BRPI0610211A2 - uso de chalconas para o tratamento de distúrbios virais - Google Patents

Abstract

USO DE CHALCONAS PARA O TRATAMENTO DE DISTúRBIOS VIRAIS. A presente invenção refere-se aos derivados de chalcona e a composições que contêm tais derivados úteis no tratamento de distúrbiosvirais, inclusive, porém não-limitado ao tratamento de lesões virais resultantes de vírus tal como o vírus do Herpes Simplex.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "USO DECHALCONAS PARA O TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS VIRAIS".

Informação Antecedente

A presente invenção refere-se ao uso de chalconas para o tra-tamento de distúrbios virais. Em uma modalidade, a invenção refere-se aotratamento de lesões virais, por exemplo, ao tratamento de herpes Iabiaisque resultam do vírus Herpes simplex (HSV), com composições que contêmchalconas.

Herpes Iabiais estão muitas vezes associados a um estigmatis-mo desagradável, no entanto, o grande número de indivíduos afetados pelovírus confirma que este é um vírus relevante na nossa sociedade. Tambémdenominado bolhas de febre (Herpes febrilis), os herpes Iabiais são provo-cados pelo vírus Herpes simplex que permanece nos nervos das pessoasatingidas pelo herpes labial. O vírus Herpes simplex é parte do grupo dosvírus herpes e compartilha com a característica distinta da capacidade depermanecer latente dentro do corpo, especificamente nas células neurais,durante longos períodos de tempo ou durante toda a vida do indivíduo.

Os herpes Iabiais são contagiosos e recorrentes. O primeiro sur-to muitas vezes ocorre 1 a 3 semanas depois que foi inicialmente contraído ovírus. O vírus a maioria das vezes se espalha por contato com as feridasabertas de um indivíduo infectado. No entanto, o vírus também pode se es-palhar até mesmo na ausência de feridas abertas ou de quaisquer sintomas.

As feridas inicialmente surgem como pequenas bolhas cheias de fluido sobrea pele.

Os sintomas incluem, porém não estão limitados a, febre, doresmusculares, glândulas inchadas, mal estar, coceira, inflamação, irritação,dores, inchaço e ardência. Estes sintomas são seguidos por uma sensaçãoinicial de formigamento para o paciente então seguida de bolhas dolorosas.O período de existência habitual das dores pode durar de 2 a 3 semanascom o descascamento das bolhas e então eventualmente a queda da pelecompletamente, geralmente em nenhuma formação de cicatriz na área infec-tada da pele.As causas para os surtos incluem um enfraquecimento do siste-ma imunológico proveniente de resfriados ou de outras infecções, do períodode tempo em que a pessoa apresentou o vírus, exaustão, estresse emocio-nal e físico, o ciclo menstrual, a imunossupressão, superexposição ao ventoe à luz solar e uso maciço de droga e de bebidas alcoólicas.

Os tipos mais comuns deste vírus são Herpes simplex vírus-1(HSV-1) e Herpes simplex vírus-2 (HSV-2). A diferença principal entre osdois vírus é este instala o seu local de latência no corpo. O HSV-1 habitual-mente permanece latente no gânglio trigeminal, nas células neurais localiza-das ao redor da orelha, ao passo que o HSV-2 habitualmente permanecelatente no gânglio sacral, nas células neurais localizadas na base da espi-nha.

O HSV-1 é responsável pela formação de herpes Iabiais forma-dos ao reador dos lábios e menos in freqüentemente, no queixo, nas nari-nas, nos dedos e nas gengivas e no céu da boca de um indivíduo infectado.Extremamente incomum, embora possível e menos conhecido do público, éa formação de herpes Iabiais na área genital de pacientes com HSV-1. Des-prezado pelo público como mais sociavelmente aceitável e geralmente maisde uma inconveniência do que um risco para a saúde, o HSV-1 pode causarsérios perigos para um indivíduo infectado. O HSV-1 pode se espalhar paraos olhos causando herpes ocular, que pode causar cegueira. O HSV-1 tam-bém tem a capacidade de se espalhar para o cérebro causando encefalitepor herpes, que pode levar à morte.

O mais abominável dos vírus Herpes simplex, o HSV-2 é res-ponsável por herpes Iabiais na área genital. Acredita-se que proximadamen-te 1 em 4 indivíduos estejam infectados com HSV-2. O HSV-2 também podeser espalhado para os olhos e para o cérebro, como discutido acima. Nãosomente o HSV-2 é um sofrimento físico desconfortável e muitas vezes dolo-roso, ele pode causar sofrimento emocional e psicológico ao indivíduo afetado.

O Herpes simplex vírus-3 (HSV-3), também conhecido como ví-rus varicella-zoster, causa catapora e posteriormente, zona. Varicella é in-fecção primária que causa a catapora. A catapora inicialmente surge comopequenas protuberâncias vermelhas no abdômen, peito ou face, posterior-mente transformando-se em bolhas que eventualmente formam crosta e ca-em do corpo. Embora os sintomas nem sempre surjam até aproximadamen-te dois dias depois da exposição ao vírus, os sintomas podem durar de cincoa dez dias e incluir uma erupção vermelha com coceira, febre e dor de cabeça.

Altamente contagiosa, a catapora é espalhada por um indivíduoinfectado, principalmente muitas vezes através de coriza, tosse e pela respi-ração. Ela é então ipalada pelos pulmões do indivíduo recém-infectado, pas-sando para a corrente sangüínea. Entrando nas células neurais, o víruspermanece latente durante anos, até mesmo durante toda a vida, possivel-mente reaparecendo como Herpes zoster ou zona. Acredita-se que a zonaseja contraída de um indivíduo com catapora, nunca de alguém com zona.

Os sintomas iniciais da zona habitualmente incluem uma sensação de formi-gamento, coceira, torpor ou dores lancinantes na ou sob a pele. A zona ge-ralmente afeta um lado do corpo, caracterizada por um surto de bolhas quecoçam seriamente dolorosas. Pode ocorrer neuralgia pós-herpética como umefeito retardado doloroso da zona. Tratamentos para neuralgia pós-herpéticaincluem esteróides, drogas antivirais, antidepressivos, anticonvulsivos e a-gentes tópicos.

O tratamento de herpes Iabiais com certas chalconas isoladasda Casca do Caule Stem Bark da Millettia Ieucantha foi descrito em Phrutivo-rapongkpul e outros, Chem. Pharm. Bull 51 (2) 187-190 (2003). A PatenteUS Ns. 4.327.088 descreve acrilofenonas fosfonóxi-substituídas como úteisno tratamento de infecções causadas por rinovírus, enterovírus e vírus deinfluenza humanos.

Antivirais tais como aciclovir, valciclovir ou farciclovir podem serusados para tratar HSV-1 e HSV-2 oral e genital, assim como zona e catapo-ra resultantes de HSV-3. Estes antivirais reduzem o período de tempo que énecessário para a cicatrização das bolhas e podem ser ingeridos oralmenteem uma base regular para evitar recorrências. No entanto, estes fármacosexistentes podem causar efeitos colaterais tais como, por exemplo, náusea,vômitos, diarréia, dor de cabeça, tonteiras e erupções e alguns usuários po-dem sentir desorientação, alucinações, delírio e tremores. Também podeocorrer função renal anormal como um resultado da administração de aciclo-vir, valciclovir ou farmciclovir. Os pacientes com disfunção renal pre-existente ou desidratação ou com disfunção hepática são aconselhados aouso com cautela.

A função renal anormal também pode ocorrer em função dasinterações do fármaco com fármacos nefrotóxicos, algumas medicaçõescontra dores e ciclosporina.

São, portanto, desejáveis novas composições eficazes e segu-ras para tratar lesões virais, tais como herpes labial, que minimizem e/ouque eliminem o número e/ou a gravidade das lesões.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a composições que contêm chal-conas e a processos para utilização de tais chalconas, tal como no tratamen-to de lesões virais.

Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um pro-cesso para o tratamento de lesões virais que inclui a administração a umsujeito que necessite tal tratamento de uma composição que contenha com-postos de fórmula I:

<formula>formula see original document page 5</formula>

Formula I

em que,

R1 e R2 são independentemente um do outro -OH ou -OR;

R é Ci-C6-alquila, acila ou glicosila;

R3 é independentemente um do outro Ci-C6-alquila, C2-io-alquenila, carbóxi, alquilcarbonila, halogênio, nitro ou ciano;

m é 0-5;

η é 0-5 eρ é 0-5;

com a condição de que quando m = 3, então R1 não seja simul-taneamente hidróxi na posição 2' e alcóxi nas posições 4' e 6';

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômerose sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em algumas modalidades, as lesões virais resultam de um vírusselecionado entre um vírus herpes (por exemplo, HSV-1, HSV-2 ou HSV-3).Em outras modalidades as lesões virais são herpes labiais.

Em algumas modalidades, o método de administração é tópico,tal como aplicando-se topicamente o composto à lesão. Em outras modali-dades o método de administração é oral.

Em um outro aspecto, a invenção refere-se a um processo parao tratamento de um ou mais sintomas associados com infecções virais emum sujeito que sofre com um vírus, tais como Herpes herpes simplex, comuma composição que contém um composto de Fórmula I. Em algumas mo-dalidades, os sintomas incluem febre, dores musculares, glândulas incha-das, mal estar, coceira, inflamação, irritação, dores, inchaço e ardência.

Em algumas modalidades, a invenção refere-se a composiçõespara o tratamento de lesões virais que incluem pelo menos um dos compos-tos a seguir: 2',4' dihidróxi-2,3-dimetoxichalcona; 2'-hidróxi-3,4-dimetoxichalcona; 2'-hidróxi-4,4'-dimetoxichalcona; 6,-hidróxi-2,2,,3,,4>4·-pentametoxichalcona; 2'-hidróxi-2,2',4-dimetoxichalcona; 2'-hidróxi-2,3, 5'-trimetoxichalcona; 2'-hidróxi-2,4,4'-trimetoxichalcona; 2'-hidróxi-2,4,5'-trimetoxichalcona; 2'-hidróxi-3,4,5'-trimetoxichalcona; 2,2',4'-trihidroxichalcona; 2',4,4'-trihidroxichalcona; 2',3l,4'-trihidroxichalcona; 2',4,5'-trimetoxichalcona; 2',4,5'-trihidroxichalcona; 2',3,4,5'-tetrametoxichalcona; 2'-hidróxi-2,4,5'-trimetoxichalcona; 2'4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona; 2',4'-dihidróxi-2,3-dimetoxichalcona; 2',4,4,,6'-tetrametoxichalcona; 2',3,4,4',6'-pentametoxichalcona; 4-hidróxi-2',4',6'-trimetoxichalcona; 2',4,4',6'-tetrametoxichalcona; 2'-hidróxi-3,3',4,5-tetrametoxichalcona;2,4-dihidróxi-2',4',6'-tetrametoxichalcona; 3-hidróxi-2',4,4',6'-tetrametoxichalcona; 4'-hidróxi-2'-metil-3,4,5-trimetoxichalcona; 4'-hidróxi-2'-metil-4-metoxichalcona;2,,4,4'-trihidróxi-3-metoxichalcona; 5-geranil-2,2'4,4'-tetrahidroxichalcona;S^^-trihtàróxi^-metóxi-S-prenilchalcona; 4,4'-dihidróxi-3,5-diprenilchalcona;2',4,4'-trihidróxi-3-prenilchalcona; 2',4,4,-trihidróxi-3, 5'-diprenilchalcona;2',4,4l-trihidróxi-3,3',5-triprenilchalcona; 2',3,3,,4,4'-pentahidróxi-3'-prenilchalcona;2,2\4,-trihidróxi-3-prenilchalcona; 2,,3,4,4',6'-pentahidróxi-2,5-diprenilchalcona; 4,4,,6'-trihidróxi-3,3,-diprenilchalcona; 3,4,4'-trihidróxi-2-metoxichalcona; 2',6'-dihidróxi-4-metoxichalcona; 2,-hidróxi-3',4'-dimetoxichalcona; 2'-hidróxi-2,4-dimetoxichalcona; 2l-hidróxi-2J4'-dimetoxichalcona; 2'4,4'-trihidróxi-6-metóxi-3-prenilchalcona; 3'4,4'-trihidróxi-2-metóxi-3-prenilchalcona; 2'-hidróxi-2,4'-dimetoxichalcona e 5-bromo-4-hidróxi-3,4'-dimetoxichalcona.

Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se a um pro-cesso para o tratamento de infecções virais que inclui administrar a um sujei-to que necessite tal tratamento uma composição que contenha compostosde Fórmula I, representados pela Fórmula IA:

<formula>formula see original document page 7</formula>

Fórmula IA

em que,

R4 é hidrogênio ou -OR' e

R1 é hidrogênio ou CrC6-alquila;

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômero-se sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em algumas modalidades as lesões virais são herpes labiais.

Em um outro aspecto, a invenção refere-se a um processo parao tratamento de um ou mais sintomas associados a infecções virais em umsujeito que sofre de um vírus, tal como um vírus Herpes simplex, com umacomposição que contém um composto de fórmula IA. Em algumas modali-dades, os sintomas incluem febre, dores musculares, glândulas inchadas,mal estar, coceira, inflamação, irritação, dores, inchaço e ardência.

Em algumas modalidades as composições contêm um compostoselecionado entre 2",4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona, 2',4'-dihidróxi-4-metoxichalcona, 2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona, 2',4',4-trihidroxichalcona,2',4,4'-trihidróxi-3-metoxichalcona e 2',3,4'-trihidróxi-4-metoxichalcona inclu-sive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômeros e sais farma-ceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em algumas modalidades as composições contêm 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona com a estrutura a seguir:

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômeros e sais far-maceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em outras modalidades, as composições contêm o composto2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona com a estrutura a seguir:

<formula>formula see original document page 8</formula>

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômerose sais far-maceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em outras modalidades, as composições contêm o composto2',4'-dihidróxi-4-metoxichalcona com a estrutura a seguir:

<formula>formula see original document page 8</formula>

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômerose sais far-maceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em outras modalidades, as composições contêm o composto2',4',4-trihidroxichalcona com a estrutura a seguir:

<formula>formula see original document page 8</formula>

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômerose sais far-maceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em outras modalidades as composições contêm o composto2l,4,4,-trihidróxi-3-metoxichalcona

<formula>formula see original document page 9</formula>

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômeros e sais far-maceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em outras modalidades as composições contêm o composto2,,3,4'-trihidróxi-4-metoxichalcona:

<formula>formula see original document page 9</formula>

inclusive estereoisômeros isolados, misturas de estereoisômeros e sais far-maceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Em algumas modalidades, as lesões virais resultam de um vírusselecionado entre Herpes simplex vírus-1, Herpes simplex vírus-2 e Herpessimplex vírus-3.

Em uma outra modalidade, a invenção refere-se a um processopara o controle de crescimento viral e replicação resultante de vírus Herpessimplex, que inclui administara ao sujeito que necessite tal tratamento umacomposição que contém um composto de fórmula IA, tais como 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona, 2',4'-dihidróxi-4-metoxichalcona, 2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona, 2',4',4-trihidroxichalcona, 2',4,4'-trihidróxi-3-metoxichalcona e 2',3,4'-trihidróxi-4-metoxichalcona, inclusive estereoisôme-ros isolados, misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitá-veis dos mesmos.

Em uma outra modalidade, a invenção refere-se à composiçãoque está incluída em uma formulação tópica. Em uma outra modalidade, acomposição é administrada oralmente.

Em outras modalidades, a invenção refere-se ao método de tra-tamento com uma composição que também contém pelo menos um dos se-guintes: (i) um ingredientee ativo protetora da pele selecionado entre alanto-ína, hidróxido de alumínio gel, calamina, manteiga de cacau, óleo de fígadode bacalhau, farinha de aveia coloidal, dimeticona, glicerina, gordura dura,caulim, lanolina, óleo mineral, petrolato, bicarbonato de sódio, amido tópico,petrolato branco, acetato de zinco e/ou oxido de zinco; (ii) um ingredienteexterno, anestésico ou antiprurítico selecionado entre benzocaína, picrato debutamaben, dibucaína, cloridrato de dibucaína, cloridrato de dimetiosoquina,cloridrato de diclonina, lidocaína, cloridrato de lidocaína, cloridrato de pra-moxina, tetracaína, cloridrato de tetracaína, álcool benzílico, cânfora, meta-cresol canforado, alcatrão de junípero, mentol, fenol, fenolato de sódio re-sorcinol, cloridrato de tripelenamina, aspirina, hidrocortisona, acetato de hi-drocortisona e/ou cloridrato de difenidramina e/ou iii) um outro ingredienteselecionado entre isotiocianato de alila, solução de amônia, aspirina, bismutode tartarato e sódio, capsaicina, oleorresina de capsicum, hidrato de cloral,clorobutanol, sulfato de ciclometicaína, eucalipto, eugenol, salicilato de glicol,hexilresorcinol, diclõridrato de histamina, cloridrato de metapirilina, nicotinatode metila, salicilato de metila, pectina, salicilamida, ácido tânico, timol, salici-lato de trolamina, óleo de turpentine, sulfato de zinco, acetato de alumínio,sulfato de alumínio, estearato de sacarose, distereato de sacarose e/ou ha-mamélis.

Em outras modalidades, a invenção refere-se ao processo detratamento com uma composição que contém ainda um ou mais agentesselecionados do agentes antimicrobianos, outros agentes antivirais, agentesantifúngicos, antioxidantes, agentes de tamponamento, filtros solares, agen-tes cosméticos, fragrâncias, lubrificantes, hidratantes, agentes de secagem eagentes espessantes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Definições

Como usado no presente relatório descritivo, as palavras e ex-pressões a seguir pretendem geralmente ter os significados como apresen-tados a seguir, exceto até a extensão que o contexto no qual elas são usa-das indique outro significado.

O termo "ingredientes adstringente ativos" inclui porém não estálimitado a, acetato de alumínio, sulfato de alumínio e hamamélis.

O termo "acila" refere-se aos grupos -C(O)-H, -C(0)-(alquila),-C(0)-(cicloalquila), -C(0)-(alquenila).O termo "alquenila" refere-se a uma cadeia de hidrocarbonetomonorradical ramificada ou não-ramificada, insaturada ou poliinsaturada,que tem desde aproximadamente 2 até 10 átomos de carbono. Este termo éexemplificado por grupos tais como etenila, but-2-enila, 3-metil-but-2-enila(também denominado "prenila", octa-2,6-dienila, 3,7-dimetil-octa-2,6-dienila(também denominado "geranila") e similares.

O termo "alquila" refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto satu-rada monorradical ramificada ou não ramificada. Este termo é exemplificadopor grupos tal como metila e inclui etila, propila, butila, t-butila, pentila e simi-lares.

O termo "alcoxicarbonila" significa um radical "-COOR1", em queR' é um grupo alquila como aqui definido. Exemplos de radicais alcoxicarbo-nila incluem, porém não são limitados a, metoxicarbonila, etoxicarbonila esimilares.

O termo "carbóxi" refere-se à porção "-COOH."

O termo "cosméticos" inclui maquilagem, base e produtos para ocuidado da pele. O termo "maquilagem" refere-se aos produtos que deixamcor na face, inclusive bases, isto é, camuflagens, bálsamos para os lábios,batons etc.. O termo "base" refere-se a produtos líquidos, em crème, em es-puma, compactos, de camuflagem ou similares que tornam uniforme a colo-ração global da pele. A base é tipicamente fabricada para funcionar melhorsobre a pele hidratada e/ou tratada com óleo. O termo "produtos para o cui-dado da pele" refere-se a produtos usados para tratar ou então cuidar para,hidratar, melhorar ou limpar a pele. O termo "cosméticos" pode também in-cluir outros produtos farmacêuticos inofensivos protetores da pele para usohumano no balcão como definido no código de regulamentos federais taiscomo 21 CFR 347 e 21 CFR 348.

O termo "composto de fórmula I" ou "composto de fórmula IA"pretende abranger os derivados da invenção como divulgados, estereoisô-meros, misturas de estereoisômeros e/ou os sais farmaceuticamente aceitá-veis de tais compostos. Além disso, os compostos empregados nesta inven-ção incluem os isômeros estereoquímicos individuais e misturas de isôme-ros. Para fins de brevidade, exceto quando especificamente indicado ao con-trário (por exemplo, por designação de um único sal, isômero ou mistura), otermo devia ser entendido para incluir estereoisômeros isolados, misturas deestereoisômeros, sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-fármacos dosmesmos.

O termo "quantidade eficaz" refere-se àquela quantidade de umcomposto da presente invenção que é suficiente para efetuar o tratamento,como definido neste caso, quando administrada a um mamífero que necessi-te tal tratamento. A quantidade eficaz vai variar dependendo do sujeito e doestado, da doença que está sendo tratada, do peso e da idade do sujeito, dagravidade do estado da doença, do composto em particular escolhido, doregime de dosagem a ser seguido e similares, tudo podendo ser facilmentedeterminado por um versado na técnica.

O termo "ingredientes externos analgésicos, anestésicos e anti-pruríticos" inclui, porém não está limitado a benzocaína, picrato de butama-ben, dibucaína, cloridrato de dibucaína, cloridrato de dimetiosoquina, clori-drato de diclonina, lidocaína, cloridrato de lidocaína, cloridrato de pramoxina,tetracaína, cloridrato de tetracaína, álcool benzílico, cânfora, metacresol can-forado, alcatrão de junípero, mentol, fenol, fenolato de sódio resorcinol, clori-drato de tripelenamina, aspirina, hidrocortisona, acetato de hidrocortisonae/ou cloridrato de difenidramina.

O termo "inflamação" refere-se à resposta protetora localizadaprovocada pela destruição dos tecidos. É caracterizada por sinais de dores,calor, vermelhidão e/ou inchaço.

O termo "halogênio" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo.

O termo "glicosila" refere-se a um derivado de açúcar com 5 ou6 carbonos. Exemplos de glicosila incluem porém não estão limitados a alo-sila, altrosila, glicosila, manosila, gulosila, idosila, galactosila, talosila, arabi-nosila, xilosila, lixosila, ramnosila, ribosila, desoxifuranosila, desoxipiranosilae desoxirribosila. A glicose pode ser azida substituída ou O-acetilada, O-alquilada, O-sililada, O-estanilada ou O-estanilidenada.

O termo "farmaceuticamente aceitáveis" refere-se àqueles com-postos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro doâmbito do julgamento justo do médico, adequados para contato com os teci-dos dos seres humanos e animais sem excessivas toxicidade, irritação, res-posta alergia ou outras complicações do problema correspondente com umarazão razoável de benefício / risco.

O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a saisque mantenham a eficiência biológica e as propriedades dos compostos des-ta invenção e que não sejam biologicamente ou de outra foram indesejáveis.Em alguns casos, os compostos desta invenção são capazes de formar saisem virtude da presença de grupos fenólicos e/ou carboxila. Os sais de adi-ção de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados partindode bases inorgânicas ou orgânicas. Os sais derivados de bases inorgânicas,incluem para fins de exemplo apenas, sais de sódio, de potássio, de lítio, deamônio, de cálcio e de magnésio. Os sais derivados de bases orgânicas,incluem para fins de exemplo apenas sais de aminas primárias, secundáriase terciárias.

O termo "pró-fármaco" refere-se a uma forma inativa de um com-posto que deve ser metabolizado in vivo, por exemplo, por fluidos biológicosou enzimas, e/ou por um sujeito depois da administração em uma forma ati-va do composto para produzir o efeito farmacológico desejado. O pró-fármaco pode ser metabolizada antes da absorção, durante a absorção, de-pois da absorção ou a um sítio específico. Podem ser utilizados formas depró-fármaco de compostos, por exemplo, para melhorar a biodisponibilidade;melhorar a aceitabilidade do sujeito tais como mascaração ou redução dascaracterísticas desagradáveis tais como sabor amargo, odor ou irritabilidadegastrointestinal; alterar a solubilidade; ser responsável por liberação ou apli-cação prolongada ou retardada; melhorar a facilidade de formulação e/oufornecer aplicação sítio-específica do composto. A referência a um compostoneste caso inclui as formas de pró-fármaco de um composto.

O termo "estereoisômeros" refere-se a compostos que tenhamfórmulas moleculares idênticas, mas que diferem no arranjo de seus átomosno espaço. As configurações dos estereoisômeros que devem a sua exis-tência à rotação impedida ao redor das duplas ligações são diferenciadaspor seus prefixos eis e trans, (Z e E), que indicam que os grupos estão nomesmo lado (eis ou Z) ou em lados opostos (trans ou E) da dupla ligação namolécula de acordo com as regras de Cahn-Ingold-Prelog.

O termo "produtos para o cuidado da pele" pode incluir, mas nãoestá limitado a, ingredientes ativos protetores da pele, ingredientes ativosadstringentes, ingredientes externos analgésicos, anestésicos e antipruríti-cos como publicado em 21 CFR 347.10, 347.12 e 348.10 e outros ingredien-tes como publicado em 55 FR 3370 ou misturas dos mesmos.

O termo "ingredientes ativos protetores da pele" inclui, mas nãoestá limitado a alantoína, hidróxido de alumínio gel, calamina, manteiga decacau, óleo de fígado de bacalhau, farinha de aveia coloidal, dimeticone,glicerina, gordura dura, caulim, lanolina, óleo mineral, petrolato, bicarbonatode sódio, amido tópico, petrolato branco, acetato de zinco e óxido de zinco.Os ingredientes ativos protetores da pele também podem incluir filtros solares.

O termo "filtro solar" pode incluir, porém não está limitado a, fil-tros solares orgânicos ou inorgânicos, bloqueadores solares de óxido de ti-tânio e de óxido de zinco e protetores para a pele e/ou misturas dos mes-mos. Os produtos filtros solares que fornecem um valor mínimo de SPF nãomenor do que 2, incluem, porém não estão limitados a, ácido aminobervzóico(PABA); avobenzona, cinoxato, dioxibenzona, homossalato, antranilato dementila, metoxicinamato, octocrileno, metoxicinamato de octila, salicilato deoctila, oxibenzona, padimato O, ácido fenilbenzimidazol sulfônico, sulisoben-zona, dióxido de titânio, salicilato de trolamina, óxido de titânio e óxido dezinco.

O termo "aplicação tópica" significa depositar ou espalhar sobreo exterior da pele usando, por exemplo, as mãos ou um aplicador tais comolencinho, aplicador, rolo ou borrifador. Como usado neste caso, "veículo tó-pico" significa um ou mais diluentes de carga sólida ou líquida compatíveisque são adequados para administração tópica a um mamífero. Exemplos deveículos tópicos incluem, porém não estão limitados a, água, ceras, óleos,emolientes, emulsificantes, agentes espessantes, agentes de gelificação emisturas dos mesmos.

O termo "tratamento" ou "tratar" inclui (i) inibir a doença ou o dis-túrbio, isto é, interrompendo ou suprimindo o desenvolvimento de sintomasclínicos da doença ou do distúrbio e/ou (ii) aliviando a doença ou o distúrbio,isto é, provocando a regressão ou a cura de sintomas clínicos da doença oudo distúrbio. Exemplos incluem, porem não estão limitados a, supressão darecorrência ou da gravidade de sintomas de infecções virais, tais como lesões.

O termo "lesões virais", refere-se a todas as lesões que foramafetadas por distúrbios virais tais como todos os herpes, inclusive, porémnão restrito a, herpes labiais, herpes genital, zona, catapora, formas de zos-ter e outros distúrbios de natureza viral. Este termo não está restrito a lesõesorofaciais e inclui manifestações em todas as partes do corpo.

Compostos da Invenção

Certos compostos de fórmula I ou de Formula IA podem ser ma-teriais sintéticos ou podem ser obtidos como extratos de fontes naturais. Al-guns gêneros ilustrativos de plantas dos quais estes compostos podem serderivados são primula, trifolium, bidens, e/ou coreopsis.

As vias sintéticas para a produção de compostos da presenteinvenção foram descritas na literatura, por exemplo ^m Bioorganic & Chem.Letters (2004) 14, 3913-3916, Indian Journal of Chemistry (2003) 42B, 202-205 ou Indian Journal of Chemistry (1988) 27B, 67.

Estes compostos também podem ser disponíveis de fontes co-merciais tal como Indofine Chemical Company, Inc. (Somerville, NJ) e Sig-ma-AIdrich (Milwaukee, Wl).

Utilidade, Testagem e Administração

Utilidade Geral

Compostos, composições/formulações e métodos da presenteinvenção são úteis no tratamento ou no controle de doenças virais e/ou desintomas dos mesmos. As doenças virais podem incluir, mas não estão limi-tadas a: molluscum contagiosum\ vírus linfotrófico da célula T humana (H-TLV); vírus da imunodeficiência humana (HIV); vírus da imunodeficiênciahumana adquirida (AIDS); papilomavírus humano; vírus herpes; herpes; di-senteria viral; arenavírus; coronavírus; enterovírus; resfriado comum; gripe;sarampo; rubéola; catapora; cachumba; pólio; raiva; mononucleose; ebola;vírus sincial respiratório; febre da dengue; febre amarela; febre de Lassa;bunyavírus; filovírus; flavivírus; hantavírus; rotavírus; febre do Nilo Ocidental;arbovírus; parainfluenza; varíola; vírus de Epstein-Barr; citomegalovírus;gastroenterite viral; apendicite aguda; hepatite (Α-E; X); herpes labiais; me-ningite; encefalite; zona; pneumonia; febre do Rift Valley; febre de hendra;roséola; febre de mosquito-pólvora; síndrome respiratória aguda e grave(SARS); verrugas; doença provocada por arranhão de gatos; eritema infec-cioso; orf; doença da mão, do pé e da boca e ptiríase rósea.

É um objetivo desta invenção controlar as doenças virais taiscomo os vírus do herpes simplex (HSV-1, HSV-2 ou HSV-3). É um outro ob-jetivo desta invenção melhorar os sintomas associados com infecções virais,tais como porém não limitados a, febre, dores musculares, glândulas incha-das, mal estar, coceira, inflamação, irritação, dores, inchaço e ardência.

É um objetivo desta invenção fornecer composições melhoradase métodos para o tratamento ou controle de HSV-1 e HSV-2 durante a faseativa do vírus. É um outro objetivo desta invenção fornecer composições queajudassem a eliminar e/ou reduzir o número de herpes labiais resultantes deHSV-1 e HSV-2. É um outro objetivo desta invenção fornecer composiçõespara ajudar a evitar o surto de novos herpes labiais resultantes de HSV-1 eHSV-2. É um outro objetivo desta invenção reduzir o tempo de cicatrizaçãodos herpes labiais.

É um outro objetivo desta invenção controlar o crescimento virale/ou a replicação resultante de HSV-1 e HSV-2.

É um objetivo desta invenção fornecer composições e ingredien-tes para composições que possam ser usadas em combinação com medica-ções para lesão viral convencional para reduzir a sua aparência. É tambémum objetivo desta invenção fornecer métodos para a utilização de composi-ções da invenção com tratamentos para lesão viral convencional para novasterapias de combinação que maximizem o controle da lesão viral. É um obje-tivo correspondente aliviar os impactos sociais e psicológicos negativos fre-qüentemente sofridos pelas pessoas afligidas com HSV-1 e HSV-2.

É um objetivo desta invenção fornecer composições melhoradase métodos para o tratamento e o controle de HSV-3 durante a fase ativa dovírus. É um outro objetivo desta invenção fornecer composições que ajudas-sem a eliminar e/ou reduzir o número de catapora resultante do HSV-3.

É um outro objetivo desta invenção fornecer composições e in-gredientes para composições que possam ser usadas em combinação commedicações para catapora convencionais para reduzir a sua aparência e/oureduzir inflamação e irritação associadas, inclusive coceira. Também é umoutro objetivo da presente invenção fornecer métodos para uso das compo-sições da invenção com tratamentos convencionais para catapora para for-necer novas terapias de combinação que maximizem o controle manutençãoda catapora.

É um outro objetivo desta invenção fornecer composições queajudem a eliminar e/ou a reduzir o numero de zonas resultantes de HSV-3. Éum outro objetivo desta invenção fornecer composições e ingredientes paracomposições que possam ser usados em combinação com medicações con-vencionais contra zonas para reduzir a aparência de e/ou reduzir os sinto-mas associados-na faixa de desde coceira leve até dores graves e intensas.

É um outro objetivo desta invenção fornecer métodos para a utilização decomposições da invenção com tratamentos convencionais para zonas parafornecer novas terapias de combinação que maximizem o controle manuten-ção da catapora.

Testaqem

Esta seção descreve como são selecionadas as composiçõesque incorporam os compostos da presente invenção.

A avaliação in vitro da atividade anti-viral pode ser determinadapor redução de placa como relatado em J. Nat. Prod. (1990) 53, 340-344 oucomo descrito no Exemplo 1. A células Vero pré-cultivadas (ATCC CCL-81)é adicionada uma suspensão de vírus (ATCC VR-260) misturada com meiocomplete que contém várias concentrações do composto teste e a mistura éincubada até que seja observado um efeito citopático máximo (CPE) na cul-tura de controle do vírus não tratado. A inibição de CPE é determinada pelaadição de um corante (MTS, (3-[4,5-dimetiltiazol-2-il-5]-[3-carboximetiloxifenil]-2-[4-sulfofenil]-2H tetrazólio)) em procedimento de cap-tação (Promega1S Cell Titer Aqueous One Solution). Este método mede aviabilidade da célula e é baseado na redução do MTS à base de tetrazóliopor enzimas mitocondriais de células hospedeiras viáveis a MTS formazan.A cor roxa do MTS formazan é então medida espectrofotometricamente. Ovalor da densidade óptica (OD) de cada cultura é uma função da quantidadede formazan produzida que é proporcional ao número de células viáveis. Oscompostos da presente invenção apresentaram atividade anti-viral superiorcomo descrito na Tabela I.

Ensaios in vitro à base de célula para inflamação são bem co-nhecidos na técnica, por exemplo, E-selectina (também denominada Molécu-la de Adesão a Leucócito Endotelial ou ELAM) ou interleucina-6 (IL-6). Oensaio ELAM mede a atividade in vitro dos compostos teste na redução daexpressão de ELAM em células endoteliais ativadas. Em resumo, as célulasendoteliais são criadas por adição de ativadores conhecidos tais como Iipo-polissacarídeos, TNF ou IL-Ιβ, sozinhos ou em alguma combinação. As cé-- lulas ativadas produzem ELAM, que podem ser medidas usando-se, por e-xemplo, um ensaio ELISA à base de anticorpo monoclonal E-selectina, comodescrito nos Exemplos.

O ensaio IL-6 mede a liberação de IL-6 de uma linhagem de cé-lula macrófaga de rato depois de um desafio inflamatório com LPS e a capa-cidade de artigos teste para inibir esta ativação e liberação. A IL-6 é medidapor um ELISA IL-6 de rato e a toxicidade da célula é determinada usando-seRastreador de Célula.

A avaliação in vivo da atividade antiinflamatória pode ser deter-minada por ensaios bem caracterizados que medem o Edema da Pata Indu-zido por Carrageenan e pela Resposta Inflamatória da Orelha de Camun-dongo a Ácido Araquidônico Tópico (Gabor, M., Mouse Ear Inflamation Mo-deis and their Pharmacological Applications, 2000). O Edema da Pata Indu-zido por Carrageenan é um modelo de inflamação, que provoca a formaçãode edema que depende do tempo depois da administração de carrageenanna superfície intraplantar de uma pata de rato. A aplicação de ácido araqui-dônico (AA) às orelhas de camundongos produz vasodilatação imediata eeritema, seguidos pelo desenvolvimento abrupto de edema, que é máximo a40 a 60 minutos. O início do edema coincide com os aumentos de proteína ede leucócitos. Depois de uma hora, o edema diminui rapidamente e as célu-las inflamatórias saem do tecido de modo que 6 horas depois as orelhas ti-nham retornado a quase normais. Este ensaio mede a capacidade de umcomposto teste de tratamento destes processos inflamatórios pela via sistê-mica de administração.

A atividade citotóxica pode ser avaliada na cultura da célula u-sando-se estresse oxidativo induzido por alto teor de glutamato (HGOS) nalinhagem de células dopaminérgicas de camundongo. O efeito citotóxico doglutamato não é devido à excitotoxicidade, pois esta linhagem de célula édesprovida de receptores glutamato inotrópicos. Ao contrário, a toxicidadedas células dopaminérgicas induzida por glutamato está associada a umainibição de transporte de cistina que leva subseqüentemente ao esgotamen-to de níveis de glutationa intracelular (GSH) (Murphy T. H., et ai, Neuron 2,1547 -1558, 1989), activation of neuronal 12-lipoxygenase (Li,-Y. et ai, Neu-ron 19,453 -463, 1997), increased ROS production (Tan S. et ai, J. Cell Bioi141, 1423 -1432, 1998) and elevated intracellular Ca2+ (Li, Y. et ai, see su-pra). Algumas moléculas foram medidas por sua capacidade de proteger ascélulas contra estresse induzido poro glutamato e o ensaio é detalhado nosExemplos.

Administração

Em uma modalidade, os compostos da invenção são administra-dos em uma quantidade farmaceuticamente eficaz, por exemplo, uma dosa-gem suficiente para fornecer tratamento para os estados de doença descri-tos anteriormente. A administração dos compostos da invenção ou dos saisfarmaceuticamente aceitáveis dos mesmos pode ser por qualquer uma dosmodos de administração aceitos para agentes que servem para utilidadessimilares.

No emprego dos compostos desta invenção para tratamento dascondições acima, pode ser usado qualquer modo de administração farma-ceuticamente aceitável. Os compostos da invenção podem ser administra-dos sozinhos ou em combinação com outros excipientes farmaceuticamenteaceitáveis, inclusive formas sólidas, semi-sólidas, líquidas ou formas de do-sagem em aerossol, tais como, por exemplo, comprimidos, cápsulas, pós,grânulos, cachês, líquidos, suspensões, soluções, supositórios, aerossóis ousimilares. Os compostos da presente invenção também podem ser adminis- .trados nas formas de dosagem retardada ou controlada, inclusive injeçõesem depósito, bombas osmóticas, pílulas, emplastros transdermais (inclusiveelectrotransporte) e similares, para a administração prolongada do compostoa uma taxa predeterminada, isto é, em formas de dosagem unitária paraadministração isolada de dosagens precisas. As composições irão tipica-mente incluir um veículo ou um excipiente farmacêutico convencional e umcomposto da presente invenção ou um sal do mesmo farmaceuticamenteaceitável. Além disso, estas composições podem incluir outros agentes me-dicinais, agentes farmacêuticos, veículos, adjuvantes e similares, inclusive,porém não limitados a, melhoradores de permeabilidade e formulações deliberação lenta.

O composto ativo pode ser eficaz em uma ampla faixa de dosa-gem e é geralmente administrado em uma quantidade farmaceuticamenteeficaz, como descrito acima. Será compreendido, no entanto, que a quanti-dade do composto realmente administrado será, no caso de um produto far-macêutico, determinado por um medico, à luz das circunstâncias relevantes,inclusive a condição a ser tratado, a via de administração escolhida, o com-posto real administrado, a idade, o peso e a resposta do paciente individual,a gravidade da síndrome do paciente e similares. No caso de um cosméticoou de uma preparação para cuidado com a pele vendida no balcão, a quan-tidade de composto real que se deseja que seja administrada pelo consumi-dor será recomendada pelo fabricante, baseado nos resultados do teste dofabricante, que pode, em todo ou em parte ser determinada na base de umou mais testes in vitro e/ou in vivo aqui descritos.

As composições da presente invenção são adequadas para tra-tamento de lesões virais e de seus sintomas tais como, porém não limitadosa, febre, dores musculares, glândulas inchadas, mal estar, coceira, inflama-ção, irritação, dores, inchaço e ardência. A composição pode ser aplicadatopicamente à pele. Em uma modalidade, a composição tópica contém ocomposto em uma quantidade de desde aproximadamente 0,001 % até a-proximadamente 20 %, em peso da composição, tal como desde aproxima-damente. 0,01 % até aproximadamente 10 %, em peso da composição, talcomo desde aproximadamente 0,1 % até aproximadamente 5 %, em pesoda composição. As composições da presente invenção podem ser aplicadastopicamente por borrifação, salpicação, pulverização, aplicação com mechade algodão, aplicação com esponja, com pincel, despejando, distribuindo,recobrindo e revestindo fortemente a área afetada.

Os compostos e os métodos da invenção podem ser emprega-dos em aplicações de cuidado com a pele em que é desejável tratamento oumelhoria das lesões virais. Por exemplo, os compostos e as composições dainvenção podem ser incorporados em preparações sem enxágüe: paninhos;toalhinhas; chumaços; loções; bálsamos; géis; cremes; loções; óleos; un-güentos; pastas; bálsamos; tinturas; emulsões; suspensões coloidais; batonse composições em bastão.

As composições úteis para administração tópica das composi-ções da presente invenção formuladas como soluções tipicamente incluemum solvente aquoso ou orgânico farmaceuticamente aceitável. O termo sol-vente orgânico farmaceuticamente aceitável refere-se a um solvente queseja capaz de ter a composição da presente invenção dispersa ou dissolvidano mesmo e de possuir propriedades de segurança aceitáveis (por exemplo,características de irritação e de sensibilização). Exemplos de solventes or-gânicos adequados incluem: propileno glicol; polietileno glicol(200-600); poli-propileno glicol (425-2025); glicerol; 1,2,4-butanotriol; ésteres de sorbitol;1,2,6-hexanotriol; etanol; isopropanol; butanotriol; ésteres de sorbitol; 1,2,6-hexanotriol; etanol; isopropanol; butanodiol e misturas dos mesmos.

As formulações tópicas da presente invenção tipicamente con-têm a nova composição da invenção e opcionalmente, um solvente polar. Ossolventes adequados para uso nas formulações da presente invenção inclu-em qualquer solvente polar capaz de dissolver a nova composição da inven-ção. Os solventes polares adequados incluem: água; álcoois (tais como eta-nol, álcool propílico, álcool isopropílico, hexanol e álcool benzílico); polióis(tais como propileno glicol, polipropileno glicol, butileno glicol, hexileno glicol,sorbitol e glicerina) e pantenol dissolvido em glicerina, óleos flavorizantes emisturas dos mesmos. Também podem ser usadas misturas destes solven-tes. Exemplos de solventes polares são álcoois polihídricos e água, tais co-mo porém não-limitados a glicerina, pantenol em glicerina, glicóis tais comopropileno glicol e butileno glicol, polietileno glicóis, água e misturas dosmesmos.

[083] Também pode ser adicionado um emoliente às composi-ções tópicas da presente invenção. O componente emoliente pode incluirgorduras, óleos, álcoois graxos, ácido graxos e ésteres que ajudam na apli-cação e na adesão, fornecem brilho e mais fundamentalmente fornecem hi-dratação oclusiva. Os emolientes adequados para uso são derivados do áci-do isoesteárico, palmitato de isopropila, óleo de lanolina, dimerato de diiso-propila, óleo de soja maleatado, palmitato de octila, isoestearato de isopropi-la, Iactato de cetila, ricinoleato de cetila, acetato de tocoferila, lanolina álcoolacetilado, acetato de cetila, fenil trimeticona, oleato de glicerila, Iinoleato detocoferila, glicerídeos de germe de trigo, propionato de araquidila, Iactato demiristila, oleato de decila, ricinoleato de propileno glicol, Ianolato de isopropi-la, tetraestearato de pentaeritritila, dicaprilato / dicaprato de neopentilglicol,coco-glicerídeos hidrogenados, isononanoato de isononila, isononanoato deisotridecila, miristato de miristal, triisocetil citrato de triisocetila, álcool cetíli-co, octil dodecanol, álcool oleílico, pantenol, lanolina álcool, ácido linoléico,ácido linolênico, ésteres de sacarose de ácidos graxos, hidroxiestearato deoctila e misturas dos mesmos. Exemplos de outros emolientes adequadospodem ser encontrados em Cosmetic Bench Reference, pp. 1.19-1.22(1996), aqui incorporado como referência. Os emolientes adequados incluememulsificantes emolientes polares (tais como ésteres de poliglicerol linearesou ramificados) e emolientes não-polares.

Por "emoliente polar", como usado neste caso, entende-se qual-quer emulsificante emoliente que tenha pelo menos uma porção polar e emque a solubilidade (a 30 0C) do composto no emoliente polar seja maior doque aproximadamente 1,5 %, maior do que aproximadamente 2 % ou maiordo que aproximadamente 3 %. Os emolientes polares adequados incluem,porém não estão limitados a, poliol éster e poliol éteres tais como ésteres depoliglicerol e éteres de poliglicerol de cadeia linear ou ramificada. Exemplosnão Iimitativos de tais emolientes incluem poligliceril-3-diisoesterato, poligli-ceril-2-sesquiisoesterato, poligliceril-5-diestearato, poligliceril-10-diestearato,poligliceril-10-diisoesterato, monoglicerídeos acetilados, ésteres de glicerol,tricaprilato/caprato de glicerol, ricinoleato de glicerila, isoesterato de glicerila,miristato de glicerila, Iinoleato de glicerila, polialquileno glicóis tais comoPEG 600, monoglicerídeos, 2-monolaurina, ésteres de sorbitan e misturasdos mesmos.

Por "emoliente não-polar," como usado neste caso, entende-sequalquer emulsificante emoliente que não possua momentos elétricos per-manentes. Os emolientes não-polares adequados incluem, porém não estãolimitados a, ésteres e hidrocarbonetos de cadeia linear ou ramificada. Exem-plos não-limitativos de tais emolientes incluem, porém não estão limitados a,isononanoato de isononila, isoesterato de isopropila, hidroxiestearato de octi-la, dimerato de diisopropila, óleo de lanolina, palmitato de octila, palmitato deisopropila, parafinas, isoparafinas, lanolina acetilada, ésteres de ácido graxode sacarose, miristato de isopropila, estearato de isopropila, óleo mineral,óleos de silicone, alantoína, isohexadecano, isododecano, petrolato e mistu-ras dos mesmos. A solubilidade do composto em emolientes polares ou não-polares é determinada de acordo com os métodos conhecidos na técnica.

Os óleos que agem como emolientes também conferem viscosi-dade, pegajosidade e propriedades de deslizamento às composições cosmé-ticas tais como em batons. Exemplos de oleos adequados incluem, porémnão estão limitados a, triglicerídeos caprílicos; triglicerídeo cáprico; triglicerí-deo isoesteárico; triglicerídeo adípico; propileno glicol acetato de miristila;lanolina; óleo de lanolina; polibuteno; palmitato de isopropila; miristato deisopropila; isoesterato de isopropila; sebaçato de dietila; adipato de diisopro-pila; acetato de tocoferila; Iinoleato de tocoferila; estearato de hexadecila;Iactato de etila; oleato de cetila; ricinoleato de cetila; álcool oleílico; álcoolhexadecílico; hidroxiestearato de octila; dodecanol de octila; óleo de germede trigo; oleos vegetais hidrogenados; oleo de mamona; petrolato; Ianolinasmodificadas; hidrocarbonetos de cadeia ramificada; álcoois e ésteres; óleode milho; óleo de semente de algodão; óleo de oliva; óleo de palma; óleo desemente de colza; óleo de açafroa; óleo de jojoba; óleo de prímula do cre-púsculo; óleo de abacate; óleo mineral; óleo de karité; palmitato de octila;óleo de soja maleatado; trioctanoato de glicerol; dimerato de diisopropila eóleos de silicone voláteis e não-voláteis inclusive fenil trimeticona.

Os óleos adequados para uso neste caso são acetilglicerídeos,octanoatos e decanoatos de álcoois e de poliálcoois, tais como aqueles deglicol e de glicerol, os ricinoleatos de álcoois e de poliálcoois tais como rici-noleato de cetila, diisoesterato de poliglicerila-3, éteres de poliglicerol, éste-res de poliglicerol, triglicerídeos caprílicos, triglicerídeos cápricos, triglicerí-deo isoesteárico, triglicerídeo adípico, fenil trimeticona, óleo de lanolina, po-libuteno, palmitato de isopropila, isoesterato de isopropila, ricinoleato de ceti-la, octil dodecanol, álcool oleílico, óleos vegetais hidrogenados, óleo de ríci-no, Ianolinas modificadas, palmitato de octila, óleo de lanolina, óleo de sojamaleatado, ricinoleato de cetila, trioctanoato de glicerila, dimerato de diiso-propila, derivados de lanolina sintéticos e álcoois de cadeia ramificada, éste-res de sacarose de ácidos graxos, hidroxiestearato de octila e misturas dosmesmos.

Também pode ser adicionado um tensoativo às composições dainvenção, para conferir propriedades de aplicação vantajosas. Os tensoati-vos adequados para uso são aqueles que podem formar emulsões e/ou es-truturas em associação. Os tensoativos adequados para uso não apresen-tam problemas dermatológicos ou toxicológicos. Os tensoativos aniônicos,os tensoativos não-iônicos, os tensoativos catiônicos, os tensoativos anfoté-ricos e misturas dos mesmos são adequados para uso. Por exemplo, sãousados os tensoativos aniônicos, os tensoativos não-iônicos, os tensoativoscatiônicos, os tensoativos anfotéricos e misturas dos mesmos que têm umponto de Krafft a ou abaixo aproximadamente da temperatura ambiente.

As composições desta invenção podem conter um ou mais ma-teriais, aqui isoladamente ou coletivamente denominados "agentes de solidi-ficação", que é eficaz para solidificar os materiais base líquidos em particulara serem usados na composição cosmética. Como usado neste caso, o termo"solidificar" refere-se à alteração física e/ou química do material base líquidode modo a formar um sólido ou semi-sólido a condições ambiente, isto é,para formar a composição final que tem uma estrutura física estável e podeser depositada sobre a pele sob condições normais de uso. Como é conside-rada por aqueles versados na técnica, a seleção do agente de solidificaçãoem particular para uso nas composições cosméticas irá depender do tipo decomposição em particular desejado, isto é, à base de gel ou de cera, da reo-logia desejada, do material base líquido usado e dos outros materiais a se-rem usados na composição.

As formulações Iipossomais também podem ser úteis para ascomposições da presente invenção. Tais composições podem ser prepara-das por combinação da composição da presente invenção com um fosfolipí-deo, tais como dipalmitoilfosfatidil colina, colesterol e água de acordo commétodos conhecidos, por exemplo, como descrito em Mezei e outros, J.Pharm. Pharmacol. 34:473-474 (1982) ou uma modificação dos msmos. Oslipídeos adequados para formar Iipossomos podem ser usdos em lugar dofosfolipídeo, como pode ser lecitina, também. A preparação de Iipossomo éentão incorporada a uma das formulações tópicas acima (por exemplo, umgel ou uma emulsão de óleo-em-água) para produzir a formulação Iiposso-mal. Outras composições e usos farmacêuticos de Iipossomos aplicados to-picamente estão descritos, por exemplo, em Mezei, M. Topics in Pharmaceu-tical Sciences, Breimer e outros, eds., Elsevier Science, New York, N.Y., pp.345-358(1985).As composições tópicas da presente invenção também podemser aplicadas à cavidade oral quando incorporadas a enxaguatórios orais oucolutórios ou podem ser usadas para tratamento oftálmico incorporadas acolírios, gotas para os olhos ou chumaços para os olhos.

Uma outra maneira de administração para as condições deta-lhadas acima é oral, que usa um regime de dosagem diária conveniente quepode ser ajustado de acordo com o grau de sofrimento. Para tal administra-ção oral, é formada uma composição não-tóxica, farmaceuticamente aceitá-vel, pela incorporação de qualquer um dos excipientes normalmente empre-gados, tais como, por exemplo, manitol, lactose, amido, estearato de mag-nésio, sacarina de sódio, talco, celulose, crosscarmelose de sódio, glicose,gelatina, sacarose, carbonato de magnésio e similares. Tais composiçõesassumem a forma de soluções, suspensões, comprimidos, comprimidos dis-persíveis, pílulas, cápsulas, pós, formulações de liberação retardada e similares.

As composições podem assumir a forma de uma pílula ou de umcomprimido e assim a composição pode conter, juntamente com o ingredien-te ativo, um diluente tais como lactose, sacarose, fosfato dicálcico ou simila-res; um lubrificante tal como estearato de magnésio ou similares e um aglu-tinante tais como amido, goma acácia, polivinilpirrolidina, gelatina, celulose ederivados dos mesmos e similares.

No preparo de uma formulação, pode ser necessário moer ocomposto ativo para fornecer o tamanho da partícula apropriado antes dacombinação com os outros ingredientes. Se o composto ativo for substanci-almente insolúvel, ele é habitualmente moído até um tamanho de partículamenor do que 200 mesh. Se o composto ativo for substancialmente solúvelem água, o tamanho da partícula é normalmente ajustado por moagem parafornecer uma distribuição substancialmente uniforme na formulação, por e-xemplo, aproximadamente 40 mesh.

Alguns exemplos de excipientes adequados para preparaçõesorais incluem lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, gomaacácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio,celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope e metilcelulose. As formulações podem adicionalmente incluir: agentes lubrificantestais como talco, estearato de magnésio e óleo mineral; agentes umidificado-res; agentes emulsificantes e de suspensão; agentes conservantes tais co-mo hidróxi-benzoatos de metila e de propila; agentes adoçantes e agentesflavorizantes. As composições da invenção podem ser formuladas de modoa fornecer liberação rápida, prolongada ou retardada do ingrediente ativodepois da administração ao paciente empregando procedimentos conheci-dos na técnica.

O termo "formas de unidade de dosagem" refere-se a unidadesfisicamente isoladas como dosagens unitárias para sujeitos humanos e ou-tros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada dematerial ativo calculada para produzir o efeito terapêutico, em associaçãocom um excipiente farmacêutico adequado.

Para preparar as composições sólidas tais como comprimidos, oingrediente ativo principal é misturado com um excipiente farmacêutico paraformar uma prê-formulação de composição sólida que contém uma misturahomogênea de um composto da presente invenção. Quando refere-se a es-tas pré-formulações de composições como homogêneas, entende-se que oingrediente ativo está disperso uniformemente em toda a composição demodo que a composição possa ser facilmente subdividida em formas de do-sagem unitária igualmelnte eficazes tais como comprimidos, pílulas e cápsu-las. Esta pré-formulação sólida é então subdividida em formas de dosagemunitária do tipo descrito acima que contém, por exemplo, desde 0,1 até apro-ximadamente 500 mg do ingrediente ativo da presente invenção.

Os comprimidos ou pílulas da presente invenção podem ser re-vestidos ou então compostos para fornecer uma forma de dosagem que for-neça a vantagem de ação prolongada. Por exemplo, o comprimido ou a pílu-la pode incluir um componente de dosagem interna e um de dosagem exter-na, este último estando na forma de um envoltório sobre o primeiro. Os doiscomponentes podem ser separados por uma camada entérica que servepara resistir à desintegração no estômago e para permitir que o componenteinterno passe intacto para o duodeno ou tenha a sua liberação retardada.Pode ser usada uma variedade de materiais para tais camadas ou revesti-mentos entéricos, tais materiais incluindo alguns ácidos poliméricos e mistu-ras de ácidos poliméricos com materiais tais como goma laca, álcool cetílicoe acetato de celulose.

As composições líquidas que podem ser administradas farma-ceuticamente podem, por exemplo, ser preparadas por dissolução, dispersãoetc. de um composto ativo como definido acima e adjuvantes farmacêuticosopcionais em um veículo, tais como, por exemplo, água, solução salina, dex-trose aquosa, glicerol, glicóis, etanol e similares, para assim formar uma so-lução ou uma suspensão. Se desejado, a composição farmacêutica a seradministrada também pode conter quantidades mínimas de substâncias au-xiliares não-tóxicas tais como agentes umidificantes; agentes emulsificantes;agentes solubilizadores; agentes tamponadores de pH e similares, por e-xemplo, acetato de sódio, citrato de sódio, derivados de ciclodextrina, mono-laurato de sorbitano, acetato de trietanolamina, oleato de trietanolamina etc.Os métodos reais de preparação de tais formas de dosagem são conhecidosou serão evidentes, para os versados na técnica; por exemplo, ver Reming-torís Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Penns-ylvania, 15§ Edição (1975). A composição ou a formulação a ser administra-da irá conter, em qualquer eventualidade, uma quantidade do composto ati-vo em uma quantidade eficaz para aliviar os sintomas do sujeito que estásendo tratado.

As formas líquidas em que as novas composições da presenteinvenção podem ser incorporadas para administração oral incluem soluçõesaquosas; xaropes flavorizados adequadamente; suspensões aquosas ouoleosas e emulsões flavorizadas com óleos comestíveis tais como óleo desemente de algodão, óleo de gergelim, óleo de coco ou óleo de amendoim,assim como elixires e/ou veículos farmacêuticos similares.

Alternativamente, podem ser preparadas formulações orais lí-quidas ou semi-sólidas por dissolução ou dispersão do composto ativo ou salem óleos vegetais, glicóis, triglicerídeos, ésteres de propileno glicol (por e-xemplo, carbonato de propileno) e similares e encapsulando-se estas solu-ções ou suspensões em envólucros de cápsulas de gelatin dura ou mole.

Esta invenção inclui composições associadas com veículos far-maceuticamente aceitáveis. Na obtenção das composições desta invenção,o ingrediente ativo é habitualmente misturado com um excipiente, diluído porum excipiente ou encerrado em um veículo que pode estar na forma de umacápsula, um sachê, papel ou outro recipiente. Quando o excipiente servircomo um diluente, ele pode ser um material sólido, semi-sólido ou líquido,que age como um veículo, carreador ou meio para o ingrediente ativo. Dessemodo, as composições orais discutidas acima podem estar na forma decomprimidos, pílulas, pós, pastilhas, sachês, cachês, elixires, suspensões,emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como em um meio sólido ou em ummeio líquido), ungüentos contendo, por exemplo, até 10 % em peso do com-posto ativo, cápsulas de gelatina moles e duras, supositórios, soluções esté-reis injetáveis e pós estéreis embalados.

A administração parenteral pode empregar a implantação de umsistema de liberação lenta ou de liberação controlada, tal que seja mantidoum nível de dosagem constante. A percentagem de composto ativo contidaem tais composições parenterais é altamente dependente da natureza espe-cífica do mesmo, assim como a atividade do composto e as necessidades dosujeito.

As composições da presente invenção podem ser usadas sozi-nhas ou em combinação com um ou mais agentes de beneficiamento adicio-nais, por exemplo com um agente anestésico, analgésico, antiinfecioso, an-tibacteriano ou antifúngico ou misturas dos mesmos. Alguns exemplos deanestésicos adequados que podem ser adicionados às composições da pre-sente invenção para fornecer alívio da dor e da coceira incluem, porém nãoestão limitados a, benzocaína, lidocaína, tetracaína, diclonina, pramoxina,butamben, cânfora, mentol, eucaliptol, timol, dibucaína, bupivocaína, carbo-caína, ropivocaína, procaína, cocaína, novocaína, xilocaína, mepivacaína,cloreto de benzetônio, anetol, hexetidina, eugenol, cafeína, nicotina, combi-nação de lidocaína e prilocaína, óleo de cravo, óleo de árvore de chá, clori-drato de lidocaína, cloridrato de dibucaína, cloridrato de tetracaína, tronota-no, cloridrato de diclonina, cloridrato de pramoxina, diperodon, picrato debutamben, sulfato de ciclometicaína, cloridrato de ciclometicaína, cloridratode dimetissoquina, analgésicos opióides tais como morfina e derivados dosmesmos e fármacos psicoativos inclusive fármacos tricíclicos antidepressi-vos (TCAs).

Os exemplos de analgésicos adequados que podem ser adicio-nados às composições da presente invenção para fornecer alívio da febre,de males e de dores que possam estar associadas ao vírus, incluem, porémnão estão limitados a, acetaminofen, ibuprofen, aspirina, saliciclamida, salici-Iato de trolamina, salicilato de metila, sais salicilatos, ácido Ν,Ν-dimetil as-pártico, ácido Ν,Ν-dimetil glutâmico, cloridrato de tripelenamina, hidrocorti-sona, acetato de hidrocortisona e antipirina.

Alguns exemplos de antiinfecciosos ou antibacterianos adequa-dos que também podem ser adicionados às composições da presente inven-ção para inibir a difusão da infecção que pode estar associada com o vírus,incluem brometo de benzalcônio, cloreto de benzalcônio, cloridrato de clore-hexidina, triclosan, ácido sórbico, cloreto de benzetônio, cloreto de metilbenzetônio, álcool, cloreto de cetil piridínio, cloroxilenol, hexaclorofeno e clo-rehexidina.

Exemplos de antifúngicos tópicos que podem ser adicionados àscomposições da presente invenção para o controle do crescimento de fun-gos que podem estar associados com as dores, incluem, porém não estãolimitados a, haloprogina, ciclopirox, flucitosina, miconazol, econazol, clotri-mazol, fluconazol, oxiconazol, sulconazol, metronidazol, itraconazol, cetoco-nazol, butaconazol, terconazol, nistatina, povidona-iodo, tolnaftato, cloridratode terbinafina, micatina, nistatina, anforericina B1 griseofulvina, ácido benzói-co, ácido salicílico, oxido mercúrico, resorcinol, triacetina, ácido undecilênicoe seus sais de cálcio, de cobre e de zinco.

EXEMPLOS

As preparações e os exemplos a seguir são fornecidos parapermitir que os versados na técnica entendam mais claramente e realizem apresente invenção. Eles não deveriam ser considerados como Iimitativos doâmbito da invenção, porém simplesmente como sendo ilustrativo e represen-tativo da mesma.

Exemplo 1

Ensaio de HSV-1

Células Vero (ATCC CCL-81) são pré-cultivadas em places decultura de tecido com 96 cavidades usando Meio de Eagle Modificado porDulbecco (DMEM) suplementado com 10 % de soro fetal bovino (FBS) inati-vado pelo calor, L-Glutamina, penicilina e estreptomicina.

Para cada uma das réplicas de culturas de células são adiciona-dos 50 μL da solução do artigo teste e 50 μΙ_ de suspensão de vírus (ATCCVR-260). A multiplicidade de infecção usada é de aproximadamente 0,05unidade de formação de placa (PFU) por célula. Os controles de célula quecontêm somente meio, os controles infectados com vírus que contêm meio evírus, os controles de citotoxicidade do fármaco que contêm meio e cadaconcentração de fármaco, os controles de reagente que contêm somentemeio de cultura (sem células) e os controles colorimétricos do artigo testeque contêm o artigo teste e meio (sem células) são processados simultane-amente com as amostras do teste. As placas são incubadas a 37 0C em umaatmosfera umidificada que contém 5 % de CO2 até ser observado CPE (efei-to citopático) máximo nas culturas de controle de vírus não-tratado (Dia 5).

A inibição de CPE é determinada por um procedimento de cap-tação de corante (MTS) ("Promega1S Cell Titer Aqueous One Solution"). Estemétodo mede a viabilidade da célula e é baseado na redução do MTS à ba-se de tetrazólio por enzimas mitocondriais de células hospedeiras viáveis aMTS formazan. MTS (10 μΙ) é adicionado a cada um dos cavidades da pla-ca. As placas são incubadas a 37 0C durante 4 horas. A cor roxa do MTSformazan é então medida espectrofotometricamente a 490/650 nm. O valorda densidade óptica (OD) de cada cultura é uma função da quantidade deformazan produzida que é proporcional ao numero de células viáveis.

São calculadas a percentagem de redução de CPE (efeito cito-pático) das cavidades infectadas com vírus (eficácia antiviral) e a percenta-gem da viabilidade da célula de cavidades de controle de fármaco não infec-tados (citotoxicidade). A IC50 (concentração de inibição na qual o compostofornece 50% de redução de CPE) e TC50 (concentração citotóxica em que ocomposto provoca a morte de 50 % das células) são calculadas usando umprograma de computador.

Os compostos da presente invenção quando testados comodescrito acima apresentaram redução de replicação viral.

<table>table see original document page 32</column></row><table>

Exemplo 2

Ensaio de Inflamação - Ensaio de E-Selectina da Célula

A Molécula de Adesão Endotelial-Leucócito (ELAM), tambémconhecida como E-selectina, foi expressa na superfície de células endoteli-ais. Neste ensaio, foram usados lipopolissacarídeo (LPS) e IL-1 β para esti-mular a expressão de E-selectina, os agentes do teste foram testados porsuas capacidades de reduzir esta expressão, de acordo com estudos quedemonstram que a redução da adesão de leucócito à superfície da célulaendotelial estava associada a menores danos celulares (por exemplo, Taka-da, M., e outros, Transplantation 64: 1520-25, 1997; Steinberg, J.B. e outros,J. HeartLung Trans. 13:306-313, 1994).

As células endoteliais podem ser selecionadas entre qualqueruma de algumas fontes e cultivadas de acordo com métodos conhecidos natécnica, inclusive, por exemplo, células endoteliais da artéria coronariana,endoteliais microvasculares do cérebro humano (HBMEC; Hess, D.C. e ou-tros, Neurosci. Lett. 213(1): 37-40, 1996) ou células endoteliais de pulmão.As células foram cultivadas convenientemente em places de 96 cavidades.As células foram estimuladas por adição de uma solução a cada cavidadeque contém 10 μ9/ιτιΙ_ de LPS e 100 pg/ml de IL-1 □ durante 6 horas na pre-sença do agente teste (as concentrações específicas e o tempo podem serajustados dependendo do tipo da célula). A solução tamponadora de trata-mento foi removida e substituída por Fixing Solution® (100 pUwelI) preaque-cida durante 25 minutos à temperatura ambiente. As células foram entãolavadas 3 X, então incubadas com Solução Tamponadora de Bloqueio (PBS+ 2 % FBS) durante 25 minutos à temperatura ambiente. A Solução Tampo-nadora de Bloqueio que contém Anticorpo Monoclonal E-Selectina (1:750,Sigma Catalog #S-9555) foi adicionada a cada cavidade. As placas foramseladas e armazenadas a 4°C durante toda a noite. As placas foram lavadas4 X com 160 μΙ_ de Solução Tamponadora de Bloqueio por cavidade. O se-gundo Anticorpo-HRP diluído 1:5000 na Solução Tamponadora de Bloqueiofoi então adicionado (100 μL/cavidade) e as placas foram incubadas à tem-peratura ambiente (protegidas da luz) durante duas horas. As placas foramentão lavadas 4 X com Solução Tamponadora de Bloqueio antes da adiçãode 100 μΙ_ de Solução de Substrato ABTS à temperatura ambiente (Zymed,Catalog #00-2024). As cavidades foram deixadas revelar durante 35 minu-tos, antes da medida a 402 nm em uma Leitora Fluoroskan® Reader comprograma de agitação durante 10 segundos. Os resultados positivos foramregistrados como uma diminuição na concentração de E-selectina em cavi-dades testadas, comparadas às cavidades de controle.

Certos compostos desta invenção quando testados como descri-to acima apresentaram alguma atividade a uma EC5O de 10μΜ ou menos.

Exemplo 3

Ensaio de Inflamação - Ensaio de IL-6

A finalidade deste ensaio é medir a IL-6 de uma célula de macró-fago usando uma técnica ELISA. Este ensaio mede a liberação de IL-6 deuma linhagem de célula de macrófago de rato (NR8383) depois de um testede desafio inflamatório com LPS e a capacidade dos artigos teste de inibiresta ativação e a liberação. A IL-6 é medida por um ILt6 ELISA de rato (o kitIL-6 ELISA é disponível por Pierce/Endogen #ER2-IL6) e a toxicidade dacélula é determinada usando-se Rastreador de Célula.Materiais e Equipamentos:

MATERIAIS PARA PREPARAÇÃO DA CÉLULA E EXPERIMENTO

• linhagem de célula NR8383 (ATCC #CRL-2192)

• meio Kaighn1S F12 (Gibco #211127-022)

• FBS (Hyclone SH30070.03)

• Penicilina/Estreptomicina, 10OX (Gibco 15140-122).

• LPS (Sigma L2537) (armazenagem a 5mg/ml em DMSO, for-mar alíquota e armazenar no congelador)

• Cell Tracker Green (Molecular Probe # C2925 1mg ou #C702520*50)

• Cell tracker PM = 465 (10mM é 1 mg em 215 uL de alíquota deDMSO e armazenar no congelador)

• Solução Tamponadora HBSS (ver Apêndice 10.1, 10.2)

• Placa de 96 cavidades preta de fundo claro (VWR # 29442-152)

• Placa mãe de 96 cavidades de poço profundo, DyNA Block1000 (VWR # 40002-008)

PREPARAÇÃO E PROCEDIMENTO EXPERIMENTAIS:SEMEAR NR8383 EM PLACAS DE 96 CAVIDADES:

Placas de 96 cavidades pretas de fundo claro foram revestidascom FBS a 5 % em meio de Kaighn (470 ml de meio + 25 ml de FBS + 5mlde "pen/step") (100 pL por.cavidade) e incubada durante 30 minutos a 37 0Centão a solução a 5 % de meio foi removida por aspiração. As célulasNR8383 foram semeadas em meio de Kaighn com 15 %-FBS e cultivadas a37 0C durante 24 horas antes de usar no ensaio com IL-6.

ATIVAÇÃO DE LPS E PLACA INSTALADA PARA ARTIGO TESTE:

24 horas depois da semeadura, as células foram estimuladascom LPS a uma concentração final de 10 ug/mL no meio de crescimentoNR8383. A placa de célula NR8383 foi recuperada da incubadora e as pla-cas foram preparadas como a seguir: para cada placa de 96 cavidades, 30mL de meio de crescimento NR8383 foram aquecidos e 3 mL foram removi-dos para o controle negativo. Aos 27 mL restantes do meio foram adiciona-dos 54 μΙ_ de 5 mg/mL LPS e foram removidos 3 mL para o controle positivo.

Em tubos de Falcon de 15 mL, foram colocados 2 mL da solução de LPS-meio. Os artigos de teste foram adicionados à sua concentração mais alta aoseus respectivos tubos, o meio velho foi removido e foram adicionados 200pL de cada cavidade proveniente da placa-mãe a cada cavidade respectivada placa de células. As placas de células foram incubadas durante mais 24horas na incubador a 37 0C.

As placas de células estavam prontas para medida da viabilida-dade da célula usando Rastreador de Célula e a quantidade de IL-6 nos so-brenadantes foi medida pela corrida com the IL-6 ELISA por um kit disiponí-vel por Pierce/Endogen #ER2-IL6.

Os compostos da presente invenção foram testados para suacapacidade de reduzir a inflamação neste modelo.

Exemplo 4

Ensaio de Estresse Oxidativo por Alto Teor de Glutamato (HGOS)

Este procedimento foi usado para induzir o estresse oxidativocom alto teor de glutamato (HGOS) em uma linhagem de célula neuronaldopaminérgica. Usando este ensaio foram estabelecidas a potência e a efi-ciência dos artigos teste contra canos à célula neuronal de HGOS e a morteda célula em uma maneira com grande circulação de material.

Materiais

• Linhagem de células neuronais dopaminérgicas

· DMEM-Em Glicose (Life Technologies Cat # 11966-025)

• L-glutamina (Life Technologies Cat # 25030-081)

• Sal monossódico de ácido L-glutâmico (Sigma Cat # G5889)

• D-glicose (Sigma Cat # G-6151)

• Solução Tamponadora de HBSS 10 χ (pH 7,4) (950 mL de á-gua isenta de Pyrogen, 2,44 g/L de MgCI2.6H20, 3,73 g/L de KCI, 59,58 g/Lde Hepes, 58,44 g/L de NaCI, 1,36 g/L de KH2PO4, 1,91 g/L de CaCI2 .2H20e pH até 4.5 com HCI)• Corante rastreador de célula fluorescente verde (Sondas Mole-culares, Cat # 2925). Preparar uma solução 5 μΜ em HBSS preaquecida uminstante antes do uso.

• Placa estéril de 96 cavidades pré-revestida com poli-D-lisina(Corning Catalog # 3665)

Placa-mãe de 96 cavidades de poço profundo, DyNA Block 10OO(VWR Catalog # 40002-008)Células Neuronais

As células foram semeadas na placa de 96 cavidades a umadensidade de 2000 por cavidade e deixadas crescer durante 72 horas emuma incubadora a 33°C com 5 % de CO2 em atmosfera de ar. O número depassagem das células para cada experimento do ensaio não foi mais do queρ = 11 para minimizar a variação experimental.

Preparação do Composto em Placas Mãe de poço profundo

VWRBrand DyNA Block 1000, placas mãe de poço profundo(VWR Cat. # 40002-008) foram usadas para a preparação dos compostosteste.

Todos os compostos foram dissolvidos em DMEM-No Glu con-tendo glicose 1 mM, glutamato 30 mM e Pen/Strep1x. DMEM-No Glu comglicose 1 mM e 1x P/S foram usados como o controle negativo, DMEM-NoGlucose com glicose 1 mM, foi usado glutamato 100 M como um control po-sitivo e Glutatião 100 μΜ foi adicionado ao control positivo como um padrão.Todos os procedimentos para isto que envolvem a obtenção e a diluição doscompostos forem realizados usando condições assépticas com luz mínima.

Preparação da Célula

As placas foram removidas da incubadora e examinadas sob omicroscópio para aparência morfológica e densidade. Usando uma técnicaasséptica e um aspirador de 8 canais o meio foi removido cuidadosamentedas células e substituído com 200 μΙ de HBSS 1 x. Isto foi feito tão rapida-mente quanto possível para evitar a secagem das células. As placas foramentão colocadas nos umidificadores a 37°C da Biiomek 2000 Side Loader.Quatro placas foram lavadas de uma só vez de modo a minimizar o tempoem qua as células estavam em repouso em HBSS 1 χ antes da adição dasolução teste do composto.

Instalação Experimental

As estações de trabalho Beckman Biomek foram usadas paracarregar os compostos e os controles das placas mãe sobre as placas dacélula que foram pré-lavadas com HBSS sob condições estéreis. As placasforam incubadas na incubadora HTS superior a 37 qC em CO2 a 5 % duranteexatamente 16 horas. No dia seguinte, usando-se as estações de trabalhoBeckman Biomek, as placas foram removidas da incubadora. Usando-seCell Tracker Addition, os compostos foram removidos das placas, lavadosuma vez com 200 pm de HBSS 1 χ preaquecido e então 100 μΙ de Cell Trac-ker Green 5 μιτι foram adicionados a cada cavidade. As placas foram incu-badas a 37 qC durante 30 minutos para permitir que o corante entre na célu-la e seja clivado pelas esterases. Depois de lavar as células duas vezes comHBSS 1 χ preaquecido, as placas foram lidas com a excitação 485; 538 parde filtro de emissão em um Fluoroskan.

Certos compostos da presente invenção eram ativos e exibiramproteção contra danos da célula HGOS e morte da célula.

Claims (39)

1. Processo para o tratamento de uma lesão viral causada porherpes simplex, que compreende administrar ao sujeito que necessite taltratamento uma composição que compreende um composto de Fórmula I:<formula>formula see original document page 38</formula>Fórmula Iem que,R1 e R2 são independentemente um do outro -OH ou -OR;R é C1-C6-alquila, acila ou glicosila;R3 é independentemente um do outro CrC6-alquila, C2-10-alquenila, carbóxi, alquilcarbonila, halogênio, nitro ou ciano;méO-5;η é 0-5 eρ é 0-5;com a condição de que quando m = 3, então R1 não é simulta-neamente hidróxi na posição 2' e alcóxi nas posições 4' e 6';inclusive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômerose sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a lesãoviral é um herpes labial.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a compo-sição é administrada topicamente à lesão.

4. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a compo-sição é administrada oralmente.

5. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a compo-sição também compreende pelo menos um agente selecionado entre um dosgrupos a seguir:(i) um ingrediente ativo protetor da pele selecionado entre alan-toína, hidróxido de alumínio gel, calamina, manteiga de cacau, óleo de fíga-do de bacalhau, farinha de aveia coloidal, dimeticona, glicerina, gordura du~ra, caulim, lanolina, óleo mineral, petrolato, bicarbonato de sódio, amido tó-pico, petrolato branco, acetato de zinco e/ou óxido de zinco e(ii) um ingrediente analgésico externo, anestésico ou antipruríticoselecionado entre benzocaína, picrato de butamaben, dibucaína, cloridratode dibucaína, cloridrato de dimetiosoquina, cloridrato de diclonina, lidocaína,cloridrato de lidocaína, cloridrato de pramoxina, tetracaína, cloridrato de te-tracaína, álcool benzílico, cânfora, metacresol canforado, alcatrão de junípe-ro, mentol, fenol, fenolato de sódio resorcinol, cloridrato de tripelenamina,aspirina, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona e/ou cloridrato de difeni-dramina.

6. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a compo-sição também compreende pelo menos um outro agente selecionado dogrupo que consiste em agentes antimicrobianos, outros agentes virais, agen-tes antifúngicos, antioxidantes, agentes de tamponamento, filtros solares,agentes cosméticos, fragrâncias, lubrificantes, hidratantes, agentes de seca-gem e agentes espessantes.

7. Processo para o tratamento de um sintoma associado cominfecção viral em um sujeito que sofre de vírus herpes simplex, que compre-ende administrar o sujeito uma composição que compreende um compostode Fórmula I: <formula>formula see original document page 39</formula> Fórmula Iem que,R1 e R2 são independentemente um do outro -OH ou -OR;R é Ci-C6-alquila, acila ou glicosila;R3 é independentemente um do outro Ci-C6-alquila, C2-10-alquenila, carbóxi, alquilcarbonila, halogênio, nitro ou ciano;m é 0-5;η é 0-5 eρ é 0-5;com a condição de que quando m = 3, então R1 não é simulta-neamente hidróxi na posição 2' e alcóxi nas posições 4'e 6';inclusive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômerose sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

8. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que o sintomaé selecionado entre o grupo que consiste em febre, dores musculares, glân-dulas inchadas, mal estar, coceira, inflamação, irritação, dores, inchaço eardência.

9. Processo para o tratamento de uma lesão viral que compre-ende administrar ao sujeito em necessidade de tal tratamento uma composi-ção que compreende um composto de Fórmula IA: <formula>formula see original document page 40</formula> Fórmula IAem que,R4 é hidrogênio ou -OR1 eR' é hidrogênio ou Ci-C6-alquila;inclusive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômerose sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

10. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que a lesãoviral é um herpes labial.

11. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que o com-posto é selecionado entre 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona, 2',4'-dihidróxi--4-metoxichalcona, 2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona, 2',4',4-trihidroxichalcona,-2',4,4'-trihidróxi-3-metoxichalcona e 2,,3,4'-trihidróxi-4-metoxichalcona inclu-sive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômeros e sais farmaceu-ticamente aceitáveis dos mesmos.

12. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que o com-posto é 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona inclusive estereoisômeros sim-ples, misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dosmesmos.

13. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que o com-posto é 2',3,4,4,-tetrahidroxichalcona, inclusive estereoisômeros simples,misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

14. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que o com-posto é 2\4'-dihidróxi-4-metoxichalcona inclusive estereoisômeros simples,misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

15. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que a com-posição também compreende pelo menos um agente selecionado entre umdos grupos a seguir:(i) um ingrediente ativo protetor da pele selecionado entre alan-toína, hidróxido de alumínio gel, calamina, manteiga de cacau, óleo de fíga-do de bacalhau, farinha de aveia coloidal, dimeticona, glicerina, gordura du-ra, caulim, lanolina, óleo mineral, petrolato, bicarbonato de sódio, amido tó-pico, petrolato branco, acetato de zinco e/ou óxido de zinco e(ii) um ingrediente analgésico externo, anestésico ou antipruríticoselecionado entre benzocaína, picrato de butamaben, dibucaína, cloridratode dibucaína, cloridrato de dimetiosoquina, cloridrato de diclonina, lidocaína,cloridrato de lidocaína, cloridrato de pramoxina, tetracaína, cloridrato de te-tracaína, álcool benzílico, cânfora, metacresol canforado, alcatrão de junípe-ro, mentol, fenol, fenolato de sódio resorcinol, cloridrato de tripelenamina,aspirina, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona e/ou cloridrato de difeni-dramina.

16. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que a com-posição também compreende pelo menos um outro agente selecionado en-tre o grupo que consiste em agentes antimicrobianos, outros agentes virais,agentes antifúngicos, antioxidantes, agentes de tamponamento, filtros sola-res, agentes cosméticos, fragrâncias, lubrificantes, hidratantes, agentes desecagem e agentes espessantes.

17. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que a com-posição é administrada topicamente à lesão.

18. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que a com-posição é administrada oralmente.

19. Processo para o tratamento de um sintoma associado à in-fecção viral em um sujeito afetado com o vírus, que compreende administrarao sujeito uma composição que compreende um composto de Fórmula IA: <formula>formula see original document page 42</formula> Fórmula IAem que,R4 é hidrogênio ou -OR' eR1 é hidrogênio ou Ci-C6-alquila;inclusive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômerose sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

20. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que a infec-ção vital resulta de vírus-1 do herpes simplex.

21. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que o sin-toma é selecionado entre o grupo que consiste em febre, dores musculares,glândulas inchadas, mal-estar, coceira, inflamação, irritação, dores, inchaçoe ardência

22. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que o com-posto é selecionado entre 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona, 2',4'-dihidróxi--4-metoxichalcona, 2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona, 2',4',4-trihidroxichalcona,-2,,4,4'-trihidróxi-3-metoxichalcona e 2',3,4'-trihidróxi-4-metoxichalcona inclu-sive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômeros e sais farmaceu-ticamente aceitáveis dos mesmos.

23. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que o com-posto é 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona inclusive estereoisômeros sim-pies, misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dosmesmos.

24. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que o com-posto é 2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona inclusive estereoisômeros simples, mis-turas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos/

25. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que o com-posto é 2',4'-dihidróxi-4-metoxichalcona inclusive estereoisômeros simples,misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

26. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que a com-posição também compreende pelo menos um agente selecionado entre umdos grupos a seguir:(i) um ingrediente ativo protetor da pele selecionado entre alan-toína, hidróxido de alumínio gel, calamina, manteiga de cacau, óleo de fíga-do de bacalhau, farinha de aveia coloidal, dimeticona, glicerina, gordura du-ra, caulim, lanolina, óleo mineral, petrolato, bicarbonato de sódio, amido tó-pico, petrolato branco, acetato de zinco e/ou óxido de zinco e(ii) um ingrediente analgésico externo, anestésico ou antipruríticoselecionado entre benzocaína, picrato de butamaben, dibucaína, cloridratode dibucaína, cloridrato de dimetiosoquina, cloridrato de diclonina, lidocaína,cloridrato de lidocaína, cloridrato de pramoxina, tetracaína, cloridrato de te-tracaína, álcool benzílico, cânfora, metacresol canforado, alcatrão de junípe-ro, mentol, fenol, fenolato de sódio resorcinol, cloridrato de tripelenamina,aspirina, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona e/ou cloridrato de difeni-dramina.

27. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que a com-posição também compreende pelo menos um outro agente selecionado en-tre o grupo que consiste em agentes antimicrobianos, outros agentes virais,agentes antifúngicos, antioxidantes, agentes de tamponamento, filtros sola-res, agentes cosméticos, fragrâncias, lubrificantes, hidratantes, agentes desecagem e agentes espessantes.

28. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que a com-posição é administrada topicamente.

29. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que a com-posição é administrada oralmente.

30. Processo para o controle de crescimento e de replicação vi-ral resultante de vírus herpes simplex que compreende administrar ao sujeitoque necessite de tal tratamento uma composição que compreende um com-posto de Fórmula IA:<formula>formula see original document page 44</formula>em que,R4 é hidrogênio ou -OR1 eR1 é hidrogênio ou CrC6-alquila;inclusive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômerose sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

31. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que o vírusherpes simplex é o HSV-1.

32. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que o com-posto é selecionado entre 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona, 2',4'-dihidróxi-4-metoxichalcona, 2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona, 2',4,,4-trihidroxichalcona,2,14,4'-trihidróxi-3-metoxichalcona e 2',3,4'-trihidróxi-4-metoxichalcona inclusive estereoisômeros simples, misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

33. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que o com-posto é 2',4'-dihidróxi-3,4-dimetoxichalcona inclusive estereoisômeros sim-ples, misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dosmesmos.

34. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que o com-posto é 2',3,4,4'-tetrahidroxichalcona inclusive estereoisômeros simples, mis-turas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

35. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que o com-posto é 2',4'-dihidróxi-4-metoxichalcona inclusive estereoisômeros simples,misturas de estereoisômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

36. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que a com-posição também compreende pelo menos um agente selecionado entre umdos grupos a seguir:(i) um ingrediente ativo protetor da pele selecionado entre alan-toína, hidróxido de alumínio gel, calamina, manteiga de cacau, óleo de fíga-do de bacalhau, farinha de aveia coloidal, dimeticona, glicerina, gordura du-ra, caulim, lanolina, óleo mineral, petrolato, bicarbonato de sódio, amido tó-pico, petrolato branco, acetato de zinco e/ou óxido de zinco e(ii) um ingrediente analgésico externo, anestésico ou antipruríticoselecionado entre benzocaína, picrato de butamaben, dibucaína, cloridratode dibucaína, cloridrato de dimetiosoquina, cloridrato de diclonina, lidocaína,cloridrato de lidocaína, cloridrato de pramoxina, tetracaína, cloridrato de te-tracaína, álcool benzílico, cânfora, metacresol canforado, alcatrão de junípe-ro, mentol, fenol, fenolato de sódio resorcinol, cloridrato de tripelenamina,aspirina, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona e/ou cloridrato de difeni-dramina.

37. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que a com-posição também compreende pelo menos um outro agente selecionado en-tre o grupo que consiste em agentes antimicrobianos, outros agentes virais,agentes antifúngicos, antioxidantes, agentes de tamponamento, filtros sola-res, agentes cosméticos, fragrâncias, lubrificantes, umidificantes, agentes desecagem e agentes espessantes.

38. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que a com-posição é administrada topicamente.

39. Processo de acordo com a reivindicação 30, em que a com-posição é administrada oralmente.