BR122021026652B1 - Método in vitro para diagnosticar fibrilação atrial intermitente, uso de uma troponina cardíaca e dispositivo para diagnosticar fibrilação atrial intermitente - Google Patents

Método in vitro para diagnosticar fibrilação atrial intermitente, uso de uma troponina cardíaca e dispositivo para diagnosticar fibrilação atrial intermitente Download PDF

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Abstract

A presente invenção refere-se a um método de diferenciação inicial se um paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica. O método é baseado na determinação da quantidade de uma troponina cardíaca em uma amostra de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica obtida em menos de 24 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. São adicionalmente idealizados pela presente invenção kits e dispositivos adaptados para a condução do método de acordo com a presente invenção.

Description

[001] A presente invenção refere-se a um método para diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica. O método é baseado na determinação da quantidade de uma troponina cardíaca em uma amostra de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica obtida em menos de 24 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. Além disso, a presente invenção refere-se a um método de diagnóstico de fibrilação atrial em pacientes. São adicionalmente idealizados pela presente invenção kits e dispositivos adaptados para a condução do método de acordo com a presente invenção. A presente invenção também se refere a um sistema de diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica e de diagnóstico da fibrilação atrial. Além disso, a presente invenção refere-se a reagentes e kits utilizados para realizar os métodos descritos no presente.
[002] Apoplexia aparece após doenças cardíacas isquêmicas como a segunda maior causa de anos perdidos por vida ajustada a incapacidades em países com alta renda e de morte em todo o mundo. Se as consequências adversas iniciais da apoplexia apresentadas puderem ser melhoradas utilizando trombólise, no caso de apresentação posterior, a prevenção secundária (para evitar apoplexia subsequente) utilizando aspirina e anticoagulantes aparentemente é o único método apropriado para evitar a progressão da doença (van der Worp, B. e van Gijn, J., NEJM2007: 357: 572 - 578).
[003] A fim de evitar ou tratar a apoplexia, a identificação da causa subjacente da apoplexia é importante. Isso foi abordado pelos critérios TOAST (Adams, H. P. et al, Stroke 1993: 24: 35-41). Os critérios TOAST dissecam as causas de apoplexia em aterotrombóticas (arteriosclerose de vasos grandes), cardioembólicas, lacunares (que envolve vasos pequenos) e não determinadas (Adams, H. P. et al). A fim de determinar esses critérios, é necessário ultrassom transcraniano e da carótide, bem como ecocardiografia e eletrocardiograma (Rodrigues-Yanez et al, Disease Markers 2009: 26: 189-195). Até aqui, NT- proBNP foi associado a apoplexia cardioembólica, mas não a apoplexia aterotrombótica, lacunar e não determinada (Rodriguez-Yanez et al). Uma desvantagem importante deste método é o fato de que BNP ou NT-proBNP poderão ser liberados pelo cérebro em apoplexia isquêmica e, portanto, limitar o potencial de diagnóstico de peptídeos natriuréticos do tipo cerebral. De forma interessante, demonstrou-se no contexto dos estudos conduzidos pelos inventores que o nível médio em soro de NT-proBNP em pacientes com apoplexia aumentou a partir da apresentação de 331 pg/ml até o acompanhamento por 24 horas (437 pg/ml) em cerca de 30%. Desta forma, o diagnóstico de apoplexia cardioembólica com base na determinação de peptídeos natriuréticos é baseado no momento em que é obtida a amostra a ser testada. Existe, portanto, a necessidade de identificar marcadores de risco que não sejam liberados pelo cérebro.
[004] Troponinas cardíacas T e I são os biomarcadores preferidos para o diagnóstico de enfarte agudo do miocárdio (Anderson, J. L., ACC/AHA 2007 Guidelines for the Management of Patients with Unstable Angina/Non-ST- Elevation Myocardial Infarction, J. Am. Coll. Cardiol. 2007; 50 (7): e1-e157). Reconheceu-se que níveis elevados de troponina podem ser detectados em diversos estados de doenças crônicas não agudas, incluindo doença das artérias coronarianas, parada cardíaca e doença renal crônica (vide, por exemplo, Omland et al, N. Engl. J. Med. 2009; 361 (26): 2538-2547). Também se demonstrou que troponinas T e I são detectáveis em indivíduos da população geral (vide, por exemplo, Wallace et al, Prevalence and Determinants of Troponin T Elevation in the General Population, Circulation, 2006; 113 (16): 1958-1965).
[005] Song et al (Journal of Clinical Neurology, Volume 4, 2006, págs. 75 a 83) descrevem um estudo que inclui 455 pacientes com apoplexia isquêmica. Troponina T em soro foi elevada em cerca de 10% dos pacientes e associada a maior severidade de apoplexia, particularmente com déficits neurológicos mais severos e danos ao lóbulo insular. Os autores do estudo concluem que níveis elevados de troponina no soro podem ser indicativos de menor tolerância cardíaca à tensão causada pela apoplexia isquêmica aguda. Desta forma, segundo Song et al, o aumento da troponina seria causado por apoplexia aguda, ou seja, seguiria o evento agudo.
[006] No contexto da presente invenção, demonstrou-se, surpreendentemente, que níveis de troponina cardíaca elevados em pacientes com apoplexia cardioembólica já são detectáveis no início da apoplexia cardioembólica. Desta forma, ao contrário dos ensinamentos de Song et al, o aumento do nível de troponinas cardíacas não é causado pelo evento de apoplexia. Ao contrário, os estudos de acordo com a presente invenção sugerem que os níveis de troponinas cardíacas já são mais altos antes do início dos sintomas de apoplexia. A determinação de troponinas cardíacas permite, portanto, diferenciação precoce entre apoplexia isquêmica cardioembólica e apoplexia isquêmica não cardioembólica no paciente. Isso é vantajoso, pois a determinação precoce da causa de apoplexia é crucial para o tratamento suficiente de pacientes que sofrem de apoplexia, particularmente pacientes que sofrem de apoplexia cardioembólica. Além disso, apoplexias devido a cardioembolia geralmente são severas e propensas a recorrência precoce.
[007] Métodos convencionais de diagnóstico normalmente não permitem a determinação precoce confiável da causa da apoplexia. Consequentemente, um regime de tratamento personalizado não pode ser determinado com precisão suficiente. Por isso, muitos pacientes receberão regime de tratamento que é insuficiente ou que pode causar efeitos colaterais adversos. São necessários, portanto, meios e métodos de diferenciação confiável entre as causas de apoplexia.
[008] O problema técnico subjacente à presente invenção pode ser considerado o fornecimento de meios e métodos para atender à necessidade mencionada acima.
[009] O problema técnico é solucionado pelas realizações caracterizadas nas reivindicações e no presente abaixo.
[010] Consequentemente, o método de acordo com a presente invenção de diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica compreende: a. determinação da quantidade de troponina cardíaca em uma amostra de paciente que sofre de apoplexia isquêmica; em que a amostra foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica.
[011] Em uma realização preferida, o método compreende adicionalmente a etapa de: b. comparação da quantidade da mencionada troponina cardíaca conforme determinado na etapa (a) com uma quantidade de referência, de forma a diferenciar se o mencionado paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica.
[012] A presente invenção refere-se particularmente, portanto, a um método para diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, que compreende: c. determinação da quantidade de uma troponina cardíaca em uma amostra de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica; e d. comparação da quantidade da mencionada troponina cardíaca conforme determinado na etapa (a) com uma quantidade de referência, de forma a diferenciar se o mencionado paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica.
[013] Preferencialmente, diferencia-se se um paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica por meio de condução da etapa adicional (c) diagnóstico se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, com base nos resultados da comparação conduzida na etapa (b).
[014] Em uma realização preferida do método de acordo com a presente invenção, a etapa (a) compreende adicionalmente a determinação da quantidade de um peptídeo natriurético na amostra do paciente obtida imediatamente após o início da apoplexia isquêmica. Preferencialmente, a quantidade determinada desta forma do peptídeo natriurético é comparada na etapa (b) com uma quantidade de referência para um peptídeo natriurético.
[015] A presente invenção também se refere, portanto, a um método para diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, que compreende: a. determinação da quantidade de uma troponina cardíaca e de peptídeo natriurético em uma amostra de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica obtidas imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica; e b. comparação da quantidade da mencionada troponina cardíaca conforme determinado na etapa (a) com uma quantidade de referência para a troponina cardíaca e a quantidade do mencionado peptídeo natriurético com uma quantidade de referência do peptídeo natriurético, de forma a diferenciar se o mencionado paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica.
[016] O método de acordo com a presente invenção é preferencialmente um método ex vivo. Além disso, ele pode compreender etapas adicionais às mencionadas explicitamente acima. Etapas adicionais podem referir-se, por exemplo, a tratamentos prévios da amostra ou avaliação dos resultados obtidos por meio do método. O método pode ser conduzido manual ou automaticamente. Preferencialmente, a etapa (a) e/ou (b) pode, no todo ou em parte, ser assistida por automação, tal como por um equipamento sensorial e robótico apropriado para determinação na etapa (a) ou uma comparação implementada por computador e/ou diferenciação com base na mencionada comparação na etapa (b).
[017] Consequentemente, a presente invenção também se refere preferencialmente a um sistema de diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, que compreende: a. uma unidade analisadora configurada para colocar em contato, in vitro, uma parte de uma amostra de paciente que sofre de apoplexia isquêmica com um ligante que compreende afinidade de ligação específica para uma troponina cardíaca; b. uma unidade analisadora configurada para detectar um sinal da parte da amostra do paciente colocado em contato com o ligante; c. um dispositivo de computação que possui um processador e encontra-se em comunicação operativa com as mencionadas unidades de análise; e d. um meio legível por máquina não transitório que inclui uma série de instruções executáveis por um processador, em que as instruções, quando executadas, calculam uma quantidade de troponina cardíaca e comparam a quantidade do marcador com uma quantidade de referência, de forma a diferenciar se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica.
[018] O termo “diferenciação”, da forma utilizada no presente, indica a diferenciação entre apoplexia cardioembólica e apoplexia não cardioembólica em pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica. O termo, da forma utilizada no presente, inclui preferencialmente o diagnóstico de diferenciação entre apoplexia isquêmica cardioembólica e apoplexia isquêmica não cardioembólica em pacientes. Como compreenderão os técnicos no assunto, essa determinação normalmente não se destina a ser correta para 100% dos pacientes a serem diagnosticados de forma diferencial. O termo requer, entretanto, que uma parte estatisticamente significativa de pacientes possa ser diagnosticada corretamente. Pode-se confirmar se um diagnóstico/diferenciação é correto por meio de métodos bem conhecidos na técnica. Além disso, os técnicos no assunto podem determinar se uma parte é estatisticamente significativa sem esforço adicional utilizando diversas ferramentas de avaliação estatística bem conhecidas, tais como a determinação de intervalos de confiança, determinação de valores p, teste t de Student, teste de Mann-Whitney etc. Detalhes são encontrados em Dowdy e Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1983. Os intervalos de confiança preferidos são de pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%. Os valores p são preferencialmente de 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 ou 0,0001.
[019] O termo “paciente”, da forma utilizada no presente, refere-se a animais, preferencialmente mamíferos e, de maior preferência, seres humanos. Preferencialmente, o paciente sofre ou não sofre de infecções agudas. Além disso, idealiza-se ainda que o paciente não sofre de síndrome coronariana aguda e/ou de falhas renais crônicas. Particularmente, o paciente no contexto do método mencionado acima deverá ter função renal normal. Além disso, o paciente é preferencialmente um paciente que se apresenta a uma unidade de pronto atendimento.
[020] A definição do paciente fornecida no presente aplica-se preferencialmente ao paciente a ser testado segundo o método de acordo com a presente invenção, bem como ao(s) paciente(s) do(s) qual(is) é derivada a quantidade de referência.
[021] O paciente a ser testado segundo o método de acordo com a presente invenção deverá sofrer de apoplexia isquêmica. A expressão “apoplexia isquêmica” (também denominada no presente “apoplexia”) é bem conhecida dos técnicos no assunto (vide, por exemplo, Adams et al, Guidelines for the Early Management of Adults with Ischemic Stroke, A Guideline from the American Heart Association/American Stroke Association Stroke Council, Clinical Cardiology Council, Cardiovascular Radiology and Intervention Council e Atherosclerotic Peripheral Vascular Disease and Quality of Care Outcomes em Research Interdisciplinary Working Groups in Stroke, 2007; 38: 1655; ou Stroke Genetics, editado por Hugh S. Markus, Capítulo 1, An Introduction to Stroke, Oxford University Press, Incorporated, data de publicação 06/03, ambos os quais são incorporados ao presente como referência com relação ao teor completo da sua descrição). Da forma utilizada no presente, o termo refere-se preferencialmente a apoplexia isquêmica cerebral. Apoplexia isquêmica é causada pela redução do fluxo de sangue para o cérebro ou suas partes, o que gera fornecimento reduzido (subfornecimento) de oxigênio às células cerebrais. Apoplexia isquêmica pode ser caracterizada por anemia de tecido causada pela obstrução do fluxo de entrada de sangue arterial. Ela pode gerar danos irreversíveis ao tecido devido à morte de células cerebrais.
[022] Existem diversos sistemas de classificação para apoplexia isquêmica. A classificação do Projeto de Apoplexia da Comunidade de Oxford (OCSP, também conhecida como classificação Bamford ou Oxford) depende principalmente dos sintomas iniciais; com base na extensão dos sintomas, o episódio de apoplexia é classificado como enfarte de circulação anterior total (TACI), enfarte de circulação anterior parcial (PACI), enfarte lacunar (LACI) ou enfarte de circulação posterior (POCI). Estas quatro entidades preveem a extensão da apoplexia, a área afetada do cérebro, a causa subjacente e o prognóstico.
[023] Preferencialmente, os chamados critérios TOAST são aplicados no presente. Para os critérios TOAST, vide, por exemplo, Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. (maio de 2008), Stroke, Lancet 371 (9624): 1612-23 ou Classification of Subtype of Acute Ischemic Stroke, Definitions for Use in a Multicenter Clinical Trial, TOAST, Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment, Stroke 24 (1): 35-41, ambos os quais são incorporados ao presente como referência com relação a todo o teor da descrição. A classificação TOAST (Teste de Organismo 10172 em Tratamento de Apoplexia Aguda) é baseada em sintomas clínicos, bem como em resultados de pesquisas adicionais; com base nisso, a apoplexia é classificada como devendo-se a (1) embolia de origem cardíaca (apoplexia cardioembólica); (2) trombose ou embolia devido à arteriosclerose de uma artéria grande (estenose de artéria grande, apoplexia aterotrombótica); (3) obstrução de vasos sanguíneos pequenos (apoplexia lacunar) ou (4) causa indeterminada (duas causas possíveis: nenhuma causa identificada ou investigação incompleta). Desta forma, apoplexias isquêmicas não cardioembólicas preferidas são apoplexia aterotrombótica (vide 2) e apoplexia lacunar (vide 3).
[024] Pode-se determinar por meio de métodos bem conhecidos se um paciente sofre de apoplexia, particularmente de apoplexia isquêmica. Além disso, sintomas de apoplexia são bem conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Adams et al (loc. cit.). Sintomas de apoplexia incluem, por exemplo, dormência súbita ou fraqueza da face, braço ou perna, especialmente sobre um lado do corpo, confusão súbita, problemas de fala ou compreensão, problemas súbitos de visão com um ou os dois olhos e problemas súbitos no andar, vertigens, perda de equilíbrio ou coordenação.
[025] O termo “amostra” designa uma amostra de fluido do corpo, amostra de células separadas ou amostra de tecido ou órgão. Amostras de fluidos do corpo podem ser obtidas por meio de métodos bem conhecidos e incluem preferencialmente amostras de sangue, plasma, soro ou urina, de maior preferência amostras de sangue, plasma ou soro. Amostras de órgãos ou tecidos podem ser obtidas de qualquer tecido ou órgão, por exemplo, por meio de biópsia. Células separadas podem ser obtidas dos fluidos do corpo ou dos tecidos ou órgãos por meio de métodos de separação tais como centrifugação ou seleção celular. Preferencialmente, amostras de células, tecidos ou órgãos são obtidas dessas células, tecidos ou órgãos que expressam ou produzem os peptídeos indicados no presente.
[026] A amostra a ser testada no contexto do método de acordo com a presente invenção deverá haver sido obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia (bem como a amostra de referência). Preferencialmente, uma amostra é considerada como havendo sido obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia caso tenha sido obtida do mencionado paciente em menos de 24 horas, particularmente em menos de 12 horas após o início dos sintomas de apoplexia. De maior preferência, uma amostra é considerada como havendo sido obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia caso tenha sido obtida do mencionado paciente em menos de 6 horas, particularmente em menos de 3 horas após o início dos sintomas de apoplexia. Idealiza-se ainda que a amostra tenha sido obtida em menos de uma ou duas horas após o início dos sintomas de apoplexia.
[027] A expressão “troponina cardíaca” designa todas as isoformas de troponina expressas em células do coração e, preferencialmente, as células subendocardiais. Essas isoformas são bem caracterizadas na técnica conforme descrito, por exemplo, em Anderson, 1995, Circulation Research, vol. 76, n° 4: 681-686 e Ferrieres, 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493. Preferencialmente, troponina cardíaca designa Troponina T e/ou Troponina I e, de preferência superior, Troponina T. Deve-se compreender que isoformas de troponinas podem ser determinadas no método de acordo com a presente invenção juntas, ou seja, simultânea ou sequencialmente, ou individualmente, ou seja, sem determinar a outra isoforma. Sequências de aminoácidos de Troponina T humana e Troponina I humana são descritas em Anderson, loc cit, e Ferrieres, 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493.
[028] A expressão “troponina cardíaca” também engloba variantes das troponinas específicas mencionadas acima, ou seja, preferencialmente, Troponina I e, de maior preferência, Troponina T. Essas variantes possuem pelo menos as mesmas propriedades biológicas e imunológicas essenciais de troponinas cardíacas específicas. Particularmente, elas compartilham as mesmas propriedades biológicas e imunológicas essenciais se forem detectáveis pelos mesmos testes específicos indicados no presente relatório descritivo, tal como por meio de testes ELISA utilizando anticorpos monoclonais ou policlonais que reconhecem especificamente as mencionadas troponinas cardíacas. Além disso, deve-se compreender que uma variante indicada de acordo com a presente invenção deverá ter sequência de aminoácidos diferente devido a pelo menos uma substituição, exclusão e/ou adição de aminoácido, em que a sequência de aminoácidos da variante é ainda, preferencialmente, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 92%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98% ou pelo menos de cerca de 99% idêntica à sequência amino da troponina específica. Preferencialmente, o grau de identidade deve ser determinado por meio da comparação de duas sequências idealmente alinhadas ao longo de uma janela de comparação, em que o fragmento da sequência de aminoácidos na janela de comparação pode compreender adições ou exclusões (tais como intervalos ou sobreposições) em comparação com a sequência de referência (que não compreende adições nem exclusões) para alinhamento ideal. O percentual é calculado por meio de determinação da quantidade de posições em que o resíduo de aminoácidos idêntico ocorre nas duas sequências para gerar o número de posições coincidentes, dividindo o número de posições coincidentes pelo número total de posições na janela de comparação e multiplicando o resultado por cem para gerar o percentual de identidade de sequências. Alinhamento ideal de sequências para comparação pode ser conduzido pelo algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, Add. APL. Math. 2: 482 (1981), por meio do algoritmo de alinhamento de homologia de Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443 (1970), pelo método de busca de similaridades de Pearson e Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. (U. S. A.) 85: 2444 (1988), por implementações computadorizadas desses algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA no Pacote de Software da Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) ou por meio de inspeção visual. Considerando que duas sequências foram identificadas para comparação, GAP e BESTFIT são preferencialmente empregados para determinar o seu alinhamento ideal e, portanto, o grau de identidade. Preferencialmente, são utilizados os valores padrão de 5,00 para peso de lacuna e 0,30 para comprimento de peso de lacuna. Variantes podem ser variantes alélicas ou homólogos, parálogos ou ortólogos específicos de qualquer outra espécie. Além disso, as variantes indicadas no presente incluem fragmentos das troponinas cardíacas específicas ou os tipos de variantes mencionados acima, desde que esses fragmentos possuam as propriedades biológicas e imunológicas essenciais indicadas acima. Preferencialmente, as variantes de troponina cardíaca possuem propriedades imunológicas (ou seja, composição de epítopos) comparáveis com as de troponina T ou troponina I humana. Desta forma, as variantes deverão ser reconhecíveis pelos meios mencionados acima ou ligantes utilizados para determinar a concentração das troponinas cardíacas. Esses fragmentos podem ser, por exemplo, produtos de degradação das troponinas. São adicionalmente incluídas variantes que diferem devido a modificações pós-tradução tais como fosforilação ou miristilação. Preferencialmente, a propriedade biológica de troponina I e sua variante é a capacidade de inibir ATPase de actomiosina ou inibir a angiogênese in vivo e in vitro, o que pode ser detectado, por exemplo, com base no teste descrito por Moses et al, 1999, PNAS USA 96 (6): 2645-2650). Preferencialmente, a propriedade biológica de troponina T e sua variante é a capacidade de formação de complexo com troponina C e I, ligação íons de cálcio ou ligação a tropomiosina, preferencialmente quando presente na forma de complexo de troponina C, I e T ou complexo formado por troponina C, troponina I e uma variante de troponina T. Sabe-se que baixas concentrações de troponina cardíaca em circulação podem ser detectadas em pacientes sob várias condições, mas estudos adicionais são necessários para compreender o seu papel e velocidade correspondente (Masson et al, Curr. Heart Fail Rep. (2010) 7: 15-21).
[029] A expressão “peptídeo natriurético” compreende peptídeos do tipo peptídeo natriurético atrial (ANP) e peptídeo natriurético cerebral (BNP) e suas variantes que possuem o mesmo potencial de previsão. Peptídeos natriuréticos de acordo com a presente invenção compreendem peptídeos do tipo ANP e do tipo BNP e suas variantes (vide, por exemplo, Bonow, 1996, Circulation 93: 1946-1950). Peptídeos do tipo ANP compreendem pré-proANP, proANP, NT-proANP e ANP. Peptídeos de tipo BNP compreendem pré-proBNP, proBNP, NT-proBNP e BNP. O peptídeo pré-pro (134 aminoácidos no caso de pré-proBNP) compreende um peptídeo de sinal curto, que é dividido enzimaticamente para liberar o peptídeo pro (108 aminoácidos no caso de proBNP). O peptídeo pro é adicionalmente dividido em um peptídeo pro N- terminal (peptídeo NT-pro, 76 aminoácidos no caso de NT-proBNP) e no hormônio ativo (32 aminoácidos no caso de BNP, 28 aminoácidos no caso de ANP). Preferencialmente, peptídeos natriuréticos de acordo com a presente invenção são NT-proANP, ANP e, de maior preferência, NT-proBNP, BNP e suas variantes. ANP e BNP são os hormônios ativos e possuem meia vida mais curta que os seus parceiros inativos correspondentes, NT-proANP e NT-proBNP. BNP é metabolizado no sangue, enquanto NT-proBNP circula no sangue como molécula intacta e, desta forma, é eliminado por via renal. A meia vida in vivo de NT-proBNP é 120 minutos mais longa que a de BNP, que é de 20 minutos (Smith, 2000, J. Endocrinol. 167: 239-46). Pré-analíticos são mais robustos com NT- proBNP, o que permite fácil transporte da amostra para um laboratório central (Mueller, 2004, Clin. Chem. Lab. Med. 42: 942-4). Amostras de sangue podem ser armazenadas à temperatura ambiente por vários dias ou podem ser remetidas ou embarcadas sem perda de recuperação. Por outro lado, armazenagem de BNP por 48 horas à temperatura ambiente ou a 4 °C gera perda de concentração de pelo menos 20% (Mueller, loc cit; Wu, 2004, Clin. Chem. 50: 867-73). Dependendo do transcurso ou propriedades de interesse, portanto, qualquer medição das formas ativas ou inativas do peptídeo natriurético pode ser vantajosa. Os peptídeos natriuréticos de preferência superior de acordo com a presente invenção são NT-proBNP ou suas variantes. Conforme discutido resumidamente acima, o NT-proBNP humano, conforme indicado de acordo com a presente invenção, é um polipeptídeo que compreende, preferencialmente, 76 aminoácidos de comprimento correspondentes à parte N-terminal da molécula NT-proBNP humana. A estrutura de BNP e NT-proBNP humano já foi descrita em detalhes no estado da técnica, tal como WO 02/089657, WO 02/083913 ou Bonow, loc cit. Preferencialmente, NT-proBNP humano, da forma utilizada no presente, é NT- proBNP humano conforme descrito em EP 0.648.228 B1. Estes documentos do estado da técnica são incorporados ao presente como referência com relação às sequências específicas de NT-proBNP e suas variantes neles descritas. O NT- proBNP indicado de acordo com a presente invenção engloba adicionalmente variantes alélicas e outras da mencionada sequência específica para NT-proBNP humano discutido acima. Especificamente, são idealizados polipeptídeos variantes que se encontram preferencialmente sobre o nível de aminoácidos, pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% ou 99% idênticos a NT-proBNP humano, preferencialmente ao longo de todo o comprimento de NT-proBNP humano. O grau de identidade entre duas sequências de aminoácidos pode ser determinado por algoritmos bem conhecidos na técnica. Preferencialmente, o grau de identidade deve ser determinado por meio da comparação de duas sequências idealmente alinhadas ao longo de uma janela de comparação, em que o fragmento da sequência de aminoácidos na janela de comparação pode compreender adições ou exclusões (tais como intervalos ou sobreposições) em comparação com a sequência de referência (que não compreende adições nem exclusões) para alinhamento ideal. O percentual é calculado por meio de determinação da quantidade de posições em que o resíduo de aminoácidos idêntico ocorre nas duas sequências para gerar o número de posições coincidentes, dividindo o número de posições coincidentes pelo número total de posições na janela de comparação e multiplicando o resultado por cem para gerar o percentual de identidade de sequências. Alinhamento ideal de sequências para comparação pode ser conduzido pelo algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, Add. APL. Math. 2: 482 (1981), pelo algoritmo de alinhamento de homologia de Needleman e Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443 (1970), por meio do método de alinhamento de busca local de Pearson e Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. (U. S. A.) 85: 2444 (1988), por implementações computadorizadas desses algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA e TFASTA no Pacote de Software da Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) ou por meio de inspeção visual. Considerando que duas sequências foram identificadas para comparação, GAP e BESTFIT são preferencialmente empregados para determinar o seu alinhamento ideal e, portanto, o grau de identidade. Preferencialmente, são utilizados os valores padrão de 5,00 para peso de lacuna e 0,30 para comprimento de peso de lacuna. Variantes indicadas acima podem ser variantes alélicas ou outros homólogos, parálogos ou ortólogos específicos de qualquer outra espécie. Também são idealizados e substancialmente similares produtos de degradação proteolítica que ainda são reconhecidos pelos meios de diagnóstico ou por ligantes dirigidos contra o peptídeo com comprimento total correspondente. Também são englobados polipeptídeos variantes que contêm exclusões, substituições e/ou adições de aminoácidos em comparação com a sequência de aminoácidos de NT-proBNP humano, desde que os mencionados polipeptídeos possuam propriedades de NT-proBNP. As propriedades de NT-proBNP indicadas no presente são propriedades biológicas e/ou imunológicas. Preferencialmente, as variantes de NT-proBNP possuem propriedades imunológicas (ou seja, composição de epítopos) comparáveis com as de NT-proBNP humano. Desta forma, as variantes deverão ser reconhecíveis pelos meios mencionados acima ou ligantes utilizados para determinar a quantidade dos peptídeos natriuréticos. Propriedades biológicas e/ou imunológicas de NT-proBNP podem ser detectadas por meio do teste descrito em Karl et al (Karl, 1999, Scand. J. Clin. Lab. Invest. 230: 177-181) e Yeo et al (Yeo, 2003, Clinica Chimica Acta 338: 107-115). Variantes também incluem peptídeos modificados após a tradução tais como peptídeos glicosilados. Além disso, uma variante de acordo com a presente invenção também é um peptídeo ou polipeptídeo que tenha sido modificado após a coleta da amostra, por exemplo, por meio de ligação covalente ou não covalente de uma marca, particularmente uma marca radioativa ou fluorescente, ao peptídeo.
[030] A determinação da quantidade de um peptídeo ou polipeptídeo indicado no presente relatório descritivo refere-se à medição da quantidade ou concentração, preferencialmente quantitativa ou semiquantitativamente. A medição pode ser realizada direta ou indiretamente. Medição direta refere-se à medição da quantidade ou concentração do peptídeo ou polipeptídeo com base em um sinal que é obtido do próprio peptídeo ou polipeptídeo e cuja intensidade relaciona-se diretamente com a quantidade de moléculas do peptídeo presente na amostra. Esse sinal (às vezes denominado no presente sinal de identidade) pode ser obtido, por exemplo, medindo-se um valor de intensidade de uma propriedade física ou química específica do peptídeo ou polipeptídeo. Medição indireta inclui a medição de um sinal obtido de um componente secundário (ou seja, um componente que não seja o próprio peptídeo ou polipeptídeo) ou um sistema de leitura biológica, tal como reações celulares mensuráveis, ligantes, marcas ou produtos de reação enzimática.
[031] Segundo a presente invenção, a determinação da quantidade de um peptídeo ou polipeptídeo pode ser atingida por todos os meios conhecidos de determinação da quantidade de peptídeos em uma amostra. Os mencionados meios compreendem imunoteste e métodos que podem utilizar moléculas marcadas em diversos formatos de teste de sanduíche, competição ou outros. Esses testes são preferencialmente baseados em agentes de detecção tais como anticorpos que reconhecem especificamente o peptídeo ou polipeptídeo a ser determinado. Os agentes de detecção serão capazes, direta ou indiretamente, de gerar um sinal que indica a presença ou ausência do peptídeo ou polipeptídeo. Além disso, a potência de sinal pode ser preferencialmente correlacionada direta ou indiretamente (tal como reversamente proporcional) à quantidade de polipeptídeo presente em uma amostra. Métodos apropriados adicionais compreendem a medição de uma propriedade física ou química específica para o peptídeo ou polipeptídeo, tal como a sua massa molecular precisa ou espectro de NMR. Os mencionados métodos compreendem preferencialmente biossensores, dispositivos óticos acoplados a imunotestes, biochips, dispositivos analíticos tais como espectrômetros de massa, analisadores de NMR ou dispositivos cromatográficos. Além disso, os métodos incluem métodos com base em ELISA de microplacas, imunotestes robóticos ou totalmente automatizados (disponíveis, por exemplo, em analisadores Elecsys®), CBA (teste de ligação de cobalto enzimático, disponível, por exemplo, em analisadores Roche-Hitachi®) e testes de aglutinação de látex (disponíveis, por exemplo, em analisadores Roche-Hitachi®).
[032] Preferencialmente, a determinação da quantidade de peptídeo ou polipeptídeo compreende as etapas de (a) contato de uma célula capaz de permitir reação celular cuja intensidade indica a quantidade do peptídeo ou polipeptídeo com o mencionado peptídeo ou polipeptídeo por um período de tempo adequado; e (b) medição da reação celular. Para medir as reações celulares, a amostra ou amostra processada é preferencialmente adicionada a um cultivo celular e é medida a reação celular interna ou externa. A reação celular pode incluir a expressão mensurável de um gene relator ou a secreção de uma substância, tal como um peptídeo, polipeptídeo ou molécula pequena. A expressão ou substância deverá gerar um sinal de intensidade que se correlaciona com a quantidade do peptídeo ou polipeptídeo.
[033] Também preferencialmente, a determinação da quantidade de um peptídeo ou polipeptídeo compreende a etapa de medição de um sinal de intensidade específico que pode ser obtido a partir do peptídeo ou polipeptídeo na amostra. Conforme descrito acima, esse sinal pode ser a intensidade de sinal observada em uma variável m/z específica para o peptídeo ou polipeptídeo observado em espectro de massa ou espectro de NMR específico para o peptídeo ou polipeptídeo.
[034] A determinação da quantidade de um peptídeo ou polipeptídeo pode compreender preferencialmente as etapas de (a) contato do peptídeo com um ligante específico; (b) remoção (opcional) de ligante não ligado; e (c) medição da quantidade de ligante ligado.
[035] Segundo uma realização preferida, as mencionadas etapas de contato, remoção e medição podem ser realizadas por uma unidade analisadora do sistema descrito no presente. Segundo algumas realizações, as mencionadas etapas podem ser realizadas por uma unidade analisadora isolada do mencionado sistema ou por mais de uma unidade analisadora em comunicação operativa entre si. Segundo uma realização específica, por exemplo, o mencionado sistema descrito no presente pode incluir uma primeira unidade analisadora para realizar as mencionadas etapas de contato e remoção de uma segunda unidade analisadora conectada operativamente à mencionada primeira unidade analisadora por uma unidade de transporte (tal como um braço robótico), que realiza a mencionada etapa de medição.
[036] O ligante ligado, particularmente o ligante ou o complexo de ligante e peptídeo, gerará um sinal de intensidade. A ligação de acordo com a presente invenção inclui ligação covalente e não covalente. Um ligante de acordo com a presente invenção pode ser qualquer composto, tal como peptídeo, polipeptídeo, ácido nucleico ou molécula pequena, que se liga ao peptídeo ou polipeptídeo descrito no presente. Os ligantes preferidos incluem anticorpos, ácidos nucleicos, peptídeos ou polipeptídeos tais como receptores ou parceiros de ligação para o peptídeo ou polipeptídeo e seus fragmentos que compreendem os domínios de ligação para os peptídeos e aptâmeros, tais como aptâmeros de peptídeo ou ácido nucleico. Métodos de preparação desses ligantes são bem conhecidos na técnica. A identificação e a produção de aptâmeros ou anticorpos apropriados, por exemplo, também é oferecida por fornecedores comerciais. Os técnicos no assunto são familiares com métodos de desenvolvimento de derivados desses ligantes com afinidade ou especificidade mais alta. Mutações aleatórias, por exemplo, podem ser introduzidas nos ácidos nucleicos, peptídeos ou polipeptídeos. Esses derivados podem ser testados em seguida para determinar a ligação de acordo com procedimentos de seleção conhecidos na técnica, tais como exibição de fagos. Os anticorpos indicados no presente incluem anticorpos monoclonais e policlonais, bem como seus fragmentos, tais como fragmentos de Fv, Fab e F(ab)2 que são capazes de ligar o antígeno ou hapteno. A presente invenção também inclui anticorpos de fita simples e anticorpos híbridos humanizados em que sequências de aminoácidos de um anticorpo doador não humano que exibem especificidade de antígeno desejada são combinadas com sequências de um anticorpo receptor humano. As sequências doadoras normalmente incluirão pelo menos os resíduos de aminoácidos de ligação de antígenos do doador, mas podem também compreender outros resíduos de aminoácidos estrutural e/ou funcionalmente relevantes do anticorpo doador. Esses híbridos podem ser preparados por meio de diversos métodos bem conhecidos na técnica. Preferencialmente, o ligante ou agente liga-se especificamente ao peptídeo ou polipeptídeo. Ligação específica de acordo com a presente invenção indica que o ligante ou agente não deverá ligar-se substancialmente (realizar “reação cruzada”) a outro peptídeo, polipeptídeo ou substância presente na amostra a ser analisada. Preferencialmente, o peptídeo ou polipeptídeo ligado especificamente deverá ser ligado com afinidade pelo menos três vezes mais alta, de maior preferência pelo menos dez vezes mais alta e, de preferência ainda maior, pelo menos cinquenta vezes mais alta que qualquer outro peptídeo ou polipeptídeo relevante. A ligação não específica pode ser tolerável se ainda puder ser diferenciada e medida de forma inequívoca, tal como de acordo com o seu tamanho em Western Blot, ou pela sua abundância relativamente mais alta na amostra. A ligação do ligante pode ser medida por meio de qualquer método conhecido na técnica. Preferencialmente, o mencionado método é semiquantitativo ou quantitativo. Métodos apropriados adicionais de determinação de polipeptídeos ou peptídeos são descritos a seguir.
[037] Em primeiro lugar, a ligação de um ligante pode ser medida diretamente, por exemplo, por meio de NMR ou ressonância de plasma da superfície. A medição da ligação de um ligante, segundo realizações preferidas, é realizada por uma unidade analisadora de um sistema descrito no presente. Em seguida, uma quantidade da ligação medida pode ser calculada por um dispositivo de computação de um sistema descrito no presente. Em segundo lugar, caso o ligante também sirva de substrato de atividade enzimática do peptídeo ou polipeptídeo de interesse, um produto de reação enzimática pode ser medido (a quantidade de protease, por exemplo, pode ser medida por meio de medição da quantidade de substrato dividido, por exemplo, em Western Blot). Alternativamente, o próprio ligante pode exibir propriedades enzimáticas e o complexo de “ligante/peptídeo ou polipeptídeo” ou o ligante que foi ligado pelo peptídeo ou polipeptídeo, respectivamente, pode ser colocado em contato com um substrato apropriado, permitindo a detecção pela geração de um sinal de intensidade. Para medição de produtos de reação enzimática, a quantidade de substrato é preferencialmente saturadora. O substrato pode também ser marcado com uma marca detectável antes da reação. Preferencialmente, a amostra é colocada em contato com o substrato por período de tempo adequado. Um período de tempo adequado designa o tempo necessário para a produção de uma quantidade detectável, preferencialmente mensurável, de produto. Em vez de medir a quantidade de produto, pode ser medido o tempo necessário para o surgimento de uma dada quantidade de produto (tal como detectável). Em terceiro lugar, o ligante pode ser acoplado de forma covalente ou não covalente a uma marca, permitindo a detecção e a medição do ligante. A marcação pode ser realizada por meio de métodos diretos ou indiretos. Marca direta envolve o acoplamento direto (covalente ou não covalente) da marca ao ligante. Marcação indireta envolve a ligação (covalente ou não covalente) de um ligante secundário ao primeiro ligante. O ligante secundário deverá ligar-se especificamente ao primeiro ligante. O mencionado ligante secundário pode ser acoplado a uma marca apropriada e/ou ser o alvo (receptor) de ligação de ligante terciário ao ligante secundário. O uso de ligantes secundários, terciários ou até de ordem superior é frequentemente empregado para aumentar o sinal. Ligantes secundários e de ordem superior apropriados podem incluir anticorpos, anticorpos secundários e o sistema de estreptavidina e biotina bem conhecido (Vector Laboratories, Inc.). O ligante ou substrato pode também ser “marcado” com uma ou mais marcas, conforme conhecido na técnica. Essas marcas podem então ser alvos de ligantes de ordem superior. Marcas apropriadas incluem biotina, digoxigenina, marca His, glutation-S-transferase, FLAG, GFP, marca myc, hemaglutinina de vírus da influenza A (HA), proteína de ligação de maltose e similares. No caso de peptídeo ou polipeptídeo, a marca encontra-se preferencialmente no terminal N e/ou no terminal C. Marcas apropriadas são quaisquer marcas detectáveis por meio de um método de detecção apropriado. Marcas típicas incluem partículas de ouro, esferas de látex, éster acridan, luminol, rutênio, marcas enzimaticamente ativas, marcas radioativas, marcas magnéticas (tais como “esferas magnéticas”, incluindo marcas paramagnéticas e superparamagnéticas) e marcas fluorescentes. Marcas enzimaticamente ativas incluem, por exemplo, peroxidase de rabanete silvestre, fosfatase alcalina, betagalactosidase, luciferase e seus derivados. Substratos apropriados de detecção incluem diaminobenzidina (DAB), 3,3’-5,5’-tetrametilbenzidina, NBT- BCIP (cloreto de tetrazólio azul 4-nitro e fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indolila, disponível na forma de solução padrão pronta para uso da Roche Diagnostics), CDP-Star® (Amersham Biosciences) e ECF® (Amersham Biosciences). Uma combinação de substrato e enzima apropriada pode resultar em produto de reação colorido, fluorescência ou quimioluminescência, que pode ser medida de acordo com métodos conhecidos na técnica (utilizando, por exemplo, um filme sensível à luz ou sistema de câmera apropriado). Como ocorre com a medição da reação enzimática, os critérios fornecidos acima são aplicados de forma análoga. Marcas fluorescentes típicas incluem proteínas fluorescentes (tais como GFP e seus derivados), Cy3, Cy5, Vermelho do Texas, fluoresceína e as tinturas Alexa (tais como Alexa 568). Marcas fluorescentes adicionais são disponíveis, por exemplo, por meio da Molecular Probes (Oregon). Também é contemplado o uso de quantum dots como marcas fluorescentes. Marcas radioativas típicas incluem 35S, 125I, 32P, 33P e similares. Uma marca radioativa pode ser detectada por meio de qualquer método conhecido e apropriado, tal como um filme sensível à luz ou um formador de imagens de fósforo. Métodos de medição apropriados de acordo com a presente invenção também incluem precipitação (particularmente imunoprecipitação), eletroquimioluminescência (quimioluminescência eletrogerada), RIA (radioimunoteste), ELISA (teste imunossorvente ligado por enzimas), testes de imunicidade de enzimas de sanduíche, imunotestes de sanduíche de eletroquimioluminescência (ECLIA), fluoroimunoteste de lantanídeos amplificado por dissociação (DELFIA), teste de proximidade de cintilação (SPA), turvometria, nefelometria, turvometria ou nefelometria amplificada por látex ou testes de imunicidade de fase sólida. Métodos adicionais conhecidos na técnica (tais como eletroforese de gel, eletroforese de gel 2D, eletroforese de gel de poliacrilamida SDS (SDS-PAGE), Western Blot e espectrometria de massa) podem ser utilizados isoladamente ou em combinação com marcação ou outros métodos de detecção conforme descrito acima.
[038] A quantidade de peptídeo ou polipeptídeo pode ser, também preferencialmente, determinada conforme segue: (a) contato de um suporte sólido que compreende um ligante para o peptídeo ou polipeptídeo conforme especificado acima com uma amostra que compreende o peptídeo ou polipeptídeo e (b) medição da quantidade de peptídeo ou polipeptídeo que é ligada ao suporte. O ligante, preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste de ácidos nucleicos, peptídeos, polipeptídeos, anticorpos e aptâmeros, encontra-se preferencialmente presente sobre um suporte sólido em forma imobilizada. Materiais de fabricação de suportes sólidos são bem conhecidos na técnica e incluem, entre outros, materiais de coluna disponíveis comercialmente, esferas de poliestireno, esferas de látex, esferas magnéticas, partículas metálicas coloidais, superfícies e fragmentos de silício e/ou vidro, fitas de nitrocelulose, membranas, folhas, Duracyte, cavidades e paredes de bandejas de reação, tubos plásticos etc. O ligante ou agente pode ser ligado a muitos veículos diferentes. Exemplos de veículos bem conhecidos incluem vidro, poliestireno, cloreto de polivinila, polipropileno, polietileno, policarbonato, dextran, nylon, amiloses, celuloses naturais e modificadas, poliacrilamidas, agaroses e magnetita. A natureza do veículo pode ser solúvel ou insolúvel para os propósitos da presente invenção. Métodos apropriados de fixação/imobilização do mencionado ligante são bem conhecidos e incluem, mas sem limitações, interações iônicas, hidrofóbicas, covalentes e similares. Também se contempla o uso de “conjuntos de suspensão” como conjuntos de acordo com a presente invenção (Nolan, 2002, Trends Biotechnol. 20 (1): 9-12). Nesses conjuntos de suspensão, o veículo, tal como uma microesfera, encontra- se presente em suspensão. O conjunto consiste de microesferas diferentes, possivelmente marcadas, que conduzem ligantes diferentes. São geralmente conhecidos métodos de produção desses conjuntos, por exemplo, com base em química de fase sólida e grupos protetores fotoinstáveis (US 5.744.305).
[039] O termo “quantidade”, da forma utilizada no presente, engloba a quantidade absoluta de um polipeptídeo ou peptídeo, a concentração ou quantidade relativa do mencionado polipeptídeo ou peptídeo, bem como qualquer valor ou parâmetro a ele correlacionado ou que dele pode ser derivado. Esses valores ou parâmetros compreendem valores de sinal de intensidade de todas as propriedades físicas ou químicas específicas obtidas dos mencionados peptídeos por meio de medições diretas, tais como valores de intensidade em espectros de massa ou espectros de NMR. Além disso, são englobados todos os valores ou parâmetros que são obtidos por meio de medições indiretas especificadas em outros pontos no presente relatório descritivo, tais como quantidades de reação determinadas a partir de sistemas de leitura biológica em resposta aos peptídeos ou sinais de intensidade obtidos de ligantes ligados especificamente. Deve-se compreender que valores correlacionados às quantidades ou aos parâmetros mencionados acima podem também ser obtidos por todas as operações matemáticas padrão. Segundo realizações preferidas da presente invenção, a determinação de uma “quantidade” é realizada pelo sistema descrito, por meio do quê um dispositivo de computação determina a “quantidade” com base em etapas de contato e medição realizadas por uma ou mais unidades analisadoras do mencionado sistema.
[040] O termo “comparação”, da forma utilizada no presente, engloba a comparação da quantidade do peptídeo ou polipeptídeo compreendido pela amostra a ser analisada com uma quantidade de fonte de referência apropriada especificada em outros pontos do presente relatório descritivo. Deve-se compreender que a comparação, da forma utilizada no presente, designa a comparação de valores ou parâmetros correspondentes; uma quantidade absoluta, por exemplo, é comparada com uma quantidade de referência absoluta enquanto uma concentração é comparada com uma concentração de referência ou um sinal de intensidade obtido de uma amostra de teste é comparado com o mesmo tipo de sinal de intensidade de uma amostra de referência. A comparação indicada na etapa (b) do método de acordo com a presente invenção pode ser conduzida manualmente ou assistida por computador. Desta forma, a comparação indicada na etapa (b) do método de acordo com a presente invenção pode ser conduzida por um dispositivo de computação (tal como de um sistema descrito no presente). Os valores da quantidade e da referência podem, por exemplo, ser comparados entre si e a mencionada comparação pode ser conduzida automaticamente por um programa de computador que executa um algoritmo para comparação. O programa de computador que conduz a mencionada avaliação fornecerá a determinação desejada em formato de saída apropriado. Para comparação assistida por computador, o valor da quantidade determinada pode ser comparado com valores correspondentes a referências apropriadas que são armazenadas em um banco de dados por um programa de computador. O programa de computador pode avaliar adicionalmente o resultado da comparação, ou seja, fornecer automaticamente a determinação desejada em um formato de saída apropriado.
[041] Para comparação assistida por computador, o valor da quantidade determinada pode ser comparado com valores correspondentes a referências apropriadas que são armazenadas em um banco de dados por um programa de computador. O programa de computador pode avaliar adicionalmente o resultado da comparação, ou seja, fornecer automaticamente a determinação desejada em um formato de saída apropriado. O mencionado resultado pode servir preferencialmente de auxílio na diferenciação entre apoplexia isquêmica cardioembólica e não cardioembólica.
[042] Pode-se fornecer o resultado de uma comparação, por exemplo, na forma de dados brutos (quantidades absolutas ou relativas) e, em alguns casos, como indicador na forma de palavra, frase, símbolo ou valor numérico que pode ser indicativo de diagnóstico específico.
[043] A expressão “quantidade de referência”, da forma utilizada no presente, indica uma quantidade que permite a alocação de pacientes no grupo de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica ou em um grupo de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica não cardioembólica. Essa quantidade de referência pode ser uma quantidade limite que separa esses grupos entre si. Consequentemente, a “quantidade de referência” do marcador Troponina deverá ser uma quantidade que permite a alocação de pacientes no grupo de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica ou em um grupo de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica não cardioembólica. Uma quantidade limite apropriada que separa os dois grupos pode ser calculada sem esforços adicionais pelos testes estatísticos indicados no presente com base em quantidades de troponina cardíaca de um paciente ou grupo de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica ou um paciente ou grupo de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica não cardioembólica. Quantidades indicadas preferidas que podem ser derivadas dos pacientes ou grupo de pacientes mencionados acima são indicadas em outros pontos do presente.
[044] Quantidades de referência podem, em princípio, ser calculadas para um conjunto de pacientes conforme especificado acima com base na média ou em valores médios para um dado biomarcador aplicando métodos estatísticos padrão. Particularmente, a precisão de um teste tal como um método destinado ao diagnóstico de evento ou não é mais bem descrita pelas suas características de operação de receptor (ROC) (vide especialmente Zweig, 1993, Clin. Chem. 39: 561-577). O gráfico ROC é uma plotagem de todos os pares de sensibilidade/especificidade resultantes da variação contínua do limite de decisão ao longo de toda a faixa de dados observada. O desempenho clínico de um método de diagnóstico depende da sua precisão, ou seja, sua capacidade de alocação correta de pacientes a um certo prognóstico ou diagnóstico. A plotagem de ROC indica a sobreposição entre as duas distribuições por meio de plotagem da sensibilidade em comparação com a especificidade 1 para toda a faixa de limites apropriada para realizar distinção. Sobre o eixo y, encontra-se a sensibilidade ou a fração positiva verdadeira, que é definida como a razão entre o número de resultados de teste positivos verdadeiros e o produto do número de resultados de teste positivos verdadeiros e o número de falsos negativos. Isso também foi indicado como positividade na presença de doença ou condição. Ela é calculada unicamente a partir do subgrupo afetado. Sobre o eixo x, encontra- se a fração falsa positiva ou especificidade 1, que é definida como a razão entre o número de resultados falsos positivos e o produto do número de resultados negativos verdadeiros e o número de falsos positivos. Ela é um índice da especificidade e é totalmente calculada a partir do subgrupo não afetado. Como as frações positivas verdadeiras e falsas são calculadas de forma totalmente separada, utilizando os resultados de teste de dois subgrupos diferentes, a plotagem de ROC é independente da prevalência do evento no conjunto. Cada ponto sobre a plotagem de ROC representa um par de sensibilidade e especificidade correspondente a um limite de decisão específico. Um teste com discriminação perfeita (sem sobreposição nas duas distribuições de resultados) possui plotagem de ROC que passa através do canto superior esquerdo, em que a fração positiva verdadeira é de 1,0, ou 100% (sensibilidade perfeita) e a fração falsa positiva é 0 (especificidade perfeita). A plotagem teórica de um teste sem discriminação (distribuições idênticas de resultados para os dois grupos) é uma linha em diagonal a 45° do canto inferior esquerdo até o canto superior direito. A maior parte das plotagens encontra-se entre esses dois extremos. Caso a plotagem de ROC caia completamente abaixo da diagonal de 45°, isso é facilmente solucionado revertendo-se o critério de “positividade” de “maior que” para “menor que” ou vice-versa. Qualitativamente, quanto mais próxima a plotagem estiver do canto superior esquerdo, mais alta a precisão geral do teste. Dependendo de um intervalo de confiança desejado, um limite pode ser derivado da curva de ROC, permitindo o diagnóstico ou a previsão de um dado evento com equilíbrio adequado de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Consequentemente, a referência a ser utilizada para o método de acordo com a presente invenção mencionado acima pode ser preferencialmente uma quantidade limite ou de corte e pode ser preferencialmente gerada por meio do estabelecimento de ROC para o mencionado conjunto conforme descrito acima e derivação de uma quantidade limite. Dependendo da sensibilidade e especificidade desejadas para um método de diagnóstico, a plotagem de ROC permite a derivação de limites apropriados.
[045] O diagnóstico/diferenciação indicado no presente pode ser fornecido pelo dispositivo de computação de um sistema descrito no presente com base na mencionada comparação da “quantidade” calculada com uma referência ou limite. Um dispositivo de computação de um sistema pode fornecer, por exemplo, um indicador, na forma de uma palavra, símbolo ou valor numérico que indica apoplexia cardioembólica ou apoplexia não cardioembólica.
[046] Preferencialmente, a(s) quantidade(s) de referência é(são) derivada(s) de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica. Neste caso, uma quantidade essencialmente idêntica ou quantidade mais alta de troponina cardíaca na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência é preferencialmente indicativa de apoplexia isquêmica cardioembólica. Caso seja também determinado um peptídeo natriurético, uma quantidade essencialmente idêntica ou quantidade mais alta de troponina cardíaca e do peptídeo natriurético na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência da troponina cardíaca e a quantidade de referência do peptídeo natriurético é preferencialmente indicativa de apoplexia isquêmica cardioembólica.
[047] Também preferencialmente, a quantidade de referência de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) pode ser derivada de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de apoplexia isquêmica não cardioembólica. Neste caso, uma quantidade essencialmente idêntica ou quantidade reduzida de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência é indicativa de apoplexia isquêmica não cardioembólica. Caso seja também determinado um peptídeo natriurético, uma quantidade essencialmente idêntica ou quantidade reduzida de troponina cardíaca e do peptídeo natriurético na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência da troponina cardíaca e a quantidade de referência do peptídeo natriurético é indicativa de apoplexia isquêmica não cardioembólica.
[048] A quantidade de referência aplicável para pacientes individuais pode variar dependendo de diversos parâmetros fisiológicos, tais como idade, sexo ou subpopulação, bem como do meio utilizado para determinação do polipeptídeo ou peptídeo indicado no presente. Uma quantidade de referência apropriada pode ser determinada a partir de uma amostra de referência a ser analisada em conjunto, ou seja, simultânea ou subsequentemetne, com a amostra de teste.
[049] Além disso, a quantidade de referência pode definir uma quantidade limite, particularmente uma quantidade de referência calculada, para a troponina cardíaca (e, opcionalmente, para o peptídeo natriurético), em que uma quantidade de troponina (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) na amostra do paciente de teste maior que o limite correspondente deverá ser indicativa de apoplexia isquêmica cardioembólica, enquanto uma quantidade de troponina (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) na amostra do paciente de teste mais baixa que o limite correspondente deverá ser indicativa de apoplexia não cardioembólica.
[050] Quantidades de referência preferidas são indicadas abaixo no presente.
[051] Uma quantidade de referência preferida que indica apoplexia isquêmica cardioembólica é uma quantidade de troponina cardíaca, particularmente de Troponina T, de cerca de 8 pg/ml a cerca de 40 pg/ml e, de maior preferência, de 10 a 30 pg/ml, cerca de 11,6 a cerca de 20 pg/ml e, de preferência ainda maior, de cerca de 15 a 20 pg/ml. De preferência ainda maior, a referência é uma quantidade de cerca de 8, 10 ou 11,6 pg/ml. Uma quantidade de teste que é essencialmente idêntica ou maior deverá ser indicativa da apoplexia isquêmica cardioembólica, enquanto quantidade reduzida na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência deverá ser indicativa de apoplexia isquêmica não cardioembólica. Preferencialmente, as quantidades de referência mencionadas acima são derivadas de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica.
[052] A presente invenção é particularmente útil para eliminar apoplexia cardioembólica. Particularmente, uma quantidade de teste de troponina cardíaca, preferencialmente de Troponina T, que é de menos de 5 pg/ml, particularmente menos de 3 ou menos de 2 pg/mg, indica que o paciente não sofre de apoplexia cardioembólica (e, portanto, preferencialmente, sofre de apoplexia não cardioembólica).
[053] Uma quantidade de referência preferida que indica apoplexia isquêmica cardioembólica é uma quantidade de peptídeo natriurético, particularmente de NT-proBNP, de cerca de 500 pg/ml a cerca de 1500 pg/ml, de maior preferência, de 700 a 1300 pg/ml e, de preferência ainda maior, de cerca de 800 a 1000 pg/ml. De preferência ainda maior, a referência é uma quantidade de cerca de 700, 800 ou, de preferência superior, 900 pg/ml. Uma quantidade de teste que é essencialmente idêntica ou maior deverá ser indicativa da apoplexia isquêmica cardioembólica, enquanto quantidade reduzida na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência deverá ser indicativa de apoplexia isquêmica não cardioembólica. Preferencialmente, as quantidades de referência mencionadas acima são derivadas de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica (além da quantidade de troponina cardíaca).
[054] Conforme indicado acima, a presente invenção é particularmente útil para eliminar apoplexia cardioembólica. Particularmente, uma quantidade de teste de peptídeo natriurético, preferencialmente de NT- proBNP, que é de menos de 250 pg/ml, particularmente menos de 200 ou menos de 150 pg/mg, indica que o paciente não sofre de apoplexia cardioembólica (e, portanto, preferencialmente, sofre de apoplexia não cardioembólica).
[055] A expressão “cerca de”, no contexto da presente invenção, indica +/- 20%, +/- 10%, +/- 5%, +/- 2% ou +/- 1% dos valores mencionados. Isso também leva em consideração desvios habituais causados por métodos de medição, estatísticas e similares.
[056] Em uma realização preferida do método de acordo com a presente invenção, o mencionado método compreende adicionalmente a recomendação de terapia para o mencionado paciente, particularmente se o paciente houver sido diagnosticado como sofrendo de apoplexia cardioembólica. Uma terapia que pode ser recomendada em pacientes que sofrem de apoplexia cardioembólica é terapia lítica e/ou terapia de anticoagulação (vide, por exemplo, Cairns, J. A. et al, Canadian J. of Cardiology 2011: 27: 74-90 ou Camm, A. J. et al, Eur. Heart Journal 2010: 31: 2369-429, que são ambos incorporados ao presente como referência).
[057] Em um aspecto da presente invenção, é contemplado um método de diferenciação se pacientes sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, em que o mencionado método compreende: a. determinação da quantidade de troponina cardíaca em uma amostra de pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica por meio de (i) colocação da amostra em contato com um agente de detecção que se liga especificamente à mencionada troponina cardíaca por tempo suficiente para permitir a formação de um complexo do mencionado agente de detecção e da troponina cardíaca da amostra; (ii) medição da quantidade do complexo formado, em que a mencionada quantidade do complexo formado é proporcional à quantidade de troponina cardíaca presente na amostra; e (iii) transformação da quantidade do complexo formado em uma quantidade de troponina cardíaca que reflete a quantidade do marcador presente na amostra; b. comparação da mencionada quantidade com uma referência; e c. estabelecimento de um auxiliar para diferenciar se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, com base no resultado da comparação realizada na etapa b.
[058] Preferencialmente, também é determinada a quantidade de um peptídeo natriurético.
[059] Em outro aspecto da presente invenção, é contemplado um sistema de diferenciação se pacientes sofrem de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, que compreende: d. uma unidade analisadora configurada para colocar uma amostra de paciente que sofre de apoplexia isquêmica em contato com um agente de detecção que se liga especificamente ao marcador troponina cardíaca por tempo suficiente para permitir a formação de um complexo do mencionado agente de detecção e do marcador da amostra; e. uma unidade analisadora configurada para medir a quantidade do complexo formado, em que a mencionada quantidade do complexo formado é proporcional à quantidade do marcador presente na amostra; f. um dispositivo de computação que possui um processador e encontra-se em comunicação operativa com as mencionadas unidades de análise; e g. um meio legível por máquina não transitório que inclui uma série de instruções executáveis por um processador, em que as instruções, quando executadas, transformam a quantidade do complexo formado em uma quantidade do marcador que reflete a quantidade do marcador presente na amostra, comparam a mencionada quantidade com uma referência e estabelecem um auxiliar para diferenciar se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, com base no resultado da mencionada comparação com a mencionada referência.
[060] Preferencialmente, o sistema também compreende um agente de detecção que se liga especificamente a peptídeo natriurético.
[061] Um agente de detecção apropriado pode ser, em um aspecto, um anticorpo que se liga especificamente à troponina cardíaca em uma amostra de paciente a ser pesquisado por meio do método de acordo com a presente invenção. Outro agente de detecção que pode ser aplicado, em um aspecto, pode ser um aptâmero, que se liga especificamente ao marcador na amostra. Em ainda outro aspecto, a amostra é removida do complexo formado entre o agente de detecção e o marcador antes da medição da quantidade de complexo formado. Consequentemente, em um aspecto, o agente de detecção pode ser imobilizado sobre um suporte sólido. Em ainda outro aspecto, a amostra pode ser removida do complexo formado sobre o suporte sólido por meio da aplicação de uma solução de lavagem. O complexo formado deverá ser proporcional à quantidade do marcador presente na amostra. Compreender-se- á que a especificidade e/ou a sensibilidade do agente de detecção a ser aplicado define o grau de proporção de pelo menos um marcador compreendido na amostra que é capaz de ser ligado especificamente. Detalhes adicionais de como a determinação pode ser conduzida também são encontrados em outros pontos do presente. A quantidade de complexo formado deverá ser transformada em uma quantidade do marcador que reflete a quantidade realmente presente na amostra. Essa quantidade, em um aspecto, pode ser essencialmente a quantidade presente na amostra ou pode ser, em outro aspecto, uma quantidade que é uma certa proporção devido à relação entre o complexo formado e a quantidade presente na amostra original.
[062] Em ainda outro aspecto do método mencionado acima, a etapa (a) pode ser conduzida por uma unidade analisadora, em um aspecto uma unidade analisadora conforme definido em outros pontos do presente.
[063] Em um aspecto do método de acordo com a presente invenção, a quantidade determinada na etapa (a) é comparada com uma referência. Em um aspecto, a referência é uma referência conforme definido em outros pontos do presente. Em ainda outro aspecto, a referência leva em conta a relação proporcional entre a quantidade medida de complexo e a quantidade presente na amostra original. Desta forma, as referências aplicadas em um aspecto do método de acordo com a presente invenção são referências artificiais que são adotadas para refletir as limitações do agente de detecção que foi utilizado. Em outro aspecto, a mencionada relação pode também ser levada em conta ao conduzir-se a comparação, incluindo, por exemplo, uma etapa de cálculo de correção e/ou normalização para a quantidade determinada antes da comparação real do valor da quantidade determinada com a referência. Novamente, a etapa de cálculo de correção e/ou normalização para a quantidade determinada adota a etapa de comparação, de tal forma que as limitações do agente de detecção utilizado sejam adequadamente refletidas. Em um aspecto, a comparação é conduzida automaticamente, tal como assistida por um sistema de computador ou similar.
[064] O auxiliar para diferenciar se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica é estabelecido com base na comparação conduzida na etapa (b) por meio de alocação do paciente (i) ao grupo de pacientes que sofrem de apoplexia cardioembólica ou (ii) ao grupo que sofre de apoplexia não cardioembólica conforme definido em outros pontos do presente. Conforme já discutido no presente, a alocação do paciente pesquisado não deve ser correta em 100% dos casos pesquisados. Além disso, os grupos de pacientes aos quais o paciente pesquisado é alocado são grupos artificiais, pelo fato de que são estabelecidos com base em considerações estatísticas, ou seja, um certo grau de probabilidade previamente selecionado com base no qual deverá operar o método de acordo com a presente invenção. Em um aspecto da presente invenção, o auxiliar de diferenciação é estabelecido automaticamente, assistido, por exemplo, por um dispositivo de computação ou similar, conforme descrito e revelado no presente.
[065] Em um aspecto do método de acordo com a presente invenção, o mencionado método compreende adicionalmente uma etapa de recomendação e/ou administração ao paciente de acordo com o resultado estabelecido na etapa (c) conforme descrito em detalhes no presente.
[066] Em um aspecto do método mencionado acima, as etapas (b) e/ou (c) são conduzidas por uma ou mais unidades analisadoras conforme descrito no presente.
[067] Método de diagnóstico da fibrilação atrial: Fibrilação atrial (AF) frequentemente não é reconhecida pelo paciente. Este é o caso em cerca de 40% dos pacientes, o que indica que a análise de histórico é insensível para o diagnóstico de fibrilação atrial (Kamel, H. et al, Curr. Atheroscler. Rep. 2011: 13: 338-343). Embora estes números refiram- se a fibrilação atrial persistente, fibrilação atrial paroxismal possui diagnóstico ainda mais difícil e somente pode ser detectada por meio de telemetria cardíaca em pacientes ou mesmo monitoramento Jolter. Este último possui a vantagem de que o ECG é registrado e pode ser analisado posteriormente por médicos com experiência. Utilizando ECG de Holter, fibrilação atrial anteriormente não reconhecida paroxismal foi mais frequente que fibrilação atrial persistente (Rizos, T. et al, Cerebrovasc. Dis. 2011: 32: 276-282). A fim de detectar fibrilação atrial paroxismal/isquêmica de forma confiável, aparentemente é necessário monitoramento Holter por 72 horas (Gumbinger, C. et al, Europ. J. of Neurology, 2011, aguardando publicação). Desta forma, o reconhecimento de fibrilação atrial paroxismal é um desafio significativo, especificamente porque pelo menos 1% da população geral possui fibrilação atrial persistente e a frequência aumenta com a idade (Rizos, T. et al).
[068] Os inventores descobriram que a determinação de troponina cardíaca permite o diagnóstico de fibrilação atrial. De forma interessante, pacientes com fibrilação atrial intermitente também apresentaram níveis mais altos de troponina cardíaca. Podem também ser identificados, portanto, pacientes que exibem fibrilação atrial intermitente por meio de determinação da quantidade de troponina cardíaca.
[069] As definições e explicações fornecidas no presente aplicam- se, mutatis mutandis, às realizações da presente invenção a seguir.
[070] Além disso, a presente invenção refere-se a um método de diagnóstico de fibrilação atrial em um paciente suspeito de sofrerem de fibrilação atrial, que compreende: h. determinação da quantidade de troponina cardíaca em uma amostra do mencionado paciente.
[071] Em uma realização preferida, o método compreende a etapa adicional de: i. comparação da quantidade determinada da mencionada troponina cardíaca com uma quantidade de referência; desta forma, é diagnosticada a fibrilação atrial intermitente.
[072] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um método de diagnóstico de fibrilação atrial em um paciente suspeito de sofrerem de fibrilação atrial, que compreende: a. determinação da quantidade de troponina cardíaca em uma amostra do mencionado paciente; e b. comparação da quantidade determinada da mencionada troponina cardíaca com uma quantidade de referência, por meio do quê é diagnosticada a fibrilação atrial.
[073] Preferencialmente, diagnostica-se se o paciente sofre de fibrilação atrial ou não por meio da condução da etapa adicional (c) de diagnóstico se o paciente sofre de fibrilação atrial ou não.
[074] Preferencialmente, é diagnosticada a fibrilação atrial intermitente.
[075] Consequentemente, a presente invenção refere-se particularmente a um método para diagnosticar fibrilação atrial intermitente em um paciente suspeito de sofrerem de fibrilação atrial, que compreende: a. determinação da quantidade de troponina cardíaca em uma amostra do mencionado paciente; e b. comparação da quantidade determinada da mencionada troponina cardíaca com uma quantidade de referência, por meio do quê é diagnosticada a fibrilação atrial intermitente.
[076] Em uma realização preferida do método de acordo com a presente invenção, a etapa (a) compreende adicionalmente a determinação da quantidade de um peptídeo natriurético na amostra do paciente. Preferencialmente, a quantidade determinada desta forma do peptídeo natriurético é comparada na etapa (b) com uma quantidade de referência para um peptídeo natriurético.
[077] Consequentemente, a presente invenção também se refere a um método de diagnóstico de fibrilação atrial em um paciente suspeito de sofrerem de fibrilação atrial, que compreende: c. determinação da quantidade de troponina cardíaca e de peptídeo natriurético em uma amostra do mencionado paciente; e d. comparação da quantidade da mencionada troponina cardíaca conforme determinado na etapa (a) com uma quantidade de referência para a troponina cardíaca e da quantidade do mencionado peptídeo natriurético com uma quantidade de referência do peptídeo natriurético, por meio do quê é diagnosticada a fibrilação atrial.
[078] A expressão “fibrilação atrial” é bem conhecida na técnica. Fibrilação atrial é analisada, por exemplo, por Fuster et al, que é integralmente incorporado ao presente como referência (Fuster, V., Rydén, L. E., Asinger, R. W. et al, ACC/AHA/ESC Guidelines for the Management of Patients With Atrial Fibrillation: Executive Summary: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines and the European Society of Cardiology Committee for Practice Guidelines and Policy Conferences (Committee to Develop Guidelines for the Management of Patients With Atrial Fibrillation) Developed in Collaboration With the North American Society of Pacing and Electrophysiology; Circulation, 23 de outubro de 2001; 104 (17): 2118-50). Fibrilação atrial é ritmo cardíaco anormal que envolve as duas cavidades superiores do coração. Em ritmo cardíaco normal, o impulso gerado pelo nódulo sinoatrial difunde-se através do coração e causa contração do músculo cardíaco e bombeamento de sangue. Em fibrilação atrial, os impulsos elétricos regulares do nódulo sinoatrial são substituídos por impulsos elétricos rápidos e desorganizados que resultam em batidas do coração irregulares.
[079] A fibrilação atrial (AF) pode ser permanente, persistente ou intermitente (para explicação desses termos, vide também Fuster et al (loc. cit.).
[080] Pacientes preferencialmente sofrem de fibrilação atrial permanente caso a fibrilação atrial tenha persistido por mais de um ano. Particularmente, não ocorre retroconversão para o ritmo senoidal (apenas mediante tratamento).
[081] Pacientes preferencialmente sofrem de fibrilação atrial persistente caso a fibrilação atrial dure mais de sete dias e podem necessitar de intervenção elétrica ou farmacológica para por término à fibrilação atrial. Desta forma, fibrilação atrial persistente ocorre em episódios, mas a arritmia não é retroconvertida espontaneamente para ritmo senoidal.
[082] Pacientes preferencialmente sofrem de fibrilação atrial intermitente (frequentemente também denominada fibrilação atrial paroximal) caso haja episódios de fibrilação atrial que são encerrados espontaneamente. Os episódios de fibrilação atrial podem durar de segundos até dias. Preferencialmente, os episódios duram menos de uma hora.
[083] No contexto do método mencionado acima, preferencialmente, é diagnosticada fibrilação atrial intermitente.
[084] Fibrilação atrial permanente e persistente podem ser facilmente diagnosticadas, por exemplo, em um eletrocardiograma. Descobertas características são, preferencialmente, a ausência de ondas P, atividade elétrica desorganizada no seu lugar e a irregularidade do intervalo R--R devido à condução irregular de impulsos para os ventrículos. Fibrilação atrial intermitente é de diagnóstico mais difícil, pois o diagnóstico somente é possível durante o episódio de fibrilação atrial.
[085] Os inventores descobriram surpreendentemente que a determinação de troponina cardíaca (e, opcionalmente, de peptídeo natriurético) em uma amostra de paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial permite o diagnóstico de fibrilação atrial. Particularmente, níveis mais altos de troponina cardíaca são indicativos de paciente que sofre de AF, enquanto níveis mais baixos de troponina cardíaca são indicativos de paciente que não sofre de AF. Além disso, a determinação de troponina cardíaca também permite o diagnóstico de fibrilação atrial intermitente, mesmo na ausência de episódios de fibrilação atrial (no momento em que a amostra é obtida). Desta forma, durante a condução do método mencionado acima, fibrilação atrial intermitente é preferencialmente diagnosticada na ausência de episódios de fibrilação atrial, particularmente no momento em que a amostra é obtida. Desta forma, o paciente preferencialmente não sofre de episódios de fibrilação atrial quando a amostra é obtida.
[086] O paciente conforme o método de acordo com a presente invenção mencionado acima deverá ser suspeito de sofrer de fibrilação atrial. Pacientes suspeitos de sofrer de fibrilação atrial (tal como de fibrilação atrial intermitente) são preferencialmente pacientes que apresentam um ou mais fatores de risco de fibrilação atrial. Esses fatores de risco são bem conhecidos na técnica e incluem doença cardíaca, incluindo problemas de válvula e histórico de ataque cardíaco e cirurgia cardíaca, hipertensão sistêmica, especialmente se não for bem controlada com mudanças de estilo de vida ou medicações, e consumo de álcool. Preferencialmente, o paciente é suspeito de pertencer a um grupo de risco. Particularmente, idealiza-se que o paciente possui distúrbios cardíacos comprovados ou suspeitos, incluindo pacientes que possuem fatores de risco que os pré-dispõem a distúrbios cardíacos tais como hipertensão arterial ou sistêmica, diabetes mellitus, fumantes, indivíduos com hiperlipemia ou sinais da síndrome metabólica, particularmente se o paciente estiver em idade avançada (mais de 60, 65, 70 e, preferencialmente, 75 anos de idade). Alternativa ou adicionalmente, o paciente pode preferencialmente sofrer de distúrbios valvulares, preferencialmente de distúrbios da válvula mitral. Idealiza- se ainda que o paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial sofra de hipertireoidismo.
[087] Em uma realização preferida do método de acordo com a presente invenção, o paciente que é suspeito de sofrer de fibrilação atrial preferencialmente sofre de apoplexia isquêmica, particularmente de apoplexia isquêmica cardioembólica (para explicação desses termos, consulte outros pontos do presente). Caso o paciente a ser testado de acordo com o método mencionado acima sofra de apoplexia isquêmica, a amostra é preferencialmente obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia conforme descrito no contexto do método para diferenciação precoce para saber se o paciente sofrer de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica.
[088] Também se prefere, entretanto, que o paciente a ser testado não sofra de apoplexia isquêmica.
[089] Preferencialmente, a quantidade de referência com relação ao método mencionado acima é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial (ou de um grupo de pacientes), em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) ou uma quantidade de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) que aumenta em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente sofre de fibrilação atrial. Alternativa ou adicionalmente, a quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial ou de um grupo desses pacientes, em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) ou uma quantidade de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) que é reduzida em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente não sofre de fibrilação atrial.
[090] Além disso, a quantidade de referência pode definir uma quantidade limite para a troponina cardíaca (e, opcionalmente, para o peptídeo natriurético), em que uma quantidade de troponina (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) na amostra do paciente de teste maior que o limite correspondente deverá ser indicativa de fibrilação atrial, enquanto uma quantidade de troponina (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) na amostra do paciente de teste mais baixa que o limite correspondente deverá indicar que o paciente não sofre de fibrilação atrial.
[091] Quantidades de referência preferidas são indicadas abaixo no presente.
[092] Uma quantidade de referência preferida que indica fibrilação atrial é uma quantidade de troponina cardíaca, particularmente de Troponina T, de cerca de 6 pg/ml a cerca de 40 pg/ml e, de maior preferência, de 8 a 30 pg/ml, cerca de 10 a cerca de 20 pg/ml e, de preferência ainda maior, de cerca de 15 a 20 pg/ml. De preferência ainda maior, a referência é uma quantidade de cerca de 10 pg/ml ou, de preferência superior, cerca de 7 pg/ml. Uma quantidade de teste que é essencialmente idêntica ou mais alta deverá indicar fibrilação atrial, enquanto uma quantidade reduzida na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência deverá indicar que o paciente não sofre de fibrilação atrial. Preferencialmente, as quantidades de referência mencionadas acima são derivadas de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de fibrilação atrial.
[093] Uma quantidade de referência preferida que indica fibrilação atrial é uma quantidade de peptídeo natriurético, particularmente de NT-proBNP, de cerca de 300 pg/ml a cerca de 1500 pg/ml, de maior preferência, de 400 a 1300 pg/ml e, de preferência ainda maior, de cerca de 500 a 1000 pg/ml. De preferência ainda maior, a referência é uma quantidade de cerca de 500, 400 ou, de preferência superior, cerca de 300 pg/ml. Uma quantidade de teste que é essencialmente idêntica ou mais alta deverá indicar fibrilação atrial, enquanto uma quantidade reduzida na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência deverá indicar que o paciente não sofre de fibrilação atrial. Preferencialmente, as quantidades de referência mencionadas acima são derivadas de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de fibrilação atrial.
[094] Conforme definido acima, o diagnóstico de fibrilação atrial intermitente é desafiador, enquanto o diagnóstico de fibrilação atrial permanente ou persistente é um tanto fácil. Como pacientes com fibrilação atrial permanente e persistente podem ser identificados sem esforços adicionais, é particularmente interessante identificar os pacientes que não sofrem de fibrilação atrial permanente ou persistente, mas que sofrem de fibrilação atrial intermitente.
[095] De forma interessante, demonstrou-se no contexto dos estudos da presente invenção que os níveis de troponinas cardíacas e de peptídeos natriuréticos são mais baixos em pacientes com fibrilação atrial intermitente que em pacientes com fibrilação atrial persistente ou permanente. Isso é conveniente, pois a determinação de troponina cardíaca e, opcionalmente, um peptídeo natriurético permite a identificação dos pacientes que sofrem de fibrilação intermitente.
[096] Em uma realização preferida da presente invenção, portanto, deverá ser diagnosticada fibrilação atrial intermitente, particularmente em um paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial intermitente.
[097] A fim de permitir o diagnóstico de fibrilação atrial intermitente, a quantidade de troponina cardíaca e, opcionalmente, a quantidade do peptídeo natriurético, conforme determinado na etapa (a), deverão ser comparadas na etapa (b) com duas quantidades de referência. Idealiza-se que uma primeira quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente (ou de um grupo desses pacientes) e que uma segunda quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial permanente ou, particularmente, de fibrilação atrial persistente (ou de um grupo desses pacientes). Naturalmente, as quantidades de referência deverão ser derivadas de amostras dos pacientes mencionados acima.
[098] Preferencialmente, uma quantidade de troponina cardíaca e, opcionalmente do peptídeo natriurético na amostra do paciente de teste que seja essencialmente idêntica ou maior que a quantidade de referência (para a troponina cardíaca e, opcionalmente, para o peptídeo natriurético) derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente (ou de um grupo desses pacientes), mas que seja menor que a quantidade de referência derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial permanente ou persistente (ou de um grupo desses pacientes) é indicativa para o diagnóstico de fibrilação atrial intermitente.
[099] Uma quantidade de referência preferida para troponina cardíaca, particularmente para Troponina T, derivada de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente (ou de um grupo desses pacientes) encontra-se na faixa de cerca de 5 a 10 pg/ml. Preferencialmente, a quantidade de referência é de cerca de 9 pg/ml.
[100] Uma quantidade de referência preferida para troponina cardíaca, particularmente para Troponina T, derivada de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial persistente (ou de um grupo desses pacientes) encontra-se na faixa de cerca de 12 a 25 pg/ml. Preferencialmente, a quantidade de referência é de cerca de 18 pg/ml.
[101] Uma quantidade de referência preferida para peptídeo natriurético, particularmente para NT-proBNP, derivado de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente (ou de um grupo desses pacientes) encontra-se na faixa de cerca de 300 a 500 pg/ml. Preferencialmente, a quantidade de referência é de cerca de 350 pg/ml.
[102] Uma quantidade de referência preferida para peptídeo natriurético, particularmente para NT-proBNP, derivado de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial persistente ou permanente (ou de um grupo desses pacientes) encontra-se na faixa de cerca de 900 a 1500 pg/ml. Preferencialmente, a quantidade de referência é de cerca de 900 pg/ml.
[103] Em outra realização preferida do método de diagnóstico de AF, é diagnosticada fibrilação atrial intermitente. O paciente de acordo com esta realização preferida deverá conhecidamente não sofrer de fibrilação atrial permanente e/ou persistente (o que pode ser determinado sem esforços adicionais, vide acima).
[104] Desta forma, também é idealizado o método para diagnosticar fibrilação atrial intermitente em um paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial intermitente, mas que conhecidamente não sofrem de fibrilação atrial persistente e/ou permanente, que compreende: a. determinação da quantidade de troponina cardíaca (e, opcionalmente, de peptídeo natriurético) em uma amostra do mencionado paciente; e b. comparação da quantidade determinada da mencionada troponina cardíaca (e, opcionalmente, do mencionado peptídeo natriurético) com uma ou mais quantidades de referência, por meio do quê é diagnosticada a fibrilação atrial intermitente.
[105] O paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial intermitente possui preferencialmente os mesmos fatores de risco do paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial (vide outros pontos do presente). Particularmente, idealiza-se que o paciente sofre de apoplexia isquêmica, particularmente de apoplexia isquêmica cardioembólica.
[106] A quantidade de referência a ser aplicada no contexto da presente invenção deverá ser derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente ou de pacientes que conhecidamente não sofrem de AF.
[107] Preferencialmente, a quantidade de referência com relação à realização mencionada acima é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial (ou de um grupo de pacientes), em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) ou uma quantidade de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) que aumenta em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente sofre de fibrilação atrial intermitente. Alternativa ou adicionalmente, a quantidade de referência é derivada de pacientes que conhecidamente não sofrem de fibrilação atrial, em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) ou uma quantidade de troponina cardíaca (e, opcionalmente, do peptídeo natriurético) que é reduzida em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente não sofre de fibrilação atrial intermitente.
[108] Uma quantidade de referência preferida que indica fibrilação atrial intermitente é uma quantidade de troponina cardíaca, particularmente de Troponina T, de cerca de 5 pg/ml a cerca de 30 pg/ml e, de maior preferência, de 5 a 25 pg/ml, cerca de 6 a cerca de 10 pg/ml e, de preferência ainda maior, de cerca de 6 a 8 pg/ml. De preferência ainda maior, a referência é uma quantidade de cerca de 8 pg/ml ou, de preferência superior, cerca de 7 pg/ml. Uma quantidade de teste que é essencialmente idêntica ou mais alta deverá indicar fibrilação atrial intermitente, enquanto uma quantidade reduzida na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência deverá indicar que o paciente não sofre de fibrilação atrial intermitente. Preferencialmente, as quantidades de referência mencionadas acima são derivadas de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de fibrilação atrial intermitente.
[109] Uma quantidade de referência preferida que indica fibrilação atrial intermitente é uma quantidade de peptídeo natriurético, particularmente de NT-proBNP, de cerca de 300 pg/ml a cerca de 800 pg/ml, de maior preferência, de 300 a 700 pg/ml e, de preferência ainda maior, de cerca de 350 a 500 pg/ml. De preferência ainda maior, a referência é uma quantidade de cerca de 500, 400 ou, de preferência superior, cerca de 300 pg/ml. Uma quantidade de teste que é essencialmente idêntica ou mais alta deverá indicar fibrilação atrial intermitente, enquanto uma quantidade reduzida na amostra de teste em comparação com a quantidade de referência deverá indicar que o paciente não sofre de fibrilação atrial intermitente. Preferencialmente, as quantidades de referência mencionadas acima são derivadas de um paciente ou grupo de pacientes que conhecidamente sofrem de fibrilação atrial intermitente.
[110] Em uma realização preferida do método de acordo com a presente invenção mencionado acima, o mencionado método compreende adicionalmente a recomendação de terapia para o mencionado paciente, se o paciente houver sido diagnosticado como sofrendo de fibrilação atrial, particularmente de fibrilação atrial intermitente. Terapias preferidas que podem ser recomendadas em pacientes que sofrem de fibrilação atrial são descritas, por exemplo, por Fuster et al (Fuster et al, J. Am. Coll. Cardiol. 2001: 38: 1231 e Fuster, V. et al, Circulation 2006: 114 a 257). Terapias preferidas incluíram a administração de bloqueadores beta, bloqueadores de canais de cálcio não de di-hidropiridina, digoxina, antagonistas de vitamina K, aspirina e ácido acetilsalicílico. Além disso, pode-se recomendar intervenção elétrica ou farmacológica para encerrar a fibrilação atrial. Intervenção farmacológica inclui preferencialmente a administração de flecainida, dofetilida, propafenona e/ou ibutilida. É adicionalmente idealizada a administração de inibidores de fator Xa, tais como rivaroxoban e/ou dabigatran (vide Patel, M. R. et al, NEJM 2011: 365: 883-91; Connolly, S. J. et al, NEJM 2010: 261: 1139-51).
[111] Realizações preferidas do método mencionado acima:
[112] Preferencialmente, é diagnosticada a fibrilação atrial intermitente.
[113] Em uma realização preferida, o paciente não sofre de apoplexia isquêmica.
[114] Em outra realização preferida, o paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial sofre de apoplexia isquêmica, particularmente de apoplexia cardioembólica, em que a amostra foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. Preferencialmente, a amostra do mencionado paciente foi obtida do mencionado paciente em menos de 12 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica, particularmente em menos de 6 horas ou em menos de 3 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica.
[115] Em uma realização preferida, em que o paciente conhecidamente não sofre de fibrilação atrial persistente e/ou permanente, particularmente em que a quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente ou de um grupo desses pacientes, em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca ou uma quantidade de troponina cardíaca que é elevada em comparação com a quantidadede referência indica que o paciente sofre fibrilação atrial intermitente e/ou em que a quantidade de referência é derivada de pacientes que conhecidamente não sofrem de fibrilação atrial ou de um grupo desses pacientes, em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca ou uma quantidade de troponina cardíaca que é reduzida em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente não sofre de fibrilação atrial intermitente.
[116] Em outra realização preferida, a quantidade de troponina cardíaca na amostra do paciente é comparada com duas quantidades de referência, em que a primeira quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente ou de um grupo desses pacientes, em que a segunda quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial permanente ou persistente ou de um grupo desses pacientes. Preferencialmente, uma quantidade de troponina cardíaca na amostra do paciente que é essencialmente idêntica ou maior que a primeira quantidade de referência, mas que é mais baixa que a segunda quantidade de referência derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial permanente ou persistente, é indicativa para o diagnóstico de fibrilação atrial intermitente.
[117] Em uma realização preferida, o método compreende adicionalmente a determinação da quantidade de um peptídeo natriurético, particularmente de um peptídeo natriurético cerebral, particularmente de BNP e NT-proBNP.
[118] Preferencialmente, fibrilação atrial intermitente é diagnosticada na ausência de episódios de fibrilação atrial, particularmente no momento em que a amostra é obtida.
[119] Em outro aspecto da presente invenção, é contemplado um sistema de diagnóstico de AF, particularmente fibrilação atrial intermitente, que compreende: a. uma unidade analisadora configurada para colocar uma amostra de paciente que é suspeito de sofrer de AF, particularmente fibrilação atrial intermitente, em contato com um agente de detecção que se liga especificamente ao marcador troponina cardíaca por tempo suficiente para permitir a formação de um complexo do mencionado agente de detecção e do marcador da amostra; b. uma unidade analisadora configurada para medir a quantidade do complexo formado, em que a mencionada quantidade do complexo formado é proporcional à quantidade do marcador presente na amostra; c. um dispositivo de computação que possui um processador e encontra-se em comunicação operativa com as mencionadas unidades de análise; e d. um meio legível por máquina não transitório que inclui uma série de instruções executáveis por um processador, em que as instruções, quando executadas, transformam a quantidade do complexo formado em uma quantidade do marcador que reflete a quantidade do marcador presente na amostra, comparam a mencionada quantidade com uma quantidade de referência e estabelecem um auxiliar para diagnóstico de AF, particularmente fibrilação atrial intermitente, com base no resultado da mencionada comparação com a mencionada referência.
[120] Preferencialmente, o sistema também compreende um agente de detecção que se liga especificamente a peptídeo natriurético.
[121] Em ainda outro aspecto do método mencionado acima, a etapa (a) pode ser conduzida por uma unidade analisadora, em um aspecto uma unidade analisadora conforme definido em outros pontos do presente.
[122] Em um aspecto do método de acordo com a presente invenção, a quantidade determinada na etapa (a) é comparada com uma referência. Em um aspecto, a referência é uma referência conforme definido em outros pontos do presente. Em ainda outro aspecto, a referência leva em conta a relação proporcional entre a quantidade medida de complexo e a quantidade presente na amostra original. Desta forma, as referências aplicadas em um aspecto do método de acordo com a presente invenção são referências artificiais que são adotadas para refletir as limitações do agente de detecção que foi utilizado. Em outro aspecto, a mencionada relação pode também ser levada em conta ao conduzir-se a comparação, incluindo, por exemplo, uma etapa de cálculo de correção e/ou normalização para a quantidade determinada antes da comparação real do valor da quantidade determinada com a referência. Novamente, a etapa de cálculo de correção e/ou normalização para a quantidade determinada adota a etapa de comparação, de tal forma que as limitações do agente de detecção utilizado sejam adequadamente refletidas. Em um aspecto, a comparação é conduzida automaticamente, tal como assistida por um sistema de computador ou similar.
[123] O auxiliar de diagnóstico de AF, particularmente fibrilação atrial intermitente, é estabelecido com base na comparação conduzida na etapa (b) alocando-se o paciente (i) ao grupo de pacientes que sofrem de fibrilação atrial ou (ii) ao grupo dos que não sofrem de fibrilação atrial conforme descrito no presente. Conforme já discutido no presente, a alocação do paciente pesquisado não deve ser correta em 100% dos casos pesquisados. Além disso, os grupos de pacientes aos quais o paciente pesquisado é alocado são grupos artificiais, pelo fato de que são estabelecidos com base em considerações estatísticas, ou seja, um certo grau de probabilidade previamente selecionado com base no qual deverá operar o método de acordo com a presente invenção. Em um aspecto da presente invenção, o auxiliar de otimização da determinação de risco é estabelecido automaticamente, assistido, por exemplo, por um dispositivo de computação ou similar, conforme descrito e revelado no presente.
[124] Em um aspecto do método de acordo com a presente invenção, o mencionado método compreende adicionalmente uma etapa de recomendação e/ou administração ao paciente de acordo com o resultado estabelecido na etapa (c) conforme descrito em detalhes no presente.
[125] Em um aspecto do método mencionado acima, as etapas (b) e/ou (c) são conduzidas por uma ou mais unidades analisadoras conforme descrito no presente.
[126] Além disso, a presente invenção refere-se ao uso de troponina cardíaca e/ou de um agente de detecção, que se liga especificamente (e, opcionalmente, de um peptídeo natriurético e/ou agente de detecção, que se liga especificamente) em uma amostra de paciente que sofre de apoplexia isquêmica para diferenciação precoce para saber se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, em que a amostra foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. Preferencialmente, a mencionada amostra foi obtida em menos de seis horas após o início dos sintomas de apoplexia.
[127] Também é idealizado pela presente invenção o uso de uma troponina cardíaca e/ou de um agente de detecção que se liga especificamente a ela (e, opcionalmente, de um peptídeo natriurético e/ou agente de detecção que se liga especificamente a ela) em uma amostra de paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial para diagnóstico de fibrilação atrial no mencionado paciente. Preferencialmente, é diagnosticada a fibrilação atrial intermitente.
[128] A expressão “agente de detecção”, da forma utilizada no presente, designa um agente que é capaz de reconhecer especificamente e ligar o biomarcador indicado no presente (uma troponina cardíaca ou um peptídeo natriurético) quando presente em uma amostra. Além disso, o mencionado agente deverá permitir detecção direta ou indireta do complexo formado pelo mencionado agente e pelo biomarcador. A detecção direta pode ser atingida por meio da inclusão de uma marca detectável no agente. Marcação indireta pode ser atingida por um agente adicional que se liga especificamente ao complexo que compreende o biomarcador e o agente de detecção, em que o mencionado agente adicional é capaz de gerar um sinal detectável. Compostos apropriados que podem ser utilizados como agentes de detecção são bem conhecidos na técnica. Preferencialmente, o agente de detecção é um anticorpo ou aptâmero que se liga especificamente ao biomarcador. Os anticorpos indicados no presente incluem anticorpos monoclonais e policlonais, bem como seus fragmentos, tais como fragmentos de Fv, Fab e F(ab)2 que são capazes de ligar o antígeno ou hapteno. Também são idealizados anticorpos de fita simples e anticorpos híbridos humanizados em que sequências de aminoácidos de um anticorpo doador não humano que exibem especificidade de antígeno desejada são combinadas com sequências de um anticorpo receptor humano.
[129] A presente invenção refere-se ainda a um dispositivo de diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica em pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica, em que o mencionado dispositivo compreende: a. uma unidade de análise (ou unidade analisadora) que compreende um agente de detecção para troponina cardíaca que permite a determinação da quantidade da mencionada troponina cardíaca (e, opcionalmente, um agente de detecção para um peptídeo natriurético que permite a determinação da quantidade do mencionado peptídeo natriurético); e b. uma unidade de avaliação (ou unidade analisadora) que compreende um processador de dados que possui implementado um algoritmo de comparação da(s) quantidade(s) determinada(s) pela unidade de análise com quantidade(s) de referência armazenada(s) em um banco de dados, a fim de diferenciar se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, em que a quantidade de referência é derivada de amostras de um paciente de referência conforme descrito no presente no contexto do método de diferenciação se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica e o algoritmo é um algoritmo conforme definido no contexto do mencionado método.
[130] A presente invenção refere-se ainda a um dispositivo de diagnóstico de fibrilação atrial, particularmente fibrilação atrial intermitente, em um paciente suspeito de sofrerem de fibrilação atrial, em que o mencionado dispositivo compreende: a. uma unidade de análise (ou unidade analisadora) que compreende um agente de detecção para troponina cardíaca que permite a determinação da quantidade da mencionada troponina cardíaca (e, opcionalmente, um agente de detecção para um peptídeo natriurético que permite a determinação da quantidade do mencionado peptídeo natriurético); e b. uma unidade de avaliação (ou unidade analisadora) que compreende um processador de dados que possui implementado um algoritmo de comparação da(s) quantidade(s) determinada(s) pela unidade de análise com quantidade(s) de referência armazenada(s) em um banco de dados a fim de diagnosticar fibrilação atrial, particularmente fibrilação atrial intermitente, em que a quantidade de referência é derivada de uma amostra de paciente de referência conforme descrito no presente no contexto do método de diagnóstico de fibrilação atrial (particularmente, fibrilação atrial intermitente) e o algoritmo é um algoritmo conforme definido no contexto do método de diagnóstico de fibrilação atrial (particularmente, fibrilação atrial).
[131] O termo “dispositivo”, da forma utilizada no presente, refere- se a um sistema que compreende as unidades mencionadas acima ligadas operativamente entre si para permitir o diagnóstico segundo os métodos de acordo com a presente invenção. Agentes de detecção preferidos que podem ser utilizados para a unidade de análise são descritos no presente. A unidade de análise compreende preferencialmente os mencionados agentes de detecção em forma imobilizada sobre um suporte sólido que deve ser colocado em contato com a amostra que compreende os biomarcadores cuja quantidade deve ser determinada. Além disso, a unidade de análise pode também compreender um detector que determina a quantidade de agente de detecção que é ligada especificamente ao(s) biomarcador(es). A quantidade determinada pode ser transmitida para a unidade de avaliação. A mencionada unidade de avaliação compreende um elemento de processamento de dados, tal como um computador, com um algoritmo implementado para conduzir comparação entre a quantidade determinada e uma referência apropriada. Referências apropriadas podem ser derivadas de amostras de pacientes a serem utilizadas para a geração de quantidades de referência conforme descrito acima. Os resultados de diagnóstico podem ser fornecidos como saída de dados brutos de diagnóstico paramétrico, preferencialmente como quantidades absolutas ou relativas. Deve- se compreender que esses dados podem necessitar de interpretação pelo médico. Também são idealizados, entretanto, dispositivos de sistemas especializados em que a saída compreende dados brutos de diagnóstico processados cuja interpretação não necessita de médicos especializados. Preferencialmente, o dispositivo de acordo com a presente invenção pode ser utilizado para conduzir o método de acordo com a presente invenção mencionado acima de forma automatizada.
[132] Uma realização preferida da presente invenção inclui um sistema de orientação de exercícios conforme definido no presente. Exemplos de sistemas incluem analisadores químicos clínicos, analisadores químicos de coagulação, analisadores imunoquímicos, analisadores de urina e analisadores de ácido nucleico, utilizados para detectar o resultado de reações químicas ou biológicas ou para monitorar o progresso de reações químicas ou biológicas. Mais especificamente, exemplos de sistemas de acordo com a presente invenção podem incluir sistemas Roche Elecsys®, analisadores de imunoteste Cobas®, analisadores Abbott Architect® e Axsym®, analisadores Siemens Centaur® e Immulite®, analisadores Beckman Coulter UniCel® e Acess® ou similares.
[133] Realizações do sistema podem incluir uma ou mais unidades analisadoras utilizadas para a prática da presente invenção. As unidades analisadoras do sistema descrito no presente encontram-se em comunicação operativa com o dispositivo de computação descrito no presente por meio de qualquer um dentre conexão com fio, Bluetooth, LANS ou sinal sem fio, conforme conhecido. Além disso, de acordo com a presente invenção, uma unidade analisadora pode compreender um aparelho isolado ou módulo dentro de um instrumento maior, que realiza um ou ambos dentre a detecção e, por exemplo, a avaliação qualitativa e/ou quantitativa das amostras para fins de diagnóstico. Uma unidade analisadora pode, por exemplo, realizar ou auxiliar a pipetagem, dosagem e mistura de amostras e/ou reagentes. Uma unidade analisadora pode compreender uma unidade de retenção de reagentes para armazenar reagentes para realização dos testes. Os reagentes podem ser dispostos, por exemplo, na forma de recipientes ou conjuntos que contêm reagentes individuais ou um grupo de reagentes, colocados em receptáculos ou posições apropriadas dentro de um transportador ou compartimento de armazenagem. Reagentes de detecção podem também encontrar-se em forma imobilizada sobre um suporte sólido em contato com a amostra. Além disso, uma unidade analisadora pode incluir um componente de detecção e/ou processo que pode ser otimizado para análise específica.
[134] Segundo algumas realizações, uma unidade analisadora pode ser configurada para detecção ótica de um analisado, tal como um marcador, com uma amostra. Um exemplo de unidade analisadora configurada para detecção óptica compreende um dispositivo configurado para converter energia eletromagnética em sinais elétericos, que inclui detectores ópticos de elementos isolados e múltiplos ou conjunto. Segundo a presente invenção, um detector óptico é capaz de monitorar um sinal eletromagnético óptico e fornecer um sinal de saída elétrico ou sinal de reação com relação a um sinal de linha base indicativo da presença e/ou concentração de um analisado em uma amostra que está localizada em um trajeto óptico. Esses dispositivos podem também incluir, por exemplo, fotodiodos, incluindo fotodiodos de avalanche, fototransistores, detectores fotocondutores, conjuntos de sensor linear, detectores CCD, detectores CMOS, incluindo detectores de conjunto CMOS, fotomultiplicadores e conjuntos fotomultiplicadores. Segundo certas realizações, um detector óptico, tal como um fotodiodo ou fotomultiplicador, pode conter circuito eletrônico de processamento ou condicionamento de sinais adicional. Um detector óptico pode incluir, por exemplo, pelo menos um pré-amplificador, filtro eletrônico ou circuito integrado. Pré-amplificadores apropriados incluem, por exemplo, pré-amplificadores de integração, transimpedância e ganho de corrente (espelho de corrente).
[135] Além disso, uma ou mais unidades analisadoras de acordo com a presente invenção podem compreender uma fonte de luz para emissão de luz. Uma fonte de luz de uma unidade analisadora pode consistir, por exemplo, de pelo menos um elemento emissor de luz (tal como um diodo emissor de luz, uma fonte de radiação alimentada com energia elétrica tal como uma lâmpada incandescente, lâmpada eletroluminescente, lâmpada de descarga de gás, lâmpada de descarga com alta intensidade ou laser) para medir concentrações de analisado com uma amostra sendo testada ou para permitir transferência de energia (tal como por meio de transferência de energia de ressonância fluorescente ou catálise de enzimas).
[136] Além disso, uma unidade analisadora do sistema pode incluir uma ou mais unidades de incubação (por exemplo, para manter amostras ou reagentes sob temperatura ou faixa de temperaturas especificada). Em algumas realizações, uma unidade analisadora pode incluir um termociclizador, incluindo um termociclizador em tempo real, para submeter a amostra a ciclos de temperatura repetidos e monitorar alterações da quantidade de um produto de amplificação com a amostra.
[137] Além disso, uma unidade analisadora do sistema descrito no presente pode compreender ou ser conectada operacionalmente a um recipiente de reação ou unidade de alimentação de cubetas. Exemplos de unidades de alimentação incluem unidades de processamento de líquidos, tais como unidades de pipeta, para fornecer amostras e/ou reagentes para os recipientes de reação. A unidade de pipeta pode compreender uma agulha lavável reutilizável, tal como uma agulha de aço, ou pontas de pipeta descartáveis. A unidade analisadora pode compreender adicionalmente uma ou mais unidades de mistura, tal como um agitador para agitar uma cubeta que compreende um líquido ou uma pá de mistura para misturar líquidos em uma cubeta ou recipiente de reagentes.
[138] Segue-se do acima que, de acordo com algumas realizações da presente invenção, partes de algumas etapas de métodos descritos e revelados no presente podem ser realizadas por um dispositivo de computação. Um dispositivo de computação pode ser, por exemplo, um computador com propósitos gerais ou um dispositivo de computação portátil. Dever-se-á também compreender que diversos dispositivos de computação podem ser utilizados em conjunto, tal como por meio de uma rede ou outros métodos de transferência de dados, para realizar uma ou mais etapas dos métodos descritos no presente. Exemplos de dispositivos de computação incluem computadores desktop, computadores laptop, assistentes de dados pessoais (“PDA”), tais como dispositivos da marca BLACKBERRY, dispositivos celulares, computadores tablets, servidores e similares. Geralmente, um dispositivo de computação compreende um processador capaz de executar uma série de instruções (tais como um programa de software).
[139] Um dispositivo de computação possui acesso a memória. Memória é um meio legível por computador e pode compreender um ou mais dispositivos de armazenagem, posicionados localmente com o dispositivo de computação ou acessíveis ao dispositivo de computação, por exemplo, por meio de uma rede. Meios legíveis por computador podem ser quaisquer meios disponíveis que podem ser acessados pelo dispositivo de computação e incluem meios voláteis e não voláteis. Meios legíveis por computador podem também ser um ou ambos dentre meios removíveis e não removíveis. Como forma de exemplo e não de limitação, meios legíveis por computador podem compreender meios de armazenagem por computador. Exemplos de meios de armazenagem por computador incluem, mas sem limitações, RAM, ROM, EEPROM, memória flash ou qualquer outra tecnologia de memória, CD-ROM, Disco Versátil Digital (DVD) ou outro disco óptico de armazenagem, cassetes magnéticas, fita magnética, armazenagem em disco magnético, outros dispositivos de armazenagem magnéticos ou qualquer outro meio que possa ser utilizado para armazenar uma série de instruções capazes de serem acessadas pelo dispositivo de computação e executadas pelo processador do dispositivo de computação.
[140] Segundo realizações da presente invenção, software pode incluir instruções que, quando executadas por um processador do dispositivo de computação, podem realizar uma ou mais etapas dos métodos descritos no presente. Algumas das instruções podem ser adaptadas para produzir sinais que controlam a operação de outras máquinas e, portanto, podem operar através desses sinais de controle para transformar materiais removidos do próprio computador. Estas descrições e representações são os meios utilizados pelos técnicos no assunto de processamento de dados, por exemplo, para conduzir mais efetivamente a substância do seu trabalho para outros técnicos no assunto.
[141] A série de instruções pode também compreender um algoritmo que é geralmente concebido para ser uma sequência autoconsistente de etapas que gera um resultado desejado. Estas etapas são as que necessitam de manipulações físicas de quantidades físicas. Normalmente, mas não necessariamente, estas quantidades assumem a forma de sinais ou pulsos elétricos ou magnéticos, que podem ser armazenados, transferidos, transformados, combinados, comparados e manipulados de outra forma. Às vezes é conveniente, principalmente por razões de uso comum, designar esses sinais como valores, caracteres, dados de visor, números ou similares com referência aos itens físicos ou manifestações nas quais esses sinais são realizados ou expressos. Dever-se-á ter em mente, entretanto, que todos estes termos e similares devem ser associados às quantidades físicas apropriadas e são meramente utilizados no presente como marcas convenientes aplicadas a essas quantidades. Segundo algumas realizações da presente invenção, um algoritmo para condução de comparação entre uma quantidade determinada de um ou mais marcadores descritos no presente e uma referência apropriada é realizado por meio da execução das instruções. Os resultados podem ser fornecidos como saída de dados brutos de diagnóstico paramétrico ou como quantidades absolutas ou relativas. Segundo diversas realizações do sistema descrito no presente, “diagnóstico” pode ser fornecido pelo dispositivo de computação de um sistema descrito no presente com base na mencionada comparação da “quantidade” calculada com uma referência ou limite. Um dispositivo de computação de um sistema pode fornecer, por exemplo, um indicador, na forma de uma palavra, símbolo ou valor numérico que indica um diagnóstico específico.
[142] O dispositivo de computação pode também ter acesso a um dispositivo de saída. Exemplos de dispositivos de saída incluem, por exemplo, máquinas de fax, visores, impressoras e arquivos. Segundo algumas realizações da presente invenção, o dispositivo de computação pode realizar uma ou mais etapas de um método descrito no presente e, em seguida, fornecer uma saída, por meio de um dispositivo de saída, relacionada a um resultado, indicação, razão ou outro fator do método.
[143] A presente invenção engloba adicionalmente um kit de diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica em pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica, em que o mencionado kit compreende um agente de detecção de troponina cardíaca e um ou mais padrões que reflete(m) a(s) quantidade(s) de referência derivada(s) de uma amostra de paciente que conhecidamente sofre de apoplexia cardioembólica e/ou de paciente que conhecidamente sofre de apoplexia não cardioembólica.
[144] A presente invenção, por fim, engloba um kit de diagnóstico da fibrilação atrial em um paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial, em que o mencionado kit compreende um agente de detecção para troponina cardíaca (e, opcionalmente, para um peptídeo natriurético) e um ou mais padrões que reflete(m) a(s) quantidade(s) de referência conforme derivado de uma amostra de paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial e/ou de paciente que conhecidamente não sofre de fibrilação atrial.
[145] O termo “kit”, da forma utilizada no presente, designa uma coleção dos componentes mencionados acima, preferencialmente fornecidos separadamente ou em um único recipiente. O recipiente também compreende instruções de condução do método de acordo com a presente invenção. Essas instruções podem apresentar-se na forma de manual ou podem ser fornecidas por um código de programa de computador que é capaz de conduzir as comparações indicadas nos métodos de acordo com a presente invenção e estabelecer consequentemente um diagnóstico quando implementado em um computador ou dispositivo de processamento de dados. O código de programa de computador pode ser fornecido em um dispositivo ou meio de armazenagem de dados tal como um meio de armazenagem ótico ou magnético (tal como um disco compacto) ou diretamente em um computador ou dispositivo de processamento de dados. Além disso, o kit pode preferencialmente compreender padrões que refletem as quantidades de referência conforme descrito e indicado em detalhes no presente. O agente de detecção é preferencialmente imobilizado sobre um veículo e, preferencialmente, uma fita de teste.
REALIZAÇÕES DA PRESENTE INVENÇÃO
[146] São relacionadas a seguir realizações preferidas dos métodos de acordo com a presente invenção. Aplicam-se preferencialmente as definições fornecidas acima, mutatis mutandis. 1. Método para diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, que compreende a determinação da quantidade de troponina cardíaca em uma amostra de paciente que sofre de apoplexia isquêmica, em que a amostra foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. 2. Método de acordo com a realização 1, que compreende adicionalmente a etapa de comparação da quantidade da mencionada troponina cardíaca com uma quantidade de referência, de forma a diferenciar se o mencionado paciente sofre de apoplexia cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica. 3. Método de acordo com qualquer das realizações 1 ou 2, em que a amostra que foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia foi obtida do mencionado paciente em menos de 24 horas, particularmente em menos de 12 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. 4. Método de acordo com qualquer das realizações 1 ou 2, em que a amostra que foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia foi obtida do mencionado paciente em menos de 6 horas, particularmente em menos de 3 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. 5. Método de acordo com qualquer das realizações 1 a 4, em que a quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de apoplexia cardioembólica, em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca ou uma quantidade de troponina cardíaca que é elevado em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente sofre de apoplexia cardioembólica; e/ou em que a quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica, em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca ou uma quantidade de troponina cardíaca que é elevado em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente sofre de apoplexia isquêmica não cardioembólica. 6. Método de acordo com qualquer das realizações 1 a 5, que compreende adicionalmente a determinação da quantidade de um peptídeo natriurético, particularmente de um peptídeo natriurético cerebral, particularmente de BNP ou NT-proBNP. 7. Método de diagnóstico de fibrilação atrial em um paciente suspeito de sofrerem de fibrilação atrial, que compreende a determinação da quantidade de troponina cardíaca em uma amostra do mencionado paciente. 8. Método de acordo com a realização 7, que compreende adicionalmente a etapa de comparação da quantidade de troponina cardíaca com uma quantidade de referência. 9. Método de acordo com qualquer das realizações 7 ou 8, em que o paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial sofre de apoplexia isquêmica, particularmente de apoplexia cardioembólica, em que a amostra foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. 10. Método de acordo com a realização 9, em que a mencionada amostra do mencionado paciente foi obtida do mencionado paciente em menos de 12 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica, particularmente em menos de 6 horas ou em menos de 3 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. 11. Método de acordo com qualquer das realizações 7 a 10, em que é diagnosticada a fibrilação atrial intermitente. 12. Método de acordo com qualquer das realizações 7 a 11, que compreende adicionalmente a determinação da quantidade de um peptídeo natriurético, particularmente de um peptídeo natriurético cerebral, particularmente de BNP ou NT-proBNP. 13. Uso de troponina cardíaca e/ou de um agente de detecção, que se liga especificamente a ela em uma amostra de paciente para diferenciação precoce para saber se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, em que a amostra foi obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica. 14. Uso de troponina cardíaca e/ou de um agente de detecção que se liga especificamente a ela em uma amostra de paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial para diagnóstico de fibrilação atrial no mencionado paciente. 15. Dispositivo de diferenciação precoce para saber se um paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica em pacientes que sofrem de apoplexia isquêmica, em que o mencionado dispositivo compreende: a. uma unidade de análise que compreende um agente de detecção para troponina cardíaca que permite a determinação da quantidade da mencionada troponina cardíaca (e, opcionalmente, um agente de detecção para um peptídeo natriurético que permite a determinação da quantidade do mencionado peptídeo natriurético); e b. uma unidade de avaliação que compreende um processador de dados que possui implementado um algoritmo de comparação da(s) quantidade(s) determinada(s) pela unidade de análise com quantidade(s) de referência armazenada(s) em um banco de dados, a fim de diferenciar se o paciente sofre de apoplexia isquêmica cardioembólica ou de apoplexia isquêmica não cardioembólica, em que a quantidade de referência é derivada de amostras de um paciente conforme definido na realização 5 e o algoritmo é um algoritmo conforme definido na reivindicação 5.
[147] Todas as referências mencionadas no presente relatório descritivo são integralmente incorporadas ao presente como referência.
[148] Os exemplos a seguir deverão meramente ilustrar a presente invenção. Eles não deverão ser interpretados, de nenhuma forma, para limitar o escopo da presente invenção. EXEMPLO 1 DETERMINAÇÃO DE TROPONINA T, GDF-15 E NT-PROBNP Determinou-se Troponina T utilizando teste de sanduíche ELISA de eletroquimioluminescência da Roche e teste STAT (giro curto ao longo do tempo) hs (alta sensibilidade) de troponina T da Elecsys. O teste emprega dois anticorpos monoclonais dirigidos especificamente contra troponina T cardíaca humana. Os anticorpos reconhecem dois epítopos (posição de aminoácidos 125-131 e 136-147) localizados na parte central da proteína troponina T cardíaca, que consiste de 288 aminoácidos (sensibilidade analítica abaixo de 1,0).
[149] Determinou-se NT-proBNP utilizando teste de sanduíche ELISA de eletroquimioluminescência da Roche e teste STAT (giro curto ao longo do tempo) proBNP II da Elecsys. O teste emprega dois anticorpos monoclonais que reconhecem epítopos localizados na parte N-terminal (1-76) de proBNP (1108).
[150] Para determinar a concentração de GDF-15 em uma amostra de plasma e soro, foi empregado um teste de protótipo Elecsys, utilizando um anticorpo IgG GDF-15 anti-humano de cabra purificado por cromatografia de afinidade GDF-15 da R&D Systems (AF957). Em cada experimento, foi gerada uma curva padrão com GDF-15 humano recombinante da R&D Systems (957-GD/CF). Os resultados com novas bateladas ou proteína GDF-15 recombinante foram testados em uma amostra de plasma padrão e qualquer desvio acima de 10% foi corrigido por meio da introdução de um fator de ajuste para este teste. Medições de GDF-15 em uma amostra de soro e plasma do mesmo paciente geraram resultados virtualmente idênticos após a correção para fatores de diluição eventuais. O limite de detecção do teste foi de 200 pg/ml. EXEMPLO 2 CONJUNTO DE PACIENTES Ao todo, 255 pacientes com apoplexia isquêmica (idade média de 70 anos) foram testados para determinar NT-proBNP, trponinT e GDF 15. Ataque isquêmico transitório estava presente em 23 pacientes, apoplexia menor foi diagnosticada em 61 pacientes e apoplexia importante foi encontrada em 108 pacientes. Além disso, conforme descrito acima, realizou-se ultrassom caotoide e transcraniano bem como eletro e ecocardiografia e os pacientes foram classificados de acordo com os critérios TOAST. Além disso, realizou-se ECG HOLTER com sete dias para identificar fibrilação atrial não observada sobre o eletrocardiograma de rotina. EXEMPLO 3 RESULTADOS Foram obtidos os resultados a seguir (são indicados os valores médios, o 25° percentual e o 75° percentual):
Figure img0001
Figure img0002
[151] Conforme descrito anteriormente, apoplexia cardioembólica foi associada a níveis de NT-proBNP, GDF 15 não contribuiu significativamente com a classificação da apoplexia, mas troponina T sensível contribuiu, de forma a excluir as dificuldades de separação de peptídeos natriuréticos tipo B cerebral e cardíaco.
[152] Estes dados são adicionalmente sustentados pela classificação relativa à presença ou ausência de fibrilação atrial. Os resultados são os seguintes:
Figure img0003
[153] Os dados demonstram novamente a associação de fibrilação atrial com NT-pro BNP e tropinina T, mas muito menos com GDF 15. As limitações de NT-pro BNP a serem utilizadas na classificação também foram sustentadas pelo fato de que os níveis médios de NT-pro BNP aumentaram a partir da apresentação (331 pg/ml) até acompanhamento por 24 horas para 437 pg/ml, que se encontra na faixa de aumento de 30%. Não fica claro até que ponto esse aumento deveu-se a causas cardíacas ou foi liberado pelo cérebro. Por outro lado, não houve aumento significativo de Troponina T no acompanhamento. Desta forma, os níveis de Troponina T permaneceram estáveis.
[154] Resumidamente, descobriu-se que Troponina T é uma ferramenta poderosa na identificação/separação de causas de apoplexia. Este método pode também ser utilizado na prevenção de apoplexia em combinação com peptídeos natriuréticos do tipo B. GDF 15 forneceu surpreendentemente poucas informações adicionais a essa questão clínica importante. EXEMPLO 4 ESTUDOS DE CASOS Um homem com 68 anos de idade é diagnosticado com TIA (ataque isquêmico transitório) com base em sintomas clínicos e MRI subsequente. Seu ECG é normal. Sua Troponina T é de 10,2 pg/ml e sua NT-pro BNP é de 520 pg/ml. Ecocardiograma exibiu suave distúrbio no ventrículo esquerdo e nas aurículas não houve formação de trombo. Com base nos critérios TOAST, o paciente foi diagnosticado como apoplexia cardioembólica após eliminar outras possibilidades. Devido à formação de trombo intra-atrial, ele recebe ECG Holter por três dias, que revela fibrilação atrial paroxismal. Ele recebe em seguida terapia anticoagulante, pois não tinha contraindicações.
[155] Um homem com 72 anos de idade apresenta apoplexia menor confirmada por meio de MRI após eliminar sangramento intracerebral por meio de varrimento CT. Sua Troponina T é de 4,1 pg/ml e sua NT-pro BNP é de 245 pg/ml. Ultrassom da carótida revela estenose de 80% da bifurcação da carótida direita. ECG e ecocardiografia são normais, exceto por distúrbios diastólicos menores. Como ele não é propenso a ter AF, não foi conduzida ECG de Holter. Ele é aconselhado a considerar a revisão da carótida obstruída após avaliação mais intensa de artérias intra e extracerebrais.
[156] Uma mulher com 52 anos de idade relata tontura e palpitações e visita o pronto atendimento. Sua Troponina T é de 3 pg/ml, NT-pro BNP é de 115 pg/ml, ECG e ecocardiografia estão dentro do normal. Como os sintomas não indicam evento cerebral nem fibrilação atrial, nenhuma pesquisa adicional foi realizada, o que está de acordo com os resultados de troponina T e NT-pro BNP. Ela foi dispensada com suspeita de síndrome de ansiedade.
[157] Um homem com 58 anos de idade apresenta-se ao pronto atendimento devido a fraqueza temporária do seu braço esquerdo. Seu ECG é normal, sua Troponina T é de 11,1 pg/ml e sua NT-pro BNP é de 435 pg/ml. MRI descarta apoplexia e, devido aos resultados de Troponina T e NT-pro BNP, realizou-se posteriormente ECG Holter que revelou fibrilação atrial paroxismal. Eco subsequente incluindo TTE revelou trombos intra-atriais. Ele é diagnosticado com fibrilação atrial paroxismal e colocado em terapia com anticoagulantes sem contraindicações evidentes.
[158] Um homem com 58 anos de idade apresenta-se com apoplexia isquêmica duas horas após o início dos sintomas ao pronto atendimento. Os sintomas incluem fraqueza súbita do braço e da perna direita, sua Troponina T é de 12,5 pg/ml e NT-pro BNP é de 920 pg/ml. A suspeita de apoplexia cardioembólica é confirmada por ecocardiografia do esôfago com trombo visível na aurícula esquerda. Angiografia associada à terapia de lise confirmou o diagnóstico. Terapia de lise foi bem-sucedida, os sintomas melhoraram e o paciente é colocado em anticoagulantes.
[159] Um homem com 58 anos de idade apresenta-se com tontura ao seu médico. Ele teve diabetes mellitus nos últimos oito anos, fumou na maior parte da vida e apresenta hipertensão arterial conhecida nos últimos dez anos. Formação de imagens exclui TIA, segundo a ecocardiografia ele possui aurícula esquerda dilatada sem formação de trombo e, na apresentação, seu ECG é normal e registrou-se batimento senoidal. Sua troponina é de 11 pg/ml e NT-pro BNP é de 480 pg/ml. Algumas semanas mais tarde, o paciente é colocado em ECG Holter e registra-se fibrilação atrial intermitente.
CONCLUSÃO
[160] A identificação de pacientes com apoplexia cardioembólica é importante, pois ela indica etapas de diagnóstico adicionais, tratamento e, de forma ainda mais importante, a prevenção de apoplexias futuras. Demonstrouse a utilidade de peptídeos natriuréticos na detecção de candidatos para apoplexia cardioembólica em pacientes que se apresentam com apoplexia isquêmica. Conforme exibido no presente, entretanto, peptídeos natriuréticos podem alterar-se no transcurso da apoplexia, o que limita o seu potencial de diagnóstico. Este não é o caso com Troponina T, que não está sujeita a alterações substanciais.
[161] Raciocínio similar aplica-se à detecção de fibrilação atrial paroximal ou intermitente. Fibrilação atrial é mais frequente na população mais velha. Como os métodos de diagnóstico (ECG Holter e métodos de detecção para resultar em trombos atriais, TEE) possuem disponibilidade limitada, a seleção dos pacientes (ingresso/exclusão) é importante. Isso pode ser atingido pela determinação de Troponina T (e NT-pro BNP) e pelo uso de cortes apropriados.
[162] Concluindo, os inventores identificaram Troponina T como método de diagnóstico importante em apoplexia isquêmica, bem como fibrilação atrial intermitente, a fim de dirigir métodos de diagnóstico e cronogramas de tratamento adicionais.

Claims (8)

1. MÉTODO IN VITRO PARA DIAGNOSTICAR FIBRILAÇÃO ATRIAL INTERMITENTE, em um paciente humano suspeito de sofrer de fibrilação atrial intermitente, caracterizado por compreender: a) a determinação da quantidade de uma troponina cardíaca em uma amostra do mencionado paciente, em que a amostra foi obtida do mencionado paciente em menos de 6 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica; e b) a comparação da quantidade de troponina cardíaca com uma quantidade de referência; em que a fibrilação atrial intermitente é diagnosticada na ausência de um episódio de fibrilação atrial.
2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo paciente, suspeito de sofrer de fibrilação atrial, sofrer de apoplexia isquêmica, particularmente de apoplexia cardioembólica, e em que a amostra tenha sido obtida imediatamente após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica.
3. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pela mencionada amostra do mencionado paciente ter sido obtida do mencionado paciente em menos de 3 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica.
4. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo paciente conhecidamente não sofrer de fibrilação atrial persistente e permanente e/ou em que a quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente ou a partir de um grupo desses pacientes, e em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca ou uma quantidade de troponina cardíaca que é elevada em comparação com a quantidadede referência indica que o paciente sofre de fibrilação atrial intermitente e/ou em que a quantidade de referência é derivada de um paciente que conhecidamente não sofre de fibrilação atrial ou de um grupo desses pacientes, em que uma quantidade idêntica de troponina cardíaca ou uma quantidade de troponina cardíaca que é reduzida em comparação com a quantidade de referência indica que o paciente não sofre de fibrilação atrial intermitente.
5. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pela quantidade de troponina cardíaca na amostra do paciente ser comparada com duas quantidades de referência, em que a primeira quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial intermitente ou de um grupo desses pacientes, e em que a segunda quantidade de referência é derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial permanente ou persistente ou de um grupo desses pacientes, em particular em que uma quantidade de troponina cardíaca na amostra do paciente que é essencialmente idêntica ou maior que a primeira quantidade de referência, mas que é inferior a segunda quantidade de referência derivada a partir de um paciente que conhecidamente sofre de fibrilação atrial permanente ou persistente é indicativa para o diagnóstico de fibrilação atrial intermitente.
6. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por compreender adicionalmente a determinação da quantidade de um peptídeo natriurético, particularmente de um peptídeo natriurético cerebral, particularmente de BNP e NT-proBNP, em que a amostra foi obtida em menos de 6 horas após o início dos sintomas de apoplexia isquêmica.
7. USO DE UMA TROPONINA CARDÍACA e/ou de um agente de detecção que se liga especificamente a ela, caracterizado por ser em uma amostra de um paciente, suspeito de sofrer de fibrilação atrial intermitente, para diagnosticar in vitro a fibrilação atrial intermitente no mencionado paciente, em que a fibrilação atrial intermitente é diagnosticada na ausência de um episódio de fibrilação atrial.
8. DISPOSITIVO PARA DIAGNOSTICAR FIBRILAÇÃO ATRIAL INTERMITENTE, em um paciente suspeito de sofrer de fibrilação atrial intermitente, caracterizado por compreender: a) uma unidade de análise que compreende um agente de detecção para uma troponina cardíaca que permite a determinação da quantidade da mencionada troponina cardíaca; e b) uma unidade de avaliação que compreende um processador de dados que possui implementado um algoritmo de comparação da quantidade determinada pela unidade de análise com uma ou mais quantidade de referência armazenada em um banco de dados, a fim de diagnosticar fibrilação atrial intermitente, em que a quantidade de referência é derivada de uma amostra de paciente de referência de um paciente, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 4 a 5, e o algoritmo é um algoritmo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 4 a 5.
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