BR112021002754A2 - combinação de inibidor de histona desacetilase e inibidor de proteína quinase e uso farmacêutico da mesma - Google Patents

Abstract

COMBINAÇÃO DE INIBIDOR DE HISTONA DESACETILASE E INIBIDOR DE PROTEÍNA QUINASE E USO FARMACÊUTICO DA MESMA. Trata-se do uso de uma combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de tumores, uma composição farmacêutica que compreende um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase como ingredientes ativos, e um método para tratar ou prevenir cânceres combinando-se um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase.

Description

“COMBINAÇÃO DE INIBIDOR DE HISTONA DESACETILASE E INIBIDOR DE PROTEÍNA QUINASE E USO FARMACÊUTICO DA MESMA” REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] O pedido reivindica a prioridade do Pedido de Patente Chinês nº 201810943005.6 intitulado “COMBINATION OF

HISTONE DEACETYLASE INHIBITOR AND PROTEIN KINASE INHIBITOR AND PHARMACEUTICAL USE THEREOF”, depositado em 17 de agosto de 2018 junto à Administração de Propriedade Intelectual Nacional da China, que é incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade.

CAMPO

[0002] A presente revelação se refere ao campo técnico da medicina antitumoral direcionada a moléculas pequenas, e especificamente se refere ao uso de uma combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de quinase na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir um tumor, e uma composição farmacêutica contendo um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de quinase como ingredientes farmacêuticos ativos. A presente revelação particularmente se refere a uma composição farmacêutica contendo Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma como ingredientes ativos, e um método para tratar ou prevenir câncer com a combinação de Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

ANTECEDENTES

[0003] O câncer é uma das principais doenças que ameaçam a saúde humana. O tratamento do câncer atrai a atenção do mundo inteiro. Os fármacos quimioterápicos convencionais não bloqueiam especificamente a divisão celular que causa morte celular, mas também danificam as células humanas normais enquanto matam as células tumorais. Além disso, muitos fármacos citotóxicos têm uma faixa de tratamento limitada e são propensos a causar reações adversas, o que pode aumentar a resistência ao fármaco após a administração em longo prazo.

[0004] Vários tipos de fármacos antitumorais foram desenvolvidos na técnica anterior, entre os quais os inibidores de histona desacetilase (HDAC) são uma classe importante de compostos antitumorais.

[0005] A histona desacetilase (HDAC) é uma classe de protease que desempenha um papel importante na modificação estrutural dos cromossomos e na regulação da expressão genética. Em geral, a acetilação da histona facilita a dissociação do DNA e octâmeros da histona e o relaxamento da estrutura do nucleossomo, de modo que vários fatores de transcrição e fatores de transcrição cooperativos podem se ligar especificamente aos sítios de ligação do DNA e ativar a transcrição genética. No núcleo, a acetilação e desacetilação da histona estão em equilíbrio dinâmico, reguladas pelas histona acetiltransferases (HATs) e HDACs. As HATs transferem o grupo acetila da Acetil-CoA para os resíduos de lisina específicos no terminal amino das histonas. As HDACs realizam a desacetilação das histonas e se liga firmemente ao DNA carregado negativamente, desse modo a cromatina é mais compacta e curvada, resultando em repressão transcricional. Em células cancerosas, a superexpressão de HDAC leva ao aumento da desacetilação. Ao restaurar a carga positiva das histonas, a interação entre o DNA e as histonas é aumentada, e os nucleossomos soltos se tornam compactos, o que é desfavorável para a expressão de genes específicos, incluindo alguns genes supressores de tumor. Os inibidores de HDAC, como uma nova classe de fármacos antitumorais, pode aumentar a acetilação da histona em regiões específicas da cromatina, regulando, desse modo, a expressão e estabilidade das proteínas relacionadas à diferenciação e apoptose celular, e induzindo a diferenciação e apoptose celular. Os inibidores de HDAC não apenas têm um bom efeito terapêutico em uma variedade de tumores hematológicos e tumores sólidos, mas também têm as vantagens de seletividade relativamente alta para células tumorais e baixa toxicidade.

[0006] A literatura mostrou que a inibição da atividade de HDAC pode efetivamente inibir o crescimento, metástase e invasão de células tumorais. Os inibidores de HDAC se tornaram importantes candidatos antitumorais. Estudos mostraram que os inibidores de HDAC podem efetivamente inibir a proliferação de células tumorais, induzir a diferenciação e apoptose de células tumorais, bem como antiangiogênese, e têm efeitos inibidores na migração, invasão e metástase de células tumorais.

[0007] Os inibidores de HDAC ativam genes supressores de tumor ao regular a acetilação e desacetilação de resíduos de lisina no terminal N de histonas, inibindo, desse modo, o crescimento de células tumorais e induzindo a apoptose de células tumorais (Apoptosis on hepatoma cells but not on primary hepatocytes by histone deacetylase inhibitors valproate and ITF2357. J Hepatol, 2005, 42: 210-217).

Yindong Kang et al., em 2009, publicaram uma revisão de pesquisa sobre o efeito de imunomodulação de inibidores de histona desacetilase através de células dendríticas. (Yindong Kang et al., Studies on the Immunomodulation Effect of Histone Deacetylase Inhibitors through Dendritic Cells, Chinese Journal of Transplantation, Volume 3, Edição 2, 2009). Essa revisão descreveu a relação entre inibidores de histona desacetilase e células dendríticas (DCs), bem como a regulação imunológica. Os inibidores de HDAC exibem forte atividade antitumoral em altas concentrações, e uma variedade de efeitos imunomoduladores em baixas concentrações. Quando os inibidores de HDAC agem diretamente nas DCs, eles enfraquecem a capacidade de as DCs migrarem para a quimiocina CCL19 durante a maturação, impedindo, desse modo, que as DCs alcancem e entrem nos órgãos linfoides para exercer suas funções de apresentação de antígenos. Os inibidores de HDAC afetam a diferenciação, maturação e migração das DCs, e interferem no processo de apresentação de antígenos das DCs, como a célula de apresentação de antígeno mais importante, que desempenha um papel importante na ativação de linfócitos T específicos de antígenos. Em geral, os inibidores de HDAC agem diretamente nas DCs para suprimir a resposta imunológica.

[0008] Recentemente, estudos sobre as funções de HDAC progrediram rapidamente. Isso se torna gradualmente um ponto importante de pesquisa nesse campo o desenvolvimento de um inibidor de HDAC seletivo. Atualmente, uma variedade de inibidores de HDAC já está comercialmente disponível tanto nacionalmente quanto no exterior, por exemplo, vorinostat, chidamida. No entanto, os inibidores de HDAC existentes ainda precisam ser aprimorados nos aspectos de atividade, eficácia, metabolismo do fármaco e efeitos colaterais. Um fármaco antitumoral com mais eficácia e efeito melhor é urgentemente necessário na técnica anterior para atender às crescentes necessidades de saúde das pessoas.

SUMÁRIO

[0009] Os inventores constataram inesperadamente no estudo que a combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase pode alcançar efeitos antitumorais sinérgicos.

[0010] Em um aspecto, a presente revelação fornece o uso de uma combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de tumores.

[0011] Em outro aspecto, a presente revelação fornece um método para tratar ou prevenir um tumor, que compreende administrar um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase a um indivíduo em necessidade do mesmo.

[0012] As proteína quinases são uma família de enzimas que catalisam a fosforilação de resíduos específicos nas proteínas. Elas são amplamente classificadas em tirosina e serina/treonina-proteína quinases, que representam uma grande família de proteínas que desempenham um papel importante na regulação de vários processos celulares e manutenção das funções celulares. As proteína quinases são enzimas associadas às vias de transdução de sinal, que catalisam a transferência do fosfato terminal do ATP para o grupo hidroxila dos resíduos de tirosina, serina e/ou treonina das proteínas. A superexpressão ou expressão imprópria de proteína quinases normais ou mutantes em mamíferos tem sido extensamente estudada e tem-se mostrado que desempenham um papel importante no desenvolvimento de muitas doenças incluindo o câncer. Essas quinases parcialmente incluem, mas não estão limitadas a tirosina quinases não receptoras, por exemplo, a família Janus quinase (Jak1, Jak2, Jak3 e Tyk2); tirosina quinases receptoras, por exemplo, quinases receptoras do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR); e serina/treonina-proteína quinases, por exemplo, b-RAF. A atividade de quinase anormal é observada em muitas doenças, incluindo transtornos proliferativos benignos e malignos e doenças causadas por ativação inapropriada dos sistemas nervoso e imunológico.

[0013] Como uma grande família de enzimas estruturalmente relacionadas, as proteína quinases são responsáveis por controlar uma variedade de processos de transdução de sinal nas células. (Consultar, por exemplo, Hardie e Hanks, The Protein Kinase Facts Book, I e II, Academic Press, San Diego, Calif., 1995). Acredita-se que as proteína quinases tenham evoluído de um gene ancestral comum devido à conservação de sua estrutura e função catalítica. Quase todas as quinases contêm um domínio catalítico semelhante com 250-300 aminoácidos. As quinases podem ser categorizadas em diferentes famílias por seus receptores de fosforilação (por exemplo, proteína-tirosina, proteína-serina/treonina, lipídios etc.). Foram identificados motivos de sequência que geralmente correspondem a cada uma dessas famílias. (consultar, por exemplo, Hanks e Hunter, (1995), FASEB J.9:576-596; Knighton etc., Science, (1991) 253:407-414; Hiles etc., Cell, (1992), 70:419-429; Kunz etc., Cell (1993), 73:585- 596; Garcia-Bustos etc., EMBO J., (1994), 13:2.352-2.361).

[0014] Muitas doenças são associadas à atividade de quinase inapropriada causada por mutação, superexpressão ou regulação inapropriada, regulação anormal ou desregulação, bem como superprodução ou subprodução de fatores de crescimento ou citocinas, incluindo, mas não se limitando a câncer e outras doenças. As proteína quinases se tornaram uma classe de importantes enzimas como alvos para a intervenção terapêutica. Particularmente, a superativação da tirosina quinase cKit é associada a malignidades hematológicas e é um alvo para a terapia contra o câncer (Heinrich, Griffith etc., Blood 2000, 96 (3): 925-32). Similarmente, a sinalização de JAK3 está envolvida na leucemia e linfoma, que é atualmente usada como um alvo terapêutico potencial (Heinrich, Griffith etc., 2000). As proteína quinases também desempenham um papel chave na regulação do ciclo celular. Constatou-se que uma variedade de doenças, incluindo muitos tipos de cânceres, podem ser causadas pelos defeitos em vários componentes das vias de transdução de sinal (Gaestel et al., Current Medicinal Chemistry, (2007) 14: 2.214-2.234). Recentemente, as proteína quinases relacionadas às vias oncogênicas de transdução de sinal têm se tornado importantes alvos de fármacos no tratamento de várias doenças incluindo muitos tipos de cânceres. Uma variedade de inibidores de proteína quinase também têm sido usados como fármacos antitumorais.

[0015] Na presente revelação, preferencialmente, o inibidor de proteína quinase da mesma é selecionado a partir de um inibidor de serina quinase, um inibidor de treonina quinase e um inibidor de tirosina quinase. Preferencialmente, o inibidor de proteína quinase da mesma é Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0016] Na presente revelação, preferencialmente, o inibidor de histona desacetilase da mesma é Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

[0017] Em um aspecto particularmente preferencial da presente revelação, o inibidor de histona desacetilase é Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, e o inibidor de quinase é Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Mais preferencialmente, o inibidor de histona desacetilase é Chidamida, e o inibidor de quinase é Chiauranibe.

[0018] Em outro aspecto, a presente revelação fornece uma composição farmacêutica, que compreende um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase como ingredientes farmacêuticos ativos, e opcionalmente compreende excipientes e/ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

[0019] Na composição farmacêutica da presente revelação, preferencialmente, o inibidor de proteína quinase é selecionado a partir de inibidores de serina quinase, inibidores de treonina quinase e inibidores de tirosina quinase. De modo particularmente preferencial, o inibidor de proteína quinase da mesma é Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. De modo especialmente preferencial, os ingredientes farmacêuticos ativos consistem em Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma. Em uma modalidade particular, os ingredientes farmacêuticos ativos consistem em Chiauranibe e Chidamida.

[0020] Em uma modalidade particularmente preferencial da presente revelação, a composição farmacêutica é fornecida em forma de dose unitária, compreendendo 5-100 mg de Chidamida e 5-100 mg de Chiauranibe. Mais preferencialmente, a quantidade de Chidamida e Chiauranibe é 5-60 mg e 10-100 mg, respectivamente.

[0021] Em algumas modalidades da presente revelação, na composição farmacêutica, os excipientes e/ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis da mesma compreendem povidona, copovidona, hidroxipropilmetilcelulose e copolímeros de enxerto de polivinil capralactama-acetato de polivinila- polietilenoglicol (por exemplo, Soluplus®). Em algumas outras modalidades, os excipientes e/ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis compreendem celulose microcristalina, povidona, copovidona, lactose, manitol, crospovidona e carboximetilcelulose sódica.

[0022] A composição farmacêutica da presente revelação está preferencialmente em uma forma de grânulos, dispersões sólidas, cápsulas ou comprimidos.

[0023] Em outro aspecto, a presente revelação fornece um kit para tratar ou prevenir um câncer ou um tumor, compreendendo um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase como ingredientes ativos, em que o inibidor de histona desacetilase e o inibidor de proteína quinase pode ser administrado de modo simultâneo ou sequencial.

[0024] Preferencialmente, o kit da presente revelação compreende Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma e Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como os ingredientes ativos, que podem ser administrados de modo simultâneo ou sequencial. Em um aspecto particularmente preferencial, o kit da presente revelação compreende Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma administrada primeiro e Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo administrado em segundo lugar como os ingredientes ativos.

[0025] Em outro aspecto, a presente revelação fornece um método para tratar ou prevenir um tumor, compreendendo administrar de modo simultâneo ou sequencial um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase a um indivíduo em necessidade do mesmo.

[0026] Os inventores constataram inesperadamente que a combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase tem efeitos antitumorais sinérgicos significativos que foram confirmados nos experimentos com camundongos sem pelo, mostrando que a administração combinada dos dois ingredientes pode sinergicamente induzir a apoptose de células cancerosas e sinergicamente inibir a formação de colônia de células tumorais. Os inventores também constataram inesperadamente que o pré-tratamento com um inibidor de histona desacetilase pode aumentar a sensibilidade das células ao inibidor de proteína quinase, e mais efetivamente intensificar os efeitos antitumorais do inibidor de proteína quinase.

[0027] Constatou-se nos experimentos de MTS, formação de colônia, análise de ciclo celular em citometria de fluxo, Caspase 3/7 e outros experimentos da presente revelação que a administração combinada de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase pode sinergicamente induzir a inibição do ciclo celular e apoptose das linhagens de células de carcinoma hepatocelular, por exemplo, Bel-7404 e Bel-7402. Tal eficácia antitumoral sinérgica pela combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase também foi provada pelo modelo de xenoenxerto de célula Bel-7404 em camundongos sem pelo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0028] A FIG. 1 mostra a eficácia antitumoral de um inibidor de proteína quinase (Chiauranibe) sinergicamente sensibilizado por um inibidor de histona desacetilase (Chidamida);

[0029] A FIG. 2 mostra que a combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase pode sinergicamente inibir a clonogenicidade de células tumorais conforme se mostra no ensaio de cristal violeta;

[0030] A FIG. 3 mostra que a combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase pode intensificar a inibição do ciclo de células tumorais testado por ensaio de citometria de fluxo com iodeto de propídio (PI);

[0031] A FIG. 4 mostra que a combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase pode intensificar a indução de apoptose tumoral testada pelo ensaio de Caspase 3/7;

[0032] A FIG. 5 mostra que o pré-tratamento com um inibidor de histona desacetilase (Chidamida) pode intensificar o efeito antitumoral de um inibidor de proteína quinase (Chiauranibe) nos experimentos de administração sequencial;

[0033] A FIG. 6 mostra a eficácia antitumoral sinérgica da combinação de um inibidor de histona desacetilase (Chidamida) e um inibidor de proteína quinase (Chiauranibe) nos modelos de camundongo sem pelo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0034] Os termos usados no presente documento são usados para descrever modalidades específicas, mas não se destina a limitar a presente revelação. Conforme usado no presente documento, as formas singulares “um”, “uma”, “a” e “o” também se destinam a incluir as formas plurais, a menos que haja uma indicação clara no contexto. Além disso, os termos “incluir”, “compreender”, “conter” ou variações dos mesmos no relatório descritivo e/ou reivindicações da presente revelação se destinam a ser usados de maneira semelhante ao termo “compreender”.

[0035] Conforme usado no presente documento, os termos “tratar”, “aliviar” e “aprimorar” podem ser usados intercambiavelmente. Esses termos se referem aos métodos relacionados a efeitos benéficos ou esperados (incluindo, mas não se limitando a benefício terapêutico e/ou benefício preventivo).

[0036] Conforme usado no presente documento, o termo “antitumoral” se refere ao tratamento, alívio ou aprimoramento da “condição tumoral”. O termo “condição tumoral” se refere à existência de células com características de crescimento anormal como proliferação descontrolada, proliferação infinita, potencial metastático, crescimento rápido e alta taxa de proliferação, sinalização oncogênica desordenada e determinada morfologia única. Ele inclui, mas não se limita ao crescimento das seguintes células: (1) células benignas ou malignas (por exemplo células tumorais) associadas à superexpressão de histona desacetilases, tirosina ou serina/treonina-proteína quinases; (2) células benignas ou malignas (por exemplo células tumorais) associadas à atividade anormalmente alta de histona desacetilases, tirosina ou serina/treonina-proteína quinases.

[0037] Os versados na técnica podem entender que, na combinação de fármacos ou composição farmacêutica da presente revelação, os ingredientes farmacêuticos ativos são usados em uma quantidade eficaz ou em uma quantidade terapeuticamente eficaz. Os termos “quantidade eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” se referem à quantidade do inibidor descrito no presente documento que é suficiente para alcançar o resultado pretendido (incluindo, mas não se limitando à aplicação no tratamento de doenças) conforme definido abaixo. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com a aplicação pretendida (in vitro ou in vivo), ou com o indivíduo que está sendo tratado e a condição da doença, como o peso corporal e idade dos indivíduos, a gravidade da doença, a via de administração etc., que podem ser facilmente determinados por um versado na técnica. O termo também se aplica à dosagem que pode induzir uma resposta específica (por exemplo, redução da proliferação ou regulação decrescente da atividade da proteína alvo) na célula alvo. A dosagem específica pode variar dependendo do composto particular selecionado, do regime de dosagem a ser seguido, se é administrado em combinação com outros compostos, do tempo de administração, do tecido a ser administrado e do sistema físico de entrega para transportá-lo.

[0038] “Sinergia” ou “efeito sinérgico” significa que, quando um ingrediente farmacêutico ativo combinado com uma quantidade eficaz de outro ingrediente farmacêutico ativo ou outra terapia, produz um efeito melhor do que usando cada um separadamente. Em algumas modalidades, o uso sinérgico de ingredientes farmacêuticos ativos em quantidades terapêuticas eficazes ou terapias produz um efeito melhor do que o efeito aditivo de cada um dos dois ingredientes farmacêuticos ativos ou terapias quando usados sozinhos.

[0039] O termo “inibidor” se refere a um composto capaz de inibir a função biológica de uma proteína alvo ao inibir a atividade ou expressão da proteína alvo. A atividade biológica do inibidor está relacionada ao desenvolvimento, crescimento ou espalhamento de um tumor ou respostas imunológicas indesejadas em uma doença autoimune.

[0040] Os termos “administração combinada”, “coadministração” e seus equivalentes gramaticais envolvem a aplicação de dois ou mais ingredientes farmaceuticamente ativos a um indivíduo, de modo que os ingredientes farmaceuticamente ativos e/ou os metabólitos dos mesmos possam estar simultaneamente presentes no animal. A administração combinada inclui administrar os ingredientes ativos concomitantemente ou em momentos diferentes como composições separadas, ou administrar uma composição compreendendo os dois ingredientes ativos da mesma. Os ingredientes farmacêuticos ativos coadministrados podem estar na mesma preparação, ou em diferentes preparações, ou no mesmo produto, por exemplo, como uma forma de um kit.

[0041] Conforme usado no presente documento, “efeito terapêutico” inclui os benefícios terapêuticos e/ou benefícios preventivos conforme descrito acima. O efeito preventivo inclui retardar ou eliminar a aparição da doença ou condição, retardar ou eliminar o surgimento da doença ou condição, desacelerar, interromper ou inverter a progressão da doença ou condição, ou qualquer combinação dos mesmos.

[0042] O termo “sal farmaceuticamente aceitável” se refere a sais derivados de uma variedade de contraíons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição de ácido e sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis. Os sais de adição de ácido podem ser formados com ácidos inorgânicos e orgânicos. Os ácidos inorgânicos capazes de derivar sais dos mesmos incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares. Os ácidos orgânicos capazes de derivar sais dos mesmos incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p- toluenossulfônico, ácido salicílico e similares. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas. As bases inorgânicas capazes de derivar sais das mesmas incluem, por exemplo, sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio e similares. As bases orgânicas capazes de derivar sais das mesmas incluem, por exemplo, aminas primárias, aminas secundárias e aminas terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas naturais, aminas cíclicas, resinas de troca iônica básicas e similares, especialmente como isopropil amina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina e etanolamina. Em algumas modalidades, os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis selecionados a partir de sais de amônio, potássio, sódio, cálcio e magnésio.

[0043] O “excipiente e/ou carreador farmaceuticamente aceitável” inclui todos e quaisquer solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes bactericidas e agentes fungicidas, reguladores isotônicos e agentes de retardamento de absorção e similares. Esses meios e agentes usados em substâncias farmaceuticamente ativas são bem conhecidos na técnica. Quaisquer meios ou agentes convencionais podem ser usados nas composições terapêuticas da presente revelação, exceto por aqueles incompatíveis com os ingredientes ativos. Os ingredientes ativos suplementares também podem ser incorporados nas composições dos mesmos.

[0044] Na presente revelação, os tumores incluem as seguintes doenças ou condições: câncer de mama; câncer de ovário; câncer de útero; câncer de colo de útero; câncer de próstata; câncer de bexiga; leucocitemia incluindo leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mieloide crônica, leucemia de células capilares, osteomielodisplasia, doenças mieloproliferativas, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mielogênica crônica (CML), mastocitose, leucemia linfocítica crônica (CLL), mieloma múltiplo (MM) e síndromes mielodisplásicas (MDS); câncer ósseo; câncer de pulmão; câncer de pele incluindo carcinoma de célula basal, melanoma e carcinoma de células escamosas; retinoblastoma; melanoma de pele ou intraocular (ocular); carcinoma hepático primário; carcinoma renal; carcinoma da tireoide; linfadenoma relacionado à AIDS, como linfoma difuso de grandes células B, linfoma imunoblástico de células B e linfoma de pequenas células não clivadas; sarcoma de Kaposi; câncer do sistema nervoso central, como tumor cerebral primário incluindo neuroglioma; câncer do sistema nervoso periférico, incluindo neurofibromatose e neurilemoma, tumor maligno de células fibrosas, histiocitoma fibroso maligno, meningioma maligno, mesotelioma maligno e tumor mulleriano misto maligno; câncer oral e orofaríngeo; câncer gástrico; câncer de testículo; carcinoma do timo; câncer do reto e câncer de cólon.

[0045] Um tratamento de combinação de acordo com a presente revelação é eficaz em uma ampla faixa de dosagem. Por exemplo, quando usada para tratar adultos, a dose diária do inibidor de histona desacetilase e inibidor de proteína quinase pode ser de 1 a 100 mg, preferencialmente de 5 a 100 mg, respectivamente. Em uma modalidade particular, uma combinação de Chidamida e Chiauranibe é usada, em que a dosagem diária de Chidamida é de 5 a 60 mg, e a dose diária de Chiauranibe é de 10 a 100 mg, respectivamente. A dose exata pode ser facilmente determinada pelos versados na técnica de acordo com o ingrediente farmacêutico ativo selecionado, a via de administração, a forma do composto a ser administrado, o indivíduo a ser tratado, o peso do indivíduo a ser tratado e a preferência e experiência do médico.

[0046] A combinação farmacêutica da presente revelação também pode ser usada junto com outros ingredientes farmacêuticos ativos com atividade antitumoral. Desse modo, a composição farmacêutica ou kit da presente revelação pode conter ainda outro ingrediente (ou ingredientes) farmacêutico ativo com atividade antitumoral.

[0047] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode ser adequada para administração oral, por exemplo, na forma de grânulos, cápsulas ou comprimidos. A composição farmacêutica da presente revelação adequada para administração oral pode estar em formas de dosagem dispersas, como cápsulas ou comprimidos, líquidos ou aspersões, cada um contendo uma quantidade predeterminada de ingredientes ativos, como pós ou em grânulos, soluções, ou suspensões em líquidos aquosos ou não aquosos, emulsões de óleo em água ou emulsões líquidas de água em óleo, incluindo formas de dosagem líquidas (como suspensões ou pastas fluidas) e formas de dosagem sólidas orais (como comprimidos ou pós a granel). O termo “comprimido” conforme usado no presente documento geralmente se refere a comprimidos, comprimidos, cápsulas (incluindo cápsulas de gelatina moles) e pastilhas. As formas de dosagem orais podem ser fornecidas como comprimidos, pílulas, drágeas, cápsulas, emulsões, suspensões lipofílicas e hidrofílicas, líquidos, géis, xaropes, pastas fluidas, suspensões, etc. ingeridas oralmente por um indivíduo ou paciente a ser tratado.

Tais formas de dosagem podem ser preparadas por qualquer método farmacêutico.

Os excipientes adequados podem ser cargas, como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol ou sorbitol; preparações de celulose, como amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, tragacanto, metilcelulose, hidroxipropilmetilcllulose, carboximetilcelulose sódica e/ou polivinlpirrolidona (PVP). De forma geral, a composição é preparada misturando-se de modo uniforme e firme o ingrediente ativo com carreadores líquidos ou carreadores sólidos finamente triturados ou ambos e, então, conformando o produto na forma desejada se necessário.

Por exemplo, a mesma pode ser preparada em um comprimido comprimindo-se ou moldando-se opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios.

A mesma também pode ser preparada em um comprimido comprimindo-se o ingrediente ativo em uma forma de fluxo livre como pó ou grânulos usando-se uma máquina adequada.

O ingrediente ativo da mesma é opcionalmente misturado com excipientes como, mas não limitado a, ligantes, lubrificantes, diluentes inertes e/ou tensoativos ou dispersantes.

Os comprimidos moldados podem ser preparados moldando-se uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte em uma máquina adequada.

O carreador pode assumir várias formas de acordo com a forma de preparação necessária para administração.

Quando a composição é preparada para formas de dosagem oral, qualquer meio farmacêutico convencional pode ser usado como carreador. No caso de preparações líquidas orais (como suspensões, soluções e elixires) ou aerossóis, como água, glicóis, óleos, álcoois, agentes flavorizantes, conservantes, agentes colorantes etc. podem ser usados como carreadores. No caso de preparações sólidas orais, em algumas modalidades nas quais a lactose não é usada, por exemplo, amidos, açúcares, celulose microcristalina, diluentes, agentes de granulação, lubrificantes, ligantes e agentes desintegrantes podem ser usados como carreadores. Por exemplo, os carreadores adequados para preparações orais sólidas incluem pós, cápsulas e comprimidos. Se necessário, os comprimidos podem ser revestidos por uma técnica padrão aquosa ou não aquosa.

[0048] A composição pode compreender adicionalmente um ou mais aditivos e excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Tais aditivos e excipientes incluem, mas não estão limitados a, preventivos de adesão, agentes antiespumantes, tampões, polímeros, antioxidantes, conservantes, agentes quelantes, modificadores de viscosidade, tonificantes, agentes flavorizantes, agentes colorantes, intensificadores de sabor, opacificantes, agentes de suspensão, ligantes, cargas, plastificantes, lubrificantes e misturas dos mesmos. Experimentos

[0049] Materiais experimentais

[0050] As linhagens de células de hepatoma humano Bel- 7402 e Bel-7404 foram adquiridas junto ao Cell Resource Center of Shanghai Institutes for Biological Sciences, CAS, e rotineiramente cultivadas a 37 °C sob 5 % de CO2, em um meio de cultura de RPMI-1640 (Gibco) contendo 10 % de soro fetal bovino (FBS; Gibco) e 1 % de Penicilina- Estreptomicina (HyClone). A tripsina foi adquirida junto à Gibco. O cristal violeta, solução de RNase A (10 mg/ml), iodeto de propídio (PI), Triton X-100 foram adquiridos junto à Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Kits de ensaio de viabilidade celular MTS, kits de ensaio Caspase-Glo 3/7 foram adquiridos junto à Promega. Os camundongos sem pelo foram adquiridos junto ao Guangdong Medical Laboratory Animal Center.

[0051] Exemplo 1. Ensaios de MTS

[0052] O método experimental

[0053] As linhagens de células Bel-7402, Bel-7404 foram digeridas por tripsina, coletadas e contadas e, então, semeadas em uma placa de cultura celular de 96 poços à densidade de 3.000 células/180 µl em cada poço, e cultivadas a 37 °C sob 5 % de CO2. Após serem cultivadas durante a noite, as células foram administradas de acordo com o agrupamento e as concentrações finais mostradas na FIG. 1 (o volume final de cada poço após administração era de 200 µl). A dose para cada grupo foi disposta em 3 poços replicados. Após as células serem tratadas com os fármacos por 120 horas, os meios de cultura na placa de 96 poços foram descartados, e 100 µl de reagentes MTS para detectar o ensaio de viabilidade celular contendo 89,5 µl de RPMI- 1640 livre de vermelho de fenol, 10 µl de MTS e 0,5 µl de PMS foram adicionados a cada poço, ao passo que o mesmo volume de reagentes MTS para detectar o ensaio de viabilidade celular foi adicionado aos poços sem células semeadoras como fundo de detecção (OD490-BLK). Após a incubação a 37 °C por cerca de 1 hora, a absorbância de cada poço foi lida a um comprimento de onda de 490 nm com um leitor de microplaca. O valor de OD490-T de cada poço administrado e o valor de OD490-T0 do poço de controle negativo após a dedução de fundo foram obtidos subtraindo- se OD490-BLK de um valor de leitura de absorbância de cada poço.

[0054] A taxa de sobrevivência relativa das células em cada poço administrado foi calculada de acordo com a seguinte fórmula:

[0055] Taxa de sobrevivência = OD490-T / OD490-T0 × 100 %

[0056] O resultado experimental

[0057] Conforme mostrado na FIG. 1, nas linhagens de células Bel-7402 e Bel-7404, tanto o monotratamento de Chiauranibe quanto o monotratamento de Chidamida mostraram um determinado efeito inibidor na proliferação de células tumorais, que eram dependentes de dose. Deve-se observar que em Bel-7402, quando a dose de efeito de Chiauranibe alcançou 3 µM e a dose de efeito de Chidamida alcançou 0,5, 1 ou 2 µM, respectivamente, os dois fármacos exibiram um efeito sinérgico significativo, ou seja, na mesma dose, a eficácia da combinação dos dois fármacos foi melhor do que a soma da eficácia dos dois fármacos únicos usados separadamente. Em Bel-7404, quando a dose de efeito de Chiauranibe alcançou 3 µM e a dose de efeito de Chidamida alcançou 0,5 ou 1 µM, os dois fármacos exibiram um efeito sinérgico mais significativo do que em Bel-7402.

[0058] Exemplo 2. Ensaios de formação de colônia

[0059] O método experimental

[0060] As linhagens de células SMMC-7721, Bel-7404 no estágio de fase de log foram digeridas por tripsina, coletadas e contadas, então semeadas em uma placa de cultura celular de 6 poços à densidade de 500 células/1,8 ml em cada poço, e cultivadas a 37 °C sob 5 % de CO2. Após serem cultivadas durante a noite, as células foram administradas de acordo com o agrupamento, e as dosagens de concentração final são mostradas na FIG. 2 (o volume final de cada poço após administração era de 2 ml). Os fármacos e meios de cultura foram substituídos a cada 3 dias para manter estáveis o sistema de cultura e a dosagem para cada poço.

[0061] Após ser cultivada por 2-3 semanas, quando surgiram colônias celulares visíveis na placa de cultura, a cultura foi encerrada. Os sobrenadantes foram descartados, e a placa foi lavada cuidadosamente com PBS duas vezes. 1 ml de solução de etanol a 75 % foi adicionado a cada poço para fixar as células, e a solução fixadora foi descartada após 15 min. Então as células foram coradas por 15 min adicionando-se 1 ml de solução de cristal violeta a cada poço, e solução de coloração foi lavada lentamente com água corrente e seca ao ar. As colônias celulares positivas coradas em cada poço da placa de cultura foram fotografadas para comparar sua densidade.

[0062] O resultado experimental

[0063] Conforme mostrado na FIG. 2, em SMMC-7721, quando a Chidamida monotratada em células a uma dose de 0,5 ou 1 µM, não houve efeito significativo na formação de colônias celulares. A densidade de colônias positivas coradas com cristal violeta nos dois poços foi equivalente àquela no poço de controle onde um volume igual de solvente

DMSO foi adicionado. No entanto, uma dose de 5 µM de monotratamento de Chiauranibe teve um efeito relativamente significativo na formação de colônias celulares. Quando uma dose de 0,5 ou 1 µM de Chidamida foi adicionada com Chiauranibe em tal dose, a formação de colônias celulares foi inibida mais significativamente, e a inibição foi positivamente correlacionada à dose de Chidamida. Em Bel- 7404, quando a Chidamida monotratada em células a uma dosagem de 0,5 ou 1 µM, ou Chiauranibe monotratado em células a uma dosagem de 3 µM, todos afetaram um pouco a formação de colônias celulares, ao passo que a formação de colônia celular foi inibida mais significativamente como os dois fármacos combinados nas células. Assim, a combinação de Chidamida e Chiauranibe teve um efeito sinérgico sensível na inibição das colônias de SMMC-7721 e Bel-7404.

[0064] Exemplo 3. O ciclo celular analisado pelo ensaio de citometria de fluxo com coloração por PI

[0065] O método experimental

[0066] As células de Bel-7404 no estágio de fase de log foram digeridas por tripsina, coletadas e contadas. As células foram semeadas em uma placa de 6 poços à densidade de 106 células por poço em um total de 18 poços. Após serem normalmente cultivadas durante a noite, as células semeadas foram divididas em 6 grupos, a saber, grupo de controle de solvente, grupo de Chiauranibe 3 µM, grupo de Chidamida 0,5 µM, grupo de Chidamida 1 µM, a combinação de grupo de Chiauranibe 3 µM e Chidamida 0,5 µM e a combinação de grupo de Chiauranibe 3 µM e Chidamida 1 µM. Cada grupo foi disposto em 3 poços repetidos, e os compostos correspondentes foram adicionados de acordo com as concentrações finais acima. Após serem cultivadas por 48 horas, as amostras de células foram coletadas por tripsinização e centrifugadas a 800 rpm por 10 min. Cada amostra foi totalmente ressuspensa em 300 µl de solução salina tamponada com fosfato (PBS), gotejada em 700 µl de etanol absoluto preaquecido gota a gota e, então, misturadas uniformemente por inversão suave várias vezes, para dispersar e fixar as células. Permitiu-se que as amostras fixadas repousassem a 4 °C por mais de 12 horas e foram analisadas pelo ensaio de citometria de fluxo dentro de 1 semana.

[0067] PBS, 10 mg/ml de solução estoque de PI, 10 mg/ml de solução de RNase A e Triton X-100 foram misturados a uma razão de 1.000: 5: 2: 1 para formar uma solução de tingimento de trabalho. As amostras de células fixadas foram centrifugadas a 4 °C, 1.000 rpm por 10 min, e os sobrenadantes foram completamente descartados e lavados duas vezes com PBS. Cada amostra foi ressuspensa em 300 µl da solução de tingimento de trabalho acima. Após serem incubadas a 37 °C por 30 minutos no escuro, as células foram filtradas com uma peneira de aço inoxidável de 200 mesh. O filtrado foi analisado quanto aos ciclos celulares pelo ensaio de citometria de fluxo (cada amostra continha

20.000 células).

[0068] O resultado do experimento

[0069] Conforme mostrado na FIG. 3, em Bel-7404, em comparação com o grupo de controle de solvente, o ciclo celular do grupo de Chidamida 0,5 µM quase não foi afetado. As células na fase G2/M e células poliploides aumentaram ligeiramente no grupo de Chidamida 1 µM e no grupo de

Chiauranibe 3 µM. Quando Chiauranibe 3 µM foi combinado com Chidamida 0,5 µM ou 1 µM, as células tiveram uma parada de fase G2/M mais significativa e um aumento na proporção de células poliploides, indicando que a combinação de Chidamida e Chiauranibe teve um efeito antitumoral de intensificar sinergicamente a inibição do ciclo celular e promover sinergicamente poliploidização celular.

[0070] Exemplo 4. A apoptose celular analisada pelo ensaio de Caspase 3/7

[0071] O método experimental

[0072] As células de Bel-7404 no estágio de fase de log foram digeridas por tripsina, coletadas e contadas. As células foram semeadas em uma placa de 96 poços à densidade de 2.000 células por poço em um total de 18 poços. Após serem normalmente cultivadas durante a noite, as células semeadas foram divididas em 6 grupos, a saber, o grupo em branco, o grupo de controle de solvente, o grupo de Chiauranibe 3 µM, o grupo de Chidamida 0,5 µM, a combinação de grupo de Chiauranibe 3 µM e Chidamida 0,5 µM e o grupo de controle positivo. Cada grupo foi disposto em 3 poços repetidos, e os compostos correspondentes foram adicionados de acordo com as concentrações finais acima e cocultivados por 48 horas.

[0073] O tampão Caspase-Glo3/7 e pó liofilizado de Caspase-Glo3/7 como um substrato foram equilibrados em 18- 22 °C. Então, o tampão Caspase-Glo3/7 foi vertido em um frasco marrom contendo o substrato de Caspase-Glo3/7, e misturados por vórtex ou inversão até o substrato ser completamente dissolvido para formar o reagente Caspase- Glo.

[0074] A placa de 96 poços contendo as células tratadas foram retiradas da incubadora e equilibradas à temperatura ambiente. 70 µl de reagente Caspase-Glo (meios de cultura: reagente Caspase-Glo = 1: 1) foram adicionados a cada poço da placa de 96 poços contendo 70 µl do controle em branco, o grupo de controle de solvente, os grupos tratados com fármaco e o grupo de controle positivo. O conteúdo de cada poço foi misturado suavemente com o uso de um agitador de placa em 300-500 rpm por 30 s. As células foram incubadas à temperatura ambiente (18-22 °C) por 30 min a 3 h. O valor de fluorescência de cada amostra foi medido por um luminômetro. O valor de fluorescência pode refletir diretamente a proporção de células apoptóticas em cada poço, e pode ser usado para calcular e comparar a variabilidade celular dos diferentes grupos.

[0075] O resultado experimental

[0076] Conforme mostrado na FIG. 4, em Bel-7404, após as células serem tratadas com Chidamida 0,5 µM sozinha, a proporção de células apoptóticas não teve diferença significativa a partir do grupo de controle de solvente com o volume igual de DMSO. O monotratamento com Chiauranibe 3 µM aumentou a proporção de células apoptóticas até certo ponto. Quando os dois fármacos nas doses acima foram combinados para tratar as células, a proporção de células apoptóticas foi significativamente aumentada, o que foi significativamente superior à soma da proporção de apoptose aumentada pelos dois fármacos únicos separadamente. Os dois fármacos sinergicamente promoveram a apoptose de células tumorais. Desse modo, a combinação causou uma inibição de atividade celular tumoral que foi significativamente superior à soma da inibição causada usando-se cada um dos dois fármacos sozinhos.

[0077] Exemplo 5. Experimento de administração sequencial

[0078] O método experimental

[0079] As células de Bel-7404 no estágio de fase de log foram digeridas por tripsina, coletadas, contadas, semeadas em uma placa de cultura celular de 96 poços à densidade de

5.000 células/180 µl em cada poço, e cultivadas sob 5 % de CO2 a 37 °C. Após as células serem cultivadas durante a noite, os fármacos correspondentes ao agrupamento e às concentrações finais de 0 a 48 horas conforme se mostra na FIG. 5, foram adicionados, e o volume final em cada poço alcançou 200 µl. Após as células serem cultivadas por 48 horas, os meios de cultura foram aspirados cuidadosamente da placa de 96 poços. Em cada poço, 180 µl de meios de cultura frescos e os fármacos correspondentes ao agrupamento e às concentrações finais por 48-96 horas conforme se mostra na FIG. 5, foram adicionados (de modo que o volume final em cada poço alcançou 200 µl). Após as células serem cultivadas por mais 48 horas, ou seja, o tempo total do tratamento de fármaco alcançar 96 horas, os meios de cultura foram descartados na placa de 96 poços, e os reagentes MTS para ensaio de viabilidade celular foram adicionados para detectar e calcular a taxa de sobrevivência celular em cada poço.

[0080] O resultado experimental

[0081] Conforme mostrado na FIG. 5, em Bel-7404, seja nas primeiras 48 horas ou nas 48 horas seguintes, o efeito inibidor nas células causado pela adição de dois fármacos ao mesmo tempo foi maior do que adicionando-se cada um dos dois fármacos separadamente. Deve-se observar que o pré- tratamento das células com monoterapia de Chidamida nas primeiras 48 horas e, então, o tratamento das células com monoterapia de Chiauranibe nas 48 horas seguintes, após a remoção da Chidamida, foi muito diferente do pré-tratamento das células com monoterapia de Chiauranibe nas primeiras 48 horas e, então, o tratamento das células com monoterapia de Chidamida nas 48 horas seguintes, após a remoção do Chiauranibe. O pré-tratamento com Chidamida tornou as células mais sensíveis a Chiauranibe, mas o pré-tratamento com Chiauranibe não tornou as células sensíveis ao efeito subsequente de monoterapia de Chidamida, indicando que o mecanismo da sensibilização sinérgica resultante da combinação dos dois fármacos foi que a modificação epigenética das células por Chidamida mudou a sensibilidade das células aos efeitos farmacológicos de Chiauranibe.

[0082] Exemplo 6. Experimentos de modelo de xenoenxerto de células tumorais em camundongos sem pelo

[0083] O método experimental

[0084] As células de Bel-7404 foram cultivadas para se expandirem em uma grande quantidade, e se manterem em um estado de fase de log. Após o número das células alcançar a quantidade necessária, elas foram digeridas com tripsina, coletadas, lavadas duas vezes com uma grande quantidade de PBS para remover a tripsina e soro, e foram centrifugadas a 800 rpm por 10 min à temperatura ambiente e os sobrenadantes celulares foram descartados. As células foram ressuspensas no meio de cultura RPIM-1640 livre se FBS, e ajustou-se a densidade celular a 107/300 µl.

[0085] Sob condições assépticas, a cada camundongo sem pelo injetou-se subcutaneamente no dorso 300 µl/injeção, uma injeção por camundongo sem pelo. Uma seringa médica descartável de 1 ml para injeção foi usada, e a direção e o sítio de injeção foram aproximadamente iguais para cada camundongo sem pelo.

[0086] Um dia após a implantação celular, os camundongos sem pelo foram aleatoriamente divididos em quatro grupos (a saber, grupo de controle de solvente, grupo de Chiauranibe 2,5 mg/kg, grupo de Chidamida 20 mg/kg e o grupo de administração combinada), alojados em jaulas separadas após serem marcados, receberam administração em grupos, e a formação de tumor de cada camundongo foi observada todos os dias. Com o peso corporal de cada camundongo sem pelo medido antes da administração, aos camundongos sem pelo foi administrada intragastricamente uma dosagem baseada por quilograma do peso corporal, ou seja, 10 µl de solução de CMC-Na por grama de peso corporal para o grupo de controle de solvente, 10 µl de suspensão de 0,25 mg/ml Chiauranibe- CMC-Na por grama de peso corporal para o grupo de Chiauranibe 2,5 mg/kg, 10 µl de 2 mg/ml de suspensão de Chidamida-CMC-Na por grama de peso corporal para o grupo de Chidamida 20 mg/kg, e 10 µl de da suspensão de CMC-Na contendo 0,25 mg de Chiauranibe e 2 mg de Chidamida por mililitro, por grama de peso corporal para o grupo de administração combinada. A cada 2 dias, o diâmetro mais longo do tumor (comprimento) e o diâmetro mais largo (largura) perpendicular ao diâmetro mais longo foram medidos com um paquímetro. O volume tumoral foi calculado pela fórmula TS = comprimento × (largura)2/2 e registrado.

Cada camundongo sem pelo recebeu administração intragástrica regularmente uma vez por dia. O experimento foi encerrado após a última administração no 33o dia.

[0087] O resultado do experimento

[0088] Conforme mostrado na FIG. 6, em comparação com o grupo de controle de solvente, nos dois grupos aos quais se administrou o fármaco único de 2,5 mg/kg de Chiauranibe ou 20 mg/kg de Chidamida, o volume tumoral dos camundongos sem pelo portadores de tumor foi inibido até certo ponto, ao passo que a taxa de inibição de tumor final do grupo de administração combinada foi superior à soma das taxas de inibição de tumor dos dois grupos aos quais se administrou o fármaco único. Isso demonstrou que os dois fármacos tinham atividade antitumoral sinergicamente sensibilizada nos camundongos sem pelo portadores de tumor.

[0089] Exemplo 7. Preparação (em 1.000 unidades) da composição farmacêutica de composto 1 (grânulos ou cápsulas)

[0090] Fórmula de dispersão sólida de Chidamida componentes quantidade Chidamida 50 g povidona 250 g etanol medicinal 8.000 ml

[0091] Fórmula de grânulo de composto componentes quantidade dispersão sólida de 180 g Chidamida Chiauranibe 50 g componentes quantidade povidona 10 g celulose microcristalina 160 g lactose 100 g estearato de magnésio 5 g etanol medicinal 75 ml

[0092] Processo de preparação

[0093] (1) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula de dispersão sólida de Chidamida, Chidamida, povidona e etanol medicinal foram pesados, misturados e agitados até todos os componentes serem completamente dissolvidos a 80 °C para obter uma solução transparente. A solução foi submetida à evaporação giratória ou secagem por aspersão para preparar um pó branco, ou seja, dispersão sólida de Chidamida;

[0094] (2) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula de grânulo de composto, a dispersão sólida de Chidamida, Chiauranibe, povidona, celulose microcristalina e lactose foram pesadas. Em um granulador a úmido, os excipientes foram adicionados e misturados uniformemente e, então, o etanol medicinal foi adicionado para obter grânulos em granulação a úmido. Os grânulos obtidos foram secos em um forno ou um secador de leito fluidizado, e peneirados com uma tela de 20 mesh, para obter os grânulos contendo substâncias auxiliares farmacêuticas.

[0095] (3) Os grânulos obtidos na etapa (2) foram misturados com estearato de magnésio em proporções por 2 min para obter grânulos totalmente misturados.

[0096] (4) Os grânulos totalmente misturados obtidos na etapa (3) foram embalados para obter grânulos, ou cápsulas ocas preenchidas em cápsulas obtidas.

[0097] Exemplo 8. Preparação (em 1.000 unidades) da composição farmacêutica de composto 2 (grânulos, cápsulas ou comprimidos)

[0098] Fórmula de dispersão sólida de Chidamida componentes quantidade Chidamida 50 g copovidona 250 g etanol medicinal 5.500 ml

[0099] Fórmula de grânulo de composto componentes quantidade dispersão sólida de 60 g Chidamida Chiauranibe 90 g crospovidona 50 g celulose microcristalina 160 g manitol 140 g estearato de magnésio 5 g

[0100] Processo de preparação

[0101] (1) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula de dispersão sólida de Chidamida, Chidamida, copovidona e etanol medicinal foram pesados, misturados e agitados até todos os componentes serem completamente dissolvidos a 80 °C para obter uma solução transparente. A solução foi submetida à evaporação giratória ou secagem por aspersão para preparar aproximadamente um pó branco, ou seja, dispersão sólida de Chidamida;

[0102] (2) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula de grânulo de composto, a dispersão sólida de Chidamida, Chiauranibe, crospovidona, celulose microcristalina e manitol foram pesados. Os excipientes foram adicionados a um misturador tridimensional e misturados uniformemente, para preparar grânulos em granulação a seco. Os grânulos obtidos foram peneirados com uma tela de 20 mesh, para obter os grânulos contendo substâncias auxiliares farmacêuticas.

[0103] (3) Os grânulos obtidos na etapa (2) foram misturados com estearato de magnésio em proporções por 2 min para obter grânulos totalmente misturados.

[0104] (4) Os grânulos totalmente misturados obtidos na etapa (3) foram embalados para obter grânulos de liberação rápida, ou cápsulas ocas preenchidas para obter cápsulas, ou comprimidos nos comprimidos obtidos.

[0105] Exemplo 9. Preparação (em 1.000 unidades) da composição farmacêutica de composto 3 (grânulos ou comprimidos)

[0106] Fórmula de dispersão sólida de Chidamida componentes quantidade Chidamida 60 g hidroxipropilmetilcelulose 300 g etanol medicinal 6.000 ml água 1.600 ml

[0107] Fórmula de grânulo de composto componentes quantidade componentes quantidade dispersão sólida de 360 g Chidamida Chiauranibe 30 g crospovidona 80 g celulose microcristalina 200 g lactose 190 g estearato de magnésio 8 g

[0108] Processo de preparação

[0109] (1) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula de dispersão sólida de Chidamida, hidroxipropilmetilcelulose foi pesada e dissolvida em água na quantidade da fórmula, em que a Chidamida foi adicionada e, então, agitada até ser dissolvida a 80 °C para obter uma solução transparente. A solução foi submetida à evaporação giratória ou secagem por aspersão para preparar um pó esbranquiçado, ou seja, dispersão sólida de Chidamida.

[0110] (2) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula de grânulo de composto, a dispersão sólida de Chidamida, Chiauranibe, crospovidona, celulose microcristalina e lactose foram pesados. Os excipientes foram adicionados a um misturador tridimensional e misturados uniformemente, para preparar grânulos em granulação a seco. Os grânulos obtidos foram peneirados com uma tela de 20 mesh, para obter os grânulos contendo substâncias auxiliares farmacêuticas.

[0111] (3) Os grânulos obtidos na etapa (2) foram misturados com estearato de magnésio em proporções por 2 min para obter grânulos totalmente misturados.

[0112] (4) Os grânulos totalmente misturados obtidos na etapa (3) foram embalados para obter grânulos de liberação rápida, ou comprimidos nos comprimidos obtidos.

[0113] Exemplo 10. Preparação (em 1.000 unidades) da composição farmacêutica de composto 4 (cápsulas)

[0114] Fórmula de uma solução de revestimento de fármaco para Chidamida componentes quantidade Chidamida 20 g povidona 100 g etanol medicinal 3.000 ml

[0115] Fórmula de uma solução de revestimento de fármaco para Chiauranibe componentes quantidade Chiauranibe 60 g povidona 25 g etanol medicinal 500 ml

[0116] Fórmula de núcleo de pílula componentes quantidade núcleo de pílula em branco 150 g (celulose microcristalina)

[0117] Processo de preparação

[0118] (1) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula da solução de revestimento de fármaco para Chidamida, Chidamida, povidona e etanol medicinal foram pesados, misturados e agitados até todos os componentes serem completamente dissolvidos a 80 °C, para obter uma solução transparente, ou seja, uma solução de revestimento para Chiauranibe.

[0119] (2) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula da solução de revestimento de fármaco para Chiauranibe, povidona e etanol medicinal foram pesados. A povidona foi dissolvida no etanol. O Chiauranibe foi disperso uniformemente na solução de povidona, para obter uma solução de revestimento de fármaco para Chiauranibe.

[0120] (3) Revestimento: O núcleo de pílula em branco foi precisamente pesado e aplicado com os fármacos aspergindo-se a solução de revestimento de fármaco para Chidamida e a solução de revestimento de fármaco para Chiauranibe separadamente em um leito fluidizado; o núcleo de pílula após a aspersão foi pesado para calcular a taxa de aplicação de fármaco, então os péletes de fármacos combinados contendo Chidamida e Chiauranibe foram obtidos.

[0121] (4) Os péletes obtidos na etapa (3) por revestimento foram cápsulas ocas preenchidas em cápsulas obtidas.

[0122] Exemplo 11. Preparação de (em 1.000 unidades) composição farmacêutica de composto 5 (cápsulas)

[0123] Fórmula de solução de revestimento de fármaco combinada para Chidamida e Chiauranibe componentes quantidade Chidamida 5 g Chiauranibe 100 g copovidona 30 g etanol medicinal 1.000 ml

[0124] Fórmula de núcleo de pílula: componentes quantidade núcleo de pílula em branco 100 g (celulose microcristalina)

[0125] Processo de preparação

[0126] (1) Com base nas quantidades dos componentes na fórmula da solução de revestimento de fármaco combinada para Chidamida e Chiauranibe, Chidamida, povidona e etanol medicinal foram pesados, misturados e agitados até serem completamente dissolvidos a 80 °C, para obter uma solução transparente. O Chiauranibe foi disperso uniformemente na solução transparente de Chidamida, para obter a solução de revestimento de fármaco combinada para Chidamida e Chiauranibe.

[0127] (2) Revestimento: O núcleo de pílula em branco foi precisamente pesado e aplicado com os fármacos aspergindo-se a combinação de líquido de revestimento de Chidamida e Chiauranibe em um leito fluidizado; o núcleo de pílula após a aspersão foi pesado para calcular a taxa de aplicação de fármaco, então os péletes de fármacos combinados contendo Chidamida e Chiauranibe foram obtidos.

[0128] (3) Os péletes obtidos na etapa (2) por revestimento foram cápsulas ocas preenchidas em cápsulas obtidas.

[0129] As formulações preparadas acima foram testadas quanto à dissolução de fármaco in vitro em um meio de ácido clorídrico de 0,1 mol/l, de acordo com a Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, edição de 2015. Como um resultado, mais de 85 % dos fármacos foram dissolvidos dentro de 15 min, o que cumpriu com os requisitos de liberação.

Claims (18)

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma combinação de um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase caracterizado por ser na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir um tumor.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de proteína quinase é selecionado a partir do grupo que consiste em um inibidor de serina quinase, um inibidor de treonina quinase e um inibidor de tirosina quinase.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o inibidor de histona desacetilase é Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

4. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o inibidor de proteína quinase é Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o inibidor de histona desacetilase é Chidamida e o inibidor de proteína quinase é Chiauranibe.

6. Composição farmacêutica caracterizada por compreender um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase como ingredientes farmacêuticos ativos, e opcionalmente um excipiente e/ou carreador farmaceuticamente aceitável.

7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que os ingredientes farmacêuticos ativos consistem em Chiauranibe e Chidamida.

8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o excipiente e/ou carreador farmaceuticamente aceitável inclui povidona, copovidona, hidroxipropilmetilceluloses e copolímeros de enxerto de polivinil capralactama-acetato de polivinila-polietilenoglicol.

9. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de que em uma dosagem unitária, a quantidade de Chidamida é 5-100 mg, e a quantidade de Chiauranibe é 5-100 mg, respectivamente, preferencialmente 5-60 mg de Chidamida e 10-100 mg de Chiauranibe, respectivamente.

10. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 9, sendo a composição farmacêutica caracterizada por estar em uma forma de grânulos, dispersões sólidas, cápsulas ou comprimidos.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por compreender excipientes e/ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis selecionados a partir do grupo que consiste em celulose microcristalina, povidona, copovidona, lactose, manitol, crospovidona e carboximetilcelulose sódica.

12. Kit para tratar ou prevenir câncer caracterizado por compreender um inibidor de histona desacetilase e um inibidor de proteína quinase como ingredientes ativos, em que o inibidor de histona desacetilase e o inibidor de proteína quinase são administrados de modo simultâneo ou sequencial.

13. Kit, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por compreender Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma e Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingredientes ativos, em que a Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma e o Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo são administrados de modo simultâneo ou sequencial.

14. Kit, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por compreender Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma administrada em primeiro lugar e Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, administrado em segundo lugar, como ingredientes ativos.

15. Uso da composição farmacêutica conforme definida em qualquer uma das reivindicações 6 a 11 caracterizado por ser na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir um tumor.

16. Uso do kit conforme definido em qualquer uma das reivindicações 12 a 14 caracterizado por ser na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir câncer, em que o inibidor de histona desacetilase e o inibidor de proteína quinase são administrados de modo simultâneo ou sequencial.

17. Uso do kit, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o inibidor de histona desacetilase é Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, e o inibidor de proteína quinase é Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

18. Uso do kit, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que Chidamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma é administrada em primeiro lugar e Chiauranibe ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado em segundo lugar, como ingredientes ativos.