EA017682B1 - Полимер и способ его получения, фармацевтическая композиция в форме наночастиц, способ и набор для ее получения и способ лечения патологических состояний у людей или животных - Google Patents

Abstract

Данное изобретение касается биологически совместимого, небиодеградируемого и нетоксичного полимера формулы (I), включающего три мономерных единицы, выбранных из 1-винилпирролидона (VP), N-изопропилакриламида (NIPAM) и сложного эфира малеинового ангидрида и полиэтиленгликоля (MPEG), поперечно сшитых с дифункциональным виниловым соединением, высокой чистоты и главным образом свободного от относительно токсичных мономерных примесей, и способа его получения. Данное изобретение, кроме того, касается фармацевтических композиций в форме наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, включающих полимер данного изобретения, которые являются безопасными, менее токсичными и удобными для введения лежачим пациентам, нуждающимся в этом. Кроме того, данное изобретение касается высокоселективного способа получения фармацевтических композиций наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений.

Description

Данное изобретение предусматривает биологически совместимый и небиодеградируемый полимер высокой чистоты, главным образом свободный от мономерных примесей, и способ его получения.

Данное изобретение далее предусматривает фармацевтические композиции слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, использующие указанный полимер данного изобретения.

Кроме того, данное изобретение касается высокоселективного способа получения фармацевтических композиций слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, а также способа введения их пациентам, нуждающимся в этом.

Полимер данного изобретения, являющийся нетоксичным и безопасным, таким образом, делает фармацевтические композиции в форме наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, включающие указанный полимер, также менее токсичными и более безопасными для введения.

Предпосылки данного изобретения

Последние годы наблюдается постоянно возрастающий интерес к применению новых материалов в области медицины и фармацевтики, или в качестве протезов, или в медицинских устройствах, разработанных для контакта с биологической средой живого организма. Из этих материалов полимеры, в основном синтетические полимеры, являются, безусловно, самыми разнообразными классами, которые, как находят, обеспечивают значительные преимущества медицинской помощи для пациента.

Применение полимеров в области медицины и фармацевтики широко варьирует. В медицине полимеры применяют как импланты или опорные материалы, такие как искусственные органы, сосудистые трансплантаты, внутриглазные линзы, искусственные суставы, протезы молочной железы, шовные материалы, экстракорпоральные терапевтические средства или другие опорные материалы, такие как используемые в гемоперфузии, оксигенаторы крови, катетеры, трубка для крови, материалы, покрывающие раны и ожоги, шины, контактные линзы и т.п. В фармацевтической области полимеры особенно использовались в развитии систем доставки наночастиц и систем доставки регулируемого высвобождения. Обширные исследования также осуществляют нацеливание лекарственных средств с системами доставки в желательный участок. Кроме того, полимеры нашли широкое применение в других направлениях, например, таких как пластыри для трансдермальной доставки лекарственного средства, микросферы, биопроцессы, такие как ферментная и клеточная иммобилизация и т.д.

Среди таких применений системы доставки в форме наночастиц лекарственных средств более широко изучены, а также широко изучены носители лекарственных средств нанометрового размера с гидрофильными поверхностями, особенно те, что включают две сферические совместно ориентированные области полимерных мицел - плотно упакованное ядро гидрофобного материала, который отвечает за захват гидрофобного лекарственного средства или соединения, и внешняя оболочка, выполненная из гидрофильного материала. Выяснили, что такие системы избегают распознавания и поглощения ретикуло-эндотелиальными системами (КЕ8), и, таким образом, могут циркулировать в крови длительное время. Кроме того, из-за их чрезвычайно маленького размера (полимерная мицелла обычно состоит из нескольких сотен блок-сополимеров и имеет диаметр от около 20 до 50 нм), частицы проникают пассивным механизмом нацеливания из сосудов на патологические участки, такие как солидные опухоли.

Полимеры получают диапазон свойств, относящихся к их химическим и структуральным особенностям. Полимерные цепи в основном могут быть линейными, разветвленными или поперечно сшитыми с соседними цепями. Кроме того, эти цепи могут быть неупорядоченными, упорядоченными или ориентированными в одном направлении. Эти структуральные особенности вместе с химической композицией обеспечивают разнообразие свойств полимерам, что приводит к разнообразию применений конечного назначения. Кроме того, эти структуральные особенности вместе с химической композицией могут сообщить или лишить образованный полимер биосовместимости и устойчивости к биодеградации средой тканей хозяина. Эти факторы также влияют на другие свойства, такие как растворимость, и способы обработки и формирования.

Более того, когда полимер вводят млекопитающим, он обычно медленно исчезает из участка введения, однако, это исчезновение происходит из-за химической реакции, такой как гидролиз, который обычно является частью способа биотрансформации, и указанный полимер метаболизируется и выделяется из организма. Однако это иногда приводит к ненужным метаболитам, которые оказывают неблагоприятные влияния на различные биологические системы.

Поэтому полимеры, которые инертны в/к среде применения и выделены или экстрагированы неповрежденными из участка введения, а также служат, в основном, как ограничивающий скорость барьер для транспорта и высвобождения лекарственного средства из него, могут иметь большое значение, основанное на намеченных функциях. К тому же, биодеградируемость полимера зависит от механических и химических свойств полимера. Множество натуральных, синтетических и биосинтетических полимеров являются био- и экологически разлагаемыми. Полимер на основе С-С скелета склонен быть небиодеградируемым, тогда как содержащие гетероатомы полимерные скелеты способны к биодеградации. Поэтому небиодеградируемость/биодеградируемость можно получить в полимерах продуманной делеци

- 1 017682 ей/добавлением химических связей, таких как ангидридные, эфирные или амидные связи и т.д. Общие примеры небиодеградируемых полимерных материалов включают полиэтиленвинилацетат, полидиметилсилоксан, полиэфируретан, этилцеллюлозу, целлюлозы ацетат, полиэтилен и поливинилхлорид.

Существует путаница в сообщениях, основанных на попытках, сделанных за последние десятилетия, или на развитие систем доставки из наночастиц для широкого ряда лекарственных средств, использующих полимеры. Приведены некоторые из них.

ί) 8акига1 с1 а1. в патенте США 5412072 показали, что комплекс, включающий лекарственное средство, ковалентно связан с полимером, состоящим из гидрофильных и гидрофобных фрагментов, что делает указанный комплекс водорастворимым и, таким образом, пригодным для введения. Лекарственные средства, применяемые здесь, обычно менее водорастворимые или нерастворимые соединения, а комплекс лекарственного средства с полимером, как сообщили, формирует полимерные мицеллы в водных растворах и становится растворимым в воде высокомолекулярным полимеризированным лекарственным средством, пригодным и приемлемым для введения.

ίί) Уокоуаша с1 а1. в патенте США 5449513 сообщают о полимерной мицелле, которая в отличие от раскрытой 8акига1 с1 а1. в патенте США 5412072, не является комплексом, где лекарственное средство ковалентно связано с полимером, а скорее где лекарственное средство захвачено полимером. Лекарственные средства, применяемые в захваченном состоянии, являются гидрофобными по природе. Полимерная мицелла, в свою очередь, получена путем захвата гидрофобных лекарственных средств внутри полимерной оболочки традиционными способами, такими как обработка ультразвуком, с последующей очисткой мицелл, полученных таким образом, с помощью диализа.

ш) Эс^н с1 а1. в патенте США 5439686; в патенте США 5362478; в патенте США 5916596; в патенте США 6096331; в патенте США 6537579 и в патенте США 6749868 показали получение полимерной мицеллы существенно нерастворимых в воде соединений. Не растворимое в воде соединение, как сообщили, захвачено внутрь полимерной оболочки до значительной степени и пригодно для введения пациенту, нуждающемуся в этом, или в форме раствора, или в форме суспензии.

Полимеры, применяемые 8акига1 с1 а1. в патенте США 5412072, обычно включают гидрофильный сегмент, выбранный из полиэтиленгликоля, полисахаридов, полиакриламида и т.д., и гидрофобный сегмент, выбранный из полиаспарагиновой кислоты, полиглутаминовой кислоты, полилизина и т. д.

Полимеры, применяемые Уокоуаша с1 а1. в патенте США 5449513, обычно включают гидрофильный сегмент, выбранный из полиэтилен оксида, полияблочной кислоты, полиаспарагиновой кислоты, полиглутаминовой кислоты, полилизина, полисахарида и т. д., и гидрофобного сегмента, выбранного из полиф-бензил Ь-аспартата), поли(у-бензил Ь-глутамата), полиф-замещенного аспартата), поли(узамещенного глутамата), поли(Ь-лейцина), поли(Ь-валина), поли(Ь-фенилаланина), гидрофобных полиаминокислот, полистирола, полиметакрилата, полиакрилата, полиметакрилат амида, полиакрилат амида, полиамида, полиэфира, полиалкиленоксида и гидрофобных полиолефинов.

Полимеры, применяемые Эс^н с1 а1. в патенте США 5439686; в патенте США 5362478; в патенте США 5916596; в патенте США 6096331; в патенте США 6537579 и в патенте США 6749868, в основном несут сульфгидрильные группы или дисульфидные связи в своей структуре, например альбумин (который содержит 35 цистеиновых остатков), инсулин (который содержит 6 цистеиновых остатков), гемоглобин (который содержит 6 цистеиновых остатков на α₂β₂ единицу), лизоцим (который содержит 8 цистеиновых остатков), иммуноглобулины, α-2-макроглобулин, витронектин, витронектин, фибриноген и т. д. Такие полимеры, главным образом, поперечно сшиты путем формирования дисульфидных связей. Такие полимеры включают и синтетические, и натуральные полимеры, упомянутые ранее, несут сульфгидрильные группы или дисульфидные связи в своей структуре. Сульфгидрильные группы или дисульфидные мостики, как сообщают, или уже существуют, или получены приемлемыми химическими модификациями. Натуральные полимеры, как сообщают, являются предпочтительными и включают альбуминовые белки, олигопептиды, полинуклеиновые кислоты и т. д.

Однако недостаток полимерных мицелл, описанных 8акига1 с1 а1., Уокоуаша с1 а1. и Эсха! с1 а1., заключается в том, что все они используют полимеры, синтетические и натуральные, которые являются биодеградируемыми. Следует упомянуть, что биодеградируемые полимеры, хотя и способны влиять на образец высвобождаемого лекарственного средства, а также на кинетические характеристики высвобождения помещенного лекарственного средства, однако, особенно не желательны в системах доставки лекарственного средства, потому что они:

a) имеют низкое время существования в плазме из-за их быстрого захвата клетками системы мононуклеарных фагоцитов (МР8);

b) не отвечают на физиологические изменения;

c) не имеют последовательных кинетических характеристик высвобождения лекарственного средства, что может причинять экономическую и терапевтическую потерю лекарственных средств и другие неблагоприятные эффекты; и

ά) могут вызывать повышение токсичности или иммуногенности, поскольку инкапсуляция белковых лекарственных средств включает органические растворители, которые могут вызывать денатурацию

- 2 017682 белка.

Применялись системы доставки, где полимеры не являются биодеградируемыми, они раскрыты;

ί) Майга с1 а1. в патенте США 5874111, где лекарственное средство захвачено в полимер, что приводит к формированию высокомонодисперсной полимерной гидрофильной наночастицы. Применяемые полимеры включают мономеры, подобные винилпирролидону (УР) или смеси винилпирролидона и полиэтиленгликольфумарата (РЕСЕ) и т.д.

и) Майга с1 а1. в патенте США 6322817, где применяемые полимеры включают по меньшей мере один тип амфифильного мономера, выбранного из группы, включающей винилпирролидон, акриловую кислоту, алкилакрилаты, имеющие длину цепи С₃-С₆, функционализированный полиэтиленгликоль молекулярного веса от 2000 до 6000, Ν-алкилакриламид, имеющий длину цепи С₃-С₆, и алкилцианоакрилат, имеющий длину цепи С₃-С₆. Лекарственные средства, захваченные в полимерные мицеллы, представляют собой таксановые производные, в частности Паклитаксел.

ϊϊΐ) Бо\\'с с1 а1. в заявке на патент США 2005/0169882, где применяемые полимеры включают эффективный сегмент (который является небиодеградируемым) и биодеградируемый сегмент. Более конкретно, эффективный небиодеградируемый сегмент включает поли(№изопропилакриламид), поли(№ алкилакриламид), поли(№и-пропилакриламид), поли(№изопропилметакриламид), поли(этиленоксид)поли(пропиленоксид)-поли(этиленоксид), подобные эластину полипептиды или его производное, а биодеградируемый сегмент включает полисахарид, декстран, полиэфир, полилактид, поли(Ь-молочную кислоту), поли(О,Ь-молочную кислоту), поли(лактид-ко-гликолиды), биотинилированную поли(этиленгликоль-блок-молочную кислоту) и т.д.

В случае полимеров, раскрытых в патенте США 5874111, следует отметить, что такие полимеры получают путем полимеризации соответствующих мономеров, а полимерный материал, полученный таким образом, очищают и выделяют из водной среды, содержащей его, способом диализа.

В случае полимеров, раскрытых также в патенте США 6322817, полимеры получают путем полимеризации соответствующих мономеров, очищают и выделяют из водной среды путем диализа.

Аналогично, полимеры, раскрытые Бо\\^гс с1 а1. в заявке на патент США 2005/0169882, также очищают и выделяют из водной среды, содержащей их, путем диализа.

По отношению к соединениям или лекарственным средствам, раскрытым Майга с1 а1. в патенте США 5874111, заключаемые в раскрытые там полимеры, это, прежде всего, - антигены, бычья сыворотка и т. д. В случае патента США 6322817, лекарственные средства, заключаемые в раскрытые там полимеры, - это, прежде всего, нерастворимые в воде таксановые производные, особенно Паклитаксел, тогда как Бо\\'с с1 а1. в заявке на патент США 2005/0169882 раскрыли широкое множество лекарственных средств, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, раскрытую там.

В дополнение к вышеупомянутому, Вигтап с1 а1. в патенте США 6365191 предлагают фармацевтическую композицию, включающую полимер, раскрытый в патенте США 6322817, и более конкретно фармацевтическую композицию таксановых производных, особенно Паклитаксела. Здесь указанную фармацевтическую композицию получают путем добавления раствора Паклитаксела в этаноле в инфузионный носитель, включающий раствор декстрозы, к которому добавили раствор полимера в воде, содержащий анионный сурфактант и буферный агент. Вигтап с1 а1., кроме того, заявили, что фармацевтическая композиция стабильна в течение более чем 12 ч без какого-либо осаждения лекарственного средства из перфузионной жидкости, и что более чем 90% лекарственного средства (как проанализировано с помощью НРЬС (высокоэффективная жидкостная хроматография)) захвачено в полимерную мицеллу даже через 24 ч получения перфузионной жидкости.

Несмотря на то, что Вигтап с1 а1. в патенте США 6365191 заявили, что фармацевтическая композиция, раскрытая там, находится в форме наночастиц, однако, в описании отсутствует упоминание относительно размера заявленной формы наночастиц. Единственное упоминание о размере частиц полимерных мицелл, содержащих Паклитаксел, можно найти в раскрытом Майга с1 а1. патенте США 6322817, где указанные наночастицы, содержащие Паклитаксел, как сообщают, имеют диаметр в диапазоне 30-150 нм. Аналогично, нет упоминания о размере частиц полимерных мицелл композиций, раскрытых Бо\\^гс с1 а1. в заявке на патент США 2005/0169882.

Важно отметить, что полимеры, раскрытые в патенте США 5874111; в патенте США 6322817; в патенте США 6365191 и в заявке на патент США 2005/0169882, получают из одного или более мономеров, которые включают винилпирролидон и Ν-изопропилакриламид. Кроме того, важно отметить, что винилпирролидон и Ν-азопропилакриламид являются токсичными соединениями, чье присутствие в фармацевтической композиции, предназначенной для употребления человеком или животным, не только не одобрено Органами Здравоохранения во всем мире, но также находится под строгим соблюдением качества со строгими пределами, установленными всемирными фрамокопейными форумами. Например, уровень мономерного винилпирролидона в полимере, поливинилпирролидона, а также какого-либо другого полимера, содержащего винилпирролидон как мономер, предписанный Фармокопеями Европы и США, не должен превышать предел 0,001% (т. е. <10 ррт).

Существует серьезная опасность, что в способах получения и выделения полимеров, раскрытых в

- 3 017682 патенте США 5874111; в патенте США 6322817; в патенте США 6365191 и в заявке на патент США 2005/0169882, содержащих винилпирролидон в качестве одного из мономеров, указанный мономер, т. е. винилпирролидон, может присутствовать в пределах выше 0,001% (т. е. >10 ррт).

В равной мере существует серьезная опасность, что фармацевтические композиции, содержащие такие полимеры, содержащие винилпирролидон в качестве одного из мономеров, могут также содержать винилпирролидон как мономерный контаминант, и что указанный мономер, т. е. винилпирролидон, может также присутствовать в пределах выше 0,001% (т. е. >10 ррт).

Это могло быть верно, особенно по отношению к фармацевтическим композициям, раскрытым в патенте США 6322817; в патенте США 6365191 и в заявке на патент США 2005/0169882.

Не следует слишком подчеркивать, что какая-либо химическая реакция, включая реакцию получения полимеров, никогда не доходит до конца, в том смысле, что неизменно один или более из реагентов переносится в продукт. Это применимо к реакциям полимеризации, включающим винилпирролидон как мономер и зависящим от молярных или весовых пропорций применяемого винилпирролидона, существует возможность, что некоторое количество винилпирролидона останется, как контаминант, в полимерных продуктах, полученных из него.

В связи с вышеупомянутым, интересы данных изобретателей были найдены верными, где анализ показал, что полимер, полученный полимеризацией трех мономеров, т.е. винилпирролидона (УР), Νизопропилакриламида (ΝΙΡΑΜ) и сложного эфира малеинового ангидрида и полиэтиленгликоля (МРЕС), точно как по описанию в примерах I, II и III патента США 6322817, как выявили, содержит количество Ν-изопропилакриламида (ΝΙΡΑΜ) и винилпирролидона (УР), представленное в табл. I.

Таблица I. Количество остаточных мономеров в полимере, полученном по способу, описанному в примерах I, II и III патента США 6322817

Мономер	% вес/вес, определенный в полимере
ΝΙΡΑΜ	0,066 - 0,076 (660 - 760 ррт)
УР	0,008-0,011 (80- 110 ррт)

Очевидно, что количество винилпирролидона, найденного в полимере по меньшей мере в девять раз больше предела токсичности 0,001% (т. е. 10 ррт), фармацевтическая композиция, содержащая такой полимер, была бы очень опасной и высоко токсичной для введения людям или животным.

Потребность, если не крайняя необходимость, существует не только в полимере, главным образом свободном от токсичных мономеров, таких как Ν-изопропилакриламид (МРАМ) и винилпирролидон (УР), но также в фармацевтических композициях, включающих полимер, которые, главным образом, свободны от токсичных мономерных примесей, таких как Ν-изопропилакриламид (МРАМ) и винилпирролидон (УР).

Можно также отметить, что фармацевтические композиции, раскрытые Вигтап е! а1. в патенте США 6365191, как сообщают, имеют стабильность только около 12 ч или более с 90% или более лекарственного средства, захваченного в полимерную мицеллу, к исходу 24 ч. Кроме того, фармацевтические композиции, раскрытые Ро\\е е! а1. в заявке на патент США 2005/0169882, как сообщают, имеют загруженность биологически активными веществами только приблизительно 40%, с высвобождением биологически активного вещества от нескольких часов до нескольких дней.

Существует дополнительная потребность в фармацевтических композициях, которые имеют более длительную стабильность, а также более высокую загруженность лекарственным средством, и, более того, являются безопасными и менее токсичными.

Данное изобретение является шагом вперед не только в разработке полимера, главным образом свободного от токсичных мономерных примесей, но также в разработке фармацевтической композиции, включающей такой желательный полимер, который является безопасным для введения человеку или животному и имеет более длительную стабильность.

Цели данного изобретения

Цель данного изобретения заключается в обеспечении биологически совместимого и небиодеградируемого полимера высокой чистоты, главным образом свободного от мономерных примесей.

Другая цель данного изобретения заключается в обеспечении способа получения биологически совместимого и небиодеградируемого полимера высокой чистоты, главным образом свободного от мономерных примесей.

Еще одна цель данного изобретения заключается в обеспечении фармацевтических композиций слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, включающих биологически совместимые и небиодеградируемые полимеры высокой чистоты, главным образом свободные от мономерных примесей.

Дополнительная цель данного изобретения заключается в обеспечении способа получения фармацевтических композиций слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, использующих биологически совместимые и небиодеградируемые полимеры высокой чисто

- 4 017682 ты, главным образом свободные от мономерных примесей.

Дополнительная цель данного изобретения заключается в обеспечении фармацевтических композиций наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, включающих биологически совместимые и небиодеградируемые полимеры высокой чистоты, свободные от мономерных примесей, которые безопасны и менее токсичны.

Другой целью данного изобретения является обеспечение высоко селективного способа получения фармацевтических композиций в форме наночастиц, включающих слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения и биологически совместимый и небиодеградируемый полимер высокой чистоты, свободный от мономерных примесей.

Еще одной целью данного изобретения является обеспечение способа введения фармацевтических композиций в форме наночастиц, включающих биологически совместимый и небиодеградируемый полимер высокой чистоты, главным образом свободный от мономерных примесей, пациентам, нуждающимся в этом.

Дополнительная цель данного изобретения заключается в обеспечении фармацевтических композиций в форме наночастиц, включающих биологически совместимый и небиодеградируемый полимер высокой чистоты, свободный от мономерных примесей, которые являются стабильными более продолжительные периоды времени.

Аббревиатуры, применяемые в данном изобретении

УР = винилпирролидон или 1-винилпирролидин-2-он

ΝΙΡΑΜ = Ν-изопропилакриламид

МРЕО = сложный эфир малеинового ангидрида и полиэтиленгликоля

МВ А - НЬР-метилен-Ыз-акриламид

ΤΜΕϋ = тетраметилэтилендиамин

АР8 = аммония персульфат

ЦС8Т = нижняя критическая температура растворения ϋ8Ο = дифференциальная сканирующая калориметрия

ТОА = термогравиметрический анализ

СМС = критическая концентрация мицелл

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1: ¹Н-ЯМР (ядерно-магнитный резонанс) спектр полимера данного изобретения.

Фиг. 2: ¹³С-ЯМР спектр полимера данного изобретения.

Фиг. 3: Спектр преобразования Фурье в инфракрасной области (ИК-Фурье) полимера данного изобретения.

Фиг. 4: Термограмма ТОА полимера данного изобретения.

Фиг. 5: Термограмма Э8С полимера данного изобретения.

Фиг. 6: Фармакокинетический профиль крови [¹⁴С]-меченного полимера данного изобретения.

Фиг. 7: Фотографии окрашенного солохромом и эозином участка мочки уха кролика через 48 ч после подкожного введения 10% раствора декстрозы (Контроль).

Фиг. 8: Фотографии окрашенного солохромом и эозином участка мочки уха кролика через 48 ч после подкожного введения водного раствора полимера данного изобретения.

Фиг. 9: Фотографии окрашенного солохромом и эозином участка краевой вены уха кролика через 24 ч после внутривенного введения 10% раствора декстрозы (Контроль).

Фиг. 10: Фотографии окрашенного солохромом и эозином участка краевой вены уха кролика через 24 ч после внутривенного введения водного раствора полимера данного изобретения.

Фиг. 11: Изображение типичного способа получения и введения пациентам, нуждающимся в этом, фармацевтической композиции в форме наночастиц данного изобретения.

Краткое описание данного изобретения

Выяснили, что можно достичь всех сформулированных целей, которые преодолевают большинство, если не все, ограничения известного уровня техники.

Во-первых, выявили, что можно получить полимер, включающий мономерную единицу ΝΙΡΑΜ и ΥΡ, где количество соответствующих отдельных мономерных примесей в полимере, полученном таким

- 5 017682 образом, ниже допустимых пределов токсичности.

В частности, выявили, что можно получить полимер, включающий ΝΙΡΑΜ, УР и МРЕО как мономерные единицы, который является главным образом свободным от мономерных примесей токсичных ΝΙΡΑΜ и УР. В частности, выявили, что можно получить такой полимер с высокой чистотой, содержащий указанные контаминанты ΝΙΡΑΜ и УР на уровнях много ниже 0,001% вес./вес.

Полимер, имеющий желательные характеристики, можно получить высокоселективным способом, при котором подвергают водный раствор, содержащий полимер, полученный полимеризацией ΝΙΡΑΜ, УР и МРЕО, стадии диафильтрации или ультрафильтрации, в отличие от способов диализа, как поясняется в известном уровне техники.

Такой полимер, полученный способом данного изобретения, превосходящим известные способы, особенно способ, раскрытый в патенте США 6322817, включающий стадию диализа, можно лучше понять из сравнения остаточных мономеров, содержащихся в соответствующих полимерах, как представлено в табл. ΙΙ.

Таблица ΙΙ. Сравнение мономерных примесей, содержащихся в полимере, полученном согласно способу, раскрытому в патенте США 6322817, использующему диализ, по отношению к полимеру, полученному согласно данному изобретению, использующему диафильтрацию

Параметр	Полимер, полученный по способу патента США 6322817	Полимер, полученный по способу данного изобретения
Остаточный ΝΙΡΑΜ	0,066 - 0,076% вес/вес (660-760 ррт)	< 0,001% вес/вес (<10 ррт)
Остаточный УР	0,008 - 0,011% вес/вес (80-110 ррт)	< 0,001% вес/вес (<10 ррт)

Следует отметить, что диализ является способом, который включает медленное отделение меньших молекул от больших молекул или растворенных веществ от коллоидных частиц в растворе путем селективной диффузии через полупроницаемую мембрану. В типичном способе диализа раствор полимера для очистки содержится в полупроницаемой мембране, а растворы с низким молекулярным весом (мономеры) удалены путем добавления чистого растворителя, обычно вода находится вне мембраны. Этот растворитель меняют периодически или непрерывно, пока концентрация способных диффундировать растворов (мономеры, подобные ШРАМ и УР) в раствор, содержащий полимер, не снижается.

В отличие от способа диализа методика диафильтрации включает механический поток жидкости с помощью насоса через мембрану, посредством чего жидкость нагнетается тангенциально (из-за чего диафильтрация также известна как фильтрация тангенциального потока) по поверхности мембраны. Приложенное давление заставляет порцию жидкости диффундировать селективно через мембрану в сторону фильтрата. Оставшиеся полимерные компоненты не накапливаются на поверхности полупроницаемой мембраны.

В отличие от способа диализа, где начальное количество или объем водного раствора полимера, взятого для очистки, остается как таковой/или такой же или становится растворенным в конце или при завершении указанной операции в способе диафильтрации, с другой стороны, поскольку водный раствор полимера захвачен тангенциальным потоком, одновременно дает концентрацию указанного раствора, содержащего полимер, что приводит к еще более концентрированному раствору полимера. Например, если раствор, содержащий приблизительно 100 г полимера в 5,0 л воды, подвергают диализу и диафильтрации, соответственно, в конце первого способа, получают раствор, содержащий 100 г полимера в 4,5-5,5 л воды, тогда как в конце последнего способа снижение концентрации начального объема составляет обычно от одной четвертой до одной шестой (1/4-1/6) начального объема, и в конце получают раствор 100 г полимера в около 0,8-1,3 л воды.

Кроме того, как упоминается выше, в способе диализа растворитель вне мембраны, содержащий раствор полимера, необходимо заменять периодически или непрерывно вручную, тогда как при способе диафильтрации нет необходимости в такой ручной операции периодической или непрерывной замены какого-либо растворителя. Это делает первый способ трудоемким, требующим неавтоматизированного контроля во время операции, тогда как последний способ полностью автоматизирован и регулирован и, следовательно, менее трудоемкий и удобный, не требующий неавтоматизированного контроля во время этой операции.

Кроме того, благодаря способу диафильтрации, действующему в закрытой среде, по сравнению со способом диализа, который действует в открытой среде, какая-либо возможность микробной контаминации является минимальной или не существует в первом способе, и он поэтому квалифицируется как операция в асептических условиях, соответствующих не только Правилам организации производства и контроля качества лекарственных средств, а также соответствующих Нормативным рекомендациям во всем мире.

- 6 017682

Кроме того, благодаря не только использованию ручной операции, а также неотъемлемому принципу, при котором работает способ диализа, временной цикл единичной операции является длительным и обычно занимает около 24-36 ч. Для сравнения, для способа диафильтрации, благодаря неотъемлемому принципу, при котором он работает, нужен очень короткий временной цикл, и для завершения обычно нужно менее одного часа. Говоря другими словами, способ диафильтрации по меньшей мере в двадцать пять (25) раз быстрее, чем способ диализа и поэтому промышленно более приемлемый.

В то время как способ диализа предусматривает довольно длинный временной цикл для операции и завершения, другим присущим недостатком указанного способа является то, что он позволяет очистить только небольшой объем/количество раствора полимера. Такие ограничения не касаются способа диафильтрации, и вообще он позволяют очистить больший объем/количество раствора по меньшей мере приблизительно в 4-5 раз. Например, если способом диализа можно очистить раствор 100 г полимера в 5,0 л воды в одном цикле, способом диафильтрации можно очистить в одном цикле от 400 до 500 г полимера в 20,0-25,0 л воды. Излишне упоминать, что большая обрабатывающая способность способа диафильтрации является дополнительным преимуществом вдобавок к другим, уже обсуждаемым выше, т. е. меньшее время операции, автоматизация и регуляция операции, удобство и меньшая трудоемкость, конкурентная концентрация или снижение объема исходного раствора, соответствующее правилам организации производства и контроля качества лекарственных средств и нормативным рекомендациям, минимальная или отсутствующая микробная контаминация и т. д.

Однако, как упоминалось и обсуждалось выше, наиболее важным преимуществом способа диафильтрации над способом диализа является чистота полимера, полученного соответствующими способами, первый способ производит полимер, главным образом, свободный от мономерных примесей и, поэтому, нетоксичный и безопасный для потребления человеком/животным [см. Таблицу II].

Последнее, но не наименьшее, характерное преимущество способа диафильтрации заключается в том, что если полимер требуется/необходимо выделить в твердой форме из раствора путем выпаривания растворителя, например, с помощью лиофилизации, тогда благодаря указанному способу, приводящему к снижению концентрации или исходного объема раствора полимера, обычно до от около одной четвертой до одной шестой (1/4-1/6) исходного объема, временной цикл выпаривания/лиофилизации будет также сильно сокращен. В способе диализа, поскольку не происходит снижение концентрации или исходного объема, если полимер требуется/необходимо выделить в твердой форме из раствора, временной цикл выпаривания/лиофилизации будет много длиннее.

Вкратце, способ диафильтрации по сравнению со способом диализа легко расширяется для крупного производства, соответствующего правилам организации производства и контроля качества лекарственных средств, и, поэтому, промышленно более целесообразный и благоприятный.

Существенные различия между способами диафильтрации и диализа приведены в табл. III для быстрой ссылки.

В то время как до некоторой степени методика диафильтрации или ультрафильтрации применяется для различных очисток, однако не сообщается о ее применении в области полимеров и формируется новый и изобретательский аспект данного изобретения.

Кроме того, данное изобретение далее охарактеризовало полимер высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей, полученный таким образом, различными спектроскопическими способами, такими как ¹Н-ЯМР (ядерно-магнитный резонанс), ¹³С-ЯМР и преобразование Фурье в инфракрасной области (ИК-Фурье), и определило его структуру (I), как показано ниже.

Кроме того, на основании исследований с радиомеченным полимером на самцах швейцарских мышей-альбиносов, как будет очевидно из деталей, приведенных в дальнейшей части данного описания [см. табл. VI и VII и фиг. 6], выявили, что полимер данного изобретения является небиодеградируемым и быстро выделяется из организма без отложения и нарушения в жизненно важных органах, и предложили безопасность и выгоду полимера для использования человеком/животным.

- 7 017682

Таблица III. Сравнение способов диализа и диафильтрации по отношению к очистке водного раствора полимера данного изобретения

Параметр	Способ диализа	Способ диафильтрации
Размер партии	Лимитированный и, следовательно, ограниченный (например, 100 г полимера в 5,0 л воды)	Можно обработать, по меньшей мере, в 4 - 5 раз больший объем/количество (например, 400 - 500 г полимера в 20,0 - 25,0 л воды)
Условия обработки	Открытая среда	Закрытая среда
Время обработки	Длительное (24 - 36 часов)	Более короткое (< 1 часа)
Операция и преимущество	Ручная; трудоемкая; менее удобная	Автоматизированная и управляемая; менее трудоемка; очень удобная
Микробная контаминация	Высокая вероятность	Минимальная или непроявляющаяся
Снижение концентрации исходного объема раствора	Отсутствует	От около одной четвертой до одной шестой (1/4 -1/6)
Временной цикл лиофилизации раствора	Длительный (90 -110% исходного объема, подлежащего лиофилизации)	Более короткий (только 15 25% исходного объема, подлежащего лиофилизации)
Мономерная контаминация	Очень высокая	Ниже фармакопейных и токсичных пределов
Масштабность и промышленная воспроизводимость	Затрудненная; менее целесообразная	Легко расширяется; соответствие правилам организации производства и контроля качества лекарственных средств; высоко целесообразная

Кроме того, на основе обширных исследований токсичности, таких как локализованная токсичность (подкожная и внутривенная), дозовая токсичность целевых органов до 800 мг/кг веса животного организма, токсичность шестимесячной циклической дозы и т.д., как будет очевидно из деталей, приведенных в дальнейшей части данного описания [см. фиг. 7-10], обнаружили, что полимер данного изобретения является нетоксичным, биологически совместимым и биологически безопасным для применения в создании фармацевтических композиций, предназначенных для применения и введения человеку/животному.

Кроме того, обнаружили, что полимер данного изобретения, который является высокочистым и главным образом свободным от мономерных примесей и, кроме того, является биологически совместимым, небиодеградируемым, безопасным и нетоксичным, особенно пригодный для получения фармацевтических композиций, включающих указанный полимер в форме наночастиц вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями, которые, в свою очередь, безопасны и менее токсичны для применения человеком/животным и/или введения.

Особенно, биологически совместимый, небиодеградируемый, безопасный и нетоксичный полимер данного изобретения, как обнаружили, заключает полностью или почти полностью в свою полимерную оболочку множество слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, где указанные слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения находятся в форме наночастиц с размером частиц от 30 до 150 нм.

- 8 017682

В частности, обнаружили, что полимер данного изобретения можно применять для получения фармацевтической композиции в форме наночастиц, вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями, захватывающими множество слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений полностью или почти полностью в свою полимерную оболочку. Такие слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения имеют растворимость в воде менее 10 мг/мл. Примеры таких слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений включают, но не ограничиваются, противораковые агенты, противовоспалительные агенты, противогрибковые агенты, противорвотные средства, противогипертензивные агенты, половые гормоны, стероиды, антибиотики, иммуномодуляторы, анестезирующие средства и т. д. Типичными примерами противораковых агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, являются Паклитаксел, Доцетаксел и другие родственные таксановые производные; Иринотекан, Топотекан и другие родственные Кампотециновые производные; Доксорубицин, Дауномицин и родственные антрациклиновые производные; Цисплатин; Оксалиплатин; 5-Фторурацил; Митомицин; Метотрексат; Этопосид; бетулиновая кислота и ее производные и Веделолактон и его производные. Типичные примеры противовоспалительных агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Индометацин, Ибупрофен, Кетопрофен, Флубипрофен, Пироксикам, Теноксикам и Напроксен. Типичные примеры противогрибковых агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Кетоконазол и Амфотерицин В. Типичные примеры половых гормонов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Тестостерон, Эстроген, Прогестерон и Эстрадиол. Типичные примеры стероидов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Дексаметазон, Преднизолон и Триамцинолон. Типичные примеры противогипертензивных агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Каптоприл, Рамиприл, Теразозин, Миноксидил и Празозин. Типичные примеры противорвотных средств, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Ондансетрон и Гранисетрон. Типичные примеры антибиотиков, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Метронидазол и фусидовую кислоту. Типичные примеры иммуномодуляторов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Циклоспорин и бифенилдиметилдикарбоновую кислоту. Типичные примеры анестезирующих средств, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Пропофол, Альфаксалон и Гексобарбитал.

Выявили, что по отношению к противораковым агентам, в частности, полимер данного изобретения способен заключать полностью в свою полимерную оболочку слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения, подобные Паклитакселу, Доцетакселу, Этопосиду и различным производным бетулиновой кислоты, обозначенным как ΜΙ-1098, ΌΚΤ-4012 и ΌΚΤ-4015, имеющим следующие структуры (II), (III) и (IV), которые, в свою очередь, раскрыты в патенте США 6403816 и заявке на патент Индии № 265/ΌΕΕ/2005, поданной 09 февраля 2005 г.

- 9 017682

Фармацевтические композиции в форме наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, упомянутых выше, и особенно фармацевтические композиции в форме наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, подобных Паклитакселу, Доцетакселу и Этопосиду, и сильнодействующих противораковых соединений, подобных ΜΙ-1098, ΌΚΕ-4012 и ΌΚΕ-4015, упомянутым выше, как выявили, имеют более длительную стабильность более 24 ч по сравнению с фармацевтической композицией наночастиц Паклитаксела, полученной по способу Вигтап е! а1., раскрытому в патенте США 6365191, которая, как заявлено в указанном патенте, имеет стабильность только 12 ч. Что касается выражения стабильность, его следует рассматривать как обозначение периода, измеряемого в часах, где слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение остается в растворе в фармацевтической композиции, включающей его, без какого-либо осаждения лекарственного средства или соединения из него.

Кроме того, в фармацевтических композициях в форме наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, упомянутых выше, и особенно в фармацевтических композициях в форме наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, подобных Паклитакселу, Доцетакселу и Этопосиду, и сильнодействующих противораковых соединений, подобных ΜΙ 1098, ΌΚΕ 4012 и ΌΚΕ 4015, упомянутых выше, указанные лекарственные средства или соединения, как выявили, захвачены в полимерную мицеллу до более 95% даже через 24 ч. Для сравнения, в фармацевтической композиции в форме наночастиц Паклитаксела, полученного по способу Вигтап е! а1., раскрытому в патенте США 636519, лекарственное средство, как обнаружили, захвачено в полимерную мицеллу только до 90% даже через 24 ч.

Сравнение фармацевтических композиций слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, включающих полимер высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей данного изобретения, с фармацевтической композицией Паклитаксела, также в форме наночастиц, как раскрыто в патенте США 6365191, будет очевидно из сравнения, приведенного в табл. IV.

- 10 017682

Таблица IV. Сравнение фармацевтической композиции слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений данного изобретения по отношению к фармацевтической композиции, раскрытой в патенте США 6365191

	Детали	Раскрытие содержащихся в патенте США 6365191	Данное изобретение
1	Рассматриваемые слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения	Таксановые производные, особенно Паклитаксел	Множество лекарственных средств и соединений
2	Полимер, применяемый в фармацевтической композиции	Включение ΝΙΡΑΜ, УР, и МРЕСг мономерных единиц	Включение ΝΙΡΑΜ, УР, и МРЕСг мономерных единиц
3	Мономерные контаминанты, присутствующие в полимере	ΝΙΡΑΜ : 0,066 - 0,076% вес/вес УР :0,008-0,011% вес/вес	ΝΙΡΑΜ : <0,001% вес/вес УР : < 0,001% вес/вес
4	Размер наночастиц в фармацевтической композиции	Не определен	30 - 150 нм
4	Стабильность	Около 12 часов	>24 часов
5	Захват лекарственного средства в полимерную мицеллу через 24 часа	90%	>95%

В дополнение к преимуществам не только полимера высокой чистоты и главным образом свободного от мономерных примесей, полученного по способу данного изобретения, а также преимуществам фармацевтических композиций слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, включающих полимер данного изобретения, над полимерами и фармацевтическими композициями предшествующего уровня техники, как обсуждалось в деталях выше, данное изобретение, кроме того, представляет высокоселективный способ получения фармацевтических композиций слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, где указанное слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение, захваченное в полимерную оболочку применяемого здесь полимера, получено в форме наночастиц соответствующего размера. Этот высокоселективный способ формирует другой аспект данного изобретения.

В первую очередь, следует отметить, что из описания, содержащегося в примерах 1-40, и приведенного под заголовком Предпочтительная композиция и Формуляция для инфузии в патенте США 6365191 Вигтап е! а1., фармацевтическую композицию Паклитаксела, очевидно, получают сначала растворением необходимого количества полимера в необходимом количестве растворяющей жидкости (обычно 5 или 10% раствор декстрозы) с последующим добавлением анионного сурфактанта для получения прозрачного раствора, рН которого факультативно регулируют буферным агентом. К полученному прозрачному раствору полимера и анионного сурфактанта в растворяющей жидкости затем добавляют спиртовой раствор Паклитаксела для получения концентрации лекарственного средства, изменяющейся от 0,1 до 10 мг/мл, которое, как заявлено, в основном представляет собой фармацевтическую композицию в форме наночастиц, пригодную для введения.

Как упоминается выше, в то время как в патенте США 6365191 ничего не сказано о размере наночастиц, полученных таким образом, тем не менее, оказалось, производятся или даются несоответствующие размеры наночастиц в работе данных изобретателей в их попытках получить фармацевтическую композицию Паклитаксела по способу, описанному в примерах 1-40 и под заголовком Предпочтительная композиция и Формуляция для инфузии в патенте США 6365191 Вигтап е! а1.

На этом фоне данное изобретение показывает, что образование наночастиц соответствующих размеров высокоселективно и в большей степени зависит от:

ΐ) скорости, с которой спиртовой раствор Паклитаксела добавляют в раствор полимера и других наполнителей в растворяющей жидкости;

ΐΐ) объема спиртового раствора Паклитаксела и объема растворяющей жидкости, к которому добавляют предыдущее;

ΐΐΐ) внутреннего диаметра или размера просвета иглы, через которую спиртовой раствор Паклитаксела добавляют в раствор полимера и фармацевтически приемлемые наполнители в растворяющей жидкости; и ΐν) положения контейнера, который содержит растворяющую жидкость, полимер и фармацевтически приемлемые наполнители во время добавления спиртового раствора Паклитаксела.

- 11 017682

В частности, обнаружили, что только через:

a) добавление спиртового раствора Паклитаксела через шприц в раствор полимера и других наполнителей в растворяющей жидкости в определенный период времени;

b) использование иглы, имеющей внутренний диаметр от 0,305 до 0,356 мм, для добавления меньшего объема спиртового раствора Паклитаксела в раствор полимера и фармацевтически приемлемых наполнителей в растворяющую жидкость или

c) использование иглы, имеющей внутренний диаметр от 0,559 до 0,711 мм, для добавления большего объема спиртового раствора Паклитаксела в раствор полимера и фармацевтически приемлемых наполнителей в растворяющей жидкости;

6) инъекцию спиртового раствора Паклитаксела в раствор полимера и других наполнителей в растворяющей жидкости, где игла шприца, через который спиртовой раствор Паклитаксела добавляют, должна остаться погруженной в раствор растворяющей жидкости; и

е) факультативно, удерживание контейнера, содержащего указанную растворяющую жидкость, в перевернутом положении во время инъекции спиртового раствора Паклитаксела в раствор полимера и других наполнителей в растворяющей жидкости, будет достигнуто получение наночастиц соответствующего размера с минимальной или незначительной вариацией размера и соответствующий ввод лекарственного средства в полимерную оболочку. Кроме того, только с помощью селективного способа обнаружили, что можно достичь более продолжительной стабильности фармацевтической композиции.

Кроме того, обнаружили, что упомянутый выше высокоселективный способ не ограничен только получением наночастиц Паклитаксела, а также равно эффективный в получении наночастиц соответствующего размера других слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, особенно Доцетаксела, Этопосида, бетулиновой кислоты, сильнодействующих противораковых производных бетулиновой кислоты, подобных М1-1098 формулы (II), ΌΚΕ-4012 формулы (III), ΌΚΕ-4015 формулы (IV), рассмотренных выше.

В частности обнаружили, что если время добавления меньшего объема, приблизительно от 1 до 5 мл раствора слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения в раствор (около 35 раз инъецированного объема) полимера и других наполнителей в растворяющей жидкости, превышает 4 с, или если внутренний диаметр иглы (через которую вводят раствор слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения) находится вне диапазона 0,305-0,356 мм, тогда такое добавление приводит к получению несоответствующего размера наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, а также дает фармацевтическую композицию обладающую слабой стабильностью, из-за чего раствор не остается прозрачным в течение более продолжительных периодов времени, а становится матовым в более короткие промежутки времени.

Аналогично, в частности обнаружили, что если время добавления большего объема приблизительно от 5 до 15 мл раствора слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения в раствор (около 35 раз инъецированного объема) полимера и других наполнителей в растворяющей жидкости превышает 10 с, или если внутренний диаметр иглы (через которую вводят раствор слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения) находится вне диапазона 0,559-0,711 мм, тогда такое добавление приводит к получению несоответствующего размера наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, а также дает фармацевтическую композицию, обладающую слабой стабильностью, из-за чего раствор не остается прозрачным в течение более продолжительных периодов времени, а становится матовым в более короткие промежутки времени.

Примером могут служить фармацевтические композиции двух слабо растворимых в воде противораковых лекарственных средств или соединений, т.е. Паклитаксела и производного бетулиновой кислоты, ΌΚΕ-4012 формулы (III), где эффект времени добавления раствора указанных лекарственных средств и внутренние диаметры игл, через которые такие растворы добавляют в раствор полимера и фармацевтически приемлемых наполнителей в растворяющей жидкости, приведены в табл. V.

Фармацевтическая композиция данного изобретения традиционно представлена как набор из двух ампул:

a) одна включает раствор слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения в водорастворимом растворителе или их смесей при приемлемой концентрации указанного лекарственного средства и

b) другая включает раствор полимера данного изобретения, высокой чистоты и главным образом свободного от мономерных примесей, вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями в водном растворителе, обычно вода для инъекции, обе ампулы являются стерильными и произведены и укупорены в асептических условиях.

Содержимое двух ампул затем добавляют в растворяющую жидкость перед введением людям/животным.

Факультативно, набор, кроме того, может включать растворяющую жидкость, шприц и иглу с внутренним диаметром в диапазоне от 0,305 до 0,356 мм, если объем небольшой, приблизительно 1-5 мл содержимого ампулы а) нужно добавить к около 35-кратному объему содержимого ампулы Ь), или шприц

- 12 017682 и иглу с внутренним диаметром в диапазоне от 0,559 до 0,711 мм, если объем больше, приблизительно 10-15 мл содержимого ампулы а) нужно добавить к около 35-кратному объему содержимого ампулы Ь).

Особенно в случае набора, включающего Паклитаксел, для введения пациентам для лечения рака молочной железы, набор из двух ампул включал бы:

a) одну ампулу, содержащую раствор 400 мг Паклитаксела в 20 мл этанола;

b) другую, содержащую раствор, включающий 200 мг полимера данного изобретения, высокой чистоты и главным образом свободного от мономерных примесей, вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями в 20 мл воды, и факультативно, набор, кроме того, может включать 500 мл сосуд 10% раствора декстрозы, шприц и иглу с внутренним диаметром 0,711 мм для инъекции раствора ампулы а) в 500 мл сосуд 10% раствора декстрозы, в который добавляют раствор ампулы Ь) в период времени, не превышающий 10 с, предпочтительно в период времени 6 с, для получения фармацевтической композиции, пригодной для введения в наночастицы соответствующего размера, с минимальной или незначительной вариацией размера и соответствующим вводом лекарственного средства в полимерную оболочку, и более продолжительной стабильности.

Таблица V. Эффект времени добавления раствора слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений и внутреннего диаметра игл, через которые такие растворы добавляют в раствор полимера и других наполнителей в растворяющей жидкости

Наблюдения/Резуль-

Прозрачный

Матовый

Слегка матовый

Очень слабо матовый

Слегка матовый

Паклитаксел/Этанол (1 мл)

Паклитаксел/Этанола (1 мл)

Паклитаксел/Этанола (1 мл)

Паклитаксел/Этанола (1 мл)

Паклитаксел/Этанола (1 мл)

- 13 017682

6	Паклитаксел/Этанола (1 мл)	0,467	6 сек./§: 5 мл	280	<2	Сильно матовый
7	Паклитаксел/Этанола (1 мл)	0,711	6 сек./§: 5 мл	285	<2	Высоко матовый
8	Паклитаксел/Этанола (1 мл)	1,270	6 сек./& 5 мл	230 0	<0,5	Молочный
9	ϋΚΡ-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	0,305	3 сек./& 5 мл	70	>24	Прозрачный
10	ОКГ-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	0,465	2 сек./§> 5 мл	90	20	Очень слабо матовый
11	ϋΚΓ-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	0,711	2 сек./З; 5 мл	100	<10	Слегка матовый
12	ЭК.Г-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	1,270	2 сек./З 5 мл	130	<6	Матовый
13	ϋΚΡ-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	0,305	6 сек./З 5 мл	200	<6	Слегка матовый
14	ΌΚΡ-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	0,467	6 сек./З 5 мл	200	<4	Сильно матовый
15	ϋΚΡ-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	0,711	6 сек./З 5 мл	240	<2	Сильно матовый
16	ϋΚΓ-4012 формулы (Ш)/Этанола (1 мл)	1,270	6 сек./З 5 мл	810 0	<0,5	Молочный
17	Паклитаксел/Этанола (15 мл)	0,711	10 сек ./-500 мл	85	>24	Прозрачный
18	Паклитаксел/Этанола (15 мл)	0,711	15 сек./~500 мл	150	<15	Слегка матовый
19	Паклитаксел/Этанола (15 мл)	0,330	18 сек./»500 мл	50	20	Прозрачный

В итоге, данное изобретение, как упоминается выше, является шагом вперед в обеспечении решения большинства, если не всех, ограничений способов известного уровня техники в области технологии наночастиц и предусматривает:

ΐ) полимер, включающий три мономерных единицы, выбранных из ΝΙΡΑΜ, УР и МРБО, высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей с уровнем токсичных ΝΙΡΑΜ и УР в полимере <0,001%; который, более того, как установлено биологически совместимый, небиодеградируемый, безопасный и нетоксичный для применения человеком/животным;

ίί) высокоселективный способ получения полимера, включающего три мономерные единицы, выбранные из ΝΙΡΑΜ, УР и МРБО, высокой чистоты и главным образом свободного от мономерных примесей с уровнем токсичных ΝΓΑΜ и УР в полимере <0,001%, при котором подвергают водный раствор полимера, полученный таким образом, диафильтрации;

ίίί) фармацевтическую композицию слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, включающую полимер высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями, который является безопасным и нетоксичным и, следовательно, высоко приемлемым для применения человеком/животным или введения;

ΐν) высокоселективный способ получения фармацевтической композиции слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, включающей полимер высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями, имеющий соответствующий размер наночастиц, и введенное соответствующее лекарственное средство; и

ν) фармацевтическую композицию слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, включающую полимер высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями, имеющий соответствующий размер наночастиц с более высоким вводом лекарственного средства и более продолжительной стабильностью.

Детальное описание данного изобретения

А. Получение полимера данного изобретения

Полимер данного изобретения включает три мономерные единицы, выбранные из ΝΓΑΜ, УР и ΜΡΕΘ, где полимерные цепи поперечно сшиты поперечно-сшивающим агентом, который не содержит какие-либо сульфгидрильные группы или дисульфидные связи.

Поперечно-сшивающий агент играет важную роль во время полимеризации, обеспечивая поперечные связи в линейных полимерных цепях, и, в общем, представляет собой дифункциональное виниловое

- 14 017682 соединение, когда бы не использовался. Он может быть более чем дифункциональным, т. е. может иметь более чем два реакционных участка. Дифункциональное виниловое соединение, которое можно успешно применять, представляет собой Ν,Ν'-метилен-бис-акриламид (МВА), являющийся предпочтительным.

Полимер данного изобретения можно получить общими способами, обычно адаптированными для реакций полимеризации.

В конкретном варианте осуществления полимер данного изобретения можно получить, подвергая мономеры Ν-изопропилакриламид (ΝΙΡΑΜ), 1-винил-2-пирролидон (УР) и полиэтиленгликоль (молекулярный вес 6000) сложный эфир малеинового ангидрида (МРЕС) свободнорадикальной полимеризации в присутствии активатора, инициатора полимеризации и поперечно сшивающего агента в водной среде.

Комбинацию мономеров, Ν-изопропил акриламида (ΝΙΡΑΜ) и винилпирролидона (УР), можно применять в весовом соотношении от 55:22 до 65:35, в то время как комономерная композиция (ΝΙΡΑΜ + УР): МРЕС, которую можно применять, находится в диапазоне от 80:20 до 95:5. Более конкретно и предпочтительно комбинацию мономеров Ν-изопропилакриламида (ИГРАМ) и винилпирролидона (УР) применяют в весовом соотношении от 58:32 до 62:28, а комономерную композицию (ИГРАМ + УР): МРЕС применяют в диапазоне 90:10 или 95:5, который, как выяснили, придает желательную биосовместимость, небиодеградируемость и биологически безопасный профиль полимерам по причине того, что это конкретное соотношение соответственно приводит к формированию свободно гиперразветвленной кополимерной единицы NIΡΑΜ и УР, которая стабилизирована покрытием внешней оболочки, сформованной из водородного связывания с помощью диэфирного аддукта (мажор) и моноэфирного аддукта (минор) малеинового ангидрида - полиэтиленгликоля (МРЕС).

Инициаторы полимеризации играют важную роль в инициации свободнорадикального формирования. Инициаторами, которые можно применять, могут быть пероксидные соединения, такие как диацил пероксид, бензоил пероксид, диацетил пероксид, диалкил пероксиды, третичный бутил пероксид и третичный амил пероксид, или инициаторы полимеризации на основе нитрила, такие как 2,2'-азо-бисизобутиронитрил (ΑΙΒΝ), или инициаторы полимеризации на основе неорганической соли, такие как аммония пердисульфат или аммония персульфат (АР8), применяемые или отдельно, или в комбинации.

Среди вышеупомянутых инициаторов полимеризации предпочтительным является аммония персульфат (АР8).

Хотя инициаторы полимеризации инициируют полимеризацию, однако реакция полимеризации, как находят, ускоряется присутствием активирующих агентов (часто известных как активаторы), которые катализируют формирование свободных радикалов из инициаторов полимеризации. Такие активаторы можно выбрать из тетраметилэтилендиамина (ТМЕЭ) и аммония-железа сульфата (ЕА8), из которых комбинация ТМЕЭ и ЕА8 является предпочтительной. Для реакции полимеризации можно применять какую-либо комбинацию инициатора полимеризации и активатора. Можно также применять два или более инициаторов. Аналогично, можно применять два или более активатора.

Как упоминается выше, поперечно-сшивающий агент играет важную роль во время полимеризации, обеспечивая поперечные связи в линейных полимерных цепях, и, в общем, представляет собой дифункциональное виниловое соединение, когда бы не использовался. Он может быть более чем дисфункциональным, т.е. может иметь более чем два реакционных участка. Дисфункциональным виниловым производным, которое предпочтительно можно применять, является Ν,Ν'-метилен-бис-акриламид (МВА).

Полимеризацию выполняют в присутствии инертного газа, который может быть азотом или аргоном.

Обычно реакцию полимеризации выполняют, во-первых, растворяя приемлемые количества соответствующих мономеров, т.е. Ν-изопропилакриламида (NIΡΑΜ), 1-винил-2-пирролидона (УР) и полиэтиленгликоля (молекулярный вес 6000) сложного эфира малеинового ангидрида (МРЕС) в водном растворителе, которым обычно является вода. К водному раствору соответствующих мономеров, полученных таким образом, добавляют последовательно водный раствор поперечно сшивающего агента и активатора. Раствор деаэрируют путем барботирования инертного газа на протяжении около 30-60 мин. К деаэрированному раствору добавляют водный раствор инициаторов полимеризации и раствор подвергают полимеризации при температуре от 25 до 45°С, предпочтительно при температуре от 25 до 35°С при непрерывном барботировании инертным газом, пока не завершится полимеризация.

Поперечно-сшивающий агент можно применять в количествах в диапазоне 1,3-1,5% вес./вес. общего содержания мономеров и более предпочтительно в диапазоне 1,35-1,4% вес./вес. общего содержания мономеров.

Активаторы можно применять в количествах в диапазоне 15-18% вес./вес. общего содержания мономеров и более предпочтительно в диапазоне 15-16% вес./вес. общего содержания мономеров.

Инициатор полимеризации можно применять в количествах в диапазоне 20-30% вес./вес. общего содержания мономеров и более предпочтительно в диапазоне 23-25% вес./вес. общего содержания мономеров.

Ход реакции полимеризации наблюдают с помощью НРЬС, и обычно реакция занимает около 3-6 ч.

После завершения реакции полимеризации раствор подвергают фильтрации через предварительно стерилизованные одноразовые 0,2 мкм капсульные фильтры с полиэфирсульфоновой мембраной 1, раз

- 15 017682 мер пор 0,8 и 0,2 мкм; Туре ΌΡ8-5101ΆΆ-201 (изготовленные М/8 Лйуапеей М|сгойсу1СС5 Ρνΐ. Ы4, Индия). Фильтрованное содержимое реакционного сосуда подвергают диафильтрации с помощью устройства диафильтрации РгоДих М12 (М1Шроге) для удаления мономерных примесей и других низкомолекулярных примесей.

Диафильтрация обычно длится менее чем один час и обычно дает не только раствор, главным образом свободный от мономерных примесей, а также в концентрированной форме, обычно от одной четвертой до одной шестой (1/4-1/6) исходного объема раствора, подвергнутого диафильтрации. Если необходимо, концентрированный раствор, полученный таким образом, который главным образом свободный от мономерных примесей, можно подвергнуть другому циклу диафильтрации. Концентрированный раствор полимера данного изобретения высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей можно подвергнуть стадии лиофилизации для получения полимера в твердой лиофилизованной форме для применения в фармацевтических композициях, или концентрированный раствор, как таковой, можно непосредственно применять для формуляции указанных фармацевтических композиций.

В типичном варианте осуществления реакцию полимеризации выполняют, растворяя приемлемое количество соответствующих мономеров, т.е. Ν-изопропилакриламида (ΝΤΡΑΜ), 1-винил-2-пирролидона (νΡ) и полиэтиленгликоля (молекулярный вес 6000) сложного эфира малеинового ангидрида (МРЕС), в воде. К водному раствору соответствующих мономеров, полученному таким образом, добавляют приемлемый объем водного раствора (около 5% вес./об.) поперечно-сшивающего агента, Ν,Ν'-метилен-бисакриламида (около 1,37% вес./вес. общего содержания мономеров) и комбинацию активаторов, включающую приемлемый объем тетраметилэтилен диамина (ТМЕЭ. около 15,4% вес./вес. общего содержания мономеров) и водный раствор (0,5% вес./об.) аммония-железа сульфата (около 0,1% вес./вес. общего содержания мономеров). Предпочтительно добавлять сначала один из активаторов, а другой вместе с инициатором полимеризации, который добавляют позже. Раствор деаэрируют барботированием азота в течение около 30 мин. К деаэрированному раствору добавляют приемлемый объем водного раствора (около 80% вес./об.) инициаторов полимеризации, аммония персульфат (около 24% вес./вес. общего содержания мономеров), а раствор подвергают полимеризации при температуре предпочтительно от 25 до 35°С при непрерывном барботировании азотом, пока не завершится полимеризация. Обычно реакция полимеризации занимает 3-5 ч.

После завершения реакции полимеризации раствор подвергают фильтрации через предварительно стерилизованный, одноразовый 0,2 мкм капсульный фильтр с полиэфирсульфоновой мембраной 1 (размер пор 0,8 + 0,2 мкм). Фильтрованное содержимое реакционного сосуда подвергают диафильтрации для удаления мономерных примесей и других низкомолекулярных примесей.

В типичном варианте осуществления раствор полимера в воде при концентрации приблизительно 1 г в 50 мл можно было бы подвергнуть диафильтрации, вследствие чего после диафильтрации получают концентрированный раствор полимера от около одной четвертой до одной шестой (1/4-1/6) исходного объема, приблизительно 1 г полимера в около 12-13 мл воды, который содержит менее чем 0,001% вес./вес. и NIΡΑΜ, и νΡ.

Определение количества остаточных мономеров, особенно остаточных νΡ и ИГАМ, в полимере выполняют с помощью ΗΡΕΟ. Системой ΗΡΕΟ, которую можно использовать для определения мономеров, являются серии АдПеп1 1100 или эквиваленты, использующие колонки обратной фазы ΡΡ-18 (С-18) [ЫсЬгозрЕег ΚΡ-18е, 5μ, 250 мм х 4 мм]. Используемой подвижной фазой является смесь воды и ацетонитрила в соотношении 80:20 при скорости потока 1 мл/мин с инъекционным объемом образца 50 мкл.

Время разгонки составляет 10 мин, колоночная температура составляет 30°С, а длина волны детектора составляет 226 нм.

При описанных выше условиях ИГАМ имеет время удержания около 3 мин, тогда как время удержания νΡ составляет около 5 мин.

Концентрированный раствор полимера, полученный таким образом, является высоко чистым и главным образом свободным от мономерных примесей, его можно подвергнуть стадии лиофилизации для получения полимера в твердой лиофилизованной форме для применения в фармацевтических композициях или концентрированный раствор, как таковой, можно непосредственно применять для формуляции указанной фармацевтической композиции. Предпочтительно применять концентрированный раствор полимера, как таковой, для формуляции в фармацевтических композициях.

В. Характеристика полимера данного изобретения

Полимер данного изобретения, полученный упомянутым выше способом, подвергают экстенсивному спектроскопическому анализу, такому как ^!Н-ЯМР, ¹³С-ЯМР, преобразование Фурье в инфракрасной области (ИК-Фурье), и термальному анализу, такому как дифференциальная сканирующая калориметрия (Э8С) и термогравиметрический анализ (ТСА) и т.д., для выяснения структуры полученного таким образом полимера.

¹Н-ЯМР спектр полимера данного изобретения в СЭС1₃, показывает пики при δ (ррт) 1,14 (Ьг, -СН (СН₃)2); 1,45 (Ьг, -СН-СН^-Кольцо); 1,63 (Ьг, -СН2-СНС(=О)ИН); 1,99 (Ьг, -СНС(=О)ИН-), СН (νΡ кольцо), 2,36 (СН₂, νΡ кольцо), 3,0 (-О-СН₂-СН₂-), 3,23 (СН₂-И-); 3,62-3,66 (Вг, СН₂, ΜΡЕ6); 3,72 (ΝΗ

- 16 017682

СН(СН₃)₂); 3,97 (Вг, СН). ¹Н-ЯМР спектр полимера данного изобретения приведен на фиг. 1.

¹³С-ЯМР спектр полимера данного изобретения показывает пики при δ (ррт) 174 (С=О); 76,6-77,6 (мультиплет для СЭС1₃ и СН для полимерного скелета); 70,6 (СН₂ МРЕО); 41,6 (СН для изопропиловой единицы); 31,8 (СН₂, полимерный скелет); 22,6 (СН₃, изопропил). С-ЯМР спектр полимера данного изобретения приведен на фиг. 2.

Преобразование Фурье в инфракрасной области (ИК-Фурье) спектра полимера данного изобретения показывает пики при следующих значениях частот (см^-1) 3500 (§, ОН); 3296 (§, ΝΗ, §ее-амид); 2972-2933 (§, СН, СН₂, СН₃); 1651 (Ьг, сильные, раздвоенные пики сложного эфира С=О и С=О амида I); 1546 (§, ΝΗ изгиб амида II и возможно С=О свободной кислоты, минор); 1387, 1367 (дуплет изопропиловой группы, СН₃, деформация); 1172-1129 (т, О-С-О). Преобразование Фурье в инфракрасной области (ИК-Фурье) спектра полимера данного изобретения приведен на фиг. 3.

Эти изучения характеристик подтверждают, что полимер данного изобретения имеет структуру, которая ниже изображена как формула (I).

Кроме того, для характеристики физико-химических свойств полимера в деталях, оценивали различные свойства полимера, такие как термические свойства, критическая мицеллиальная концентрация (СМС), растворимость и рН, стабильность при хранении.

Термогравиметрический анализ (ТОА) показал, что существует некоторая потеря веса от 51-260°С, которая показывает потерю растворителя и некоторые макромолекулярные реакции, которые могли бы происходить особенно в единице МРЕО полимера, перед тем как начинается деградация при около 310°С. Это показывает, что полимер имеет высокую термическую стабильность, которая в большей степени может обеспечиваться единицами МРЕО. Термограмма ТОА полимера данного изобретения приведена на фиг. 4.

Кроме того, профиль дифференциальной сканирующей калориметрии (Э8С) полимера, представленный на фиг. 5, не показывает какой-либо температуры стеклования (Тд), а только наблюдается температура плавления (Тт) 58°С и температура точки рекристаллизации (Т_С) 38,4°С. Отсутствие какой-либо четкой Тд может свидетельствовать о высокожесткой гиперразветвленной структуре, чему также способствует экстенсивное водородное связывание с МРЕО.

Структура полимера данного изобретения

Более низкая критическая температура раствора (РС8Т) полимера имеет значения в диапазоне 5060°С. Это важный параметр для амфифильных полимеров в водной фазе, проявляющийся в реагирующих на тепло фазовых переходах при определенной температуре, названной РС8Т. Ниже БС8Т полимер покажет растворимую расширенную конфигурацию цепи, т.е. гидрофильное поведение. Выше РС8Т полимер подвергается фазовому переходу, чтобы выполнить формирование нерастворимого, гидрофобного агрегата. Это свойство используется для определения способности формировать мицеллы в приемлемом растворителе и действовать в системах доставки лекарственных средств в фармацевтических применениях.

Критическая мицеллиальная концентрация (СМС) является другим важным параметром, который определяет капсулирующую способность наноносителя и определяет стабильность. Это самая низкая концентрация для амфифильного полимера или мономолекулярных мицелл для формирования мицеллярной структуры, способной капсулировать лекарственное средство в своем гидрофобном ядре. Значение СМС для данного полимера составляет около 0,2 мг/мл. Кроме того, полимер, включающий чувствительные к температуре и рН-чувствительные мономеры, такие как Ν-изопропилакриламид (АЗРАМ) и 1винилпирролидин-2-он (УР), хорошо известны как биологически совместимые с белками и клетками

- 17 017682 крови. Кроме того, биомедицинские применения поли (ΝΣΡΑΜ) достаточно распространены из-за их обратимого температурного перехода, т.е. БС8Т, исключительного водородного связывания, способностей формировать мицеллы и гидрогели. Аналогично, поливинилпирролидоновые (также известные как Повидон) полимеры также высоководорастворимы и формируют экстенсивное водородное связывание с водой. Намеченное применение этого полимера должно было воплотить новую систему, включающую эффективности различных предварительно определенных мономеров, приводя к формированию чувствительных к температуре, рН-чувствительных, стабильных полимерных наночастиц, содержащих гидрофильные и гидрофобные группы для повышения растворимости лекарственных средств, слабо растворимых в воде.

Обнаружили, что формирование произвольно гиперразветвленной кополимерной единицы, состоящей из ΝΣΡΑΜ и νΡ, стабилизированной покрытием внешней оболочки, сформированным водородным связыванием диэфирным аддуктом (мажор) и моноэфирным аддуктом (минор) малеинового ангидрида полиэтиленгликоля (ΜΡΕΘ), имеющей комономерную композицию (ΝΣΡΑΜ + νΡ): ΜΡΕΘ в диапазоне от 80:20 до 95:5, а также единицы ΝΨΑΜ: νΡ в диапазоне от 55:22 до 65:35, придает полимерам желательную биосовместимость, небиодеградируемость и биологически безопасный профиль. В частности, обнаружили, что лучшие результаты (более высокая БС8Т, более высокий выход, процент высвобождения из наночастиц Паклитаксела) получили, когда композиция (ΝΡΑΜ + νΡ): ΜΡΕΘ имела диапазон 90:10 или 95:5, а единицы ΝΠ’ΑΜ: νΡ применялись в диапазоне от 58:32 до 62:28. Соотношение применяемого мономера также соответствует финальному полимеру и подтверждается различными исследованиями, такими как исследования ¹Н-ЯМР, ¹³С-ЯМР и преобразование Фурье в инфракрасной области (ИКФурье) спектра.

С. Биосовместимость и небиодеградируемость полимера данного изобретения

Когда оценили фармакокинетические показатели, биораспределение и выведение [¹⁴С]-меченного полимера на самцах швейцарских машей-альбиносов, профиль концентрации радиоактивности в крови показал двухфазную кривую (фиг. 6), с коротким периодом полувыведения Т_1/2(3) 0,448 ± 0,157 /аса (26,88 мин) и быстрым очищением 54,7 мл/ч. Результаты исследования приведены в табл. VΣ и νΠ.

Таблица ’ν/ Параметры фармакокинетических показателей полимера данного изобретения

Параметр	Оценка ± 8Е (стандартная ошибка)
Т1/2(К10)	0,152 ±0,018 часа
Тш(альфа)	0,065 ±0,014 часа
Т1/2(бета)	0,448 ±0,157 часа
Г ^тах	82,96 ±5,11 мкг/мл
лис	18,29 ± 1,62 часа х мкг/мл
сь	54,67 ± 4,86 мл/час
мкт	0,465 ± 0,13 часа
ν55	25,43 ± 5,2 мл

Обнаружили, что преобладающим путем выведения являлась моча (моча, 66,91% по сравнению с калом, 17,39% за 48 ч) и данные восстановления, собранные за 48 ч, составляют 84,87% введенной радиоактивности. Распределение в тканях было незначительным. Почка, печень, кожа и кишечник, как выявили, являются мишеневыми органами. Однако уровень полимера в ткани быстро снижался через мочу и кал.

Таблица νΠ. Восстановление радиомеченного полимера данного изобретения

Время	Процент (%) дозы
0-10 минут	0-1 час	0-24 часов	0-48 часов
Моча	27,14	61,64	64,56	66,91
Кал	0,10	0,65	12,29	17,39
Ткань	15,50	3,22	0,78	0,57
Смыв	5,04	2,27	0,84	0,00
Общее	47,16	67,78	78,47	84,87

Таким образом, в заключение, полимер, как обнаружили, быстро выделяется из организма, не являясь отложенным и ухудшенным в жизненных органах, что обеспечивает безопасность и приемлемость полимера для применения человеком.

Ό. Исследования токсичности полимера данного изобретения

Исследования токсичности полимера формулы (I) выполняли для оценивания:

(ί) локализованной токсичности (подкожная и внутривенная);

(ΐΐ) дозовой токсичности мишеневых органов до 800 мг/кг веса животного организма и (ϊϊί) шестимесячной циклической дозовой токсичности.

- 18 017682

Ό(ί) Люкализованная токсичность (подкожная и внутривенная)

Токсичность полимера определяли после отдельного подкожного введения 100 мкл 75-мг/мл полимера в ухо кролика, что вызывало слабое воспаление на участке инъекции, при анализе через 48 ч после инъекции предположили, что данный полимер не вызывает какую-либо локальную токсичность на участке введения после подкожного введения.

Токсичность данного полимера определяли на протяжении пяти дней непрерывного внутривенного введения 75-мг/мл данного полимера при дозе 125 мг/кг в ушную вену кролика и получили подобные результаты, кроме того, подтвердили, что данный полимер не вызывает какую-либо локальную токсичность на участке введения.

Представленные фотографии окрашенного солохромом/эозином участка мочки уха кролика через 48 ч подкожной инъекции с 10% раствором декстрозы показаны на фиг. 7, а фотографии окрашенного солохромом/эозином участка мочки уха кролика через 48 ч подкожной инъекции с водным раствором полимера показаны на фиг. 8.

Представленные фотографии окрашенного солохромом/эозином участка краевой вены уха кролика через 24 ч внутривенной инъекции с 10% раствором декстрозы показаны на фиг. 9, и фотографии окрашенного солохромом/эозином участка краевой вены уха кролика через 24 ч внутривенной инъекции с водным раствором полимера показаны на фиг. 10.

Ό(ίί) Дозовая токсичность мишеневых органов (до 800 мг/кг веса животного организма)

Кроме того, токсичность оценивали на возможном мишеневом органе(органах) со специальными ссылками на микроциркуляцию и определяли с помощью отдельного внутривенного болюсного введения на крысах Вистара. Полимер вводили двумя различными дозировками 400 и 800 мг/кг. При условиях исследования отдельное внутривенное болюсное введение данного полимера при какой-либо дозе не приводит к какой-либо смертности или какому-либо заметному признаку токсичности или симптомам у крыс. Отдельные и средние веса тела крыс показали устойчивое повышение в группах, обработанных полимером и контрольных. Не отметили никакой значительной разницы по весу тела опытных животных при обеих дозах по сравнению с таковыми контроля.

У крыс, обработанных полимером, гематологические параметры находились в пределах нормы на протяжении исследования. Биохимические параметры также находились в пределах нормы у животных, обработанных обеими дозами. Анализ с помощью актометра показал, что не существует значительной разницы двигательной активности между контрольной и опытной группами на день 7 и 21, соответственно, подсказывая, что полимер не обладает какой-либо нейротоксичностью.

Образцы опытной и контрольной групп показали подобные гистологические особенности. Гистологическое исследование выполняли на жизненно важных органах, таких как печень, сердце, легкие, почки, селезенка, желудок, толстая кишка, мышца бедра и глаз. Все исследованные органы показали нормальную структуру при обследовании на световом микроскопе. Внимательно проверили микроциркуляцию в каждом органе, и не заметили никаких патологических особенностей в каком-либо из органов. Кроме того, не было изменений в микроциркуляции животных, обработанных полимером.

Из вышеупомянутых наблюдений стало достаточно очевидно, что полимер данного изобретения при дозе или 400 мг/кг, или 800 мг/кг веса тела, который вводили в течение пяти последовательных дней, не вызвал какой-либо общей токсичности или какой-либо значительной гематологической токсичности, показав биологически безопасный и нетоксичный профиль данного полимера.

Ό(ίίί) Токсичность шестимесячной циклической дозы

Кроме того, токсичность шестимесячной критической дозы изучали на крысах с помощью внутривенной инъекции полимера, используемого в формуляции в форме наночастиц. Для исследования использовали самцов и самок крыс Вистара, а дозирование выполняли внутривенно в боковую хвостовую вену циклически один раз каждые три недели в течение 180 дней (приблизительно 26 недель). Животные опытной и контрольной групп обычно оставались активными и здоровыми в течение периода исследования. Эквивалент концентрации полимера 10 мг/кг лекарственного средства выявили безопасным у животных при исследовании. Минимальные изменения в гематологических параметрах отметили в нормальном диапазоне для крыс Вистара и не нашли их зависимыми от лечения.

Вышеупомянутые исследования наводят на мысль, что синтезированный полимер нетоксичен и биологически безопасный для применения в создании фармацевтических композиций.

Е. Фармацевтические композиции, включающие полимер данного изобретения

Как обсуждалось выше, полимер данного изобретения формулы (Ι), высокой чистоты и главным образом свободный от мономерных примесей, в частности имеющий остаточные мономерные МРАМ и УР <0,001% можно применять с пользой для получения фармацевтических композиций слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц, которые безопасны и нетоксичны для введения или применения человеку или животному.

В частности, полимер данного изобретения можно применять для получения фармацевтической композиции в форме наночастиц, вместе с фармацевтически приемлемыми наполнителями, который захватывает множество слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений полностью или

- 19 017682 почти полностью в свою полимерную оболочку.

Кроме того, как обсуждалось выше, слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения, которые можно применять в фармацевтических композициях данного изобретения, обычно имеют растворимость в воде менее 10 мг/мл.

Примеры таких слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений включают, но не ограничиваются, противораковые агенты, противовоспалительные агенты, противогрибковые агенты, противорвотные средства, противогипертензивные агенты, половые гормоны, стероиды, антибиотики, иммуномодуляторы, анестезирующие средства и т.д. Типичными примерами противораковых агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, являются Паклитаксел, Доцетаксела и другие родственные таксановые производные; Иринотекан, Топотекан и другие родственные кампотециновые производные; Доксорубицин, Дауномицин и родственные антрациклиновые производные; Цисплатин; Оксалиплатин; 5-фторурацил; Митомицин; Метотрексат; Этопосид; бетулиновая кислота и ее производные; Веделолактон и его производные. Типичные примеры противовоспалительных агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Индометацин, Ибупрофен, Кетопрофен, Флубипрофен, Пироксикам, Теноксикам и Напроксен. Типичные примеры противогрибковых агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Кетоконазол и Амфотерицин В. Типичные примеры половых гормонов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Тестостерон, Эстроген, Прогестерон и Эстрадиол. Типичные примеры стероидов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Дексаметазон, Преднизолон и Триамцинолон. Типичные примеры противогипертензивных агентов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Каптоприл, Рамиприл, Теразозин, Миноксидил и Празозин. Типичные примеры противорвотных средств, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Ондансетрон и Гранисетрон. Типичные примеры антибиотиков, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Метронидазол и фусидовую кислоту. Типичные примеры иммуномодуляторов, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Циклоспорин и бифенил диметил дикарбоновую кислоту. Типичные примеры анестезирующих средств, которые могут быть захвачены в полимерную оболочку, включают Пропопол, Альфаксалон и Гексобарбитал.

Фармацевтическая композиция слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений типично представлен набором из двух ампул, включающим, с одной стороны, ампулу содержащую раствор слабо растворимого в воде лекарственного средства в водорастворимом растворителе или их смеси при приемлемой концентрации указанного лекарственного средства или соединения; и включающим, с другой стороны, ампулу, содержащую раствор полимера данного изобретения, высокой чистоты и главным образом свободного от мономерных примесей, и фармацевтически приемлемых наполнителей в водном растворителе, обычно воде для инъекции, обе ампулы набора являются стерильными, произведены и запакованы в асептических условиях. Содержимое двух ампул затем добавляют последовательно в растворяющую жидкость для введения людям/животным. Следует отметить, что, как обсуждалось выше, а так же будет обсуждаться далее, слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение захватывается в полимерную оболочку применяемого здесь полимера и производится в форме наночастиц соответствующего размера. Соотношение раствора слабо растворимого в воде лекарственного средства в водорастворимом растворителе или их смесях к раствору слабо растворимого в воде лекарственного средства в водорастворимом растворителе или их смесях, содержащихся в двух ампулах обычно составляет от 1:1 до 1:10 по объему, предпочтительно соотношение составляет 1:1.

Факультативно, набор из двух ампул, кроме того, может включать растворяющую жидкость, шприц и иглу с внутренним диаметром в диапазоне от 0,305 до 0,356 или от 0,559 до 0,711 мм, который зависит от объема раствора лекарственного средства и объема растворяющей жидкости, содержащей полимер и наполнители, подлежащие смешиванию для введения людям/животным, нуждающимся в этом.

Пригодные водорастворимые растворители, которые можно применять для растворения слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения, включают алифатический спирт, особенно этанол; диалкиламиды, особенно диметилформамид и диметилацетамид; диалкилсульфоксиды, особенно диметилсульфоксид и диэтилсульфоксид; полиэтиленгликоли различного молекулярного веса; полипропилен гликоли различного молекулярного веса; сурфактанты, особенно полисорбат 80, полисорбат 20, полиоксиэтилированное растительное масло и полиэтоксилированное касторовое масло; глицерин и т. д.

Фармацевтически приемлемые наполнители, которые можно преимущественно применять, включают натрия дезоксихолат; различные соли желчных кислот; полисорбаты различных сортов, особенно полисорбат 80, полисорбат 20, полиоксиэтилированное растительное масло и полиэтоксилированное касторовое масло; полисахариды, подобные декстрозе, сахарозе, лактозе, маннитолу и т.д.; сложные эфиры сорбитана или спанов различных марок, туг) (сложных эфиров жирных кислот) различных марок или полоксомеров различных марок и т.д., и буферный агент для регулирования рН. Какой-либо буферный агент, известный в данной области, можно применять для регулирования рН раствора, а в предпочтительном варианте осуществления предпочтительно использовать натрия цитрат в качестве буферного агента.

Из фармацевтически приемлемых наполнителей предпочтительным является натрия дезоксихолат,

- 20 017682 поскольку он влияет на стабилизацию фармацевтической композиции, тогда как буферный агент используют для регулировки рН перфузионной жидкости в диапазоне от 6,0 до 8,5, который также влияет, как обнаружили, на стабилизацию фармацевтической композиции.

Фармацевтическая композиция может иметь пригодный ввод или дозу слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения, и выбор оптимального ввода или дозы указанного лекарственного средства или соединения в значительной степени зависит от природы лекарственного средства или соединения, его растворимости, а также от терапевтического нарушения, для которого его вводили. В случае фармацевтически приемлемых наполнителей пропорция или количество, которые можно применять в фармацевтической композиции аналогично, в свою очередь зависят от природы и ввода слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения, содержащихся в композиции.

Фармацевтическую композицию в форме наночастиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений данного изобретения можно получить следующим путем:

ί) получают концентрат лекарственного средства, включая растворение слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения в пригодном водорастворимом растворителе или их смесях;

ίί) получают водный концентрат полимера и фармацевтически приемлемых наполнителей, включая стадии, на которых:

a) сначала добавляют необходимое количество полимера формулы (I), высокой чистоты и главным образом свободного от мономерных примесей, особенно имеющего уровень токсичных ИГРАМ и УР <0,001%, в приемлемое количество воды для инъекции для получения раствора;

b) добавляют фармацевтически приемлемые наполнители и буферный агент в раствор полимера в воде;

ϊϊΐ) смешивают раствор со стадии и Ь) с растворяющей жидкостью до получения прозрачного раствора;

ίν) используют иглу, имеющую внутренний диаметр от 0,305 до 0,356 мм, для добавления меньшего объема раствора со стадии ί) в раствор со стадии ίίί); или

ν) используют иглу, имеющую внутренний диаметр от 0,559 до 0,711 мм, для добавления большего объема раствора со стадии ί) в раствор со стадии ίίί);

νί) вводят раствор со стадии ί) в раствор со стадии ίίί), где игла шприца, через который добавляют раствор со стадии ί) должна оставаться погруженной в раствор со стадии ίίί); и νίί) факультативно удерживают контейнер, содержащий раствор со стадии ίίί), в перевернутом положении во время введения раствора со стадии ί), чтобы полностью захватить слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение полностью или почти полностью в полимерную оболочку и получить наночастицы лекарственного средства или соединения, имеющие размер от 30 до 150 нм. Такая перфузионная жидкость остается стабильной на протяжении более чем 24 ч с более чем 95% лекарственного средства, оставшегося введенным в полимерные мицеллы.

Следует отметить, что выбор растворяющей жидкости главным образом зависит от природы слабо растворимого в воде лекарственного средства или применяемого соединения, а также от нарушения, для лечения которого вводят фармацевтическую композицию. Пригодные растворяющие жидкости можно выбрать из, без ограничения, воды, солевого раствора, 5% и 10% растворов декстрозы, раствора декстрозы и натрия хлорида, раствора натрия лактата, лактированного раствора Рингера, раствора маннитола, раствора маннитола с декстрозой или натрия хлорида, раствора Рингера, раствора натрия хлорида, стерильной воды для инъекции и растворов разнообразных электролитов, включая меняющиеся комбинации электролитов, декстрозы, фруктозы и инвертированного сахара. Предпочтительно растворяющей жидкостью является жидкость, включающая декстрозу и воду, а более предпочтительно 5 и 10% растворы декстрозы.

Предпочтительный способ получения фармацевтической композиции наночастиц данного изобретения и ее введения пациентам, нуждающимся в этом, графически представлен на фиг. 11.

Данное изобретение, кроме того, описано в деталях, что касается следующих неограничивающих примеров, которые, однако, никоим образом не должны быть рассмотрены как ограничение объема данного изобретения.

Следует отметить, что в примерах, приведенных ниже, оборудование диафильтрации, применяемое для очистки полимера, представляло собой устройство диафильтрации Ргойих М12 (производство Μί11ίроге), а оборудование для диализа, применяемое для очистки полимера, представляло собой целлюлозную мембрану - Ό-9402 (производство 81дта).

Экспериментальный раздел

Ссылочный пример 1. Получение полимера с помощью способа диализа

Реакцию полимеризации выполняют в 2-л стеклянном сосуде. К около 2 л воды добавляют 24 г Νизопропил акриламида, 12 мл дистиллированного 1-винил-2-пирролидона и 4 г полиэтиленгликоля (молекулярный вес 6000) сложного эфира малеинового ангидрида (МРЕС). К этому добавляют 11,2 мл водного раствора Ν,Ν'-метилен-бис-акриламида (МВА) [49 мг/мл] и 8 мл тетраметилэтилендиамина (б = 0,77

- 21 017682 г/мл). Раствор деаэрируют путем барботирования газообразного азота 30 мин. Затем добавляют 8 мл водного аммония-железа сульфата (0,5% вес./об.) и 12 мл водного аммония персульфата (80% вес/об.), и реакция продолжается 3 ч с непрерывным барботированием азота. Полимеризацию выполняют при 34°С в водяной бане со взбалтыванием при 80 об./мин.

Раствором наполняют диализные емкости и спускают в воду (среду диализа). Диализ выполняют 24 ч, один раз меняя воду. Через 24 ч раствор удаляют из диализных емкостей и лиофилизируют в круглодонных колбах.

Определение и количественное определение остаточных мономеров, особенно остаточных УР и ΝΙΡΑΜ, в полимере выполняют с помощью системы НРЬС серий АдПспГ 1100, используя обратно фазовые КР-18 (С-18) колонки [Ь1сйто8рйег КР-18е, 5μ, 250 мм х 4 мм]. Используемой мобильной фазой является смесь воды и ацетонитрила в соотношении 80:20 при скорости потока 1 мл/мин с объемом образца инъекции 50 мкл. Время разгонки составляет 10 мин, температура колонки 30°С, а длина волны детектора 226 нм. При описанных выше условиях МРАМ имеет время удержания около 3 мин, тогда как УР имеет время удержания около 5 мин.

Аналитические данные: % остаточных мономеров ί) МРАМ = 0,066% (660 ррт) и ίί) УР = 0,011% (110 ррт).

Пример 1. Получение полимера с помощью способа диафилътрации

Реакцию полимеризации выполняют в двух 5-л стеклянных сосудах для размера партии 160 г (4 л х 2) полимера. В каждый сосуд добавляют 48 г Ν-изопропилакриламида, 23 мл дистиллированного 1винил-2-пирролидона и 8 г полиэтиленгликоля (молекулярный вес 6000) сложного эфира малеинового ангидрида (МРЕО) к около 4 л воды. К этому добавляют 22,4 мл водного раствора М,М'-метилен-Ь1какриламида (МВА) [49 мг/мл] и 16 мл тетраметилэтилендиамина. Раствор деаэрируют с помощью барботирования газообразным азотом 30 мин. Затем добавляют 16 мл водного аммония-железа сульфата (0,5% вес./об.) и 24 мл водного аммония персульфата (80% вес./об.), и реакция длится 3 ч при непрерывном барботировании азотом. Полимеризацию выполняют при 34°С в водяной бане со взбалтыванием при 80 об./мин. Во время полимеризация образцы отбирают в приемлемые точки времени (0, 15, 60 и 180 мин) для наблюдения за реакцией.

После завершения полимеризации раствор фильтруют через предварительно стерилизованные одноразовые 0,2 мкм капсульные фильтры с полиэфирсульфоновой мембраной 1 с размером пор 0,8 и 0,2 мкм (тип ИР8-5101АА-201, производства Абуапсеб Мютобеукек РУ!. Ыб, Индия). Фильтрованное содержимое обоих реакционных сосудов объединяют и подвергают фильтрации тангенциального потока с помощью устройства диафилътрации РтоДих М12 (МПДроте) для удаления остаточных мономеров и других примесей с низким молекулярным весом. Комбинированную партию 8 л реакционной смеси сначала концентрируют до около 2,2 л путем диафильтрации, а затем образованный концентрат подвергают диафильтрации с помощью около 30 л высоко очищенной воды. Во время диафильтрации реакционную смесь концентрируют до около 1 л. Общее время обработки диафильтрацией для размера партии 160 г (8 л) составляет около 4-6 ч. Диафильтрованный раствор затем подвергают лиофилизации.

Определение и количественное определение остаточных мономеров, особенно остаточных УР и МРАМ, в полимере выполняют с помощью системы НРЬС серий АдПеп! 1100, используя обратно фазовые КР-18 (С-18) колонки |Ыс11гокр11ег КР-18е, 5μ, 250 мм х 4 мм]. В качестве мобильной фазы используют смесь воды и ацетонитрила в соотношение 80:20 при скорости потока 1 мл/мин с объемом образца инъекции 50 мкл. Время разгонки составляет 10 мин, температура колонки 30°С, а длина волны детектора 226 нм. При описанных выше условиях МРАМ имеет время удержания около 3 мин, тогда как УР имеет время удержания около 5 мин.

Аналитические данные: % остаточных мономеров ί) МРАМ < 0,001% (<10 ррт) и ίί) УР < 0,001% (<10 ррт).

Полимер имеет следующие спектральные характеристики, а именно:

Ή ЯМР (300 МН/, спектрометр Вгикег, СИС1₃, δ ррт): 1,15 (Ьг, -СН(СН₃)₂); 1,45 (Ьг, -СН₂-СНМ(УР-Кольцо); 1,63 (Ьг, -СН2-СНС(=О)М1Н); 1,99 (Ьг, -СНС(=О)М1Н-), СН (УР кольцо), 2,36 (СН, УР кольцо), 3,0 (-О-СН₂-СН₂-), 3,23 (СН-Ν-); 3,62-3,66 (Вг, СН₂, МРЕО); 3,72 (М1Н-СН(СН₃)₂); 3,97 (Вг, СН);

¹³С ЯМР (300 МН/, спектрометр Вгикег, СИС1₃, δ ррт): 174 (С=О); 76,6-77,6 (мультиплет для СИС1₃ и СН для полимерного скелета), 70,6 (СН₂'к МРЕО), 41,6 (СН для изопропиловой единицы), 31,8 (СН₂'к, полимерный скелет), 22,6 (СН₃'к, изопропил);

ΕΤΙΚ (КВг гранула, см^-1): 3500 (к, ОН); 3296 (к, ΝΉ, кес-амид), 2972-2933 (к, СН, СН₂, СН), 1546 (к, ΝΉ петля амида II и вероятная С=О свободной кислоты, минор), 1387, 1367 (дуплет изопропиловых групп, СН3, деформация), 1172-1129 (т, О-С-О).

- 22 017682

Пример 2. Получение фармацевтической композиции Паклитаксела в форме наночастиц (воспроизведение в небольшом объеме, т.е. до 40 мл)

A) Получение спиртового раствора Паклитаксела (20 мг/мл): 200 мг Паклитаксела растворяют в 10,0 мл этанола.

B) Получение водного концентрата полимера и наполнителей: 100 мг полимера, полученного по примеру 1, 66,7 мг натрия дезоксихолата и 100 мг натрия цитрата растворяют в 10 мл воды для получения прозрачного раствора.

C) Получение наночастиц Паклитаксела (0,6 мг/мл): 1,0 мл водного концентрата полимера и наполнителей со стадии В) растворяют в 31,3 мл 10% раствора декстрозы для получения прозрачного раствора. 1,0 мл спиртового раствора Паклитаксела стадии А) добавляют в упомянутый выше раствор через иглу, имеющую внутренний диаметр 0,330 мм, за 4 с для получения наночастиц Паклитаксела с концентрацией 0,6 мг/мл.

Фармацевтическая композиция, полученная таким образом, имеет следующие . характеристики:

Растворяющая жидкость	Концентрация полимера (мг/мл)	Концентрация натрия дезоксихолата (мг/мл)	Концентрация натрия цитрата (мг/мл)	Концентрация Паклитаксела (мг/мл)	Размер частицы (нм)	Стабильность
10% декстроза	0,3	0,2	0,3	0,6	«80	> 24 часов

Пример 3. Получение фармацевтической композиции Паклитаксела в форме наночастиц (воспроизведение в большем объеме, т.е. до 500 мл)

A) Получение спиртового раствора Паклитаксела (20 мг/мл): 400 мг Паклитаксела растворяют в 20,0 мл этанола.

B) Получение водного концентрата полимера и наполнителей: 200 мг полимера, полученного по примеру 1, 133,4 мг натрия дезоксихолата и 200 мг натрия цитрата растворяют в 20 мл воды для получения прозрачного раствора.

C) Получение наночастиц Паклитаксела (0,6 мг/мл): 15,0 мл водного концентрата полимера и наполнителей стадии В) растворяют в 500 мл 10% раствора декстрозы для получения прозрачного раствора. 15,0 мл спиртового раствора Паклитаксела стадии А) добавляют в вышеупомянутый раствор через иглу, имеющую внутренний диаметр 0,711 мм, за 8 с для получения наночастиц Паклитаксела с концентрацией 0,6 мг/мл.

Фармацевтическая композиция, полученная таким образом, обладает следующими характеристиками:

декстроза ющая жидкость

Растворя-

Концентрация полимера (мг/мл)	Концентрация натрия дезоксихолата (мг/мл)	Концентрация натрия цитрата (мг/мл)	Концентрация Паклитаксела (мг/мл)	Размер частицы (нм)	Стабильность
о,з	0,2	0,3	0,6	«85	> 24 часов

Пример 4. Получение фармацевтической композиции в форме наночастиц производного бетулиновой кислоты [ΜΙ-1098 формулы (II)]

А) Получение раствора ΜΙ-098 (15 мг/мл): ΜΙ-1098 (15 мг) растворяют в смеси 0,15 мл Ν,Νдиметилацетамида, добавляют 0,01 мл Полисорбата 80 и 0,84 мл этанола к вышеупомянутому раствору и растворяют с помощью ультразвука.

В) Получение водного концентрата полимера и наполнителей: 10 мг полимера, полученного по примеру 1, 6,67 мг натрия дезоксихолата и 10 мг натрия цитрата растворяют в 1 мл воды для получения прозрачного раствора.

С) Получение наночастиц ΜΙ-1098 (0,75 мг/мл): 0,3 мл водного концентрата полимера и наполнителей стадии В) растворяют в 9,2 мл 5% раствора декстрозы для получения прозрачного раствора. К вышеупомянутому раствору добавляют 0,5 мл раствора ΜΙ-1098 стадии А) через иглу с внутренним диаметром 0,330 мм за 3 с для получения наночастиц ΜΙ-1098 с концентрацией 0,75 мг/мл.

Фармацевтическая композиция, полученная таким образом, обладает следующими характеристика ми:

Растворяющая жидкость	Концентрация полимера (мг/мл)	Концентрация натрия дезоксихолата (мг/мл)	Концентрация натрия цитрата (мг/мл)	Концентрация ΜΙ- 1098 (мг/мл)	Размер частицы (нм)	Стабильность
10% декстроза	0,3	0,2	0,3	0,75	и 62	> 24 часов

- 23 017682

Пример 5. Получение фармацевтической композиции в форме наночастиц производного бетулиновой кислоты [ΌΚΡ-4012 формулы (III)]

A) Получение раствора ΌΚΡ-4012 (20 мг/мл): Μ1-ΌΚΡ-4012 (20 мг) растворяют в смеси 0,01 мл Полисорбата 80 и 0,99 мл этанола с помощью ультразвука.

B) Получение водного концентрата полимера и наполнителей: 10 мг полимера, полученного по примеру 1, 6,67 мг натрия дезоксихолата и 10 мг натрия цитрата растворяют в 1 мл воды для получения прозрачного раствора.

C) Получение наночастиц ΌΚΡ-4012 (0,60 мг/мл): 0,33 мл водного концентрата полимера и наполнителей стадии В) растворяют в 10,44 мл 5% раствора декстрозы для получения прозрачного раствора. 0,33 мл раствора ΌΚΡ-4012 стадии А) добавляют к вышеупомянутому раствору через иглу с внутренним диаметром 0,305 мм за 3 с для получения наночастиц ΌΚΡ-4012 с концентрацией 0,6 мг/мл.

Фармацевтическая композиция, полученная таким образом, обладает следующими характеристиками:

Растворяющая жидкость	Концентрация полимера (мг/мл)	Концентрация натрия дезоксихолата (мг/мл)	Концентрация натрия цитрата (мг/мл)	Концентрация ϋΚΡ4012 (мг/мл)	Размер частицы (нм)	Стабильность
5% декстроза	о,з	0,2	о,з	0,6	га 70	> 24 часов

Пример 6. Получение фармацевтической композиции в форме наночастиц производного бетулиновой кислоты [ΌΚΡ-4015 формулы (IV)]

A) Получение раствора ΌΚΡ-4015 (20 мг/мл): Μ1-ΌΚΡ-4015 (20 мг) растворяют в смеси 0,01 мл Полисорбата 80 и 0,99 мл этанола и растворяют с помощью ультразвука.

B) Получение водного концентрата полимера и наполнителей: 10 мг полимера, полученного по Примеру 1, 6,67 мг натрия дезоксихолата и 10 мг натрия цитрата растворяют в 1 мл воды для получения прозрачного раствора.

C) Получение наночастиц ΌΚΡ-4015 (0,60 мг/мл): 0,33 мл водного концентрата полимера и наполнителей стадии В) растворяют в 10,44 мл 5% раствора декстрозы для получения прозрачного раствора. 0,33 мл раствора ΌΚΡ-4015 стадии А) добавляют к вышеупомянутому раствору через иглу с внутренним диаметром 0,330 мм за 4 секунды для получения наночастиц ΌΚΡ-4015 с концентрацией 0,6 мг/мл.

Фармацевтическая композиция, полученная таким образом, обладает следующими характеристиками:

Растворяющая жидкость	Концентрация полимера (мг/мл)	Концентрация натрия дезоксихолата (мг/мл)	Концентрация натрия цитрата (мг/мл)	Концентрация ОКР4015 (мг/мл)	Размер частицы (нм)	Стабильность
5% декстроза	0,3	0,2	0,3	0,6	га 46	> 24 часов

Пример 7. Получение фармацевтической композиции Доцетаксела в форме наночастиц

A) Получение спиртового раствора Доцетаксела (40 мг/мл): 200 мг Доцетаксела растворяют в 5,0 мл этанола.

B) Получение водного концентрата полимера и наполнителей: 400 мг полимера, полученного по примеру 1, 400 мг натрия дезоксихолата и 400 мг натрия цитрата растворяют в 10 мл воды для получения прозрачного раствора.

C) Получение наночастиц Доцетаксела (0,5 мг/мл): 4,0 мл водного концентрата полимера и наполнителей стадии В) растворяют в 35,5 мл 10% раствора декстрозы для получения прозрачного раствора. 0,5 мл спиртового раствора Доцетаксела стадии А) добавляют к вышеупомянутому раствору через иглу с внутренним диаметром 0,330 мм за 3 с для получения наночастиц Доцетаксела с концентрацией 0,5 мг/мл.

Фармацевтическая композиция, полученная таким образом, обладает следующими характеристиками:

Растворяющая жидкость	Концентрация полимера (мг/мл)	Концентрация натрия дезоксихолата (мг/мл)	Концентрация натрия цитрата (мг/мл)	Концентрация Доцетаксела (мг/мл)	Размер частицы (нм)	Стабильность
10% декстроза	4,0	4,0	4,0	0,5	га 125	> 24 часов

Пример 8. Получение фармацевтической композиции Этопосида в форме наночастиц

- 24 017682

A) Получение раствора Этопосида (20 мг/мл): 20 мг Этопосида растворяют в смеси 0,10 мл Ν,Νдиметил ацетамида и 0,90 мл этанола под ультразвуком.

B) Получение водного концентрата полимера и наполнителей: 10 мг полимера, полученного по примеру 1, 6,67 мг натрия дезоксихолата и 10 мг натрия цитрата растворяют в 10 мл воды для получения прозрачного раствора.

C) Получение наночастиц Этопосида (0,6 мг/мл): 0,3 мл водного концентрата полимера и наполнителей стадии В) растворяют в 9,4 мл 5% раствора декстрозы для получения прозрачного раствора. 0,3 мл спиртового раствора Этопосида стадии А) добавляют к вышеупомянутому раствору через иглу с внутренним диаметром 0,330 мм за 3 с для получения наночастиц Этопосида с концентрацией 0,6 мг/мл.

Фармацевтическая композиция, полученная таким образом, обладает следующими характеристика ми:

Растворяющая жидкость	Концентрация полимера (мг/мл)	Концентрация натрия дезоксихолата (мг/мл)	Концентрация натрия цитрата (мг/мл)	Концентрация Этопосида (мг/мл)	Размер частицы (нм)	Стабильность
5% декстроза	0,3	0,2	0,3	0,6	«50	> 24 часов

Пример 9. Определение фармакокинетических показателей, биораспределения и выведения [С]меченного полимера у мышей

Самцов швейцарских мышей-альбиносов возрастом 6-8 недель массой приблизительно 25-30 г произвольно распределили на пять групп по шесть животных в каждой. [¹⁴С]-меченный полимер растворили в деоинизированной воде до 5 мг/мл с учетом определенной активности полимера. Все животные получили однократную дозу [¹⁴С] полимера 40 мг/кг путем внутривенной инъекции.

При исследовании фармакокинетических показателей 100 мкл крови отобрали у животных путем ретроорбитального кровоизлияния под анестезией с точками времени 3, 10, 30 мин, 1, 2, 4, 8, 16 и 24 ч после введения в пробирки, содержащие БЭТА. Для исследований выделения собирают мочу и кал из обменной камеры или силой (10 мин). В завершение (10, 60 мин, 24 и 48 ч) отбирают пробы надпочечника, мозга, легких, печени, сердца, почек, селезенки, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, кала, мочи, мочевого пузыря, глаза, кожи, мышцы бедра и эпидидимуса, промывают, иссекают и взвешивают.

Концентрации [¹⁴С] полимера в крови и моче определяют путем комбинирования 50 мкл крови/мочи с 5 мл жидкой сцинтилляционной смеси. Кал и ткань (не более 0,5 мг) гомогенизируют в деионизированной воде для получения 20% гомогената перед комбинированием 500 мкл с 5 мл жидкой сцинтилляционной смеси. Образцы анализируют анализатором жидкой сцинтилляции. Число импульсов в минуту (СРМ) пересчитали на количество [¹⁴С] полимера в мкг/мл, исходя из линейности и кривых тушения.

Профиль концентрации радиоактивности в крови показывает двухфазную кривую с коротким периодом полувыведения Т_1/2 (β) 0,448 ± 0,157 ч асов (26,88 мин) и быстрым очищением 54,7 мл/ч.

Обнаружили, что доминантным путем выведения является моча (моча, 66,91% по сравнению с калом, 17,39% через 48 ч), и данные восстановления, собранные до 48 ч, составляют 84,87%) введенной радиоактивности. Тканевое распределение незначительное. Почка, печень, кожа и кишечник, как выявили, являются мишеневыми органами. Однако уровень полимера в ткани быстро снижается через мочу и кал.

Тканевое распределение незначительно в почке, печени, коже и кишечнике, представляя самые высокие уровни радиоактивности. Однако уровни полимера в ткани быстро снижаются через мочу и кал.

В заключение исследование показывает, что полимер быстро выделяется из организма, не откладываясь в жизненно важных органах. Хотя, как известно, полимер является небиодеградируемым, быстрое и эффективное очищение главным образом через мочу предполагает безопасность и применимость полимера для применения на людях.

Пример 10. Определение возможной локальной токсичности, если таковая имеется, на участке введения при пятидневном внутривенном болюсном введение 125 мг/кг полимера на кроликах

Анализируемое вещество, растворенное в 10% декстрозе с концентрацией 75 мг/мл, вводят внутривенно 5 мл одноразовым шприцем и иглой 23 О в краевую вену правого уха каждого кролика при 125 мг/кг ежедневно в течение пяти последовательных дней. Левое ухо служит контролем и получает 10% декстрозу тем же путем. Объем дозирования доводят до не более чем 3,5 мл/кг веса тела животного. Периодические наблюдения за локальной токсичностью выполняют на участке инъекции через 5, 10, 30, 60 мин и 24 ч каждый день в течение дней 1-5. Пункционную биопсию на участке инъекции выполняют для обоих ушей всех шести кроликов в день 7.

Пятидневное непрерывное внутривенное введение 75 мг/мл полимера при дозе 125 мг/кг в ушную вену кролика вызывает тромбофлебит, от слабого до умеренного, на участке инъекции 10% декстрозы у кроликов. Можно заключить, что выбранная доза полимера не вызывает какой-либо локальной токсич

- 25 017682 ности на участке введения.

Пример 11. Определение токсичности возможного мишеневого органа(ов) со специальной ссылкой на микроциркуляцию при пятидневном внутривенном болюсном введение 400 мг/кг полимера на крысах Вистара

Анализируемое вещество растворяют в 10% декстрозе и вводят внутривенно с помощью 5 мл одноразового шприца и мглы 23 О в хвостовую вену каждой крысы при 400 мг/кг. Контрольные животные получают только 05 декстрозу тем же самым путем. Объем дозирования доводят до 5 мл/кг веса тела животного. Регистрируют периодические наблюдения (день 7, 14 и 21 после обработки) за неблагоприятными эффектами (обычное обследование и лабораторные параметры) и случаи смерти. Всех животных умертвили и вскрыли.

При условиях исследования пятидневное внутривенное болюсное введение полимера при уровне дозы 400 мг/кг веса организма не вызывает какой-либо смертности или каких-либо физических признаков токсичности или симптомов у обработанных крыс.

Отдельные и средние веса тел крыс показывают стойкое повышение у обработанных полимером и контрольных групп. Никакой значительной разницы не отмечают для веса тела опытных животных по сравнению с контрольными.

У крыс, обработанных полимером, гематологические параметры находятся в пределах нормы на протяжении исследования. Значительные различия определяют при исходных данных для общего билирубина (р = 0,0471) и мочевой кислоты (р = 0,0157) для временной группы и общего белка (р = 0,0005) и мочевой кислоты (р = 0,0404) для конечной группы животных по сравнению с контрольными животными. Однако все значения находятся в пределах нормы.

Анализ с помощью актометра показывает, что нет значительной разницы двигательной активности между контрольными и опытными группами в дни 7 и 21, соответственно, что предполагает, что полимер не обладает какой-либо нейротоксичностью.

Образцы опытных и контрольных групп показывают подобные гистологические особенности. Все исследованные органы показывают нормальную структуру при световой микроскопии. Микроциркуляцию каждого органа тщательно обследуют и не выявляют патологические особенности в каком-либо из органов. Кроме того, нет изменений в микроциркуляции полимера опытных животных.

Из вышеупомянутых наблюдений видно, что полимер при дозе 400 мг/кг веса тела, введенный в течение пяти последовательных дней, не вызывает какой-либо общей токсичности или какой-либо значительной гематологической токсичности. Однако выявили, что общий билирубин значительно выше у окончательной группы по сравнению с контрольной группой в день 21.

Пример 12. Определение токсичности возможного мишеневого органа(ов) со специальными ссылками на микроциркуляцию при отдельном внутривенном болюсном введении 800 мг/кг полимера на крысах Вистара

Анализируемое вещество, растворенное в 10% декстрозе, вводят с помощью 1 мл одноразового шприца и иглы 26 О в хвостовую вену каждой крысы при 800 мг/кг. Контрольные животные получают только 10% декстрозу тем же самым путем. Объем дозирования доводят до 5 мл/кг веса тела животного. Регистрируют периодические наблюдения (день 1, 3 и 7 после обработки) за неблагоприятными эффектами (общее обследование и лабораторные параметры) и случаи смерти. Всех животных умерщвляют и вскрывают.

При условиях исследования отдельное внутривенное болюсное введение полимера при уровне дозы 800 мг/кг веса тела не вызывает какой-либо смертности или каких-либо заметных признаков или симптомов токсичности у крыс.

Отдельные и средние веса тела крыс показывают стойкое повышение у обработанных полимером и контрольных групп. У крыс, обработанных полимером, гематологические параметры находятся в пределах нормы на протяжении исследования. У крыс, обработанных полимером, биохимические параметры находятся в пределах нормы на протяжении исследования. Гистопатологические исследования показывают, что нет значительной разницы между контрольными и опытными группами крыс. Фотомикрографии обработанных полимером крыс, умерщвленных в день 3 и день 7 после инъекции, показывают, что изменения в микроциркуляции у всех четырех обследованных органов (мозг, глаз, почка и кожа) не проявляются.

Из вышеупомянутого наблюдения видно, что полимер при дозе 800 мг/кг веса тела не вызывает какой-либо общей токсичности или какой-либо значительной гематологической и биохимической токсичности или изменений в микроциркуляции и считается безопасным при внутривенном введении крысам.

Пример 13. Определение возможной локальной токсичности, если таковая имеется, на участке (подкожного) введения полимера у кроликов

Отдельную инъекцию 0,1 мл анализируемого вещества, растворенного в 10% декстрозе с концентрацией 75 мг/мл, вводят подкожно 1 мл одноразовым шприцем и иглой 230 в правую мочку уха каждого из шести кроликов. Контролем служит 0,1 мл 10% декстрозы тем же самым путем в левую мочку уха всех шести кроликов. Выполняют периодические наблюдения локальной токсичности на участке инъекции через 5, 10, 30, 60 мин и 24 ч.

- 26 017682

Отдельное подкожное введение 100 мкл 75 мг/мл полимера или 100 мкл декстрозы в ухо кролика вызывает слабое воспаление на участке инъекции через 48 ч после инъекции. Можно заключить, что выбранный полимер не вызывает какой-либо локальной токсичности на участке введения после подкожного введения.

Пример 14. Определение шестимесячной дозовой токсичности полимера, введенного внутривенным путем, на крысах

Полимер, применяемый в формуляции в форме наночастиц, вводят с уровнем дозы, эквивалентным 10 мг/кг лекарственного средства. Контролем вводят декстрозу (10%) внутривенно в боковую хвостовую вену циклически один раз каждые три недели в течение 180 дней (приблизительно 26 недель). Наблюдения включают смертность, клинические признаки, вес тела, потребление пищи и воды, клинические лабораторные исследования, вес органов и гистопатологию.

Животные опытных и контрольных групп остаются обычно активными и здоровыми в течение периода исследования. Не наблюдается связанной с обработкой смертности, за исключением нескольких случаев смерти из-за инфекций в опытных и контрольных группах. Животные обоих полов показывают прогрессивное повышение веса тела и отсутствие изменений в потреблении пищи или воды в течение исследования. Гематологические параметры и самцов, и самок в пределах нормы, характерных для крыс Вистара. Однако в опытной группе наблюдается минорное снижение, только в пределах нормы, \УВС и нейтрофильных единиц у самцов и нейтрофильных единиц у самок. Слабое повышение в ретикулоцитной единице отмечают у опытных и контрольных групп.

Биохимические параметры крови и у самцов и самок в пределах нормы, характерных для крыс Вистара. Минорные изменения, включающие слегка более высокие по сравнению с нормой, значения глюкозы, ЛЬР и креатина и у самцов и у самок опытных и контрольных групп. Слабое повышение триглицеридов опытной группы самцов наблюдают 6 месяцев. Параметры мочи самцов и самок находятся в пределах нормы.

Claims (94)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ получения полимера, включающего три мономерных звена, выбранных из 1винилпирролидона (УР), Ν-изопропилакриламида (ИГРАМ) и сложного эфира малеинового ангидрида и полиэтиленгликоля (МРЕС), поперечно сшитых дифункциональным виниловым производным, содержащего каждый из токсичных мономерных контаминантов в количествах менее чем 0,001%, при этом способ включает стадии, на которых:

   ί) растворяют приемлемые количества трех мономеров ИГРАМ, УР и МРЕС в воде;

   и) добавляют последовательно в раствор со стадии 1) приемлемые количества поперечносшивающего агента и активатора;

   ϊϊΐ) барботируют инертный газ в раствор со стадии ίί) в течение 30-60 мин;

   ίν) добавляют приемлемое количество активатора и инициатора полимеризации в раствор со стадии ίν);

   ν) полимеризуют раствор со стадии ίν) при температуре от 25 до 45°С в атмосфере инертного газа в течение 3-6 ч;

   νί) подвергают раствор со стадии ν) фильтрации через предварительно стерилизованные фильтры, а фильтрат собирают;

   νίί) подвергают фильтрат со стадии νί) диафильтрации, а фильтрат собирают;

   νίίί) факультативно подвергают фильтрат со стадии νίί) дополнительной диафильтрации, а фильтрат собирают и ίχ) факультативно подвергают фильтрат со стадии νίί) или νίίί) лиофилизации для получения лиофилизованного порошка полимера.
2. 2. Способ по п.1, где весовое соотношение мономеров ИГРАМ:УР находится в диапазоне от 55:22 до 65:35, а весовое соотношение мономеров (ИГРАМ + УР):МРЕС находится в диапазоне от 90:10 до 95:5.
3. 3. Способ по п.1, где весовое соотношение мономеров ИГРАМ:УР находится в диапазоне от 58:32 до 62:28, а весовое соотношение мономеров (ИГРАМ + УР):МРЕС находится в диапазоне от 80:20 до 95:5.
4. 4. Способ по п.1, где поперечно-сшивающий агент представляет собой дисфункциональное виниловое соединение.
5. 5. Способ по п.4, где дисфункциональное виниловое соединение представляет собой Ν,Ν'-метиленбис-акриламид.
6. 6. Способ по п.1, где поперечно-сшивающий агент применяют в количествах в диапазоне от 1,3 до 1,5 вес.% в расчете на общее количество мономеров.
7. 7. Способ по п.6, где поперечно-сшивающий агент применяют в количествах в диапазоне от 1,35 до 1,4 вес.% в расчете на общее количество мономеров.
8. 8. Способ по п.1, где активатор выбирают из тетраметилэтилендиамина или аммония-железа суль

   - 27 017682 фата, или их комбинации.
9. 9. Способ по п.1, где активатор применяют в количествах в диапазоне от 15 до 18 вес.% в расчете на вес общего количества мономеров.
10. 10. Способ по п.9, где активатор применяют в количествах в диапазоне от 15 до 16 вес.% в расчете на общее количество мономеров.
11. 11. Способ по п.1, где инициатор полимеризации представляет собой по меньшей мере одно или более пероксидных соединений, таких как диацилпероксид, бензоилпероксид, диацетилпероксид, диалкилпероксиды, третичный бутилпероксид и третичный амилпероксид, или инициаторов полимеризации на основе нитрила, таких как 2,2'-азо-бис-изобутиронитрил (АГВЫ), или инициаторов полимеризации на основе неорганической соли, таких как пердисульфат аммония или персульфат аммония.
12. 12. Способ по п.11, где инициатор полимеризации представляет собой пердисульфат аммония или персульфат аммония.
13. 13. Способ по п.1, где инициатор полимеризации применяют в количествах в диапазоне от 20 до 30 вес.% в расчете на общее количество мономеров.
14. 14. Способ по п.13, где инициатор полимеризации применяют в количествах в диапазоне от 23 до 25 вес.% в расчете на общее количество мономеров.
15. 15. Способ по п.1, где инертный газ представляет собой аргон или азот.
16. 16. Способ по п.1, где предварительно стерилизованный фильтр, применяемый на стадии νί), представляет собой одноразовые 0,2 мкм капсульные фильтры с полиэфирсульфоновой мембраной 1, имеющие размер пор 0,8 и 0,2 мкм.
17. 17. Способ по п.1, где оборудование диафильтрации, применяемое на стадиях νί) и νίί), представляет собой устройство диафильтрации РгоДих М12 от М1Шроге.
18. 18. Полимер, полученный способом по п.1, включающий три мономерных звена, выбранных из 1винилпирролидона (УР), Ν-изопропилакриламида (ΝΊΡΑΜ) и сложного эфира малеинового ангидрида и полиэтиленгликоля (МРЕС), поперечно сшитых дифункциональным виниловым производным, содержащий каждый из токсичных мономерных контаминантов в количествах менее чем 0,001%.
19. 19. Полимер по п.18, содержащий токсичный 1-винилпирролидон (УР) в количестве менее чем 0,001%.
20. 20. Полимер по п.18, содержащий токсичный Ν-изопропилакриламид (ЫРАМ) в количестве менее чем 0,001%.
21. 21. Полимер по п.18, где дисфункциональным виниловым поперечно-сшивающим агентом является Ν,Ν'-метилен-бис-акриламид (МВА).
22. 22. Полимер по п.18, где весовое соотношение мономеров МРАМ:УР находится в диапазоне от 55:22 до 65:35.
23. 23. Полимер по п.18, где весовое соотношение мономеров МРАМ:УР находится в диапазоне от 58:32 до 62:28.
24. 24. Полимер по п.18, где весовое соотношение мономеров (ИШАМ + УР):МРЕС находится в диапазоне от 90:10 до 95:5.
25. 25. Полимер по п.18, где весовое соотношение мономеров (ИШАМ + УР):МРЕС находится в диапазоне от 80:20 до 95:5.
26. 26. Полимер по п.18, имеющий пики δ в 174, 76,6-77,6, 70,6, 41,6, 31,8 и 22,6 в ¹³С ЯМР-спектре.
27. 27. Полимер по п.18, имеющий пики δ в 1,14, 1,45, 1,63, 1,99, 2,36, 3,0, 3,23, 3,62-3,66, 3,72 и 3,97 в ¹Н ЯМР-спектре.
28. 28. Полимер по п.18, имеющий частоту значений см^-1 в 3500, 3296, 2972-2933, 1546, 1387, 1367 и 1172-1129 в ИК-Фурье спектре.
29. 29. Полимер по п.18, имеющий структуру формулы (I)

    - 28 017682

    Н0-|ъс— сн·] рн,-сн₂|он

    НО-[Н;С— сн] ^Н₂-СН₂]-ОН 6 о

    0=^

    -но-сн^н#)
30. 30. Полимер по п.18, который является биологически совместимым.
31. 31. Полимер по п.18, который является небиодеградируемым.
32. 32. Полимер по п.18, который является нетоксичным.
33. 33. Полимер по п.18, имеющий значение Т_1/2 (К10) 0,152 ± 0,018 ч.
34. 34. Полимер по п.18, имеющий значение Т_1/2 (а) 0,065 ± 0,014 ч.
35. 35. Полимер по п.18, имеющий значение Т_1/2 (β) 0,448 ± 0,0157 ч.
36. 36. Полимер по п.18, имеющий значение С_тах 82,96 ± 5,11 мкг/мл.
37. 37. Полимер по п.18, имеющий значение площади под кривой (АИС) 18,29 ± 1,62 ч х мкг/мл.
38. 38. Полимер по п.18, имеющий значение времени клиренса (СЬ) 54,67 ± 4,86 мл/ч.
39. 39. Полимер по п.18, имеющий значение среднего времени удержания (МКТ) 0,465 ± 0,13 ч.
40. 40. Полимер по п.18, имеющий значение объемного распределения при стабилизированном состоянии (У₈₈) 25,43 ± 5,2 мл/ч.
41. 41. Полимер по п.18, который является выделенным из мочи, кала, тканей и смыва.
42. 42. Полимер по п.18, который является преимущественно выделенным из мочи и кала.
43. 43. Полимер по п.18, около 67% которого являются выделенными из мочи через 48 ч после дозирования.
44. 44. Полимер по п.18, около 17% которого являются выделенными из кала через 48 ч после дозирования.
45. 45. Полимер по п.18, около 84% которого являются выделенными из мочи, кала, тканей и смыва через 48 ч после дозирования.
46. 46. Полимер по п.18, который не вызывает локальной токсичности на участке введения через 48 ч после подкожного введения водного раствора полимера в ухо кролика.
47. 47. Полимер по п.18, который не вызывает локальной токсичности на участке введения через 24 ч после внутривенного введения водного раствора полимера в ушную вену кролика.
48. 48. Полимер по п.18, который не вызывает общей токсичности, если вводится внутривенным болюсным путем крысам Вистара до пяти последовательных дней при дозе от 400 до 800 мг/кг.
49. 49. Полимер по п.18, который не вызывает значительной гематологической токсичности, если вводится внутривенным болюсным путем крысам Вистара до пяти последовательных дней при дозе от 400 до 800 мг/кг.
50. 50. Полимер по п.18, представляющий собой [¹⁴С]-меченный полимер, включающий три мономерных звена, выбранных из 1-винилпирролидона (УР), Ν-изопропилакриламида (МРАМ) и сложного эфира малеинового ангидрида и полиэтиленгликоля (МРЕО), поперечно сшитых Ν,Ν'-метилен-бисакриламидом (МВА).
51. 51. Полимер по п.18, представляющий собой [¹⁴С]-меченный полимер, где весовое соотношение мономеров МРАМ:УР находится в диапазоне от 55:22 до 65:35, а соотношение мономеров (МРАМ + УР): МРЕО находится в диапазоне от 90:10 до 95:5.
52. 52. Полимер по п.50 или 51, где весовое соотношение мономеров МРАМ:УР находится в диапазоне от 58:32 до 62:28, а соотношение мономеров (МРАМ + УР):МРЕО находится в диапазоне от 80:20 до 95:5.
53. 53. Набор, включающий (а) ампулу, содержащую раствор слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения в водорастворимом растворителе или смеси водорастворимых растворителей, и (Ь) другую ампулу, содержащую раствор полимера по п.18, и фармацевтически приемлемые наполнители, где растворы в ампулах (а) и (Ь) находятся в объемном соотношении от 1:1 до 1:10, при этом набор предназначен для получения фармацевтической композиции слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц для введения пациентам.

    - 29 017682
54. 54. Набор по п.53, где слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения имеют растворимость в воде менее чем 10 мг/мл.
55. 55. Набор по п.53, где слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение выбрано из класса противораковых агентов, противовоспалительных агентов, противогрибковых агентов, противорвотных средств, противогипертензивных агентов, половых гормонов, стероидов, антибиотиков, анестезирующих средств или иммуномодуляторов.
56. 56. Набор по п.55, где противораковые агенты выбраны из Паклитаксела, Доцетаксела и таксановых производных; Иринотекана, Топотекана и кампотециновых производных; Доксорубицина, Дауномицина и антрациклиновых производных; Цисплатина; Оксалиплатина; 5-Фторурацила; Митомицина; Метотрексата; Этопосида; бетулиновой кислоты и ее производных; и Веделолактона и его производных.
57. 57. Набор по п.55, где противовоспалительные агенты выбраны из Индометацина, Ибупрофена, Кетопрофена, Флубипрофена, Пироксикама, Теноксикама и Напроксена.
58. 58. Набор по п.55, где противогрибковые агенты выбраны из Кетоконазола и Амфотерицина В.
59. 59. Набор по п.55, где половые гормоны выбраны из Тестостерона, Эстрогена, Прогестерона и Эстрадиола.
60. 60. Набор по п.55, где стероиды выбраны из Дексаметазона, Преднизолона и Триамцинолона.
61. 61. Набор по п.55, где противогипертензивные агенты выбраны из Каптоприла, Рамиприла, Теразозина, Миноксидила и Празозина.
62. 62. Набор по п.55, где противорвотные средства выбраны из Ондансетрона и Гранисетрона.
63. 63. Набор по п.55, где антибиотики выбраны из Метронидазола и фусидовой кислоты.
64. 64. Набор по п.55, где иммуномодуляторы выбраны из Циклоспорина и бифенилдиметил дикарбоновой кислоты.
65. 65. Набор по п.55, где анестезирующие средства выбраны из Прополола, Альфаксалона и Гексобарбитала.
66. 66. Набор по п.56, где производные бетулиновой кислоты выбраны из М1-1098 формулы (II), ΌΚΡ4012 формулы (III) и ΌΚΤ-4015 формулы (ГУ)
67. 67. Набор по п.53, где водорастворимый растворитель выбран из этанола, диметилформамида, диметилацетамида, диметилсульфоксида, диэтилсульфоксида, полиэтиленгликолей различного молекулярного веса, полипропиленгликолей различного молекулярного веса, полисорбата 80, полисорбата 20, полиоксиэтилированного растительного масла, полиэтоксилированного касторового масла или глицерина и их смесей.
68. 68. Набор по п.53, где фармацевтически приемлемые наполнители выбраны из натрия дезоксихолата; солей желчных кислот, полисорбата 80; полисорбата 20, полиоксиэтилированного растительного масла; полиэтоксилированного касторового масла; полисахаридов, подобных декстрозе, сахарозе, лактозе и маннитолу; сложных эфиров сорбитана или спанов различных марок, сложных эфиров жирных кислот различных марок (туф или полоксомеров различных марок и их смесей.
69. 69. Набор по п.68, где фармацевтически приемлемые наполнители дополнительно включают буферный агент.
70. 70. Набор по п.69, где буферный агент является цитратом натрия.
71. 71. Набор по п.53, факультативно включающий растворяющую жидкость, шприц и иглу, имеющую внутренний диаметр в диапазоне от 0,305 до 0,356 мм, если объем небольшой, 1-5 мл раствора ампулы а) добавить до около 35-кратного ее объема, включающего содержимое ампулы Ь) в растворяющую жидкость, или шприц и иглу, имеющую внутренний диаметр в диапазоне от 0,559 до 0,711 мм, если объем больше, 10-15 мл содержимого ампулы а) нужно добавить до около 35-кратного ее объема, включающего содержимое ампулы Ь) в растворяющую жидкость.
72. 72. Фармацевтическая композиция в форме наночастиц, пригодная для введения пациентам, включающая слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение, водорастворимый раствори

    - 30 017682 тель, полимер по п.18 и фармацевтически приемлемые наполнители, все из которых содержатся в растворяющей жидкости.
73. 73. Фармацевтическая композиция по п.72, где слабо растворимые в воде лекарственные средства выбраны из класса противораковых агентов, противовоспалительных агентов, противогрибковых агентов, противорвотных средств, противогипертензивных агентов, половых гормонов, стероидов, антибиотиков, анестезирующих средств или иммуномодуляторов.
74. 74. Фармацевтическая композиция по п.72, где фармацевтически приемлемые наполнители выбраны из натрия дезоксихолата, солей желчных кислот, полисорбата 80; полисорбата 20, полиоксиэтилированного растительного масла, полиэтоксилированного касторового масла, полисахаридов, подобных декстрозе, сахарозе, лактозе и маннитолу, сложных эфиров сорбитана или спанов различных марок, сложных эфиров жирных кислот различных марок (туг)) или полоксомеров различных марок и их смесей.
75. 75. Фармацевтическая композиция по п.72, где водорастворимые растворители выбраны из этанола, диметилформамида, диметилацетамида, диметилсульфоксида, диэтилсульфоксида, полиэтиленгликолей различного молекулярного веса, полипропиленгликолей различного молекулярного веса, полисорбата 80, полисорбата 20, полиоксиэтилированного растительного масла, полиэтоксилированного касторового масла или глицерина и их смесей.
76. 76. Фармацевтическая композиция по п.72, где растворяющая жидкость выбрана из воды, солевого раствора, 5 и 10% растворов декстрозы, раствора декстрозы и натрия хлорида, раствора натрия лактата, лактированного раствора Рингера, раствора маннитола, раствора маннитола с декстрозой или натрия хлоридом, раствора Рингера, раствора натрия хлорида, стерильной воды для инъекции и сложных растворов электролитов, включающих различные комбинации электролитов, декстрозы, фруктозы и инвертированного сахара.
77. 77. Фармацевтическая композиция по п.72, где слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение заключено в полимерную оболочку в форме наночастиц.
78. 78. Фармацевтическая композиция по п.77, где размер наночастиц находится в диапазоне от 30 до 150 нм.
79. 79. Фармацевтическая композиция по п.72, где полимер имеет структуру формулы (I), содержит мономерные νΡ и ΝΙΡΑΜ в количествах менее чем 0,001%; имеет пики δ в 174, 76,6-77,6, 70,6, 41,6, 31,8 и 22,6 в ¹³С ЯМР спектре; имеет пики δ в 1,14, 1,45, 1,63, 1,99, 2,36, 3,0, 3,23, 3,62-3,66, 3,72 и 3,97 в '11 ЯМР спектре; имеет частоту значений см^-1 в 3500, 3296, 2972-2933, 1546, 1387, 1367 и 1172-1129 в ИКФурье спектре.
80. 80. Фармацевтическая композиция по п.72, где полимер имеет структуру формулы (I); содержит мономерные νΡ и ΝΙΡΑΜ в количествах менее чем 0,001%; имеет значение Т_!/2 (К10) 0,152 ± 0,018 ч; значение Т_!/2 (а) 0,065 ± 0,014 ч; значение Т_!/2 (β) 0,448 ± 0,0157 ч; значение С_тах 82,96 ± 5,11 мкг/мл; значение площади под кривой (АИС) 18,29 ± 1,62 ч х мкг/мл; значение времени клиренса (СЬ) 54,67 ± 4,86 мл/ч; значение среднего времени удержания (МКТ) 0,465 ± 0,13 ч; значение объемного распределения в стабилизированном состоянии (V,,) 25,43 ± 5,2 мл/ч.
81. 81. Фармацевтическая композиция по п.72, имеющая рН от 6,0 до 8,5.
82. 82. Способ получения фармацевтической композиции слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений в форме наночастиц по п.72, включающий стадии, на которых:

    ί) получают концентрат лекарственного средства/соединения путем растворения слабо растворимого в воде лекарственного средства или соединения в пригодном водорастворимом растворителе или смеси водорастворимых растворителей;

    ίί) получают водный концентрат полимера и фармацевтически приемлемых наполнителей, при этом:

    a) сначала добавляют необходимое количество полимера формулы (I), имеющего уровень токсичных ΝΙΡΑΜ и νΡ < 0,001%, к приемлемому количеству воды для инъекции для получения раствора;

    b) добавляют фармацевтически приемлемые наполнители и буферный агент в раствор полимера в воде;

    ϊϊΐ) смешивают раствор со стадии и Ь) с растворяющей жидкостью до получения прозрачного раствора;

    ίν) применяют иглу с внутренним диаметром от 0,305 до 0,356 мм для добавления меньшего объема раствора со стадии ί) в раствор со стадии ίίί) за 4 с; или

    ν) применяют иглу с внутренним диаметром от 0,559 до 0,711 мм для добавления большего объема раствора со стадии ί) в раствор со стадии ίίί) за 10 с;

    νί) вводят раствор со стадии ί) в раствор со стадии ίίί), где игла шприца, через который добавляют раствор со стадии ί), должна остаться погруженной в раствор со стадии ίίί); и νίί) факультативно, держат контейнер, содержащий раствор со стадии ίίί), в перевернутом положении во время инъекции раствора со стадии ί).
83. 83. Способ по п.82, где применяемые слабо растворимые в воде лекарственные средства выбраны из класса противораковых агентов, противовоспалительных агентов, противогрибковых агентов, противо

    - 31 017682 рвотных средств, противогипертензивных агентов, половых гормонов, стероидов, антибиотиков, анестезирующих средств или иммуномодуляторов.
84. 84. Способ по п.82, где применяемые фармацевтически приемлемые наполнители выбраны из натрия дезоксихолата; солей желчных кислот, полисорбата 80; полисорбата 20, полиоксиэтилированного растительного масла; полиэтоксилированного касторового масла; полисахаридов, подобных декстрозе, сахарозе, лактозе и маннитолу; сложных эфиров сорбитана или спанов различных марок, сложных эфиров жирных кислот различных марок (туг)) или полоксомеров различных марок и их смесей.
85. 85. Способ по п.82, где водорастворимые растворители выбраны из этанола, диметилформамида, диметилацетамида, диметилсульфоксида, диэтилсульфоксида; полиэтиленгликолей различного молекулярного веса; полипропиленгликолей различного молекулярного веса; полисорбата 80, полисорбата 20, полиоксиэтилированного растительного масла, полиэтоксилированного касторового масла или глицерина и их смесей.
86. 86. Способ по п.82, где применяемые растворяющие жидкости выбраны из воды, солевого раствора, 5 и 10% растворов декстрозы, раствора декстрозы и натрия хлорида, раствора натрия лактата, лактированного раствора Рингера, раствора маннитола, раствора маннитола с декстрозой или натрия хлоридом, раствора Рингера, раствора натрия хлорида, стерильной воды для инъекции и сложных растворов электролитов, включающих различные комбинации электролитов, декстрозы, фруктозы и инвертированного сахара.
87. 87. Способ по п.82, где меньший объем раствора на стадии ίν) относится к объему 1-5 мл раствора со стадии 1).
88. 88. Способ по п.82, где больший объем раствора на стадии ν) относится к объему 10-15 мл раствора со стадии 1).
89. 89. Способ по п.82, где размеры частиц слабо растворимых в воде лекарственных средств или соединений, заключенных в полимерную оболочку в полученной фармацевтической композиции, находятся в диапазоне от 30 до 150 нм.
90. 90. Фармацевтическая композиция по п.72, полученная способом по п.82.
91. 91. Фармацевтическая композиция по п.72, полученная способом по п.82, где полимер имеет структуру формулы (I); содержит мономерные УР и НСРАМ в количестве менее чем 0,001% и является безопасным и нетоксичным для введения людям или животным.
92. 92. Фармацевтическая композиция по п.72, полученная способом по п.82, пригодная для лечения патологических состояний, для которых эффективны слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения, выбранные из класса противораковых агентов, противовоспалительных агентов, противогрибковых агентов, противорвотных средств, противогипертензивных агентов, половых гормонов, стероидов, антибиотиков, анестезирующих средств или иммуномодуляторов.
93. 93. Способ лечения патологических состояний у людей или животных, для которых эффективны слабо растворимые в воде лекарственные средства или соединения по пп.55-66, включающий введение фармацевтической композиции наночастиц по п.72, содержащей слабо растворимое в воде лекарственное средство или соединение.
94. 94. Способ по п.93, включающий внутривенные, внутримышечные или подкожные инъекции.