CN116637182A - 包含抗ctla4-抗pd-1双特异性抗体和西奥罗尼的药物组合 - Google Patents
包含抗ctla4-抗pd-1双特异性抗体和西奥罗尼的药物组合 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116637182A CN116637182A CN202310172580.1A CN202310172580A CN116637182A CN 116637182 A CN116637182 A CN 116637182A CN 202310172580 A CN202310172580 A CN 202310172580A CN 116637182 A CN116637182 A CN 116637182A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- variable region
- chain variable
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 21
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 156
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 156
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 73
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 67
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 57
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 51
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 42
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 42
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 41
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 claims description 26
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 15
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 14
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 claims description 14
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 13
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 10
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 10
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 9
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 7
- 208000006468 Adrenal Cortex Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 6
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 6
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 6
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 6
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 5
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 5
- 208000016035 malignant germ cell tumor of ovary Diseases 0.000 claims description 5
- 201000008022 malignant ovarian germ cell neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 claims description 5
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 claims description 5
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 claims description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 112
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000013078 crystal Chemical group 0.000 abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 179
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 57
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 40
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 36
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 29
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 26
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 26
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 22
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 22
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 16
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 16
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 14
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 13
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 13
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 12
- 208000032818 Microsatellite Instability Diseases 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 230000033607 mismatch repair Effects 0.000 description 11
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 9
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 6
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 5
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 5
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 5
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 5
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 4
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 206010063836 Atrioventricular septal defect Diseases 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 3
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 3
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 3
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 241000168254 Siro Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001211 electron capture detection Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 3
- LGQLOGILCSXPEA-UHFFFAOYSA-L nickel sulfate Chemical compound [Ni+2].[O-]S([O-])(=O)=O LGQLOGILCSXPEA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229910000363 nickel(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 2
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 101710138871 Ig gamma-1 chain C region Proteins 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102100039345 Immunoglobulin heavy constant gamma 1 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- LGXVIGDEPROXKC-UHFFFAOYSA-N 1,1-dichloroethene Chemical group ClC(Cl)=C LGXVIGDEPROXKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJTAZXHBEBIQQX-UHFFFAOYSA-N 1,5-bis(chloromethyl)naphthalene Chemical compound C1=CC=C2C(CCl)=CC=CC2=C1CCl HJTAZXHBEBIQQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- ZYHQGITXIJDDKC-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-aminophenyl)ethyl]aniline Chemical group NC1=CC=CC=C1CCC1=CC=CC=C1N ZYHQGITXIJDDKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYNLGDBUJLVSMA-UHFFFAOYSA-N 4,5-diacetyloxy-9,10-dioxo-2-anthracenecarboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(O)=O)=CC(OC(C)=O)=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2OC(=O)C TYNLGDBUJLVSMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 101150100936 CD28 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 1
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 102100028843 DNA mismatch repair protein Mlh1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034157 DNA mismatch repair protein Msh2 Human genes 0.000 description 1
- 102100021147 DNA mismatch repair protein Msh6 Human genes 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 1
- 108010021470 Fc gamma receptor IIC Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001134036 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Msh2 Proteins 0.000 description 1
- 101000968658 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Msh6 Proteins 0.000 description 1
- 101000840257 Homo sapiens Immunoglobulin kappa constant Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000916644 Homo sapiens Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102100029572 Immunoglobulin kappa constant Human genes 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 102100029206 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c Human genes 0.000 description 1
- 229910015837 MSH2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100028198 Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010074346 Mismatch Repair Endonuclease PMS2 Proteins 0.000 description 1
- 102100037480 Mismatch repair endonuclease PMS2 Human genes 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010026664 MutL Protein Homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001645095 Parisis Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- ROBVIMPUHSLWNV-UHFFFAOYSA-N aminoglutethimide Chemical compound C=1C=C(N)C=CC=1C1(CC)CCC(=O)NC1=O ROBVIMPUHSLWNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003437 aminoglutethimide Drugs 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 1
- 229940030495 antiandrogen sex hormone and modulator of the genital system Drugs 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- GOLCXWYRSKYTSP-UHFFFAOYSA-N arsenic trioxide Inorganic materials O1[As]2O[As]1O2 GOLCXWYRSKYTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 108091092330 cytoplasmic RNA Proteins 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229960004590 diacerein Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N epipodophyllotoxin Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000006450 immune cell response Effects 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000091 immunopotentiator Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- BRKWREZNORONDU-UHFFFAOYSA-N n-(2-aminophenyl)-6-(7-methoxyquinolin-4-yl)oxynaphthalene-1-carboxamide Chemical compound C=1C=NC2=CC(OC)=CC=C2C=1OC(C=C1C=CC=2)=CC=C1C=2C(=O)NC1=CC=CC=C1N BRKWREZNORONDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003726 plant lectin Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001237 podophyllotoxin Drugs 0.000 description 1
- YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N podophyllotoxin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 229940095055 progestogen systemic hormonal contraceptives Drugs 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108091035233 repetitive DNA sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000053632 repetitive DNA sequence Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005316 response function Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940126672 traditional medicines Drugs 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 230000002477 vacuolizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4406—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 3, e.g. zimeldine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，涉及一种包含抗CTLA4‑抗PD‑1双特异性抗体和西奥罗尼的药物组合。具体地，所述的药物组合，其包含西奥罗尼或其可药用盐或其晶型，以及至少一种抗CTLA4‑抗PD‑1双特异性抗体。本发明还涉及所述药物组合的用途。本发明的药物组合具有良好的抗肿瘤效果。
Description
技术领域
本发明属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，涉及一种包含抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体和西奥罗尼的药物组合及其用途。具体地，本发明涉及一种包含突变的抗CTLA4-抗PD-1的双特异性抗体和西奥罗尼或其可药用盐或其晶型的药物组合及其用途。
背景技术
跨膜受体PD-1(程序性细胞死亡-1)是CD28基因家族成员之一，在活化的T细胞，B细胞以及骨髓系细胞都有表达。PD-1的配体PDL1(Programmed cell death 1ligand 1，亦简称为PDL-1)和PDL2(Programmed cell death 1ligand 2，亦简称为PDL-2)均属于B7超家族，其中PDL1在多种细胞都有表达，包括T细胞，B细胞以及内皮细胞和上皮细胞，PDL2则仅表达于抗原呈递细胞如树突状细胞和巨噬细胞。
PD-1/PDL1信号通路在调节免疫耐受、微生物感染及肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。PD-1的表达主要在T细胞等免疫细胞，而PD-1的配体PDL1主要在许多人类肿瘤组织呈高表达。阻断PD-1/PDL1信号通路可使被抑制的T细胞激活，进而攻击癌细胞。阻断PD-1/PDL1信号可以促进肿瘤抗原特异性T细胞的增殖，发挥杀伤肿瘤细胞的作用，进而抑制局部肿瘤生长(Julie R et al.,2012，N Engl JMed.366:2455–2465)。另外，高表达PDL1的肿瘤伴随着很难被检测到的癌症(Hamanishi et al.,2007,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 104:3360-5)。一种实施有效的方法是通过体内注射抗PD-1抗体对PD-1的表达进行调控。由于PD-1抗体的广谱抗肿瘤前景和惊人的药效，业界普遍认为针对PD-1通路的抗体将带来治疗多种肿瘤治疗的突破性的进展：用于治疗非小细胞性肺癌，肾细胞癌，卵巢癌，黑色素瘤(HometM.B.,Parisi G.,et al.,2015,Semin Oncol.42(3):466-473)，白血病以及贫血病(HeldSA,Heine A,et al.,2013,Curr Cancer Drug Targets.13(7):768-74)。
细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte sociated antigen4，亦简称为CTLA4)与CD28分子在基因结构、染色体定位、序列的同源性及基因表达具有十分相近的关系，都是共刺激分子B7的受体，主要表达于被激活T细胞表面。CTLA4与B7结合后能抑制小鼠和人T细胞的激活，在T细胞活化中起负调节作用。
CTLA4抗体(或抗CTLA4单克隆抗体)或CTLA4配体可以阻止CTLA4与其天然配体结合，从而封闭CTLA4对T细胞负性调节信号的传导，增强T细胞对各种抗原的反应性，在这方面体内与体外研究结果基本一致。目前已有CTLA4单克隆抗体处于临床试验阶段或被批准用于治疗前列腺癌，膀胱癌，结肠直肠癌，胃肠道癌，肝癌，恶性黑色素瘤等(Grosso JF.,Jure-Kunkel MN.,2013,Cancer Immun.13:5.)。
白细胞介素2(IL-2)由T细胞产生，是调节T细胞亚群的生长因子，也是调控免疫应答的重要因子，并可促进活化B细胞增殖，参与抗体反应、造血和肿瘤监视。重组的人IL-2已经被美国FDA批准用于治疗恶性肿瘤(包括黑色素瘤、肾肿瘤等)，同时正在进行治疗慢性病毒感染的临床研究(Chavez,A.R.,et al.,2009,Ann N Y Acad Sci,1182:p.14-27)。CTLA4及CTLA4抗体作为T细胞功能状况的重要影响因素，通过干预机体免疫微环境。体外和体内试验实验中，CTLA4抗体可特异地解除CTLA4对机体免疫抑制，激活T细胞，诱导IL-2产生，在抗肿瘤及寄生虫等疾病的基因治疗中有广泛应用前景。
CTLA4抗体可对疾病产生特异性治疗作用，并发挥较高疗效，补充传统用药的不足，由此开辟基因治疗的新途径。
双特异性抗体(Bispecific Antibody)亦称为双功能抗体，是同时靶向两种不同抗原的特异性药物，其可通过免疫分选纯化生产。另外，也可通过基因工程获得。基因工程方法在结合位点优化，合成形式的考量以及产量等方面都具有相应的灵活性，所以具有一定的优势。目前，其存在形式已被证明有超过45种(Dafne Müller,Kontermann RE.2010,BioDrugs,24(2):89-98)。目前已开发的多种双特异性抗体为IgG-scFv形式即Morrison模式(Coloma MJ,Morrison SL.1997,Nat Biotechnol.15:159-163)，由于这种类似于天然存在的IgG形式，其在抗体工程、表达和纯化上所具有的优势，已被证明是双功能抗体的其中一种理想存在形式(Miller BR,Demarest SJ,et al.,2010,Protein Eng Des Sel；23:549-57；Fitzgerald J,Lugovskoy A.2011.MAbs；3:299-309)。
ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)即抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用，是指抗体的Fab段结合病毒感染的细胞或肿瘤细胞的抗原表位，其Fc段与杀伤细胞(NK细胞、巨噬细胞等)表面的Fc受体(Fc Receptor,FcR)结合，介导杀伤细胞直接杀伤靶细胞。
CDC(complement dependent cytotoxicity)即补体依赖的细胞毒性，是指当抗体与细胞膜表面相应抗原特异性结合后，形成复合物而激活补体系统，进而在靶细胞表面形成MAC，导致靶细胞溶解。补体能导致多种细菌和其他病原生物细胞的溶解，是机体抵抗病原生物感染的重要防御机制。
Fc受体是表达在特定免疫细胞表面，用于识别抗体Fc区域介导免疫应答的免疫球蛋白家族蛋白。抗体Fab区域识别抗原后，其抗体Fc区域与免疫细胞(如杀伤细胞)上的Fc受体结合，启动免疫细胞的应答功能，如吞噬作用及ADCC。
根据Fc受体识别抗体类型及表达细胞的不同，Fc受体主要分为FcγR、FcαR和FcεR三种类型，FcγR又可分为FcγRI(亦称为CD64)、FcγRII(亦称为CD32)、FcγRIII(亦称为CD16)和FcRn(亦称为Neonatal Fc receptor)四种亚型。其中FcγRI、FcγRII、FcγRIII与ADCC效应密切相关。FcγRIII是介导ADCC的最主要分子，在不同细胞类型中具有高度同源的FcγRIIIa和FcγRIIIb两种亚型，在FcγRIIIa人群中存在单核干多态性(SNP)位点引起的高亲和力FcγRIIIa亚型，分别称为FcγRIIIa_V158和低亲和力FcγRIIIa_F158两个亚型。FcγRI对IgG的Fc区域具有较高的亲和力，参与ADCC过程；FcγRII有FcγRIIa，FcγRIIb和FcγRIIc(亦分别称为CD32a，CD32b，CD32c)三个亚型，其中FcγRIIa具有ADCC活性；FcγRIIa在人群中存在由于单核苷酸突变导致的两种亚型，分别称为FcγRIIa_H131和FcγRIIa_R131；FcγRIIb为抑制性受体，FcγRIIb是典型的抑制性FcγR，可抑制附近的ITAM通路。例如，免疫复合物与BCR结合后，Fc段会结合同一细胞上的FcγRIIb，负性调节B细胞激活，减少抗体、细胞因子的分泌(Hogarth PM,Pietersz GA.2012,NATURE REVIEWS DRUGDISCOVERY,11(4):311-331)。
IgG家族包含四个成员，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，它们重链恒定区的可结晶片段(fragment crystallizable，Fc)区域存在氨基酸的差异，导致它们与FcγRs的亲和力各不相同。IgG1是人体内最多的亚型，也是单抗药物中用的最多的亚型，IgG1能够结合各种FcγRs，能够引发ADCC以及CDC效应。IgG2与FcγRs的亲和力最弱，但是IgG2仍能够通过与FcγRIIa的结合引发单核细胞介导的ADCC。IgG3与FcγRs的结合能力最强，能引发ADCC，且CDC效应比IgG1更强。IgG4分子与FcγRI之外的FcγRs结合较弱，IgG4分子引起CDC和NK细胞介导的ADCC的可能性较低；然而，IgG4亚型抗体可通过与FcγRI的结合介导ADCP效应，靶向于免疫细胞的抗体药物存在ADCP效应可能会导致免疫细胞损伤，具有影响药物药理学负面效应。目前，尚需要开发新的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，以减少或消除抗体介导的ADCC、ADCP和/或CDC活性对抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体所结合的免疫细胞造成的损伤，提高抗体药物药效。
化疗药物目前主要分为下述九类(赫捷等，临床肿瘤学，北京：人民卫生出版社，2016：230-237)第一类为直接与DNA结合，阻止DNA复制的药物，包括各种炕化剂、丝裂霉素和博来霉素、达卡巴嗪、铂类药物如顺铂和卡铂、喜树碱类药物及其衍生物；第二类为阻止核酸生物合成的药物，这类药物主要影响瘤细胞的酶系，使DNA和RNA的前体物合成受阻，从而抑制DNA或RNA形成，主要包括甲氨蝶岭、氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、羟基脲和阿糖胞苷等，主要作用于S期细胞，属抗代谢类化疗药，为周期特异性抗癌药；第三类为影响转录的化疗药物，主要药理作用是插入DNA双螺旋与其形成非共价结合，从而干扰DNA上的遗传信息转录到依赖DNA的mRNA上，导致模报功能受到损害、转录受阻，主要包括。第四类为影晌微管蛋白和有丝分裂的药物主要包括长春碱类、鬼臼毒素类和紫杉醇类等植物药；第五类为影晌核糖体功能，阻止蛋白质合成的药物以二尖杉醋碱类植物药为代表，它能抑制蛋白质合成的起始阶段，使核糖体分解并释出新生肽链，但不能阻止mRNA和tRNA与核糖体的结合这类药可使核DNA和胞质RNA减少、多聚核糖体解聚，并拥制有丝分裂；第六类为影晌细胞膜的药物植物凝集素如刀豆素(Con-A)和植物凝集素(PHA)等可以和细胞膜上的糖蛋白受体结舍，从而影响瘤细胞的DNA合成，阻止瘤细胞分裂；第七类为诱导细胞凋亡(apoptosis)的药物，如三氧化二砷等；第八类为激素类主要通过调节内分泌米治疗肿瘤，包括雌激素类、抗雌激素类、孕激素类、雄激素类、抗雄激素类、肾上腺皮质激素类、抗肾上腺皮质激素类(包括氯苯二氯乙烷和氨鲁米特)；第九类为抗肿瘤靶点治疗，包括单克隆抗体、表皮生长因子信号传导抑制剂(如针对受体型酪氨酸激酶通路的靶向药物)、泛素蛋白酶体抑制剂、血管生成抑制剂等。
西奥罗尼(Chiauranib)是由深圳微芯生物科技股份有限公司开发的一种多靶点多通路选择性激酶抑制剂。西奥罗尼可选择性抑制Aurora B、CSF1R和VEGFR/PDGFR/c-Kit等多个激酶靶点，从而抑制肿瘤细胞增殖、增强抗肿瘤免疫以及抑制肿瘤血管生成，实现多通路机制的抗肿瘤药效。西奥罗尼在前期的临床试验中，针对多线治疗失败的小细胞肺癌(SCLC)患者，相比于历史对照数据，其单药治疗取得了十分积极的疗效结果。中国专利文献(公开号：CN 111728974A)披露了西奥罗尼化合物的结构，为N-(2-氨基苯基)-6-(7-甲氧基喹啉-4-氧)-1-萘酰胺，其结构式如下面的式I所示。
然而，很多肿瘤患者在接受化疗药物治疗后疾病仍无法得到长期控制，5年生存率仍然很低。因此，开发更低毒性、更有效的治疗手段或者联合给药治疗方案具有巨大的临床意义。
发明内容
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，创造性地将抗CTLA4-抗PD-1抗体与西奥罗尼适当地联用，得到的药物组合具有良好的抗肿瘤效果。
由此提供了下述发明：
本发明的一个方面涉及一种药物组合，其包含西奥罗尼或其可药用盐(例如盐酸盐)或其晶型(例如非溶剂化晶型A、B或C)，以及至少一种(例如1种、2种或3种)抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述西奥罗尼或其可药用盐或其晶型与所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的质量比为1：(1-1000)，优选为1：(5-500)，更优选为1：(10-100)。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述西奥罗尼或其可药用盐或其晶型与所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的质量比为1：(5-1000)，优选为1：(10-500)，更优选为1：(10-100)、1：(10-150)、1：(10-200)、1：(10-250)、1：(10-300)、1：(10-350)、1：(10-400)或1：(10-450)。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的单位剂量为100mg-1000mg、200mg-800mg、200mg-500mg、300mg-600mg、400mg-500mg或者450mg。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述西奥罗尼或其可药用盐或其晶型的单位剂量为0.1mg-100mg、0.5mg-50mg、1mg-20mg、2mg-15mg、3mg-12mg、4mg-8mg或者5mg。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，
所述药物组合为固定组合，例如为药物组合物；或者
所述药物组合是非固定组合，例如所述非固定组合中的西奥罗尼或其可药用盐或其晶型、抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体各自存在于独立的药物组合物中。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合物，其中，所述药物组合物独立地为固体药物组合物或液体药物组合物。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料，例如载体和/或赋形剂。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述药物组合物不包含除了西奥罗尼或其可药用盐或其晶型和抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体其它活性药物成分。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
其中：
所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；
或者，
所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；
所述免疫球蛋白均为人IgG1亚型；
并且按照EU编号系统(EU numbering system)，所述免疫球蛋白的重链恒定区在第234位点、235位点和237位点中的任意2个位点或3个位点发生突变，并且突变后，双特异性抗体与FcγRIIIa和/或C1q的亲和力常数相比突变前降低；优选地，所述亲和力常数通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，发生上述突变后，双特异性抗体与FcγRIIIa、FcγRI、FcγRIIa_H131、FcγRIIIa_V158和/或FcγRIIb的亲和力常数相比突变前降低；优选地，所述亲和力常数通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有如下突变：
L234A和L235A；或者
L234A和G237A；或者
L235A和G237A；
或者
L234A、L235A、G237A。
本发明中，如果没有特别说明，位点之前的字母表示突变前的氨基酸，位点之后的字母表示突变后的氨基酸。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
其中：
所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；
或者，
所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；
所述免疫球蛋白均为人IgG1亚型；
并且按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有如下突变组合之一：
L234A和L235A；或者
L234A和G237A；或者
L235A和G237A；或者
L234A、L235A、G237A。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区还具有选自如下的一个或多个突变：
N297A、D265A、D270A、P238D、L328E、E233D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、P331S、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A、T394D、G236R、G236A、L328R、A330S、P331S、H268A、E318A和K320A。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其为IgG-scFv形式即Morrison模式。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:18；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:20；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44；
或者，
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQID NO:10、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:18；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:20。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其选自如下的(1)－(20)中的任一项：
(1)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:4所示；
(2)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:8所示；
(3)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:12所示；
(4)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:4所示；
(5)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:8所示；
(6)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:12所示；
(7)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:16所示；
(8)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:20所示；
(9)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:16所示；
(10)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:20所示；
(11)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:16所示；
(12)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:20所示；
(13)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:42所示；
(14)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:44所示；
(15)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:42所示；
(16)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:44所示；
(17)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:42所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:16所示；
(18)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:16所示；
(19)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:42所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:20所示；
以及，
(20)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:20所示。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体：
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示，并且其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段以大于大约10-7M，例如大于大约10-6M、10-5M、10-4M或10-3M或更大的亲和力常数结合FcγRIIIa_F158、FcγRI、FcγRIIa_H131、FcγRIIIa_V158和/或FcγRIIb；优选地，所述亲和力常数通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得；
优选地，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段与FcγRIIIa_F158、FcγRI、FcγRIIa_H131、FcγRIIIa_V158和/或FcγRIIb没有结合信号或者结合信号小于0.1nm；优选地，所述结合信号是指通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得的响应值。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段以大于大约10-9M，例如大于大约10-8M、10-7M、10-6M或10-5M或更大的亲和力常数结合C1q；优选地，所述亲和力常数通过FortebioOctet分子相互作用仪测得；
优选地，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段与C1q没有结合信号或者结合信号小于0.1nm；优选地，所述结合信号是指通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得的响应值。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接；和/或所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区直接连接或者通过连接片段连接。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述连接片段为(GGGGS)n，n为正整数；优选地，n为1、2、3、4、5或6。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区为1个，和第二蛋白功能区为2个。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述单链抗体连接在免疫球蛋白的重链的C末端。由于免疫球蛋白由两条重链，因此，一个免疫球蛋白分子连接有两个单链抗体分子。优选地，两个单链抗体分子相同。优选地，所述单链抗体通过前述连接片段与免疫球蛋白的重链的C末端形成酰胺键连接。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述免疫球蛋白的恒定区是人源化的，例如，重链恒定区均采用Ig gamma-1chain C region，ACCESSION:P01857；轻链恒定区均采用Igkappa chain C region，ACCESSION:P01834。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体以小于大约10-5M，例如小于大约10-6M、10-7M、10-8M、10-9M或10-10M或更小的KD结合CTLA4蛋白和/或PD-1蛋白。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药物组合，其中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体为单克隆抗体。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药物组合，其中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体为人源化抗体。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述单链抗体连接在免疫球蛋白的重链的C末端。
在本发明的一些实施方式中，所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
所述第一蛋白功能区为1个，所述第二蛋白功能区为2个；
其中，所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示，并且其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；
所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示；
所述单链抗体连接在免疫球蛋白的重链的C末端；
所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区通过第一连接片段连接；并且所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区通过第二连接片段连接；所述第一连接片段和所述第二连接片段相同或不同；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列独立地选自SEQ IDNO:25和SEQ ID NO:26；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列均如SEQ ID NO:26所示。
本发明的另一方面涉及一种药盒产品，其包含本发明中任一项所述的药物组合，以及产品说明书。
在本发明的一些实施方式中，所述的药盒产品，其包含独立包装的第一产品和第二产品，
其中，
所述第一产品包含本发明中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体；
所述第二产品包含西奥罗尼或其药学上可接受的盐(例如盐酸盐)或其晶型(例如非溶剂化晶型A、B或C)；
优选地，所述第一产品和所述第二产品还独立地包含一种或多种药学上可接受的辅料；
优选地，所述药盒产品还包含产品说明书。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药盒产品，其中，所述第一产品的单位剂量，按照其中的所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的质量计算，为100mg-1000mg、200mg-800mg、200mg-500mg、300mg-600mg、400mg-500mg或者450mg。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药盒产品，其中，所述第二产品的单位剂量，按照其中的西奥罗尼或其可药用盐或其晶型的质量计算，为0.1mg-100mg、0.5mg-50mg、0.5mg-10mg、1mg-10mg、2mg-8mg或者1mg-5mg或者5mg。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述的药盒产品，其中，所述第二产品的单位剂量，按照其中的西奥罗尼或其可药用盐或其晶型的质量计算，为1mg-20mg、2mg-15mg、3mg-12mg、4mg-8mg或者5mg。
本发明的再一方面涉及本发明中任一项所述的药物组合在制备治疗或预防肿瘤的药物中的用途；
优选地，所述肿瘤选自黑色素瘤、肾肿瘤、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、白血病、乳腺癌、间皮瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、淋巴瘤、胰腺癌和鼻咽癌中的一种或多种；
优选地，所述肺癌选自非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌和肺鳞癌中的一种或多种；
优选地，所述胃癌为胃腺癌或食管结合部腺癌；
优选地，所述肿瘤为具有MSI-H/dMMR表型的实体瘤；优选地，所述肿瘤选自具有MSI-H/dMMR表型的下述肿瘤中的一种或多种：
结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、间皮瘤、肉瘤、肾上腺皮质癌、恶性黑色素瘤和卵巢生殖细胞肿瘤。
MSI(microsatellite instability)是微卫星不稳定性。微卫星(Microsatellite)是遍布于人类基因组中的短串联重复序列,有单核苷酸、双核苷酸或高位核苷酸的重复，重复次数10-50次。与正常细胞相比，某些异常组织细胞，如肿瘤，内的微卫星由于重复单位的插入或缺失而导致微卫星长度的改变，就叫做MSI。根据MSI不稳定性和程度，可分为微卫星高度不稳定型(MSI-H)、微卫星低度不稳定型(MSI-L)和微卫星稳定型(MSS)。造成MSI的主要原因是DNA错配修复(mismatch repair，MMR)功能缺陷。人类错配修复基因(MMR基因)经转录翻译后可表达相应的错配修复蛋白，如果任一MMR蛋白表达缺失可造成细胞的错配修复功能缺陷，则对DNA复制过程中的碱基错配丧失修复功能而造成累积，导致微卫星不稳定(MSI)的发生，约15％的结直肠癌是经由MSI途径引发的。最早发现于结直肠癌，也可发生于胃癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质肿瘤等(Baretti M等人.PharmacolTher.2018；189:45-62.)，后续研究在间皮瘤、肉瘤、肾上腺皮质癌、恶性黑色素瘤和卵巢生殖细胞肿瘤中亦发现MSI-H/dMMR特征。
MSI-H和dMMR代表两种不同检测方法所产生的结果，dMMR与MSI-H在生物学上具有一致性，称为MSI-H/dMMR或者MSI-high/dMMR，MSI-L和MSS则是MMR正常(proficientmismatch repair，pMMR)的表型。dMMR检测方法为基于肿瘤标本(包括手术标本、穿刺标本)进行MSH2、MLH1、MSH6以及PMS2四个错配基因的免疫组化蛋白检测，若四个蛋白里面任何一个蛋白表达缺失则为dMMR；如四个蛋白均为阳性表达则肿瘤为pMMR，即错配修复功能完整。MSI的检测为肿瘤细胞和体细胞重复DNA序列(微卫星序列)的长度进行一一配对检测，并比较长度。当使用PCR方法并基于美国NCI标准检测5个标准位点时，如果其中有两个或两个以上位点不一致则为不稳定，定义为MSI-H，如果一个位点不一致则称为MSI-L(微卫星低度不稳定)，如5个位点均一致则为MSS。高通量测序(High-throughput sequencing)(或称下一代测序，Next-generation sequencing technology，NGS)亦可作为检测微卫星不稳定性的方法。当选用更多的微卫星位点，如多于5个或者其他一些微卫星位点，进行PCR检测时，通常≥30％的位点不一致就叫MSI-H，所有位点都一致就定义为MSS，在0到30％之间是MSI-L。
根据本发明中任一项所述的药物组合，其用于治疗或预防肿瘤；
优选地，所述肿瘤选自黑色素瘤、肾肿瘤、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、白血病、乳腺癌、间皮瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、淋巴瘤、胰腺癌和鼻咽癌中的一种或多种；
优选地，所述肺癌选自非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌和肺鳞癌中的一种或多种；
优选地，所述胃癌为胃腺癌或食管结合部腺癌；
优选地，所述肿瘤为具有MSI-H/dMMR表型的实体瘤；优选地，所述肿瘤选自具有MSI-H/dMMR表型的下述肿瘤中的一种或多种：
结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、间皮瘤、肉瘤、肾上腺皮质癌、恶性黑色素瘤和卵巢生殖细胞肿瘤。
本发明的再一方面涉及一种治疗或预防肿瘤的方法，包括给予有需求的受试者以有效量的本发明中任一项所述的药物组合的步骤；
优选地，所述肿瘤选自黑色素瘤、肾肿瘤、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、白血病、乳腺癌、间皮瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、淋巴瘤、胰腺癌和鼻咽癌中的一种或多种；
优选地，所述肺癌选自非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌和肺鳞癌中的一种或多种；
优选地，所述胃癌为胃腺癌或食管结合部腺癌；
优选地，所述肿瘤为具有MSI-H/dMMR表型的实体瘤；优选地，所述肿瘤选自具有MSI-H/dMMR表型的下述肿瘤中的一种或多种：
结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、间皮瘤、肉瘤、肾上腺皮质癌、恶性黑色素瘤和卵巢生殖细胞肿瘤。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的治疗或预防肿瘤的方法，其中，所述给予有需求的受试者以有效量的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的步骤为在手术治疗之前或之后，和/或在放射治疗之前或之后。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的治疗或预防肿瘤的方法，其中，
抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的单次给药剂量为每千克体重0.1-100mg，优选1-10mg(例如1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg或10mg)；或者，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的单次给药剂量为每位受试者10-1000mg(例如大约100mg、大约150mg、大约200mg、大约250mg、大约300mg、大约350mg、大约400mg、大约450mg、大约500mg、大约600mg、大约700mg、大约800mg、大约900mg或大约1000mg)，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg或200mg；
优选地，每3天、4天、5天、6天、10天、1周、2周或3周给药一次；
优选地，给药方式为静脉滴注或静脉注射。
在一些方案中，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的施用治疗以2周(14天)或3周(21天)为一个周期，优选在每个周期第一天(D1)静脉给予抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体。例如，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体以每两周一次(q2w)或者每三周一次(q3w)的频率施用。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述的治疗或预防肿瘤的方法，其中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体和西奥罗尼同时或顺序施用。
抗体治疗药物，特别是单克隆抗体(mAB)已在多种疾病的治疗中取得了良好的疗效。获取这些治疗性抗体的传统实验方法是采用抗原免疫动物，在免疫动物体内获取靶向抗原的抗体，或通过亲和力成熟的方法来改进那些与抗原的亲和力较低的抗体。
轻链和重链的可变区决定抗原的结合；每条链的可变区均含有三个高变区，称互补决定区(CDR)(重链(H)的CDR包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，轻链(L)的CDR包含LCDR1、LCDR2、LCDR3；其由Kabat等人命名，见Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition(1991),第1-3卷,NIH Publication 91-3242,Bethesda Md)。
通过本领域技术人员所熟知的技术手段，例如通过VBASE2数据库分析下面的(1)-(13)项中的单克隆抗体序列的CDR区的氨基酸序列，结果如下：
(1)14C12
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:16所示。
其重链可变区的3个CDR区的氨基酸序列如下：
HCDR1:GFAFSSYD(SEQ ID NO:27)
HCDR2:ISGGGRYT(SEQ ID NO:28)
HCDR3:ANRYGEAWFAY(SEQ ID NO:29)
其轻链可变区的3个CDR区的氨基酸序列如下：
LCDR1:QDINTY(SEQ ID NO:30)
LCDR2:RAN(SEQ ID NO:31)
LCDR3:LQYDEFPLT(SEQ ID NO:32)
(2)14C12H1L1
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:20所示。
其重链可变区的3个CDR区的氨基酸序列与14C12相同。
其轻链可变区的3个CDR区的氨基酸序列与14C12相同。
(3)4G10
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:4所示；
其重链可变区的3个CDR区的氨基酸序列如下：
HCDR1:GYSFTGYT(SEQ ID NO:33)
HCDR2:INPYNNIT(SEQ ID NO:34)
HCDR3:ARLDYRSY(SEQ ID NO:35)
其轻链可变区的3个CDR区的氨基酸序列如下：
LCDR1:TGAVTTSNF(SEQ ID NO:36)
LCDR2:GTN(SEQ ID NO:37)
LCDR3:ALWYSNHWV(SEQ ID NO:38)
(4)4G10H1L1
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:8所示；
其重链可变区的3个CDR区的氨基酸序列与4G10相同。
其轻链可变区的3个CDR区的氨基酸序列与4G10相同。
(5)4G10H3L3
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:12所示；
其重链可变区的3个CDR区的氨基酸序列与4G10相同。
其轻链可变区的3个CDR区的氨基酸序列与4G10相同。
(6)BiAb001(M)
其重链可变区涉及的9个CDR区的氨基酸序列如下：
HCDR1:GFAFSSYD(SEQ ID NO:27)
HCDR2:ISGGGRYT(SEQ ID NO:28)
HCDR3:ANRYGEAWFAY(SEQ ID NO:29)
HCDR4:GYSFTGYT(SEQ ID NO:33)
HCDR5:INPYNNIT(SEQ ID NO:34)
HCDR6:ARLDYRSY(SEQ ID NO:35)
HCDR7:TGAVTTSNF(SEQ ID NO:36)
HCDR8:GTN(SEQ ID NO:37)
HCDR9:ALWYSNHWV(SEQ ID NO:38)
其轻链可变区涉及的3个CDR区的氨基酸序列如下：
LCDR1:QDINTY(SEQ ID NO:30)
LCDR2:RAN(SEQ ID NO:31)
LCDR3:LQYDEFPLT(SEQ ID NO:32)
(7)BiAb002(M)
其重链可变区涉及的9个CDR区的氨基酸序列与BiAb001(M)相同。
其轻链可变区涉及的3个CDR区的氨基酸序列与BiAb001(M)相同。
(8)BiAb003(M)
其重链可变区涉及的9个CDR区的氨基酸序列与BiAb001(M)相同。
其轻链可变区涉及的3个CDR区的氨基酸序列与BiAb001(M)相同。
(9)BiAb004(M)
其重链可变区涉及的9个CDR区的氨基酸序列与BiAb001(M)相同。
其轻链可变区涉及的3个CDR区的氨基酸序列与BiAb001(M)相同。
本发明的抗体BiAb004(hG1TM)在BiAb004(M)非可变区引入氨基酸突变。按照EU编号系统在234、235和237位点引入氨基酸突变：
通过在其重链铰链区域第234号位点引进了亮氨酸到丙氨酸的点突变(L234A)，第235号位点引进了亮氨酸到丙氨酸的点突变(L235A)，第237号位点引进了甘氨酸到丙氨酸的点突变(G237A)获得BiAb004(hG1TM)。
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
如本文中所使用的，当提及CTLA4蛋白(Cytotoxic T-Lymphocyte associatedAntigen 4)的氨基酸序列时，其包括但不限于CTLA4蛋白的全长，或者CTLA4的胞外片段CTLA4ECD或者包含CTLA4ECD的片段；还包括CTLA4ECD的融合蛋白，例如与小鼠或人IgG的Fc蛋白片段(mFc或hFc)进行融合的片段。然而，本领域技术人员理解，在CTLA4蛋白的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本发明中，术语“CTLA4蛋白”应包括所有此类序列，包括其天然或人工的变体。并且，当描述CTLA4蛋白的序列片段时，其还包括其天然或人工变体中的相应序列片段。
如本文中所使用的，当提及PD-1蛋白的氨基酸序列时，其包括但不限于PD-1蛋白(NCBI GenBank:NM_005018)的全长，或者PD-1的胞外片段PD-1ECD或者包含PD-1ECD的片段；还包括PD-1ECD的融合蛋白，例如与小鼠或人IgG的Fc蛋白片段(mFc或hFc)进行融合的片段。然而，本领域技术人员理解，在PD-1蛋白的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本发明中，术语“添加)，蛋白”应包括所有此类序列，包括其天然或人工的变体。并且，当描述PD-1蛋白的序列片段时，其还包括其天然或人工变体中的相应序列片段。
如本文中所使用的，如果没有特别说明，所述B7为B7-1和/或B7-2；其具体蛋白序列为现有技术中已知序列，可以参考现有文献或者GenBank中公开的序列。例如，B7-1(CD80,NCBI Gene ID:941)；B7-2(CD86,NCBI Gene ID:942)。
如本文中所使用的，术语EC50是指半数最大效应浓度(concentration for 50％ofmaximal effect)，是指能引起50％最大效应的浓度。
如本文中所使用的，术语“抗体”是指，是指通常由两对多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。从一般意义上，重链可以理解为抗体中分子量较大的多肽链，轻链是指抗体中分子量较小的多肽链。轻链可分类为κ和λ轻链。重链通常可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“基酸区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“基酸区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循Kabat Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987and 1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人(1989)Nature 342:878-883的定义。特别地，重链还可以包含3个以上CDR，例如6、9、或12个。例如在本发明的双功能抗体中，重链可以是IgG抗体的重链的C端连接另一个抗体的scFv，这种情况下重链含有9个CDR。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。
在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。
如本文中所使用的，术语“单抗”和“单克隆抗体”是指，来自一群高度同源的抗体分子中的一个抗体或抗体的一个片断，也即除可能自发出现的自然突变外，一群完全相同的抗体分子。单抗对抗原上的单一表位具有高特异性。多克隆抗体是相对于单克隆抗体而言的，其通常包含至少2种或更多种的不同抗体，这些不同的抗体通常识别抗原上的不同表位。单克隆抗体通常可采用Kohler等首次报道的杂交瘤技术获得(Kohler et al.,Nature,256:495,1975)，但也可采用重组DNA技术获得(如参见U.S.Patent 4,816,567)。
如本文中所使用的，术语“人源化抗体”是指，人源免疫球蛋白(受体抗体)的全部或部分CDR区被一非人源抗体(供体抗体)的CDR区替换后得到的抗体或抗体片段，其中的供体抗体可以是具有预期特异性、亲和性或反应性的非人源(例如，小鼠、大鼠或兔)抗体。此外，受体抗体的构架区(FR)的一些氨基酸残基也可被相应的非人源抗体的氨基酸残基替换，或被其他抗体的氨基酸残基替换，以进一步完善或优化抗体的性能。关于人源化抗体的更多详细内容，可参见例如，Jones et al.,Nature,321:522 525(1986)；Reichmann etal.,Nature,332:323 329(1988)；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593 596(1992)；和Clark,Immunol.Today 21:397 402(2000)。
如本文中所使用的，术语“表位”是指，抗原上被免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位。“表位”在本领域内也称为“抗原决定簇”。表位或抗原决定簇通常由分子的化学活性表面基团例如氨基酸或碳水化合物或糖侧链组成并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。例如，表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个连续或非连续的氨基酸，其可以是“线性的”或“构象的”。参见，例如，EpitopeMapping Protocols in Methods in Molecular Biology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。在线性表位中，蛋白质与相互作用分子(例如抗体)之间的所有相互作用的点沿着蛋白质的一级氨基酸序列线性存在。在构象表位中，相互作用的点跨越彼此分开的蛋白质氨基酸残基而存在。
如本文中所使用的，术语“分离的”或“被分离的”指的是，从天然状态下经人工手段获得的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的高纯度的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”或“被分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。
如本文中所使用的，术语“大肠杆菌表达系统”是指由大肠杆菌(菌株)与载体组成的表达系统，其中大肠杆菌(菌株)来源于市场上可得到的菌株，例如但不限于：GI698,ER2566,BL21(DE3),B834(DE3),BLR(DE3)。
如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。
如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa细胞，BHK细胞，HEK 293细胞或人细胞等的动物细胞。
如本文中使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。在某些实施方式中，特异性结合某抗原的抗体(或对某抗原具有特异性的抗体)是指，抗体以小于大约10-5M，例如小于大约10-6M、10-7M、10-8M、10-9M或10-10M或更小的亲和力(KD)结合该抗原。在本发明的一些实施方案中，术语“靶向”是指特异性结合。
如本文中所使用的，术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体-抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。通常，抗体以小于大约10-5M，例如小于大约10-6M、10-7M、10-8M、10- 9M或10-10M或更小的解离平衡常数(KD)结合抗原，例如，如使用表面等离子体共振术(SPR)在BIACORE仪中测得，或通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得。
如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”和“单抗”具有相同的含义且可互换使用；术语“多克隆抗体”和“多抗”具有相同的含义且可互换使用；术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用A或Ala表示。
如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences.Edited by Gennaro AR,19thed.Pennsylvania:Mack Publishing Company,1995)，并且包括但不限于：pH调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂。例如，pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液；表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如Tween-80；离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。
如本文中所使用的，术语“佐剂”是指非特异性免疫增强剂，当其与抗原一起或预先递送入机体时，其可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂有很多种，包括但不限于铝佐剂(例如氢氧化铝)、弗氏佐剂(例如完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂)、短小棒状杆菌、脂多糖、细胞因子等。弗氏佐剂是目前动物试验中最常用的佐剂。氢氧化铝佐剂则在临床实验中使用较多。
如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病(例如CTLA4与B7结合或者CTLA4活性过高相关的疾病如肿瘤)有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病(例如CTLA4与B7结合或者CTLA4活性过高相关的疾病如肿瘤)的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。
“复发性”癌症是在对初始治疗(例如手术)产生应答后，在初始部位或远处部位再生的癌症。“局部复发性”癌症是在治疗后，在与先前治疗的癌症相同的位置出现的癌症。
“转移性”癌症是指从身体的一部分(例如肺部)扩散到身体的另一部分的癌症。
如本文中所使用的，术语“完全消除”是指通过现有的仪器设备(例如FortebioOctet分子相互作用仪)检测显示没有结合信号或结合信号极低。在本发明的一个实施方案中，没有结合信号或结合信号极低是指结合信号(即响应值或Response)低于0.1nm。
在本发明中，如果没有特别说明，所述“第一”(例如第一蛋白功能区、第一连接片段或者第一产品)和“第二”(例如第二蛋白功能区、第二连接片段或者第二产品)是为了指代上的区分或表述上的清楚，并不具有典型的次序上的含义。
本发明中，如果没有特别说明，“大约”或者“约”是指在所修饰的数值或者物理量的10％、20％或30％的范围内上下浮动，例如，大约100分钟或约100分钟，可以是90分钟-110分钟、80分钟-120分钟或者70分钟-130分钟。
西奥罗尼的晶型包括但不限于非溶剂化晶型A、非溶剂化晶型B和非溶剂化晶型C，参照中国专利授权CN 107868044B中的记载，其中：
所述非溶剂化晶型A的X-射线粉末衍射图在反射角2θ为6.88°、9.26°、12.74°、13.82°、18.58°、20.86°和25.72°处有特征峰；
所述非溶剂化晶型B的X-射线粉末衍射图在反射角2θ为4.88°、9.68°、12.74°、14.52°、17.72°、24.30°、25.26°处具有特征峰；
所述非溶剂化晶型C的X-射线粉末衍射图在反射角2θ为4.84°、9.68°、12.92°、14.60°、16.46°、17.44°、22.00°、25.28°处具有特征峰。
发明的有益效果
本发明实现了如下的(1)至(2)项中所述技术效果中的一项或多项：
(1)本发明的药物组合具有良好的治疗或预防肿瘤的效果。
(2)本发明的药物组合中，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体与西奥罗尼具有协同作用，取得了治疗或预防肿瘤协同效果；其中所述肿瘤包括但不限于：黑色素瘤、肾肿瘤、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、白血病、乳腺癌、间皮瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、淋巴瘤、胰腺癌或鼻咽癌；优选地，所述肺癌为非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌或肺鳞癌；优选地，所述胃癌为胃腺癌或食管结合部腺癌。
附图说明
图1：BiAb004(hG1TM)与FcγRI的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为50nM，25nM，12.5nM，6.25nM，3.12nM。
图2：BiAb004(hG1WT)FcγRI的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为50nM，25nM，12.5nM，6.25nM，3.12nM。
图3：BiAb004(hG1TM)与FcγRIIIa_V158的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为500nM，250nM，125nM，62.5nM，31.25nM。
图4：BiAb004(hG1WT)与FcγRIIIa_V158的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为500nM，250nM，125nM，62.5nM，31.25nM。
图5：BiAb004(hG1TM)与FcγRIIIa_F158的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为500nM，250nM，125nM，62.5nM，31.25nM。
图6：BiAb004(hG1WT)与FcγRIIIa_F158的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为500nM，250nM，125nM，62.5nM，31.25nM。
图7：BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_H131的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM。
图8：BiAb004(hG1WT)与FcγRIIa_H131的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM。
图9：BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_R131的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM。
图10：BiAb004(hG1WT)与FcγRIIa_R131的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM。
图11：BiAb004(hG1TM)与FcγRIIb的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM。
图12：BiAb004(hG1WT)与FcγRIIb的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM。
图13：BiAb004(hG1TM)与C1q的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗体的浓度分别为20nM，10nM，5nM，2.5nM，1.25nM。
图14：BiAb004(hG1WT)与C1q的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗原的浓度分别为20nM，10nM，5nM，2.5nM，1.25nM。
图15：5C10H2L2-IgG1mt与C1q的亲和力常数检测结果图。图中从上到下的每对曲线中加入抗原的浓度分别为20nM、10nM、5nM、2.5nM、1.25nM。
图16：BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)对表达CTLA-4和PD-1抗原的293T-CTLA4-PD1细胞的ADCC活性检测。
图17：BiAb004(hG1TM)联用西奥罗尼诱导混合淋巴细胞分泌IFN-γ结果图。
图18：BiAb004(hG1TM)联用西奥罗尼诱导混合淋巴细胞分泌IL-2结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，为可以通过市场购买获得的常规产品。
在本发明的下述实施例中：
BALB/c小鼠购自广东省医学实验动物中心。
人外周血单核细胞均为在中山康方生物医药有限公司分离制备，且经提供者知情同意。
Raji-PDL1为中山康方生物医药有限公司基于人B细胞系细胞Raji细胞通过转染构建的表达有人PD-L1的细胞。
Ficoll-PaqueTM PLUS(或Ficoll-Paque PLUS)购自GE Healthcare。
Human IL-2ELISA Kit购自达科为生物技术股份有限公司。
RPMI 1640培养基、DMEM培养基、Trypsin-EDTA(0.25％)phenol red、Blasticidin均来源于Gibco。
FBS来源于Excell bio。
同型对照抗体为人抗鸡蛋溶酶体抗体(human anti-Hen Egg Lysozyme IgG，即anti-HEL抗体，或者human IgG，简称hIgG)的序列来自于Acierno等人发表的Affinitymaturation increases the stability and plasticity of the Fv domain of anti-protein antibodies中Fab F10.6.6序列的可变区序列(Acierno等人.J Mol Biol.2007；374(1):130-146.)。
在本发明的下述实施例中，使用的西奥罗尼来自深圳微芯生物科技股份有限公司。
制备例1：抗CTLA4的抗体的序列设计
抗CTLA4的抗体4G10及其人源化抗体4G10H1L1、4G10H3L3的重链和轻链的氨基酸序列、以及编码核酸序列分别与中国专利公开CN 106967172A中的4G10、4G10H1L1、4G10H3L3相同。
(1)4G10的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区的核酸序列：(372bp)
CAGGTCAAGCTGCAGGAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGAGCTTCAATGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACTCATTCACTGGCTACACCATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAACCTTGAATGGATTGGACTTATTAATCCTTACAATAATATTACTAACTACAACCAGAAGTTCATGGGCAAGGCCACATTTACTGTAGACAAGTCATCCAGCACAGCCTACATGGAACTCCTCAGACTGACATCTGAAGACTCTGGAGTCTATTTCTGTGCAAGACTCGACTATAGGTCTTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTAT(SEQ ID NO:1)
其编码的氨基酸序列：(124aa)
QVKLQESGPELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSSSTAYMELLRLTSEDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVY(SEQ ID NO:2)
轻链可变区的核酸序列：(378bp)
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTTTGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTAGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAGGCCAGCCCAAGTCTTCGCCATCAGTCACCCTGTTTCAAGGGCAATTCTGC(SEQ ID NO:3)
其编码的氨基酸序列：(126aa)
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNFANWVQEKPDHLFTSLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVLGQPKSSPSVTLFQGQFC(SEQ ID NO:4)
(2)人源化单克隆抗体4G10H1L1的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区(4G10H1V)的核酸序列：(345bp)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCTCCATGAAGATCTCTTGCAAGGCCAGCGGATACAGTTTCACTGGCTATACCATGAACTGGGTCAAACAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATCGGGCTGATTAATCCTTACAACAACATCACCAACTACAACCAGAAGTTCATGGGAAAAGCAACCTTTACAGTGGACAAGAGCATTTCCACAGCCTACATGGAACTGAGCCGGCTGACTTCAGACGATAGCGGGGTCTATTTTTGTGCAAGGCTGGATTATCGCTCTTACTGGGGGCAGGGAACTCTGGTCACTGTCTCCGCT(SEQ ID NO:5)
其编码的氨基酸序列：(115aa)
QVQLVESGAELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQ APGQGLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSISTAYMEL SRLTSDDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:6)轻链可变区(4G10L1V)的核酸序列：(327bp)
CAGGCTGTCGTCACTCAGGAACCTTCACTGACTGTGAGCCCAGGAGGAACTGTCACCCTGACATGCGGAAGCTCCACCGGAGCAGTGACCACATCCAACTTCGCCAATTGGGTCCAGGAAAAGCCAGGCCAGGCATTTCGATCCCTGATCGGAGGCACAAACAATCGGGCTTCTTGGGTGCCCGCAAGATTCTCAGGAAGCCTGCTGGGGGGAAAAGCCGCTCTGACCATTAGTGGCGCTCAGCCTGAGGACGAAGCCGAGTACTTCTGCGCTCTGTGGTATAGCAACCACTGGGTGTTTGGCGGGGGAACAAAGCTGACTGTGCTG(SEQ ID NO:7)
其编码的氨基酸序列：(109aa)
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFANWVQE KPGQAFRSLIGGTNNRASWVPARFSGSLLGGKAALTISGAQPED EAEYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO:8)
(3)人源化单克隆抗体4G10H3L3的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区(4G10H3V)的核酸序列：(345bp)
CAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGCCGAAGTGAAGAAACCCGGCGCCTCAGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCAGCGGGTACAGTTTCACTGGATATACCATGAACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCCAGGGGCTGGAGTGGATCGGCCTGATTAACCCTTACAACAACATCACTAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGGAGAGTGACCTTTACAGTGGACACCAGCATTTCCACAGCCTACATGGAACTGTCCCGGCTGAGATCTGACGATACAGGCGTGTACTTCTGCGCTAGGCTGGATTACCGCAGCTATTGGGGACAGGGCACACTGGTGACTGTCAGCGCA(SEQ ID NO:9)
其编码的氨基酸序列(4G10H3V)：(115aa)
QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQ APGQGLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMEL SRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:10)轻链可变区(4G10L3V)的核酸序列：(327bp)
CAGGCTGTCGTCACTCAGGAACCTTCACTGACCGTGTCTCCTGGCGGGACTGTCACCCTGACATGCGGCAGCTCCACAGGGGCCGTGACCACAAGTAACTTCCCAAATTGGGTCCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCCCGGAGTCTGATCGGAGGCACCAACAACAAGGCCAGCTGGACACCCGCACGGTTCAGCGGCAGCCTGCTGGGCGGCAAGGCCGCTCTGACAATTAGCGGAGCCCAGCCTGAGGACGAAGCCGAGTACTATTGCGCTCTGTGGTACTCCAACCACTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACTGTGCTG(SEQ ID NO:11)
其编码的氨基酸序列(4G10L3V)：(109aa)
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQ KPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPED EAEYYCALWYSNHWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO:12)
制备例2：抗PD-1的抗体14C12及其人源化抗体14C12H1L1的序列设计
抗PD-1的抗体14C12及其人源化抗体14C12H1L1的重链和轻链的氨基酸序列、以及编码核酸序列分别与中国专利公开CN106967172A中的14C12、14C12H1L1相同。
(1)14C12的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区的核酸序列：(354bp)
GAGGTCAAACTGGTGGAGAGCGGCGGCGGGCTGGTGAAGCCCGGCGGGTCACTGAAACTGAGCTGCGCCGCTTCCGGCTTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCATGGGTGAGGCAGACCCCTGAGAAGCGCCTGGAATGGGTCGCTACTATCAGCGGAGGCGGGCGATACACCTACTATCCTGACTCTGTCAAAGGGAGATTCACAATTAGTCGGGATAACGCCAGAAATACTCTGTATCTGCAGATGTCTAGTCTGCGGTCCGAGGATACAGCTCTGTACTATTGTGCAAACCGGTACGGCGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACAGTCTCTGCC(SEQ ID NO:13)
其编码的氨基酸序列：(118aa)
EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSSYDMSWVRQT PEKRLEWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNARNTLYLQM SSLRSEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:14)
轻链可变区的核酸序列：(321bp)
GACATTAAGATGACACAGTCCCCTTCCTCAATGTACGCTAGCCTGGGCGAGCGAGTGACCTTCACATGCAAAGCATCCCAGGACATCAACACATACCTGTCTTGGTTTCAGCAGAAGCCAGGCAAAAGCCCCAAGACCCTGATCTACCGGGCCAATAGACTGGTGGACGGGGTCCCCAGCAGATTCTCCGGATCTGGCAGTGGGCAGGATTACTCCCTGACCATCAGCTCCCTGGAGTATGAAGACATGGGCATCTACTATTGCCTGCAGTATGATGAGTTCCCTCTGACCTTTGGAGCAGGCACAAAACTGGAACTGAAG(SEQ ID NO:15)
其编码的氨基酸序列：(107aa)
DIKMTQSPSSMYASLGERVTFTCKASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:16)
(2)人源化单克隆抗体14C12H1L1的重链可变区序列和轻链可变区序列、重链序列和轻链序列
重链可变区的核酸序列：(354bp)
GAAGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGGCTGGTGCAGCCCGGCGGGTCACTGCGACTGAGCTGCGCAGCTTCCGGATTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCCTGGGTGCGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGATTGGGTCGCTACTATCTCAGGAGGCGGGAGATACACCTACTATCCTGACAGCGTCAAGGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGTAAGAACAATCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACCGCACTGTACTATTGTGCCAACCGCTACGGGGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGGCAGGGAACCCTGGTGACAGTCTCTAGT(SEQ ID NO:17)
其编码的氨基酸序列：(118aa)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:18)
轻链可变区的核酸序列：(321bp)
GACATTCAGATGACTCAGAGCCCCTCCTCCATGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGGGTCACCTTCACATGCCGCGCTAGTCAGGATATCAACACCTACCTGAGCTGGTTTCAGCAGAAGCCAGGGAAAAGCCCCAAGACACTGATCTACCGGGCTAATAGACTGGTGTCTGGAGTCCCAAGTCGGTTCAGTGGCTCAGGGAGCGGACAGGACTACACTCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAGGACATGGCAACCTACTATTGCCTGCAGTATGATGAGTTCCCACTGACCTTTGGCGCCGGGACAAAACTGGAGCTGAAG(SEQ ID NO:19)其编码的氨基酸序列：(107aa)
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPG KSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATY YCLQYDEFPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:20)
14C12H1L1重链(14C12H1)的DNA序列：(1344bp)
GAAGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGGCTGGTGCAGCCCGGCGGGTCACTGCGACTGAGCTGCGCAGCTTCCGGATTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCCTGGGTGCGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGATTGGGTCGCTACTATCTCAGGAGGCGGGAGATACACCTACTATCCTGACAGCGTCAAGGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGTAAGAACAATCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACCGCACTGTACTATTGTGCCAACCGCTACGGGGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGGCAGGGAACCCTGGTGACAGTCTCTAGTGCCAGCACCAAAGGACCTAGCGTGTTTCCTCTCGCCCCCTCCTCCAAAAGCACCAGCGGAGGAACCGCTGCTCTCGGATGTCTGGTGAAGGACTACTTCCCTGAACCCGTCACCGTGAGCTGGAATAGCGGCGCTCTGACAAGCGGAGTCCATACATTCCCTGCTGTGCTGCAAAGCAGCGGACTCTATTCCCTGTCCAGCGTCGTCACAGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTCAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAATCCTGCGACAAGACACACACCTGTCCCCCCTGTCCTGCTCCCGAACTCCTCGGAGGCCCTAGCGTCTTCCTCTTTCCTCCCAAACCCAAGGACACCCTCATGATCAGCAGAACCCCTGAAGTCACCTGTGTCGTCGTGGATGTCAGCCATGAGGACCCCGAGGTGAAATTCAACTGGTATGTCGATGGCGTCGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAGGAACAGTACAACTCCACCTACAGGGTGGTGTCCGTGCTGACAGTCCTCCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCTCTCCCTGCCCCCATTGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAAGGCCAACCCAGGGAGCCCCAGGTCTATACACTGCCTCCCTCCAGGGACGAACTCACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTTTATCCCAGCGACATCGCCGTCGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCCGAGAATAACTACAAGACCACCCCTCCTGTCCTCGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAAAGCAGGTGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTCCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAA(SEQ ID NO:21)
其编码的氨基酸序列：(448aa)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:22)
14C12H1L1轻链(14C12L1)的DNA序列：(642bp)
GACATTCAGATGACTCAGAGCCCCTCCTCCATGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGGGTCACCTTCACATGCCGCGCTAGTCAGGATATCAACACCTACCTGAGCTGGTTTCAGCAGAAGCCAGGGAAAAGCCCCAAGACACTGATCTACCGGGCTAATAGACTGGTGTCTGGAGTCCCAAGTCGGTTCAGTGGCTCAGGGAGCGGACAGGACTACACTCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAGGACATGGCAACCTACTATTGCCTGCAGTATGATGAGTTCCCACTGACCTTTGGCGCCGGGACAAAACTGGAGCTGAAGCGAACTGTGGCCGCTCCCTCCGTCTTCATTTTTCCCCCTTCTGACGAACAGCTGAAATCAGGCACAGCCAGCGTGGTCTGTCTGCTGAACAATTTCTACCCTAGAGAGGCAAAAGTGCAGTGGAAGGTCGATAACGCCCTGCAGTCCGGCAACAGCCAGGAGAGTGTGACTGAACAGGACTCAAAAGATAGCACCTATTCCCTGTCTAGTACACTGACTCTGTCCAAGGCTGATTACGAGAAGCACAAAGTGTATGCATGCGAAGTGACACATCAGGGACTGTCAAGCCCCGTGACTAAGTCTTTTAACCGGGGCGAATGT(SEQ ID NO:23)
其编码的氨基酸序列：(214aa)
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:24)
制备例3：双功能抗体BiAb001(M)、BiAb002(M)、BiAb003(M)和BiAb004(M)的序列设计
双功能抗体BiAb001(M)、BiAb002(M)、BiAb003(M)和BiAb004(M)的结构模式属于Morrison模式(IgG-scFv)，即在一个IgG抗体的两条重链的C端均通过连接片段连接另一个抗体的scFv片段，其重链和轻链的设计组成如下面的表A。
表A：BiAb001(M)、BiAb002(M)、BiAb003(M)和BiAb004(M)的序列设计
上面的表A中:
Linker1的氨基酸序列为(GGGGS)3(SEQ ID NO:25)
Linker2的氨基酸序列为(GGGGS)4(SEQ ID NO:26)
另外，上述的表A中，BiAb001(M)、BiAb002(M)、BiAb003(M)和BiAb004(M)抗体的scFv片段中的4G10H1V(M)、4G10L1V(M)、4G10H3V(M)、4G10L3V(M)是分别在4G10H1V、4G10L1V、4G10H3V、4G10L3V基础上对其骨架区中个别氨基酸进行了突变，有效地优化了抗体的结构，提高了其有效性。
(1)4G10H1V(M)：(115aa，基于4G10H1V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出)
QVQLVESGAELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQ APGQCLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSISTAYMEL SRLTSDDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:41)
(2)4G10L1V(M)：(110aa，基于4G10L1V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出)
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFANWVQE KPGQAFRSLIGGTNNRASWVPARFSGSLLGGKAALTISGAQPED EAEYFCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR(SEQ ID NO:42)
(3)4G10H3V(M)：(115aa，基于4G10H3V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出)
QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQ APGQCLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMEL SRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:43)
(4)4G10L3V(M)：(110aa，基于4G10L3V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出)
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQ KPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPED EAEYYCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR(SEQ ID NO:44)
为了与下文中的突变后的抗体相区分，在本发明实施例中BiAb004(M)亦称为BiAb004(hG1WT)。上述的BiAb004(M)作为“野生型”，其采用Ig gamma-1chain C region，ACCESSION:P01857作为重链恒定区，Ig kappa chain C region，ACCESSION:P01834为轻链恒定区。
制备例4：基于人源化双功能抗体BiAb004的非可变区氨基酸突变设计
本发明人在制备例3所获得的BiAb004(hG1WT)的基础上，通过在其重链的第234号位点引进了亮氨酸到丙氨酸的点突变(L234A)，第235号位点引进了亮氨酸到丙氨酸的点突变(L235A)，第237号位点引进了甘氨酸到丙氨酸的点突变(G237A)，获得了BiAb004(hG1TM)。
BiAb004(hG1TM)中的免疫球蛋白部分的重链的DNA序列：(1344bp，突变位点用下划线标出)
GAAGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGGCTGGTGCAGCCCGGCGGGTCACTGCGACTGAGCTGCGCAGCTTCCGGATTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCCTGGGTGCGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGATTGGGTCGCTACTATCTCAGGAGGCGGGAGATACACCTACTATCCTGACAGCGTCAAGGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGTAAGAACAATCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACCGCACTGTACTATTGTGCCAACCGCTACGGGGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGGCAGGGAACCCTGGTGACAGTCTCTAGTGCCAGCACCAAAGGGCCCAGCGTGTTTCCTCTCGCCCCCTCCTCCAAAAGCACCAGCGGAGGAACCGCTGCTCTCGGATGTCTGGTGAAGGACTACTTCCCTGAACCCGTCACCGTGAGCTGGAATAGCGGCGCTCTGACAAGCGGAGTCCATACATTCCCTGCTGTGCTGCAAAGCAGCGGACTCTATTCCCTGTCCAGCGTCGTCACAGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTCAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAATCCTGCGACAAGACACACACCTGTCCCCCCTGTCCTGCTCCCGAAGCTGCTGGAGCCCCTAGCGTCTTCCTCTTTCCTCCCAAACCCAAGGACACCCTCATGATCAGCAGAACCCCTGAAGTCACCTGTGTCGTCGTGGATGTCAGCCATGAGGACCCCGAGGTGAAATTCAACTGGTATGTCGATGGCGTCGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAGGAACAGTACAACTCCACCTACAGGGTGGTGTCCGTGCTGACAGTCCTCCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCTCTCCCTGCCCCCATTGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAAGGCCAACCCAGGGAGCCCCAGGTCTATACACTGCCTCCCTCCAGGGACGAACTCACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTTTATCCCAGCGACATCGCCGTCGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCCGAGAATAACTACAAGACCACCCCTCCTGTCCTCGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAAAGCAGGTGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTCCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAA(SEQ ID NO:39)
BiAb004(hG1TM)中的免疫球蛋白部分的重链的氨基酸序列：(448aa，突变位点用下划线标出)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:40)
BiAb004(hG1TM)和BiAb004(hG1WT)轻链的DNA序列相同，其编码的氨基酸序列也相同，具体序列见制备例3。
实验例1:BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的受体FcγRI亲和力检测
Fc受体FcγRI又名(CD64)可与IgG抗体的Fc端结合，参与抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。治疗性单克隆抗体与Fc受体结合的能力影响到该抗体的安全性和有效性。
本实验使用Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRI的亲和力常数，以评价各抗体的潜在的ADCC、ADCP活性。
Fortebio Octet分子相互作用仪检测相应抗体与FcγRI的亲和力常数实验方法简述如下：样品稀释缓冲液为PBS，0.02％Tween-20，0.1％BSA，pH7.4的溶液。HIS1K传感器上加入浓度为1μg/mL的FcγRI(购自Sinobio)溶液，固定时间50s，以使得FcγRI固定于传感器表面。抗体与FcγRI的结合和解离参数的测定均在缓冲液中进行，抗体浓度为3.12－50nM(两倍梯度稀释)。固定有抗原的传感器在缓冲液中平衡60s后测定固定在传感器上的FcγRI与各抗体的结合，时间120s；FcγRI与抗体的解离测定时间为120s。检测温度为30℃，频率为0.3Hz。数据以1:1模型拟合分析，以得到各抗体和FcγRI的亲和力常数。
FcγRI与BiAb004(hG1TM)和BiAb004(hG1WT)的亲和力常数测定结果如下面的表1以及图1、图2所示。
表1:BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRI结合的动力学参数
结果显示，BiAb004(hG1WT)可以与FcγRI结合，亲和力常数为5.92E-09M；而BiAb004(hG1TM)由于与FcγRI没有结合信号或信号极低，故未能获得相应数据，认为其不与FcγRI结合。
结果表明，相对于BiAb004(hG1WT)，BiAb004(hG1TM)被有效的消除了其与FcγRI的结合活性。
实验例2：FcγRIIIa_V158与BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的亲和力常数测定
Fc受体FcγRIIIa_V158(又名CD16a_V158)，可与IgG抗体的Fc端结合，介导ADCC效应。
实验中使用Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)，和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIIa_V158的亲和力常数，以评价各抗体的ADCC活性。
Fortebio Octet分子相互作用仪检测相应抗体与FcγRIIIa_V158的亲和力常数实验方法简述如下：样品稀释缓冲液为PBS，0.02％Tween-20，0.1％BSA，pH7.4。5μg/mL的FcγRIIIa_V158固定在HIS1K传感器上，时间120s，传感器在缓冲液中平衡60s，固定在传感器上的FcγRIIIa_V158与各抗体结合，抗体浓度为31.25－500nM(两倍稀释)，时间60s，抗体在缓冲液中解离，时间60s。传感器使用10mM甘氨酸，pH1.5再生，时间5s，重复4次。检测温度为30℃，频率为0.3Hz。数据以1:1模型拟合分析，得到亲和力常数。
FcγRIIIa_V158与BiAb004(hG1TM)和BiAb004(hG1WT)的亲和力常数测定结果如下面的表2以及图3、图4所示。
表2：BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIIa_V158结合的动力学参数
结果显示，BiAb004(hG1WT)可以与FcγRI_V158结合，亲和力常数为1.77E-07M；而BiAb004(hG1TM)由于与FcγRIIIa_V158没有结合信号或信号极低，故未能获得相应数据，认为其不与FcγRIIIa_V158结合。
结果表明，相对于BiAb004(hG1WT)，BiAb004(hG1TM)被有效的消除了其与FcγRIIIa_V158的结合活性。
实验例3：FcγRIIIa_F158与BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的亲和力常数测定
Fc受体FcγRIIIa_F158(又名CD16a_F158)可与IgG抗体的Fc端结合，介导ADCC。
本实验使用Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)，和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIIa_F158的亲和力常数，以评价各抗体的ADCC活性。
Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIIa_F158的亲和力常数实验方法简述如下：样品稀释缓冲液为PBS，0.02％Tween-20，0.1％BSA，pH7.4。5μg/mL的FcγRIIIa_F158固定在HIS1K传感器上，时间120s，传感器在缓冲液中平衡60s，固定在传感器上的FcγRIIIa_F158与各抗体结合，抗体浓度为31.25-500nM(两倍稀释)，时间60s，抗体在缓冲液中解离，时间60s。传感器使用10mM甘氨酸，pH1.5再生，时间5s，重复4次。检测温度为30℃，频率为0.3Hz。数据以1:1模型拟合分析，得到亲和力常数。
FcγRIIIa_F158与BiAb004(hG1TM)和BiAb004(hG1WT)的亲和力常数测定结果如下面表3以及图5、图6所示。
表3：BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIIa_F158结合的动力学参数
结果显示，BiAb004(hG1WT)可以与FcγRIIIa_F158结合，亲和力常数为2.21E-07M；而BiAb004(hG1TM)由于与FcγRIIIa_F158没有结合信号或信号极低没有结合，故未能获得相应数据，认为其不与FcγRIII_F158结合。
结果表明，相对于BiAb004(hG1WT)，BiAb004(hG1TM)被有效的消除了其与FcγRIIIa_F158的结合活性。
实验例4：FcγRIIa_H131与BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的亲和力常数测定
Fc受体FcγRIIa_H131又名(CD32a_H131)可与IgG抗体的Fc端结合，介导ADCC。
本实验使用Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_H131的亲和力常数，以评价各抗体的ADCC活性。
Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_H131的亲和力常数实验方法简述如下：固化物稀释液为PBS，0.02％Tween-20，0.1％BSA，pH7.4，分析物稀释缓冲液为PBS，0.02％Tween-20，0.02％casein，0.1％BSA，pH7.4。5μg/mL的FcγRIIa_H131固定在NTA传感器上，固定高度约为1.0nm，传感器在PBS，0.02％Tween-20，0.02％casein，0.1％BSA，pH7.4缓冲液中平衡300s以封闭传感器，固定在传感器上的FcγRIIa_H131与抗体结合，抗体浓度为12.5-200nM(两倍梯度稀释)，时间60s，抗体在缓冲液中解离，时间60s。传感器使用10mM Glycine，pH1.7和10mM硫酸镍再生。检测温度为30℃，频率为0.6Hz。数据以1:1模型拟合分析，得到亲和力常数。
FcγRIIa_H131与BiAb004(hG1TM)和BiAb004(hG1WT)的亲和力常数测定结果如下面的表4以及图7、图8所示。
表4：BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_H131结合的动力学参数
结果显示，BiAb004(hG1WT)可以与FcγRIIa_H131结合，亲和力常数为2.22E-08M；而BiAb004(hG1TM)由于与FcγRIIa_H131没有结合信号或信号极低，故未能获得相应数据，认为其不与FcγRIIa_H131结合。
结果表明，相对于BiAb004(hG1WT)，BiAb004(hG1TM)被有效的消除了其与FcγRIIa_H131的结合活性。
实验例5：FcγRIIa_R131与BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的亲和力常数测定
Fc受体FcγRIIa_R131(又名CD32a_R131)可与IgG抗体的Fc端结合，介导ADCC。
本实验使用Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_R131的亲和力常数，以评价各抗体的ADCC活性。
Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的亲和力常数实验方法简述如下：固化物稀释液为PBS，0.02％Tween-20，0.1％BSA，pH7.4，分析物稀释缓冲液为PBS，0.02％Tween-20，0.02％casein，0.1％BSA，pH7.4。5μg/mL的FcγRIIa_R131固定在NTA传感器上，固定高度约为1.0nm，传感器在PBS，0.02％Tween-20，0.02％casein，0.1％BSA，pH7.4缓冲液中平衡300s以封闭传感器，固定在传感器上的FcγRIIa_R131与抗体结合，抗体浓度为12.5-200nM(两倍梯度稀释)，时间60s，抗体在缓冲液中解离，时间60s。传感器使用10mM Glycine，pH1.7和10mM硫酸镍再生。检测温度为30℃，频率为0.6Hz。数据以1:1模型拟合分析，得到亲和力常数。
FcγRIIa_R131与BiAb004(hG1TM)和BiAb004(hG1WT)的亲和力常数测定结果如下面的表5以及图9、图10所示。
表5:BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_R131结合的动力学参数
结果显示，BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM))均可以与FcγRIIa_R131结合，亲和力常数分别为1.43E-08M，4.20E-08M。
结果表明，BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIa_R131均有结合活性。但图9和图10的结果显示，BiAb004(hG1WT)的结合信号高度较高，亲和力也强于BiAb004(hG1TM)。
实验例6：FcγRIIb与BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的亲和力常数测定
Fc受体FcγRIIb(又名CD32b)可与IgG抗体的Fc端结合，负性调控免疫细胞的功能，抑制免疫细胞的激活、增殖，抑制细胞因子的分泌等。
本实验使用Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIb的亲和力常数，以评价BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与Fc受体的结合能力。
Fortebio Octet分子相互作用仪检测BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIb的亲和力常数实验方法简述如下：固化物稀释液为PBS，0.02％Tween-20，0.1％BSA，pH7.4，分析物稀释缓冲液为PBS，0.02％Tween-20，0.02％casein，0.1％BSA，pH7.4。5μg/mL的FcγRIIb固定在NTA传感器上，固定高度约为1.0nm，传感器在PBS，0.02％Tween-20，0.02％casein，0.1％BSA，pH7.4缓冲液中平衡300s以封闭传感器，固定在传感器上的FcγRIIb与抗体结合，抗体浓度为12.5-200nM(两倍梯度稀释)，时间60s，抗体在缓冲液中解离，时间60s。传感器使用10mM Glycine，pH1.7和10mM硫酸镍再生。检测温度为30℃，频率为0.6Hz。数据以1:1模型拟合分析，得到亲和力常数。
FcγRIIb与BiAb004(hG1TM)和BiAb004(hG1WT)的亲和力常数测定结果如下面的表6以及图11、图12所示。
表6:BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与FcγRIIb结合的动力学参数
结果显示，BiAb004(hG1WT)可以与FcγRIIb结合，亲和力常数分别为5.61E-08M；而BiAb004(hG1TM)由于与FcγRIIb没有结合信号或信号极低，故未能获得相应数据，认为其不与FcγRIIb结合。
结果表明，相对于BiAb004(hG1WT)，BiAb004(hG1TM)被有效的消除了其与FcγRIIb的结合活性。
实验例7：C1q与BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的亲和力测定
血清补体C1q可与IgG抗体的Fc端结合，介导CDC效应。治疗性单克隆抗体与C1q结合的能力影响到该抗体的安全性和有效性。
本实验使用Fortebio Octet分子相互作用仪检测了BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)与C1q的亲和力常数，以评价各抗体的CDC活性。实验例中采用抗PDL1抗体5C10H2L2-IgG1mt作为对照抗体，其制备方法参照PCT公开WO2017148424A1。
Fortebio Octet分子相互作用仪检测相应抗体与C1q的亲和力常数实验方法简述如下：样品稀释缓冲液为PBS，0.02％ Tween-20，0.1％BSA，pH7.4。50μg/mL的抗体固定在FAB2G传感器上，固定高度约为2.0nm，传感器在缓冲液中平衡60s，固定在传感器上的抗体与抗原C1q结合,抗原浓度为1.25-20nM(两倍梯度稀释)，时间60s，抗原抗体在缓冲液中解离，时间60s。传感器使用10mM甘氨酸，pH1.7再生，时间5s，重复4次。样品板震动速率为1000rpm，检测温度为30度，检测频率为0.6Hz。数据以1:1模型拟合分析，得到亲和力常数。数据采集软件为Fortebio Data Acquisition 7.0，数据分析软件为Fortebio DataAnalysis 7.0。
C1q与BiAb004(hG1TM)、BiAb004(hG1WT)以及5C10H2L2-IgG1mt的亲和力常数测定结果如下面的表7以及图13、图14、图15所示。
表7：BiAb004(hG1WT)、BiAb004(hG1TM)和5C10H2L2-IgG1mt与C1q结合的动力学参数
结果显示BiAb004(hG1WT))可以与C1q结合，亲和力常数为2.53E-09M；而BiAb004(hG1TM)由于与C1q没有结合信号或信号极低，故未能获得相应数据，认为其不与C1q结合。
结果表明，相对于BiAb004(hG1WT)，BiAb004(hG1TM)被有效的消除了其与C1q的结合活性。
实验例8：BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)对表达CTLA4和PD-1抗原的293T- CTLA4-PD1细胞的ADCC活性检测
ADCC效应是指具有杀伤活性的效应免疫细胞通过其表面表达的Fc受体(FcR)识别结合于靶细胞抗原上抗体的Fc段，直接杀伤靶细胞。为检测抗CTLA4-抗PD-1的双功能抗体BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)的ADCC效应，发明人构建了表达有PD-1和CTLA4抗原的293T-CTLA4-PD1细胞和原代PBMC共培养体系以检测抗体的ADCC活性。
BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM))对表达CTLA4和PD-1抗原的293T-CTLA4-PD1细胞的ADCC活性检测，方法具体如下：
按Ficoll外周血单个核细胞分离操作说明书分离获得正常人PBMC，分离后的PBMC用RPMI-1640完全培养基重悬，AO/PI染色计数，冻存。实验前一天，复苏PBMC，计细胞数及活率，于37℃、5％CO2的二氧化碳培养箱中孵育过夜；实验当天，收集293T-CTLA4-PD1细胞、PBMC，800rpm或1200rpm离心5min后，再用RPMI-1640(含1％FBS)(以下称培养基)重悬细胞，洗涤细胞2次；计细胞数及活率，用培养基将细胞浓度调整到合适范围，根据试验设计，在96孔板中加入100μL 293T-CTLA4-PD1细胞3.0E+04/孔；加入50μL抗体室温预孵育1小时；1小时后加入50μl PBMC，9.0E+05/孔，充分混匀；37℃、5％ CO2的二氧化碳培养箱中孵育4hrs。250xg离心5min；小心吸取100μL细胞上清(注意不要吸到板底细胞)于新的96孔平底微量板中，根据Cytotoxicity Detection Kit说明书每孔加入100μL现配的反应液，室温避光孵育30min。分别于490nm和650nm处测量OD值，根据ADCC(％)＝(实验组-阴性对照组)/(靶细胞LDH最大释放-靶细胞LDH自发释放)×100％计算各组ADCC百分数。
BiAb004(hG1WT)和BiAb004(hG1TM)对表达CTLA4和PD-1抗原的293T-CTLA4-PD1细胞的ADCC活性用ADCC百分数表示，结果如图16所示。
结果显示，在PBMC与293T-CTLA4-PD1混合培养体系中，在同等剂量水平下，BiAb004(hG1TM)所诱导的ADCC百分数显著低于BiAb004(hG1WT)。
结果表明，BiAb004(hG1TM)无ADCC活性。
实验例9：抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体联合西奥罗尼在淋巴细胞-肿瘤细胞混合
反应体系中的活性评价
新鲜分离的PBMC(来自健康捐献者)贴壁过夜后收集单核细胞，加入GM-CSF(2000U/mL，来源于peprotech，货号300-03)、IL-4(2000U/mL，来源于peprotech，货号200-04)，培养3天后进行诱导，iDC组半量换液加入GM-CSF(2000U/mL)、IL4(2000U/mL)，mDC组半量换液后加入GM-CSF(2000U/mL)、IFN-γ(50ng/mL，来源于Sino Biological，货号11725-HNAS-100)、LPS(100ng/mL，来源于SIGMA，货号L6529)，培养箱培养2天后收集细胞，进行冻存备用。
常规消化离心收集A375细胞(购自ATCC，由中原公司代理，货号：CRL-1619)，按照2×106个细胞/皿铺于10cm平皿，其中1皿加入西奥罗尼(来自微芯生物，批号：210604)至终浓度为15μM，并设置空白对照组，于37℃、5％CO2培养箱孵育48h(培养基：DMEM+10％FBS)。提前1晚复苏与iDC/mDC来自同一供者(自体)或者不同供者(异体)的PBMC(来自健康捐献者)，提前2h复苏iDC(未成熟的树突状细胞)和mDC(成熟的树突状细胞)，计数后按照DC：PBMC＝1:10的比例铺于96孔平底板；收集未处理及15μM西奥罗尼处理48h后的A375细胞，3×104/50μL/孔加入相应的分组孔，加入BiAb004(hG1TM)，300nM/50μL/孔加入相应的分组孔；于培养箱中孵育3-5天；分别在第3天和第5天时收集细胞上清，采用ELISA试剂盒检测IFN-γ(购自达科为公司，货号：Cat：1110202)和IL-2(购自达科为公司，货号：Cat：1110202)的分泌量。
DC、PBMC和A375细胞混合培养后的IFN-γ分泌检测结果如图17所示。DC、PBMC和A375细胞混合培养后的IL-2分泌检测结果如图18所示。
由图可见，双功能抗体BiAb004(hG1TM)单药组、西奥罗尼单药组以及双功能抗体BiAb004(hG1TM)联用西奥罗尼组均能有效地促进反应体系中的IFN-γ和IL-2分泌。其中，双功能抗体BiAb004(hG1TM)联用西奥罗尼组促IFN-γ和IL-2分泌的能力分别均显著强于双功能抗体BiAb004(hG1TM)单药组、西奥罗尼单药组。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
Claims (24)
1.一种药物组合，其包含西奥罗尼或其可药用盐(例如盐酸盐)或其晶型(例如非溶剂化晶型A、B或C)，以及至少一种(例如1种、2种或3种)抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体。
2.根据权利要求1所述的药物组合，其中，所述西奥罗尼或其可药用盐或其晶型与所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的质量比为1：(1-1000)，优选为1：(5-500)，更优选为1：(10-100)。
3.根据权利要求1至2中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的单位剂量为100mg-1000mg、200mg-800mg、200mg-500mg、300mg-600mg、400mg-500mg或者450mg。
4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述西奥罗尼或其可药用盐或其晶型的单位剂量为0.1mg-100mg、0.5mg-50mg、1mg-20mg、2mg-15mg、3mg-12mg、4mg-8mg或者5mg。
5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的药物组合，其中，
所述药物组合为固定组合，例如为药物组合物；或者
所述药物组合是非固定组合，例如所述非固定组合中的西奥罗尼或其可药用盐或其晶型、抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体各自存在于独立的药物组合物中。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述药物组合物独立地为固体药物组合物或液体药物组合物。
7.根据权利要求5至6中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
8.根据权利要求5至7中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述药物组合物不包含除了西奥罗尼或其可药用盐或其晶型和抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体其它活性药物成分。
9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
其中：
所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；
或者，
所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；
所述免疫球蛋白均为人IgG1亚型；
并且按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区在第234位点、235位点和237位点中的任意2个位点或3个位点发生突变，并且突变后，双特异性抗体与FcγRIIIa和/或C1q的亲和力常数相比突变前降低；优选地，所述亲和力常数通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得。
10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有如下突变：
L234A和L235A；或者
L234A和G237A；或者
L235A和G237A；
或者
L234A、L235A、G237A。
11.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
其中：
所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；
或者，
所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3并且其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3；
所述免疫球蛋白均为人IgG1亚型；
并且按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有如下突变组合之一：
L234A和L235A；或者
L234A和G237A；或者
L235A和G237A；或者
L234A、L235A、G237A。
12.根据权利要求1至11中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区还具有选自如下的一个或多个突变：
N297A、D265A、D270A、P238D、L328E、E233D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、P331S、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A、T394D、G236R、G236A、L328R、A330S、P331S、H268A、E318A和K320A。
13.根据权利要求1至12中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:18；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:20；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQID NO:41和SEQ ID NO:43；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44；
或者，
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:18；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:20。
14.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其选自如下的(1)－(20)中的任一项：
(1)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:4所示；
(2)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:8所示；
(3)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:12所示；
(4)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:4所示；
(5)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:8所示；
(6)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:12所示；
(7)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；
(8)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；
(9)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；
(10)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；
(11)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:16所示；
(12)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:20所示；
(13)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:42所示；
(14)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:44所示；
(15)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:42所示；
(16)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:44所示；
(17)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:42所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:16所示；
(18)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:16所示；
(19)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:42所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:20所示；
以及，
(20)
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:20所示。
15.根据权利要求1至14中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体：
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示，并且其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示。
16.根据权利要求1至15中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段以大于大约10-7M，例如大于大约10-6M、10-5M、10-4M或10-3M或更大的亲和力常数结合FcγRIIIa_F158、FcγRI、FcγRIIa_H131、FcγRIIIa_V158和/或FcγRIIb；优选地，所述亲和力常数通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得；
优选地，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段与FcγRIIIa_F158、FcγRI、FcγRIIa_H131、FcγRIIIa_V158和/或FcγRIIb没有结合信号或者结合信号小于0.1nm；优选地，所述结合信号是指通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得的响应值。
17.根据权利要求1至16中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段以大于大约10-9M，例如大于大约10-8M、10-7M、10-6M或10-5M或更大的亲和力常数结合C1q；优选地，所述亲和力常数通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得；
优选地，所述免疫球蛋白或其抗原结合片段与C1q没有结合信号或者结合信号小于0.1nm；优选地，所述结合信号是指通过Fortebio Octet分子相互作用仪测得的响应值。
18.根据权利要求1至17中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接；和/或所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区直接连接或者通过连接片段连接。
19.根据权利要求1至18中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述连接片段为(GGGGS)n，n为正整数；优选地，n为1、2、3、4、5或6。
20.根据权利要求1至19中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。
21.根据权利要求1至20中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述单链抗体连接在免疫球蛋白的重链的C末端。
22.根据权利要求1至21中任一权利要求所述的药物组合，其中，所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
所述第一蛋白功能区为1个，所述第二蛋白功能区为2个；
其中，所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示，并且其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；
所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示；
所述单链抗体连接在免疫球蛋白的重链的C末端；
所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区通过第一连接片段连接；并且所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区通过第二连接片段连接；所述第一连接片段和所述第二连接片段相同或不同；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列独立地选自SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列均如SEQ ID NO:26所示。
23.一种药盒产品，其包含权利要求1至22中任一权利要求所述的药物组合，以及产品说明书。
24.权利要求1至22中任一权利要求所述的药物组合在制备治疗或预防肿瘤的药物中的用途；
优选地，所述肿瘤选自黑色素瘤、肾肿瘤、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、白血病、乳腺癌、间皮瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、淋巴瘤、胰腺癌和鼻咽癌中的一种或多种；
优选地，所述肺癌选自非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌和肺鳞癌中的一种或多种；
优选地，所述胃癌为胃腺癌或食管结合部腺癌；
优选地，所述肿瘤为具有MSI-H/dMMR表型的实体瘤；优选地，所述肿瘤选自具有MSI-H/dMMR表型的下述肿瘤中的一种或多种：
结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、间皮瘤、肉瘤、肾上腺皮质癌、恶性黑色素瘤和卵巢生殖细胞肿瘤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210174665 | 2022-02-24 | ||
| CN2022101746659 | 2022-02-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116637182A true CN116637182A (zh) | 2023-08-25 |
Family
ID=87614121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310172580.1A Pending CN116637182A (zh) | 2022-02-24 | 2023-02-24 | 包含抗ctla4-抗pd-1双特异性抗体和西奥罗尼的药物组合 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116637182A (zh) |
| WO (1) | WO2023160647A1 (zh) |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW201922793A (zh) * | 2017-11-16 | 2019-06-16 | 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 | Ｐｄ－１抗體和ｖｅｇｆｒ抑制劑聯合治療小細胞肺癌的用途 |
| CN113768933B (zh) * | 2017-12-06 | 2024-02-20 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | Parp抑制剂用于治疗化疗耐药的卵巢癌或乳腺癌的用途 |
| CN114681455A (zh) * | 2018-08-17 | 2022-07-01 | 深圳微芯生物科技股份有限公司 | 组蛋白去乙酰化酶抑制剂与蛋白激酶抑制剂之组合及其制药用途 |
| TWI797426B (zh) * | 2019-03-25 | 2023-04-01 | 大陸商深圳微芯生物科技股份有限公司 | 西奧羅尼用於小細胞肺癌的治療 |
| WO2021023117A1 (zh) * | 2019-08-02 | 2021-02-11 | 康方药业有限公司 | 抗ctla4-抗pd-1双特异性抗体及其用途 |
| WO2022007745A1 (zh) * | 2020-07-08 | 2022-01-13 | 深圳微芯生物科技股份有限公司 | 西奥罗尼及其联合用药治疗非霍奇金淋巴瘤的用途 |
-
2023
- 2023-02-24 CN CN202310172580.1A patent/CN116637182A/zh active Pending
- 2023-02-24 WO PCT/CN2023/078103 patent/WO2023160647A1/zh unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023160647A1 (zh) | 2023-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2021023117A1 (zh) | 抗ctla4-抗pd-1双特异性抗体及其用途 | |
| EP4067387A1 (en) | Anti-pd-1-anti-vegfa bispecific antibody, pharmaceutical composition and use thereof | |
| CN112300280B (zh) | 一种抗pd-1抗体及其医药用途 | |
| CN114181310B (zh) | 抗tigit抗体、其药物组合物及用途 | |
| KR20230004726A (ko) | 항-cd73/항-pd-1 이중특이항체 및 이의 용도 | |
| US10626183B2 (en) | IFN-γ-inducible regulatory T cell convertible anti-cancer (IRTCA) antibody and uses thereof | |
| EP4190819A1 (en) | Pharmaceutical combination containing anti-pd-1-anti-vegfa bispecific antibody, and use thereof | |
| EP4234579A1 (en) | Anti-cd73 antibody and use thereof | |
| WO2023160647A1 (zh) | 包含抗ctla4-抗pd-1双特异性抗体和西奥罗尼的药物组合 | |
| WO2024051223A1 (zh) | 药物组合及用途 | |
| WO2023246247A1 (zh) | 药物组合物及其用途 | |
| EP4357367A1 (en) | Pharmaceutical composition and use thereof | |
| EP4375300A1 (en) | Pharmaceutical composition and use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Country or region after: China Address after: No. 158 Kangyao South Road, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province, 510799 Applicant after: Akeso Pharmaceuticals, Inc. Applicant after: SHENZHEN CHIPSCREEN BIOSCIENCES Co.,Ltd. Address before: No. 158 Kangyao South Road, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province, 510799 Applicant before: Akeso Pharmaceuticals, Inc. Country or region before: China Applicant before: SHENZHEN CHIPSCREEN BIOSCIENCES Co.,Ltd. |