WO2014183673A1 - 阿那格雷及其衍生物的抗肿瘤用途 - Google Patents

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WO2014183673A1
WO2014183673A1 PCT/CN2014/077694 CN2014077694W WO2014183673A1 WO 2014183673 A1 WO2014183673 A1 WO 2014183673A1 CN 2014077694 W CN2014077694 W CN 2014077694W WO 2014183673 A1 WO2014183673 A1 WO 2014183673A1
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substituted
unsubstituted
tumor
cancer
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PCT/CN2014/077694
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俞强
何静
张卿
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中国科学院上海药物研究所
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/06—Anti-neoplasic drugs, anti-retroviral drugs, e.g. azacytidine, cyclophosphamide

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicine, and in particular, the present invention provides antitumor use of the drug anagrelide and its derivatives.
  • Cancer has become the second most serious disease threatening human health, and humans still have no good way to treat cancer. It is known that there are 30,000 genes in the human genome, about 200 known drug targets, about 2,000 theoretical targets from the genome, and about 10,000 drugs in the clinic, including 1200 different structure types. . Therefore, a large number of compounds are currently available to target various functional and structural target proteins in humans, and these already marketed drugs have proven safety and good bioavailability.
  • Anagrelide also known as Anguining, is a structural formula of 6,7-dichloro-1,5-dihydroimidazo[2,1-b]quinazoline-2(3H)one, March 1997. It is marketed in the United States and is used as a phosphodiesterase inhibitor for the treatment of anti-thrombocytopenia. As early as 1979, American scientists J.S. Fleming and J.P. Buyniski discovered that the novel small molecule compound BL-4162A (Anagrelide) showed significant antithrombotic function in animal experiments.
  • Anagrelide can inhibit the activity of phosphodiesterase (PDE) and increase the content of cAMP in cells, thereby affecting the proliferation, maturation and differentiation of blood cells.
  • PDE phosphodiesterase
  • Anagrelide can inhibit the activity of phosphodiesterase (PDE) and increase the content of cAMP in cells, thereby affecting the proliferation, maturation and differentiation of blood cells.
  • PDE phosphodiesterase
  • the present invention provides a novel use of the drug Anagrelide and its derivatives for the treatment of tumors.
  • a first aspect of the invention a use of a compound of formula I, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, for the manufacture of a medicament for the treatment or inhibition of tumors and/or inhibition of tumor cell growth or Pharmaceutical composition;
  • Ri, R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 and R 8 are each independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a halogen atom, an amino group, a hydroxyl group, a cyano group, an aldehyde group, a nitro group, and a carboxyl group.
  • substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 alkyl substituted or unsubstituted C3 ⁇ C10 cycloalkyl, substituted or unsubstituted C2 ⁇ C10 alkenyl, substituted or unsubstituted C2 ⁇ C10 alkynyl, substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 heteroaryl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 alkoxy, substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl-oxy, substituted or unsubstituted a C1-C10 heteroaryl-oxy group, a substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 acyl group, a substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 ester group, a substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 sulfonyl group;
  • R 9 is selected from the group consisting of a hydrogen atom, an oxygen atom, a substituted or unsubstituted C1 to C10 alkyl group, a substituted or unsubstituted C3 to C10 cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted C6 to C10 aryl group, a substituted or not Substituted C1 ⁇ C10 heteroaryl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 alkoxy, substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl-oxy, substituted or unsubstituted acyl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 Sulfonyl;
  • the phenyl group includes an unsubstituted phenyl group or a substituted phenyl group having 1-3 substituents selected from the group consisting of: halogen, C1-C10 alkyl group, cyano group, OH, nitro group, C3 ⁇ C10 Cycloalkyl, C1 to C10 alkoxy, amino.
  • the R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 and R 8 are each independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a halogen atom, an amino group, a hydroxyl group, and a cyano group.
  • R 9 is selected from the group consisting of a hydrogen atom, an oxygen atom, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkyl group, a substituted or unsubstituted C3 to C6 cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted C6 to C10 aryl group, a substituted or not Substituted C1 ⁇ C10 heteroaryl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C5 alkoxy, substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl-oxy, substituted or Unsubstituted -CO-Cl ⁇ C5 alkyl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C5 sulfonyl;
  • ⁇ R 8 are each independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a halogen atom, a cyano group, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkyl group, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkoxy group, Substituted or unsubstituted C3 ⁇ C6 cycloalkyl;
  • ⁇ 1 and 12 together form, and / or R 3 and R 4 together form a group selected from the group: a substituted or unsubstituted C1 ⁇ C5 cycloalkyl, substituted or unsubstituted heterocycloalkyl C1 ⁇ C5 Base, carbonyl;
  • R 9 is selected from the group consisting of: a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkyl group, a substituted or unsubstituted C3 to C6 cycloalkyl group;
  • 1 to 8 of R to R 9 are a hydrogen atom, and preferably 2 to 7 are a hydrogen atom.
  • 1 to 8 of the above ⁇ are halogen atoms.
  • 1 to 8 of the above ⁇ are halogen atoms, and the other ⁇ are all hydrogen atoms.
  • the pharmaceutically acceptable salt is a salt selected from the group consisting of hydrochloride, acetate, phosphate, or a combination thereof.
  • the pharmaceutical composition comprises: (a) a therapeutically effective amount of anagrelide; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the effective concentration of the anagrelide is 0.01 nM/L-lmM/L, preferably 0.1 nM/L-50 ( ⁇ M/L, most preferably lnM/L-10). ( ⁇ M/L.
  • the content of anagrelide in the pharmaceutical composition is 0.01 to 99% by weight, preferably 0.1 to 90% by weight.
  • the drug or pharmaceutical composition is also used to induce tumor cell apoptosis. In another preferred embodiment, the drug or pharmaceutical composition is also used to interfere with tumor cell proliferation. In another preferred embodiment, the drug or pharmaceutical composition is also used to modulate the cell cycle of tumor cells; and/or
  • the drug or pharmaceutical composition is also used to block the cell cycle.
  • the drug or pharmaceutical composition is used to induce tumor cells to produce G1, G2 cycle arrest.
  • the drug or pharmaceutical composition is also used to inhibit metastasis of tumor cells.
  • the tumor or tumor cell is selected from the group consisting of: liver cancer, cervical cancer, glioma, colon cancer, kidney cancer, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, skin cancer, nasopharyngeal carcinoma , esophageal cancer, gastric cancer, ovarian cancer, melanoma.
  • the tumor cells are selected from the group consisting of Hela, H4, FHCC98, SMMC772 BEL7404, A498, SW1116, MDA-MB-23 K MDA-MB-468, DU145, U87-MG, Wi38, H1299, or a combination thereof.
  • the tumor cells are selected from the group consisting of Hela, H4, FHCC98, SMMC772, or a combination thereof.
  • a cell cycle blocker comprising an effective amount of the compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, or a pharmaceutical composition thereof .
  • the compound of formula I is anagrelide.
  • the blocker is used to induce tumor cells to produce G1, G2 cycle arrest.
  • the retarder further comprises a carrier.
  • the carrier is a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the invention provides a method of non-therapeutic regulation of the cell cycle in vitro, the method comprising the steps of: comprising an effective amount of the compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof,
  • the cells are cultured in a culture system of the pharmaceutical composition thereof.
  • the compound of formula I is anagrelide.
  • the cells are cultured in a culture system containing an effective amount of anagrelide hydrochloride.
  • the cell is a tumor cell, preferably the tumor cell is selected from the group consisting of: liver cancer, cervical cancer, glioma, colon cancer, kidney cancer, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, pancreatic cancer , skin cancer, nasopharyngeal cancer, esophageal cancer, gastric cancer, ovarian cancer, melanoma.
  • the tumor cells are selected from the group consisting of Hela, H4, FHCC98, SMMC772
  • the effective concentration of the compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof is O.OlnM/L-lmM/L, preferably 0.1 nM/L-50 ( ⁇ M /L, optimally lnM/L-10 ( ⁇ M/L.
  • the compound of formula I has an action time of from 2 to 96 hours.
  • the compound of formula I has a period of time of from 1 to 30 days.
  • a fourth aspect of the invention provides a method of non-therapeutic inhibition of cell growth or induction of apoptosis in vitro, the method comprising the steps of: comprising an effective amount of a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable thereof
  • the cells are formulated in a culture system of a salt or a prodrug, or a pharmaceutical composition thereof.
  • the compound of formula I is anagrelide.
  • the cell is a tumor cell.
  • the compound of formula I has an effective concentration of 0.01 nM/L-lmM/L, preferably 0.1 ⁇ ⁇ / ⁇ - 500 ⁇ ⁇ , most preferably 1 ⁇ ⁇ / ⁇ ⁇ - 100 ⁇ ⁇ .
  • the compound of formula I has an action time of from 2 to 96 hours when used as a preparation outside the organism. In another preferred embodiment, when used as a living body, the compound of the formula I has an action time of from 1 to 360 days, preferably from 1 to 180 days, more preferably from 1 to 60 days, most preferably For 1 to 30 days.
  • a method of preparing an antitumor drug comprising: administering a therapeutically effective amount of the compound of Formula I, or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, and a pharmaceutically acceptable
  • the carriers are mixed to form a pharmaceutical composition.
  • the compound of formula I is anagrelide.
  • the pharmaceutical composition further comprises a component selected from the group consisting of a tumor suppressor, a tumor necrosis inducing agent, or a combination thereof.
  • a method of treating a tumor comprising: administering to a subject in need of treatment a therapeutically effective amount of a compound of formula I, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable thereof a salt or prodrug, or a pharmaceutical composition thereof.
  • a pharmaceutical composition for treating or inhibiting a tumor comprising (a) a pharmaceutically acceptable carrier and (b) a compound of formula I, optical isomerism Or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof,
  • each group is as defined above.
  • the pharmaceutical composition is in the form of an oral dosage form or an injection dosage form.
  • a use of a compound of formula I, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, for use in the preparation of a composition for use in inhibiting tumor cells (ii) Inducing apoptosis of tumor cells; (iii) Interfering with tumor cell proliferation; (iv) Regulating the cell cycle of tumor cells; (Inducing tumor cells to produce G1, G2 cycle arrest; and/or (vi) Inhibiting tumors Transfer of cells.
  • the composition is a pharmaceutical composition. It is to be understood that within the scope of the present invention, the various technical features of the present invention and the technical features specifically described hereinafter (as in the embodiments) may be combined with each other to constitute a new or preferred technical solution. Due to space limitations, we will not repeat them here. DRAWINGS
  • Figure 1 shows a schematic diagram of the chemical structure of Anagrelide
  • Figure 2 shows the growth inhibition spectrum of Anagrelide on tumor cells, where:
  • Figure 2 A shows the growth inhibition tumor spectrum of Anagrelide ⁇
  • Figure 2 shows the growth inhibition spectrum of Anagrelide 50 ⁇
  • Figure 3 shows the real-time cell detection results and the IC50 values of Anagrelide for different cell lines; cells 3000/lOOuL dot plates, 100 nM Anagrelide were added overnight, and cell growth was monitored using a Roche cell real-time monitor.
  • the red line is the DMSO control group and the green line is the dosing group.
  • Figure 4 shows the distribution of cell cycle after 24 hours of treatment with 100 nM Anagrelide by flow cytometry
  • Figure 5 shows a statistical diagram of the results of flow cytometry
  • Figure 6 shows the drug concentration ⁇ , H4, FHCC98 cells received at different time points after administration, Western Blot detection of PARP shear results.
  • Figure 7 shows the effect of Anagrelide on tumor cell migration.
  • Figure 8 shows the effect of Anagrelide on the weight of tumor-bearing nude mice
  • Figure 9 shows the effect of Anagrelide on tumor volume in tumor-bearing nude mice
  • Figure 10 shows the effect of Anagrelide on the tumor weight of tumor-bearing nude mice
  • Figure 11 shows the effect of Anagrelide on routine blood tests in tumor-bearing nude mice
  • Figure 11 A shows the effect of Anagrelide on white blood cells
  • Figure 11 B shows the effect of Anagrelide on red blood cells
  • FIG. 11 C shows the effect of Anagrelide on hemoglobin
  • Figure 11 D shows the effect of Anagrelide on platelets.
  • model indicates the model animal group
  • Anagrelide I indicates the administration group I administered at a dose of 10 mg/kg
  • Anagrelide II indicates the administration group II at a dose of 30 mg/kg.
  • the present inventors discovered for the first time, through the screening of a large number of compounds, that the commercially available drug for the treatment of anti-thromboticosis, anagrelide, can be used for treating tumors and inhibiting tumor cell growth.
  • the effect of changing the cell cycle has an excellent effect of inhibiting tumor cell growth and inducing tumor cell death.
  • substituted means that one or more hydrogen atoms on the group are substituted with a substituent selected from the group consisting of C1 to C10 alkyl, C3 to C10 cycloalkyl, C1 to C10 alkoxy, halogen.
  • phenyl hydroxy, carboxy (-COOH), C1 to C10 aldehyde, C2 to C10 acyl, C2 to C10 ester, amino, phenyl; said phenyl including unsubstituted phenyl or having 1-3 substituents Substituted phenyl group, the substituent is selected from the group consisting of: halogen, C1-C10 alkyl, cyano, OH, nitro, C3 ⁇ C10 cycloalkyl, C1 ⁇ C10 alkoxy, amino.
  • C1 to C10 alkyl means a straight or branched alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, Tert-butyl, or a similar group.
  • C3 to C10 cycloalkyl means a cycloalkyl group having 3 to 10 carbon atoms, such as a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cycloheptyl group, or the like.
  • C2 ⁇ C10 alkenyl refers to an alkenyl group having 1 to 10 carbon atoms, such as ethenyl, propenyl, isopropenyl, butenyl, isobutenyl, sec-butenyl, tert-butenyl, or the like. Group.
  • C2 ⁇ C10 alkynyl refers to an alkynyl group having 1 to 10 carbon atoms, such as ethynyl, propynyl, isopropynyl, butynyl, isobutynyl, sec-butynyl, tert-butyne Base, or a similar group.
  • C6-C10 aryl means an aryl group having 6 to 10 carbon atoms, and includes a monocyclic or bicyclic aryl group such as a phenyl group, a naphthyl group, or the like.
  • C1 to C10 heteroaryl means a heteroaryl group having 1 to 10 carbon atoms, such as a pyrrolyl group, a pyridyl group, a furyl group, or the like.
  • C1 ⁇ C10 alkoxy refers to a straight or branched alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms, such as methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, iso Butoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, or the like.
  • C6-C10 aryl-oxy refers to a straight or branched aryl-oxy group having 6 to 10 carbon atoms, such as phenyl-oxy, naphthyl-oxy, or the like.
  • C1 ⁇ C10 heteroaryl-oxy refers to a straight or branched heteroaryl-oxy group having 1 to 10 carbon atoms, such as pyridyl-oxy, furyl-oxy, or the like. .
  • C1 to C10 acyl means a group having a “-CO-alkyl” structure, preferably having a structure of "-CO-C1 to C10 alkyl", such as a methylacyl group, an ethyl acyl group, a propyl acyl group, and a different group.
  • C1 to C10 ester group means a group having an alkyl-COO-structure, preferably having a C1 to C10 alkyl-COO- structure, such as CH 3 COO-, C 2 H 5 COO-, C 3 H 8 COO-, (CH 3 ) 2 CHCOO-, "C 4 H 9 COO-, tC 4 H 9 COO-, or the like.
  • C1 to C10 sulfonyl means a group having a structure of "-SO 2 -alkyl", preferably having a structure of "-SO 2 -C1 to C10 alkyl", such as methylsulfonyl group, ethylsulfonyl group, Propylsulfonyl, isopropylsulfonyl, butylsulfonyl, isobutylsulfonyl, sec-butylsulfonyl, tert-butylsulfonyl, or the like.
  • C1 to C20 heterocycloalkyl means a heterocycloalkyl group having 1 to 20 carbon atoms such as an epoxyethyl group, a tetrahydrofuranyl group, a tetrahydropyrrolyl group, or the like.
  • halogen means? , Cl, Br and I. Anagre and its uses
  • anagrelide As used herein, the terms “anagrelide”, “Anagrelide”, “Anguining”, “ANA” are used interchangeably and refer to a compound having the structure shown below, or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof. , or its preparation form:
  • the anagrelide is 6,7-dichloro-1,5-dihydroimidazo[2,1-b]quinazoline-2(3H)one.
  • anagrelide is clinically used as a phosphodiesterase inhibitor for the treatment of anti-thrombocytopenia.
  • the present invention provides a novel use of anagrelide or a pharmaceutically acceptable formulation thereof for inhibiting tumors, and in particular, the novel uses provided by the present invention include:
  • the anagrelide or a pharmaceutical composition thereof can be administered at a lower concentration.
  • the anagrelide can act on a subject cell at a concentration of ⁇ lmM/L and produce a desired effect.
  • the invention also provides the use of a class of anagrelide derivatives, optical isomers thereof, or pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof.
  • ⁇ R 8 are each independently selected from the group consisting of: a hydrogen atom, a halogen atom, an amino group, a hydroxyl group, a cyano group, an aldehyde group, a nitro group, a carboxyl group (-COOH), a substituted or unsubstituted C1 to C10 alkyl group, a substituted or not Substituted C3 ⁇ C10 cycloalkyl, substituted or unsubstituted C2 ⁇ C10 alkenyl, substituted or unsubstituted C2 ⁇ C10 alkynyl, substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 a heteroaryl group (such as a substituted or unsubstituted 5 or 6 membered heterocyclic ring, an 8 to 10 membered heteroaryl ring system), a substituted or unsubstituted C1 to C10 alkoxy group,
  • R 9 is selected from the group consisting of a hydrogen atom, an oxygen atom, a substituted or unsubstituted C1 to C10 alkyl group, a substituted or unsubstituted C3 to C10 cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted C6 to C10 aryl group, a substituted or not Substituted C1 ⁇ C10 heteroaryl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C10 alkoxy, substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl-oxy, substituted or unsubstituted acyl (preferably -CO-C1 ⁇ C10) Alkyl), substituted or unsubstituted C1 to C10 sulfonyl;
  • one or more hydrogen atoms on the substituent group are substituted with a substituent selected from the group consisting of C1 to C10 alkyl, C3 to C10 cycloalkyl, C1 to C10 alkoxy, halogen, hydroxy, carboxy ( -COOH), C1 ⁇ C10 aldehyde group, C2 ⁇ C10 acyl group, C2 ⁇ C10 ester group, amino group, phenyl group;
  • the phenyl group includes an unsubstituted phenyl group or a substituted phenyl group having 1-3 substituents selected from the group consisting of: halogen, C1-C10 alkyl group, cyano group, OH, nitro group, C3 ⁇ C10 Cycloalkyl, C1 to C10 alkoxy, amino.
  • the ⁇ are each independently selected from the group consisting of: a hydrogen atom, a halogen atom, an amino group, a hydroxyl group, a cyano group, a nitro group, an amino group, an aldehyde group, a carboxyl group, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkane.
  • a substituted or unsubstituted C3 ⁇ C6 cycloalkyl group a substituted or unsubstituted C2 ⁇ C5 alkenyl group, a substituted or unsubstituted C2 ⁇ C5 alkynyl group, a substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl group, substituted or not a substituted C1 ⁇ C6 heteroaryl group, a substituted or unsubstituted C1 ⁇ C5 alkoxy group, a substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl-oxy group, a substituted or unsubstituted C1 ⁇ C6 heteroaryl-oxy group, Substituted or unsubstituted -CO-Cl ⁇ C5 alkyl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C5 alkyl-COO-, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C5 sulfonyl; or R n R 2 , R 3 and
  • R 9 is selected from the group consisting of a hydrogen atom, an oxygen atom, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkyl group, a substituted or unsubstituted C3 to C6 cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted C6 to C10 aryl group, a substituted or not Substituted C1 ⁇ C10 heteroaryl, substituted or unsubstituted C1 ⁇ C5 alkoxy, substituted or unsubstituted C6 ⁇ C10 aryl-oxy, substituted or unsubstituted-CO-Cl ⁇ C5 alkyl, substituted Or unsubstituted C1 ⁇ C5 sulfonyl;
  • each is independently selected from the group consisting of a hydrogen atom, a halogen atom, a cyano group, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkyl group, a substituted or unsubstituted C3 to C6 cycloalkyl group;
  • R 2 , R 3 and R 4 together constitute a group selected from the group consisting of a substituted or unsubstituted C1 to C5 cycloalkyl group, a substituted or unsubstituted C1 to C5 heterocycloalkyl group, a carbonyl group;
  • R 9 is selected from the group consisting of: a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted C1 to C5 alkyl group, a substituted or unsubstituted C3 to C6 cycloalkyl group;
  • 1 to 8 of R to R 9 are a hydrogen atom, and preferably 2 to 7 are a hydrogen atom.
  • 1 to 8 of the above ⁇ are halogen atoms.
  • 1 to 8 of the ⁇ are halogen atoms, and the other ⁇ are each a hydrogen atom.
  • the pharmaceutically acceptable salt is a salt selected from the group consisting of hydrochloride, acetate, phosphate, or a combination thereof.
  • the present invention provides novel uses of a compound of formula I, a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, and a pharmaceutically acceptable formulation thereof for inhibiting tumors, and in particular, the novel uses provided by the present invention include:
  • the term "pharmaceutically acceptable salt” refers to a salt of a compound of the invention with a pharmaceutically acceptable inorganic and organic acid, including: hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, nitric acid, sulfuric acid; Acids include: formic acid, acetic acid, propionic acid, succinic acid, naphthalene disulfonic acid (1,5), asiamic acid, oxalic acid, tartaric acid, lactic acid, salicylic acid, benzoic acid, valeric acid, diethyl acetic acid, propylene Acid, succinic acid, fumaric acid, pimelic acid, adipic acid, maleic acid, malic acid, sulfamic acid, phenylpropionic acid, gluconic acid, ascorbic acid, nicotinic acid, isonicotinic acid, methanesulfonic acid, Toluenesulfonic acid, citric acid, and
  • pharmaceutically acceptable prodrug refers to a compound which is inactive in vitro but which is capable of being converted in vivo to the active substance of formula I to exert its pharmacological action.
  • the invention also provides a pharmaceutical composition having significant anti-tumor efficacy, comprising a therapeutically effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and one or more pharmaceutically acceptable salts Carrier.
  • the pharmaceutical composition comprises a therapeutically effective amount of anagrelide hydrochloride, and one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • the compound itself or a mixture of a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable excipient, diluent or the like may be orally administered in the form of a tablet, a capsule, a granule, a powder or a syrup or may be administered orally in the form of an injection. Dosing.
  • the pharmaceutical composition preferably contains, as an active ingredient, a compound of the formula I of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an amount of from 0.01% to 99% by weight, more preferably from 0.1% to 90% by weight of the active ingredient.
  • the above formulations can be prepared by conventional pharmaceutical methods.
  • useful pharmaceutical adjuvants include excipients (e.g., saccharide derivatives such as lactose, sucrose, glucose, mannitol, and sorbitol; starch derivatives such as corn starch, potato starch, dextrin, and carboxymethyl starch; Cellulose derivatives such as crystalline cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, calcium carboxymethyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose; gum arabic; dextran; silicate derivatives such as magnesium metasilicate Aluminum; phosphate derivatives such as calcium phosphate; carbonate derivatives such as calcium carbonate; sulfate derivatives such as calcium sulfate; etc.; binders (eg gelatin, polyvinylpyrrolidone and polyethylene glycol;), disintegration Agents (such as cellulose derivatives such as sodium carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone;), lubricants (such as talc, calcium stearate, magnesium stearate,
  • the amount of the compound of the present invention, a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, or a pharmaceutical composition thereof varies depending on the age, sex, race, condition, and the like of the patient.
  • the daily dose for a typical adult is from about 10 mg to about 2000 mg, preferably from 50 mg to about 1000 mg.
  • the invention provides a method of modulating a cell cycle agent, the method comprising administering to a subject cell an effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I.
  • the compound of formula I can be used to block the cell cycle, such as for inducing cells to produce G1, G2 cycle arrest, thereby regulating the cell cycle of the cell, or changing the progression of cell division.
  • the compound of formula I or a pharmaceutical composition thereof can selectively modulate the cell cycle of a part of cells, but does not induce a cycle arrest for other non-sensitive cells.
  • the compound of formula I or a pharmaceutical composition thereof is used to modulate the cell cycle of tumor cells.
  • the tumor cells are tumor cells selected from the group consisting of Hela, H4, FHCC98, SMMC772 BEL7404, A498, SW1116, MDA-MB-23 MDA-MB-468, DU145, U87-MG, Wi38, H1299 cells, or a combination thereof; preferably selected from the group consisting of Hela, H4, FHCC98, SMMC7721 cells, or a combination thereof.
  • the compound of formula I can act on the cells at a lower concentration, preferably at a concentration of 1 mM/L, and induce or regulate the cell cycle of the cells to produce a cycle arrest.
  • the effective concentration of the compound of formula I is 0.01 nM/L-lmM/L, preferably 0.1 nM/L-50 ( ⁇ M/L, most preferably
  • the action time of the compound of the formula I is not particularly limited, and may be 21; ⁇ 30 days.
  • the duration of action of the compound of formula I differs depending on the environment of action and the subject of action.
  • the compound of formula I has an action time of from 2 to 96 hours. In another preferred embodiment, the compound of formula I has an action time of from 1 to 30 days.
  • the invention provides a method of inducing apoptosis or inhibiting cell growth, the method comprising administering to a subject cell an effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I.
  • the compound of formula I or a pharmaceutical composition thereof can selectively induce partial apoptosis or inhibit partial cell growth without inhibiting the growth of other non-sensitive cells.
  • the compound of formula I or a pharmaceutical composition thereof is for use in regulating the cell cycle of tumor cells.
  • the tumor cells are tumor cells selected from the group consisting of Hela, H4, FHCC98, SMMC772 U BEL7404, A498, SW1116, MDA-MB-231, MDA-MB-468, DU145, U87-MG, Wi38 , H1299 cells, or a combination thereof; most preferred subject tumor cells are selected from the group consisting of Hela, H4, FHCC98, SMMC7721 cells, or a combination thereof.
  • the compound of formula I can act on the target cell at a lower concentration, preferably at a concentration of 100 mM/L, and induce or regulate the cell cycle of the cell, producing a periodic block.
  • the compound of formula I has an effective concentration of from 0.01 nM/L to 1 mM/L, preferably from 0.1 nM/L to 50 ( ⁇ M/L, most preferably lnM/L-10). ( ⁇ M/L.
  • the action time of the compound of the formula I is not particularly limited, and may be 21; ⁇ 30 days.
  • the duration of action of the compound of formula I differs depending on the environment of action and the subject of the action.
  • the compound of formula I has an action time of from 2 to 96 hours.
  • the compound of formula I is used for a period of from 1 to 30 days.
  • Antitumor drug (pharmaceutical composition) and preparation thereof are not particularly limited, and may be 21; ⁇ 30 days.
  • the duration of action of the compound of formula I differs depending on the environment of action and the subject of the action.
  • the compound of formula I has an action time of from 2 to 96 hours.
  • the compound of formula I is used for a period of from 1 to 30 days.
  • the invention provides a method of inducing apoptosis or inhibiting cell growth, the method comprising administering to a subject cell an effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I.
  • the pharmaceutical composition comprises: (a) a therapeutically effective amount of a compound of formula I; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the tumor comprises: cervical cancer, glioma, liver cancer.
  • the compound of formula I has an effective concentration of from 0.01 nM/L to 1 mM/L, preferably from 0.1 nM/L to 50 ( ⁇ M/L, most preferably lnM/L-10). ( ⁇ M/L.
  • the invention also provides a method of preparing an anti-tumor drug or pharmaceutical composition, the method comprising: mixing a therapeutically effective amount of a compound of formula I with a pharmaceutically acceptable carrier to form a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition further comprises a component selected from the group consisting of a tumor suppressor, a tumor apoptosis inducing agent, or a combination thereof.
  • Administration of a therapeutically effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I to a subject can treat or inhibit the tumor.
  • the main advantages of the invention include:
  • anagrelide of the present invention and its derivatives have very good antitumor effects.
  • anagrelide can significantly inhibit the growth of tumor cells, while for non-sensitive cell lines, when the concentration is increased to 1mM/L, it will not cause any growth inhibition. It shows that it has strong specificity and selectivity for the target, and has great application value and advantages in clinical application.
  • the invention is further illustrated below in conjunction with specific embodiments. It is to be understood that the examples are merely illustrative of the invention and are not intended to limit the scope of the invention.
  • Anagre l ide is purchased from Hydrazine, dimethyl sulfoxide (
  • the antibodies used in the study were as follows: Rabbit anti-PARP was purchased from CST, and mouse anti-tubul in was purchased from Santa.
  • H1299 ATCC Human lung cancer cells PRMI1640+10%FBS and above were cultured in a 37 °C cell culture chamber containing 5% CO 2 , and the cells were tested in the logarithmic growth phase.
  • Transfer film semi-dry method: The film voltage is 10 ⁇ 15V, and the time is adjusted according to the protein size;
  • Blocking Block with TBST containing 5% skim milk at room temperature for 1 hour at room temperature; 5) Combine primary antibody: 1:2000 ⁇ 1: 10000 diluted antibody with 5% BSA in TBST, room temperature The mixture was shaken on a bleaching shaker for 1 hour, 4 Q C overnight. Wash TBST three times, each time for 10 minutes;
  • Binding secondary antibody 1:5000 ⁇ 1: 10000 diluted antibody was incubated in TBST containing 5% BSA, and placed in a decolorizing shaker at room temperature for 1 hour. Wash TBST three times, every 10 minutes.
  • the cells in the logarithmic growth phase were inoculated into 96-well culture plates at a suitable density, 100 ⁇ L per well, and cultured overnight, and then added with different concentrations of drugs for 72 hours, and each concentration was set to three replicate wells. After the end of the action, add 20 ⁇ M/well of MTT (5 mg/ml in PBS) to each well for 3-5 hours, then drain the medium and add 100 ul/well. DMS0, placed in a bleaching shaker and shaken for 10 minutes until the blue-purple crystalline formazan (Formazan) was completely dissolved. The OD (Optical Density) value was detected by a microplate reader (detection wavelength 595 nM, reference wavelength 650 nM).
  • the cells growing in the log phase were seeded in a 6-well culture plate at a concentration of 5 X l OVmL, and 1.5 mL of the culture medium per well, and cultured overnight. After adding a different concentration of the drug for a certain period of time, the cells were collected into a 1.5 mL EP tube. Rinse the cells twice with pre-cooled PBS, add a little PBS (about 200 ul), and mix well. Pre-cooled lmL75% ethanol (prepared in PBS), and add cells to the alcohol while shaking on the shaker. Fix at 4 °C overnight. After centrifugation at 1000 r/m for 5 min, the supernatant was discarded and washed twice with l-2 mL PBS.
  • the cells were suspended in 0.5 mL RNaseA ( 1. Omg/ml) PBS and digested at 37 °C for 1 h.
  • the cells were resuspended in 0.5 mL of 25 ug/mL PI stain and protected from light for 30 min at 4 °C.
  • the cell cycle distribution was analyzed by flow cytometry using a 300 mesh cell strainer.
  • the cells in the logarithmic growth phase were seeded in a 6-well culture plate at a concentration of 5 X 10 5 /mL, and cultured overnight.
  • the cells were stimulated by different concentrations of the drug, and the cells were collected for apoptosis using Kekki Biotechnology's Annexin V/PI-FITC Apoptosis Detection Kit.
  • the specific steps are as follows: Collect the cells with a 1.5 mL centrifuge tube and wash the cells twice with PBS. Add 500ul Binding Buffer suspension cells, add 5ul Annexin V- FITC, and add 5ul PI to mix. Reactive reaction at room temperature for 15 min. Apoptosis was detected by flow cytometry.
  • the cells in the logarithmic growth phase were trypsinized, centrifuged and resuspended, and 3. 5 X 107 mL per well was inoculated into a 16-well plate equipped with a real-time monitor of the cells, and incubated at 37 ° C overnight.
  • the real-time monitor automatically monitors the cell growth status and responds to the number of cells depending on the size of the resistance formed by the cell spreading. The larger the cell index value, the faster the cells grow and the more cells.
  • the cells in the logarithmic growth phase are spread according to 120 X 107 mL cell plate, so that the cells are evenly spread across the six-well plate and incubated at 37 °C. overnight. Replace with fresh medium without serum.
  • the cells are starved for 10 hours, scratch the horizontal line of the gun head perpendicular to the bottom of the six-well plate, rinse with serum-free medium for 3 times, rinse the suspension cells, and add serum-free.
  • the medium was photographed at 0, 2, 6, 12, and 24 hours, and the cell movement distance was calculated using Image J.
  • Anagrelide anti-tumor effect on tumor cells from different tissue sources in vitro By screening more than 500 FDA-approved non-anticancer drugs, it was found that the small molecule compound Anagrelide has a growth inhibitory effect on a variety of tissue-derived tumor cells, and its structural formula is 6,7-dichloro- 1, 5-dihydroimidazo[2,1-b]quinazoline-2 (3H) ketone ( Figure 1).
  • Tumor cells from different tissue sources were selected.
  • concentrations of Anagrelide were ⁇ ⁇ ⁇ and 50 ⁇ ⁇ respectively.
  • the 0 value was measured and the cell survival rate was calculated.
  • the tumor spectrum is shown in Figure 2.
  • Anagrelide concentration of ⁇ ⁇ ⁇ can produce significant growth inhibition; for MDA-MB-231, MDA-MB- 468, DU145 , U87- MG, Wi38, H1299 cells, Anagrelide can also inhibit growth when the concentration is 50 ⁇ .
  • Anagrelide produces different anti-tumor effects on different tumor cells.
  • Angrel ide through cell real-time monitors, He la, H4, FHCC98, SMMC7721, BEL7404, A498
  • SW1116 monitors the change in cell growth status within 72 hours of the administration of Anagre 1 i de ( Figure 3).
  • the cells were 3000/lOOuL plate, and after culturing overnight, ⁇ Anagrel ide was added to monitor the cell growth status in real time.
  • the red line is the DMS0 control group and the green line is the dosing group.
  • Tumor cells are a type of cells whose cycle is not normally regulated and can proliferate indefinitely.
  • anti-tumor chemotherapy drugs commonly used in clinical practice, some drugs have been used as cell cycle arresters to inhibit tumor cell growth and achieve anti-tumor effects.
  • H4 and FHCC98 cells as examples to detect the effect of Anagrelide on the apoptotic pathway by Western Blot.
  • H4 cells and FHCC98 cells were dosed at different time points, drug concentration ⁇ , and Western Blot was used to detect PARP shear.
  • Angrelide can induce cycle arrest of all sensitive cells.
  • Sensitive cells such as HeLa, H4, S ⁇ C7721, and F3 ⁇ 4CC98 have very strong cell cycle arrest. When cells are arrested for a long period of time, apoptosis eventually occurs. While sensitive cells such as SW1116, A498 and Bel7404 still maintain slow growth, they also have obvious cycle arrest, indicating that Angrelide can also induce cell cycle arrest of these tumor cells.
  • HeLa cells were used as an example to detect whether Anagrelide can affect tumor cell migration by cell scratch assay.
  • Example 2 Anagrelide inhibits human H4 xenografts
  • Cremophor EL was purchased from Sigma, Cat. No. C5135; 95% medicinal ethanol was purchased from Shanghai Yifu Biotechnology Co., Ltd.
  • BALB/c nude mice female, weighing 16-17 g, purchased from Shanghai Slack Laboratory Animal Co., Ltd. (license number: SCXK (Shanghai) 2012-0002), breeding environment: SPF animal room, free feeding, 12h light /12h dark.
  • the ligation volume is 0. lmL.
  • the inoculation volume is 0. lmL.
  • the diameter of the transplanted tumor was measured with a vernier caliper.
  • each of the drug-administered groups showed significant tumor-inhibiting effects in a dose-dependent manner (Fig. 9, Fig. 10).
  • the tumor weight of each drug-administered group was significantly lower than that of the vehicle control group, and the tumor weight of the Anagrelide II (30 mg/kg) group was smaller than that of the Anagrelide I (10 mg/kg) group, indicating that the effect of Anagrelide on tumor weight was dose-dependent. .
  • Anagrelide has been on the market for 16 years in the United States as a drug against thrombocytopenia. The drug has been on the market so far, and no serious side effects have been found. After screening, the inventors first unexpectedly discovered and confirmed that Anagrelide has a good anticancer activity, can significantly inhibit the cell cycle of cancer cells at a very low concentration, and finally induce apoptosis of cancer cells. All documents mentioned in the present application are hereby incorporated by reference in their entirety in their entireties in the the the the the the the the the the the the the the the the the the. In addition, it is to be understood that various modifications and changes may be made by those skilled in the art in the form of the appended claims.

Abstract

本发明提供了阿那格雷及其衍生物的抗肿瘤用途，具体地，本发明提供了阿那格雷及其衍生物的在制备治疗或抑制肿瘤的药物或药物组合物中的用途。

Description

阿那格雷及其衍生物的抗肿瘤用途
技术领域
本发明涉及药物领域， 具体地， 本发明提供了药物阿那格雷及其衍生物在的 抗肿瘤的用途 背景技术
癌症已经成为威胁人类健康的第二大疾病，而目前人类依旧没有很好的办法治疗 癌症。 已知人类基因组共有 30,000个基因， 已知的药物作用靶点约有 200个， 从基 因组推测的理论靶点约 2000个， 而临床上已有药物约为 10,000种， 包括 1200种不 同的结构类型。 因此， 目前已经拥有大量的化合物来针对人体内各种功能和结构各异 的靶点蛋白， 且这些已经上市的药物具有已被证明的安全性和良好的生物利用度。
阿那格雷（Anagrelide) 又称安归宁， 其结构式为 6,7-二氯 -1,5-二氢咪唑并 [2,1-b] 喹唑啉 -2(3H)酮， 1997年 3月在美国上市， 作为磷酸二酯酶抑制剂， 用于治疗抗血小 板增多症。 早在 1979年， 美国科学家 J.S.Fleming和 J.P.Buyniski发现， 新型小分子 化合物 BL-4162A (Anagrelide)在动物试验中表现出显著的抗血栓功能。 随后的研究 发现， Anagrelide能抑制磷酸二酯酶 (PDE)的活性， 提高细胞内 cAMP的含量， 从而 影响血细胞的增殖、 成熟、 分化等功能。 然而， 阿那格雷 （Anagrelide ) 在治疗肿瘤 中的作用和应用尚未见报道。 因此， 本领域尚没有阿那格雷或其衍生物在肿瘤治疗方 面的应用。
鉴于目前尚缺乏令人满意的有效治疗肿瘤的方法， 因此本领域迫切需要开发新的 治疗肿瘤的药物。 发明内容
本发明提供了一种药物阿那格雷（Anagrelide )及其衍生物在用于肿瘤治疗中 的新用途。
本发明的第一方面， 一种式 I化合物， 其光学异构体， 或其药学上可接受的盐 或前药的用途， 用于制备治疗或抑制肿瘤和 /或抑制肿瘤细胞生长的药物或药物组合 物；
Figure imgf000002_0001
(I) 其中，
Ri, R2、 R3、 R4、 R5、 R6、 R7和 R8各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氨基、 羟基、 氰基、 醛基、 硝基、 羧基、 取代或未取代的 C1〜C10烷基、 取代或 未取代的 C3〜C10环烷基、取代或未取代的 C2〜C10烯基、取代或未取代的 C2〜C10 炔基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳基、 取代或 未取代的 C1〜C10烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳基-氧基、 取代或未取代的 C1〜C10酰基、 取代或未取代的 C1〜C10 酯基、 取代或未取代的 C1〜C10磺酰基；
或 1^和 1 2共同构成， 和 /或 R3和 R4共同构成选自下组的基团： 取代或未取 代的 C3〜C20环烷基、 取代或未取代的 C1〜C20杂环烷基、 =0;
R9选自下组： 氢原子、 氧原子、 取代或未取代的 C1〜C10烷基、 取代或未取 代的 C3〜C10环烷基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10 杂芳基、 取代或未取代的 C1〜C10烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或未取代的酰基、 取代或未取代的 C1〜C10磺酰基；
其中， 所述取代指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：
C1〜C10烷基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、 卤素、 羟基、 羧基、 C1〜C10醛 基、 C2〜C10酰基、 C2〜C10酯基、 氨基、 苯基；
所述的苯基包括未取代的苯基或具有 1-3个取代基的取代苯基， 所述取代基 选自： 卤素、 C1-C10烷基、 氰基、 OH、 硝基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、 氨基。
在另一优选例中， 所述 、 R2、 R3、 R4 、 R5、 R6、 R7和 R8各自独立地选自 下组： 氢原子、 卤素原子、 氨基、 羟基、 氰基、 硝基、 氨基、 醛基、 羧基、 取代 或未取代的 C1〜C5烷基、取代或未取代的 C3〜C6环烷基、取代或未取代的 C2〜C5 烯基、 取代或未取代的 C2〜C5炔基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取 代的 C1〜C6杂芳基、 取代或未取代的 C1〜C5烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10 芳基-氧基、 取代或未取代的 C1〜C6杂芳基-氧基、 取代或未取代的 -CO-Cl〜C5烷 基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基 -COO-、 取代或未取代的 C1〜C5磺酰基； 或 和 R2、 R3和 R4共同构成选自下组的基团： 取代或未取代的 C3〜C10环烷基、 取 代或未取代的 C1〜C10杂环烷基、 羰基；
R9选自下组： 氢原子、 氧原子、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代或未取代 的 C3〜C6环烷基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳 基、 取代或未取代的 C1〜C5烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或 未取代的 -CO-Cl〜C5烷基、 取代或未取代的 C1〜C5磺酰基；
其中， 所述取代的定义如上所述。
在另一优选例中， 〜R8各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氰基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代或未取代的 C1〜C5烷氧基、 取代或未取代的 C3〜C6环烷基；
或 1^和 1 2共同构成， 和 /或 R3和 R4共同构成选自下组的基团： 取代或未取 代的 C1〜C5环烷基、 取代或未取代的 C1〜C5杂环烷基、 羰基；
R9选自下组： 氢原子、取代或未取代的 C1〜C5烷基、取代或未取代的 C3〜C6 环烷基；
其中， 所述取代的定义如上所述。
在另一优选例中， 所述的 R 〜R9中的 1〜8个为氢原子， 较佳地 2〜7个为氢原 子。
在另一优选例中， 所述的 〜 中的 1〜8个为卤素原子。
在另一优选例中， 所述的 〜 中的 1〜8个为卤素原子， 且其他 〜 均为 氢原子。
在另一优选例中， 所述 如式 II所示的结构：
Figure imgf000004_0001
在另一优选例中， 所述的药学上可接受的盐为选自下组的盐： 盐酸盐、 醋酸 盐、 磷酸盐， 或其组合。
在另一优选例中，所述的药物组合物包括： (a) 治疗有效量的阿那格雷；和 (b) 药 学上可接受的载体。
在另一优选例中， 所述阿那格雷的有效浓度为 0.01nM/L-lmM/L， 较佳地为 0.1nM/L-50(^M/L， 最佳地为 lnM/L-10(^M/L。
在另一优选例中， 所述药物组合物中阿那格雷的含量为 0.01— 99wt%， 较佳地 为 0.1-90wt%。
在另一优选例中， 所述药物或药物组合物还用于诱导肿瘤细胞凋亡。 在另一优选例中， 所述药物或药物组合物还用于干扰肿瘤细胞增殖。 在另一优选例中， 所述药物或药物组合物还用于调控肿瘤细胞的细胞周期； 和 / 或
所述药物或药物组合物还用于阻滞细胞周期。
在另一优选例中， 所述药物或药物组合物用于诱导肿瘤细胞产生 Gl、 G2周期阻 滞。
在另一优选例中， 所述药物或药物组合物还用于抑制肿瘤细胞的转移。
在另一优选例中， 所述的肿瘤或肿瘤细胞选自： 肝癌、 宫颈癌、 神经胶质瘤、 结 肠癌、 肾癌、 乳腺癌、 肺癌、 前列腺癌、 胰腺癌、 皮肤癌、 鼻咽癌、 食道癌、 胃癌、 卵巢癌、 黑色素瘤。
在另一优选例中，所述的肿瘤细胞选自下组： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC772 BEL7404、 A498、 SW1116, MDA-MB-23 K MDA-MB-468, DU145、 U87-MG、 Wi38、 H1299, 或其组合。
在另一优选例中， 所述肿瘤细胞选自下组： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC772 或其组合。
本发明的第二方面， 提供了一种细胞周期阻滞剂， 所述阻滞剂包含有效量的所述 的式 I化合物， 或其药学上可接受的盐或前药， 或其药物组合物。
在另一优选例中， 所述的式 I化合物为阿那格雷。
在另一优选例中， 所述阻滞剂被用于诱导肿瘤细胞产生 Gl、 G2周期阻滞。 在另一优选例中， 所述阻滞剂还包含载体。
在另一优选例中， 所述载体为药学上可接受的载体。
本发明的第三方面， 提供了一种体外非治疗性调节细胞周期的方法， 所述方法包 括步骤： 在含有有效量的所述式 I化合物， 或其药学上可接受的盐或前药， 或其药物 组合物的培养体系中培养所述细胞。
在另一优选例中， 所述的式 I化合物为阿那格雷。
在另一优选例中， 在含有有效量阿那格雷盐酸盐的培养体系中培养所述细胞。 在另一优选例中， 所述细胞为肿瘤细胞， 较佳地所述肿瘤细胞选自： 肝癌、 宫颈 癌、 神经胶质瘤、 结肠癌、 肾癌、 乳腺癌、 肺癌、 前列腺癌、 胰腺癌、 皮肤癌、 鼻咽 癌、 食道癌、 胃癌、 卵巢癌、 黑色素瘤。
在另一优选例中， 所述肿瘤细胞选自下组： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC772
BEL7404、 A498、 SW1116, MDA-MB-23 K MDA-MB-468, DU145、 U87-MG、 Wi38、 H1299细胞，或其组合； 更佳地选自下组： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC7721 细胞， 或其组合。
在另一优选例中， 所述式 I化合物或其药学上可接受的盐或前药的有效浓度为 O.OlnM/L-lmM/L, 较佳地为 0.1nM/L-50(^M/L， 最佳地为 lnM/L-10(^M/L。
在另一优选例中， 所述式 I化合物的作用时间为 2〜96h。
在另一优选例中， 所述式 I化合物的作用时间为 1〜30天。
本发明的第四方面，提供了一种体外非治疗性抑制细胞生长或诱导细胞凋亡的 方法， 所述方法包括步骤： 在含有有效量的所述式 I化合物， 或其药学上可接受的 盐或前药， 或其药物组合物的培养体系中配所述细胞。
在另一优选例中， 所述的式 I化合物为阿那格雷。
在另一优选例中， 所述细胞为肿瘤细胞。
在另一优选例中， 所述式 I化合物的有效浓度为 0.01nM/L-lmM/L， 较佳地为 0.1ηΜ/Ι^-500μΜ， 最佳地为 1ηΜ/Ι^-100μΜ。
在另一优选例中， 当作用于生物体体外时，所述式 I化合物的作用时间为 2〜96h。 在另一优选例中， 当作用于生物体体内时， 所述式 I化合物的作用时间为 1〜360 天， 较佳地为 1〜180天， 更佳地为 1〜60天， 最佳地为 1〜30天。
本发明的第五方面， 提供了一种制备抗肿瘤药物的方法， 所述方法包括： 将治疗 有效量的所述式 I化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合， 从而形成药物组合物。
在另一优选例中， 所述的式 I化合物为阿那格雷。
在另一优选例中， 所述药物组合物还包括选自下组的组分： 肿瘤抑制剂、肿瘤凋 亡诱导剂， 或其组合。
本发明的第六方面， 提供了一种治疗肿瘤的方法， 所述方法包括： 对需要治疗的 对象施用治疗有效量的所述式 I化合物， 其光学异构体， 或其药学上可接受的盐或前 药， 或其药物组合物。
本发明的第七方面， 提供了一种用于治疗或抑制肿瘤的药物组合物， 所述的药物 组合物含有 (a)药学上可接受的载体和 (b)式 I化合物， 其光学异构体， 或其药学上可接 受的盐或前药，
Figure imgf000006_0001
式中， 各基团的定义如上所述。
在另一优选例中， 所述的药物组合物的剂型为口服剂型、 注射剂型。 本发明的第八方面， 提供了一种式 I化合物， 其光学异构体， 或其药学上可接 受的盐或前药用于制备组合物的用途， 所述组合物用于 « 抑制肿瘤细胞生长； （ii)诱 导肿瘤细胞凋亡； （； iii)干扰肿瘤细胞增殖； （iv)调控肿瘤细胞的细胞周期； （ 诱导肿 瘤细胞产生 Gl、 G2周期阻滞； 和 /或 (vi)抑制肿瘤细胞的转移。
在另一优选例中， 所述的组合物为药物组合物。 应理解， 在本发明范围内中， 本发明的上述各技术特征和在下文 (；如实施例） 中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。 限于篇幅， 在此不再一一累述。 附图说明
图 1显示了 Anagrelide的化学结构示意图；
图 2显示了 Anagrelide对肿瘤细胞的生长抑制瘤谱， 其中：
图 2 A显示了 Anagrelide ΙμΜ的生长抑制瘤谱；
图 2 Β显示了 Anagrelide 50μΜ的生长抑制瘤谱；
图 3显示了细胞实时检测结果及 Anagrelide对不同细胞株的 IC50值； 细胞 3000个 /lOOuL点板， 培养过夜后加入 100nM Anagrelide, 使用罗氏公司细胞实时 监控仪监测细胞生长状况。 红色线条为 DMSO对照组， 绿色线条为加药组。
图 4显示了流式细胞仪检测 100nM Anagrelide 作用于细胞 24小时后细胞周 期的分布图；
图 5显示了流式细胞仪检测结果的统计图；
图 6显示了药物浓度 ΙΟΟηΜ, H4、 FHCC98细胞不同时间点给药后收样， Western Blot检测 PARP剪切的结果图。
图 7显示了 Anagrelide对肿瘤细胞迁移的影响
图 8显示了 Anagrelide对肿瘤荷瘤裸鼠体重的影响；
图 9显示了 Anagrelide对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响；
图 10显示了 Anagrelide对荷瘤裸鼠肿瘤重量的影响；
图 11显示了 Anagrelide对荷瘤裸鼠血常规检测的影响； 其中，
图 11 A显示了 Anagrelide对白细胞的影响；
图 11 B显示了 Anagrelide对红细胞的影响；
图 11 C显示了 Anagrelide对血红蛋白的影响；
图 11 D显示了 Anagrelide对血小板的影响。 其中，图 8-11中， model表示模型动物组， Anagrelide I表示给药剂量 10mg/kg 的给药组 I， Anagrelide II表示给药剂量 30mg/kg的给药组 II。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究， 通过对大量化合物的筛选， 首次意外地发 现市售的常规用于抗血小板增多症治疗的药物阿那格雷可用于治疗肿瘤， 能够起 到抑制肿瘤细胞生长， 改变细胞周期的作用， 具有抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤 细胞死亡的优异效果。 基于上述发现， 发明人完成了本发明。 术语
如本文所用， 术语 "取代" 指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代 基取代： C1〜C10烷基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、卤素、羟基、羧基（-COOH)、 C1〜C10醛基、 C2〜C10酰基、 C2〜C10酯基、 氨基、 苯基； 所述的苯基包括未取 代的苯基或具有 1-3个取代基的取代苯基， 所述取代基选自： 卤素、 C1-C10烷基、 氰基、 OH、 硝基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、 氨基。
术语 " C1〜C10烷基" 指具有 1〜10个碳原子的直链或支链烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基、 或类似基团。
术语 " C3〜C10环烷基" 指具有 3〜10个碳原子的环烷基， 例如环丙基、 环丁 基、 环戊基、 环庚基、 或类似基团。
术语 " C2〜C10烯基" 指具有 1〜10个碳原子的烯基， 例如乙烯基、 丙烯基、 异丙烯基、 丁烯基、 异丁烯基、 仲丁烯基、 叔丁烯基、 或类似基团。
术语 " C2〜C10炔基" 指具有 1〜10个碳原子的炔基， 例如乙炔基、 丙炔基、 异丙炔基、 丁炔基、 异丁炔基、 仲丁炔基、 叔丁炔基、 或类似基团。
术语 " C6〜C10芳基" 指具有 6〜10个碳原子的芳基， 包括单环或二环芳基， 例如苯基、 萘基， 或类似基团。
术语 " C1〜C10杂芳基" 指具有 1〜10个碳原子的杂芳基， 例如吡咯基、 吡啶 基、 呋喃基， 或类似基团。
术语 " C1〜C10烷氧基" 指具有 1-10个碳原子的直链或支链烷氧基， 例如甲 氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 丁氧基、 异丁氧基、 仲丁氧基、 叔丁氧基、 或类似基团。
术语 " C6〜C10芳基-氧基" 指具有 6-10个碳原子的直链或支链芳基-氧基， 例如苯基-氧基、 萘基-氧基， 或类似基团。 术语 " C1〜C10杂芳基-氧基" 指具有 1-10个碳原子的直链或支链杂芳基-氧 基， 例如吡啶基-氧基、 呋喃基-氧基， 或类似基团。
术语 " C1〜C10酰基" 指具有 " -CO-烷基" 结构， 优选为具有 " -CO-C1〜C10 烷基" 结构的基团， 例如甲基酰基、 乙基酰基、 丙基酰基、 异丙基酰基、 丁基酰 基、 异丁基酰基、 仲丁基酰基、 叔丁基酰基、 或类似基团。
术语" C1〜C10酯基"指具有烷基 -COO-结构，优选为具有 C1〜C10烷基 -COO- 结构的基团，例如 CH3COO-、 C2H5COO-、 C3H8COO-、（CH3)2CHCOO-、《C4H9COO-、 tC4H9COO-， 或类似基团。
术语" C1〜C10磺酰基 "指具有" -SO2-烷基"结构，优选为具有" -SO2-C1〜C10 烷基"结构的基团， 例如甲基磺酰基、 乙基磺酰基、 丙基磺酰基、 异丙基磺酰基、 丁基磺酰基、 异丁基磺酰基、 仲丁基磺酰基、 叔丁基磺酰基、 或类似基团。
术语 " C1〜C20杂环烷基" 指具有 1〜20个碳原子的杂环烷基， 如环氧乙基、 四氢呋喃基、 四氢吡咯基， 或类似基团。
术语 "卤素" 指？、 Cl、 Br和 I。 阿那格雷及其用途
如本文所用， 术语"阿那格雷"、 "Anagrelide", "安归宁"、 "ANA"可互换使用， 均指具有如下式所示结构的化合物， 或其药学上可接受的盐或前药， 或其制剂形 式：
Figure imgf000009_0001
在本发明的优选例中，所述的阿那格雷为 6,7-二氯 -1,5-二氢咪唑并 [2, 1-b]喹唑 啉 -2(3H)酮。
目前， 在临床上阿那格雷作为磷酸二酯酶抑制剂， 用于治疗抗血小板增多症。 本发明提供了阿那格雷或其药学上可接受的制剂在抑制肿瘤方面的新用途， 具体 地， 本发明提供的新用途包括：
0)作为抗肿瘤药物， 用于肿瘤或癌症的治疗或抑制；
(b)在体外或体内选择性地用于抑制肿瘤细胞增殖， 或者诱导细胞凋亡；
(c)在体外或体内选择性地调控肿瘤细胞的周期， 诱导细胞产生 G1周期阻滞和 G2周期阻滞。
(d)在体外或体内选择性地用于抑制肿瘤细胞迁移。 所述的阿那格雷或其药物组合物可以在较低浓度下作用， 较佳地， 所述阿那格雷 可以在≤lmM/L的浓度下作用于对象细胞， 并产生所需的作用。 阿那格雷衍生物的用途
本发明还提供了一类阿那格雷的衍生物， 其光学异构体， 或其药学上可接受的盐 或前药的用途。 其中， 所述 ：
Figure imgf000010_0001
其中，
〜R8各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氨基、 羟基、 氰基、 醛基、 硝基、 羧基（-COOH) 、 取代或未取代的 C1〜C10烷基、 取代或未取代的 C3〜C10 环烷基、 取代或未取代的 C2〜C10烯基、 取代或未取代的 C2〜C10炔基、 取代或 未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳基 （如取代或未取代的 5 元或 6元杂环、 8元至 10元杂芳二环环系） 、 取代或未取代的 C1〜C10烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳基-氧基、 取代 或未取代的酰基（优选为 -CO-C1〜C10烷基）、取代或未取代的酯基（优选为 C1〜C10 烷基 -COO-) 、 取代或未取代的 C1〜C10磺酰基 （-SO2-C1〜C10烷基） ；
或 和 1 2、 R3和 R4共同构成选自下组的基团： 取代或未取代的 C3〜C20环 烷基 (；优选为 C3〜C10环烷基；)、 取代或未取代的 C1〜C20杂环烷基（优选为取代或 未取代的 5元或 6元杂环、 8元至 12元杂芳二环环系） 、 羰基 (=0);
R9选自下组： 氢原子、 氧原子、 取代或未取代的 C1〜C10烷基、 取代或未取 代的 C3〜C10环烷基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10 杂芳基、 取代或未取代的 C1〜C10烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或未取代的酰基（优选为 -CO-C1〜C10烷基） 、 取代或未取代的 C1〜C10磺酰 基；
其中， 取代指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代： C1〜C10 烷基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、 卤素、 羟基、 羧基 （-COOH) 、 C1〜C10 醛基、 C2〜C10酰基、 C2〜C10酯基、 氨基、 苯基；
所述的苯基包括未取代的苯基或具有 1-3个取代基的取代苯基， 所述取代基 选自： 卤素、 C1-C10烷基、 氰基、 OH、 硝基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、 氨基。 在另一优选例中， 所述 〜 各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氨 基、 羟基、 氰基、 硝基、 氨基、 醛基、 羧基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代 或未取代的 C3〜C6环烷基、取代或未取代的 C2〜C5烯基、取代或未取代的 C2〜C5 炔基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C6杂芳基、 取代或未 取代的 C1〜C5烷氧基、取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、取代或未取代的 C1〜C6 杂芳基-氧基、 取代或未取代的 -CO-Cl〜C5烷基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基 -COO-、 取代或未取代的 C1〜C5磺酰基； 或 R n R2、 R3和 R4共同构成选自下组 的基团： 取代或未取代的 C3〜C10环烷基、 取代或未取代的 C1〜C10杂环烷基、 羰基；
R9选自下组： 氢原子、 氧原子、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代或未取代 的 C3〜C6环烷基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳 基、 取代或未取代的 C1〜C5烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或 未取代的 -CO-Cl〜C5烷基、 取代或未取代的 C1〜C5磺酰基；
其中， 取代的定义如上所述。
在另一优选例中， 〜 各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氰基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代或未取代的 C3〜C6环烷基；
或！^和 R2、 R3和 R4共同构成选自下组的基团：取代或未取代的 C1〜C5环烷 基、 取代或未取代的 C1〜C5杂环烷基、 羰基；
R9选自下组： 氢原子、取代或未取代的 C1〜C5烷基、取代或未取代的 C3〜C6 环烷基；
其中， 取代的定义如上所述。
在另一优选例中， 所述的 R 〜R9中的 1〜8个为氢原子， 较佳地 2〜7个为氢原 子。
在另一优选例中， 所述的 〜 中的 1〜8个为卤素原子。
在另一优选例中， 所述的 〜 中的 1〜8个为卤素原子， 且其他的 〜 均 为氢原子
在另 优选例中 所述的 I化合物具有如式 II所示的结构:
Figure imgf000011_0001
优选例中 所述的式 I化合物具有选自下组的结构:
Figure imgf000012_0001
在另一优选例中， 所述的药学上可接受的盐为选自下组的盐： 盐酸盐、 醋酸 盐、 磷酸盐， 或其组合。
本发明提供了式 I化合物， 其药学上可接受的盐或前药， 及其药学上可接受 的制剂在抑制肿瘤方面的新用途， 具体地， 本发明提供的新用途包括：
(a) 作为抗肿瘤药物， 用于肿瘤或癌症的治疗或抑制；
(b) 在体外或体内选择性地用于抑制肿瘤细胞增殖， 或者诱导细胞凋亡；
(c) 在体外或体内选择性地调控肿瘤细胞的周期， 诱导细胞产生 G1周期阻滞 和 G2周期阻滞。
(d) 在体外或体内选择性地用于抑制肿瘤细胞迁移。 药学上可接受的盐或前药
如本文所用， 术语 "药学上可接受的盐" 指本发明化合物与药学上可接受的 无机酸和有机酸所形成的盐， 无机酸包括： 盐酸、 氢溴酸、 磷酸、 硝酸、 硫酸； 有机酸包括： 甲酸、 乙酸、 丙酸、 丁二酸、 萘二磺酸 (1,5)、 亚细亚酸、 草酸、 酒 石酸、 乳酸、 水杨酸、 苯甲酸、 戊酸、 二乙基乙酸、 丙二酸、 琥珀酸、 富马酸、 庚二酸、 己二酸、 马来酸、 苹果酸、 氨基磺酸、 苯丙酸、 葡糖酸、 抗坏血酸、 烟 酸、 异烟酸、 甲磺酸、 对甲苯磺酸、 柠檬酸， 以及氨基酸。
如本文所用， 术语 "药学上可接受的前药" 指在体外无活性， 但能够在生物 体内转化为式 I所示活性物质， 从而发挥其药理作用的化合物。 药物组合物
本发明还提供了一种药物组合物， 其具有显著的抗肿瘤功效， 其中含有治疗有效 量的所述式 I化合物或其药学上可接受的盐， 以及一种或多种药学上可接受的载体。 在本发明的另一优选例中， 所述的药物组合物中含有治疗有效量的阿那格雷盐酸盐， 以及一种或多种药学上可接受的载体。
可将化合物本身或其药学上可接受的盐与可药用赋形剂、稀释剂等的混合物以片 剂、 胶囊、 颗粒剂、 散剂或糖浆剂的形式口服给药或以注射剂的形式非口服给药。 该 药物组合物优选含有重量比为 0.01%-99%的本发明的式 I化合物或其药学上可接受的 盐作为活性成分， 更优选含有重量比为 0.1%-90%的活性成分。 上述制剂可通过常规制药方法制备。 可用的药用辅剂的例子包括赋形剂 (例如糖 类衍生物如乳糖、 蔗糖、 葡萄糖、 甘露糖醇和山梨糖醇； 淀粉衍生物如玉米淀粉、 土 豆淀粉、 糊精和羧甲基淀粉； 纤维素衍生物如结晶纤维素、 羟丙基纤维素、 羧甲基纤 维素、 羧甲基纤维素钙、 羧甲基纤维素钠； 阿拉伯胶； 右旋糖酐； 硅酸盐衍生物如偏 硅酸镁铝； 磷酸盐衍生物如磷酸钙； 碳酸盐衍生物如碳酸钙； 硫酸盐衍生物如硫酸钙 等；)、 粘合剂 (例如明胶、 聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇；)、 崩解剂 (例如纤维素衍生物如 羧甲基纤维素钠、 聚乙烯吡咯烷酮；)、 润滑剂 (例如滑石、 硬脂酸钙、 硬脂酸镁、 鲸蜡、 硼酸、 苯甲酸钠、 亮氨酸)、 稳定剂 (对羟基苯甲酸甲酯、 对羟基苯甲酸丙酯等；)、 矫味 剂 (例如常用的甜味剂、 酸味剂和香料等；)、 稀释剂和注射液用溶剂 (例如水、 乙醇和甘 油等)。
本发明的化合物、其药学上可接受的盐或前药， 或其药物组合物的给药量随患者 的年龄、性别、种族、病情等的不同而不同。一般成人的日给药量为大约 10mg-2000mg， 优选 50mg-1000mg。
细胞周期调控
本发明提供了一种调控细胞周期剂的方法， 所述方法包括， 对对象细胞施用有效 量的式 I化合物或包括式 I化合物的药物组合物。
较佳地， 所述的式 I化合物可以用于阻滞细胞周期， 如用于诱导细胞产生 Gl、 G2周期阻滞， 从而调控细胞的细胞周期， 或改变细胞分裂的进程。
所述的式 I化合物或其药物组合物可以选择性地调控部分细胞的细胞周期， 而对 于其他非敏感性细胞不起诱导周期阻滞的作用。在本发明的一个优选例中， 所述的式 I化合物或其药物组合物用于调控肿瘤细胞的细胞周期。
在另一优选例中， 所述肿瘤细胞是选自下组的肿瘤细胞： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC772 BEL7404、 A498、 SW1116, MDA-MB-23 MDA-MB-468, DU145、 U87-MG、 Wi38、 H1299细胞， 或其组合； 较佳地选自下组： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC7721细胞， 或其组合。
所述的式 I化合物可以在较低浓度下，较佳地在 lmM/L的浓度下作用于细胞 并诱导或调控细胞的细胞周期， 产生周期阻滞。 在另一优选例中， 所述式 I化合物 的有效浓度为 0.01nM/L-lmM/L， 较佳地为 0.1nM/L-50(^M/L， 最佳地为
lnM/L-10(^M/L。
所述式 I化合物的作用时间没有特别限制， 如可以为 21！〜 30天。 较佳地， 所述式 I化合物的作用时间根据作用环境和作用对象不同而有所区别。 在本发明的一个优选 例中， 所述式 I化合物的作用时间为 2〜96h。 在另一优选例中， 所述式 I化合物的作 用时间为 1〜30天。 细胞凋亡诱导
本发明提供了一种诱导细胞凋亡或抑制细胞生长的方法， 所述方法包括， 对对象 细胞施用有效量的式 I化合物或包括式 I化合物的药物组合物。
所述的式 I化合物或其药物组合物可以选择性地诱导部分细胞凋亡或抑制部分细 胞生长， 而对于其他非敏感性细胞的生长不产生抑制作用。
在本发明的一个优选例中， 所述的式 I化合物或其药物组合物用于调控肿瘤细胞 的细胞周期。 较佳地， 所述肿瘤细胞是选自下组的肿瘤细胞： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC772 U BEL7404, A498、 SW1116、 MDA - MB - 231、 MDA - MB - 468、 DU145、 U87 - MG、 Wi38、H1299细胞，或其组合；最优选的对象肿瘤细胞选自下组： Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC7721细胞， 或其组合。
所述的式 I化合物可以在较低浓度下，较佳地在 100mM/L的浓度下作用于对 象细胞并诱导或调控细胞的细胞周期， 产生周期阻滞。
在另一优选例中， 所述式 I化合物的有效浓度为 0.01nM/L- lmM/L， 较佳地为 0.1nM/L-50(^M/L， 最佳地为 lnM/L-10(^M/L。
所述式 I化合物的作用时间没有特别限制， 如可以为 21！〜 30天。 较佳地， 所述式 I化合物的作用时间根据作用环境和作用对象不同而有所区别。 在本发明的一个优选 例中， 所述式 I化合物的作用时间为 2〜96h。 在另一优选例中， 所述式 I化合物的作 用时间为 1〜30天。 抗肿瘤药物（药物组合物）及其制备
本发明提供了一种诱导细胞凋亡或抑制细胞生长的方法， 所述方法包括， 对对象 细胞施用有效量的式 I化合物或包括式 I化合物的药物组合物。
在本发明的一个优选例中，所述的药物组合物包括：（a)治疗有效量的式 I化合物； 和 (b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中， 所述的肿瘤包括： 宫颈癌、 神经胶质瘤、 肝癌。
在另一优选例中， 所述式 I化合物的有效浓度为 0.01nM/L- lmM/L， 较佳地为 0.1nM/L-50(^M/L， 最佳地为 lnM/L-10(^M/L。
本发明还提供了一种抗肿瘤药物或药物组合物的制备方法， 所述方法包括： 将治 疗有效量的式 I化合物与药学上可接受的载体混合， 从而形成药物组合物。 在另一优选例中， 所述药物组合物还包括选自下组的组分： 肿瘤抑制剂、 肿瘤凋 亡诱导剂， 或其组合。
对被治疗对象施用治疗有效量的式 I化合物或包括式 I化合物的药物组合物， 可 以治疗或抑制肿瘤。 本发明的主要优点包括：
(1) 提供了一种毒副作用低， 安全性好的新型抗肿瘤药物；
(2) 提供了一种高选择性地诱导细胞凋亡的方法；
(3) 提供了一种高选择性地阻滞细胞周期的方法；
(4) 提供了一种高选择性地抑制细胞迁移的方法
(5) 本发明的阿那格雷及其衍生物具有非常好的抗肿瘤效果。 在极低剂量下 ( ΙΟηΜ/L) ， 阿那格雷就能够很明显的抑制肿瘤细胞的生长， 而对于非敏感细胞株， 当浓度提高到 ImM/L时， 依然不会造成任何生长抑制的作用， 表明其对靶点有很强 的专一性和选择性， 具有巨大的应用价值和临床应用的优势。 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本 发明而不用于限制本发明的范围。 下列实施例中凡未注明具体条件的实验方法之 处， 通常按照常规条件 (；例如 Sambrook等人， 分子克隆： 实验室手册 (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件）， 或按照制造厂商所建议 的条件。 除非另外说明， 否则百分比和份数按重量计算。 实施例 1 阿那格雷对肿瘤细胞的影响
1 实验材料与方法
1. 1 药品和试剂
阿那格雷（Anagre l ide )购自百灵威公司， 二甲基亚砜（ dimethyl sulfoxide,
DMS0 ) 溶解后配制成 10mM储存液， - 20°C 保存。 DMEM， a -MEM, PRMI 1640培养基 和胎牛血清购自 Gibco公司 ( Life Technologi es , Grand I sland, NY, USA) 。
研究中使用抗体如下： 兔抗 -PARP购自 CST公司， 鼠抗 -tubul in购自 Santa 公司。
1. 2 细胞株及细胞培养
表 1.人肿瘤组织细胞株来源
Figure imgf000015_0001
H4 ATCC 人神经胶质瘤细胞 DMEM+10%FBS
A498 ATCC 人肾癌细胞 PRMI1640+10%FBS
SW1116 ATCC 人结肠癌细胞 MEM+10%FBS
HeLa ATCC 人宫颈癌上皮细胞 DMEM+10%FBS
race- 98 中科院细胞库 人肝癌细胞 PRMI 1640+10%FBS
Bel7404 中科院细胞库 人肝癌细胞 PRMI1640+10%FBS
SMMC7721 中科院细胞库 人肝癌细胞 PRMI1640+10%FBS
DU145 ATCC 人前列腺癌细胞 PRMI1640+10%FBS+
2mM谷氨酰胺
U87-MG ATCC 人乳腺癌细胞 DMEM+10%FBS
MDA-MB-231 ATCC 人乳腺癌细胞 PRMI1640+10%FBS
MDA-MB-468 ATCC 人乳腺癌细胞 PRMI1640+10%FBS
Wi38 ATCC 人肺癌细胞 DMEM+10%FBS
H1299 ATCC 人肺癌细胞 PRMI1640+10%FBS 以上细胞株皆置于 37 °C含 5%C02的细胞培养箱培养， 待细胞处于对数生长期 时进行实验。
1.3 Western blot分析
1 )垂直蛋白质电泳分离： 8%-10%SDS-聚丙烯酰胺（SDA-PAGE)凝胶电泳分离， 5%积层胶。 积层胶分离电压为 80V, 分离胶分离电压为 120V, 溴酚蓝指示剂跑至底 部停止；
2) 转膜： 半干法： 转膜电压为 10〜15V， 根据蛋白大小调整时间；
3 ) 丽春红预染， 观察转膜效果；
4) 封闭： 用含 5%脱脂牛奶的 TBST于室温置于脱色摇床振荡封闭 1小时； 5 )结合一抗： 1:2000〜1： 10000稀释抗体与含 5%BSA的 TBST中， 室温置于脱色 摇床振荡结合 1小时， 4QC过夜。 TBST洗三遍， 每次 10分钟；
6)结合二抗： 1:5000〜1： 10000稀释抗体于含 5%BSA的 TBST中， 室温置于脱色 摇床振荡结合 1小时。 TBST洗三遍， 每次 10分钟。
显影 ECL试剂盒底物作用 2-3分钟， 化学发光检测， 曝光于 X胶片。
1. 4 MTT (噻唑蓝） 比色法
处于对数生长期的细胞按合适密度接种于 96孔培养板， 每孔 lOOul , 培养过夜 后， 加入不同浓度药物作用 72h， 每个浓度设三复孔。 作用结束后， 向每孔加入 20 μ ΐ/well的 MTT ( 5mg/ml in PBS) 作用 3-5小时后， 吸尽培养基， 加入 100ul/well DMS0， 避光置于脱色摇床振荡 10分钟至蓝紫色结晶甲瓒 （Formazan) 完全溶解， 用 酶标仪检测 OD (Optical Density) 值 （检测波长 595nM， 参考波长 650nM)。 空白组 为不加细胞只加培养基， 对照组为加入与药物同体积的 DMS0, 计算细胞存活率= (实 验组 0D值-空白组 0D值） / (对照组 0D-空白组 0D值）。
1. 5 流式细胞仪检测细胞周期分布
处于对数期生长的细胞按 5 X lOVmL浓度接种于 6孔培养板， 每孔 1. 5mL培 养基， 培养过夜。 加入不同浓度的药物剌激一定时间后， 将细胞收集到 1. 5mL的 EP管中。 用预冷的 PBS冲洗细胞广 2次， 加入少许 PBS ( 200ul左右） ， 吹匀。 预冷 lmL75%乙醇 （PBS配制） ， 在振荡仪上边振荡边向酒精中滴加细胞。 4 °C固 定过夜。1000r/m离心 5min后，弃上清，加入 l-2mL PBS清洗两次。用 0. 5mL RNaseA ( 1. Omg/ml ) PBS悬浮细胞， 37 °C消化 lh。 用 0. 5mL 25ug/mL的 PI染液重悬细 胞， 4 °C避光 30min。 用 300目细胞筛过滤， 流式细胞仪分析细胞周期分布情况。
1. 6 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡
将处于对数生长期的细胞按 5 X 105/mL浓度接种于 6孔培养板， 培养过夜。 加入不同浓度药物剌激， 收集细胞用凯基生物的 Annexin V/PI-FITC细胞凋亡检 测试剂盒检测细胞凋亡。 具体步骤如下： 收集细胞与 1. 5mL离心管， 用 PBS洗涤 细胞两次。 加入 500ulBinding Buffer悬浮细胞， 加入 5ul Annexin V- FITC混匀 后， 加入 5ulPI混匀。 室温、 避光反应 15min。 用流式细胞仪检测细胞凋亡。
1. 7 RTCA细胞实时监控仪检测细胞生长
将处于对数生长期的细胞胰酶消化后， 离心并重悬， 每孔 3. 5 X 107mL接种 于细胞实时监控仪配套的 16孔板中， 37°C孵育过夜后加药。实时监控仪自动监测 细胞生长状况， 根据细胞铺展后形成电阻的大小反应细胞数量。细胞指数值越大， 细胞生长的越快， 细胞数越多。
1. 8 划痕实验检测细胞迁移
将六孔板的底部用记号笔均匀的划上横线后， 将处于对数生长期的细胞， 按 照 120 X 107mL个细胞点板， 使细胞尽量均匀的铺满六孔板， 37°C孵育过夜。 换 上不含血清的新鲜培养基， 细胞饥饿 10小时后， 用枪头垂直于六孔板底的横线划 痕， 用无血清培养基冲洗 3次， 将悬浮细胞冲洗干净后， 加入无血清培养基， 0、 2、 6、 12、 24小时分别拍照， 使用 Image J计算细胞移动距离。
2 实验结果
2. 1阿那格雷（Anagrelide ) 对不同组织来源肿瘤细胞的体外抗肿瘤效果 通过对 500多种 FDA批准上市的非抗癌药物筛选， 发现小分子化合物阿那格雷 (Anagrelide ) 对多种组织来源的肿瘤细胞都有生长抑制的作用， 其结构式为 6， 7- 二氯 -1， 5-二氢咪唑并 [2， 1-b]喹唑啉 -2 (3H)酮 （图 1 )。
选取不同组织来源的肿瘤细胞， Anagrelide浓度分别为 Ι μ Μ和 50 μ Μ， 给药 72 小时后 ΜΤΤ检测 0D值， 计算细胞存活率= (给药组 0D-空白组 0D/对照组 0D-空白组 0D) *100%， GraphPadPrism 4软件作图。 得到瘤谱如图 2所示。
结果显示， 对于 Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC772U BEL7404, A498、 SW1116细胞， Anagrelide浓度为 Ι μ Μ时就能产生明显的抑制生长的作用； 而对于 MDA-MB-231、 MDA- MB- 468、 DU145、 U87- MG、 Wi38、 H1299细胞， Anagrelide浓度为 50 μ Μ时也能 抑制其生长。
2. 2 阿那格雷 （Anagrelide ) 对于不同肿瘤细胞产生不同的抗肿瘤效果 为了进一步检测 Angrel ide对细胞生长的抑制作用， 通过细胞实时监控仪， 以 He la、 H4、 FHCC98、 SMMC7721、 BEL7404、 A498、 SW1116为例，实时监测 Anagre 1 i de 给药 72小时内细胞生长状况的改变（图 3)。 细胞 3000个 /lOOuL点板， 培养过夜 后加入 ΙΟΟηΜ Anagrel ide , 实时监测细胞生长状况。 红色线条为 DMS0对照组， 绿色线条为加药组。
结果显示， 对于 Hela、 H4、 FHCC98、 SMMC7721细胞（敏感细胞）， Anagrel ide 最终诱导细胞死亡， 而对于 BEL7404、 A498、 SW1116细胞 （较为敏感细胞） ， 给 药 72小时内细胞并未发生凋亡现象， 但有明显的生长抑制。
通过 MTT的方法， 检测了 Anagrel ide在这 7株细胞系上的 IC50值， 均不超 过 ΙΟΟηΜ (表 2)。
结果表明， 在极低的浓度下， 本发明化合物即可对多种肿瘤细胞的生长起到 抑制作用。
Figure imgf000018_0001
2. 3 阿那格雷 （Anagrelide)对肿瘤细胞周期的影响
肿瘤细胞是一类周期不受正常调控的细胞， 能够无限增殖。 目前临床上常用的抗 肿瘤化疗药物中， 已有一部分药物作为细胞周期阻滞剂来抑制肿瘤细胞生长从而达到 抗肿瘤效果。
为了检测 Anagrelide是否对肿瘤细胞的周期产生影响，采用 PI染色和流式细胞 仪， 以 SMMC7721 , HeLa, SW1116为例， 分别代表对 Anagrelide最敏感、 较为敏感的 细胞， 检测 Angrelide对细胞周期的影响 （图 4、 图 5 )
结果显示， 对于 Anagrelide处理过的 SMMC7721和 HeLa细胞， 处于 G1期和 G2/M期的细胞数明显增加， 而 S期的细胞减少， 说明细胞产生了明显的 Gl、 G2 周期阻滞， 而对于较为不敏感的细胞 SW1116, Anagrelide也产生了较为微弱的周 期阻滞的作用。
2.4 阿那格雷 （Anagrelide) 诱导肿瘤细胞凋亡
通过观察发现， Angrelide长时间给药后， 细胞体积变小， 细胞质浓缩最终 死亡。 因此， 我们以 H4、 FHCC98细胞为例， 通过 Western Blot的方法， 检测 Anagrelide对凋亡通路的影响。
如图 6的 WersternBlot结果所示，细胞加药处理一定时间后，检测下游 PARP 剪切情况， 发现 PARP剪切随时间的延长而逐渐增加。 以上实验结果说明， Angrelide能够诱导肿瘤细胞凋亡。
H4细胞和 FHCC98细胞不同时间点给药后收样， 药物浓度 ΙΟΟηΜ, Western Blot 检测 PARP剪切。
由以上实验可知， Angrelide可诱导所有的敏感细胞发生周期阻滞， 对于
HeLa，H4，S匪 C7721，F¾CC98等敏感细胞， 其周期阻滞作用非常强， 当细胞停滞生 长一段时间后， 最终发生凋亡。 而 SW1116、 A498和 Bel7404等较敏感细胞虽然尚 能维持缓慢的生长， 但也产生了明显的周期阻滞现象， 表明 Angrelide也可诱导 这些肿瘤细胞的周期阻滞。
2.5 阿那格雷 （Anagrelide) 抑制肿瘤细胞迁移
细胞迁移是肿瘤细胞的一大特征， 当原发瘤生长到一定程度时， 就会逐渐向 周围扩散， 以获取更大的空间和更多的养分维持肿瘤细胞的生长。 肿瘤细胞一旦 在体内扩散， 就会对肿瘤的治疗带来很大的困难， 因此抑制肿瘤的转移是当前抗 肿瘤研究中非常重要的一个方面。
通过细胞划痕实验， 以 HeLa细胞为例， 检测 Anagrelide是否能影响肿瘤细 胞迁移。
结果如图 7显示， Anagrelide在 ΙΟΟηΜ时就能明显抑制 HeLa细胞划痕愈合 的速度， 表明 Anagrelide能够抑制肿瘤细胞的迁移。
3. 阿那格雷衍生物的抗肿瘤实验
发明人用一系列阿那格雷衍生物重复了上述实验， 得到了与阿那格雷盐酸盐 类似的结果。 实验所使用的阿那格雷衍生物的结构如下：
Figure imgf000020_0001
实施例 2 阿那格雷（Anagrelide) 对人 H4移植瘤的抑制作用
1.材料和方法
1.1 材料
1.1.1 供试品
名称： Anagrelide
货号： A637300
性状： 白色粉末
纯度： 98%
来源： 百灵威 (Toronto Research Chemicals Ins. )
保存： 配制前 -20°C保存
1.1.2 阴性对照品（溶媒）
Cremophor EL: 95%药用乙醇: 水 =12.5： 12.5： 75
Cremophor EL购自 Sigma, 货号 C5135; 95%药用乙醇购自上海益醇生物科技 有限公司。
1.1.3 实验动物
BALB/c 裸鼠， 雌性， 体重 16-17 g， 购自上海斯莱克实验动物有限公司 （许 可证号码： SCXK (沪） 2012— 0002) ， 饲养环境： SPF级动物房， 自由摄食， 12h 光照 /12h黑暗。
1.2 实验步骤
在无菌条件下， 取处于生长增殖期的肿瘤细胞， 消化后调整细胞浓度， 接种于 裸小鼠右侧腋窝下， 每只接种体积为 0. lmL。 用游标卡尺测量移植瘤直径， 待肿瘤生 长至 200-300 mm3时选取荷瘤鼠， 根据肿瘤大小随机分成 3组 （n=4只） ： 阴性对照 组， Anagrelide I (lOmg/kg) , Anagrelide II (30mg/kg) 。 各组按灌胃给药， 给 药当天记为 dl， 阴性对照组给予等量溶媒， 以后每周测量 2次肿瘤长径和短径， 同 时称量小鼠体重。 给药第 21 天， 处死动物， 剖瘤称重。 在处死动物前， 摘眼球取 血， 测定血中白细胞数量 (WBC)、 红细胞数量（RBC)、 血红蛋白浓度（Hb)和血小板数 量 （PLT) 。 2 实验结果
2.1 阿那格雷 （Anagrelide) 对荷瘤裸鼠体重的影响
从各处理组动物体重变化趋势分析， Anagrelide各剂量组对动物体重的影响 不大 （图 8) ， 与阴性对照组无显著性差异。
2.2 阿那格雷 （Anagrelide) 对荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响
与溶媒对照组相比， 各给药组表现出明显的抑瘤效果， 且有一定的剂量浓度 依赖性（图 9、 图 10)。
试验终点时， 各给药组肿瘤重量均显著小于溶媒对照组， 且 Anagrelide II (30mg/kg) 组的肿瘤重量小于 Anagrelide I (10mg/kg) 组， 表明 Anagrelide 对肿瘤重量的影响具有剂量依赖性。
2.3 阿那格雷 （Anagrelide) 对荷瘤裸鼠血常规的影响
与溶媒对照组相比， 各给药组血常规各项指标没有出现明显的降低（图 11)。 讨论
阿那格雷 （Anagrelide) 作为抗血小板增多症的药物， 已经在美国上市 16 年。 该药上市至今， 未发现任何严重的毒副作用。 经过筛选本发明人首次意外地 发现和证实了， Anagrelide具有很好的抗癌活性， 能在很低浓度明显抑制癌细胞 的细胞周期， 并最终诱导癌细胞发生凋亡。 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考， 就如同每一篇文献被 单独引用作为参考那样。 此外应理解， 在阅读了本发明的上述讲授内容之后， 本 领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改， 这些等价形式同样落于本申请所 附权利要求书所限定的范围。

Claims

权 利 要 求
1、 一种式 I化合物， 其光学异构体， 或其药学上可接受的盐或前药的用途， 其 特征在于， 用于制备治疗或抑制肿瘤和 /或抑制肿瘤细胞生长的药物或药物组合物；
Figure imgf000022_0001
Ri, R2、 R3、 R4、 R5、 R6、 R7和 R8各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氨基、 羟基、 氰基、 醛基、 硝基、 羧基、 取代或未取代的 C1〜C10烷基、 取代或 未取代的 C3〜C10环烷基、取代或未取代的 C2〜C10烯基、取代或未取代的 C2〜C10 炔基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳基、 取代或 未取代的 C1〜C10烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳基-氧基、 取代或未取代的 C1〜C10酰基、 取代或未取代的 C1〜C10 酯基、 取代或未取代的 C1〜C10磺酰基；
或 1^和 1 2共同构成， 和 /或 R3和 R4共同构成选自下组的基团： 取代或未取 代的 C3〜C20环烷基、 取代或未取代的 C1〜C20杂环烷基、 =0;
R9选自下组： 氢原子、 羟基、 取代或未取代的 C1〜C10烷基、 取代或未取代 的 C3〜C10环烷基、取代或未取代的 C6〜C10芳基、取代或未取代的 C1〜C10杂芳 基、 取代或未取代的 C1〜C10烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代 或未取代的酰基、 取代或未取代的 C1〜C10磺酰基；
其中， 所述取代指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：
C1〜C10烷基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、 卤素、 羟基、 羧基、 C1〜C10醛 基、 C2〜C10酰基、 C2〜C10酯基、 氨基、 苯基；
所述的苯基包括未取代的苯基或具有 1-3个取代基的取代苯基， 所述取代基 选自： 卤素、 C1-C10烷基、 氰基、 OH、 硝基、 C3〜C10环烷基、 C1〜C10烷氧基、 氨基。
2、 如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述 、 R2、 R3、 R4、 R5、 R6、 7和 各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氨基、 羟基、 氰基、 硝基、 氨 基、 醛基、 羧基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代或未取代的 C3〜C6环烷基、 取代或未取代的 C2〜C5烯基、 取代或未取代的 C2〜C5炔基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C6杂芳基、 取代或未取代的 C1〜C5烷氧基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、 取代或未取代的 C1〜C6杂芳基-氧基、 取代 或未取代的 -CO-Cl〜C5烷基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基 -COO-、 取代或未取代 的 C1〜C5磺酰基； 或 和 、 R3和 R4共同构成选自下组的基团： 取代或未取代 的 C3〜C10环烷基、 取代或未取代的 C1〜C10杂环烷基、 羰基；
R9选自下组： 氢原子、 羟基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代或未取代的 C3〜C6环烷基、 取代或未取代的 C6〜C10芳基、 取代或未取代的 C1〜C10杂芳基、 取代或未取代的 C1〜C5烷氧基、取代或未取代的 C6〜C10芳基-氧基、取代或未取 代的 -CO-Cl〜C5烷基、 取代或未取代的 C1〜C5磺酰基；
其中， 所述取代的定义如上所述。
3、 如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述 〜 各自独立地选自下组： 氢原子、 卤素原子、 氰基、 取代或未取代的 C1〜C5烷基、 取代或未取代的 C1〜C5 烷氧基、 取代或未取代的 C3〜C6环烷基；
或 1^和 1 2共同构成， 和 /或 R3和 R4共同构成选自下组的基团： 取代或未取 代的 C1〜C5环烷基、 取代或未取代的 C1〜C5杂环烷基、 羰基；
R9选自下组： 氢原子、取代或未取代的 C1〜C5烷基、取代或未取代的 C3〜C6 环烷基；
其中， 所述取代的定义如上所述。
4、 如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述的式 I化合物具有如式 II所 示的结构：
Figure imgf000023_0001
5、 如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述的药学上可接受的盐为选自 下组的盐： 盐酸盐、 醋酸盐、 磷酸盐， 或其组合。
6、如权利要求 1所述的用途，其特征在于，所述的药学上可接受的盐为盐酸盐。
7、 如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述药物或药物组合物还用于诱导 肿瘤细胞凋亡。
8、 如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述药物或药物组合物还用于干扰 肿瘤细胞增殖。
9、 如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述药物或药物组合物还用于调控 肿瘤细胞的细胞周期； 和 /或
所述药物或药物组合物还用于阻滞细胞周期； 和 /或
所述药物或药物组合物还用于抑制肿瘤细胞的转移。
10、如权利要求 1所述的用途， 其特征在于， 所述的肿瘤或肿瘤细胞选自： 肝癌、 宫颈癌、 神经胶质瘤、 结肠癌、 肾癌、 乳腺癌、 肺癌、 前列腺癌、 胰腺癌、 皮肤癌、 鼻咽癌、 食道癌、 胃癌、 卵巢癌、 黑色素瘤。
11、 一种细胞周期阻滞剂， 其特征在于， 包含有效量的所述的式 I化合物， 或其 药学上可接受的盐或前药， 或其药物组合物。
12、 一种体外非治疗性调节细胞周期的方法， 其特征在于， 包括步骤： 在含有有 效量的所述式 I化合物， 或其药学上可接受的盐或前药， 或其药物组合物的培养体系 中培养所述细胞。
13、 一种体外非治疗性抑制细胞生长或诱导细胞凋亡的方法， 其特征在于， 所 述方法包括步骤： 在含有有效量的所述式 I化合物， 或其药学上可接受的盐或前药， 或其药物组合物的培养体系中配所述细胞。
14、 一种制备抗肿瘤药物的方法， 其特征在于， 所述方法包括： 将治疗有效量的 所述式 I化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合， 从而形成 药物组合物。
15、 一种式 I化合物， 其光学异构体， 或其药学上可接受的盐或前药的用途， 其 特征在于， 用于制备组合物， 所述组合物用于 « 抑制肿瘤细胞生长； （ii)诱导肿瘤细 胞凋亡； （； iii)干扰肿瘤细胞增殖； （iv)调控肿瘤细胞的细胞周期； （ 诱导肿瘤细胞产 生 Gl、 G2周期阻滞； 和 /或 (vi)抑制肿瘤细胞的转移。
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