CN101501067B - 利尿和利尿钠的多肽 - Google Patents

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Abstract

本文提供利尿和利尿钠的多肽。例如，本文提供了具有利尿和/或利尿钠活性的多肽。在一些例子中，本文提供的多肽可具有利尿和利尿钠活性，而不具有降低血压的能力。本文还提供了在哺乳动物中诱导利尿和/或利尿钠活性的方法和材料。

Description

利尿和利尿钠的多肽
相关申请的交叉引用
本申请要求2007年6月13日提交的美国临时申请No.60/934,584和2006年8月8日提交的美国临时申请序列No.60/836,581的优先权。
背景
1.技术领域
本文涉及如利尿和利尿钠多肽的方法和材料。例如，本文涉及具有利尿和利尿钠活性而不具有降低血压能力的多肽。
2.背景信息
利尿钠多肽家族的成员是调节体液内稳态的激素。心房利尿钠肽(ANP)由心房肌细胞响应于血管内容积的增加而分泌。ANP在循环中后，其主要作用于肾脏、血管组织和肾上腺，其中它的作用导致肾脏排出钠和水以及血管内容积和血压降低。BNP也来自心肌细胞，并如ANP一样在人体血浆中循环。BNP是利尿钠、抑制肾素(rennin)、血管舒张和松弛性的。BNP的主要循环和贮存形式是具有环结构的32氨基酸多肽。BNP的生理作用由与鸟苷酸环化酶相连的受体利尿钠肽受体A(NPR-A)介导。BNP的清除由NPR-C受体推动，将其移出循环。BNP也由中性内肽酶通过酶促裂解而降解。C-型利尿钠肽(CNP)来源于内皮细胞，起血管舒张和生长抑制多肽作用。树眼镜蛇属(Dendroaspis)利尿钠肽(DNP)结构与ANP、BNP和CNP相似，其从非洲绿树眼镜蛇(Dendoaspis angusticeps)或绿曼巴蛇(green mamba snake)的毒液分离。
概要
本文涉及利尿和利尿钠多肽。例如，本文提供了具有利尿和利尿钠活性的多肽。具有利尿活性的多肽可在医学上用于治疗高血压、肾病、肝硬化、充血性心力衰竭或任何流体过剩态(fluid overload state)。具有利尿钠活性的多肽可增加钠从体内的排出，并可在医学上用于治疗高血压、肾病、肝硬化、充血性心力衰竭或任何钠过剩态。
在一些情况下，本文所提供的多肽可具有利尿和利尿钠活性而不具备降低血压的能力。在一些情况下，本文所提供的多肽可施用于患有充血性心力衰竭的哺乳动物，这些情况下诱导可检测的利尿效应而不诱导可检测的利尿钠效应，同时影响肾小球滤过率。
总之，本文的一个方面特征是一种长度为37至47氨基酸残基的大致纯的多肽，其中所述多肽包含或主要由如下氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述多肽的长度可为38至46氨基酸残基。所述多肽的长度可为39至45氨基酸残基。所述多肽的长度可为40至44氨基酸残基。所述多肽的长度可为41至43氨基酸残基。所述多肽的长度可为42氨基酸残基。所述多肽的长度可为37氨基酸残基。所述多肽的长度为47氨基酸残基。所述氨基酸序列可是SEQ ID NO：1所列的序列。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有4个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有3个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有2个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有1个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸添加。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸缺失。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸取代。所述多肽的长度可为42氨基酸残基，且其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO：1所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。所述多肽可不具有降低哺乳动物血压的能力。所述哺乳动物可是人类或犬。
在另一方面，本文特征为一种长度为45至65氨基酸残基的大致纯的多肽，其中所述多肽包含或主要由如下的第一氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合，且其中所述多肽包含如下的第二氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：2所列的或(b)与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失。所述多肽的长度可为58至63氨基酸残基。所述多肽的长度可为60氨基酸残基。所述多肽的长度可为45氨基酸残基。所述多肽可为65氨基酸残基。所述多肽的序列可是SEQ ID NO：3所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。
在另一方面，本文特征为一种分离的核酸，其编码长度为37至47氨基酸残基的多肽，其中所述多肽包含或主要由如下氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述多肽的长度可为38至46氨基酸残基。所述多肽的长度可为39至45氨基酸残基。所述多肽的长度可为40至44氨基酸残基。所述多肽的长度可为41至43氨基酸残基。所述多肽的长度可为42氨基酸残基。所述多肽的长度可为37氨基酸残基。所述多肽的长度可为47氨基酸残基。所述氨基酸序列可是SEQ ID NO：1所列的序列。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有4个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有3个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有2个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有1个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸添加。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸缺失。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸取代。所述多肽的长度可为42氨基酸残基，且其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO：1所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。所述多肽可不具有降低哺乳动物血压的能力。所述哺乳动物可是人类或犬。
在另一方面，本文特征为一种分离的核酸，其编码长度为45至65氨基酸残基的多肽，其中所述多肽包含或主要由如下第一氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合，且其中所述多肽包含如下第二氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：2所列的或(b)与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失。所述多肽的长度可为58至63氨基酸残基。所述多肽的长度可为60氨基酸残基。所述多肽的长度可为45氨基酸残基。所述多肽可为65氨基酸残基。所述多肽的序列可是SEQ ID NO：3所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。
在另一方面，本文特征为一种载体，其包含编码长度为37至47氨基酸残基的多肽的核酸，其中所述多肽包含或主要由如下氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述多肽的长度可为38至46氨基酸残基。所述多肽的长度可为39至45氨基酸残基。所述多肽的长度可为40至44氨基酸残基。所述多肽的长度可为41至43氨基酸残基。所述多肽的长度可为42氨基酸残基。所述多肽的长度可为37氨基酸残基。所述多肽的长度可为47氨基酸残基。所述氨基酸序列可是SEQ ID NO：1所列的序列。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有4个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有3个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有2个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有1个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸添加。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸缺失。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸取代。所述多肽的长度可为42氨基酸残基，且其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO：1所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。所述多肽可不具有降低哺乳动物血压的能力。所述哺乳动物可是人类或犬。
在另一方面，本文特征为一种载体，其包含编码长度为45至65氨基酸残基的多肽的核酸，其中所述多肽包含或主要由如下第一氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合，且其中所述多肽包含如下第二氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：2所列的或(b)与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失。所述多肽的长度可为58至63氨基酸残基。所述多肽的长度可为60氨基酸残基。所述多肽的长度可为45氨基酸残基。所述多肽可为65氨基酸残基。所述多肽的序列可是SEQ ID NO：3所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。
在另一方面，本文特征为一种宿主细胞，其包含编码长度为37至47氨基酸残基的多肽的核酸，其中所述多肽包含或主要由如下氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述多肽的长度可为38至46氨基酸残基。所述多肽的长度可为39至45氨基酸残基。所述多肽的长度可为40至44氨基酸残基。所述多肽的长度可为41至43氨基酸残基。所述多肽的长度可为42氨基酸残基。所述多肽的长度可为37氨基酸残基。所述多肽的长度可为47氨基酸残基。所述氨基酸序列可是SEQ ID NO：1所列的序列。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有4个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有3个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有2个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有1个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸添加。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸缺失。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸取代。所述多肽的长度可为42氨基酸残基，且其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO：1所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。所述多肽可不具有降低哺乳动物血压的能力。所述哺乳动物可是人类或犬。所述宿主细胞可为真核宿主细胞。
在另一方面，本文特征为一种宿主细胞，其包含编码长度为45至65氨基酸残基的多肽的核酸，其中所述多肽包含或主要由如下第一氨基酸序列组成：(a)SEQ IDNO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合，且其中所述多肽包含如下第二氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：2所列的或(b)与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失。所述多肽的长度可为58至63氨基酸残基。所述多肽的长度可为60氨基酸残基。所述多肽的长度可为45氨基酸残基。所述多肽可为65氨基酸残基。所述多肽的序列可是SEQ ID NO：3所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。所述宿主细胞可为真核宿主细胞。
在另一方面，本文特征为一种药物组合物，其包括药物上可接受载体和长度为37至47氨基酸残基的多肽，其中所述多肽包含或主要由如下氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ IF NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述多肽的长度可为38至46氨基酸残基。所述多肽的长度可为39至45氨基酸残基。所述多肽的长度可为40至44氨基酸残基。所述多肽的长度可为41至43氨基酸残基。所述多肽的长度可为42氨基酸残基。所述多肽的长度可为37氨基酸残基。所述多肽的长度可为47氨基酸残基。所述氨基酸序列可是SEQ ID NO：1所列的序列。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有4个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有3个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有2个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有1个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸添加。所述氨基酸序列与SEQID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸缺失。所述氨基酸序列与SEQID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸取代。所述多肽的长度可为42氨基酸残基，且其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO：1所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。所述多肽可不具有降低哺乳动物血压的能力。所述哺乳动物可是人类或犬。
在另一方面，本文特征为一种药物组合物，其包括药物上可接受载体和长度为45至65氨基酸残基的多肽，其中所述多肽包含或主要由如下第一氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合，且其中所述多肽包含如下第二氨基酸序列：(a)SEQID NO：2所列的或(b)与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失。所述多肽的长度可为58至63氨基酸残基。所述多肽的长度可为60氨基酸残基。所述多肽的长度可为45氨基酸残基。所述多肽可为65氨基酸残基。所述多肽的序列可是SEQ ID NO：3所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。
在另一方面，本文特征为一种增加哺乳动物利尿和利尿钠活性而不降低血压的方法。所述方法包括或主要由以下组成：向所述哺乳动物施用多肽，其中所述多肽长度为37至47氨基酸残基，其中所述多肽包含或主要由如下氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述多肽的长度可为38至46氨基酸残基。所述多肽的长度可为39至45氨基酸残基。所述多肽的长度可为40至44氨基酸残基。所述多肽的长度可为41至43氨基酸残基。所述多肽的长度可为42氨基酸残基。所述多肽的长度可为37氨基酸残基。所述多肽的长度可为47氨基酸残基。所述氨基酸序列可是SEQ ID NO：1所列的序列。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有4个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有3个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有2个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1所列的序列比对可具有1个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。所述氨基酸序列与SEQID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸添加。所述氨基酸序列与SEQID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸缺失。所述氨基酸序列与SEQID NO：1所列的序列比对可具有5个或更少的氨基酸取代。所述多肽的长度可为42氨基酸残基，且其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO：1所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。所述多肽可不具有降低哺乳动物血压的能力。所述哺乳动物可是人类或犬。
在另一方面，本文特征为一种增加哺乳动物利尿和利尿钠活性而不降低血压的方法。所述方法包括或主要由以下组成：向所述哺乳动物施用多肽，其中所述多肽长度为45至65氨基酸残基，其中所述多肽包含或主要由如下第一氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合，且其中所述多肽包含如下第二氨基酸序列：(a)SEQID NO：2所列的或(b)与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失。所述多肽的长度可为58至63氨基酸残基。所述多肽的长度可为60氨基酸残基。所述多肽的长度可为45氨基酸残基。所述多肽可为65氨基酸残基。所述多肽的序列可是SEQ ID NO：3所列的序列。所述多肽可具有利尿和利尿钠活性。
在另一方面，本文特征为一种治疗患有肾功能障碍的哺乳动物的方法。所述方法包括或主要由以下组成：在降低所述肾功能障碍症状的严重度的情况下向所述哺乳动物施用多肽。所述哺乳动物可是人类。所述肾功能障碍可包括肾衰竭。所述肾功能障碍可包括伴有充血性心力衰竭的肾衰竭。所述多肽可以静脉内、口服或鼻内施用。所述多肽可以缓释制剂(formulation)施用。所述多肽的长度可为37至47氨基酸残基且包含SEQ ID NO：1所列的氨基酸序列。所述多肽的长度可为37至47氨基酸残基且包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合的氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基且包含(i)SEQ ID NO：1所列的第一氨基酸序列和(ii)SEQ ID NO：2所列的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列，且包含SEQ ID NO：2所列的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含SEQ ID NO：1所列的第一氨基酸序列，且包含与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列，且包含与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或具有(ii)15个或更少的氨基酸缺失的第二氨基酸序列。所述症状可包括异常血清肌酸酐水平、尿流量、肾素水平、肾小球滤过率、尿cGMP排泄率、尿ANP排泄率、尿BNP排泄率、心排血量、系统血管阻力或醛固酮水平。所述症状可包括尿流量减少，且其中所述哺乳动物的尿流量在所述施用步骤后增加至少50％。所述症状可包括肾素水平降低，且其中所述哺乳动物的肾素水平在所述施用步骤后增加至少50％。所述症状可包括肾小球滤过率降低，且其中所述哺乳动物的肾小球滤过率在所述施用步骤后增加至少50％。所述症状可包括尿cGMP排泄率降低，且其中所述哺乳动物的尿cGMP排泄率在所述施用步骤后增加至少25％。所述症状可包括尿ANP排泄率降低，且其中所述哺乳动物的尿ANP排泄率在所述施用步骤后增加至少25％。所述症状可包括尿BNP排泄率降低，且其中所述哺乳动物的尿BNP排泄率在所述施用步骤后增加至少25％。所述症状可包括心排血量增加，且其中所述哺乳动物的心排血量在所述施用步骤后降低至少2％。所述症状可包括系统血管阻力降低，且其中所述哺乳动物的系统血管阻力在所述施用步骤后增加至少10％。所述症状可包括醛固酮水平降低，且其中所述哺乳动物的醛固酮水平在所述施用步骤后增加至少10％。
在另一方面，本文特征为一种治疗患有炎性疾病的哺乳动物的方法。所述方法包括或主要由以下组成：在降低所述炎性疾病症状的严重度的情况下向所述哺乳动物施用多肽。所述哺乳动物可是人类。所述多肽可以静脉内、口服或鼻内施用。所述多肽可以缓释制剂施用。所述多肽的长度可为37至47氨基酸残基且包含SEQ IDNO：1所列的氨基酸序列。所述多肽的长度可为37至47氨基酸残基且包含与SEQ IDNO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合的氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基且包含(i)SEQ ID NO：1所列的第一氨基酸序列和(ii)SEQ ID NO：2所列的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列，且包含SEQ ID NO：2所列的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含SEQ ID NO：1所列的第一氨基酸序列，且包含与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列，且包含与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或具有(ii)15个或更少的氨基酸缺失的第二氨基酸序列。
在另一方面，本文特征为一种治疗患有心功能障碍的哺乳动物的方法。所述方法包括或主要由以下组成：在降低所述心功能障碍症状的严重度的情况下向所述哺乳动物施用多肽。所述哺乳动物可是人类。所述心功能障碍可包括心力衰竭。所述心功能障碍可包括伴有肾衰竭的充血性心力衰竭。所述多肽可以静脉内、口服或鼻内施用。所述多肽可以缓释制剂施用。所述多肽的长度可为37至47氨基酸残基且包含SEQ ID NO：1所列的氨基酸序列。所述多肽的长度可为37至47氨基酸残基且包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合的氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基且包含(i)SEQID NO：1所列的第一氨基酸序列和(ii)SEQ ID NO：2所列的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列，且包含SEQ ID NO：2所列的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含SEQ IDNO：1所列的第一氨基酸序列，且包含与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失的第二氨基酸序列。所述多肽的长度可为45至65氨基酸残基，包含与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列，且包含与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或具有(ii)15个或更少的氨基酸缺失的第二氨基酸序列。
除非另外限定，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有如本发明所属领域普通技术人员所通常理解的相同的含义。尽管与本文描述的方法和材料相似或等价的方法和材料可用于实践本发明，但下文仍描述了一些适合的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献以引用的方式全文并入本文。在存在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。此外，这些材料、方法和实施例仅为示例而不意为限制。
本发明的一个或多个实施方式的详述以下文的附图和说明书列出。从本说明书和附图以及权利要求书，本发明的其它特征、目标和优点将变得明显。
附图说明
图1是长度为60氨基酸残基的ASBNP多肽(SEQ ID NO：4)、长度为42氨基酸残基的ASBNP.1多肽(SEQ ID NO：1)、长度为60氨基酸残基在43位有丙氨酸的ASBNP.2多肽(SEQ ID NO：3)的示意图。ASBNP.2的序列从43位的丙氨酸到60位的亮氨酸长度为18氨基酸残基(SEQ ID NO：2)。ASBNP(也称为BNP2)是由选择性剪接产生的BNP的变体形式。
图2是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的尿流率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图3是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的尿钠排泄率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图4是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的远端分支肾小管(distalfractional tubular)钠重吸收率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图5是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的近端肾小管分支(proximaltubular fractional)钠重吸收率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1。
图6是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的血浆cGMP水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图7是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的血浆肾素活性的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图8是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的肾小球滤过率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图9是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的肾血流率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图10是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的犬的平均动脉血压水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图11是描绘如所示的浓度以BNP、ASBNP或ASBNP.1治疗的HUVECS的cGMP水平的条形图。OX代表氧化的，非-OX表示非-氧化的。
图12是描绘如所示的浓度以BNP、ASBNP或ASBNP.1治疗的HASMCS的cGMP水平的条形图。OX代表氧化的，非-OX表示非-氧化的。
图13是描绘如所示的浓度以BNP、ASBNP或ASBNP.1治疗的兔血管环获得的血管活性测量值的线图。
图14含有编码ASBNP.1多肽的核酸序列(SEQ ID NO：5)和编码ASBNP.2多肽的核酸序列(SEQ ID NO：6)。
图15是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏(paced)犬的尿流率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图16是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的尿钠排泄率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec2是恢复2。
图17是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的远端分支肾小管钠重吸收率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec1是恢复1；rec 2是恢复2。
图18是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的近端肾小管分支钠重吸收率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；ree1是恢复1；rec 2是恢复2。
图19是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的血浆cGMP水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图20是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的血浆肾素活性(ng/mL/小时)的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec1是恢复1；rec 2是恢复2。
图21是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的肾小球滤过率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图22是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的肾血流率的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图23是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的平均动脉血压水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图24是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的尿cGMP排泄的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec2是恢复2。
图25是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的尿ANP排泄的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec2是恢复2。
图26是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的尿BNP排泄的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec2是恢复2。
图27是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的血浆BNP水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图28是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的血浆ANP水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图29是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的肺毛细血管楔压的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图30是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的心排血量的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图31是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的系统血管阻力的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图32是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的血管紧张素II水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec 2是恢复2。
图33是描绘如所示地以ASBNP.1治疗的起搏犬的醛固酮水平的条形图。基线是在施用前；低是2pmol；高是10pmol；超高是100pmol；rec 1是恢复1；rec2是恢复2。
图34是描绘开始施用ASBNP.1多肽(100pmol/kg/分钟)90分钟后在所示时间起搏犬中尿钠排泄(微Eq/min)的图。BL＝基线；30min＝30分钟的ASBNP.1多肽施用；60min＝60分钟的ASBNP.1多肽施用；90min＝90分钟的ASBNP.1多肽施用；冲洗＝输注终止的冲洗阶段后；Rec 1＝终止输注后30分钟；Rec 2＝终止输注后60分钟。
图35是描绘开始施用ASBNP.1多肽(100pmol/kg/分钟)90分钟后在所示时间起搏犬中尿流量(mL/min)的图。BL＝基线；30min＝30分钟的ASBNP.1多肽施用；60min＝60分钟的ASBNP.1多肽施用；90min＝90分钟的ASBNP.1多肽施用；冲洗＝输注终止的冲洗阶段后；Rec 1＝终止输注后30分钟；Rec 2＝终止输注后60分钟。
图36是描绘开始施用ASBNP.1多肽(100pmol/kg/分钟)90分钟后在所示时间起搏犬中平均动脉血压(mmHg)的图。BL＝基线；30min＝30分钟的ASBNP.1多肽施用；60min＝60分钟的ASBNP.1多肽施用；90min＝90分钟的ASBNP.1多肽施用；冲洗＝输注终止的冲洗阶段后；Rec 1＝终止输注后30分钟；Rec 2＝终止输注后60分钟。
图37是描绘开始施用ASBNP.1多肽(100pmol/kg/分钟)90分钟后在所示时间起搏犬中肾血流量的图。BL＝基线；30min＝30分钟的ASBNP.1多肽施用；60min＝60分钟的ASBNP.1多肽施用；90min＝90分钟的ASBNP.1多肽施用；冲洗＝输注终止的冲洗阶段后；Rec 1＝终止输注后30分钟；Rec 2＝终止输注后60分钟。
图38是描绘开始施用ASBNP.1多肽(100pmol/kg/分钟)90分钟后在所示时间起搏犬中肺毛细血管楔压的图。BL＝基线；30min＝30分钟的ASBNP.1多肽施用；60min＝60分钟的ASBNP.1多肽施用；90min＝90分钟的ASBNP.1多肽施用；冲洗＝输注终止的冲洗阶段后；Rec 1＝终止输注后30分钟；Rec 2＝终止输注后60分钟。
图39是描绘开始施用ASBNP.1多肽(100pmol/kg/分钟)90分钟后在所示时间起搏犬中心排血量(1/min)的图。BL＝基线；30min＝30分钟的ASBNP.1多肽施用；60min＝60分钟的ASBNP.1多肽施用；90min＝90分钟的ASBNP.1多肽施用；冲洗＝输注终止的冲洗阶段后；Rec 1＝终止输注后30分钟；Rec 2＝终止输注后60分钟。
详述
本文涉及利尿和利尿钠的多肽。例如，本文提供了具有利尿和/或利尿钠活性的多肽。在一些例子中，本文提供的多肽可具有利尿和/或利尿钠活性，而不具有降低血压的能力。本文还提供了在哺乳动物中诱导利尿和/或利尿钠活性的方法和材料。
本文提供的多肽可具有任何序列并可具有任何长度。例如，本文提供的多肽可包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所列的序列。在一些例子中，本文提供的多肽可包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所列的序列比对具有10个或更少的(如9个或更少的、8个或更少的、7个或更少的、6个或更少的、5个或更少的、4个或更少的、3个或更少的、2个或更少的、1个或0个)氨基酸添加、缺失、取代或其组合的氨基酸序列。例如，本文提供的多肽可包含SEQ ID NO：1所列的序列，除了SEQ ID NO：1的第一丝氨酸残基或最后一个缬氨酸残基被缺失或以不同的氨基酸残基取代。
在一些例子中，本文提供的多肽可包含：(a)是SEQ ID NO：1所列的或与SEQID NO：1所列的序列比对具有10个或更少的(如9个或更少的、8个或更少的、7个或更少的、6个或更少的、5个或更少的、4个或更少的、3个或更少的、2个或更少的、1个或0个)氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列和(b)是SEQ IDNO：2所列的或与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)10个或更少的(如9个或更少的、8个或更少的、7个或更少的、6个或更少的、5个或更少的、4个或更少的、3个或更少的、2个或更少的、1个或0个)氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的(如14个或更少的、13个或更少的、12个或更少的、11个或更少的、10个或更少的、9个或更少的、8个或更少的、7个或更少的、6个或更少的、5个或更少的、4个或更少的、3个或更少的、2个或更少的、1个或0个)氨基酸缺失的第二氨基酸序列。例如，本文提供的多肽可包括或由SEQ ID NO：3所列的序列组成，除了SEQ ID NO：3 43位的半胱氨酸残基是半胱氨酸以外的氨基酸(如丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸(praline)、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸)。
可如本文所述的制备和修饰相对于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所列的多肽序列具有一个或多个氨基酸取代的多肽。氨基酸取代可是保守或非保守的氨基酸取代。保守的氨基酸取代包括例如，以另一种酸性氨基酸残基取代酸性氨基酸残基(如天冬氨酸或谷氨酸)，以另一种碱性氨基酸残基取代碱性氨基酸残基(如赖氨酸、精氨酸或组氨酸)，以另一种疏水氨基酸残基取代疏水氨基酸残基(如以异亮氨酸取代亮氨酸，以缬氨酸取代甲硫氨酸，或以缬氨酸取代丙氨酸)，以另一种亲水氨基酸残基取代亲水氨基酸残基(如丝氨酸、甘氨酸或苏氨酸)。
保守的氨基酸取代也包括将具有特定类型侧链的氨基酸残基取代为具有类似类型侧链的另一氨基酸残基。例如，保守的氨基酸取代包括以另一具有脂肪族侧链的氨基酸残基取代具有脂肪族侧链的氨基酸残基(如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)，以另一具有脂肪族-羟基侧链的氨基酸残基取代具有脂肪族-羟基则链的氨基酸残基(如丝氨酸或苏氨酸)，以另一具有包含-酰胺侧链的氨基酸残基取代具有包含-酰胺侧链的氨基酸残基(如天冬酰胺或谷氨酰胺)，以另一具有芳香侧链的氨基酸残基取代具有芳香侧链的氨基酸残基(如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸)，以另一具有碱性侧链的氨基酸残基取代具有碱性侧链的氨基酸残基(如赖氨酸、精氨酸或组氨酸)，以另一具有含硫侧链的氨基酸残基取代具有含硫侧链的氨基酸残基(如半胱氨酸或甲硫氨酸)。
本文提供的多肽可具有任何长度。例如，本文提供的多肽的长度可为25至75(如30至70、32至60、32至57、32至50、32至45、35至43或38至43)氨基酸残基。应理解，长度为25或75氨基酸残基的多肽是长度为25至75氨基酸残基的多肽。
在一些例子中，本文提供的多肽长度可为37至47氨基酸残基并可包括如下氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：1所列的或(b)与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸添加、缺失、取代或其组合。这种多肽的例子包括但不限于ASBNP.1多肽。在一些例子中，本文提供的多肽长度可为45至65氨基酸残基并可包括：(a)是SEQ ID NO：1所列的或与SEQ ID NO：1所列的序列比对具有5个或更少的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列和(b)是SEQ ID NO：2所列的或与SEQ ID NO：2所列的序列比对具有(i)5个或更少的氨基酸添加、取代或其组合，只要所述添加或取代不造成半胱氨酸残基的存在或(ii)15个或更少的氨基酸缺失的第二氨基酸序列。这种多肽的例子包括但不限于ASBNP.2多肽。
在一些例子中，本文提供的多肽可为大致纯的多肽。此处所用于多肽的术语″大致纯的″指该多肽大致没有天然伴随的其它多肽、脂质、糖类和核酸。因此，大致纯的多肽是从其天然环境移出的任何多肽并是至少60％纯的或为任何化学合成的多肽。大致纯的多肽可为至少约百分之60、65、70、75、80、85、90、95或99纯的。通常，大致纯的多肽可在非还原性聚丙烯酰胺凝胶上产生单独的主条带。
在一些实施方式，本文提供的多肽可不具有刺激人类脐带血管内皮细胞(HUVEC)产生cGMP的能力。可使用例如BIOTRACK cGMP酶免疫检测试剂盒(AmershamPharmacia Biotech)检测胞内cGMP产生。在其它实施方式，本文提供的多肽可不具有血管活性。可通过确定血管(如器官槽中的颈动脉)对多肽的响应度而评估血管活性。
本文提供的多肽可通过表达编码该多肽的重组核酸或化学合成而获得。例如可使用应用编码本文提供的多肽的表达载体的标准重组技术。然后所得的多肽可使用例如亲合色谱技术和HPLC来纯化。纯化的程度可由任何合适方法测量，包括但不限于：柱色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法。本文提供的多肽可被设计或工程化以包含允许多肽纯化(如被捕获到亲合基质上)的标签序列。例如，诸如c-myc、血凝素、多组氨酸或FlagTM标签(Kodak)的标签可用于帮助多肽纯化。这种标签可插入在多肽内任何位置，包括羧基端或氨基端。可使用的其它融合物包括帮助检测多肽的酶，诸如碱性磷酸酶。
本文提供的多肽可产生为包含两个区，即包括成熟利尿钠多肽(如BNP、DNP、ANP或CNP)的N-末端和环结构的第一区和包括ASBNP的C-末端部分的突变或截短形式的第二区。BNP、DNP、ANP或CNP的N-末端和环结构在别处阐述。见于如美国专利中请No.10/561,014。
通过与药物上可接受非毒性赋形剂或载体混合，本文提供的多肽可配制为药物组合物。这种组合物可以有效治疗例如心脏、肝脏、肾脏或其它的钠滞留(sodiumretaining)疾病的量施用于需要其的受治疗者。例如这种组合物可施用于患有肾功能障碍的受治疗者。肾功能障碍可包括但不限于急性肾衰竭、肾小球肾炎、慢性肾衰竭、氮质血症、尿毒症、免疫肾病、急性肾炎综合征、急进性肾炎综合征、肾病综合征、贝格尔氏病、慢性肾炎/蛋白尿综合征、肾小管间质(tubulointerstital)病、肾毒性失调、肾梗死、动脉粥样硬化栓塞性肾病(atheroembolic renaldisease)、肾皮质坏死、恶性肾血管硬化、肾静脉血栓形成、肾小管性酸中毒、肾性糖尿、肾性尿崩症、巴特氏综合征、李德尔氏综合征、多囊肾病、间质性肾炎、急性溶血尿毒症综合征、肾髓质囊性病、髓质海绵肾、遗传性肾炎和指甲髌骨综合征。
本文提供的组合物也可施用于患有心功能障碍的受治疗者。心功能障碍可包括但不限于CHF、扩张性充血性心肌病、肥厚性心肌病、限制性心肌病、二尖瓣病、主动脉瓣疾病、三尖瓣病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、肺动脉高压、高动脉压、肾血管性高血压、动脉硬化、动脉粥样硬化和心脏肿瘤。
本文提供的组合物也可施用于患有炎性疾病的受治疗者。炎性疾病可包括但不限于心肌炎、哮喘、慢性炎症、自身免疫糖尿病、肿瘤血管发生、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它关节炎病、败血病、败血症性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性败血病、中毒性休克综合征、哮喘、成人呼吸窘迫综合征、中风、再灌注损伤、CNS损伤如神经创伤和缺血、银屑病再狭窄、脑型疟、慢性肺炎病、硅肺病、肺肉瘤病、骨吸收病如骨质疏松症、移植物抗宿主反应、克隆氏病、包括炎性肠病(IBD)的溃疡性结肠炎、和胃灼热(pyresis)。
药物组合物可制备用于肠胃外施用，尤其是以水性生理缓冲溶液中液态溶液或悬浮液的形式；用于口服施用，尤其是以片剂或胶囊的形式；用于鼻内施用，尤其是以粉末、鼻滴剂或气溶胶的形式。用于其它施用途径的组合物可使用标准方法如所期望的制备。
用于肠胃外施用的制剂可包含作为普通赋形剂的无菌水或盐水、聚烷撑二醇如聚乙二醇、植物来源的油、氢化萘及类似物。尤其是，生物相容的、生物可降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物、或聚氧乙烯(polyoxethylene)-聚氧丙烯共聚物是用于控制多肽体内释放的赋形剂的例子。其它适合的肠胃外递送系统包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入的输注系统和脂质体。如果期望，用于吸入施用的制剂可包含赋形剂如乳糖。吸入制剂可为水性溶液，包含例如聚氧乙烯-9-月桂醚、甘胆酸盐、脱氧胆酸盐，或该制剂可为用于以鼻滴剂形式施用的油性溶液。如果期望，化合物可配制为鼻内施用的凝胶剂。用于肠胃外施用的制剂也可包括用于含服施用的甘胆酸盐。
对于口服施用，片剂或胶囊可以常规方法与药物上可接受赋形剂一起配制，诸如粘合剂(如预胶凝化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙甲基纤维素)；填充剂(如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(如硬酯酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(如土豆淀粉或淀粉乙醇酸钠)；或湿润剂(如十二烷基硫酸钠)。片剂可以本领域已知方法包衣。用于口服施用的制剂(preparation)也可配制为获得化合物的受控释放。
鼻制剂可呈现液态形式或为干燥产品。雾化的水性悬浮剂或溶液剂可包括载体或赋形剂以调节pH和/或张度。
本文所述的多肽还可配制为用于局部递送。本文提供的多肽的局部施用和/或递送可由已知方法实现，如离子电渗疗法或脂质体凝胶(lipogel)。
本文所述的组合物(如包括本文提供的多肽)可另外地包括其它活性成分。
可在施用本文所述的多肽(如配制为药物组合物)于受治疗者(如患有肾功能障碍或心功能障碍或炎性疾病的受治疗者)之前、过程中和/或之后监控各种临床参数。例如，可监控生命体征、电解质、血清肌酐、胱抑素、尿BNP水平、血浆BNP水平、排尿量、施用多肽的血浆水平、施用多肽的尿水平或其任何组合。在一些例子中，可监控血浆肾素活性、肾小球滤过率、尿cGMP排泄、血浆cGMP水平、尿ANP排泄、尿BNP排泄、心排血量、系统血管阻力、醛固酮水平或其任何组合。任何合适方法可用于监控临床参数，包括但不限于本文所述的方法。
监控临床参数可使得临床医生能确定所施用的多肽是否有效，例如是否降低了心脏功能障碍或肾功能障碍或炎性疾病的症状严重度。此外，在施用本文提供的多肽之前、过程中和/或之后监控临床参数可指示多肽的剂量是否该增加或减少，多肽的施用是否该继续还是中断，或多肽是否应再次施用。监控临床参数还可指示受治疗者疾病的严重度，这反过来又可对何时该施用本文提供的多肽以及以何剂量提供指导。
编码多肽的核酸
本文还提供了编码本文提供的一个或多个多肽的分离的核酸。此处所用的术语″分离的″对于核酸是指不与其所衍生自的生物体的天然存在的基因组中紧密相邻的两序列(一在5’端一在3’端)紧密相邻的天然存在的核酸。例如，分离的核酸可为但不限于任何长度的重组DNA分子，只要在天然存在的基因组中通常见于该重组DNA分子紧密侧翼的核酸序列之一被移除或不存在。因此分离的核酸包括但不限于独立于其它序列作为单独分子存在的重组DNA(如由PCR或限制性核酸内切酶处理产生的cDNA或基因组DNA片段)以及并入载体、自主复制质粒、病毒(如逆转录病毒、腺病毒或疱疹病毒)或并入原核生物或真核生物基因组DNA的重组DNA。此外，分离的核酸可包括作为杂合体或融合核酸序列部分的重组DNA分子。
此处所用的术语″分离的″对于核酸还包括任何非-天然存在核酸，因为非-天然存在核酸序列在自然不存在，不具有在天然存在基因组中紧密相邻的序列。例如，非天然存在核酸如工程化核酸被认为是分离的核酸。工程化核酸(如编码包括SEQID NO：1所列的氨基酸序列或由SEQ ID NO：1所列的氨基酸序列组成的多肽的核酸)可使用常用分子克隆或化学核酸合成技术制造。分离的非-天然存在核酸可独立于其它序列，或并入载体、自主复制质粒、病毒(如逆转录病毒、腺病毒或疱疹病毒)或并入原核生物或真核生物基因组DNA。此外，非-天然存在核酸可包括作为杂合体或融合核酸序列一部分的核酸分子。在例如cDNA文库或基因组文库或包含基因组DNA限制性消化片段的凝胶片中存在于数百至数百万其它核酸中的核酸不被认为是分离的核酸。
此处所用的术语″核酸″是指RNA和DNA，包括mRNA、cDNA、基因组DNA、合成的(如化学合成的)DNA和核酸类似物。核酸可为双链或单链的，为单链时可为有义链或反义链。此外核酸可为环状或线性的。核酸类似物可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架修饰以改进例如核酸的稳定性、杂交或溶解度。在碱基部分的修饰包括脱氧尿苷修饰脱氧胸苷，和5-甲基-2’-脱氧胞苷和5-溴-2’-脱氧胞苷修饰脱氧胞苷。糖部分的修饰可包括核糖糖2’羟基的修饰以形成2’-O-甲基或2’-O-烯丙基糖。脱氧核糖磷酸骨架可被修饰以产生吗啉代核酸，其中每个碱基部分连接至6-元吗啉代环，或产生肽核酸，其中脱氧磷酸骨架被假肽骨架代替并保留四个碱基。见于例如Summerton和Weller Antisense Nucleic AcidDrug Dev.，7：187-195(1997)；和Hyrup等.Bioorgan.Med.Chem，4：5-23(1996)。此外，脱氧磷酸骨架可被例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯骨架、亚磷酰胺(phosphoroamidite)或烷基磷酸三酯骨架代替。
本文提供的核酸可包括SEQ ID NO：5或6所列的序列或由SEQ ID NO：5或6所列的序列组成。
通常，本文提供的分离的核酸长度为至少10核肾酸(如长度为10、15、20、25、30、35、40、50、75、100、200、300、350、400、或更多核苷酸)。小于全长的核酸分子可为有用的，例如为珍断目的作为引物或探针。分离的核酸分子可通过标准技术产生，包括但不限于普通分子克隆和化学核酸合成技术。例如可使用聚合酶链式反应(PCR)技术。PCR是指其中酶促扩增靶核酸的方案或技术。从目标区域各端或超出的序列信息通常用于设计寡核苷酸引物，该引物序列与待扩增的模板相对链相同。PCR可用于从DNA和RNA扩增特定序列，包括总基因组DNA或总细胞RNA的序列。引物长度通常为15至50核苷酸，但长度可从10核苷酸至数百核苷酸变化。例如，引物长度可为12、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40或45核苷酸。引物可以常规方法从限制性消化片段纯化或可化学合成。为了扩增的效率最大，引物通常为单链，但引物可为双链的。双链引物在用于扩增前首先变性(如用热处理)以分离各链。普通PCR技术描述于例如PCR Primer：A Laboratory Manual(PCR引物：实验室手册)，Dieffenbach和Dveksler编辑，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1995。当使用RNA为模板来源时，可使用逆转录酶来合成互补DNA(cDNA)链。如别处描述的，连接酶链式反应、链置换扩增、自主序列复制或基于核酸序列的扩增也可用于获得分离的核酸(Lewis，Genetic Engineering News，12(9)：1(1992)；Guatelli等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：1874-1878(1990)；和Weiss，Science，254：1292(1991))。
分离的核酸还可化学合成，作为单独核酸分子(如应用亚磷酰胺技术以3’至5’方向使用自动DNA合成)或作为一系列寡核苷酸。例如，一对或多对长寡核苷酸(如＞100核苷酸)可合成为包含期望序列，每一对包含短的互补性区段(如约15核苷酸)如此当寡核苷酸对退火时形成双链体。DNA聚合酶用于延伸寡核苷酸，形成每寡核苷酸对的单、双链核酸分子，随后其可被连接入载体。
分离的核酸也可由诱变获得。例如，编码具有SEQ ID NO：1、2或3所列序列的多肽的核酸序列可使用标准技术突变，例如，由PCR的寡核苷酸定向诱变和/或位点定向诱变。见于Short Protocols in Molecular Biology(分子生物学简要方案)，第8章，Green Publishing Associates和John Wiley&Sons，Ausubel等编辑，1992。这种突变包括添加、缺失、取代和其组合。
载体和宿主细胞
本文还提供了包含本文提供的核酸的载体。此处所用的″载体″是复制子，如质粒、噬菌体或粘粒，另一DNA区段可插入其中以促使所插入区段的复制。载体可为表达载体。″表达载体″可为包括一个或多个表达控制序列的载体，″表达控制序列″是控制和调节另一DNA序列转录和/或翻译的DNA序列。
在本文提供的表达载体中，核酸可可操作地连接于一个或多个表达控制序列。此处所用的″可操作地连接″表示并入遗传构建体从而表达控制序列有效地控制目标编码序列的表达。表达控制序列的例子包括启动子、增强子和转录终止区。启动子是由DNA分子区域组成的表达控制序列，通常在转录起始点(通常靠近RNA聚合酶II的起始位点)上游的100核苷酸内。为了使编码序列处于启动子控制下，将多肽的翻译阅读框的翻译起始位点置于启动子下游1至约50核苷酸是必须的。增强子提供时间、位置和水平的表达特异性。不同于启动子，增强子当位于与转录位点不同距离时也起作用。增强子也可位于转录起始位点下游。编码序列″可操作地连接″细胞中的表达控制序列并″处于其控制下″，当RNA聚合酶能转录编码序列为mRNA，随后可翻译为编码序列编码的多肽。
合适的表达载体包括但不限于质粒和病毒载体，其衍生自例如细菌噬菌体、杆状病毒、烟草花叶病毒、疱疹病毒、细胞巨化病毒、逆转录病毒、痘病毒类、腺病毒和腺相关病毒。多种载体和表达系统可从如下公司商业获得：Novagen(Madison，WI)、Clonetech(Palo Alto，CA)、Stratagene(La Jolla，CA)和Invitrogen/LifeTechnologies(Carlsbad，CA)。
表达载体可包括设计为促进随后操作所表达的核酸序列(如纯化或定位)的标签序列。如绿色荧光蛋白(GFP)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、多组氨酸、c-myc、血凝素或FlagTM标签(Kodak，New Haven，CT)序列等标签序列通常显示为与编码多肽的融合物。这种标签可插入在多肽的任何地方，包括羧基端或氨基端。
本文还提供了包含本文提供的核酸分子和/或核酸载体的宿主细胞。术语″宿主细胞″意为包括可引入核酸分子或载体的原核细胞和真核细胞。任何方法可用于引入核酸到细胞。例如，磷酸钙沉淀、电穿孔、热激、脂质转染法、微注射和病毒介导的核酸转移可用于引入核酸到细胞。此外，裸DNA可如别处描述的直接体内递送到细胞(美国专利No.5,580,859和5,589,466)。
检测多肽
本文提供了检测本文提供的多肽的方法和材料。这种方法和材料可用于监控接受多肽作为治疗剂的哺乳动物的多肽水平。本文提供的多肽(如ASBNP.1和ASBNP.2)例如可使用一个或多个抗体免疫地检测。此处所用的术语″抗体″包括能结合于本文提供的多肽的表位决定子的完整分子和其片段。术语″表位″是指抗原上结合抗体互补位的抗原决定子。表位决定子通常由化学活性的表面分子分型(grouping)组成，如氨基酸或糖侧链，且通常具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。表位通常具有至少5个连续氨基酸(连续表位)，或可选地为限定特定结构的一组非连续氨基酸(如构象表位)。术语″抗体″包括多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体或嵌合抗体、单链Fv抗体片段、Fab片段和F(ab)2片段。多克隆抗体是包含在免疫动物血清中抗体分子的异质群体。单克隆抗体是针对抗原的特定表位的抗体的同质群体。
对本文提供的多肽(如ASBNP.1和ASBNP.2)具有特异性结合亲和性的抗体片段可由已知技术产生。例如，F(ab’)2片段可由抗体分子的胃蛋白酶消化而产生；Fab片段可由还原F(ab’)2片段的二硫键而产生。或者可构建Fab表达文库。见于例如，Huse等，Science，246：1275(1989)。产生抗体或其片段后，由标准免疫检测方法对其进行测试以识别本文提供的多肽，所述标准免疫检测方法包括ELISA技术、放射免疫测定和蛋白质印迹法。见于Short Protocols in Molecular Biology(分子生物学简要方案)，第11章，Green Publishing Associates和John Wiley&Sons，Ausubel，F.M等编辑，1992。
在免疫测定中，对本文提供的多肽具有特异性结合亲合性的抗体或结合这种抗体的第二抗体可直接或间接地被标记。合适的标记包括但不限于放射性核素(如125I、131I、35S、3H、32P、33P或14C)、荧光部分(如荧光素、FITC、PerCP、若丹明或PE)、发光部分(如Quantum Dot Corporation，Palo Alto，CA供应的QdotTM纳米微粒)、吸收限定波长的光的化合物、或酶(如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶)。通过与生物素轭合可间接标记抗体，随后用标记有上述分子的抗生物素蛋白或链霉亲和素检测。检测或定量标记的方法取决于标记的性质并是本领域已知的。检测器的例子包括但不限于X射线胶片、放射性计数器、闪烁计数器、分光光度计、比色计、荧光计、发光计和光密度计。本领域技术人员熟悉的这些方法(包括″多层″测定)的组合可用于增强测定的敏感度。
用于检测本文提供的多肽的免疫测定可以多种已知格式进行，包括三明治测定、竞争测定(竞争RIA)或桥免疫测定(bridge immunoassay)。见于例如，美国专利No.5,296,347；4,233,402；4,098,876和4,034,074。检测本文提供的多肽的方法通常包括将生物样品与结合本文提供的多肽的抗体接触，并检测多肽与抗体的结合。例如，对本文提供的多肽具有特异性结合亲合性的抗体可由本领域已知多种方法的任一种固定于固相基质上，随后接触生物样品。多肽对固相基质上抗体的结合可通过利用表面等离子体共振现象而检测，该现象导致结合后表面等离子体共振强度变化，这可被合适仪器如Biacore装置(Biacore International AB，Rapsgatan，Sweden)定性或定量地检测。或者，抗体被如上所述地标记和检测。使用已知量的本文提供的多肽可产生标准曲线以帮助定量多肽水平。
在其它实施方式，其中捕获抗体固定在固相基质上的″三明治″测定用于检测本文提供的多肽的存在、不存在或水平。固相基质可与生物样品接触以使样品中任何目标多肽可结合固定抗体。结合于抗体的多肽的存在、不存在或水平可使用对多肽具有特异性结合亲合性的″检测″抗体确定。在一些实施方式，可使用对BNP和本文提供的多肽具有结合亲合性的捕获抗体。在该实施方式，可使用对本文提供的特定多肽具有特异性结合亲合性的检测抗体。应理解，在三明治测定中，捕获抗体不应与检测抗体结合相同表位(或在多克隆抗体的情形是一定范围的表位)。因此，如果单克隆抗体用作捕获抗体，检测抗体可为另一单克隆抗体，其结合的表位与捕获单克隆抗体结合的表位在物理上完全分开或仅与它部分重叠，或为多克隆抗体，其结合的表位不同于捕获单克隆抗体结合的表位或是捕获单克隆抗体结合的表位之外的表位。如果多克隆抗体用作捕获抗体，检测抗体可为单克隆抗体，其结合的表位与捕获多克隆抗体结合的任一表位在物理上完全分开或与它部分重叠，或为多克隆抗体，其结合的表位不同于捕获多克隆抗体结合的表位或是捕获多克隆抗体结合的表位之外的表位。三明治测定可以三明治ELISA测定、三明治蛋白质印迹法测定或三明治免疫磁性检测测定进行。
抗体(如捕获抗体)可结合的合适的固相基质包括但不限于，微孔滴定板、试管、膜如尼龙或硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)、和珠或颗粒(如琼脂糖、纤维素、玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、磁性或能磁化的珠或颗粒)。当使用自动免疫测定系统时，磁性或能磁化的颗粒尤其有用。
对本文提供的多肽具有特异性结合亲合性的抗体可由标准方法产生。通常，多肽可如上所述地重组产生，或可由生物样品(如异源表达系统)纯化，并用于免疫宿主动物，包括兔、鸡、小鼠、豚鼠或大鼠。例如长度为至少6氨基酸的具有SEQ IDNO：1或2所列的氨基酸序列的多肽或其片段可用于免疫动物。各种佐剂可用于增加取决于宿主物种的免疫响应，并包括弗氏佐剂(完全和不完全的)、矿物胶体(mineral gel)如氢氧化铝、表面活性物质如溶血卵磷脂、复合多元醇(pluronicpolyol)、聚阴离子、肽类、油乳胶、钥孔戚血蓝素和二硝基苯酚。单克隆抗体可使用本文提供的多肽和标准杂交瘤技术制备。尤其是，单克隆抗体可由任何提供了生产抗体分子的技术获得，诸如描述于Kohler等，Nature，256：495(1975)的持续培养的细胞系、人类B-细胞杂交瘤技术(Kosbor等，Immunology Today，4：72(1983)；Cole等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80：2026(1983))和EBV-杂交瘤技术(Cole等，″Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(单克隆抗体和癌症治疗)，″Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96(1983))。这种抗体可为任何免疫球蛋白类，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD及其任何亚类。产生单克隆抗体的杂交瘤可在体外和体内培养。
用于检测本文提供的多肽的可选技术包括质谱-分光光度技术，如电喷射离子化(ESI)和基质辅助激光解吸电离(MALDI)。见于例如，Gevaert等，Electrophoresis，22(9)：1645-51(2001)；Chaurand等，J.Am.Soc.MassSpectrom.，10(2)：91-103(1999)。用于这种应用的质谱仪可从AppliedBiosystems(Foster City，CA)；Bruker Daltronics(Billerica，MA)和AmershamPharmacia(Sunnyvale，CA)获得。
本发明将由以下实施例进一步阐述，这不限制由权利要求书所描述的本发明范围。
实施例
实施例1-ASBNP.1多肽的生物效应
设计并合成ASBNP的截短形式，其在半胱氨酸前终止并包含13氨基酸的C-末端尾。该多肽称为ASBNP.1多肽(图1)。静脉内ABNP.1输注的生物效应在正常犬中检测。简要地说，将6只正常犬输注2、10和100pmol的ASBNP.1多肽制剂，即每只犬接受2、10和100pmol的ASBNP.1多肽制剂的连续输注。尿流量、尿钠排泄、远端分支肾小管钠重吸收、近端肾小管分支钠重吸收、平均动脉血压、血浆cGMP水平、肾小球滤过率、肾血流量和血浆肾素水平如别处所述的测量(Chen等，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.，288：R1093-R1097(2005)和Haber等，J.Clin.Endocrinol.Metab.，29：1349-1355(2005))。系统施用ASBNP.1多肽造成利尿和利尿钠效应(图2和3)。ASBNP.1多肽的效应针对远端肾小管(图4和5)。血浆cGMP在超高剂量升高。在两个高剂量有肾素降低的趋势(图6和7)。系统施用ASBNP.1多肽对肾小球滤过率、肾血流量或平均动脉血压没有影响(图8-10)。
这些结果证明ASBNP.1多肽具有明显的肾效应且不具备影响系统血压的能力。
进行如下试验以比较BNP、ASBNP和ASBNP.1多肽的活性。简要地说，BNP、ASBNP和ASBNP.1的合成形式施用于HUVEC和HASMC，并确定cGMP水平。在这些细胞中ASBNP具有最小效应，而ASBNP.1对cGMP无效应。这些结果证明与BNP相比，ASBNP和ASBNP.1当施用于预先收缩的兔动脉时无效应(图13)。
实施例2-ASBNP.1多肽在患有CHF的哺乳动物中的生物效应
静脉内ABNP.1输注的生物效应在患有充血性心力衰竭(CHF)的起搏犬模型中检测。简要地说，10只犬经受可编程的心脏起搏器(Medtronic，Minneapolis，MN)手术植入。手术后恢复后，这些动物接受11天的快速心室起搏(240跳动/分钟)，如别处所述的(Chen等，Circulation，100：2443-2448(1999))，这可诱导明显的充血性心力衰竭CHF。将这些犬静脉内输注2、10和100pmol的ASBNP.1多肽制剂，即每只犬接受2、10和100pmol的ASBNP.1多肽制剂的连续输注。
在输注时进行急性血液动力学研究，并在基线和每次输注过程中比较各组和各犬。尿流量、尿钠排泄、远端分支肾小管钠重吸收、近端肾小管分支钠重吸收、血浆cGMP水平、肾素(rennin)水平、肾小球滤过率、肾血流量、平均动脉血压、尿cGMP排泄、尿ANP排泄、尿BNP排泄、血浆BNP水平、血浆ANP水平、肺毛细血管楔压、心排血量、系统血管阻力、血管紧张素II水平和醛固酮水平如别处所述的测量(Chen等，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.，288：R1093-R1097(2005)和Haber等，J.Clin.Endocrinol.Metab.，29：1349-1355(2005))。系统施用ASBNP.1多肽于起搏犬造成利尿效应但不造成利尿钠效应(图15和16)。在冲洗阶段肾素率增加(图20)。以高水平系统施用ASBNP.1多肽增加肾小球滤过率(图21)。以高和超高水平系统施用ASBNP.1多肽增加尿cGMP排泄(图24)。高水平还增加尿ANP排泄(图25)。超高水平还增加尿BNP排泄(图26)。心排血量从施用高水平多肽降低并在试验其余时间保持降低(图30)。系统血管阻力在高、超高、冲洗和恢复1阶段增加(图31)。醛固酮从施用低水平多肽增加并在试验其余时间继续增加(图33)。对远端肾小管分支钠重吸收、近端肾小管分支钠重吸收肾血流量、血浆cGMP、平均动脉血压、血浆BNP、血浆ANP、肺毛细血管楔压或血管紧张素II水平无效应(图17、18、19、22、23、28、29和32)。
这些结果证明ASBNP.1多肽在CHF动物中具有肾效应(包括增强的GFR)，并不具备影响系统血压的能力。
在另一试验中，将ASBNP.1多肽制剂施用于犬(100pmol/kg/分钟达90分钟)。在施用ASBNP.1多肽30、60和90分钟后测量尿钠排泄、尿流量、平均动脉血压、肾血流量、肺毛细血管楔压和心排血量。施用ASBNP.1多肽后进行30分钟的冲洗阶段。由施用生理盐水而进行冲洗。冲洗阶段后、施用ASBNP.1多肽后60分钟(Rec1)和90分钟(Rec 2)的两次恢复阶段的每次之后，再次测量尿钠排泄、尿流量、平均动脉血压、肾血流量、肺毛细血管楔压和心排血量。结果呈现于图34-39。观察到以100pmol/kg/分钟的剂量施用ASBNP.1多肽90分钟增加尿钠排泄和尿流量(图34和35)。对平均动脉血压、肾血流量或心排血量未观察到显著效应(图36、37和39)。施用ASBNP.1多肽后60分钟观察到肺毛细血管楔压的降低(图38)，PAP(肺动脉压)或RAP(右动脉压)无变化。
实施例3-ASBNP.1多肽对动物模型的生物效应
ASBNP.1输注的效应进一步在TIVCC模型(模拟肝硬化和肾病的钠滞留犬模型)中评价。具有钠滞留和腹水但没有同时发生的TIVCC模型心充盈压增加，如别处所述(Wei等，Am.J.Physiol.，273：R838-844(1997))。使用静脉内施用增加剂量直到100pmol.kg/分钟而在TIVCC模型中检测ASBNP.1多肽。
实施例4-在患有快速心室起搏造成的心力衰竭的犬中诱导放射造影-诱导的 肾病
在戊巴比妥麻醉(30mg/kg)下并经由左胸廓切开术和心包切除术，暴露心脏并将旋入式(screw-in)心外膜起搏器导线(lead)植入右心室。起搏器导线连接于皮下植入胸部的起搏器。此外，在起搏器植入时，在肾动脉上方至少6cm处将聚乙烯导管(PE 240，Clay Adams，Parsippany，New Jersey，USA)经由股动脉置入主动脉。允许犬恢复3天时间，在此期间它们接受克林霉素和Combater的预防性抗生素治疗。从手术恢复后，将起搏器设置为250跳动每分钟且以此速率起搏持续10天以产生心力衰竭。
开始起搏后11天(急性试验当天)，将放射造影剂(Mallinkrodt，Inc.，St.Louis，Missouri，USA)以7mL/kg的剂量静脉内输注10分钟的时间。如别处所述的(Margulies等，Kidney International，38(6)：1101-8(1990))，犬回到代谢笼，进行一系列的6个连续24小时尿收集，以监控放射造影诱导的肾病。
在一些试验中，在施用放射造影剂之前向起搏犬施用ASBNP.1多肽。每只犬施用2、10和100pmol的ASBNP.1多肽连续输注或以100pmol ASBNP.1多肽输注90分钟一次。在施用ASBNP.1多肽后30、60和90分钟、冲洗阶段后、和冲洗阶段后两次恢复阶段每次期间，测量尿钠排泄、尿流量、平均动脉血压、肾血流量、肺毛细血管楔压和心排血量。临床参数的测量值与在施用放射造影剂前未施用ASBNP.1的对照犬的测量值比较。
实施例5-在包括患有CHF的患者的高危患者中预防造影剂诱导的肾衰竭
对处于CIN高风险(如老年患者和有慢性肾功能不全、糖尿病和心力衰竭风险的患者)，需要造影剂来成像(如血管造影术或CT)的患者在施用造影剂之前预防性地以IV输注ASBNP多肽或ASBNP.1多肽处理。在输注之前获取生命体征并进行实验室检测以测量电解质、血清肌酐、胱抑素和BNP多肽水平。使用检测ASBNP多肽的Biosite BNP测定和/或使用特异针对ASBNP多肽的测定来获得BNP多肽水平。测量基线排尿量并评估尿电解质。在施用造影剂之前开始静脉内输注ASBNP多肽、ASBNP.1多肽或衍生物。输注期间每2小时评价生命体征和排尿量。在开始后的预先确定时间，患者接受造影剂施用。这个时间可与达到由对多肽的特异性测定所确定的多肽水平的一定浓度一致。造影剂施用后，输注持续8至24小时或直到注意到血清肌酐和/或胱抑素不从基线变化。
实施例6-治疗心肾综合征
发展恶化的肾功能、在急性失代偿的心力衰竭背景中具有利尿剂抵抗的患者预期地以IV输注ASBNP多肽或ASBNP.1多肽处理。在输注之前，获取生命体征并进行实验室检测以测量电解质、血清肌酐、胱抑素和BNP多肽水平。测量基线排尿量并评估尿电解质。开始静脉内输注ASBNP多肽、ASBNP.1多肽或其衍生物。输注期间(持续12至72小时)每2小时评价生命体征和排尿量。输注期间每天评价药物水平、BNP多肽水平、血清肌酐、胱抑素和血浆和尿电解质。
其它实施方式
应理解，尽管已结合详细的说明书阐述了本发明，但前述的说明书意为阐释而非限制本发明范围，本发明范围由所附权利要求书的范围限定。其它方面、优点和修饰都在以下权利要求书的范围内。
Figure IYZ000006113711600011
Figure IYZ000006113711600021
Figure IYZ000006113711600031

Claims (15)

1.一种大致纯的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列是SEQ ID NO：1。
2.一种分离的核酸，其编码氨基酸序列为SEQ ID NO：1的多肽。
3.一种载体，其包含编码氨基酸序列为SEQ ID NO：1的多肽的核酸。
4.一种宿主细胞，其包含编码多肽的核酸，其中所述多肽的氨基酸序列是SEQID NO：1。
5.权利要求4所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核宿主细胞。
6.一种药物组合物，其包括药物上可接受载体和多肽，其中所述多肽的氨基酸序列是SEQ ID NO：1。
7.氨基酸序列为SEQ ID NO：1的多肽的用途，用于制备增加哺乳动物或人类利尿和利尿钠活性而不降低血压的药物。
8.一种氨基酸序列为SEQ ID NO：1的多肽的用途，用于制备治疗患有肾功能障碍的哺乳动物或人类的药物，且其中所述药物是在降低所述肾功能障碍症状的严重度的情况下施用的。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述肾功能障碍包括肾衰竭。
10.根据权利要求8所述的用途，其中所述肾功能障碍包括伴有充血性心力衰竭的肾衰竭。
11.根据权利要求8所述的用途，其中所述药物以静脉内、口服或鼻内施用。
12.根据权利要求8所述的用途，其中所述药物以缓释制剂施用。
13.一种氨基酸序列为SEQ ID NO：1的多肽的用途，用于制备治疗患有心功能障碍的哺乳动物或人类的药物，所述心功能障碍是伴有肾衰竭的充血性心力衰竭，其中所述药物是在降低所述心功能障碍症状的严重度的情况下施用的。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述药物以静脉内、口服或鼻内施用。
15.根据权利要求13所述的用途，其中所述药物以缓释制剂施用。
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