BR112021008883A2 - inibidores de rock quinase - Google Patents

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Matthew Randolph Lee
Anthony Joseph Varano
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Cervello Therapeutics, Llc
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Abstract

INIBIDORES DE ROCK QUINASE. A presente invenção se refere a compostos que inibem a atividade ROCK. Em particular, a presente invenção se refere a compostos, composições farmacêuticas e métodos de uso, tais como métodos de inibição da atividade ROCK e métodos para o tratamento de, por exemplo, síndrome da malformação cavernosa cerebral (CCM) e doenças cardiovasculares com o uso dos compostos e composições farmacêuticas da presente invenção.

Description

“INIBIDORES DE ROCK QUINASE” CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a compostos que são inibidores de proteínas quinases associadas a Rho (ROCK). Em particular, a presente invenção refere-se a compostos que inibem seletivamente a atividade ROCK, composições farmacêuticas que compreendem os compostos e métodos de uso para os mesmos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] ROCK é um efetor RhoA crítico envolvido na regulação de múltiplas vias de sinalização celular através da fosforilação de múltiplos substratos, incluindo cadeia leve de miosina (MLC), LIM Kinase, MYPT1 e CPI-17. Os substratos ROCK estão envolvidos na contratilidade do músculo liso, permeabilidade vascular, organização dos filamentos de actina, adesão celular, migração celular, controle de crescimento e citocinese. O envolvimento direto de ROCK na contratilidade do músculo liso resulta do aumento da fosforilação de ambas as MLC, que aumenta a contratilidade na fosforilação, e MLC-fosfatase, que é inibida na fosforilação, aumentando, ainda mais, a ativação de ROCK da fosforilação de MLC e, resultando, assim, no aumento da contratilidade do músculo liso.
[003] Os relatórios da literatura sugerem uma ligação entre a atividade ROCK e várias doenças cardiovasculares associadas à disfunção vasotônica, incluindo hipertensão, aterosclerose, acidente vascular cerebral isquêmico, vasoespasmo coronário, vasoespasmo cerebral, angina, disfunção erétil e doença renal e também uma ligação com outra hiper-reatividade do músculo liso, como glaucoma e asma.
[004] A síndrome da malformação cavernosa cerebral (CCM) é uma doença associada a junções endoteliais defeituosas, predominantemente no cérebro, predispondo os pacientes a um risco vitalício de convulsões, acidente vascular cerebral hemorrágico e outros déficits neurológicos. Malformações cavernosas cerebrais (CCMs) são malformações vasculares encontradas principalmente no sistema nervoso central, por exemplo,
tronco encefálico e medula espinhal, que podem ocorrer em formas herdadas esporádicas ou autossômicas dominantes, as últimas das quais mapeadas para três loci, KRIT-1/CCM1, MGC4607/OSM/CCM2 e PDCD10/CCM3 (por exemplo, consultar Glading et al., (2007) J. Cell Biol. 179: 247-254).
[005] As proteínas CCM1, CCM2 e CCM3 interagem, cada uma, com uma série de proteínas, incluindo Rap1, uma RhoA-GTPase. Rap1 desempenha um papel na regulação do citoesqueleto de actina, estimulando a formação de fibras de actina. Mutações de inativação em CCM1, CCM2 ou CCM3 são suficientes para induzir lesões vasculares de CCM ao inibir a formação de tubo semelhante a vaso de células endoteliais e invasão de matriz extracelular levando a junções enfraquecidas entre células e aumento de vazamento de vasos sanguíneos. A perda de expressão das proteínas CCM1, -2 ou -3 causa uma superexpressão marcada e um aumento da ativação de Rap1. O aumento da ativação de Rap1 está associado ao aumento da fosforilação dependente de Rho quinase (ROCK) e ao knockdown de RNA em formato de grampo curto de células endoteliais resgatadas por ROCK da patologia CCM (por exemplo, consultar Borikova et al., (2010) J. Biol. Chem. 285: 11.760 a
11.764).
[006] Infelizmente, os pacientes com CCM têm opções de tratamento limitadas e não existem fármacos aprovados nos Estados Unidos para o tratamento de CCM. O cloridrato de Fasudil, um derivado da isoquinolina sulfonamida, é um potente inibidor de ROCK aprovado fora dos Estados Unidos para o tratamento do vasoespasmo cerebral após hemorragia subaracnoide e sintomas de isquemia cerebral. Fasudil tem sido usado off-label por médicos para tratar CCM, presumivelmente por inibir a atividade ROCK quinase; no entanto, Fasudil, que mostra baixa seletividade sobre outras quinases da família AGC, também exibe uma série de efeitos colaterais tóxicos graves e desvantagens, incluindo tratamentos obrigatórios de curta duração, baixa biodisponibilidade oral, toxicidade celular e flutuações da pressão arterial (por exemplo, consultar Xin et al., (2015) BioSci Rep. 35: 1 a 13).
[007] Há uma necessidade médica séria não atendida de tratar pacientes com CCM e, mais amplamente, de inúmeras outras doenças que envolvem contratilidade elevada do músculo liso, como doença cardiovascular, com evidências predominantes que apontam para inibidores seletivos de ROCK quinase como uma fonte provável para intervenção terapêutica farmacológica. Em conjunto, há uma necessidade de desenvolver novos inibidores de ROCK quinase que tenham tempos de tratamento melhorados, biodisponibilidade oral melhorada, toxicidade celular reduzida e atividade off-target reduzida, particularmente sobre os membros da quinase da família AGC.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[008] Os presentes inventores reconheceram a necessidade de desenvolver novos inibidores de ROCK quinase que demonstrem potência celular, seletividade de cinoma, eficácia, estabilidade e segurança melhoradas. Os compostos e composições da presente invenção superam vantajosamente uma ou mais dessas deficiências ao fornecer inibidores de ROCK potentes, seletivos e oralmente ativos.
[009] Em um aspecto da invenção, são fornecidos compostos que inibem a atividade ROCK quinase. Em certas modalidades, os compostos são representados pela fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb):
Fórmula (I) Fórmula (II)
[010] ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
[011] em que:
[012] X é uma heteroarila parcialmente saturada que contém aza;
[013] Y é N ou CH;
[014] cada R1 é um grupo ciano, hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, -NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila;
[015] Q é uma ligação, O ou N;
[016] cada R2 é hidrogênio ou halogênio;
[017] cada R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C3 alquila;
[018] cada R4 é hidrogênio ou C1-C3 alquila; e
[019] m é 0, 1, 2 ou 3.
[020] Em outro aspecto da invenção, são fornecidas as composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) e excipientes, sais, solvatos, carreadores farmaceuticamente aceitáveis e/ou diluentes.
[021] Em ainda outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um método de tratamento de uma doença cardiovascular associada à vasotensão aumentada que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) ou uma composição farmacêutica que compreende tal composto para um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a doença cardiovascular é hipertensão, aterosclerose, acidente vascular cerebral isquêmico, vasoespasmo coronário, vasoespasmo cerebral, angina e disfunção erétil.
[022] Em ainda outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um método de tratamento de doenças envolvendo contratilidade elevada do músculo liso não vascular que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) ou uma composição farmacêutica que compreende tal composto para um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a doença envolve contratilidade elevada do músculo liso não vascular, asma e glaucoma.
[023] Em ainda outro aspecto da invenção, são fornecidos métodos para inibir a atividade ROCK em uma célula que compreende o contato da célula com um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb). Também são fornecidos métodos para o tratamento de CCM em um paciente que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) ou composição farmacêutica que compreende tal composto a um paciente com necessidade do mesmo.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[024] A presente invenção se refere a inibidores de ROCK quinase. Em particular, a presente invenção se refere a compostos que inibem seletivamente a atividade de uma ROCK quinase, composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz dos compostos e métodos de uso para os mesmos, tais como métodos para o tratamento da síndrome de malformação cavernosa cerebral (CCM) e doenças cardiovasculares.
DEFINIÇÕES
[025] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o mesmo significado que é comumente entendido por uma pessoa versada na técnica à qual esta invenção pertence. Todas as patentes, pedidos de patentes e publicações referidos são incorporados ao presente documento a título de referência na medida em que são consistentes com a presente divulgação. Os termos e faixas têm sua definição geralmente definida, a menos que expressamente definido de outra forma.
[026] Para simplificar, as porções químicas são definidas e referidas principalmente como porções químicas univalentes (por exemplo, alquila, arila, etc.). No entanto, tais termos também podem ser usados para transmitir porções químicas multivalentes correspondentes sob as circunstâncias estruturais apropriadas, aparentes para as pessoas versadas na técnica. Todos os átomos são considerados como tendo seu número normal de valências para formação de ligações (isto é, 4 para carbono, 3 para N, 2 para O e 2, 4 ou 6 para S, dependendo do estado de oxidação do S).
[027] Tal como usado no presente documento, uma “ROCK quinase” refere-se a um membro da família da proteína quinase associada a Rho (“ROCK”), incluindo ROCK1 e ROCK2 quinases.
[028] Conforme usado neste documento, um “inibidor de ROCK” refere-se a compostos da presente invenção que são representados pelas fórmulas (I) ou (II), conforme descrito neste documento. Esses compostos são capazes de modular negativamente ou inibir toda ou parte da atividade enzimática de uma ROCK quinase.
[029] O termo “alquila”, conforme empregado no presente documento, refere-se a grupos alifáticos de cadeia linear e ramificada com 1 a 12 átomos de carbono. Dessa forma, “alquila” abrange os grupos C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 e C12. Exemplos de grupos alquila incluem, sem limitação, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[030] O termo “ciano” refere-se a -CN.
[031] O termo “cicloalquila”, conforme empregado neste documento, é um grupo hidrocarboneto cíclico saturado e parcialmente insaturado com 3 a 12 carbonos. Dessa forma, “cicloalquila” inclui grupos de hidrocarbonetos cíclicos C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 e C12. Exemplos de grupos cicloalquila incluem, sem limitação, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo-heptila e ciclo-octila.
[032] Tal como usado no presente documento, o termo “heteroarila” refere-se a um grupo com 5 a 14 átomos no anel, preferencialmente 5, 6, 10, 13 ou 14 átomos no anel; com 6, 10 ou 14 elétrons π compartilhados em uma matriz cíclica; e com, além de átomos de carbono, um a três heteroátomos que são, cada um, independentemente N, O ou S. “Heteroarila” também inclui sistemas de anéis multicíclicos fundidos (por exemplo, bicíclicos) nos quais um ou mais dos anéis fundidos são não aromáticos, desde que pelo menos um anel seja aromático e pelo menos um anel contenha um átomo no anel N, O ou S.
[033] Exemplos de grupos heteroarila incluem acridinila, azocinila, benzimidazolila, benzofuranila, benzo[d]oxazol-2(3H)-ona, 2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, benzotiofuranila, benzotiofenila, benzoxazolila, benztiazolila, benztriazolila, benztetrazolila, benzisoxazolila, benzisotiazolila, benzimidazolinila, carbazolila, 4aH-carbazolila, carbolinila, cromanila, cromenila, cinolinila, furanila, furazanila, imidazolinila, imidazolila, 1H-indazolila, indolenila, indolinila, indolizinila, indolila, 3H-indolila, isobenzofuranila, isocromanila, isoindazolila, isoindolinila, isoindolila, isoquinolinila, isotiazolila, isoxazolila, naftiridinila, octa-hidroisoquinolinila, oxadiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila, oxazolidinila, oxazolila, oxazolidinila, pirimidinila, fenantridinila, fenantrolinila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxati-inila, fenoxazinila, ftalazinila, piperonila, pteridinila, purinila, piranila, pirazinila, pirazolidinila, pirazolinila, pirazolila, piridazinila, pirido-oxazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinila, piridila, pirimidinila, pirrolinila, 2H-pirrolila, pirrolila, quinazolinila, quinolinila, 4H-quinolizinila, quinoxalinila, quinuclidinila, tetra-hidroisoquinolinila, tetra-hidroquinolinila, tetrazolila, 6H-1,2,5-tiadiazinila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,4-tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, tiantrenila, tiazolila, tienila, tienotiazolila, tieno-oxazolila, tienoimidazolila, tiofenila, triazinila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, 1,2,5-triazolila, 1,3,4-triazolila e xantenila.
[034] O termo “heteroarila que contém aza” refere-se a um grupo heteroarila que contém um átomo de nitrogênio no lugar de um átomo de carbono em um grupo monocíclico, bicíclico, policíclico ou fundido com 5 a 14 átomos no anel, preferencialmente 5, 6, 10, 13 ou 14 átomos no anel; com 6, 10 ou 14 elétrons π compartilhados em uma matriz cíclica. “Heteroarila que contém aza” também inclui sistemas de anéis multicíclicos fundidos (por exemplo, bicíclicos) nos quais um ou mais dos anéis fundidos são não aromáticos, desde que pelo menos um anel seja aromático e pelo menos um anel contenha um N.
[035] Grupos heteroarila que contêm aza exemplificativos incluem, porém sem limitação, indolizinila, indolila, isoindolila, 3H-indolila, indolinila, indazolila, 1H-indazolila, benzimidazolila, benztiazolila, purinila, 4H-quinolizinila, quinolinila, isoquinolinila, cinolinila, ftalazinila, quinazolinila, quinoxalinila, 1,8-naftiridinila, pteridinila, quinuclidinila, carbazolila, acridinila, fenazimila, fenotiazinila, fenoxazinila, 2H-pirrolila, pirrolila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, oxazolila, tiazolila, imidazolila, 2-imidazolinila, pirazolila, 2-pirazolila, isoxazolila, isotiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,3,4-tiadiazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila e 1,3,5-triazinila.
[036] O termo “haloalquila” refere-se a uma cadeia alquila na qual um ou mais hidrogênios foram substituídos por um halogênio. As haloalquilas exemplificativas são trifluorometila, difluorometila, fluroclorometila e fluorometila.
[037] O termo “halogênio” ou “halo”, conforme empregado neste documento, refere-se a cloro, bromo, flúor ou iodo.
[038] O termo “hidroxila” refere-se a -OH.
[039] O termo “hidroxialquila” refere-se a -alquil-OH.
[040] Conforme usado neste documento, “uma quantidade eficaz” de um composto é uma quantidade que é suficiente para modular negativamente ou inibir a atividade de uma ROCK quinase.
[041] Tal como usado no presente documento, uma “quantidade terapeuticamente eficaz” de um composto é uma quantidade que é suficiente para melhorar ou, de alguma forma, reduzir um sintoma ou parar ou reverter a progressão de uma afecção, por exemplo, CCM, ou modular negativamente ou inibir a atividade de uma ROCK quinase. Essa quantidade pode ser administrada como uma dosagem única ou pode ser administrada de acordo com um regime, em que seja eficaz.
[042] Conforme usado neste documento, “tratamento” significa qualquer maneira pela qual os sintomas ou patologia de uma afecção, distúrbio ou doença em um paciente são melhorados ou, de outra forma, alterados de forma benéfica.
[043] Tal como usado neste documento, a melhoria dos sintomas de um distúrbio particular pela administração de um composto ou composição farmacêutica particular refere-se a qualquer diminuição, seja permanente ou temporária, duradoura ou transitória, que pode ser atribuída ou associada à administração da composição.
COMPOSTOS
[044] Em um aspecto da invenção, são fornecidos os compostos representados pela fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb): Fórmula (I)
Fórmula (II)
[045] ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
[046] em que:
[047] X é uma heteroarila parcialmente saturada que contém aza;
[048] Y é N ou CH;
[049] cada R1 é um grupo ciano, hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, -NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila;
[050] Q é uma ligação, O ou N;
[051] cada R2 é hidrogênio ou halogênio;
[052] cada R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C3 alquila;
[053] cada R4 é hidrogênio ou C1-C3 alquila; e
[054] m é 0, 1, 2 ou 3.
[055] Em um aspecto da invenção, X é uma heteroarila que contém aza selecionada de indolizinila, indolila, isoindolila, 3H-indolila, indolinila, indazolila, 1H-indazolila, benzimidazolila, benztiazolila, purinila, 4H-quinolizinila, quinolinila, isoquinolinila, cinolinila, ftalazinila, quinazolinila, quinoxalinila, 1,8-naftiridinila, pteridinila, quinuclidinila, carbazolila, acridinila, fenazimila, fenotiazinila, fenoxazinila, 2H-pirrolila, pirrolila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila,
oxazolila, tiazolila, imidazolila, 2-imidazolinila, pirazolila, 2-pirazolinila, isoxazolila, isotiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,3,4-tiadiazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila e 1,3,5-triazinila. Em uma modalidade, X é uma indolin-1-ila substituída por R1.
[056] Em uma modalidade, X é:
[057] em que m, Y e R1 são como definidos neste documento.
[058] Em uma modalidade, m é um e R1 é ciano, hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, -NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila.
[059] Em uma modalidade, R1 é ciano. Em uma modalidade, R1 é hidroxila. Em uma modalidade, R1 é halogênio. Em uma modalidade, o halogênio é cloro ou flúor. Em uma modalidade, R 1 é haloalquila. Em uma modalidade, a haloalquila é trifluorometila. Em uma modalidade, R 1 é Q-C1-C3 alquila. Em uma modalidade, Q é uma ligação e a C1-C3 alquila é metila, etila ou isopropila. Em uma modalidade, R1 é Q-C1-C3 alquila, em que Q é O e C1-C3 alquila é metila, etila ou isopropila. Em uma modalidade, R1 é Q-C1-C3 alquila, em que Q é N e C1-C3 alquila é metila, etila ou isopropila. Em uma modalidade, R1 é hidroxialquila, em que a hidroxialquila é hidroximetila. Em uma modalidade, R1 é alcóxi. Em uma modalidade, o alcóxi é metóxi. Em uma modalidade, R1 é o -N(R4)2. Em uma modalidade, cada grupo R4 é hidrogênio. Em uma modalidade, cada grupo R4 é C1-C3 alquila. Em uma modalidade, R1 é -NR4C(O)C1-C3 alquila. Em uma modalidade, o grupo R4 é hidrogênio e a C1-C3 alquila é metila. Em uma modalidade, R1 é cicloalquila, em que a cicloalquila é ciclopropila.
[060] Em uma modalidade, m é dois e cada R1 é independentemente ciano, hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, -NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila. Em certas modalidades, cada R1 é halogênio. Em uma modalidade, um R1 é ciano e o outro R1 é hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, -NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila.
[061] Em uma modalidade, X é:
[062] em que cada R1 é hidrogênio ou metila. Em uma modalidade, cada R1 é metila.
[063] Em uma modalidade, R2 é halogênio. Em certas modalidades, o halogênio é cloro.
[064] Em uma modalidade, R3 é halogênio ou C1-C3 alquila. Em certas modalidades, o halogênio é flúor. Em outras modalidades, R3 é C1-C3 alquila, em que C1-C3 alquila é metila.
[065] Em certas modalidades, os compostos de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) são:
[066] e sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos anteriores.
[067] Os compostos de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) podem ser formulados em composições farmacêuticas.
[068] Os compostos divulgados neste documento incluem todos os compostos marcados isotopicamente e que são farmaceuticamente aceitáveis, nos quais um ou mais átomos dos compostos divulgados neste documento são substituídos por átomos com o mesmo número atômico e uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados aos compostos divulgados neste documento incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor, cloro e iodo, tais como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I e 125I. Esses compostos radiomarcados podem ser úteis para ajudar a determinar ou medir a eficácia dos compostos, por exemplo, caracterizando afinidades de ligação e cinética de ligação a ROCK e outros modos de ação. Certos compostos da divulgação, quando marcados com isótopos radioativos, tais como trítio, 3H e carbono-14, 14C, também podem ser úteis na caracterização da distribuição de fármacos e expressão de tecido in vivo de ROCK.
[069] Quando marcados com isótopos mais pesados, como deutério, 2H, os compostos divulgados neste documento podem exibir vantagens terapêuticas, como maior estabilidade metabólica, resultando em meias-vidas in vivo mais longas, o que, por sua vez, pode reduzir os requisitos de dosagem terapêutica.
[070] A fim de caracterizar melhor a ocupação do receptor do substrato ou a expressão do tecido em espécimes vivos estática ou longitudinalmente, a troca de átomos de compostos divulgados neste documento por isótopos emissores de pósitrons, como 11C, 14F, 15O e 13N, pode permitir estudos de Tomografia de Emissão de Pósitrons (PET).
[071] Os compostos marcados isotopicamente, conforme divulgado neste documento, podem ser preparados por práticas convencionais conhecidas pelas pessoas versadas na técnica ou por processos que são análogos aos descritos nos exemplos e esquemas associados com o uso de um reagente marcado isotopicamente apropriado no lugar do reagente não marcado anteriormente empregado.
[072] Alguns dos compostos divulgados neste documento podem existir como estereoisômeros. Os compostos divulgados neste documento incluem todos os estereoisômeros, tanto como preparações de estereoisômeros individuais puros, quanto como preparações enriquecidas de cada um, e ambas as misturas racêmicas de tais estereoisômeros e os diastereômeros e enantiômeros individuais, que podem ser separados de acordo com métodos conhecidos pelas pessoas versadas na técnica. Além disso, os compostos divulgados neste documento incluem todos os estados tautoméricos individuais dos compostos e misturas dos mesmos.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS
[073] Em outro aspecto, a invenção fornece composições farmacêuticas que compreendem um inibidor de ROCK quinase de acordo com a invenção e um carreador, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os compostos da invenção podem ser formulados por qualquer método bem conhecido na técnica e podem ser preparados para administração por qualquer via, incluindo, sem limitação, parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, subcutânea, intranasal, intratraqueal ou intrarretal. Em certas modalidades, os compostos da invenção são administrados por via intravenosa em um ambiente hospitalar. Em certas outras modalidades, a administração pode ser preferencialmente por via oral.
[074] As características do carreador dependerão da via de administração. Tal como usado neste documento, o termo “farmaceuticamente aceitável” significa um material não tóxico que é compatível com um sistema biológico, como uma célula, cultura, tecido ou organismo de células, e que não interfere com a eficácia da atividade biológica do ingrediente ativo (ou ingredientes ativos). Assim, as composições de acordo com a invenção podem conter, além do inibidor, diluentes, cargas, sais, tampões, estabilizadores, solubilizantes e outros materiais bem conhecidos na técnica. A preparação de formulações farmaceuticamente aceitáveis é descrita, por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª Edição, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990.
[075] Tal como usado neste documento, o termo sais farmaceuticamente aceitáveis refere-se a sais que retêm a atividade biológica desejada dos compostos identificados acima e exibem efeitos toxicológicos mínimos ou nenhum efeito toxicológico indesejado. Exemplos de tais sais incluem, porém sem limitação, sais de adição de ácido formados com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico e semelhantes) e sais formados com ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tânico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácido naftalenossulfônico, ácido naftalenodissulfônico e ácido poligalacturônico. Os compostos também podem ser administrados como sais quaternários farmaceuticamente aceitáveis conhecidos pelas pessoas versadas na técnica, que incluem especificamente o sal de amônio quaternário da fórmula ---NR+Z-, em que R é hidrogênio, alquila ou benzila, e Z é um contraíon, incluindo cloreto, brometo, iodeto, --O-alquila, toluenossulfonato, metilsulfonato, sulfonato, fosfato ou carboxilato (tal como benzoato, succinato, acetato, glicolato, maleato, malato, citrato, tartarato, ascorbato, benzoato, cinamoato, mandeloato, benziloato e difenilacetato).
[076] O composto ativo é incluído no carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável em uma quantidade suficiente para fornecer a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz sem causar efeitos tóxicos graves no paciente tratado. Uma dose do composto ativo para todas as condições acima mencionadas está na faixa de cerca de 0,01 a 300 mg/kg; preferencialmente, 0,1 a 100 mg/kg por dia; mais geralmente, 0,5 a cerca de 25 mg por quilograma de peso corporal do destinatário por dia. Uma dosagem tópica típica variará de 0,01 a 3% em p/p em um carreador adequado. A faixa de dosagem eficaz dos derivados farmaceuticamente aceitáveis pode ser calculada com base no peso do composto original a ser entregue. Se o derivado exibir atividade em si mesmo, a dosagem eficaz pode ser estimada como acima, com o uso do peso do derivado, ou por outros meios conhecidos pelas pessoas versadas na técnica.
[077] As composições farmacêuticas que compreendem compostos da presente invenção podem ser usadas nos métodos descritos neste documento.
MÉTODOS DE USO
[078] Em ainda outro aspecto, a invenção fornece métodos para inibir a atividade ROCK em uma célula que compreende o contato da célula em que a inibição da atividade ROCK é desejada com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb), sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos ou composições farmacêuticas que contêm o composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[079] As composições e métodos fornecidos neste documento são considerados particularmente úteis para inibir a atividade ROCK em uma célula. Em uma modalidade, uma célula na qual a inibição da atividade ROCK é desejada é posta em contato com uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) para modular negativamente a atividade de uma ROCK quinase. Em outras modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de sal farmaceuticamente aceitável ou composições farmacêuticas que contêm o composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) podem ser usadas. Em certas modalidades, o contato da célula com uma quantidade eficaz ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) ocorre in vivo. Em certas modalidades, o contato da célula com uma quantidade eficaz ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) ocorre in vitro. Em uma modalidade, a quantidade terapeuticamente eficaz do composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) está entre cerca de 0,01 a 300 mg/kg por dia. Em uma modalidade, a quantidade terapeuticamente eficaz do composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) está entre cerca de 0,1 a 100 mg/kg por dia.
[080] Em uma modalidade, o composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb), preferencialmente, inibe a atividade ROCK2 quinase em relação à ROCK1 quinase. Em outra modalidade, o composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) inibe a atividade ROCK2 quinase e ROCK1 quinase em um grau semelhante. Em uma modalidade, a quantidade terapeuticamente eficaz do composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) está entre cerca de 0,01 a 300 mg/kg por dia. Em uma modalidade, a quantidade terapeuticamente eficaz do composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) está entre cerca de 0,1 a 100 mg/kg por dia.
[081] Em uma modalidade, são fornecidos métodos de tratamento de um paciente com síndrome de malformação cavernosa cerebral (CCM) que compreendem a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, sozinho ou combinado com um carreador, excipiente ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.
[082] Em outra modalidade, são fornecidos métodos de tratamento de uma doença cardiovascular associada à vasotensão aumentada que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) ou composição farmacêutica dos mesmos a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a doença cardiovascular é hipertensão, aterosclerose, acidente vascular cerebral isquêmico, vasoespasmo coronário, vasoespasmo cerebral, angina e disfunção erétil.
[083] Na modalidade, são fornecidos métodos de tratamento de doenças que envolvem contratilidade elevada do músculo liso não vascular que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb) ou composição farmacêutica dos mesmos a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a doença envolve contratilidade elevada do músculo liso não vascular, asma e glaucoma.
[084] Modulando-se negativamente a atividade ROCK, particularmente em casos de células que superexpressam a enzima ROCK ou mutações autossômicas dominantes que ativam a enzima ROCK, os métodos são projetados para modular a atividade ROCK, em algumas modalidades, para inibir a formação de novas CCMs e/ou reduzir ou erradicar as CCMs existentes em pacientes tratados ou tratar certas doenças cardiovasculares ou doenças que envolvem elevada contratilidade do músculo liso não vascular. As células/paciente podem ser postas em contato com uma dose única ou doses múltiplas de acordo com um regime de tratamento particular para efetuar a modulação negativa desejada de ROCK. Por exemplo, o tamanho e o número de CCMs podem ser monitorados usando-se métodos bem conhecidos, incluindo varreduras por TC ou varreduras de RMI, para avaliar a eficácia do tratamento e as dosagens podem ser ajustadas, em conformidade, pelo médico assistente.
[085] A concentração e a via de administração ao paciente podem variar dependendo da gravidade da doença. Os compostos, sais farmaceuticamente aceitáveis e composições farmacêuticas dos mesmos que compreendem tais compostos e sais também podem ser coadministrados com outros compostos ou usados em combinação com outros tratamentos, tais como intervenção cirúrgica, como um adjuvante antes da cirurgia ou pós-operatório. O grau de inibição da ROCK quinase pode ser monitorado no paciente com o uso de métodos de ensaio bem conhecidos, incluindo aqueles no Exemplo A, para acessar a eficácia do tratamento, juntamente com outras práticas de imageamento craniano e instrumentação, tais como tomografias computadorizadas, RMIs, raios X, etc. e as dosagens podem ser ajustadas, em conformidade, pelo médico assistente.
ESQUEMAS E EXEMPLOS DE REAÇÃO
[086] Os compostos da presente invenção podem ser preparados com o uso de reagentes comercialmente disponíveis usando-se os métodos sintéticos e esquemas de reação descritos neste documento, ou usando-se outros reagentes e métodos convencionais bem conhecidos pelas pessoas versadas na técnica.
[087] Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com os esquemas de reação gerais I e II.
ESQUEMA I
[088] O Esquema I ilustra a preparação de compostos de fórmula (I) da presente invenção. Uma haloisoquinolina A substituída por R2 sofre reação de substituição eletrofílica aromática com ácido sulfuroclorídrico sob temperatura elevada para proporcionar o intermediário halossulfonado Β (Etapa 1). A reação do intermediário halossulfonado Β sob condições ácidas, por exemplo, HCl e temperatura elevada, proporcionam isoquinolinona C substituída por ácido sulfônico (Etapa 2). O ácido sulfônico é convertido no cloreto de sulfonila, normalmente com o uso de cloreto de sulfurila em DMF a temperaturas reduzidas (Etapa 3). A adição de heteroarila X que contém aza substituída por R1 procede normalmente sob condições básicas com o uso de uma base apropriada, como TEA, em um solvente, como DCM, para proporcionar compostos E de fórmula (I) (Etapa 4).
Esquema II
[089] O Esquema II ilustra a preparação de compostos de fórmula (II) da presente invenção, em que R3 é C1-C3 alquila. A nitração da isoquinolina A substituída por halo é realizada usando-se ácido nítrico na presença de ácido sulfúrico sob temperaturas reduzidas, por exemplo, a 0 °C, para produzir o composto substituído por nitro Β. O ácido borônico R 3B(OH)2 é acoplado ao intermediário Β por meio de uma reação de Suzuki usando-se um catalisador de paládio apropriado, por exemplo, Pd(dddf)Cl 2, na presença de uma base adequada, por exemplo, CsCO3, em dioxano, para gerar Composto C substituído por R3. O composto C que contém nitro é reduzido à amina D. A amina D é reagida com nitrito de sódio sob condições ácidas e, em seguida, tratada com CuCl2 e SO2 para oferecer cloreto de sulfonila E. A adição de heteroarila X que contém aza substituída por R1 normalmente procede sob condições básicas com o uso de uma base apropriada, como TEA, em um solvente, como DCM, para proporcionar o composto F. A reação com m-CPBA oferece N-óxido G. O tratamento de N-óxido G com anidrido acético com aquecimento oferece o acetato que sofre rearranjo 2,3-sigmatrópico espontâneo. A desproteção do acetato fornece o composto 1-oxo H.
[090] Os Exemplos seguintes pretendem ilustrar, ainda, certas modalidades da invenção e não pretendem limitar o escopo da invenção. EXEMPLO 1
5-((4-metilindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[091] Composto 1-2: Uma solução de 1-cloroisoquinolina (5 g, 30,5 mmol) em ácido sulfuroclorídrico (50 ml, 750,9 mmol) foi agitada a 150 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de gelo e, em seguida, foi diluída com H 2O (300 ml) e extraiu-se com DCM (100 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (300 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 0:1 a 10:1). Composto 1-2, cloreto de 1-cloroisoquinolina-5-sulfonila (19,1 g, 72,9 mmol, 47,7% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[092] Composto 1-3: Uma solução de cloreto de 1-cloroisoquinolina-5-sulfonila (2,5 g, 9,54 mmol) em solução aq. de HCl (30 ml, 9 N, 276,9 mmol) foi agitada a 100 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, Composto 1-3, ácido 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfônico (2,8 g, bruto), foi obtido como um sólido amarelo e foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[093] Composto 1-4: A uma solução de ácido 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfônico (0,8 g, 3,55 mmol) em SOCl2 (40 ml) foi adicionado DMF (273 μl, 3,55 mmol) a 0 °C e a mistura foi agitada a 15 °C durante 30 min sob uma atmosfera de N2. Em seguida, a mistura foi agitada a 35 °C durante 2,5 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (100 ml) e extraída com DCM (200 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (100 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, Composto 1-4, cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (0,3 g, 1,23 mmol, 34,6% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo. O composto foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[094] EXEMPLO 1: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (150 mg, 615,6 μmol) em DCM (10 ml) foi adicionado TEA (128,5 μl, 923,4 μmol) e 4-metilindolina (90,1 mg, 677,1 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 5 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (60 ml) e extraída com DCM (200 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (80 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 1:1).
[095] EXEMPLO 1, 5-(4-metilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (90 mg, 252 μmol, 41,1% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 340,09.
[096] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,65 (br, 1H), 8,48 (d, J=8 Hz, 1H), 8,26 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,59 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,34 (t, J=6 Hz, 1H), 7,20~7,02 (m, 3H), 6,81 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,04 (t, J=8,0 Hz, 2H), 2,89 (t, J=8 Hz, 2H), 2,11 (s, 3H). EXEMPLO 2
5-((5-hidroxi-indolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[097] Composto 2-2: A uma solução de cloreto de 1-cloroisoquinolina-5-sulfonila (0,4 g, 1,53 mmol) em DCM (10 ml) foi adicionado TEA (318 μl, 2,29 mmol) e indolin-5-ol (226,9 mg, 1,68 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 1:1). Composto 2-2, 1-[(1-cloro-5-isoquinolil)sulfonil]indolin-5-ol (350 mg, 970,0 μmol, 63,6% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[098] EXEMPLO 2: Uma solução de 1-[(1-cloro-5-isoquinolil)sulfonil]indolin-5-ol (330 mg, 914,6 μmol) em HCl (10 ml, 9 N) foi agitada a 90 °C por 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de solução saturada de NaHCO 3 até o pH=7, e, em seguida, diluída com H2O (30 ml) e extraída com EtOAc (10 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (30 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: waters Xbridge Prep OBD C18 150 mm x 40 mm x 10 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mm)-B, ACN]; Β%: 25% a 55%, 11 min). EXEMPLO 2, 5-(5-hidroxi-indolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (6 mg, 17,1 μmol, 1,87% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 342,07.
[099] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 10,16 (br, 1H), 8,73 (d, J=8 Hz, 1H), 8,20 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,56~7,44 (m, 2H), 7,38~7,30 (m, 1H),
6,74 (s, 1H), 6,43 (d, J=6,4 Hz, 1H), 6,35 (d, J=8,4 Hz, 1H), 3,54 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,93 (d, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 3 5-(indolin-1-ilsulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[100] Composto 3-1: A uma solução de cloreto de 1-cloroisoquinolina-5-sulfonila (0,3 g, 1,14 mmol) em DCM (8 ml) foi adicionado TEA (238,9 μl, 1,72 mmol) e indolina (109,1 mg, 915,6 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (60 ml) e extraída com EtOAc (100 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, Composto 3-1, 1-cloro-5-indolin-1-ilsulfonil-isoquinolina (0,2 g, bruto) foi obtido como um sólido amarelo. O composto 3-1 foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[101] EXEMPLO 3: Uma mistura de 1-cloro-5-indolin-1-ilsulfonil-isoquinolina (0,2 g, 580,02 μmol, 1 eq) em solução aq. de HCI (5 ml, 12 M) foi agitada a 100 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (15 ml) a 0 °C e, em seguida, NaHCO3 foi adicionado à mistura para ajustar o pH a 8 e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi partilhado entre H2O (60 ml) e DCM (100 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2,
éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). EXEMPLO 3, 5-indon-1-ilsulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (40 mg, 117,5 μmol, 20,2% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 326,07.
[102] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,58 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,34 (d, J=8 Hz, 1H), 7,61 (t, J=8 Hz, 1H), 7,47 (d, J=8 Hz, 1H), 7,38 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,25~7,10 (m, 3H), 7,00 (t, J=8 Hz, 1H), 4,03 (t, J=8 Hz, 2H), 2,85 (t, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 4 5-((6-cloroindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1 (2H)-ona
[103] EXEMPLO 4: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (100,0 mg, 410,4 μmol) em DCM (5 ml) foi adicionado TEA (85,7 μl, 615,6 μmol) e 6-cloroindolina (56,7 mg, 369,4 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (50 ml) e extraída com DCM (150 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (100 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter:acetato de etila = 8:1 a 0:1). 40 mg do EXEMPLO 4, 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona, foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 360,03.
[104] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,60 (d, J=8 Hz, 1H), 8,35 (d, J=8 Hz, 1H), 7,63 (t, J=8 Hz, 1H), 7,45 (d, J=2 Hz, 1H), 7,37 (d, J=7,6
Hz, 1H), 7,26 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,10 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,02~6,96 (m, 1H), 4,03 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,87 (t, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 5 5-((6-fluoroindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1 (2H)-ona
[105] EXEMPLO 5: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (150,0 mg, 615,6 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados 6-fluoroindolina (75,9 mg, 554,0 μmol) e TEA (128,5 μl, 923,3 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (30 ml) e extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). EXEMPLO 5, 5-(6-fluoroindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (80 mg, 204,3 μmol, 33,2% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 344,06.
[106] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,59 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,36 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,62 (t, J=8 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8 Hz, 1H), 7,26 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,22~7,17 (m, 1H), 7,12~7,06 (m, 1H), 6,75~6,66 (m, 1H), 4,03 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,87 (t, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 6
5-((6-metilindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[107] Composto 6-1: A uma solução de cloreto de 1-cloroisoquinolina-5-sulfonila (0,3 g, 1,14 mmol) em DCM (8 ml) foram adicionados TEA (239 μl, 1,72 mmol) e 6-metilindolina (121 mg, 916 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (60 ml) e extraída com EtOAc (100 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, composto 6-1, 1-cloro-5-(6-metilindolin-1-il)sulfonil-isoquinolina (0,2 g, bruto), foi obtido como um sólido amarelo. O produto bruto foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[108] EXEMPLO 6: Uma mistura de 1-cloro-5-(6-metilindolin-1-il)sulfonil-isoquinolina (0,2 g, 557 μmol) em solução aq. de HCl (5 ml, 12 M) foi desgaseificada e purgada com N 2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 100 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (15 ml) a 0 °C e, em seguida, NaHCO3 foi adicionado à mistura para ajustar o pH a 8 e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. A mistura de reação foi diluída com H2O (60 ml) e extraída com DCM (100 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). EXEMPLO 6, 5-(6-metilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (40 mg, 107,4 μmol, 19,2% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 340,09.
[109] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,57 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,32 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,59 (t, J=8 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,22 (d, J=8 Hz, 1H), 6,99 (d, J=7,6 Hz, 1H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,01 (t, J=8 Hz 2H), 2,79 (t, J=8 Hz 2H), 2,31 (s, 3H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 7 5-((4-(hidroximetil)indolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-on a
[110] EXEMPLO 7: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (0,3 g, 1,23 mmol) em DCM (10 ml) foram adicionados TEA (257,0 μl, 1,85 mmol) e indolin-4-ilmetanol (202,0 mg, 1,35 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (15 ml) e extraída com DCM (5 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (15 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 0:1). EXEMPLO 7, 5-[4-(hidroximetil)indolin-1-il]sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (35 mg, 91,59 μmol,
7,44% de rendimento), foi obtido como um sólido marrom escuro. LC-MS: [M+1] 356,08.
[111] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,56 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,34 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,58 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,50 (d, J=8 Hz, 2H), 7,22 (d, J=8 Hz, 1H), 7,17 (t, J=8 Hz, HI), 7,04 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,06 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,91 (t, J=8,4 Hz, 2H). Dois prótons foram trocados. EXEMPLO 8 5-((4-(trifluorometil)indolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-on a
[112] EXEMPLO 8: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (150 mg, 615 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (128,5 μl, 923,3 μmol) e 4-(trifluorometil)indolina (103,6 mg, 554,0 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (30 ml) e extraída com DCM (75 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (20 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1).
[113] EXEMPLO 8, 5-[4-(trifluorometil)indolin-1-il]sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (20 mg, 44,2 μmol, 7,18% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 394,06.
[114] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,60 (d, J=8 Hz, 1H), 8,38 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,70 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,63 (t, J=8 Hz, 1H), 7,40~7,20 (m, 4H), 4,10 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,05 (t, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 9 5-((4-ciclopropilindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[115] EXEMPLO 9: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (150 mg, 615,5 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (128,5 μl, 923,3 μmol) e 4-ciclopropilindolina (88,2 mg, 554,0 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (40 ml) e foi extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (20 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). EXEMPLO 9, 5-(4-ciclopropilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoqui-nolin-1-ona (25 mg, 57,8 μmol, 9,39% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 366,10.
[116] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,57 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,59 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,07 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,05 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 2,93 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 1,73~1,67 (m, 1H), 0,88~0,86 (m, 2H), 0,57~0,55 (m, 2H). EXEMPLO 10
5-((4-etilindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[117] Composto 10-1: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (150 mg, 615,5 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (128,5 μl, 923,3 μmol) e 4-vinilindolina (98,3 mg, 677,1 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (30 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). Composto 10-1, 5-(4-vinilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (50 mg, 141,8 μmol, 23,05% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[118] EXEMPLO 10: Uma mistura de 5-(4-vinilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (50 mg, 141,8 μmol), Pd/C (5 mg, 10% em peso) em MeOH (5 ml) foi desgaseificada e purgada com H 2 3 vezes, e, em seguida, a mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob atmosfera de H2 (103,42 kPa (15 psi)). A mistura de reação foi filtrada e o filtro foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO 2, éter de petróleo:acetato de etila = 5:1 a 0:1). O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge 150 mm x 50 mm x 10 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 10 mM)-B, ACN]; Β%: 30% a 60%, 12 min). EXEMPLO 10, 5-(4-etilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (14 mg, 39,4 μmol, 27,7% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 354,10.
[119] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,58 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,34 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,60 (t, J=8 Hz, 1H), 7,32 (t, J=7,2 Hz, 2H), 7,18 (d, J=4,0 Hz, 1H), 7,13 (t, J=7,6 Hz, 1H), 6,88 (d, J=4 Hz, 1H), 4,03 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,76 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,50~2,44 (m, 2H), 1,06 (t, J=7,6 Hz, 3H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 11 5-((4-(1-hidroxietil)indolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-on a
[120] EXEMPLO 11: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (244,2 mg, 1,00 mmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (209,3 μl, 1,50 mmol) e 1-indolin-4-iletanol (180 mg, 1,10 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (60 ml) e extraída com DCM (150 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge 150 mm x 25 mm x 5 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM) B, ACN]; Β%: 10% a 40%, 10 min). EXEMPLO 11, 5-[4-(1-hidroxietil)indolin-1-il]sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (40 mg), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M + 1] 370,10.
[121] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,57 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,35 (d, J=8 Hz, 1H), 7,59 (t, J=8 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8, 1H), 7,34 (d, J=8
Hz, 1H), 7,21 a 7,15 (m, 2H), 7,11 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,88 a 4,71 (m, 1H), 4,07 a 4,01 (m, 2H), 2,89 a 2,80 (m, 2H), 1,26 (d, J=6,4 Hz, 3H). Dois prótons foram trocados. EXEMPLO 12 5-((3,3-dimetilindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[122] Composto 12-1: A uma solução de cloreto de 1-cloroisoquinolina-5-sulfonila (0,3 g, 1,14 mmol) em DCM (8 ml) foram adicionados TEA (238,9 μl, 1,72 mmol) e 3,3-dimetilindolina (134,8 mg, 915,6 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (60 ml) e extraída com EtOAc (100 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, Composto 12-1, 1-cloro-5-(3,3-dimetilindolin-1-il)sulfonil-isoquinolina (0,2 g, bruto), foi obtido como um sólido amarelo. O produto bruto foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[123] EXEMPLO 12: Uma mistura de 1-cloro-5-(3,3-dimetilindolin-1-il)sulfonilisoquinolina (0,2 g, 536,3 μmol) em solução aq. de HCl (5 ml, 12 M) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 100 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (15 ml) a 0 °C e, em seguida, NaHCO3 foi adicionado à mistura para ajustar a pH 8, filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi diluído com H2O (60 ml) e extraído com DCM (100 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, acetato de éter etílico de petróleo = 10:1 a 0:1). EXEMPLO 12, 5-(3,3-dimetilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (12 mg, 31,5 μmol, 5,88% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 354,10.
[124] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,58, (d, J=8 Hz, 1H), 8,42 (d, J=8 Hz, 1H), 7,62 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,48 (d, J=8 Hz, 1H), 7,43 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,23 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,18 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,11 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,02 (t, J=7,6 Hz, 1H), 3,73 (s, 2H), 1,08 (s, 6H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 13 5-((3-metilindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[125] EXEMPLO 13: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (100 mg, 410,4 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (85,6 μl, 615,6 μmol) e 3-metilindolina (55,7 mg, 328,3 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (50 ml) e extraída com DCM (150 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). 70 mg do EXEMPLO 13,
5-(3-metilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona, foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 340,09.
[126] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,67 (s, 1H), 8,49 (d, J=8 Hz, 1H), 8,30 (d, J=8 Hz, 1H), 7,61 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,31~7,30 (m, 2H), 7,20~7,13 (m, 3H), 7,01 (t, J=7,6 Hz, 1H), 4,19 (t, J=9,2 Hz, 1H), 3,57 a 3,53 (m, 1H), 3,29~3,24 (m, 1H), 1,05 (d, J=6,8 Hz, 3H). EXEMPLO 14 5-((4-isopropilindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[127] Composto 14-1: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (83,4 mg, 342,6 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (71,5 μl, 513,8 μmol) e 4-isopropenilindolina (60 mg, 376,82 μmol). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (10 ml) e extraída com DCM (50 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 1:1). O composto 14-1,5-(4-isopropenilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (50 mg, 136,4 μmol, 39,8% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo.
[128] EXEMPLO 14: A uma solução de 5-(4-isopropenilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (50 mg, 136,45 μmol, 1 eq) em MeOH (5 ml) foi adicionado Pd/C (5 mg, 10% de pureza) sob H 2. A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h com uma pressão de (103,42 kPa (15 psi)). A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, acetato de éter etílico de petróleo = 5:1 a 0:1). O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge 150 mm x 50 mm x 10 um; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; B%: 30% a 60%, 12 min). EXEMPLO 14, 5-(4-isopropilindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (8 mg, 21,50 μmol, 15,7% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 368,12.
[129] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,57 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,34 (d, J=6,8 Hz, 1H), 7,59 (t, J=8 Hz, 1H), 7,32 a 7,26 (m, 2H), 7,15 (t, J=7,6 Hz, 2H), 6,95 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,00 (t, J=8 Hz, 2H), 2,81 ~2,71 (m, 3H), 1,10 (d, J=6,8 Hz, 6H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 15 1-((1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolina-6-car bonitrila
[130] EXEMPLO 15: A uma solução de cloreto de 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfonila (202,8 mg, 832,3 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (173,8 μl, 1,25 mmol) e indolina-6-carbonitrila (120 mg, 832,3 μmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 5 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H 2O (40 ml) e, em seguida, a mistura de reação foi extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). EXEMPLO 15, 1-[(1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (80 mg, 215,8 μmol, 25,9% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 351,07.
[131] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,68 (s, 1H), 8,51 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,37 (d, J=6,4 Hz, 1H), 7,64 (t, J=8 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,47 a 7,40 (m, 3H), 7,11 (d, J=7,2 Hz, 1H), 4,06 (t, J=8 Hz, 2H), 3,07 (t, J=8,0 Hz, 2H). EXEMPLO 16 5-((4,6-dicloroindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[132] EXEMPLO 16: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (176,6 mg, 725,1 μmol) em DCM (3 ml) foram adicionados TEA (151,3 μl, 1,09 mmol) e 4,6-dicloroindolina (150 mg, 797,6 μmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (60 ml) e extraída com DCM (150 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (50 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150 mm x 40 mm x 10 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; B%: 35% a 55%, 11 min). EXEMPLO 16, 5-(4,6-dicloroindolin-1-il)sulfonilisoquinolin-1-ol (60 mg, 150,5 μmol, 20,7% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 393,99.
[133] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,53 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,31 (d, J=8 Hz, 2H), 7,67 (t, J=8 Hz, 1H), 7,39 (d, J=7,6 Hz, 1H) 7,23 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,10 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,09 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,03 (t, J=8,4 Hz, 2H). EXEMPLO 17 4-ciclopropil-1-((1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)i ndolina-6-carbonitrila
[134] EXEMPLO 17: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (50 mg, 205,2 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (85,6 μl, 615,6 μmol) e 4-ciclopropilindolina-6-carbonitrila (37,8 mg, 205,2 μmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (15 ml) e extraída com DCM (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Xtimate C18 150 mm x 25 mm x 5 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; Β%: 50% a 80%, 10 min). EXEMPLO 17, 4-ciclopropil-1-[(1-hidroxi-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (19 mg,
47,5 μmol, 23,1% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 391,10.
[135] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,62 (d, J=8 Hz, 1H), 8,39 (d, J=6,8 Hz, 1H), 7,65 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,35 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,27 (d, J=7,6 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,09 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,07 (t, J=8,4 Hz, 2H), 1,79~1,77 (m, 1H), 0,98~0,95 (m, 2H), 0,68 a 0,66 (m, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 18 4-metil-1-((1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolin a-6-carbonitrila
[136] EXEMPLO 18: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (100 mg, 410,4 μmol) em DCM (5 ml) foram adicionados TEA (65,9 μl, 474,0 μmol) e 4-metilindolina-6-carbonitrila (50 mg, 316,0 μmol). A mistura de reação foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e foi extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 0:1). O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 4:5). EXEMPLO 18,
1-[(1-hidroxi-5-isoquinolil)sulfonil]-4-metilindolina-6-carbonitrila (8 mg, 19,9 μmol, 6,30% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 365,08.
[137] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,61 (d, J=8 Hz, 1H), 8,38 (d, J=8 Hz, 1H), 7,64 (t, J=8 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,37 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,28 (d, J=8 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 4,07 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,96 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,20 (s, 3H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 19 7-cloro-5-((6-cloroindolin-1-il)sulfonil)isoquinolin-1(2H)-ona
[138] Composto 19-2: Uma mistura de 3,5-diclorobenzaldeído (25 g, 142,8 mmol), 2,2-dietoxietanamina (83,08 ml, 571,3 mmol) em tolueno (200 ml) foi desgaseificada e purgada com N 2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 110 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (500 ml) e extraída com EtOAc (900 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (200 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, composto 19-2, (E)-1-(3,5-diclorofenil)-N-(2,2-dietoxietil)metanimina (35 g, bruto) foi obtido como um sólido amarelo. O produto bruto foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[139] Composto 19-3: A uma solução de H2SO4 (500 ml) foi adicionada, gota a gota, (E)-1-(3,5-diclorofenil)-N-(2,2-dietoxietil) metanimina (30 g, 103,3 mmol) em DCM (100 ml) a 125 °C. A mistura resultante foi agitada a 125 °C durante 6 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (200 ml) a 0 °C e, em seguida, NaOH aq. (200 ml) foi adicionado à mistura para ajustar o pH 8. A mesma foi extraída com EtOAc (1000 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (200 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 20:1 a 5:1).
[140] Composto 19-3, 5,7-dicloroisoquinolina (8 g, 40,3 mmol, 39,0% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[141] Composto 19-4: Uma mistura de 5,7-dicloroisoquinolina (100 mg, 504,9 μmol), difenilmetanimina (137,2 mg, 757,3 μmol), (5-difenilfosfanil-9,9-dimetil-xanten-4-il)-difenil-fosfano, metanossulfonato, [2-[2-(metilamino)fenil]fenil] paládio (485,9 mg, 504,9 μmol), t-BuONa (2 M, 1,26 ml) em tolueno (10 ml) foi desgaseificada e purgada com N 2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 100 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, acetato de éter etílico de petróleo = 20:1 a 1:1).
[142] Composto 19-4, N-(7-cloro-5-isoquinolil)-1,1-difenil-metanimina (40 mg, 116,6 μmol, 11,5% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[143] Composto 19-5: A uma solução de N-(7-cloro-5-isoquinolil)-1,1-difenil-metanimina (0,3 g, 875,0 μmol) em THF (10 ml) foi adicionado HCl (3 M, 525,0 μl). A mistura foi agitada a 25 °C durante 2 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (10 ml) a 0 °C e, em seguida, NaOH aq. (10 ml) foi adicionado à mistura para ajustar o pH a 8. A mistura de reação foi diluída com H2O (10 ml) e extraída com DCM (50 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 5:1 a 1:1). Composto 19-5, 7-cloroisoquinolin-5-amina (0,1 g, 559,8 μmol, 63,9% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[144] Composto 19-6: A uma solução de 7-cloroisoquinolin-5-amina (0,1 g, 559 μmol) em HCl (5 ml) foram adicionados NaNO2 (38,6 mg, 559,8 μmol) e H2O (1 ml) a -5 °C. A mistura foi agitada a -5 °C durante 1 h. Em seguida, transferiu-se, em uma porção, até uma solução de AcOH (5 ml) com CuCl (13,8 mg, 139,9 μmol) em H2O (1 ml) que foi saturada com SO2 borbulhado. A mistura foi agitada a 25 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi retomado com água (20 ml) e DCM e extraído com DCM (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, composto 19-6, cloreto de 7-cloroisoquinolina-5-sulfonila (0,2 g, bruto) foi obtido como um sólido amarelo que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[145] Composto 19-7: A uma solução de cloreto de 7-cloroisoquinolina-5-sulfonila (0,2 g, 763,0 μmol) em acetona (10 ml) foram adicionados K2CO3 (158,1 mg, 1,14 mmol) e 6-cloroindolina (128,9 mg, 839,3 μmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação é diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 1:1).
[146] Composto 19-7, 7-cloro-5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-isoquinolina (80 mg, 210,9 μmol, 27,6% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[147] Composto 19-8: Uma mistura de 7-cloro-5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-isoquinolina (80 mg, 210,9 μmol), m-CPBA (65,7 mg, 316,4 μmol) em DCM (5 ml) foi resfriada a 0 °C e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (15 ml) e extraída com DCM (25 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada a 10 ml, secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:EtOAc = 10:1 para DCM: MeOH = 10:1). Composto 19-8, 7-cloro-5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-2-oxido-isoquinolin-2-io (50 mg, 126,5 μmol, 59,9% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[148] Composto 19-9: Uma mistura de 7-cloro-5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-2-oxido-isoquinolin-2-io (50 mg, 126,5 μmol) em AC2O (3 ml) foi acalorada a 90 °C e, em seguida, a mistura foi agitada a 90 °C durante 3 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, [7-cloro-5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-1-isoquinolil] acetato (40 mg, bruto), foi obtido como um sólido marrom que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[149] EXEMPLO 19: Uma mistura de [7-cloro-5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-1-isoquinolil] acetato (40 mg, 91,4 μmol) e KOH (7,70 mg, 137,2 μmol) em MeOH (5 ml) foi desgaseificada e purgada com
N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 2 h sob uma atmosfera de N2. Em seguida, a mistura foi agitada a 70 °C durante 3 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Xtimate C18 150 mm x 25 mm x 5 μm; fase móvel: [A, água (NH 4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; Β%: 50% a 70%, 10 min). EXEMPLO 19, 7-cloro-5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-2H-isoquinolin-1-ona (18 mg, 45,0 μmol, 49,2% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 393,99.
[150] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,43 (d, J=4,4 Hz, 1H), 8,21 (d, J=2,8 Hz, 1H), 7,38 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,33 (d, J=1,6 Hz, 1H), 7,23 (d, J=8 Hz, 1H), 7,08 (t, J=7,6 Hz, 2H), 4,05 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,95 (t, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 20 1-((7-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolin a-6-carbonitrila
[151] Composto 20-1: A uma solução de cloreto de 7-cloroisoquinolina-5-sulfonila (0,1 g, 381,5 μmol) em acetona (8 ml) foram adicionados K2CO3 (79,0 mg, 572,2 μmol) e indolina-6-carbonitrila (60,5 mg, 419,6 μmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila - 10:1 a 0:1). Composto 20-1, 1-[(7-cloro-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (30 mg, 81,1 μmol, 21,2% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[152] Composto 20-2: Uma mistura de 1-[(7-cloro-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (30 mg, 81,1 μmol), m-CPBA (26,2 mg, 121,6 μmol) em DCM (5 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (15 ml) e extraída com DCM (50 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 5:1 para DCM:McOH = 10:1). Composto 20-2, 1-(7-cloro-2-oxido-isoquinolin-2-io-5-il)sulfonilindolina-6-carbonitrila (30 mg), foi obtido como um sólido amarelo.
[153] Composto 20-3: Uma mistura de 1-(7-cloro-2-oxido-isoquinolin-2-ium-5-il)sulfonilindolina-6-carbonitrila (30 mg, 77,7 μmol) em Ac2O (3 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 100 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, Composto 20-3, [7-cloro-5-(6-cianoindolin-1-il)sulfonil-1-isoquinolil] acetato (20 mg, bruto), foi obtido como um óleo amarelo que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[154] EXEMPLO 20: Uma mistura de [7-cloro-5- (6-cianoindolin-1-il)sulfonil-1-isoquinolil] acetato (20 mg, 46,7 μmol) e KOH (5,25 mg, 93,4 μmol) em MeOH (5 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 2 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (10 ml) e extraída com DCM (50 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: HUAPU C8 Extreme BDS 150 mm x 30 mm x 5 um; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; Β%: 45% a 55%, 10 min).
[155] EXEMPLO 20, 1- [(7-cloro-1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (2 mg, 4,7 μmol, 10,2% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 385,03.
[156] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,44 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,32 (d, J=2 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,52 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,45~7,36 (m, 2H), 7,04 (d, J=8,8 Hz, 1H), 4,07 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,07 (t, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 21 5-((6-cloroindolin-1-il)sulfonil)-4-fluoroisoquinolin-1-ol
(ii) SO2, CuCl2, dioxano 0 a 5 °C, 2 h
[157] Composto 21-2: A uma solução de n-BuLi (2,5 M, 201,8 ml) em THF (100 ml) foi adicionada uma solução de 4-bromoisoquinolina (30 g, 144,1 mmol) em THF (100 ml) a -65 °C. A mistura foi agitada a -65 °C durante 30 min. Uma solução de N-(benzenossulfonil)-N-fluoro-benzenossulfonamida (100,0 g, 317,2 mmol) em THF (100 ml) foi adicionada a -65 °C. A mistura foi agitada a -65 ° C durante 1 h. Em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 10,5 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (500 ml) e extraída com EtOAc (1500 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (100 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto, composto 21-2, 4-fluoroisoquinolina (30 g, bruto), foi obtido como um óleo marrom. O produto bruto foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[158] Composto 21-3: A uma solução de 4-fluoroisoquinolina (8 g, 54,3 mmol) em H2SO4 (50 ml) foi adicionado KNO3 (6,05 g, 59,8 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (100 ml) a -15 °C e, em seguida, NaOH aq. (50 ml) foi adicionado à mistura para ajustar a pH 8. A mesma foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 1:1). Composto 21-3, 4-fluoro-5-nitro-isoquinolina (5 g, 26,0 mmol, 47,8% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[159] Composto 21-4: Uma mistura de 4-fluoro-5-nitro-isoquinolina (5 g, 26,0 mmol), NH4Cl (11,1 g, 208,1 mmol), Zn (13,6 g, 208,1 mmol) em THF (20 ml) e H2O (10 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 5 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO 2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 1:1). Composto 21-4, 4-fluoroisoquinolin-5-amina (3 g, 18,5 mmol, 71,1% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[160] Composto 21-5: A uma solução de 4-fluoroisoquinolin-5-amina (3 g, 18,5 mmol) em HCl (10 ml) foram adicionados NaNO3 (1,57 g, 18,5 mmol) e H2O (2 ml) a -15 °C. A mistura foi agitada a -15 °C durante 1 h sob uma atmosfera de N2. Em seguida, a mesma foi transferida para uma solução de AcOH (10 ml) com CuCl (457,8 mg, 4,62 mmol) e H 2O (2 ml) que foi saturada por SO2 borbulhado. A mistura foi agitada a -5 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto bruto de Composto 21-5, cloreto de 4-fluoroisoquinolina-5-sulfonila (1,1 g, bruto), foi obtido como um sólido amarelo e foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[161] Composto 21-6: Uma mistura de cloreto de 4-fluoroisoquinolina-5-sulfonila (0,5 g, 2,04 mmol), 6-cloroindolina (250,1 mg, 1,63 mmol), TEA (424,9 μl, 3,05 mmol) em DCM (10 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (30 ml) e extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (20 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, acetato de éter etílico de petróleo = 10:1 a 1:1). Composto 21-6, 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-fluoro-isoquinolina (0,2 g, 551,2 μmol), foi obtido como um sólido amarelo.
[162] Composto 21-7: Uma mistura de 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-fluoro-isoquinolina (0,2 g, 551 μmol), m-CPBA (142,6 mg, 826,9 μmol) em DCM (10 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 5:1 para DCM: MeOH = 10:1). Composto 21-7, 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-fluoro-2-oxido-isoquinolin-2-io (70 mg, 184 μmol, 33,5% de rendimento), foi obtido como um sólido branco.
[163] EXEMPLO 21: Uma mistura de 5- (6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-fluoro-2-oxido-isoquinolin-2-io (70 mg, 184,7 μmol) em Ac2O (10 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 110 °C durante 8 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: HUAPU C8 Extreme BDS 150 mm x 30 mm x 5 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; Β%: 35% a 55%, 10 min). EXEMPLO 21, 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-fluoro-isoquinolin-1-ol (5 mg, 12,2 μmol, 6,61% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. LC-MS: [M+1] 378,81.
[164] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 9,10 (s, 1H), 8,74 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,23 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,97 (d, J=6,8 Hz, 1H), 7,81 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,35 (d, J=8 Hz, 1H), 7,12~7,15 (m, 1H), 4,16 (t, J=8,8 Hz, 2H), 3,23 (t, J=8,4 Hz, 2H). Um próton foi trocado. EXEMPLO 22
1- ((1-hidroxi-4-metilisoquinolin-5-il)sulfonil)indolina-6-carb onitrila
[165] Composto 22-1: A uma mistura de KNO3 (21,3 g, 211,4 mmol) em H2SO4 (600 ml) foi adicionada 4-bromoisoquinolina (40 g, 192,2 mmol) a 0 °C e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por meio da adição de água gelada (3000 ml) e, em seguida NH3.H2O foi adicionado à mistura para ajustar o pH para 8. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi lavado com MeOH (500 ml) e, depois, filtrado. O sólido foi dissolvido com EtOAc (500 ml) e H 2O (1000 ml). A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo.
[166] Composto 22-1, 4-bromo-5-nitro-isoquinolina (75 g, 296,3 mmol, 77,0% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[167] Composto 22-2: A uma mistura de 4-bromo-5-nitro-isoquinolina (55 g, 217,3 mmol) em dioxano (500 ml) e H 2O (50 ml) foram adicionados ácido metilborônico (26,02 g, 434,6 mmol), Cs2CO3 (141,6 g, 434,6 mmol) e Pd(dppf)Cl2 (15,90 g, 21,73 mmol) em uma porção. A mistura foi aquecida a 110 °C e agitada durante 12 h. A mistura de reação foi filtrada. O filtrado foi diluído com H2O (1,2 l) e extraiu-se com EtOAc (800 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1,2 l), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO 2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 3:1). Composto 22-2, 4-metil-5-nitro-isoquinolina (36 g, 191,3 mmol, 88,0% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[168] Composto 22-3: A uma solução de 4-metil-5-nitro-isoquinolina (33 g, 175,3 mmol) em THF (500 ml) e H2O (250 ml) foram adicionados Zn (91,7 g, 1,40 mol) e NH4Cl (75,0 g, 1,40 mol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 0:1). Composto 22-3, 4-metilisoquinolin-5-amina (20 g, 113,8 mmol, 64,8% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[169] Composto 22-4: Solução 1: A uma mistura de 4-metilisoquinolin-5-amina (3 g, 18,9 mmol) em HCl (30 ml) foram adicionados NaNO2 (1,31 g, 18,9 mmol) e H2O (6 ml) em uma porção a -5 °C sob N2. A mistura foi agitada a -5 °C durante 1 h. Solução 2: Fez-se com que SO2 borbulhasse em uma solução de CuCl (469,3 mg, 4,74 mmol) em HOAc (30 ml) e H2O (6 ml) a 0 °C durante 30 minutos. As duas soluções foram misturadas e agitadas a 25 °C durante 1,5 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi diluído com H2O (300 ml) e extraído com DCM (200 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (300 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O composto 22-4, cloreto de 4-metilisoquinolina-5-sulfonila (2 g, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo e foi usado diretamente sem purificação.
[170] Composto 22-5: A uma solução de cloreto de 4-metilisoquinolina-5-sulfonila (2 g, 8,27 mmol) em acetona (30 ml) foram adicionados K2CO3 (3,43 g, 24,8 mmol) e indolina-6-carbonitrila (1,19 g, 8,27 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h. A mistura foi aquecida a 50 °C e agitada durante 2 horas. A mistura de reação foi diluída com H2O (200 ml) e extraída com DCM (200 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 0:1). Composto 22-5, 1- [(4-metil-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (1,1 g, 2,52 mmol, 30,4% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[171] Composto 22-6: A uma solução de 1-[(4-metil-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (1,1 g, 3,15 mmol) em DCM (30 ml) foi adicionado m-CPBA (1,44 g, 6,93 mmol) a 0 °C. A mistura foi acalorada a 25 °C e agitada durante 12 h. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0, acetato de etila: EtOH = 1:1). Composto 22-6, 1- (4-metil-2-oxido-isoquinolin-2-io-5-il)sulfonilindolina-6-carbonitrila (1 g, 2,54 mmol, 80,7% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[172] EXEMPLO 22: Uma mistura de 1-(4-metil-2-oxido-isoquinolin-2-io-5-il)sulfonilindolina-6-carbonitrila (1 g, 2,74 mmol) em Ac2O (20 ml) foi aquecida a 120 °C e agitada durante 12 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi dissolvido em DMF (20 ml) e filtrado. O filtrado foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150 mm x 40 mm x 10 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; B%: 20% a 50%, 11 min) e concentrado. O produto foi adicionado a EtOH (2 ml) e filtrado para fornecer 1- [(1-hidroxi-4-metil-5-isoquinolil)sulfonil] indolina-6-carbonitrila (19 mg) como um sólido amarelo claro. LC-MS: [M+1] 365,08.
[173] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,71 (br, 1H), 8,59 (d, J=6,4 Hz, 1H), 7,89 (d, J=6,4 Hz, 1H), 7,59~7,51 (m, 3H), 7,25 (s, 2H), 4,22 (t, J=8,8 Hz, 2H), 3,4 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,61 (s, 3H). EXEMPLO 23
1- ((1-hidroxi-4-metilisoquinolin-5-il)sulfonil) -4-metilindolin a-6-carbonitrila
[174] Composto 23-1: A uma solução de cloreto de 4-metilisoquinolina-5-sulfonila (100 mg, 413,7 μmol) em acetona (5 ml) foram adicionados K2CO3 (171,5 mg, 1,24 mmol) e 4-metilindolina-6-carbonitrila (52,36 mg, 331,0 μmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h. A mistura foi aquecida a 50 °C e agitada durante 6 horas. A mistura de reação foi diluída com H2O (100 ml) e extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 0:1).
[175] Composto 23-1, 4-metil-1- [(4-metil-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (50 mg, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo.
[176] Composto 23-2: A uma solução de 4-metil-1- [(4-metil-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (50 mg, 137 μmol) em DCM (10 ml) foi adicionado m-CPBA (62,9 mg, 302,7 μmol) a 0 °C. A mistura foi aquecida a 25 °C e agitada durante 2 h. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0, acetato de etila: MeOH = 5:1). Composto 23-2,
4-metil-1- (4-metil-2-oxido-isoquinolin-2-io-5-il)sulfonil-indolina-6-carbonitrila (40 mg, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo.
[177] EXEMPLO 23: Uma mistura de 4-metil-1- (4-metil-2-oxido-isoquinolin-2-io-5-il)sulfonil-indolina-6-carbonitrila (40 mg, 105,4 μmol) em Ac2O (5 ml) foi aquecida a 100 °C e agitada durante 12 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Luna C18 100 mm x 30 mm x 5 μm; fase móvel: [A, água (0,1% de TFA)-B, ACN]; Β%: 30% a 55%, 12 min). EXEMPLO 23, 1-[(1-hidroxi-4-metil-5-isoquinolil)sulfonil]-4-metil-indolina-6-carbonitrila (1,6 mg, 3,97 μmol, 3,76% de rendimento) foi obtido como um sólido marrom. LC-MS: [M+1] 379,10.
[178] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,71 (br, 1H), 8,59 (d, J=8 Hz, 1H), 7,88 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,53 (t, J=8 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,26~7,25 (m, 1H), 7,09 (s, 1H), 4,22 (t, J=8 Hz, 2H) 2,61 (s, 6H) (2H pode ser sobreposto com o ponto máxima de água). EXEMPLO 24 5-((6-cloroindolin-1-il)sulfonil)-4-metilisoquinolin-1-ol
[179] Composto 24-1: A uma solução de cloreto de 4-metilisoquinolina-5-sulfonila (500 mg, 2,07 mmol) em acetona (10 ml) foram adicionados K2CO3 (857,7 mg, 6,21 mmol) e 6-cloroindolina (317,8 mg, 2,07 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi diluído com H2O (200 ml) e extraída com EtOAc (150 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0 a 0:1). Composto 24-1, 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-metil-isoquinolina (400 mg, 947,4 μmol, 45,80% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[180] Composto 24-2: A uma solução de 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-metil-isoquinolina (400 mg, 1,11 mmol) em DCM (10 ml) foi adicionado m-CPBA (579,3 mg, 2,79 mmol) a 0 °C. A mistura foi aquecida a 25 °C e agitada durante 2,5 horas. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 1:0, acetato de etila: MeOH = 5:1). Composto 24-2, 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-metil-2-oxido-isoquinolin-2-io (300 mg, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo.
[181] EXEMPLO 24: Uma mistura de 5- (6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-metil-2-oxido-isoquinolin-2-io (300 mg, 800,3 μmol) em Ac2O (10 ml) foi aquecida a 100 °C e agitada durante 12 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150 mm x 40 mm x 10 μm; fase móvel: [A, água (NH4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; Β%: 30% a 55%, 11 min). MeOH (2 ml) foi adicionado, a mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para oferecer o composto 24, 5- (6-cloroindolin-1-il)sulfonil-4-metil-isoquinolin-1-ol (6 mg, 15,2 μmol, 40,7% de rendimento) como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 374,05.
[182] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,70 (br, 1H), 8,59 (d, J=4,4 Hz, 1H), 7,86 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,54 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J=8 Hz, 1H), 7,25 (d, J=4,8 Hz 1H), 7,09 (d, J=8,8 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,2 (t, J=8 Hz, 1H), 3,26 (m, 2H, sobreposto com o ponto máximo de solvente), 2,61 (s, 3H). Um próton foi trocado.
EXEMPLO 25 5-((6-cloroindolin-1-il)sulfonil)ftalazin-1(2H)-ona
[183] Composto 25-2: Uma mistura de 4-nitroisoindolina-1,3-diona (25 g, 130,1 mmol), NaBH4 (11,13 g, 294,0 mmol) em MeOH (250 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes. A mistura foi agitada a 25 °C durante 2 h sob uma atmosfera de N2. A solução foi acidificada com HCl a 20% (100 ml) e a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo seco foi tratado com acetona. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). Composto 25-2, 3-hidroxi-4-nitro-isoindolin-1-ona (15 g, 59% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[184] Composto 25-3: Uma mistura de 3-hidroxi-4-nitro-isoindolin-1-ona (10 g, 51,5 mmol) em HCl (70 ml, solução aquosa a 20%) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes. A mistura foi agitada a 90 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 1:1). O composto 25-3, 3-hidroxi-4-nitro-3H-isobenzofuran-1-ona (10 g, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo e foi usado sem purificação adicional.
[185] Composto 25-4: Uma mistura de 3-hidroxi-4-nitro-3H-isobenzofuran-1-ona (10 g, 51,2 mmol), N2H4.H2O (9,05 g, 153,7 mmol) em EtOH (200 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes. A mistura foi agitada a 80 °C durante 5 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila a DCM:MeOH = 10:1 a 10:1).
[186] Composto 25-4, 5-nitro-2H-ftalazin-1-ona (6 g, 31,3 mmol, 61,2% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo.
[187] Composto 25-5: Uma mistura de 5-nitro-2H-ftalazin-1-ona (6 g, 31,3 mmol), Pd/C (3 g, 10% em peso) em MeOH (100 ml) foi desgaseificada e purgada com H2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob atmosfera de H2 com uma pressão de 103,42 kPa (15 psi). A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila a DCM: MeOH =10:1 a 10:1).
[188] Composto 25-5, 5-amino-2H-ftalazin-1-ona (3 g, 18,6 mmol, 59,3% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[189] Composto 25-6: A uma solução de 5-amino-2H-ftalazin-1-ona (3 g, 18,61 mmol) em HCl (20 ml) foram adicionados NaNO2 (1,28 g, 18,61 mmol) e H2O (5 ml) a -5 °C. A mistura foi agitada a -5 °C durante 1 h. Em seguida, transferiu-se, em uma porção, a uma solução de AcOH (15 ml) com CuCl (460,7 mg, 4,65 mmol) e H2O (5 ml) que foi saturada borbulhando-se SO2. A mistura foi agitada a 25 °C durante 2 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto em bruto do Composto 25-6, cloreto de 1-oxo-2H-ftalazina-5-sulfonila (1,5 g, 6,13 mmol, rendimento de 32,9%), foi obtido como um sólido amarelo e foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[190] EXEMPLO 25: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-ftalazina-5-sulfonila (1 g, 4,09 mmol) em DCM (15 ml) foram adicionados TEA (853,3 ul, 6,13 mmol) e 6-cloroindolina (502,2 mg, 3,27 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (50 ml) e extraída com DCM (150 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (10 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). Composto 25, 5-(6-cloroindolin-1-il)sulfonil-2H-ftalazin-1-ona (0,15 g, 373,3 μmol, 9,13% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 361,03.
[191] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 13,08 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,56 (d, J=8 Hz, 1H), 8,46 (d, J=8 Hz, 1H), 8,02 (t, J=8 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,22 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J=8,4 Hz, 1H), 4,06 (t, J=8 Hz, 2H), 2,90 (t, J=8,4 Hz, 2H). EXEMPLO 26 1-((1-oxo-1,2-di-hidroftalazin-5-il)sulfonil)indolina-6-carbon itrila
[192] EXEMPLO 26: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-ftalazina-5-sulfonila (0,5 g, 2,04 mmol) em DCM (15 ml) foram adicionados TEA (426 ul, 3,07 mmol) e indolina-6-carbonitrila (235 mg, 1,63 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com EtOAc (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (20 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etila = 10:1 a 0:1). Composto 26, 1-[(1-oxo-2H-ftalazin-5-il)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (30 mg, 81,6 μmol, rendimento de 3,99%) foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: [M+1] 352,06.
[193] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 13,09 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,56 (d, J=8 Hz, 2H), 8,01 (t, J=8 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,52 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,41 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,08 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,03 (t, J=8,4 Hz, 2H). EXEMPLO 27 1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolin a-6-carbonitrila
[194] Composto 27-2. A uma mistura de 4-cloroisoquinolina (5 g, 30,56 mmol, 1 eq), em H2SO4 (20 ml), KNO3 (3,40 g, 33,62 mmol, 1,1 eq) foi adicionado a 0 °C sob N2. A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi adicionada à água gelada (100 ml) e, em seguida, solução saturada de NaOH foi adicionada até o pH ser ajustado para pH = 10. A mistura foi extraída com EtOAc (200 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi lavado com a mistura de solvente de éter de petróleo/acetato de etila = 1/1 (50 ml). A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. Composto 27-2, 4-cloro-5-nitro-isoquinolina (4 g, 19,18 mmol, 62,74% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[195] Composto 27-3: A uma solução de 4-cloro-5-nitro-isoquinolina (4 g, 19,18 mmol, 1 eq) e NH4Cl (8,21 g, 153,40 mmol, 8 eq), em THF (50 ml) e H2O (25 ml), Zn (10,03 g, 153,40 mmol, 8 eq) foi adicionado a 0 °C. A mistura resultante foi agitada a 15 °C durante 3 h. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi adicionado a H2O (200 ml) e extraído com EtOAc (150 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1). Composto 27-3, 4-cloroisoquinolin-5-amina (1,5 g, 8,40 mmol, 43,79% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo claro.
[196] Preparação da Solução 1: A uma mistura de 4-cloroisoquinolin-5-amina (1,5 g, 8,40 mmol, 1 eq) em HCl conc. (15 ml) foi adicionado NaNO2 (579,45 mg, 8,40 mmol, 1 eq) em uma porção, a -5 °C sob N2. A mistura foi agitada a -5 °C durante 1 hora.
[197] Preparação da Solução 2: SO2 foi borbulhado em uma solução de CuCl (207,85 mg, 2,10 mmol, 0,25 eq) em HOAc (15 ml) e H2O (3 ml) a 0 °C durante 30 minutos.
[198] Composto 27-4: À solução 1, a solução 2 foi adicionada lentamente. A mistura foi agitada a 15 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi diluído com H2O (500 ml) e extraído com DCM (300 ml * 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (500 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo que foi usado sem purificação adicional. O composto 27-4, cloreto de 4-cloroisoquinolina-5-sulfonila (1,5 g, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo.
[199] Composto 27-5: A uma mistura de cloreto de 4-cloroisoquinolina-5-sulfonila (1,5 g, 5,72 mmol, 1 eq) e indolina-6-carbonitrila (825,06 mg, 5,72 mmol, 1 eq), em DMF (20 ml), K2CO3 (1,58 g, 11,45 mmol, 2 eq) foi adicionado em uma porção a 15 °C sob N2. A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi diluída com H2O (200 ml) e extraída com EtOAc (150 ml * 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1). Composto 27-5, 1-[(4-cloro-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (600 mg, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo.
[200] Composto 27-6: A uma solução de 1-[(4-cloro-5-isoquinolil)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (600 mg, 1,62 mmol, 1 eq) em DCM (20 ml) foi adicionado m-CPBA (769,93 mg, 3,57 mmol, pureza de 80%, 2,2 eq). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 para acetato de etila: EtOH = 3:1). O produto em bruto do Composto 27-6 foi obtido triturado com MeOH (50 ml), filtrado e usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[201] EXEMPLO 27: Uma mistura de 1-(4-cloro-2-oxido-isoquinolin-2-io-5-il)sulfonilindolina-6-carbonitrila (150 mg, 388,78 umol, 1 eq) em Ac2O (15 ml) foi aquecida a 100 °C e agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Xtimate C18 150*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM) -ACN]; B%: 40%-70%, 10 min). Em seguida, o resíduo foi purificado novamente por HPLC prep (coluna: Xtimate C18 150*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM) -ACN]; B%: 30%-55%, 8 min). EXEMPLO 27, 1-[(4-cloro-1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (4 mg, 9,63 umol, 2,48% de rendimento, 92,93% de pureza), foi obtido como um sólido amarelo. LCMS (ESI+) m/z: 383,0.
[202] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8,55 (d, J=8 Hz, 1H), 7,98 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,63 a 7,46 (m, 4H), 7,21 (s, 1H), 4,15 (t, J=8,6 Hz, 2H), 3,34 (t, J=8,8 Hz, 2H). EXEMPLO 28 1-((1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-2,3-di-hidro-1 H-pirrolo[3,2-c]piridina-6-carbonitrila
[203] Composto 28-2: A uma solução de 6-cloro-2, 3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridina (1,6 g, 10,35 mmol, 1 eq), em DCM (20 ml), Boc2O (6,78 g, 31,05 mmol, 7,13 ml, 3 eq), TEA (2,09 g, 20,70 mmol, 2,88 ml, 2 eq) e DMAP (1,26 g, 10,35 mmol, 1 eq) foram adicionados a 20 °C. A mistura foi aquecida a 50 °C e agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1). Composto 28-2, 6-cloro-2, 3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-1-carboxilato de terc-butila (1,5 g, 5,89 mmol, 56,90% de rendimento), foi obtido como um óleo incolor.
[204] Composto 28-3: Para uma solução de 6-cloro-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-1-carboxilato de terc-butila (1,5 g, 5,89 mmol, 1 eq), em MeOH (50 ml) e DIPEA (5 ml), Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2 (2,40 g, 2,94 mmol, 0,5 eq) foi adicionado a 15 °C. A suspensão foi desgaseificada sob vácuo e purgada com CO várias vezes. A mistura foi agitada sob CO (344,73 kPa (50 psi)) a 80 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1). Composto 28-3, O6-metil 2,3-di-hidropirrolo [3,2-c] piridina-1,6-dicarboxilato de O1-terc-butila (1,5 g, 4,31 mmol, 73,22% de rendimento, 80% de pureza), foi obtido como um sólido vermelho.
[205] Composto 28-4: A uma solução de O6-metil-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-1,6-dicarboxilato de O1-terc-butila (1,57 g, 5,64 mmol, 1 eq), em MeOH (20 ml) e H2O (4 ml), NaOH (676,96 mg, 16,92 mmol, 3 eq) foi adicionado. A mistura foi agitada a 15 °C durante 30 min. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o MeOH. Em seguida, à solução restante foi adicionada solução de HCl 12 M até pH = 3 a aproximadamente 4, e a mistura foi extraída com EtOAc (100 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo que foi usado sem purificação adicional. Composto 28-4, ácido 1-terc-butoxicarbonil-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-6-carboxílico (700 mg, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo.
[206] Composto 28-5: A uma solução de ácido 1-terc-butoxicarbonil-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-6-carboxílico (650 mg, 2,46 mmol, 1 eq), em DMF (10 ml) HATU (1,40 g, 3,69 mmol, 1,5 eq), NH4Cl (526,24 mg, 9,84 mmol, 4 eq) e DIPEA (1,59 g, 12,30 mmol, 2,14 ml, 5 eq) foram adicionados. A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi adicionada a H2O (150 ml) e extraída com EtOAc (80 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (150 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO 2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1). Composto 28-5, 6-carbamoil-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-1-carboxilato de terc-butila (300 mg, 46% de rendimento), foi obtido como um sólido branco.
[207] Composto 28-6: A uma solução de 6-carbamoil-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-1-carboxilato de terc-butila (250 mg, 949,52 μmol, 1 eq), em THF (10 ml), piridina (195,28 mg, 2,47 mmol, 199,26 ul, 2,6 eq) e TFAA (518,51 mg, 2,47 mmol, 343,38 μl, 2,6 eq) foram adicionados. A mistura foi agitada a 15 °C durante 2 h. A mistura de reação foi adicionada a H2O (100 ml) e extraída com EtOAc (50 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml), secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 1:1). O composto 28-6, 6-ciano-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-1-carboxilato de terc-butila (250 mg, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo claro.
[208] Composto 28-7: Uma solução de 6-ciano-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-1-carboxilato de terc-butila (250 mg, 1,02 mmol, 1 eq) em HCl/EtOAc (10 ml) foi agitada a 15 °C por 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi usado sem purificação adicional. Composto 28-7, 2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridina-6-carbonitrila (160 mg, em bruto, HCl), foi obtido como um sólido esbranquiçado.
[209] Composto 28-8: Uma mistura de ácido 1-hidroxi-isoquinolina-5-sulfônico (1,00 g, 4,44 mmol, 1 eq) em SOCl2 (10 ml) e DMF (0,1 ml) foi aquecida a 40 °C e agitada durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi diluído com H2O (100 ml) e extraiu-se com DCM (70 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml), secas sobre Na 2SO4,
filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1). Composto 28-8, cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (300 mg, em bruto) foi obtido como um sólido amarelo que foi usado diretamente na próxima etapa.
[210] EXEMPLO 28: A uma solução de 2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridina-6-carbonitrila (37,53 mg, 258,55 μmol, 0,7 eq), em DMF (7 ml), NaH (59,10 mg, 1,48 mmol, 78,02 μl, 60% de pureza, 4 eq) foi adicionado a 15 °C. A mistura foi agitada a essa temperatura por 30 min e, em seguida, cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (90 mg, 369,36 μmol, 1 eq) foi adicionado a 15 °C. A mistura resultante foi agitada a 15 °C durante 1,5 h. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H 2O (20 ml) e, depois, diluída com H2O (40 ml) e extraiu-se com EtOAc (20 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (60 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC Prep (coluna: Xtimate C18 150*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN];B%: 20% a 50%, 8 min). EXEMPLO 28, 1-[(1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]-2,3-di-hidropirrolo[3,2-c]piridina-6-carbonitr ila (3 mg, 98,76% de pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+)/mz: 353,0.
[211] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,74 (br, 1H), 8,56 (d, J=8 Hz, 1H), 8,51~8,46 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,67 (t, J=8 Hz, 1H), 7,45~7,37 (m, 1H), 7,11 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,10 (t, J=8,8 Hz, 2H), 3,22 (t, J=8,6 Hz, 2H). EXEMPLO 29
4-metoxi-1-((1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indol ina-6-carbonitrila
[212] Composto 29-2: A uma solução de 4-metoxi-1H-indol-6-carbonitrila (230 mg, 1,34 mmol, 1 eq), em DCM (8 m), foi adicionado trietilsilano (776,63 mg, 6,68 mmol, 1,07 ml, 5 eq). A reação foi, em seguida, resfriada a 0 °C e TFA (4 ml) foi adicionado gota a gota a 0 °C. A mistura foi aquecida a 50 °C e agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1) Composto 29-2, 4-metoxi-indolina-6-carbonitrila (100 mg, 40% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo claro.
[213] EXEMPLO 29: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (150 mg, 615,60 μmol, 1 eq) e 4-metoxi-indolina-6-carbonitrila (32,17 mg, 184,68 μmol, 0,3 eq), em DCM (10 ml), foi adicionado TEA (207,64 mg, 1,23 mmol, 285,61 μl, 60% de pureza, 2 eq). A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi adicionada a H2O (50 ml) e extraída com EtOAc (30 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Nano-micro Kromasil C18 100*40 mm 10 μm; fase móvel: [água (0,1% de TFA)-ACN];B%: 30% a 56%, 10 min). O resíduo foi purificado novamente por HPLC prep (coluna: Xtimate C18 150*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM) -ACN]; B%: 25% a 55%, 8 min). EXEMPLO 29, 4-metoxi-1-[(1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (2 mg, 96,64% de pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 382,0.
[214] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,68 (br, 1H), 8,52 (d, J=8 Hz, 1H), 8,34 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,64 (t, J=8 Hz, 1H), 7,38 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,13 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,07 (t, J=8,6 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,99 (t, J=8,6 Hz, 2H). EXEMPLOS 30 E 31 N-(1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-6- cianoindolin-4-il)acetamida 4-amino-1- ((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfo nil)indolina-6-carbonitrila
[215] Composto 30-2: A uma solução de 4-nitro-1H-indol-6-carbonitrila (1,00 g, 5,34 mmol, 1 eq) em EtOH (20 ml) Pd/C (1,00 g, 106,86 μmol, 5% em peso) sob N2. A suspensão foi desgaseificada sob vácuo e purgada com H2 várias vezes. A mistura foi agitada sob H2 (103,42 kPa (15 psi)) a 15 °C durante 1,5 horas. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo que foi usado sem purificação adicional. Composto 30-2, 4-amino-1H-indol-6-carbonitrila (700 mg, 4,45 mmol, 83,35% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[216] Composto 30-3: A uma solução de 4-amino-1H-indol-6-carbonitrila (700 mg, 4,45 mmol, 1 eq) em DCM (15 ml) foram adicionados TEA (1,35 g, 13,36 mmol, 1,86 ml, 3 eq) e cloreto de acetila (419,54 mg, 5,34 mmol, 381,40 μl, 1,2 eq). A mistura foi agitada a 15 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO 2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1) por 2 vezes. Composto 30-3, N-(6-ciano-1H-indol-4-il)acetamida (600 mg, 3,01 mmol, 67,63% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo claro.
[217] Composto 30-4: Para uma solução de N-(6-ciano-1H-indol-4-il)acetamida (600 mg, 3,01 mmol, 1 eq), em DCM (20 ml), TESH (3,50 g, 30,12 mmol, 4,81 ml, 10 eq) foi adicionado. A reação foi, em seguida, resfriada a 0 °C e TFA (10 ml) foi adicionado gota a gota a 0 °C. A mistura resultante foi agitada a 15 °C durante 12 horas. A mistura foi aquecida a 50 °C e agitada durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1).
[218] Composto 30-4, N-(6-cianoindolin-4-il)acetamida (400 mg, 1,99 mmol, 66,00% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo claro.
[219] EXEMPLO 30: A uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (200 mg, 820,79 umol, 1 eq) em DCM (10 ml), TEA (332,22 mg, 3,28 mmol, 456,98 ul, 4 eq) e N-(6-cianoindolin-4-il)acetamida (82,58 mg, 410,40 umol, 0,5 eq) foram adicionados. A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi adicionada a H 2O (150 ml) e extraída com EtOAc (80 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila =
1/0, DCM: MeOH = 2:1). O resíduo foi purificado novamente por HPLC prep (coluna: Xtimate C18 150*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN]; B%: 20% a 50%, 8 min). EXEMPLO 30, N-[6-ciano-1-[(1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]indolin-4-il]acetamida (20 mg, 96,9% de pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 409,1.
[220] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,67 (br, 1H), 9,58 (s, 1H), 8,49 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,61 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,36~7,28 (m, 2H), 7,07 (d, J=7,2 Hz, 1H), 4,04 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 2,97 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 2,03 (s, 1H).
[221] EXEMPLO 31: Uma mistura de N-[6-ciano-1-[(1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]indolin-4-il]acetamida (40 mg, 97,94 μmol, 1 eq) em HCl conc. (6 ml) e EtOH (6 ml) foi aquecida a 50 °C e agitada durante 4,5 horas. A mistura de reação foi adicionada a Na2CO3 aq. até pH> 7 e, em seguida, diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (50 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Welch Ultimate AQ-C18 150*30 mm*5 μm; fase móvel: [água (0,1% de TFA)-ACN]; B%: 25% a 55%, 12 min). EXEMPLO 31, 4-amino-1-[(1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]indolina-6-carbonitrila (14 mg, 98,04% de pureza, sal de TFA), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 367,1.
[222] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,69 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 5,65 (br, 2H), 4,05 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 8,4 Hz, 2H). EXEMPLOS 32, 33 E 34
N-(6-ciano-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sul fonil)indolin-4-il)acetamida 4-amino-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfo nil)indolina-6-carbonitrila 4-(dimetilamino)-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5 -il)sulfonil)indolina-6-carbonitrila
[223] Composto 32-2: Três misturas de reação foram preparadas em paralelo da seguinte maneira: a uma solução de 4-bromoisoquinolina (100 g, 480,64 mmol, 1 eq), em H2SO4 (250 ml), KNO3
(53,45 g, 528,71 mmol, 1,1 eq) foi adicionado a 0 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (1 l) a 0 °C e, em seguida, Solução de NaOH aq. (800 ml) foi adicionada à mistura para ajustar o pH a aproximadamente
8. A mistura foi filtrada e o bolo da filtragem foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi triturado com éter de petróleo: EtOAc=1:1,5 (2,5 l) a 25 °C por 12 horas. O filtrado e o sólido foram triturados com H2O (1,5 l) a 25 °C durante 5 h. Composto 32-2, 4-bromo-5-nitro-isoquinolina (200 g, 790,35 mmol, 54,81% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo. LCMS (ESI+) m/z: 252,9.
[224] Composto 32-3: Duas misturas de reação foram preparadas em paralelo da seguinte maneira: uma mistura de 4-bromo-5-nitro-isoquinolina (50 g, 197,59 mmol, 1 eq), Cs2CO3 (128,76 g, 395,18 mmol, 2 eq), Pd(dppf)Cl2 (14,46 g, 19,76 mmol, 0,1 eq) e MeB (OH)2 (23,66 g, 395,18 mmol, 2 eq) em dioxano (400 ml) e H2O (40 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 110 °C durante 12 horas sob atmosfera de N2. Dois lotes com a mesma escala (50 g) foram executados em paralelo e processados/purificados juntos. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o dioxano. O resíduo foi diluído com H2O (1,5 l) e extraído com EtOAc (2 l * 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1:1). Composto 32-3, 4-metil-5-nitro-isoquinolina (40 g, 212,56 mmol, 53,79% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[225] Composto 32-4: A uma solução de 4-metil-5-nitro-isoquinolina (60 g, 318,84 mmol, 1 eq) em DCM (800 ml) foi adicionado m-CPBA (151,31 g, 701,44 mmol, 80% de pureza, 2,2 eq) a 0 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de Na2SO3 aq. (900 ml). A mistura de reação foi diluída com H2O (1 l) e extraída com DCM (2000 ml * 4). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi triturado com EtOAc (2000 ml) a 25 °C durante 2 h e o sólido foi seco sob pressão reduzida. Composto 32-4, 4-metil-nitro-2-xido-isquinolin-2-io (40 g, 195,90 mmol, 61,44% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[226] Composto 32-5: A uma solução de 4-metil-5-nitro-2-oxido-isoquinolin-2-io (45 g, 220,39 mmol, 1 eq), em DCM (500 ml), POCl3 (40,55 g, 264,47 mmol, 24,58 ml, 1,2 eq) e DMF (8,05 g, 110,20 mmol, 8,48 ml, 0,5 eq) foram adicionados a 0 °C. A mistura foi agitada a 20 °C durante 12 horas sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover DCM. O resíduo foi arrefecido bruscamente com H 2O (300 ml) e, em seguida, foi filtrado. O bolo de filtragem foi seco sob pressão reduzida para oferecer um resíduo que foi usado sem purificação adicional. O produto bruto do Composto 32-5, 1-cloro-4-metil-5-nitro-isoquinolina (27 g, bruto), foi obtido como um sólido amarelo. LCMS (ES1+) m/z: 222,9.
[227] Composto 32-6: Uma mistura de 1-cloro-4-metil-5-nitro-isoquinolina (27 g, 121,28 mmol, 1 eq), NaOMe (13,10 g, 242,56 mmol, 2 eq) em MeOH (500 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 80 ° C durante 5 horas sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o MeOH. O resíduo foi diluído com H2O (500 ml) e extraído com EtOAc (600 ml * 4). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 5:1). Composto 32-6, 1-metoxi-4-metil-5-nitro-isoquinolina (15 g, 68,74 mmol, 56,68% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[228] Composto 32-7: A uma solução de 1-metoxi-4-metil-5-nitro-isoquinolina (15 g, 68,74 mmol, 1 eq) em MeOH (210 ml) e H2O (70 ml), Zn (22,48 g, 343,71 mmol, 5 eq) e NH4Cl (18,39 g, 343,71 mmol, 5 eq) foram adicionados a 0 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1:1). Composto 32-7, 1-metoxi-4-metil-isoquinolin-5-amina (10 g, 53,13 mmol, 77,29% de rendimento), foi obtido como um sólido marrom. LCMS (ESI+) m/z: 189,0.
[229] Composto 32-8: A uma solução de 1-metoxi-4-metil-isoquinolin-5-amina (2 g, 10,63 mmol, 1 eq) em HCl (80 ml), NaNO2 (903,12 mg, 10,63 mmol, 1 eq) em H2O (5 ml) foi adicionado a -5 °C. A mistura foi agitada a -5 °C durante 1 hora e transferida para uma solução de AcOH (50 ml) com CuCl (262,98 mg, 2,66 mmol, 63,52 ml, 0,25 eq) em H2O (5 ml) que foi saturada por SO2 em uma porção. A mistura foi agitada a 20 °C durante 2 h. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (100 ml) a 0 °C e, em seguida, a mistura foi extraída com DCM (200 ml * 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo que foi usado sem purificação adicional. Composto 32-8, cloreto de 1-metoxi-4-metil-isoquinolina-5-sulfonila (1,5 g, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo. LCMS (ES1+) m/z: 271,9.
[230] Composto 32-9: A uma mistura de N-(6-cianoindolin-4-il)acetamida (888,67 mg, 4,42 mmol, 1,2 eq) e piridina (1,05 g, 13,25 mmol, 1,07 ml, 3,6 eq) foi adicionada gota a gota uma solução de cloreto de 1-metoxi-4-metilisoquinolina-5-sulfonil (780 mg, 2,87 mmol, 0,78 eq) em DCM (10 ml) -5 °C. A mistura foi desgaseificada e purgada com N 2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 15 °C durante 12 horas sob atmosfera de N 2. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. Composto bruto 32-9, N-(6-ciano-1-((1-metoxi-4-metilisoquinolin-5-il)sulfonil)indolin-4-il)acetamida (1,2 g, bruto), foi obtido como um sólido marrom e usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[231] EXEMPLO 32: Uma mistura de N-(6-ciano-1-((1-metoxi-4-metilisoquinolin-5-il)sulfonil)indolin-4-il)acetamida (600 mg, 1,37 mmol, 1 eq) e TMSI (1,10 g, 5,50 mmol, 748,43 μl, 4 eq) em ACN
(10 ml) foi agitado a 15 °C durante 1 hora sob atmosfera de N 2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H2O (30 ml) a 0 °C, e, em seguida, extraída com EtOAc (30 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (60 ml * 1), secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por TLC prep (SiO2, DCM: MeOH = 10:1), então foi repurificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge BEH C18 100*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN]; B%: 15% a 50%, 8 min). EXEMPLO 32, N-(6-ciano-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolin-4-il)aceta mida (4 mg, 9,46 umol, 99,9% pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 423,1.
[232] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,69 (br, 1H), 9,74 (s, 1H), 8,59 (d, J=4 Hz, 1H), 7,98~7,85 (m, 2H), 7,52 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 4,22 (t, J=8,4 Hz, 2H), aproximadamente 3,31 (2H, misturado com o pico do solvente), 2,59 (s, 3H), 2,14 (s, 3H).
[233] EXEMPLO 33: Uma solução de N-(6-ciano-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolin-4-il)aceta mida (30 mg, 71,01 μmol, 1 eq) em HCl (5 ml) e EtOH (5 ml) foram agitados a 50 °C durante 5 h. À mistura de reação foi adicionada solução saturada de Na 2CO3 até pH = 8 a 0 °C e, em seguida, extraída com EtOAc (60 ml * 5). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 ml * 1), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge BEH C18 100*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN]; B%: 20% a 50%, 8 min). EXEMPLO 33, 4-amino-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolina-6-carbonit rila (3,8 mg, 9,87 umol, 13,89% de rendimento, 98,77% de pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 381,0.
[234] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,66 (br, 1H), 8,57 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,81 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,53 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,23 (s,
1H), 6,64 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 5,79 (s, 2H), 4,17 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,07 (t, J=8,4 Hz, 2H), 2,59 (s, 3H).
[235] EXEMPLO 34: Para uma solução de 4-amino-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolina-6-carbonit rila (20 mg, 52,57 μmol, 1 eq) em DMF (2 ml) foi adicionada piridina (12,48 mg, 157,72 μmol, 12,73 μl, 3 eq) e MeI (74,62 mg, 525,74 μmol, 32,73 μl, 10 eq). Em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge BEH C18 100*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN]; B%: 30% a 60%, 8 min). 4-(dimetilamino)-1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolina-6- carbonitrila (2,1 mg, 5,09 umol, rendimento de 9,68%, pureza de 99%) foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 409,0.
[236] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,68 (br, 1H), 8,59 (d, J=7,6 Hz 1H), 7,86 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,53 (t, J=8 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 4,17 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,05 (2H, misturado com o pico do solvente), 2,87 (s, 6H), 2,61 (s, 3H). EXEMPLOS 35, 36 E 37 N-(1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-6- cianoindolin-4-il)acetamida 4-amino-1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfo nil)indolina-6-carbonitrila
1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-4-(di metilamino)indolina-6-carbonitrila
[237] Composto 35-2: A uma solução de 4-cloroisoquinolina (40 g, 244,49 mmol, 1 eq) em H2SO4 (110 ml) foi adicionada gota a gota uma solução de KNO3 (32,13 g, 317,84 mmol, 1,3 eq) em H2SO4 (140 ml) lentamente a -5 °C. A mistura foi agitada a 0 ° C durante 1 h e, em seguida, agitada a 15 °C durante 12 h. A mistura foi despejada em água gelada (3 l) e, em seguida, Na2CO3 foi adicionada à mistura até pH = 8. Um sólido amarelo foi precipitado, filtrado e o bolo de filtragem foi lavado com H 2O (2000 ml * 3), concentrou-se o bolo do filtro. O bolo de filtragem foi dissolvido em EtOAc, o EtOAc foi filtrado e o bolo de filtragem foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. Composto bruto 35-2, 4-cloro-5-nitroisoquinolina (43 g, 206,14 mmol, 84,31% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[238] Composto 35-3: A uma solução de 4-cloro-5-nitroisoquinolina (43 g, 206,14 mmol, 1 eq) em CHCl3 (500 ml), m-CPBA (88,93 g, 412,27 mmol, pureza de 80%, 2 eq) foi adicionado em vários porção a 0 °C. A mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h. À mistura foi adicionado NaHCO3 sat. (1 l) a 0 °C, a mistura foi extraída com CHCl3/MeOH = 10/1 (500 ml * 4) e, em seguida, as camadas orgânicas foram lavadas com Na 2S2SO4 a 15% aq. (500 ml * 4), e a camada orgânica combinada foi seca sobre Na 2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/1 a 0/1). Composto 35-3, 2-óxido de 4-cloro-5-nitroisoquinolina (36 g, 160,28 mmol, 77,76% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo.
[239] Composto 35-4: A uma solução de 2-óxido de 4-cloro-5-nitroisoquinolina (36 g, 160,28 mmol, 1 eq) em DCM (500 ml), POCl3 (49,15 g, 320,57 mmol, 29,79 ml, 2 eq) foi adicionado lentamente a 0 °C. A mistura foi agitada a 60 °C durante 12 h sob atmosfera de N 2. A mistura foi adicionada a água (1000 ml) e extraída com DCM (500 ml * 3). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 sat. (800 ml * 3) e salmoura (1500 ml), depois seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. Composto bruto 35-4, 1,4-dicloro-5-nitroisoquinolina (26 g, 106,98 mmol, 66,74% de rendimento), foi obtido como um sólido marrom.
[240] Composto 35-5: A uma solução de 1,4-dicloro-5-nitroisoquinolina (25 g, 102,86 mmol, 1 eq) em MeOH (150 ml), NaOMe (24,45 g, 113,15 mmol, 25% de pureza, 1,1 eq). A mistura foi agitada a 80 °C durante 1 h sob atmosfera de N2, filtrada e o bolo de filtragem foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer Composto 36-5, 4-cloro-1-metoxi-5-nitroisoquinolina (16 g, 67,05 mmol, Rendimento de 65,19%), foi obtido como um sólido marrom.
[241] Composto 35-6: A uma solução de 4-cloro-1-metoxi-5-nitroisoquinolina (15,9 g, 66,63 mmol, 1 eq) e NH4Cl (35,64 g, 666,31 mmol, 10 eq) em MeOH (200 ml) e H2O (40 ml), Zn (43,57 g, 666,31 mmol, 10 eq) foi adicionado lentamente a 0 °C. A mistura foi agitada a 15 °C durante 2 h, filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi adicionado a H2O (50 ml) e a mistura foi extraída com EtOAc (500 ml * 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2000 ml * 1), secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi lavado com éter de petróleo/acetato de etila = 30:1 (930 ml), filtrado e o bolo de filtragem foi seco sob pressão reduzida. Composto bruto 36-6, 4-cloro-1-metoxi-isoquinolin-5-amina (11,2 g, 53,68 mmol, 80,56% de rendimento), foi obtido como um sólido branco.
[242] Preparação da Solução A: Para uma solução de 4-cloro-1-metoxi-isoquinolin-5-amina (0,2 g, 958,57 umol, 1 eq) em HCl (8 ml), uma solução de NaNO2 (99,21 mg, 1,44 mmol, 1,5 eq) em H2O (1 ml) a -5 °C foi adicionado. A mistura foi agitada a -5 ° C durante 1 h.
[243] Preparação da solução Β: SO2 foi feito borbulhar numa solução de CuCl (23,72 mg, 239,64 umol, 5,73 ul, 0,25 eq) em AcOH (5 ml) e H2O (1 ml) a 0 °C durante 30 minutos a 103,42 kPa (15 psi).
[244] Composto 35-7: A solução A foi transferida para a solução Β e a mistura foi agitada a 15 °C durante 2 h. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (20 ml) a 0 °C e, em seguida, extraída com DCM (30 ml * 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml * 2), secas sobre Na2SO, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. Composto 35-7, cloreto de 4-cloro-1-metoxi-isoquinolina-5-sulfonil (300 mg, em bruto), foi obtido como um sólido amarelo.
[245] Composto 35-9: A uma mistura de N-(6-cianoindolin-4-il)acetamida (Composto 35-8; 500 mg, 2,48 mmol, 1,3 eq) e piridina (453,57 mg, 5,73 mmol, 462,83 μl, 3 eq) foi adicionada gota a gota a solução de cloreto de 4-cloro-1-metoxi-isoquinolina-5-sulfonil (1,27 g, 1,91 mmol, 1 eq) em DCM (5 ml) a -5 °C. A mistura foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes, e a mistura foi agitada a 15 °C durante 12 h sob atmosfera de N 2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. Composto bruto 35-9, N-(1-((4-cloro-1-metoxiisoquinolin-5-il)sulfonil)-6-cianoindolin-4-il)acetamida (1,5 g, bruto), foi obtido como um sólido vermelho e usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[246] EXEMPLO 35: Uma mistura de N-(1-((4-cloro-1-metoxi-isoquinolin-5-il)sulfonil)-6-cianoindolin-4-il)acetamida (100 mg, 218,87 umol, 1 eq) e TMSI (218,96 mg, 1,09 mmol, 148,96 ul, 5 eq) em ACN (10 ml) foi agitado a 80 °C durante 2 horas sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H 2O (20 ml) a 0 °C, e, em seguida, extraída com EtOAc (40 ml * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (80 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por TLC prep (SiO2, DCM: MeOH = 10:1). Em seguida, o resíduo foi purificado novamente por HPLC Prep (coluna: Waters Xbridge BEH C18 100*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN]; B%: 20% a 50%, 8 min). EXEMPLO 35, N-(1-((4-Cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-6-cianoindolin-4-il)acet amida (1,9 mg, 4,08 umol, 1,86% de rendimento, pureza de 95,1%), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 443,0.
[247] RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,73 (s, 1H), 8,57 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,01 (d, J=8 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,63 (t, J=7,6 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,19 (t, J=8,4 Hz, 2H), ~3,20 (2H, misturado com pico de solvente), 2,14 (s, 3H).
[248] EXEMPLO 36: Uma solução de N-(1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-6-cianoindolin-4-il)aceta mida (16 mg, 36,13 umol, 1 eq) em HCl conc. (3 ml) e EtOH (3 ml) foram agitados a 50 °C durante 5 h. À mistura foi adicionada solução saturada de Na 2CO3 até pH = 8 a 0 °C, e a mistura foi extraída com EtOAc (40 ml * 5). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge BEH C18 100*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN]; B%: 20% a 40%, 8 min). EXEMPLO 36,
4-amino-1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolina-6-carbonit rila (1,6 mg, 97,6% de pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 400,9.
[249] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,04 (br, 1H), 8,56 (d, J=8 Hz, 1H), 7,92 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,65~7,61 (m, 2H), 6,63 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 5,77 (s, 2H), 4,15 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,05 (t, J=8,4 Hz, 2H).
[250] EXEMPLO 37: Para uma solução de 4-amino-1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)indolina-6-carbonit rila (20 mg, 49,90 μmol, 1 eq) em DMF (2,5 ml) foi adicionada piridina (39,47 mg, 498,95 umol, 40,27 μl, 10 eq) e MeI (141,64 mg, 997,91 umol, 62,12 μl, 20 eq). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge BEH C18 100*25 mm*5 μm; fase móvel: [água (NH4HCO3 a 10 mM)-ACN]; B%: 30% a 60%, 8 min). EXEMPLO 37, 1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-4-(dimetilamino)indolina-6- carbonitrila (3,1 mg, 7,08 μmol, rendimento de 14,20%, 98 % de pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 429,1.
[251] RMN de 1Η (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,05 (br, 1H), 8,55 (d, J=8 Hz, 1H), 7,94 (d, J=8 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,63 (t, J=8 Hz, 1H), 6,9 2 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,13 (t, J=8,4 Hz, 2H), ~3,33 (2H, misturado com o pico do solvente), 2,85 (s, 6H). EXEMPLO 38 1-((1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-2,3-di-hidro-1 H-pirrolo[3,2-b]piridina-6-carbonitrila
[252] EXEMPLO 38: Para uma mistura de 2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina-6-carbonitrila (21,45 mg, 147,74 μmol, 1,2 eq) e piridina (29,22 mg, 369,36 μmol, 29,81 μl, 3 eq), foi adicionada gota a gota uma solução de cloreto de 1-oxo-2H-isoquinolina-5-sulfonila (30 mg, 123,12 μmol, 1 eq) em DCM (3 ml) a -5 °C. A mistura foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes, e a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O produto em bruto foi absorvido em MeOH (2 ml) a 25 °C durante 10 min, filtrado e concentrado sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Welch Ultimate AQ-C18 150*30 mm*5 pM; fase móvel: [água (0,1% de TFA)-ACN]; B%: 35% a 65%, 12 min). EXEMPLO 38, 1-[(1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]-2,3-di-hidropirrolo[3,2-b]piridina-6-carbonitr ila (15 mg, 41,51 umol, 33,71% de rendimento, pureza de 97,5%), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 353,0.
[253] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,71 (br, 1H), 8,59~8,52 (m, 2H), 8,46 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,90 (d, J=2 Hz, 1H), 7,64 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,39 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,11 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,08 (t, J=8,4 Hz, 2H), 3,22 (t, J=8,8 Hz, 2H). EXEMPLO 39 1-((4-metil-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-2,3-di -hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina-6-carbonitrila
[254] Composto 39-2: Para uma mistura de 2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina-6-carbonitrila (19,23 mg, 132,49 μmol, 1,2 eq) e piridina (26,20 mg, 331,22 μmol, 26,73 μl, 3 eq) foi adicionado gota a gota uma solução de cloreto de 1-metoxi-4-metil-isoquinolina-5-sulfonil (30 mg, 110,41 μmol, 1 eq) em DCM (2 ml) a -5 °C. A mistura foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes, e a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover DCM (2 ml). O resíduo foi purificado por TLC preparativa (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/1). Composto 39-2 1-[(1-metoxi-4-metil-5-isoquinolil)sulfonil]-2,3-di-hidropirrolo[3,2-b]piridina-6-carb onitrilc (15 mg, 39,43 umol, 35,71% de rendimento), foi obtido como um sólido branco.
[255] EXEMPLO 39: Uma mistura de 1-[(1-metoxi-4-metil-5-isoquinolil)sulfonil]-2,3-dihidropirrolo[3,2-b]piridina-6-carb onitrila (15 mg, 39,43 μmol, 1 eq) e TMSI (31,56 mg, 157,72 μmol, 21,47 μl, 4 eq) em ACN (2 ml) foi agitado a 25 °C durante 1 hora sob atmosfera de N 2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H2O (5 ml) a 0 °C, e, em seguida, extraída com EtOAc (5 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 ml), secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40 mm*10 μm; fase móvel: [água (0,04% de NH3H2O+10 mM de NH4HCO3)-ACN];B%: 25% a 55%, 8 min). EXEMPLO 39, 1-[(4-metil-1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]-2,3-dihidropirrolo[3,2-b]piridina-6-c arbonitrila (3,4 mg, 9,28 umol, 23,53% de rendimento, 100% de pureza), foi obtido como um sólido branco. LCMS (ESI+) m/z: 367,0.
[256] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,72 (br, 1H), 8,62 ~ 8,57 (m, 2H), 8,02 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,59 ~ 7,51 (m, 2H), 7,25 (s, 1H), 4,23 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 3,49 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 2,59 (s, 3H). EXEMPLO 40 1-((4-cloro-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolin-5-il)sulfonil)-2,3-di -hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina-6-carbonitrila
[257] Composto 40-2: Para uma mistura de 2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina-6-carbonitrila (17,89 mg, 123,23 umol, 1,2 eq) e piridina (24,37 mg, 308,07 μmol, 24,87 μl 3 eq) foi adicionado gota a gota uma solução de cloreto de 4-cloro-1-metoxi-isoquinolina-5-sulfonil (30 mg, 102,69 μmol, 1 eq) em DCM (2 ml a -5 °C. A mistura foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes, e a mistura foi agitada a 25 °C durante 12 horas sob atmosfera de N2. LC-MS mostrou que aproximadamente 50% do composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover DCM (2 ml). O resíduo foi purificado por TLC prep (SiO2, PE: EA = 1:1).
[258] Composto 40-2, 1-[(4-cloro-1-metoxi-5-isoquinolil)sulfonil]-2,3-di-hidropirrolo[3,2-b]piridina-6-car bonitrila (30 mg, 74,84 umol, 72,88% rendimento), foi obtido como um sólido branco.
[259] EXEMPLO 40: Para uma mistura de 1-[(4-cloro-1-metoxi-5-isoquinolil)sulfonil]-2,3-di-hidropirrolo[3,2-b]piridina-6-car bonitrila (30 mg, 74,84 umol, 1 eq) e TMSI (59,90 mg, 299,37 umol, 40,75 ul, 4 eq) em ACN (2 ml) foi agitado a 25 °C durante 1 hora sob atmosfera de N 2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H 2O (4 ml) a 0 °C, e, em seguida, extraída com EtOAc (4 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (8 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Welch Ultimate AQ-C18 150*30 mm*5 μm; fase móvel: [água (0,1% de TFA)-ACN];B%: 15% a 45%, 12 min). EXEMPLO 40, 1-[(4-cloro-1-oxo-2H-isoquinolin-5-il)sulfonil]-2,3-dihidropirrolo[3,2-b]piridina-6-c arbonitrila (7 mg, 17,55 umol, 23,45% de rendimento, 97% de pureza), foi obtido como um sólido amarelo. LCMS (ESI+) m/z: 386,9.
REAGENTES DE INDOLINA INDOLINA 2 6-cloroindolina
[260] INDOLINA 2: A uma mistura de 6-cloro-1H-indol (5 g, 32,98 mmol) em AcOH (80 ml) foi adicionado NaBH3CN (6,84 g, 108 mmol) a 0 °C e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C por 12 h sob atmosfera de N 2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (20 ml) a 0 °C e depois NaOH aq. foi adicionado à mistura para ajustar o pH a aproximadamente 8. A mistura foi extraída com EtOAc (250 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila =
20:1 a 5:1). O composto do título, 6-cloroindolina (3 g, 19,5 mmol, 59,2% de rendimento), foi obtido como um óleo verde. INDOLINA 4 Indolina-6-carbonitrila
[261] INDOLINA 4: A uma mistura de 1H-indol-6-carbonitrila (5 g, 35,1 mmol) em AcOH (80 ml) foi adicionado NaBH3CN (7,29 g, 116,0 mmol) a 0 °C e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C por 12 h sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (20 ml) a 0 °C. NaOH saturado aq. foi adicionado à mistura para ajustar o pH a aproximadamente 8. A mistura foi extraída com EtOAc (300 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO 2, éter de petróleo/acetato de etila = 10:1 a 5:1). O resíduo foi purificado por HPLC prep (coluna: Xtimate C18 10 μ x 250 mm x 50 mm; fase móvel: [A, água (NH 4HCO3 a 10 mM)-B, ACN]; B%: 20% a 40%, 25 min). O composto do título, indolina-6-carbonitrila (1,9 g, 13,1 mmol, 37,4% de rendimento), foi obtido como um sólido branco. INDOLINA 6
1-(1H-indol-4-il)etan-1-ona INDOLINA 7 1-(1H-indol-4-il)etan-1-ol INDOLINA 8 1-(indolin-4-il)etan-1-ol
[262] INDOLINA 6: A uma solução de 1H-indol-4-carbonitrila (5 g, 35,1 mmol) em THF (20 ml) foi adicionado MeLi (1,8 M, 41,9 ml). A mistura foi agitada a 80 °C durante 8 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H 2O (100 ml) a 0 °C. A mistura de reação foi extraída com DCM (400 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20:1 a 1:1). O composto do título, 1-(1H-indol-4-il)etanona (2,5 g, 15,7 mmol, 44,6% de rendimento), foi obtido como um sólido amarelo.
[263] INDOLINA 7: A uma solução de 1-(1H-indol-4-il)etanona (2,4 g, 15,0 mmol) em THF (20 ml) foi adicionado NaBH4 (2,28 g, 60,3 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de H2O (100 ml) a 0 °C. A mistura de reação foi extraída com DCM (250 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1:1). 1-(1H-Indol-4-il)etanol (1 g, 6,20 mmol, 41,1% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[264] INDOLINA 8: A uma mistura de 1-(1H-indol-4-il)etanol (1 g, 6,20 mmol) em AcOH (10 ml) foi adicionado NaBH3CN (1,29 g, 20,4 mmol) a 0 °C e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C durante 5 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (15 ml) a 0 ° C, e depois NaOH aq. foi adicionado à mistura para ajustar o pH a aproximadamente 8. A mistura de reação foi extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10:1 a 1:1). 1-Indolin-4-iletanol (250 mg, 1,53 mmol, 24,6% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. INDOLINA 10 4,6-dicloroindolina
[265] INDOLINA 10: A uma mistura de 4,6-dicloro-1H-indol (0,5 g, 2,69 mmol) em AcOH (5 ml) foi adicionado NaBH3CN (557 mg, 8,87 mmol) a 0 °C e, em seguida, a mistura foi agitada a 25 °C por 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (20 ml) a 0 °C e depois NaOH aq. foi adicionado à mistura para ajustar o pH a aproximadamente 8. A mistura de reação foi extraída com DCM (100 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 30:1 a 5:1). 4,6-Dicloroindolina (0,1 g, 531,7 μmol, 19,7% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo. INDOLINA 12 4-ciclopropil-1H-indol-6-carbonitrila INDOLINA 13 4-ciclopropilindolina-6-carbonitrila
[266] INDOLINA 12: Uma mistura de 4-bromo-1H-indol-6-carbonitrila (0,1 g, 452,3 μmol), ácido ciclopropilborônico (77,7 mg, 904,7 μmol), Cs2CO3 (294,7 mg, 904,7 μmol), Pd(dppf)Cl2 (33,1 mg, 45,2 ol) em dioxano (5 ml) e H2O (0,5 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes. Em seguida, a mistura foi agitada a 110 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com EtOAc (80 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20:1 a 5:1). 4-Ciclopropil-1H-indol-6-carbonitrila (50 mg, 274,3 μmol, 60,6% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo.
[267] INDOLINA 13: A uma solução de 4-ciclopropil-1H-indol-6-carbonitrila (50 mg, 274,3 μmol) em AcOH (3 ml) foi adicionado sódio; cianoboranuida (56,90 mg, 905,4 μmol) a 0 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de água gelada (5 ml) a 0 °C e depois foi adicionado à mistura para ajustar o pH a aproximadamente 8. A mistura de reação foi extraída com DCM (50 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na 2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por TLC preparativa (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 5: 1).
[268] O composto 4-ciclopropilindolina-6-carbonitrila (20 mg, 108,6 μmol, 39,5% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo. INDOLINA 15 4-metil-1H-indol-6-carbonitrila INDOLINA 16 4-metilindolina-6-carbonitrila
[269] INDOLINA 15: A uma mistura de 4-bromo-1H-indol-6-carbonitrila (1 g, 4,52 mmol) em dioxano (15 ml) e H2O (1,5 ml) foi adicionado ácido metilborônico (541,5 mg, 9,05 mmol), Cs 2CO3 (2,95 g, 9,05 mmol) e Pd(dppf)Cl2 (331,0 mg, 452,3 μmol) em uma porção. A mistura foi aquecida a 110 °C e agitada durante 12 h. A mistura da reação foi diluída com H2O (300 ml) e extraída com EtOAc (150 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (300 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1:0 a 0:1). 4-metil-1H-indol-6-carbonitrila (600 mg, 3,34 mmol, 73,8% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo claro.
[270] INDOLINA 16: A uma solução de 4-metil-1H-indole-6-carbonitrila (600 mg, 3,84 mmol) em HOAc (15 ml) foi adicionado NaBH3CN (1,45 g, 23,0 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 12 h. A mistura de reação foi adicionada Na2CO3 aq. saturado por pH até aproximadamente 8. A mistura foi diluída com H2O (300 ml) e extraída com EtOAc (150 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (300 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1:0 a 0:1). 4-metilindolina-6-carbonitrila (250 mg, 1,20 mmol, 31,2% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo claro. INDOLINA 18 4-(prop-1-en-2-il)indolina
[271] INDOLINA 18: Uma mistura de 4-bromoindolina (0,5 g, 2,52 mmol), 2-isopropenil-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (509,0 mg, 3,03 mmol), Cs2CO3 (1,23 g, 3,79 mmol), Pd(dppf)Cl2 (184,7 mg, 252,4 μmol) em dioxano (10 ml) e H2O (2 ml) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes, e, em seguida, a mistura foi agitada a 110 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N2. A mistura de reação foi diluída com H2O (20 ml) e extraída com DCM (60 ml x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (20 ml), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1:0 a 10:1). 4-isopropenilindolina (60 mg, 376,8 μmol, 14,9% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo. INDOLINA 20 4-vinilindolina
[272] INDOLINA 20: A uma mistura de 4-bromoindolina (1 g, 5,05 mmol) e 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioxaborolano (933 mg, 6,06 mmol) em dioxano (10 ml) e H2O (2 ml) como adicionou-se Pd(dppf)Cl2 (369 mg, 504,9 μmol) e Cs2CO3 (2,47 g, 7,57 mmol) a 15 °C sob N2. A mistura foi aquecida a 110 °C e agitada durante 12 horas. O resíduo foi diluído com H 2O (120 ml) e extraído com EtOAc (60 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura 120 ml, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1:0 a 10:1).
4-Vinilindolina (400 mg, 2,45 mmol, 48,6% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo. INDOLINA 22 4-ciclopropilindolina
[273] INDOLINA 22: A uma solução de 4-bromoindolina (0,5 g, 2,52 mmol) em dioxano (10 ml) e H2O (1 ml) foi adicionado ácido ciclopropilborônico (433,6 mg, 5,05 mmol), dicésio; carbonato (1,65 g, 5,05 mmol) e ciclopentil(difenil)fosfano; dicloropaládio; ferro (184,7 mg, 252,4 μmol). A mistura foi agitada a 110 °C durante 12 h sob uma atmosfera de N 2. A mistura da reação foi diluída com H2O (15 ml) e extraída com EtOAc (40 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina saturada a 20 ml, secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para oferecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1:0 a 10:1). 4-Ciclopropilindolina (0,1 g, 628 μmol, rendimento de 24,8%) foi obtido como um óleo amarelo. EXEMPLO 41
[274] Este exemplo ilustra que os compostos exemplificativos da presente invenção inibem a atividade enzimática ROCK1 e/ou ROCK2.
[275] As curvas de dose-resposta para compostos da presente invenção foram determinadas usando um ensaio enzimático de acoplamento de fluorescência usando o domínio catalítico ROCK1 humano truncado C-terminal purificado (aminoácidos 1-477 do número de acesso NP_005397.1) fundido a GST (Carna BioSciences, Catálogo nº 01-109) e domínio da enzima quinase ROCK2 humana truncada C-terminal purificada (aminoácidos 1-553 do número de acesso NP_004841.2) fundido a GST (Carna BioSciences, Catálogo nº 01-110). Além disso, a proteína quinase 1 dependente de cGMP de comprimento total (PKG ou PRKG1; aminoácidos 1-686 do número de acesso NP_006249.1) fundida a GST (Carna BioSciences, Catálogo nº 01-142), PKACα de comprimento total (PRKACA; aminoácidos 1-351 do número de acesso NP_002721.1) fundido a GST (Carna BioSciences, Catálogo nº 01-127) e domínio catalítico de AKT1 humano truncado C-terminal (aminoácidos 104-480 do número de acesso NP_005154.1) fundido a GST (Carna Biosciences, Catálogo nº 01-101) foram usados como um controle para medir qualquer atividade de quinase fora do alvo não desejada.
[276] Resumidamente, os compostos da presente invenção foram solubilizados em DMSO e uma série de 12 diluições em série de três vezes foram feitas para cada composto em DMSO a 2,5%. A concentração inicial de partida para as diluições em série de cada composto foi de 10 μΜ ou 100 μΜ. As amostras de controle sem composto, enzima ROCK ou ATP também foram preparadas e processadas em paralelo com as amostras de teste de composto.
[277] Uma alíquota de 4 μl de cada diluição em série do composto de teste diluída em H2O com 2,5% de DMSO foi adicionada a um poço que contém 4 μl de ROCK1 N-truncada purificada 10 nM (concentração final de 4 nM), enzima ROCK2 N-truncada purificada 10 nM (concentração final de 4 nM), AKT1 1,25 nM (concentração final de 0,5 nM), PKACA 25 pM (concentração final de 10 pM) ou PKG 20 nM (concentração final de 8 nM), em tampão de reação contendo Hepes 50 mM, pH 7,5, 1 mM de EGTA, 10 mM de MgCl 2, 2 mM de DTT, e 0,01% de Tween 20 (concentração final). Para iniciar a reação enzimática, 2 μl de uma solução foram adicionados a cada poço para fornecer uma concentração final de substrato de peptídeo Ulight-CREBTide 50 nM (Perkin Elmer, Catálogo nº TRF0107) e 4 pM de ATP para ensaios ROCK1 e AKT1, 8 pM de ATP para Ensaios ROCK2 e ATP 30 pM para ensaios PKG ou ATP 1 pM para ensaios PKACA. As misturas de reação foram incubadas à temperatura ambiente durante uma hora. Após uma hora, a reação foi interrompida pela adição de uma solução de 10 μl de um anticorpo fosfo-CREB marcado com Europium (Ser133) (Perkin Elmer, Catálogo nº TRF0200) em tampão LANCE suplementado com EDTA 20 mM. As misturas de reação interrompidas foram incubadas à temperatura ambiente durante 90 minutos. As razões TR-FRET 665/620 foram determinadas com o uso de um instrumento leitor de placa monocromador Clariostar (BMG LabTech) de acordo com as instruções do fabricante. O valor de IC50 para cada composto foi determinada a partir de cada curva de dose-resposta utilizando o software GraphPad Prism 7 com uma resposta à dose sigmodial. Os resultados para compostos exemplificativos de Fórmula (I) e Fórmula (II) são mostrados na Tabela 1. Legenda: A é IC 50 ≤ 100 nM: Β é 100 nM < IC50 < 1000 nM; C é 1,000 < IC50 ≤ 10.000 nM; D é IC50 >10.000 nM. TABELA 1
INIBIÇÃO DA ATIVIDADE ROCK POR COMPOSTOS EXEMPLIFICATIVOS DE FÓRMULA (I)
[278] Embora a invenção tenha sido descrita em conexão com modalidades específicas da mesma, será entendido que é possível realizar modificações adicionais e este pedido se destina a cobrir quaisquer variações, usos ou adaptações da invenção seguindo, em geral, os princípios da invenção e incluindo tais desvios da presente divulgação como abrangidos pela prática conhecida ou habitual dentro da técnica à qual a invenção pertence e como podem ser aplicados às características essenciais expostas neste documento, e como se segue no escopo das reivindicações anexas.

Claims (36)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto de fórmula (Ia), fórmula (Ib), fórmula (IIa) ou fórmula (IIb): ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: caracterizado pelo fato de que: X é uma heteroarila parcialmente saturada que contém aza; Y é N ou CH;
cada R1 é um grupo ciano, hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, -NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila; Q é uma ligação, O ou NR4; cada R2 é hidrogênio ou halogênio; cada R3 é hidrogênio, halogênio ou C1-C3 alquila; cada R4 é hidrogênio ou C1-C3 alquila; e m é 0, 1, 2 ou 3;
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a heteroarila que contém aza é indolizinila, indolila, isoindolila, 3H-indolila, indolinila, indazolila, 1H-indazolila, benzimidazolila, benztiazolila, purinila, 4H-quinolizinila, quinolinila, isoquinolinila, cinolinila, ftalazinila, quinazolinila, quinoxalinila, 1,8-naftiridinila, pteridinila, quinuclidinila, carbazolila, acridinila, fenazimila, fenotiazinila, fenoxazinila, 2H- pirrolila, pirrolila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, oxazolila, tiazolila, imidazolila, 2- imidazolila, pirazolila, 2-pirazolinila, isoxazolila, isotiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,3,4-tiadiazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila ou 1,3,5- triazinila.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é: em que R1, Y e m são de acordo com a reivindicação 1.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que m é um e R1 é ciano, hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, -NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o halogênio é cloro ou flúor.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a haloalquila é trifluorometila.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que Q é uma ligação e a C 1-C3 alquila é metila, etila ou isopropila.
8. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que Q é O e a C1-C3 alquila é metila, etila ou isopropila.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que Q é N e a C1-C3 alquila é metila, etila ou isopropila.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que cada grupo R4 do -N(R4)2 é hidrogênio.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que cada grupo R4 do -N(R4)2 é C1-C3 alquila.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a hidroxialquila é hidroximetila.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a cicloalquila é ciclopropila.
14. Composto, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que m é dois e cada R1 é independentemente ciano, halogênio, C1-C3 alquila ou cicloalquila.
15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que cada R1 é halogênio.
16. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que um R1 é ciano e o outro R1 é hidroxila, hidroxialquila, halogênio, haloalquila, alcóxi, Q-C1-C3 alquila, -N(R4)2, - NR4C(O)C1-C3 alquila ou cicloalquila.
17. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é:
e em que cada R1 é hidrogênio ou metila.
18. Composto, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que cada R1 é metila.
19. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que R2 é halogênio.
20. Composto, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o halogênio é cloro.
21. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que R3 é halogênio ou C1-C3 alquila.
22. Composto, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o halogênio é flúor.
23. Composto, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que a C1-C3 alquila é metila.
24. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
25. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade eficaz de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
26. Método para inibir a atividade ROCK em uma célula, caracterizado pelo fato de que compreende colocar a célula em que a inibição da atividade ROCK é desejada em contato com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, de acordo com a reivindicação 1.
27. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o contato ocorre in vivo.
28. Método, de acordo com a reivindicação 26 ou 27, caracterizado pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz do composto é entre cerca de 0,01 a 300 mg/kg por dia.
29. Método, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz do composto é entre cerca de 0,1 a 100 mg/kg por dia.
30. Método para tratar um paciente que tem síndrome de malformação cavernosa cerebral (CCM), caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, de acordo com a reivindicação 1, isolado ou combinado com um carreador, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável.
31. Método, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz do composto é entre cerca de 0,01 a 300 mg/kg por dia.
32. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz do composto é entre cerca de 0,1 a 100 mg/kg por dia.
33. Método de tratamento de uma doença cardiovascular associada a vasotensão aumentada, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, de acordo com a reivindicação 1, isolado ou combinado com um carreador, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável, a um paciente em necessidade do mesmo.
34. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que a doença cardiovascular é hipertensão, aterosclerose, acidente vascular cerebral isquêmico, vasoespasmo coronário, vasoespasmo cerebral, angina ou disfunção erétil.
35. Método de tratamento de doenças que envolvem contratilidade elevada do músculo liso não vascular caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, de acordo com a reivindicação 1, isolado ou combinado com um carreador, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável, a um paciente em necessidade do mesmo.
36. Método, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a doença que envolve contratilidade elevada do músculo liso não vascular é asma ou glaucoma.
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