세포 증식이 101 ㎍/㎖를 제외하고 시험한 모든 농도에서 RARβ2 효능제, AC55649에 대하여 관찰되었으며, 이 농도에서, AC55649, ATRA 또는 CD1530에서 배양된 세포에 대하여 낮은 또는 최소의 증식이 관찰되었다.
이들 결과는 RARβ2 효능제, AC55649가 I형 NKT 세포 활성의 유효한 저해제이며, 레티노산 수용체-β2(RAR-β2) 신호전달 경로가 I형 NKT 세포의 저해에 수반됨을 시사한다.
실시예 13
I형 NKT 세포에 대한 PPAR -γ경로 조절의 효과
퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체(PPAR)는 리간드-유도성 전사 인자이며, 이는 핵 호르몬 수용체 슈퍼패밀리에 속하며, 이에는 갑상선 호르몬, 레티노이드, 스테로이드 호르몬 및 비타민 D에 대한 수용체도 또한 포함된다. PPAR은 DNA에서 특정 퍼옥시좀 증식제 반응 요소(PPRE)에 대한 헤테로다이머 파트너로서 레티노이드 X 수용체(RXR)와의 결합에 의해 유전자 발현을 조절한다. PPAR은 지질 및 에너지 대사, 염증, 배아 이식, 당뇨병 및 암에서 역할을 수행하는데 연루된다.
신선하게 단리된 비장 I형 NKT 세포를 단계 농도의 PPAR-γ 효능제 로지글리타존 또는 PPAR-γ 길항제 GW9662의 존재 하에 또는 부재 하에 [3H] -티미딘 및 최적의 농도의 αGalCer와 함께 배양함으로써 비장 I형 NKT 세포의 저해에서의 PPAR-γ 경로의 역할을 시험하였다. αGalCer 자극에 대하여 반응하는 비장 I형 NKT 세포의 증식을 [3H]-티미딘 혼입에 의해 결정하였다. 유사한 수준의 증식이 모든 농도에서, PPAR-γ 효능제, 로지글리타존 또는 PPAR-γ 길항제, GW9662 중 어느 하나에서 배양된 세포에 대하여 관찰되었다. 도 13을 참조한다. 이들 결과는 PPAR-γ 경로의 특이적 저해 또는 활성화가 I형 NKT 세포 증식을 직접적으로 저해하지 않음을 시사한다.
실시예 14
I형 NKT 세포 활성에 대한 레티놀 유사체의 효과의 시험
비장 세포를 나이브 B6 마우스로부터 단리하고, 단계 농도의 ATRA, 레티놀, 9-시스-RA 또는 13-시스-RA의 존재하에 또는 부재 하에, [3H]-티미딘 및 최적의 농도의 αGalCer과 함께 시험관 내에서 배양하였다. αGalCer 자극에 반응하는 비장 I형 NKT 세포의 증식을 [3H]-티미딘 혼입에 의해 정량화하였다. 도 14에 나타낸 바와 같이, 101 ㎍/㎖ ATRA에서 배양된 세포에 대하여 증식이 관찰되지 않거나 최소의 증식이 관찰된 한편, I형 NKT 세포 증식의 동일한 저해 수준이 101 ㎍/㎖을 초과하는 레티놀, 9-시스-RA 또는 13-시스-RA의 농도에서만 관찰되었다.
실시예 15
I형 NKT 세포 활성에 대한 RAR 효능제의 효과의 시험
시험관 내 증식 및 사이토카인 분비 검정을 신선하게 단리된 비장세포 및 I형 NKT 세포 하이브리도마(1.2 Hyb)에 대하여 수행하였다. 세포를 적정 농도의 ATRA, 트레티노인, RARα 효능제 AM580, RARβ 효능제 AC55649 또는 RARγ 효능제 CD1530와 함께, [3H]-티미딘 및 최적의 농도의 αGalCer(10 ng/㎖)의 존재 하에 배양하였다. αGalCer 자극에 반응하는 I형 NKT 세포의 증식을 [3H]-티미딘 혼입에 의해 정량화하였다. IL-2 샌드위치 ELISA를 사용하여 IL-2 수준을 측정하였다. RAR 효능제의 최적의 농도를 결정하였다. 이들의 최적의 농도에서의 RAR 효능제의 효과의 비교는 도 15에 나타나 있다. 가장 낮은 증식 수준이 ATRA, 트레티노인, RARγ 효능제 CD1530의 존재 하에 배양된 세포에 대하여 관찰되었다. RARγ 효능제 CD1530의 존재 하에 배양된 세포는 가장 낮은 IL-2 분비 수준을 보였다. 이들 결과에 의해, RARγ 효능제 CD1530이 I형 NKT 세포 활성의 효과적인 저해제임이 나타났다.
실시예 16
I형 NKT 세포의 타자로텐 및 ATRA 저해의 비교
I형 NKT 세포 활성에 대한 선택적 RARγ 효능제, 타자로텐의 효과를 시험관 내 증식 및 사이토카인 분비 검정에 의해 시험하였다.
시험관 내 증식 및 사이토카인 분비 검정을 신선하게 단리된 비장세포 및 I형 NKT 세포 하이브리도마(1.2 Hyb) 상에서 수행하였다. 세포를 증가하는 농도의 ATRA 또는 타자로텐과 함께 [3H] -티미딘 및 최적의 농도의 αGalCer(10 ng/㎖)의 존재 하에 배양하였다. αGalCer 자극에 반응하는 I형 NKT 세포의 증식을 [3H] -티미딘 혼입에 의해 정량화하였다. IL-2 수준을 IL-2 샌드위치 ELISA를 사용하여 측정하였다. ATRA 및 타자로텐에 의한 I형 NKT 세포 저해의 비교는 도 16에 나타나 있다. RAR 효능제에 의해 I형 NKT 세포 증식 및 IL-2 분비가 저해되나, 타자로텐은 보다 낮은 농도에서 이의 저해 효과를 달성한다. 도 16을 참조한다.
실시예 17
타자로텐 및 ATRA 의 생체 내 투여 후의 I형 NKT 세포의 저해
타자로텐 또는 ATRA의 생체내 투여 후의 I형 NKT 세포에서의 기능상 변화를 시험하였다. 마우스의 그룹에 5일의 기간 동안 매일 300 ㎍ ATRA(15㎎/㎏), 300 ㎍ 타자로텐(15㎎/㎏) 또는 비히클(DMSO)을 복강내 주사하였다. 비장 I형 NKT 세포를 정제하고, 증가하는 농도의 αGalCer와 함께 시험관 내에서 배양하였다. 세포의 증식을 [3H] -티미딘 혼입에 의해 측정하고 결과는 도 17에 나타내었다. αGalCer 자극에 대한 ATRA 주사, 타자로텐 주사 또는 비히클(DMSO) 주사 마우스로부터 단리된 세포의 증식 반응의 비교에 의해, ATRA 또는 타자로텐 중 어느 하나의 생체 내 투여가 I형 NKT 세포 활성을 저해하는 것이 나타났다. 그러나 가장 낮은 증식 수준이 타자로텐 주사 마우스로부터 단리된 I형 NKT 세포에 대하여 관찰되었다. 도 17을 참조한다.
단핵 세포를 ATRA, 타자로텐 또는 비히클(DMSO) 중 어느 하나를 주사한 마우스의 간으로부터 단리하고, αGalCer/CD1d-테트라머 및 pan 항-TCRβ 항체로 염색하였다. 유세포분석을 수행하고, αGalCer/CD1d-테트라머/TCRβ 발현 세포(I형 NKT 세포)의 집단을 도 18에 나타낸 바와 같이 정량화하였다. 대조군 대 ATRA 또는 타자로텐 투여 동물의 간에서 I형 NKT 세포의 개수의 유의미한 차이가 관찰되지 않았다. 도 18을 참조한다. 이들 결과는 ATRA 또는 타자로텐 투여가 간의 I형 NKT 세포를 고갈시키지 않음을 나타낸다.
예측예 18
RAR 효능제 투여에 의한 ALD 의 예방
마우스의 그룹에 유효량의 ATRA, 타자로텐, 트레티노인, RARα 효능제 AM580, RARβ 효능제 AC55649, RARγ 효능제 CD1530 또는 비히클/DMSO를 5일의 기간 동안 매일 주사하고, 이 기간 동안 마우스는 10일 동안 5% 에탄올을 함유하는 유동식에 이어서, (11일에) 단일의 고용량의 에탄올의 위관영양(5 g/㎏(체중))(만성 + 에탄올 폭음 섭식 그룹) 또는 같은 칼로리의 덱스트린 말토스-함유 식이에 이어서, 같은 칼로리의 덱스트린 말토스의 위관영양(대조군) 중 어느 하나에 있게 함으로써, 알코올성 간질병의 예방 또는 완화에서의 RAR 효능제의 유효성을 시험한다. 마우스를 위관영양 후 6 내지 8시간에 안락사시키고, 혈청 및 간 조직을 수집한다.
혈청 ALT 수준을 각 마우스 그룹에 대하여 결정한다. 혈청 ALT 수준은 대조군 섭식 마우스에 비하여 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 비히클/DMSO 주사 마우스에서 상당히 증가되는 것으로 예상된다. ATRA, 타자로텐, 트레티노인, AM580, AC55649, CD1530의 주사를 제공받는 만성 + 에탄올 폭음 섭식 마우스는 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 비히클/DMSO 주사 마우스에 비하여 감소된 혈청 ALT 수준을 갖는 것으로 예상된다. 만성 + 에탄올 폭음 섭식으로 처리된 ATRA, 타자로텐 또는 트레티노인 주사 마우스의 혈청 ALT 수준은 대조군 섭식 마우스에서 관찰되는 수준과 유사할 것으로 예상된다. 간의 지방간염(지방간 질환)에 대한 조직학 시험은 만성 + 에탄올 폭음 섭식 후에 비히클/DMOS 주사 마우스로부터 수집된 간 조직의 상당한 손상을 보여줄 것으로 예상되는 한편, 만성 + 에탄올 폭음 섭식 후에 ATRA, 타자로텐, 트레티노인, AM580, AC55649, CD1530의 주사 마우스로부터 수집된 간 조직에 대하여 손상이 감소되거나 손상이 없을 것으로 예상된다.
예측예 19
ATRA-처리 또는 타자로텐-처리 BL/6 마우스로부터의 αGalCer/CD1d-테트라머-정제된 I형 NKT 세포를 사용한 입양면역(adoptive) 전달 실험을 사용하여, 나이브 BL/6 수여자로 전달되는 경우, 단계적 개수의 이들 세포가 만성 + 에탄올 폭음 섭식 후에 간 손상을 저해할 수 있는지를 시험한다.
정제된(분류된) 설파티드-CD1d-테트라머+ T 세포를 시험하여, CD1d+/+ 및 CD1d-/- 마우스로의 입양면역 전달 시에 이들이 ALD를 예방할 수 있는지를 결정한다. 사이토카인 낙다운(knockout) 마우스를 설파티드-반응성 T 세포의 공여자로 사용하여, ALD의 조절에서 II형 NKT 세포에 의한 IFN-γ, IL-4 및 IL-10 분비의 역할을 직접 결정한다. 설파티드-반응성 T 세포를 테트라머를 사용하여 단리하고, 단계적 개수(50만 내지 100만개)를 입양면역을 통해 CD1d+/+ 및 CD1d-/- C57BL/6 수여자에게 전달한다. 대략 150만개의 설파티드-CD1d-테트라머+ 세포를 18마리의 나이브 C57BL/6 마우스로부터 단리한다. 1일 후에, 수여자를 만성 + 에탄올 폭음 섭식에 노출시킨다. II형 NKT 세포에 의한 사이토카인 분비의 역할을 분석하기 위하여, 조기에 IFN-γ, IL-4-/- 또는 IL-10-/-를 BL/6 백그라운드(Jackson Lab) 상에 사용한다. BL/6 야생형 또는 낙아웃 마우스의 그룹에 설파티드(20 ㎍/동물)를 주사한 다음, ALD를 유도한다. 이들 2형 사이토카인의 부재 하에, 설파티드 투여는 ALD를 예방하는 것으로 예상된다. 입양면역 세포-전달 실험을 특정 사이토카인 낙아웃 마우스로부터의 설파티드-CD1d-테트라머+ 세포를 사용하여 추가로 수행하고, 단계적 개수(50만 내지 100만개)를 CD1d-/- C57BL/6 마우스로 전달한다. 1일 후에, 수여자 마우스에는 에탄올 섭식을 유지한다. 병행하여, 양성 대조군으로서, 설파티드-CD1d-테트라머+ T 세포를 야생형 마우스로부터 CD1d+/+ BL/6 마우스로 전달한다. 이들 실험은 ALD의 조절에서 설파티드-반응성 T 세포에 의해 분비되는 이들 사이토카인의 역할을 직접 확인시켜줄 것으로 예상된다.
균등성
상기 기재된 내용은 본 발명을 당업자가 충분히 실시할 정도로 충분한 것으로 간주된다. 전술한 설명 및 실시예는 바람직한 본 발명의 구체예들은 상세하게 설명하며, 발명자들에 의해 고려되는 최적의 방식을 설명한다. 그러나, 전술한 설명이 내용에 얼마나 상세하게 나타나는 것과는 상관없이, 본 발명은 다양한 방식으로 실행될 수 있으며, 본 발명은 첨부된 청구범위 및 이의 균등성에 따라 해석되어야 한다.

Claims (24)

  1. RARγ-선택적 효능제(agonist)를 포함하는 하나 이상의 염증 질환(inflammatory condition)의 치료 또는 예방용 약학적 조성물로서, 상기 조성물은 I형 NKT 세포의 활성화를 저해하기에 충분한 양의 RARγ-선택적 효능제를 포함하는 것인 약학적 조성물로서,
    상기 RARγ-선택적 효능제는 타자로텐 (tazarotene) 또는 CD1530을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 염증 질환은 지방간 질환, 알코올 유도 간염, 비-알코올성 지방증 간염, 간경변증, 전격성(fulminating) 간경변증, 특발성 간염, 바이러스-유도 간염, 간-담도 암종과 관련된 염증성 간염, 다발경화증, 전신 홍반성 낭창, 류마티스 관절염, 염증성 장 질병, 자가면역 간염, 천식 및 셀리악병 (celiac disease)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 염증 질환은 지방간 질환, 알코올 유도 간염, 비-알코올성 지방증 간염, 간경변증, 전격성 간경변증, 특발성 간염, 바이러스-유도 간염, 간-담도 암종과 관련된 염증성 간염, 다발경화증, 전신 홍반성 낭창, 류마티스 관절염, 및 염증성 장 질병으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 염증 질환은 비-알코올성 지방증 간염인 것인 약학적 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 염증 질환은 지방간 질환인 것인 약학적 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 염증 질환은 간 세포의 섬유증 (fibrosis of liver cells)을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RARγ-선택적 효능제는 타자로텐 (tazarotene)을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  8. 삭제
  9. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 II형 NKT 세포를 활성화시키기에 충분한 양의 설파티드 (sulfatide)를 더 포함하는 것인 약학적 조성물.
  10. 청구항 7에 있어서, 상기 조성물은 1 mg 내지 50 mg의 타자로텐을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  11. 청구항 9에 있어서, 상기 조성물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 화학 구조를 갖는 설파티드를 포함하는 것인 약학적 조성물:
    하기 식을 가지며:
    Figure 112018112876907-pct00046

    상기 식에서, R1은 결합, 수소, C1 내지 C30 알킬, C1 내지 C30 치환된 알킬, C1 내지 C30 알케닐, C1 내지 C30 치환된 알케닐 및 C5 내지 C12 당으로 구성된 군으로부터 선택되고; R2는 수소, 하이드록시기, 메톡시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되며; R3은 수소, 하이드록시기, 메톡시기, 에톡시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되고; R4는 수소, 하이드록시기 및 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택되며; R5는 수소, 하이드록실, 카르보닐, 알콕시 및 결합으로 구성된 군으로부터 선택되고; R6은 C1 내지 C40 알킬, C1 내지 C40 치환된 알킬, C1 내지 C40 알케닐, C1 내지 C40 치환된 알케닐 및 C1 내지 C40 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; R7은 C1 내지 C40 알킬, C1 내지 C40 치환된 알킬, C1 내지 C40 알케닐, C1 내지 C40 치환된 알케닐 및 C1 내지 C40 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; R8은 수소, 하이드록실기, 카르보닐, 알콕시기 및 결합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 화학 구조; 및
    하기 식을 갖는 화학 구조:
    Figure 112018112876907-pct00047
    .
  12. 하기 중 적어도 하나를 위해 RARγ-선택적 효능제를 포함하는, 유효량의 약학적 조성물:
    환자에서 하나 이상의 염증 질환의 치료 또는 예방; 또는
    염증 질환을 갖는 환자에서 I형 NKT 세포의 활성화의 저해이고,
    상기 RARγ-선택적 효능제는 타자로텐 또는 CD1530을 포함하고, 및
    상기 염증 질환은 지방간 질환, 알코올 유도성 간염, 비-알코올성 지방증 간염, 간경변증, 전격성 간경변증, 특발성 간염, 바이러스-유도성 간염, 간-담도 암종과 관련된 염증성 간염, 다발경화증, 전신 홍반성 낭창, 류마티스 관절염, 염증성 장 질병, 자가면역 간염, 천식, 및 셀리악병으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 청구항 12에 있어서, 상기 RARγ-선택적 효능제는 타자로텐을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  16. 청구항 12 또는 15에 있어서, 상기 조성물은 설파티드를 더 포함하는 것인 약학적 조성물.
  17. 삭제
  18. 청구항 2 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염증 질환은 바이러스-유도성 A형 간염, 바이러스-유도성 B형 간염, 및 바이러스-유도성 C형 간염으로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스-유도성 간염인 것인 약학적 조성물.
  19. 청구항 12에 있어서, 상기 염증 질환은 바이러스-유도성 A형 간염, 바이러스-유도성 B형 간염, 및 바이러스-유도성 C형 간염으로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스-유도성 간염인 것인 약학적 조성물.
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
KR1020147001610A 2011-06-24 2012-06-22 염증 질환의 예방 및 치료 KR102055395B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161501139P 2011-06-24 2011-06-24
US61/501,139 2011-06-24
PCT/US2012/043875 WO2012178108A1 (en) 2011-06-24 2012-06-22 Prevention and treatment of inflammatory conditions

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197036256A Division KR102164567B1 (ko) 2011-06-24 2012-06-22 염증 질환의 예방 및 치료

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140048939A KR20140048939A (ko) 2014-04-24
KR102055395B1 true KR102055395B1 (ko) 2019-12-12

Family

ID=47422987

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020147001610A KR102055395B1 (ko) 2011-06-24 2012-06-22 염증 질환의 예방 및 치료
KR1020197036256A KR102164567B1 (ko) 2011-06-24 2012-06-22 염증 질환의 예방 및 치료

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197036256A KR102164567B1 (ko) 2011-06-24 2012-06-22 염증 질환의 예방 및 치료

Country Status (13)

Country Link
US (3) US9949996B2 (ko)
EP (2) EP3616701A1 (ko)
JP (2) JP6441073B2 (ko)
KR (2) KR102055395B1 (ko)
CN (2) CN111298120A (ko)
AU (1) AU2012272642B2 (ko)
BR (1) BR112013033309B1 (ko)
CA (1) CA2840272C (ko)
DK (1) DK2723347T3 (ko)
ES (1) ES2759584T3 (ko)
MX (1) MX367850B (ko)
RU (1) RU2678561C9 (ko)
WO (1) WO2012178108A1 (ko)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2723347T3 (da) 2011-06-24 2019-11-18 Gri Bio Inc Forebyggelse og behandling af inflammationstilstande
WO2014113695A1 (en) 2013-01-18 2014-07-24 Cornell University Methods of treating diseases associated with high fat diet and vitamin a deficiency using retinoic acid receptor agonists
US11191755B2 (en) 2014-01-17 2021-12-07 Cornell University Compositions and methods for providing cardioprotective effects
WO2015109231A1 (en) * 2014-01-17 2015-07-23 Cornell University Methods of treating metabolic syndrome related conditions using retinoic acid receptor agonists
WO2015131035A1 (en) 2014-02-27 2015-09-03 Lycera Corporation Adoptive cellular therapy using an agonist of retinoic acid receptor-related orphan receptor gamma & related therapeutic methods
CA2942469A1 (en) * 2014-03-10 2015-09-17 Cornell University Combination therapy for head and neck cancer
EP3140291A4 (en) 2014-05-05 2018-01-10 Lycera Corporation Tetrahydroquinoline sulfonamide and related compounds for use as agonists of rory and the treatment of disease
US10189777B2 (en) 2014-05-05 2019-01-29 Lycera Corporation Benzenesulfonamido and related compounds for use as agonists of RORγ and the treatment of disease
DK3229811T3 (da) * 2014-12-09 2021-03-08 Gri Bio Inc Forebyggelse og behandling af betændelseslidelser
CA2982847A1 (en) 2015-05-05 2016-11-10 Lycera Corporation Dihydro-2h-benzo[b][1,4]oxazine sulfonamide and related compounds for use as agonists of ror.gamma. and the treatment of disease
CA2987289A1 (en) 2015-06-11 2016-12-15 Lycera Corporation Aryl dihydro-2h-benzo[b][1,4]oxazine sulfonamide and related compounds for use as agonists of ror.gamma. and the treatment of disease
EP3650045A4 (en) 2017-07-04 2021-07-07 Daiichi Sankyo Company, Limited MEDICINAL PRODUCTS FOR RETINA DEGENERATIVE DISEASE ASSOCIATED WITH PHOTORECEPTOR DEGENERATION
EP3806839A4 (en) * 2018-06-14 2022-03-30 Cornell University Cornell Center For Technology, Enterprise & Commercialization ("CCTEC") COMPOSITIONS AND METHODS TO DELIVER CARDIOPROTECTIVE EFFECTS
CN113207799B (zh) * 2021-03-19 2022-03-15 中山大学 一种二型糖尿病小鼠快速心衰模型的构建方法
WO2023044355A1 (en) * 2021-09-15 2023-03-23 Cornell University Compositions and methods for mitigating alcohol liver disease

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6593359B1 (en) 1995-10-09 2003-07-15 Centre International De Recherches Dermatologioues Galderma (C.I.R.D. Galderma) Use of a RAR-γ-specific agonist ligand for increasing the rate of apoptosis

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE59778B1 (en) 1985-12-04 1994-04-06 Max Planck Gesellschaft Medicament with anti-tumour action containing hexadecylphosphocholine
JP3879938B2 (ja) * 1994-03-31 2007-02-14 日本ケミカルリサーチ株式会社 抗炎症剤
JPH08109134A (ja) * 1994-10-11 1996-04-30 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 細胞変成抑制並びに臓器毒性軽減剤
US6025388A (en) 1995-04-26 2000-02-15 Allergan Sales, Inc. Method for inhibiting gene expression promoted by AP1 protein with RARβ selective retinoids and method for treatment of diseases and conditions with such retinoids
US5624957A (en) * 1995-06-06 1997-04-29 Bristol-Myers Squibb Company Rary-specific retinobenzoic acid derivatives
US5965606A (en) 1995-12-29 1999-10-12 Allergan Sales, Inc. Methods of treatment with compounds having RAR.sub.α receptor specific or selective activity
JP2001500486A (ja) 1996-08-28 2001-01-16 アンスティテュ ナショナル デゥ ラ サンテ エ デゥ ラ ルシェルシュ メディカル Ｒａｒアンタゴニストとｒｘｒアゴニストとの治療学的組合せおよびその使用
TR200001717T2 (tr) 1998-01-22 2000-11-21 Asta Medica Aktiengesellschaft Leishmaniasis tedavisinde miltefosin ihtiva eden ve ağızdan alınan katı farmasötik bileşimler.
JO2178B1 (en) 1999-10-19 2003-04-23 اف . هوفمان لاروش ايه جي Treatment of invasive diseases, using selected anti-PAR materials
US7390795B2 (en) 2000-12-18 2008-06-24 Pentraxin Therapeutics Limited Treatment and prevention of tissue damage
AU2002254396A1 (en) * 2001-03-26 2002-10-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Method of attenuating reactions to skin irritants
AU2003294757A1 (en) * 2002-11-29 2004-06-23 Axxima Pharmaceuticals Ag Formulations useful against hepatitis c virus infections
US20050026950A1 (en) * 2003-07-30 2005-02-03 Allergan, Inc. Methods of therapeutic treatment using retinoids to achieve consistent bioavailability
CN1210041C (zh) * 2003-09-29 2005-07-13 中国医学科学院皮肤病研究所 治疗痤疮的复方外用药物
WO2005120479A1 (en) 2004-06-09 2005-12-22 Gpc Biotech Ag Use of selenium or a selenium salt and a retinoid acid or a retinoid in the treatment of viral hepatitis c
ATE495750T1 (de) * 2005-09-29 2011-02-15 Torrey Pines Inst Sulfatide zur behandlung von autoimmunkrankheiten
US20110118197A1 (en) * 2005-09-29 2011-05-19 Vipin Kumar Chaturvedi Prevention of hepatic ischemic reperfusion injury by administration of sulfatides
JP2009520730A (ja) 2005-12-23 2009-05-28 ヤド・テヒノロギース・ゲーエムベーハー アレルギー性疾患を治療および予防するための手段および方法
DE102006019906A1 (de) 2006-04-28 2007-10-31 Müller-Enoch, Dieter, Prof. Dr. Verwendung von Verbindungen der Formel A-R-X oder deren pharmazeutisch akzeptable Salze zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung
EP2097075A1 (fr) * 2006-11-20 2009-09-09 Galderma Research & Development, S.N.C. Utilisation d'adapalène pour moduler l'expression de cd1d ou il-10.
BR112012001680A2 (pt) * 2009-07-16 2015-09-01 Stiefel Laboratories Derivados de tazaroteno
IT1403356B1 (it) 2010-12-27 2013-10-17 Sit La Precisa Spa Con Socio Unico Dispositivo per il controllo dell'erogazione di un gas combustibile verso un bruciatore, particolarmente per apparecchi riscaldatori di acqua
ES2727038T3 (es) 2011-05-26 2019-10-11 Gri Bio Inc Derivados de ácido sulfónico oxigenados que contienen amino o amonio y su uso médico
DK2723347T3 (da) 2011-06-24 2019-11-18 Gri Bio Inc Forebyggelse og behandling af inflammationstilstande
US9005490B2 (en) 2012-12-14 2015-04-14 Delphi Technologies, Inc. Material for solid state sintered material
US20160067269A1 (en) 2013-04-08 2016-03-10 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Miltefosin Or Perifosin For Use In The Treatment of IBD
DK3229811T3 (da) 2014-12-09 2021-03-08 Gri Bio Inc Forebyggelse og behandling af betændelseslidelser

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6593359B1 (en) 1995-10-09 2003-07-15 Centre International De Recherches Dermatologioues Galderma (C.I.R.D. Galderma) Use of a RAR-γ-specific agonist ligand for increasing the rate of apoptosis

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Alcoholism Clinical and Experimental Research, 24(5), 188(2000.05.)
Br. J. Dermatol., 135, 18-25(1996.)

Also Published As

Publication number Publication date
EP3616701A1 (en) 2020-03-04
RU2678561C9 (ru) 2019-03-05
JP6441073B2 (ja) 2018-12-19
KR20190140087A (ko) 2019-12-18
KR20140048939A (ko) 2014-04-24
AU2012272642A2 (en) 2014-02-13
RU2014100056A (ru) 2015-07-27
EP2723347B1 (en) 2019-09-04
WO2012178108A1 (en) 2012-12-27
EP2723347A4 (en) 2015-02-25
BR112013033309A2 (pt) 2017-03-07
BR112013033309B1 (pt) 2022-07-05
CA2840272C (en) 2020-09-15
ES2759584T3 (es) 2020-05-11
MX2013015441A (es) 2014-09-22
US20210169909A1 (en) 2021-06-10
CN103732231B (zh) 2020-04-10
CN103732231A (zh) 2014-04-16
AU2012272642A1 (en) 2014-01-30
JP2017206523A (ja) 2017-11-24
US9949996B2 (en) 2018-04-24
US10925886B2 (en) 2021-02-23
KR102164567B1 (ko) 2020-10-12
MX367850B (es) 2019-09-09
DK2723347T3 (da) 2019-11-18
US20180193368A1 (en) 2018-07-12
RU2678561C2 (ru) 2019-01-30
US20140187504A1 (en) 2014-07-03
JP2014517077A (ja) 2014-07-17
US11660309B2 (en) 2023-05-30
BR112013033309A8 (pt) 2018-03-06
CN111298120A (zh) 2020-06-19
CA2840272A1 (en) 2012-12-27
AU2012272642B2 (en) 2017-09-07
EP2723347A1 (en) 2014-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102055395B1 (ko) 염증 질환의 예방 및 치료
JP2014517077A5 (ko)
Maricic et al. Inhibition of type I natural killer T cells by retinoids or following sulfatide‐mediated activation of type II natural killer T cells attenuates alcoholic liver disease in mice
JP2023030210A (ja) 炎症性病態の予防および治療
RU2789326C1 (ru) Предупреждение и лечение воспалительных состояний
KR102665487B1 (ko) 염증 질환의 예방 및 치료

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
X091 Application refused [patent]
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)