BRPI0620745A2 - polÍmero biocompatÍvel, nço-biodegradÁvel, nço tàxico, de ultilidade para composiÇÕes de nanopartÍculas farmacÊuticas - Google Patents

Abstract

POLÍMERO BIOCOMPATÍVEL, NçO-BIODEGRADÁVEL, ATàXICO éTIL PARA COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS NANOPARTICULADAS, constituído de um polímero biocompatível, não-biodegradável e atóxico de fórmula (I), compreendido de três unidades monoméricas, selecionadas de L-vinilpirrolidona (VP), N-isopropilacrilamida (NIPAM), e éster de anidrido maléico e olietileno glicol (MPEG),reticulado com um derivado vinílico bifuncional, de alta pureza e substancialmente livre dos respectivos contaminantes monoméricos tóxicos, e processo para preparação do mesmo. A invenção refere-se ainda a composições farmacêuticas nanoparticuladas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água compreendendo o polímero da invenção, que são seguras, menos tóxicas e convenientes para administração à cabeceira a pacientes com necessidade das mesmas. Além disso, a invenção refere-se a um método altamente seletivo para preparação de composições farmacêuticasnanoparticuladas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água.

Description

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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" Campo da Invenção A presente invenção fornece um polímero biocompatível e não- biodegradável de alta pureza, substancialmente livre de contaminantes monoméricos e um processo para a preparação do mesmo.

A presente invenção também fornece composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada utilizando o referido polímero da invenção. Além disso, a presente invenção refere-se a um método altamente seletivo para a preparação de composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada assim como a um método de administração das mesmas a pacientes com necessidade das mesmas. O polímero da presente invenção sendo atóxico e seguro, dessa forma torna as composições farmacêuticas nanoparticuladas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água compreendendo o referido polímero também menos tóxicas e mais seguras para administração. Fundamentos da Invenção

Os últimos anos vem presenciando um interesse cada vez mais crescente na aplicação de novos materiais nos campos médico e farmacêutico, seja como próteses ou em dispositivos médicos projetados para contato com o ambiente biológico no corpo vivo. Desses materiais, polímeros, principalmente polímeros sintéticos, constituem de longe as classes mais diversas que se observa conferir benefícios consideráveis à saúde do paciente. As aplicações de polímeros na área médica e farmacêutica são bastante variáveis. Na área médica, os polímeros são empregados como implantes ou materiais de suporte tais como órgãos artificiais, enxertos vasculares, lentes intra-oculares, articulações artificiais, próteses mamárias, materiais de sutura, agentes terapêuticos extracorporais ou outros materiais de suporte tais como aqueles usados em hemoperfusão, oxigenadores de sangue, cateteres, tubagem sangüínea, materiais para cobrir feridas e queimaduras, talas, lentes de contato etc. Na área farmacêutica, os polímeros são particularmente usados no desenvolvimento de sistemas de distribuição de nanopartículas e sistemas de distribuição de liberação contratos. Estudos extensos também vêm sendo efetuados para vetorizar drogas com sistemas de distribuição para o sítio desejado. Além disso, os polímeros também têm bastante utilidade em outras aplicações, tais como emplastros para distribuição transdérmica de drogas, microsferas, bioprocessos tais como imobilização enzimática e celular etc. Entre tais aplicações, os sistemas de distribuição de drogas nanoparticuladas vêm sendo estudados mais extensivamente e carreadores de drogas de tamanho nanométrico com superfícies hidrofílicas, especialmente aqueles compreendendo duas regiões concêntricas esféricas de micelas poliméricas - um núcleo densamente acondicionamento de um material hidrofóbico, que é responsável pelo aprisionamento de uma droga ou composto hidrofóbico e um envoltório externo feito de material hidrofílico vêm sendo extensivamente estudados. Verifica-se que tais sistemas escapam do reconhecimento e absorção pelos sistemas reticulo-endoteliais (RES) e podem portanto circular no sangue por muito tempo. Além disso, devido ao seu tamanho extremamente pequeno (uma micela polimérica geralmente consiste em várias centenas de copolímeros em blocos e tem um diâmetro de cerca de 20 nm - 50 nm), as partículas extravasam nos sítios patológicos, tais como tumores sólidos através do mecanismo de vetorização passivo.

Os polímeros extraem sua gama de propriedades atribuíveis aos seus aspectos químicos e estruturais. As cadeias do polímero podem ser essencialmente lineares, ramificadas, ou reticuladas a cadeias adjacentes. Além disso, estas cadeias podem ser desorganizadas, organizadas ou orientadas em uma única direção. Estes aspectos estruturais combinados com a composição química conferem uma variedade de propriedades aos polímeros, resultando em uma variedade de aplicações finais. Além disso, estes aspectos estruturais combinados com a composição química pode conferir ao polímero resultante biocompatibilidade e resistência à biodegradação pelo ambiente do tecido hospedeiro ou privar o polímero resultante destas propriedades. Estes fatores também têm influência sobre outras propriedades tais como solubilidade e métodos de processamento e moldagem. Além do mais, quando um polímero é injetado nos mamíferos, normalmente ele desaparece lentamente do local de administração, entretanto, este desaparecimento ocorre em resposta a uma reação química tal como hidrólise, que normalmente faz parte do processo de biotransformação e o referido polímero é metabolizado e eliminado do corpo. Isto, no entanto, às vezes leva a metabólitos desnecessários, que causam efeitos desagradáveis em vários sistemas biológicos. Por conseguinte, os polímeros que são inertes no/para o ambiente de uso, e são eliminados ou extraídos intatos do local de administração também funcional essencialmente como uma barreira limitativa da taxa para o transporte e a liberação de uma droga, podem ser de suma importância com base nas funções desejadas. Mais uma vez, a biodegradabilidade de um polímero depende das propriedades mecânicas e químicas do polímero. Uma variedade de polímeros naturais, sintéticos, e biossintéticos são biodegradáveis e ambientalmente degradáveis. Um polímero baseado no esqueleto C-C tende a ser não-biodegradável, ao passo que esqueletos de polímero contendo heteroátomos conferem biodegradabilidade. Não-

biodegradabilidade/biodegradabilidade pode ser portanto ser introduzida nos polímeros pela deleção/adição criteriosa de ligações químicas tais como ligações anidrido, éster, ou amida, entre outros. Exemplos comuns de materiais poliméricos não- biodegradáveis incluem polietileno vinil acetato, polidimetil siloxano, poliéter uretano, etil celulose, acetato de celulose, polietileno e polivinil cloreto. Existe um sem-número de relatórios disponíveis sobre as tentativas feitas nas últimas décadas sobre o desenvolvimento de sistemas de distribuição de nanoparticulados para uma grande variedade de drogas utilizando polímeros. Para mencionar apenas alguns, estes incluem os relatórios de: i) Sakurai et al. no documento US 5.412.072, onde se verifica que um complexo compreendendo uma droga covalentemente ligado a um polímero composto de fragmentos hidrofílicos e hidrofóbicos torna o referido complexo solúvel em água e - portanto adequado para administração. As drogas utilizadas nesse documento em geral são compostos menos solúveis ou insolúveis em água e está relatado que o complexo droga-polímero forma micelas poliméricas em soluções aquosas e se transforma em drogas polimerizadas de alto peso molecular solúveis em água, úteis e adequadas para administração. ii) Yokoyama et al. no documento US 5.449.513, onde eles reportam uma micela polimérica, que ao contrário daquela apresentada por Sakurai et al. no documento US 5.412.072 não é um complexo onde uma droga é covalentemente ligada a um polímero, mas sim um complexo onde a droga é aprisionada no polímero. As drogas utilizadas para aprisionamento são de natureza hidrofóbica. A micela polimérica por sua é preparada por aprisionamento de drogas hidrofóbicas no interior do envoltório polimérico por meio de métodos convencionais tais como ultra sonicação, seguida de purificação das micelas assim obtidas através de diálise.

iii) Desai et al. nos documentos US 5.439.686; US 5.362.478; US 5.916.596; US 6.096.331; US 6.537.579 e US 6.749.868, onde são preparadas micelas poliméricas de compostos substancialmente insolúveis em água. Está descrito que o composto insolúvel em água é aprisionado no interior do envoltório polimérico em um grau significativo e adequado para administração a um paciente com necessidade do mesmo seja em uma forma solúvel ou suspendida.

Os polímeros utilizados por Sakurai et al. no documento US 5.412.072 são em geral aqueles compreendendo um segmento hidrofílico selecionado de polietileno glicol, polissacarídeos, poliacrilamida etc. e um segmento hidrofóbico selecionado de ácido poliaspártico, ácido poliglutâmico, polifisina etc. Os polímeros utilizados por Yokoyanaa et al. no documento US 5.449.513 são em geral aqueles compreendendo um segmento hidrofílico selecionado de óxido de polietileno, ácido polimálico, ácido poliaspártico, ácido poliglutâmico, polilisina, polissacarídeo etc. e um segmento hidrofóbico selecionado de poli (β-benzil L-aspartato), poli(y-benzil L-glutamato), poli (aspartato β-substituído), poli (aspartato γ-substituído), poli(L- leucina), poli(L-valina), poli(L-fenilalanina), poliaminoácidos hidrofóbicos, poliestireno, polimetacrilato, poliacrilato, polimetacrilato amida, poliacrilato amida, poliamida, poliéster, óxido de polialquileno e poliolefmas hidrofóbicas. Os polímeros utilizados por Desai et al. nos documentos US 5.439.686; US 5.362.478; US 5.916.596; US 6.096.331; US 6.537.579 e US 6.749.868 são em geral aqueles contendo essencialmente grupos sulfidril ou ligações dissulfeto em sua estrutura por exemplo albumina (que contém 35 resíduos cisteína), insulina (que contém 6 resíduos cisteína), hemoglobina (que contém 6 resíduos cisteína por unidade α2 β2), lisozima (que contém 8 resíduos cisteína), imunoglobulinas, a-2- macroglobulina, Vitronectina, Vitronectina, Fibrinogênio etc. Tais polímeros são substancialmente reticulados através da formação de ligações dissulfeto. Tais polímeros incluem polímeros tanto sintéticos quanto naturais, que como mencionado acima, contêm grupos sulfidril ou ligações dissulfeto em sua estrutura. Os grupos sulfidril ou ligações dissulfeto são apresentados como sendo preexistentes ou como sendo obtidos através de modificações químicas adequadas. Os polímeros naturais são tidos como preferidos e incluem proteínas albumínicas, oligopeptídios, ácidos polinucléicos etc. No entanto, a desvantagem com as micelas poliméricas descritas por Sakurai et al., Yokoyama et al., e Desai et al. é que todas elas utilizam polímeros, tanto sintéticos como naturais, que são biodegradáveis. Pode-se dizer que polímeros biodegradáveis embora sejam capazes de influenciar o padrão de liberação da droga assim como a cinética de liberação da droga carregada, no entanto, não são particularmente preferidos em sistemas de distribuição de drogas porque eles:

a) têm um tempo de vida plasmática baixo devido a sua rápida captura pelas células do sistema de fagócitos mononucleares (MP S);

b) não apresentam resposta a alterações fisiológicas;

c) não apresentam cinética de liberação da droga que possa causar econômica e terapeuticamente consumo das drogas e outros efeitos colaterais; e

d) podem causar aumento de toxicidade ou imunogenicidade visto que a encapsulação de drogas protéicas envolve solventes orgânicos, que podem causar desnaturação de proteínas. Sistemas de distribuição onde polímeros, que são não- biodegradáveis, foram utilizados e descritos por:

i) Maitra et al. no documento US 5.874.111, onde a droga é aprisionada no polímero resultando em na formação de uma

nanopartícula hidrofílica polimérica altamente monodispersada. Os polímeros utilizados são aqueles compreendendo monômeros como vinilpirrolidona (VP) ou mistura de vinilpirrolidona e polietilenoglicolfumarato (PEGF), etc.

ii) Maitra et al. no documento US 6.322.817, onde os polímeros utilizados compreendem pelo menos um tipo de um monômero

anfifílico selecionado do grupo que consiste em vinilpirrolidona, ácido acrílico, alquil acrilatos tendo um comprimento de cadeia de C3 a C6 polietileno glicol funcionalizado de um peso molecular de 2000 a 6000, N-alquilacrilamida tendo um comprimento de cadeia de C3 a C6, e alquilcianoacrilato tendo um comprimento de cadeia de C3 a C6. As drogas aprisionadas nas micelas poliméricos são derivados de taxano, em particular Paclitaxel.

iii) Lowe et al. no documento US 2005/0169882, onde os polímeros utilizados compreendem um segmento ativo ("smart") (que é não-biodegradável) e um segmento biodegradável. Mais especialmente, o segmento não-biodegradável ativo compreende poli(N-isopropilacrilamida), poli(N- alquilacrilamida), poli(N-n- propilacrilamida), poli(N-isopropilmetacrilamida), poli(óxido de etileno)-poli(óxido de propileno)-poli(óxido de etileno), polipeptídios semelhantes à elastina, ou um derivado do mesmo e o segmento biodegradável compreende polissacarídeo, dextrana, poliéster, polilactíeo, poli(ácido L-láctico), poli(ácido D,L- láctico), poli(lactídeo-co-glicolídeos), poli etileno glicol-bloco- ácido láctico) biotinilado etc.

No caso dos polímeros apresentados no documento US 5.874.111, pode-se observar que tais polímeros são preparados através da polimerização dos respectivos monômeros e o material polimérico assim obtido é purificado e isolado de um meio aquoso contendo o mesmo através de um método de diálise.

No caso dos polímeros apresentados no documento US 6.322.817 também os polímeros são preparados através da polimerização dos respectivos monômeros e o material polimérico assim obtido é purificado e isolado de um meio aquoso através de um método de diálise.

Igualmente, os polímeros apresentados por Lowe et al. no documento US 2005/0169882 também é purificado e isolado de um meio aquoso contendo o mesmo através de um método de diálise.

Quanto aos compostos ou drogas descritos por Maitra et al. no documento US 5.874.111 para aprisionamento nos polímeros descritos nesse documento, eles são principalmente antígenos, soro bovino etc. No caso do documento US 6.322.817, as drogas para aprisionamento nos polímeros descritos nesse documento são principalmente derivados de taxano insolúveis em água, especialmente paclitaxel, enquanto que Lowe et al. no documento US 2005/0169882 apresentam uma ampla gama de drogas, que podem ser aprisionadas no envoltório polimérico descrito no mesmo documento. Além do acima exposto, Burman et al. no documento US 6.365.191 ensinam uma composição farmacêutica compreendendo o polímero descrito no documento US 6.322.817, e mais especificamente uma composição de derivados de taxano, especialmente paclitaxel. Nesta invenção, a referida composição farmacêutica é preparada pela adição de uma solução de paclitaxel em etanol a uma veículo de infusão compreendendo solução de dextrose, à qual fora adicionada uma solução de polímero em água contendo um tensoativo aniônico e um agente tamponante. Burman et al. reivindicam ainda que a composição farmacêutica é estável por mais de 12 horas sem qualquer precipitação da droga do fluido de perfusão e que mais de 90% (segundo análise por HPLC) da droga ficam aprisionados na micela polimérica mesmo depois de 24 horas da preparação do fluido de perfusão. Ainda assim, Burman et al. no documento US 6.365.191 reivindicam que a composição farmacêutica reivindicada está em uma forma nanoparticulada, no entanto, não há qualquer menção no relatório descritivo quanto ao tamanho da forma nanoparticulada reivindicada. A única menção sobre o tamanho de partícula das micelas poliméricas contendo paclitaxel pode ser encontrada na descrição feita por Maitra et al. no documento US 6.322.817, onde as referidas nanopartículas contendo paclitaxel são reportadas como tendo um diâmetro na faixa de 30 - 150 nm. Da mesma forma, não qualquer menção sobre o tamanho de partícula das micelas poliméricas das composições apresentadas por Lowe et al. no documento US 2005/0169882. É importante notar que os polímeros apresentados nos documentos US 5.874.111, US 6.322.817, US 6.365.191 e US 2005/0169882 são preparados a partir de um ou mais monômeros, que incluem vinilpirrolidona e N-

Λ

isopropilacrilamida. E ainda importante notar que a vinilpirrolidona e a N-isopropilacrilamida são compostos tóxicos, cuja presença em uma composição farmacêutica destinada ao consumo humano/animal não apenas é condenada pelas Autoridades de Saúde de todo o mundo, como também sofre rigoroso controle de qualidade, com limites rígidos estipulados pelos Fóruns Farmacopéicos em todo o mundo. Por exemplo, o nível de vinilpirrolidona monomérica no polímero, polivinilpirrolidona, assim como qualquer outro polímero contendo vinilpirrolidona como monômero, segundo estabelecido pelas Farmacopéias US e Européia não deve ultrapassar um limite de 0,001% (i.e., <10 ppm).

Existe um grande risco de que nos métodos descritos nos documentos US 5.874.111, US 6.322.817, US 6.365.191 e US 2005/0169882 para preparação e isolamento de polímeros utilizando vinilpirrolidona como um dos monômeros, o referido monômero, i.e., vinilpirrolidona possa estar presente em limites superiores a 0,001% (i.e., >10 ppm).

Existe um risco igualmente grande de que as composições farmacêuticas contendo tais polímeros, utilizando vinilpirrolidona como um dos monômeros também possa conter vinilpirrolidona como um contaminante monomérico e que o referido monômero, i.e., vinilpirrolidona também possa estar presente em limites superiores a 0,001% (i.e., >10 ppm). Isto pode ser verdade especialmente em relação às composições farmacêuticas apresentadas nos documentos US 6.322.817, US 6.365.191 eUS 2005/0169882.

Não é preciso enfatizar que qualquer reação química incluindo uma reação para a preparação de polímero nunca está completa no sentido de que invariavelmente um ou mais dos reagentes são deixados no produtos. Isto se aplica a reações de polimerização envolvendo vinilpirrolidona como um monômero e dependendo das proporções molares ou ponderais da vinilpirrolidona utilizada, há sempre a possibilidade de que alguma quantidade da vinilpirrolidona permaneça como contaminante nos produtos poliméricos preparados com a mesma.

Em relação ao acima exposto, as preocupações dos presentes inventores mostraram-se verdadeiras, onde análise do polímero preparado por polimerização de três monômeros, a saber, vinilpirrolidona (VP), N-isopropilacrilamida (NIPAM) e éster de anidido maléico e polietileno glicol (MPEG) exatamente da maneira descrita nos Exemplos I, II e III do documento US 6.322.817 mostrou conter uma quantidade de N- isopropilacrilamida (NIPAM) e vinilpirrolidona (VP) como resume a Tabela I.

Tabela I: Quantidade de monômeros residuais no polímero preparado pelo método descrito nos exemplo I, II e III do

documento US 6.322.817

Monômero % p/p Detectado no polímero NIPAM 0,066 - 0,076 (660 - 760 ppm) VP 0,008-0,011 (80- 110 ppm)

Seria bastante evidente que a quantidade de vinilpirrolidona encontrada no polímero fosse pelo menos mais de oito vezes o limite tóxico de 0,001% (i.e., 10 ppm), onde a composição

farmacêutica contendo tal polímero seria muito insegura e altamente tóxica para administração a seres humanos ou animais. E necessário, se não imperativo, que haja não apenas um polímero substancialmente livre de monômeros tóxicos, tais como N-isopropilacrilamida (NIPAM) e vinilpirrolidona (VP) mas também composições farmacêuticas compreendendo um polímero, que sejam substancialmente livres de contaminantes monoméricos tóxicos, tais como N-isopropilacrilamida (NIPAM) e vinilpirrolidona (VP).

Também deve ser observado que as composições farmacêuticas apresentadas por Burman et al. no documento US 6.365.191 são reportadas como tendo uma estabilidade de apenas cerca de 12 horas ou mais com 90% ou mais da droga aprisionada na micela polimérica no final de 24 horas. Além disso, as composições farmacêuticas apresentadas por Lowe et al. no documento US 2005/0169882 são reportadas como tendo uma carga das substâncias biologicamente ativas de aproximadamente apenas 40%, com uma liberação da substância biologicamente ativa entre algumas horas a vários dias.

São ainda necessárias composições farmacêuticas, que tenham uma estabilidade mais longa assim como maior carga de droga, que além disso sejam seguras e menos tóxicas. A presente invenção é uma etapa em direção ao progresso de fornecer não apenas um polímero, que é substancialmente livre de contaminantes monoméricos tóxicos, como também de fornecer uma composição farmacêutica compreendendo tal polímero desejado, que é segura para administração ao ser humano/aminal e tem estabilidade mais longa. Objetivos da Invenção

Constitui um objetivo da presente invenção fornecer um polímero biocompatível e não-biodegradável de alta pureza, substancialmente livre de contaminantes monoméricos.

Constitui um outro objetivo da presente invenção fornecer um processo para a preparação de um polímero biocompatível e não- biodegradável de alta pureza, substancialmente livre de contaminantes monoméricos. Constitui ainda um outro objetivo da presente invenção fornecer composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada compreendendo polímeros biocompatíveis e não-biodegradáveis, de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos. Constitui um outro objetivo da presente invenção fornecer um método para a preparação de composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada utilizando polímeros biocompatíveis e não- biodegradáveis, de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos.

Constitui ainda um outro objetivo da presente invenção fornecer composições farmacêuticas nanoparticuladas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água compreendendo polímeros biocompatíveis e não-biodegradáveis de alta pureza e livres de contaminantes monoméricos, que são seguros e menos tóxicos.

Constitui um outro objetivo da presente invenção fornecer um método altamente seletivo para a preparação de composições farmacêuticas em forma nanoparticulada compreendendo drogas ou compostos pobremente solúveis em água e um polímero biocompatível e não-biodegradável de alta pureza e livres de contaminantes monoméricos.

Constitui ainda um outro objetivo da presente invenção fornecer um método de administração das composições farmacêuticas nanoparticuladas compreendendo um polímero biocompatível e não-biodegradável de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos a pacientes com necessidade das mesmas.

Constitui um outro objetivo da presente invenção fornecer composições farmacêuticas nanoparticuladas compreendendo um polímero biocompatível e não-biodegradável de alta pureza e livre de contaminantes monoméricos, que são estáveis por períodos de tempo mais longos. Abreviações usadas na invenção VP = vinilpirrolidona ou vinilpirrolidin-2-ona NIPAM = N-isopropilacrilamida

r

MPEG = Ester de anidrido maléico e polietileno glicol MBA = N, Ν'-metilenobisacrilamida TMED = Tetrametiletilenodiamina APS = persulfato de amônio

LCST = temperatura de solução crítica mais baixa DSC = calorimetria de varredura diferencial TGA = análise termogravimétrica CMC = Concentração de micela crítica Breve Descrição das figuras

Fig. 1: O espectro de IH-NMR do polímero da presente invenção.

Fig. 2: O espectro de 13 C-NMR do polímero da presente invenção.

Fig. 3: O espectro de infravermelho da transformada de Fourier (FT-IR) do polímero da presente invenção. Fig. 4: O termograma de TGA do polímero da presente invenção. Fig. 5: O termograma de DSC do polímero da presente invenção. Fig. 6: O perfil sangüíneo farmacocinético do polímero marcado com [14C] da presente invenção. ► 13

Fig. 7: Fotografias do local do lobo da orelha de coelho colorido com S&E depois de 48 horas da administração subcutânea de uma solução de dextrose a 10% (controle). Fig. 8: Fotografias do local do lobo da orelha de coelho colorido com S&E depois de 48 horas da administração subcutânea de uma solução aquosa do polímero da presente invenção. Fig. 9: Fotografias do local da veia marginal da orelha de coelho colorido com S&E depois de 24 horas da administração intravenosa de uma solução de dextrose a 10% (controle). Fig. 10: Fotografias do local da veia marginal da orelha de coelho colorido com S&E depois de 24 horas da administração intravenosa de uma solução aquosa do polímero da presente invenção.

Fig. 11: Uma representação de um método típico para a preparação e administração de pacientes com necessidade da mesma da composição farmacêutica nanoparticulada da presente invenção.

Sumário da Invenção

Em seus esforços, os presentes inventores descobriram que todos os objetivos apresentados puderam ser atingidos, e que ainda superaram a maioria, senão todas as limitações da técnica anterior.

Em primeiro lugar, os presentes inventores descobriram que era possível obter um polímero compreendendo uma unidade monomérica de NIPAM e de VP, onde a quantidade dos respectivos contaminantes monoméricos individuais no polímero assim obtido está abaixo dos limites tóxicos prescritos. Em particular, os presentes inventores descobriram que era possível obter um polímero compreendendo NIPAM, VP e MPEG como unidades monoméricas, que é substancialmente livre de contaminantes monoméricos de NIPAM e VP tóxicos. Especificamente, os presentes inventores descobriram que tal polímero poderia ser obtido com alta pureza contendo os referidos contaminantes NIPAM e VP em níveis muito menores que 0,001% p/p. O polímero com as características desejadas pode ser obtido através de um método altamente seletivo, compreendendo submeter uma solução aquosa contendo o polímero obtido por polimerização NIPAM, VP e MPEG a uma etapa de diafiltração ou ultrafiltração, ao contrário dos métodos de diálise, como ensinado na técnica anterior.

Que o polímero obtido pelo método da presente invenção é superior aos métodos da técnica anterior, especialmente ao método descrito no documento US 6.322.817, envolvendo uma etapa de diálise pode ser mais bem entendido a partir de uma comparação dos monômeros residuais contidos nos respectivos polímeros, como resumido na Tabela II.

Tabela II: Uma comparação dos contaminantes monoméricos contidos no polímero obtido pelo processo descrito no documento US 6.322.817, utilizando diálise vis-à-vis o polímero obtido pela presente invenção, utilizando diafiltração_

Parâmetro O polímero obtido pelo método do documento US 6.322.817 O polímero obtido pelo método da presente invenção NIPAM Residual 0,066 - 0,076 % p/p (660- 760 ppm) <0,001% p/p (<10 ppm) VP Residual 0,008 -0,011 % p/p (80-110 ppm) <0,001% p/p (<10 ppm)

Deve ser observado que a diálise é um processo, que envolve separação lenta em moléculas menores de moléculas maiores ou de substâncias dissolvidas de partículas coloidais em uma solução por difusão seletiva através de uma membrana semipermeável. Em um método de diálise típico, a solução de polímero para purificação está contida em uma membrana semipermeável e os solutos de baixo peso molecular (monômeros) são removidos colocando-se um solvente puro, geralmente água por fora da membrana. Este solvente é trocado periodicamente ou continuamente até a concentração de solutos difusíveis (monômeros como NIPAM e VP) na solução contendo o polímero ser reduzida.

Ao contrário do método de diálise, a técnica de diafiltração envolve o fluxo mecânica de fluido por uma bomba através da membrana, pelo qual o fluido é bombeado tangencialmente (por isso a diafiltração também é conhecida como filtração de fluxo tangencial), ao da superfície da membrana. Uma porção aplicada força uma porção do fluido a difundir seletivamente através da membrana até o lado do filtrado. Os componentes poliméricos retidos não se acumulam na superfície da membrana semipermeável.

Ao contrário do método de diálise, onde a quantidade ou volume inicial da solução aquosa do polímero levada para purificação continua como tal/ou a mesma ou fica diluída no final ou término da referida operação, no método de diafiltração, por outro lado, como a solução aquosa do polímero é arrastada pelo fluxo tangencial, concorrentemente resulta em concentração da referida solução contendo o polímero, resultando em uma solução mais concentrada do polímero. Por exemplo, quando uma solução contendo, digamos 100 g do polímero em 5,0 litros de água é submetida à diálise e diafiltração, respectivamente, no final do primeiro método é obtida uma solução contendo 100 g do polímero em 4,5 a 5,5 litros de água, ao passo que no final do segundo método resulta uma redução ou concentração do volume inicial, geralmente para um valor entre um quarto a um sexo (1/4 a 1/6) do volume inicial, e no final é obtida uma solução de 100 g do polímero em cerca de 0,8 a 1,3 litros de água. Além disso, como mencionado acima, no método de diálise o solvente mantido fora da membrana contendo a solução do polímero precisa ser trocada periodicamente ou continuamente a mão, ao passo que no método de diafiltração esta operação manual de troca periódica ou contínua de qualquer solvente não é necessário. Isto torna o primeiro método tedioso requerendo supervisão manual durante sua operação, ao passo que o segundo método é totalmente automático e regulado e por conseguinte menos tedioso e conveniente não requerendo supervisão manual durante sua operação. Além disso, devido ao fato de o método de diafiltração ser operável em um ambiente fechado em comparação com o método de diálise, que opera em um ambiente aberto, qualquer possibilidade de contaminação microbiana é mínima ou inexistente no primeiro método e por conseguinte seria qualificado como uma operação em condições assépticas, não apenas conforme as Boas Práticas de Produção mas também conforme as Diretrizes Reguladoras mundiais. Além disso, em virtude de não envolver uma operação manual mas também do princípio inerente sob o qual funciona o método de diálise, o ciclo de tempo para uma operação unitária é extenso e geralmente leva cerca de 24 - 36 horas. Em comparação, o método de diafiltração em virtude do princípio inerente sob o qual funciona requer um ciclo de tempo muito curto e geralmente leva menos de uma hora para terminar. Em outras palavras, o método de diafiltração é pelo menos 25 (vinte e cinco) vezes mais rápido que o método de diálise e por conseguinte mais adequado em termos industriais.

Embora o método de diálise requeira um ciclo de tempo bastante mais longo para operação e término, uma outra desvantagem inerente do referido método é que ele permite somente uma pequeno volume/quantidade de uma solução do polímero a ser purificada. Estas limitações não acontecem com o método de diafiltração e em geral ele permite um volume/quantidade maior, digamos da ordem de pelo menos 4 a 5 vezes de uma solução a ser purificada. Por exemplo, se o método de diálise tem capacidade de purificar uma solução de 100 g do polímero em 5,0 litros de água em um ciclo, pelo método de diafiltração em um ciclo entre podem ser purificados 400 e 500 g do polímero em 20,0 a 25,0 litros de água. Não é necessário dizer que a maior capacidade de processamento do método de diafiltração é uma outra vantagem que ele oferece além de outras já discutidas anteriormente, i.e., tempo de operação mais rápido, operação automatizada e regulada, conveniente e menos tediosos, concorrente concentração ou redução no volume da solução inicial, consonância com as Boas Práticas de Produção e Diretrizes Reguladoras, contaminação microbiana mínima ou inexistente etc.

No entanto, como mencionado e discutido anteriormente, a vantagem mais importante que o método de diafiltração tem sobre o método de diálise é na pureza do polímero obtido pelos respectivos métodos, com o primeiro método produzindo o polímero substancialmente livre de contaminantes monoméricos e por conseguinte atóxico e seguro para consumo humano/animal [Vide Tabela II].

Por fim, mas não menos importante, uma outra vantagem inerente do método de diafiltração é que se for requerido/necessário que o polímero seja isolado da solução na forma sólida, através de evaporação do solvente, por exemplo através de liofilização então em virtude de o referido método resultar em uma redução ou concentração do volume inicial da solução de polímero, geralmente em torno de cerca de um quarto a um sexto (1/4 a 1/6) do volume inicial, o ciclo de tempo de evaporação/liofilização também seria drasticamente reduzido. No método de diálise, como não ocorre redução ou concentração do volume inicial, se for requerido/necessário que o polímero seja isolado da solução na forma sólida, o ciclo de tempo de evaporação/liofilização seria muito maior.

Em suma, o método de diafiltração em comparação com o método de diálise é facilmente ajustável para produção em grande escala segundo as Boas Práticas de Produção, e por conseguinte mais viável e favorável em termos industriais. As diferenças essenciais entre os métodos de diafiltração e de diálise estão resumidas na Tabela III, para uma consulta rápida. Apesar de até certo ponto a técnica de diafiltração ou ultrafiltração ser aplicada a várias purificações, entretanto, sua aplicação no campo de polímeros ainda não reportada e constitui o aspecto novo e inventivo da presente invenção. Além disso, os presentes inventores caracterizaram ainda o polímero de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos assim obtido, por várias métodos espectroscópicos tais como 1H-NMR, 13C-NMR e infravermelho por transformada de Fourier (FT-IR) e descobriram que ele tem a estrutura (I) mostrada abaixo: Além disso, baseado em estudos com polímero radiomarcado em camundongos albinos suíços machos, como seria evidente pelos detalhes dados na última parte deste relatório descritivo (vide Tabelas VI e VII e Fig. 6], foi descoberto que o polímero da presente invenção é não-biodegradável e é rapidamente eliminado do corpo sem ser depositado e degradado em órgãos vitais, sugerindo a segurança e utilidade do polímero para uso humano/animal.

Tabela III: Uma comparação dos métodos de diálise e diafiltração vis-à-vis purificação de uma solução aquosa do polímero da presente invenção__

Parâmetro Método de Diálise Método de Diafiltração Tamanho da batelada Limitado e por conseguinte embaraçoso (por exemplo, 100 g de polímero em 5,0 litros de água) Pelo menos 4-5 vezes o volume/quantidade podem ser processados (por exemplo 400 a 500 g de polímero em 20,0 a 25,0 litros de água) Condições de processamento Ambiente aberto Ambiente fechado Tempo de processamento Longo (24-36 Horas) Mais curto (< 1 hora) Operação e Conveniência Manual; Tedioso; Menos Conveniente Automatizado e regulado; menos tediosos; altamente conveniente Contaminação microbiana Grande possibilidade Mínima ou inexistente Redução/concentração do volume inicial da solução Nenhuma Cerca de um quarto a um sexto (1/4 a 1/6) Ciclo de tempo de liofilização da solução Demorado (90-110% do volume inicial a serem liofilizados) Mais curto (somente 15- 25% do volume inicial a serem liofilizados) Contaminação monomérica Muito alta Abaixo dos limites farmacopéicos e tóxicos Ajuste e viabilidade industrial Difícil; menos viável Facilmente ajustável; consoante com as Boas Práticas de Produção; bastante viável Além disso, com base em extensos estudos de toxicidade tais como toxicidade localizada (subcutânea e intravenosa), toxicidade da dose em órgãos alvo até 800 mg/kg de peso corporal do animal, toxicidade da dose cíclica em seis meses etc., como seria evidente a partir dos detalhes dados na última parte deste relatório descritivo [vide figs. 7-10], foi descoberto que o polímero da presente invenção é atóxico, biocompatível e biologicamente seguro para uso na produção de composições farmacêuticas destinadas ao uso e administração a humanos/animais.

Foi ainda descoberto que o polímero da presente invenção, que é de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos e ainda é biocompatível, não-biodegradável, seguro e atóxico é particularmente útil na preparação de composições farmacêuticas, compreendendo o referido polímero em forma nanoparticulada junto com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, que por sua vez são seguros e menos tóxicos para uso e/ou administração a humanos/animais.

Especialmente, o polímero biocompatível, não-biodegradável, seguro e atóxico da presente invenção mostrou aprisionar completamente ou quase completamente em seu envoltório polimérico uma gama de drogas ou compostos pobremente solúveis em água, onde as referidas drogas ou compostos pobremente solúveis em água estão disponíveis em forma nanoparticulada, em tamanhos de partículas entre 30-150 nm.

O=

NH

O: Estrutura do polímero da presente invenção Em particular, foi descoberto que o polímero da presente invenção poderia ser usado para preparar uma composição farmacêutica em formas nanoparticuladas, junto com excipientes farmaceuticamente aceitáveis aprisionando uma gama de drogas ou compostos pobremente solúveis em água completamente ou quase completamente em seu envoltório polimérico. Tais drogas ou compostos pobremente solúveis em água são aquelas com solubilidade em água inferior a 10 mg/ml. Exemplos de tais drogas ou compostos pobremente solúveis em água incluem, porém sem limitação, agentes anticâncer, agentes antiinflamatórios, agentes antifúngicos, antieméticos, agentes anti-hipertensivos, hormônios sexuais, esteróides, antibióticos, imunomoduladores, anestésicos etc. Exemplos típicos de agentes anticâncer que podem ser aprisionados no envoltório polimérico são paclitaxel, cocetaxel, e outros derivados de taxano relacionados; irinotecano, topotecano, e outros derivados de camptotecina relacionados; doxorubicina, daunomicina, e derivados de antraciclina relacionados; cisplatina; oxiplatina; 5- fluoruracil; mitomicina, metotrexato; etoposida; ácido betulínico e seus derivados; e wedelolactona e seus derivados. Exemplos típicos de agentes antiinflamatórios que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem indometacina, ilbuprofeno, cetoprofeno, flubiprofeno, piroxicam, tenoxicam, e naproxeno. Exemplos típicos de agentes antifúngicos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem cetoconazol, e anfotericina B. Exemplos típicos de hormônios sexuais que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem testosterona, estrogênio, progesterona, e estradiol. Exemplos típicos de esteróides que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem dexametasona, prednisolona, e triamcinolona. Exemplos típicos de os agentes anti-hipertensivos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem captopril, ramipril, terazosina, minoxidil, e parazosina. Exemplos típicos de antieméticos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem Ondansetrona e Granisetrona. Exemplos típicos de antibióticos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem metronidazol, e ácido fusídico. Exemplos típicos de imunomoduladores que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem ciclosporina; e ácido bifenil dimetil dicarboxílico. Exemplos típicos de anestésicos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem propofol, alfaxalona, e hexobarbital.

Em relação aos agentes anticâncer em particular, foi descoberto que o polímero da presente invenção é capaz de aprisionar completamente em seu envoltório polímero drogas ou compostos pobremente solúveis em água como paclitaxel, docetaxel, etoposida, e vários derivados de ácido betulínico, tais como designados como MJ-1098, DRF-4012 e DRF-4015 tendo as estruturas (II), (III), e (IV) a seguir, que por sua vez estão descritos no documento US 6,403,816 e em nosso Pedido Indiano N0 No. 265/DEL/2005 copendente, depositado em 09 de fevereiro de 2005.

OjN-/ \-HjCO—N

^ V Ή

MJ-Í09B (U)iAsDisclosedIn US 6,403,S16

DRF- 4612(111), As Disclased DilF- 401 S(IV), As Dischsed

In Indian Appin. No. 26S/DEL.200S In Intlhm Appltu No. 26S/DEL.2B0S

As composições farmacêuticas nanoparticuladas das drogas ou compostos pobremente solúveis em água mencionadas acima e especialmente as composições farmacêuticas nanoparticuladas das drogas ou compostos pobremente solúveis em água como paclitaxel, docetaxel e etoposida e compostos anticâncer potentes como MJ- 1098, DRF-4012 e DRF-4015, mencionados acima mostraram ter estabilidade mais longa de mais de 24 horas em comparação com uma composição farmacêutica nanoparticulada de paclitaxel preparada pelo método de Burman et ai., apresentado no documento US 6.365.191, que como reivindicado na referida patente tem uma estabilidade de apenas 12 horas. Com referência ao termo "estabilidade", entende-se que ele significa o período, contado em horas, em que a droga ou composto pobremente solúvel em água fica em solução na composição farmacêutica compreendendo o mesmo, sem qualquer precipitação da droga ou composto. Além disso, nas composições farmacêuticas nanoparticuladas das drogas ou compostos pobremente solúveis em água, mencionadas acima e especialmente nas composições farmacêuticas nanoparticuladas das drogas ou compostos pobremente solúveis em água como paclitaxel, docetaxel e etoposida e compostos anticâncer potentes como MJ 1098, DRF 4012 e DRF 4015, mencionados acima, foi verificado que as referidas drogas ou compostos ficam aprisionados na micela polímero em uma extensão de mais de 95% mesmo depois de 24 horas. Em comparação, em uma composição farmacêutica nanoparticulada de paclitaxel preparada pelo método de Burman et al., apresentado no documento US 6.365.191, foi verificado que a droga fica aprisionada na micela polimérica em uma extensão de somente 90% mesmo depois de 24 horas.

Uma comparação das composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada, compreendendo o polímero de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos da presente invenção em relação à composição farmacêutica de paclitaxel, também em forma nanoparticulada apresentada no documento US 6.365.191, seria evidente da comparação resumida na Tabela IV.

Tabela IV: Comparação da composição farmacêutica de drogas ou compostos pobremente solúveis em água da presente invenção vis-à-vis a composição farmacêutica apresentada no documento US 6.365.191 Série N0 Detalhes Descrição contida no documento US 6.365.191 Presente invenção 1 Drogas ou compostos pobremente solúveis em água mencionadas Derivados de taxano, especialmente paclitaxel Uma gama de drogas e compostos 2 O polímero utilizado na composição farmacêutica Compreendendo unidades monoméricas de NIPAM, VP, e MPEG Compreendendo unidades monoméricas de NIP AM, VP, e MPEG 3 Contaminantes monoméricos presentes no polímero NIPAM: 0,066-0,076% p/p VP: 0,008-0,011% p/p NIPAM: <0,001% p/p VP: <0,001% p/p 4 Tamanho das nanopartículas na composição farmacêutica Não especificado 30-150 nm 4 Estabilidade Cerca de 12 horas >24 horas Aprisionamento da droga na micela polimérica depois de 24 horas 90% >95%

Além das vantagens de que não apenas o polímero de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos obtidos

pelo método da presente invenção mas também as vantagens que as composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água, compreendendo o polímero da presente invenção têm em relação aos polímeros e composições farmacêuticas da técnica anterior, discutidas em detalhes anteriormente, os presentes inventores descobriram ainda um método altamente seletivo para preparação de composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água, onde a referida droga ou composto pobremente solúvel em água, aprisionado no envoltório polimérico do polímero utilizado é produzido em uma forma nanoparticulada de tamanho consistente. Este método altamente seletivo constitui um outro aspecto inventivo da presente invenção.

Em primeiro lugar, deve ser observado que a partir da descrição contida nos exemplos 1-40 e que dado sob o título "A Composição Preferida" e "Formulação para Infusão" no documento US 6.365.191 de Burman et al., a composição farmacêutica de paclitaxel é aparentemente preparada primeiro por dissolução da quantidade necessária do polímero em uma quantidade necessária de um fluido diluente (geralmente uma solução de dextrose a 5% ou 10%), seguida da adição de um tensoativo aniônico para obter uma solução límpida, cuja pH é

Λ

opcionalmente ajustado com um agente tamponante. A solução límpida resultante do polímero e do tensoativo aniônico no fluido diluente é então adicionada uma solução alcoólica de paclitaxel para obter uma concentração variável da droga variando de 0,1 a mg/ml, que essencialmente é reivindicada como sendo a composição farmacêutica em forma nanoparticulada útil para administração.

Como mencionado acima, embora o documento US 6.365.191 não mencione o tamanho das nanopartículas assim obtidas, foi, no entanto, descoberto produzir ou resultar em tamanhos inconsistentes das nanopartículas nas mãos dos presentes inventores em suas tentativas de preparar uma composição farmacêutica de paclitaxel, pelo método descrito nos exemplos 1- 40 e que dado sob o título "A Composição Preferida" e "Formulação para Infusão" no documento US 6.365.191 de Burman et al.

contra estes fundamentos, os presentes inventores descobriram que a produção de nanopartículas em tamanhos consistentes foi altamente seletiva e altamente dependente:

i) da taxa à qual uma solução alcoólica de paclitaxel é adicionada a uma solução do polímero e outros excipientes no fluido

diluente;

ii) do volume da solução alcoólica de paclitaxel e do volume do fluido diluente, ao qual o primeiro é adicionado;

iii) do diâmetro interno ou do tamanho do orifício da agulha através da qual a solução alcoólica de paclitaxel é adicionada a

uma solução do polímero e excipientes farmaceuticamente aceitáveis no fluido diluente; e

iv) da posição do recipiente, que contém o fluido diluente e o polímero e excipientes farmaceuticamente aceitáveis no momento da adição da solução alcoólica de paclitaxel.

Em particular, os presentes inventores descobriram que somente através da:

a) adição de uma solução alcoólica de paclitaxel através de uma seringa a uma solução do polímero e outros excipientes no fluido diluente em um período de tempo específico; b) utilização de uma agulha com um diâmetro interno entre 0,305 mm e 0,356 mm, para adição de um volume menor da solução alcoólica de paclitaxel à solução do polímero e excipientes farmaceuticamente aceitáveis no fluido diluente; ou

c) utilização de uma agulha com um diâmetro interno entre 0,559 e 0,711 mm, para adição de um volume maior da solução

alcoólica de paclitaxel à solução do polímero e excipientes farmaceuticamente aceitáveis no fluido diluente;

d) injeção de uma solução alcoólica de paclitaxel na solução do polímero e outros excipientes no fluido diluente, onde a agulha

da seringa através da qual a solução alcoólica de paclitaxel é adicionada deve ficar imersa na solução do fluido diluente; e

e) opcionalmente, manutenção do recipiente contendo o referido fluido diluente em uma posição invertida durante a injeção de uma solução alcoólica de paclitaxel na solução do polímero e

outros excipientes no fluido diluente, a produção de nanopartículas de tamanhos de partícula consistentes, com variação de tamanho mínima ou desprezível e carga consistente da droga, no envoltório polimérico poderia ser obtida. Além disso, foi verificado que somente através do método seletivo poderia ser obtida uma estabilidade mais longa da composição farmacêutica.

Foi ainda descoberto que o método altamente seletivo, mencionado anteriormente não é limitado à produção de nanopartículas de paclitaxel apenas, mas também é igualmente eficaz na produção de nanopartículas de tamanhos de partícula consistentes de outras drogas ou compostos pobremente solúveis em água, especialmente docetaxel, etoposida, ácido betulínico, derivados de ácido betulínico anticâncer potentes como MJ- 1098 de fórmula (II), DRF-4012 de fórmula (III), DRF-4015 de fórmula (IV), mencionados anteriormente. Foi particularmente descoberto que se o tempo de adição de um volume menor, digamos entre 1 e 5 ml da solução da droga ou composto pobremente solúvel em água a uma solução (cerca de vezes o volume injetado) do polímero e outros excipientes no fluido diluente, ultrapassar um tempo de 4 segundos, ou se o diâmetro interno da agulha (através da qual a solução da droga ou composto pobremente solúvel em água é injetada) estiver fora da faixa de 0,305 mm a 0,356 mm, então tal adição resultará na produção de tamanhos de partícula inconsistentes das nanopartículas das drogas ou compostos pobremente solúveis em água assim como resultará em uma composição farmacêutica possuindo pobre estabilidade, o que quer dizer que a solução não permanece límpida por períodos de tempo mais longos mas fica opalescente em períodos de tempo mais curtos. Igualmente, foi particularmente descoberto que se o tempo de adição de um volume maior, digamos entre 5 e 15 ml da solução da droga ou composto pobremente solúvel em água a uma solução (cerca de 35 vezes o volume injetado) do polímero e outros excipientes no fluido diluente, ultrapassar um tempo de 10 segundos, ou se o diâmetro interno da agulha (através da solução da droga ou composto pobremente solúvel em água é injetado) estiver fora da faixa de 0,559 a 0,711 mm, então tal adição resultará na produção de tamanhos de partícula inconsistentes das nanopartículas das drogas ou compostos pobremente solúveis em água assim como resultará em uma composição farmacêutica de estabilidade pobre, o que quer dizer que a solução não permanece límpida por períodos de tempo mais longos mas fica opalescente em períodos de tempo mais curtos.

Isto pode ser exemplificado em relação a composições farmacêuticas de duas drogas ou compostos anticâncer pobremente solúveis em água, a saber, paclitaxel e um derivado de ácido betulínico, DRF-4012 de fórmula (III), onde o efeito do tempo de adição de uma solução das referidas drogas e os diâmetros internos das agulhas através das quais tais soluções são adicionadas à solução do polímero e excipientes farmaceuticamente aceitáveis no fluido diluente estão resumidos na Tabela V.

A composição farmacêutica da presente invenção é convenientemente apresentada como um kit de dois fracos: a) um compreendendo uma solução de uma droga ou composto pobremente solúvel em água em um solvente miscível em água, ou misturas dos mesmos a uma concentração adequada da referida droga; e

b) o outro compreendendo uma solução do polímero da presente invenção, de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos, junto com excipientes farmaceuticamente aceitáveis em um solvente aquoso, geralmente água de grau de injeção, ambos os frascos sendo estéreis e produzidos e embalados em condições assépticas. O conteúdo dos dois frascos é então adicionado ao fluido diluente antes da administração a humanos/animais. Opcionalmente, o kit pode compreender ainda um fluido diluente, e uma seringa e uma agulha com um diâmetro interno na faixa de 0,305 a 0,356 mm, se um volume pequeno, digamos 1 - 5 ml do conteúdo do frasco a) tiver que ser adicionado a cerca de 35 vezes seu volume do conteúdo do frasco b) ou uma seringa e uma agulha com um diâmetro interno na faixa de 0,559 a 0,711 mm, se um volume maior, digamos 10-15 ml do conteúdo do frasco a) tiver que ser adicionado a cerca de 35 vezes seu volume do conteúdo do frasco b).

Especialmente no caso de um kit compreendendo paclitaxel, para administração a pacientes para tratamento de câncer de mama, a apresentação na forma de um kit de dois frascos compreende:

a) um frasco contendo uma solução de 400 mg de paclitaxel em 20 ml de etanol;

b) o outro contendo uma solução contendo 200 mg do polímero da presente invenção, de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos, junto com excipientes farmaceuticamente aceitáveis em 20 ml de água, e

opcionalmente, o kit pode compreender ainda uma garrafa de 500 ml de solução de dextrose a 10%, e uma seringa e uma agulha com um diâmetro interno de 0,711 mm, para injeção da solução do frasco a) na garrafa de 500 ml de solução de dextrose a 10%, à qual fora adicionada a solução do frasco b) em um período de tempo não superior a 10 segundos, de preferência em um período de tempo de 6 a segundos para produzir uma composição farmacêutica adequada para administração em nanopartículas de tamanhos de partícula consistentes, com variação de tamanho mínima ou desprezível e carga consistente da droga, no interior do envoltório polimérico, e estabilidade mais longa.

Tabela V: Efeito do tempo de adição de uma solução de drogas ou compostos pobremente solúveis em água e do diâmetro internos das agulhas através das quais tais soluções são adicionadas a uma solução do polímero e outros excipientes em um fluido diluente

Série N0 Droga ou composto pobremente solúvel em água; o solvente no qual ele é dissolvido, e o volume de solução injetado Diâmetro interno (em mm) da agulha através da qual a solução da droga ou composto pobremente solúvel em água é adicionada à solução do polímero e excipientes em um fluindo diluente Tempo de adição (cm seg.) da solução de droga ou composto pobremente solúvel em água à solução do polímero e excipientes em um fluido diluente (cm ml) Observações/Resultados Tamanh o de partícul a médio (nm) Estabilid ade (h) Clarida de da solução 1 paclitaxel/Etanol (1 ml) 0,305 3 seg./» 35ml 80 >24 límpida 2 paclitaxel/Etanol (1 ml) 0,467 2 seg./« 35ml 90 20 Opalesc ência muito leve 3 paclitaxel/Etanol (1 ml) 0,711 2 seg./« 35ml 135 <10 Leve opalesc ência 4 paclitaxel/Etanol (1 ml) 1,270 2 seg./« 35ml 270 <4 Opalesc ente paclitaxel/Etanol (1 ml) 0,305 6 seg./a 35ml 240 <4 Leve opalesc » 29

ência 6 paclitaxel/Etanol (1 ml) 0,467 6 seg./« 35ml 280 <2 Altame nte opalesc ente 7 paclitaxel/Etanol (1 ml) 0,711 6 seg./» 35ml 285 <2 Altame nte opalesc ente 8 paclitaxel/Etanol (1 ml) 1,270 6 seg./» 35ml 2300 <0,5 leitosa 9 DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 0,305 3 seg./» 35ml 70 >24 límpida DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 0,465 2 seg./» 35ml 90 20 Opalesc ência muito leve 11 DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 0,711 2 seg./» 35ml 100 <10 Leve opalesc ência 12 DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 1,270 2 seg./» 35ml 130 <6 Opalesc ente 13 DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 0,305 6 seg./» 35ml 200 <6 Leve opalesc ência 14 DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 0,467 6 seg./» 35ml 200 <4 Altame nte opalesc ente DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 0,711 6 seg./» 35ml 240 <2 Altame nte opalesc ente 16 DRF-4012 de fórmula (III)/Etanol (Iml) 1,270 6 seg./» 35ml 8100 <0,5 leitosa 17 paclitaxel/Etanol (15ml) 0,711 10 seg./»500 ml 85 >24 límpida 18 paclitaxel/Etanol (15ml) 0,711 15 seg./»500 ml 150 <15 Leve opalesc ência 19 paclitaxel/Etanol (15ml) 0,330 18 seg./»500 ml 50 20 límpida

Em resumo, a presente invenção, como mencionado acima, é uma etapa em direção ao progresso de fornecer uma solução para a maioria, senão todas as limitações dos métodos da técnica anterior no campo da tecnologia cie nanopartículas e fornece: i) um polímero compreendendo três unidades monoméricas selecionadas de NIPAM, VP, e MPEG, de alta pureza e » 30

substancialmente livre de contaminantes monoméricos, com o nível de NIPAM e VP tóxicos no polímero <0,001%; que, ademais, foi estabelecido como sendo biocompatível, não- biodegradável, seguro e atóxico para uso humano/animal; ii) um método altamente seletivo para preparação do polímero compreendendo três unidades monoméricas selecionadas de NIPAM, VP, e MPEG, de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos, com o nível de NIPAM e VP tóxicos no polímero <0,001% compreendendo submeter uma solução aquosa do polímero assim preparado à diafiltração;

iii) uma composição farmacêutica de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada, compreendendo o polímero de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos junto com excipientes

farmaceuticamente aceitáveis, que é segura e atóxica e por conseguinte altamente adequada para uso ou administração a humano s/animai s;

iv) um método altamente seletivo para produção de uma composição farmacêutica de drogas ou compostos pobremente

solúveis em água em forma nanoparticulada, compreendendo o polímero de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos junto com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, com tamanhos de partícula consistentes das nanopartículas e carga de droga consistente; e v) uma composição farmacêutica de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada, compreendendo o polímero de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos junto com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, com tamanhos de partícula consistentes das nanopartículas com carga de droga mais alta e uma estabilidade mais longa. Descrição Detalhada da Invenção A. Preparação do polímero da presente invenção O polímero da presente invenção compreende três unidades monoméricas selecionadas de NIPAM, VP e MPEG, onde as * 31

cadeias do polímero são reticuladas com um agente de reticulação, que não contém grupos sulfidril nem ligações dissulfeto.

O agente de reticulação desempenha um papel importante durante a polimerização fornecendo reticulações nas cadeias do polímero linear e é em geral um derivado vinílico bifuncional, sempre que usado. Ele pode ser mais que bifuncional, i.e., ele pode ter mais de dois sítios reativos. Um derivado vinílico bifuncional que pode ser vantajosamente empregado é a N, Ν'-metileno bis acrilamida (MBA), que é preferida.

O polímero da presente invenção pode ser preparado por métodos genéricos normalmente adotados para reações de polimerização. Em uma modalidade particular, o polímero da presente invenção pode ser preparado submetendo-se os monômeros N- isopropilacrilamida (NIPAM), 1-vinil-2-pirrolidona (VP) e polietileno glicol (peso molecular 6000) éster de anidrido maléico (MPEG) à polimerização de radicais livres na presença de um ativador, um iniciador de polimerização, e um agente de reticulação em meio aquoso. Uma combinação de monômeros, N-isopropil acrilamida (NIPAM) e vinilpirrolidona (VP) pode ser empregada na proporção em peso variando entre 55:22 e 65:35, embora a composição comonomérica de (NIPAM + VP): MPEG que pode ser empregada esteja na faixa de 80:20 a 95:5. Mais particularmente e de preferência, uma combinação dos monômeros N-isopropil acrilamida (NIPAM) e vinilpirrolidona (VP) é empregada na proporção em peso variando entre 58:32 e 62: 28 e a composição comonomérica de (NIPAM + VP): MPEG é empregada na faixa de 90: 10 ou 95: 5, que mostra conferir a biocompatibilidade, a não-biodegradabilidade e perfil biologicamente seguro desejados aos polímeros, pelo fato de esta proporção particular resultar consistentemente na formação de uma unidade copolimérica aleatoriamente hiper-ramificada de NIPAM e VP, que são estabilizados por um revestimento de envoltório externo da ligação hidrogênio pelo aduto diéster # 32

(principal) e pelo aduto monoéster (secundário) de anidrido maléico - polietileno glicol (MPEG).

Os iniciadores de polimerização desempenham um papel importante na iniciação da formação de radicais livres. Os iniciadores que podem ser empregados podem ser compostos do tipo peróxido, tais como peróxido de diacil, peróxido de benzoil, peróxido de diacetil, peróxidos de dialquil, peróxido de ter-butil e peróxido de ter-amil ou iniciadores de polimerização à base de nitrila tais como 2, 2'-azobis isobutironitrila (AIBN) ou iniciadores de polimerização à base de sal inorgânico tais como perdissulfato de amônio ou per sulfato de amônio (APS), seja isolado ou em combinação.

Entre os iniciadores de polimerização mencionados acima, persulfato de amônio (APS) é o preferido. Embora os iniciadores de polimerização iniciem a polimerização, no entanto, foi verificado que a reação de polimerização é acelerada pela presença de agentes ativadores (geralmente conhecidos como ativadores) que catalisam a formação de radicais livres dos iniciadores de polimerização. Tais ativadores podem ser selecionados de tetrametiletileno diamina (TMED) e sulfato de amônio ferroso (FAS)5 cuja combinação de TMED e FAS é preferida. Qualquer combinação do iniciador de polimerização e do ativador pode ser empregada para a reação de polimerização. Também podem ser usados dois ou mais iniciadores. Da mesma forma, também podem ser empregados dois ou mais ativadores.

Como mencionado acima, o ageQte de reticulação desempenha um papel importante durante a polimerização fornecendo reticulações nas cadeias do polímero linear e em geral é um derivado vinílico bifuncional, sempre que usado. Ele pode ser mais que bifuncional, i.e., ele pode ter mais de dois sítios reativos. Um derivado vinílico bifuncional que pode ser usado é aN, Ν'-metileno bis acrilamida (MBA), que é preferida. A polimerização é realizada na presença de um gás inerte, que pode ser nitrogênio ou argônio. I 33

Em geral, a reação de polimerização é realizada primeiro dissolvendo-se uma quantidade apropriada dos respectivos monômeros, a saber, N-isopropilacrilamida (NIPAM), l-vinil-2- pirrolidona (VP) e polietileno glicol (peso molecular 6000) éster de anidrido maléico (MPEG) em um solvente aquoso, que em

Λ

geral é água. A solução aquosa dos respectivos monômeros assim obtidos adiciona-se sucessivamente uma solução aquosa de um agente de reticulação e um ativador. A solução é desaerada borbulhando-se um gás inerte por cerca de 30 - 60 minutos. À solução desaerada adiciona-se uma solução aquosa de iniciadores de polimerização e a solução é submetida à polimerização a uma temperatura entre 25° e 45°C, de preferência a uma temperatura entre 25° e 350C com borbulhamento contínuo do gás inerte por um período de tempo até que a polimerização esteja completa. O agente de reticulação pode ser empregado em quantida Ies na faixa entre 1,3 e 1,5% p/p do teor de monômeros lotai a a mais preferivelmente na faixa entre 1,35 e 1,4% p/p do teor de monômeros totais.

Os ativadores podem ser empregados em quantidades .a faixa entre 15 e 18 % p/p do teor de monômeros 1 tai: e mais preferivelmente na faixa entre 15 e 16 % p/p do teor de monômeros totais.

O iniciador de polimerização pode ser empregai > em quantidades na faixa entre 20 e 30% p/p do teor de morômeros totais e mais preferivelmente na faixa entre 23 e 25 % ρ do teor de monômeros totais.

O progresso da reação de polimerização é monitoraeo ρ 4PLC e geralmente fica completo em cerca de 3 - 6 horas. Depois de completada a reaça o de polimerização a e ção é submetida à filtração através de filtros de cápsuh d 1 com membrana de poliéter sulfona de 0,2 μηι pré-ester 1 ada e descartável, tamanho de poro de 0,8 a 0,2 μηι; ti DPS- 5101AA-201 (Fabricante: M/s Advanced Microdev es t. Ltd,

r

índia). O conteúdo filtrado do vaso reacional é sub ido à diafiltração usando o dispositivo de diafiltração Profaa Ml 2 (Millipore) para remover os contaminantes monoméricos e outras impurezas de baixo peso molecular.

A diafiltração geralmente é completada em menos de uma hora e normalmente resulta não apenas em uma solução substancialmente livre de contaminantes monoméricos mas também em uma forma concentrada, geralmente um quarto a um sexto (1/4 a 1/6) do volume inicial da solução submetida à diafiltração. Se necessário, a solução concentrada, assim obtida, que é substancialmente livre de contaminantes monoméricos, pode ser submetida a um outro ciclo de diafiltração. A solução de polímero concentrada da presente invenção de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos pode ser submetida a uma etapa de liofilização para obter o polímero em forma liofilizada sólida para utilização em composições farmacêuticas ou a solução concentrada como tal pode ser diretamente utilizada para formulação das referidas composições farmacêuticas.

Em uma modalidade típica, a reação de polimerização é realizada por dissolução de uma quantidade apropriada dos respectivos monômeros, a saber, N-isopropilacrilamida (NIPAM), 1-vinil- 2- pirrolidona (VP) e polietileno glicol (peso molecular 6000) éster

Λ

de anidrido maléico (MPEG) em água. A solução aqm. a dos respectivos monômeros assim obtida, é adicionado um volume apropriado de solução aquosa (cerca de 5% p/v) de um agente de reticulação, N, N' -metileno bis acrilamida (cerca de 1,37 % p/p do teor de monômeros totais) e uma combinação de ativadores, compreendendo um volume apropriado de tetramet: l< tileno diamina (TMED, cerca de 15,4% p/p do teor de mo: κ meros totais) e uma solução aquosa (0,5% p/v) de sulfato de a nônio

r

ferroso (cerca de 0,1 % p/p do teor de monômeros totais). E preferível adicionar um dos ativadores primeiro e o outro junto com o iniciador de polimerização, que c adicionado posteriormente. A solução é desaerada borbulhando-se ni':rc ^ênio

Λ

por cerca de 30 minutos. A sojução desaerada é adicioi a o um volume apropriado de uma solução aquosa (cerca de 80 °/ j v) de iniciadores de polimerização, persulfato de amônio (cerca de 24 % p/p do teor de monômeros totais) e a solução é submetida à polimerização a uma temperatura de preferência entre 25° e 3 50C com borbulhamento contínuo de nitrogênio por um período de tempo até que a polimerização esteja completa. Geralmente, a reação de polimerização fica completa em 3-5 horas. Depois de completada a reação de polimerização, a solução é submetida à filtração através de um filtro de cápsula de 1" com membrana de poliéter sulfona de 0,2 μιη descartável pré- esterilizada (0,8 + 0,2 μηι de tamanho de poro). O conteúdo filtrado do vaso reacional é submetido à diafiltração para remover os contaminantes monoméricos e outras impurezas de baixo peso molecular.

Em uma modalidade típica, uma solução do polímero em água a uma concentração de digamos 1 g em 50 ml pode ser submetida à diafiltração, com o que, depois da diafiltração é obtida uma solução concentrada do polímero em cerca de um quarto a um sexto (1/4 a 1/6) do volume inicial, digamos 1 g do polímero em cerca de 12-13 ml de água, que contém menos de 0,001% p/p de NIPAMe de VP.

A detecção e quantificação dos monômeros residuais, especialmente VP e NIPAM residuais no polímero foram realizadas por HPLC. O sistema de HPLC que pode ser usado para detecção dos monômeros é a série Agilent 1100 ou equivalentes, usando colunas de fase reversa RP- 18 (C- 18) [Lichrospher RP-18e, 5 μ, 250 mm χ 4 mm]. A fase móvel usada é uma mistura de água e acetonitrila em uma proporção de 80: 20, a uma taxa de fluxo de 1 ml/min, com um volume de injeção de amostra de 50 μΐ.

O tempo de operação é de 10 minutos e a temperatura da coluna é de 30°C e o comprimento de onda do detector é de 226 nm. Nas condições acima, o NIPAM apresentou um tempo de retenção de cerca de 3 minutos, ao passo que o VP apresentou um tempo de retenção de cerca de 5 minutos. A solução concentrada do polímero assim obtido é de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos, que pode ser submetida a uma etapa de liofilização para obter o polímero em forma liofilizada sólida para utilização em composições farmacêuticas ou a solução concentrada como tal pode ser utilizada diretamente para formulação da referida composição farmacêutica. No entanto é preferível utilizar a solução concentrada do polímero como tal para formulação como composições farmacêuticas. B. Caracterização do polímero da presente invenção O polímero da presente invenção obtido pela método mencionado anteriormente foi submetido a uma extensa análise espectroscópica tal como 1H-NMR, 13C-NMR, infravermelho por transformada de Fourier (FT-IR) e análise térmica tal como calorimetria de varredura diferencial (DSC) e análise termogravimétrica (TGA) etc. para elucidar a estrutura do polímero assim obtido.

O espectro de IH NMR do polímero da presente invenção em CDC13 mostra picos no δ (ppm) de 1,14 (br, -CH (CH3)2); 1,45 (br, -CH2-CH-N(anel VP); 1,63 (br,-CH2-CHC0=0)NH); 1,99 (br, -CH C(=0))NH-), CH2 (anel VP), 2,36 (CH2, anel VP), 3,0 (-0-CH2-CH2-), 3,23(CH2-N-); 3,62-3,66(Br, CH2, MPEG); 3,72(NH-CH(CH3)2); 3,97(Br, CH). O espectro de IH-NMR do polímero da presente invenção está resumido na Fig. 1. O espectro de 13C NMR do polímero da presente invenção mostra picos no δ (ppm) de 174 (C=O); 76,6-77,6 (multipleto para CDC13 e CH para o esqueleto do polímero); 70,6 (CH2's MPEG); 41,6 (CH para unidade isopropil); 31,8 (CH2's, esqueleto do polímero); 22,6 (CH3's, isopropil). O espectro de 13C-NMR do polímero da presente invenção está resumido na Fig. 2.

O espectro do infravermelho por transformada de Fourier (FT-IR) do polímero da presente invenção mostra picos nos seguintes valores de freqüência (cm-1) de 3500 (s, OH); 3296 (s, NH, sec- amida); 2972-2933 (s, CH, CH2, CH3); 1651 (br, forte, vários picos C=O do éster e C=O da amida I); 1546 (s, NH mistura da » 37

amida II e possivelmente C=O do ácido livre, secundário); 1387, 1367 (dubleto de grupos isopropil, CH3, deformação), 1172-1129 (m, O-C-O). O espectro do infravermelho por transformada de Fourier (FT-IR) do polímero da presente invenção está resumido naFig. 3.

Estes estudos de caracterização confirmam que o polímero da presente invenção tem a estrutura que está representada abaixo como fórmula (I):

Além disso, para caracterizar as propriedades físico-químicas do polímero detalhadamente, foram avaliadas várias propriedades do polímero tais como propriedades térmicas, concentração crítica de micelas (CMC), solubilidade e pH, estabilidade ao armazenamento.

A análise termogravimétrica (TGA) mostrou que ocorreu uma certa perda de peso de 51 - 260°C, o que indica perda de solventes e algumas reações macromoleculares que podem estar ocorrendo especialmente nas unidades MPEG do polímero antes de começar a ocorrer degradação em torno de 310°C. Isto indica que o polímero tem alta estabilidade térmica, que em grande parte deve ser fornecida pelas unidades MPEG. O termograma de TGA do polímero da presente invenção está resumido na Fig. 4. Além disso, o perfil da calorimetria de varredura diferencial (DSC) do polímero, representado na Fig. 5, não mostrou qualquer temperatura de transição de vidro (Tg), mas foram observadas apenas uma temperatura de fusão (Tm) de 58°C e uma temperatura de ponto de recristalização (Tc) de 38,4°C. A ausência de qualquer Tg nítida pode ser indicativa de uma estrutura hiper-ramificada bastante rígida, que também pode ser parcialmente responsável pela extensa de ligação de hidrogênio com MPEG. » 38

HQ-JH2C-

O

NH

(I)

Estrutura do polímero da presente invenção A temperatura de solução crítica mais baixa (LCST) do polímero tem valores na região de 50 - 60°C. Mais uma vez este é um parâmetro importante para polímeros anfifílicos em fase aquosa que se manifesta em transições de fase termossensíveis a uma certa temperatura chamada LCST. Abaixo da LCST o polímero apresentaria uma configuração de cadeia ampliada solúvel, i.e., um comportamento hidrofílico. Acima da LCST, o polímero sofre uma transição de fase para formar um agregado hidrofóbico insolúvel. Esta propriedade é útil para determinar a capacidade de formar micelas no solvente apropriado e agir em sistemas de distribuição para as drogas em aplicações farmacêuticas. A concentração crítica de micelas (CMC) é um outro parâmetro importante que define a capacidade de encapsulação de um nanocarreador e determina a estabilidade. Esta é a concentração mais baixa para que o polímero anfifílico ou unímeros formem uma estrutura micelar capaz de encapsular uma droga em seu núcleo hidrofóbico. O valor da CMC para o presente polímero é de cerca de 0,2 mg/ml. Além disso, bem se sabe que o polímero compreendendo monômeros termossensíveis e sensíveis ao pH tais como N-isopropilacrilamida (NIPAM) e 1-vinil pirrolidin-2- ona (VP) é biocompatível com proteínas e células sangüíneas. Além disso, aplicações biomédicas de poli(NIPAM) são bastante difundidas devido à transição de temperatura reversível, i.e.,

25 LCST, excelente ligação ao hidrogênio, capacidade de formar micelas e hidrogel. Da mesma forma, polímeros de polivinilpirrolidona (também conhecida como povidona) também bastante solúveis em água e formam extensa ligação de hidrogênio com água. A aplicação pretendida deste polímero era criar um novo sistema de incorporação incorporando as resistências dos vários monômeros predefinidos levando à formação de nanopartículas poliméricas termossensíveis, sensíveis ao pH e estáveis contendo grupo hidrofílicos e hidrofóbicos para solubilizar as drogas que são pobremente solúveis em água.

De forma muito surpreendente, foi descoberto que a formação de uma unidade copolimérica aleatoriamente hiper-ramificada consistindo em NIPAM e VP estabilizados por um revestimento de envoltório externo formado de ligação hidrogênio por aduto de diéster (principal) e aduto de monoéster (secundário) de anidrido maléico - polietileno glicol (MPEG) tendo a composição comonomérica de (NIPAM + VP): MPEG na faixa de 80:20 a 95:5 assim como unidades NIPAM: VP na faixa de 55:22 a 65:35 confere a biocompatibilidade, a não-biodegradabilidade e o perfil biologicamente seguro desejados aos polímeros. Especificamente, foi descoberto que melhores resultados (LCST mais alta, maior rendimento, percentagem de liberação de nanopartículas de paclitaxel) são obtidos quando a composição de (NIPAM + VP): MPEG está na faixa de 90: 10 ou 95: 5 e unidades NIPAM: VP são usadas na faixa de 58:32 a 62:28. A proporção do monômero usado também é consistente no polímero final e é confirmada por vários estudos tais como estudos dos espectros de 1H-NMR, 13C-NMR e infravermelho por transformada de Fourier (FT-IR).

C. Biocompatibilidade e não-biodegradabilidade do polímero da presente invenção

Quando a farmacocinética, a biodistribuição e a eliminação do polímero [14C]-marcado foi avaliada usando camundongos albinos suíços machos, o perfil de concentração de sangue « 40

radioativo revelou uma curva bifásica (Fig. 6), com meia-vida de eliminação curta Τ1/2(β) de 0,448 ± 0,157 horas (26,88 min) e depuração rápida de 54,7 ml/h. Os resultados deste estudo estão resumidos nas Tabelas VI e VII. Tabela VI: Parâmetros farmacocinéticos do polímero da presente invenção_

Parâmetro Estimativa ± SE τι/2 (Kio) 0,152 ± 0,018 h T1/2 (alfa) 0,065 ±0,014 h T1/2 (beta) 0,448 ± 0,157 h Cmax 82,96±5,l^g/ml AUC 18,29+ 1,62 h χ μg/ml CL 54,67 ± 4,86 ml/h MTR 0,465 ±0,13 h Vss 25,43 + 5,2 ml

Foi verificado que a via de eliminação dominante é a urina (urina, 66,91% vs. fezes, 17,39% em 48 horas) e os dados de recuperação coletados até 48 horas representam 84,87% de radioatividade injetados. A distribuição tecidual foi desprezível.

Foi descoberto que os rins, o fígado, a pele e o intestino são os órgãos alvo. No entanto, o nível do polímero nos tecidos foi rapidamente depurado via urina e fezes.

Tabela VII: Recuperação do polímero radiomarcado da presente invenção_

Tempo Percentagem (%) da dose 0-10 minutos 0-1 hora 0-24 horas 0-48 horas Urina 27,14 61,64 64,56 66,91 Fezes 0,10 0,65 12,29 17,39 Tecidos 15,50 3,22 0,78 0,57 Enxágüe 5,04 2,27 0,84 0,00 Total 47,16 67,78 78,47 84,87

Portanto, concluindo, foi verificado que o polímero é rapidamente eliminado do corpo sem ser depositado e degradado em órgãos vitais sugerindo a segurança e a utilidade do polímero

para uso humano.

D. Estudos de toxicidade do polímero da presente invenção Estudos de toxicidade do polímero de fórmula (I) foram realizados para avaliar:

(i) toxicidade localizada (subcutânea e intravenosa);

(ii) toxicidade da dose em órgãos alvo até 800 mg/kg de peso corporal do animal; e

(iii) toxicidade da dose cíclica em seis meses

D(i) Toxicidade localizada (subcutânea e intravenosa) A toxicidade do polímero foi determinada depois de uma única administração subcutânea de 100 μΐ de 75 mg/ml do polímero na orelha de um coelho, que causou inflamação moderada no local da injeção, quando testado 48 horas depois da injeção, sugerindo que o presente polímero não causa qualquer toxicidade local no local de administração subsequente à administração subcutânea. A toxicidade do presente polímero foi determinada para uma administração intravenosa contínua por cinco dias de 75 mg/ml do presente polímero a uma dose de 125 mg/kg na veia da orelha de um coelho e foram obtidos resultados semelhantes, confirmando ainda que o presente polímero não causa qualquer toxicidade local no local de administração. Fotografias representativas do local do lobo da orelha de coelho colorido com S&E depois de 48 horas de injeção subcutânea com solução de dextrose a 10% estão mostradas na Fig. 7 e fotografias do local do lobo da orelha de coelho colorido com S&E depois de 48 horas de injeção subcutânea com uma solução aquosa do polímero estão mostradas na Fig. 8. Fotografias representativas do local da veia marginal da orelha de coelho colorido com S&E depois de 24 horas de injeção subcutânea com solução de dextrose a 10% estão mostradas na Fig. 9 e fotografias do local da veia marginal da orelha de coelho colorido com S&E depois de 24 horas de injeção subcutânea com uma solução aquosa do polímero estão mostradas na Fig. 10. D(ii) Toxicidade da dose em órgãos alvo (até 800 mg/kg de peso corporal do animal)

Além disso, a toxicidade foi avaliada em possíveis órgãos alvo com referência especial à microvasculatura e determinada pela administração única de bolo intravenoso a ratos Wistar. O » 42

polímero foi administrado em duas dosagens diferentes, a saber, 400 mg/kg e 800 mg/kg. Nas condições do estudo, a administração única de bolo intravenoso do presente polímero em qualquer dose não produz qualquer mortalidade nem qualquer sinal tóxico ou sintoma observável nos ratos. O peso corporal individual e médio dos ratos mostrou um aumento constante tanto no grupo tratado com polímero quanto no grupo de controle. Não foi observada qualquer diferença significativa no peso corporal dos animais tratados nas duas doses em relação àqueles do grupo de controle.

Nos ratos tratados com o polímero, foram observados parâmetros hematológicos dentro dos limites normais durante todo o estudo. Os parâmetros bioquímicos também ficaram dentro dos limites normais para os animais tratados com ambas as doses. O teste do fotoactômetro mostrou que não houve diferenças significativas na atividade locomotora entre o grupo de controle e o grupo tratado nos dias 7 e 21, respectivamente, sugerindo que o polímero não é neurotóxico.

Os espécimes do grupo tratado e do grupo de controle apresentaram aspectos histológicos semelhantes. O estudo histológico foi efetuado em órgãos vitais tais como fígado, coração, pulmões, rins, baço, estômago, cólon, músculo da coxa e olhos. Todos os órgãos estudados apresentaram estrutura normal no exame com microscópio ótico. A microvasculatura em cada órgão foi cuidadosamente examinada e não foram observados aspectos patológicos em nenhum dos órgãos. Além disso, não houve alterações na microvasculatura dos animais tratados com polímero.

Das observações acima, ficou bastante evidente que o polímero da presente invenção a uma dose de 400 mg/kg ou 800 mg/kg de peso corporal administrados por cinco consecutivos não causou qualquer toxicidade geral nem qualquer toxicidade hematológica significativa indicando o perfil biologicamente seguro e atóxico do presente polímero. D(iii) Toxicidade de dose cíclica em seis meses » 43

Além disso, a toxicidade de dose cíclica em seis meses foi estudada em ratos por injeção intravenosa do polímero usado em formulação de nanopartícuias. Ratos Wistar machos/fêmeas foram usados para o estudo e a aplicação foi feita por via intravenosa na veia terminal lateral de forma cíclica uma vez a cada três semanas por um período de 180 dias (aproximadamente 26 semanas). Os animais do grupo tratado e do grupo de controle continuaram de um modo geral ativos e saudáveis durante o período de estudo. A concentração de polímero equivalente a 10 mg/kg de droga mostrou-se segura nos animais em estudo. As alterações mínimas observadas nos parâmetros hematológicos estavam dentro da faixa normal para ratos Wistar e não mostraram estar relacionadas ao tratamento. Os estudos acima sugerem que o polímero sintetizado é atóxico e biologicamente seguro para uso na produção de composições farmacêuticas.

E. Composições farmacêuticas compreendendo o polímero da presente invenção

Como discutido acima, o polímero da presente invenção de fórmula (I), de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos, em particular tendo NIPAM e VP monoméricos residuais <0,001% podem ser vantajosamente utilizados para a preparação de composições farmacêuticas de drogas ou compostos pobremente solúveis em água em forma nanoparticulada, que são seguras e atóxicas para administração ou uso em humano s/animais.

Em particular, o polímero da presente invenção pode ser usado para preparar uma composição farmacêutica em formas nanoparticuladas, junto com excipientes farmaceuticamente aceitáveis aprisionando uma gama de drogas ou compostos pobremente solúveis em água completamente ou quase completamente em seu envoltório polimérico. Além disso, como discutido acima, as drogas ou compostos pobremente solúveis em água que podem ser utilizados nas composições farmacêuticas da presente invenção são aquelas que * 44

geralmente têm solubilidade em água inferior a 10 mg/ml. Exemplos destas drogas ou compostos pobremente solúveis em água incluem, porém sem limitação, agentes anticâncer, agentes antiinflamatórios, agentes antifúngicos, antieméticos, agentes anti-hipertensivos, hormônios sexuais, esteróides, antibióticos, imunomoduladores, anestésicos etc. Exemplos típicos de agentes anticâncer que podem ser aprisionados no envoltório polimérico são paclitaxel, docetaxel, e outros derivados de taxano relacionados; irinotecano, topotecano, e outros derivados de camptotecina relacionados; doxorubicina, daunomicina, e derivados de antraciclina relacionados; cisplatina; oxaliplatina; 5- fluoruracil; mitomicina; metotrexato; etoposida; ácido betulínico e seus derivados; e wedelolactona e seus derivados. Exemplos típicos de agentes antiinflamatórios que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem indometacina, ibuprofeno, cetoprofeno, flubiprofeno, piroxicam, tenoxicam, e naproxeno. Exemplos típicos de agentes antifúngicos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem cetoconazol, e anfotericina B. Exemplos típicos de hormônios sexuais que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem testosterona, estrogênio, progesterona, e estradiol. Exemplos típicos de esteróides que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem dexametasona, prednisolona, e triamcinolona. Exemplos típicos de os agentes anti-hipertensivos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem captopril, ramipril, terazosina, minoxidil, e parazosina. Exemplos típicos de antieméticos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem ondansetrona e granisetrona. Exemplos típicos de antibióticos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem metronidazol, e ácido fusídico. Exemplos típicos de imunomoduladores que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem ciclosporina; e ácido bifenil dimetil dicarboxílico. Exemplos típicos de anestésicos que podem ser aprisionados no envoltório polimérico incluem propopol, alfaxalona, e hexobarbital. Uma composição farmacêutica de drogas ou compostos pobremente solúveis em água tipicamente compreende uma apresentação na forma de um kit de dois fracos, compreendendo de um lado, um frasco contendo uma solução de uma droga pobremente solúvel em água em um solvente miscível em água, ou misturas do mesmo, a uma concentração adequada da referida droga ou composto; e compreendendo de outro lado, um frasco contendo uma solução do polímero da presente invenção, de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes monoméricos e excipientes farmaceuticamente aceitáveis em um solvente aquoso, geralmente água de grau de injeção, ambos os frascos do kit sendo estéreis e produzidos e embalados em condições assépticas. O conteúdo dos dois frascos é então adicionado sucessivamente a um fluido diluente para administração a humanos/animais. Deve ser observado, como discutido anteriormente assim como será discutido posteriormente, que a droga ou composto pobremente solúvel em água fica aprisionado no envoltório polimérico do polímero utilizado e é produzido em uma forma nanoparticulada de tamanho consistente. A proporção da solução de uma droga pobremente solúvel em água em um solvente miscível em água, ou misturas do mesmo à solução de uma droga pobremente solúvel em água em um solvente miscível em água, ou misturas do mesmo, contida em ambos geralmente está entre 1:1 e 1:10 por volume, de preferência em uma proporção de 1: 1.

Opcionalmente, a apresentação na forma de um kit de dois frascos pode ainda compreender um fluido diluente, e uma seringa e uma agulha de diâmetro interno na faixa entre 0,305 e 0,356 ou 0,559 e 0,711 mm, que depende do volume da solução de droga e do volume do fluido diluente contendo o polímero e excipientes a serem misturados para administração a humanos/animais com necessidade do mesmo. Solventes miscíveis em água adequados que podem ser utilizados para dissolver a droga ou composto pobremente solúvel em água incluem um álcool alifático, especialmente etanol; dialquil 46

amidas, especialmente dimetil formamida e dimetil acetamida; dialquil sufóxidos, especialmente dimetil sulfóxido e dietil sulfóxido; polietileno glicóis de vários pesos moleculares; polipropileno glicóis de vários pesos moleculares; tensoativos, especialmente polissorbato 80, polissorbato 20, óleo vegetal polioxietilado, e óleo de rícino polioxietilado; glicerina etc. Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis que podem ser vantajosamente usados incluem desoxicolato de sódio; vários sais biliares; polissorbatos de vários graus, especialmente polissorbato 80, polissorbato 20, óleo vegetal polioxietilado, e óleo de rícino polioxietilado; polissacarídeos como dextrose, sacarose, lactose, manitol etc.; sorbitan ésteres ou "spans" de vários graus; myrj de vários graus; poloxômeros de vários graus etc., e um agente tamponante para ajuste do pH. Qualquer agente tamponante conhecido na literatura pode ser empregado para ajuste do pH da solução, e em uma modalidade preferida é vantajoso utilizar citrato de sódio como o agente tamponante. Dos excipientes farmaceuticamente aceitáveis, desoxicolato de sódio é preferido uma vez que ele tem um efeito na estabilização da composição farmacêutica, ao passo que o agente tamponante é usado para ajustar o pH do fluido de perfusão na faixa entre 6,0 e 8,5, que também mostra ter um efeito na estabilização da composição farmacêutica.

A composição farmacêutica pode ter uma carga ou dose adequada da droga ou composto pobremente solúvel em água e a escolha da carga ou dose ótima da referida droga ou composto depende grandemente da natureza da droga ou composto, de sua solubilidade assim como do distúrbio terapêutico para o qual ela é administrada. No caso dos excipientes farmaceuticamente aceitáveis, a proporção ou quantidade dos mesmos que pode ser usada na composição farmacêutica por sua vez depende igualmente na natureza e da carga da droga ou composto pobremente solúvel em água contido na composição. A composição farmacêutica em nanoparticulado de drogas ou compostos pobremente solúveis em água da presente invenção pode ser preparada da seguinte maneira:

i) Preparação do concentrado de droga, compreendendo dissolver a droga ou composto pobremente solúvel em água em um solvente miscível em água adequado, ou misturas do mesmo; ii) Preparação de um concentrado aquoso do polímero e excipientes farmaceuticamente aceitáveis, compreendendo as etapas de:

a) primeiro, adição da quantidade requerida do polímero de fórmula (I), de alta pureza e subseqüentemente livre de

contaminantes monoméricos, tendo especialmente um nível de NIPAM e VP tóxicos de < 0,001 % a uma quantidade apropriada de água para injeção para obter uma solução;

b) adição dos excipientes farmaceuticamente aceitáveis e de um agente tamponante à solução do polímero em água;

iii) Misturação da solução da etapa ii b) com um líquido de diluição para obter uma solução límpida;

iv) Utilização de uma agulha com um diâmetro interno entre 0,305 e 0,356, para adição de um volume menor da solução da etapa i) à solução da etapa iii); ou v) Utilização de uma agulha com um diâmetro interno entre 0,559 e 0,711 mm, para adição de um volume maior da solução da etapa i) à solução da etapa iii);

vi) Injeção da solução da etapa i) na solução da etapa iii), onde a agulha da seringa através da qual a solução da etapa 1) é

adicionada deve ficar imersa na solução da etapa iii); e

vii) Opcionalmente, manter o recipiente contendo a solução da etapa iii) em uma posição invertida durante a injeção da solução da etapa i), para aprisionar complementa a droga ou composto pobremente solúvel em água completamente ou quase

completamente no envoltório polimérico e produzir nanopartículas da droga ou composto com um tamanho de partícula de 30 a 150 rim. Tal fluido de perfusão permanece estável por mais de 24 horas com mais de 95% da droga permanecendo carregados nas mi celas poliméricas. Deve ser observado que a escolha do fluido diluente, depende grandemente da natureza da droga ou composto pobremente solúvel em água utilizado assim como do distúrbio para o qual a composição farmacêutica é administrada. Fluidos diluentes adequados podem ser selecionados de, porém sem limitação, água, solução salina, soluções de dextrose a 5% e 10%, solução de dextrose e cloreto de sódio, solução de lactato de sódio, solução de Ringer lactada, solução de manitol, solução de manitol com dextrose ou cloreto de sódio, solução de Ringer, solução de cloreto de sódio, água estéril para injeção e soluções de vários eletrólitos compreendendo combinações variáveis de eletrólitos, dextrose, frutose e açúcar invertido. De preferência, o fluido diluente é um fluido compreendendo dextrose e água e mais preferivelmente soluções de dextrose a 5% e 10%. O método preferido para preparação da composição farmacêutica nanoparticulada da presente invenção e sua administração a pacientes com necessidade da mesma está graficamente representado na Fig. 11.

A invenção é ainda descrita detalhadamente com relação aos exemplos não limitativos a seguir, que, no entanto, não devem ser interpretados como limitativos do escopo da invenção.

Deve ser observado que nos Exemplos apre:-catados abaixo, o equipamento de diafiltração utilizado para purificação do polímero foi um dispositivo de diaílltraçào Proflux Ml 2 (Fabricante: Millipore) e que o equipamento dc diálise usado para purificação do polímero foi de membrana de celulose - D- 9402 (Fabricante: Sigma) Seção Experimental Exemplo de referência 1

Preparação do polímero usando o método de diálise A reação de polimerização foi realizada em um vaso de vidro de 2 1. 24 g de N-Isopropil acrilamida, 12 ml de l-vinil-2-pirrolidona distilada e 4 g de polietileno glicol (peso molecular 6000) éster de anidrido maléico (MPEG) foram adicionai s cerca de 2 1 de água. A esta mistura foram adicionados I \2 ml de solução aquosa de N, Ν'-Metilenobisacrilamida (MB/ ϊ [49 mg/ml] e 8 ml de tetrametiletilenodiamina (d = 0,77gm/ml). A solução foi desaerada borbulhando-se nitrogênio gasoso por 30 minutos. Em seguida 8 ml de sulfato de amônio ferroso aquoso (0,5% p/v) e 12 ml de persulfato de amônio aquoso (80% p/v) foram adicionados e a reação continuou por 3 horas com borbulhamento contínuo de nitrogênio. A polimerização foi realizada a 34°C em um banho de água com agitação a 80 rpm.

A solução foi introduzida em sacos de diálise e foi passada em água (meio de diálise). A diálise foi realizada por 24 horas trocando a água uma vez. Depois de 24 horas, a solução foi retirada dos sacos de diálise e liofilizada em balões de fundo redondo.

A detecção e a quantificação dos monômeros residuais, especialmente VP e NIPAM residuais no polímero foram efetuadas por um sistema de HPLC da série Agilent 1100, usando colunas RP-18 (C-18) de fase reversa ILichrospher RP-18e, 5 μ, 250 mm χ 4 mm]. A fase móvel usada foi uma mistura de água e acetonitrila em uma proporção de 80: 20, a uma taxa de fluxo de 1 ml/min, com um volume de injeção da amostra de 50 μΐ. O tempo de operação foi de 10 minutos e a temperatura da coluna foi de 30° C e o comprimento de onda do detector foi de 226 nm. Nas condições acima, o NIPAM teve um tempo de retenção de cerca de 3 minutos, ao passo que o VP teve um tempo de retenção de cerca de 5 minutos. Dados analíticos: % de monômeros residuais i) NIPAM = 0,066% (660 ppm) e ii) VP = 0,011% (110 ppm). Exemplo 1

Preparação do polímero usando o método de diafiltração A reação de polimerização é realizada em dois vasos de vidro de 5 1 para um tamanho de batelada de 160 g (4 1 χ 2) do polímero. A cada vaso, 48 g de N-isopropilacrilamida, 23 ml de l-vinil-2- pirrolidona destilada e 8 g de polietileno glicol (peso molecular 6000) éster de anidrido · maléico (MPEG) foram adicionados a cerca de 4 1 de água. A esta mistura foram adicionados 22,4 ml de solução aquosa de N, N'- Metilenobisacrilamida (MBA) [49 mg/ml] e 16 ml de tetrametiletilenodiamina. A solução foi desaerada borbulhando-se nitrogênio gasoso por 30 minutos. Em seguida 16 ml de sulfato de amônio ferroso aquoso (0,5% p/v) e 24 ml de persulfato de amônio aquoso (80% p/v) foram adicionados e a reação continuou por 3 horas com borbulhamento contínuo de nitrogênio. Á polimerização foi realizada a 34°C em um banho de água com agitação a 80 rpm. Durante a polimerização, amostras foram coletadas em tempos apropriados (0, 15, 60 e 180 minutos) para monitoramento da reação. Depois de completada a polimerização, a solução foi filtrada através de filtros de cápsulas de 1" de membrana de poliéter sulfona de 0,2 μηι pré-esterilizados e descartáveis de 0,8 e 0,2 μπι de tamanho de poro, tipo DPS-5101AA-201, produzido por ("mfg by") Advanced Microdevices Pvt. Ltd, índia). O conteúdo filtrado de ambos os vasos de reação foi reunido e submetido à filtração de fluxo tangencial usando o dispositivo de diafiltração Proflux Ml2 (Millipore) para remover monômeros residuais e outras impurezas de baixo peso molecular. O lote combinado de 8 1 da mistura reacional foi inicialmente concentrado em torno de 2,2 litros através de diafiltração e em seguida o concentrado resultante foi diafiltrado usando cerca de 30 litros de água altamente purificada. Durante a diafiltração, a mistura reacional é concentrada para cerca de 1 litro. O tempo de processamento total para a diafiltração para um tamanho de batelada de 160 g (8 1) é de cerca de 4 - 6 horas. A solução diafiltrada é então submetida à liofilização.

A detecção e a quantificação dos monômeros residuais, especialmente VP e NIPAM residuais no polímero foram realizadas pelo sistema de HPLC da série Agilent 1100, usando colunas RP-18 (C-18) de fase reversa [Liclirospher RP-18e, 5 μ, 250 mm χ 4 mm]. A fase móvel usada foi uma mistura de água e acetonitrila em uma proporção de 80: 20, a uma taxa de fluxo de 1 ml/min, com um volume de injeção da amostra de 50 μΐ. O tempo de operação foi de 10 minutos e a temperatura da coluna foi de 30°C e o comprimento de onda do detector foi de 226 nm. Nas condições acima, o NIPAM teve um tempo de retenção de cerca de 3 minutos, ao passo que o VP teve um tempo de retenção de cerca de 5 minutos.

Dados analíticos: % de monômeros residuais i) NIPAM = < 0,001% (<10 ppm) e ii) YP = < 0,001% (<10 ppm)

O polímero apresentou as características espectrais a seguir, a saber,

IH NMR (300 MHz, espectrômetro Bruker, CDC13, δ ppm): 1,15 (br,-CH(CH3)2); 1,45 (br, - CH2-CH-N(anel VP); 1,63 (br,-CH2- CHC(=0)NH); 1,99 (br,·-CH C(O)NH-), CH2 (anel VP), 2,36 (CH2, anel VP), 3,0 (-0-CH2-CH2-), 3,23(CH2-N-); 3,62- 3,66(Br, CH2, MPEG); 3,72(NH- CH(CH3)2); 3,97(Br, CH) 13C NMR (300 MHz, espectrômetro Bruker, CDC13, δ ppm): 174 (C=O); 76,6-77,6 (multipleto para CDC13 e CH para esqueleto do polímero), 70,6 (CH2's MPEG), 41,6 (CH para unidade isopropil), 31,8 (CH2's, esqueleto do polímero), 22,6 (CH3' s, isopropil)

FTIR (pelota de KBr, cm-1): 3500 (s, OH) ; 3296 (s, NH, sec- Amida), 2972-2933 (s, CH, CH2, CH3), 1546 (s, NH mistura de Amida II e possivelmente C=O de ácido livre, secundário), 1387, 1367 (dubleto de grupos isopropil, CH3, deformação), 1172-1129 (m, O-C-O). Exemplo 2

Preparação de composição farmacêutica nanoparticulada de paclitaxel (Reconstituição em pequeno volume, i.e., até 40 ml)

A] Preparação de solução alcoólica de paclitaxel (20 mg/ml): 200 mg de paclitaxel foram dissolvidos em 10,0 ml de etanol.

B] Preparação de concentrado aquoso de polímero e excipientes: 100 mg do polímero obtido no Exemplo 1, 66,7 mg de

desoxicolato de sódio e 100 mg de citrato de sódio foram dissolvidos em 10 ml de água para dar uma solução límpida.

C] Preparação de nanopartícuias de paclitaxel (0,6 mg/ml): 1,0 ml do concentrado aquoso do polímero e excipientes da etapa B] foi dissolvido em 31,3 ml de solução de dextrose a 10% para obter

uma solução límpida. 1,0 ml da solução alcoólica de paclitaxel da etapa AJ foi adicionado à solução acima através dc uma agulha com um diâmetro interno de 0,330 mm em 4 segundos para obter nanopartículas de paclitaxel a uma concentração de 0,6 mg/ml. A composição farmacêutica assim preparada apresentou as seguintes características:

Fluido Conccntr Coneentraç Concentra Coneentraç '!'amanho Fstabilidade diluente ação de ão de ção dc ão de dc polímero desoxicolat citrato de paclitaxel partícula (mg/ml) o de sódio sódio (mg/ml) (nm) (mg/ml) (mg/ml) Dcxtrosc 0,3 0,2 0,3 0,6 «80 >24 horas a 1 0%

lixemplo 3

Preparação de composição farmacêutica nanoparticulada de paclitaxel (Reconstituição cm grande volume, i.c., até 500 ml) A] Preparação de solução alcoólica de paclitaxel (20 mg/ml): 400 mg de paclitaxel foram dissolvidos em 20,0 ml de etanol. R] Preparação do concentrado aquoso de polímero e excipientes: 200 mg tio polímero obtido no Pxemplo 1, 133,4 mg de desoxicoiato de sódio e 200 mg de citrato de sódio foram dissolvidos cm 20 ml de água para dar uma solução límpida. C] Preparação de nanopartículas de paclitaxel (0,6 mg/ml): 15,0 ml do concentrado aquoso do polímero e excipientes da etapa B| foram dissolvidos em 500 ml de solução de dextrose a 10% para obter uma solução límpida. 15,0 ml da solução alcoólica de paclitaxel da etapa A] foram adicionados à solução acima através de uma agulha com um diâmetro interno de 0,711 mm em 8 segundos para obter nanopartículas de paclitaxel a uma concentração de 0,6 mg/ml A composição farmacêutica assim preparada apresentou as seguintes características:_

Fluido diluente Conccntraçã o de polímero (mg/ml) Conccntraçã o dc desoxicoiato de sódio (mg/ml) Coneentraç ão de citrato de sódio (mg/ml) Coneentraç ão de paclitaxel (mg/ml) Tamanho dc partícula (nm) lí stabi li dacle Dextrose a 1 0% 0,3 0,2 0,3 0,6 «85 >24 horas Iixcmplo 4

Preparação de composição farmacêutica nanoparticulada de um derivado de ácido betulínico [MJ-1098 de fórmula (II) | ΛI Preparação de uma solução de MJ- 1098 (15 mg/ml): MJ- 1098 (15 mg) foi dissolvido em uma mistura de 0,15 ml de N,N- Dirneti lacetamida, 0,01 ml de Polissorbato 80 e 0,84 ml de IitanoI foi adicionado à solução acima e dissolvido por sonicação. B] Preparação do concentrado aquoso de polímero e cxcipientcs: mg do polímero obtido no Iixemplo 1, 6,67 mg de dcsoxicolato de sódio e 10 mg de citrato de sódio foram dissolvidos em 1 ml de água para dar uma solução límpida. CI Preparação de nanopartículas de MJ- 1098 ( 0,75 mg/ml) : 0,3 ml do concentrado aquoso do polímero e cxcipientcs da etapa B | foi dissolvido cm 9,2 ml de solução de dextrose a 5% para obter uma solução límpida. 0,5 ml da solução de MJ-1098 da etapa Aj foi adicionado à solução acima através de uma agulha com um diâmetro interno de 0,330 mm em 3 segundos para obter nanopartículas de MJ-1098 a uma concentração de 0,75 mg/ml A composição farmacêutica assim preparada apresentou as seguintes características:____

Iluicio diluente Concentr ação de polímero (mg/ml) Conccntraç ão d e desoxicolat o de sódio (mg/ml) Coneentraçã o de eitrato de sódio (mg/ml) Conccntraç ão de Mj- 1098 (mg/ml) lamanh o d c partícula (nm) Kstabilidad e Dcxtrosc a 5% 0,3 0,2 0,3 0,75 «62 >24 horas

Iixemplo 5

Preparação de Composição farmacêutica nanoparticulada dc um derivado de ácido betulínico [DRF-4012 de fórmula (111)J

ΛI Preparação de uma solução de DRF-4012 (20 mg/ml): MJ- DRF-4012 (20 mg) foi dissolvido em uma mistura dc 0,01 ml de Polissorbato 80 e 0,99 ml de litanol e dissolvido por sonicação. BI Preparação do concentrado aquoso de polímero c cxcipientcs: 10 mg do polímero obtido no Iixcmplo 1, 6,67 mg de desoxicolato dc sódio e 10 mg de citrato de sódio foram dissolvidos em 1 ml de água para dar uma solução límpida. CI Preparação dc nanopartículas de DRF-4012 (0,60 mg/ml): 0,33 ml do concentrado aquoso do polímero e excipientes da etapa B| foi dissolvido em 10,44 ml de solução de dextrose a 5% para obter uma solução límpida. 0,33 ml da solução de DRF-4012 da etapa A| foi adicionado à solução acima através de uma agulha com um diâmetro interno de 0,305 mm em 3 segundos para obter nanopartículas de DRF-4012 a uma concentração dc 0,6 mg/ml

A composição farmacêutica assim preparada apresentou as seguintes características:

Muido Concentrai; Concentraçã Concentrai; Coneentrair Tamanh 1 !stahili 0 dil uente ão d c o de ão d c ão dc o de dade polímero desoxicolato citralo de DRF-4012 partícula (mg/ml) de sódio (mg/ml) sódio (mg/ml) (mg/ml) (nm) Dextrose a 0.3 CU 0.3 0.6 -70 >24 horas

ILxemplo 6

Preparação de composição farmacêutica nanoparticulada de uni derivado de ácido betulínico |DRF-4015 de fórmula (IV)I

ΛI Preparação de uma solução de DRF-4015 (20 mg/ml): MJ- DRF-4015 (20 mg) foi dissolvido em uma mistura dc 0,01 ml de Polissorbato 80 e 0,99 ml de Ktanol e dissolvido por sonicação. BI Preparação do concentrado aquoso de polímero e excipientes: mg do polímero obtido no I^xemplo 1, 6,67 mg dc desoxicolato de sódio e 10 mg de citrato dc sódio foram dissolvidos em 1 ml de água para dar uma solução límpida. CI Preparação de nanopartículas de DRF-4015 (0,60 mg/ml): 0,33 ml do concentrado aquoso do polímero c excipientes da etapa B| foi dissolvido em 10,44 ml de solução de dextrose a 5% para obter uma solução límpida. 0,33 ml da solução de DRP-4015 da etapa A| foi adicionado à solução acima através de uma agulha com um diâmetro interno de 0,330 mm em 4 segundos para obter nanopartículas de DRF-4015 a uma concentração de 0,6 mg/ml A composição farmacêutica assim preparada apresentou as seguintes características:

I-Iuido ( oneentraç Concentrada Concentrai; ('oncentra Iamanho 1'.stabil ι dil uente ão dc o de ão de ção de de dade polímero desoxicolato citrato de DRI- partícula (mg/ml) cie sódio sódio 4015 (nm) (mg/ml) (mg/ml) (mg/ml) Dcxtrosc a 0.3 0.2 0.3 0.6 -46 >24 5% horas

Hxcmplo 7

Preparação dc composição farmacêutica nanoparticulada dc docctaxcl

AJ Preparação dc solução alcoólica de docctaxcl (40 mg/ml): 200 mg dc docctaxcl foram dissolvidos em 5,0 ml de Htanol. BI Preparação do concentrado aquoso de polímero e excipicntes: 400 mg do polímero obtido no Hxcmplo 1, 400 mg dc desoxicolato de sódio e 400 mg de citrato dc sódio foram dissolvidos em 10 ml de água para dar uma solução límpida. CI Preparação dc nanopartículas dc docctaxel (0,5 mg/ml): 4,0 ml do concentrado aquoso do polímero e cxcipientcs da etapa B| foram dissolvidos em 35,5 ml de solução de dextrose a 10% para obter uma solução límpida. 0,5 ml da solução alcoólica de docctaxcl da etapa A | foi adicionado à solução acima através dc uma agulha com um diâmetro interno de 0,330 mm em 3 segundos para obter nanopartículas de docctaxel a uma concentração dc 0,5 mg/ml. A composição farmacêutica assim preparada apresentou as se mi i η te s c ara c te r í st i c as:

I lindo diluente Concentr ação de polímero (mg/ml) Concentraça o de desoxicolato de sódio (mg/ml) Concen traç ào de citrato de sódio (mg/ml) Concentraç ão de docctaxel (mg/ml) Iamanh o de partícula (nm) Iislabilidad e Dextrose a 10% 4,0 4,0 4,0 0,5 -125 >24 horas

Hxemplo 8

Preparação de composição farmacêutica nanoparticulada de etoposida

AJ Preparação de uma solução de etoposida (20 mg/ml): 20 mg dc etoposida foram dissolvidos em uma mistura de 0,10 ml de N, N-dimetil acetamida e 0,90 ml dc Htanol com sonicação. B ] Preparação do concentrado aquoso de polímero e excipicntes: mg do polímero obtido no Kxemplo 1, 6,67 mg de desoxicolato de sódio c 10 mg de eitrato de sódio foram dissolvidos em 10 ml de água para dar uma solução límpida. Cj Preparação de nanopartículas de etoposida (0,6 mg/ml): 0,3 ml do concentrado aquoso do polímero e excipientes da etapa B| foi dissolvido cm 9,4 ml de solução dc dextrose a 5% para obter uma solução límpida. 0,3 ml da solução alcoólica de etoposida da etapa A | foi adicionado à solução acima através de uma agulha com um diâmetro interno de 0,330 mm em 3 segundos para obter nanopartículas de etoposida a uma concentração de 0,6 mg/ml.

A composição farmacêutica assim preparada apresentou as seguintes características:____________

l;luido diluente Concentraç ão de polímero (mg/ml) Concentraçã o dc desoxicolato dc sódio (mg/ml) Concentra ção dc eitrato dc sódio (mg/m 1) Concentraç ão de etoposida (mg/ml) 1'amanh o de partícula (nm) Hstabilidad e Dextrose a 5% 0,3 0,2 0,3 0,6 ~50 >24 horas

lixemplo 9

Determinação da farmacocinética, biodistribuição, c eliminação do polímero 114C |-marcado em camundongos camundongos albinos suíços machos, com 6-8 semanas de idade, pesando aproximadamente 25 - 30 g, foram aleatoriamente 2,0 divididos em cinco grupos consistindo em seis animais cada. O polímero 114C|-marcado com diluído com água desionizada ate 5 mg/ml com base na atividade específica do polímero. Todos os animais receberam uma dose única do 114C| polímero 40 mg/kg por injeção intravenosa. No estudo farmacocinético 100 μΐ de sangue foram coletados dos animais por sangramento retro-orbital sob anestesia nos tempos de 0, 10, 39 minutos, 1, 2, 4, 8,16, c 24 horas após administração em tubos contendo KDfA. Para estudos de excreção, urina e fezes foram coletados do gradil metabólico ou à força (10 minutos). No final (10 minutos, 60 minutos, 24 e 48 horas) adrenal, cérebro, pulmões, fígado, coração, rins, baço, estômago, intestino delgado, intestino grosso, fezes, urina, bexiga urinária, olhos, pele, pele, músculo da coxa, testículos e epiciidimo foram coletados, enxaguados, excisados e pesados. As concentrações do [ 14C|-polímero no sangue e na urina foram determinadas combinando-se 50 μΐ de sangue/urina com 5 ml de coquetel de cintilação líquida. Fezes e tecidos (não mais que 0,5 g) foram homogeneizados em água desionizada para obter 20 % de homogeneizado antes de combinar 500 μΐ com 5 ml 1 de coquetel de cintilação líquida. As amostras foram analisadas por um analisador de cintilação líquida. As contagens por minuto (cpm) foram convertidas em quantidade do 114C]-polímero em pg/ml com base em curvas de linearidade e de "Quenching". O perfil de concentração de sangue radioativo revelou uma curva bifásica com meia-vida de eliminação Tl/2 (β) curta de 0,448 ± 0,157 horas (26,88 minutos) e depuração rápida de 54,7 ml/h. Foi verificado que a via de eliminação dominante c a urina (urina, 66,91% vs. fezes, 17,39% em 48 horas) e os dados de recuperação coletados até 48 horas respondem por 84,87% da radioatividade injetada. A distribuição tecidual foi desprezível. Foi verificado que os rins, fígado, pele e intestino são os órgãos alvo. Fntretanto, o nível do polímeros nos tecidos foi rapidamente depura via urina e fezes.

A distribuição tecidual foi desprezível nos rins, fígado, pele e intestino apresentando os níveis mais altos de radioatividade. Fntretanto, o nível do polímeros nos tecidos foi rapidamente depura via urina c fezes.

Concluindo, o estudo mostra que o polímero é rapidamente eliminado do corpo sem ser depositado em órgãos vitais. Fmbora se saiba que o polímero é não-biodegradávcl, a depuração rápida e eficiente principalmente pela urina sugere a segurança e a utilidade do polímero para uso humano. Fxcmplo 10

Determinação da possível toxicidade local, se houver, no local de administração mediante administração intravenosa de bolo por cinco dias de 125 mg/kg do polímero em coelhos A substância de teste dissolvida em dextrose 10% a uma concentração dc 75 mg/ml foi administrada por via intravenosa com uma seringa descartável de 5 ml c uma agulha 23 G na veia marginal da orelha direita de cada coelho a 125 mg/kg por dia por cinco dias consecutivos. A orelha esquerda serviu de controle e recebeu dextrose 10% pela mesma via. O volume de aplicação foi ajustado em não mais de 3,5 ml/kg de peso corporal do animal. Foram feitas observações periódicas quanto à toxicidade local no local de injeção em 5 min, 10 min, 30 min, 60 min e 24 horas a cada dia durante os dias 1 a 5. Biópsias de punção no local de injeção foram retiradas de ambas as orelhas dc todos os seis coelhos no dia 7.

Uma administração intravenosa contínua por cinco dias de 75 mg/ml do polímero a uma dose de 125 mg/kg na veia da orelha de coelho causou tromboílcbite leve a moderada no local de injeção da dextrose 10% injetada nos coelhos. Pode-se concluir que a dose do polímero selecionado não causa qualquer toxicidade local no local de administração. Kxcmplo 1 1

Determinação dos possíveis órgãos alvo de toxicidade com referencia especial à microvasculatura mediante administração intravenosa dc bolo por cinco dias de 400 mg/kg do polímero em ratos Wistar

A substância de teste foi dissolvida em dextrose 10% e administrada por via intravenosa com a ajuda de uma seringa descartável de 5 ml c uma agulha 23 G na veia terminal de cada rato a 400 mg/kg. Os animais de controle receberam somente dextrose 05 pela mesma via. O volume de aplicação foi ajustado em 5 ml/kg dc peso corporal do animal, f oram feitas observações periódicas quanto (dia 7, 14 e 21 após o tratamento) quanto aos efeitos adversos (exame geral c parâmetros laboratoriais) e as mortes foram registradas. rIodos os animais foram sacrificados c nccrópsia foi feita.

Nas condições do estudo, a administração intravenosa de bolo por cinco dias do polímero a um nível de dose de 400 mg/kg de peso corporal não produz qualquer mortalidade nem quaisquer sinais tóxicos físicos ou sintomas nos ratos tratados. Os pesos corporais individuais e médios dos ratos mostraram um aumento constante tanto no grupo tratado com polímero quanto no grupo de controle. Nenhuma diferença significativa foi observada no peso corporal dos animais em relação àquele do grupo de controle.

Nos ratos tratados com o polímero, os parâmetros hem ato lógicos ficaram dentro dos limites normais durante todo o estudo. Diferenças significativas foram detectadas na linha basal para bilirubina total (p=0,0471) e ácido úrico (p=0,0157) para o grupo interno e proteína total (p=0,0005) e ácido úrico (p=0,0404) para os animais do grupo terminal cm relação aos animais de controle. No entanto, todos os valores estão dentro dos limites normais. O teste do fotoaetômetro mostrou que não houve diferenças significativas entre a atividade locomotora entre o grupo de controle c o grupo tratado no dia 7 e 21 respectivamente sugerido que o polímero não tem qualquer neurotoxicidade. Os espécimes do grupo de controle e do grupo tratado mostraram aspectos histológicos semelhantes. Todos os órgãos estudados mostraram estrutura normal ao exame com microscópio ótico. A mi crovascu latura cm cada órgão foi cuidadosamente examinada e não foram vistos aspectos patológicos em nenhum dos órgãos. Além disso, não houve alterações na microvasculatura dos animais tratados com polímero. Das observações acima, foi visto que o polímero a uma dose de 400 mg/kg de peso corporal administrada por cinco dias consecutivos não causou qualquer toxicidade geral nem qualquer toxicidade hcmatológica significativa. No entanto, foi verificado que a bilirubina total era significativamente mais alta no grupo terminal em relação ao grupo de controle no dia 21. Kxcmplo 12

Determinação dos possíveis órgãos alvo de toxicidade com referencia especial à microvasculatura mediante administração intravenosa única dc bolo de 800 mg/kg do polímero em ratos Wistar A substância dc teste foi dissolvida em dextrose 10% e foi administrada por via intravenosa com a ajuda de uma seringa descartável de 1 ml e uma agulha 26 G na veia terminal de cada rato a 800 mg/kg. Os animais dc controle receberam somente dextrose 10% pela mesma via. O volume de aplicação foi ajustado em 5 ml/kg de peso corporal do animal. Foram feitas observações periódicas quanto (dia 1, 3 e 7 após o tratamento) quanto aos efeitos adversos (exame geral e parâmetros laboratoriais) e as mortes foram registradas, fodos os animais foram sacrificados c necrópsia foi feita.

Nas condições do estudo, a administração intravenosa única de bolo do polímero a um nível de dose de 800 mg/kg de peso corporal não produz qualquer mortalidade nem quaisquer sinais tóxicos ou sintomas observáveis nos ratos. Os pesos corporais individuais e médios dos ratos mostraram um aumento constante tanto no grupo tratado com polímero quanto no grupo de controle. Nos ratos tratados com o polímero, os parâmetros hematológicos ficaram dentro dos limites normais durante todo o estudo. Nos ratos tratados com o polímero, os parâmetros bioquímicos ficaram dentro dos limites normais durante todo o estudo. Os estudos histopatológicos mostraram que não há diferenças significativas entre o grupo de controle e o grupo de tratado de ratos. Fotomicrografias dos ratos tratados com polímero sacrificados no dia 3 e no dia 7 após a injeção mostram que não há alterações aparentes na microvasculatura em todos os quatro órgãos examinados (cérebro, olho, rim c pele). Das observações acima nota-se que o polímero a uma dose de 800 mg/kg dc peso corporal não causa qualquer toxicidade geral nem qualquer toxicidade hematológica e bioquímica significativa nem alterações na microvasculatura e pode ser considerado seguro quando administrado por via intravenosa em ratos. Exemplo 13

Determinação da possível toxicidade local, se houver, no local de administração (subcutânca) do polímero em coelhos Uma única injeção de 0,1 ml da substância de teste dissolvida cm dcxtrosc 10% a uma concentração dc 75 mg/ml foi administrada por via subcutânca com uma seringa descartável dc 1 ml e uma agulha 23 G no lobo da orelha direita de cada um de seis coelhos. O controle recebeu 0,1 ml de dextrosc 10 ò/o pela mesma via no lobo da orelha esquerda de Lodos os seis coelhos, foram feitas observações periódicas quanto à toxicidade local no local de injeção cm 5 min, 10 min, 30 min, 60 min e 24 horas. Uma única administração subcutânca dc 100 μΐ de 75 mg/ml do polímero ou 100 μΐ de dextrosc na orelha do coelho causa inflamação leve no local dc injeção quando examinada 48 horas depois da injeção. Pode-se concluir que o polímero selecionado não causa qualquer toxicidade local no local de administração subsequente à administração subcutânca. Kxcmplo 14

Determinação do estudo de toxicidade de dose em seis meses por via intravenosa do polímero em ratos

O polímero usado na formulação nanoparticulada foi administrado em um nível de dose equivalente a 10 mg/kg de droga. Os controles receberam dextrosc (10%) por via intravenosa na veia terminal lateral ciclicamente uma vez a intervalos de três semanas durante um período de 180 dias (aproximadamente 26 semanas). As observações compreenderam mortalidade, sinais clínicos, peso corporal, consumo de comida e água, investigações clínicas laboratoriais, peso dos órgãos e histopatologia.

Os animais do grupo tratado e do grupo de controle permaneceram de um modo geral ativos e saudáveis durante o período de estudo. Não ocorreu mortalidade associada ao tratamento à exceção de algumas mortes incidentais devido a infecções tanto no grupo dc tratamento quanto no grupo de controle. Os animais de ambos os sexos apresentaram aumento progressivo no peso corporal e não houve alterações no consumo de comida ou água durante o estudo. Os parâmetros hcmatológicos tanto nos machos quanto nas fêmeas estão dentro dos limites normais reportados para ratos Wistar. !Entretanto, no grupo dc tratamento, ocorreu uma diminuição pequena, ainda dentro dos limites normais, da WBC e da contagem de neutrófilos nos machos c da contagem de neutrófilos nas fêmeas. Um leve aumento na contagem de reticulócitos foi observado tanto no grupo tratado quanto no grupo de controle.

Os parâmetros bioquímicos do sangue tanto nos machos quanto nas fêmeas ficaram dentro dos limites normais reportados para ratos Wistar. Pequenas alterações incluíram valores ligeiramente mais altos que os normais na glicose, ALP c creatinina tanto nos machos quanto nas fêmeas do grupo tratado c do grupo de controle. Um leve aumento nos triglicerídcos dos machos do grupo dc tratamento foi observado em 6 meses. Os parâmetros da urina tanto nos machos quanto nas fêmeas ficaram dentro dos limites normais.

Claims (107)

1. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por compreender três unidades monoméricas, selecionadas de 1 -vinilpirrolidona (VP), N-isopropilacrilamida (NIPAM), e éster de anidrido maléico e polietileno glicol (MPEG), reticulado com um derivado vinílico bifuncional, de alta pureza e substancialmente livre dos respectivos contaminantes monoméricos tóxicos.

2. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por compreender três unidades monoméricas, selecionadas de 1 -vinilpirrolidona (VP), N- isopropilacrilamida (NIPAM), e éster de anidrido maléico e polietileno glicol (MPEG), reticulado com um derivado vinílico bifuncional, de alta pureza, contendo os respectivos contaminantes monoméricos tóxicos em quantidades inferiores a 0,001%.

3. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado onde o agente de reticulação vinílico bifuncional é N,N'- Metileno bis acrilamida (MBA).

4. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por conter 1-vinilpirrolidona tóxica (VP) em quantidades inferiores a 0,001%.

5. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por conter N-isopropilacrilamida tóxica (NIPAM) em quantidades inferiores a 0,001%.

6. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado onde a proporção em peso dos monômeros, NIPAM: VP varia na faixa entre 55:22 e 65:35.

7. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 6, caracterizado onde a proporção em peso dos monômeros, NIPAM: VP varia na faixa entre 58: 32 e 62: 28.

8. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado onde a proporção em peso dos monômeros, (NIPAM + VP): MPEG varia na faixa entre 90: 10 e 95: 5.

9. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 8, caracterizado onde a proporção em peso dos monômeros, (NIPAM + VP): MPEG varia na faixa entre 80:20 e 95:5.

10. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter picos de δ a 174, 76,6-77,6, 70,6, 41,6, 31,8 , e 22,6 em seu espectro de 13C NMR.

11. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter picos de δ a 1,14, 1,45, 1,63, 1,99, 2,36, 3,0, 3,23, 3,62-3,66, 3,72, e 3,97 em seu espectro de 1H NMR.

12. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter freqüência de valores cm"1 de 3500, 3296, 2972- 2933, 1546, 1387, 1367, e 1172-1129 em seu espectro de FT-IR.

13. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter a estrutura de fórmula (I) <formula>formula see original document page 66</formula>

14. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado porque é biocompatível.

15. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por que é não-biodegradável.

16. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por que é atóxico.

17. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de Ίυι (KlO) de 0,152 ± 0,018 horas.

18. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de T]/2 (a) de 0,065 ± 0,014 horas.

19. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de Ti/2 (β) de 0,448 ± 0,0157 horas.

20. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de Cmax de 82,96 ±5,11 μg/ml.

21. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de área sob a curva (AUC) de 18,29 ± 1,62 horas χ μg/ml.

22. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de tempo de depuração (CL) de 54,67 ± 4,86 ml/hr.

23. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de tempo de residência médio (MRT) de 0,465 ± 0,13 horas.

24. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por ter um valor de distribuição de volume no estado estacionário ( Vss) de 25,43 ± 5,2 ml/h.

25. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por que é eliminado da urina fezes, tecidos, e enxaguadura.

26. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2 e 25, caracterizado por que é predominantemente eliminado da urina e fezes.

27. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2 e 25, caracterizado por que cerca de 67% do qual são eliminados da urina 48 horas após a aplicação.

28. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2 e 25, caracterizado por que cerca de 17% do qual são eliminados das fezes 48 horas após a aplicação.

29. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2 e 25, caracterizado por que cerca de 84% do qual são eliminados da urina, fezes, tecidos e enxaguadura, 48 horas após a aplicação.

30. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por que não causa qualquer toxicidade local no local de administração, 48 horas após a administração subcutânea de uma solução aquosa do referido polímero na orelha de um coelho.

31. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por que não causa qualquer toxicidade local no local de administração, 24 horas após a administração intravenosa de uma solução aquosa do referido polímero na veia da orelha de um coelho.

32. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por que não causa qualquer toxicidade geral, quando administrado através de uma via bolar intravenosa a ratos Wistar até cinco dias consecutivos a uma dose entre 400 mg/kg e 800 mg/kg.

33. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizado por que não causa qualquer toxicidade hematológica significativa, quando administrado através de uma via bolar intravenosa a ratos Wistar até cinco dias consecutivos a uma dose entre 400 mg/kg e 800 mg/kg.

34. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero marcado com [14C] compreendendo três unidades monoméricas, selecionadas de 1- vinilpirrolidona (VP), N-isopropilacrilamida (NIPAM), e éster de anidrido maléico e polietileno glicol (MPEG), reticulado com N,N1-Metileno bis acrilamida (MBA).

35. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero marcado com [14C] compreendendo três unidades monoméricas, selecionadas de 1- vinilpirrolidona (VP)3 N-isopropilacrilamida (NIPAM), e éster de anidrido maléico e polietileno glicol (MPEG), reticulado com N,N1-Metileno bis acrilamida (MBA).

36. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero marcado com [14C] de alta pureza de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 e 35, onde a proporção em peso dos monômeros, NIPAM: VP varia na faixa entre 55:22 e 65: 35, e a proporção de monômeros, (NIPAM + VP): MPEG varia na faixa entre 90: 10 e 95: 5.

37. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero marcado com [14C] de alta pureza de acordo com qualquer uma das reivindicações 34, 35 e 38 onde a proporção em peso dos monômeros, NIPAM: VP varia na faixa entre 58: 32 e 62: 28, e a proporção de monômeros, (NIPAM + VP): MPEG varia na faixa entre 80:20 e 95:5.

38. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser ura processo para a preparação de um polímero de alta pureza e substancialmente livre dos respectivos contaminantes monoméricos tóxicos e contendo os respectivos contaminantes monoméricos tóxicos em quantidades inferiores a 0,001%, de acordo com as reivindicações 1 e 2 compreendendo as etapas de: i) Dissolver quantidades apropriadas dos três monômeros, NIPAM, VP e MPEG em água; ii) Adicionar sucessivamente à solução da etapa i), quantidades apropriadas de um agente de reticulação e de um ativador; iii) Borbulhar um gás inerte na solução da etapa ii) por um período entre 30 e 60 minutos; iv) Adicionar uma quantidade apropriada de um ativador e de um iniciador de polimerização à solução da etapa iv); v) Polimerizar a soiução da etapa iv), a uma temperatura entre 25°C e 45°C, em uma atmosfera de um gás inerte por 3 a 6 horas; vi) Submeter a solução da etapa v) à filtração através de filtros pré-esterilizados e recolher o filtrado; vii) Submeter o filtrado da etapa vi) à diafiltração e recolher o filtrado; viii) Opcionalmente submeter o filtrado da etapa vii) a uma etapa de diafiltração adicional e recolher o filtrado; e ix) Opcionalmente submeter o filtrado da etapa vii) ou viii) à liofilização para obter um pó liofilizado do polímero.

39. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde a proporção dos monômeros, NIPAM: VP varia na faixa entre 55:22 e 65: 35, e a proporção em peso dos monômeros, (NIPAM + VP): MPEG varia na faixa entre 90: 10 e 95: 5.

40. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde a proporção em peso dos monômeros, NIPAM: VP varia na faixa entre 58: 32 e 62: 28, e a proporção de monômeros, (NIPAM + VP): MPEG varia na faixa entre 80:20 e 95:5.

41. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde o agente de reticulação é um derivado vinilico bifuncional.

42. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 41, caracterizado onde o derivado vinílico bifuncional é N5N1- metileno bis acrilamida.

43. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde o agente de reticulação é empregado em quantidades na faixa entre 1,3 e 1,5 % p/p do teor de monômeros totais.

44. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 43, caracterizado onde o agente de reticulação é empregado em quantidades na faixa entre 1,35 e 1,4 % p/p cio teor de monômeros totais.

45. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 3 8, caracterizado onde o ativador é selecionado de qualquer um de tetrametiletileno diamina ou sulfato de amônio ferroso, ou uma combinação de ambos.

46. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 3 8, caracterizado onde o ativador é empregado em quantidades na faixa entre 15 e 18 % p/p do teor de monômeros totais.

47. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 46, caracterizado onde o ativador é empregado em quantidades na faixa entre 15 e 16 % p/p do teor de monômeros totais.

48. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde o iniciador de polimerização é pelo menos um ou mais selecionados de compostos do tipo peróxido, tais como peróxido de diacil, peróxido de benzoil, peróxido de diacetil, peróxidos de dialquil, peróxido de ter-butil e peróxido de ter-amil ou iniciadores cle polimerização à base de nitrila tais como 2, 2'-Azobis isobutironitrila (AIBN) ou iniciadores de polimerização à base de sal inorgânico tais como perdissulfato de amônio ou persulfato de amônio.

49. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanopcirticuladas", de acordo com a reivindicação 48, caracterizado onde o iniciador de polimerização é perdissulfato de amônio ou persulfato de amônio.

50. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde o iniciador de polimerização é empregado em quantidades na faixa entre 20 e 30 % p/p do teor de monômeros totais.

51. "Polímero Biocompatível, Não-Biodcgradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 50, caracterizado onde o iniciador de polimerização é empregado em quantidades na faixa entre 23 e 25 % p/p do teor de monômeros totais.

52. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde o gás inerte é argônio ou nitrogênio.

53. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde o filtro pré- esterilizado utilizado na etapa v) é um filtro de cápsula 1' de membrana de poliéter sulfona de 0,2 pm descartável tendo um tamanho de poro de 0,8 e 0,2 pm.

54. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoprrticuladas", de acordo com a reivindicação 38, caracterizado onde o equipamento de diafiltração utilizado nas etapas vi) e vii) é um dispositivo de diafiltração Proflux Ml2 da Millipore Make.

55. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, contendo 1- vinilpirrolidona tóxica (VP) em uma quantidade menor que 0,001%.

56. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por s cr um polímero obt do pelo processo de acordo com a reivindicação 3 8, contendo N- isopropilacrilamida (NIPAM) tóxica em uma quantidade menor que 0,001%.

57. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, tendo picos de δ a 174, 76,6-77,6, 70,6, 41,6, 31,8 , e 22,6 em seu espectro de 13C NMR.

58. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, tendo picos de δ a 1,14, 1,45, 1,63, 1,99, 2,36, 3,0, 3,23, 3,62-3,66, 3,72, e 3,97 em seu espectro de 1HNMR.

59. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, tendo freqüência de valores cm"1 de 3500, 3296, 2972-2933, 1546, 1387, 1367, e 1172-1129 em seu espectro de FT-IR.

60. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, tendo a estrutura de fórmula (I), HO-fHaO-OH|ÇH2-CHâlOH HO^C-CHl p^-CH^OH

61. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, que é biocompatível, não-biodegradável e atóxico.

62. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, tendo um valor de Tl/2 (KlO) de 0,152 ± 0,018 horas; um valor de T1/2 (a) de 0,065 ± 0,014 horas; um valor de T1/2 (β) de 0,448 ± 0,0157 horas; um valor de Cmax de 82,96 ± 5,11 μg/ml; um valor de área sob a curva (AUC) de 18,29 ± 1,62 horas χ μg/ml; um valor de tempo de depuração (CL) de 54,67 ± 4,86 ml/h; um valor de tempo de residência médio (MRT) de 0,465 ± 0,13 horas; e um valor de distribuição de volume no estado estacionário (Vss) de 25,43 ± 5,2 ml/h.

63. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, cerca de 84% do qual são eliminados da urina, fezes, tecidos e enxaguadura 48 horas após a aplicação.

64. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, que não causa qualquer toxicidade local no local de administração, 48 horas após a administração subcutânea de uma solução aquosa do referido polímero na orelha de um coelho ou 24 horas após a administração intravenosa de uma solução aquosa do referido polímero na veia da orelha de um coelho.

65. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um polímero obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 38, que não causa qualquer toxicidade geral ou toxicidade hematológica, quando administrado através de uma via bolar intravenosa a ratos Wistar até cinco dias consecutivos a uma dose entre 400 mg/kg e 800 mg/kg.

66. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um kit compreendendo (a) um frasco contendo uma solução de uma droga ou composto pobremente solúvel em água em um solvente miscível em água ou misturas do mesmo e (b) um outro frasco contendo uma solução de um polímero de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, de alta pureza e subseqüentemente livre de contaminantes monoméricos e excipientes farmaceuticamente aceitáveis, onde (a) e (b) são fornecidos em uma proporção entre 1: 1 e 1: 10 em volume, adequado para a preparação de uma composição farmacêutica das referidas drogas ou compostos pobremente solúveis em água na forma nanoparticulada para administração a pacientes como necessidade da mesma.

67. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 66, caracterizado por ser um polímero onde as drogas ou compostos pobremente solúveis em água têm uma solubilidade em água menor que 10 mg/ml.

68. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 66, caracterizado onde a droga ou composto pobremente solúvel em água é selecionado da classe de agentes anticâncer, agentes antiinflamatórios, agentes antifúngicos, antieméticos, agentes anti- hipertensivos, hormônios sexuais, esteróides, antibióticos, anestésicos ou imunomoduladores.

69. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os agentes anticâncer são selecionados de paclitaxel, docetaxel, e outros derivados de taxano afins; Irinotecano, Topotecano, e outros derivados de camptotecina afins; Doxorubicina, Daunomicina, e outros derivados de antraciclina afins; Cisplatina; Oxaliplatina; 5- Fluoruracil; Mitomicina; Metotrexato; Etoposida; ácido betulínico e seus derivados e wedelolactona e seus derivados.

70. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os agentes antiinflamatórios são selecionados de Indometacina, Ibuprofeno, cetoprofeno, Flubiprofeno, Piroxicam, Tenoxicam, e Naproxeno.

71. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os agentes antifúngticos são selecionados de cetoconazol, e anfotericina B.

72. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os hormônios sexuais são selecionados de Testosterona, Estrogênio, Progesterona e Estradiol.

73. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os esteróides são selecionados de Dexametasona, Prednisolona, e Triamcinolona.

74. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os agentes anti-hipertensivos são selecionados de Captopril, Ramipril, Terazosina, Minoxidil, e Parazosina.

75. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os antieméticos são selecionados de Ondansetrona e Granisetrona.

76. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os antibióticos são selecionados de Metronidazol, e ácido fusídico.

77. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde imunomoduladores são selecionados de Ciclosporina; e ácido bifenil dimetil dicarboxílico.

78. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os anestésicos são selecionados de Propolol, Alfaxalona, e Hexobarbital.

79. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 68, caracterizado onde os derivados de ácido betulínico são selecionados de MJ- 1098 de fórmula (II), DRF-4012 de fórmula (III), e DRF-4015 de fórmula (IV). (III)

80. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 66, caracterizado onde o solvente miscível em água é selecionado de etanol, dimetil formamida, dimetil acetamida, dimetil sulfóxido, dietil sulfóxido; polietileno glicóis de vários pesos moleculares; polipropileno glicóis de vários pesos moleculares; polissorbato 80, polissorbato 20, óleo vegetal polioxietilado, óleo de rícino polioxietilado ou glicerina e misturas dos mesmos.

81. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 66, caracterizado onde os excipientes farmaceuticamente aceitáveis são selecionados de desoxicolato de sódio; sais biliares, polissorbato 80; polissorbato 20, óleo vegetal polioxietilado; óleo de rícino polioxietilado; polissacarídeos como dextrose, sacarose, lactose, e manitol; sorbitan ésteres ou "spans" de vários graus, "myrj" de vários graus, ou poloxômeros de vários graus e misturas dos mesmos.

82. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 81, caracterizado onde os excipientes farmaceuticamente aceitáveis compreendem ainda um agente tamponante.

83. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 82, caracterizado onde o agente tamponante é citrato de sódio.

84. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 66, caracterizado opcionalmente compreendendo um líquido de diluição, e uma seringa e uma agulha com um diâmetro interno na faixa de 0,305 a 0,356 mm, se um pequeno volume, digamos 1-5 ml do conteúdo do frasco a) tiver que ser adicionado a cerca de vezes seu volume compreendendo o conteúdo do frasco b) no líquido de diluição ou uma seringa e uma agulha com um diâmetro interno na faixa de 0,559 a 0,711 mm, se um volume maior, digamos 10-15 ml do conteúdo do frasco a) tiver que ser adicionado a cerca de vezes seu volume compreendendo o conteúdo do frasco b) no líquido de diluição.

85. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser uma composição farmacêutica na forma nanoparticulada, compreendendo uma droga ou composto pobremente solúvel em água, um solvente miscível em água, um polímero de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, e excipientes farmaceuticamente aceitáveis, todos eles estando contidos em um líquido de diluição, adequada para administração a pacientes com necessidade da mesma.

86. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado onde as drogas pobremente solúveis em água são aquelas mencionadas nas reivindicações 68-79 precedentes.

87. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado onde os excipientes farmaceuticamente aceitáveis são aqueles mencionados nas reivindicações 81-83 precedentes.

88. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado onde os solventes miscíveis em água são aqueles mencionados na reivindicação 80 precedentes.

89. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado onde o líquido de diluição é selecionado de água, solução salina, soluções de dextrose a 5% e 10%, solução de dextrose e cloreto de sódio, solução de lactato de sódio, solução de Ringer lactada, solução de manitol, solução de manitol com dextrose ou cloreto de sódio, solução de Ringer, solução de cloreto de sódio, água estéril para injeção, e diversas soluções de eletrólitos compreendendo combinações variáveis de eletrólitos, dextrose, frutose e açúcar invertido.

90. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado. onde a droga ou composto pobremente solúvel em água é aprisionado no envoltório polimérico na forma nanoparticulada.

91. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 90, caracterizado onde o tamanho de partícula da forma nanoparticulada varia na faixa entre 30 e 150 nm.

92. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado onde o polímero utilizado é de alta pureza; tendo a estrutura de fórmula (I); contendo VP e NIPAM monoméricos em quantidades inferiores a 0,001%; tendo picos de δ a 174, 76,6-77,6, 70,6, 41,6, 31,8 , e 22,6 em seu espectro de 13C NMR; tendo picos de δ a 1,14, 1,45, 1,63, 1,99, 2,36, 3,0, 3,23;3,62-3,66, 3,72, e 3,97 em seu espectro de 1H NMR; e tendo freqüência de valores cm"1 de 3500, 3296, 2972-2933, 1546, 1387, 1367, e 1172-1129 em seu espectro de FT-IR.

93. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado onde o polímero utilizado é de alta pureza; tendo a estrutura de fórmula (I); contendo VP e NIPAM monoméricos em quantidades inferiores a 0,001%; tendo um valor de Ti72 (KlO) de 0,152 ± 0,018 horas; um valor de T172 (a) de 0,065 ± 0,014 horas; um valor de Ti72 (β) de 0,448 ± 0,0157 horas; um valor de Cmax de 82,96 ±5,11 μg/ml; um valor de área sob a curva (AUC) de 18,29 ± 1,62 horas χ μg/ml; um valor de tempo de depuração (CL) de 54,67 ± 4,86 ml/h; um valor de tempo de residência médio (MRT) de 0,465 ± 0,13 horas; e um valor de distribuição de volume no estado estacionário (Vss) de 25,43 ± 5,2 ml/h.

94. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 85, caracterizado tendo um pH entre 6,0 e 8,5.

95. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um processo para a preparação da composição farmacêutica de drogas ou compostos pobremente solúveis em água na forma nanoparticulada de acordo com a reivindicação 85 compreendendo as etapas de: i) Preparação do concentrado de droga/composto, compreendendo dissolver a droga ou composto pobremente solúvel em água em um solvente miscível em água adequada, ou misturas do mesmo; ii) Preparação de um concentrado aquoso do polímero e excipientes farmaceuticamente aceitáveis, compreendendo as etapas de: a) primeiro, adição da quantidade requerida do polímero de fórmula (I), de alta pureza e subseqüentemente livre de contaminantes monoméricos, tendo especialmente um nível de NIPAM e VP tóxicos de < 0,001 % a uma quantidade apropriada de água para injeção para obter uma solução; b) adição dos excipientes farmaceuticamente aceitáveis e de um agente tamponante à solução do polímero em água; iii) Misturação da solução da etapa ii b) com um líquido de diluição para obter uma solução límpida; iv) Utilização de uma agulha com um diâmetro interno entre 0,305 e 0,356, para adição de um volume menor da solução da etapa i) à solução da etapa iii) em 4 segundos; ou v) Utilização de uma agulha com um diâmetro interno entre 0,559 e 0,711 mm, para adição de um volume maior da solução da etapa i) à solução da etapa iii) em 10 segundos; vi) Injeção da solução da etapa i) na solução da etapa iii), onde a agulha da seringa através da qual a solução da etapa i) é adicionada deve ficar imersa na solução da etapa iii); e vii) Opcionalmente, manter o recipiente contendo a solução da etapa iii) em uma posição invertida durante a injeção da solução da etapa i).

96. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado onde as drogas pobremente solúveis em água usadas são aquelas mencionadas nas reivindicações 68-79 precedentes.

97. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado onde os excipientes farmaceuticamente aceitáveis usados são aqueles mencionados nas reivindicações 81-83 precedentes.

98. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado onde os solventes miscíveis em água são aqueles mencionados na reivindicação 80 precedente.

99. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado onde os líquidos de diluição usados são aqueles mencionados na reivindicação 89 precedente.

100. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado onde o volume menor de solução, de acordo com a etapa iv), refere-se a um volume entre 1 - 5 ml da solução da etapa i) da reivindicação 95.

101. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado onde o volume maior de solução, de acordo com a etapa v), refere-se a um volume entre 10 - 15 ml da solução da etapa i) da reivindicação 95.

102. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado onde os tamanhos de partícula das drogas ou compostos pobremente solúveis em água aprisionados no envoltório polimérico na composição farmacêutica obtida variam na faixa de 30 a 150 nm.

103. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado, administrada a pacientes com necessidade da mesma por via intravenosa, intramuscular, ou subcutânea.

104. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado, onde o polímero utilizado é de alta pureza; tendo a estrutura de fórmula (I); e contendo VP e NIPAM monoméricos em quantidades inferiores a 0,001%, que é segura e atóxica para administração a seres humanos/animais.

105. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 95, caracterizado útil para tratamento de condições patológicas, que as drogas ou compostos pobremente solúveis em água são capazes de tratar.

106. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas" caracterizado por ser um método de tratamento de condições patológicas em seres humanos/animais, que as drogas ou compostos pobremente solúveis em água de acordo com as reivindicações 68-79 são capazes de tratar, compreendendo a administração de uma composição farmacêutica nanoparticulada das referidas dorgas ou compostos pobremente solúveis em água de acordo com a reivindicação 85.

107. "Polímero Biocompatível, Não-Biodegradável, Atóxico útil para Composições Farmacêuticas Nanoparticuladas", de acordo com a reivindicação 106, caracterizado por compreender injeções intravenosa, intramuscular, ou subcutânea.