KR101643147B1 - 트로포닌 및 ｂｎｐ 토대의 뇌졸중의 위험 환자 및 원인 진단 - Google Patents

트로포닌 및 ｂｎｐ 토대의 뇌졸중의 위험 환자 및 원인 진단 Download PDF

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Abstract

본 발명은 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 24 시간 이내에 수득된 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양 결정을 토대로 한다. 본 발명은 나아가 본 발명의 방법을 실시하기에 적합하게 맞춰진 키트 및 장치에 관한 것이다.

Description

트로포닌 및 ＢＮＰ 토대의 뇌졸중의 위험 환자 및 원인 진단 {TROPONIN AND BNP BASED DIAGNOSIS OF RISK PATIENTS AND CAUSE OF STROKE}
본 발명은 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 24 시간 이내에 수득된 허혈성 뇌졸중을 앓는 환자 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양 결정을 토대로 한다. 나아가, 본 발명은 대상체에서의 심박 세동 진단 방법에 관한 것이다. 나아가, 본 발명에서는 본 발명의 방법을 실시하기에 적합화된 키트 및 장치를 제공한다. 본 발명은 또한 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하고, 심박 세동을 진단하기 위한 시스템에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 본원에 개시된 방법 실시에 이용되는 시약 및 키트에 관한 것이다.
뇌졸중은 고소득 국가에서 허혈성 심장 질환에 이어 두번째로 수명을 단축하는 원인이 되고 있으며, 전세계적 사망 원인으로 꼽히고 있다. 조기에 나타나게 되는 뇌졸중의 불리한 결과들은 혈전 용해를 이용해 완화될 수 있고, 만년에 나타날 것들에 대해서는 아스피린 및 항응고제를 이용한 (후속하는 뇌졸중을 예방하기 위한) 2 차적인 예방이 질환 진행을 막는 유일한 적절한 방법인 것으로 나타났다 (van der Worp B and van Gijn J., NEJM 2007: 357: 572 578).
뇌졸중을 예방 또는 치료하기 위해서는, 뇌졸중의 근본 원인을 알아내는 것이 중요하다. 이는 TOAST 기준 (Adams H.P. et al Stroke 1993: 24: 35 41) 에 의해 해결되었다. TOAST 기준은 뇌졸중의 원인을 죽상혈관성 (큰 혈관들의 죽상동맥경화), 심장색전성, 소와성 (작은 혈관들이 관여됨) 및 미지의 것으로 나눈다 (Adams H.P. et al). 그러한 기준을 평가하기 위해서는 경동맥 및 경두개 초음파는 물론 심초음파 및 심전도도 필요하다 (Rodriguez-Yanez et al, Disease Markers 2009: 26: 189 - 195). 지금까지, NT-pro BNP 는 심장색전성 뇌졸중과는 연관되어 있지만, 죽상경화성, 소와성 및 미지의 뇌졸중과는 연관이 없다 (Rodriguez-Yanez et al). 그 방법의 한가지 큰 단점은 BNP 또는 NT-pro BNP 가 허혈성 뇌졸중인 뇌로부터 방출될 수 있기에, 뇌형 (Brain type) 나트륨이뇨 펩티드의 진단 잠재성을 제한한다는 점이다. 흥미롭게도, 본 발명자들은 본원 연구와 관련하여 뇌졸중 환자에서의 NT-proBNP 의 혈청 수준 중간값이 331 pg/ml 로 제시되고 후속관찰 24 시간 후에 약 30% 증가 (437 pg/ml) 되었음을 발견하게 되었다. 따라서, 나트륨이뇨 펩티드의 결정을 근거로 한 심장색전성 뇌졸중의 진단은 시험 시료를 수득하는 시점이 중요하다는 점을 알 수 있다. 따라서, 뇌로부터 방출되지 않는 위험 마커를 식별할 필요가 있다.
심장 트로포닌 T 및 I 는 급성 심근경색증 진단을 위한 바람직한 바이오마커이다 (Anderson JL, ACC/AHA 2007 guidelines for the management of patients with unstable angina/non-ST-Elevation myocardial infarction. J Am Coll Cardiol. 2007; 50(7): e1e157). 상승된 트로포닌 수준은 관상동맥 질환, 심부전, 및 만성 신부전을 포함하는 여러 비-급성 만성 질환 상태에서 검출될 수 있다 (참고문헌은, 예를 들어 Omland et al., N Engl J Med. 2009; 361(26): 2538-2547). 트로포닌 T 및 I 는 또한 일반적인 집단의 개인들에게서도 검출가능한 것으로 나타났다 (참고문헌은, 예를 들어 Wallace et al., Prevalence and determinants of Troponin T elevation in the general population. Circulation. 2006; 113(16): 1958-1965).
문헌 [Song et al. (Journal of Clinical Neurology, Volume 4, 2006, pages 75 내지 83)] 에서는 허혈성 뇌졸중이 있는 455 명의 환자를 포함하는 연구를 기재한다. 혈청 트로포닌 T 는 환자에서 약 10% 상승하며, 특히 더욱 심각한 신경학적 후유증 및 뇌섬엽에 대한 손상과 관련된 더욱 심한 뇌졸중 중증과 관련되어 있다. 본 연구의 저자들은 상승된 혈청 트로포닌 수준이 급성 허혈성 뇌졸중로 야기되는 스트레스에 대한 더 낮은 심장 용인성의 표식이 될 수 있는 것으로 결론지었다. 따라서, 상기 Song 등의 문헌에 따르면, 트로포닌의 상승은 급성 뇌졸중에 의해 유발되며, 즉 급성 이벤트에 후속하게 된다.
본 발명의 맥락에서, 놀랍게도 심장색전성 뇌졸중이 있는 환자에서 상승된 심장 트로포닌 수준은 심장색전성 뇌졸중의 발증시 이미 검출가능한 것으로 나타났다. 따라서, 상기 Song 등의 문헌의 교시와는 대조적으로, 심장 트로포닌 수준 증가는 뇌졸중 이벤트에 의해 야기되는 것이 아니다. 오히려, 본 발명의 연구에서는 심장 트로포닌의 수준은 뇌졸중 증상의 발증 전에 이미 증가되어 있음을 시사한다. 따라서, 심장 트로포닌의 결정은 대상체에서 심장색전성 허혈성 뇌졸중 및 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중의 조기 구별을 가능하게 해 준다. 이는 뇌졸중 원인의 조기 평가가 뇌졸중을 앓고 있는 대상체, 특히 심장색전성 뇌졸중을 앓고 있는 환자의 경우에, 그를 충분히 치료하기 위해 매우 중대하기 때문에, 유리한 것이다. 나아가, 심장색전으로 인한 뇌졸중은 일반적으로 중증이며, 조기 재발하는 경향이 있다.
통상적인 진단 기법으로는 일반적으로 뇌졸중 원인을 조기에 신뢰성있게 평가할 수 있지 않다. 따라서, 개별맞춤형 치료 투약계획이 충분한 정확성을 갖고 결정될 수 없다. 그 결과로서, 수많은 환자들이 불충분하거나 또는 부작용 효과가 있을 수 있는 치료 투약계획을 제공받게 된다. 따라서, 뇌졸중의 원인들을 신뢰성있게 구별하는 수단 및 방법이 필요하다.
본 발명이 해결하고자 하는 기술적인 문제는 상기 언급된 필요를 충족시킬 수단 및 방법을 제공하는 것이다.
상기 기술적인 문제는 하기 본원에 기재된 사항 및 특허청구범위에서 특징이 지개된 구현예들에 의해 해결된다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 방법을 제공한다:
a) 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양을 결정하는 단계,
여기서, 시료는 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후 수득되는 것임.
바람직한 구현예에서, 상기 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다:
b) 단계 a) 에서 결정된 상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교함으로써, 해당 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하게 되는 단계.
따라서, 본 발명은 특히 하기 단계를 포함하는 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 방법에 관한 것이다:
a) 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후에 수득되는 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양을 결정하는 단계, 및
b) 단계 a) 에서 결정된 상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교함으로써, 해당 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하게 되는 단계.
바람직하게는, c) 단계 b) 에서 실시된 비교 결과를 토대로 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 진단하는 단계를 추가로 실시함으로써, 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하게 된다.
본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서, 단계 a) 는 허혈성 뇌졸중의 발증 직후 수득되는 대상체 유래의 시료에서 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 그렇게 결정된 나트륨이뇨 펩티드의 양을 단계 b) 에서 나트륨이뇨 펩티드에 대한 기준량과 비교한다. .
따라서, 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 방법에 관한 것이다:
a) 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후 수득되는 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체 유래의 시료에서 심장 트로포닌 및 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) 단계 a) 에서 결정된 상기 심장 트로포닌의 양을 심장 트로포닌에 대한 기준량과, 그리고, 상기 나트륨이뇨 펩티드의 양을 나트륨이뇨 펩티드의 기준량과 비교함으로써 해당 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하게 되는 단계.
본 발명의 방법은 바람직하게는 생체외적 방법이다. 나아가, 이는 상기 설명하여 언급된 것에 추가하여 단계들을 포함할 수 있다. 예를 들어, 추가 단계들은 시료 예비처리 또는 방법에 의해 수득된 결과의 평가와 관련된 것일 수 있다. 상기 방법은 수동식으로 실시되거나 또는 자동의 보조를 받을 수 있다. 바람직하게는, 단계 (a) 및/또는 (b) 가 전부 또는 부분적으로, 예를 들어 단계 (a) 에서는 결정을 위한 적합한 로봇 또는 감각적 장비 (sensory equipment) 에 의해 또는 단계 (b) 에서는 상기 비교를 토대로 컴퓨터-실행 비교 및/또는 구별에 의해 자동의 보조를 받을 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 바람직하게는 하기를 포함하는, 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 시스템에 관한 것이다:
a) 시험관 내에서 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체 유래의 시료 일부를 심장 트로포닌에 대한 특이적 결합 친화성을 포함하는 리간드와 접촉시키도록 배치되어 있는 분석기 단위체,
b)리간드와 접촉시킨 대상체 유래의 시료 일부 유래의 신호를 검출하도록 배치되어 있는 분석기 단위체,
c) 프로세서를 갖고 있으며, 상기 분석 단위체와 작동가능하게 통신이 되는 컴퓨팅 장치, 및
d) 프로세서에 의해 실행가능한 여러 지시사항을 포함하며, 지시사항은 실행시 심장 트로포닌의 양을 산출하고, 마커 양을 기준량과 비교하는 비-일시적 기계 검독 매체, 이로써, 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하게 됨.
본원에 사용된 용어 "구별" 은 허혈성 뇌졸중을 앓는 환자에서 심장색전성 뇌졸중 및 비-심장색전성 뇌졸중을 구분하는 것을 의미한다. 본원에 사용된 그 용어는 바람직하게는 대상체에서 심장색전성 허혈성 뇌졸중 및 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 구별하여 진단하는 것을 포함한다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 그러한 평가는 일반적으로 구별하여 진단함에 있어서 대상체 100% 에 대해 정확할 것을 의도하지는 않는다. 그러나, 상기 용어는 통계적으로 유의한 비율의 대상체가 올바르게 진단될 수 있을 것을 필요조건으로 한다. 진단/구별이 올바른지 여부는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 확인할 수 있다. 나아가, 해당 비율이 통계적으로 유의한지 여부는 다양한 널리 공지된 통계적 평가 도구들, 예를 들어 신뢰 구간의 결정, p-값 결정, Student's t-테스트, Mann-Whitney 테스트 등을 이용해 당업자의 추가적인 수고없이도 결정될 수 있다. 상세한 내용은, 참고문헌 [Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983] 을 참고할 수 있다. 바람직한 신뢰 구간은 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상이다. p-값은 바람직하게는 0.1, 0.05, 0.01, 0.005, 또는 0.0001 이다.
본원에 사용된 용어 "대상체" 는 동물, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간에 관한 것이다. 바람직하게는, 대상체는 급성 감염증을 앓고 있지 않다. 나아가, 대상체는 급성 관상동맥 증후군 및/또는 만성 신부전을 앓고 있지 않음을 가정한다. 특히, 상기 언급된 방법의 맥락에서 대상체는 정상적인 신장 기능을 지니고 있다. 나아가, 대상체는 바람직하게는 응급 단위가 제공되고 있는 대상체이다.
본원에 제공된 대상체의 정의는 바람직하게는 본 발명의 방법에 따라 시험되는 대상체 뿐만 아니라 기준량의 유래가 되는 대상체(들)에게도 적용된다.
본 발명의 방법에 따라 시험되는 대상체는 허혈성 뇌졸중을 앓고 있을 수 있다. 용어 "허혈성 뇌졸중" (본원에서는 "뇌졸중" 으로도 언급함) 은 당업자에게 널리 공지되어 있다 (참고문헌은, 예를 들어 Adams et al., Guidelines for the Early Management of Adults With Ischemic Stroke, A Guideline From the American Heart Association/ American Stroke Association Stroke Council, Clinical Cardiology Council, Cardiovascular Radiology and Intervention Council, and the Atherosclerotic Peripheral Vascular Disease and Quality of Care Outcomes in Research Interdisciplinary Working Groups in Stroke. 2007; 38: 1655; 또는 Stroke Genetics, edited by Hugh S. Markus, Chapter 1 "An introduction to stroke, Oxford University Press, Incorporated, Publish Date 06/03, 두 문헌 모두 본원에 참고문헌으로 포함됨). 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어는 바람직하게는 뇌의 허혈성 뇌졸중을 지칭한다. 허혈성 뇌졸중은 뇌 세포에 대한 산소 전달 (공급) 감소를 유도하는 뇌 또는 그의 일부분에 대한 혈류 감소에 의해 야기된다. 허혈성 뇌졸중은 동맥혈의 유입 차단으로 인해 야기되는 조직 빈혈을 특징으로 할 수 있다. 이는 뇌 세포 사멸로 인한 비가역적인 조직 손상을 유도할 수 있다.
허혈성 뇌졸중에 대한 다양한 분류 시스템이 있다. The Oxford Community Stroke Project 분류법 (OCSP, 이는 밴포드 (Bamford) 또는 옥스포드 (Oxford) 분류법으로도 공지됨) 은 기본적으로 최초의 증상들을 기준으로 한다; 증상의 중증도를 기준으로 하여, 뇌졸중 에피소드는 전체적인 전방의 순환 경색 (total anterior circulation infarct) (TACI), 부분적인 전방의 순환 경색 (partial anterior circulation infarct) (PACI), 소와성 경색 (LACI) 또는 후방순환 경색 (posteriorcirculation infarct) (POCI) 으로 분류된다. 그러한 네가지 실체는 뇌졸중의 중증도, 영향을 받은 뇌의 영역, 근본 원인 및 예후를 예측하게 해 준다.
바람직하게는, 소위 TOAST 기준이 본원에 적용된다. TOAST 기준에 대해 참고문헌은, 예를 들어 [Donnan GA, Fisher M, Macleod M, Davis SM (May 2008). "Stroke". Lancet 371 (9624): 161223] 또는 ["Classification of subtype of acute Ischemic Stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. TOAST. Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment". Stroke 24 (1): 3541, 이들 두 문헌은 전체 공개된 내용이 참고문헌으로 포함됨]. TOAST (Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment) 분류는 임상적 증상 뿐만 아니라 추가적인 조사 결과를 바탕으로 하며; 그러한 근거로, 뇌졸중은 (1) 심장 기원의 색전증 (심장색전성 뇌졸중) (2) 대동맥의 죽상경화로 인한 혈전증 또는 색전증 (대동맥 협착, 죽상혈관 뇌졸중), (3) 작은 혈관의 폐색 (소와성 뇌졸중) 또는 (4) 미지의 원인 (원인에는 두가지 가능성이 있음: 원인이 밝혀지지 않았거나, 또는 조사 미완으로 인함) 으로 인한 것들로 분류된다. 따라서, 바람직한 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중은 죽상경화성 뇌허혈 (2 를 참조) 및 소와성 뇌졸중 (3 참조) 이다.
대상체가 뇌졸중, 특히 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부는 널리 공지된 방법으로 결정될 수 있다. 나아가, 뇌졸중의 증상들은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 Adams 등의 문헌 (인용한 텍스트) 에 기재되어 있다. 예를 들어, 뇌허혈 증상에는 얼굴, 팔 또는 다리의, 특히 신체 한쪽에서의 갑작스런 마비 또는 약화, 갑작스런 혼란, 발화 또는 이해 곤란, 한쪽 또는 양쪽 눈에서의 갑작스런 시각적 불편 및 갑작스런 도보의 불편, 현기증, 균형 또는 협응 상실이 포함된다.
용어 "시료" 는 체액 시료, 단리된 세포 시료 또는 조직 또는 장기 유래의 시료를 지칭한다. 체액 시료는 널리 공지된 기법으로 수득될 수 있고, 여기에는 바람직하게는 혈액, 혈장, 혈청 또는 뇨의 시료가 포함되며, 더욱 바람직하게는 혈액, 혈장 또는 혈청의 시료이다. 조직 또는 장기 시료는 예를 들어 생검에 의해 임의의 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 단리된 세포는 원심분리 또는 세포 분류와 같은 분리 기법에 의해 체액 또는 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 바람직하게는, 세포-, 조직- 또는 장기 시료는 본원에서 언급되는 펩티드를 발현 또는 제공하는 세포, 조직 또는 장기로부터 수득된다.
본 발명의 방법의 맥락에서 시험되는 시료는 뇌졸중 증상의 발증 직후 수득되어야 한다 (기준 시료도 마찬가지임). 바람직하게는, 시료는, 뇌졸중 증상의 발증 후 24 시간 이내, 특히 12 시간 이내에 해당 대상체로부터 수득된다면, 뇌졸중의 증상 발증 직후 수득된 것으로 간주된다. 더욱 바람직하게는, 시료는 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 6 시간 이내, 더욱더 바람직하게는 3 시간 이내에 해당 대상체로부터 수득된다면, 뇌졸중 증상의 발증 직후에 수득된 것으로 간주된다. 뇌졸중 증상의 발증 후 1 또는 2 시간 이내에 수득된 시료도 또한 고려된다.
용어 "심장 트로포닌" 은 심장의 세포들, 바람직하게는 심내막하 세포에서 발현되는 모든 트로포닌 이소형을 지칭한다. 그러한 이소형은 예를 들어, 문헌 [Anderson 1995, Circulation Research, vol. 76, no. 4: 681-686 및 Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493] 에 기재된 바와 같이 당업계에 특징파악이 잘 되어 있다. 바람직하게는, 심장 트로포닌은 트로포닌 T 및/또는 트로포닌 I 을, 가장 바람직하게는 트로포닌 T 를 지칭한다. 트로포닌의 이소형은 여타 이소형과 동시에 또는 연쇄적으로 또는 개별적으로, 즉 전혀 결정하지 않고도 본 발명의 방법으로 결정될 수 있다. 인간 트로포닌 T 및 인간 트로포닌 I 에 대한 아미노산 서열은 문헌 [Anderson, 상기 언급된 문헌, 및 Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493] 에 개시되어 있다.
용어 "심장 트로포닌" 은 또한 상기 언급된 특정 트로포닌, 즉 바람직하게는 트로포닌 I 및 더욱 바람직하게는 트로포닌 T 의 변이체를 포함한다. 그러한 변이체들은 해당 특정 심장 트로포닌과 적어도 동일한 본질적인 생물학적 및 면역학적 특성을 갖는다. 특히, 이들은 본 명세서에서 언급하는 특정 검정, 예를 들어 해당 심장 트로포닌을 특이적으로 인식하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 이용해 ELISA 검정으로 검출가능한 경우, 동일한 생물학적 및 면역학적 특성을 공유한다. 나아가, 본 발명에 따라 언급되는 변이체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 부가로 인해 상이한 아미노산 서열을 갖게 되는 것으로 이해되는데, 여기서 변이체의 아미노산 서열은 바람직하게는 특정 트로포닌의 아미노산 서열과 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 92% 이상, 약 95% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 또는 약 99% 이상 일치한다. 바람직하게는, 일치도는 2 개의 최적 정렬 서열을 비교 창 상에서 비교하여 결정되는데, 여기서 비교 창의 아미노산 서열의 절편은 최적 정렬을 위한 기준 서열 (부가 또는 결실을 포함하지 않음) 에 비해 부가 또는 결실 (예를 들어, 갭 (gap) 또는 오버행 (overhang)) 을 포함할 수 있다. 백분율은 두 서열에서 동일한 아미노산 잔기가 나타나는 위치의 갯수를 산출해 매치되는 위치의 갯수를 수득하고, 매치되는 위치의 갯수를 비교 창에서의 전체 위치 갯수로 나누고, 그 결과에 100 을 곱해 서열 일치성의 백분율을 수득한다. 비교를 위한 최적의 서열 정렬은 문헌 [Smith and Waterman Add. APL. Math. 2: 482 (1981)] 의 국지적 상동성 알고리즘에 의해, 문헌 [Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48: 443 (1970)] 의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌 [Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444 (1988)] 의 유사도 검색 방법에 의해, 이들 알고리즘의 전산화된 실행에 의해 (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA, 및 TFASTA, Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI), 또는 시각적 관찰에 의해 실시될 수 있다. 두 서열의 비교를 위해 식별될 것을 고려하면, GAP 및 BESTFIT 가 바람직하게는 그의 최적 정렬 및 그에 따른 일치도 결정에 채용된다. 바람직하게는, 갭 웨이트 (gap weight) 에 대한 디폴트 값 (default value) 5.00 및 갭 웨이트 길이 (gap weight length) 에 대한 0.30 을 이용했다. 변이체는 대립형질 변이체 또는 임의의 여타 종 특이적 상동체 (homolog), 파라로그 (paralog) 또는 오르토로그 (ortholog) 일 수 있다. 나아가, 본원에서 언급되는 변이체는 특이적 심장 트로포닌 또는 상기 언급된 유형의 변이체들의 절편들도, 상기 언급된 핵심적인 면역학적 및 생물학적 특성을 갖기만 한다면 포함한다. 바람직하게는, 심장 트로포닌 변이체가 인간 트로포닌 T 또는 트로포닌 I 의 것에 필적하는 면역학적 특성 (즉, 에피토프 조성) 을 갖는다. 따라서, 변이체들은 심장 트로포닌 농도 결정에 이용되는 상기 언급된 수단 또는 리간드에 의해 인식가능할 것이다. 변이체들은 심장 트로포닌 농도 결정에 이용되는 상기 언급된 수단 또는 리간드에 의해 인식가능할 것이다. 그러한 변이체는 예를 들어 트로포닌의 분해 생성물일 수 있다. 추가로, 포스포릴화 또는 미리스틸화와 같은 번역후 개질로 인해 상이해진 변이체들도 포함된다. 바람직하게는, 트로포닌 I 및 그의 변이체의 생물학적 특성은 액토미오신 (actomyosin) ATPase 을 억제하거나 또는 생체내 및 시험관내 혈관형성을 억제하는 능력이며, 이는 예를 들어 문헌 [Moses et al. 1999 PNAS USA 96 (6): 2645-2650)] 에 기재된 검정을 근거로 검출될 수 있다. 바람직하게는, 트로포닌 T 및 그의 변이체의 생물학적 특성은 트로포닌 C 및 I 와 복합체를 형성하고, 칼슘 이온에 결합하거나 또는 트로포미오신 (tropomyosin) 에 결합하여, 바람직하게는 트로포닌 C, I 및 T 의 복합체로서 또는 트로포닌 C, 트로포닌 I 및 트로포닌 T 의 변이체에 의해 형성되는 복합체로서 존재하게 되는 능력이다. 낮은 농도의 순환 심장 트로포닌은 여러 조건의 대상체에서 검출될 수 있음이 공지되어 있으나, 심화된 연구에서 그들 각각의 역할 및 비율을 이해할 필요가 있다 (Masson et al., Curr Heart Fail Rep (2010) 7:1521).
용어 "나트륨이뇨 펩티드" 는 심방의 나트륨이뇨 펩티드 (ANP)-유형 및 뇌 나트륨이뇨 펩티드 (BNP)-유형 펩티드 및, 동일한 예측 잠재력을 가진 그의 변이체를 포함한다. 본 발명에 따른 나트륨이뇨 펩티드는 ANP-유형 및 BNP-유형 펩티드 및 이들의 변이체를 포함한다 (참고문헌은, 예를 들어 Bonow, 1996, Circulation 93: 1946-1950). ANP-유형 펩티드는 pre-proANP, proANP, NT-proANP 및 ANP 를 포함한다. BNP-유형 펩티드는 pre-proBNP, proBNP, NT-proBNP, 및 BNP 를 포함한다. pre-pro 펩티드 (pre-proBNP 의 경우 135 아미노산) 는 짧은 신호 펩티드를 포함하는데, 이는 효소로 절단되어 pro 펩티드 (proBNP 의 경우 108 아미노산) 을 방출한다. pro 펩티드는 N-말단 pro 펩티드 (NT-pro 펩티드, NT-proBNP 의 경우 76 아미노산) 및 활성 호르몬 (BNP 의 경우 32 아미노산, ANP 의 경우 28 아미노산) 으로 더 잘라진다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 나트륨이뇨 펩티드는 NT-proANP, ANP, 및 더욱 바람직하게는, NT-proBNP, BNP, 및 이들의 변이체이다. ANP 및 BNP 는 활성 호르몬이며, 그의 각 불활성 카운터파트인 NT-proANP 및 NT-proBNP 보다 더 짧은 반감기를 갖고 있다. BNP 는 혈액에서 대사되는 한편, NT-proBNP 는 혈액에서는 온전한 분자로 순환하고, 신장에서 있는 그대로 제거된다. NT-proBNP 의 생체내 반감기는 반감기가 20 분인 BNP 보다 더 긴 120 분이다 (Smith 2000, J Endocrinol. 167: 239-46.). 예비분석물들 (preanalytics) 은 NT-proBNP 을 갖고 있어 더욱 강건하여, 시료를 중앙 실험실로 더욱 쉽게 수송하도록 해 준다 (Mueller 2004, Clin Chem Lab Med 42: 942-4.). 혈액 시료는 실온에서 수일 동안 저장될 수 있거나, 또는 회수 손실없이 우편발송 또는 선박수송될 수 있다. 대조적으로, 실온 또는 4℃ 에서의 48 동안의 BNP 의 저장은 20% 이상의 농도 손실을 불러온다 (Mueller loc.cit.; Wu 2004, Clin Chem 50: 867-73.). 따라서, 관심대상의 타임-코스 (time-course) 또는 특성에 따라서는, 나트륨이뇨 펩티드의 활성 또는 불활성 형태 중 어느 한 편의 측정이 유리할 수 있다. 본 발명에 따른 가장 바람직한 나트륨이뇨 펩티드는 NT-proBNP 또는 그의 변이체이다. 상기 간략히 논의된 바에 따르면, 본 발명에 따라 언급되는 바와 같은 인간 NT-proBNP 은 바람직하게는 인간 NT-proBNP 분자의 N-말단 부분에 해당하는 길이의 76 아미노산을 포함하는 폴리펩티드이다. 인간 BNP 및 NT-proBNP 의 구조는 이미 선행 기술에서 기재된 바 있으며, 그 문헌은 예를 들어 WO 02/089657, WO 02/083913 또는 상기 언급되었던 Bonow 의 문헌이다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 인간 NT-proBNP 은 EP 0 648 228 B1 에 개시된 바와 같은 인간 NT-proBNP 이다. 그러한 선행 기술 문헌은 본원에 개시된 NT-proBNP 및 그의 변이체의 특정 서열과 관련한 참고문헌으로 본원에 포함된다. 본 발명과 관련하여 언급되는 NT-proBNP 는 추가로 상기 논의된 인간 NT-proBNP 에 대한 상기 특이적 서열의 대립형질 및 여타 변이체를 포함한다. 구체적으로, 인간 NT-proBNP 과, 바람직하게는 인간 NT-proBNP 의 전체 길이를 통틀어, 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 수준의 것인 변이체 폴리펩티드가 고려된다. 상기 두 아미노산 서열간의 일치도는 당업계에 널리 공지된 알고리즘으로 결정될 수 있다. 바람직하게는, 일치도는 비교 창에서 2 개의 최적 정렬된 서열을 비교하여 결정되며, 비교 창에서의 아미노산 서열의 절편은 최적 정렬에 대해 기준 서열 (부가 또는 결실을 포함하지 않음) 에 비교하여 부가 또는 결실 (예를 들어, 갭 또는 오버행) 을 포함할 수 있다. 백분율은 두 서열에서 동일한 아미노산 잔기가 나타나는 위치의 갯수를 결정해 매치되는 위치의 갯수를 수득하고, 매치되는 위치의 갯수를 비교 창에서의 전체 위치 갯수로 나누고, 그 결과에 100 을 곱해 서열 일치성의 백분율을 수득해 산출된다. 비교를 위한 최적의 서열 정렬은 문헌 [Smith and Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981)] 의 국지적 상동성 알고리즘에 의해, 문헌 [Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)] 의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌 [Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444 (1988)] 의 유사도 검색 방법에 의해, 이들 알고리즘의 전산화된 실행에 의해 (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI), 또는 시각적 관찰에 의해 실시될 수 있다. 두 서열이 비교를 위해 식별될 것을 고려하면, GAP 및 BESTFIT 가 바람직하게는 그의 최적 정렬 및 그에 따른 일치도 결정을 위해 채용된다. 바람직하게는, 갭 웨이트 (gap weight) 에 대한 디폴트 값 (default value) 5.00 및 갭 웨이트 길이 (gap weight length) 에 대한 0.30 을 이용했다. 변이체는 대립형질 변이체 또는 임의의 여타 종 특이적 상동체 (homolog), 파라로그 (paralog) 또는 오르토로그 (ortholog) 일 수 있다. 실질적으로 유사하며 또한 고려되는 것들은 진단 수단에 의해 또는 각 전장 펩티드를 지향하는 리간드에 의해 여전히 인식되는 단백질가수분해 분해 생성물이다. 인간 NT-proBNP 의 아미노산에 대한 아미노산 결실, 치환 및/또는 부가가 있는 변이체 폴리펩티드는, 상기 폴리펩티드가 NT-proBNP 특성을 갖고 있는 한 포함된다. 본원에 언급되는 NT-proBNP 특성은 면역학적 및/또는 생물학적 특성이다. 바람직하게는, NT-proBNP 변이체는 인간 NT-proBNP 의 것에 필적하는 면역학적 특성 (즉, 에피토프 조성) 을 갖고 있다. 따라서, 변이체들은 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하기 위해 사용되는 상기 언급된 수단 또는 리간드에 의해 인식가능할 것이다. 생물학적 및/또는 면역학적 NT-proBNP 특성은 문헌 [Karl et al. (Karl 1999, Scand J Clin Lab Invest 230:177-181), Yeo et al. (Yeo 2003, Clinica Chimica Acta 338:107-115)] 에 기재된 검정에 의해 검출가능하다. 변이체는 또한 글리코실화된 펩티드와 같은 번역후 개질된 펩티드를 포함한다. 나아가, 본 발명에 따른 변이체는 또한 시료 수집 후, 예를 들어 표지, 특별하게는 방사활성 또는 형광 표지의 펩티드에 대한 공유결합적 또는 비-공유결합적 결합에 의해 개질된 펩티드 또는 폴리펩티드이다.
본 명세서에서 언급된 펩티드 또는 폴리펩티드의 양 결정은, 바람직하게는 반정량적 또는 정량적인, 양 또는 농도의 측정에 관한 것이다. 측정은 직접적으로 또는 간접적으로 실시될 수 있다. 직접적 측정은 펩티드 또는 폴리펩티드 자체로부터 수득되는 신호를 토대로 펩티드 또는 폴리펩티드의 양 또는 농도 측정, 및 시료 중에 존재하는 펩티드의 분자 수와 직접 정비례하는 강도를 측정하는 것에 관한 것이다. 그러한 신호 (본원에서는 강도 신호로도 언급됨) 는 종종 본원에서, 예를 들어 펩티드 또는 폴리펩티드의 특정한 물리적 또는 화학적 특성의 강도 값 측정에 의해 수득될 수 있다. 간접적 측정은 2 차적 구성요소 (즉, 펩티드 또는 폴리펩티드 자체가 아닌 구성요소) 또는 생물학적 판독 시스템, 예를 들어 측정가능한 세포 응답성, 리간드, 표지 또는 효소 반응 생성물로부터 수득되는 신호의 측정을 포함한다.
본 발명에 따르면, 펩티드 또는 폴리페티드의 양 측정은 시료 내 펩티드 양의 측정을 위한 모든 공지된 수단에 의해 실시될 수 있다. 상기 수단은 면역검정 및 다양한 샌드위치, 경쟁, 또는 여타 검정 포맷의 표지가능한 분자를 이용할 수 있는 방법들을 포함한다. 그러한 검정은, 바람직하게는 측정할 펩티드 또는 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 항체와 같은 검출제를 기반으로 한다. 검출제는 펩티드 또는 폴리펩티드의 존재 또는 부재를 표시하는 신호를 직접적으로 또는 간접적으로 생성할 수 있는 것이다. 나아가, 신호 세기는 바람직하게는 시료 중에 존재하는 폴리펩티드의 양에 대해 직접적으로 또는 간접적으로 (예를 들어, 역-비율) 보정될 수 있다. 나아가, 적합한 방법은 그의 정확한 분자량 또는 NMR 스펙트럼과 같은 펩티드 또는 폴리펩티드에 특정한 물리적 화학적 특성 측정을 포함한다. 상기 방법은 바람직하게는 바이오센서, 면역검정과 커플링되어 있는 광학 장치, 바이오칩, 분석 장치, 예컨대 질량 분광계, NMR-분석기 또는 크로마토그래피 장치를 포함한다. 나아가, 방법은 마이크로플레이트 ELISA-기반의 방법, 완전 자동화 또는 로봇 면역검정 (예를 들어, ElecsysTM 분석기로 이용가능), CBA (효소성 Cobalt Binding Assay, 예를 들어 Roche-HitachiTM 분석기로 이용가능), 및 라텍스 응집 검정 (예를 들어, Roche-HitachiTM 분석기로 이용가능) 을 포함한다.
바람직하게는, 펩티드 또는 폴리펩티드의 양 결정은, (a) 적절한 시간 동안 펩티드 또는 폴리펩티드의 양 표시인 세포 응답 세기를 이끌어낼 수 있는 세포를 상기 펩티드 또는 폴리펩티드와 접촉시키는 단계, (b) 세포 응답을 측정하는 단계를 포함한다. 세포 응답 측정을 위해, 시료 또는 가공 시료는 바람직하게는 세포 배양에 첨가하고, 내부 또는 외부 세포 응답을 측정한다. 세포 응답은 측정가능한 리포터 유전자 발현 또는 물질, 예를 들어 펩티드, 폴리펩티드 또는 소형 분자의 분비를 포함한다. 발현 또는 물질은 펩티드 또는 폴리펩티드의 양에 비례하는 세기를 제공한다.
또한 바람직하게는, 펩티드 또는 폴리펩티드의 측정은 시료 중의 펩티드 또는 폴리펩티드로부터 수득가능한 특정 세기 신호를 측정하는 단계를 포함한다. 상기 기재된 바와 같이, 그러한 신호는 펩티드 또는 폴리펩티드에 특이적인 질량 스펙트럼 또는 NMR 스펙트럼에서 관찰되는 펩티드 또는 폴리펩티드에 특이적인 m/z 변수에서 관찰되는 신호 세기일 수 있다.
펩티드 또는 폴리펩티드 양의 결정은 바람직하게는 (a) 펩티드를 특정 리간드에 접촉시키는 단계, (b) (선택적으로) 비-결합 리간드를 제거하는 단계, (c) 결합된 리간드의 양을 측정하는 단계를 포함할 수 있다.
바람직한 구현예에 따르면, 상기 접촉, 제거 및 측정 단계는 본원에 개시된 시스템의 분석기 단위체에 의해 실시될 수 있다. 일부 구현예에 따르면, 상기 단계들은 상기 시스템의 단일 분석기 단위체에 의해, 또는 작동가능한 서로간의 통신이 되는 하나 초과의 분석기 단위체에 의해 실시될 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에 따르면, 본원에 개시된 상기 시스템은 상기 접촉 및 제거 단계 실행을 위한 제 1 분석기 단위체 및 수송 단위체 (예를 들어, 로봇 팔) 에 의해 상기 제 1 분석기 단위체에 작동적으로 연결되어 있어 상기 측정 단계를 실행하는 제 2 분석기 단위체를 포함할 수 있다.
결합된 리간드, 특히 리간드 또는 리간드/펩티드 복합체는 일정 세기 신호를 생성할 것이다. 본 발명에 따른 결합은 공유 결합 및 비공유 결합을 모두 포함한다. 본 발명에 따른 리간드는 본원에 기재된 펩티드 또는 폴리펩티드에 결합하는 임의의 화합물, 예를 들어, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산, 또는 소형 분자일 수 있다. 바람직한 리간드에는, 항체, 핵산, 펩티드 또는 폴리펩티드, 예컨대 수용체 또는 펩티드 또는 폴리펩티드에 대한 결합 파트너 및, 펩티드에 대한 결합 도메인을 포함하는 이들의 절편, 압타머 (aptamer), 예를 들어 핵산 또는 펩티드 압타머가 포함된다. 그러한 리간드의 제조 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 적합한 항체 또는 압타머의 식별 및 제조는 또한 시판 공급사에 의해 제공된다. 당업자는 더 높은 친화성 또는 특이성을 가진 그러한 리간드의 유도체를 개발하는 방법에 친숙하다. 예를 들어, 무작위적 돌연변이가 핵산, 펩티드 또는 폴리펩티드에 도입될 수 있다. 이어서, 그러한 유도체들은 당업계에 공지된 스크리닝 과정, 예를 들어 파지 디스플레이를 위해 시험될 수 있다. 본원에서 언급되는 항체들은 폴리클로날 및 모노클로날 항체 뿐 아니라 그의 절편들, 예컨대 항원 또는 합텐에 결합할 수 있는 Fv, Fab 및 F(ab)2 절편을 포함한다. 본 발명은 또한 단일쇄 항체 및 인간화된 하이브리드 항체를 포함하는데, 여기서 원하는 항원-특이성을 나타내는 비-인간 공여자 항체는 인간 수용자 항체와 조합되어 있다. 공여자 서열은 일반적으로 적어도 공여자의 항원-결합 아미노산 잔기를 포함할 것이나, 공여자 항체의 여타 구조적 및/또는 기능적 관련 아미노산 잔기를 포함할 수도 있다. 그러한 하이브리드는 당업계에 널리 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 바람직하게는, 리간드 또는 시약은 펩티드 또는 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 본 발명에 따른 특이적 결합은 리간드 및 시약이 분석할 시료 중에 존재하는 또다른 펩티드, 폴리펩티드 또는 물질에 실질적으로 결합 ("교차-반응") 하지 않음을 의미한다. 바람직하게는, 특이적으로 결합된 펩티드 또는 폴리펩티드는 임의의 여타 관련 펩티드 또는 폴리펩티드보다 3 배 이상, 더욱 바람직하게는 10 배 이상, 더욱더 바람직하게는 50 배 이상 더 높은 친화성을 갖고 결합될 것이다. 비특이적 결합은, 예를 들어 웨스턴 블랏 상의 그의 크기에 따라 또는 시료 중의 그의 상대적으로 더 높은 풍부성에 의해, 명백하게 구분 및 측정될 수 있다. 리간드의 결합은 당업계에 공지된 임의의 방법으로 측정될 수 있다. 바람직하게는, 상기 방법은 반-정량적 또는 정량적이다. 나아가, 폴리펩티드 또는 펩티드 결정을 위한 적합한 기법이 하기에 기재되어 있다.
우선, 리간드의 결합은 예를 들어 NMR 또는 표면 플라스몬 공명에 의해 직접적으로 측정될 수 있다. 바람직한 구현예에 따른 리간드의 결합 측정은 본원에 개시된 시스템의 분석기 단위체에 의해 실시된다. 이후, 측정된 결합량은 본원에 개시된 전산 장치로 산출될 수 있다. 두번째로, 리간드가 또한 관심 대상의 펩티드 또는 폴리펩티드의 기질로서 제공되는 경우, 효소 반응 생성물 (예를 들어, 프로테아제 양은 절단된 기질의 양을, 예를 들어 웨스턴 블랏 상에서) 이 측정될 수 있다. 대안적으로, 리간드는 자체로 효소 특성을 나타낼 수 있으며, "리간드/펩티드 또는 폴리펩티드" 복합체 또는 펩티드 또는 폴리펩티드에 의해 각각 결합되어 있는 리간드가 적합한 기질과 접촉되어, 세기 신호 (intensity signal) 의 생성에 의한 검출을 가능케 할 수 있다. 효소 반응 생성물의 측정을 위해, 바람직하게는 기질의 양이 포화되어 있다. 기질은 또한 반응 전에 검출가능한 표지로 표지되어 있을 수 있다. 바람직하게는, 시료는 적절한 기간 동안 기질과 접촉되어 있다. 적절한 기간은 검출가능한, 바람직하게는 측정가능한 양의 생성물이 생성되기에 충분한 시간을 지칭한다. 생성물의 양을 측정하는 대신에, 주어진 (예를 들어, 검출가능한) 양의 생성물의 출현에 필요한 시간을 측정할 수도 있다. 세번째로, 리간드는 리간드의 검출 및 측정을 가능케 해 주는 표지에 공유결합으로 또는 비공유결합으로 커플링되어 있을 수 있다. 표지는 직접적 또는 간접적 방법으로 실시될 수 있다. 직접적 표지는 리간드에 대한 직접적 (공유결합적 또는 비공유결합적) 표지의 커플링을 수반한다. 간접적 표지는 제 1 리간드에 대한 제 2 리간드의 결합 (공유결합 또는 비공유결합) 을 수반한다. 제 2 리간드는 제 1 리간드에 특이적으로 결합한다. 상기 제 2 리간드는 제 2 리간드에 결합하는 제 3 리간드의 적합한 표지 및/또는 표적 (수용체) 으로 커플링될 수 있다. 제 2 , 제 3 또는 그 이상의 리간드의 이용은 종종 신호 증대를 위해 이용된다. 적합한 제 2 및 그 이상의 리간드는 항체, 2 차 항체 및 널리 공지된 스트렙타비딘-바이오틴 시스템 (Vector Laboratories, Inc.) 을 포함할 수 있다. 리간드 또는 기질은 또한 당업계에 공지된 하나 이상의 태그로 "태그" 될 수 있다. 이어서, 그러한 태그는 더 높은 차수의 리간드에 대해 표적이 될 수 있다. 적합한 태그에는 바이오틴, 디곡시게닌, His-Tag, 글루타티온-S-트랜스퍼라아제, FLAG, GFP, myc-tag, 인플루엔자 A 바이러스 해마글루티닌 (HA), 말토오스 결합 단백질 등이 포함된다. 펩티드 또는 폴리펩티드의 경우, 태그는 바람직하게는 N-말단 및/또는 C-말단에 있다. 적합한 표지는 적절한 검출 방법에 의해 검출가능한 임의의 표지이다. 전형적 표지에는 금 입자, 라텍스 비드, 아크리단 에스테르, 루미논, 루테늄, 효소 활성 표지, 방사활성 표지, 자석 표지 (예를 들어 "자석 비드", 상자성 및 반자성 표지 포함), 및 형광 표지가 포함된다. 효소 활성 표지에는 예를 들어 고추냉이 퍼옥시다아제, 알칼리성 포스파타아제, 베타-갈락토시다아제, 루시퍼라아제 및 그의 유도체가 포함된다. 검출을 위한 적합한 기질에는 디아미노벤지딘 (DAB), 3,3'-5,5'-테트라메틸벤지딘, NBT-BCIP (Roche Diagnostics 사로부터 즉석 제조 원액 용액으로 이용가능한 4-니트로블루 테트라졸륨 클로라이드 및 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-포스페이트), CDP-StarTM (Amersham Biosciences), ECFTM (Amersham Biosciences) 이 포함된다. 적합한 효소-기질 조합은 당업계에 공지된 방법 (예를 들어, 감광 필름 또는 적합한 카메라 시스템 이용) 에 따라 측정될 수 있는 착색 반응 생성물, 형광 또는 화학발광물을 결과물로 제공할 수 있다. 효소 반응 측정에 관하여, 기준은 비슷하게 적용된다. 전형적 형광 표지에는 형광 단백질 (예컨대, GFP 및 그의 유도체), Cy3, Cy5, 텍사스 레드, 플루오레신 및 Alexa 염료 (예를 들어, Alexa 568) 가 포함된다. 추가로 형광 표지는 예를 들어 Molecular Probes (Oregon) 로부터 입수가능하다. 또한, 형광 표지와 같은 양자 점 (quantum dots) 의 이용이 고려될 수 있다. 전형적 방사활성 표지에는 35S, 125I, 32P, 33P 등이 포함된다. 방사활성 표지는 임의의 공지된 적절한 방법, 예를 들어 감광 필름 또는 인광 영사기 (phosphor imager) 에 의해 검출가능하다. 본 발명에 따른 적합한 측정 방법은 또한 침강법 (특히, 면역침강법), 전자발광 (전자생성 화학발광), RIA (방사면역검정), ELISA (효소-연계 면역흡수 검정), 샌드위치 효소 면역 시험 (sandwich enzyme immune tests), 전자발광 샌드위치 면역검정 (ECLIA), 해리-강화 란타나이드 플루오로 면역 검정 (dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay) (DELFIA), 섬광 근거리 검정 (scintillation proximity assay) (SPA), 탁도측정 (turbidimetry), 혼탁측정 (nephelometry), 라텍스-강화 탁도측정 또는 혼탁측정 (latex-enhanced turbidimetry or nephelometry), 또는 고상 면역 시험을 포함한다. 당업계에 공지된 추가적인 방법 (예컨대, 겔 전기영동, 2D 겔 전기영동, SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE), 웨스턴 블랏 (Western Blotting) 및 질량 분광계) 이 또한 단독으로 또는 상기 기재된 표지 여타 검출 방법과 조합하여 이용될 수 있다.
펩티드 또는 폴리펩티드의 양은 바람직하게는 다음과 같이 결정될 수 있다: (a) 상기 기재된 바와 같은 펩티드 또는 폴리펩티드에 대한 리간드를 포함하는 고체 담지체를 펩티드 또는 폴리펩티드를 함유하는 시료와 접촉시킴, 및 (b) 담지체에 결합된 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측정함. 바람직하게는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 항체 및 압타머로 이루어진 군으로부터 선택되는 리간드는 바람직하게는 고체 담지체 상에 고정된 형태로 존재한다. 고체 담지체의 제작 재료는 당업계에 널리 공지되어 있으며, 특히 시판하여 입수가능한 컬럼 재료, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 자석 비드, 콜로이드 금속 입자, 유리 및/또는 실리콘 칩 및 표면, 니트로셀룰로오스 스트립, 멤브레인, 쉬트, 듀라사이트 (duracyte), 웰 및 반응 트레이의 웰, 플라스틱관 등을 포함한다. 리간드 또는 시약은 수많은 상이한 담체에 결합될 수 있다. 널리 공지된 담체의 예시에는 유리, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리카르보네이트, 덱스트란, 나일론, 아밀로오스, 천연 및 개질 셀룰로오스, 폴리아크릴아미드, 아가로오스 및 마그네타이트가 포함된다. 담체의 본성은 본 발명의 목적을 위해 가용성 또는 불용성일 수 있다. 상기 리간드를 고정/고착하기 위한 적합한 방법은 널리 공지되어 있으며, 이에 제한되지 않으나 이온성, 소수성, 공유결합성 상호작용 등을 포함한다. 본 발명에 따라 어레이로서 "현탁액 어레이" 를 이용하는 것을 고려해 볼 수도 있다 (Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1):9-12). 그러한 현탁 어레이에서, 담체, 예를 들어 마이크로비드 또는 미소구체가 현탁액 내에 존재한다. 어레이는, 표지되어 있을 수 있고, 상이한 리간드를 담지하고 있을, 상이한 마이크로비드 또는 미소구체로 이루어진다. 그러한 어레이의 제조 방법은 예를 들어 고상 화학 및 광-변화성 보호기가 일반적으로 공지되어 있다 (US 5,744,305).
본원에 사용된 용어 "양" 은 폴리펩티드 또는 펩티드의 절대적인 양, 상기 폴리펩티드 또는 펩티드의 상대적인 양 또는 농도 뿐만 아니라 그들과 관련되거나 또는 그들로부터 유래될 수 있는 임의의 값 또는 파라미터를 포함한다. 그러한 값 또는 파라미터는 직접 측정으로 수득되는 모든 특이적 물리적 또는 화학적 특성 유래의 강도 신호 값, 예를 들어 질량 분광계 또는 NMR 분광계에서의 세기 값을 포함한다. 더욱이, 본 명세서의 다른 곳에서 기술한 간접적 측정에 의해 수득되는 모든 값 또는 파라미터, 예를 들어 펩티드에 대한 응답에서 생물학적 판독 시스템으로부터 결정되는 응답 값 또는 특이적으로 결합된 리간드로부터 수득되는 세기 신호이다. 상기 언급된 양 또는 파라미터와 비례하는 값이 또한 모든 표준 수학적 조작에 의해 수득될 수 있다는 점이 이해될 것이다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, "양" 의 결정은 개시된 시스템에 의해 실시됨으로써, 전산 장치는 상기 시스템의 하나 이상의 분석기 단위체에 의해 실시되는 접촉 및 측정 단계를 기반으로 하여 "양" 을 결정한다.
본원에 사용된 용어 "비교" 는 본 명세서 기술되어 있는 적절한 기준 공급원의 값으로 분석될 시료를 포함하여 이루어지는 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 비교함을 포함한다. 본원에 사용된 비교는 상응하는 파라미터 또는 값의 비교, 예를 들어 절대량을 기준 기준량과 비교하고, 농도를 기준 시료 유래의 동일한 유형의 기준 농도 또는 세기 신호와 비교하는 것을 지칭함을 이해할 수 있을 것이다. 본 발명의 방법의 단계 (b) 에서 언급되는 비교는 수동으로 또는 컴퓨터의 보조로 실시될 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법의 단계 (b) 에서 언급되는 비교는 컴퓨팅 장치 (예를 들어, 본원에 개시된 시스템) 에 의해 실시될 수 있다. 양에 대한 값 및 기준은 예를 들어 서로 비교할 수 있으며, 상기 비교는 비교를 위한 알고리즘을 실행하는 컴퓨터 프로그램으로 자동으로 실시될 수 있다. 상기 평가를 실시하는 컴퓨터 프로그램은 적합한 출력 포맷으로 원하는 평가를 제공할 것이다. 컴퓨터 보조 비교를 위해서는, 결정된 양의 값을 컴퓨터프로그램에 의해 저장되어 있는 적절한 기준에 해당하는 값과 비교할 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 나아가 비교 결과를 평가할 수 있으며, 즉 적합한 출력 포맷에서 원하는 평가를 자동으로 제공한다.
컴퓨터 보조 비교를 위해서는, 결정된 양의 값을 컴퓨터프로그램에 의해 저장되어 있는 적절한 기준에 해당하는 값과 비교할 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 나아가 비교 결과를 평가할 수 있으며, 즉 적합한 출력 포맷에서 원하는 평가를 자동으로 제공한다. 상기 결과는 바람직하게는 심장색전성 및 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중 사이의 구별 보조로 제공될 수 있다.
예를 들어, 비교 결과는 원 데이터 (절대량 또는 상대량) 로 제공될 수 있으며, 일부의 경우 특별한 진단의 표식일 수 있는 단어, 어구, 기호 또는 수치적 값의 형태인 표식으로서 제공될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "기준량" 은 대상체를 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체의 군 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체의 군으로 할당하게 만드는 양을 지칭한다. 그러한 기준량은 이들 군을 서로 구분하는 역치량일 수 있다. 따라서, 바이오마커 트로포닌에 대한 기준량은 대상체를 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체의 군 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체의 군으로 할당하는 양일 것이다. 두 군을 구분하는 적합한 역치량은 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체 또는 대상체의 군 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체 또는 대상체의 군 유래의 심장 트로포닌의 양을 기준으로 하여 본원에 언급되는 통계적 시험에 의해 추가의 작업 없이 산출될 수 있다. 상기 언급된 대상체들 또는 대상체들의 군으로부터 유도될 수 있는 바람직한 기준량은 본원에 기재되어 있다.
기준량은 본래 표준 통계 방법으로 주어진 바이오마커에 대해 평균값 또는 중간값을 기준으로 하여 상기 기술된 바와 같은 대상체의 코호트에 대해 산출될 수 있다. 특히, 이벤트의 존재 유무를 진단하려는 목적의 방법과 같은 시험의 정확성은 그의 수여자-조작 특징 (receiver-operating characteristics (ROC)) 에 의해 기술된다 (참고문헌은, 특히 Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577). ROC 그래프는 관찰된 전체 범위의 데이터 상에서 결정 역치를 계속하여 다양하게 하여 수득되는 결과로서의 감수성/특이성의 그래프이다. 진단 방법의 임상적 성능은 그의 정확성, 즉 대상체들을 특정 예후 또는 진단으로 정확하게 할당하는 그의 능력에 좌우된다. ROC 그래프는 구분짓기에 적합하도록 역치의 전체 범위에 대해 감수성 대 1-특이성을 그래프로 그려 두 분포 사이의 중복을 표시한다. y-축 상에는 감수성이 있거나, 또는 진정한 양성 분획이 있는데, 이는 진정한 양성 시험 결과 대 진정한 양성 및 거짓-음성 시험 결과 갯수의 결과물의 비율로 정의된다. 이는 또한 질환 또는 병태의 존재 하에서는 양성으로서 지칭된다. x-축 상에는 거짓-양성 분획 또는 1-특이성이 있는데, 이는 거짓-양성 결과의 갯수 대 진정한 음성의 갯수 및 거짓-양성 결과의 갯수의 결과물의 비율로 정의된다. 이는 특이성의 지수이며, 영향받지 않은 하위군으로부터 온전히 산출된다. 2 개의 상이한 하위군으로부터의 시험 결과를 이용해 진정한-양성 및 거짓-양성 분획이 온전히 따로 산출되기 때문에, ROC 그래프는 코호트에서의 이벤트 유병율과는 독립적이다. ROC 그래프 상의 각 지점은 특별한 결정 역치에 해당하는 감수성/1-특이성 쌍을 나타낸다. 완벽한 구별 (두 결과 배치에서 중복 없음) 을 하는 시험에서는 좌측 상단 코너를 통과하는 ROC 그래프가 나오는데, 여기서 진정한-양성 분획은 1.0 이거나 또는 100% (완벽한 감수성) 이며, 거짓-음성 분획은 0 (완벽한 특이성) 이다. 구별을 못하는 (두 군에 대한 결과의 동일한 분포) 이론적 그래프는 좌측 하단 코너로부터 우측 상단 코너로의 45° 사선이다. 대부분의 그래프는 두 극값 사이에 있다. ROC 그래프가 45° 대각선의 아래에 완전하게 있는 경우, 이는 "그보다 더 큰" 내지 "그보다 더 작은" 또는 그 앞뒤가 바뀐 "양성" 에 대한 기준을 역전시켜 쉽게 해결된다. 정성적으로, 그래프가 좌측 상단 코너에 더 가까울수록, 시험의 전체적 정확도가 더 높다. 원하는 신뢰 구간에 따라서는, 역치값이, 감수성 및 특이성의 각각 적절한 균형을 갖춘 주어진 이벤트에 대한 진단 또는 예측을 가능케 하는 ROC 곡선으로부터 유도될 수 있다. 따라서, 본 발명의 상기 언급된 방법에 이용된 기준은 바람직하게는 역치값 또는 컷오프 양일 수 있고, 바람직하게는 상기 기재된 바와 같은 상기 코호트에 대한 ROC 를 확립하고 그로부터 역치값을 유도하여 생성될 수 있다. 진단 방법에 대한 원하는 감도 및 특이성에 좌우되어, ROC 그래프가 적절한 역치값의 유도를 가능케 한다.
본원에서 언급되는 진단/구별은 산출된 "양" 의 기준 또는 역치값과의 상기 비교를 토대로 본원에 개시된 시스템의 컴퓨팅 장치에 의해 제공될 수 있다. 예를 들어, 시스템의 컴퓨팅 장치는 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 뇌졸중 중 하나의 표식자인 단어, 기호 또는 수치적 값의 형태인 표식자를 제공할 수 있다.
바람직하게는, 기준량(들)은 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체들의 군으로부터 유도된다. 그러한 경우, 기준량과 비교하여 본질적으로 동일한 양 또는 증가되어 있는 양의, 시료 중의 심장 트로포닌은 바람직하게는 심장색전성 허혈성 뇌졸중에 대한 표식이다. 나트륨이뇨 펩티드가 또한 결정되는 경우, 심장 트로포닌에 대한 기준량 및 나트륨이뇨 펩티드에 대한 기준량과 비교시 시험 시료 중의 본질적으로 동일한 양 또는 증가되어 있는 양의, 시험 시료 중의 심장 트로포닌 및 나트륨이뇨 펩티드는 바람직하게는 심장색전성 허혈성 뇌졸중에 대한 표식이다.
또한 바람직하게는, 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 에 대한 기준량은 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 것으로 공지되어 있는 대상체 또는 대상체들의 군으로부터 유도될 수 있다. 그러한 경우, 기준량과 비교해 본질적으로 동일한 양 또는 감소되어 있는 양의, 시험 시료 중의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 양은 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중에 대한 표식이다. 나트륨이뇨 펩티드가 또한 결정된 경우, 심장 트로포닌에 대한 기준량 및 나트륨이뇨 펩티드에 대한 기준량과 비교시 시험 시료 중의 동일한 양 또는 감소된 양의 심장 트로포닌 또는 나트륨 이뇨펩티드가 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중의 표식이다.
개별 대상체에 적용가능한 기준량은 연령, 성별 또는 부분모집단과 같은 다양한 생리학적 파라미터 뿐만 아니라 본원에 언급된 폴리펩티드 또는 펩티드의 측정에 이용된 수단에 따라 변경될 수 있다. 적합한 기준량은 시험 시료와 함께, 즉 동시에 또는 후속하여 분석될 기준 시료로부터 결정될 수 있다.
나아가, 기준량은 역치 량, 특히 심장 트로포닌 (및, 선택적으로는 나트륨이뇨 펩티드) 에 대해 산출된 기준량을 정의함으로써, 각 역치 값보다 더 큰 시험 대상체의 시료 중의 트로포닌 (및, 선택적으로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 양이 심장색전성 허혈성 뇌졸중에 대한 표식일 것인 한편, 각 역치 값보다 더 낮은 시험 대상체의 시료 중의 트로포닌 (및, 선택적으로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 양이 비-심장색전성 뇌졸중의 표식이 될 것이다.
바람직한 기준량은 하기 본원에 기재된다:
심장색전성 허혈성 뇌졸중을 표시하는 바람직한 기준량은 약 8 pg/ml 내지 약 40 pg/ml, 더욱 바람직하게는 10 내지 30 pg/ml, 약 11.6 내지 약 20 pg/ml, 더욱더 바람직하게는 약 15 내지 20 pg/ml 인 심장 트로포닌의 양이다. 더욱더 바람직하게는, 기준량은 약 8, 10, 또는 11.6 pg/ml 이다. 시험 양이 기준량과 본질적으로 동일하거나 또는 기준량에 비해 증가되어 있는 것은 심장색전성 허혈성 뇌졸중의 표식일 것이며, 기준량에 비해 시험 시료 중에 감소된 양은 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중의 표식일 것이다. 바람직하게는, 상기 언급된 기준량은 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체들의 군으로부터 유도된다.
본 발명은 심장색전성 뇌졸중을 배제하는데 특히 유용하다. 특히, 5 pg/ml 미만, 특히 3 pg/mg 미만 또는 2 pg/mg 미만인 심장 트로포닌, 바람직하게는 트로포닌 T 의 시험량은 대상체가 심장색전성 뇌졸중을 앓지 않음 (및, 이에 따라, 바람직하게는 비-심장색전성 뇌졸중을 앓고 있음) 을 나타낸다.
심장색전성 허혈성 뇌졸중을 나타내는 바람직한 기준량은 약 500 pg/ml 내지 약 1500 pg/ml, 더욱 바람직하게는 700 내지 1300 pg/ml, 더욱더 바람직하게는 약 800 내지 1000 pg/ml 인 나트륨이뇨 펩티드, 특히 NT-proBNP 의 양이다. 더욱더 바람직하게는, 기준은 약 700, 800, 또는 가장 바람직하게는 900 pg/ml 인 양이다. 기준량과 본질적으로 동일하거나 또는 그에 비해 증가되어 있는 시험량은 심장색전성 허혈성 뇌졸중에 대한 표식인 반면, 기준량에 비해 시험 시료 중에 감소되어 있는 양은 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중의 표식일 것이다. 바람직하게는, 상기 언급된 기준량은 (심장 트로포닌의 양에 추가하여) 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체의 군으로부터 유도된다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명은 심장색전성 뇌졸중의 배제에 특히 유용하다. 특히, 250 pg/ml 미만, 특히 200 pg/ml 미만 또는 150 pg/mg 미만인 시험량의 나트륨이뇨 펩티드, 특히 NT-proBNP 는 대상체가 심장색전성 뇌졸중을 앓고 있지 않음 (따라서, 바람직하게는 비-심장색전성 뇌졸중을 앓고 있음) 을 나타낸다.
본 발명의 맥락에서 용어 "약" 은 상기 값으로부터 +/- 20%, +/- 10%, +/- 5%, +/- 2 % 또는 +/- 1% 를 의미한다. 이는 또한 측정 기법, 통계 등에 의해 유발되는 일반적인 편차를 고려한 것이다.
본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서, 상기 방법은 특히, 대상체가 심장색전성 뇌졸중을 앓는 것으로 진단되는 경우, 상기 대상체에 대한 치료요법 권장 단계를 추가로 포함한다. 심장색전성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체에게 권장될 수 있는 치료요법은 용해소 요법 (lytic therapy) 및/또는 항응고 요법 (anticoagulation therapy) 이다 (참고문헌은, 예를 들어 본원에 참고문헌으로 포함되는 Cairns J.A. et al Canadian J of Cardiology 2011: 27: 74-90 또는 Camm A.J. et al Eur Heart Journal 2010: 31: 2369-2429).
발명의 한 국면에서, 하기 단계를 포함하는, 환자가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 방법이 고려된다:
a) (i) 검출제와 시료 중의 심장 트로포닌의 복합체 형성에 충분한 시간 동안 상기 심장 트로포닌에 특이적으로 결합하는 검출제와 시료를 접촉시키는 단계, (ii) 형성된 복합체의 양을 측정하는 단계, 여기서 상기 형성된 복합체의 양은 시료 중에 존재하는 심장 트로포닌의 양과 비례함, 및 (iii) 형성된 복합체의 양을 시료 중에 존재하는 마커의 양을 반영하는 심장 트로포닌의 양으로 변환시키는 단계에 의한, 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양 결정 단계;
b) 상기 양을 기준과 비교하는 단계; 및
c) 단계 b) 에서 한 비교 결과를 토대로 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 보조수단을 확립하는 단계.
바람직하게는, 나트륨이뇨 펩티드의 양도 결정된다.
본 발명의 또다른 국면에서, 하기를 포함하는, 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 시스템이 고려된다:
a) 검출체 및 시료 유래의 마커의 복합체 형성에 충분한 시간 동안 마커 심장 트로포닌에 특이적으로 결합하는 검출제를 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료와 접촉시키도록 배치되어 있는 분석기 단위체,
b) 형성된 복합체의 양을 측정하도록 배치되어 있는 분석기 단위체, 여기서 상기 형성된 복합체의 양은 시료 중에 존재하는 마커의 양과 비례함,
c) 프로세서 및 상기 분석기 단위체와 작동가능한 통신하게 되어 있는 컴퓨팅 장치, 및
d) 프로세서에 의해 실행가능한 여러 지시사항을 포함하는 비-일시적 기계 검독 매체, 상기 지시사항은 실행시, 형성된 복합체의 양을 시료 중에 존재하는 마커의 양을 반영하는 마커의 양으로 변환하고, 상기 양을 기준과 비교하고, 상기 기준과의 상기 비교 결과를 토대로 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하기 위한 보조수단을 확립함.
바람직하게는, 시스템이 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 검출체도 포함한다.
한 국면에서, 적합한 검출제는 본 발명의 방법으로 조사할 대상체의 시료 중의 심장 트로포닌에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다. 한 국면에서, 적용가능한 또다른 검출제는 시료 중의 마커에 특이적으로 결합하는 압타머일 수 있다. 또다른 국면에서, 시료는 형성된 복합체의 양 측정 전에 검출제와 마커 사이에 형성된 복합체로부터 제거된다. 따라서, 한 국면에서 검출제는 고체 담지체 상에 고정될 수 있다. 또다른 국면에서, 시료는 세척액 적용에 의해 고체 담지체 상에 형성된 복합체로부터 제거될 수 있다. 형성된 복합체는 시료 중에 존재하는 마커의 양에 비례할 것이다. 적용되는 검출제의 특이성 및/또는 감수성이 특이적으로 결합될 수 있는 시료 중에 포함되어 있는 하나 이상의 마커의 비율을 한정한다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 결정이 실시되는 방법에 관한 더욱 상세한 사항은 본원에 기재되어 있다. 형성된 복합체의 양은 시료 중에 존재하는 복합체의 양으로 변환될 것이다. 한 국면에서, 그 양은 본질적으로 시료 중에 존재하는 양일 수 있거나, 또는 또다른 국면에서 형성된 복합체와 본래 시료에 존재하는 양 사이의 관계로 인한 그들의 특정 비율인 양일 수 있다.
상기 언급된 방법의 또다른 한 국면에서, 단계 a) 는 분석기 단위체에 의해 실시될 수 있고, 한 국면에서 분석기 단위체는 본원에 기재된 바와 같이 정의된 것이다.
본 발명의 방법의 한 국면에서, 단계 a) 에서 결정된 양은 기준과 비교된다. 한 국면에서, 기준은 본원에서 정의된 바와 같은 기준이다. 또다른 국면에서, 기준은 복합체의 측정량과 본래 시료에 존재하는 양 사이의 비례 관계를 고려한다. 따라서, 본 발명의 방법의 한 국면에 적용된 기준은 사용된 검출제의 한계를 반영하도록 맞춰진 인공적인 기준이다. 또다른 국면에서, 또한 결정된 양의 값 및 기준을 실제 비교하기 전에 예를 들어 결정된 양에 대한 정규화 및/또는 보정 산출 단계에 의해, 비교 실시 시 상기 관계가 고려될 수 있다. 다시금, 결정된 양에 대한 정규화 및/또는 보정 산출 단계는 비교 단계를 채택하여, 사용된 검출제의 한계가 적절히 반영되도록 한다. 한 국면에서, 비교는 예를 들어 컴퓨터 시스템 등의 보조로 자동으로 실시된다.
대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 보조수단은 대상체들을 본원에 제시된 바와 같이 (i) 심장색전성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체의 군 또는 (ii) 비-심장색전성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체의 군으로 할당함으로써, 단계 b) 에서 실시되는 비교를 토대로 확립된다. 본원에서 이미 논의된 바와 같이, 조사한 대상체들의 할당은 조사한 경우의 100% 에서 반드시 정확한 것은 아니다. 나아가, 조사한 대상체가 할당되는 대상체의 군들은, 통계 고려사항들, 즉 본 발명의 방법이 작동될 수 있는 가능성의 특정 예측 정도를 기반으로 하여 확립된 인공적인 군이다. 발명의 한 국면에서, 구별의 보조수단은 본원에 기재 및 개시된 바와 같이 예를 들어 컴퓨팅 장치 등의 보조로 자동적으로 확립된다.
본 발명의 방법의 한 국면에서, 상기 방법은 본원에 상세히 기술되어 제시된 바와 같이 단계 c) 에서 확립된 결과에 따라 권장 단계 및/또는 대상체 관리 단계를 추가로 포함한다.
상기 언급된 방법의 한 국면에서, 단계 b) 및/또는 c) 는 본원에 제시된 하나 이상의 분석기 단위체에 의해 실시된다.
심박 세동 진단 방법
심박 세동 (AF) 은 종종 환자에 의해 인식되지 않는다. 이는, 심박 세동의 진단에 대한 둔감함의 이력을 나타낸 환자의 약 40% 에 해당한다 (Kamel H. et al, Curr Atheroscler Rep 2011: 13: 338 343). 그러한 수치들은 지속적 심박 세동과 관련있는데, 발작성 심박 세동은 진단하기에 더욱더 어렵고, 인페이션트 카디악 텔레멘트리 (inpatient cardiac telemetry) 또는 심지어 홀더 모니터링 (Jolter Monitoring) 으로만 포획될 수 있다. 후자의 것은, ECG 가 기록되며, 추후에 경험이 많은 전문의에 의해 재검토될 수 있다는 장점을 갖고 있다. Holter ECG 를 이용하면, 발작성 - 선행기술에서는 인식되지 않음 - 심박 세동이 지속적 심방 세동보다 더욱 빈번했다 (Rizos T. et al. Cerebrovasc. Dis 2011: 32: 276 - 282). 발작성/허혈성 심박 세동을 신뢰성있게 포획하려면, 72 h Holter 모니터링이 필요한 것으로 나타났다 (Gumbinger C et al, Europ. J. of Neurology 2011, 공보 앞부분). 따라서, 발작성 심박 세동의 인식은 괄목할 도전과제이며, 구체적으로 일반 집단의 1% 이상에서 지속적 심박 세동이 있었고, 그 빈도는 연령에 따라 증가한다 (Rizos T. et al).
본 발명의 발명자들은 심장 트로포닌의 결정이 심박 세동의 진단을 가능케 한다는 것을 발견했다. 흥미롭게도, 간헐성 AF 가 있는 환자들은 또한 증가된 심장 트로포닌 수준을 갖고 있었다. 따라서, 간헐성 AF 를 나타내는 환자들은 또한 심장 트로포닌의 양을 결정하여 확인될 수 있다.
본원에 제공된 정의 및 설명은 본 발명의 실시예에 준용하여 적용된다.
나아가, 본 발명은 심박 세동을 앓고 있는 것으로 추정되는 대상체에서 심박 세동을 진단하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 a) 상기 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양을 측정하는 단계를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 상기 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다:
b) 그렇게 수득된 상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교하는 단계. 이로써 간헐적 심박 세동이 진단된다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 심박 세동을 앓는 것으로 추정되는 대상체에서의 심박 세동 진단 방법에 관한 것이다:
a) 상기 대상체 유래의 시료에서 심장 트로포닌의 양을 결정하는 단계, 및
b) 그렇게 결정된 상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교함으로써, 심박 세동을 진단하는 단계.
바람직하게는, c) 대상체가 심박 세동을 앓는지 또는 그렇지 않은지 여부를 진단하는 단계를 추가로 실시하여, 대상체가 심박 세동을 앓는지 또는 그렇지 않은지 여부를 진단한다.
바람직하게는, 간헐적 심박 세동이 진단된다.
따라서, 본 발명은 특히 하기 단계를 포함하는, 심박 세동을 앓고 있을 것으로 추정되는 대상체에서의 간헐적 심박 세동의 진단 방법에 관한 것이다:
a) 상기 대상체 유래의 시료에서 심장 트로포닌의 양을 결정하는 단계, 및
b) 그렇게 결정된 상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교하고, 이로써 간헐적 심박 세동을 진단하는 단계.
본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서, 단계 a) 는 대상체 유래의 시료에서 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 그렇게 결정된 나트륨이뇨 펩티드의 양을 단계 b) 에서 나트륨이뇨 펩티드의 기준량과 비교한다.
따라서, 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 심박 세동을 앓는 것으로 추정되는 대상체에서의 심박 세동 진단 방법에 관한 것이다:
a) 상기 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양 및 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
b) 단계 a) 에서 결정된 상기 심장 트로포닌의 양을 심장 트로포닌에 대한 기준량과 비교하고, 상기 나트륨이뇨 펩티드의 양을 나트륨이뇨 펩티드에 대한 기준량과 비교하여, 이로써 심박 세동을 진단하는 단계.
용어 "심박 세동" 은 당업계에 널리 공지되어 있다. 심박 세동은 예를 들어 본원에 참고문헌으로 포함되는 Fuster 등의 문헌에서 검토된 바 있다: (Fuster V, Rydn LE, Asinger RW, et al. ACC/AHA/ESC Guidelines for the Management of Patients With Artrial Fibrillation: Executive Summary A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines and the European Society of Cardiology Committee for Practice Guidelines and Policy Conferences (Committee to Develop Guidelines for the Management of Patients With Artrial Fibrillation) Developed in Collaboration With the North American Society of Pacing and Electrophysiology. Circulation. Oct 23 2001;104(17):2118-50). 심박 세동은 심장의 두 상단 챔버가 관여되는 비정상적인 심장 리듬이다. 정상 심장 리듬에서는, 심방 동결절 (sino-atriuml node) 에 의해 생성되는 충격이 심장을 통해 퍼져나가서 심근의 수축을 야기하고, 혈액을 펌핑하게 된다. 심박 세동에서는, 심방 동결절의 규칙적인 전기적 충격이 흐트러지고, 빠른 전기 충격으로 대체되어, 규칙적이지 않은 심박을 야기하게 된다.
심박 세동 (AF) 은 영구적, 지속적 또는 간헐적 (이들 용어의 설명에 대해서는 상기 Fuster 등의 문헌 (상기 기재됨) 을 참조) 일 수 있다.
대상체는, AF 가 1 년 넘게 지속하는 경우 바람직하게는 AF 를 앓고 있는 것이다. 특별하게는, 동박절 (sinus rhythm) 로 되돌아가는 변환은 일어나지 않는다 (또는 치료한 경우에만 되돌아감).
대상체는, AF 가 7 일 초과하여 지속하는 경우 지속적 AF 를 앓고 있는 것이고, 심박 세동을 중단하기 위해 약학적 또는 전기적 개입을 필요로 할 수 있다. 따라서, 지속적 AF 는 에피소드로 일어나고, 부정맥이 자발적으로 동박절로 되돌아가는 변환을 하지 않는다.
대상체는, 자발적으로 중단하지 않는 심박 세동의 에피소드가 있는 경우, 바람직하게는 간헐적 AF (종종 발작성 AF 로도 일컬어짐) 을 앓고 있는 것이다. 심박 세동의 에피소드는 수초 내지 수일 지속할 수 있다. 바람직하게는, 에피소드는 1 시간 미만 지속한다.
상기 언급된 방법의 맥락에서, 바람직하게는 간헐적 심박 세동이 진단된다.
영구적 및 지속적 심박 세동이, 예를 들어 심전도 상에서, 용이하게 진단될 수 있다. 특징적인 발견사실들은, 바람직하게는 P 웨이브의 부재, 그들의 위치에서의 전기적 활성의 흐트러짐 및 심실에 대한 충격의 불규칙한 실시로 인한 R--R 간격의 불규칙함이다. 간헐적 심박 세동은, 심박 세동의 에피소드 동안에만 진단이 가능하기 때문에, 진단하기가 더욱 어렵다.
본 발명의 발명자들은 놀랍게도 심박 세동을 앓는 것으로 추정되는 대상체의 시료 중의 심장 트로포닌 (및, 선택적으로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 결정이 심박 세동의 진단을 가능케 해 준다는 것을 알게 되었다. 특별하게는, 증가된 수준의 심장 트로포닌은 AF 를 앓고 있는 대상체에 대한 표식이며, 감소된 수준의 심장 트로포닌은 AF 를 앓고 있지 않은 대상체에 대한 표식이다. 나아가, 심장 트로포닌의 결정은 또한 심지어 AF (시료가 수득될 당시) 의 에피소드가 부재한 경우라도 간헐적 AF 의 진단을 가능케 한다. 이에 따라, 상기 언급된 방법을 실시함으로써, 간헐적 심박 세동이 바람직하게는 특히 시료가 수득될 당시 심박 세동의 에피소드가 부재하는 경우 진단된다. 따라서, 대상체는 바람직하게는 시료가 수득될 때 AF 의 에피소드를 앓고 있지 않다.
본 발명의 상기 언급된 방법에 따르면 대상체는 심박 세동을 앓고 있는 것으로 추정된다. 심박 세동 (예를 들어, 간헐적 심박 세동) 을 앓고 있는 것으로 추정되는 대상체는, 바람직하게는 심박 세동의 위험 요인을 하나 이상 갖고 있는 대상체이다. 그러한 위험 요인은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 판막의 문제점을 포함하는 심장 질환, 및 심장 마비 및 심장 수술의 이력, 특히 생활형태의 변화 및 의약 섭취로 제어되지 않는 경우의, 전신성 고혈압 및 알콜 섭취를 포함한다. 바람직하게는, 추정되는 대상체가 위험군에 속해 있다. 특히, 대상체는 동맥 또는 전신 고혈압과 같은 심장 이상 성향의 위험 인자를 갖고 있는 대상체, 당뇨, 흡연자, 고지방혈증 또는 대사 증후군의 징후가 있는 개인, 특히 대상체가 고령인 경우 (60, 65, 70 세 초과, 바람직하게는 75 세 초과의 연령) 가 고려된다. 대안적으로 또는 추가적으로 대상체는, 바람직하게는 이첨판 장애로 인한, 심장 판막 장애를 앓고 있을 수 있다. 대상체가 AF 를 앓고 있을 것으로 추정되거나, 갑상선기능 항진증을 앓을 것으로 추정되는 경우가 추가로 고려된다.
본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서, 대상체는 심박 세동을 앓고 있는 것으로 추정되며, 바람직하게는 허혈성 뇌졸중, 특히 심장색전성허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 것으로 추정된다 (이들 용어에 대해서는, 본원 참조). 상기 기재된 방법에 따라 시험될 대상체가 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 경우, 시료는 바람직하게는 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 방법의 맥락에서 기재된 바와 같이, 뇌졸중 증상의 발증 직후에 수득된다.
그러나, 시험할 대상체가 허혈성 뇌졸중을 앓지 않는 것이 또한 바람직하다.
바람직하게는, 상기 언급된 방법과 연계하여 기준량은 심박 세동을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 (또는 대상체들의 군) 으로부터 유도되며, 기준량과 실질적으로 동일한 양의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드), 또는 기준량에 비해 증가되어 있는 양의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 은 대상체가 심박 세동을 앓고 있는 것을 나타낸다. 추가적으로 또는 대안적으로, 기준량은 심박 세동을 앓고 있지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 그러한 대상체들의 군으로부터 유도되며, 기준량과 실질적으로 동일한 양의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드), 또는 기준량에 비해 감소되어 있는 양의 심장 트로포닌 Troponin (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 은 대상체가 심박 세동을 앓고 있지 않다는 것을 나타낸다.
나아가, 기준량은 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 에 대한 역치값 양을 정할 수 있으며, 이로써 각 역치값에 비해 더 큰, 시험 대상체의 시료 중의 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 양은 심박 세동에 대한 표식일 것이며, 각 역치에 비해 더 낮은, 대상체의 시료 중의 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 양은 대상체가 심박 세동을 앓고 있지 않음을 나타내는 것이다.
바람직한 기준량은 하기 본원에 제시되어 있다:
심박 세동을 나타내는 바람직한 기준량은 약 6 pg/ml 내지 약 40 pg/ml, 더욱 바람직하게는 8 내지 30 pg/ml, 또는 약 10 내지 약 20 pg/ml, 더욱더 바람직하게는 약 15 내지 20 pg/ml 인 심장 트로포닌, 특히 트로포닌 T 의 양이다. 더욱더 바람직하게는, 기준은 약 10 pg/ml, 또는 가장 바람직하게는 약 7 pg/ml 의 양이다. 본질적으로 동일하거나 또는 증가되어 있는 시험량은 심박 세동에 대한 표식일 수 있는 반면, 기준에 비해 시험 시료에서의 감소된 양은 대상체가 심박 세동을 앓고 있지 않음을 표시하는 것이다. 바람직하게는, 상기 언급된 기준량은 심박 세동을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체들의 군으로부터 유도된다.
심박 세동을 나타내는 바람직한 기준량은 약 300 pg/ml 내지 약 1500 pg/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 1300 pg/ml, 더욱더 바람직하게는 약 500 내지 1000 pg/ml 인 나트륨이뇨 펩티드, 특히 NT-proBNP 의 양이다. 더욱더 바람직하게는, 기준은 약 500, 400, 또는 가장 바람직하게는 약 300 pg/ml 의 양이다. 기준량과 본질적으로 동일하거나 또는 그에 비해 증가되어 있는 시험량은 심박 세동에 대한 표식인 한편, 기준량에 비해 감소되어 있는 시험량은 대상체가 심박 세동을 앓고 있지 않음을 나타낸다. 바람직하게는, 상기 언급된 기준량은 심박 세동을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체의 군으로부터 유도된다.
상기 제시된 바와 같이, 간헐적 심박 세동의 진단은 도전적 과제인데 반해, 영구적 또는 지속적 심박 세동의 진단은 그에 비해 용이하다. 영구적 및 지속적 심박 세동이 있는 대상체는 번잡한 노고를 들이지 않고도 식별될 수 있기 때문에, 영구적 또는 지속적 심박 세동을 앓고 있지는 않으나, 간헐적 심박 세동을 앓고 있는 대상체를 식별하는 것에 특별히 관심이 기울여진다.
흥미롭게도, 본 발명의 연구 맥락에서, 심장 트로포닌 및 나트륨이뇨 펩티드의 수준이 간헐적 심박 세동이 있는 대상체에서는 지속적 또는 영구적 심박 세동이 있는 대상체에서보다 더 낮은 것으로 나타났다. 이는, 심장 트로포닌 및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드의 결정이 간헐적 세동을 앓고 있는 환자를 식별할 수 있게 하므로, 유리하다.
따라서, 본 발명의 바람직한 구현예에서, 간헐적 심박 세동이, 특히 간헐적 심박 세동을 앓고 있을 것으로 추정되는 대상체에서 진단될 것이다.
간헐적 AF 의 진단을 가능케 하기 위해서는, 단계 a) 에서 결정되는 심장 트로포닌의 양 및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드의 양을 단계 b) 에서의 두 기준량과 비교해야 한다. 제 1 기준량은 간헐적 AF 을 앓고 있는 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 으로부터 유도될 것이며, 제 2 기준량은 영구적 또는 특별하게는 지속적 AF 을 앓고 있는 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 로부터 유도된다는 것을 고려한다. 물론, 기준량은 상기 언급된 대상체들의 시료로부터 유도될 것이다.
바람직하게는, 시험 대상체의 시료 중의 심장 트로포닌 및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드의 양이, 간헐적 AF 를 앓는 것으로 공지되어 있는 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 로부터 유도된 기준량 (심장 트로포닌 및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 에 비해 본질적으로 동일하거나 또는 더 크지만, 영구적 또는 지속적 AF 를 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 로부터 유도되는 기준량보다는 더 적은 것은, 간헐적 AF 의 진단에 대한 표식이다.
간헐적 AF 를 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 (또는 그러한 대상체들의 군) 유래의 심장 트로포닌, 특히 트로포닌 T 에 대한 바람직한 기준량은 약 5 내지 10 pg/ml 의 범위에 있다. 바람직하게는, 기준량은 약 9 pg/ml 이다.
영구적 또는 지속적 AF 를 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 로부터 유도되는 심장 트로포닌, 특히 트로포닌 T 에 대한 바람직한 기준량은 약 12 내지 25 pg/ml 의 범위에 있다. 바람직하게는, 기준량이 약 18 pg/ml 이다.
간헐적 AF 를 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 로부터 유도된 나트륨이뇨 펩티드, 특히 NT-proBNP 에 대한 바람직한 기준량은 약 300 내지 500 pg/ml 의 범위이다. 바람직하게는, 기준량은 약 350 pg/ml 이다.
영구적 또는 지속적 AF 을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 로부터 유도되는 나트륨이뇨 펩티드, 특히 NT-proBNP 에 대한 바람직한 기준량은 약 900 내지 1500 pg/ml 의 범위에 있다. 바람직하게는, 기준량이 약 900 pg/ml 이다.
AF 진단 방법의 또다른 바람직한 구현예에서, 간헐적 AF 가 진단된다. 그러한 바람직한 구현예에 따라 대상체는 영구적 또는 지속적 심박 세동 (추가적인 번잡한 작업 없이 결정될 수 있음, 상기 참조) 을 앓지 않는 것으로 공지되어 있다.
따라서, 하기 단계를 포함하는, 간헐적 심박 세동을 앓고 있는 것으로 추정되나, 지속적 및/또는 영구적 심박 세동을 앓는 것으로 공지되어 있지는 않은 대상체에서의 간헐적 심박 세동 진단 방법이 고려된다:
a) 상기 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 양을 결정하는 단계, 및
b) 그렇게 결정된 심장 트로포닌 (및, 임의로는 상기 나트륨이뇨 펩티드) 의 양을 기준량과 비교하고, 이로써 간헐적 심박 세동이 진단되는 단계.
간헐적 AF 을 앓고 있을 것으로 추정되는 대상체는 바람직하게는 AF 를 앓고 있을 것으로 추정되는 대상체와 동일한 위험 인자 (본원 참조) 를 갖고 있다. 특히, 대상체는 허혈성 뇌졸중, 특히 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있을 것으로 고려된다.
본 발명의 맥락에서 적용되는 기준량은 간헐적 AF 를 앓고 있을 것으로 공지되어 있는 대상체, 또는 AF 를 앓고 있을 것으로 공지되지 않은 대상체로부터 유도된다.
바람직하게는, 상기 언급된 구현예와 연계된 기준량은 간헐적 심박 세동을 앓고 있는 것으로 공지되어 있는 대상체 (또는 상기 대상체들의 군) 로부터 유도되며, 여기서 기준량과 동일한 양의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드), 또는 기준량에 비해 증가되어 있는 양의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 의 양은 대상체가 간헐적 심박 세동을 앓고 있음을 나타낸다. 추가적으로 또는 대안적으로, 기준량은 심박 세동을 앓고 있는 것으로 공지되어 있지 않은 대상체로부터 유도되는데, 여기서 기준량과 동일한 양의 심장 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드), 또는 기준량에 비해 감소된 양의 심장 트로포닌 트로포닌 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드) 은 대상체가 간헐적 심박 세동을 앓고 있지 않음을 나타낸다.
간헐적 심박 세동을 나타내는 바람직한 기준량은 약 5 pg/ml 내지 약 30 pg/ml, 더욱 바람직하게는 5 내지 25 pg/ml, 또는 약 6 내지 약 10 pg/ml, 더욱더 바람직하게는 약 6 내지 8 pg/ml 인 심장 트로포닌, 특히 트로포닌 T 의 양이다. 더욱더 바람직하게는, 기준은 약 8 pg/ml, 또는 가장 바람직하게는 약 7 pg/ml 인 양이다. 시험량이 기준량과 본질적으로 동일하거나 또는 그에 비해 증가되어 있음은 간헐적 심박 세동에 대한 표식인 한편, 기준량에 비해 시험 시료 중에 감소되어 있는 양은 대상체가 간헐적 심박 세동을 앓고 있지 않음을 나타내는 것이다. 바람직하게는, 상기 언급된 기준량이 간헐적 심박 세동을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체들의 군으로부터 유도된다.
간헐적 심박 세동을 나타내는 바람직한 기준량은 약 300 pg/ml 내지 약 800 pg/ml, 더욱 바람직하게는 300 내지 700 pg/ml, 더욱더 바람직하게는 약 350 내지 500 pg/ml 인 양의 나트륨이뇨 펩티드, 특히 NT-proBNP 이다. 더욱더 바람직하게는, 기준은 약 500, 400, 또는 가장 바람직하게는 약 300 pg/ml 의 양이다. 시험량이 기준량과 본질적으로 동일하거나 또는 그에 비해 증가되어 있는 것은 간헐적 심박 세동에 대한 표식일 것이며, 기준량에 비해 감소된 시험 시료의 양은 대상체가 간헐적 심박 세동을 앓고 있지 않음을 나타내는 것이다. 바람직하게는, 상기 언급된 기준량은 간헐적 심박 세동을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 또는 상기 대상체들의 군으로부터 유도된다.
본 발명의 상기 언급된 방법의 바람직한 구현예에서, 상기 방법은 대상체가 심박 세동, 특히 간헐적 심박 세동으로 진단된 경우, 상기 대상체를 위한 치료요법 권장 단계를 추가로 포함한다. 심박 세동을 앓고 있는 대상체에게 권장될 수 있는 바람직한 치료요법은, 예를들어 문헌 [Fuster et al. (Fuster et al. J Am Coll Cardiol 2001: 38: 1231, 및 Fuster V. et al. Circulation 2006: 114 내지 257)] 에 기재되어 있다. 바람직한 치료요법은 베타 차단제, 비-디히드로피리딘 칼슘 차단제, 디곡신, 비타민 K 안타고니스트, 아스피린, 아세틸살리실산의 투여를 포함한다. 나아가, 약학적 또는 전기적 개입이 심박 세동 중단을 위해 권장될 수 있다. 약학적 개입은 바람직하게는 플레카이나이드 (flecainide), 도페틸라이드 (dofetilide), 프로파레논 (propafenone) 및/또는 이부틸라이드 (ibutilide) 의 투여를 포함한다. 인자 Xa 저해제, 예컨대 리바록사반 (rivaroxoban) 및/또는 다비가트란 (dabigatran) 의 투여도 추가로 고려된다 (참고문헌은, Patel M.R. et al, NEJM 2011: 365: 883 - 891; Connolly S.J. et al NEJM 2010: 261: 1139 - 51).
상기 언급한 방법의 바람직한 구현예 :
바람직하게는, 간헐적 심박 세동이 진단된다.
바람직한 구현예에서, 대상체는 허혈성 뇌졸중을 앓고 있지 않다.
또다른 바람직한 구현예에서, 심박 세동을 앓을 것으로 추정되는 대상체가 허혈성 뇌졸중, 특히 심장색전성 뇌졸중을 앓고 있으며, 여기서 시료는 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후 수득된다. 바람직하게는, 상기 대상체 유래의 시료는 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 12 시간 이내에, 특히 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 6 시간 이내 또는 3 시간 이내에 수득된다.
바람직한 구현예에서, 대상체가 지속적 및/또는 영구적 심박 세동을 앓지 않는 것으로 공지되어 있고, 특히 기준량이 간헐적 심박 세동을 앓는 것으로 공지된 대상체 또는 일군의 상기 대상체들로부터 유도된 것이며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌, 또는 증가된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 간헐적 심박 세동을 앓고 있음을 표시하는 것이고/것이거나 기준량이 심박 세동을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도되며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌, 또는 감소된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 간헐적 심박 세동을 앓지 않는 것을 표시하는 것이다.
또다른 바람직한 구현예에서, 시료 중의 심장 트로포닌의 양을 두 기준량과 비교하며, 여기서 제 1 기준량은 간헐적 AF 를 앓는 것으로 공지된 대상체 또는 일군의 그러한 대상체들로부터 유도되며, 제 2 기준량은 영구적 또는 지속적 AF 를 앓는 것으로 공지된 대상체 또는 일군의 그러한 대상체들로부터 유도된다. 바람직하게는, 제 1 기준량과 실질적으로 동일하거나 또는 더 많지만, 영구적 또는 지속적 AF 를 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도된 제 2 기준량보다는 더 적은 대상체의 시료 중의 심장 트로포닌의 양이 간헐적 AF 진단의 표식이다.
바람직한 구현예에서, 해당 방법은 나트륨이뇨 펩티드, 특히 뇌 나트륨이뇨 펩티드, 특별하게는 BNP 및 NT-proBNP 의 양을 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
바람직하게는, 간헐적 심박 세동이, 특히 시료가 수득되는 시점에서, 심박 세동의 에피소드의 부재 하에 진단된다.
본 발명의 또다른 국면에서, 하기를 포함하는 AF, 특히 간헐적 AF 를 진단하는 시스템이 고려된다:
a) 검출제 및 시료 유래의 마커의 복합체 형성에 충분한 시간 동안 AF, 특히 간헐적 AF 를 앓고 있는 것으로 추정되는 대상체 유래의 시료를 마커 심장 트로포닌에 특이적으로 결합하는 검출제와 접촉시키도록 배치되어 있는 분석기 단위체,
b) 형성된 복합체의 양을 측정하도록 배치되어 있는 분석기 단위체, 여기서 상기 형성된 복합체의 양은 시료 중에 존재하는 마커의 양과 비례함,
c) 프로세서를 갖고 있으며, 상기 분석 단위체와 작동가능하게 통신이 되는 컴퓨팅 장치, 및
d) 프로세서에 의해 실행가능한 여러 지시사항을 포함하며, 지시사항은 실행시 형성된 복합체의 양을 시료 중에 존재하는 마커의 양을 반영하는 마커의 양으로 변환하고, 상기 양을 기준량과 비교하고, 상기 기준에 대한 비교 결과를 토대로 AF, 특히 간헐적 AF 의 진단에 대한 보조수단을 확립하는 비-일시적 기계 검독 매체,
바람직하게는, 시스템이 또한 나트륨이뇨 펩티드에 특이적으로 결합하는 검출제를 포함한다.
상기 언급된 방법의 한 국면에서, 단계 a) 는 분석기 단위체에 의해 실시될 수 있고, 한 국면에서 분석기 단위체는 본원에 정의되어 있다.
본 발명의 방법의 한 국면에서, 단계 a) 에서 결정된 양은 기준과 비교된다. 한 국면에서, 기준은 본원에서 정의된 바와 같은 기준이다. 또다른 국면에서, 기준은 측정된 복합체의 양과 본래 시료에 존재하는 양 사이의 비례적 관계를 고려한 것이다. 따라서, 본 발명의 방법의 한 국면에 적용되는 기준은 사용된 검출제의 한계를 반영하도록 적응시킨 인공적 기준이다. 또다른 국면에서, 또한 결정된 양 및 기준의 값을 실제로 비교하기에 앞서 예를 들어 결정된 양에 대한 정규화 및/또는 보정 산출 단계를 포함함으로써, 비교 수행시 상기 관계가 고려될 수 있다. 다시금, 결정된 양에 대한 정규화 및/또는 보정 산출 단계는 비교 단계를 채택하여, 사용되었던 검출제의 한계가 적절히 반영되도록 한다. 한 국면에서, 비교는 예를 들어 컴퓨터 시스템 등의 보조를 받아, 자동으로 실시된다.
AF, 특히 간헐적 AF 의 진단 보조수단은 대상체를 (i) AF 를 앓고 있는 대상체의 군 또는 (ii) AF 를 앓고 있지 않은 대상체의 군으로 할당함으로써 단계 b) 에서 실시된 비교를 토대로 확립된다. 본원에 이미 논의된 바와 같이, 조사한 대상체들의 할당은 조사한 경우의 100% 에서 반드시 정확한 것은 아니다. 나아가, 조사된 대상체가 할당되는 대상체들의 군은 통계적 고려사항, 즉 미리선택된 본 발명의 방법이 작동될 가능성의 정도를 토대로 확립되도록 한 인공적인 군으로 할당된다. 발명의 한 국면에서, 위험 평가를 최적화하기 위한 보조수단은 예를 들어 본원에 기재 및 논의된 바와 같이 컴퓨팅 장치 등에 의해 보조를 받아 자동적으로 확립된다.
본 발명의 방법의 한 국면에서, 상기 방법은 본원에 상세히 제시된 바와 같이 단계 c) 에서 확립된 결과에 따라 권장 단계 및/또는 대상체 관리 단계를 추가로 포함한다.
상기 언급된 방법의 한 국면에서, 단계 b) 및/또는 c) 는 본원에 제시된 하나 이상의 분석기 단위체에 의해 실시된다.
나아가, 본 발명은 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 결정하기 위한, 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체의 시료 중의 심장 트로포닌 및/또는 그에 특이적으로 결합하는 검출제 (및 임의로는 나트륨이뇨 펩티드 및/또는 그에 특이적으로 결합하는 검출제) 의 용도에 관한 것이며, 여기서 상기 시료는 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후 수득된다. 바람직하게는, 상기 시료는 뇌졸중 증상의 발증 후 6 시간 내에 수득된다.
본 발명에는 또한 심박 세동을 앓고 있는 것으로 추정되는 대상체에서 심박 세동을 진단하기 위한, 상기 대상체의 시료 중의 심장 트로포닌 및/또는 그에 특이적으로 결합하는 검출제 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드 및/또는 그에 특이적으로 결합하는 검출제) 의 용도를 고려한다. 바람직하게는, 간헐적 심박 세동이 진단된다.
본원에 사용된 용어 "검출제" 는 시료 중에 존재시 본원에 언급된 바이오마커 (심장 트로포닌, 또는 나트륨이뇨 펩티드) 를 특이적으로 인식하고 결합할 수 있는 작용제를 지칭한다. 나아가, 상기 작용제는 상기 작용제 및 바이오마커에 의해 형성된 복합체의 직접적 또는 간접적 검출을 가능하게 한다. 직접적 검출은 작용제에 검출가능한 표지를 포함함으로써 달성될 수 있다. 간접적 표지는 바이오마커 및 검출제를 함유하는 복합체에 특이적으로 결합하는 추가 작용제에 의해 달성될 수 있으며, 여기서 상기 추가 작용제는 검출가능한 신호를 생성할 수 있다. 검출제로서 사용될 수 있는 적합한 화합물들은 당업계에 널리 공지되어 있다. 바람직하게는, 검출제는 바이오마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 압타머이다. 본원에 언급되는 항체에는 폴리클로날 및 모노클로날 항체 뿐만 아니라, 그의 절편, 예컨대 항원 또는 합텐에 결합할 수 있는 Fv, Fab 및 F(ab)2 절편을 포함한다. 또한, 단일쇄 항체 및 인간화된 하이브리드 항체도 고려되는데, 여기서 원하는 항원-특이성을 나타내는 비-인간 공여자 항체의 아미노산 서열은 인간 수용자 항체의 서열과 조합된다.
본 발명은 하기를 포함하는, 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체에서 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는지 여부를 조기에 구별하기 위한 장치에 관한 것이다:
a) 심장 트로포닌의 양을 결정하도록 해 주는 심장 트로포닌에 대한 검출제 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하도록 해 주는 상기 나트륨이뇨 펩티드에 대한 검출제) 를 함유하는 분석 단위체 (또는 분석기 단위체); 및
b) 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는지 여부를 구별하기 위한, 분석 단위체에 의해 결정된 양(들)을 데이터베이스에 저장된 기준량(들)과 비교하기 위한 알고리즘을 실행하는 데이터 프로세서를 포함하는 평가 단위체 (또는 분석기 단위체), 여기서 기준량은 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 방법의 맥락에서 본원에 기재된 바와 같이 기준 대상체 유래의 시료로부터 유도되며, 알고리즘은 상기 방법의 맥락에서 정의되는 알고리즘임.
본 발명은 추가로 하기를 포함하는, 심박 세동을 앓고 있는 것으로 추정되는 대상체에서 심박 세동, 특히 간헐적 심박 세동을 진단하는 장치에 관한 것이다:
a) 심장 트로포닌의 양을 결정하도록 해 주는 심장 트로포닌에 대한 검출제 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하도록 해 주는 나트륨이뇨 펩티드에 대한 검출제) 를 포함하는 분석 단위체 (또는 분석기 단위체); 및
b) 심박 세동, 특히 간헐적 심박 세동을 진단하기 위해, 분석 단위체에 의해 결정된 양(들)을 데이터베이스에 저장된 기준량(들)과 비교하기 위한 알고리즘을 실행하는 데이터 프로세서를 포함하는 평가 단위체 (또는 분석기 단위체), 여기서 기준량은 심박 세동 (특히, 간헐적 심박 세동) 진단 방법의 맥락에서 본원에 기재된 바 있는 기준 대상체 유래의 시료로부터 유도되며, 알고리즘은 심박 세동 (특히, 심박 세동) 진단 방법의 맥락에서 정의된 알고리즘임.
본원에 사용된 용어 "장치" 는 본 발명의 방법에 따른 진단을 가능케 할 서로 작동적으로 연결되어 있는 상기 언급된 단위체들을 포함하는 시스템에 관한 것이다. 분석 단위체에 사용될 수 있는 바람직한 검출제는 본원에 개시되어 있다. 분석 단위체는 바람직하게는, 결정될 바이오마커의 양을 포함하는 시료에 접촉시킬 고체 담지체 상에 고정되어 있는 형태의 상기 검출제를 함유한다. 나아가, 분석 단위체는 또한 바이오마커(들)에 특이적으로 결합되어 있는 검출제의 양을 결정하는 검출기를 포함할 수 있다. 결정되는 양은 평가 단위체로 전송될 수 있다. 상기 평가 단위체는 결정되는 양과 적합한 기준 사이의 비교를 실시하기 위한 알고리즘이 실행되는 컴퓨터와 같은 데이터 프로세싱 엘리먼트를 포함한다. 적합한 기준은 상기 본원에 기재된 기준량의 생성에 이용되는 대상체의 시료로부터 유도될 수 있다. 진단 결과는, 바람직하게는 절대량 또는 상대량으로서 매개변수의 진단용 원 데이터 출력으로 제공될 수 있다. 그러한 데이터는 임상의에 의한 해석을 필요로 할 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러나, 출력물이 전문의의 해석을 필요치 않는 가공된 진단 원 데이터를 포함하는 전문가 시스템도 고려된다. 바람직하게는, 본 발명의 장치는 자동화된 방식으로 본 발명의 상기 언급된 방법을 실시하도록 이용될 수 있다.
본 개시내용의 바람직한 구현예는 본원에 제시된 실시를 안내하기 위한 시스템을 포함한다. 시스템의 예시는, 화학적 또는 생물학적 반응의 결과를 검출하거나 화학적 또는 생물학적 반응의 진행을 모니터링하기 위해 사용되는 임상 화학 분석기, 응집 화학 분석기, 면역화학 분석기, 뇨 분석기, 핵산 분석기를 포함한다. 더 구체적으로는, 본 개시내용의 예시 시스템은, Roche ElecsysTM Systems 및 Cobas e Immunoassay Analyzers, Abbott ArchitectTM 및 AxsymTM Analyzers, Siemens CentaurTM 및 ImmuliteTM Analyzers, 및 Beckman Coulter UniCelTM 및 AcessTM Analyzers 등을 포함할 수 있다.
시스템의 구현예는 대상 개시내용의 실시에 이용되는 하나 이상의 분석기 단위체를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 시스템의 분석기 단위체는 공지된 바와 같이 임의의 유선 연결, Bluetooth, LANS, 또는 무선 신호를 통해 본원에 개시된 컴퓨팅 장치와 작동가능한 통신이 된다. 추가로, 본 개시내용에 따르면, 분석기 단위체는 더 큰 기기 내에 검출의 한편 또는 양편, 예를 들어 진단 목적의 시료의 정성적 및/또는 정량적 평가를 실시할 독립형 장치 또는 모듈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 분석기 단위체는 시료 및/또는 시약의 피펫팅, 투약, 혼합을 실행 또는 보조할 수 있다. 분석기 단위체는 검정을 실행할 시약을 잡고 있기 위한 시약 홀딩 단위체를 포함할 수 있다. 시약은 예를 들어, 저장 구획 또는 컨베이어 내에 적절한 용기 또는 위치에 배치되어 있는 개별 시약들 또는 시약들의 군을 포함하는 용기 또는 카셋트의 형태로 정렬되어 있을 수 있다. 검출 시약은 또한 시료와 접촉되어 있는 고체 담지체 상에 고정된 형태로 존재할 수 있다. 나아가, 분석기 단위체는 특정 분석에 최적화가능한 프로세스 및/또는 검출 구성요소를 포함할 수 있다.
일부 구현예에 따르면, 분석기 단위체는 예를 들어 시료가 있는 분석물, 예를 들어 마커의 광학적 검출을 위해 배치될 수 있다. 광학적 검출을 위해 배치된 예시 검출기 단위체는 전자기적 에너지를 전기적 신호로 변환하기 위해 배치된 장치를 포함하며, 이는 단독 및 다중-엘리먼트 또는 어레이 광학 검출기를 포함한다. 본 발명 개시내용에 따르면, 광학 검출기는 광학적 전자기적 신호를 모니터링할 수 있고, 광학 경로 내에 위치된 시료 중의 분석물의 존재성 및/또는 농도의 기준선 신호 표식자에 대한 전기적 출력 신호 또는 응답 신호를 제공할 수 있다. 그러한 장치는 또한 예를 들어 애벌란시 포토다이오드 (avalanche photodiodes) 를 포함하는 포토다이오드 (photodiode), 포토트랜지스터, 광전도 검출기, 선형 센서 어레이 (linear sensor array), CCD 검출기, CMOS 어레이 검출기를 포함하는 CMOS 검출기, 광전자배증관 (photomultiplier), 및 광전자배증관 어레이를 포함할 수 있다. 특정 구현예에 따르면, 포토다이오드 또는 광전자배증관과 같은 광학 검출기는 추가적인 신호 컨디셔닝 또는 프로세싱 전자기기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 광학 검출기는 하나 이상의 전치 증폭기 (pre-amplifier), 전자식 필터 (electronic filter) 또는 통합 회로 (integrated circuit) 를 포함할 수 있다. 적합한 전치 증폭기는 예를 들어 적산기 (integrating), 트랜스임피던스 (transimpedance), 및 전류 이득 (current gain (전류 반복기; current mirror)) 전치 증폭기를 포함한다.
추가적으로, 본 개시내용에 따른 하나 이상의 분석기 단위체는 발광을 위한 광원을 포함할 수 있다. 예를 들어, 분석기 단위체용 광원은 시험할 시료를 이용해 분석물 농도를 측정하거나 또는 (형광 공명 에너지 이동 또는 효소 촉매화를 통해) 에너지 이동을 가능케 하는 하나 이상의 광 발광 엘리먼트 (예컨대, 발광 다이오드, 전력 조사 광원, 예컨대 백열등, 전자발광 램프, 가스 방전 램프, 고휘도 방전 램프, 레이저) 로 이루어질 수 있다.
나아가, 시스템의 분석기 단위체는 하나 이상의 인큐베이션 단위체 (예를 들어, 시료 또는 시약을 특정 온도 또는 온도 범위로 유지하기 위한 것) 를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 분석기 단위체는 시료를 반복적인 온도 순환에 적용하고 시료를 이용해 증폭된 생성물의 양을 모니터링하기 위한, 실시간 열순환기를 포함하는 열순환기를 포함할 수 있다.
추가적으로, 본원에 개시된 시스템의 분석기 단위체는 반응 용기 또는 큐벳 주입 단위체를 포함하거나 또는 그에 작동적으로 연결되어 있을 수 있다. 예시 주입 단위체에는 약체 프로세싱 단위체, 예컨대 시료 및/또는 시약을 반응 용기로 전달하기 위한 피펫팅 단위체를 포함한다. 피펫팅 단위체는 재사용가능한 세척가능한 바늘, 예컨대 강철 바늘, 또는 1 회용 피펫 팁을 포함할 수 있다. 분석기 단위체는 하나 이상의 혼합 단위체, 예를 들어 액체를 담고 있는 큐벳을 쉐이킹하기 위한 쉐이커, 또는 큐벳내 혼합물을 혼합하기 위한 혼합 패들 또는 시약 용기를 추가로 포함할 수 있다.
상기 및 본 개시내용의 일부 구현예에 따르면, 본원에 개시되고 기재된 방법의 일부 단계들 중 일부는 컴퓨팅 장치에 의해 실행될 수 있다. 컴퓨팅 장치는 예를 들어 일반적인 목적의 컴퓨터 또는 이동형 컴퓨팅 장치일 수 있다. 다중 컴퓨팅 장치들이 함께, 예컨대 네트워크 상에서 또는 본원에 개시된 방법들의 하나 이상의 단계를 수행하기 위한 여타 데이터 이동 방법 상에서 이용될 수 있다. 예시 컴퓨팅 장치에는 데스크탑 컴퓨터, 랩탑 컴퓨터, 퍼스널 데이터 어시스턴트 ("PDA"), 예컨대 BLACKBERRY 브랜드 장치, 셀방식 장치 (cellular devices), 태블릿 컴퓨터, 서버 등이 있다. 일반적으로, 컴퓨팅 장치는 여러 지시사항 (예컨대, 소프트웨어의 프로그램) 을 실행할 수 있는 프로세서를 포함한다.
컴퓨팅 장치는 메모리에 대한 접선을 갖고 있다. 메모리는 컴퓨터가 검독가능한 매체이며, 컴퓨팅 장치에 국지적으로 위치되어 있거나 또는 예를 들어 네트워크를 통해 컴퓨팅 장치에 접근가능한 단일 저장 장치 또는 다중 저장 장치를 포함할 수 있다. 컴퓨터가 검독가능한 매체는 컴퓨팅 장치에 의해 접근될 수 있고, 휘발성 및 비휘발성 매체를 포함하는 임의의 이용가능한 매체일 수 있다. 나아가, 컴퓨터가 검독가능한 매체는 제거가능 및 제거불가 매체 중 하나 또는 두가지 모두일 수 있다. 예시로서, 이에 제한되지 않지만, 컴퓨터가 검독가능한 매체는 컴퓨터 저장 매체를 포함할 수 있다. 예시적인 컴퓨터 저장 매체에는, 이에 제한되지 않으나, RAM, ROM, EEPROM, 플래쉬 메모리 또는 임의의 여타 메모리 기법, CD-ROM, Digital Versatile Disk (DVD) 또는 여타 광학 디스크 저장, 자기 카셋트, 자기 테이트, 자기 디스트 저장소 또는 여타 자기 저장 장치, 또는 컴퓨팅 장치에 의해 접근될 수 있고, 컴퓨팅 장치의 프로세서에 의해 실행될 수 있는 여러 지시사항을 저장하기 위해 이용될 수 있는 임의의 여타 매체가 포함된다.
본 개시내용의 구현예에 따르면, 소프트웨어는, 컴퓨팅 장치의 프로세서에 의해 실행시 본원에 개시된 방법의 하나 이상의 단계를 실행할 수 있는 지시사항을 포함할 수 있다. 지시사항 중 일부는 여타 기계의 조작을 제어하는 신호를 생성하고, 이에 따라 그러한 제어 신호들이 컴퓨터 자체로부터 멀리 제거되는 재료들을 변형시키도록 적합화될 수 있다. 그러한 설명 및 제시내용들은 데이터 프로세싱 분야에서, 예를 들어 노작의 결과물을 타 당업자에게 가장 유효하게 전달할 당업자에 의해 이용되는 수단이다.
여러 지시사항들이 또한 원하는 결과를 유도하는, 일반적으로 일관성 있는 순서의 단계가 되도록 한 알고리즘을 포함할 수 있다. 그러한 단계들은 물리적 양의 물리적 취급을 필요로 하는 것이다. 일반적으로, 반드시 필요한 것은 아니지만, 그러한 양은 저장, 이동, 변화, 조합, 비교 및 그렇지 않으면 취급될 수 있는 전기적 또는 자기적 펄스 또는 신호의 형태를 취한다. 종종, 원칙적으로 통상적 이용을 이유로, 그러한 신호는 구현 및 표현되는 물리적 아이템 또는 표명들에 대한 기준으로서 값, 캐릭터, 표시 데이터, 수 등과 같은 신호를 가리킨다. 그러나, 그러한 것들 및 유사한 용어들 전부가 적절한 물리적 양과 관련되어 있으며, 본원에서는 단지 그러한 양에 적용될 편리한 표지로서 이용된다는 것을 숙지해야 한다. 본 개시내용의 일부 구현예에 따르면, 본원에 개시된 하나 이상의 마커들의 결정량 및 적합한 기준 사이의 비교를 실시할 알고리즘은 지시사항의 수행에 의해 구현 및 실시된다. 결과는 파라미터의 진단 원 데이터로서 또는 절대량 또는 상대량으로서 제공될 수 있다. 본원에 개시된 시스템의 다양한 구현예에 따르면, "진단" 은 기준 또는 역치에 대해 산출된 "양" 의 상기 비교를 기반으로 하여 본원에 개시된 시스템의 컴퓨팅 장치에 의해 제공될 수 있다. 예를 들어, 시스템의 컴퓨팅 장치는 특별한 진단의 표식인 단어, 기호 또는 수치적 값의 형태로 표식을 제공할 수 있다.
컴퓨팅 장치는 또한 출력 장치에 대한 접속을 갖고 있을 수 있다. 예시 출력 장치에는 예를 들어 팩스 장치, 디스플레이, 프린터, 및 파일이 포함된다. 본 개시내용의 일부 구현예에 따르면, 컴퓨팅 장치는 본원에 개시된 방법의 하나 이상의 단계를 실행할 수 있고, 이후 방법의 결과, 표시, 비율 또는 여타 인자들과 관련하여 출력 장치를 통해 출력물을 제공할 수 있다.
본 발명은 추가로 허혈성 뇌졸중을 앓고 있는 대상체에서 대상체의 허혈성 뇌졸중이 심장색전성 허혈성 뇌졸중인지 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중인지 여부를 조기에 구별하기 위한 키트를 포함하는데, 상기 키트는 심장 트로포닌에 대한 검출제 및, 심장색전성 뇌졸중을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 및/또는 비-심장색전성 뇌졸중을 앓고 있는 것으로 공지된 대상체 유래의 시료로부터 유도되는 기준량(들)을 반영하는 표준 (표준들) 을 포함한다.
본 발명은 최종적으로 심박 세동을 앓을 것으로 추정되는 대상체에서 심박 세동을 진단하는 키트를 포함하는데, 여기서 상기 키트는 심장 트로포닌 (및, 선택적으로는 나트륨이뇨 펩티드) 에 대한 검출제 및, 심박 세동을 앓는 것으로 공지된 대상체 및/또는 심박 세동을 앓지 않는 것으로 공지된 대상체 유래의 시료로부터 유도되는 기준량(들) 을 반영하는 표준 (표준들) 을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "키트" 는, 바람직하게는 따로따로 또는 단일한 용기에 제공되는, 상기 언급된 구성요소들의 집합체를 지칭한다. 용기는 또한 본 발명의 방법을 실시하기 위한 지시사항을 포함한다. 그러한 지시사항은 매뉴얼의 형태일 수 있거나, 또는 본 발명의 방법에서 언급되는 비교를 실시할 수 있는 컴퓨터 프로그램 코드를 제공받을 수 있어, 컴퓨터 또는 데이터 프로세싱 장치 상에서 실행할 때 그에 따라 진단을 확립하게 된다. 컴퓨터 프로그램 코드는 데이터 저장 매체 또는 광학 저장 매체 (예를 들어, 컴팩트 디스크) 와 같은 장치 상에 제공될 수 있거나, 또는 직접 컴퓨터 또는 데이터 프로세싱 장치 상에 제공될 수 있다. 나아가, 키트는 바람직하게는 본원에 기재되어 상세히 설명되는 기준량을 반영하는 표준을 포함한다. 검출제는 바람직하게는 담체, 바람직하게는 테스트 스트립 상에 고정되어 있다.
본 발명의 구현예들
하기에는 본 발명의 바람직한 구현예가 수록된다. 바람직하게는 상기 본원에 제공된 정의가 준용된다.
1. 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양을 결정하는 단계를 포함하는, 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하는 방법으로서, 상기 시료가 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후에 수득된 것인 방법.
2. 구현예 1 의 방법에서, 상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교함으로써, 상기 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
3. 구현예 1 및 2 의 방법에서, 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후에 수득되는 상기 시료가, 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 24 시간 이내에, 특히 12 시간 이내에 상기 대상체로부터 수득된 것인 방법.
4. 구현예 1 및 2 의 방법에서, 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후에 수득되는 상기 시료가, 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 6 시간 이내에, 특히 3 시간 이내에 상기 대상체로부터 수득된 것인 방법.
5. 구현예 1 내지 4 중 임의의 한 방법에서, 기준량이 심장색전성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도되며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌, 또는 증가된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 심장색전성 뇌졸중을 앓는 것을 표시하고/하거나,
기준량이 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도되며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌, 또는 감소된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것을 표시하는 방법.
6. 구현예 1 내지 5 중 임의의 한 방법에서, 나트륨이뇨 펩티드, 특히 뇌 나트륨이뇨 펩티드, 특별하게는 BNP 또는 NT-proBNP 의 양을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
7. 대상체 유래의 시료에서 심장 트로포닌의 양을 결정하는 단계를 포함하는, 심박 세동을 앓는 것으로 추정되는 인간 대상체에서의 간헐적 심박 세동의 진단 방법.
8. 구현예 7 에 있어서, 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
9. 구현예 7 및 8 의 방법에 있어서, 심박 세동을 앓을 것으로 추정되는 대상체가 허혈성 뇌졸중, 특히 심장색전성 뇌졸중을 앓고 있으며, 시료가 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후 수득된 것인 방법.
10. 구현예 9 의 방법에 있어서, 상기 대상체 유래의 상기 시료가 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 12 시간 이내에, 특히 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 6 시간 이내 또는 3 시간 이내에 수득된 것인 방법.
11. 구현예 7 내지 10 중 임의의 방법에서, 간헐적 심박 세동이 진단되는 방법.
12. 구현예 7 내지 11 중 임의의 방법에서, 나트륨이뇨 펩티드, 특히 뇌 나트륨이뇨 펩티드, 특히 BNP 및 NT-proBNP 의 양을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
13. 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하기 위한, 대상체 시료 중의 심장 트로포닌 및/또는 상기 트로포닌에 결합하는 검출시약의 용도로서, 상기 시료가 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 직후 수득되는 용도.
14. 심박 세동을 앓는 것으로 추정되는 인간 대상체의 시료에서, 상기 대상체에서의 간헐적 심박 세동을 진단하기 위한 심장 트로포닌 및/또는 상기 트로포닌에 특이적으로 결합하는 검출 시약의 용도.
15. 하기를 포함하는, 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체에서 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하기 위한 장치:
a) 상기 심장 트로포닌 (및, 선택적으로는 상기 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정할 수 있도록 해 주는, 나트륨이뇨 펩티드에 대한 검출 시약) 의 양을 결정하도록 해 주는 심장 트로포닌에 대한 검출 시약을 포함하는 분석 단위체; 및
b) 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하기 위해 분석 단위체에 의해 결정된 양(들)을 데이터베이스에 저장된 기준량(들)과 비교하기 위한 알고리즘을 실행하는 데이터 프로세서를 포함하는 평가 단위체로서, 상기 기준량이 구현예 5 의 대상체 유래의 시료로부터 유도되며, 상기 알고리즘이 구현예 5 에 기재된 알고리즘인 단위체.
명세서에서 인용한 모든 참고문헌들은 전체 개시 내용이 본원에 참고문헌으로 포함된다.
하기 실시예는 본 발명을 설명할 뿐이다. 이들은 어떤 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어선 안된다.
실시예 1: 트로포닌 T, GDF -15 및 NT - proBNP 의 결정
트로포닌 T 는 Roche 사의 전자발광 ELISA 샌드위치 테스트 Elecsys TroponinTM (고감도) STAT (Short Turn Around Time) 검정을 이용해 결정했다. 테스트는 인간 심장 트로포닌 T 에 대해 특이적으로 지향적인 두가지 모노클로날 항체를 이용했다. 항체들은 288 개의 아미노산으로 이루어진 (분석 감도는 1,0 미만) 심장 트로포닌 T 단백질의 중앙 부분에 위치된 2 개의 에피토프 (아미노산 위치 125 내지 131 및 136 내지 147) 를 인식한다.
NT-proBNP 는 Roche 사의 전자발광 ELISA 샌드위치 테스트 Elecsys proBNP II STAT (Short Turn Around Time) 검정을 이용해 결정했다. 테스트는 proBNP (1-108) 의 N-말단 부분 (1 내지 76) 에 위치된 에피토프를 인식하는 두가지 모노클로날 항체를 이용한다.
혈청 및 혈장 시료 중의 GDF-15 의 농도를 결정하기 위해, R&D Systems 사의 폴리클로날인, GDF-15 친화성 크로마토그래피-정제된, 염소 항-인간 GDF-15 IgG 항체 (AF957) 를 이용하는 Elecsys 프로토타입 테스트를 채용했다. 각 실험에서, 표준 곡선은 R&D Systems 사의 재조합 인간 GDF-15 (957-GD/CF) 를 이용해 생성했다. 신규 회분 또는 재조합 GDF-15 단백질을 이용해 수득한 결과는 표준 혈장 시료에서 시험하고, 10% 를 초과하는 임의의 편차는 상기 검정에 대한 보정 인수를 도입해 정정했다. 동일한 환자 유래의 혈청 및 혈장 시료 중의 GDF-15 측정은 궁극적 희석 인자에 대한 보정 후에는 사실상 동일한 결과를 제공했다. 이 검정의 검출 한계는 200 pg/ml 였다.
실시예 2: 환자 코호트
허혈성 뇌졸중이 있는 총 255 명의 환자 (평균 연령 70 세) 를 NT-pro BNP, 트로포닌 T 및 GDF 15 에 대해 시험했다. 일시적 국소 빈혈성 공격이 23 명의 환자에서 나타났고, 경미한 뇌졸중이 61 명의 환자에서 진단되었고, 중대한 뇌졸중이 108 명의 환자에서 나타났다. 추가로, 상기 기재된 바와 같이 경동맥 및 경두개 초음파 뿐만 아니라 심전도 및 심초음파를 실시했고, 환자를 TOAST 기준에 따라 분류했다. 더욱이, 7 일 째에 HOLTER ECG 를 실시하여 통상적 심전도 상에서 알 수 없던 심박 세동을 밝혀냈다.
실시예 3: 결과
하기 결과가 수득되었다 (표시된 것은 중간값, 25 백분위수 및 75 백분위수임):
Figure 112014036260624-pct00001
선행기술에 기재된 심장색전성 뇌졸중은 증가되어 있는 NT-pro BNP 수준과 연관되어 있기 때문에, GDF 15 는 뇌졸중 분류에 유의하게 기여하지 않았지만, 감수성 트로포닌 T 는 유의하게 기여했으며, 이에 따라 심장 및 뇌 B 유형 나트륨이뇨 펩티드 구분의 어려움은 배제되었다.
이러한 데이터는 심박 세동 부재가 존재하는 것과 연관된 분류에 의해 추가로 뒷받침된다. 결과는 다음과 같다:
Figure 112014036260624-pct00002
데이터는 다시 AF 의 NT-pro BNP 및 트로포닌 T 와의 연계성을 증명하나, GDF 15 와는 연계성이 훨씬 더 낮다. 분류에 이용되는 NT-pro BNP 의 한계는 또한 중앙값 NT-pro BNP 수준이 제시 당시 (331 pg/ml) 로부터 후속관찰 24 시간 후 437 pg/ml 까지 30% 증가 범위 내에서 증가되었다는 사실에 의해 뒷받침된다. 어느 정도까지의 그러한 증가가 심장 원인의 것인지 또는 뇌로부터 방출된 것인지는 분명하지 않다. 대조적으로, 후속관찰시 트로포닌 T 의 유의한 증가는 없었다. 따라서, 트로포닌 T 수준은 안정하게 남아 있었다.
요약하면, 트로포닌 T 는 뇌졸중 원인의 식별/구분에 있어서 강력한 도구인 것으로 나타났다. 그러한 방법은 또한 B 유형 나트륨이뇨 펩티드와 조합하여 뇌졸중 예방에 이용될 수 있다. GDF 15 는 그러한 중요한 임상적 문제에 대한 작지만 놀랄만한 추가적 정보를 제공해 준다.
실시예 4: 케이스 연구
68 세 남성이 임상적 증상 및 후속한 MRI 를 근거로 TIA (일과성 뇌허혈증) 로 진단되었다. 그의 ECG 는 정상이었다. 그의 트로포닌 T 는 10.2 pg/ml 였으며, 그의 NT-pro BNP 는 520 pg/ml 였다. 심방에는 혈전 형성이 없었고, 심초음파도에서는 경미한 좌심실 부전이 있었다. TOAST 기준을 근거로, 대상체는 다른 가능성들을 배제한 후 심장색전성 뇌졸종으로 진단되었다. 심방내 혈전 형성때문에, 대상체는 3 일간 Holter ECG 를 제공받았으며, 이는 발작성 심박 세동을 밝혀냈다. 이어서, 대상체는 사용 금지 사유가 없었기 때문에 항응혈제 치료요법을 받게 되었다.
72 세 남성이 CT 스캔에 의해 뇌내 출혈을 배제한 후, MRI 에 의해 확인된 경미한 뇌졸중을 나타냈다. 그의 트로포닌 T 는 4.1 pg/ml 였고, 그의 NT-pro BNP 는 245 pg/ml 였다. 경동맥 초음파는 우측 경동맥 분지의 80% 협착을 밝혀냈다. 경미한 심장 이완기 부전을 제외하고는 ECG 및 심초음파는 정상이었다. AF 를 갖고 있지 않을 공산이 커서, Holter ECG 는 실시하지 않았다. 뇌내 및 뇌외 동맥의 더욱 집중적인 평가 후 대상체에게는 폐색된 경동맥의 정정을 고려해 볼 것을 권고했다.
52 세 여성은 현기증 및 항진을 보고하며 응급실을 찾았다. 그녀의 트로포닌 T 는 3 pg/ml 였고, NT-pro BNP 는 115 pg/ml 였으며, ECG 및 심초음파는 정상 범위였다. 트로포닌 T 및 NT-pro BNP 결과와 함께, 증상들이 뇌 이벤트 또는 심박 세동을 지향하지 않아서, 추가적인 조사는 실시하지 않았다. 환자는 의심성 불안 증후군으로부터 벗어났다.
58 세 남성은 그의 좌측 팔의 일시적 약화때문에 응급실을 찾았다. 그의 ECG 는 정상이었고, 그의 트로포닌 T 는 11.1 pg/ml 였으며, NT-pro BNP 는 435 pg/ml 였다. 트로포닌 T 및 NT-pro BNP 결과 때문에 MRI 는 뇌졸중을 배제했으며, Holter ECG 를 이후에 실시하여 발작성 AF 를 밝혀냈다. TTE 를 포함한 후속 Echo 는 심방내 혈전을 밝혀냈다. 환자는 발작성 심박 세동으로 진단되었으며, 명백한 사용 금지 사유가 없었기 때문에 항응혈제 치료요법을 받게 되었다.
58 세 남성은 허혈성 뇌졸중 증상 시작 2 시간 후에 응급실에 왔는데, 증상은 우측 팔 및 다리의 갑작스러운 약화를 포함했으며, 그의 트로포닌 T 는 12.5 pg/ml 였고, NT-pro BNP 는 920 pg/ml 였다. 의심되던 심장색전성 뇌졸중을 좌심방에서 혈전을 보인 식도 심초음파에 의해 확인했다. 용해 치료요법 (lysis therapy) 과 연계된 혈관조영법으로 진단을 확인했다. 용해 치료요법은 성공적이었으며, 증상이 호전되었고, 환자는 항응혈제를 제공받게 되었다.
58 세 남성은 현기증이 있어 병원을 방문했으며, 지난 8 년간 당뇨를 앓고 있었고, 그의 생애 대부분 흡연을 했고, 지난 10 년간 동맥 고혈압이 있는 것으로 알려졌다. 조영술에서 TIA 는 제외했고, 심초음파 상에서 혈전 형성 없이 확장된 좌심방이 있었으며, 제시시 그의 ECG 는 정상이었고, 동박절 (sinus rhythm) 이 기록되었다. 그의 트로포닌은 11 pg/ml 였고, NT-pro BNP 는 480 pg/ml 였다. 수주 후, 환자에게 Holter ECG 를 제공했고, 간헐적 심박 세동이 기록되었다.
결론:
심장색전성 뇌졸중이 있는 뇌졸중 환자의 식별은, 그것이 추후의 진단 단계 및 치료, 더욱 중요하게는 추후 뇌졸중의 예방을 겨냥하게 하기 때문에 중요하다. 나트륨이뇨 펩티드는 허혈성 뇌졸중이 나타난 환자에서 심장색전성 뇌졸중에 대한 후보를 검출함에 있어서 유용성을 나타냈다. 그러나, 본원에 제시된 바와 같이 나트륨이뇨 펩티드는 뇌졸중 과정 동안 변화할 수 있어서, 그의 진단용 잠재성을 제한하지만, 실질적 변화에 적용되지 않는 트로포닌 T 의 경우에는 그렇지 않다.
발작성 또는 간헐적 심박 세동의 검출에도 유사한 논리가 적용된다. 심박 세동은 노년 집단에서 더욱 빈번하다. 진단 방법 (Holter ECG 및 결과물인 동맥 혈전 검출 방법, TEE) 은 이용가능성에 제한성이 있기 때문에, 환자 선별 (포함/배제) 이 중요하다. 이는 트로포닌 T (및 NT-pro BNP) 의 결정 및 적절한 컷 오프의 이용으로 실시될 수 있다.
결론적으로, 본 발명자들은 허혈성 뇌졸중 및 간헐적 심박 세동에서 추후의 진단 방법 및 치료 일정을 정하기 위한 중요한 진단 방법으로서 트로포닌 T 를 밝혀냈다.

Claims (20)

  1. 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하기 위한 정보를 제공하기 위하여, 하기의 단계를 포함하는 방법으로서:
    a) 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료 중의 심장 트로포닌의 양을 결정하는 단계로서, 상기 시료가 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 6 시간 이내에 수득된 것인 단계; 및
    b) 상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교함으로써, 상기 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 단계;
    상기 기준량이 심장색전성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도되며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌 또는 증가된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 심장색전성 뇌졸중을 앓는 것을 표시하거나,
    상기 기준량이 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도되며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌 또는 감소된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것을 표시하거나,
    또는 이들 모두인 방법.
  2. 삭제
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 시료가 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 3 시간 이내에 상기 대상체로부터 수득된 것인 방법.
  4. 삭제
  5. 제 1 항에 있어서, 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  6. 대상체 시료에서 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하기 위한 정보를 제공하기 위하여, 심장 트로포닌, 상기 트로포닌에 특이적으로 결합하는 검출시약, 또는 이들 모두를 이용하는 방법으로서,
    상기 시료가 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 6 시간 이내에 수득된 것이고;
    상기 심장 트로포닌의 양을 기준량과 비교함으로써, 상기 대상체가 심장색전성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하는 단계를 포함하고;
    상기 기준량이 심장색전성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도되며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌 또는 증가된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 심장색전성 뇌졸중을 앓는 것을 표시하거나,
    상기 기준량이 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도되며, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌 또는 감소된 양의 심장 트로포닌이 대상체가 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것을 표시하거나,
    또는 이들 모두인 방법.
  7. 하기를 포함하는, 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체에서 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 조기에 구별하기 위한 장치:
    a) 심장 트로포닌의 양을 결정하도록 해 주는 심장 트로포닌에 대한 검출 시약 (및, 임의로는 나트륨이뇨 펩티드의 양을 결정하도록 해 주는 나트륨이뇨 펩티드에 대한 검출 시약) 을 포함하는 분석 단위체; 및
    b) 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중 또는 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는지 여부를 구별하기 위해 분석 단위체에 의해 결정된 양(들)을 데이터베이스에 저장된 기준량(들)과 비교하기 위한 알고리즘을 실행하는 데이터 프로세서를 포함하는 평가 단위체, 여기서 상기 기준량은 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료, 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 대상체 유래의 시료, 또는 이들 모두로부터 유도되고, 여기서 상기 시료는 허혈성 뇌졸중의 증상 발증 후 6 시간 이내에 수득된 것이고, 알고리즘이 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상임:
    i) 기준량이 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도된 경우, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌, 또는 증가되어 있는 양의 심장 트로포닌이 대상체가 심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있음을 표시함, 및
    ii) 기준량이 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓는 것으로 공지된 대상체로부터 유도된 경우, 기준량과 비교시 동일한 양의 심장 트로포닌, 또는 감소되어 있는 양의 심장 트로포닌이 대상체가 비-심장색전성 허혈성 뇌졸중을 앓고 있음을 표시함.
  8. 제 5 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨 펩티드는 뇌 나트륨이뇨 펩티드 (BNP)-유형 펩티드인 방법.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 뇌 나트륨이뇨 펩티드 (BNP)-유형 펩티드는 BNP 또는 NT-proBNP 인 방법.
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
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