BR122019022461B1 - Processo para preparar uma fração ácida isolada de goma mástique - Google Patents

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Abstract

A presente invenção refere-se a composições e formulações que compre-endem uma fração ácida isolada da goma mástique e seus usos no tratamento de funções neurológicas comprometidas, bem como na reparação de tecidos e feridas.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A invenção refere-se a composições das frações ácidas isoladas da goma mástique, e seus usos.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] A busca por novas entidades medicamentosas derivadas de plantas e produtos vegetais para várias aplicações terapêuticas remonta à antiguidade e persiste até a atualidade. Uma dessas fontes é o mástique, também conhecido como goma de mástique ou goma mástique, que é uma resina lenhosa obtida na forma do exsudato de Pistacia lentiscus L., um membro da família Anacardiaceae. O mástique foi utilizado no mundo mediterrâneo antigo para distúrbios gastrointestinais como gastralgia, dispepsia e úlcera péptica. Notou-se que a administração oral do másti- que a pacientes humanos com úlcera duodenal e a ratos experimentais com úlceras gástricas e duodenais induzidas surtiu efeitos terapêuticos (Al-Habbal et al (1984) Clin Exp Pharmacop Physio 11(5):541-4; Said et al (1986) J Ethnopharmacol 15(3):271-8). Embora tenha sido revelado que o mástique tem efeitos bactericidas in vitro contra Helicobacter pylori, o agente etiológico causador da doença caracterizada por úlcera péptica (Marone et al (2001) J Chemother 13:611-614), outros relatos revelam que o mástique não exerce atividade antibacteriana quando administrado a pacientes humanos positivos à H. pylori (Bebb et al (2003) J Antimicrob Chemother 52:522-23) ou a camundongos infectados experimentalmente (Loughlin et al (2003) J Antimicrob Chemother 51:367-371).
[003] A Patente da Grécia N° GR 1.003.541 revela a ação antimicrobiana e antifúngica do óleo de aroeira de Chios extraído das folhas, ramos e frutos de Pista- cia lentiscus var. Chia.
[004] A Patente da Grécia N° GR 1.003.868 revela o uso de um produto derivado de Pistacia lentiscus var. Chia como antioxidante, indutor da cicatrização de feridas e agente citostático.
[005] O Pedido de Patente dos Estados Unidos N° 2005/0238740 é direcionado ao uso do mástique e seus componentes para o controle de infecções microbianas.
[006] Paraschos et al (2007), de autoria de alguns dos inventores do pedido de patente mencionado, revelam preparação de um extrato de aroeira total sem polímero (TMEWP), preparada através da extração com solvente polar do mástique bruto e a remoção do polímero insolúvel poli-β-mirceno do mesmo, e frações ácidas e neutras separadas de TMEWP (Paraschos et al (2007) Antimicrob Agents Che- mother 51(2):551-559). De acordo com a descrição, a administração de TMEWP a camundongos infectados com H. pylori durante um período de 3 meses resultou em 30 vezes a redução da colonização bacteriana, amplamente imputável a um composto particular purificado da fração ácida. Os autores indicam que o TMEWP foi preparado já que foi especulado que o elevado percentual do poli-β-mirceno nas preparações de mástique bruto, conforme utilizado em estudos anteriores, prejudicava a potencial atividade in vivo durante a administração oral. Os autores revelam ainda que a remoção do poli-β-mirceno pode produzir uma fração terapêutica acentuada com atividade contra a H. pylori.
[007] O Pedido de Patente EP N° 1520585 é direcionado ao tratamento contra o câncer utilizando produtos vegetais naturais ou óleos essenciais ou componentes de algumas espécies de Pistacia.
[008] A Publicação do Pedido de Patente Internacional N° WO 2005/112967 é direcionada à atividade anticancerígena da goma mástique de Chios.
[009] Van der Berg et al (1998) revelam o isolamento e a purificação da fração polimérica do mástique utilizando cromatografia por exclusão de tamanho e ex- tração (Van der Berg et al (1998) Tetrahedron Lett 3:2645-2648).
[010] Barra et al (2007) revelam a extração e análise por cromatografia gasosa de óleo essencial de P. lentiscus L. (Barra et al (2007) J Agric Food Chem 55(17):7093-7098). De acordo com a descrição, foi identificado um total de 45 compostos, incluindo-se o β-mirceno como um dos compostos principais.
[011] A Publicação do Pedido de Patente Internacional N° WO 2010/100650 concedida a alguns dos inventores da presente invenção, é direcionada aos usos terapêuticos de frações da goma mástique.
[012] A Publicação do Pedido de Patente Internacional N° WO 2010/100651 concedida a alguns dos inventores da presente invenção, é direcionada a composições de mirceno polimérico.
[013] A Publicação do Pedido de Patente Internacional N° WO 2005/094837 é direcionada ao uso do ácido masticadienólico como inibidor da DNA beta- polimerase, utilizada para o tratamento de cânceres, tumores e doenças neurodege- nerativas.
[014] Marner et al (1991) revelam a identificação de vários triterpenóides da goma mástique de P. lentiscus (Marner et al (1991) Phytochemistry, 30, 3709-3712).
[015] Giner-Larza et al (2002) revelam triterpenos anti-inflamatórios de galhas de Pistacia terebinthus (Planta Med (2002), 68, 311-315).
[016] No entanto, ainda existe uma necessidade não atendida de agentes seguros, versáteis e eficazes para o tratamento de várias condições, como aquelas associadas às funções neurológicas comprometidas e condições neurodegenerati- vas relacionadas, incluindo-se, por exemplo, doença de Alzheimer, acidente vascular cerebral, e outros similares, e outras condições, como a regeneração de tecidos, reparação de tecidos e feridas.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[017] A presente invenção fornece composições farmacêuticas que compre- endem uma fração ácida isolada da goma mástique, que contém compostos ácidos que são solúveis tanto em solventes orgânicos polares como não polares. A fração da invenção exibe uma variedade de atividades biológicas benéficas que podem ser exploradas por várias aplicações terapêuticas. Mais especificamente, revelou-se agora que uma fração ácida isolada da goma mástique tem atividade e é útil no tratamento de funções neurológicas comprometidas e condições neurodegenerativas relacionadas (por exemplo, revertendo-se a condição neurodegenerativa), acidente vascular cerebral, regeneração de tecido, reparação de tecidos e feridas, e outros similares.
[018] De acordo com algumas modalidades, a presente invenção proporciona adicionalmente composições que compreendem compostos isolados da fração ácida isolada da goma mástique, dotadas de atividade terapêutica. Em algumas modalidades, as composições podem incluir uma pluralidade de compostos isolados selecionados a partir de compostos ácidos individuais encontrados na fração ácida da goma mástique de acordo com a invenção. De acordo com algumas modalidades a composição inclui pelo menos três compostos isolados selecionados entre ácido masticadienólico, ácido isomasticadienólico, ácido masticadienólico, ácido isomasti- cadienólico, ácido 3-O-acetil masticadienólico, ácido 3-O-acetil epimasticadienólico, ácido 3-O-acetil isomasticadienólico, ácido 3-O-acetil epi-isomasticadienólico, ácido oleanônico, ácido morônico e ácido 3-oxo-lup-20(29)-en-28-óico. Em algumas modalidades exemplificativas, as composições incluem pelo menos ácido masticadienóli- co, ácido isomasticadienólico e ácido oleanônico. Essas composições exibem inesperadamente um efeito sinérgico, e com isso a combinação de compostos exibe um efeito terapêutico acentuadamente maior no tratamento de funções neurológicas comprometidas e condições/distúrbios neurodegenerativos, em comparação aos compostos individuais isoladamente.
[019] A fração ácida do mástique de acordo com as modalidades da inven- ção pode ser distinguida das frações de mástique reveladas na técnica anterior, já que sua preparação envolve o uso de um solvente polar e de um solvente não polar, enquanto a técnica anterior ensina o apenas o uso de solventes polares. As frações ácidas preparadas através da utilização de solventes polares somente contêm com-postos que não são solúveis em solventes apolares como o hexano, enquanto esses compostos não estão presentes na fração ácida da corrente invenção. Por conseguinte, as frações da invenção compreendem uma combinação de compostos que difere do que revela a técnica anterior. Além disso, os inventores da presente invenção descobriram que a fração ácida da invenção possui inesperadamente uma gama de atividades terapêuticas altamente inesperadas que não são sugeridas pela técnica anterior.
[020] Os ensinamentos da presente invenção foram exemplificados com extratos da goma mástique preparada por um procedimento de extração em três etapas, de modo a obter uma fração ácida que é solúvel em um solvente polar e em um solvente não polar, e em que o material da goma mástique que é solúvel no solvente polar, mas permanece insolúvel no solvente não polar, é eliminado. Em outras modalidades, os principais compostos da fração ácida isolada foram isolados e identificados. Várias combinações de alguns desses compostos exibem um inesperado efeito sinérgico no tratamento de várias funções neurológicas comprometidas (como, por exemplo, acidente vascular cerebral), e no tratamento de distúrbios neurodege- nerativos relacionados, como a doença de Alzheimer.
[021] Sem vincular-se a qualquer teoria ou mecanismo de ação particular, a atividade das frações ácidas isoladas da goma mástique aqui revelada torna útil a presente invenção para várias doenças ou condições associadas a condições neu- ronais comprometidas, como, por exemplo, melhoria das ligações interneuronais e superação da comunicação interneuronal defeituosa no cérebro e tecido neural afetado por patologias associadas à formação sináptica incorreta. Essa patologia é sub- jacente às patologias do sistema nervoso, incluindo-se, por exemplo, doença de Alzheimer. Demonstra-se que a atividade das frações ácidas isoladas da goma másti- que pode ser utilizada para o tratamento do acidente vascular cerebral. A invenção também pode ser útil para promover a cicatrização de feridas e rejuvenescimento de um grande número de células e tecidos. A invenção também pode ser útil no prolongamento do ciclo de vida dos animais.
[022] É preciso compreender ainda que a atividade biológica das frações e composições aqui reveladas é inibida pela presença de determinados compostos presentes nas frações ácidas que foram preparadas sem aplicar as primeiras duas etapas de extração como aqui reveladas.
[023] De acordo com algumas modalidades, a presente invenção fornece uma composição que compreende uma quantidade eficaz de uma fração ácida isolada da goma mástique, e um veículo farmaceuticamente aceitável; em que a fração é caracterizada pelo fato de ser solúvel em pelo menos um solvente orgânico polar e solúvel em pelo menos um solvente orgânico não polar, e em que a dita fração é substancialmente destituída de compostos que são solúveis no dito solvente orgânico polar, mas insolúveis no dito solvente orgânico não polar.
[024] Em algumas modalidades, a composição é obtida por um processo que compreende as etapas de: (a) tratar a goma mástique com um solvente orgânico polar; (b) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico polar; (c) remover opcionalmente o dito solvente orgânico polar; (d) tratar a fração solúvel obtida na etapa (b) ou (c) com um solvente orgânico não polar, (e) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico não polar; (f) remover opcionalmente o dito solvente orgânico não polar; (g) dissolver a fração obtida na etapa (f) em um solvente orgânico; (h) tratar a solução obtida na etapa (g) com uma solução básica de modo a obter uma fração básica; e (i) acidificar a fração básica obtida na etapa (h) com uma solução ácida;
[025] Em algumas modalidades, as etapas (d) a (f) podem precedem as etapas (a) a (c).
[026] Em algumas modalidades, o tratamento com uma solução básica (basi- ficação) na etapa (h) compreende extrair a solução obtida na etapa (g) com uma ou mais soluções aquosas básicas adequadas; ou contatar a solução obtida na etapa (g) com uma resina de troca iônica básica.
[027] Em algumas modalidades, a etapa (h) compreende contatar a solução obtida na etapa (g) com uma resina de troca iônica básica, e em seguida remover a resina de troca iônica básica por filtração. Nessas modalidades, a etapa (i) compreende tratar a resina de troca iônica básica com uma solução ácida.
[028] Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente as etapas de: (j) extrair a fração acidificada obtida na etapa (i) com um solvente orgânico; (k) contatar opcionalmente a fração orgânica obtida na etapa (j) com um agente de secagem de maneira a remover a água remanescente; (l) remover o solvente orgânico e/ou ácido excedente da fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k); e (m) dissolver a fração isolada obtida na etapa (l) em um veículo.
[029] Em algumas modalidades, as etapas (a) a (c) são conduzidas antes das etapas (d) a (f); ou etapas (d) a (f) são conduzidas antes das etapas (a) a (c). Em algumas modalidades, as etapas (a) a (c) e/ou (d) a (f) são repetidas por múltiplos ciclos.
[030] Em algumas modalidades, qualquer uma das etapas (c), (f) e (l) compreendem remover o solvente utilizando um meio selecionado do grupo formado por evaporação rotativa, aplicação de alto vácuo e uma combinação dos citados.
[031] Em algumas modalidades, a etapa (h) compreende extrair a solução obtida na etapa (g) com uma solução aquosa básica, e coletar a fração orgânica assim obtida. Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente combinar a fração orgânica obtida da etapa (h) com uma fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k).
[032] Em algumas modalidades, a fração orgânica obtida na etapa (h) é combinada com uma fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k) em uma quantidade em uma faixa média de 0,1% a cerca de 50% da fração orgânica obtida da etapa (h). Em algumas modalidades, a quantidade está na faixa de 0,5 a 50%; ou 2 a 25%; ou 0,1 a 10%.
[033] Solventes orgânicos polares adequados para uso na invenção podem ser selecionados entre um álcool, um éter, um éster, uma amida, um aldeído, uma cetona, uma nitrila, e suas combinações.
[034] Exemplos específicos de solventes orgânicos polares adequados incluem metanol, etanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec-butanol, t- butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-metil-1-butanol, 2-metil- 1-butanol, 3-metil-2-butanol, 2-metil-2-butanol, etilenoglicol, etilenoglicol monometil éter, éter dietílico, éter metiletílico, éter etilpropílico, éter metilpropílico, 1,2- dimetoxietano, tetrahidrofurano, dihidrofurano, furano, pirano, dihidropirano, tetrahi- dropirano, acetato de metila, acetato de etila, acetato de propila, acetaldeído, formato de metila, formato de etila, propionato de etila, propionato de metila, diclorometa- no, clorofórmio, dimetilformamida, acetamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, acetona, etilmetil cetona, dietil cetona, acetonitrila, propionitrila, e suas combinações.
[035] Em algumas modalidades, o solvente orgânico polar é selecionado entre metanol e etanol ou uma combinação dos citados.
[036] Em algumas modalidades, o solvente polar é o etanol.
[037] Solventes orgânicos não polares adequados para uso na invenção podem ser selecionados entre hidrocarbonetos alifáticos saturados ou não saturados, acíclicos ou cíclicos e hidrocarbonetos aromáticos, cada um deles é opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, e suas combinações. Em algumas modalidades, o solvente orgânico não polar é selecionado entre alcanos C5-C10, cicloal- canos C5-C10, hidrocarbonetos aromáticos C6-C14 e perfluoralcanos C7-C14, e suas combinações.
[038] Em algumas modalidades, o solvente orgânico não polar é selecionado entre pentanos, hexanos, heptanos, octanos, nonanos, decanos, ciclopentano, ciclo- hexano, cicloheptano, benzeno, tolueno, xileno, e isômeros e suas misturas.
[039] Em algumas modalidades, o alcano C5-C10 é selecionado do grupo formado por pentano, hexano, heptano, octano, nonano, decano, ciclohexano, e isômeros e suas misturas.
[040] Em algumas modalidades, o solvente orgânico não polar é o hexano.
[041] Em algumas modalidades, o solvente orgânico na etapa (g) e na etapa (j) é selecionado independentemente do grupo formado por éteres dialquílicos, éteres de alquil-arila, éteres diarílicos, ésteres, cetonas, hidrocarbonetos halogenados, hidrocarbonetos aromáticos C5-C14, perfluoralcanos C5-C14.
[042] Em algumas modalidades, o solvente orgânico adequado na etapa (g) e na etapa (j) é igual ou diferente.
[043] Em algumas modalidades, o solvente orgânico compreende um éter dialquílico.
[044] Em algumas modalidades, o solvente orgânico é o éter dietílico.
[045] Em algumas modalidades, o solvente orgânico polar compreende eta- nol, o solvente orgânico não polar compreende hexano e o solvente orgânico compreende éter dietílico.
[046] Em algumas modalidades, a etapa (h) compreende a basificação com uma solução aquosa básica. Em algumas modalidades, a solução aquosa básica é preparada dissolvendo-se uma base inorgânica em água.
[047] Em algumas modalidades, a base inorgânica é selecionada do grupo formado por carbonato de sódio, hidróxido de sódio, carbonato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de amônia, bicarbonato de sódio, fosfato de sódio, hidróxido de lítio, carbonato de lítio, e fosfato de potássio.
[048] Em algumas modalidades, a base inorgânica é o carbonato de sódio. Em algumas modalidades, a concentração do carbonato de sódio em água está na faixa de 2 a 20% p/p. Em algumas modalidades, a concentração do carbonato de sódio está na faixa de 3 a 15% p/p. Em algumas modalidades, a concentração do carbonato de sódio é cerca de 5% p/p.
[049] Em algumas modalidades, a base inorgânica é o hidróxido de sódio.
[050] Em algumas modalidades, a solução aquosa básica é preparada dissolvendo-se uma base orgânica solúvel em água em água.
[051] Em algumas modalidades, a primeira base inorgânica é carbonato de sódio aquoso aproximadamente 5% p/p, seguido de hidróxido de sódio aquoso aproximadamente 4% p/p.
[052] Em algumas modalidades, a basificação na etapa (h) compreende contatar a solução obtida na etapa (g) com uma resina de troca iônica básica. Em algumas modalidades, a resina de troca iônica básica compreende divinilbenzeno estire- no, copolímeros poliacrílicos ou formofenólicos.
[053] Em algumas modalidades, a basificação da solução é realizada até um pH superior a cerca de 7.
[054] Em algumas modalidades, a basificação da solução é realizada até uma faixa de pH de 8-10.
[055] Em algumas modalidades, a basificação da solução é realizada até uma faixa de pH de 10-13.
[056] Em algumas modalidades, a basificação da solução é realizada até um pH > 13.
[057] Em algumas modalidades, a solução ácida na etapa (i) compreende uma solução aquosa ácida ou uma solução não aquosa ácida.
[058] Em algumas modalidades, a solução aquosa ácida na etapa (i) é preparada dissolvendo-se um ácido inorgânico em água ou diluindo-se uma solução ácida mineral concentrada.
[059] Em algumas modalidades, a solução aquosa ácida é uma solução de ácido clorídrico ou ácido fosfórico.
[060] Em algumas modalidades, a solução aquosa ácida é uma solução de ácido clorídrico.
[061] Em algumas modalidades, a solução aquosa ácida na etapa (i) é preparada dissolvendo-se um ácido orgânico em água ou diluindo-se uma solução ácida mineral concentrada.
[062] Em algumas modalidades, a acidificação é realizada até um pH inferior a cerca de 7. Em algumas modalidades, a acidificação é realizada até um pH inferior a cerca de 6. Em algumas modalidades, a acidificação é realizada até um pH inferior a cerca de 5. Em algumas modalidades, a acidificação é realizada até um pH inferior a cerca de 4. Em algumas modalidades, a acidificação é realizada até um pH inferior a cerca de 3.
[063] Em algumas modalidades, a acidificação é realizada até um pH na faixa de 1-3.
[064] Em algumas modalidades, a solução não aquosa ácida na etapa (i) é preparada dissolvendo-se um ácido orgânico em um solvente não aquoso orgânico selecionado entre um álcool, um éster, um éter, uma amida ou suas misturas. Em algumas modalidades, o solvente não aquoso é metanol ou etanol ou uma mistura dos citados.
[065] Em algumas modalidades, o ácido orgânico é selecionado do grupo formado por ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido cítrico, ácido tartá- rico, ácido metanossulfônico, e ácido paratoluenossulfônico.
[066] Em algumas modalidades, o agente de secagem utilizado na etapa (k) é selecionado entre o grupo do sulfato de sódio, sulfato de magnésio, sulfato de cálcio, cloreto de cálcio, cloreto de magnésio, sulfato de potássio.
[067] Em algumas modalidades, a composição é substancialmente destituída de compostos de terpeno solúveis no dito solvente orgânico polar e insolúveis no dito solvente orgânico não polar.
[068] Em algumas modalidades, a composição compreende de cerca de 0,01 a cerca de 25% (p/p) da fração ácida isolada da goma mástique, com base no peso total da composição. Em algumas modalidades, a composição compreende de cerca de 0,01 a cerca de 12% (p/p) da fração ácida isolada da goma mástique, com base no peso total da composição.
[069] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada compreende pelo menos um entre: ácido masticadienólico; ácido isomasticadienólico; ácido isomasti- cadienóico; ácido 3-O-acetil masticadienólico; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil isomasticadienólico, ácido 3-O-acetil epi-isomasticadienólico; ácido oleanônico; ácido morônico; e ácido 3-oxo-lup-20(29)-en-28-óico. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[070] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada compreende adicionalmente pelo menos um entre: ácido oleanóico; ácido ursônico; e ácido ursólico. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[071] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada é substancialmente destituída de ácido masticadienólico.
[072] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada pode ser substancialmente destituída de óleos essenciais.
[073] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada compreende pelo menos um ácido terpenóico.
[074] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada compreende pelo menos um ácido triterpenóico.
[075] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido terpenóico compreende pelo menos um ácido triterpenóico. Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico é selecionado do grupo formado por ácido masticadienólico; ácido isomasticadienólico; ácido isomasticadienóico; ácido 3-O-acetil masticadienóli- co; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil isomasticadienólico, ácido 3-O-acetil epi-isomasticadienólico; ácido oleanônico; ácido morônico; ácido 3-oxo- lup-20(29)-en-28-óico e uma combinação dos citados. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[076] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido terpenóico está na forma monomérica. Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido terpenóico está na forma oligomérica. Em algumas modalidades, a forma oligomérica é selecionada entre o grupo formado por um dímero, um trímero, e uma combinação dos citados. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[077] Em algumas modalidades, a forma oligomérica é um dímero.
[078] Em algumas modalidades, a forma oligomérica é um trímero.
[079] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico está na forma monomérica. Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico está na forma oligomérica. Em algumas modalidades, a forma oligomérica é selecionada entre o grupo formado por um dímero, um trímero, e uma combinação dos citados. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[080] Em algumas modalidades, a forma oligomérica é um dímero.
[081] Em algumas modalidades, a forma oligomérica é um trímero.
[082] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada compreende uma combinação de ácidos triterpenóicos monoméricos e diméricos. Em algumas modalidades, a fração ácida isolada compreende uma combinação de ácidos triterpenóicos monoméricos, diméricos e triméricos.
[083] Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos um entre: ácido masticadienólico; ácido isomasticadienólico; ácido isomasticadienóico; ácido 3-O-acetil masticadienólico; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O- acetil isomasticadienólico, ácido 3-O-acetil epi-isomasticadienólico; ácido oleanôni- co; ácido morônico; e ácido 3-oxo-lup-20(29)-en-28-óico. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[084] Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente pelo menos um entre: ácido oleanóico; ácido ursônico; e ácido ursólico. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[085] Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos um ácido terpenóico. Modalidades de ácidos terpenóicos correspondem à descrição adiante.
[086] Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos um ácido triterpenóico. Modalidades de ácidos triterpenóicos correspondem à descrição adiante.
[087] Em algumas modalidades, a composição é substancialmente destituída de ácido masticadienólico.
[088] Em algumas modalidades, a goma mástique é derivada de uma planta classificada na família Anacardiaceae. As plantas adequadas incluem aquelas classificadas em um gênero selecionado do grupo formado por Pistacia, Pinus, Picea, Juniperus, Alsies, Larix, Antirrhinum, Boswellia, Citrus e Gynura.
[089] Em algumas modalidades, as plantas adequadas são selecionadas entre o gênero Pistacia.
[090] Em algumas modalidades, a espécie de Pistacia é selecionada do gru- po formado por P. lentiscus, P. atlantica, P. palestina, P. saportae, P. terebinthus, P. vera e P. integerrima.
[091] Em algumas modalidades, a espécie de Pistacia é Pistacia lentiscus L.
[092] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada é derivada de um material vegetal selecionado do grupo formado por resina, folhas, ramos, raízes, flores, sementes, brotos, casca, nozes e raízes.
[093] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada da goma mástique é obtida por um processo que compreende as etapas de: (a) tratar a goma mástique com um solvente orgânico polar; (b) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico polar; (c) remover opcionalmente o dito solvente orgânico polar; (d) tratar a fração solúvel obtida na etapa (b) ou (c) com um solvente orgânico não polar, (e) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico não polar; (f) remover opcionalmente o dito solvente orgânico não polar; (g) dissolver a fração obtida na etapa (f) em um solvente orgânico; (h) tratamento da solução obtida na etapa (g) com uma solução básica de modo a obter uma fração básica; (i) acidificar a fração básica obtida na etapa (i) com uma solução ácida; (j) extrair a fração acidificada obtida na etapa (i) com um solvente orgânico; (k) contatar opcionalmente a fração orgânica obtida na etapa (k) com um agente de secagem de maneira a remover a água remanescente; (l) remover solvente orgânico e/ou ácido excedente da fração obtida em qualquer uma das etapas(i), (j) ou (k); e (m) dissolver a fração isolada obtida na etapa (l) em um veículo.
[094] Em modalidades adicionais, a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um ácido triterpenóico; e um veículo farma- ceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpe- nóico é selecionado do grupo formado por ácido masticadienólico; ácido isomastica- dienólico; ácido isomasticadienóico; ácido 3-O-acetil masticadienólico; ácido 3-O- acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil isomasticadienólico, ácido 3-O-acetil epi- isomasticadienólico; Ácido masticadienólico, ácido oleanônico; ácido morônico; ácido 3-oxo-lup-20(29)-en-28-óico e uma combinação dos citados. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção.
[095] De acordo com algumas modalidades, a corrente invenção fornece uma composição farmacêutica essencialmente formada por ácido isomasticadienóli- co e ácido masticadienólico como os ingredientes farmaceuticamente ativos; e um veículo farmaceuticamente aceitável. A presença combinada dos dois compostos resulta em um efeito aumentado/sinérgico em relação à eficácia da composição no tratamento da função neurológica comprometida (e, portanto, do tratamento de con- dições/distúrbios neurodegenerativos) quando comparado à eficácia dos compostos individuais.
[096] Tanto o ácido isomasticadienóico quanto o ácido masticadienólico pode ser isolado de uma fonte natural, como goma mástique, ou podem ser o produto de uma síntese química.
[097] Em algumas modalidades, a razão entre o ácido isomasticadienóico e o ácido masticadienólico é de aproximadamente 1:1 p/p.
[098] De acordo com algumas modalidades, a corrente invenção fornece uma composição farmacêutica essencialmente formada por ácido oleanônico, ácido isomasticadienólico e ácido masticadienólico como únicos ingredientes farmaceuti- camente ativos; e um veículo farmaceuticamente aceitável. A presença combinada de todos os três compostos resulta em um nítido efeito sinérgico com relação à eficácia da composição no tratamento da função neurológica comprometida e no tratamento de distúrbios neurodegenerativos quando comparado à eficácia dos com- postos individuais ou uma mistura de somente dois desses três compostos.
[099] Qualquer um entre o ácido oleanônico, ácido isomasticadienólico e ácido masticadienólico pode ser isolado de uma fonte natural, como a goma másti- que, ou pode ser o produto de uma síntese química.
[0100] Em algumas modalidades, a razão entre o ácido isomasticadienóico e o ácido masticadienólico e ácido oleanônico é de aproximadamente 1:1:1 p/p/w.
[0101] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico é um monômero. Em algumas modalidades, a composição compreende o monômero do ácido oleanônico e do ácido morônico. Em algumas modalidades, o monômero do ácido oleanônico e do ácido morônico são os produtos das reações da síntese química.
[0102] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico compreende uma forma oligomérica. Em algumas modalidades, a forma oligomérica é selecionada entre o grupo formado por um dímero, um trímero, e uma combinação dos citados. Cada possibilidade é uma modalidade separada da invenção. Em algumas modalidades, a forma oligomérica é um dímero.
[0103] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico é o produto de uma síntese química.
[0104] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico que compreende uma forma oligomérica é o produto de uma síntese química. Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico é uma forma dimérica e é o produto de uma síntese química.
[0105] Em algumas modalidades, o pelo menos um ácido triterpenóico é derivado de uma fonte natural, em particular uma fonte vegetal.
[0106] Em algumas modalidades, a composição compreende uma combinação de diferentes ácidos triterpenóicos, em que pelo menos em ácido triterpenóico é o produto de uma síntese química e pelo menos outro ácido triterpenóico é derivado de uma fonte vegetal.
[0107] Fontes naturais incluem plantas classificadas na família Anacardiace- ae. As plantas adequadas incluem aquelas classificadas em um gênero selecionado do grupo formado por Pistacia, Pinus, Picea, Juniperus, Alsies, Larix, Antirrhinum, Boswellia, Citrus e Gynura.
[0108] Em algumas modalidades, as plantas adequadas são selecionadas entre o gênero Pistacia.
[0109] Em algumas modalidades, a espécie de Pistacia é selecionada do grupo formado por P. lentiscus, P. atlantica, P. palestina, P. saportae, P. terebinthus, P. vera e P. integerrima.
[0110] Em algumas modalidades, a espécie de Pistacia é Pistacia lentiscus L.
[0111] Em algumas modalidades, a fonte natural é um material vegetal selecionado do grupo formado por resina, folhas, ramos, raízes, flores, sementes, brotos, casca, nozes e raízes.
[0112] Em algumas modalidades, a fonte natural é uma planta classificada em um gênero selecionado do grupo formado por Ocimum, Laurus e Lavendula.
[0113] Em algumas modalidades, o veículo farmaceuticamente aceitável compreende um veículo hidrofóbico. Em algumas modalidades, o veículo hidrofóbico compreende pelo menos um óleo. Em algumas modalidades, o óleo é selecionado entre o grupo formado por um óleo mineral, um óleo vegetal e suas combinações. Em algumas modalidades, o óleo vegetal é selecionado do grupo formado por óleo de semente de algodão, óleo de oliva, óleo de amêndoas, óleo de canola, óleo de coco, óleo de milho, óleo de semente de uva, óleo de amendoim, óleo de açafrão, óleo de gergelim, óleo de soja, e suas combinações. Em algumas modalidades, o óleo mineral é o óleo mineral leve. Em algumas modalidades, o veículo hidrofóbico compreende pelo menos uma cera. Em algumas modalidades, o veículo hidrofóbico compreende uma combinação de pelo menos um óleo e pelo menos uma cera.
[0114] Em várias modalidades, uma composição de acordo com a invenção está em uma forma adequada para administração por uma via selecionada do grupo formado por parenteral, transdérmica, oral e tópica.
[0115] Em várias modalidades, uma composição de acordo com a invenção está em uma forma adequada para administração tópica.
[0116] Em várias modalidades, uma composição de acordo com a invenção está em uma forma adequada para administração oral.
[0117] Em várias modalidades, uma composição de acordo com a invenção está em uma forma adequada para administração parenteral.
[0118] Em algumas modalidades, a composição está em uma forma adequada para administração por injeção. Em várias modalidades, a composição é uma formulação parenteral para administração por uma via selecionada do grupo formado por subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intraarterial, intracerebral, intracerebroventricular, intraóssea e intratecal.
[0119] Em algumas modalidades, a composição é uma formulação parenteral para administração por via subcutânea.
[0120] Em várias modalidades, a composição é uma formulação para administração por uma via selecionada do grupo formado por dérmica, vaginal, retal, inalação, intranasal, ocular, auricular e oral.
[0121] Em algumas modalidades, a composição está em uma forma adequada para administração cosmética ou dermatológica.
[0122] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica está em uma forma selecionada entre o grupo formado por uma cápsula, um comprimido, um li- possoma, um supositório, uma suspensão, uma pomada, um creme, um loção, uma solução, uma emulsão, um filme, um cimento, um pó, uma cola, um aerossol e um borrifador. Em algumas modalidades, a cápsula é selecionada entre o grupo forma- do por uma cápsula de gelatina dura e uma cápsula de gelatina maleável. Em algumas modalidades, a emulsão é uma nanoemulsão ou um microemulsão.
[0123] Em algumas modalidades, a formulação compreende pelo menos um entre complexo de inclusão, uma nanoemulsão, uma microemulsão, um pó, uma balsa lipídica, uma micropartícula lipídica, um dendrímero e um lipossoma. Em algumas modalidades, o complexo de inclusão compreende pelo menos uma ciclodex- trina. Em algumas modalidades, a pelo menos uma ciclodextrina compreende hidro- xipropil-β-ciclodextrina. Em algumas modalidades, a nanoemulsão compreende gotí- culas com tamanho médio de partícula inferior a 800 nm. Em algumas modalidades, as gotículas têm tamanho médio de partícula inferior a 500 nm. Em algumas modalidades, as gotículas têm tamanho médio de partícula inferior a 200 nm. Em algumas modalidades, o pó é um pó seco por aspersão. Em algumas modalidades, o lipos- soma compreende uma vesícula multilamelar. Em algumas modalidades, a microe- mulsão compreende um tensoativo não iônico. Em algumas modalidades, o tensoa- tivo não iônico é selecionado entre o grupo formado por um óleo de rícino polioxil, um éster de ácido graxo de polioxioetileno sorbitol (polissorbatos), um poloxâmero, um derivado da vitamina E, um éter de alquil polioxioetileno, um esterato de polioxi- oetileno, ou glicerídeo poliglicolizado saturado ou suas combinações.
[0124] Em algumas modalidades, a composição é disposta no artigo de manufatura na forma de um revestimento. Em algumas modalidades, o artigo de manufatura compreende um recipiente, no qual a composição é disposta no interior do recipiente. Em algumas modalidades, o artigo de manufatura é selecionado entre o grupo formado por um artigo de tecido, uma fralda, um curativo de ferida, um dispositivo médico, uma agulha ou pluralidade de agulhas, uma microagulha ou pluralidade de microagulhas, um dispositivo de injeção e um dispensador de aspersão. Em algumas modalidades, o artigo de manufatura compreende uma pluralidade de microagulhas. Em algumas modalidades, o dispositivo médico é selecionado entre o grupo formado por um órgão protético, um órgão artificial ou componente dos citados, uma válvula, um cateter, um tubo, um stent, uma membrana artificial, um mar- ca-passo, um sensor, um endoscópio, um dispositivo de imagem, uma bomba, um fio e um implante. Em algumas modalidades, o implante é selecionado entre o grupo formado por um implante cardíaco, um implante coclear, um implante córneo, um implante cranial, um implante dentário, um implante maxilofacial, um implante de órgão, um implante ortopédico, um implante vascular, um implante intra-articular e um implante de mama.
[0125] Em algumas modalidades, a composição é adequada para administração por um meio selecionado do grupo formado por eletroporação, sonicação, frequência de rádio, aspersão pressurizada e suas combinações.
[0126] Em algumas modalidades, a composição é utilizada para o tratamento da função neurológica comprometida. Em algumas modalidades, a função neurológica comprometida compreende a diminuição de uma função selecionada do grupo formado por função cognitiva, função sensorial, função motora e suas combinações. Em algumas modalidades, a função neurológica comprometida é associada a uma condição ou doença. Em algumas modalidades, a condição ou doença é selecionada do grupo formado por doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla, doença de Parkinson, demência vascular e demência senil. Em algumas modalidades, a condição é um trauma ou acidente vascular cerebral.
[0127] Em algumas modalidades, a condição ou doença é um transtorno psiquiátrico, como esquizofrenia, transtorno bipolar ou depressão.
[0128] Em algumas modalidades, a condição ou doença é selecionada entre obesidade, anorexia, caquexia, uma infecção e um distúrbio imunológico.
[0129] Em algumas modalidades, a função neurológica comprometida é decorrente da exposição a uma droga, como um anestésico.
[0130] Em algumas modalidades, a condição ou doença é selecionada do grupo formado por demência vascular, demência senil, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla, doença de Parkinson e acidente vascular cerebral.
[0131] Em algumas modalidades, a condição é acidente vascular cerebral.
[0132] Em algumas modalidades, a condição é trauma.
[0133] Em algumas modalidades, a condição ou doença é selecionada do grupo formado por demência vascular, demência senil, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS) e esclerose múltipla.
[0134] Em algumas modalidades, a condição ou doença é selecionada do grupo formado por demência vascular, demência senil, doença de Alzheimer e esclerose lateral amiotrófica (ALS).
[0135] Em algumas modalidades, a condição ou doença é selecionada do grupo formado por demência vascular, demência senil e doença de Alzheimer.
[0136] Em algumas modalidades, a doença é a doença de Alzheimer.
[0137] Em algumas modalidades, a doença é a esclerose lateral amiotrófica (ALS).
[0138] Em algumas modalidades, a composição é para o tratamento de feridas cutâneas, incluindo-se, por exemplo, uma úlcera venosa da perna, uma úlcera de pressão, uma úlcera do pé diabético, uma queimadura, uma ferida em decorrência de amputação, uma úlcera de decúbito (escaras), um enxerto doador por separação dermoepidérmica, uma área doadora de enxerto de pele, um área de implantação do dispositivo médico, uma ferida provocada por mordida, uma ferida provocada por ulceração pelo frio, uma ferida provocada por perfuração, uma ferida por estilhaço, uma dermoabrasão, uma contusão, uma infecção, uma ferida e uma ferida cirúrgica.
[0139] Em algumas modalidades, a composição é concebida para induzir ou promover a reparação do tecido. Como aqui utilizado, o reparação do tecido com- preende a indução e promoção da regeneração de tecido, incluindo-se tecidos neu- rais.
[0140] Em algumas modalidades, a composição é concebida para induzir ou promover a reparação do tecido depois de uma lesão ou insulto. Em algumas modalidades, a lesão ou insulto é selecionado entre o grupo formado por um infarto do miocárdio, uma embolia pulmonar, um infarto cerebral, doença oclusiva da artéria periférica, uma hérnia, um infarto esplênico, uma úlcera venosa, uma axotomia, um descolamento da retina, uma infecção e um procedimento cirúrgico.
[0141] Em algumas modalidades, a composição é utilizada para induzir ou promover o prolongamento do ciclo de vida em animais. Em algumas modalidades, os animais são selecionados entre o grupo de humanos, mamíferos não humanos, aves e peixes.
[0142] Outros objetivos, recursos e vantagens da presente invenção serão evidenciados a partir da seguinte descrição e dos desenhos.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0143] Figura 1 mostra um cromatograma de HPLC de fase reversa de uma fração ácida isolada de acordo com a invenção. O cromatograma foi obtido utilizando um detector de UV-VIS na detecção de comprimento de onda de 205 nm.
[0144] Figura 2A mostra um cromatograma LC-MS de uma fração ácida isolada de acordo com a invenção, indicativo de uma mistura de dímeros do ácido tri- terpenóico.
[0145] Figura 2B mostra os espectros de massa dos picos principais do cro- matograma da Figura 2A.
[0146] Figura 2C mostra um espectro de massa ampliado do pico no tempo de retenção 6,09 min, mostrado na Figura 2A.
[0147] Figura 2D mostra um espectro de massa ampliado do pico no tempo de retenção 6,17 min, mostrado na Figura2A.
[0148] Figura 3A mostra um espectro de massa TOF de uma fração ácida isolada da goma mástique, indicativo de uma mistura de ácidos triterpênicos mono- méricos e diméricos.
[0149] Figura 3B é a lista do pico para a Figura 3A.
[0150] Figura 4 mostra o cromatograma preparativo da fração ácida isolada preparada de acordo com o Exemplo 1. A numeração do pico corresponde à numeração do pico do cromatograma analítico da Figura 1.
[0151] Figura 5A mostra o espectro de 1H-NMR do ácido morônico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0152] Figura 5B mostra o espectro de 13C-NMR do ácido morônico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0153] Figura 6A mostra o espectro de 1H-NMR do ácido oleanônico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0154] Figura 6B mostra o espectro de 13C-NMR do ácido oleanônico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0155] Figura 7A mostra o espectro de 1H-NMR do ácido masticadienólico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0156] Figura 7B mostra o espectro de 13C-NMR do ácido masticadienólico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0157] Figura 8A mostra o espectro de 1H-NMR do ácido isomasticadienóli- co, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0158] Figura 8B mostra o espectro de 13C-NMR do ácido isomasticadienóli- co, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0159] Figura 9A mostra o espectro de 1H-NMR do ácido 3-(O-Acetil) masti- cadienólico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0160] Figura 9B mostra o espectro de 13C-NMR do ácido 3-(O-Acetil) masti- cadienólico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0161] Figura 10A mostra o espectro de 1H-NMR do ácido 3-(O-Acetil) iso- masticadienólico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0162] Figura 10B mostra o espectro de 13C-NMR do ácido 3-(O-Acetil) iso- masticadienólico, isolado por HPLC preparativa da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 1.
[0163] Figura 11A mostra o efeito da fração ácida preparada de acordo com os ensinamentos de WO 2003/097212 sobre as células ARPE-19.
[0164] Figura 11B mostra o efeito da fração ácida preparada de acordo com o Exemplo 2 da corrente invenção sobre as células ARPE-19.
[0165] Figura 11C mostra o efeito do veículo do óleo de semente de algodão sobre as células ARPE-19.
[0166] Figura 12A mostra o efeito da fração insolúvel em hexano isolada da fração ácida preparada de acordo com os ensinamentos do documento WO2003/097212 sobre as células ARPE-19.
[0167] Figura 12B mostra o efeito da solução etanólica a 1% (p/p) da fração ácida isolada preparada de acordo com o Exemplo 1 da corrente invenção sobre as células ARPE-19.
[0168] Figura 12C mostra o efeito do veículo etanol sobre as células ARPE- 19.
[0169] Figuras 13A-C mostram pictogramas de células tratadas com RPh-Ac (painel superior) ou células não tratadas (veículo, painel inferior) e marcadas com anticorpos (Ab.) para: Sinaptofisina (Figura 13A); Akt fosforilado (pAkSer473) (Figura 13B); para GSK3-betaSer9 fosforilado (Figura 13C).
[0170] Figura 14A mostra gráficos representando os resultados do modelo MCAO de rato em relação ao tempo de remoção da fita adesiva da pata contralateral para diferentes composições da corrente invenção.
[0171] Figura 14B mostra gráficos representando a alterações em número de vezes da linha de base pelas composições: ácido isomasticadienólico (IMDA), ou uma combinação do ácido isomasticadienólico e ácido masticadienólico (IMDA+MDA); ou combinação do ácido oleanônico, ácido isomasticadienólico e mas- ticadienóico (OA+MDA+IMDA), na remoção da fita adesiva da pata contralateral.
[0172] Figura 15 mostra pictográficos de ratos demonstrando o efeito do veículo semente de algodão (painel esquerdo), RPh-Ac (painel intermediário) e a combinação de OA+MDA+IMDA (painel direito) sobre a cicatrização de feridas em ratos do modelo MCAo do Exemplo 5.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0173] Os inventores da presente invenção constataram de maneira inesperada que as frações ácidas isoladas da goma mástique mostram atividade elevada na melhoria ou reversão da função neurológica comprometida, recuperação de acidente vascular cerebral, cicatrização de feridas cutâneas, promoção da reparação do tecido, e promoção do prolongamento do ciclo de vida dos animais.
[0174] Nesse documento descreve-se pela primeira vez que, devido às suas várias atividades na estimulação e indução da regeneração celular, a fração ácida isolada da goma mástique, bem como as combinações de compostos isolados da goma mástique, conforme aqui descrito, podem ser empregados como ingrediente ativo em uma composição farmacêutica para diversas indicações terapêuticas.
[0175] Sob o aspecto vantajoso, as composições da invenção podem ser uti- lizadas em métodos para o tratamento da função neurológica comprometida e con-dições cutâneas. Em contato com células de indivíduos humanos e não humanos, a composição induz a diferenciação celular em uma ampla gama de tecidos, compar-timentos da célula e linhagens celulares, incluindo-se pele, endotélio, membranas mucosas, ossos, tendões e cartilagem. Além disso, a atividade de diferenciação celular da composição farmacêutica pode ser explorada para promover a incorporação in vivo de dispositivos médicos, implantes e transplantes de órgãos. Ademais, a composição farmacêutica pode ser utilizada para promover o prolongamento do ciclo de vida dos animais. Definições
[0176] Como aqui utilizado, os termos “mástique”, “resina da aroeira”, “goma mástique” e “goma de mástique”, são utilizados intercambiavelmente para denominar uma resina lenhosa (também denominada oleoresina) obtida como exsudato de qualquer árvore classificada na família Anacardiaceae. As árvores no gênero Pista- cia, mais notavelmente Pistacia lentiscus L., e em particular a cultivar P. lentiscus L. Cv. Chia (cultivada na ilha grega de Chios), são conhecidas por seu alto rendimento de mástique. Outras variedades incluem P. lentiscus L. var. emarginata Engl., e P. lentiscus L. var. latifolia Coss. Outras espécies de Pistacia incluem, por exemplo, P. atlantica, P. palestina, P. saportae, P. terebinthus, P. vera e P. integerrima.
[0177] Como aqui utilizado, o termo “fração ácida isolada da goma mástique” refere-se a uma fração obtida após a extração da goma mástique com pelo menos um solvente orgânico polar e pelo menos um solvente orgânico não polar, seguida pela extração ácido-base de uma solução do material então obtido e do isolamento da fração ácida resultante. A fração ácida isolada da invenção é solúvel em solventes orgânicos polares e não polares.
[0178] Como aqui utilizado o termo “pluralidade” refere-se a mais de um, pre-ferencialmente mais de dois. Como aqui utilizado o termo “sinérgico” significa mais do que a soma.
[0179] Como aqui utilizado, o termo “extração ácido-base” refere-se a um procedimento no qual uma solução de solvente orgânico contendo componentes não ácidos orgânicos e ácidos orgânicos é tratada/extraída com uma ou mais solu- ção(ões) aquosa(s) básica(s). Em consequência disso, os componentes ácidos orgânicos são desprotonados e então convertidos em suas formas de sal iônico correspondente e em consequência disso dissolverão na dita solução aquosa básica. Os componentes não ácidos orgânicos permanecerão atrás da solução orgânica original. Em seguida, a solução aquosa básica contendo as formas salinas dos componentes ácidos é acidificados, resultando na melhoria das formas ácidas desprotonadas dos componentes ácidos orgânicos. Essas formas ácidas desprotonadas (fração ácida) podem ser removidas da solução aquosa acidificada de diversas maneiras, dependendo das propriedades dos compostos ácidos. Uma opção para remover a fração ácida da solução acidificada é através da extração em um solvente orgânico adequado. O Exemplo 1 é um exemplo não limitante de uma extração ácido-base como descrito acima.
[0180] Dependendo da solubilidade dos compostos ácidos na solução aquosa acidificada, a fração ácida pode ser isolada através de filtração da solução aquosa acidificada.
[0181] Invés de utilizar uma solução aquosa básica para a extração ácido- base, formas básicas das resinas de troca iônica também podem ser utilizadas. Nesses casos, os componentes orgânicos ácidos (fração ácida) são capturados em sua forma iônica desprotonada pela resina. A resina é em seguida removida da solução inicial, deixando para trás os componentes não ácidos. Os componentes ácidos (fração ácida) são em seguida liberados da resina através do tratamento da resina com uma solução ácida adequada.
[0182] O uso de resinas de troca iônica para extrações ácido-base é especi- almente adequado para a extrapolação do processo e pode ser utilizado para o de-senvolvimento dos processos de extração (semi) contínua.
[0183] Exemplos das extrações ácido-base acima e outras variações podem ser encontrados em muitos livros-texto e demais publicações, e são consideradas parte do conhecimento comum do indivíduo versado na técnica. Um exemplo de um livro-texto útil é “Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry”, 5a Edição, 1989, ( p.162-163).
[0184] Como aqui utilizado, o termo “grau de pureza” refere-se ao teor de um composto químico especificado em uma preparação, expresso como percentual em peso por peso do composto químico especificado em relação aos demais compostos químicos na preparação.
[0185] Como aqui utilizado, “compostos de terpeno” refere-se a hidrocarbo- netos contendo isopreno, com unidades de isopreno (CH2=C(CH3)-CH=CH2) na orientação dianteira-traseira. Os hidrocarbonetos de terpeno, de maneira geral, têm a fórmula molecular (C5H8)n, e incluem hemiterpenos, (C5), monoterpenos (C10), ses- quiterpenos (C15), diterpenos (C20), triterpenos (C30), e tetraterpenos (C40) que, respectivamente, têm 1, 2, 3, 4, 6 e 8 unidades de isopreno. Terpenos podem ser ainda classificados como acíclicos ou cíclicos.
[0186] Como aqui utilizado, “terpenóides” e “compostos terpenóides” referem-se intercambiavelmente a compostos relacionados ao terpeno que contêm oxigênio, além das unidades de isopreno, e, portanto, incluem alcoóis, aldeídos e ceto- nas. Os terpenóides são subdivididos de acordo com o número de átomos de carbono de maneira similar ao terpeno, e, dessa maneira, incluem hemiterpenóides, (C5), monoterpenóides (C10), sesquiterpenóides (C15), diterpenóides (C20), triterpenói- des (C30), e tetraterpenóides (C40) que têm respectivamente 1, 2, 3, 4, 6 e 8 unidades de isopreno. O esqueleto dos terpenóides pode diferir da aditividade estrita das unidades de isopreno pela perda ou transferência de um fragmento, em geral de um grupo metila. Exemplos dos monoterpenóides incluem cânfora, eugenol e borneol. Exemplos de diterpenóides incluem fitol e taxol. Exemplos de triterpenóides incluem esqualeno e lanosterol.
[0187] Como aqui utilizado, “ácidos terpenóicos” refere-se a compostos ter- penóides contendo pelo menos um grupo ácido carboxílico. Os ácidos terpenóicos podem conter adicionalmente um ou mais grupos funcionais adicionais contendo oxigênio que compreendam grupos hidroxila, ceto, aldeído, éter (cíclico e não cíclico) e éster (cíclico e não cíclico).
[0188] Como aqui utilizado, “ácidos triterpenóicos” referem-se a compostos triterpenóides contendo pelo menos um grupo ácido carboxílico. Os ácidos triterpe- nóicos podem conter adicionalmente um ou mais grupos funcionais adicionais contendo oxigênio que compreendam grupos hidroxila, ceto, aldeído, éter (cíclico e não cíclico) e éster (cíclico e não cíclico).
[0189] Como aqui utilizado, “uma forma oligomérica de um ácido terpenóico” refere-se a um ácido terpenóide oligomérico no qual as unidades monoméricas são do mesmo ácido terpenóico ou de diferentes ácidos terpenóicos, e são unidos em quaisquer possíveis arranjos, e são ligados um ao outro através de qualquer grupo funcional ou ligação possível, como uma ligação C-C, um grupo éster ou um grupo éter.
[0190] Como aqui utilizado, “uma forma oligomérica de um ácido triterpenói- co” refere-se a um ácido triterpenóide oligomérico no qual as unidades monoméricas são do mesmo ácido triterpenóico ou de diferentes ácidos triterpenóicos, e são unidos em quaisquer possíveis arranjos, e são ligados um ao outro através de qualquer grupo funcional ou ligação possível, como uma ligação C-C, um grupo éster ou um grupo éter.
[0191] Como aqui utilizado, os termos "ácido masticadienólico", "ácido mas- ticadienônico", "masticadienóico" e "masticadienônico" podem ser utilizados inter- cambiavelmente.
[0192] Como aqui utilizado, os termos "ácido isomasticadienólico", "ácido isomasticadienônico", "isomasticadienóico" e "isomasticadienônico" podem ser utilizados intercambiavelmente.
[0193] Como aqui utilizado, “substancialmente destituído” significa que uma preparação ou composição farmacêutica de acordo com a invenção, em geral contendo menos de cerca de 5% da substância declarada. Por exemplo, menos que aproximadamente 3%, menos que 1%, menos que 0,5%, menos que 0,1%.
[0194] Como aqui utilizado, “quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se àquela quantidade de um ingrediente farmacêutico que substancialmente induz, promove ou resulta em um efeito terapêutico desejado.
[0195] Como aqui utilizado, “veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a um diluente ou veículo que é utilizado para aumentar a entrega e/ou propriedades farmacocinéticas de um ingrediente farmacêutico com o qual ele é formulado, mas que por si mesmo não possui efeito terapêutico, nem induz ou causa qualquer efeito indesejável ou reação adversa no indivíduo.
[0196] Como aqui utilizado, “veículo hidrofóbico farmaceuticamente aceitável” refere-se a um veículo ou diluente não polar hidrofóbico no qual uma fração do mástique é dissolvida ou suspensa.
[0197] Como aqui utilizado, “diferenciação celular” refere-se ao processo em que uma célula menos especializada se torna uma célula mais especializada. A diferenciação celular pode ser estabelecida com base em mudanças em qualquer uma das diversas características celulares, incluindo-se, entre outras, tamanho, aparência da organela, potencial da membrana, atividade metabólica, e responsividade aos sinais. Um “grau” particular pode ser atribuído a um tipo de célula para descrever a extensão da diferenciação.
[0198] Como aqui utilizado, “função neurológica comprometida” refere-se a um declínio ou diminuição em pelo menos uma entre a função sensorial, cognitiva ou motora, em comparação a um nível prévio da função ou atividade, e/ou em compa-ração a indivíduos não comprometidos compatibilizados segundo os critérios aceitos.
[0199] Como aqui utilizado, o termo “cerca de” em referência a um valor numérico declarado deve ser entendido como o valor declarado +/- 10%. Ácidos triterpenóicos e frações ácidas isoladas que compreendem ácidos terpenóicos
[0200] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece composições que compreendem combinações específicas de ácidos terpenóicos, como as encontradas nas frações ácidas isoladas da goma mástique. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece composições consistindo em compostos de ácidos triter- penóicos específicos, essas composições sendo mostradas como tendo um efeito sinérgico inesperado em comparação aos mesmos compostos de ácidos triterpenói- cos individuais no tratamento de disfunções neurológicas. Os compostos de ácidos triterpenóicos podem ser de uma fonte vegetal, em particular, a goma mástique, ou podem ser os produtos das reações da síntese química. Em alguns casos, as composições podem corresponder a combinações de compostos, nos quais alguns são sintetizados quimicamente e alguns são derivados de fontes vegetais.
[0201] Espécies vegetais úteis para a obtenção de composições da invenção incluem, sem limitação, as espécies dos gêneros Pistacia, Pinus, Picea, Juniperus, Alsies, Larix, Ocimum, Laurus e Lavendula.
[0202] Espécies úteis de Pistacia incluem, sem limitação, P. lentiscus, P. atlantica, P. palestina, P. saportae, P. terebinthus, P. vera e P. integerrima. .
[0203] Preparações comerciais de mástique estão disponíveis, por exemplo, da Chios Gum Mastic Growers Association, ou de G. Baldwin & Co., Reino Unido.
[0204] Métodos analíticos para determinação da composição química exata da fração ácida isolada obtida da goma mástique incluem ressonância nuclear magnética (por exemplo, 1HNMR e 13CNMR), viscometria, vários métodos de espectro- metria de massa (por exemplo, MALDI-TOF), HPLC, métodos de combinação, como Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS), espectrometria UV-VIS, IR e espectrometria FT-IR e outros métodos como é do conhecimento da técnica.
[0205] O método utilizado para obter frações ácidas isoladas da goma más- tique pode ser descrito da seguinte maneira. Por meio de uma descrição geral, o material vegetal coletado, por exemplo, a goma mástique, é combinado em um recipiente adequado com um solvente adequado, usualmente um solvente polar. Solventes polares adequados incluem, por exemplo, alcoóis, éteres, ésteres, amidas, aldeídos, cetonas, nitrilas e suas combinações.
[0206] Exemplos particulares de solventes orgânicos polares são metanol, etanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec-butanol, t-butanol, 1- pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-metil-1-butanol, 2-metil-1-butanol, 3-metil-2-butanol, 2-metil-2-butanol, etilenoglicol, etilenoglicol monometil éter, éter dietílico, éter metiletílico, éter etilpropílico, éter metilpropílico, 1,2-dimetoxietano, te- trahidrofurano, dihidrofurano, furano, pirano, dihidropirano, tetrahidropirano, acetato de metila, acetato de etila, acetato de propila, acetaldeído, formato de metila, formato de etila, propionato de etila, propionato de metila, diclorometano, clorofórmio, di- metilformamida, acetamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, acetona, etilmetil cetona, dietil cetona, acetonitrila, propionitrila, e suas combinações.
[0207] A goma mástique e o solvente são preferencialmente combinados de maneira que o solvente seja amplamente excedente, por exemplo, 10:1 ou 20:1. A mistura pode ser agitada periodicamente ou continuamente por um período variando de alguns minutos a diversas horas. O solvente pode ser decantado sem qualquer tratamento, ou opcionalmente a mistura pode ser primeiramente submetida à centrifugação em baixa velocidade, por exemplo, a 100 a 2000 rpm, como é do conheci- mento na técnica. O material insolúvel é recuperado do extrato e uma alíquota fresca do solvente é adicionada ao material insolúvel, de maneira que o processo de extração e dissolução é repetido por diversos ciclos, a fim de obter o máximo de compostos solúveis do solvente polar. Depois da etapa de dissolução final, os extratos contendo o material solúvel do solvente polar são combinados e o solvente polar é evaporado (por exemplo, utilizando uma evaporação rotativa, como é do conhecimento na técnica), de maneira a produzir o material solúvel do solvente polar, que pode ser denominado extrato bruto ou da “primeira etapa”.
[0208] O material do extrato da primeira etapa é combinado com um solvente orgânico não polar e extraído por agitação durante um período de 1 a 2 horas. Solventes não polares adequados incluem hidrocarbonetos alifáticos saturados ou não saturados, acíclicos ou cíclicos e hidrocarbonetos aromáticos, por exemplo, al- canos C5-C10, cicloalcanos C5-C10, hidrocarbonetos aromáticos C6-C14, e suas combinações. Cada um deles pode ser opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, por exemplo, perfluoralcanos C7-C14. Exemplos particulares de solventes orgânicos não polares são pentanos, hexanos, heptanos, octanos, nonanos, decanos, ciclopentano, ciclohexano, cicloheptano, benzeno, tolueno, xileno, e isômeros e suas misturas. O material que permanece insolúvel ou que precipita na presença do solvente não polar é removido e descartado. A fração solúvel do solvente não polar é então obtida evaporando-se o solvente não polar (por exemplo, por evaporação rotativa). Essa fração pode ser denominada extrato purificado ou “da segunda etapa”, correspondendo a uma fração isolada da goma mástique que é caracterizada pelo fato de ser solúvel em um solvente polar e em um solvente não polar, ao passo que os materiais solúveis no solvente polar, mas insolúveis no solvente não polar, foram removidos.
[0209] O material do extrato da segunda etapa é em seguida dissolvido em um solvente orgânico e essa solução é extraída repetidamente (por exemplo, quatro vezes) com uma solução aquosa básica. Uma segunda extração com uma solução aquosa básica diferente pode ser realizada. A fração básica então obtida é acidificada com uma solução ácida aquosa diluída para acidificar o pH. A solução aquosa acidificada é extraída diversas vezes com um solvente orgânico. Os extratos do solvente orgânico combinados então obtidos (também denominado “extrato da terceira etapa”) são tratados com um agente de secagem. Essa fração ácida isolada da goma mástique é então obtida evaporando-se o solvente orgânico (por exemplo, por evaporação rotativa). Essa fração é denominada fração ácida isolada da goma más- tique. Etapas intermediárias adicionais de secagem e/ou remoção do solvente po-dem ser conduzidas entre outras etapas, como é do conhecimento na técnica. Como alternativa, o material do extrato da segunda etapa pode ser combinado com uma resina de troca iônica básica, por exemplo, Amberlyst® A26. A resina de troca iônica isolada é tratada com uma solução não aquosa ácida a fim de liberar a fração ácida da resina. A fração ácida isolada é então obtida evaporando-se o solvente não aquoso e qualquer ácido excedente.
[0210] A característica que distingue as frações ácidas isoladas da invenção dos extratos de goma mástique da técnica anterior é que determinados compostos ácidos foram removidos nas duas primeiras etapas do procedimento, o que de outra forma terminaria na fração ácida final. De acordo com os ensinamentos da presente invenção, os compostos ácidos removidos durante as duas primeiras etapas do procedimento de isolamento têm um efeito prejudicial sobre as atividades biológicas benéficas das frações ácidas isoladas aqui reveladas.
[0211] O extrato da terceira etapa pode ainda ser seco, por exemplo, através de tratamento em alto vácuo (por exemplo, <0,01 mbar por até diversos dias) para remover o solvente residual e outros materiais voláteis, pesado e combinado com um solvente orgânico não polar ou outro veículo para efetuar sua dissolução.
[0212] Em algumas modalidades, a fração isolada da invenção pode ser ob- tida por um processo que compreende as etapas de: (a) tratar a goma mástique com um solvente orgânico polar; (b) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico polar; (c) remover opcionalmente o dito solvente orgânico polar; (d) tratar a fração solúvel obtida na etapa (b) ou (c) com um solvente orgânico não polar, (e) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico não polar; (f) remover opcionalmente o dito solvente orgânico não polar; (g) dissolver a fração obtida na etapa (f) em um solvente orgânico; (h) tratar a solução obtida na etapa (g) com uma solução básica de modo a obter uma fração básica; e (i) acidificar a fração básica obtida na etapa (h) com uma solução ácida.
[0213] Em algumas modalidades, o tratamento com uma solução básica (ba- sificação) na etapa (h) compreende extrair a solução obtida na etapa (g) com uma ou mais soluções aquosas básicas adequadas; ou contatar a solução obtida na etapa (g) com uma resina de troca iônica básica. No caso de uma resina de troca iônica básica, a resina podem em seguida ser tratada com uma solução ácida a fim de liberar a fração ácida capturada. A fração ácida isolada é então obtida pela remoção de quaisquer substâncias voláteis utilizando, por exemplo, aplicação de vácuo.
[0214] Em algumas modalidades, a etapa (h) compreende contatar a solução obtida na etapa (g) com uma resina de troca iônica básica, e em seguida remover a resina de troca iônica básica por filtração. A resina de troca iônica básica pode ser em seguida tratada com uma solução ácida a fim de liberar a fração ácida capturada. A fração ácida isolada é então obtida pela remoção de quaisquer substâncias voláteis utilizando, por exemplo, aplicação de vácuo.
[0215] Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente as etapas de: (j) extrair a fração acidificada obtida na etapa (i) com um solvente orgânico; (k) contatar opcionalmente a fração orgânica obtida na etapa (j) com um agente de secagem de maneira a remover a água remanescente; (l) remover solvente orgânico e/ou ácido excedente da fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k); e (m) dissolver a fração isolada obtida na etapa (l) em um veículo.
[0216] O processo pode compreender adicionalmente remover o solvente após qualquer uma das etapas (c), (f) ou (l). A remoção do solvente pode ser realizada utilizando qualquer meio conhecido na técnica, por exemplo, evaporação rotativa, aplicação de alto vácuo e uma combinação dos citados. Em algumas modalidades, as etapas (a) a (c) são conduzidas antes das etapas (d) a (f) ou vice-versa. Em algumas modalidades, o solvente orgânico polar compreende etanol, o solvente orgânico não polar compreende hexano e o solvente orgânico utilizado para a extração ácido-base compreende éter dietílico. Como já é da compreensão do indivíduo versado na técnica, cada uma das etapas (a) a (c) e etapas (d) a (f) podem ser realiza-das independentemente durante vários ciclos para melhorar o processo de extração e o grau de purificação do produto.
[0217] Em algumas modalidades, a etapa (h) compreende extrair a solução obtida na etapa (g) com uma solução aquosa básica, e coletar a fração orgânica dela obtida. Em algumas modalidades, o processo pode compreender adicionalmente combinar a fração orgânica obtida da etapa (h) com uma fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k).
[0218] Em algumas modalidades, a fração orgânica obtida na etapa (h) é combinada com uma fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k) em uma quantidade em uma faixa média de 0,1 a 50% da fração orgânica obtida da etapa (h). Em algumas modalidades, a quantidade está na faixa de cerca de 0,550%; ou 2 a 25%; ou 0,1 a 10%.
[0219] A fração ácida isolada pode compreender pelo menos um ácido ter- penóico, como uma combinação de várias combinações de ácido triterpenóico. Ácidos triterpenóicos incluem, por exemplo, ácido masticadienólico; ácido isomasticadi- enólico; ácido isomasticadienóico; ácido 3-O-acetil masticadienólico; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil isomasticadienólico, ácido 3-O-acetil epi- isomasticadienólico; ácido oleanônico; ácido oleanóico; ácido ursônico; ácido ursóli- co; ácido morônico; e ácido 3-oxo-lup-20(29)-en-28-óico.
[0220] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada pode compreender pelo menos dois compostos de ácido terpenóico, selecionados entre, por exemplo, ácido masticadienólico; ácido isomasticadienólico; ácido isomasticadienóico; ácido 3- O-acetil masticadienólico; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil iso- masticadienólico, ácido 3-O-acetil epi-isomasticadienólico; ácido oleanônico; ácido oleanóico; ácido ursônico; ácido ursólico; ácido morônico; e ácido 3-oxo-lup-20(29)- en-28-óico.
[0221] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada pode compreender pelo menos três compostos de ácido terpenóico, selecionados entre, ácido mastica- dienólico; ácido isomasticadienólico; ácido isomasticadienóico; ácido 3-O-acetil mas- ticadienólico; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil isomasticadienó- lico, ácido 3-O-acetil epi-isomasticadienólico; ácido oleanônico; ácido oleanóico; ácido ursônico; ácido ursólico; ácido morônico; e ácido 3-oxo-lup-20(29)-en-28-óico.
[0222] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada pode compreender pelo menos dois compostos de ácido terpenóico, selecionados entre, ácido mastica- dienólico, ácido isomasticadienólico, e ácido oleanônico.
[0223] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada pode ser substancialmente destituída de ácidos triterpenóicos particulares, como, por exemplo, ácido masticadienólico, ou ácido morônico. Cada possibilidade é uma modalidade separada.
[0224] Em algumas modalidades, a fração ácida isolada pode ser substancialmente destituída de óleos essenciais.
[0225] Ademais, o ácido terpenóico e ou ácidos triterpenóicos na fração ácida isolada podem estar na forma monomérica, ou na forma oligomérica, como um dímero, um trímero, ou suas combinações. Composições farmacêuticas
[0226] A composição para uso na invenção compreende uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de uma fração ácida isolada da goma mástique aqui descrita, e um veículo hidrofóbico farmaceuticamente aceitável.
[0227] A invenção fornece ainda uma composição que compreende pelo menos um ácido triterpenóico; e um veículo farmaceuticamente aceitável. O ácido triterpenóico pode ser isolado de um produto vegetal, como goma mástique, como já descrito, ou pode ser o produto de uma síntese química. Ademais, a composição pode compreender uma combinação de ácidos triterpenóicos, alguns dos quais são sintetizados quimicamente, e alguns dos quais são isolados de um ou mais produtos vegetais. Em algumas modalidades, a composição pode consistir de pelo menos dois compostos de ácidos triterpenóicos como os ingredientes farmaceuticamente ativos, e um veículo farmaceuticamente aceitável. Além disso, a composição pode compreender formas diméricas, triméricas e formas oligoméricas mais elevadas dos ácidos triterpenóicos; os oligômeros podem ser formados por ácidos triterpenóicos monoméricos iguais e diferentes. Em algumas modalidades, a composição pode consistir de pelo menos três compostos de ácidos triterpenóicos como os ingredientes farmaceuticamente ativos, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0228] Para a preparação de uma composição para uso terapêutico, veícu- loes adequados podem ser utilizados, tais como veículoes hidrofóbicos que incluem óleos farmaceuticamente aceitáveis, opcionalmente em combinação com ceras, conforme aqui descrito.
[0229] Um veículo hidrofóbico compreende pelo menos um óleo, como, por exemplo, um óleo mineral, um óleo vegetal ou suas combinações.
[0230] O termo "óleo mineral" refere-se a um líquido límpido e incolor, praticamente inodoro e sem sabor obtido da destilação do petróleo. Ele também pode ser denominado óleo branco, óleo mineral branco, petrolato líquido, parafina líquida ou óleo de parafina branca. De acordo com algumas modalidades da invenção, o óleo mineral é óleo mineral leve, um produto comercialmente disponível que pode ser obtido tanto como um produto de grau NF (National Formulary) ou como um produto de grau USP (US Pharmacopoeia). Para uso na invenção, o óleo mineral está preferencialmente desprovido de substâncias aromáticas e compostos insaturados.
[0231] Óleos vegetais adequados incluem, mas não estão limitados a, óleo de semente de algodão, óleo de oliva, óleo de amêndoas, óleo de canola, óleo de coco, óleo de milho, óleo de semente de uva, óleo de amendoim, óleo de açafrão, óleo de gergelim, óleo de soja, ou suas combinações. Em algumas modalidades, o óleo mineral é o óleo mineral leve.
[0232] O veículo farmaceuticamente aceitável, como alternativa ou em adição, pode compreender uma substituição do óleo. As substituições do óleo incluem alcanos dotados de pelo menos 10 carbonos (por exemplo, isohexadecano), ésteres de benzoato, ésteres alifáticos, ésteres não comedogênicos, compostos de silicone voláteis (por exemplo, ciclometicona), e substitutos de silicone voláteis. Exemplos de ésteres de benzoato incluem benzoato de alquila C12C15, benzoato de isostearila, benzoato de 2-etil hexila, benzoato de dipropileno glicol, benzoato de octildodecil, benzoato de estearila, e benzoato de behenila. Exemplos de alifáticos incluem octa- noato de alquila C12C15 e maleato de dioctila. Exemplos de ésteres não comodegêni- cos incluem isononanoato de isononila, isononanoato de isodecila, dilinoleato díme- ro de diisostearila, propionato de araquidila, e isononanoato de isotridecila. Exemplos de substitutos de silicone voláteis incluem decanoato de isohexila, isononanoato de octila, octanoato de isononila, e dioctanoato de dietileno glicol.
[0233] A ciclometicona é um silicone evaporativo que pode ser incluído no veículo para auxiliar na elaboração da composição propício à ejeção de um dispen- sador de aspersão. Ademais, devido à sua propriedade evaporativa, a ciclometicona pode auxiliar na retenção e fixação da formulação na superfície sobre a qual é aspergida, por exemplo, o local de uma ferida.
[0234] O veículo hidrofóbico pode compreender adicionalmente pelo menos uma cera. Ceras incluem, por exemplo, cera de abelha; ceras vegetais, ceras da cana-de-açúcar, ceras minerais, e ceras sintéticas. Ceras vegetais incluem, por exemplo, cera de carnaúba, candelila, ouricuri e jojoba. Ceras minerais incluem, por exemplo, cera de parafina, cera de lignita, ceras microcristalinas e ozoqueritas. Ceras sintéticas incluem, por exemplo, ceras de polietileno.
[0235] A composição farmacêutica pode ser formulada em qualquer uma de várias formas, tais como, por exemplo, uma cápsula (incluindo-se uma cápsula de gel maleável), um comprimido, um gel, um lipossoma, um supositório, um suspensão, uma pomada, uma solução, uma emulsão ou microemulsão, um filme, um cimento, um pó, uma cola, um aerossol, um borrifador e um gel.
[0236] Para preparar a composição farmacêutica, a fração ácida isolada da goma mástique podem ser formulada convenientemente como complexos de inclusão, nanoemulsões, microemulsões, pós e lipossomas. Em algumas modalidades, um complexo de inclusão compreende pelo menos uma ciclodextrina. Em algumas modalidades, as ciclodextrinas compreendem hidroxipropil-β-ciclodextrina. Em algumas modalidades, as nanoemulsões compreendem gotículas com tamanho médio de partícula inferior a 800 nm. Em algumas modalidades, as gotículas têm tamanho médio de partícula inferior a 500 nm. Em algumas modalidades, as gotículas têm tamanho médio de partícula inferior a 200 nm. Em algumas modalidades, os pós são pós secos por aspersão. Em algumas modalidades, os lipossomas compreendem vesículas multilamelares. Em algumas modalidades, uma microemulsão compreende um tensoativo não iônico. Os tensoativos não iônicos incluem, sem limitação, óleos de rícino polioxil, ésteres de ácido graxo de polioxioetileno sorbitol (polissorbatos), um poloxâmero, um derivado da vitamina E, éter de alquil polioxioetilenos, esterato de polioxioetilenos, glicerídeo poliglicolizado saturados ou suas combinações.
[0237] Várias formulações da fração ácida isolada da goma mástique e da sua preparação são aqui reveladas nos Exemplos 7-11. As composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas por qualquer meio que alcance o propósito pretendido. Por exemplo, a administração pode ocorrer por vias, por exemplo, oral, parenteral, tópica, transdérmica, como, por exemplo, vias de administração subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intra-arterial, intrauterina, intrauretal, intracardial, intracerebral, intracerebroventricular, intrarrenal, intra-hepática, intratendão, intraóssea, intratecal, dérmica, vaginal, retal, inalação, intranasal, ocular, auricular e oral.
[0238] A administração, além disso, pode compreender uma técnica ou meio, como a eletroporação, ou sonicação, para auxiliar na entrega, por exemplo, transdérmica. Outras técnicas que podem ser empregadas incluem, por exemplo, frequência de rádio ou aplicação por aspersão pressurizada.
[0239] A dosagem administrada dependerá da idade, estado de saúde, e peso do indivíduo, o uso de tratamento concomitante, se houver, frequência de tratamento, e da natureza do efeito desejado. A quantidade da fração ácida isolada da goma mástique da presente invenção em qualquer unidade de forma de dosagem compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz que pode variar dependendo do indivíduo que a recebe, via e frequência de administração.
[0240] De maneira geral, a quantidade da fração ácida isolada da goma mástique presente na composição farmacêutica pode estar convenientemente na faixa de cerca de 0,01% a cerca de 50%, como, 0,01% a cerca de 25%, como 0,01% a cerca de 12%, em peso por peso, com base no peso total da composição. Para o uso tópico, o percentual da fração ácida isolada da goma mástique na composição pode estar na faixa de cerca de 0,05% a cerca de 2,5%. Para administração por injeção, o percentual da fração ácida isolada da goma mástique na composição pode estar convenientemente na faixa de cerca de 0,1% a cerca de 7%. Para administração oral, o percentual da fração ácida isolada da goma mástique na composição pode estar na faixa de cerca de 0,005% a cerca de 7%.
[0241] Nas modalidades exemplificativas, as quantidades do ácido mastica- dienólico e do ácido isomasticadienólico nas composições consistindo emsses dois compostos como ingrediente ativos podem estar na faixa aproximada de 0,05% a cerca de 20% para cada composto. Para administração por injeção, a quantidade de cada um pode estar na faixa de cerca de 0,1% a cerca de 10%. Para administração tópica, a quantidade de cada um pode estar na faixa de cerca de 0,5% a cerca de 12%. Para administração oral, a quantidade de cada um pode estar na faixa de cerca de 0,5% a cerca de 15%.
[0242] Nas modalidades exemplificativas, a quantidade do ácido oleanônico, ácido masticadienólico e ácido isomasticadienólico nas composições consistindo emsses três compostos como os ingrediente ativos pode estar na faixa aproximada de 0,05% a cerca de 15% para cada composto. Para administração por injeção, a quantidade de cada um pode estar na faixa de cerca de 0,1% a cerca de 10%. Para administração tópica, a quantidade de cada um pode estar na faixa de cerca de 0,5% a cerca de 12%. Para administração oral, a quantidade de cada um pode estar na faixa de cerca de 0,5% a cerca de 15%.
[0243] As composições farmacêuticas da invenção podem ser fabricadas de maneira intrinsecamente conhecida por um indivíduo versado na técnica, por exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, granulação, produção de drá- geas, encapsulação em softgel, dissolução, extração, ou liofilização. Composições farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas combinando os compostos ativos com excipientes sólidos e semissólidos e conservantes e/ou antioxidantes adequados. Opcionalmente, a mistura resultante pode ser triturada e processada. A mistura de grânulos resultante pode ser utilizada, após adição dos agentes auxiliares adequados, se necessário, para obter comprimidos, softgels, cápsulas, ou núcleos da drágea.
[0244] Excipientes adequados, em particular, são cargas como sacarídeos, por exemplo, lactose ou sacarose, manitol ou sorbitol; preparações de celulose e/ou fosfatos de cálcio, por exemplo, trifosfato de cálcio ou hidrogenofosfato de cálcio; bem como aglutinantes, como pasta de amido, utilizando, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, tragacanto, metil celulose, hidroxipropilmetilcelulose, sódio carboximetilcelulose, e/ou polivinil pirroli- dona. Se desejado, agentes desintegrantes podem ser adicionados, como os amidos mencionados e ainda o amido de carboximetil, polivinil pirrolidona reticulada, agar, ou ácido algínico ou um sal dos citados, como alginato de sódio. Agentes auxiliares são agentes reguladores do fluxo e lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico ou seus sais, como estearato de magnésio ou estearato de cálcio, e/ou polie- tileno glicol. Núcleos da drágea são guarnecidos com revestimentos adequados os quais, se desejado, são resistentes aos sucos gástricos. Para tal finalidade, soluções sacarídicas concentradas podem ser utilizadas, as quais podem conter opcionalmente goma arábica, talco, polivinil pirrolidona, polietileno glicol e/ou dióxido de titânio, soluções envernizantes e solventes orgânicos ou misturas de solvente adequadas. Para produzir revestimentos resistentes a sucos gástricos, são utilizadas soluções de preparações de glicose adequadas, como ftalato de acetilcelulose ou ftalato de hidroxipropilmetil-celulose. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos revestimentos de comprimidos ou drágeas, por exemplo, para identificação ou a fim de caracterizar combinações de doses do composto ativo.
[0245] Outras composições farmacêuticas para uso oral incluem cápsulas do tipo push-fit feitas de gelatina, bem como cápsulas seladas e maleáveis feitas de gelatina e um plastificante, como glicerol ou sorbitol. As cápsulas do tipo push-fit podem conter os compostos ativos na forma de grânulos, os quais podem ser misturados às cargas, como lactose; aglutinantes, como amidos; e/ou lubrificantes, como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes. Nas cápsulas maleáveis, os compostos ativos são preferencialmente dissolvidos ou dissolvidos em líquidos adequados, como óleos graxos, ou parafina líquida. Além disso, estabilizan- tes podem ser adicionados.
[0246] Outras composições farmacêuticas para uso oral incluem um filme concebido para aderir à mucosa oral, conforme revelado, por exemplo, nas Patentes dos Estados Unidos N° 4.713.243; 5.948.430; 6.177.096; 6.284.264; 6.592.887, e 6.709.671.
[0247] Composições farmacêuticas na forma de supositórios consistem de uma combinação de composto(s) ativo(s) com uma base de supositório. Bases de supositório adequadas incluem, por exemplo, triglicerídeos sintéticos ou naturais, polietileno glicóis, ou hidrocarbonetos de parafina.
[0248] Formulações para administração parenteral incluem suspensões e dispersões de micropartícula dos compostos ativos conforme apropriado. Em algumas modalidades, suspensões de injeção oleosa podem ser administradas. Veículos ou solventes lipofílicos adequados incluem óleos graxos, por exemplo, óleo de gergelim, ou ésteres de ácido graxo sintético, por exemplo, oleato de etila, triglicerídeos, polietileno glicol-400, cremofor, ou ciclodextrinas. Suspensões de injeção que podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão incluem, por exemplo, carboximetil celulose de sódio, sorbitol, e/ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizantes.
[0249] Composições farmacêuticas também podem ser preparadas utilizan- do lipossomas compreendendo o ingrediente ativo. Como é do conhecimento na técnica, lipossomas são em geral derivados de fosfolipídios ou de outras substâncias lipídicas. Lipossomas são formados por cristais líquidos monohidratados ou multila- melares que são dispersos em um meio aquoso. Qualquer lipídio metabolizável não tóxico e fisiologicamente aceitável capaz de formar lipossomas pode ser utilizado. De maneira geral, os lipídios preferenciais são fosfolipídios e as fosfatidil colinas (lecitinas), tanto naturais quanto sintéticas. Métodos para formar lipossomas são conhecidos na técnica, conforme revelado, por exemplo, em Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, Nova York, N.Y. (1976) e na Patente dos Estados Unidos N° 7.048.943.
[0250] Formulações para administração tópica incluem pomadas. Veículoes adequados incluem óleos vegetais ou minerais, petrolato branco, óleos ou gordura de cadeia ramificada, ceras e gorduras animais. Os veículoes preferenciais são aqueles nos quais o ingrediente ativo é solúvel. Estabilizantes, umectantes e antioxi- dantes também podem ser incluídos, bem como agentes que conferem cor ou fragrância, se desejado. Pomadas podem ser formuladas, por exemplo, misturando-se uma solução do ingrediente ativo em um óleo vegetal, como óleo de amêndoas, com parafina macia aquecida, e deixando a mistura resfriar.
[0251] A composição farmacêutica pode compreender uma emulsão óleo- em-água ou microemulsão a fim de facilitar sua formulação para uso oral, parenteral ou tópico. Tais emulsões/microemulsões incluem de maneira geral lipídios, tensoati- vos, opcionalmente umectantes, e água. Lipídios adequados incluem aqueles de maneira geral conhecidos por sua utilidade na criação de emulsões/microemulsões óleo-em-água, por exemplo, ésteres glicerídicos de ácido graxo. Tensoativos adequados incluem aqueles de maneira geral conhecidos por sua utilidade na criação de emulsões/microemulsões óleo-em-água nas quais os lipídios são utilizados como o componente óleo na emulsão. Tensoativos não iônicos podem ser preferenciais, como por exemplo, óleo de rícino etoxilado, fosfolipídios, e copolímeros de bloco de óxido de etileno e óxido de propileno. Umectantes adequados, se utilizados, incluem, por exemplo, propileno glicol ou polietileno glicol.
[0252] A composição farmacêutica pode ser formulada na forma de um gel, como um hidrogel formado por um polímero formador de gel como carragena, goma xantana, goma caraia, goma de acácia, goma locusta, goma guar. Um hidrogel pode ser combinado com uma emulsão óleo-em-água que compreenda o ingrediente ativo.
[0253] A composição farmacêutica pode ser formulada na forma de um cimento como aqueles que compreendem polimetilmetacrilato (PMMA) ou fosfato de cálcio, como utilizados na cirurgia ortopédica.
[0254] A composição farmacêutica pode ser formulada na forma de um pó, em particular como aqueles utilizados em aplicações transdérmicas utilizando frequência de rádio, conforme descrito, por exemplo, nas Patentes dos Estados Unidos N° 6.074.688 e 6.319.541 e WO 2006/003659.
[0255] A composição farmacêutica pode ser formulada na forma de uma cola, como aquelas que compreendem octocianoacrilato utilizado para aplicações na cicatrização de feridas. Usos terapêuticos
[0256] A presente invenção fornece usos e métodos terapêuticos para o tratamento da função neurológica comprometida, tratamento de distúrbios da pele e do couro cabeludo, induzindo a reparação de tecido e feridas em um indivíduo necessitado desses procedimentos. Os métodos compreendem administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição que compreende uma fração ácida isolada da goma mástique, conforme aqui descrito. Em algumas modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuti- camente eficaz de uma composição que compreende uma combinação de pelo me- nos dois ácidos triterpenóicos selecionados entre: ácido masticadienólico; ácido isomasticadienólico; ácido isomasticadienóico; ácido 3-O-acetil masticadienólico; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil isomasticadienólico, ácido 3-O- acetil epi-isomasticadienólico; e ácido oleanônico. Em outras modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição que compreende uma combinação de pelo menos dois ácidos tri- terpenóicos selecionados entre o ácido masticadienólico; ácido isomasticadienólico e ácido oleanônico.
[0257] Em algumas modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição que compreende ácidos triterpenóicos consistindo em ácido masticadienólico e ácido isomasticadi- enólico. Em outras modalidades exemplificativas, o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição que compreende ácidos triterpenóicos consistindo em ácido oleanônico, ácido masticadienó- lico e ácido isomasticadienólico.
[0258] A etapa de administração das composições pode compreender qualquer via aceitável incluindo-se oral, tópica, parenteral, e transdérmica, como, por exemplo, a administração parenteral inclui vias de administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, intradérmica, intraperitoneal, intra-arterial, intrauterina, intrau- retral, intracardial, intracerebral, intracerebroventricular, intrarrenal, intra-hepática, intratendão, intraóssea, intratecal, dérmica, vaginal, retal, inalação, intranasal, ocular, auricular e oral.
[0259] Em algumas modalidades, a etapa de administrar compreende contatar células de um tipo particular, de uma linhagem particular ou em um estágio particular de diferenciação, com a composição. As células podem ser qualquer uma de uma ampla variedade de tipos de célula, incluindo-se em particular, células neurais, células neuronais, células endoteliais, células epiteliais e células-tronco das ditas linhagens. Ademais, as células podem ser de qualquer linhagem, por exemplo, linhagens ectodérmica, mesodérmica, entodérmica e células-tronco das ditas linhagens. Em várias modalidades, a etapa de contatar células é realizada in vivo, ex vivo ou in vitro. Em algumas modalidades, as células que serão contatadas são células- tronco e o contato das células é realizado in vivo, ex vivo e in vitro. Em algumas modalidades, as células-tronco são contatadas in vivo. Em algumas modalidades, as células-tronco são contatadas ex vivo. Em algumas modalidades, as células-tronco são contatadas in vitro.
[0260] O método aqui revelado para o tratamento da função neurológica comprometida é particularmente vantajoso indivíduos que sofrem com doenças e condições neurodegenerativas, incluindo-se em particular, trauma, acidente vascular cerebral, demência vascular, demência senil, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla (MS), e doença de Parkinson.
[0261] Em outros casos, o método pode ser aplicado em indivíduos que sofrem em decorrência do comprometimento da função neurológica em decorrência de uma infecção (por exemplo, viral, bacteriana, fúngica, parasítica).
[0262] Em algumas modalidades o método pode ser aplicado em indivíduos que sofrem em decorrência da função neurológica comprometida resultante de distúrbio imunológico.
[0263] Em algumas modalidades, a função neurológica comprometida é uma decorrência da exposição a uma droga, como um anestésico.
[0264] Em algumas modalidades, a função neurológica comprometida também pode estar associada a uma condição selecionada do grupo formado por esquizofrenia, transtorno bipolar, depressão, obesidade, anorexia e caquexia.
[0265] Em algumas modalidades, distúrbios da pele e do couro cabeludo incluem todos os distúrbios da pele, couro cabeludo e apêndices pilosos, inclusive, por exemplo, unhas e folículos pilosos. Condições particulares que podem se beneficiar da invenção incluem alopecia, eczema, psoríase, ceratose seborreia, seborreia e feridas cutâneas. Feridas cutâneas incluem úlceras venosas da perna, úlceras provocadas por pressão, úlceras do pé diabético, queimaduras, feridas de amputação, úlcera de decúbitos (escaras), enxerto doador por separação dermoepidérmicas, áreas de doação de enxertia cutânea, áreas de implantação de dispositivos médicos, feridas provocadas por mordidas, feridas provocadas por baixas temperaturas, feridas provocadas por perfuração, ferida por estilhaços, dermoabrasões, contusões, feridas infecciosas e feridas cirúrgicas. Feridas podem resultar de infecção; exposi-ção à radiação ionizante; exposição a laser, ou exposição a um agente químico.
[0266] Em algumas modalidades, a invenção pode ser eficaz e econômica para o tratamento de feridas crônicas sem cicatrização. Como é do conhecimento de um indivíduo versado na técnica básica, a eficácia de um tratamento particular na promoção da cicatrização de feridas pode ser avaliada por meio de vários critérios, incluindo-se a taxa de cicatrização medida em termos de comprimento, largura e profundidade da ferida ao longo do tempo, taxa de epitelização, formação do tecido de granulação e resistência do tecido à tensão.
[0267] Em algumas modalidades, a invenção pode ser particularmente eficaz para induzir e promover o prolongamento do ciclo de vida em humanos, mamíferos não humanos, aves e peixes.
[0268] Em algumas modalidades, os métodos aqui revelados para induzir ou promover regeneração de tecido são particularmente vantajosos para indivíduos portadores de tecido lesados, que, por exemplo, podem ser associados ou ser o resultado de uma lesão ou insulto. Os métodos para induzir ou promover a regeneração de tecido podem ser utilizados em indivíduos que tenham sofrido uma lesão ou insulto selecionado entre o grupo formado por um infarto do miocárdio, um embolia pulmonar, um infarto cerebral, doença oclusiva da artéria periférica, uma hérnia, um infarto esplênico, uma úlcera venosa, uma axotomia, um descolamento da retina, uma ferida (por exemplo, uma ferida provocada por queimadura, ferida provocada por mordida, uma ferida provocada por ulceração pelo frio, uma ferida provocada por perfuração, uma ferida por estilhaço, uma contusão, uma ferida infecciosa ou uma ferida cirúrgica), uma infecção e um procedimento cirúrgico. Em algumas modalidades, a invenção pode ser eficaz para o reparo de feridas sem deixar cicatrizes.
[0269] Em algumas modalidades, o método pode ser realizado antes ou depois da implantação de um dispositivo médico no indivíduo. Dispositivos médicos incluem, mas não estão limitados a, um membro protético, um órgão artificial ou componente do mesmo, uma válvula, um cateter, um tubo, um stent, uma membrana artificial, um marca-passo, um sensor, um endoscópio, um dispositivo de imagem, uma bomba, um fio e um implante. Implantes incluem, mas não estão limitados a, um implante cardíaco, um implante coclear, um implante córneo, um implante cranial, um implante dentário, um implante maxilofacial, um implante de órgão, um implante ortopédico, um implante vascular, um implante intra-articular e um implante de mama.
[0270] Em algumas modalidades, o dispositivo médico é um implante de órgão, que em determinado casos pode compreender células autólogas do indivíduo.
[0271] Em algumas modalidades, a etapa de contatar compreende um meio selecionado do grupo formado por eletroporação, sonicação, frequência de rádio, aspersão pressurizada e suas combinações.
[0272] Em algumas modalidades, a etapa de contatar compreende estabelecer contato entre o fluido intersticial e a composição. Isso pode ser particularmente vantajoso para feridas que são cercadas por fluido intersticial. O contato entre o fluido intersticial e a composição pode ser realizado perfurando e/ou irritando a derme com uma agulha, uma microagulha, ou um aparelho que compreende uma pluralidade de agulhas ou microagulhas. Essas agulhas ou microagulhas preferencialmente não são ocas e podem assumir uma pluralidade de formas, por exemplo, aparelho em forma de escova ou pente.
[0273] O método da invenção é adequado para aplicação em humanos, mamíferos não humanos, peixes e aves. Artigos de manufatura
[0274] O método da invenção pode englobar o uso de um artigo de manufatura que incorpora a composição compreendendo a fração ácida isolada da goma mástique aqui descrita.
[0275] A composição farmacêutica pode estar na forma de um revestimento sobre o artigo de manufatura, ou pode estar contida em um recipiente integrado ao artigo de manufatura. A composição farmacêutica está vantajosamente presente como um revestimento em dispositivos que são inseridos no corpo e concebidos para integração ao mesmo, por exemplo, um implante. A composição farmacêutica pode então promover a cicatrização do tecido no implante em virtude da atividade da fração ácida isolada da goma mástique na indução da diferenciação celular.
[0276] A composição farmacêutica pode ser incorporada com vantagens sobre ou em artigos utilizados na cicatrização de feridas ou reparação do tecido, por exemplo, uma atadura ou bandagem. A composição farmacêutica pode então promover a cicatrização de feridas em virtude da atividade da fração ácida isolada da goma mástique na indução da diferenciação celular.
[0277] Em outros casos, a composição farmacêutica pode ser incorporada a um dispositivo de entrega como uma agulha, um dispositivo de injeção ou um dis- pensador de aspersão a partir do qual a composição é entregue a uma área do corpo necessitando de terapia, por exemplo, o local de uma ferida.
[0278] Artigos de manufatura incluem, mas não estão limitados a, um artigo de tecido, uma fralda, um curativo de ferida, um dispositivo médico, uma agulha, uma microagulha, um dispositivo de injeção e um dispensador de aspersão. Em algumas modalidades, o artigo de manufatura compreende uma pluralidade de micro- agulhas. Os dispositivos médicos e implantes correspondem à descrição adiante.
[0279] Os exemplos a seguir são apresentados com a finalidade de ilustrar de maneira mais completa determinadas modalidades da invenção. No entanto, não devem de forma alguma seres interpretados como uma limitação do escopo abrangente da invenção. Um indivíduo versado na técnica pode intuir diversas variações e modificações dos princípios aqui revelados sem desvirtuar o escopo da invenção. EXEMPLOS Exemplo 1 Preparação da fração ácida isolada da goma mástique.
[0280] Resina da aroeira (10 g) foi combinada com etanol absoluto (200 ml) e a mistura repousou de um dia para o outro. A mistura foi agitada a 150 rpm por ca.15 minutos, deixando uma goma insolúvel no fundo do frasco. Todas as partículas insolúveis maiores foram deixadas em decantação por mais 20 minutos, e o eta- nol foi transferido para um novo frasco. O restante foi agitado com uma porção fresca de etanol absoluto (150 ml) a 200 rpm por 10 minutos. Essa fração de etanol foi combinada com a primeira fração. O procedimento foi repetido com outra porção de 150 ml de etanol absoluto que foi combinada com as duas primeiras porções de eta- nol. Em seguida, o etanol foi removido in vacuo utilizando um evaporador rotativo (temperatura em banho maria de 30 °C). Adicionou-se hexano (300 ml) ao resíduo remanescente e a mistura agitada a 150 rpm por duas horas. Após repouso de um dia para o outro no frasco fechado para a dissolução completa do material solúvel e para a precipitação de qualquer material insolúvel, a solução límpida de hexano foi transferida para um frasco previamente pesado e limpo e o hexano foi removido utilizando um evaporador rotativo, produzindo ca. 6 gramas de material extraído. O material extraído obtido foi em seguida dissolvido em éter dietílico (300 ML) e extraído com uma solução aquosa de carbonato de sódio 5% (4x100 ML), seguida pela extração com hidróxido de sódio aquoso 0,1 N (3x100 ML). Os dois extratos aquosos básicos foram acidificados separadamente até o pH 1-2 pela adição lenta do ácido clorídrico aquoso 10% e em seguida extraído com éter dietílico fresco (3x100 ML). As frações de éter então obtidas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro. Após filtragem do sulfato de sódio, o éter dietílico foi removido utilizando um evaporador rotativo. Isso produziu ca. 3 gramas da fração ácida isolada da goma mástique como um sólido branco.
[0281] Para fins de comparação, a adição de hexano à fração ácida preparada de acordo com os ensinamentos do documento WO2003/092712 ou Parachos et al, (2007), Antimacrobial Agents and Chemotherapy, 51(2), 551, mostrou que uma quantidade substancial dessa fração ácida era insolúvel em hexano. Quando esse material insolúvel em hexano foi testado no ensaio in vitro descrito no Exemplo 4 como uma solução etanólica 1% (contatou-se ser altamente insolúvel em óleo de semente de algodão), percebeu-se que causava grave estresse às células. O etanol convencional foi utilizado como controle negativo e não causou qualquer estresse ou dano às células nos volumes utilizados. Além disso, uma solução etanólica 1% da fração ácida preparada de acordo com a corrente invenção induziu a diferenciação eficiente das células em células neuronais. Esse resultado indica claramente que a fração ácida da corrente invenção está isenta do material nocivo presente nas frações ácidas reveladas na técnica anterior. Exemplo 2. Preparação de uma composição 5% (p/p) da fração ácida isolada da goma mástique em óleo de semente de algodão (RPh-Ac) com grau USP/NF.
[0282] A 1 grama da fração ácida isolada obtida do Exemplo 1 foram adicionados 19 gramas de óleo de semente de algodão (USP/NF) e a mistura foi agitada a 150 rpm até que fosse obtida uma composição límpida e homogênea (ca.2 horas). Exemplo 3. Isolamento e caracterização química da fração ácida isolada do mástique.
[0283] Resina de aroeira de Pistacia lentiscus L. foi extraída de acordo com o Exemplo 1 para obter a fração que foi analisada por HPLC de fase reversa (Figura 1) a fim de identificar os principais constituintes. A análise por HPLC é consistente com a presença na fração isolada de ácido morônico e ácido oleanônico na fração isolada, baseando-se na comparação com padrões analíticos.
[0284] As condições utilizadas para o método de HPLC de fase reversa da fração ácida isolada foram: Taxa de vazão: 1 ml/min; comprimento de onda UV da detecção 220nm; concentração da amostra 1 mg/ml; volume de injeção 20 Dl; lavagem da bomba e agulha com acetonitrila aquosa 20 %; fluxo de nitrogênio-ELSD 1ml/min; temperatura de evaporação -80 °C; temperatura de nebulização 60 °C; gradiente de ácido acético 0,8%-ACN.
[0285] A razão do gradiente para amostras da formulação e substância ácida é mostrada na Tabela 1:
Figure img0001
[0286] Os dados do espectro de massa da fração ácida isolada (Figuras 2A- D e Figura 3A) mostram picos indicando a presença de ácidos triterpênicos mono- méricos como ácido morônico, ácido oleanônico e outros (MH+ a 455Da; M++Na a 477 Da. Estão presentes ainda nos dados do espectro de massa os picos correspondentes aos ácidos triterpenóicos diméricos (MH+ a 910Da; M++Na a 932Da), bem como picos indicativos das formas triméricas dos ácidos triterpenóicos (MH+ a 1364Da; M++Na a 1387).
[0287] A fim de isolar e determinar a estrutura de outros constituintes principais da fração ácida isolada, desenvolveu-se um método de HPLC preparativa. Utilizando esse método, os seis principais constituintes da fração ácida isolada foram em seguida isolados por HPLC preparativa.
[0288] O método de HPLC preparativa foi desenvolvido em uma coluna preparativa 30x250 mm (ACE-121-2530). As amostras da fração isolada (ca. 75 mg por corrida) foram injetadas utilizando um circuito de 5ML. Detalhes do Método: Comprimento de onda de detecção: 205 nm; Taxa de vazão: 15 ml/min Eluentes: 1.ácido acético 0,8%:acetonitrila:THF= 25:72:3 2.ácido acético 0,8%:acetonitrila:THF= 15:82:3 3.ácido acético 0,8%:acetonitrila:THF= 10:87:3 4.ácido acético 0,8%:acetonitrila:THF= 5:92:3 Cronograma: Antes do condicionamento da coluna, ela foi lavada com grau HPLC Acetonitrila durante pelo menos 40 minutos. O tempo total de corrida é de ca.155 minutos. Condicionamento: Correr o Eluente 1 por 30 minutos. Carga: Injetar a solução 5 ML da amostra de 75 mg em MeOH Eluição: Eluente 1: 0-10 minutos Eluente 2: até a eluição do pico 2 Eluente 3: até 10 minutos após eluição do pico 4 Eluente 4: até 10 minutos após eluição do pico 6
[0289] O cromatograma do método de HPLC preparativa é mostrado na Figura 4.
[0290] Os compostos correspondentes aos seis picos indicados na Figura 4 foram isolados e caracterizados por 1H-NMR e 13C-NMR.
[0291] Mostrou-se de fato que o pico 1 e o pico 2 correspondiam respectivamente ao ácido morônico e ao ácido oleanônico quando os espectros NMR foram comparados os dados da literatura. Os espectros 1H-NMR e 13C-NMR desses dois ácidos são mostrados nas Figuras 5A-B (Pico 1, ácido morônico) e 6A-B (Pico 2, ácido oleanônico), respectivamente. O ácido morônico também foi identificado positivamente pela comparação com uma amostra comercial. O ácido oleanônico também foi comparado e mostrou-se idêntico a uma amostra preparada pela oxidação do ácido oleanóico de acordo com um método da literatura (Helv. Chim. Acta Vol.83, p.1766 (2000).
[0292] Demonstrou-se que os picos 3-6 correspondiam ao ácido masticadie- nólico (pico 3), ácido isomasticadienólico (pico 4), ácido 3-OAcetil-masticadienólico (pico 5) e ácido 3-O-acetil-isomasticadienólico (pico 6), respectivamente. Os espectros de 1H-NMR e 13C-NMR desses ácidos são mostrados nas Figuras 7A-B, Figuras 8A-B, Figuras 9A-B e Figuras 10A-B, respectivamente. (Para referência - Parachos et al, (2007), Antimacrobial Agents and Chemotherapy, 51(2), 551 e referências ali contidas.) Exemplo 4. Estudos biológicos de RPh-Ac em células epiteliais do pigmento retinal (RPE)
[0293] Estudos que buscavam avaliar os efeitos do RPh-Ac em várias linhas celulares de origem humana levaram ao uso de células ARPE-19, uma linha de célula epitelial de pigmento da retina humana não maligna.
[0294] O epitélio do pigmento retinal (RPE) é uma camada única de células epiteliais pigmentadas hexagonais de origem neuronal, que forma a camada mais externa da célula da retina ocular e é anexada à coróide subjacente. As funções do RPE incluem suporte, nutrição e proteção dos fotorreceptores subjacentes da neu- rorretina.
[0295] As células ARPE-19 estão envolvidas na fagocitose do segmento externo de células fotorreceptoras, no ciclo da vitamina A, onde isomerizam todo o trans retinol em 11-cis retinal e no suprimento dos fotorreceptores com D-glicose, aminoácidos e ácido ascórbico.
[0296] Muito embora in vivo o RPE seja pigmentado, as células ARPE-19 não formam melanina e não são pigmentadas. Em cultura as células crescem de maneira fusiforme e como células poligonais. Métodos
[0297] As células ARPE-19 (obtidas da American Type Cultura Collection, (ATCC)) foram semeadas em microplacas de cultura de tecido com 96 cavidades de fundo plano (Costar) em uma concentração de 2 - 5x103 células por cavidade (1 - 2,5x104 células/mL) em um meio de crescimento consistindo em DMEM:Ham F-12, 1:1, suplementado com Soro Bovino Fetal 10%, 200 mM glutamina, 100 unida- des/mL de penicilina e 100 Dg/mL de estreptomicina. Permitiu-se que células aderissem às superfícies da placa de um dia para o outro antes do tratamento com RPh- Ac.
[0298] RPh-Ac foi preparado essencialmente conforme a descrição constante do Exemplo 2, para fornecer uma solução 2,5% em um veículo formado por óleo de semente de algodão. As preparações foram adicionadas às cavidades em volumes de 0,5 Dl, 1Dl, 1,5Dl, 2 Dl. Esses volumes, introduzidos em um volume total do meio da amostra equivalente a 200 Dl, correspondem às concentrações finais de RPh-Ac de 0,0125%, 0,025%, 0,0375% e 0,05%, respectivamente. O óleo veículo serviu de controle do veículo e foi aplicado às culturas de controle nos mesmos volumes.
[0299] As culturas foram incubadas em uma incubadora de CO2 5% a 37oC por 48 horas. O meio foi então removido, as culturas lavadas duas vezes com tam- pão fosfato salino (PBS), fixadas com metanol absoluto por 10 minutos e marcadas com reagentes Hemacolor® (Boehringer Mannheim), que colorem as células de maneira similar à Giemsa, e podem ser utilizadas em um ensaio de viabilidade celular quantitativa (Keisari, Y. A colorimetric microtiter assay for the quantitation of cytokine activity on adherent cells in tissue culture. J. Immunol. Methods 146, 155-161, 1992).
[0300] Para determinar a expressão de proteínas marcadoras, Sinaptofisina, Akt fosforilado (pAktSer473) e GSK3-betaSer9 fosforilado em resposta ao tratamento das células com RPh-Ac, as células foram semeadas em lamínulas de vidro estéreis imersas em microplacas de 24 cavidades em uma concentração de 5d04 célu- las/cavidade em um meio consistindo em 1:1 mistura de meio essencial mínimo Dul- becco (DMEM) e meio Ham F12, suplementado com soro bovino fetal 10 e penicilina (100 unidades/ml), estreptomicina (100 Dg/ml) e glutamina (2mM).
[0301] Permitiu-se que as células aderissem de um dia para o outro às la- mínulas e RPh-Ac 2,5% em óleo de semente de algodão foi adicionado à cultura em um volume de 20 μl/ml de meio e incubadas em CO2 5% a 37oC por 48 horas. O óleo veículo serviu como controle do veículo e foi aplicado às culturas de controle no mesmo volume.
[0302] As células foram então lavadas 2X com PBS e fixadas com parafor- maldeído 4%. Para determinar a expressão de proteína de Sinaptofisina, pAktSer473, e fosfo-GSK3-betaSer9 nas células, as lamínulas de vidro foram marcadas com anticorpos monoclonais diretos de camundongo/coelho (Ab.) contra Sinaptofisina, pAk- tSer473, e pGSK3-betaSer9 humanos, em seguida por anti-IgG secundário de camun- dongo/coelho marcado com FITC. Os núcleos celulares foram contramarcados com DAPI. A preparação de teste e controle foi então avaliada em um microscópio de fluorescência. Os resultados são apresentados nas Figuras 13A-C abaixo. Resultados
[0303] Notou-se que o tratamento das células RPE ARPE-19 com RPh-Ac induziu inesperadamente a alterações morfológicas expressivas que são inequivocamente características da neurodiferenciação. As alterações morfológicas não ocorreram nas culturas de controle tratadas com óleo veículo isoladamente, e resultados semelhantes foram observados entre culturas de teste tratadas com RPh-Ac, qualquer que fosse o óleo utilizado como veículo para o composto ativo. As alterações morfológicas também foram associadas à interrupção da proliferação celular, reforçando ainda mais a conclusão de que o RPh-Ac induz à neurodiferenciação.
[0304] As culturas de controle tratadas com óleo exibiram a típica forma fusi- forme e o padrão de crescimento poligonal característico das células RPE ARPE-19 (Figura 11A). Após 48 horas de incubação em cultura, as células tratadas com RPh- Ac (0,01%; 0,2 mg/ml) tiveram sua forma alterada, e desenvolveram saliências únicas bastante longas densamente coradas e espessas reminiscentes dos axônios das células neuronais. Após 48 horas de incubação, as células tratadas com RPh-Ac (0,025%; 0,25 mg/ml) exibiram um grande número de saliências mais finas e longas reminiscentes das dendrites; e após 48 horas de incubação com RPh-Ac, as saliências finas e longas formaram junções com saliências similares em células adjacentes criando uma rede de células interconectadas, potencialmente capazes de comunicar informações entre si (Figura 11B). Redes similares ocorrem normalmente entre neurônios no sistema nervoso central e possibilitam a transmissão e o processamento das informações.
[0305] Embora as células de controle proliferassem durante o período de incubação de 48 horas (Figura 11C), as células tratadas com RPh-Ac rapidamente deixaram de proliferar e as células permaneceram em densidade esparsa, reforçando ainda mais a noção da diferenciação celular. Um sistema de pontuação para a potência na indução da diferenciação celular
[0306] Com base nos resultados acima, desenvolveu-se um sistema de pontuação para avaliar a potência das frações no sentido de induzir a diferenciação em cultura celular, com células semeadas na densidade de 2x103 por cavidade. As graduações e suas respectivas descrições são especificadas na Tabela 2.
Figure img0002
[0307] Os mesmos ensaios foram realizados utilizando os seguintes trata- mentos: - veículo óleo de semente de algodão (controle negativo) (resultados mostrados na Figura 11C) - Fração ácida de acordo com o documento WO2003/097212 e material insolúvel em hexano isolado da fração ácida de acordo com os ensinamentos do documento WO 2003/097212, 1% em etanol (Resultados mostrados na Figura 12A) - RPh-Ac, 1% em etanol (Resultados mostrados na Figura 12B) - Veículo etanol (controle negativo) (Resultados mostrados na Figura 12C).
[0308] Os resultados de acordo com a tabela de pontuação acima para a avaliação a diferenciação observada nas Figuras 11 e Figuras 12, em resposta aos vários tratamentos, são representados nas Tabela 3 e Tabela 4, abaixo.
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- Nessas quantidades as células atingiram plena diferenciação e em seguida morreram naturalmente antes de decorridas 48 horas de incubação. - * Células sofreram estresse claro e mostraram, na melhor das hipóteses, somente insinuações de diferenciação. Tabela 4
Figure img0004
Figure img0005
- Nessas quantidades as células atingiram plena diferenciação e em seguida morreram naturalmente antes de decorridas as 48 horas de incubação. ** Células sofreram estresse claro e mostraram e mostraram somente insinuações precoces de diferenciação.
[0309] As células foram então lavadas 2X com PBS e fixadas com parafor- maldeído 4%. Para determinar a expressão de proteína da, Sinaptofisina, pAktSer473, e fosfo-GSK3-betaSer9 nas células, as lamínulas de vidro foram marcadas com anticorpos monoclonais de camundongo/coelho direto contra Sinaptofisina, pAktSer473, e fosfo-GSK3-betaSer9 humanos, seguido por anti-IgG secundário de camundon- go/coelho marcado com FITC . Os núcleos celulares foram contramarcados com DAPI. A preparação de teste e controle foi então avaliada em um microscópio de fluorescência. Os resultados são apresentados nas Figuras 13A-C abaixo.
[0310] Os resultados mostrados nas Figuras 13A demonstram que, nas células tratadas com a composição RPh-Ac, foram evidenciados níveis elevados de agrupamentos de Sinaptofisina nos processos celulares (Painel superior), em comparação às células de controle (painel inferior), onde a Sinaptofisina não é expressa de forma alguma. A Sinaptofisina é uma vesícula sináptica abundante no cérebro e regula a formação da sinapse dependente da atividade nos neurônios. A Sinaptofisi- na tem sido amplamente utilizada para identificar a formação de sinapse na diferenciação de células neuronais.
[0311] As atividades de GSK-3 são reguladas negativamente pela fosforila- ção da serina. A inativação da GSK-3beta é o principal alvo regulador da via de sobrevivência da fosfatidil-inositol 3-quinase / Akt e exerce alguns de seus efeitos neu- roprotetores. A inativação do GSK-3 foi sugerida como um mecanismo para promover as funções de sobrevivência neuronal, incluindo-se regulação da formação de neurite e modulação da neurotransmissão glutamatérgica. A inibição de beta GSK-3 também está implicada na morfologia dos axônios e agrupamento da proteína sináp- tica nos neurônios em desenvolvimento. O desajuste das vias de sinalização e fosfo- rilação do substrato mediadas por GSK-3 está implicado nas condições patofisiológi- cas de uma variedade de doenças, incluindo-se doença de Alzheimer, diabetes do tipo 2, e câncer, esquizofrenia e transtornos de humor.
[0312] Os resultados mostrados na Figura 13B demonstram que as células tratadas com a composição RPh-Ac exibem altos níveis de pAktSer473 (Painel superior), em comparação às células tratadas com o veículo (painel inferior). Os resultados mostrados na Figura 13C demonstram que células tratadas com a composição RPh- Ac exibem altos níveis de pGSK-betaSer9, bem como mudanças em sua localização, em comparação às células tratadas com o veículo (painel inferior). Esses resultados sugerem que a composição RPh-Ac inativa a beta GSK3 através de sua fosforilação em Ser9 pela ativação de Akt (fosforilação da Ser 473). Exemplo 5. Efeito sinérgico das combinações de compostos triterpenóides específicos da fração ácida isolada no modelo MCAO de rato.
[0313] O acidente vascular cerebral é uma causa proeminente de grave incapacidade em longo prazo e a terceira principal causa de óbitos nos Estados Unidos. Os acidentes vasculares cerebrais isquêmicos compreendem mais de 88% de todos os acidentes vasculares cerebrais, fazendo deles o tipo mais comum de lesão cerebrovascular. Condições isquêmicas no cérebro causam morte neuronal, levando a deficiências cognitivas e sensório-motoras permanentes. O modelo de Oclusão da Artéria Cerebral Média (MCAO) é um modelo confiável para acidente vascular cerebral em ratos e simula a condição humana. A oclusão da MCA leva à lesão do córtex sensório-motor em decorrência da perda neuronal. O nível desta lesão pode ser estimado pela avaliação histológica do tamanho do enfarto e através de diversos testes de comportamento. A melhoria comportamental após a indução do acidente vascular cerebral e baixos volumes de infarto indica uma melhor condição patológica e provavelmente são o resultado de neuroproteção ou neurogênese. Portanto, o modelo MCAO pode ser utilizado como um sistema de teste confiável para avaliar a eficiência de drogas como agentes terapêuticos de condições neurológicas comprometidas, como, por exemplo, acidente vascular cerebral e doenças /condições neurode- generativas.
[0314] Para os experimentos aqui descritos, os animais são anestesiados utilizando solução de cetamina / xilazina. O pescoço do animal é então depilado e uma incisão na linha média é realizada na pele do pescoço, e o tecido subjacente foi dissecado utilizando a dissecção romba. A artéria carótida comum direita (CCA) e sua junção com a artéria carótida externa (ECA) e com a artéria carótida interna (ICA) são expostas por dissecção romba. A CCA é então fechada temporariamente posicionando ao seu redor um material de sutura de seda 3-0. A ECA é permanentemente ocluída com o mesmo tipo de material de sutura. Um terceiro fechamento, temporário, também é realizado na ICA com o material de sutura de seda 3-0.
[0315] Um pequeno orifício é coratado na ECA e o filamento de náilon é inserido na ICA, ao mesmo tempo evitando a entrada na artéria pterigopalatina. O filamento é inserido por 21-25 mm até sentir uma leve resistência. Em seguida um nó de sutura de seda 3-0 fixa o filamento.
[0316] Em seguida à cirurgia, os ratos são devolvidos às suas gaiolas e permanecem sob uma lâmpada de aquecimento até acordarem.
[0317] Dois parâmetros são monitorados e registrados durante o procedi- mento da cirurgia isquêmica: a temperatura de núcleo e o nível de glicose sanguínea do animal (BGL).
[0318] A temperatura de núcleo é monitorada utilizando sonda retal (modelo 400 YSI EUA) conectada a uma unidade de medição (modelo 8402-00 Cole Parmer) durante todo o período da cirurgia. O insulto isquêmico é iniciado quando a temperatura retal for de 37-38°C.
[0319] Em vista do efeito benéfico da composição da fração RPh-Ac sobre as células (como exemplificado acima), vários compostos compreendidos pela fração RPh-Ac foram testados no tocante a seus efeitos in vivo.
[0320] Abreviações utilizadas para os compostos e combinações testados: OA: Ácido oleanônico MDA: Ácido masticadienólico IMDA: Ácido isomasticadienólico
[0321] Ratos de diferentes grupos foram injetados duas vezes por semana por via subcutânea com 25 microlitros de item de teste designado. A primeira injeção foi administrada três horas após a indução do acidente vascular cerebral.
[0322] As seguintes formulações foram utilizadas como itens de teste para injeção: - Veículo: óleo de semente de algodão - IMDA: 0,65 % (p/p) em óleo de semente de algodão - MDA: 0,65 % (p/p) em óleo de semente de algodão - IMDA e MDA: cada 0,65 % (p/p) em óleo de semente de algodão -IMDA, MDA e OA: cada 0,65 % (p/p) em óleo de semente de algodão
[0323] MDA isoladamente; IMDA isoladamente; uma combinação de MDA+IMDA; e uma combinação de OA+MDA+IMDA foram testados utilizando um modelo MCAO de rato, em termos de sua capacidade terapêutica. Os ratos induzidos pelo acidente vascular cerebral foram tratados com cada um dos compostos tes- tados e a melhoria de suas capacidades sensório-motoras foi testada utilizando o teste de remoção do adesivo. Nesse teste, uma pequena fita adesiva é fixada às patas dianteiras dos ratos e operam como estímulo táctil. O tempo para remoção da fita é registrado. O teste de remoção da fita adesiva foi conduzido antes da indução do acidente vascular cerebral, para avaliar o tempo da linha de base de cada grupo e 27 dias após a lesão, seguido de injeções duas vezes por semana dos itens de teste. Resultados:
[0324] Como mostram os gráficos da Figura 14A, que mostram o tempo (em segundos) utilizado pelos ratos para remover a fita adesiva da pata contralateral, IMDA isoladamente foi capaz de melhorar a pontuação dos ratos tratados no teste de remoção do adesivo, em comparação aos ratos tratados com o veículo. O MDA isoladamente foi somente ligeiramente melhor que o controle do veículo. No entanto, a combinação de IMDA+MDA ou OA + MDA+IMDA (linha diagonal espessa à direita) aumentou claramente a eficiência do tratamento e os animais retornaram ao desempenho de suas linhas de base (dia 0, D0) no dia 27 (D27).
[0325] Como o IMDA por si mesmo praticamente restaurou a pontuação da linha de base dos ratos, analisou-se a razão dos itens de teste benéficos em relação à linha de base. Como mostra a Figura 14B, o IMDA, que melhorou significativamente a condição sensório-motora do rato, foi ainda 10 vezes pior que a pontuação da linha de base. Isso sugere que o IMDA por si mesmo tem seu efeito limitado e não consegue restaurar plenamente a função sensório-motora da linha de base. No entanto, surpreendentemente, as combinações de IMDA e MDA ou a combinação de IMDA, MDA e AO, além disso, aumentou a eficácia, resultando na melhoria significativa da capacidade sensório-motora a um nível ainda mais baixo do que a linha de base registrada. Esses resultados demonstram nitidamente o potente efeito sinérgi- co das combinações de IMDA, MDA e OA.
[0326] Os resultados aqui apresentados sustentam fortemente o potencial terapêutico da combinação do ácido isomasticadienólico e do ácido masticadienólico ou da combinação do ácido isomasticadienólico, ácido masticadienólico e ácido ole- anônico, e indicam um forte efeito sinérgico desses compostos mutuamente no que concerne ao tratamento da função neurológica comprometida e da regeneração do tecido neuronal. Exemplo 6. Cicatrização de feridas em ratos
[0327] Para os ratos utilizados no modelo MCAo do Exemplo 5, a cicatriza- ção das feridas cirúrgicas foi utilizada como indicador para o potencial de cura de feridas das formulações testadas utilizadas no Exemplo 5.
[0328] Os pictogramas mostrados na Figura 15 foram obtidos das feridas durante o dia 7 do modelo MCAO, para ratos tratados com veículo (óleo de semente de algodão tradicional, Painel esquerdo), RPh-Ac (painel intermediário) e com a mistura do ácido oleanônico, ácido masticadienólico e ácido isomasticadienólico (direita). As fotografias indicam com clareza que as feridas dos animais tratados com RPh-Ac (painel intermediário) ou com a mistura do ácido oleanônico, ácido masticadienólico e ácido isomasticadienólico (painel direito) estão em um estágio mais avançado de cicatrização que a ferida do animal tratado com o veículo. Exemplo 7. Preparação de complexos da ciclodextrina
[0329] Ciclodextrinas, em virtude de sua capacidade para formar complexos de inclusão com muitas drogas, podem aumentar substancialmente a solubilidade aquosa de substâncias biofarmacêuticas, em particular daquelas definidas como insolúveis em água, como compostos terpenóides particulares. Ciclodextrinas são compostos solúveis em água capazes de formar complexos reversíveis com moléculas fracamente solúveis em água resultando em um complexo de inclusão molecular solúvel. Quando o complexo de inclusão da combinação droga-ciclodextrina é diluído em um volume de água ou sangue suficientemente grande, ele é rapidamente dissociado, liberando o agente ativo farmacologicamente sequestrado.
[0330] A complexação de frações ácidas isoladas aqui descritas com β- HPCD será realizada da seguinte maneira: a. Dissolução da fração de goma mástique previamente pesada em uma quantidade mínima de solvente não polar como hexano, heptano, ou outros elementos similares. b. Adição em gotas do solvente não polar ao pó β-HPCD. c. Secagem a 50-80 °C até evaporação do solvente não polar. d. Mistura com a quantidade necessária de água. e. Dissolução com sonicação e aquecimento. f. Filtração através de filtro de 0,2-0,45 μm. Exemplo 8. Preparação de nanoemulsões da fração ácida isolada da goma mástique.
[0331] As formulações líquidas de nanoemulsão óleo-em-água devem ser preparadas por técnicas de emulsificação de alta pressão de todos os ingredientes lipídicos e do componente ativo dissolvido na fase oleosa lipídica e emulsificado com uma fase aquosa, projetado para resultar na formação de nanogotículas lipídicas estáveis e esféricas contendo a droga em dispersão uniforme. A redução do tamanho da gota da emulsão é essencial para gerar formulações da droga com alta estabilidade. Gotas preferenciais para a nanoemulsão têm um tamanho médio de gota inferior a um mícron (em geral na faixa de 0,1-0,2 μm) uniformemente dispersas em uma fase aquosa. A singularidade do expressivo núcleo do óleo hidrofóbico interno das gotículas de nanoemulsão fornece alta capacidade de solubilização para os compostos insolúveis em água. 1. Preparação da fase oleosa
[0332] A fase oleosa é formada pelo lipoid E-75 a 13%, αTP-succinato 0,026%, propilparabeno como antioxidante e Miglyol® 810 86,9%. A fração da goma mástique preparada como no Exemplo 1 é dissolvida na fase oleosa. Os componentes são misturados com aquecimento moderado até que uma solução homogênea completamente solubilizada seja obtida. 2. Preparação da fase aquosa
[0333] A fase aquosa é formada por EDTA 0,1%, Tween-80 0,5%, glicerol 2,3%, metilparabeno como conservante e 97,1% de água. O pH foi ajustado para 7,4 por NaOH 1N. 3. Mistura das fases oleosa e aquosa
[0334] A fase oleosa (3,7g) é aquecida e adicionada a 70 ml da fase aquosa (pré-aquecida). A mistura é suavemente misturada por 10-15 minutos à temperatura ambiente. 4. Preparação de emulsão espessa óleo-em-água
[0335] Uma emulsão óleo-em-água é preparada utilizando o dispensador de tamanho do meio e a unidade de homogeneização de alto cisalhamento Politron®, a 20.000 rpm por 5 min. 5. Dimensionar a emulsão na faixa de submícron com o homogeneizador de alta pressão Gaulin®
[0336] O tamanho da gota da emulsão obtida após a etapa 4 é reduzido até o nível de submícron (tamanho nanométrico) submetendo a emulsão à homogeneização de alto cisalhamento utilizando o homogeneizador de alta pressão Microlab 70 Gaulin® na pressão de 800 bar. Um total de 5-6 ciclos deve ser executado para que sejam obtidas gotículas homogêneas de nanoemulsão com um tamanho médio de partícula inferior a 200nm. O tamanho de partícula deve ser determinado por espec- troscopia de correlação de fóton (PCS) utilizando um analisador de tamanho de partícula N4MD (Coulter® Electronics, Reino Unido). Quando a maioria das partículas (> 90%) for menor que 200nm, determina-se a finalização do processo de dimensionamento. 6. Filtração estéril
[0337] Filtração em condições assépticas da nanoemulsão para frascos estéreis utilizando um filtro estéril PES de 0,2 μm e armazenamento a 40 °C. Exemplo 9. Preparação de pó seco por aspersão.
[0338] Um processo conveniente para a fabricação do produto da mistura da fração da goma mástique-lipídio ocorre através de secagem por aspersão direta da formulação de uma mistura de dispersão do solvente não polar contendo todos os ingredientes lipídicos e água contendo os componentes hidrofílicos, levando em consideração a eficiência de custo e considerações de extrapolação. O método de secagem por aspersão selecionado é aperfeiçoado a fim de obter um pó fino e de escoamento livre. A fração da goma mástique deve ser dissolvida na fase lipídica contendo os ingredientes lipídicos lecitina, tricaprina (triglicerídeo de ácido cáprico), succinato de tocoferol e aquecida (~40 °C) em um solvente não polar até que uma boa dispersão seja obtida. Uma dispersão de dióxido de silício fundido (Cab-O-Sil®) em água (5%) será preparada dilatando o pó em água purificada. A pasta semilíquida resultante (pré-aquecida a 40 °C) pode ser então vertida lentamente na dispersão de lipídeo de solvente não polar e a mistura agitada a 40 °C por cerca de 1 hora até que uma dispersão homogênea seja obtida. A mistura deve então secar por aspersão utilizando o secador por aspersão GA32Yamato Pulvis®. As condições típicas da secagem por aspersão são: taxa de vazão 7ml/min, temperatura de entrada 130 °C, temperatura de saída 70 °C, e fluxo do ar de secagem 0,5 m3/min. Espera-se obter um pó seco homogêneo contendo a mistura fração da goma mástique-lipídio.
[0339] É esperado que a formulação da mistura da fração da goma másti- que-lipídio preparada pelo processo de secagem por aspersão direta mostre boa dispersibilidade de água, sendo assim adequada para a preparação de formas de dosagem sólidas como cápsulas rígidas de gelatina ou comprimidos para melhor entrega oral com boa biodisponibilidade oral. Exemplo 10. Preparo das preparações lipossômicas.
[0340] Os lipídios contendo a fração ácida dissolvida isolada da goma másti- que devem ser dissolvidos em 100 ml de diclorometano em um frasco de fundo redondo, e agitadas por 30 minutos na temperatura ambiente até a obtenção de uma solução clara e transparente. O solvente será evaporado utilizando uma unidade de evaporação rotativa a 39°C. Condições típicas incluem a rotação do frasco a 4,5 rpm, 5 minutos em pressão atmosférica, seguido de 10-30 minutos (até a evaporação completa do solvente) em vácuo leve, e finalmente 15 minutos em vácuo pleno. Ao final do processo de evaporação, um filme lipídico uniforme será criado. O filme lipídico será dissolvido em 15 ml de tampão isotônico. Os lipossomas são preparados através de agitação vigorosa por 10-30 minutos utilizando agitador multi-wrist, até formar uma dispersão uniforme e leitosa do veículo multilamelar (MLV) e não reste qualquer filme lipídico aparente. A fim de obter uma preparação de lipossoma equilibrada e homogênea, o frasco pode ser agitado adicionalmente a 37°C por 3090 min. a 270 rpm. Exemplo 11. Preparação de microemulsões contendo a fração ácida isolada de goma mástique
[0341] Diversos tensoativos comumente utilizados em administrações paren- terais podem ser utilizados para desenvolver microemulsões água-em-óleo e óleo- em-água aceitáveis para uso injetável, oral e tópico. Tensoativos farmaceuticamente aceitáveis adequados para a formação de formulações de microemulsão incluem tensoativos não iônicos, inclusive óleo de rícino hidrogenado polioxil 40 (vendido sob o nome comercial Cremophor RH40®), óleo de rícino polioxil 35 (vendido sob o nome comercial Cremophor® EL), ésteres de ácido graxo de polioxioetileno sorbitol (polis- sorbatos), poloxâmeros (Pluronics®), vitamina E-TPGS 1,000 (VE-TPGS 1,000), éteres de alquil polioxioetileno, Solutol® HS-15, Tagat® TO, Peglicol 6-oleato, esteratos de polioxioetileno, ou glicerídeos poliglicolizados saturados, todos comercialmente disponíveis. Tensoativos preferenciais incluem óleo de rícino hidrogenado polioxil 40 (Cremophor® RH40®), óleo de rícino hidrogenado polioxil 35 (Cremophor® EL), ésteres de ácido graxo de polioxioetileno sorbitol (polissorbatos), poloxâmeros (Pluro- nics®), e vitamina E-TPGS 1,000. A quantidade total do tensoativo presente na composição geralmente será de cerca de 100 a cerca de 700 mg/g, e preferencialmente de cerca de 300 a cerca de 500 mg/g.
[0342] O preparo de microemulsões contendo a fração ácida isolada pode ser realizado dissolvendo-se a fração ácida isolada em uma quantidade apropriada de óleo, como triglicerídeos de cadeia média (Miglyol) em um frasco adequado. O frasco então é tampado. O frasco é colocado em banho maria a cerca de 50-60 °C e suavemente agitado até que todo o material da droga esteja completamente dissolvido. Depois de refrigerar o frasco até a temperatura ambiente, uma quantidade apropriada do tensoativo (como Cremophor® EL ou VE-TPGS) é adicionada e seguida da mistura de mono e diglicerídios de ácidos graxos, se houver. O frasco então é tampado e colocado em banho maria a cerca de 50-60 °C. O frasco é suavemente agitado para obter uma solução límpida e uniforme. Essa solução pode ser carrega-da nas cápsulas HPMC e armazenada à temperatura ambiente antes da dosagem oral. Como alternativa, pós poliméricos substituídos (como HPMC) podem ser adicionados à solução com agitação adequada (isto é, agitação, mistura) até obter uma suspensão polimérica uniforme. A composição resultante pode ser então carregada em cápsulas rígidas ou maleáveis de gelatina e armazenadas à temperatura ambiente antes da dosagem oral. Como alternativa, a formulação de microemulsão pode ser utilizada topicamente ou filtrada em membranas de 0,2um para ser administrada parenteralmente.
[0343] As microemulsões têm boas propriedades de dispersabilidade em água e são autoemulsificantes quando diluídas em meios aquosos para formar pequenas micelas nanométricas com maior biodisponibilidade.
[0344] A descrição acima das modalidades específicas revelará tão plenamente a natureza geral da invenção que é possível, aplicando o conhecimento corrente, imediatamente modificar e/ou adaptar para várias aplicações tais modalidades específicas sem experimentação indevida e sem transgredir o conceito genérico, e, portanto, tais adaptações e modificações devem e são concebidas para que estejam contidas no significado e na faixa de equivalentes das modalidades reveladas. É preciso compreender que a fraseologia ou terminologia aqui empregada tem o propósito meramente descritivo, e não limitante. Os meios, materiais, e etapas para conduzir as várias funções reveladas podem assumir uma variedade de formas alternativas sem desvirtuar a invenção.

Claims (6)

1. Processo para preparar uma fração ácida isolada de goma mástique, o processo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende as etapas de: (a) tratar goma mástique com um solvente orgânico polar; (b) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico polar; (c) remover, opcionalmente, o dito solvente orgânico polar; (d) tratar a fração solúvel obtida na etapa (b) ou (c) com um solvente orgânico não polar, (e) isolar uma fração solúvel no dito solvente orgânico não polar; (f) remover, opcionalmente, o dito solvente orgânico não polar; (g) dissolver a fração obtida na etapa (f) em um solvente orgânico; (h) tratar a solução obtida na etapa (g) com uma solução aquosa básica de modo a obter uma fração aquosa básica; e (i) acidificar a fração aquosa básica obtida na etapa (h) com uma solução ácida de modo a obter uma solução aquosa acidificada.
2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda as etapas de: (j) extrair a fração aquosa acidificada obtida na etapa (i) com um solvente orgânico; (k) colocar em contato, opcionalmente, a fração orgânica obtida na etapa (j) com um agente secante, de modo a remover a água remanescente; (l) remover o solvente orgânico e/ou excesso de ácido da fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k); e (m) dissolver a fração isolada obtida na etapa (l) em um veículo farmaceuti- camente aceitável.
3. Processo, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda as etapas de: (j) extrair a fração aquosa acidificada obtida na etapa (i) com um solvente orgânico; (k) colocar em contato, opcionalmente, a fração orgânica obtida na etapa (j) com um agente secante, de modo a remover a água remanescente; (l) remover o solvente orgânico e/ou excesso de ácido da fração obtida em qualquer uma das etapas (i), (j) ou (k); e (m) dissolver a fração isolada obtida na etapa (l) em um veículo farmaceuti- camente aceitável.
4. Processo, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a solução aquosa básica na etapa (h) é preparada a partir de uma base inorgânica selecionada do grupo que consiste em carbonato de sódio, hidróxido de sódio, carbonato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de amônio, bicarbonato de sódio, fosfato de sódio, hidróxido de lítio, carbonato de lítio e fosfato de potássio; ou em que as etapas (a) a (c) são realizados antes das etapas (d) a (f); ou em que as etapas (d) a (f) são realizadas antes das etapas (a) a (c); ou em que (a) a (c) e/ou as etapas (d) a (f) são repetidas por uma pluralidade de ciclos; ou em que o solvente orgânico na etapa (g) e na etapa (j) é selecionado inde-pendentemente do grupo que consiste em éteres dialquílicos, éteres alquil-arílicos, éteres diarílicos, cetonas, hidrocarbonetos halogenados, hidrocarbonetos aromáticos C5-C14, perfluoroalcanos C5-C14 e uma combinação dos mesmos; ou em que o solvente orgânico polar compreende etanol, o solvente orgânico não polar compreende hexano e o solvente orgânico para a extração ácido-base compreende éter dietílico; ou em que o solvente orgânico polar é etanol, o solvente orgânico não polar é n-hexano e o solvente orgânico para a extração ácido-base é éter dietílico.
5. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o solvente orgânico polar é selecionado do grupo que consiste em um álcool, um éter, um éster, uma amida, um aldeído, uma cetona, uma nitrila e uma combinação dos mesmos; ou em que o solvente orgânico polar é selecionado do grupo que consiste em metanol, etanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, sec-butanol, t-butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, neopentanol, 3-metil-1-butanol, 2-metil-1-butanol, 3-metil-2-butanol, 2-metil-2-butanol, etilenoglicol, etilenoglicol monometil éter, éter dietílico, éter metiletílico, éter etilpropílico, éter metilpropílico, 1,2-dimetoxietano, te- trahidrofurano, dihidrofurano, furano, pirano, dihidropirano, tetrahidropirano, acetato de metila, acetato de etila, acetato de propila, acetaldeído, formato de metila, formato de etila, propionato de etila, propionato de metila, dicloro-metano, clorofórmio, di- metilformamida, acetamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, acetona, etilmetil cetona, dietil cetona, acetonitrila, propionitrila, e uma combinação dos mesmos; ou em que o solvente orgânico polar é selecionado do grupo que consiste em metanol, etanol, propanol, isopropanol e uma combinação dos mesmos; ou em que o solvente orgânico polar é selecionado do grupo que consiste em metanol, etanol e uma combinação dos mesmos; ou em que o solvente orgânico não polar é selecionado do grupo que consiste em hidrocarbonetos alifáticos acíclicos ou cíclicos, saturados ou insaturados, e hi- drocarbonetos aromáticos, cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, e uma combinação dos mesmos; ou em que o solvente orgânico não polar é selecionado do grupo que consiste em alcanos C5-C10, cicloalcanos C5-C10, hidrocarbonetos aromáticos C6-C14 e perfluoralcanos C7-C14, e uma combinação dos mesmos; ou em que o solvente orgânico não polar é selecionado do grupo que consiste em pentanos, hexanos, heptanos, octanos, nonanos, decanos, ciclopentano, ciclo- hexano, cicloheptano, benzeno, tolueno, xileno, e isômeros e misturas dos mesmos; ou em que o solvente orgânico não polar é selecionado do grupo que consiste em pentanos, hexanos, heptanos, ciclopentano, ciclo-hexano, ciclo-heptano e isôme- ros e misturas dos mesmos; ou em que o solvente orgânico não polar é hexano; ou em que a fração ácida isolada compreende pelo menos três dentre: ácido masticadienólico; ácido isomasticadienóico; ácido isomasticadienólico; ácido 3-O- acetil masticadienólico; ácido 3-O-acetil epimasticadienólico; ácido 3-O-acetil iso- masticadienólico, ácido 3-O-acetil epi-isomasticadienólico; ácido oleanônico; ácido morônico; e ácido 3-oxo-lup-20(29)-en-28-óico.
6. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a goma mástique é obtida de P. lentiscus.
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2613777T3 (da) * 2010-09-07 2019-07-01 Regenera Pharma Ltd Sammensætninger omfattende sure ekstrakter af mastiks-gummi
IL237621A0 (en) * 2015-03-08 2015-06-30 Regenera Pharma Ltd Use of isolated fractions of the gum goddess to treat optic neuropathy
PL3352742T3 (pl) 2015-09-24 2022-05-16 Angels Hi-Tech Investment Company Kompozycje zawierające triterpenoidy do leczenia choroby alzheimera i choroby parkinsona
AU2016327286A1 (en) 2015-09-24 2018-04-12 Regenera Pharma Ltd. Compositions comprising triterpenoids
CN106178068B (zh) * 2016-08-18 2017-09-19 广州华弘生物科技有限公司 一种促进伤口愈合的贴膜及缝合器
EP3509577A4 (en) * 2016-09-08 2020-04-08 Regenera Pharma Ltd. COMPOSITION WITH ACID EXTRACTS FROM RUBBER FITTING AND USES THEREOF FOR TREATING OPTICAL NEUROPATHY
BR112019004488A2 (pt) 2016-09-08 2019-05-28 Regenera Pharma Ltd composições compreendendo triterpenoides e utilizações das mesmas para tratamento de neuropatia ótica
FR3057467B1 (fr) * 2016-10-17 2018-12-07 IFP Energies Nouvelles Procede de purification d'une solution aqueuse comprenant du diethylacetal
WO2019170239A1 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Phytoitalia Srl Terpene enriched fractions free from polyterpenes extracted from chios mastic gum and cosmetic, nutraceutical, medical devices and pharmaceutical compositions containing them
IL262050B (en) * 2018-10-02 2020-04-30 Unv Medicine Ltd Compositions comprising cbd for treating hemorrhoids
US20220023771A1 (en) * 2018-12-11 2022-01-27 Naturalia Ingredients S.R.L. Extraction method and composition obtained therefrom
CN109363975A (zh) * 2018-12-17 2019-02-22 广州诗美化妆品有限公司 一种化妆品用乳香提取物的制备方法与应用
KR102603568B1 (ko) * 2023-03-30 2023-11-20 주식회사 프롬바이오 수용화 매스틱 검을 이용한 피부장벽 기능 개선용 조성물
KR102705575B1 (ko) * 2023-12-05 2024-09-11 주식회사 프롬바이오 수용화 매스틱 검을 이용한 지방 유래 줄기세포의 섬유아세포로의 분화 유도용 조성물
KR102697519B1 (ko) * 2023-12-05 2024-08-22 주식회사 프롬바이오 수용화 매스틱 검을 이용한 지방 유래 줄기세포의 모유두세포로의 분화 유도용 조성물

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4713243A (en) 1986-06-16 1987-12-15 Johnson & Johnson Products, Inc. Bioadhesive extruded film for intra-oral drug delivery and process
DE4444288A1 (de) * 1994-12-13 1996-06-20 Rainer Dr Med Etzel Verwendung von Weihrauch zur Behandlung der Alzheimer-Krankheit
US5714007A (en) 1995-06-06 1998-02-03 David Sarnoff Research Center, Inc. Apparatus for electrostatically depositing a medicament powder upon predefined regions of a substrate
GR950100243A (el) 1995-06-28 1997-02-28 �. �����- �. ����� �.�.�. Χρησιμοποιηση της φυσικης μαστιχας χιου η του εξαγομενου εξ'αυτης φυσικου μαστιχελαιου η συνθετικων παραγωγων του για την παρασεκυη οδοντοκρεμας, οδοντικου διαλυματος, αποσμητικου στοματος, αντιηλιακων, προιοντων μαλλιων, καθως και καλλυντικων προιοντων.
DE19646392A1 (de) 1996-11-11 1998-05-14 Lohmann Therapie Syst Lts Zubereitung zur Anwendung in der Mundhöhle mit einer an der Schleimhaut haftklebenden, Pharmazeutika oder Kosmetika zur dosierten Abgabe enthaltenden Schicht
AU2107199A (en) 1998-01-08 1999-07-26 Regents Of The University Of California, The Kinesin motor modulators derived from the marine sponge (adocia)
GR1003541B (el) 1999-05-11 2001-03-07 Αντιμικροβιακη και αντιμυκητιακη δραση του εξαγομενου απο τα κλαδια, φυλλα και καρπο της μαστιχας χιου -pistacia lentiscus var chia-, μαστιχελαιου, για χρηση σε καλλυντικες, φαρμακευτικες και παραφαρμακευτικεσς εφαρμογες καθως και στην παραγωγη οδοντοτσι
GR1003550B (el) 1999-09-22 2001-03-13 Σταθερο παρασκευασμα ισοεξυλοναφθαζαρινων με πεντα- και τετρα-κυκλικα τριτερπενια, συστατικα φυτικων ελαιορητινων και κομμεων
US6623728B2 (en) 2000-06-30 2003-09-23 Unilever Home & Personal Care Usa Division Of Conopco, Inc. Cosmetic skin care compositions and containing gum mastic
GR1003868B (el) 2001-02-06 2002-04-19 Lavipharm S.A. Αξιολογηση των επουλωτικων, αντιοξειδωτικων και κυτταροστατικων ιδιοτητων της μαστιχας και των συστατικων της, και οι εφαρμογες τους
US7048943B2 (en) 2001-02-13 2006-05-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Carotenoid-loaded liposomes
US6534548B1 (en) 2001-10-02 2003-03-18 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Isoprenoid compositions for the inhibition of exoprotein production from gram positive bacteria
AU2003241345A1 (en) 2002-05-01 2003-11-17 Lavipharm S.A. Use of mastic and its components for the control of microbial infections
US7364607B2 (en) 2002-05-20 2008-04-29 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Wrought fiber sheet and filter unit
JP2004083443A (ja) * 2002-08-23 2004-03-18 Hideji Watanabe マスティックを用いた歯周病予防・治療用組成物及び歯周病予防・治療方法
US20050074509A1 (en) 2003-10-02 2005-04-07 Data Medica Padova S.P.A. Cancer treatment using natural plant products or essential oils extracted from some pistacia species or components
FR2867980B1 (fr) 2004-03-23 2006-07-14 Pierre Fabre Medicament Sa Utilisation de l'acide masticadienonique en tant qu'inhibiteur de l'adn polymerase beta
CA2560557A1 (en) 2004-03-29 2005-10-06 University Of Iowa Research Foundation Schweinfurthin analogues
WO2005112967A2 (en) 2004-05-19 2005-12-01 Balfour Marketing Corp. Anticancer activity of chios mastic gum
CA2572870A1 (en) 2004-07-06 2006-01-12 Transpharma Medical Ltd. Delivery system for transdermal immunization
US7268124B2 (en) 2004-08-25 2007-09-11 University Of Iowa Research Foundation Geranylgeranyl pyrophosphate synthase inhibitors
JP2007135493A (ja) 2005-11-18 2007-06-07 Health & Health Kk 健康食品
US20070249543A1 (en) * 2006-04-19 2007-10-25 Filiberto Zadini Dissolution of arterial cholesterol plaques by phytochemical emulsifiers
WO2008024374A2 (en) 2006-08-22 2008-02-28 Jain Mahendra K Inhibitors of pancreatic phospholipase a2 for altering cholesterol and fat uptake
US20090048205A1 (en) * 2007-08-15 2009-02-19 Colin Meyer Combination therapy with synthetic triterpenoids and gemcitabine
KR20100031069A (ko) 2008-09-11 2010-03-19 주식회사 엠디코드 매스틱 추출물 및 그 추출방법
EA021886B1 (ru) 2009-03-04 2015-09-30 Редженера Фарма Лтд. Выделенная фракция мастиковой смолы
US8722105B2 (en) * 2009-03-04 2014-05-13 Zadik Hazan Compositions of polymeric myrcene
DK2613777T3 (da) * 2010-09-07 2019-07-01 Regenera Pharma Ltd Sammensætninger omfattende sure ekstrakter af mastiks-gummi
WO2013186766A1 (en) * 2012-06-11 2013-12-19 Regenera Pharma Ltd. Extracts and therapeutic uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US20190076444A1 (en) 2019-03-14
AU2011300359B2 (en) 2014-03-06
US9271949B2 (en) 2016-03-01
IL256881A (en) 2018-03-29
US20160199389A1 (en) 2016-07-14
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