BRPI0509761B1 - Compostos de quinolinona-carboxamida como agonistas de receptor de 5-ht4, composição farmacêutica, uso dos referidos compostos e seu processo de preparação - Google Patents

Abstract

compostos de quinolinona-carboxamida como agonistas de receptor de 5-ht~ 4~. a invenção fornece compostos agonistas do receptor de 5-ht~ 4~ de quinolinona-carboxamida inéditos de fórmula (i). a invenção também fornece composições farmacêuticas que compreendem estes compostos, o uso desses compostos para o tratamento de doenças associadas à atividade do receptor de 5-ht~ 4~ e processos e intermediários úteis para preparação desses compostos. onde: r^ 1^ é hidrogênio, halo, hidroxi, c~ 1-4~alquil ou c~ 1-4~alcoxi; r^ 2^ é c~ 3-4~a1quil ou c~ 3-6~cicloalquil; r^ 3^ é hidrogênio ou c~ 1-3~alquil; r^ 4^ é - s (o)~ 2~r^ 6^ ou - c (o) r^ 2^; r^ 5^ é hidrogênio, c~ 1-3~alquil, c~ 2-3~alquil, substituído com -oh ou c~ 1-3~alcoxi ou -ch~ 2~-piridil; r^ 6^ é c~ 1-3~alquil; ou, r^ 5^ e r^ 6^, tomados em conjunto formam c^ 3-4~alquilenil; e r^ 7^ é hidrogênio, c~ 1-3~alquil ou piridil; ou um sal ou solvato ou estereoisômero farmacêuticamente aceitável desses.

Description

(54) Título: COMPOSTOS DE QUINOLINONA-CARBOXAMIDA COMO AGONISTAS DE RECEPTOR DE 5-HT4, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DOS REFERIDOS COMPOSTOS E SEU PROCESSO DE PREPARAÇÃO (51) Int.CI.: C07D 451/04 (30) Prioridade Unionista: 07/04/2004 US 60/560,076 (73) Titular(es): THERAVANCE BIOPHARMA R&D IP, LLC (72) Inventor(es): DANIEL MARQUESS; PAUL ROSS FATHEREE; S. DEREK TURNER; DANIEL D. LONG; SEOK-KI CHOI; ADAM A. GOLDBLUM; DANIEL GENOV (85) Data do Início da Fase Nacional: 09/10/2006

1/104 “COMPOSTOS DE QUINOLINONA-CARBOXAMIDA COMO AGONISTAS DE RECEPTOR DE 5-HT4, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DOS REFERIDOS COMPOSTOS E SEU PROCESSO DE PREPARAÇÃO

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Campo da Invenção

A invenção é dirigida a compostos de quinolinonacarboxamida que são úteis como agonistas de receptor de 5HT4. A invenção também é dirigida a composições farmacêuticas que compreendem tais compostos, métodos para uso de tais compostos para o tratamento ou prevenção de condições médicas mediadas por atividade de receptor de 5HT4 e processos e intermediários úteis para preparação de tais compostos.

Estado da Técnica

Serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT) é um neurotransmissor amplamente distribuído por todo o corpo, tanto no sistema nervoso central quanto em sistemas periféricos. Pelo menos sete subtipos de receptores de serotonina foram identificados e a interação de serotonina com esses diferentes receptores está ligada a uma ampla variedade de funções fisiológicas. Há, portanto, um interesse substancial no desenvolvimento de agentes terapêuticos que tenham como alvo subtipos específicos de receptor de 5-HT.

Em particular, a caracterização de receptores de 5-HT4 e a identificação de agentes farmacêuticos que interajam com eles tem sido o foco de atividade significativa recente. (veja, por exemplo, a revisão de Langlois e

Fischmeister, J. Med. Chem. 2003, 46, 319-344) . Agonistas de receptor de 5-HT4 são úteis para o tratamento de

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2/104 distúrbios de motilidade reduzida do trato gastrintestinal. Tais distúrbios incluem síndrome do cólon irritável (SCI), constipação crônica, dispepsia funcional, esvaziamento gástrico retardado, doença de refluxo gastresofágico (DRGE), gastroparesia, íleo pós-operatório, pseudoobstrução intestinal, e trânsito retardado induzido por drogas. Além disso, foi sugerido que alguns compostos agonistas do receptor de 5-HT4 podem ser usados no tratamento de distúrbios do sistema nervoso central, incluindo distúrbios cognitivos, distúrbios comportamentais, distúrbios do humor e distúrbios de controle da função autonômica.

Apesar da ampla utilidade de agentes farmacêuticos que modulam a atividade do receptor de 5-HT4, poucos compostos agonistas do receptor de 5-HT4 estão em uso clínico no momento. Um agente, cisaprida, que foi utilizado intensamente para o tratamento de distúrbios da motilidade do trato gastrintestinal, foi retirado do mercado, supostamente em função de efeitos colaterais cardíacos.

Experimentos clínicos em último estágio de outro agente, prucaloprida, foram suspensos.

Conseqüentemente, há necessidade de novos agonistas de receptor de 5-HT4 que obtenham seus efeitos desejados com efeitos colaterais mínimos. Agentes preferidos devem possuir, entre outras propriedades, maior seletividade, potência, propriedades farmacocinéticas e/ou duração de ação.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A invenção fornece compostos inéditos que possuem atividade agonista do receptor de 5-HT4. Dentre outras

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3/104 propriedades, verificou-se que os compostos da invenção são agonistas potentes e seletivos do receptor de 5-HT4. Além disso, verificou-se que os compostos da invenção exibem propriedades farmacocinéticas favoráveis que são preditivas de boa biodisponibilidade mediante administração oral.

Conseqüentemente, a invenção fornece um composto de fórmula (I):

em que

R¹ hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-4alquil ou Ci20

4alcoxi;

R² é C3-4alquil ou C3-6CÍcloalquil;

R³ é hidrogênio ou Ci-3alquil;

R⁴ é -S(O)₂R⁶ ou —C(O)R⁷;

R⁵ é hidrogênio, Ci-3alquil, C2-3alquil substituído com -OH ou Ci-3alcoxi ou — CH2—piridil;

R⁶ é Ci-3alquil;

ou, R⁵ e R⁶ tomados em conjunto formam C3-4alquilenil;

e

R⁷ é hidrogênio, Ci-3alquil ou piridil;

ou um sal ou solvato ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável desses.

A invenção também fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto da invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável.

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A invenção também fornece um método de tratamento de uma doença ou condição associada à atividade do receptor de 5-HT4, por exemplo, um distúrbio de motilidade reduzida do trato gastrintestinal, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção.

Além disso, a invenção fornece um método de tratamento de uma doença ou condição associada à atividade do receptor de 5-HT4 em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica da invenção.

Os compostos da invenção também podem ser usados como ferramentas de pesquisa, ou seja, para o estudo de sistemas ou amostras biológicas, ou para o estudo da atividade de outros compostos químicos. Conseqüentemente, em outro dos aspectos do método, a invenção fornece um método para uso de um composto de fórmula (I), ou um sal ou solvato ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável desse, como uma ferramenta de pesquisa para o estudo de um sistema ou amostra biológica ou para a descoberta de novos agonistas de receptor de 5-HT4, o método compreendendo o contato de um sistema ou amostra biológica com um composto da invenção e a determinação dos efeitos causados pelo composto sobre o sistema ou amostra biológica.

Em aspectos separados e distintos, a invenção também fornece processos e intermediários sintéticos aqui descritos, que são úteis para preparação de compostos da invenção.

A invenção também fornece um composto da invenção como

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5/104 aqui descrito para uso em terapia médica, bem como o uso de um composto da invenção na fabricação de uma formulação ou medicamento para o tratamento de uma doença ou condição associada à atividade do receptor de 5-HT4, por exemplo, um distúrbio de motilidade reduzida do trato gastrintestinal, em um mamífero.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A invenção fornece agonistas de receptor de 5-HT4 de quinolinona-carboxamida inéditos de fórmula (I), ou sais ou solvatos ou estereoisômeros farmaceuticamente aceitáveis desses. Os substituintes e valores seguintes visam fornecer exemplos representativos de vários aspectos dessa invenção. Esses valores representativos visam definir ainda mais tais aspectos e não visam excluir outros valores ou limitar o escopo da invenção.

Em um aspecto específico da invenção, R¹ é hidrogênio, halo, C1-4alquil ou C1-4alcoxi.

Em outros aspectos específicos, R¹ é hidrogênio, halo, ou C1-4alquil; ou R¹ é hidrogênio ou halo; ou R1 é flúor; ou

R¹ é bromo.

Ainda em outro aspecto específico, R¹ é hidrogênio.

Em um aspecto específico, R² é C3-4alquil ou C36cicloalquil.

Em outro aspecto específico, R² é C3-4alquil. Grupos R² 25 representativos incluem n-propil, isopropil, n-butil, secbutil e terc-butil.

Em outro aspecto específico, R² é isopropil.

Ainda em outros aspectos específicos, R² é C3-4alquil ou C4-5cicloalquil; ou R² é isopropil ou C4-5cicloalquil.

Em um aspecto específico, R³ é hidrogênio ou C1Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 9/121

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3alquil.

Em outros aspectos específicos, R³ é hidrogênio, ou R³ é metil.

Em um aspecto específico, R⁴ é —S(O)2R⁶, em que R⁶ é C13alquil.

Em outro aspecto específico, R⁴ é —S(O)2CH3.

Em um aspecto específico, R⁴ é —C(O)R⁷, em que R⁷ é hidrogênio, C1-3alquil ou piridil.

Em outros aspectos específicos, R⁴ é —C(O)R⁷, em que R⁷ é hidrogênio ou C1-3alquil; ou R⁴ é —C(O)R⁷, em que R⁷ é hidrogênio ou metil; ou R⁴ é —C(O)R⁷, em que R⁷ é hidrogênio; ou R⁴ é —C(O)R⁷, em que R⁷ é metil.

Ainda em outro aspecto específico, R⁴ é —C(O)R⁷, em que R⁷ é 3-piridil ou 4-piridil.

Em um aspecto específico, R⁵ é hidrogênio; C1-3alquil; C2-3alquil substituído com —OH ou C1-3alcoxi; ou —CH2— piridil.

Em outros aspectos específicos, R⁵ é hidrogênio, C13alquil ou —CH2—piridil; ou R⁵ é hidrogênio ou C1-3alquil.

Ainda em outros aspectos específicos, R⁵ é —CH2-3piridil; ou R⁵ é hidrogênio ou metil; ou R⁵ é hidrogênio; ou R⁵ é metil.

Ainda em outros aspectos específicos, R⁵ e R⁶ tomados em conjunto formam —(CH2)3— ou —(CH2)4; ou R⁵ e R⁶ tomados em conjunto formam —(CH2)3-.

Em	um	aspecto,	a	invenção	fornece	um	composto	de
fórmula	(I) ,	em que R3	é	hidrogênio	.
Em	outro aspecto	,	a invenção	fornece	um	composto	de
fórmula	(I) ,	em que R4	é	—S (O) 2R6.
Em	outro aspecto	,	a invenção	fornece	um	composto	de

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7/104 fórmula (I), em que R⁴ é —C(O)R⁷.

A invenção ainda fornece um composto de fórmula (I), em que R¹ é hidrogênio ou halo; R² é isopropil ou C45cicloalquil; e R³, R⁴, R⁵, R⁶ e R⁷ são definidos como na fórmula (I).

Ainda em outro aspecto, a invenção fornece um composto de fórmula (I), em que:

	R1	é	hidrogênio;
	R2	é	C3-4alquil ou C4-5CÍcloalquil;
10	R3	é	hidrogênio;
	R4	é	-S (0) 2R6 ou -C (0) R7;
	R5	é	hidrogênio ou Ci-3alquil;
	R6	é	Ci-3alquil; e
	R7	é	hidrogênio ou Ci-3alquil.

Ainda em outro aspecto, a invenção fornece um grupo de compostos de fórmula (II):

(II) em que R¹ é hidrogênio, R² é isopropil e R³, R⁴, R⁵ e

R6, ou R³, R⁴, R⁵ e R⁷ assumem os valores mostrados na

Tabela I e Tabela II, respectivamente.

Tabela I

R4 = -S(O)2R6
Exemplo N°	R3	R5	R6
1	H	ch3	ch3
2	ch3	ch3	ch3

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3	ch3	—CH2-3-piridil	ch3
4	H	H	ch3
5	H	—CR2-3-piridil	ch3
6	H	ch3	ch3
7	H	ch3	ch3
21	H	C2H5	ch3
22	H	H	ch3
23	H	- (ch2) 3-

Tabela II

R4 = —C(O)R7
Exemplo N°	R3	R5	R7
8	H	CH3	4-piridil
9	H	H	4-piridil
10	ch3	ch3	ch3
11	ch3	ch3	4-piridil
12	ch3	—CH2-3-piridil	ch3
13	H	H	ch3
14	H	ch3	ch3
15	H	ch3	H
16	H	H	H
17	H	ch3	ch3
18	H	ch3	H

As denominações químicas convencionais aqui usadas são ilustradas para o composto do Exemplo 1:

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Que é designado {(1S,3R,5R)-842-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico, de acordo com o programa de computador AutoNom, fornecido por MDL Information Systems, GmbH (Frankfurt, Alemanha). A designação (1S,3R,5R) descreve a orientação relativa das ligações associadas ao sistema de anel bicíclico que são apresentadas como cunhas sólidas e tracejadas. O composto é representado alternativamente como N-[(3-endo)-8[2-hidroxi3-(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il]-1-(1-metiletil)-2-oxo-1,2dihidro-3-quinolinacarboxamida. Em todos os compostos da invenção apresentados acima, a quinolinona-carboxamida é endo em relação grupo azabiciclooctana.

Deve ser feita menção particular dos seguintes compostos:

{(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

{(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(metanossulfonilamino) propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

{(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

{(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

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10/104 {(1S,3R,5R)-8[3-(acetil-metil-amino)-2-hidroxipropil]8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

{(1S,3R,5R)-8[3-(formil-metil-amino)-2-hidroxipropil]8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico ;

{(1S,3R,5R)-8-[(R)-3 (acetil-metil-amino)-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

{(1S,3R,5R)-8-[(R)-3-(formil-metil-amino)-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico; e {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3(metanossulfonilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carboxílico.

Como exemplificado por compostos particulares listados acima, os compostos da invenção podem conter um centro quiral, especificamente, no átomo de carbono nas fórmulas (I) ou (II) que abriga o substituinte —OR³. Conseqüentemente, a invenção inclui misturas racêmicas, estereoisômeros puros e misturas enriquecidas com estereoisômero desses isômeros, a menos que indicado de forma diferente. Quando é mostrado um estereoisômero particular, será compreendido por aqueles com habilidade na técnica que quantidades menores de outros estereoisômeros podem estar presentes nas composições da invenção, a menos que indicado de forma diferente, desde que qualquer utilidade da composição como um todo não seja eliminada pela presença desses outros isômeros.

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Definições

Quando se descreve os compostos, composições e métodos da invenção, os seguintes termos têm os seguintes significados, a menos que indicado de forma diferente.

O termo alquil significa um grupo hidrocarboneto monovalente saturado que pode ser linear ou ramificado ou combinações desses. A menos que definido de forma diferente, tais grupos alquil contêm tipicamente de 1 a 10 átomos de carbono. Grupos alquil representativos incluem, como exemplo, metil, etil, n-propil (n-Pr), isopropil (iPr) , n-butil (n-Bu) , sec-butil, isobutil, terc-butil, npentil, n-hexil, n-heptil, n-octil, n-nonil, n-decil e outros mais.

O termo alquilenil significa um grupo hidrocarboneto divalente saturado que pode ser linear ou ramificado ou combinações desse. A menos que definido de forma diferente, tais grupos alquilenil contêm tipicamente de 1 a 10 átomos de carbono. Grupos alquilenil representativos incluem, como exemplo, metileno, etileno, n-propileno, n-butileno, propano-1,2-diil(1-metiletileno), 2-metilpropano-1,2-diil (1,1-dimetiletileno) e outros mais.

O termo alcoxi significa um grupo -O-alquil monovalente, em que alquil é definido como acima. Grupos alcoxi representativos incluem, como exemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, e outros mais.

O termo cicloalquil significa um grupo carbocíclico monovalente saturado que pode ser monocíclico ou multicíclico. A menos que definido de forma diferente, tais grupos cicloalquil contêm tipicamente de 3 a 10 átomos de carbono. Grupos cicloalquil representativos incluem, como

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12/104 exemplo, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil, ciclooctil, e outros mais.

O termo halo significa flúor, cloro, bromo ou iodo.

O termo composto significa um composto que foi preparado sinteticamente ou preparado de qualquer outra forma como, por exemplo, por metabolismo.

O termo quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quantidade suficiente para efetuar tratamento quando administrada a um paciente que necessite de tratamento.

O termo tratamento, como aqui usado, significa o tratamento de uma doença, um distúrbio, ou condição médica em um paciente como, por exemplo, um mamífero (particularmente um humano) que inclui:

(a) evitar que a doença, ou distúrbio ou condição médica ocorra, ou seja, tratamento profilático de um paciente;

(b) melhora da doença, distúrbio ou condição médica, ou seja, eliminação ou regressão da doença, distúrbio ou condição médica em um paciente;

(c) supressão da doença, distúrbio ou condição médica, ou seja, tornar mais lento ou interromper o desenvolvimento da doença, distúrbio ou condição médica em um paciente; ou (d) alívio dos sintomas da doença, distúrbio ou condição médica em um paciente.

O termo sal farmaceuticamente aceitável significa um sal preparado a partir de um ácido ou uma base que seja aceitável para administração a um paciente como, por exemplo, um mamífero. Tais sais podem ser derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente

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13/104 aceitáveis e de bases farmaceuticamente aceitáveis.

Tipicamente, sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos da presente invenção são preparados a partir de ácidos.

Sais derivados de ácidos farmaceuticamente aceitáveis incluem, sem limitação, ácido acético, adípico, benzenossulfônico, benzóico, canforsulfônico, cítrico, etanossulfônico, fumárico, glucônico, glutâmico, hidrobrômico, clorídrico, lático, maléico, málico, mandélico, metanossulfônico, múcico, nitríco, pantotênico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, ptoluenossulfônico, xinafóico (ácido 1-hidroxi-2-naftóico), naftaleno-1,5-dissulfônico e outros mais.

O termo solvato significa um complexo ou agregado formado por uma ou mais moléculas de um soluto, ou seja, um composto da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável desse, e uma ou mais moléculas de um solvente. Tais solvatos são sólidos tipicamente cristalinos com uma proporção molar substancialmente fixa de soluto e solvente. Solventes representativos incluem, por exemplo, água, metanol, etanol, isopropanol, ácido acético, e outros mais. Quando o solvente for água, o solvato formado é um hidrato.

Será observado que o termo ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável de estereoisômero desse visa incluir todas as permutas de sais, solvatos e estereoisômeros como, por exemplo, um solvato de um sal farmaceuticamente aceitável de um estereoisômero de um composto de fórmula (I).

O termo grupo de proteção amino significa um grupo de proteção adequado para evitar reações indesejáveis em um nitrogênio do amino. Grupos de proteção amino

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14/104 representativos incluem, sem limitação, formil; grupos acil, por exemplo, grupos alcanoil como, por exemplo, acetil; grupos alcoxicarbonil como, por exemplo, tercbutoxicarbonil (Boc); grupos arilmetoxicarbonil como, por exemplo, benziloxicarbonil (Cbz) e 9fluorenilmetoxicarbonil (Fmoc); grupos arilmetil como, por exemplo, benzil (Bn), tritil (Tr), e 1,1-di-(4'metoxifenil)metil; grupos silil como, por exemplo, trimetilsilil (TMS) e terc-butildimetilsilil (TBDMS); e outros mais.

Procedimentos Sintéticos Gerais

Os compostos da invenção podem ser preparados a partir de materiais de partida prontamente disponíveis usando os métodos e procedimentos gerais seguintes. Embora um aspecto particular da presente invenção seja ilustrado nos esquemas abaixo, aqueles com habilidade na técnica irão reconhecer que todos os aspectos da presente invenção podem ser preparados usando os métodos aqui descritos ou com o uso de outros métodos, reagentes e materiais de partida conhecidos por aqueles com habilidade na técnica. Também será observado que quando forem fornecidas condições de processo típicas ou preferidas (ou seja, temperaturas, tempos, proporções molares de reagentes, solventes, pressões de reação etc.), outras condições de processo também podem ser usadas, a menos que definido de forma diferente. Condições ótimas de reação podem variar com os reagentes ou solventes usados em particular, mas tais condições podem ser determinadas por aqueles com habilidade na técnica por procedimentos de otimização de rotina.

Adicionalmente, como será aparente para aqueles com de 29/06/2018, pág. 18/121

15/104 habilidade na técnica, podem ser necessários grupos de proteção convencionais para evitar que certos grupos funcionais sejam submetidos a reações indesejadas. A escolha de um grupo de proteção adequado para um grupo funcional em particular, bem como de condições adequadas para proteção e desproteção, são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, numerosos grupos de proteção, e sua introdução e remoção, são descritos em T.W. Greene e G.M. Wuts, Protectíng Groups ín Organíc Synthesís, Terceira Edição, Wiley, Nova York, 1999, e referências nele citadas.

Em um método de síntese, compostos de fórmula (I) são preparados como ilustrado no Esquema A. (os substituintes e as variáveis mostrados nos esquemas seguintes têm as definições fornecidas acima, a menos que indicado de forma diferente).

Esquema A

No Esquema A, L representa um grupo de partida como, por exemplo, cloro, bromo, iodo ou etoxi, ou o reagente L— R4 é o ácido carboxílico HO-C(O)R⁷, ou seja, L representa formalmente hidróxi.

Condições de reação ótimas para a reação do Esquema A podem variar, dependendo das propriedades químicas do reagente L—R4, como é do conhecimento daqueles com habilidade na técnica.

Por exemplo, quando L for um grupo de partida halo de 29/06/2018, pág. 19/121

16/104 como, por exemplo, cloro, a reação é tipicamente conduzida pelo contato do intermediário (III) com entre cerca de 1 e cerca de 4 equivalentes de um composto de fórmula L—R⁴ em um diluente inerte como, por exemplo, diclorometano, na presença de um excesso de base, por exemplo, entre cerca de 3 e cerca de 6 equivalentes de base, como N,Ndiisopropiletilamina ou 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) . Diluentes inertes adequados também incluem N,Ndimetilformamida, triclorometano, 1,1,2,2-tetracloroetano, tetrahidrofurano, e outros mais. A reação é conduzida tipicamente em uma temperatura na faixa de cerca de -100°C a cerca de 30°C por cerca de quinze minutos a cerca de 2 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa. Reagentes L—R⁴ exemplares nos quais L é cloro incluem cloreto de metanossulfonila e cloreto de acetila.

Quando o reagente L—R⁴ for um ácido carboxílico, o Esquema A representa uma reação de acoplamento de amida que conduzida tipicamente pelo contato do intermediário (III) com entre cerca de 1 e cerca de 4 equivalentes de um composto de um ácido carboxílico L—R⁴, em um diluente inerte, por exemplo, N,N-dimetilformamida, na presença de um agente de hexafluorfosfato fosfônio (PyBop).

acoplamento como, por exemplo, de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinoA reação é conduzida tipicamente em temperatura ambiente, por cerca de quinze minutos a cerca de 2 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa. Agentes de acoplamento alternativos adequados incluem 1,3 diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1-(3dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC) e PyBop combinado com 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt).

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O acoplamento de amida do intermediário (III) com o ácido carboxílico L—R⁴ pode ser realizado alternativamente pela conversão de L—R⁴ em um éster ativado como, por exemplo, um éster de N-hidroxi succinimida (NHS) ou um éster de p-nitrofenila, ou um imidazol ácido, que então reage com o intermediário (III) .

Alternativamente, quando o reagente L—R4 é um líquido, por exemplo, formato de etila, a reação pode ser realizada dissolvendo-se (III) em um grande excesso do reagente L—R⁴, e aquecendo até uma temperatura entre cerca de 50°C e cerca de 100°C, por cerca de 12 a cerca de 24 horas.

O produto de fórmula (I) é isolado e purificado por procedimentos convencionais. Por exemplo, o produto pode ser concentrado até seco sob pressão reduzida, recolhido em uma solução aquosa ácida fraca e purificado por cromatografia HPLC.

Alternativamente, compostos de fórmula (I) podem ser preparados por N-alquilação de um composto de fórmula (I) na qual R2 é hidrogênio, que podem ser preparados de acordo com o Esquema A. A reação de N-alquilação é conduzida tipicamente pelo contato de um composto de fórmula (I), em que R² é hidrogênio, com entre cerca de 1 e cerca de 4 equivalentes de um composto da fórmula L'—R², na qual L' é um grupo de partida como, por exemplo, iodo ou bromo.

Essa reação é conduzida tipicamente em um solvente aprótico polar como, por exemplo, dimetilformamida, na presença de cerca de 2 e cerca de 4 equivalentes de uma base forte como, por exemplo, terc-butóxido de potássio. Tipicamente, a reação é realizada em uma temperatura entre cerca de 60°C e cerca de 100°C, por entre cerca de 6 e de 29/06/2018, pág. 21/121

18/104 cerca de 24 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa.

Ainda em outra alternativa, são preparados compostos de fórmula (I) em que R¹ é diferente de hidrogênio por processos convencionais de compostos de fórmula (I), em que R¹ é hidrogênio.

Intermediários de fórmula (III) são preparados a partir de materiais de partida prontamente disponíveis. Por exemplo, quando o carbono que abriga o substituinte —OR³ não for quiral, um intermediário de fórmula (III) pelo procedimento ilustrado no Esquema B.

Esquema B

¢111) em que L' representa independentemente um grupo de partida halo como, por exemplo, bromo, cloro ou iodo. Um contraíon carregado negativamente também está presente de 29/06/2018, pág. 22/121

19/104 associado ao intermediário carregado positivamente (V) ou (V' ) .

Primeiro, um intermediário de fórmula (IV) reage com um composto de oxirana, por exemplo, 2-bromometiloxirana (comumente, epibromohidrina) para formar um sal de azetidina de fórmula (V) . Essa reação é conduzida tipicamente pelo contato de (IV) com entre cerca de 2 e cerca de 4 equivalentes de 2-bromometiloxirana em um diluente polar, como etanol. A reação é conduzida tipicamente em temperatura ambiente por entre cerca de 24 e cerca de 48 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa.

Será compreendido que no processo do Esquema B e em outros processos descritos abaixo que usam o intermediário (IV) , o intermediário (IV) pode ser fornecido na forma da base livre ou na forma de um sal, com ajuste adequado das condições de reação, como necessário, como é do conhecimento daqueles com habilidade na técnica.

Um intermediário de fórmula (V' ) , no qual R³ é C13alquil, pode ser preparado pelo contato do intermediário (V) com de um pouco menos de um equivalente a cerca de um equivalente de um composto de fórmula L'—R³, em que R³ é C13alquil, em um diluente inerte na presença de cerca de 1 e cerca de 3 equivalentes de uma base forte como, por exemplo, terc-butóxido de potássio ou hidreto de sódio. A reação é conduzida tipicamente em temperatura ambiente por entre cerca de quinze minutos até uma hora, ou até que a reação esteja substancialmente completa. Diluentes inertes adequados incluem diclorometano, triclorometano, 1,1,2,2tetracloroetano, e outros mais.

de 29/06/2018, pág. 23/121

20/104

A seguir, o intermediário de azetidina (V) ou (V' ) reage com uma amina da fórmula H2NR⁵ para fornecer o intermediário (III) . Tipicamente, o intermediário de azetidina é dissolvido em um diluente inerte como, por exemplo, etanol, e colocado em contato com entre cerca de 1 e cerca de 8 equivalentes da amina H2NR⁵. Por exemplo, quando a amina H2NR⁵ for um reagente volátil como, por exemplo, metilamina, preferivelmente, entre cerca de 5 e cerca de 7 equivalentes da amina são usados. A reação é conduzida tipicamente em uma temperatura entre cerca de 50°C e cerca de 100°C por entre cerca de 12 e cerca de 24 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa.

Um intermediário de fórmula (III), em que R⁵ é hidrogênio, pode ser preparado a partir do intermediário de azetidina (V) ou (V' ) usando formato de amônio no lugar de amônia, ou seja, no lugar do reagente H2NR⁵ indicado no Esquema B. Alternativamente, para preparar o intermediário (III), em que R⁵ é hidrogênio, o anel azetidina de (V) ou (V') pode ser aberto por reação com uma azida como, por exemplo, azida de sódio, segunda então por uma reação de redução para fornecer o intermediário (III), ou o anel pode ser aberto por reação com hidróxido de amônio.

Como descrito com detalhes no Exemplo 4a, quando R³ e R⁵ são hidrogênio e o carbono que abriga o substituinte — OR³ não for quiral, um intermediário de fórmula (III) pode ser preparado pela reação do intermediário (IV) com um composto de oxiranilmetil tendo a átomo protegido de nitrogênio e então o desprotegendo. um reagente útil é 2oxiranilmetilisoindol-1,3-diona, comumente de 29/06/2018, pág. 24/121

21/104 epoxipropilftalimida, que reage com o intermediário (IV) para formar um intermediário em que um grupo 2-hidroxi propil substituído com ftalimidil:

é unido ao nitrogênio do anel azabicilcooctana de fórmula (IV) . O grupo ftalimidil é então removido por refluxo em hidrazina para formar um intermediário de fórmula (III), em que R³ e R⁵ são hidrogênio.

Um intermediário de fórmula (III), em que R³ e R⁵ são hidrogênio, também pode ser preparado por reação da azetidina (V) com o ânion de ftalimida e subseqüente tratamento com hidrazina.

Em um método de síntese alternativo, um intermediário

de fórmula (III), em	que	s R3 é	hidrogênio,	pode	ser
preparado por reação	do	intermediário (IV)	com	um
intermediário protegido	(VI)
	L'	* λ. An-p1 OH R5
		(VI)
seguido por uma etapa de	desproteção	. Na fórmula	(VI) ,	P1 é

um grupo de proteção amino, L' é um grupo de partida halo, e o asterisco representa um centro quiral. O processo que utiliza um intermediário de fórmula (VI) é útil para preparação de formas do intermediário (III), em que a estereoquímica no centro marcado pelo asterisco é especificamente (R) ou (S) , bem como para preparação de de 29/06/2018, pág. 25/121

22/104 formas não quirais do intermediário (III) .

Tipicamente, o intermediário (IV) é colocado em contato com entre cerca de 1 e cerca de 2 equivalentes de intermediário (VI) em um diluente polar como, por exemplo, metanol, na presença de mais de um equivalente de uma base, como V,V-diisopropiletilamina. A reação é conduzida tipicamente em uma temperatura entre cerca de 60°C e cerca de 100°C por entre cerca de 12 e cerca de 24 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa. O grupo de proteção P¹ é removido por procedimentos padronizados para fornecer um intermediário de fórmula (III) . Um grupo de proteção P¹ útil é Boc, que é tipicamente removido por tratamento com um ácido como, por exemplo, ácido trifluoracético.

Ainda em outro processo alternativo para a preparação do intermediário (III), o intermediário (VI) pode primeiro ser convertido em uma foram ciclizada (VII):

(VII) antes da reação com o intermediário (IV) para fornecer o intermediário (III) . O intermediário (VII) é preparado tipicamente dissolvendo-se o intermediário (VI) em um diluente inerte, por exemplo, tetrahidrofurano, na presença de uma base, por exemplo, sódio hidróxido. A reação de (VII) com (IV) para fornecer o intermediário (III) é realizada tipicamente pelo contato do intermediário (IV) com entre cerca de 1 e cerca de 4 equivalentes de intermediário (VII) em um diluente polar como, por exemplo, metanol. A reação é conduzida tipicamente em uma de 29/06/2018, pág. 26/121

23/104 temperatura entre cerca de 60°C a cerca de 100°C por entre cerca de 1 e cerca de 4 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa. O grupo de proteção P¹ é removido por procedimentos padronizados para fornecer um intermediário de fórmula (III) .

O intermediário protegido (VI) pode ser preparado a partir de an oxirana, como ilustrado no Esquema C para o exemplo particular de formação de um intermediário quiral protegido por Boc (VI') usando uma oxirana quiral. A reação é igualmente útil para a preparação de compostos não quirais de fórmula (VI).

Esquema C

(VI’ )

Como	mostrado	no	Esquema C,	uma	benzilamina	2 é
colocada	em contato	com pelo menos	um i	equivalente de	uma
oxirana	quiral 1	em	um diluente	não	polar como,	por
exemplo,	hexano	ou	tolueno,	para	formar a	2-

hidroxipropilamina 3. A reação é conduzida tipicamente em temperatura ambiente por entre cerca de 12 e cerca de 24 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa. O intermediário 3 reage tipicamente com um ligeiro excesso de dicarbonato de di-terc-butila (comumente (Boc)₂0), por exemplo, cerca de 1,1 equivalente, sob uma atmosfera de hidrogênio na presença de um catalisador metálico de transição para fornecer o intermediário de 29/06/2018, pág. 27/121

24/104 protegido por Boc (VI'). A reação é conduzida tipicamente em temperatura ambiente por entre cerca de 8 a cerca de 24 horas.

Um processo para preparação de intermediários de fórmula (IV) é mostrado no Esquema D.

Esquema D

A aminoazabiciclooctana protegida ou, comumente, aminotropano, reage primeiro com o ácido carboxílico substituído com quinolinona (VIII). Tipicamente, essa reação é realizada convertendo-se primeiro (VIII) em um cloreto ácido pelo contato de (VIII) com pelo menos um equivalente, preferivelmente entre cerca de 1 e cerca de 2 equivalentes, de um agente de ativação como, por exemplo, cloreto de tionila ou cloreto de oxalila em um diluente aromático como, por exemplo, tolueno, benzeno, xileno, ou outros mais. A reação é conduzida tipicamente em uma temperatura que varia de cerca de 80°C a cerca de 120°C, por cerca de 15 minutos a cerca de 4 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa.

A solução de cloreto ácido é tipicamente adicionada e uma mistura bifásica de cerca de 1 equivalente do aminotropano 5 para formar um intermediário protegido, que é extraído por procedimentos padronizados. A mistura bifásica de 5 é geralmente preparada dissolvendo-se 5 em um diluente aromático, como usado acima, e adicionando-se uma de 29/06/2018, pág. 28/121

25/104 solução aquosa contendo um excesso de base como, por exemplo, hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio, preferivelmente cerca de 2 a 5 equivalentes de base.

Alternativamente, o acoplamento de amida do intermediário 5 com o ácido carboxílico (VIII) pode ser realizado na presença de um agente de acoplamento, tal como 1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1-(3dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), ou hexafluorfosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfônio (PyBop), opcionalmente combinado com 1-hidroxi-7azabenzotriazol (HOAt), como descrito acima para o acoplamento de amida do intermediário (III) com um ácido carboxílico. Ainda em outra alternativa, o acoplamento de amida do intermediário 5 com o ácido carboxílico (VIII) pode ser realizado pela conversão de (VIII) em um éster ativado, também descrito acima.

O grupo de proteção P¹ é removido por procedimentos padronizados para fornecer um intermediário de fórmula (IV). Por exemplo, quando o grupo de proteção é Boc, tipicamente a remoção ocorre por tratamento com um ácido como, por exemplo, ácido trifluoracético, fornecendo o sal ácido do intermediário. O sal ácido do intermediário (IV) pode ser convertido na base livre, se desejado, por tratamento convencional com base. O grupo de proteção Cbz, para outro exemplo, é removido convenientemente por hidrogenólise sobre um catalisador metálico adequado, como paládio sobre carbono.

O aminotropano protegido 5 empregado nas reações descritas nesta aplicação é preparado a partir de materiais de partida prontamente disponíveis. Por exemplo, quando o de 29/06/2018, pág. 29/121

26/104 grupo de proteção P¹ for Boc, o aminotropano protegido 5’ é preparado pelo procedimento ilustrado no Esquema E.

Esquema E

Como descrito com detalhes no Exemplo la abaixo, para preparar o intermediário protegido 5’, primeiro, 2,5dimetoxi tetrahidrofurano 6 é colocado em contato com entre cerca de 1 e 2 equivalentes, preferivelmente cerca de 1.5 equivalentes de benzil amina e um ligeiro excesso, por exemplo, cerca de 1,1 equivalente de ácido 1,3acetonadicarboxílico 7 em uma solução ácida aquosa na presença de um agente de tamponamento como, por exemplo, fosfato de sódio hidrogênio. A mistura de reação é aquecida até entre cerca de 60 e cerca de 100°C para assegurar a decarboxilação de quaisquer intermediários carboxilados no produto, 8-benzil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona 8, comumente N-benziltropanona.

O intermediário 8 reage tipicamente com um ligeiro excesso de dicarbonato de di-terc-butila (comumente (Boc)₂0), por exemplo, cerca de 1,1 equivalente, sob uma atmosfera de hidrogênio na presença de um catalisador metálico de transição, para fornecer o intermediário protegido por Boc 9, terc-butil éster de ácido 3-oxo-8azabiciclo[3.2.1]octana-8-carboxílico. A reação é conduzida de 29/06/2018, pág. 30/121

27/104 tipicamente em temperatura ambiente por cerca de 12 a cerca de 72 horas.

Finalmente, o intermediário 9 é colocado em contato com um grande excesso, por exemplo, pelo menos cerca de 25 equivalentes de formato de amônio em um diluente inerte, como metanol, na presença de um catalisador metálico de transição para fornecer o produto 5’ na configuração endo com alta estereoespecificidade, por exemplo, proporção endo para exo >99:1. A reação é conduzida tipicamente em temperatura ambiente por cerca de 12 a cerca de 72 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa. É vantajoso adicionar o reagente de formato de amônio em porções. Por exemplo, o intermediário 9 é colocado em contato com uma porção inicial de formato de amônio de cerca de 15 a cerca de 25 equivalentes. Após um intervalo de cerca de 12 a cerca de 36 horas, é adicionada uma porção adicional de cerca de 5 a cerca de 10 equivalentes de formato de amônio. A adição subseqüente pode ser repetida após um intervalo similar. O produto 5’ pode ser purificado por procedimentos convencionais como, por exemplo, extração alcalina.

Em um método de síntese alternativo, são preparados compostos de fórmula (I) pelo acoplamento do ácido carboxílico substituído com quinolinona (VIII) com um intermediário de fórmula (IX) como ilustrado no Esquema F.

Esquema F

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28/104

A reação do Esquema F é conduzida tipicamente sob o acoplamento de condições de amida descritas acima para a reação do ácido carboxílico (VIII) com o intermediário 5.

Os intermediários de fórmula (IX) podem ser preparados pela desproteção de um intermediário de fórmula (X):

(X) em que P² representa um grupo de proteção amino.

Os intermediários de fórmula (X) podem ser preparados a partir de materiais de partida prontamente disponíveis usando procedimentos análogos a alquilação e outras reações descritas acima e/ou usando reações alternativas bem conhecidas por aqueles com habilidade na técnica. Por exemplo, o intermediário (X) podem ser preparado usando um intermediário 10

P^Z~NH

NH que pode ser formado pela desproteção do nitrogênio do amino da aminoazobiciclooctana 5 com o grupo de proteção amino P² e, então removendo P¹ do nitrogênio do grupo azabiciclooctana. Os grupos de proteção P¹ e P² são escolhidos de forma que a serem removidos sob condições diferentes. Por exemplo, quando P¹ for escolhido como Boc, Cbz pode ser usado como P². A substituição do aminotropano protegido 10 para o intermediário (IV) nas reações de 29/06/2018, pág. 32/121

29/104 descritas acima para a preparação de intermediário (III) fornece intermediários de fórmula (X).

Ainda em outro método de síntese, podem ser preparados compostos de fórmula (I), em que R³ é hidrogênio, representados abaixo como fórmula (I^T), como ilustrado no Esquema G.

Esquema G

O intermediário (XI) pode conter um centro quiral, como mostrado explicitamente para o intermediário 5 de oxirana protegido (VII).

Tipicamente, o intermediário (IV) é colocado em contato com entre cerca de 1 e cerca de 2 equivalentes do intermediário de oxirana (XI) em um diluente polar como, por exemplo, etanol, para formar o produto (I'). O intermediário (IV) pode ser fornecido em forma de sal no caso de um ligeiro excesso molar de base alcalina estar incluído na mistura de reação, antes da adição da oxirana. A reação é conduzida tipicamente em uma temperatura de cerca de 60°C a cerca de 100°C, por entre cerca de 1 e cerca de 3 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa. O produto pode ser isolado por cristalização de um diluente inerte como a base livre ou como um sal ácido.

Intermediários de fórmula (XI) podem ser preparados por reação do intermediário de oxirana 1, ilustrados no Esquema C, com a amina secundária HNR⁴R⁵. Tipicamente, uma de 29/06/2018, pág. 33/121

30/104 solução aquosa da amina HNR⁴R⁵ contendo cerca de 1 equivalente de uma base, como hidróxido de sódio, hidróxido de lítio, hidróxido de césio ou hidróxido de potássio, é colocado em contato com entre cerca de 1.5 e cerca de 2.5 equivalentes do intermediário de oxirana 1. A reação é conduzida tipicamente em uma temperatura entre cerca de 0°C e cerca de 10°C, por entre cerca de 12 e cerca de 30 horas, ou até que a reação esteja substancialmente completa.

O ácido quinolinona carboxílico (VIII) é prontamente preparado por procedimentos similares àqueles relatados na literatura em Suzuki e cols., Heterocycles, 2000, 53, 2.471-2.485 e descritos nos exemplos abaixo.

Os reagentes L’-R2, L’-R3, L-R4, H₂NR⁵ e HNR⁴R⁵ são disponíveis comercialmente ou são prontamente preparados por procedimentos padronizados a partir de materiais de partida comuns.

Detalhes adicionais em relação às condições de reação específicas e a outros procedimentos para preparação de compostos da invenção representativos ou intermediários desses são descritos nos exemplos abaixo.

Conseqüentemente, em um aspecto do método, a invenção fornece um processo para preparação de um composto de fórmula (I), ou um sal ou estereoisômero desse, o processo compreendendo:

(a) a reação de um composto de fórmula (III) :

R

(III) de 29/06/2018, pág. 34/121

31/104 com o composto da fórmula L—^R4, em que L é um grupo de partida, ou L—R⁴ representa HO-C(O)R⁷; ou (b) a reação de um composto de fórmula (VIII):

com um composto de fórmula (IX):

(IX) para fornecer um composto de fórmula (I), ou um sal ou estereoisômero desse.

A invenção ainda fornece um composto de fórmula (III), ou um sal ou estereoisômero ou derivado protegido desse, em que R¹, R², R³ e R⁵ são definidos como na fórmula (I) .

Em um aspecto adicional do método, a invenção fornece um processo para preparação de um composto de fórmula (I^T), em que R¹, R², R⁴ e R⁵ são definidos como na fórmula (I), ou um sal ou estereoisômero desse, o processo compreendendo a reação de um composto de fórmula (IV):

ou um sal desse, com um composto de fórmula (XI):

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32/104

(XI) para fornecer um composto de fórmula (I') ou um sal ou estereoisômero desse.

Composições Farmacêuticas

Os compostos de quinolinona-carboxamida da invenção são administrados tipicamente a um paciente na forma de uma composição farmacêutica. Tais composições farmacêuticas podem ser administradas ao paciente por qualquer via de administração aceitável incluindo, sem limitação, os modos de administração oral, retal, vaginal, nasal, inalada, tópica (incluindo transdérmica) e parenteral.

Conseqüentemente, em um dos aspectos das composições, a invenção é dirigida a uma composição farmacêutica que compreende um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou a sal farmaceuticamente aceitável desse. Opcionalmente, tais composições farmacêuticas podem conter outros agentes terapêuticos e/ou de formulação, se desejado.

As composições farmacêuticas da invenção contêm tipicamente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável desse. Tipicamente, tais composições farmacêuticas conterão de cerca de 0,1 a cerca de 95% por peso do agente ativo; preferivelmente, de cerca de 5 a cerca de 70% por peso; e, mais preferivelmente, de cerca de 10 a cerca de 60% por peso do agente ativo.

Qualquer veículo ou excipiente convencional pode ser de 29/06/2018, pág. 36/121

33/104 usado nas composições farmacêuticas da invenção. A escolha de um veículo ou excipiente em particular, ou de combinações de veículos ou excipientes, dependerá do modo de administração usado para tratar um paciente em particular ou do tipo de condição médica ou doença. A esse respeito, a preparação de uma composição farmacêutica adequada para um modo de administração em particular faz parte do escopo daqueles com habilidade na técnica farmacêutica. Adicionalmente, os ingredientes para estas composições são disponíveis comercialmente por, por exemplo, Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178. Como ilustração adicional, técnicas de formulação convencionais são descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^a Edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Mariland (2000); e H.C. Ansel a cols., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a Edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Mariland (1999).

Exemplos representativos de materiais que podem ser vir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, sem limitação, os seguintes: (1) açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; (2) amidos, tais como amido de milho e amido de batata; (3) celulose, como celulose microcristalina e seus derivados, tais como carboximetil celulose de sódio, etil celulose e acetato de celulose; (4) tragacanto em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras de supositório; (9) óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de açafrão, óleo de gergelim, azeite de oliva, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis de 29/06/2018, pág. 37/121

34/104 como, por exemplo, propileno glicol; (11) polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol;

(12) ésteres, tais como oleato de etila e laurato de etila;

(13) ágar; (14) agentes de tamponamento, tais como 5 hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água sem pirogênio; (17) soro fisiológico isotônico; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções-tampão de fosfato; e (21) outras substâncias atóxicas compatíveis empregadas em composições farmacêuticas.

As composições farmacêuticas da invenção são preparadas tipicamente pela mistura ou combinação cuidadosa e íntima ou combinação de um composto da invenção com um veículo farmaceuticamente aceitável e um ou mais ingredientes opcionais. Caso seja necessário ou desejado, a mistura uniformemente combinada resultante pode então ser moldada ou carregada em comprimidos, cápsulas, pílulas e semelhantes com o uso de procedimentos e equipamentos convencionais.

As composições farmacêuticas dessa invenção são empacotadas preferivelmente em uma forma de dosagem unitária. O termo “forma de dosagem unitária” refere-se a uma unidade fisicamente distinta adequada à dosagem de um paciente, ou seja, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de agente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, seja isoladamente ou em combinação com uma ou mais unidades adicionais. Por exemplo, essas formas de dosagem unitária podem ser cápsulas, comprimidos, pílulas e semelhantes.

Em uma modalidade preferida, as composições

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35/104 farmacêuticas da invenção são adequadas para administração oral. Composições farmacêuticas adequadas para administração oral podem estar na forma de cápsulas, comprimidos, pílulas, losangos, cachets, drágeas, pós, grânulos; ou como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso; ou como uma emulsão líquida óleo-em-água ou água-em-óleo; ou como um elixir ou xarope; e semelhantes; cada uma contendo uma quantidade predeterminada de um composto da presente invenção como um ingrediente ativo.

Quando destinadas à administração oral em uma forma de dosagem sólida (ou seja, como cápsulas, comprimidos, pílulas e semelhantes), as composições farmacêuticas da invenção compreenderão tipicamente um composto da presente invenção como o ingrediente ativo, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou fosfato dicálcico. Opcional ou alternativamente, tais formas de dosagens sólidas também podem compreender: (1) preenchedores ou extensores, tais como amidos, celulose microcristalina, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido salicílico; (2) ligantes, tais como carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarose e/ou acácia; (3) umectantes, tais como glicerol; (4) agentes de desintegração, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos, e/ou carbonato de sódio; (5) agentes de retardo de solução como, por exemplo, parafina; (6) aceleradores da absorção, tais como compostos de amônio quaternário; (7) agentes umidificadores, tais como álcool cetílico e/ou monoestearato de glicerol; (8)

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36/104 absorventes, tais como argila de caulim e/ou argila de bentonita; (9) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, sódio lauril sulfato e/ou misturas desses; (10) agentes corantes; e (11) agentes de tamponamento.

Agentes de liberação, agentes umidificadores, agentes de revestimento, agentes adoçantes, agentes flavorizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes também podem estar presentes nas composições farmacêuticas dessa invenção. Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes hidrossolúveis, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfato de sódio, sulfito de sódio e semelhantes; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como ascorbil palmitato, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propila, alfa-tocoferol e semelhantes; e (3) agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, etilenodiamina, ácido tetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, e semelhantes. Agentes de revestimento para comprimidos, cápsulas, pílulas e semelhantes, incluindo aqueles usados para revestimentos entéricos, tais como ftalato de acetato de celulose (CAP), ftalato de polivinil acetato (PVAP), ftalato de hidroxipropil metilcelulose, copolímeros de ácido metacrílico- éster de ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulose (CAT), carboximetil etil celulose (CMEC), succinato de acetato de hidroxipropil metil celulose (HPMCAS) e semelhantes.

Se desejado, as composições farmacêuticas da presente invenção também podem ser formuladas para fornecer de 29/06/2018, pág. 40/121

37/104 liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo usando, apenas como exemplo, hidroxipropil metil celulose em proporções variáveis; ou outras matrizes de polímero, lipossomos e/ou microesferas.

Além disso, as composições farmacêuticas da presente invenção podem conter opcionalmente agentes opacificantes e podem ser formuladas de forma a liberarem o ingrediente ativo somente, ou preferivelmente, em uma certa porção do trato gastrintestinal, opcionalmente, de forma retardada. Exemplos de composições combinadas que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. O ingrediente ativo também pode estar em forma micro-encapsulada, se apropriado, com um ou mais dos excipientes descritos acima.

Formas de dosagem líquida para administração oral incluem, como ilustração, emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. Tais formas de dosagem líquida compreendem tipicamente o ingrediente ativo e um diluente inerte, como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubilização e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, óleos (esp., óleo de semente de algodão, óleos de amendoim, de milho, de germe de cereal, azeite de oliva, óleo de rícino e de gergelim), glicerol, álcool tetrahidrofurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano e misturas desses. Suspensões, além do ingrediente ativo, podem conter agentes de suspensão tais como, por exemplo, álcoois isoestearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, de 29/06/2018, pág. 41/121

38/104 celulose microcristalina, metahidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tragacanto, e misturas desses.

Alternativamente, as composições farmacêuticas da invenção são formuladas para administração por inalação. Composições farmacêuticas adequadas para administração por inalação estarão tipicamente na forma de um aerossol ou um pó. Tais composições são administradas geralmente usando dispositivos de liberação conhecidos, tais como um inalador de dose metrificada, um inalador de pó seco, um nebulizador ou um dispositivo de liberação similar.

Quando administradas por inalação usando um recipiente pressurizado, as composições farmacêuticas dessa invenção compreenderão tipicamente o ingrediente ativo e um propelente adequado, como diclorodifluormetano, triclorofluormetano, diclorotetrafluoretano, dióxido de carbono ou outro gás adequado.

Adicionalmente, a composição farmacêutica pode estar na forma de uma cápsula ou cartucho (feito, por exemplo, de gelatina) que compreende um composto dessa invenção e um pó

adequado	para	uso	em um	inalador	de	pó.	Bases de	pó
adequadas	incluem,	como exemplo, lactose	ou amido.
Os	compostos	da	invenção	também	podem	ser
administrados	por	via transdérmica	usando	sistemas	de
liberação	e	excipientes	conhecidos	.	Por	exemplo,	um
composto	da	invenção	pode ser	misturado	com

intensificadores de permeação, tais como propileno glicol, monolaurato de polietileno glicol, azacicloalcan-2-onas e semelhantes, e incorporado em um emplastro ou sistema de liberação similar. Excipientes adicionais, incluindo agentes de gelificação, emulsificantes e tampões, podem ser de 29/06/2018, pág. 42/121

39/104 usados nestas composições transdérmicas, se desejado.

As formulações seguintes ilustram composições farmacêuticas representativas da presente invenção:

Exemplo de Formulação A

Cápsulas rígidas de gelatina	para administração oral
são preparadas da seguinte forma:
Ingredientes	Quantidade
Composto da invenção	50 mg
Lactose (seco por pulverização)	2 00 mg
Estearato de magnésio	10 mg
Procedimento representativo:	Os ingredientes são

cuidadosamente misturados e então colocados em uma cápsula rígida de gelatina (260 mg de composição por cápsula).

Exemplo de Formulação B

Cápsulas rígidas de gelatina	para administração oral
são preparadas da seguinte forma:
Ingredientes	Quantidade
Composto da invenção	20 mg
Amido	8 9 mg
Celulose microcristalina	8 9 mg
Estearato de magnésio	2 mg
Procedimento representativo:	Os ingredientes são
cuidadosamente misturados e então	passados através de uma

peneira U.S. de trama N° 45 e colocados em uma cápsula rígida de gelatina (200 mg de composição por cápsula).

Exemplo de Formulação C

Cápsulas para administração oral são preparadas da seguinte forma:

de 29/06/2018, pág. 43/121

40/104

Ingredientes	Quantidade
Composto da invenção	10 mg
Monooleato de polioxietileno	sorbitano 50 mg
Pó de amido	250 mg
Procedimento representativo: Os ingredientes são
cuidadosamente misturados e	então colocados em uma cápsula
de gelatina (310 mg de composição por cápsula).
Exemplo de	Formulação D
Comprimidos para administração oral são preparados da
seguinte forma:
Ingredientes	Quantidade
Composto da invenção	5 mg
Amido	50 mg
Celulose microcristalina	35 mg
Polivinilpirrolidona
(10 peso% em água)	4 mg
Carboximetil amido de sódio	4,5 mg
Estearato de magnésio	0,5 mg
Talco	1 mg

Procedimento representativo: O ingrediente ativo, o amido e a celulose são passados através de uma peneira U.S. de trama N° 45 e misturados cuidadosamente. A solução de polivinilpirrolidona é misturada com os pós resultantes, e essa mistura é então passada através de uma peneira U.S. de trama N° 14. Os grânulos produzidos dessa forma são secos a 50-60°C e passados através de uma peneira U.S. de trama N° 18. O carboximetil amido de sódio, o estearato de magnésio e o talco (previamente passados através de uma peneira U.S. de trama N° 60) são então adicionados aos grânulos. Após misturação, a mistura é comprimida em uma máquina de

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 44/121

41/104 comprimido para gerar um comprimido pesando 100 mg.

Exemplo de Formulação E

Comprimidos para administração oral são preparados da seguinte forma:

5 Ingredientes	Quantidade
Composto da invenção	25 mg
Celulose microcristalina	400 mg
Dióxido de silício fumegado	10 mg
Ácido esteárico	5 mg
10 Procedimento representativo:	Os ingredientes são

cuidadosamente misturados e então compactados para formarem comprimidos (440 mg de composição por comprimido).

Exemplo de Formulação F

	Comprimidos com uma fenda para	administração oral	são
15	preparados da seguinte forma:
	Ingredientes	Quantidade
	Composto da invenção	15 mg
	Amido de milho	50 mg
	Croscarmelose sódica	25 mg
20	Lactose	120 mg
	Estearato de magnésio	5 mg
	Procedimento representativo:	Os ingredientes	são

cuidadosamente misturados e compactados para formarem um comprimido com uma fenda (215 mg de composições por comprimido).

Exemplo de Formulação G

Uma suspensão para administração oral é preparada da seguinte forma:

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 45/121

42/104

Ingredientes Quantidade

Composto da invenção		0,1 g
Ácido fumárico		0,5 g
Cloreto de sódio		2,0 g
Metil parabeno		0,15 g
Propil parabeno		0,05 g
Açúcar granulado		25,5 g
Sorbitol (solução 70%)		12,85 g
Veegum k (Vanderbilt Co.)		1,0 g
Flavorizante		0,035 ml
Corantes		0,5 mg
Água destilada	q	.s. até 100 ml
Procedimento representativo:	Os	ingredientes	são
misturados para formarem uma suspensão	contendo 10 mg	de

ingrediente ativo por 10 ml de suspensão.

	Exemplo de Formulação H
Um pó seco para administração por inalação é preparado
da seguinte	forma:
Ingredientes	Quantidade
Composto da	invenção 1,0 mg
Lactose	25 mg

Procedimento representativo: O ingrediente ativo é micronizado e então mesclado com lactose. Essa mistura mesclada é então colocada em um cartucho de inalação de gelatina. Os conteúdos do cartucho são administrados usando um inalador de pó.

Exemplo de Formulação I

Um seco pó para administração por inalação em um inalador de dose metrificada é preparado da seguinte forma:

Procedimento representativo: Uma suspensão contendo 5%

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 46/121

43/104 de peso de um composto da invenção e 0,1% de peso de lecitina é preparada pela dispersão de 10 g de composto ativo como partículas micronizadas com tamanho médio menor do que 10 pm em uma solução formada por 0,2 g de lecitina dissolvida em 200 ml de água desmineralizada. A suspensão é seca por vaporização e o material resultante é micronizado até partículas que têm um diâmetro médio menor do que 1,5 pm. As partículas são colocadas em cartuchos com 1,1,1,2tetrafluoretano pressurizado.

Exemplo de Formulação J

Uma formulação injetável é preparada da seguinte forma:

Ingredientes Quantidade

Composto da invenção 0,2 g

Solução tampão de acetato de sódio (0,4 M) 40 ml

HCl (0,5 N) ou NaOH (0,5 N) q.s. até pH 4

Água (destilada, estéril) q.s. até 20 ml

Procedimento representativo: Os ingredientes acima são misturados e o pH é ajustado até 4 ± 0,5 usando HCl 0,5 N ou NaOH 0,5 N.

Exemplo de Formulação K

Cápsulas para administração oral são preparadas da seguinte forma:

Ingredientes Quantidade

Composto da Invenção 4,05 mg

Celulose microcristalina (Avicel PH 103) 259,2 mg

Estearato de magnésio 0,75 mg

Procedimento_representativo: Os ingredientes são cuidadosamente misturados e então colocados em uma cápsula de gelatina, (Tamanho #1, Branca, Opaca) (264 mg de

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 47/121

44/104 composição por cápsula).

Exemplo de Formulação L

Cápsulas para administração oral são preparadas da seguinte forma:

Ingredientes Quantidade

Composto da Invenção

Celulose microcristalina (Avicel PH 103) Estearato de magnésio

8,2 mg 139,05 mg 0,75 mg

Procedimento representativo: Os ingredientes são cuidadosamente misturados e então colocados em uma cápsula de gelatina (Tamanho #1, Branca, Opaca) (148 mg de composição por cápsula).

Será compreendido que qualquer forma dos compostos da invenção, (ou seja, base livre, sal farmacêutico ou solvato) que seja adequada para o modo de administração em particular, possa ser usada nas composições farmacêuticas discutidas acima.

Utilidade

Os compostos de quinolinona-carboxamida da invenção são agonistas de receptor de 5-HT4 e, portanto, espera-se que sejam úteis para o tratamento de condições médicas mediadas por receptores de 5-HT4 ou associadas à atividade do receptor de 5-HT4, ou seja, condições médicas que são melhoradas por tratamento com um agonista de receptor de 5HT4. Tais condições médicas incluem, sem limitação, síndrome do cólon irritável (SCI), constipação crônica, dispepsia funcional, esvaziamento gástrico retardado, doença de refluxo gastresofágico (DRGE), gastroparesia, íleo pós-operatório, pseudo-obstrução intestinal, e trânsito retardado induzido por drogas. Além disso, foi de 29/06/2018, pág. 48/121

45/104 sugerido que alguns desses compostos agonistas do receptor de 5-HT4 podem ser usados no tratamento de distúrbios do sistema nervoso central, incluindo distúrbios cognitivos, distúrbios comportamentais, distúrbios do humor e distúrbios de controle da função autonômica.

Em particular, os compostos da invenção aumentam a motilidade do trato gastrintestinal (GI) e, dessa forma, espera-se que sejam úteis para o tratamento de distúrbios do trato GI causados por motilidade reduzida em mamíferos, incluindo humanos. Estes distúrbios da motilidade do GI incluem, como ilustração, constipação crônica, síndrome do cólon irritável com constipação predominante (C-SCI), gastroparesia diabética e idiopática e dispepsia funcional.

Em um aspecto, portanto, a invenção fornece um método de aumento da motilidade do trato gastrintestinal em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto da invenção.

Quando usado no tratamento de distúrbios de motilidade reduzida do trato GI ou de outras condições mediadas por receptores de 5-HT4, os compostos da invenção serão administrados tipicamente por via oral em uma dose única diariamente ou em várias doses por dia, embora outras formas de administração possam ser usadas. A quantidade de agente ativo administrado por dose ou a quantidade total administrada por dia será tipicamente determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto específico administrado e sua atividade relativa, de 29/06/2018, pág. 49/121

46/104 a idade, peso e resposta do paciente individual, a gravidade dos sintomas do paciente, e outros mais.

Doses adequadas para o tratamento de distúrbios de motilidade reduzida do trato GI ou de outros distúrbios mediados por receptores de 5-HT4 irão variar de cerca de 0,0007 a cerca de 20 mg/kg/dia de agente ativo, incluindo de cerca de 0, 0007 a cerca de 1 mg/kg/dia. Para um humano médio de 70 kg, isso equivalería a cerca de 0,05 a cerca de 70 mg por dia de agente ativo.

Em um aspecto da invenção, os compostos da invenção são usados para o tratamento de constipação crônica. Quando usados para o tratamento de constipação crônica, os compostos da invenção serão administrados tipicamente por via oral em uma dose única diariamente ou em várias doses por dia. Preferivelmente, a dose para o tratamento de constipação crônica irá variar de cerca de 0,05 a cerca de 70 mg por dia.

Em outro aspecto da invenção, os compostos da invenção são usados para o tratamento de síndrome do cólon irritável. Quando usados para o tratamento de síndrome do cólon irritável com constipação predominante, os compostos da invenção serão administrados tipicamente por via oral em uma dose única diariamente ou em várias doses por dia. Preferivelmente, a dose para o tratamento de síndrome do cólon irritável com constipação predominante irá variar de cerca de 0,05 a cerca de 70 mg por dia.

Em outro aspecto da invenção, os compostos da invenção são usados para o tratamento de gastroparesia diabética. Quando usados para o tratamento de gastroparesia diabética, os compostos da invenção serão administrados tipicamente de 29/06/2018, pág. 50/121

47/104 por via oral em uma dose única diariamente ou em várias doses por dia. Preferivelmente, a dose para o tratamento de gastroparesia diabética irá variar de cerca de 0,05 a cerca de 70 mg por dia.

Ainda em outro aspecto da invenção, os compostos da invenção são usados para o tratamento de dispepsia funcional. Quando usados para o tratamento de dispepsia funcional, os compostos da invenção serão administrados tipicamente por via oral em uma dose única diariamente ou em várias doses por dia. Preferivelmente, a dose para o tratamento de dispepsia funcional irá variar de cerca de 0,05 a cerca de 70 mg por dia.

A invenção também fornece um método de tratamento de um mamífero com uma doença ou condição associada à atividade do receptor de 5-HT4, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção ou de uma composição farmacêutica que compreende um composto da invenção.

Como descrito acima, os compostos da invenção são agonistas de receptor de 5-HT4. A invenção ainda fornece, portanto, um método de produzir uma ação agonista em um receptor de 5-HT4 em um mamífero, o método compreendendo a administração de um composto da invenção ao mamífero. Além disso, os compostos da invenção também são úteis como ferramentas de pesquisa para a investigação ou estudo de sistemas ou amostras biológicas que possuem receptores de 5-HT4, ou para a descoberta de novos agonistas de receptor de 5-HT4. Além disso, uma vez que os compostos da invenção exibem seletividade de ligação para receptores de 5-HT4 de 29/06/2018, pág. 51/121

48/104 comparada com ligação aos receptores de outros subtipos de5-HT, particularmente receptores 5-HT3, tais compostos são particularmente úteis para o estudo dos efeitos de agonismo seletivo de receptores de 5-HT4 em um sistema ou amostra biológica. Qualquer sistema ou amostra biológica adequado possuindo receptores de 5-HT4 pode ser empregado nestes estudos que podem ser realizados tanto in vitro quanto in vivo. Sistemas ou amostras biológicas representativas adequadas para estes estudos incluem, sem limitação, células, extratos celulares, membranas plasmáticas, amostras de tecido, mamíferos (tais como camundongos, ratos, porquinhos da Índia, coelhos, cães, porcos etc.) e outros mais.

Neste aspecto da invenção, um sistema ou amostra biológica compreendendo um receptor de 5-HT4 é colocado em contato com uma quantidade agonista de receptor de 5-HT4 de um composto da invenção. Os efeitos agonistas sobre o receptor de 5-HT4 são então determinados usando procedimentos e equipamento convencionais, tais como ensaios de ligação de radioligante e ensaios funcionais. Tais ensaios funcionais incluem alterações mediadas por ligante na monofosfato cíclico de adenosina intracelular (cAMP), alterações mediadas por ligante na atividade da enzima adenilil ciclase (que sintetiza cAMP), alterações mediadas por ligante na incorporação de análogos de trifosfato de guanosina (GTP), como [³⁵S]GTPyS (guanosina 5'-O-(y-tio)trifosfato) ou GTP-Eu, em membranas isoladas por meio da troca catalisada por receptor de análogos de GTP para análogos de GDP, alterações mediadas por ligante em íons de cálcio livres intracelulares (medidos, por de 29/06/2018, pág. 52/121

49/104 exemplo, com uma leitora de placa de imagem ligada à fluorescência ou FLIPR® de Molecular Devices, Inc) ., e a medida da ativação de proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK) . Um composto da invenção pode ter ação agonista ou aumentar a ativação de receptores de 5-HT4 em qualquer um dos ensaios funcionais listados acima, ou em ensaios de natureza similar. Uma quantidade agonista de receptor de 5HT4 de um composto da invenção irá variar tipicamente de cerca de 1 nanomolar a cerca de 500 nanomolares.

Adicionalmente, os compostos da invenção podem ser usados como ferramentas de pesquisa para a descoberta de novos agonistas de receptor de 5-HT4. Nessa modalidade, os dados funcionais ou de ligação ao receptor de 5-HT4 para um composto de teste ou um grupo de compostos de testes são comparados com os dados funcionais ou de ligação ao receptor de 5-HT4 para um composto da invenção para identificar compostos de testes que têm atividade de ligação ou funcional superior, caso exista. Este aspecto da invenção inclui, como modalidades separadas, tanto a geração de dados de comparação (usando os ensaios adequados), quanto a análise dos dados de teste para identificar compostos de testes de interesse.

Entre outras propriedades, verificou-se que os compostos da invenção são agonistas potentes do receptor de 5-HT4 e exibem seletividade substancial para o receptor de subtipo 5-HT4 em relação ao receptor de subtipo 5-HT3 em ensaios de ligação de radioligante. Além disso, os compostos da invenção demonstraram propriedades farmacocinéticas superiores em um modelo em rato. Esperase, portanto, que os compostos da invenção sejam altamente de 29/06/2018, pág. 53/121

50/104 biodisponíveis mediante administração oral. Além disso, constatou-se que esses compostos não exibem um nível inaceitável de inibição da corrente de íon potássio em um modelo de limite de voltagem in vitro usando células inteiras isoladas que expressam o canal de potássio cardíaco hERG. O ensaio de limite de voltagem é um método pré-clínico aceito de avaliação do potencial para que agentes farmacêuticos mudem o padrão de repolarização cardíaca, especificamente para produzir o chamado prolongamento de QT, que foi associado à arritmia cardíaca (Cavero a cols., Opinion on Pharmacotherapy, 2000, 1, 94773, Fermini a cols., Nature Reviews Drug Discovery, 2003,

2, 439-447). Conseqüentemente, espera-se que as composições farmacêuticas que compreendem compostos da invenção tenham perfil cardíaco aceitável.

As propriedades e a utilidade dos compostos da invenção podem ser demonstradas usando vários ensaios in vitro e in vivo bem conhecidos por aqueles com habilidade na técnica. Ensaios representativos são descritos com mais detalhes nos exemplos seguintes.

EXEMPLOS

Os exemplos sintéticos e biológicos seguintes são oferecidos para ilustrar essa invenção, e não devem ser interpretados de forma alguma como limitantes do escopo dessa invenção. Nos exemplos abaixo, as seguintes abreviações têm os seguintes significados, a menos que indicado de outra forma. Aa abreviações não definidas abaixo têm seus significados geralmente aceitos.

Boc = terc-butoxicarbonil (Boc)2O = dicarbonato de di-terc-butila

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51/104

DCM	=	diclorometano
DMF	=	N, N-dime tilfo rmami da
DMSO	=	sulfóxido de dimetila
EtOAc	=	acetato de etila
mCPBA	=	ácido m-clorobenzóico
MeCN	=	acetonitrila
MTBE	=	terc-butil metil éter
PyBop	=	hexafluorfosfato de

benzotriazol1-iloxitripirrolidino-fosfônio

Rf = fator de retenção

RT = temperatura ambiente

TFA = ácido trifluoracético

THF = tetrahidrofurano

Reagentes (incluindo aminas secundárias) e solventes foram adquiridos de fornecedores comerciais (Aldrich, Fluka, Sigma etc.), e usados sem purificação adicional. As reações foram executadas sob atmosfera de nitrogênio, a menos que observado de forma diferente. O progresso das misturas de reação foi monitorado por cromatografia de camada delgada (TLC), cromatografia líquida analítica de alto rendimento (HPLC anal.) e espectrometria de massa, cujos detalhes são fornecidos abaixo e separadamente em exemplos de reações específicos. As misturas de reação foram desenvolvidas como descrito especificamente em cada reação; comumente, elas eram purificadas por extração e outros métodos de purificação, tais como cristalização dependente de temperatura e solvente e precipitação. Além disso, as misturas de reação foram purificadas rotineiramente por HPLC preparatória: um protocolo geral é descrito abaixo. A caracterização dos produtos de reação de 29/06/2018, pág. 55/121

52/104 era realizada rotineiramente por espectrometria de massa e ¹H-NMR. Para medida da NMR, as amostras eram dissolvidas em solvente deuterado (CD3OD, CDCl3 ou DMSO-dó) , e os espectros de ¹H-NMR foram adquiridos com um instrumento Varian Gemini 2000 (300 MHz) sob condições padronizadas de observação. A identificação espectrométrica de massa de compostos foi realizada por um método de ionização por pulverização eletrônica (ESMS) com um instrumento Applied Biosistemas (Foster City, CA) modelo API 150 EX ou um instrumento Agilent (Palo Alto, CA) modelo 1100 LC/MSD. O conteúdo de água é determinado por titulação de Karl Fischer usando um colorímetro Brinkmann (Westbury, NY) Metrohm Karl Fischer

Modelo 813.

Exemplo 1: Síntese de {(1S,3R,5R)-8[2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico

a. Preparação de 8-benzil-8-azabiciclo[3.2.l]octan-3ona

Ácido clorídrico concentrado (30 ml) foi adicionado a uma solução heterogênea de 2,5-dimetoxi tetrahidrofurano (82,2 g, 0, 622 mol) em água (170 ml) durante agitação. Em um frasco separado resfriado até 0°C (banho de gelo), ácido clorídrico concentrado (92 ml) foi adicionado lentamente a uma solução de benzil amina (100 g, 0,933 mol) em água (350 ml) . A solução de 2,5-dimetoxitetrahidrofurano foi agitada por aproximadamente 20 minutos, diluída com água (250 ml), e então a solução de benzil amina foi adicionada, seguida pela adição de uma solução de ácido 1,3acetonadicarboxílico (100 g, 0,684 mol) em água (400 ml) e de 29/06/2018, pág. 56/121

53/104 então pela adição de fosfato de sódio hidrogênio (44 g, 0,31 mol) em água (200 ml). O pH foi ajustado de pH 1 a pH ~4.5 usando NaOH 40%. A solução nublada e amarela pálida resultante foi agitada de um dia para o outro. A solução foi então acidificada até pH 3 do pH 7,5 usando ácido clorídrico 50%, aquecida até 85°C e agitada por 2 horas. A solução foi resfriada até a temperatura ambiente, alcalinizada até pH 12 usando NaOH 40%, e extraída com DCM (3 x 500 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (MgSO4), filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o intermediário do título bruto como um óleo marrom viscoso (52 g).

A uma solução do intermediário bruto em metanol (1.000 ml) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butila (74,6 g, 0,342 mol) a 0°C. Permitiu-se que a solução aquecesse até a temperatura ambiente e fosse agitada de um dia para o outro. O metanol foi removido sob pressão reduzida e o óleo resultante foi dissolvido em diclorometano (1.000 ml). O intermediário foi extraído em 1 M H3PO4 (1.000 ml) e lavado com diclorometano (3 x 250 ml). A camada aquosa foi alcalinizada até o pH 12 usando NaOH aquoso, e extraída com diclorometano (3 x 500 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4), filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o intermediário do título como um óleo marrom claro viscoso. ¹H-NMR (CDCl3) δ (ppm) 7,5-7,2 (m, 5H, C6H5), 3,7 (s, 2H, CH2Ph), 3,45 (s amplo, 2H, CHNBn), 2,7-2,6 (dd, 2H, CH2CO), 2,2-2,1 (dd, 2H, CH2CO),

2,1-2,0 (m, 2H, CH2CH2), 1,6 (m, 2H, CH2CH2). (m/z): [M+H] calculado para C14H17NO 216,14; encontrado, 216,0.

b. Preparação de terc-butil éster de ácido 3-oxo-8de 29/06/2018, pág. 57/121

54/104 azabiciclo[3.2.1]octana-8-carboxílico

A uma solução de 8-benzil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3ona (75 g, 0,348 mol) em EtOAc (300 ml) foi adicionada uma solução de dicarbonato de di-terc-butila (83,6 g, 0,383 mol, 1,1 eq.) em EtOAc (300 ml) . A solução resultante foi lavada (100 ml de EtOAc) e adicionada a um frasco de hidrogenização de Parr de 1 litro contendo 23 g de hidróxido de paládio (20%p Pd, base seca, em carbono, ~50% úmido com água; por exemplo catalisador de Peariman) sob um jato de nitrogênio. O vaso de reação foi desgazeificado (vácuo e N2 alternantes cinco vezes) e pressurizado até 413,68 kPa de gás H2. A solução da reação foi agitada por dois dias e recarregada com H2, como necessário, para manter a pressão de H2 em 413,68 kPa, até o término da reação, monitorado por cromatografia de camada delgada de sílica. A solução negra foi então filtrada através de um absorvente de Celite® e concentrada sob pressão reduzida para gerar o intermediário do título quantitativamente como um óleo viscoso, amarelo a laranja. Ele foi usado na etapa seguinte, sem tratamento adicional. H NMR (CDCl3) δ (ppm) 4,5 (amplo, 2H, CH-NBoc), 2,7 (amplo, 2H, CH2CO), 2,4-2,3 (dd, 2H, CH2CH2), 2,1 (amplo m, 2H, CH2CO), 1,7-1,6 (dd, 2H, CH2CH2), 1,5 (s, 9H, (CH3)3COCON).

c. Preparação de terc-butil éster de ácido (1S,3R,5R)3-amino-8-azabiciclo[3.2.1]octana-8-carboxílico

A uma solução do produto da etapa anterior (75,4 g, 0,335 mol) em metanol (1 l) foram adicionados formato de amônio (422,5 g, 6,7 mol), água (115 ml) e 65 g de paládio em carbono ativado (10% na base seca, ~50% úmido com água; do tipo Degussa E101NE/W) sob um jato de N2 durante de 29/06/2018, pág. 58/121

55/104 agitação por meio de um agitador mecânico. Após 24 e 48 horas, porções adicionais de formato de amônio (132 g, 2,1 mol) foram adicionadas a cada vez. Após o término da progressão da reação, como monitorada por HPLC anal.,

Celite® (>500g) foi adicionado e a suspensão espessa resultante foi filtrada e então o sólido coletado foi enxaguado com metanol (~500 ml) . Os filtrados foram combinados e concentrados sob pressão reduzida até que todo o metanol fosse removido. A solução nebulosa, bifásica, resultante foi então diluída com 1 M ácido fosfórico até um volume final de ~1.5 a 2,0 l em pH 2 e lavada com diclorometano (3 x 700 ml) . A camada aquosa foi alcalinizada até pH 12 usando NaOH aq. 40%, e extraída com diclorometano (3 x 700 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas por evaporação rotatória, depois em alto vácuo, deixando 52 g (70%) do intermediário do título, comumente NBoc-endo-3aminotropano, como um sólido branco a amarelo pálido. A proporção de isômero de amina endo para exo do produto foi > 99:1, com base na análise ²H-NMR (>96% de pureza por HPLC analítica) . H NMR (CDCl3) δ (ppm) 4,2-4,0 (amplo d, 2H,

CHNBoc), 3,25 (t, 1H, CHNH2), 2,1-2,05 (m, 4H), 1,9 (m,

2H), 1,4 (s, 9H, (CH3)3OCON), 1,2-1,1 (amplo, 2H). (m/z):

[M+H]+ calculado para C12H22N2O2) 227,18; encontrado, 227,2.

HPLC analítica (método isocrático; 2:98 (A:B) a 90:10 (A:B) ao longo de 5 minutos): tempo de retenção = 3,68 minutos.

d._Preparação de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico

Primeiro, acetona (228,2 ml, 3.11 mol) foi adicionada a uma suspensão agitada de 2-aminofenilmetanol (255,2 g,

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2,07 mol) e acético ácido (3,56 ml, 62 mmol) em água (2 l) em temperatura ambiente. Após 4 horas, a suspensão foi resfriada até 0°C e agitada por um adicional de 2,5 horas e então filtrada. O sólido foi coletado e lavado com água e o sólido úmido resfriado e seco por liofilização para gerar 2,2,-dimetil-1,4-dihidro-2H-benzo[1,3]oxazina (332,2 g,

98%) como um sólido esbranquiçado. ¹H NMR (CDCl3; 300 MHz) :

1,48	(s,	6H, C(CH3)2),	4,	00	(bs,	1H,	NH) , 4,86 (s, 2H,
CH2),	6,66	(d, 1H, ArH)	,	6,81	(t,	1H,	ArH) , 6, 96 (d, 1H,
10 ArH),	7, 10	(t, 1H, ArH).
	Uma	solução	de		2,2	,-dimetil-1,4-dihidro-2H-
benzo[1,3]oxazina (125	g,	0,	77	mol)	em THF (1 l) foi
filtrada	através de um	funil	de	cintilação e então
adicionada	em gotejamento	por	meio de	um funil adicional,

ao longo de um período de 2,5 horas, a uma solução agitada de 1.0 M LiAlH4 em THF (800 ml) a 0°C. A reação foi extinta por adição lenta em porções de Na2SO4*10H2O (110 g), ao longo de um período de 1,5 hora, a 0°C. A mistura de reação foi agitada de um dia para o outro, filtrada e os sais sólidos foram lavados cuidadosamente com THF. O CH3 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para gerar 2isopropilaminofenilmetanol (120 g, 95%) como um óleo amarelo. ¹H NMR (CDCl3; 300 MHz): 1,24 (d, 6H, CH(CH3)2),

	3,15	(bs, 1H,	OH), 3,61 (sept,	1H,	CH(CH3)2),	4,57 (s,	2H,
25	CH2),	6,59 (t,	, 1H, ArH),	6,65	(d,	1H, ArH),	6,99 (d,	1H,
	ArH),	7,15 (t,	1H, ArH).
		Dióxido	de manganês	(85%	182,6 g, 1.	79 mol)	foi
	adicionado	a uma	solução	agitada	de	2-
	isopropilaminofenilmetanol	(118	g,	0,71 mol)	em tolueno
30	(800	ml), e a	mistura de reação	foi	aquecida até 117°C	por

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57/104 horas. Permitiu-se que a mistura de reação resfriasse até a temperatura ambiente de um dia para o outro e, então foi filtrada através de um absorvente de Celite que era eluído com tolueno. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para gerar 2-isopropilaminobenzaldeído (105 g,

90%)	como	um óleo	laranja. H	NMR	(CDCl3;	300 MHz): 1,28
(d,	6H, CH(CH3)2),	3,76 (sept,	1H,	CH(CH3)2)	, 6,65 (t, 1H,
ArH)	, 6,69	(d, 1H,	ArH), 7,37	(d,	1H, ArH)	, 7,44 (t, 1H,
ArH)	, 9,79	(s, 1H,	CHO).

2,2-Dimetil-[1,3]dioxana-4,6-diona, comumente ácido de

Meldrum, (166,9 g, 1,16 mol) foi adicionada a uma solução agitada de 2-isopropilaminobenzaldeído (105 g, 0,64 mol), acético ácido (73,6 ml, 1,29 mol) e etilenodiamina (43,0 ml, 0,64 mol) em metanol (1 l) a 0°C. A mistura de reação foi agitada por 1 hora a 0°C, e então em temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão resultante foi filtrada e o sólido lavado com metanol e coletado para gerar o intermediário do título, ácido 1-isopropil-2-oxo1,2- dihidroquinolina-3-carboxílico (146 g, 98%) como um sólido esbranquiçado. H NMR (CDCl3; 300 MHz): 1,72 (d, 6H,

CH(CH3)2), 5,50 (bs, 1H, CH(CH3)2), 7,44 (t, 1H, ArH), 7,757,77 (m, 2H, ArH), 7,82 (d, 1H, ArH), 8,89 (s, 1H, CH).

e. Preparação de terc-butil éster de ácido (1S,3R,5R)3-[ (1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-325 carbonil)amino] -8-azabiciclo[3.2.1]octana-8-carboxílico

Cloreto de tionila (36,6 ml, 0,52 mol) foi adicionado a uma suspensão agitada de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico (80 g, 0,35 mol) em tolueno (600 ml) a 85°C, e a mistura de reação foi então aquecida até 95°C por 2 horas. A mistura de reação foi resfriada até

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58/104 temperatura ambiente e então adicionada ao longo de 25 minutos a uma solução bifásica agitada vigorosamente de terc-butil éster de ácido (1S,3R,5R)-3-amino-8azabiciclo[3.2.1]octana-8-carboxílico (78,2 g, 0,35 mol) e hidróxido de sódio (69,2 g, 1,73 mol) em tolueno/água (1:1) (1 l) a °C. Após 1 hora, permitiu-se que as camadas se separassem e a fase orgânica concentrada sob pressão reduzida. A fase aquosa foi lavada com EtOAc (1 l) e depois (500 ml), e os extratos orgânicos combinados usados para dissolver o resíduo orgânico concentrado. Esta solução foi lavada com 1 M H3PO4 (500 ml), NaHCO3 aq. sat. (500 ml) e salmoura (500 ml), seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida, para gerar o intermediário do título (127,9 g, aproximadamente 84%) como um sólido amarelo. H

NMR (CDCl3): 1,47 (s, 9H), 1,67 (d, 6H), 1,78-1, 84 (m, 2H), 2,04-2,18 (m, 6H), 4,20-4,39 (m, 3H), 5,65 (bs, 1H), 7,26 (dd, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,75 (dd, 1H), 8,83 (s, 1H), 10,63 (d, 1H).

f. Preparação de {(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-32 0 il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carboxílico

TFA (300 ml) foi adicionado a uma solução agitada do produto da etapa anterior (127,9 g) em CH2Cl2 (600 ml) a

0°C. A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada por 1 hora, e então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo oleoso marrom foi então derramado em uma solução agitada vigorosamente de éter (3 l) e um precipitado sólido se formou imediatamente. A suspensão foi agitada de um dia para o outro e então o sólido coletado por filtração e lavado com éter para gerar

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59/104 o intermediário do título como seu sal de ácido trifluoracético (131,7 g; 86% ao longo de duas etapas) como um sólido amarelo claro. ¹H NMR (CDCl3): 1,68 (d, 6H), 2,10

(d,	2H)	,	2,33	-2,39	(m,	4H),	2,44-2,61	(m,	2H),	4,08	(bs,
5 2H) ,	4,	41	(m,	1H) ,	5,57	(bs	, 1H), 7,31	(m,	1H),	7,66	(m,
2H),	7,	77	(d,	1H),	8,83	(s,	1H), 9,38	(bd,	2H),	10,78	(d,

1H) .

g. Preparação de 3-hidroxi-3'-{[(1-isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolin-3-il)carbonil]amino}espiro[azetidina10 1,8'-(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2,1]octana_(Intermediário (V) com R1 = H, R2 = isopropil)

2-Bromometiloxirana (10,72 ml, 129,5 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de {(1S,3R,5R)-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo15 1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico e sal de ácido trifluoracético (14,65 g, 43,2 mmol) em etanol (150 ml) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada por 36 horas, quando então se formou um precipitado sólido. O sólido foi coletado por filtração e lavado com etanol (70 ml) para gerar o intermediário do título como o sal de brometo (8,4 g) . (m/z) : [M] + calculado para C23H30N3O3 396,23; encontrado, 396.5. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 4,13 min.

h. _Preparação_de_{ (1S, 3R, 5R) -8- [2-hidroxi-325 metilaminopropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida_de ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3carboxílico

Brometo de 3-Hidroxi-3'-{[(1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolin-3-il)carbonil]amino}espiro[azetidina-1,8'30 (1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]octana (678 mg, 1,4 mmol) foi

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60/104 dissolvido em etanol (10 ml), e então foi adicionada metilamina (solução 41% em água) (510 ql, 8,0 mmol) . A mistura foi aquecida a 80°C por 16 horas, e então concentrada sob pressão reduzida para gerar o intermediário do título como um óleo bruto, que foi usado diretamente na etapa seguinte.

i ._Síntese_de_{ (1S, 3R, 5R) -8- [2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il} amida_de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico

O produto da etapa anterior foi dissolvido em diclorometano (10 ml), e então foi adicionado 1,8diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (763 ql, 5,1 mmol), e a mistura foi agitada sob nitrogênio e resfriada até 0°C. Cloreto de metanossulfonila (132 ql, 1,7 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos. A reação foi extinta pela adição de água e concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (10 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas gerando o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (340 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C25H36N4O5S, 505, 25; encontrado, 505,4. Tempo de retenção (HPLC anal.: 2-50% MeCN/H2O ao longo de 5 minutos) = 4,17.

Exemplo 2: Síntese de {(1S,3R,5R)-8[2-metoxi-3(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico

a. Preparação de 3-metoxi-3'-{[(1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolin-3-il)carbonil]amino}espiro[azetidina-1, 8 ' de 29/06/2018, pág. 64/121

61/104 (1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]octana (Intermediário (V' ) com Ri = H, R2 = isopropil, R3 = metil)

Terc-butóxido de potássio (1,63 g, 14,5 mmol) foi adicionado a uma suspensão agitada de brometo de 3-hidroxi5 3'-{[ (1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolin-3-il)carbonil] amino}espiro[azetidina-1,8'-(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1] octana (3,45 g, 7,25 mmol) em diclorometano (100 ml) em temperatura ambiente. Após 2 minutos, iodeto de metila (0,477 ml, 7,61 mmol) foi adicionado à mistura de reação.

Após 30 minutos, foi adicionada água (2 ml) para extinguir a reação e a mistura de reação concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em um volume mínimo de ácido acético/água (1:1) e purificado por HPLC preparatória para gerar o intermediário do título como um sal de ácido trifluoracético (2,1 g) . (m/z) : [M]+ calculado para

C24H32N3O3, 410,24; encontrado: 410,5. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 4,36 minutos.

b ._Preparação_de_(1S, 3R, 5R) -8 [2-metoxi-32 0 metilaminopropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida_de ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3carboxílico

Sal de ácido 3-Metoxi-3'-{[(1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolin-3-il)carbonil]amino}espiro[azetidina-1,8'25 (1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]octana trifluoracético (410 mg, 0.84 mmol) foi dissolvido em etanol (10 ml), e então foi adicionada metilamina (solução 41% em água, 320 pl, 5 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C por 16 horas, e então concentrada sob pressão reduzida para gerar o produto como um óleo bruto que foi usado diretamente na etapa seguinte.

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62/104 c ._Síntese_de_{ (1S, 3R, 5R) -8- [2-:metoxi-3(metanossulfonil-mmetil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2,1] oct-3-il} amida_de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico 5 O produto da etapa anterior (53,6 mg, 0,12 mmol) foi dissolvido em diclorometano (1,0 ml), e então foi adicionado 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (89,7 pL, 0,6 mmol), e a mistura foi agitada sob nitrogênio e resfriada até 0°C. Foi adicionado cloreto de metanossulfonila (18,6 pl, 0,24 mmol) e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos. A mistura foi extinta pela adição de água e concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (45,8 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C26H38N4O5S, 519,27; encontrado: 519,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,72 minutos.

Exemplo 3: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[3(metanossulfonil-piridin-3-ilmetil-amino)-2-metoxipropil]8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico

a. Preparação de {(1S,3R,5R)-8-{2-metoxi-3-[(piridin25 3-ilmetil)amino]propil}-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carboxílico

3-Metoxi-3'-[1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolin-3il)carbonil]amino}espiro[azetidina-1, 8'-(1S, 3R, 5R) - 830 azabiciclo[3.2.1]octana (410 mg, 0,84 mmol) foi dissolvido

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 66/121

63/104

em etanol (10	ml),	e	então	foi	adicionada	3-
aminometilpiridina (153	μ^	1,5	mmol).	A mistura	foi
aquecida a 60°C	por 16	horas, e	então	concentrada	sob
pressão reduzida	para gerar o	intermediário do título	como

um óleo bruto que foi usado diretamente na etapa seguinte.

b. Síntese de [3-(metanossulfonil-piridin-3-ilmetilamino)-2-metoxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida

O produto	da etapa anterior (102	,6 mg,	0,2 mmol)	foi
dissolvido em	diclorometano (1,0	ml)	e então	1,8-
diazabiciclo[5.	4.0]undec-7-eno (119,6	μ^	0,8 mmol)	foi

adicionado, e a mistura foi agitada sob nitrogênio e resfriada até 0°C. Foi acrescentado cloreto de metanossulfonila (30,1 0,4 mmol), e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos. A reação foi extinta pela adição de água, e a mistura foi concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia

HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (63,5 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C31H41N5O5S, 596, 29;

encontrado: 596,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 540%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,35 minutos.

Exemplo 4: Síntese de {(1S,3R,5R)-8[(2-hidroxi-3metanossulfonilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona3-carboxílico

a. Preparação de {(1S,3R,5R)- 8-[3-(1,3-dioxo-1,3dihidroisoindol-2-il)-2-hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il} amida_de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico de 29/06/2018, pág. 67/121

64/104 {(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (3,39 g, 10 mmol) foi dissolvida em etanol (40 ml), e então 2oxiranilmetilisoindol-1,3-diona, comumente, epoxipropilftalimida, (3,05 g, 15 mmol) foi adicionada. A mistura foi aquecida a 80°C por 36 horas, resfriada, e então concentrada sob pressão reduzida. O óleo resultante foi submetido à cromatografia instantânea (SiO2, eluindo com uma solução 9:1 de diclorometano/metanol) para gerar o intermediário do título (4,95 g) como um sólido branco que foi usado diretamente na etapa seguinte.

b ._Preparação_de_{ (1S, 3R, 5R) -8- [2-hidroxi-3aminopropil] -8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico

O produto da etapa anterior (4,95 g, 9,13 mmol) foi dissolvido em etanol (40 ml), e então hidrazina (860 gl, 27,4 mmol) foi adicionada. A mistura foi refluída por 16 horas, e então resfriada até a temperatura ambiente. A mistura foi filtrada, e o filtrado concentrado para gerar o intermediário do título como um óleo bruto, que foi usado diretamente sem purificação adicional.

c ._Síntese_de_{ (1S, 3R, 5R) -8- [2-hidroxi-3metanossulfonilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il} amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3carboxílico

O produto da etapa anterior (82 mg, 0,2 mmol) foi dissolvido em diclorometano diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno adicionado, e a mistura foi resfriada até -78°C. Cloreto de (1,0 ml), então 1,8(60 gl, 0,4 mmol) foi agitada sob nitrogênio e metanossulfonila (15,5 gl, de 29/06/2018, pág. 68/121

65/104

0,2 mmol)	foi	adicionado, e	a	mistura	foi	agitada	e
permitiu-se	que	aquecesse até	a	temperatura ambiente	ao
longo de 30	minutos. A reação	foi	extinta	pela	adição	de

água, e a mistura foi concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (70,7 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C24H34N4O5S, 491,23; encontrado: 491,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 540%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,43 minutos.

Exemplo 5: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[3(metanossulfonil-piridin-3-ilmetil-amino)-2-hidroxipropil]8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico

a. Preparação de {(1S,3R,5R)-8-{2-hidroxi-3-[(piridin3-ilmetil)amino]propil}-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carboxílico

Brometo de 3-Hidroxi-3'-{[(1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolin-3-il)carbonil]amino}espiro[azetidina-1, 8'(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]octana (505 mg, 1,27 mmol) foi dissolvido em etanol (10 ml), e então 3-(aminometil)piridina (193 pL, 1,9 mmol) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 80°C por 16 horas, e então concentrada sob pressão reduzida para gerar o intermediário do título como um óleo bruto que foi usado diretamente na etapa seguinte.

b. Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[3-(metanossulfonilpiridin-3-ilmetil-amino)-2-hidroxipropil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2de 29/06/2018, pág. 69/121

66/104 dihidroquinolina-3-carboxílico

O produto	da etapa anterior (42,	5 mg,	0,08 mmol)	foi
dissolvido	em diclorometano	(1,0	ml),	1,8-
diazabiciclo[5	.4.0]undec-7-eno (74,8	μ^	0,5 mmol)	foi

adicionado, e a mistura foi agitada sob nitrogênio e

0°C. Foi metanossulfonila (6,1 0,08 mmol), e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos. A reação foi extinta pela adição de água e concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (22,8 mg).

[M+H]+ calculado para C30H39N5O5S, 582,28; encontrado: Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,78 minutos.

Exemplo 6: Síntese de {(1S,3R,5R)-8[(R)-2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinoli na-3-carboxílico a ._Preparação_de_(S) -1- (benzil-metil-amino) -3resfriada (m/z)

582,2 até adicionado cloreto de cloropropan-2-ol

N-Benzilmetilamina (13,95 ml, 108,1 mmol) e (S)-2clorometiloxirana, comumente (S)-epiclorohidrina (8,48 ml,

108,1 mmol) foram dissolvidas em hexano (40 ml), e agitadas por 16 horas. A solução foi então submetida à cromatografia instantânea (S1O2, eluindo com metanol 10%/diclorometano 90%) . Frações contendo produto foram concentradas para gerar o intermediário do título como um óleo (19,7 g) . ^-H30 NMR (DMSO de, 299, 96 MHz): δ (ppm) 2,01 (s, 3H), 2,2-2,4

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 70/121

67/104 (m, 2H), 3,21-3,5 (m, 3H), 3,53-3,6 (m, 1H), 3,65-3,75 (m,

1H), 4,95 (d, 1H), 7,0-7,25 (m, 5H). (m/z): [M+H] + calculado para CuH16ClNO, 214,10; encontrado: 214,1.

b. Preparação de terc-butil éster de ácido ((S)-35 cloro-2-hidroxipropil)metilcarbâmico (S)-1-(benzil-metil-amino)-3-cloropropan-2-ol (8,4 g, 39,3 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (75 ml), e então foram acrescentados dicarbonato de di-terc-butila (9,3 g, 43,23 mmol) e hidróxido de paládio (2,5 g) . A mistura foi agitada por 12 horas sob hidrogênio (60 atmosferas). A mistura foi filtrada através de um leito de Celite® e concentrada até seca sob pressão reduzida. O óleo resultante foi filtrado através de sílica, eluindo com hexano, seguido por diclorometano, seguido por éter dietílico. A camada de éter foi concentrada para gerar o intermediário do título como um óleo (7,1 g) . ³H-NMR (DMSO de, 299, 96 MHz): 8 (ppm) 1,35-1,46 (s, 9H), 2,81-2,85 (s,

3H), 2,95-3,1 (m, 1H), 3,3-3,6 (m, 3H), 3,67-3,85 (m, 1H), 5,25-5,4 (m, 1H) . (m/z) : [M+H-Boc]+ calculado para

C9H18ClNO3, 123,10; encontrado: 123,1.

c. Preparação de terc-butil éster de ácido ((R)-2hidroxi-3-{3-[(1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carbonil)amino]-(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-8il}propil)metilcarbâmico

Terc-butil éster de ácido ((S)-3-cloro-2hidroxipropil)metilcarbâmico (335 mg, 1,5 mmol) e {(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (339 mg, 1,0 mmol), foram dissolvidos em metanol (5 ml) e então N,N30 diisopropiletilamina (523 3.0 mmol) foi adicionada. A

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 71/121

68/104 mistura foi aquecida a 80°C por 16 horas, e então concentrada sob pressão reduzida. O óleo resultante foi submetido à cromatografia instantânea (S1O2, eluindo com metanol 10%/diclorometano 90%) . Frações contendo produto foram concentradas para gerar o intermediário do título como um sólido branco (0,5 g). (m/z): [M+H]+ calculado para

C29H42N4O5, 527,33; encontrado: 527, 6. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 4,75 minutos.

d._Preparação_de_{(1S, 3R, 5R) -(S)-2-hidroxi-3metilaminopropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida_de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico Terc-butil éster de ácido ((R)-2-hidroxi-3-{3-[(1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carbonil)amino]15 (1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-8-il}propil) metilcarbâmico (575 mg, 1,09 mmol) foi dissolvido em diclorometano (5 ml) e então foi adicionado ácido trifluoracético (5 ml) lentamente. A mistura foi agitada por 30 minutos, e então concentrada sob pressão reduzida. O óleo resultante foi triturado com éter dietílico, e então filtrado. O precipitado foi seco sob vácuo para gerar o intermediário do título como o sal de ácido trifluoracético

(0,68 g).	(m/z):	[M+H] +	calculado para C24H34N4O3,	427,27;
encontrado	: 427,2.	Tempo	de retenção (HPLC anal.:	MeCN 2-
25 50%/H2O ao	longo de	5 minutos) = 3,40 minutos.
e.	Síntese	de	{(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-

(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il} amida_de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico {(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3-metilaminopropil]-8Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 72/121

69/104 azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (1,03 g, 1,57 mmol) foi dissolvida em diclorometano (6,0 ml), 1,8diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (747 ql, 5,0 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada sob nitrogênio e resfriada até 0°C. Foi acrescentado cloreto de metanossulfonila (124,4 ql, 1,6 mmol), e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos. A reação foi extinta pela adição de água, e a mistura foi concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (5 ml) e purificado por cromatografia

HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (0,38 g).

(m/z): [M+H]+ calculado para C25H36N4O5S, 505, 25; encontrado: 505,4. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 250%/H2O ao longo de 5 minutos) = 4,17 minutos. Base livre: ¹H-NMR (DMSO de, 299, 96 MHz): δ (ppm) 1,40-1, 68 (d, 6H),

1,81-2,02 (br	s, 4H), 2,02-2,18 (br	m, 2H),	2,22-2,36	(d,
2H), 2,78-2,90	(2 s, 6H), 2,91-3,04	(m, 1H),	3,10-3,30	(m,
4H), 3,61-3,78	(br s, 1H), 4,02-4,17	(m, 1H),	4,71-4,79	(br
s, 1H), 5,2-5,	8 (br s, 1H), 7,3-7,4	(t, 1H),	7,67-7,78	(t,
1H), 7-82-7,94	(d, 1H), 7,98-8,02	d, 1H),	8,80 (s,	1H),

10,37-10,40 (d, NH).

Exemplo 7: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinoli na-3-carboxílico

Seguindo o procedimento do Exemplo 6, com a substituição de (S)-2-clorometiloxirana por (R)-2Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 73/121

70/104 clorometiloxirana na etapa a, os seguintes intermediários e o composto do título foram preparados.

(R) -1-(benzil-metil-amino)-3-cloropropan-2-ol: ¹H-NMR (DMSO de, 299, 96 MHz): δ (ppm) 2,01 (s, 3H), 2,2-2,4 (m,

2H), 3,21-3,5 (m, 3H), 3,53-3,6 (m, 1H), 3,65-3,75 (m, 1H),

4,95 (d, 1H), 7,0-7,25 (m, 5H), (m/z): [M+H]+ calculado para CuH16ClNO, 214,10; encontrado: 214,1.

Terc-butil éster de ácido ( (R) -3-cloro-2hidroxipropil)metilcarbâmico: ²H-NMR (DMSO d6, 299,96 MHz):

8 (ppm) 1,35-1,46 (s, 9H), 2,81-2,85 (s, 3H), 2,95-3,1 (m,

1H), 3,3-3,6 (m, 3H), 3, 67-3, 85 (m, 1H), 5,25-5,4 (m, 1H), (m/z): [M+H-Boc]+ calculado para C9H18ClNO3, 123,10;

encontrado: 123,1.

Terc-butil éster de ácido ((S)-2-hidroxi-3-{3-[(115 isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carbonil)amino](1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-8-il}propil) metilcarbâmico: (m/z): [M+H]+ calculado para C29H42N4O5,

527,33; encontrado: 527,6. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 4,75 minutos.

{(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3..2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico: (m/z): [M+H]+ calculado para C24H34N4O3, 427,27; encontrado: 427,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 3,40 minutos.

{(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico: (m/z): [M+H]+ calculado para C25H36N4O5S, 505, 25; encontrado: 505, 4.

Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 74/121

71/104 minutos) = 4,17 minutos.

Exemplo 8: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3[metil-(piridina-4-carbonil)amino]propil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico (71 mg, 0,17 mmol) foi dissolvida em DMF (0,5 ml), e então foi acrescentada N,Ndiisopropiletilamina (88,9 ql, 0,51 mmol). A seguir, foi adicionada uma solução de ácido isonicotínico (41,8 mg, 0,34 mmol) e PyBOP (177 mg, 0,34 mmol) em DMF. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (30,8 mg). (m/z): [M+H]+ calculado para C30H37N5O4, 532,29; encontrado:

532,7. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,11 minutos.

Exemplo 9: Síntese de {(1S,3R,5R)-8[2-hidroxi-3[(piridina-4-carbonil)amino]propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico {(1S,3R,5R)-8-{2-hidroxi-3-aminopropil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico (82,4 mg, 0,2 mmol) foi dissolvida em DMF (0,5 ml), e então foi adicionada N,Ndiisopropiletilamina (69,7 ql, 0,4 mmol). A seguir, foi

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 75/121

72/104 acrescentada uma solução de ácido isonicotínico (49,2 mg, 0,4 mmol) e PyBOP (208,2 mg, 0,4 mmol) em DMF. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (82,1 mg). (m/z): [M+H]+ calculado para C29H35N5O4, 518,28; encontrado:

518,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,20 minutos.

Exemplo 10: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[3-(acetil-metilamino)-2-metoxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico { (1S, 3R, 5R)-8-[2-metoxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico (53,6 mg, 0,12 mmol) foi dissolvida em DMF (1,0 ml), e então foi acrescentada N,N-diisopropiletilamina (104 0,6 mmol) . A mistura foi agitada sob nitrogênio e resfriada até 0°C. Cloreto de acetila (17,1 0,24 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia

HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (40,4 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C27H38N4O4, 483,30; encontrado: 483,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 540%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,54 minutos.

Exemplo 11. Síntese de {(1S,3R,5R)-8[2-metoxi-3Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 76/121

73/104 [metil-(piridina-4-carbonil)amino]propil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico { (1S, 3R,5R)-8-[2-metoxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo1.2- dihidroquinolinona-3-carboxílico (53,6 mg, 0,12 mmol) foi dissolvida em DMF (1,0 ml), e então foi adicionada N,Ndiisopropiletilamina (104,5 pl, 0,6 mmol) . A mistura foi agitada sob nitrogênio e resfriada até 0°C. Foi adicionado cloreto de isonicotinila (42,7 mg, 0,24 mmol), e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia

HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (54,4 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C31H39N5O4, 546, 31; encontrado: 546,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 540%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,29 minutos.

Exemplo 12. Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[3-(acetilpiridin-3-ilmetil-amino)-2-metoxipropil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidro-quinolina-3-carboxílico (8-{2-metoxi-3-[(piridin-3-ilmetil)amino]propil}-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il)amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo1.2- dihidroquinolina-3-carboxílico (102,6 mg, 0.2 mmol) foi dissolvida em DMF (1,0 ml), e então foi adicionada N,Ndiisopropiletilamina (139,4 pl, 0,8 mmol). A mistura foi agitada sob nitrogênio e resfriada até 0°C. Foi acrescentado cloreto de acetila (28,5 pl, 0,4 mmol), e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos, e então

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 77/121

74/104 concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (33,2 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C32H41N5O4, 560,33; encontrado: 560,4. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,27 minutos.

Exemplo 13. Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[3-acetilamino-210 hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido

1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico {(1S,3R,5R)-8[2-hidroxi-3-aminopropil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico (82,4 mg, 0,2 mmol) foi dissolvida em DMF (0,5 ml), e então foi adicionada N,Ndiisopropiletilamina (69,7 4, 0,4 mmol). A seguir, foi adicionada uma solução de acético ácido (22,7 pl, 0,4 mmol) e PyBOP (208,2 mg, 0,4 mmol) em DMF. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o composto do título como o sal de ácido trifluoracético (79,2 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C25H34N4O4, 455, 27; encontrado: 455, 2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,33 minutos.

Exemplo 14. Síntese de {(1S,3R,5R)-8[3-(acetil-metilamino)-2-hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 78/121

75/104

A mistura foi até 0°C. Foi carboxílico {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico (43 mg, 0,1 mmol) foi dissolvida em DMF (1,0 ml), e então foi adicionada N,Ndiisopropiletilamina (87,1 ql, 0,5 mmol) agitada sob nitrogênio e resfriada acrescentado cloreto de acetila (17,8 ql, 0,25 mmol), e a mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos. A mistura foi concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o intermediário do título como o sal de ácido trifluoracético (17,1 mg). (m/z): [M+H]+ calculado para C26H36N4O4, 469, 28; encontrado: 469, 2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,49 minutos.

Exemplo 15. Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[3-(formil-metilamino)-2-hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3carboxílico {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico (43 mg, 0,1 mmol) foi dissolvida em formato de etila (1,0 ml). A mistura foi aquecida a 65°C por 16 horas, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia

HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o intermediário do título como o sal de ácido de 29/06/2018, pág. 79/121

76/104 trifluoracético (22,7 mg). (m/z): [M+H]+ calculado para

C25H34N4O4, 455, 27; encontrado: 455, 2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,37 minutos.

Exemplo 16. Síntese de {(1S,3R,5R)-8[3-formilamino-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-aminopropil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo-1,210 dihidroquinolinona-3-carboxílico (41,2 mg, 0,1 mmol) foi dissolvida em formato de etila (1,0 ml) . A mistura foi aquecida a 65°C por 16 horas, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia

HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o intermediário do título como o sal de ácido trifluoracético (37,5 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para

C24H32N4O4, 441,25; encontrado: 441,2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 5-40%/H2O ao longo de 4 minutos) = 2,89 minutos.

Exemplo 17. Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[(R)-3-(acetilmetil-amino)-2-hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina3- carboxílico {(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (200 mg, 0,3 mmol) foi dissolvida em DMF (1,0 ml), e então foi adicionada N,Ndiisopropiletilamina (160,3 ql, 0,92 mmol) . A seguir, foi adicionada uma solução de acético ácido (17,3 ql, 0,3 mmol)

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 80/121

77/104 e PyBOP (159 mg, 0,3 mmol) em DMF. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o intermediário do título como o sal de ácido trifluoracético (130 mg). (m/z) : [M+H]+ calculado para C26H36N4O4, 469, 28; encontrado: 469, 5. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 3,94 minutos.

Exemplo 18. Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[(R)-3-(formilmetil-amino)-2-hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina3- carboxílico {(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3-metilaminopropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-Isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (235 mg, 0,36 mmol) foi dissolvida em formato de etila (5,0 ml) . A mistura foi aquecida a 65°C por 16 horas, e então concentrada até seca sob pressão reduzida. O produto foi recolhido em ácido acético/água (1:1) (1,5 ml) e purificado por cromatografia

HPLC. As frações purificadas foram liofilizadas para gerar o intermediário do título como o sal de ácido trifluoracético (97,5 mg) . (m/z) : [M+H]+ calculado para

C25H34N4O4, 455, 27; encontrado: 455, 2. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 3,87 minutos.

Exemplo 19: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 5-bromo-1-isopropil-2-oxo-1,2Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 81/121

78/104 dihidroquinoli na-3-carboxílico

A uma solução de {(1S,3R,5R)-8-[ (R)-2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico (500 mg, 0,99 mmol) dissolvida em uma mistura de acetonitrila (5 ml) e acético ácido (10 ml), foi adicionado bromo (0,30 ml, 5,9 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 12 horas, e concentrada sob pressão reduzida, gerando um resíduo oleoso amarelo pálido. O resíduo foi dissolvido em acetonitrila 20% em água (TFA 0,5%) (5 ml), e purificado por HPLC. O composto do título foi obtido como o produto principal e isolado como um sal de ácido trifluoracético (200 mg) ²H-

NMR	(CD3OD): δ	(ppm)	8, 64	(s,	1H) ,	7,97 (s, 1H),	7,72-7,70
(m,	2H),	4,18	(br m,	2H) ,	4,0	(br	s, 1H), 3,2-3,0	(m), 2,88
(s,	3H),	2,79	(s,	3H),	2,5	-2,2	(m, 2H), 1,56	(d, 6H).
(m/z) :	[M+H]	+ calculado	para	C25H35BrN4O5S,	583,16;

encontrado: 583,4. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 1050%/H2O ao longo de 6 minutos) = 3,90 minutos.

Exemplo 20: Síntese alternativa de terc-butil éster de ácido ((R)-2-hidroxi-3-{3-[(1-isopropil-2-oxo1,2dihidroquinolina-3-carbonil)amino]-(1S,3R,5R)-8-azabiciclo [3.2.1]oct-8-il}propil)metilcarbâmico

a. Preparação de terc-butil éster de ácido metil-(S)1-oxiranilmetilcarbâmico

Terc-butil éster de ácido ((S)-3-cloro-2hidroxipropil)-metilcarbâmico (2,23 g, 10 mmol) foi

dissolvido	em	THF (30	ml),	e então	uma	solução	aquosa de
hidróxido	de	sódio	(0,48	g em	10	ml de	água) foi
adicionada.	A	mistura	foi	agitada	por	2 horas.	A mistura

de 29/06/2018, pág. 82/121

79/104 foi então concentrada sob pressão reduzida para remover a maior parte da THF, e a solução aquosa restante foi extraída em acetato de etila, lavando com água. O produto foi seco sobre sulfato de sódio, filtrado e concentrado sob pressão reduzida para gerar o intermediário do título como um óleo (1,6 g) . (m/z) : [M+Na]+ calculado para C9H17NO3,

210,10; encontrado: 210,1. ¹H-NMR (DMSO de, 299, 96 MHz): δ (ppm) 1,32-1,42 (s, 9H), 2,69-2,73 (m, 1H), 2,75-2,85 (s,

3H), 2,95-3,05 (br s, 1H), 3,10-3,15 (dm, 1H), 3,16-3,21 (d, 1H), 3,37-3,51 (m, 2H).

b. Síntese de terc-butil éster de ácido ((R)-2hidroxi-3-{3-[(1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carbonil)amino]-(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-8il}propil)metilcarbâmico

Terc-butil éster de ácido metil-(S)-1oxiranilmetilcarbâmico (9,53 g, 51,1 mmol) e {(1S,3R,5R)-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (8,7 g, 25,6 mmol), foram dissolvidos em metanol (100 ml). A mistura foi aquecida a 80°C por 2 horas, e então concentrada sob pressão reduzida. O óleo resultante foi recolhido em acetato de etila e lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado, seguido por cloreto de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O óleo resultante foi submetido à cromatografia instantânea (S1O2, eluindo com metanol 10%/diclorometano 90%) . Frações contendo produto foram concentradas para gerar o intermediário do título como um sólido branco (13,5 g) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C29H42N4O5, 527,33; encontrado: 527, 6. Tempo de retenção de 29/06/2018, pág. 83/121

80/104 (HPLC anal.: MeCN 2-50%/H2O ao longo de 5 minutos) = 4,75 minutos.

Exemplo 21: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3(metanossulfonil-etilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct5 3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico

Seguindo o procedimento do Exemplo 1, substituindo metilamina com etilamina na etapa h, o composto do título foi preparado. (m/z) : [M+H]+ calculado para C26H38N4O5S,

519,28; encontrado: 519,2. Tempo de retenção (HPLC anal.:

MeCN 10-70%/H2O ao longo de 6 minutos) = 2,91 minutos.

Exemplo 22: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3(metanossulfonilamino)-propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona15 3- carboxílico a1. Preparação de (S)-2-oxiranilmetilisoindol-1,3diona

A uma solução fria de (S)-1-oxiranilmetanol (5 g, 67,5 mmol) e ftalimida (9,9 g, 67,3 mmol) em tetrahidrofurano (200 ml) em banho de gelo, foi adicionada trifenilfosfina (17,9 g, 68,2 mmol) e azodicarboxilato de dietila (12,3 g, 70,6 mmol) . A mistura foi agitada a 0°C por 2 horas e em temperatura ambiente por 48 horas. A mistura foi concentrada sob vácuo, e o resíduo oleoso purificado por cromatografia instantânea em coluna de sílica, gerando o produto desejado (10,1 g) como um sólido amarelo pálido: Rt = 0,51 em EtOAc/hexano 1:1. ¹H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7,76-7,64 (m, 2H), 7,63-7,60 (m, 2H), 3,9-3,8 (dd,

1H), 3,70-3,65 (dd, 1H), 3,15 (m, 1H), 2,70-2,67 (dd, 1H),

2,58-2,55 (dd, 1H).

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 84/121

81/104 bl._Síntese de_{ (1S, 3R, 5R) -8- [ ( (R) -2-hidroxi-3metanossulfonilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona3-carboxílico

Seguindo o procedimento do Exemplo 4, substituindo 2oxiranilmetil-isoindol-1,3-diona racêmica com o intermediário quiral da etapa anterior, o sal de trifluoracetato do composto do título foi preparado. (m/z) : [M+H]+ calculado para C24H34N4O5S, 491,24; encontrado: 491,4.

Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 10-50%/H2O ao longo de

6	minutos) =	3,69 minutos. 1H-NMR (CD3OD,	300 MHz):	δ (ppm)
8,	67 (s, 1H),	7,74-7,73 (m, 3H), 7,7-7,6	(dt, 1H),	7,3-7,2
(t	, 1H), 4,2	(br s, 2H), 4,0 (br m, 2H),	3,2-2,9	(m, 4H),
2,	8 (s, 3H),	2,6-2,3 (br m, 6H), 2,2-2,1	(br m, 2H), 1,57-

1,55 (d, 6H).

O composto do título também foi preparado pelo procedimento seguinte.

a2 ._Preparação_de_N- ((S) -oxiranilmetil) metanossulfonamida

A uma solução fria de metanossulfonamida (10 g, 0,105 mol) em água (100 ml) em um banho de gelo, foi adicionado hidróxido de sódio como péletes (8,4 g, 0,21 mol), e depois (S)-2-clorometiloxirana (12,4 g, 0,158 mol). A mistura foi agitada na mesma temperatura por 2 horas, e em temperatura ambiente por 12 horas, e então foi adicionado ácido clorídrico concentrado (18 ml). O produto foi isolado por extração da camada aquosa com diclorometano (2 x 300 ml). A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e, depois evaporada até seca, gerando um líquido incolor (2,5 g), que foi usado diretamente na etapa seguinte.

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 85/121

82/104 b2 ._Síntese_de_{ (1S, 3R, 5R) -8- [ (R) -2-hidroxi-3(metanossulfonilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il} amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3carboxílico

A uma solução de {(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carboxílico (sal TFA; 4 g, 8,8 mmol) em metanol (150 ml), foram adicionados N,N-diisopropiletilamina (1,7 ml, 9,5 mmol) e o produto da etapa anterior (2,5 g, 18,2 mmol). A mistura foi agitada a 80°C por 2 dias. Após ser concentrado sob vácuo, o resíduo foi purificado por HPLC preparatória, gerando o sal de trifluoracetato do composto do título (1,3 g) . (m/z) : [M+H]+ calculado para C24H34N4O5S, 491,24;

encontrado: 491,4. Tempo de retenção (HPLC anal.: MeCN 1015 50%/H2O ao longo de 6 minutos) = 3,69 minutos.

Exemplo 23: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3(1,1-dioxo-2-isotiazolidinil)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico a ._Preparação de_{ (1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(3cloropropanossulfonilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct3-il} amida_de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico

A uma solução fria de {(1S,3R,5R)-8[2-hidroxi-325 aminopropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico e sal de TFA (0,125 g, 0,195 mmol) em diclorometano (2 ml) em um banho de gelo, foi adicionada N,N-diisopropiletilamina (0,119 ml, 0,683 mmol) e cloreto de 330 cloropropanossulfonila (0,025 ml, 0,205 mmol). Após

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 86/121

83/104 agitação a 0°C por 2 horas, a mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. Ela foi diluída com diclorometano (50 ml) e lavada com salmoura e solução saturada de NaHCCç. Após secagem sobre MgSCg, a solução orgânica foi evaporada até seca, gerando um resíduo oleoso. C produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte.

b._{ (1S, 3R, 5R)-8-[2-hidroxi-3-(1,1-dioxo-2isotiazolidinil)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3carboxílico

A uma solução de {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(3cloropropanossulfonilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolinona-3-carboxílico (100 mg, 0,18 mmol) em DMF anidra (3 ml), foi adicionado carbonato de potássio (75 mg, 0,56 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 85°C por 12 horas, e concentrada sob vácuo. C resíduo foi dissolvido em diclorometano (50 ml) e lavado com NaHCC3 saturado. Após secagem sobre MgSC4, o filtrado foi evaporado até seco, e o resíduo foi purificado por HPLC preparatória para gerar o composto do título. (m/z) : [M+H]+ calculado para C26H36N4C5S,

517,26; encontrado: 517,3.

Exemplo 24: Síntese de {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinoli na-3-carboxílico

a. Preparação de terc-butil éster de ácido (1S,3R,5R)3-[(1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carbonil)amino] -8-azabiciclo[3.2.1]octana-8-carboxílico de 29/06/2018, pág. 87/121

84/104

Em um frasco de 3 l, ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico (112,4 g, 0,486 mol, 1,1 eq.) foi suspenso em tolueno (l l). A mistura foi aquecida até 85°C, e foi adicionado cloreto de tionila (86,74 g,

0,729 mol) em gotejamento ao longo de 70 minutos. A mistura foi aquecida a 95°C por 1,5 h com agitação e então se permitiu que resfriasse até a temperatura ambiente.

Em um frasco de 12 l separado, terc-butil éster de ácido (1S,3R,5R)-3-amino-8-azabiciclo[3.2.1]octana-810 carboxílico (100,0 g, 0,442 mol, 1 eq.) foi suspenso em tolueno (1 l) e 3 M NaOH (4 eqs) foi adicionado. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 10 minutos e depois resfriada a cerca de 5°C. A solução de cloreto ácido foi adicionada lentamente com agitação ao longo de 40 minutos, mantendo a temperatura interna abaixo de 10°C. A mistura foi agitada a 3-5°C por 30 minutos, e permitiu-se que as camadas se separassem de um dia para o outro. A camada de tolueno (~2,5 l) foi coletada, concentrada a cerca da metade (~1,2 l) por evaporação rotatória, e usada diretamente na etapa seguinte.

b. Preparação de {(1S,3R,5R)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carboxílico

À solução de tolueno preparada na etapa anterior (~1.2

l), foi adicionado ácido trifluoracético (200 ml) ao longo de 20 minutos a 20°C com agitação. A mistura foi agitada a 20°C por 2 horas. Foi acrescentada água (1,55 l), e a mistura foi agitada por 30 minutos a 20°C. Após 30 minutos, a mistura se separou em três camadas. A camada do fundo (~350 ml), um óleo marrom viscoso, continha o intermediário

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85/104 bruto .

A um frasco de 12 l carregado com MTBE (2,8 l), o óleo marrom bruto foi adicionado ao longo de 1 hora a 1-2°C com agitação. A suspensão foi agitada na mesma temperatura por

1 hora e então filtrada. O filtrado foi lavado com MTBE (2 x 300 ml) e seco sob vácuo em temperatura ambiente por 4 dias, para fornecer o sal de trifluoracetato do intermediário do título (163,3 g) como um pó amarelo pálido.

c ._Preparação_de_N-metil-N- [ (S) -2-oxiran-2ilmetil]metanossulfonamida

Um frasco de 12 l foi carregado com água (1 l), seguida pela adição de NaOH (50% em água, 146,81 g, 1,835 mol) . A jarra contendo NaOH foi lavada com água (2 x 500 ml) e as lavagens foram adicionadas ao frasco. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 10 minutos e resfriada até ~8°C. (N-metil)metanossulfonamida (200,2 g,

1,835 mol) em água (500 ml) foi adicionada ao longo de 5 minutos. A mistura foi agitada por 1 hora a ~4°C e foi adicionada (S)-2-clorometiloxirana (339, 6 g, 3,67 mol) . A mistura foi agitada por 20 horas a 3-4°C. Foi adicionado diclorometano (2 l) e a mistura foi agitada por 30 minutos a 5-10°C. Permitiu-se que as duas camadas se separassem ao longo de 10 minutos, e coletadas. A camada orgânica (~2,5

l) foi adicionada de volta ao frasco de 12 l e lavada com 1

M H3PO4 (800 ml) e salmoura (800 ml) . O diclorometano foi removido por evaporação rotatória. Ao produto bruto, tolueno (400 ml) foi adicionado e removido por evaporação rotatória. Após três ciclos adicionais do processo de tolueno, o intermediário do título foi obtido (228,2 g), o

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86/104 qual foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte. d._Síntese_de_{ (1S, 3R, 5R) -8- (R) -2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il} amida_de_ácido_1-isopropil-2-oxo-1,25 dihidroquinolina-3-carboxílico

Em um frasco de 3 l, trifluoracetato de {(1S,3R,5R)-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (105,0 g, 0,232 mol) foi suspenso em etanol absoluto (400 ml). À esta suspensão,

NaOH (50% em água, 0,243 mol., 1.05 eq.) dissolvido em etanol absoluto (100 ml) foi adicionado em temperatura ambiente. A jarra contendo o NaOH foi lavada com etanol (2 x 50 ml) e as lavagens foram adicionadas à mistura de reação. Após 30 minutos de agitação, uma solução de N15 metil-N-[(S)-2-oxiran-2-ilmetil]metanossulfonamida (62,0 g, 1,5 eq.) em etanol absoluto (100 ml) foi adicionada. A mistura foi refluída por 2 horas, resfriada até a temperatura ambiente, e foram adicionados cristais semeados do composto do título. Após cerca de 5 minutos de agitação, formou-se um sólido branco. A mistura foi resfriada até 35°C e agitada por 2 horas. O sólido branco foi filtrado e o bolo úmido foi lavado com etanol absoluto gelado (3 x 50

ml).	O sólido	foi seco	sob vácuo a	30°C	por	60 horas	para
fornecer o composto do	título (93,	8 g,	conteúdo de	água
25 pelo	método de	Karl Fischer 2,03%)	. 1H	NMR	(CDCls) δ	ppm
10,52	(d, 1H),	8,83 (s,	1H), 7,75	(d,	2H),	7,64-7,60	(m,
2H),	7,28-7,26	(m, 1H),	4,33-4,26	(m,	2H),	3,78-3,75	(m,
1H),	3,27-3,20	(m, 4H),	3,01 (s, 3H), 2	, 88	(s, 3H), 2	,58-

2,53 (m, 1H), 2,30-1,81(m, 11H), 1,68 (d, 6H).

Os cristais semeados foram obtidos de uma preparação

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 90/121

87/104 prévia do composto do título pelo método desse exemplo em escala menor, no qual a cristalização ocorreu espontaneamente.

Exemplo 25: Síntese de cloridrato de {(1S,3R,5R)-85 [(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidroquinolina-3- carboxílico

Em um frasco de 1 l, {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico (34,7 g, 0,069 mol) foi suspensa em etanol absoluto (210 ml). HCl concentrado (1,1 eq.) foi adicionado em temperatura ambiente, com agitação. A mistura foi agitada no refluxo por 30 minutos, e resfriada até a temperatura ambiente e agitada por 2 horas.

O sólido foi filtrado e o bolo úmido foi lavado com etanol absoluto gelado (3 x 50 ml) . O sólido foi seco sob vácuo a 30°C por 48 horas, para fornecer o composto do título (34,5 g, 93,7% de rendimento, conteúdo de água pelo método de

Karl Fischer 0,13%) .

Exemplo 26: Síntese de sal de ácido cítrico de {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico { (1S, 3R,5R)-8-[ (R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1Isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico (0,1 g, 0,2 mmol) foi suspensa em etanol (1 ml) . À esta suspensão foi adicionada uma solução 1 M de ácido cítrico em etanol (0,072 ml, 0,072 mmol, 0,33 eq.). A mistura foi rapidamente

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88/104 sonificada até a transparência, tampada e permaneceu em repouso de um dia para o outro. A tampa então foi removida e permitiu-se que a mistura evaporasse sob condições ambientes até que fossem observados sólidos. A mistura foi então tampada novamente e repousou por 72 horas. O sólido resultante foi filtrado e lavado com etanol gelado para gerar o composto do título como um sólido (74,3 mg).

Exemplo 27: Síntese de sais ácidos de {(1S,3R,5R)-8[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metil-amino)propil]-810 azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2- dihidroquinolina-3-carboxílico

Seguindo o procedimento do Exemplo 26, os sais ácidos de { (1S, 3R, 5R) -8-[ (R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 115 isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico listados abaixo na Tabela III foram preparados em forma sólida usando os equivalentes indicados de ácido.

Tabela III: Sais Ácidos

Ácido	N° de equivalentes de ácido	Peso do produto (mg)
adípico	0,5	48,5
fosfórico	0,5	86,6
sulfúrico	0,5	27,0
tartárico	0,5	66, 3
málico	0,5	25, 3
hidrobrômico	1	62,9

Exemplo 28: Síntese de sal de ácido metanossulfônico 20 de {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2- dihidroquinolina-3-carboxílico

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A uma solução de {(1S,3R,5R)-8-M-2-hidroxi-3(metanossulfonil-metil-amino)propil1-8-azabiciclo[3.2.1] oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2dihidroquinolina-3-carboxílico (0,1 g, 0,2 mmol) em acetonitrila 50%/água (1 ml), foi adicionado uma solução 1 M de ácido metanossulfônico em etanol (0,2 ml, 0,2 mmol, 1 eq.). A mistura foi então congelada e liofilizada até seca de um dia para o outro. O sólido resultante foi dissolvido em isopropanol (1 ml) com aquecimento suave e permitiu-se que resfriasse. O sólido resultante foi coletado por filtração e lavado com isopropanol gelado para gerar o composto do título como um sólido (90 mg).

Exemplo 29: Síntese de sais ácidos de {(1S,3R,5R)-8[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metil-amino)propil]-815 azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2- dihidroquinolina-3-carboxílico

Seguindo o procedimento do Exemplo 28, os sais ácidos de { (1S,3R,5R)-8-[ (R) -2-hidroxi-3-(metanossulfonilmetilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico listados abaixo na Tabela IV foram preparados em forma sólida usando os equivalentes de ácido indicados.

Tabela IV: Sais Ácidos

Ácido	N° de equivalentes de ácido	Peso do produto (mg)
fumárico	1	107,2
benzóico	1	105, 0
(R)-mandélico	1	96, 1

Ensaio 1: Ensaio de Ligação de Radioligante em

5 Receptores Humanos de 5-HT4(c)

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a. Preparação de Membrana 5-HT4(c)

Células HEK-293 (rim embrionário humano) transfectadas de forma estável com cDNA de receptor de 5-HT4(c) humano (Bmax = ~6.0 pmol/mg de proteína, como determinado usando ensaio de ligação de radioligante de membrana [³H]GR113808) cresceram em frascos T-225 em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) contendo 4.500 mg/l de Dglicose e cloridrato de piridoxina (GIBCO-Invitrogen Corp., Carlsbad CA: Cat #11965) suplementado com soro bovino fetal

10% (FBS) (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #10437), 2 mM Lglutamina e (100 unidades) penicilina (100 qg) estreptomicina/ml (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #15140) em uma incubadora umidificada de CO2 5% a 37°C. As células cresceram sob pressão de seleção contínua pela adição de

800 qg/ml de geneticina (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #10131) ao meio.

As células cresceram até aproximadamente 60-80% de confluência (<35 passagens de subcultura). Com 20-22 horas antes da coleta, as células foram lavadas duas vezes e alimentadas com DMEM sem soro. Todas as etapas da preparação da membrana foram realizadas no gelo. A monocamada de células foi levantada suavemente por agitação mecânica e trituração com uma pipeta de 25 ml. As células foram coletadas por centrifugação a 1.000 rpm (5 minutos).

Para a preparação de membrana, os péletes de células foram ressuspensos em 50 mM ácido 4-(2-hidroxietil)-1piperazinaetanossulfônico (HEPES) super gelado, pH 7,4 (preparação do tampão de membrana) (40 ml/células totais, rendimento de 30-40 frascos T225) e homogeneizados usando a dispositivo para rompimento politron (ajustes: 19, 2 x 10

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s) no gelo. Os homogeneizados resultantes foram centrifugados a 1.200 g por 5 minutos a 4°C. O pélete foi descartado e o sobrenadante centrifugado a 40.000 g (20 minutos). O pélete foi lavado uma vez por ressuspensão com a preparação do tampão de membrana e centrifugação a 40.000 g (20 minutos) . O pélete final foi ressuspenso em 50 mM HEPES, pH 7,4 (tampão de ensaio) (equivalente a 1 frasco T225/1 ml) . A concentração de proteína da suspensão de membrana foi determinada pelo método de Bradford (Bradford,

197 6) . As membranas foram estocadas congeladas em alíquotas a -80°C.

b. Ensaios de Ligação de Radioligante

Foram realizados ensaios de ligação de radioligante in placas de ensaio de polipropileno com 96 poços de 1,1 ml de profundidade (Axygen) em um volume total de ensaio de 400 ql, contendo 2 μg de proteína de membrana em 50 mM HEPES pH 7,4, contendo albumina sérica bovina 0,025% (BSA). Estudos de saturação de ligação para determinação de valores Kd do radioligante foram realizados usando [³H]-GR113808 (Amersham Inc., Bucks, UK: Cat #TRK944; atividade específica ~82 Ci/mmol) em 8-12 concentrações diferentes variando de 0,001 nM - 5,0 nM. Foram realizados ensaios de deslocamento para determinação de valores pKi de compostos com [³H]-GR113808 a 0,15 nM e onze concentrações diferentes de composto variando de 10 pM - 100 uM.

Os compostos de teste foram recebidos como soluções de estoque de 10 mM em DMSO e diluídos até 400 qM em 50 mM HEPES pH 7,4 a 25°C, contendo BSA 0,1%, e diluições seriais (1:5) foram então feitas no mesmo tampão. A ligação inespecífica foi determinada na presença de 1 qM de

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GR113808 não rotulado. Os ensaios foram incubados por 60 minutos em temperatura ambiente, e então as reações de ligação foram terminadas por filtração rápida ao longo de placas de filtro de fibra de vidro de 96 poços GF/B (Packard BioScience Co., Meriden, CT) pré-embebidas em polietilenoimina 0,3%. As placas de filtro foram lavadas três vezes com tampão de filtração (50 mM HEPES super gelado, pH 7,4) para remover a radioatividade não ligada. As placas foram secas, 35 pl de fluido de cintilação líquida Microscint-20 (Packard BioScience Co., Meriden, CT) foram adicionados a cada poço e as placas foram contadas em um contador de cintilação líquida Packard Topcount (Packard BioScience Co., Meriden, CT).

Os dados de ligação foram analisados por análise de regressão não linear com o pacote de programas de computador GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) usando o modelo de três parâmetros para competição por um local. O BOTTOM (valor mínimo da curva) foi fixado ao valor para ligação inespecífica, como determinado na presença de 1 uM de GR113808. Os valores Ki para compostos de testes foram calculados, no Prism, a partir dos valores de IC50 mais adequados, e o valor Kd do radioligante, usando a equação de Cheng-Prusoff (Cheng e Prusoff, Biochemical Pharmacology, 1973, 22O 3.099-108): Ki = IC50 / (1 + [L]/Kd), qm que [L] = concentração de [³H]GR113808. Os resultados são expressos como o logaritmo decádico negativo dos valores Ki, pKi.

Compostos de teste com um valor pKi maior nesse ensaio têm uma afinidade de ligação mais elevada para o receptor de 5-HT4. Os compostos da invenção que foram testados neste

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93/104 ensaio tiveram um valor pKi variando de cerca de 6,3 a cerca de 9,0, tipicamente variando de cerca de 6,5 a cerca de 8,5.

Ensaio 2: Ensaio de Ligação de Radioligante em 5 Receptores Humanos de 5-HT3a:

Determinação da Seletividade do Subtipo de Receptor

a. Preparação de Membrana de 5-HT3A

Células HEK-293 (rim embrionário humano) transfectadas de forma estável com cDNA de receptor de 5-HT3A humano foram obtidas do Dr. Michael Bruess (Universidade de Bonn, GDR) (Bmax = ~9,0 pmol/mg de proteína, como determinado usando ensaio de ligação de radioligante de membrana [³H]GR65630). As células cresceram em frascos T-225 ou fábricas de células em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco 50% (DMEM) (GIBCO-Invitrogen Corp., Carlsbad, CA: Cat #11965) e Ham's F12 50% (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #11765) suplementado com soro bovino fetal 10% inativado pelo calor (FBS) (Hyclone, Logan, UT: Cat #SH30070,03) e (50 unidades) penicilina-(50 qg), estreptomicina/ml (GIBCO-Invitrogen

Corp.: Cat #15140) em uma incubadora umidificada de CO2 5% a 37°C.

As células cresceram até aproximadamente 70-80% de confluência (< 35 passagens de subcultura). Todas as etapas da preparação da membrana foram realizadas no gelo. Para colher as células, o meio foi aspirado e as células foram enxaguadas com soro fisiológico tamponado com fosfato de Dulbecco sem Ca²+ e Mg²+ (dPBS) . A monocamada de células foi levantada suavemente por agitação mecânica. As células foram coletadas por centrifugação a 1.000 rpm (5 minutos).

As etapas subseqüentes da preparação da membrana seguiram o

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94/104 protocolo descrito acima para as membranas que expressam receptores de 5-HT4(c).

b. Ensaios de Ligação de Radioligante

Foram realizados ensaios de ligação de radioligante em 5 placas de ensaio de polipropileno de 96 poços em um volume total de ensaio de 200 μΣ contendo 1,5-2 μg de proteína de membrana em 50 mM HEPES pH 7,4, contendo tampão de ensaio de BSA 0,025%. Estudos de saturação de ligação para determinação de valores Kd do radioligante foram realizados usando [³H]-GR65630 (PerkinElmer Life Sciences Inc.,

Boston, MA: Cat #NET1011, specific atividade -85 Ci/mmol) em doze concentrações diferentes, variando de 0,005 nM a 20 nM. Ensaios de deslocamento para determinação de valores pKi de compostos foram realizados com [³H]-GR65630 em 0,50 nM e onze concentrações diferentes de composto variando de 10 pM a 100 μΜ. Os compostos foram recebidos como soluções de estoque de 10 mM em DMSO (veja a seção 3,1), diluídos até 400 μM em 50 mM de HEPES pH 7,4 a 25°C, contendo BSA 0,1%, e foram então feitas diluições seriais (1:5) no mesmo buffer. A ligação inespecífica foi determinada na presença de 10 μM de MDL72222 não rotulado. Os ensaios foram incubados por 60 minutos em temperatura ambiente, e então as reações de ligação foram terminadas por filtração rápida ao longo de placas de filtro de fibra de vidro de 96 poços

GF/B (Packard BioScience Co., Meriden, CT) pré-embebidas em polietilenoimina 0,3%. As placas de filtro foram lavadas três vezes com tampão de filtração (50 mM de HEPES super gelado, pH 7,4) para remover a radioatividade não ligada. As placas foram secas, 35 μl de fluido de cintilação líquida Microscint-20 (Packard BioScience Co., Meriden, CT)

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95/104 foram adicionados a cada poço e as placas foram contadas em um contador de cintilação líquida Packard Topcount (Packard BioScience Co., Meriden, CT).

Os dados de ligação foram analisados usando o procedimento de regressão não linear descrito acima para determinar os valores Ki. O BOTTOM (valor mínimo da curva) foi fixado ao valor para ligação inespecífica, como determinado na presença de 10 pM de MDL72222. A quantidade [L] na equação de Cheng-Prusoff foi definida como a concentração de [³H]-GR65630.

A seletividade para o receptor de subtipo 5-HT4 com relação ao receptor de subtipo 5-HT3 foi calculada como a proporção Kí(5-HT3a)/Kí(5-HT4(c). Os compostos da invenção que foram testados neste ensaio tiveram uma seletividade de subtipo de receptor 5-HT4/5-HT3 variando de cerca de 50 a cerca de 8.000, tipicamente variando de cerca de 100 a cerca de 4.000.

Ensaio 3: Ensaio Flashplate de Acúmulo de cAMP em Células Inteiras com células HEK-293 que expressam Receptores 5-HT4(c)humanos

Nesse ensaio, foi determinada a potência funcional de um composto de teste pela medida da quantidade de AMP cíclico produzida quando células HEK-293 que expressam receptores de 5-HT4 foram colocadas em contato com concentrações diferentes de composto de teste.

a. Cultura de Células

Foram preparadas células HEK-293 (rim embrionário humano) transfectadas de forma estável com cDNA de receptor de 5-HT4(c) humano clonado expressando o receptor em duas densidades diferentes: (1) em uma densidade de cerca de de 29/06/2018, pág. 99/121

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0,5-0,6 pmol/mg de proteína, como determinado usando um ensaio de ligação de radioligante de membrana [³H]GR113808, e (2) em uma densidade de cerca de 6,0 pmol/mg de proteína. As células cresceram em frascos T-225 em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) contendo 4.500 mg/l de D-glicose (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #11965) suplementado com soro bovino fetal 10% (FBS) (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #10437) e (100 unidades) penicilina-(100 pg) estreptomicina/ml (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #15140) em uma incubadora umidificada de CO2 5% a 37°C. As células cresceram sob pressão de seleção contínua pela adição de geneticina (800 pg/ml: GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #10131) ao meio.

b. Preparação das Células

As células cresceram até aproximadamente 60-80% de confluência. Vinte a vinte e duas horas antes do ensaio, as células foram lavadas duas vezes, e alimentadas com DMEM sem soro contendo 4.500 mg/l de D-glicose (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #11965). Para colher as células, o meio foi aspirado e 10 ml de Versene (GIBCO-Invitrogen Corp.: Cat #15040) foi adicionado a cada frasco T-225. As células foram incubadas por 5 minutos em RT e então deslocadas do frasco por agitação mecânica. A suspensão de células foi transferida para um tubo de centrífuga contendo um volume igual de dPBS pré-aquecido (37°C) e centrifugada por 5 minutos a 1.000 rpm. O sobrenadante foi descartado e o pélete foi ressuspenso em tampão de estimulação préaquecido (37°C) (equivalente a 10 ml por 2-3 frascos T225). Este tempo era anotado e marcado como o tempo zero.

As células foram contadas com um contador Coulter de 29/06/2018, pág. 100/121

97/104 (contagens acima de 8 qm, o rendimento do frasco era de 1-2 x 10⁷ células/frasco). As células foram ressuspensas em uma concentração de 5 x 10⁵ células/ml em tampão de estimulação pré-aquecido (37°C) (como fornecido no kit flashplate) e pré-incubadas a 37°C por 10 minutos.

Os ensaios de cAMP foram realizados em um formato de radioimunoensaio usando o Sistema de Ativação de Ensaio Flashplate de Adenilil Ciclase com ¹²⁵I-cAMP (SMP004B, PerkinElmer Life Sciences Inc., Boston, MA), de acordo com as instruções do fabricante.

As células cresceram e foram preparadas como descrito acima. As concentrações celulares finais no ensaio foram 25 x 10³ células/poço e o volume final do ensaio foi de 100 ql. Os compostos de teste foram recebidos como 10 mM de soluções de estoque em DMSO, diluídos até 400 qM em 50 mM de HEPES pH 7,4 a 25°C, contendo BSA 0,1%, e então foram feitas diluições seriais (1:5) no mesmo tampão. Ensaios de acúmulo de AMP cíclico foram realizados com 11 concentrações diferentes de composto, variando de 10 pM a 100 qM (concentrações finais de ensaio) . Uma curva de resposta da concentração de 5-HT (10 pM a 100 qM) foi incluída em cada placa. As células foram incubadas, com agitação, a 37°C por 15 minutos, e a reação terminada por adição de 100 ql de tampão de detecção super gelado (como fornecido no kit flashplate) a cada poço. As placas foram seladas e incubadas a 4°C de um dia para o outro. A radioatividade ligada foi quantificada por espectroscopia por proximidade de cintilação usando o Topcount (Packard BioScience Co., Meriden, CT).

A quantidade de cAMP produzida por ml de reação foi de 29/06/2018, pág. 101/121

98/104 extrapolada a partir da curva-padrão de cAMP, de acordo com as instruções fornecidas pelo manual de usuário do fabricante. Os dados foram analisados por análise de regressão não linear com o pacote de programas de computador GraphPad Prism usando o modelo de dose-resposta sigmóide de 3 parâmetros (a inclinação restrita à unidade). Os dados de potência são registrados como valores pEC50, o logaritmo decádico negativo do valor EC50, em que EC50 é a concentração eficaz para uma resposta máxima de 50%.

Compostos de teste que exibem um valor pEC50 maior neste ensaio têm uma potência maior para a ação agonista do receptor de 5-HT4. Os compostos da invenção que foram testados neste ensaio, por exemplo, na linha de células (1) com uma densidade de cerca de 0,5-0,6 pmol/mg de proteína, tiveram um valor pEC50 variando de cerca de 7,0 a cerca de 9,0, tipicamente variando de cerca de 7,5 a cerca de 8,5.

Ensaio 4: Ensaio de Limite de Voltagem In vitro da Inibição da Corrente de Íon Potássio em Células Inteiras que Expressam o Canal de Potássio Cardíaco hERG

Células CHO-K1 transfectadas de forma estável com cDNA de hERG foram obtidas de Gail Robertson na Universidade de

Wisconsin. As células foram mantidas em estocagem criogênica até o necessário. As células foram expandidas e passadas em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco/F12 suplementado com soro bovino fetal 10% e 200 μg/ml de geneticina. Foram semeadas em lamínulas de vidro revestidas com poli-D-lisina (100 pg/ml), em placas de 35 mm² (contendo 2 ml de meio) em uma densidade que permitira que as células isoladas fossem selecionadas para os estudos de limite de voltagem de células inteiras. As placas foram de 29/06/2018, pág. 102/121

99/104 mantidas em um ambiente umidificado de CO2 5% a 37°C.

A solução extracelular era preparada pelo menos a cada 7 dias e estocada a 4°C quando não estivesse sendo usada. A solução extracelular continha (mM) : NaCl (137), KCl (4), CaCl2 (1,8), MgCl2 (1), Glicose (10), ácido 4-(2hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico (HEPES) (10), pH 7,4 com NaOH. A solução extracelular, na ausência ou presença de composto de teste, era contida em reservatórios, dos quais fluía na câmara de registro a aproximadamente 0,5 ml/minutos. A solução intracelular foi preparada, dividida em alíquotas e estocada a -20°C até o dia de ser utilizada. A solução intracelular continha (mM): KCl (130), MgCl2 (1), etileno glicol-bis(beta-aminoetil éter) sal de ácido N,N,N',N'-tetraacético (EGTA) (5), MgATP (5), ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico (HEPES) (10), pH 7,2 com KOH. Todos os experimentos foram realizados em temperatura ambiente (20-22°C).

As lamínulas nas quais as células foram semeadas foram transferidas para uma câmara de registro e perfundidas continuamente. Selos Gigaohm foram formados entre a célula e a anexação do eletrodo colocado. Após ser obtida uma anexação estável, começava o registro no modo de limite de voltagem, com o potencial de manutenção inicial em -80 mV. Após ser obtida uma corrente estável de célula inteira, as células eram expostas ao composto de teste. O protocolopadrão de voltagem era: etapa do potencial de manutenção de -80 mV a +20 mV por 4,8 segundos, repolarização a -50 mV por 5 segundos e posteriormente retorno ao potencial de manutenção original (-80 mV). Este protocolo de voltagem foi executado uma vez a cada 15 segundos (0, 067 Hz) .

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100/104

Amplitudes de pico de corrente durante a fase de repolarização foram determinadas usando o programa de computador pClamp. Os compostos de teste em uma concentração de 3 pM foram perfundidas ao longo das células por 5 minutos, seguido por um período lavagem de 5 minutos na ausência de composto. Finalmente, um controle positivo (cisaprida, 20 nM) foi adicionado ao material perfundido para testar a função da célula. A etapa de -80 mV a +20 mV ativa o canal de hERG, resultando uma corrente de saída. A etapa de volta a -50 mV produz uma corrente de cauda sw saída, à medida que o canal se recupera da inativação e se desativa.

Amplitudes de pico de corrente durante a fase de repolarização foram determinadas usando o programa de computador pCLAMP. Os dados do artigo de controle e de teste foram exportados para o Origin® (OriginLab Corp.,

Northampton MA) , em que as amplitudes de corrente individuais foram normalizadas à amplitude de corrente inicial na ausência de composto. As médias da corrente normalizada e os errros-padrão para cada condição foram calculadas e colocadas em um gráfico versus o momento do experimento.

Foram feitas comparações entre as inibições observadas da corrente de K+ após uma exposição de cinco minutos tanto para o artigo de teste quanto para o controle de veículo (normalmente DMSO 0,3%) . Foram feitas comparações estatísticas entre grupos experimentais usando um teste t independente, de duas populações (Microcal Origin v. 6.0). As diferenças foram consideradas significativas com p < 0,05.

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101/104

Quanto menor a percentagem de inibição da corrente de íon potássio neste ensaio, menor o potencial para que os compostos de testes mudem o padrão de repolarização cardíaca quando usados como agentes terapêuticos. Os compostos da invenção que foram testados neste ensaio em uma concentração de 3 pM exibiram uma inibição da corrente de íon potássio menor do que aproximadamente 20%, tipicamente, menor do que aproximadamente 15%.

Ensaio 5: Modelo in vitro de Biodisponibilidade Oral: Ensaio de Penetração Caco-2

O ensaio de penetração Caco-2 foi realizado para modelar a habilidade dos compostos de testes para passarem através do intestino e penetrarem na corrente sangüínea após administração oral. Foi determinada a taxa na qual os compostos de testes em solução penetram em uma monocamada de células designadas para simular a junção estreita de monocamadas do intestino delgado humano.

Células caco-2 (adenocarcinoma de cólon humano) foram obtidas do ATCC (“American Type Culture Collection”; Rockville, MD) . Para o estudo de penetração, as células foram semeadas em uma densidade de 63.000 células/cm² em filtros de policarbonato pré-umedecidos trans-poços (Costar; Cambridge, MA). A monocamada de células foi formada após 21 dias em cultura. Após a cultura de células na placa trans-poços, a monocamada de células contendo membranas foi destacada da placa trans-poços e inserida na câmara de difusão (Costar; Cambridge, MA) . A câmara de difusão foi inserida no bloco de aquecimento que estava equipado com água circulante externa, regulada através de termostato a 37°C para controle da temperatura. A tubulação de 29/06/2018, pág. 105/121

102/104 de ar liberava O2 95%/CO2 5% a cada metade da câmara de difusão e criava um padrão de fluxo laminar através da monocamada de células, o que era eficaz na redução da camada-limite não agitada.

O estudo de penetração foi realizado com concentrações de composto de teste a 100 qM e com ¹⁴C-manitol para monitorar a integridade da monocamada. Todos os experimentos foram realizados a 37°C por 60 minutos. As amostras foram recolhidas em 0, 30 e 60 minutos tanto do lado doador quanto do receptor da câmara. As amostras foram analisadas por HPLC ou contagem de cintilação líquida para as concentrações de composto de teste e de manitol. Foi calculado o coeficiente de penetração (Kp) em cm/seg.

Neste ensaio, um valor Kp maior do que cerca de 10 x 10^-6 cm/seg é considerado indicativo de biodisponibilidade favorável. Os compostos da invenção que foram testados neste ensaio exibiram valores K^p entre cerca de 10 x 10^-6 cm/seg e cerca de 50 x 10^-6 cm/seg, tipicamente entre cerca de 20 x 10^-6 cm/seg e cerca de 40 x 10^-6 cm/seg.

Ensaio 6: Estudo de Farmacocinética no Rato

Foram preparadas formulações de solução aquosa de compostos de testes em lático ácido 0,1% em um pH entre cerca de 5 e cerca de 6. Ratos macho Sprague-Dawley (cepa CD, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) receberam os compostos de testes por meio de administração intravenosa (IV) em uma dose de 2,5 mg/kg ou por engorda oral (PO) em uma dose de 5 mg/kg. O volume da dosagem foi de 1 ml/kg para administração IV e 2 ml/kg para administração PO.

Foram coletadas amostras sangüíneas seriais dos de 29/06/2018, pág. 106/121

103/104 animais pré-dose e em 2 (somente IV), 5, 15 e 30 minutos, e em 1, 2, 4, 8 e 24 horas pós-dose. As concentrações de compostos de testes no plasma sangüíneo foram determinadas por análise de cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS/MS) (MDS SCIEX, API 4000, Applied Biosystems, Foster City, CA) com um limite inferior de quantificação de 1 ng/ml.

Os parâmetros farmacocinéticos-padrão foram avaliados por análise não compartimentalizada (Modelo 201 para IV e Modelo 200 para PO) usando WinNonlin (Versão 4.0.1, Pharsight, Mountain View, CA). O máximo na curva de concentração de composto de teste no plasma sangüíneo vs. tempo é chamado Cmax. A área sob a curva concentração vs. tempo a partir do momento da dosagem até a última concentração mensurável (AUC(0-t)) foi calculado pela regra linear trapezóide. A biodisponibilidade oral (F(%)), ou seja, a proporção normalizada da dose de AUC(0-t) para administração PO em relação à AUC(0-t) para administração IV, foi calculada como:

F(%) = AUCpo/AUCiv x DoseIV/DosePO x 100%

Espera-se que os compostos que exibem valores maiores dos parâmetros Cmax, AUC(0-t) e F(%) neste ensaio tenham maior biodisponibilidade quando administrados por via oral. Os compostos da invenção que foram testados neste ensaio tiveram valores Cmax tipicamente variando de cerca de 0,1 a cerca de 0,25 qg/ml e valores AUC(0-t) tipicamente variando de cerca de 0,4 a cerca de 0,9 qg*hora/ml. Como exemplo, o composto do Exemplo 1 teve um valor Cmax de 0,17 qg/ml, um valor AUC(0-t) de 0,66 qg*hora/ml e biodisponibilidade oral (F(%)) no modelo em rato de cerca de 35%.

de 29/06/2018, pág. 107/121

104/104

Embora a presente invenção tenha sido descrita com relação às modalidades específicas desta, deve ser entendido por aqueles com habilidade na técnica que podem ser feitas várias alterações e que equivalentes podem ser substituídos, sem se afastar do espírito e escopo da invenção. Além disso, podem ser feitas muitas modificações para adaptar uma situação, material, composição de matérias, processo, etapa do ou etapas processo em particular, ao objetivo, espírito e escopo da presente invenção. Todas estas modificações visam ser incluídas dentro do escopo das reivindicações em anexo. Adicionalmente, todas as publicações, patentes e documentos de patentes citados anteriormente são aqui incorporados por referência em sua totalidade, como se fossem aqui incorporados individualmente por referência.

Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 108/121

1/9

Claims (9)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto, caracterizado pelo fato de ter a fórmula (I) :

   N—R⁴ R⁵ (I) onde:

   R¹ é hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-4alquil ou Ci4alcoxi;

   R² é C3-4alquil ou C3-6CÍcloalquil;

   R³ é hidrogênio ou Ci-3alquil;

   R⁴ é -S(O)₂R⁶ ou —C(O)R⁷;

   R⁵ é hidrogênio, Ci-3alquil, C2-3alquil substituído com -OH ou Ci-3alcoxi ou — 0Η₂—piridil;

   R⁶ é Ci-3alquil;

   ou, R⁵ e R⁶ tomados em conjunto formam C3-4alquilenil;

   e

   R⁷ é hidrogênio, C i-3alquil ou piridil;

   ou um sal ou estereoisômero farmaceuticamente aceitáveis desses.
2. 2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que:

   R⁵ é hidrogênio, Ci-3alquil, C2-3alquil substituído com -OH ou Ci-3alcoxi ou —0Η₂—piridil; e

   R⁶ é Ci-3alquil.
3. 3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R¹ é hidrogênio ou halo.

   de 29/06/2018, pág. 109/121

   2/9

   4 . Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R² é C3- 4alquil. 5. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R⁴ é —S (O) 2R⁶. 6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R⁴ é —S (O) 2CH3. 7 . Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R⁴ é —C (O) R⁷. 8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que R⁷ é hidrogênio ou metil. 9. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R⁵ é hidrogênio ou metil. 10. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que:

   R¹ é hidrogênio;

   R² é C3-4alquil ou C4-5CÍcloalquil;

   R³ é hidrogênio;

   R⁴ é -S(O)2R⁶ ou —C(O)R⁷;

   R⁵ é hidrogênio ou Ci-3alquil;

   R⁶ é Ci-3alquil; e

   R⁷ é hidrogênio ou Ci-3alquil.

   11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado de:

   {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il)amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[2-metoxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[3-(metanossulfonil-piridin-3-ilmetilde 29/06/2018, pág. 110/121

   3/9 amino)-2-metoxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(2-hidroxi-3-metanossulfonilamino) propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8[3-(metanossulfonil-piridin-3-ilmetilamino)-2-hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico ;

   {(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8[2-hidroxi-3-[metil-(piridina-4carbonil)amino]propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8[2-hidroxi-3-[(piridina-4-carbonil)amino] propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico;

   { (1S, 3R, 5R)-8-[3-(acetil-metil-amino)-2-metoxipropil] -8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[2-metoxi-3-[metil-(piridina-4-carbonil) amino]propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8[3-(acetil-piridin-3-ilmetil-amino)-2metoxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1de 29/06/2018, pág. 111/121
4. 4/9 isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8[3-acetilamino-2-hidroxipropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[3-(acetil-metil-amino)-2-hidroxipropil] -8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[3-(formil-metil-amino)-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[3-formilamino-2-hidroxipropil]-8azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-3-(acetil-metil-amino)-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-3-(formil-metil-amino)-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidro-quinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 5bromo-1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(metanossulfonil-etilamino) propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonilamino) propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico; e {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(1,1-dioxo-2isotiazolidinil)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de 29/06/2018, pág. 112/121
5. 5/9 de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3carboxílico; e sais e estereoisômeros farmaceuticamente aceitáveis desses.

   12. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado de:

   {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(metanossulfonilamino) propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   { (1S, 3R,5R)-8-[ (S)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[3-(acetil-metil-amino)-2-hidroxipropil] -8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[3-(formil-metil-amino)-2-hidroxipropil] -8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-3-(acetil-metil-amino)-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-3-(formil-metil-amino)-2hidroxipropil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido

   1-isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   de 29/06/2018, pág. 113/121
6. 6/9 {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonilamino) propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolinona-3-carboxílico; e sais farmaceuticamente aceitáveis e estereoisômeros desses.

   13. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado de:

   {(1S,3R,5R)-8-[2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(S)-2-hidroxi-3-(metanossulfonil-metilamino)propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico;

   {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-hidroxi-3-(metanossulfonilamino) propil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1isopropil-2-oxo-1,2-dihidroquinolina-3-carboxílico; e sais farmaceuticamente aceitáveis e estereoisômeros desses.

   14. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

   15. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar uma condição médica em um mamífero associada à atividade do receptor 5HT4.

   de 29/06/2018, pág. 114/121
7. 7/9

   16. Processo para preparação de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, o processo caracterizado por compreender:

   (a) a reação de um composto de fórmula III:

   NH

   OR³ com composto da fórmula L—R⁴, em que L é um qrupo de saída, ou L—R⁴ representa HO-C(O)R⁷; ou (b) a reação de um composto de fórmula (VIII):

   (VIII) com um composto de fórmula (IX):

   h₂n \J (IX) para fornecer um composto de fórmula (I), ou um sal ou estereoisômeros farmaceuticamente aceitáveis desses.

   17. Processo para preparação de um composto de fórmula (I’

   OH (I' )

   N—R'¹ R⁵ de 29/06/2018, pág. 115/121
8. 8/9 em que R¹, R², R⁴ e R⁵ são como definidos na reivindicação 1; ou um sal ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável desse, o processo caracterizado por compreender a reação de um composto de fórmula (IV):

   ou um sal desse, com um composto de fórmula (XI):

   (XI) para fornecer um composto de fórmula (I') ou um sal ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável desse.

   18. Composto, caracterizado pelo fato de ter a fórmula onde:

   R¹ é hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-4alquil ou Ci4alcoxi;

   R² é C3-4alquil ou C3-6OÍcloalquil;

   R³ é hidrogênio ou Ci-3alquil;

   R⁴ é -S(O)₂R⁶ ou —C(O)R⁷; e

   R⁵ é hidrogênio, Ci-3alquil, C2-3alquil substituído com de 29/06/2018, pág. 116/121
9. 9/9

   -OH ou Ci-3alcoxi ou —CH2—piridil;

   ou um sal ou estereoisômero ou derivado protegido desse.

   Petição 870180056459, de 29/06/2018, pág. 117/121