TW200817431A - Diuretic and natriuretic polypeptides - Google Patents

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200817431 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本文件係有關諸如利尿多肽（diuretic polypeptide)及 利尿納多肽（natriuretic polypeptide)之方法及材料。例如， 本文件係有關具有利尿及利尿鈉活性而缺乏降血壓能力之 多肽。 【先前技術】 利尿納多肽家族成員為調節體内體液怪定之激素。心 房利尿鈉胜肽（ANP)係由心房肌細胞回應於血管内容積的 增加而分泌。一旦ANP於循環中，ANP主要係作用於腎 臟、血管組織、及腎上腺，其作用導致腎臟分泌納及水， 以及血管内容積及血壓的降低。BNP也是來自心肌細胞且 類似於ANP，於人血漿中循環。BNP為利尿鈉、腎素抑制、 血管擴張與鬆弛作用。BNP的主要循環及儲存形式為具有 環狀結構的32胺基酸多肽。BNP的生理作用係經由鳥苷 酸環化酶鏈結之受體、利尿鈉胜肽受體A (NPR-A)調節。 BNP的清除係藉NPR-C受體所促進，將BNP從循環中去 除。BNP也係藉中性内肽酶之酵素裂解來降解。C型利尿 鈉胜肽（CNP)係來自内皮細胞，且作用為血管擴張多肽及 生長抑制多肽。樹眼鏡蛇屬（Dendroaspis)利尿鈉胜肽（DNP) 之結構類似於ANP、BNP及CNP之結構，係從樹眼鏡蛇 (Dendoaspis angusticeps)或綠樹眼鏡蛇之毒液中分離。 【發明内容】 本文件係有關利尿多肽及利尿納多肽。例如，本文件 5 94073 200817431 表供具有利尿及利尿鈉活性之多肽。具有利尿活性之多肽 於醫療上可用來治療高血壓、腎臟病、肝硬化、充血性心 臟衰竭或任何體液過載狀態。具有利尿鈉活性之多肽可增 加納自體内去除，且於醫療上可用來治療高血壓、腎臟病、 : 肝硬化、充血性心臟衰竭、或任何鈉過載狀態。 • 於若干情況下，此處所提供的多肽可具有利尿活性及 利尿鈉活性，而缺乏降血壓能力。於某些情況下，此處提 i、之夕肽可於誘導可檢測之利尿效應、不會誘導可檢測之 利尿鈉效應、同時影響腎絲球體過濾率之條件下投予至患 有充血性心臟衰竭之哺乳動物。 大致上，本文件之 -，，， 徊悲稼你百關長度為j /芏4 /個 胺基酸殘基之實質上純質的多肽，其中該多肽包含下列胺 基酸序列或主要由下列胺基酸序列組成qa)列舉於seq id N〇 : 1之序列或（b)與列舉於SEQ ID NO : 1的序列比對而 具有5個或更少個胺基酸加成、删失（純齡）、取代、或 其組合之序列。該多肽之長度可為38至46個胺基酸殘基。 該多肽之長度可為39至45個胺基酸殘基。該多肽之長度 可為40至44個胺基酸殘基。該多肽之長度可為至a 個胺基酸殘基。該多肽之長度可為42個胺基酸殘基。該多 2長度可為37個胺基酸絲。該多肽之長度可為47個 胺土 s欠殘基。該胺基酸序列可為SEQ ID · 1列舉之序 列。該胺基酸序列可與列舉於SEQ ID N〇 : i之序列比對 而具有4個或更少個胺基酸加成、删失、取代 。 該胺基酸序列可與縣_ΙΓ)Ν〇:1之序列比對而具口有 94073 6 200817431 '3個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。胺基 酸序列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有2個 或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。該胺基酸 序列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有1個或 ：更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。該胺基酸序 •列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有$個或更 少個胺基酸加成。該胺基酸序列可與列舉於SEq ID N〇 : 1之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失。胺基酸序 列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有5個或更 少個胺基酸取代。該多肽之長度可為42個胺基酸殘基，且 其中’該胺基酸序列為SEQ ID NO : 1列舉之序列。該多 肽可具有利尿及利尿鈉活性。該多肽用於哺乳動物可缺乏 降血壓能力。該哺乳動物可為人或犬。 於另一個態樣中，本文件係有關長度為45至65個胺 基酸殘基之實質上純質的多肽，其中，該多肽包含下列第 一胺基酸序列或主要由下列第一胺基酸序列組成··列舉 於SEQ ID NO : 1之序列或（b)與SEQ ID NO : 1列舉之序 列比對而具有5個或更少個胺基酸删失、取代、或其組合 之序列，以及其中，該多肽包含下列第二胺基酸序列：（a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或（b)與SEQ ID NO : 2所列 舉之序列比對而具有（1) 5個或更少個胺基酸加成、取代、 或其組合，但限制條件為該加成或取代不會導致半胱胺酸 。,基的存在；或（ii) 15個或更少個胺基酸刪失之序列。該 夕肽之長度可為58至63個胺基酸殘基。該多肽之長度可 94073 7 200817431 *為60個胺基酸殘基。該多肽之長度 兮炙/ 〜仅度可為45個胺基酸殘基。

^ ^為65個胺基酸殘基。該多肽之序列可為SEQ ID 列舉之序列°該多肽可具有利尿及利尿鋼活性。 甘於另—態樣中’本文件係有關編碼長度為37至47個 :=之多肽的單離核酸，其中，該多肽包含下列1 =夂序列或主要由下列胺基酸序肋成：⑷列舉於π⑽

.1之序列或（b)與列舉於SEQIDN〇: 1之序列比對而 具有5個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合之 序列。該多肽之長度可為38至4M固胺基酸殘基該^肽 之長度可為39至45個胺基酸殘基。該多肽之長度為度可 為40至44個胺基酸殘基。該多肽之長度可為4ι至杓個 胺基酸殘基。該多肽之長度可為42個胺基酸殘基。該多肽 之長度可為37個胺基酸殘基。該多肽之長度可為47個胺 基酸殘基。該胺基酸序列可為SEQIDN〇:丨列舉之序列。 該胺基酸序列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具 有4個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。該 胺基酸序列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有 3個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。該胺 基酸序列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有2 個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。該胺基 酸序列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有1個 或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。該胺基酸 序列可與列舉於SEQ ID NO : 1之序列比對而具有5個或 更少個胺基酸加成。該胺基酸序列可與列舉於SEQ 94073 8 200817431 NO · 1之序列比對而具有5個或更少個胺基酸删失。該胺 基酸序列可與列舉於SEQ ID N〇 :】之序列比對而且有$ 個或更少個胺基酸取代。該多肽之長度可為42個胺基酸殘 基，其中，該胺基酸序列為SEQlDN〇:〗所列舉之序列。 該多狀可具有利尿及利尿納活性。該多肽用於哺乳動物可 月b缺乏降血壓能力。該哺乳動物可為人或犬。 於另一個態樣中，本文件係有關編碼長度為45至65 ㈣基酸殘基之多肽的單離核酸，其中，該多肽包含下列 弟-胺基酸序列或主要由下列第一胺基酸序列組成··⑷列 舉於SEQ id NO : 1之序列或⑻與SEQ ID N〇 ·· !列舉之 序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失、取代、或其組 s之序歹j ’以及其中’該多肽包含下列第二胺基酸序列： ⑷列舉於SEQ ID NO : 2之序列或⑻與SEq ID N〇 ·· 2所 歹J牛之序列比對而具有⑴5個或更少個胺基酸加成、取 代或〃、、且5，但限制條件為該加成或取代不會導致半胱 胺酸殘基的存在；或⑼15個或更少個胺基酸刪失之序 列。該多肽之長度可為58至63個胺基酸殘基。該多肽之 長度可為60個胺基酸殘基。該多肽之長度可為45個胺基 酸殘基。該多肽之長度可為65個胺基酸殘基。該多肽之序 列可為SEQ ID NO · 3所列舉之序列。該多肽可具有利尿 及利尿納活性。 於另悲樣中，本文件係有關於載體，該載體包含編 碼長度為37 1 47自胺基酸殘基之多肽的核酸，其中，該 夕肽包3下列胺基酸序列或主要由下列胺基酸序列組成： 94073 9 200817431 ，⑷列舉於SEQ iD N〇 …

N〇:i的序列比餅而a士 列或⑻舆列舉於SEQ . ^ ' 〃有5個或更少個胺基酸加 :殘;:r序列。該多肽之長度可為 二之長度可為39至45個胺基酸殘基。該 =之長度可為4〇至44個胺基酸殘基。該多狀 個胺基酸殘基。該多肽之長度可為42個胺基酸 可i 4Γ/Γ之長度可為37個胺基酸殘基。該多肽之長度 〇 目胺基酸殘基。該胺基酸序列可為SEQ ID NO : 1 所列舉之序列。該胺基酸序列可與SEQIDN0: !列舉之 序列比對而具有4個或更少個胺基酸加成、删失、取代、 或其組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO ·· 1列舉之序列 比對而具有3個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其 組合。該胺基酸序列可與SEQ IDn〇··工列舉之序列比對 而具有2個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。 該胺基酸序列可與SEQIDN0: !列舉之序列比對而具口有 1個或更少個胺基酸加成、删失、取代、或其組合。該胺 基酸序列可與SEQ ID NO: 1列舉之序列比對而具有^個 或更少個胺基酸加成。該胺基酸序列可與Seq id NO · 1 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失。該胺基 酸序列可與SEq ID N0 : i列舉之序列比對而具有5個^ 更少個胺基酸取代。該多肽之長度可為42個胺基酸殘基， 且其中，該胺基酸序列為SEQ ID NO : 1列舉之序列。該 多肽可具有利尿及利尿鈉活性。該多肽用於哺乳動物可能 缺乏降血壓能力。該哺乳動物可為人或犬。 94073 10 200817431 於另個悲樣中，本文件係有關於載體，該載體包含 編碼長度為45至65個胺基酸殘基之多狀的核酸，其中， 心夕肽匕3下列第一胺基酸序列或主要由下列第一胺基酸 序列組成··⑷列舉於SEQ ID N〇 ·· !之序列或⑻與_⑴ •、卩]舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失、 ,取代、或其組合之序列；以及其中，該多狀包含下列第二 胺基酸序列··⑷列舉於SEQ ID N〇 ·· 2之序列或（b)與_ ID NO · 2所列舉之序列比對而具有⑴$個或更少個胺基 酉夂加成、取代、或其組合，但限制條件為該加成或取代不 會導致半胱胺酸殘基的存在；或⑼15個或更少個胺基酸 刪失之序列。該多肽之長度可為58至63個胺基酸殘基。 該多肽之長度可為60個胺基酸殘基。該多肽之長度可為 45個胺基酉夂或基。該多肽之長度可為。個胺基酸殘基。 該多肽之序列可為SEQIDN(): 3所列舉之序列。該多狀 可具有利尿及利尿納活性。 於另恶樣中，本文件係有關於宿主細胞，該宿主细 胞包含編碼長度為37至47個胺基酸殘基之多肽的核酸、， 其中’該多肽包含下列胺基酸序列或主要由下列胺基酸序 列組成：⑷列舉於SEQ ID N〇: !之序列或⑻與列舉於 SEQ ID NO : 1之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加 成、刪失、取代、或其組合之序列。該多肽之長度可為％ 至46個胺基酸殘基。該多肽之長度可為％至45個胺基酸 殘基。該多肽之長度可為40至44個胺基酸殘基。該多肽 之長度可為41至43個胺基酸殘基。該多肽之長度可為42 94073 11 200817431 *個胺基酸殘基。該多肽之長度可為37個胺基酸殘基。該多 肽之長度可為47個胺基酸殘基。該胺基酸序列可為SEq ID NO : 1列舉之序列。該胺基酸序列可與seq iD NC) ·工 列舉之序列比對而具有4個或更少個胺基酸加成、刪失、 ' 取代、或其組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉 ,之序列比對而具有3個或更少個胺基酸加成、刪失、取代 或其組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之序列 比對而具有2個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其 組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之序列比對 而具有1個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。 該胺基酸序列可與SEQ ID N0 : i列舉之序列比對而^有 5個或更少個胺基酸加成。該胺基酸序列可與seq出 NO · 1列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失。 該胺基酸序列可與SEq IDN〇: i列舉之序列比對而具有 5個或更少個胺基酸取代。該多肽之長度可為心個胺基酸 t殘基，且其中，該胺基酸序列為SEQ ID N〇 : i列舉之序 列。該多肽可具有利尿及利尿鈉活性。該多肽用於哺乳動 物可能缺乏降血壓能力。該哺乳動物可為人或犬。該宿主 細胞可為真核宿主細胞。 於另-個態樣中，本文件係有關於宿主細胞，該宿主 細胞包含編碼長度$ 45至65個胺基酸殘基之多肽的核 ，該多肽包含下列第一胺基酸序列或主要由下列 第-胺基酸序列組成：刚舉於seqidn〇:丨之序列或 ⑻與SEQ m N0 : i列舉之序列比對而具有5個或更少個 94073 12 200817431 * 胺基酸刪失、取代、或其組合之序列；以及其中，該多肽 k 包含下列第二胺基酸序列：（a)列舉於SEQlDN〇 : 2 列或（b)與SEQIDN〇: 2所列舉之序列比對而具有⑴ 或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件為該 ，加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（ii) 15個二 ;更少個胺基酸刪失之序列。該多肽之長度可為58至63 = 胺基酸殘基。該多肽之長度可為6G個胺基酸殘基。該多狀 之長度可為45個胺基酸殘基。該多肽之長度可為Μ個 r基酸殘基。該多肽之序列可為SEQ ID NO: 3所列舉之序 列三該多肽可具有利尿及利尿納活性。該宿主細胞可為真 核宿主細胞。 ' /、 於另-態樣中，本文件係有關於醫藥組成物，該醫藥 含醫藥上可接受之載劑及長度為37個至47個胺 基I殘基之多肽，其中，該多肽包含下列胺基酸序列或主 要由下列胺基酸序列組成：_舉於SEQidnc>:】 列或（b)與列舉於SEQ ID NO :]夕皮以L: 、m的甘 即.1之序列比對而具有5個或 更乂個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合之序列。該多 ΓΛ長:7\38至46個胺基酸殘基。該多肽之長度可為 基酸殘1 基。該多狀之長度可為40至44個胺 ::之：·該夕肽之長度可為41至43個胺基酸殘基。該 夕肽之長度可為42個胺基酸殘A。 -日〜苴缺*# 暴該多肽長度可為37個 月女基酉文殘基。該多肽之長度可為 ^ 為47個胺基酸殘基。該胺基 .®夂序列可為SEQ ID NO : 1列, 與卿^…列舉之序歹:二:列❾該胺基酸序列可 士而具有4個或更少個胺 94073 13 200817431 基^加成、刪失、取代、或其組合。該胺基酸序列可與SEQ ID N〇 · 1列舉之序列比對而具有3個或更少個胺基酸加 成、刪失、取代、或其組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO: ，1列舉之序列比對而具有2個或更少個胺基酸加成、删失、 •取代、或其組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉 之序列比對而具有1個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、 或其組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之序列 對而/、有5個或更少個胺基酸加成。該胺基酸序列可與 Q ID NO · 1列舉之序列比對而具有$個或更少個胺基 酸删失。該胺基酸序列可與SEQ ID N〇 : j列舉之序列比 對而具有5個或更少個胺基酸取代。該多肽之長度可為Μ 個胺基酸殘基’且其中，該胺基酸序列為SEQ ID NO : 1 】牛序歹】該夕狀可具有利尿及利尿納活性。該多狀用 於哺乳動物可能缺乏降血壓能力。該哺乳動物可為人或犬。 於另個怨樣中’本文件係有關於醫藥組成物，該醫 藥組成物包含醫藥上可接受之載劑及長度為45至65個胺 基酸殘基之多肽，其中，該多月太包含下列第一胺基酸序列 或主要由下列第一胺基酸序列組成：（a)列舉於SEQ ID NO: 1之序列或（b)與SEQIDN〇: i列舉之序列比對而具 有5個或更少個私基酸刪失、取代、或其組合；以及其中， 該多肽包含下列第二胺基酸序列：（a)列舉於SEQmN〇 : .2之序列或（b)與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有 • (1) 5個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條 件為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（^) 94073 14 200817431 • 失之序列。該多狀之長度可為％ 該夕肽之=夂殘基。該多肽之長度可為6〇個胺基酸殘基。 =長度可為45個胺基酸殘基。該多肽之長度可為 6 5個胺基酸殘基。續吝肤 ：^产 茂丞該夕肽之序列可為SEQ ID NO: 3所列 •舉之序列。，多肽可具有利尿及利尿納活性。 f ; 〜、木7^中，本文件係有關於在哺乳動物體内提高 =及利尿納活性而不降低血M之方法。該方法包含對該 礼動物&予多肽或主要由對該哺乳動物投予多肤所組 成，其中，該多肽之長度為37個至4?個胺基酸殘基，其 中該夕肽包合下列胺基酸序列或主要由下列胺基酸序列 組成··⑷列料SEQ ID N0 ·· i之序列或⑻與列舉於卿 D NO · 1之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪 失、取代、或其組合之序列。該多肽之長度可為％至46 個胺基酸殘基。該多肽之長度可為39至45個胺基酸殘基。 該多肽之長度可為40至44個胺基酸殘基。該多肽之長度 可為41至43個胺基酸殘基。該多肽之長度可為42個胺基 酸殘基。該多肽之長度可為37個胺基酸殘基。該多肽之長 度可為47個胺基酸殘基。該胺基酸序列可為SEQH)n〇 ·· 1列舉之序列。該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之 序列比對而具有4個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、 或其組合。該胺基酸序列可與SEq ID N〇 ·· j列舉之序列 比對而具有3個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其 組合。該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之序列比對 而具有2個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。 94073 15 200817431 *該胺基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之序列比對而具有 1個或更少個胺基酸加成、删失、取代、或其組合。該胺 基酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之序列比對而具有5個 或更少個胺基酸加成。該胺基酸序列可與SEQ ID N〇 :工 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失。該胺基 酸序列可與SEQ ID NO : 1列舉之序列比對而具有5個或 更少個胺基酸取代。該多肽之長度可為42個胺基酸殘基， 且其中，該胺基酸序列為SEQ ID N〇 Η列舉之序列。該 多肽可具有利尿及利尿納活性。該多肽用於哺乳動物可能 缺乏降血壓能力。該哺乳動物可為人或犬。 於另一怨樣中，本文件係有關於在哺乳動物體内提高 利尿及利尿鈉活性而不降低血壓之方法。該方法包含對該 哺乳動物投予多肽或主要由對該哺乳動物投予多肽所組 成’其中，該多肽之長度為45個至65個胺基酸殘基，其 中，該多肽包含下列第一胺基酸序列或主要由下列第一胺 基酸序列組成：（a)列舉於SEQ ID Ν〇:丨之序列或沙)與 SEQ ID NO : 1列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基 酸刪失、取代、或其組合之序列；以及其中，該多狀包含 下列第二胺基酸序列：（a)列舉於SEQIDN〇 : 2之序列或 ⑻與SEQ ID N0 : 2戶斤列舉之序列比對而具有⑴5個或更 少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件為該加成 或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或⑼15個或更少 個胺基酸刪失之序列。該多肽之長度可為58至63個胺基 酸殘基。該多肽之長度可為6G個絲㈣基。該多狀之長 94073 16 200817431 • ^為45個胺基酸殘基。該多肽之長度可為…固胺基酸 歹欠基。該多肽之序列可為S E q j D N 〇 : 3戶斤列舉之序列。 該多肽可具有利尿及利尿鈉活性。 =另-態樣中，本文件係有關治療患有腎功能障礙之 -:1動物之方法。該方法包含下述步驟或主要由下述步驟 成.於腎功賴礙症狀嚴重程度減輕之情況下對該哺乳 ，予多肽。該哺乳動物可為人類。該腎功能障礙可包 二腎农竭。該腎功能障礙可包含伴隨有充血性心臟衰竭之 月农竭。該多肽可經靜脈、經口或經鼻内投予。該多狀可 以緩慢釋放配方投該多肽之長度可為37至Ο個胺基 酉夂殘基，且包含SEQIDN0:1列舉之胺基酸序列。該多 =之長度可為37 147個胺基酸殘基，以及包含與犯㈣ .1所列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加 刪失、取代、或其組合之胺基酸序列。該多狀之長度 45至65個胺基酸殘基，且包含⑴SEQ ID N0 : 1所 列牛之第-胺基酸序列及⑼seqidn⑴2所列舉之第二 酸序列。該多肽長度為45至65個胺基酸殘基，包含 ㈣EQ ID N〇 : !所列舉之序列比對而具有$個或更少個 =酸删失、取代、或其組合之第一胺基酸序列，以及包 ^ QlDN〇:2所列舉之第二胺基酸序列。該多肽之長 =為45至65個胺基酸殘基，其包含_①n〇 :】所 ^之弟-胺基酸序列，以及包含與seqidn〇 :2列舉 =比對而具有⑴5個或更少個胺基酸加成、取代、或 一且5 ’但限制條件為該加成或該取代不會導致半胱胺酸 94073 17 200817431 ’殘基的存在，或（ii) 15個或更少個胺基酸删失之第二胺基 酸序列。該多肽之長度可為45至65個胺基酸殘基，其包 含與SEQ mNO: !所列舉之序列比對而具有5個或更少 個胺基酸删失、取代、或其組合之第一胺基酸序列，以及 .包含與SEQIDN0:2列舉之序列比對而具有（i)5個或更 ，少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件為該加成 或該取代不會導致半胱胺酸殘基的存在，或⑼15個或更 '少個胺基酸刪失之第二胺基酸序列。症狀可包含血清肌酸 ，酐濃度異常、尿流速異常、腎素濃度異常、腎絲球之過遽 率異常、尿cGMP排泄率異常、尿撕排泄率異常、尿 匿排泄率異常、心輸出異常、系統性血管阻力里常、或 藤固嗣濃度異常。症狀可包含尿流速的減少，及盆中，該 哺乳動物之尿流速於投藥步驟後至少增加5〇%。症狀可包 =素濃度的減少’及其中，該哺乳動物之腎素濃度於投 樂步驟後至少增加50%。症狀可包含腎絲球的過遽率減 >，U，該哺乳動物之腎絲球的過濾率於投藥步驟後 至少增加50%。症狀可包含尿cGMp排泄率減少，及立中， 該哺乳動物之尿cGMP排泌率於投藥步驟後至少增加 含尿ANP排泄率減少，及其中，該哺乳動 物之尿ANP㈣率於投藥步驟後至少增加^ =驗排泄率減少，及其中，該哺乳動物之尿腑排 I 步驟後至少增加25%。症狀可包含心輸出增 該哺乳動物之心輸出於投藥步驟後至少降低 2%。症狀可包含系統性血管阻力減少，及其中，該；二 94073 18 200817431 .^系統性血管阻力於投藥步驟後至少增加·。症狀可 ，固嗣濃度減少，及其中，該哺乳動物之路固 於投藥步驟後至少增加10%。 於另-態樣中，本文件係有關治療患有發炎病症之哺 ⑯之方去。該方法包含下述步驟或主要由下述步驟組 £成··於發炎病症症狀嚴重程度減輕的情況下，對該哺乳動 物才又予夕肽冑哺乳動物可為人類。該多狀可經靜脈、經 口、或經鼻内投予。該多肽可以緩慢釋放配方投予。該多 肤之長度可$ 37 1 47個胺基酸殘基，且包含seqidn〇: 1列舉之胺基酸序列。該多肽之長度可$ 37至47個胺基 酸殘基，以及包含與SEQ ID N〇 :、戶斤列舉之序列比對而 具有5個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合之 胺基酸序列。該多肽之長度可為45至65個胺基酸殘^， 且包含（i) SEQ ID NO : 1所列舉之第一胺基酸序列及（π) SEQ ID N0: 2所列舉之第二胺基酸序列。該多狀之長度 >可為45至65個胺基酸殘基，包含與SEQ m N〇 : j所列 舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失、取代、或 其組合之第一胺基酸序列，以及包含SEq ID : 2所列 舉之第二胺基酸序列。該多肽之長度可為45至65個胺基 酸殘基’其包含SEQ ID NO: 1所列舉之第一胺基酸序列， 以及包含與SEQIDNO: 2列舉之序列比對而具有（1)5個 或更少個胺基酸加成、取代、或其組合’但限制條件為該 '加成或該取代不會導致半胱胺酸殘基的存在，或（ii) 15個 或更少個胺基酸刪失之第二胺基酸序列。該多狀之長度可 94073 19 200817431 為至65個胺基酸殘基，其包含與SEQ ID NO ·· 1所列 ΐΓί列ΐ對而具有5個或更少個胺基酸刪失、取代、或 ”、、且。之第一胺基酸序列，以及包含與SEQ m ·· 2列 舉之序列比對而具有⑴5個或更少個胺基酸加成、取代、 ·=二、、且口，但限制條件為該加成或該取代不會導致半胱胺 1 玟基的存在，或（11) 15個或更少個胺基酸刪失之第二胺 基酸序列。 、於另您樣中，本文件係有關治療患有心臟功能障礙 之哺乳動物之方法。該方法包含下述步驟或主要由下述步 驟、'且成·於心臟功能障礙症狀嚴重程度減輕之情況下，對 該喷乳動物投予多肽。該哺乳動物可為人類。心臟功能障 礙可包括心臟衰竭。心臟功能障礙可包含伴隨有腎衰竭之 充血性心臟衰竭。該多肽可經靜脈、經口或經鼻内投予。 k夕肽可以緩丨更釋放配方投予。該多肽之長度可為p至 47個胺基酸殘基，且包含seqidn〇··丨列舉之胺基酸序 列。該多肽之長度可為37至47個胺基酸殘基，以及包含 與SEQ ID NO : 1所列舉之序列比對而具有5個或更少個 胺基酸加成、刪失、取代、或其組合之胺基酸序列。該多 肽之長度可為45至65個胺基酸殘基，且包含⑴SEQ m N〇 · 1所列舉之第一胺基酸序列及⑼SEQ ID NO : 2所列 舉之第二胺基酸序列。該多肽之長度可為45至65個胺基 酸殘基，、其包含與SEQiDN〇·· ”斤列舉之序列比對而具 有5個或更少個胺基酸刪失、取代、或#組合之第一胺基 酸序列’以及包含_1〇_:2所列舉之第二胺基酸序 94073 20 200817431 列。該多肽之長度可為45至65個胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO . 1所列舉之第一胺基酸序列，以及包含與seq id NO :2列舉之序列比對而具有（i) 5個或更少個胺基酸加 成、取代、或其組合，但限制條件為該加成或該取代不會 導致半胱胺酸殘基的存在，或（ii) 15個或更少個胺基酸刪 失之第二胺基酸序列。該多肽之長度可為45至65個胺基 酸殘基，其包含與SEQ ID N0 ·· i所列舉之序列比對而具 有5個或更少個胺基酸删失、取代、或其組合之第一胺基 酸序列，以及包含與SEQn)Nc^2列舉之序列比對而具 有（1) 5個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制 條件為該加成或該取代不會導致半胱胺酸殘基的存在，或 (ii) 15個或更少個胺基酸刪失之第二胺基酸序列。 除非另行定義，否則此處使用之全部技術及科學術語 皆具有本發明相關技藝界之熟諳技藝人士一般了解的相同 ^義。雖然類似於或相當於此處所述之方法及材料可用來 貫施本發明，但適當方法及材料說明如下。全部公開宰、 211 奢案、專利案及其它此處所述之參考文獻全文皆以 奎夕-1:入本文。备有衝突時’以本說明書包括本說明 二t :、主。此外’材料、方法及實例僅供舉例說明之 %明本1，二個或多個實施例之細節列舉㈣圖及後文 圖切及二 特徵、目的及優點由詳細說明部分及 Θ式以及由申請專利範圍將更為彰顯。 【實施方式】 94073 21 200817431 胃本文件係有關利尿多肤及利尿納多狀。例如··本文件 、曰/、有利尿活陡及/或及利尿鈉活性之多肽類。於某些情 兄下胃此處提t、之多肽具有利尿及/或利尿納活十生，而缺乏 降[月匕力纟文件也提供於哺乳動物體内誘導利尿及/ •或利尿鈉活性之方法及材料。 … A處提供之多肽可有任何序列及有任何長度。例如·· 此處提供之多肽可包括SEQIDNO ·· 1、SEQidn〇 ·· 2、 或SEQ ID NO · 3所列舉之序列。於某些情況下，此處所 提供之多肽含有與SEQidn〇:卜SEQIDN〇 : 2或seq ID NO · 3所列舉之序列比對而具有〗〇個或更少個（例如·· 9個或更少個、8個或更少個、7個或更少個、6個或更少 個、5個或更少個、4個或更少個、3個或更少個、2個或 更 >、個、1個或〇個）胺基酸加成、刪失、取代或其組合之 胺基酸序列。舉例言之，此處提供之多肽可含有SEQ m NO: 1列舉之序列，但SEQIDN〇:工之第一個絲胺酸殘 基或隶末個纈胺酸殘基經删失或以不同胺基酸殘基置換。 於若干情況下’此處提供之多肽可含有（a)第一胺基酸 序列，其為列舉於SEQ ID NO : 1之序列，或與SEQ ID NO · 1所列舉之序列比對而具有1 〇個或更少個（例如9個 或更少個、8個或更少個、7個或更少個、6個或更少個、 5個或更少個、4個或更少個、3個或更少個、2個或更少 個、1個或0個）胺基酸刪失、取代、或其組合之序列；以 及（b)第二胺基酸序列，其為列舉於SEQ ID NO: 2之序列， 或與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴1 〇個或更 22 94073 200817431 _ 少個（例如9個或更少個、8個或更少個、7個或更少個、6 個或更少個、5個或更少個、4個或更少個、3個或更少個、 2個或更少個、1個或0個）胺基酸加成、取代、或其組合， 但限制條件為該加成或取代係不同導致半脱胺酸殘基的存 • 在，或（ii) 15個或更少個（例如14個或更少個、13個或更 少個、12個或更少個、11値或更少個、1 〇個或更少個、9 個或更少個、8個或更少個、7個或更少個、6個或更少個、 5個或更少個、4個或更少個、3個或更少個、2個或更少 個、1個或0個）胺基酸刪失之序列。例如，此處提供之多 肽可包含SEQ ID NO : 3所列舉之序列或由SEQ ID NO : 3 所列舉之序列所組成，惟於SEQ ID NO : 3之位置43之丰 胱胺酸殘基為半胱胺酸以外之胺基酸（例如，丙胺酸、精胺 酸、天冬醯胺類、天冬酸、麩醯胺、麩胺酸、甘胺酸、組 胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、曱硫胺酸、苯丙胺酸、 脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸）。 相對於 SEQ ID NO : 1、SEQ ID NO : 2 或 SEQ ID NO : 3所列舉之多肽序列，具有一個或多個胺基酸取代之多肽 可如此處之說明而經製備及修飾。胺基酸取代可為保守 (conservative)胺基酸取代或非保守胺基酸取代。保守胺基 酸取代包括例如：以另一個酸性胺基酸殘基取代酸性胺基 酸殘基（例如天冬酸或麩胺酸）；以另一個鹼性胺基酸殘基 ' 取代鹼性胺基酸殘基（例如離胺酸、精胺酸或組胺酸）；以 •另一個疏水胺基酸殘基取代疏水胺基酸殘基（例如以異白 胺酸取代白胺酸、以纈胺酸取代曱硫胺酸或以纈胺酸取代 23 94073 200817431 丙胺酸），及以另一個親水胺基酸殘基取代親水胺基酸殘基 (例如絲胺酸、甘胺酸或蘇胺酸）。 • 保守胺基酸取代也包括以另一個有類似類型之支鏈之 胺基酸殘基來取代有特定類型支鏈之胺基酸殘基。例如保 ‘寸胺基酸取代包括以有脂肪族支鏈之另一個胺基酸殘基取 :代有知肪私支鏈之胺基酸殘基（例如甘胺酸、丙胺酸、纈胺 酸、白胺酸、或異白胺酸）；以有脂肪族羥基支鏈之另一個 胺基酸殘基取代有脂肪族羥基支鏈之胺基酸殘基（例如絲 #胺酸或蘇胺酸）；以有含酿胺支鏈之另-個胺基酸殘基取代 有含醯胺支鏈之胺基酸殘基（例如天冬醯胺或麩醯胺）；以 有方香族支鏈之另一個胺基酸殘基取代有芳香族支鏈之胺 基酸殘基（例如苯丙胺酸、酪胺酸或色胺酸）；以有鹼性支 鏈之另一個胺基酸殘基取代有鹼性支鏈之胺基酸殘基（例 如離胺酸、精胺酸或組胺酸）；及以有含硫支鍵之另一個胺 基敲戍基取代有含硫支鏈之胺基酸殘基（例如半胱 甲硫胺酸）。 ^ 此處提供之多肽可有任—種長度。例如，此處提供之 多肽長度可為25至75(例如·· 3〇至7〇、％至6〇、32至 5其7、Μ至f、32至45、35至43或刊至43)個胺基酸殘 =須了解長度為25或75個胺基酸殘基之多肽為具有長 度為25至75個胺基酸殘基之多肽。 、 於若干情況下，此處提供之多肽長度可為37至〇 胺基酸殘基，且包含下列胺Α酿痒 们 W下歹法基酉夂序列.⑷列舉於SEQ出 〇 . 1之序列；或⑻與SEQID N〇 糾舉之序列比對 94073 24 200817431 而具有5個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合 之序列。此種多肽之實例包括，但非限於ASBNp./多肽σ。 於若干情況下，此處提供之多肽長度可為45至65個胺基 酸殘基，且可包含（a)第一胺基酸序列’其為列舉於sEQD • NO:」之序列或與SEqidn〇: μ列舉之序列比對而具 有5個或更少個胺基酸删失、取代、或其紐合之序列；以 及（b)第二胺基酸序列，其為列舉於sEq ID Ν〇:2之序列， 或為與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5個或 更少個胺基酸加成、取代、或其組合，限制條件為該加成 或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在，或（ii) 15個或更少 個胺基酸刪失之序列。此種多肽之實例包括，但非限於 ASBNP.2 多肽。 ^ 於某些情況下，此處提供之多肽可為實質上純質的多 肽。如此處使用，術語「實質上純質」為當述及多肽時表 示該多肽實質上不含其天然相連結之其它多肽、脂質、碳 水化合物及核酸。如此，實質上純質的多肽為任一種由其 自然環境中移出之多肽，且為至少60%純質或為任一種化 學合成之多肽。實質上純質的多肽可為至少約6〇、65、7〇、 75、80、85、90、95或99°/。純質。典型地，實質上純質的 多肽於非還原聚丙烯醯胺凝膠上可獲得單一主帶。 於若干具體實施例中，此處提供之多肽於人臍帶血管 内皮細胞（HUVEC)不具有刺激CGMP製造的能力。胞内 cGMP之製造可使用例如生物追蹤（bi〇TRAck) cGMP酵 素免疫分析套組（Amersham Pharmacia Biotech)分析。於其 25 94073 200817431 它具體實施例中，此處提供之 測定血管（例如器官室（organ c 的反應可評估血管活性。 夕肽可缺乏血管活性。經由 hamber)内之頸動脈）對多肽 =處提供之多肽可藉由表現編褐多肽之重組核酸或夢 化I 獲件。舉例言之，可使用編碼此處提供之多肽 之表現載體的標準重組技術。然後所得多肽可使用例如親 =層析術及HPLC純化。純化程度可#任—種適當方法測 定匕括非限於.官柱層析術、聚丙烯醯胺凝膠電泳、 或高效液相層析術。此處提供之多肽可經過設計或經建構 以含有允許純化（例如：被捕捉至親和基質上）該多肤之標 籤序列。例如諸如c-myc、血球凝集素、聚組胺酸或ρι^ΤΜ 標籤（村ϋ公司（Kodak))等標籤可用來協助多肽的純化。此 等標籤可插人多肽的任何位置’包括插人㈣端或胺基 端。其它使用的融合（fusion)包括可輔助多肽之檢測之酶， 諸如驗性填酸酶。 此處^供之多肽可製造成含有兩區，第一區包括成熟 利尿鈉多肽（例如：BNP、DNP、ANP或CNP)之N端及環 狀結構以及弟一區包括ASBNP之C端部之突變體或截頭 變體。BNP、DNP、ANP及CNP之N端及環狀結構說明 於他處。參考例如：美國專利申請案第1〇/561，〇14號。 此處提供之多肽可經由與醫藥上可接受之無毒賦形劑 或載劑混合而調配成醫藥組成物。此等組成物可以有效治 療例如心、肝、腎或其它鈉滯留病症之量來投予至有需要 的個體。舉例言之，此等組成物可投予至有腎功能障礙之 26 94073 200817431 個體。腎功能障礙包括，但非限於急性腎衰竭 腎炎、慢性腎衰竭、氮血症、尿毒症、免疫腎病；急性巧 病症候群、快速進行性腎病症料、腎病症候群、柏月 (Berger’s)病、慢性腎病/蛋白尿症候群、腎小管間質^ 腎臟中毒症、腎臟梗塞、動脈拴塞性腎病、腎皮質摘：、 惡性腎血管硬化、腎靜脈血栓、腎小管酸中毒、腎葡 '播 尿、腎原性m巴特氏（Bamef，s)症候群、李德氏 (Lidder’s)症候群、多囊性腎病、間f性腎炎、急性溶^ 尿毒症候群、髓質囊腫病、趫f海料、遺傳性腎炎 指甲-膝蓋症候群。 此處提供之組成物也可投予至有心臟功能障礙之個 心臟功能障礙包括，但非限於CHF、擴張性充血性心 肌病變、肥大性心肌病變、限制性心肌病變、僧帽瓣病、 主動脈瓣病、三尖瓣病、心絞痛、心肌梗塞、心律不整、 肺回壓、動脈高血壓、腎血管性高血壓、動脈硬化、動脈 粥狀硬化及心臟腫瘤。 大此處提供之組成物也可投予至患有發炎病症之個體。 發炎病症包括，但非限於心肌炎、氣喘、慢性發炎、自體 免疫性糖尿病、腫瘤血管新生、類風濕性關節炎、類風濕 性脊椎炎、骨關節炎、痛風性關節炎及其它關節炎病症、 =血病、敗血性休克、内毒性休克、革蘭氏陰性敗血病、 毒性休克症候群、氣喘、成人呼吸窘迫症候群、中風、再 灌流傷害、中樞神經系統（CNS)傷害諸如神經創傷及局部 缺血、乾癬、血管再狹窄、腦瘧、慢性肺發炎病、矽肺病、 94073 27 200817431 肺肉狀瘤病、骨 反應、克隆氏病 病0 質再吸收病諸如骨質疏鬆、移植物對宿主 、>貝瘍性大腸炎包括發炎性腸病（ibd)及熱 / -二、、、成物可製備成供腸道外投藥用，特別係呈 理緩衝水令液中之液體溶液劑或懸浮液劑劑型；供 藥用，特別係呈錠劑或膠囊劑劑型；或供鼻㈣藥，^ 係呈散劑、鼻用滴劑或喷霧劑劑型。供其它投藥途^用 之組成物可視需要使用標準方法製備。 _腸道外投樂用之調配物含有無菌水或食鹽水、聚伸燒 基一醇類諸如聚乙二醇、植物來源之油、氯化蔡類 賦形劑。特別’生物相容性、生物可分解之乳交醋聚合物、 乳交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯·聚氧丙料聚 =制於活㈣多肽狀_财例。其它料腸道外 輪达糸統包括乙稀乙酸乙埽酯共聚物粒子、滲透屢幫浦、 植入輸注系統及微脂粒。吸入投藥用之調配物若有所兩可 含有諸如乳糖之賦形劑。吸入調配物可為例如：含有^ 烯、9月才土基鱗、甘膽酸鹽（gIyc〇ch〇iate)及去氧膽酸鹽之 水溶液劑；或可為呈鼻用滴劑劑型投藥之油性溶液劑。若 有所而’化合物可調配成凝膠劑供鼻内施用。腸道外投藥 用之調配物也包括經頰投藥之甘膽酸鹽。 ^ /供口服投樂，錠劑或膠囊可藉習知手段使用醫藥上 ^之賦形劑製造’醫藥上可接受之賦形劑諸如黏結劑(例 預膠化玉麵粉、聚乙烯基㈣㈣或㈣基甲基纖維 素）’·填充劑（例如乳糖、微晶纖維素或碟酸朗）；潤滑劑 94073 28 200817431 .(例如硬脂酸鎂、滑石或石夕土）；崩散劑（例如馬铃箸興粉或 • 乙醇酸澱粉鈉）；或濕潤劑（例如护 ’、^ 技蓺尺P 4古本七亡 爪酉夂月才土酯鈉）。錠劑可藉 • 孜*界已知方法包衣。經口投筚田制节丨u 合物之控制釋放。 糸用製劑也可調配來提供化 可呈液體劑型或乾燥產品劑型。霧化水性懸 ::二： 劑可包括載劑或賦形劑來調整。H值及/ ,之二==多肽也可調配供局部藥品輪送。此處提供 :肽：局彻及/或局部輸送可使用已知方法例如離 子電冰或脂凝膠等方法來達成。 此處所述組成物（例如包括此處提供之多可 括其它活性成分。 於將此處所述之多肽（例如調配成為醫藥組成物）投予 f個體(例如患有腎或心功能障礙或發炎病症之個體)之 U之中及/或之後1視各種臨床參數。例如可監視生命徵 象、電解質、血清肌酸酐、半胱胺酸蛋白酶抑制素 (CyStatin)、尿卿濃度、血漿卿濃度、尿輸出、所投 予之多肽之血漿漠度、所投予之多肽之尿漠度、或其任一 種組合。於若干情況下，可監視血漿腎素活性、腎絲球體 過遽率、尿CGMP排泌、血漿cGMp漢度、尿ANp排泄、 尿BNP排泄、心輸出、系統性血管阻力、駿固闕濃度、或 其任一種組合。任一種適當方法皆可用來監視臨床參數， 包括但非限於此處所述方法。 監視臨床參數可允許臨床醫師判定所投予之多肽是否 94073 29 200817431 有效，例如判定心或腎功能障礙或發炎病症的症狀嚴重程 度是否減輕。此外，監視投予此處提供之多肽之前、之中 及/或之後之臨床參數可指示是否應增減多肽劑量，多肽的 投予是否須繼續或中止，或多肽是否應再投^。監視臨床 參數也顯示個體病症的嚴重程度，而可提供何時須投予此 處提供之多肽以及以何種劑量投予的指南。 編碼多肽之核酸 本文件也提供編碼此處提供之一種或多種多狀的單離 核酸。術語「單離」於此處用於核酸，係指天然存在之核 酸’該核酸係衍生自有機體之天然基因體，且該核酸並未 緊鄰其在該天然存在基因體中所緊鄰之兩端序列（一序列 係於5端，一序列係於3，端）。例如，單離的核酸可為（但 非限制性）具有任何長度之重組舰分子，但限制條件為 正常出現於天然基因體中重組舰分子緊鄰旁出的核酸 序列之-被去除或不存在。如此，單離的核酸包括，但非 限制於重組舰，其係以不依賴其它序列之分離分子存在 (例如藉PCR處理或核酸限制内切酶處 祕因體舰諸），·以及重組舰，其係併人載體 ^生稷製質體、病毒（例如：反轉錄病毒、腺病毒或癌療病 母）或併入原核生物或真核生物之基因體dna。此外 ::核酸可包括重組DNA分子’其構成雜交核酸 融合核酸序列之一部分。 術語「單離 然存在之核酸， 」用於此處係指核酸，其也包括任何非天 因為非天然存在之核酸序列無法在自然界 94073 30 200817431 二非夭：：有其在天然存在基因體中所緊鄰的序列。例 的㈣在之核酸諸如：經建構之核酸係被視為單離 籌之核酸(例如:編碼多肽的核酸，該多肽包 3 Q Q: 1列舉之胺基酸序列或由SEQ ID N0. ! =酸序列所組成)可使用常用分子選殖技術或化 ^亥夂5成技術製造。單離的非㈣存在之核酸可不依賴 -它序列’或可併入載體、自發性複製質體、病毒（例如： 反轉錄病毒、腺病毒或癌療病毒）或併入原核生物或真核生 物之基因體DNA。此外’非天然存在的核酸包括核酸分 子，其構成雜交核酸序列或融合核酸序列之一部分。存在 於例如CDNA基因庫或基因體基因庫或含有基因體職 限制酶身切片段（restriction digest)之凝膠切片内之數百種 或數百萬種其它核酸中之核酸不被視為單離的核酸。 如此處使用，術語「核酸」係指RNA及，包括 mRNA、cDNA、基因體DNA、合成（例如化學合成）〇ΝΑ 及核酸類似物。核酸可為雙股核酸或單股核酸，單股核酸 可為正義股（sense strand)或反義股（antisense strand)。此 外’核酸可為圓形或線形。核酸類似物可於鹼基部分、糖 部分或磷酸根主鏈經修飾來增進例如核酸之安定性、雜 交、或溶解度。於鹼基部分之修飾包括去氧尿核苷替代去 氧胸腺核苷，及5_曱基-2 ’-去氧胞核苷與5-溴_2，-去氧胞核 普替代去氧胞核苷。糖部分之修飾包括核糖之2,經基修錦 來形成2’-〇-曱基糖或2’-0-烯丙基糖。去氧核糖磷酸根主 鍵可經修飾來製造嗎啉基核酸，其中各個鹼基部分係鍵聯 94073 31 200817431 至6員嗎淋基環或胜肽核酸’其中去氧碟酸根主鏈係由假 胜肽（pseudopeptide)主鏈所置換，且保有4個鹼基。例如： 參考 Simimerton and Weller Antisense Nucleic Acid Drug

Dev。7 : 187-195 (1997);及 Hynzp et al· Bi〇〇rgan Med Chem·，4 : 5-23 (1996)。此外，去氧磷酸根主鏈可以例如 硫代鱗酸根（phosphorothioate)主鏈或二硫代磷酸根主鏈、 亞磷醯胺（phosphoramidite)或烷基磷酸三酯主鏈置換。 此處提供之核酸可包含或由SEQ ID NO : 5或6列舉 之序列所組成。 典型地，此處提供之單離的核酸長度為至少1〇個核苷 酸（例如：長度為 10、15、20、25、30、35、40、50、75、 100、200、300、350、400個或更多個核苷酸）。短於全長 之核酸分子可用作為例如診斷目的之引子或探針。單離的 核酸分子可藉標準技術包括，但非限於常用分子選殖及化 學核酸合成技術製造。例如可使用聚合酶連鎖反應（pcR) 技術。PCR係指縣核酸經過酶擴增之程序或技術。得自 f興，區域末端或超出該末端之序職訊典型係用來設計 养核普酸引子，其序㈣與欲擴增的模板的減股序列相 同。PCR可用擴增來自職及舰的特定序列，包括得 自全基因體DNA之彳列或全細胞RNA之㈣。引子長度 典型為15至5G個核苦酸，但長度可為1Q個核㈣至數百 個核苷酸。例如引子長度可為12、15、16、17、18、19、 :、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35,40 或45個核苦酸。引子可藉習知方法而由限制酶剪切而純 94073 32 200817431 化，或引子可藉化學合成。為了獲得最大擴增效率，引子 典型為單股，但引子也可為雙股。雙股引子於用於擴增之 前，首先經過變性（例如使用加熱處理）來分離各股。一般 PCR 技術係述於例如 PCR Primer: A Laboratory Manual，ed by Dieffenbach and Dveksler， Cold Spring Harbor Laboratory Press，1995。當使用RNA作為模板來源時，反 轉錄酶可用來合成互補DNA(cDNA)股。連接酶連鎖反 應、鏈替代擴增法、自主序列複製、或依賴核酸序列擴增 法也可用來獲得如它處所述之單離的核酸（Lewis，Genetic Engineering News, 12(9) · 1 (1992) ； Guatelli et al.? Proc. Natl· Acad· Sci. USA，87 : 1874-1878 (1990);及 Weiss， Science 254 : 1292 (1991)) 〇 單離的核酸也可經化學合成，合成呈單一核酸分子（例 如使用亞磷醯胺技術於3’至5’方向的自動DNA合成），或 合成為一系列寡核苷酸。例如可合成一對或多對長募核苷 酸（例如：>100個核苷酸），其含有期望之序列，各對含有 短互補節段（例如約15個核苷酸），故當寡核苷酸對鍊合之 時形成二倍體。DNA聚合酶用來延長募核苷酸，獲得每個 寡核苷酸對之單一雙股核酸分子，然後可接合入載體。 單離的核酸也可藉突變發生獲得。例如編碼具有SEQ ID NO : 1、2或3列舉之序列之多肽之核酸序列可使用標 準技術突變，標準技術例如為募核苷酸導向突變發生及/ 或透過PCR之位置導向突變發生來突變。參考Short Profocols in Molecular Biology， Chapter 8， Green 33 94073 200817431 -Publishing Associates and John Wiley & Sons, Edited by .Ausubeletal. 1992。此等突變包括加成、刪失、取代、及 其組合。 載體及宿主細胞 - 本文件也提供含有此處提供之核酸之载體。如此處使 ••用，「載體」為複製子諸如質體、嗟菌體、或黏質體，另一 DNA節段可插入其中來獲得所插入的節段的複製。載體可 為表現載體。「表現載體」為包括—個或多個表現控制序列 之載體且「表現控制序列」為控制且調節另一個序 列之轉錄及/或轉譯之DNA序列。 於此處提供之表現載體中，核酸可經操作聯結至一個 或多個表現控制序列。如此處使用，「操作聯結一:物 linked)」表示併人基因構築質體，讓表現控制序列可有效 控制感興趣之編碼序列的表現。表現控制序列之實例包括 啟動子、增強子及轉錄終止區。啟動子為由撕A分子區 :所組叙表現㈣㈣，典㈣於㈣起點（通常接近RNA 聚合酶Π的起始位置）上游的⑽個核㈣以内。欲讓編 碼序列於啟動子的控制之下，需要將多狀之轉譯讀取框之 轉譯起始位置置於啟動基因下游之i個核普酸至約5〇個核 普酸間。增強子提供時間、位置及程度的表現特異性 (SPeCffy)。不似啟動子，增強子當位在距轉錄位置的各 個距料均可作用。增強子也可位在轉錄起始位置下游。 田UNA〆聚口 _可轉錄編碼序列成時，編碼序列於 細胞中係「經操作聯結」且處於表現控制序列的「控制之 94073 34 200817431 下」，隨後可轉譯成由該編碼序列所編碼之多肽。 適當表現載體包括，但非限於衍生自例如噬菌體、桿 狀病毒、於草鑲喪病毒、癌療病毒、巨細胞病毒、反轉錄 病毒、癌病毒、腺病毒及腺相關病毒之質體及病毒載體。 • 多種載體及表現系統可於商業上獲得諸如諾瓦吉公司 (Novagen)(威斯康辛州，麥狄森；Madison，WI)、克隆内 特公司（Clonetech)(加州，保羅奥圖；Palo Alto, LA)、史 翠特吉公司（Stratagene)(加州，拉荷拉；La Jolla，LA)及印 維卓吉 / 生命技術公司（Invitrogen/Life Technologies)(加 州，卡爾斯貝；Carlsbad，LA)等公司。 表現載體包括設計來輔助所表現之核酸序列隨後之操 作（例如純化或定位）之標籤序列。標籤序列諸如綠螢光蛋 白（GFP)、麵胱甘肽S·轉移酶（GST)、聚組胺酸、c_myc、 血球凝集素、或FlagTM標籤（柯達公司，康乃狄克州，紐 哈文；Kodak，New Haven，CT)序列典型係表現呈與編碼多 肽之融合體。此等標籤可插入於多肽内部的任何位置，包 括插入羧基端或胺基端。 本文件也提供含有此處所提供之核酸分子及/或核酸 載體之宿主細胞。術語「宿主細胞」意圖包括可導入核酸 分子或載體之原核細胞或真核細胞。任何方法皆可用來將 核酸導入細胞内部。例如：填酸約沉殿、電穿孔、熱震（heat shock)、脂轉染、微注入、及病毒媒介核酸轉移可用來將 • 核酸導入細胞内部。此外，如本文它處所述，裸DNA可 於活體内直接輸送入細胞（美國專利5,580,859及 35 94073 200817431 5,589,466) 〇 檢測多肽 本文件提供檢測此處提供之多肽之方法 =3可=視接收多肽作為治療的哺乳動物體内

之夕肽浪度。此處提供之多肽（例如Α_ρ.!及媳N 可使用如-種或多種抗體藉免疫學方式檢測。如此處使 「抗體」包括可結合至此處提供之多肽之抗原決 疋^位之疋子之完好分子或其片段。術語「抗原決定部位」 係指抗體的抗體決定部位所結合的抗原上之抗原決定子。 抗原決定子通常係由分子之化學活性表面基團:、諸如胺基 酸或糖支鏈所組成’典型具有特殊三度空間結構特性二 及具有特殊電荷特性。抗原決定部位通常有至少5個鄰接 的胺基酸（連原決定部位），或料，可為界定特殊結 構之非鄰接胺基酸組（例如：構像抗原決定部位）。術語「抗 體」包括多株抗體、單株抗體、人化抗體或喪合抗體、單 鍵Fv抗體片段、Fab片段及F(ab)2片段。多株抗體為含於 免疫接種動物血清之非同源抗體分子族群。單株抗體為對 抗原之特殊抗原決定部位之同源抗體族群。 對此處提供之多肽（例如：ASBNP.1及ASBNP.2)有專 、、、。&親和力之抗體片段可藉已知技術產生。例如： I|Ub’）2片段可經由抗體分子之胃蛋白酶消化產生；片 又可、、二由還原p(ab’）2片段之雙硫橋產生。另外，可組構

Fab 表現存庫。例如：參考 Huse et al.，Science, 246 : 1275 (1989)。一旦已經製造’藉標準免疫分析法包括ELISA技 36 94073 200817431 J 術、放射性免疫分析及西方墨點法測試抗體或其片段來辨 識此處提供之多肽。參考 Short Protocols in Moleabr Biology，Chapter 11，Green Associates and John Wiley & Sons，edited by Ausubel，F.M. et al·，1992 〇 • 於免疫學分析中，對此處提供之多肽具有特異性結合 . 親和力之抗體或結合至此種抗體之二次抗體可直接或間接 加標記。適當標記包括，但非限於放射性核種（例如：1251、 1311、35S、3H、32P、33P或14〇、螢光部分（例如：螢光素、 f FITC、PerCP、若丹明（rhodamine)或PE)、冷光部分（例如： QdotTM 奈米粒子，Quantum Dot Corporation，Palo Alto, CA)提供、吸收特定波長光之化合物或酶（例如：驗性填酸 酶或辣根過氧化酶）。抗體可經由與生物素軛合間接加標 記，然後使用前述分子加標記之抗生物素或鏈黴抗生物素 (streptavidin)檢測。檢測標記或定量標記之方法係依據之 標記之本質而定，且為技藝界所已知。檢測器實例包括， 但非限於X光底片、放射性計數器、閃爍計數器、分光光 度計、比色計、螢光計、冷光計、及密度計。熟諳技藝人 士所已知之辦法之組合（包括「多層」檢定分析）可用來提 升檢定分析的敏感度。 檢測此處提供之多肽之免疫學檢定分析可以多種已知 格式進行，包括三明治檢定分析、競爭檢定分析（競爭RIA) 或架橋免疫檢定分析。例如··參考美國專利案5,296,347、 -4,233,402、4,098,876、及 4,034,074。檢測此處提供之多 肽之方法大致上包括生物樣本與結合至此處提供之多肽之 94073 37 200817431 抗體接觸以及檢測多肽與抗齡結合。例如，對此處提供 之夕肽具有特異性結合親和力之抗體可藉技藝界已知之多 種方法中之任-種方法固定^固體基質上，然後曝露於生 物樣本下。多肽於固體基質上之抗體的 面電聚之共振現象來檢測，其於結合料致表面 強度的改變，其可藉適當儀器例如：BiaCore裝置（Biac〇re International AB，Rapsgatan，Sweden)定性或定量。另外， 抗體係如前文說明標記及檢測。可使用已知數量之此處提 供之多肽產生標準曲線來辅助定量多肽含量。 ^其它具體實施例中，其中捕捉抗體固定於固體基質 上之「三明治」檢定分析用來檢測此處提供之多肽之存在、 不存在或含量。固體基質可與生物樣本接觸，樣本中任何 令人感興趣之多肽可結合至經固定之抗體。結合至抗體之 多肽的存在、不存在或含量可使用對該多肽有特異性結合 親和力之檢測」抗體來測定。於若干具體實施例中，可 使用對BNP以及此處提供之多月太具有結合親和力之捕捉 抗體。於本具體實施例中，可使用對此處所提供之特定多 肽有~異性結合親和力之檢測抗體。須了解於三明治檢定 刀析中，捕捉抗體不應結合至檢測抗體的相同抗原決定部 位（或於多株抗體情況下涉及之抗原決定位）。如此，若使 用單株抗體作為捕捉抗體，則檢測抗體可為另一種單株抗 體，該單株抗體係結合至抗原決定部位，該抗原決定部2 係與捕捉單株抗體所結合的抗原決定部位完全實體上不同 或只有部分重疊；或該檢測抗體可為多株抗體，其係結合 94073 38 200817431 至捕捉單株抗體所結合的抗原決定部位以外的或除外的抗 . 原决疋邛位。若使用多株抗體作為捕捉抗體，則檢測抗體 •可為單株抗體，該單株抗體係結合至抗原決定部位，該抗 原決定部位係與捕捉多株抗體所結合的任一抗原決定部位 •完全實體上不同或只有部分重疊；或該檢測抗體可為多株 •抗體，其係結合至捕捉多株抗體所結合的抗原決定部位以 外的或除外的抗原決定部位。三明治檢定分析可實施為三 明治ELISA檢定分析，三明治西方墨點檢定分析或三明治 ^ 免疫磁性檢測檢定分析。 抗體（例如··捕捉抗體）可結合之適當固體基質包括， 但非限於微量滴定板、管、膜如尼龍膜或硝基纖維素膜及 珠粒或粒子（例如瓊脂糖、纖維素、玻璃、聚苯乙烯、聚丙 烯醯胺、磁珠或磁粒子、或可磁化之珠粒或粒子）。磁性或 可磁化粒子於使用自動免疫檢定分析系統特別有用。 對此處提供之多肽有特異性結合親和力之抗體可透過 標準方法製造。大致上，多肽可如前文說明重組製造，或 多肽可由生物樣本（例如：非同源表現系統）純化，且用來 免疫接種宿主動物包括兔、雞、小鼠、天竺鼠或大鼠。舉 例吕之’由SEQ ID NO ·· 1或2列舉之胺基酸序列之多肽、 或至少長6個胺基酸之其片段可用來免疫接種動物。各種 可用來提高免疫反應之佐劑係依據宿主種類而定，且包括 •弗冷氏（Freund’s)佐劑（完全及不完全佐劑）、礦物凝膠諸如 .氫氧化鋁、界面活性物質諸如：脫酸卵磷脂（lysolecithin)、 普隆尼克（pluronic)多元醇類、聚陰離子類、胜肽類、油乳 94073 39 200817431 膠、鎖孔帽貝血藍質（keyhole limpet nemocyanin)及二硝基 酚。單株抗體可使用此處提供之多肽及標準融合瘤技術製 備。特別，單株抗體可藉由提供培養連續細胞株製造抗體 分子的任一種技術獲得，諸如：述於Kohler et al·，Nature， 256 : 495 (1975)、人 B 細胞融合瘤技術（Kosbor et al·， Immunology Today，4 : 72 (1983)) ; Cole et al·，Proc· Natl· Acad· Sci· USA，80 : 2026 (1983))及 EBV 融合瘤技術（Cole et al.，“Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy”，Alan R.

Liss，Inc·，pp· 77-96 (1983)) 〇此等抗體可屬於任一種免疫 球蛋白類別包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD及其任一種亞 類。製造單株抗體的融合瘤可於試管内及於活體内培養。 檢測此處提供之多肽之其它技術包括質譜術諸如電喷 灑離子化（ESI)、及基質輔助雷射脫附游離（MALDI)。例如 參考 Gevaert et al·，Electrophoresis，22(9) · 1645-51 (2001) ； Chaurand et al·，J. Am. Soc. Mass Spectrom·， 10(2) : 91-103 (1999)。可用於此項應用之質譜儀可得自 Applied Bio systems (Foster City， CA) ； Bruker

Daltronics (Billerica, MA);及 Amersham Pharmacia (Sunnyvale，CA) 〇 將於下列實施例進一步說明本發明，但並未囿限申請 專利範圍所述之發明範圍。 實施例 實施例1-ASBNP. 1多肽之生物效應 中止於半胱胺酸前方且含有13胺基酸C端尾端之 40 94073 200817431 • ASBNP截頭形式經過設計及合成。此多肽稱作為ASBNP· 1 ，多肽（第1圖）。靜脈ABNP.1融合之生物效應係於正常犬體 内試驗。簡言之，6條正常犬被輸注2、10及1 〇〇皮莫耳 ASBNP.1多肽製劑，亦即各犬接受2、10及1〇〇皮莫耳 • ASBNP· 1多肽製劑之連續輸注。如它處說明，測量尿流速、 • 尿鈉排泄速率、遠端部分腎小管鈉再吸收、近端部分腎小 管鈉再吸收、平均動脈血壓、血漿cGMP濃度、腎絲球體 過濾率、腎血流、及血漿腎素濃度（chen et al·，Am· J· Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol., 288 · R1093-1097 (2005) and Haber et al·，J· Clin· Endocrinol· Metab·，29 ·· 1349-1355 (2005))。系統性投予ASBNP.1多肽導致利尿及 利尿鈉效應（第2圖及第3圖）。ASBNP.1多肽之效應係靶 定於遠端腎小管（第4圖及第5圖）。血漿cGMP濃度於超 高劑量時升高。於兩個較高劑量時，腎素趨向降低傾向（第 6圖及第7圖）。系統性投予ASBNP.1多肽對腎絲球體過濾 率、腎血流速或平均動脈血壓無影響（第8至10圖）。 % 此等結果驗證ASBNP.1多肽有明顯的腎臟功效，而缺 乏影響系統性血壓的能力。

進行下列實驗來比較BNP、ASBNP及ASBNP.1多肽 之活性。簡言之，合成形式之BNP、ASBNP及ASBNP· 1 投予至HUVEC及HASMC，且測定cGMP濃度。ASBNP • 之功效極低，ASBNP· 1對此等細胞之cGMP無影響。此等 • 結果驗證ASBNP及ASBNP.1投予至經過預先縮窄之兔動 脈（第13圖）時，與BNP比較，其不具功效。 41 94073 200817431 ' 實施例2-ASBNP.1多肽用於患有充血性心臟衰竭（CHF)之 哺乳動物之生物功效 於患有充血性心臟衰竭（CHF)之植入心跳節律器之犬 模式試驗靜脈輸注ASBNP.1之生物效果。簡言之，1〇頭 . 犬接受手術植入可程式規劃之心跳節律器（Medtronic， .Minneapolis，MN)。於手術復原後，動物接收11天快速的 心室節律（240下/分鐘），如它處所述，誘發蓄意之充血性 心臟衰竭 CHF (Chen et al·，Circulation，100 : 2443-2448 (1999))。犬經靜脈輸注2、10及100皮莫耳ASBNP.1多肽 製劑，亦即各犬連續接受輸注2、10及100皮莫耳ASBNP.1 多肽製劑。 輸注時進行急性血液動力學研究，各組間以及各犬間 於基準線以及於各次輸注期間做比較。如它處所述測定尿 流速、尿納排泄速率、遠端部分腎小管鈉再吸收速率、近 端部分腎小管鈉再吸收速率、血漿cGMP濃度、血漿腎素 活性、腎絲球體過濾率、腎血流速、平均動脈血壓、尿cGMP 、 排泄、尿ANP排泄、尿BNP排泄、血漿BNP濃度、血漿 ANP濃度、肺微血管楔壓、心輸出、系統性血管阻力、升 壓素II濃度及搭固酮濃度（Chen et al·，Am· J· Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol., 288 · R1093-1097 (2005) and Haber et al·, J. Clin. Endocrinol. Metab·，29: 1349-1355 • (2005))。ASBNP.1多肽系統性投予至植入β跳節律器犬， • 導致利尿效應，但不會導致利尿鈉效應（第15圖及第16 圖）。整個清除期間（washout period)，腎素含量升高（第20 42 94073 200817431 • 圖）。系統性投予ASBNP.1多肽於高濃度時提高絲球體過 濾率（第21圖）。系統性投予ASBNP.1多肽於高濃度及超 高濃度時增加尿cGMP排泄（第24圖）。高濃度也增加尿 ANP排泄（第25圖）。超高濃度也提高尿BNP排泄（第26 ^ 圖）。心輸出量自投予高濃度多肽時降低，且整個其餘實驗 . 期間仍然維持降低（第30圖）。系統性血管阻力於高、超高、 清除及復原1期皆增高（第31圖）。自投予低濃度多肽時， 醛固酮增加，且整個其餘實驗期間醛固酮持續升高（第33 圖）。對遠端腎小管部分鈉再吸收、近端腎小管部分鈉再吸 收、腎血流速、血漿cGMP、平均動脈壓、血漿BNP、企 漿ANP、肺微血管楔壓或升壓素II濃度無影響（第17、18、 19、22、23、28、29 及 32 圖）° 此等結果驗證ASBNP.1多肽具有腎臟功效（包括提升 GFR)，而於CHF動物中缺乏影響系統性血壓的能力。 於另項實驗中，ASBNP.1多肽製劑投予至犬（100皮莫 耳/千克/分鐘經歷90分鐘）。投予ASBNP.1多肽30、60及 90分鐘後，測定尿鈉排泄、尿流速、平均動脈血壓、腎血 流速、肺微血管楔壓及心輸出。投予ASBNP.1多肽接著為 30分鐘的清除期。經由投予生理食鹽水來進行清除。於清 除期後，以及投予ASBNP.1多肽後之60分鐘（Rec 1)及90 分鐘（Rec 2)的兩個復原期後再度測量尿納排泄、尿流速、 • 平均動脈血壓、腎血流速、肺微血管楔壓及心輸出。結果 - 示於第34至39圖。觀察得到投予劑量100皮莫耳/千克/ 分鐘之ASBNP· 1多肽經歷90分鐘增加尿鈉排泄以及增加 43 94073 200817431 尿流速（第34圖及第35圖）。對平均動脈血壓、腎血流速 或心輸出未觀察得顯著影響（第36、37及39圖）。投予 ASBNP.1多肽後60分鐘，觀察得到肺微血管楔壓的降低 (第38圖），PAP(肺動脈壓）或RAP(右動脈壓）不變。 實施例3-爽用動物模式，ASBNP. 1多肽之生物效應 ASBNP.1輸注之效應係於TIVCC模式（模擬肝硬化及 腎炎之鈉滯留犬模式）進一步評估。如它處說明，鈉滞留及 腹水之TIVCC模式並未同時增加心臟填充壓力（Wei et al·， Am· J· Physiol·，273 : R838-844 (1997))。使用靜脈投予高 達1〇〇皮莫耳·千克/分鐘之增加劑量的ASBNP.1多肽於 TIVCC模式試驗。 實施例4-於因快速心室節律而造成有心衰竭犬^ 射性對比誘發的腎病變 於戊巴比妥（pentobarbital)麻醉（30毫克/千克）下，透過 左胸切開術及心包膜切除術，讓心臟曝露出，旋入 、、包膜 心跳節律器引線植入右心室内部。心跳節律器弓丨線接到 下植入胸部的心跳節律器。此外，於心跳節'律器植人日$ 經由股動脈將聚乙烯導管（PE 240，Clav Λ ’ y Adams

Parslppomy，NewJersey，USA)放置入主動脈於腎動耻上 5 至少6厘米。讓犬經3曰時間恢復，於該恢復期間接&方 林達黴素（clindamycin)及康百特（Combater)預防性於又克 治療。由手術復原後，心跳節律器被規劃為每分鐘25〇 ^ 持續此種節律10曰造成心衰竭。 下’

開始節律後，急性實驗11日當日，放射柯I 從斜比劑 44 94073 200817431 ' Vascoray，Mallinkrodt，lnc·，st. Louis，Missouri，USA)以 7 .毫升/千克劑量經1 〇分鐘時間靜脈輸注。犬送回代謝籠内 .進行一系列6次連續24小時尿液收集，如它處所述用來監 視放射性對比劑誘發的腎病變（Margulies et al·，Kidney ^ International，38(6) : ll〇l_8 (1990))。 : 於若干實驗中，於投予放射性對比劑之前，ASBNP. 1 多肽投予至植入心跳節律器犬。各犬連續輸注2、10及100 皮莫耳的ASBNR1多肽，或進行一次90分鐘輸注100皮 f 莫耳的ASBNP.1多肽。於投予ASBNP.1多肽後，於經過 清除期之後、以及於清除期後的兩次復原期各別之後30、 60及90分鐘測定尿鈉排泄、尿流速、平均動脈血壓、腎 血流速、肺微血管楔壓及心輸出。臨床參數測量值係與投 予放射性對比劑之前，未投予ASBNP.1之對照犬所得測量 值做比較。 實施例5-於高風險病人包括患有CHF病人中預防對比劑 誘發腎衰竭 有高風險CIN病人（例如老年病人及有慢性腎功能不 全、糖尿病及心衰竭風險之病人）需要對比劑來造影（例如 血管攝影或電腦斷層（CT))，於投予對比劑介質之前預防性 以靜脈輸注ASBNP多肽或ASBNR1多肽處理。於輸注前， 測定生命徵象，進行實驗室試驗來測定電解質、血清肌酸 •酐、半胱胺酸蛋白酶抑制素及BNP多肽濃度。BNP多肽濃 度係使用Biosite BNP檢定分析檢測ASBNP多肽獲得，及 /或使用對ASBNP多肽特異之檢定分析獲得。測量基準線 45 94073 200817431 ，：出，且評估尿液電解質。於投予對 脈輸注AS卿多肽、ASBNR1 ;;每2小時評估生命徵象及尿輸出。於開始後的二; 間，病人接受對比劑的投予。如藉多肽之特昱性檢定斤 可能吻合達到士某個濃度的多肽。投予對二 /或半胱胺^白8酶=2美t持t續輸注至發現肌酸肝及 丁肌妝敗玄Θ酶抑制素與基準線相較無變化為止。 :急性無代償心衰竭背景下發展出惡化腎功能及有利 二抗性之病人❹靜脈輸注ASBNp多肽或asbnp !多狀 :=:於:f前，測定生命徵象，進行實驗室試驗 ==電~貝、血清肌酸酐、半胱胺酸蛋白酶抑制素及驗 夕肽$辰度。測量基準線尿輸出，且評估尿液電解質。開始 靜脈輸注ASBNP多肽、ASBNpi多肽或其衍生物。輸注 期間（持績期間為期12小時至72小時）每2小時評估生命 徵，及尿輸出。整個輸注期間每日評估藥物濃度、腑多 肽濃度、血清肌酸酐、半胱胺酸蛋白酶抑制素及血漿電解 質及尿電解質。 其它實施例 須了解雖然已經就其細節敘述來說明本發明，但前文 兒月僅t、舉例5兒明本發明之用而非限制性，本發明係由隨 附之申請專利範圍之範圍所界定。其它態樣、優點及修改 係屬於如下之申請專利範圍之範圍内。 【圖式簡單說明】 94073 46 200817431 第1圖（彩色）為asbnp多肽長度為6〇個胺基酸殘基 (SEQ ID NO : 4)、ASBNR1多肽長度為42個胺基酸殘基 (SEQ ID NO: 1)、ASBNP.2多肽長度$ 6〇個胺基酸殘基 且有丙胺酸於位置43 (SEQ ID N〇 : 3)之示意圖。ASBNp.2 之序列為由位置43之丙胺酸至位置6〇之白胺酸，其長度 為1M固胺基酸殘基（SEq ID N〇 : 2)。ASBNp (也稱作為 BNP2)為由其它剪接所產生之bNP之變異形式。 第2圖為如所指示使用ASBNpi處理犬之尿流速作圖 之柱狀圖。基準線為投藥前；低為2皮莫耳(pmol);高為 1〇皮莫耳；超高為100皮莫耳；rec 1為復原i ;及咖2 處理犬之尿鈉排泄速 低為2皮莫耳；高為 1為復原1 ;及rec 2 第3圖為如所指示使用ASBNP. 1 率作圖之柱狀圖。基準線為投藥前； 10皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳；rec 為设原2。 弟4圖為如所指示使用ASBNP.1處理犬之遠 小管納再吸f速率作圖之柱狀圖。基準線為投藥前 廣;高為10虔葸耳；韶高為ion 2皮莫n :㈢一_ w為投藥前； 叉夫斗’回為10皮莫耳；超高為1〇〇皮箪 復；^ 1 . 叉矢斗，rec 设原1，及rec 2為復原2。 第5圖為如所指示使用ASBNP.1處理犬之 小管鈉再噁你、± 士 近端部 再及收速率作圖之柱狀圖。基準 2皮莫耳·古炎 ~仅樂月丨j， 、卞，同為10皮莫耳；超高為100皮箪 為復原1。 反吴耳，及！ 第6圖為如 所指示使用ASBNP.1處理犬

之血漿cGMP 94073 47 200817431 j作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為 含 2為復原1 以100皮莫耳、1為復原-及咖 第7圖為如所指示使用ASBNp i處理 跃 性作圖之柱狀圖。基準.你士 水月素活 丞早綠為扠樂刖，低為2虔簟耳·古 為復原 2。 1 *^rec 2 為如所㈣使用ASBNR1處理犬之腎絲球體過 肩率作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為2皮莫耳；高 為1〇/莫耳；超高為100皮莫耳；咖i為復原i ;及二 2為復原2。 第9圖為如所指示❹ASBNR1處理犬之腎血流速作 圖之柱狀®。基準線為投藥前；低為2皮莫耳；高為ι〇 皮莫耳；超高為100皮莫耳；rec i為復原i ;及rec 復原2。 ， 第1〇圖為如所指示使用ASBNP1處理犬之平均動脈 血壓作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為2皮莫耳；高 為10皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳；rec丨為復原丨；及⑽ 2為復原2。 弟11圖（彩色）為使用如所指示濃度之Bnp、ASBNP、 或ASBNR1處理之HUVECS之cGMP濃度作圖之柱狀圖。 OX表示經氧化，以及ηοη-ΟΧ表示未經氧化。 第12圖（彩色）為使用如所指示濃度之bnp、ASBNP、 或ASBNP.1處理之HASMCS之cGMP濃度作圖之柱狀圖。 94073 48 200817431 ox表示經氧化，以及ηοη_〇χ表示未經氧化。 第13圖（彩色）為由使用BNP、ASBNP或ASBNP.1於 所才曰不浪度處理之兔血管環所得血管活性測量值作圖之曲 線圖。

第14圖含有可編碼ASBNP.l多肽之核酸序列（SEQ ID NO ·· 5)，及可編碼ASBNp.2多肽之核酸序列（seq⑴n〇 : 6) 〇 第15圖為如所指示使用asbnp.1處理植入心跳節律 益犬之，流速作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為2皮 莫耳；高為10皮莫耳；超高為100皮莫耳；rec 1為復原 1 ;及rec 2為復原2。 弟16圖為如所指示使用ASBNP.1處理植入心跳節律 器犬之尿納排泄速率作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低 為2皮莫耳；高為10皮莫耳；超高為100皮莫耳；rec i 為復原1 ;及rec 2為復原2。 第17圖為如所指示使用ASBNP· 1處理植入心跳節律 器犬之遠端部分腎小管納再吸收速率作圖之柱狀圖。基準. 2投藥前；低為2皮莫耳；高為H)皮莫耳；超高為100 皮莫=’ rec 1為復原！；及rec2為復原2。 第1圖為如所指示使用ASBNP· 1處理植入心跳節律 線為投藥前;低為率作圖之柱狀圖。基準 皮莫耳⑽為復/丨：，，為1〇皮莫耳4高為1〇。 第_二，:：2為復原2。 W日不使用ASBNP.1處理植入心跳節律 94073 49 200817431

裔犬之血裝CGMP、、曾ώ： A 低為2古宜且/ 狀圖。基準線為投藥前； •低為2皮莫耳，向為1 古 為#屌1 · β 皮莫耳，起同為100皮莫耳；rec i .马设原1，及rec2為復原2。 •哭犬I血將如所才日不使asbnp. 1處理植入心跳節律 口口犬之血桌月素活性ί太古/古斗/丨口士、仏 ^ ^ ^ - (不克/尾升7小日守）作圖之柱狀圖。基準 • 線為投樂前；低為2古苴且·古炎Λ丄， -古莖且· 1 , 皮旲耳，冋為10皮莫耳；超高為100 皮莫=，rec 1為復原1 ;及reC2為復原2。 第=圖為如所指示使用ASBNPl處理植人心 球體過渡率作圖之柱狀圖。基準線為； =々及耳;高為10皮莫耳;超高為-皮莫耳;… 為设原1，及rec2為復原2。 弟22圖為如所指示使用ASBNp i處理植人心跳節律 ==腎血流速作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為2 =耳，面為H)皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳為復 原1，及rec 2為復原2。 :。f 23圖為如所指示使用ASBNpi處理植人心跳節律 Z大之平均動脈血壓作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低 <、、、2皮莫耳；高為1〇皮莫耳；超高為1〇 為制1;及咖2為復原2。 莫耳咖1 。。第24圖為如所指示使用ASBNp i處理植入心跳節律 =犬之尿eGMP排泄作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低 、’、、2皮莫耳；高為10皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳；ree工 '為復原1 ;及咖2為復原2。 、 第25圖為如所指示使用ASBNP.1處理植入心跳節律 94073 50 200817431 器犬之尿ANP排泄作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為 2皮莫耳；高為1〇皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳；】為 復原1 ;及rec 2為復原2。 、 w第26圖為如所指示使用ASBNP.1處理植入心跳節律 器犬之尿BNP排泄作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為 2皮莫耳；高為10皮莫耳；超高為100皮莫耳；rec q 復原1 ;及rec 2為復原2。 、 第27圖為如所指示使用ASBNp i處理植入心跳節律 器犬之血漿BNP濃度作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低 為2皮莫耳；高為1〇皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳；“ “ 為復原1 ;及rec 2為復原2。 时、第28圖為如所指示使用ASBNp i處理植入心跳節律 β犬之血t ANP濃度作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低 為^皮莫耳；高為10皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳；⑽^ 為復原1 ;及rec 2為復原2。 抑第29圖為如所指示使用ASBNR1處理植入心跳節律 口口犬之肺微血官楔壓（pulm〇nary capillary wed# pas此 乍圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為2皮莫耳；高為 皮莫耳，超南為100皮莫耳；rec i為復原i ;及咖2為 復原2。 的、弟30圖為如所指示使用ASBNp i處理植入心跳節律 *犬之^輪出作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為2皮 莫耳；高為10皮莫耳；超高為100皮莫耳；rec 1為復原 1 ;及rec 2為復原2。 94073 51 200817431 第31圖為如所指示使用ASBNP.1處理植入心跳節律 器犬之系統性血管阻力作圖之柱狀圖。基準線為投藥前； 低為2皮莫耳；高為1〇皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳ϋ 為復原1 ;及rec 2為復原2。 口。第32圖為如所指示使用湖㈣處理植入心跳節律 器犬，升壓5濃度作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為 2—皮莫耳；高為1()皮莫耳；超高為⑽皮莫耳^上為 復原1 ;及rec 2為復原2。 第33圖為如所指示使用ASBNP.1處理植入心跳節律 器犬之醛固酮濃度作圖之柱狀圖。基準線為投藥前；低為 2—皮莫耳；高為10皮莫耳；超高為1〇〇皮莫耳；rec i為 復原1 ;及rec 2為復原2。 第34圖為開始投予ASBNR1多肽（1〇〇皮莫耳/千克/ 分鐘）後經歷90分鐘於指示時間的植入心跳節律器犬之尿 鈉排泄（微當量/分鐘）之作圖。BL=基準線；3〇分鐘=投予 ASBNR1多肽3G分鐘；60分鐘=投予ASBNP.1多肽6〇分 鐘；90分鐘=投予ASBNR1多肽9〇分鐘；清除=於輸注終 止之清除期後；Rec i =終止輸注後3〇分鐘；及尺“ >終 止輸注後60分鐘。 、 第35圖為開始投予ASBNR1多肽（1〇〇皮莫耳/千克/ 分鐘）後經歷90分鐘於指示時間的植入心跳節律器犬之尿 流速（毫升/分鐘）之作圖。BL=基準線；3〇分鐘=投予 ASBNP.1乡肽30分鐘；60分鐘=投^ ASBNP1多肽6〇分 鐘；90分鐘=投予ASBNR1多肽9〇分鐘；清除=於輸注終 94073 52 200817431 止之清除期後；Rec 1 =終止輸注後30分鐘；及Rec 2=終 止輸注後60分鐘。 第36圖為開始投予ASBNP.1多肽（100皮莫耳/千克/ 分鐘）後經歷90分鐘於指示時間的植入心跳節律器犬之平 均動脈血壓（毫米汞柱）之作圖。BL=基準線；30分鐘=投予 ASBNP.1多肽30分鐘；60分鐘=投予ASBNP.1多肽60分 鐘；90分鐘=投予ASBNP.1多肽90分鐘；清除=於輸注終 止之清除期後；Rec 1 =終止輸注後30分鐘；及Rec 2=終 止輸注後60分鐘。 第37圖為開始投予ASBNP.1多肽（100皮莫耳/千克/ 分鐘）後經歷90分鐘於指示時間的植入心跳節律器犬之腎 血流速之作圖。BL=基準線；30分鐘=投予ASBNP.1多肽 30分鐘；60分鐘=投予ASBNP.1多肽60分鐘；90分鐘= 投予ASBNP.1多肽90分鐘；清除=於輸注終止之清除期 後；Rec 1 =終止輸注後30分鐘；及Rec 2=終止輸注後60 分鐘。 第38圖為開始投予ASBNP.1多肽（100皮莫耳/千克/ 分鐘）後經歷90分鐘於指示時間的植入心跳節律器犬之肺 微血管楔壓之作圖。BL=基準線；30分鐘=投予ASBNP.1 多肽30分鐘；60分鐘=投予ASBNP.1多肽60分鐘；90分 鐘=投予ASBNP.1多肽90分鐘；清除=於輸注終止之清除 期後；Rec 1 =終止輸注後30分鐘；及Rec 2=終止輸注後 60分鐘。 第39圖為開始投予ASBNP.1多肽（100皮莫耳/千克/ 53 94073 200817431 ' 分鐘）後經歷90分鐘於指示時間的植入心跳節律器犬之心 .輸出（升/分鐘）之作圖。BL =基準線；30分鐘=投予ASBNP.1 多肽30分鐘；60分鐘=投予ASBNP.1多肽60分鐘；90分 鐘=投予ASBNP.1多肽90分鐘；清除=於輸注終止之清除 • 期後；Rec 1 =終止輸注後30分鐘；及Rec 2 =終止輸注後 60分鐘。 54 94073

Claims (1)

1. 200817431 " 十、申請專利範圍： . h 一種長度為37至47個胺基酸殘基之實質上純質的多 . 肽，其中，該多肽包含下列胺基酸序列：（a)列舉於SEQ ID NO : 1之序列或（b)與列舉於SEQ ID NO ·· 1之序列 • 比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或 . 其組合之序列。 2·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽之長度為 38個至46個胺基酸殘基。 3 ·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽之長度為 39個至45個胺基酸殘基。 4·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽之長度為 40個至44個胺基酸殘基。 5·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽之長度為 41個至43個胺基酸殘基。 6·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽之長度為 42個胺基酸殘基。 ' 7.如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽之長度為 3 7個胺基酸殘基。 8. 如申請專利範圍第丨項之多肽，其中，該多肽之長度為 47個胺基酸殘基。 9. 如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該胺基酸序列為 • SEQ ID NO : 1列舉之序列。 .ίο.如申請專利範圍« !項之多月太，其中，該胺基酸序列係 與SEQm NO : i所列舉之序列比對而具有四個或更少 94073 55 200817431 個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。 11 ·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該胺基酸序列係 與SEQ ID NO : 1所列舉之序列比對而具有三個或更少 個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。 12·如申請專利範圍第i項之多肽，其中，該胺基酸序列係 與SEQ ID NO ·· 1所列舉之序列比對而具有二個或更少 個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。 13·如申請專利範圍第i項之多肽，其中，該胺基酸序列係 與SEQ ID NO ·· 1所列舉之序列比對而具有一個或更少 個胺基酸加成、刪失、取代、或其組合。 14·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該胺基酸序列係 與SEQ ID NO : 1所列舉之序列比對而具有五個或更少 個胺基酸加成。 15·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該胺基酸序列係 與SEQ ID NO: 1所列舉之序列比對而具有五個或更少 個胺基酸刪失。 16.如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該胺基酸序列係 與SEQ ID NO: 1所列舉之序列比對而具有五個或更少 個胺基酸取代。 17·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽之長度為 42個胺基酸殘基，以及其中，該胺基酸序列為seq① NO : 1列舉之序列。 18.如申請專利範圍帛1項之多狀，其中，該多狀具有利尿 及利尿納活性。 94073 56 200817431 19·如申請專利範圍第1項之多肽，其中，該多肽於哺乳動 物體内缺乏降低血壓之能力。 20·如申請專利範圍第19項之多肽，其中，該哺乳動物為 人或犬。 、、、 21·—種長度為45至65個胺基酸殘基之實質上純質的多 肽’其中’該多肽包含下列第一胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與SEQIDNO: 1列舉之序列比對而具有5個或 更少個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列；以及 其中’該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（Η) 15個或更少個胺基酸刪失之序列。 22·如申請專利範圍第21項之多肽，其中，該多肽之長度 為58至63個胺基酸殘基。 23·如申請專利範圍第21項之多肽，其中，該多肽之長度 為60個胺基酸殘基。 24·如申請專利範圍第21項之多肽，其中，該多肽之長度 為4 5個胺基酸殘基。 25·如申請專利範圍第21項之多肽，其中，該多肽之長度 為6 5個胺基酸殘基。 26·如申請專利範圍第21項之多肽，其中，該胺基酸序列 94073 57 200817431 為SEQ ID NO : 3列舉之序列。 27·如申請專利範圍第21項之多肽，其中，該多肽具有利 尿及利尿納活性。 28·—種編碼長度為37至47個胺基酸殘基之多肽的單離核 酸，其中，該多肽包含下列胺基酸序列：（a)列舉於SEQ ID NO : 1之序列或（b)與列舉於SEQ ID NO : 1之序列 比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、或 其組合之序列。 29·—種編碼長度為45至65個胺基酸殘基之多肽的單離核 酸，其中，該多肽包含下列第一胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與列舉於SEQIDN0:丨之序列比對而具有$個 或更少個胺基酸删失、取代、或其組合之序列；以及 其中，該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（^) 15個或更少個胺基酸刪失之序列。 30,種載體’包含編碼長度為37至47個胺基酸殘基之多 肽的核酸’其中’該多肽包含下簡基酸序列：⑷列舉 於SEQ ID N〇 . 1之序列或（b)與列舉於SEQ ID NO : 1 之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪失、取 代、或其組合之序列。 94073 58 200817431 31.—種載體，包含編碼長度為45至65個胺基酸殘基之多 肽的核酸，其.中，該多肽包含下列第一胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與列舉於SEQ ID N0 :丨之序列比對而具有5個 或更少個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列；以及 其中，該多肽包含下列第二胺基酸序列： ⑷列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b)與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代或其組合，但限制條件為 該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（π) 15 個或更少個胺基酸刪失之序列。 32·—種宿主細胞，包含編碼長度為叨至47個胺基酸殘基 之多肽的核酸，其中，該多肽包含下列胺基酸序列： 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或（b)與列舉於SEQ冚 NO: 1之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、删 失、取代、或其組合。 33.—種宿主細胞，包含編碼長度為郫至65個胺基酸殘基 之多肽的核酸，其中，該多肽包含下列第一胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與列舉於SEQIDN〇:丨之序列比對而具有5個 或更少個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列；以及 其中，該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5 94073 59 200817431 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（ii) 15個或更少個胺基酸刪失之序列。 34·如申請專利範圍第32或33項之宿主細胞，其中，該宿 主細胞為真核宿主細胞。 35·—種醫藥組成物，包含醫藥上可接受之載劑及長度為 37至47個胺基酸殘基之多肽，其中，該多肽包含下列 胺基酸序列··（a)列舉於SEQIDNCK 1之序列或（b)與列 舉於SEQ ID NO: 1之序列比對而具有5個或更少個胺 基酸加成、刪失、取代、或其組合之序列。 36·—種醫藥組成物，包含醫藥上可接受之載劑及長度為 45至65個胺基酸殘基之多肽，其中，該多肽包含下列 第一胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與列舉SEQ ID NO: 1之序列比對而具有5個或 更V、個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列，以及 其中，該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（ii) 15個或更少個胺基酸刪失之序列。 37· —種於哺乳動物體内提高利尿及利尿鈉活性而不降低 血壓之方法，其中，該方法包含對該哺乳動物投予多 94073 60 200817431 月太其中’該多肽之長度為37個至47個胺基酸殘基， 且/、中π亥夕狀包含下列胺基酸序列：（a)列舉於seq id N0: 1之序列或（b)與列舉於SEQ ID NO: 1之序列比對 而具有5個或更少個胺基酸加成、删失、取代、或其組 合之序列。 38·種於哺乳動物體内提高利尿及利尿鈉活性而不降低 血壓之方法，其中，該方法包含對該哺乳動物投予多 肽其中’該多肽之長度為45個至65個胺基酸殘基， 且其中，該多肽包含下列第一胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與列舉於SEQIDN0:丨之序列比對而具有5個 或更少個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列，以及 其中’該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO: 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（ii) 15個或更少個胺基酸刪失之序列。 39·—種治療患有腎功能障礙之哺乳動物之方法，其中，該 方法包含對該哺乳動物投予長度為37個至47個胺基酸 殘基之多肽，其中，該多肽包含下列胺基酸序列：（a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或（b)與列舉於SEQ ID NO: 1之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪 失、取代、或其組合之序列，以及其中，該投予係於該 61 94073 200817431 腎功此IV礙之症狀的嚴重程度減輕之情況下進行 .40·—種治療患有腎功能障礙之哺乳動物之方法，其中，該 . 方法包含對該哺乳動物投予長度為45個至65個胺基酸 殘基之多肽，其中，該多肽包含下列第一胺基酸序列： ‘ （a)列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 ： (b)與列舉於SEQ ID N0: 1之序列比對而具有5個 或更少個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列，以及 其中，該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（H) 15個或更少個胺基酸刪失之序列，以及 其中，該投予係於該腎功能障礙之症狀嚴重程度減 輕之情況下進行。 ^ 41·如申請專利範圍第37至40項中任一項之方法，其中， 該哺乳動物為人類。 42·如申請專利範圍第39或40項之方法，其中，該腎功能 障礙包含腎衰竭。 43·如申請專利範圍第39或4〇項之方法，其中，該腎功能 障礙包含伴隨有充血性心衰竭的腎衰竭。 44.如申請專利範圍第39或40項之方法，其中，該多肽係 ' 經靜脈、經口或經鼻内投予。 45·如申請專利範圍第39或40項之方法，其中，該多肽係 62 94073 200817431 以緩慢釋放配方投予。 > 4 6 ·如申明專利範圍弟3 9項之方法，其中，該多肤之長度 為37至47個胺基酸殘基，且包含SEq ID NO : 1列舉 之胺基酸序列。 .47·如申請專利範圍第39項之方法，其中，該多肽之長度 ； 為37至47個胺基酸殘基，以及包含與SEQ ID NO : 1 所列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪 失、取代、或其組合之胺基酸序列。 48. 如申請專利範圍第4〇項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含⑴SEq m ν〇 ·· 1所 列舉之第一胺基酸序列及（ii) SEQ ID NO: 2所列舉之第 二胺基酸序列。 49. 如申請專利範圍第4〇項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含與SEQ出N〇 :丄所 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失、取 、代、或其組合之第一胺基酸序列，以及包含seq出 NO : 2所列舉之第二胺基酸序列。 5〇.如申請專利範圍第40項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含SEQ ID NO : 1所列 舉之第一胺基酸序列，以及包含與SEQ ID N0: 2列舉 之序列比對而具有（i)5個或更少個胺基酸加成、取代、 或其組合，但限制條件為該加成或該取代 .胺酸殘基的存在，或间15個或更少職基酸 二胺基酸序列。 乐 94073 63 200817431 51·如申請專利範圍第40項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含與sEQ ID NO : 1所 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失、取 代、或其組合之第一胺基酸序列，以及包含與SEQ ID NO · 2列舉之序列比對而具有⑴5個或更少個胺基酸加 成、取代、或其組合，但限制條件為該加成或該取代不 會導致半胱胺酸殘基的存在，或i 5個或更少個胺基 酸刪失之第二胺基酸序列。 52. 如申請專利範圍第39或4〇項之方法，其中，該症狀包 2血清肌酸酐濃度異常、i流速If、腎素濃度異常、 腎絲球之過濾率異常、尿cGMp排泄率異常、尿ANp 排泄，異常、尿瞻排池率異常、心輸出異常、系統 性血官阻力異常、或醛固酮濃度異常。 53. 如申請專利範圍第39或4〇項之方法，其中，該症狀包 Ϊ尿流速的減少，及其巾，該哺乳動物之尿流速於該投 樂步驟後至少增加5〇%。 54. 如申請專利範圍第％或4()項之方法， 含腎素濃度的減少，及A中，μ症故 該投藥步驟後至少增.加2。動物之腎素⑽ 55. 如申請專利範圍第％或扣項之方法，其中，該㈣ 含腎絲球的過濾率減少，及1中，該… 的過濾率於該投藥步驟後至；增加；:。動物之腎海 56·如申請專利範圍第39或40項之方法， 含尿排泄率減少，及其中，該^中，該症取 、τ為南礼動物之尿cG 94073 64 200817431 排泄率於該投藥步驟後至少增加25%。 57. 如申請專利範圍第％或如 含尿ANP排泄率減少 、之方法，八中，該症狀包 排泄率於該投華牛其中’該哺乳動物之尿猜 忑杈条步驟後至少增加25%。 58. 如申請專利範圍第39或40項之方法，其中， 含尿ΒΝΡ排泄率減少，s ^ 忒症狀包 ^ 及其中，該哺乳動物之屁 排泄率於該投藥步驟後至少增加25%。 认如申請專利範圍第39或4〇項之方法，其中，該 含心輸出增加，及其中，_哺 q / 已 步驟後至少降低2%。南礼動物之心輸出於該投藥 6〇.==利範圍第39或40項之方法，其中，該症狀包 =、、先性血管阻力減少，及其中，該哺乳動物之系統性 血官阻力於該投藥步驟後至少增加1〇%。 61.如:請專利範圍第39 $40項之方法，其中，該症狀包 含醛固酮濃度減少，及其中，該哺乳動物之醛固酮濃度 於該投藥步驟後至少增加1 0%。 62·一種治療患有發炎病症之哺乳動物之方法，其中，該方 法包含對該哺乳動物投予長度為37個至47個胺基酸殘 基之多肽，其中，該多肽包含下列胺基酸序列··（a)列舉 於SEQ ID NO : 1之序列或（b)與列舉於SEQ iD N〇 :丄 之序列比而具有5個或更少個胺基酸加成、刪失、取代、 或其組合之序列，以及其中，該投予係於該發炎病症之 症狀嚴重程度減輕之情況下進行。 63·如申請專利範園第62項之方法，其中，該多肽之長度 94073 65 200817431 為37至47個胺基酸殘基，且包含與SEQ ID NO : 1所 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪 失、取代、或其組合之胺基酸序列。 64·—種治療患有發炎病症之哺乳動物之方法，其中，該方 法包含對該哺乳動物投予長度為45個至65個胺基酸殘 基之多肽，其中，該多肽包含下列第一胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與列舉於SEQID N0: !之序列比對而具有$個 或更少個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列，以及 其中’該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO : 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或（H) 15個或更少個胺基酸刪失之序列，以及 其中’該投予係於該發炎病症之症狀嚴重程度減輕 之情況下進行。 65·如申請專利範圍第64項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含與SEq ip no : 1所 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸删失、取 代、或其組合之第一胺基酸序列，以及包含與S]Eq jd NO ·· 2列舉之序列比對而具有⑴5個或更少個胺基酸加 成、取代、或其紐合，但限制條件為該加成或該取代不 會導致半胱胺酸殘基的存在，或（ii)丨5個或更少個胺基 66 94073 200817431 酸刪失之第二胺基酸序列。 ‘ 66.—種治療患有心功能障礙之哺乳動物之方法，其中，該 ' 方法包含對該哺乳動物投予長度為37個至47個胺基酸 殘基之多肽，其中，該多肽包含下列胺基酸序列：⑷ 列舉於SEQ ID NO . 1之序列或⑻與列舉於SEq ： N〇 . 1之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、删 失、取代、或其組合之序歹I以及其中，該投予係於該 心功能障礙之症狀嚴重程度減輕之情況下進行。 ,67. 一種治療患有心功能障礙之哺乳動物之方法，其中，該 方法包含對該哺乳動物投予長度為45個至65個胺基酸 殘基之多肽，其中，該多肽包含下列第一胺基酸序列·· (a) 列舉於SEQ ID NO : 1之序列或 (b) 與列舉於SEQ ID N0 :丨之序列比對而具有5個 或更少個胺基酸刪失、取代、或其組合之序列，以及 其中，該多肽包含下列第二胺基酸序列： (a) 列舉於SEQ ID NO : 2之序列或 (b) 與SEQ ID NO: 2所列舉之序列比對而具有⑴5 個或更少個胺基酸加成、取代、或其組合，但限制條件 為該加成或取代不會導致半胱胺酸殘基的存在；或 15個或更少個胺基酸刪失之序列，以及 其中，該投予係於該心功能障礙之症狀嚴重程度減 •輕之情況下進行。 68.如申請專利範圍第66或67項之方法，其中，該哺乳動 物為人類。 94073 67 200817431 69·如申請專利範圍第66或67項之方m該心功能 障礙包含心臟衰竭。 ，該心功能 ，該多肽係 ，該多肽係 70. 如申請專利範圍第66或67項之方法，其中 障礙包含伴隨有腎衰竭的充血性心衰竭/。' 71. 如申請專利範圍第66或67項之方=:其中 經靜脈、經口或經鼻内投予。 72·如申請專利範圍第66或67項之方法，其中 以緩丨更釋放配方投予。 73.如申請專利範圍第66項之方法’其中，該多肽之長度 為37至47個胺基酸殘基，且包含SEq ι〇 N〇 :工列舉 之胺基酸序列。 74·如申請專利範圍第66項之方法，其中，該多肽之長度 為37至47個胺基酸殘基，且包含與SEq ID no : 1所 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸加成、刪 失、取代、或其組合之胺基酸序列。 75·如申請專利範圍第67項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含⑴SEq id NO : 1所 列舉之第一胺基酸序列及（ii) SEQ ID NO: 2所列舉之第 —胺基酸序列。 76·如申請專利範圍第67項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含與SEQ id NO :所 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失、取 氏、或其組合之第一胺基酸序列，以及包含SEQ id N〇 : 2所列舉之第二胺基酸序列。 68 94073 200817431 77·如申請專利範圍第67項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含SEQ ID NO : 1所列 舉之第一胺基酸序列，以及包含與SEQ ID NO : 2列舉 之序列比對而具有（i) 5個或更少個胺基酸加成、取代、 或其組合’但限制條件為該加成或該取代不會導致半胱 胺酸殘基的存在，或（ii) 15個或更少個胺基酸刪失之第 一胺基酸序列。 78·如申請專利範圍第67項之方法，其中，該多肽之長度 為45至65個胺基酸殘基，且包含與SEQ ID NO ·· 1所 列舉之序列比對而具有5個或更少個胺基酸刪失、取 代、或其組合之第一胺基酸序列，以及包含與SEQ ID N〇 · 2列舉之序列比對而具有⑴5個或更少個胺基酸加 成、取代、或其組合，但限制條件為該加成或該取代不 會導致半脱胺酸殘基的存在，或（Π) 15個或更少個胺基 酸刪失之第二胺基酸序列。 69 94073