BR112020021294A2 - proteína de fusão ligada à proteína cd47 e aplicação da mesma - Google Patents
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Abstract
A pela presente invenção fornece uma proteína de fusão que se liga a uma proteína CD47 e uma aplicação da mesma, em que a proteína de fusão é capaz de se ligar a uma proteína CD47 usando um valor KD de 1x10-8 M ou inferior. A proteína de fusão pode bloquear especificamente a interação entre uma proteína CD47 e SIRPa sem causar uma reação de coagulação do sangue e pode inibir ainda mais o crescimento e/ou proliferação de tumores ou células tumorais.
Description
“PROTEÍNA DE FUSÃO LIGADA À PROTEÍNA CD47 E SEUS MÉTODO DE PREPARAÇÃO E USOS TERAPÊUTICOS, BEM COMO MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, COMPOSIÇÃO, VETOR E CÉLULA HOSPEDEIRA” Campo técnico
[001] O presente pedido se refere-se a uma ligação de proteína de fusão a uma proteína CD47 e ao uso da mesma. A referida proteína de fusão pode bloquear especificamente a interação entre a proteína CD47 e SIRPα sem causar uma reação de coagulação do sangue e pode inibir o crescimento e/ou proliferação de tumores ou células tumorais. Fundamentos
[002] A proteína CD47 é uma glicoproteína transmembrana, que é membro da superfamília das imunoglobulinas e expressa na superfície de várias células, incluindo glóbulos vermelhos. Os ligantes de CD47 compreendem integrinas, trombospondina-1 e proteínas reguladoras de sinal (SIRPs). O CD47 afeta uma variedade de funções biológicas, incluindo a migração de células, células T, ativação de células dendríticas, desenvolvimento de axônios, etc. Além disso, pela interação com SIRPα, CD47 pode inibir a fagocitose por macrófagos; e proteger as células normais, tais como células sanguíneas e semelhantes, de serem fagocitadas por macrófagos. Estudos descobriram que, além da expressão de CD47 por células de tecido normal, muitas células tumorais sobre-expressam CD47 e evitam que os macrófagos fagocitem as células tumorais por combinação com o SIRPα na superfície dos macrófagos. É considerado um mecanismo pelo qual os tumores escapam à vigilância imunológica do corpo. O bloqueio da interação entre a proteína CD47 e SIRPα pode inibir o crescimento de tumores (Theocharides APA, et al., 2012).
[003] No entanto, os reagentes atuais para bloquear a interação entre a proteína CD47 e SIRPα têm uma atividade de reconhecimento limitada. Tende a ter afinidade insuficiente com a proteína CD47 e capacidade limitada de inibir tumores.
Em outro aspecto, os fármacos de anticorpo atuais direcionados a CD47 têm efeitos colaterais que causam anemia ou trombocitopenia (Yinpeng Bai et al., Chin J Clin Oncol., 2017 Vol 44. No. 7). Há uma necessidade urgente de desenvolver uma nova terapia que possa bloquear efetivamente a interação entre a proteína CD47 e SIRPα com menos efeitos colaterais.
[004] O presente pedido fornece uma proteína de fusão que se liga a uma proteína CD47 e seu uso. A proteína de fusão pode ligar-se especificamente à proteína CD47. A proteína de fusão do presente pedido tem pelo menos uma das seguintes características: 1) ligação específica à proteína CD47 com uma afinidade relativamente alta; 2) bloquear especificamente a interação entre a proteína CD47 com SIRPα; 3) não causar reação de coagulação do sangue; 4) inibir o crescimento e/ou proliferação de tumores ou células tumorais; 5) bloquear um sinal apoptótico induzido pela interação CD47/SIRPα; e/ou 6) ser seguro para o sujeito e não ter efeitos colaterais que prejudiquem o corpo. O presente pedido fornece ainda um método de preparação e uso da proteína de fusão.
[005] Em um aspecto, o presente pedido fornece uma proteína de fusão capaz de se ligar especificamente à proteína CD47 e tem pelo menos uma das seguintes características: 1) ligação à proteína CD47 com um valor de KD de 1 x 10-8 M ou inferior; 2) bloquear especificamente a interação entre a proteína CD47 com SIRPα; 3) não causar reação de coagulação do sangue; e 4) inibir o crescimento e/ou proliferação de tumores ou células tumorais.
[006] Em algumas modalidades, a referida proteína CD47 é uma proteína CD47 humana.
[007] Em algumas modalidades, a referida proteína CD47 é uma proteína CD47 expressa na superfície das células.
[008] Em algumas modalidades, os referidos tumores ou células tumorais são CD47-positivos.
[009] Em algumas modalidades, os referidos tumores são selecionados do grupo que consiste em tumores hematológicos positivos para CD47 e/ou tumores sólidos positivos para CD47.
[0010] Em algumas modalidades, a referida proteína de fusão compreende um domínio SIRPα humano que pode se ligar especificamente à referida proteína CD47 e uma região Fc da imunoglobulina, em que o referido domínio SIRPα humano está direta ou indiretamente ligado à região Fc da imunoglobulina.
[0011] Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano compreende um domínio extracelular do SIRPα humano, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano compreende um domínio IgV do SIRPα humano, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano compreende um domínio da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano compreende um domínio IgV da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano compreende resíduos de aminoácidos nas posições 33-149 da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos.
[0012] Em algumas modalidades, o domínio SIRPα humano do presente pedido compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NO: 1-20, 62-65, e uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos
96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%) de homologia de sequência com as mesmas.
[0013] Em algumas modalidades, a proteína de fusão do presente pedido compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NO: 21-61, e uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95 %, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%) de homologia de sequência com as mesmas.
[0014] Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos compreende substituições, deleções ou adições de um ou mais resíduos de aminoácidos.
[0015] Em algumas modalidades, o referido mutante compreende substituições de aminoácidos em um ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em I61, V63, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, D96, K98, N100, R107, G109 e V132.
[0016] Em algumas modalidades, o referido mutante compreende uma ou mais substituições de aminoácidos selecionadas do grupo que consiste em R22C, I29L, I61L/V/F, V63I, E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L, Q82S/R/G/N, K83R, E84K/H/D/R/G, V93L/A, D95H/R/E, D96S/T, K98R, N100G/K/D/E, R107N/S, G109R/H e V132L/R/I/S.
[0017] Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NO: 1-20, 62-65.
[0018] Em algumas modalidades, a referida região Fc da imunoglobulina compreende uma região Fc de IgG.
[0019] Em algumas modalidades, o referido IgG é um IgG humano. Em algumas modalidades, o referido IgG é selecionado do grupo que consiste em IgG1 e/ou IgG4.
[0020] Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano está localizado no terminal N da referida região Fc da imunoglobulina.
[0021] Em algumas modalidades, o referido domínio SIRPα humano está ligado à região Fc da imunoglobulina por meio de um ligante.
[0022] Em algumas modalidades, a referida região Fc da imunoglobulina compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NO: 67- 68.
[0023] Em algumas modalidades, a referida proteína de fusão compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NOS: 21-61.
[0024] Em outro aspecto, o presente pedido fornece uma molécula de ácido nucleico que codifica a proteína de fusão do presente pedido.
[0025] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um vetor que compreende a molécula de ácido nucleico do presente pedido.
[0026] Em outro aspecto, o presente pedido fornece uma célula hospedeira que compreende a molécula de ácido nucleico do presente pedido ou o vetor do presente pedido.
[0027] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um método de preparação da proteína de fusão do presente pedido, o referido método compreendendo a cultura da célula hospedeira do presente pedido em condições que permitem a expressão da proteína de fusão.
[0028] Em outro aspecto, o presente pedido fornece uma composição, compreendendo a proteína de fusão, a molécula de ácido nucleico, o vetor e/ou a célula hospedeira do presente pedido e, opcionalmente, adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis.
[0029] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um uso da proteína de fusão, a molécula de ácido nucleico, o vetor, a célula hospedeira e/ou a composição do presente pedido na preparação de um fármaco e/ou kit, em que o referido fármaco e/ou kit ou kit é para prevenir ou tratar tumores ou doenças autoimunes. Em algumas modalidades, os tumores são selecionados do grupo que consiste em tumores hematológicos positivos para CD47 ou tumores sólidos positivos para CD47. Em algumas modalidades, as doenças autoimunes são selecionadas do grupo que consiste em doença de Crohn, asma alérgica e artrite reumatoide.
[0030] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um método para bloquear a interação entre a proteína CD47 e SIRPα, o referido método compreendendo a administração da proteína de fusão ou a composição do presente pedido.
[0031] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um método para inibir o crescimento e/ou a proliferação de tumores ou células tumorais, o referido método compreendendo o contato da proteína de fusão ou a composição do presente pedido com os tumores ou células tumorais. Em algumas modalidades, o contato ocorre in vitro.
[0032] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um método de prevenção ou tratamento de tumores ou doenças autoimunes em um sujeito, o referido método compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da proteína de fusão ou a composição do presente pedido ao sujeito. Em algumas modalidades, os tumores são selecionados do grupo que consiste em tumores hematológicos positivos para CD47 ou tumores sólidos positivos para CD47. Em algumas modalidades, as doenças autoimunes são selecionadas do grupo que consiste em doença de Crohn, asma alérgica e artrite reumatoide.
[0033] Os especialistas na técnica podem reconhecer prontamente outros aspectos e vantagens da presente divulgação a partir da descrição detalhada abaixo.
A descrição detalhada abaixo apenas mostra e descreve modalidades exemplares da presente divulgação. Como os especialistas na técnica reconhecerão, o conteúdo da presente divulgação permite que os especialistas na técnica modifiquem as modalidades específicas, conforme divulgado, sem se afastar do espírito e do escopo da invenção a que o presente pedido se refere. Correspondentemente, os desenhos e a descrição no relatório descritivo do presente pedido são apenas exemplares, em vez de restritivos.
[0034] As características específicas da invenção envolvidas no presente pedido são mostradas nas reivindicações anexas. Por referência às modalidades exemplares, conforme descrito detalhadamente abaixo, e aos desenhos anexos, as características e vantagens da invenção envolvidas no presente pedido podem ser mais bem compreendidas. A breve descrição dos desenhos anexos é a seguinte:
[0035] A FIG. 1 mostra uma vista esquemática da estrutura física do vetor pTM.
[0036] A FIG. 2 mostra uma vista esquemática do método de detecção das interações entre os domínios truncados SIRPα e um mutante do mesmo e CD47.
[0037] A FIG. 3 mostra os resultados da triagem de enriquecimento de mutantes de domínio truncado SIRPα por citometria de fluxo.
[0038] A FIG. 4 mostra o alinhamento de sequência de domínios truncados SIRPα e suas variantes.
[0039] A FIG. 5 mostra os resultados da proteína de fusão do presente pedido para reconhecer a proteína CD47.
[0040] As FIGs. 6A-6B mostram a especificidade da proteína de fusão do presente pedido para reconhecer uma proteína CD47 humana.
[0041] A FIG. 7 mostra o reconhecimento da proteína de fusão do presente pedido para uma proteína CD47 humana e outras proteínas.
[0042] A FIG. 8 mostra que a proteína de fusão do presente pedido e TTI-621 bloqueiam competitivamente a ligação da proteína CD47 ao seu ligante SIRPα.
[0043] As FIGs. 9A-9C mostram os resultados da proteína de fusão do presente pedido para o reconhecimento da célula Raji, célula Jurkat e a proteína CD47 de superfície da célula A549.
[0044] A FIG. 10A-10C mostram os resultados da proteína de fusão do presente pedido e TTI-621 para o reconhecimento da célula Raji, célula Jurkat e a proteína CD47 de superfície da célula A549.
[0045] A FIG. 11 mostra os resultados da proteína de fusão do presente pedido e Hu5F9-G4 para resistir à reação de coagulação do sangue.
[0046] As FIGs. 12A-12B mostram a atividade de inibição de tumor da proteína de fusão do presente pedido.
[0047] As FIGs. 13A-13B mostram os efeitos da proteína de fusão do presente pedido em glóbulos vermelhos e plaquetas em comparação com TTI-621.
[0048] A FIG. 14 mostra os resultados da proteína de fusão do presente pedido para reconhecer a proteína CD47.
[0049] A FIG. 15 mostra que a proteína de fusão do presente pedido bloqueia competitivamente a ligação da proteína CD47 ao seu ligante SIRPα.
[0050] A FIG. 16 mostra os resultados da proteína de fusão do presente pedido e Hu5F9-G4 para resistir à reação de coagulação do sangue.
[0051] A FIG. 17 mostra que a proteína de fusão do presente pedido bloqueia efetivamente a apoptose induzida por CD47-Fc de células Jurkat-CSR.
[0052] A FIG. 18A mostra os efeitos da proteína de fusão do presente pedido sobre o nível de glóbulos vermelhos no sangue periférico de camundongos.
[0053] A FIG. 18B mostra os efeitos da proteína de fusão do presente pedido sobre o nível de plaquetas no sangue periférico de camundongos.
[0054] A FIG. 19 mostra os efeitos inibitórios da proteína de fusão do presente pedido no crescimento do tumor em camundongos.
[0055] A FIG. 20 mostra os efeitos da proteína de fusão do presente pedido sobre o peso corporal de camundongos.
[0056] A seguir, as modalidades da invenção envolvidas no presente pedido são descritas por meio de exemplos específicos. Os especialistas na técnica podem compreender facilmente outras vantagens e efeitos da invenção envolvidos no presente pedido através do conteúdo divulgado no presente relatório descritivo.
[0057] Em um aspecto, o presente pedido fornece uma proteína de fusão que pode se ligar especificamente à proteína CD47 com um valor KD de 1 x 10-8 M ou inferior, por exemplo, um valor KD não superior a 9 x 10-9 M, não superior a 8 x 10-9 M, não superior a 7 x 10-9 M, não superior 6,2 x 10-9 M, não superior 6 x 10-9 M, não superior 5 x 10-9 M, não superior 4,8 x 10-9 M, não superior 4,5 x 10-9 M, não mais que 2 x 10-9 M, não mais que 1,5 x 10-9 M ou não mais que 1 x 10-10 M ou menos.
[0058] Em alguns casos, a proteína de fusão do presente pedido também pode bloquear especificamente a interação entre a proteína CD47 e SIRPα, ativando assim macrófagos para fagocitar células tumorais ou inibindo o sinal apoptótico de algumas células específicas. Além disso, a proteína de fusão do presente pedido pode não causar uma reação de coagulação do sangue. Por exemplo, a referida proteína de fusão e uma solução de glóbulos vermelhos foram adicionadas a uma placa de hemaglutinação de teste e, em seguida, os glóbulos vermelhos afundaram no fundo do poço em vez de se achatarem em uma malha. A proteína de fusão pode inibir ainda mais o crescimento e/ou proliferação de tumores ou células tumorais, por exemplo, pode diminuir a área ou tamanho do tumor, ou pode aumentar a taxa de sobrevivência do sujeito com um tumor. A proteína de fusão também é segura para administração ao sujeito porque não afetaria negativamente o peso corporal e/ou a taxa de mortalidade do sujeito. Além disso, a proteína de fusão do presente pedido é fácil de preparar e obter, e não está limitada a uma fonte de região Fc da imunoglobulina específica.
[0059] No presente pedido, o termo "proteína de fusão" geralmente se refere a um polipeptídeo complexo, isto é, uma única sequência de aminoácidos contínua que consiste em dois (ou mais) polipeptídeos. A proteína de fusão pode geralmente ser preparada artificialmente por meio de ácido nucleico recombinante ou síntese química.
[0060] No presente pedido, o termo "proteína CD47" também é conhecido como proteína associada à integrina (IAP), que pertence à superfamília das imunoglobulinas. A proteína CD47 pode se ligar às integrinas de membrana, trombospondina-1 (TSP-1) ou proteína alfa reguladora de sinal (SIRPα). A proteína CD47 pode ser expressa na superfície da membrana celular. A referida proteína CD47 pode ser um complexo supramolecular que consiste em IAPs, proteínas G e colesteróis específicos. No presente pedido, a referida proteína CD47 pode ser uma proteína CD47 humana com o Número de Acessão sendo CEJ95640.1 no banco de dados GenBank. No presente pedido, a proteína CD47 pode compreender uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 66.
[0061] No presente pedido, o termo "positivo para CD47" geralmente se refere à expressão de características da proteína CD47, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos em um organismo ou na superfície das células. As células positivas para CD47 podem ser células que sobre-expressam CD47. A célula positiva pra CD47 geralmente pode servir como um indicativo de doenças. Por exemplo, no caso de doenças, a referida densidade da proteína CD47 na superfície das células positivas para CD47 excederá a densidade da proteína CD47 do mesmo tipo de células em condições normais. Em algumas modalidades, os referidos tumores ou células tumorais podem ser positivos para CD47.
Por exemplo, os referidos tumores podem ser selecionados do grupo que consiste em tumores hematológicos positivos para CD47 e/ou tumores sólidos positivos para CD47.
[0062] No presente pedido, o termo "KD" pode ser usado alternadamente com "KD" e geralmente se refere à constante de dissociação de uma interação específica anticorpo-antígeno em uma unidade de M (mol/L). KD pode ser calculado pelas concentrações do material AB e dos materiais dissociados A e B: KD=c (A) *c (B) /c (AB). Pode-se ver pela fórmula que quanto maior o valor de KD, maior a dissociação e mais fraca a afinidade dos materiais A e B; caso contrário, quanto menor o valor de KD, menor será a dissociação e mais forte será a afinidade dos materiais A e B.
[0063] No presente pedido, o termo "SIRPα" geralmente se refere a uma glicoproteína de membrana reguladora da família SIRP. A referida SIRPα pode reconhecer a proteína CD47 e pode servir como o ligante da proteína CD47. SIRPα é uma proteína transmembrana, que pode ter 3 regiões semelhantes à superfamília da imunoglobulina na sua região extracelular, em que a região no terminal N medeia a ligação ao CD47. A referida SIRPα é expressa principalmente nas superfícies de macrófagos, células dendríticas e células nervosas. A referida região citoplasmática de SIRPα é altamente conservada em ratos, camundongos e humanos. A referida SIRPα exibe um polimorfismo que não afeta, no entanto, o seu reconhecimento e ligação à proteína CD47.
[0064] No presente pedido, o termo "domínio SIRPα humano" geralmente compreende uma SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. No presente pedido, o referido domínio de SIRPα humana pode compreender um domínio extracelular da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. O referido domínio de SIRPα humana pode compreender um domínio IgV da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. O referido domínio de SIRPα humana pode compreender um domínio da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. O referido domínio de SIRPα humana pode compreender resíduos de aminoácidos nas posições 33-149 da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Em humanos, a proteína SIRPα tem principalmente dois tipos, um tipo (variante 1 de SIRPα humana ou Tipo V1) tem uma sequência de aminoácidos com o Número de Acessão do GenBanK NP_542970.1 (a sequência de aminoácidos desta é conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62, em que os resíduos de aminoácidos nas posições 31-504 podem constituir um domínio de SIRPα madura). O outro tipo (Variante 2 ou Tipo V2) tem 13 aminoácidos diferentes daqueles na variante 1 ou Tipo V1, e a sequência de aminoácidos deste tem o Número de Acessão GenBanK CAA71403.1.
[0065] No presente pedido, o referido domínio de SIRPα humana pode compreender um domínio extracelular da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos.
[0066] No presente pedido, o termo "domínio extracelular" geralmente se refere a uma região estrutural funcional da proteína localizada fora da membrana celular. Em algumas modalidades, o referido domínio extracelular pode se referir ao domínio extracelular do domínio da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Por exemplo, o referido domínio extracelular do domínio da SIRPα humana pode compreender 3 domínios da superfamília das imunoglobulinas (IgSF) e uma pluralidade de locais de glicosilação. O referido domínio extracelular do domínio de SIRPα humana pode se ligar a um ligante específico (por exemplo, a proteína CD47), alcançando uma função de transdução de sinal. O referido domínio extracelular do da domínio SIRPα humana também pode ser ativado por uma variedade de mitógenos e ser fosforilado, tais como soro, insulina, fatores de crescimento, EGF, PDGF e fatores neurotróficos.
[0067] No presente pedido, o referido domínio da SIRPα humana pode compreender um domínio IgV da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. No presente pedido, o referido domínio da SIRPα humana pode compreender a variante 1 da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Por exemplo, o referido domínio da SIRPα humana pode compreender resíduos de aminoácidos nas posições 33-149 da variante 1 da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos.
[0068] No presente pedido, o termo "domínio IgV" geralmente se refere a um domínio semelhante a IgV que é semelhante ao domínio variável do anticorpo. O domínio da imunoglobulina pode ser dividido em quatro classes: IgV, IgC1, IgC2 e IgI. O domínio IgV pode estar presente em diferentes famílias de proteínas e compreende a cadeia leve e a cadeia pesada, o receptor de células T da imunoglobulina. A SIRPα humana pode apresentar um alto polimorfismo no domínio IgV. Por exemplo, o referido domínio IgV da variante 1 de SIRPα humana pode mediar a ligação do domínio SIRPα humana à proteína CD47 humana (Seiffert, M. et al. (2001) Blood 97,2741-9; Vernon- ffilson, E.F.et al. (2000) Eur J Immunol 30, 2130-7).
[0069] Por exemplo, a referida variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos podem compreender uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO:
62. Por exemplo, o referido domínio da SIRPα humana pode compreender um domínio IgV da variante 1 da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. Por exemplo, o referido domínio de IgV da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos pode compreender uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em SEQ ID NO: 65 (ou seja, os resíduos nas posições 38-145 da sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62).
Alternativamente, por exemplo, o referido domínio da SIRPα humana pode compreender o domínio truncado da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos. O referido domínio truncado da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos pode compreender uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em SEQ ID NO: 63 (ou seja, os resíduos nas posições 33-149 da sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62).
[0070] O domínio da SIRPα humana do presente pedido pode compreender uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer um selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1-20 e 62-65.
[0071] No presente pedido, o termo "mutante" geralmente se refere a uma proteína, polipeptídeo ou sequência de aminoácidos na qual ocorre uma mutação. A referida mutação pode se referir à diferença em comparação com o tipo selvagem. Por exemplo, a referida mutação pode ser uma alteração estrutural da sequência de aminoácidos que ocorre com base no tipo selvagem. Por exemplo, o referido tipo selvagem pode ser um fenótipo típico sem a referida alteração estrutural. Por exemplo, o referido mutante pode ser obtido após a mutação do domínio da SIRPα humana, seu fragmento (compreendendo um domínio IgV da SIRPα humana, seu fragmento, um domínio da variante 1 SIRPα humana, seu fragmento ou resíduos de aminoácidos nas posições 33 -149 da variante 1 da SIRPα humana, seu fragmento) que é considerado o tipo selvagem.
[0072] No presente pedido, o mutante pode compreender substituições de aminoácidos em um ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em I61, V63, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, D96, K98, N100, R107, G109 e V132. As referidas posições dos resíduos de aminoácidos de substituições de aminoácidos podem ser um número de resíduo preciso usando a sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62 como referência, em que o "resíduo Xn" se refere ao resíduo X correspondente à posição n na sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62, em que n é um número inteiro positivo, X é uma abreviatura de qualquer resíduo de aminoácido. Por exemplo, o "resíduo I61" se refere ao resíduo de amino I correspondente à posição 61 na sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62.
[0073] No presente pedido, a "substituição de aminoácido Xn" refere-se a uma substituição de aminoácido que ocorre no resíduo de aminoácido X na posição n da sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62, em que n é um número inteiro positivo, X é uma abreviatura de qualquer resíduo de aminoácido. Por exemplo, as "substituições de aminoácidos I61" se referem à substituição de aminoácidos que ocorre no resíduo de aminoácido I correspondente à posição 61 da sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62.
[0074] No presente pedido, um determinado resíduo de aminoácido em uma determinada sequência de aminoácido "correspondente a" um determinado resíduo de aminoácido em outra sequência de aminoácido geralmente se refere a uma relação correspondente de resíduo de aminoácido obtido pelo alinhamento da sequência de aminoácido sob condições de otimização. O referido alinhamento de sequência pode ser realizado por meios que os especialistas na técnica entendam, por exemplo, pelo uso de softwares BLAST, BLAST-2, ALIGN, NEEDLE ou Megalign (DNASTAR), etc. Os especialistas na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para uso no alinhamento, compreendendo um algoritmo ny necessário para atingir o alinhamento ideal na sequência de comprimento total sendo comparada.
[0075] As substituições de aminoácidos do presente pedido podem ser substituições não conservadas. As referidas substituições não conservadas podem compreender a alteração dos resíduos de aminoácidos em uma proteína ou polipeptídeo alvo de uma forma não conservada, por exemplo, substituir um resíduo de aminoácido com um certo tamanho de cadeia lateral ou uma certa característica (por exemplo, hidrofílico) por um amino resíduo de ácido tendo um tamanho de cadeia lateral diferente ou uma característica diferente (por exemplo, hidrofóbico).
[0076] As referidas substituições de aminoácidos também podem ser substituições conservadas. As referidas substituições conservadas podem compreender a alteração dos resíduos de aminoácidos em uma proteína ou polipeptídeo alvo de uma maneira conservada, por exemplo, substituir um resíduo de aminoácido com um certo tamanho de cadeia lateral ou uma certa característica (por exemplo, hidrofílico) por um resíduo de aminoácido com mesmo tamanho de cadeia lateral ou semelhante ou a mesma ou características semelhantes (por exemplo, ainda hidrofílico). Essas substituições conservadas geralmente não produziriam um efeito significativo na estrutura ou na função da proteína produzida. No presente pedido, a variante da sequência de aminoácidos que é um mutante da proteína de fusão, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos pode compreender substituições de aminoácidos conservadas que não mudariam notavelmente a estrutura ou função do proteína (por exemplo, uma capacidade de bloquear a ligação do CD47 ao seu ligante).
[0077] Como exemplo, as substituições mútuas entre aminoácidos em cada um dos seguintes grupos podem ser consideradas como substituições conservadas no presente pedido: Grupo de aminoácidos com lados não polares: alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptofano e metionina. Grupo de aminoácidos sem carga com cadeias laterais polares: glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina e glutamina. Grupo de aminoácidos carregados negativamente com cadeias laterais polares: ácido aspártico e ácido glutâmico. Grupo de aminoácidos básicos com carga positiva: lisina, arginina e histidina.
Grupo de aminoácidos com fenil: fenilalanina, triptofano e tirosina.
[0078] Em algumas modalidades, o referido mutante pode compreender uma ou mais substituições de aminoácidos selecionadas do grupo que consiste em I61L/V/F, V63I, E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L, Q82S/R/G/N, K83R, E84K/H/D/R/G, V93L/A, D95H/R/E, D96S/T, K98R, N100G/K/D/E, R107N/S, G109R/H e V132L/R/I/S.
[0079] No presente pedido, as substituições de aminoácidos "XnY/Z" significam que o resíduo X correspondente à posição n na sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62 é substituído por um resíduo de aminoácido Y ou um resíduo de aminoácido Z, em que n é um número inteiro positivo, X, Y e Z são independentemente uma abreviatura de qualquer resíduo de aminoácido, respectivamente, e X é diferente de Y ou Z. Para exemplo, a substituição de aminoácido "I61L/V/F" significa que o resíduo I correspondente à posição 61 da sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62 é substituído por um resíduo de aminoácido L, V ou F.
[0080] Por exemplo, a proteína de fusão do presente pedido pode compreender um grupo de substituição de aminoácido selecionado do grupo que consiste em: (1) I61L, V63I, E77I, E84K, V93L, L96S, K98R, N100G e V132L; (2) I61V, E77N, Q82S, K83R e E84H; (3) I61F, V63I, K83R, E84K e V132I; (4) I61L, E77Q, E84D, R107N e V132I; (5) I61L, V63I, E77K, K83R, E84D e N100G; (6) I61V, E77H, Q82R, K83R, E84H e R107S; (7) I61L, E77I, Q82G, E84R, V93L, L96T, N100G, R107S, G109R e V132R; (8) I61L, E77M, Q82G, K83R, E84D e V132L; (9) I61L; (10) I61F, D95H, L96S, G109H e V132S;
(11) I61F, D95H, L96S, K98R, G109H e V132S; (12) I61L, E77Q, E84D, V93A, R107N e V132I; (13) E77K, L96S, N100K, G109H e V132L; (14) I61L, V63I, Q82G, E84G, D95R, L96S, N100D e V132I; (15) I61L, E77R, Q82N, K83R, E84G, V93L, D95E, L96T, K98R, N100D e V132L; (16) I61V, E77N, Q82S, K83R, E84H e V93A; (17) I61V, V63I, E77V, K83R, E84D, D95E, L96T, K98R e N100E; (18) I61L, V63I, E77V, K83R, D95E, L96S, K98R, N100D e G109R; (19) I61V, E77L, Q82G, E84G, V93L, D95E, L96T, K98R e N100G; e (20) I61L, V63I, E77N, Q82G e E84G.
[0081] No presente pedido, as variantes do domínio SIRPα compreendendo respectivamente um grupo das substituições de aminoácidos de (1) a (20) acima com base no domínio truncado da variante 1 de SIRPα humana (a sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 63, ou seja, os resíduos nas posições 33-149 da sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62) podem ser sequencialmente denominados M1, M5, M12, M35, M37, M41, M57, M67, M81, M82, M84, M91, M99, M102, M111, M122, M126, M130, M135 e M145. Esses mutantes podem compreender sequencialmente as sequências de aminoácidos mostradas em uma das SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 20.
[0082] No presente pedido, a proteína de fusão compreendendo o domínio truncado da variante 1 da SIRPα humana (a sequência de aminoácidos conforme estabelecido em SEQ ID NO: 63, ou seja, os resíduos nas posições 33-149 da sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62) e a Fc da IgG1 humana (a sequência de aminoácidos conforme estabelecida na SEQ ID NO: 67) pode ser sequencialmente nomeada de SS002 que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 61.
[0083] No presente pedido, o termo "região Fc da imunoglobulina" geralmente se refere à região de base da estrutura em forma de Y da estrutura do anticorpo, que também é chamada de região cristalizável do fragmento (região Fc). Nos isotipos de anticorpos IgG, IgA e IgD, a região Fc pode ser composta por dois fragmentos de proteína idênticos derivados do segundo e do terceiro domínios constantes das duas cadeias pesadas do anticorpo. As regiões Fc de IgM e IgE podem compreender três domínios constantes de cadeia pesada em cada cadeia polipeptídica. A região Fc de IgG tem um sítio de N-glicosilação altamente conservado. Em algumas modalidades, a referida região Fc da imunoglobulina pode compreender a região Fc de IgG. Em algumas modalidades, a referida região Fc da imunoglobulina pode incluir as regiões CH2 e CH3 da região constante da cadeia pesada. Em algumas modalidades, a referida região Fc da imunoglobulina pode compreender uma região de dobradiça. Por exemplo, a referida região Fc da imunoglobulina pode compreender uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer um dos seguintes: SEQ ID NO: 67-68.
[0084] No presente pedido, o termo "IgG" geralmente se refere à imunoglobulina G (Imunoglobulina G). IgG é uma das imunoglobulinas humanas. De acordo com a diferença da antigenidade da cadeia gama nas moléculas de IgG, a IgG humana possui quatro subtipos: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. No presente pedido, o termo "IgG1" geralmente se refere a um subtipo com a maior proporção de IgG que tem uma afinidade relativamente alta com o receptor Fc. Por exemplo, a referida IgG pode ser uma IgG humana. Alternativamente, por exemplo, a referida IgG pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em IgG1 e/ou IgG4.
[0085] No presente pedido, a referida proteína de fusão compreende um domínio da SIRPα humana que pode se ligar especificamente à proteína CD47 e uma região Fc da imunoglobulina, em que o domínio da SIRPα humana pode ser direta ou indiretamente ligada à região Fc da imunoglobulina. Por exemplo, o referido domínio da SIRPα humana pode estar localizado no terminal N da região Fc da imunoglobulina. Por exemplo, o referido terminal C do domínio da SIRPα humana pode ser direta ou indiretamente ligado ao terminal N da Fc da imunoglobulina. Por exemplo, o referido domínio da SIRPα humana pode ser ligado à referida Fc da imunoglobulina através de um ligante. No presente pedido, o referido ligante pode ser um ligante peptídico.
[0086] No presente pedido, a proteína de fusão do presente pedido compreendendo um grupo de substituições de aminoácidos de (1) - (20) como acima com base no referido SS002, respectivamente, pode ser sequencialmente denominada SS002M1, SS002M5, SS002M12, SS002M35, SS002M37, SS002M41, SS002M57, SS002M67, SS002M81, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M99, SS002M102, SS002M111, SS002M122, SS002M126, SS002M130, SS002M135 e SS002M145. Estas proteínas de fusão podem sequencialmente compreender a sequência de aminoácidos conforme estabelecida na SEQ ID NO: 21-SEQ ID NO: 40.
[0087] No presente pedido, a proteína de fusão do presente pedido compreende, respectivamente, um grupo de substituições de aminoácidos de (1) - (20) acima e a Fc da IgG4 humana (a sequência de aminoácidos conforme estabelecida em SEQ ID NO: 68) com base no domínio truncado da variante 1 da SIRPα humana (compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 63, ou seja, os resíduos nas posições 33-149 na sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 62) podem ser sequencialmente denominados SS002M1G4, SS002M5G4, SS002M12G4, SS002M35G4, SS002M37G4, SS002M41G4, SS002M57G4, SS002M67G4, SS002M81G4, SS002M82G4, SS002M84G4, SS002M91G4, SS002M99G4, SS002M102G4, SS002M111G4, SS002M122G4, SS002M126G4, SS002M130G4, SS002M135G4 e SS002M145G4. Estas proteínas de fusão podem compreender sequencialmente a sequência de aminoácidos conforme estabelecido em uma das SEQ ID NO: 41 a SEQ ID NO: 60.
[0088] Em algumas modalidades, a proteína de fusão do presente pedido pode compreender uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NO: 21-SEQ ID NO: 61.
[0089] A proteína, polipeptídeo e/ou sequência de aminoácidos envolvida no presente pedido também pode ser entendida como compreendendo pelo menos o seguinte escopo: variantes ou homólogos com a mesma função ou semelhante à referida proteína ou polipeptídeo.
[0090] No presente pedido, as referidas variantes podem ser proteínas ou polipeptídeos gerados pela substituição, deleção ou adição de um ou mais aminoácidos em comparação com a sequência de aminoácidos da referida proteína e/ou do referido polipeptídeo (por exemplo, o domínio da SIRPα humana, seu fragmento, ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos; ou a referida proteína de fusão). Por exemplo, a referida variante funcional pode compreender proteínas ou polipeptídeos com alterações de aminoácidos pela substituição, deleção e/ou inserção de pelo menos 1 aminoácido, por exemplo, 1-30, 1-20 ou 1-10, alternativamente, por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições, deleções e/ou inserções de aminoácidos. A referida variante funcional pode reter substancialmente as características biológicas da referida proteína ou do referido polipeptídeo antes da mudança (por exemplo, substituições, deleções ou adições). Por exemplo, a referida variante funcional pode reter pelo menos 60%, 70%, 80%, 90% ou 100% da atividade biológica (por exemplo, a capacidade de se ligar especificamente à proteína CD47) da referida proteína ou do referido polipeptídeo antes da mudança.
[0091] No presente pedido, o referido homólogo pode ser uma proteína ou polipeptídeo que tem pelo menos cerca de 80% (por exemplo, pelo menos cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou mais) de homologia de sequência com a sequência de aminoácidos da referida proteína e/ou referido polipeptídeo (por exemplo, o domínio da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos; ou a referida proteína de fusão).
[0092] No presente pedido, a referida homologia geralmente se refere à similaridade, analogia ou associação entre duas ou mais sequências. O "percentual de homologia de sequência" pode ser calculado por meio de comparação das duas sequências a serem alinhadas na janela de comparação para determinar o número de posições nas quais a mesma base de ácido nucleico (por exemplo, A, T, C, G, I) ou o mesmo resíduo de aminoácido (por exemplo, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys e Met) são presentes de modo a fornecer o número de posições correspondentes, dividindo o número de posições correspondentes pelo número total de posições na janela de comparação (isto é, o tamanho da janela) e multiplicando o resultado por 100 para obter o percentual da homologia de sequência. O alinhamento para determinar o percentual de homologia de sequência pode ser realizado de uma variedade de maneiras conhecidas na técnica, por exemplo, pelo uso de softwares de computador disponíveis publicamente, como os softwares BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Os especialistas na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para o alinhamento de sequência, incluindo qualquer algoritmo necessário para atingir o alinhamento máximo dentro da sequência de comprimento total sendo comparada ou dentro da região de sequência alvo. A referida homologia também pode ser determinada pelos seguintes métodos: FASTA e BLAST. O algoritmo FASTA é descrito em, por exemplo, WR Pearson e DJ Lipman's "Improved Tool for Biological Sequence Comparison", Proc. Natl. Acad. Sci., 85: 2444-2448, 1988; e D, J. Lipman and W. R. Pearson’s "Fast and Sensitive Protein Similarity Search", Science, 227:1435-1441,
1989. Para a descrição do algoritmo BLAST, vide S. Altschul, W. Gish, W. Miller, E. W. Myers and D. Lipman, "A Basic Local Alignment Search Tool", Journal of Molecular
Biology, 215: 403-410, 1990. MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA
[0093] Em outro aspecto, o presente pedido fornece uma ou mais moléculas de ácido nucleico capazes de codificar a proteína de fusão do presente pedido.
[0094] Em algumas modalidades, a referida molécula de ácido nucleico pode codificar completamente a proteína de fusão do presente pedido. Por exemplo, a referida proteína de fusão pode ser obtida pelo uso de apenas um tipo de molécula de ácido nucleico. Em algumas modalidades, a referida molécula de ácido nucleico pode codificar uma parte da proteína de fusão do presente pedido. Por exemplo, a referida proteína de fusão pode ser obtida pelo uso de mais de dois tipos de diferentes moléculas de ácido nucleico. Por exemplo, a referida molécula de ácido nucleico pode codificar os referidos domínios da SIRPα humana da proteína de fusão do presente pedido (por exemplo, o referido domínio extracelular da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos, o referido domínio IgV da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos, o referido domínio da SIRPα humana variante 1, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos). Alternativamente, por exemplo, a referida molécula de ácido nucleico pode codificar a região Fc da imunoglobulina da proteína de fusão.
[0095] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um ou mais vetores que podem compreender uma ou mais moléculas de ácido nucleico do presente pedido. Em outro aspecto, o presente pedido fornece uma célula (por exemplo, uma célula hospedeira), que pode compreender a molécula de ácido nucleico do presente pedido ou o vetor do presente pedido.
[0096] No presente pedido, o termo "molécula de ácido nucleico" geralmente se refere a uma forma isolada de nucleotídeo, desoxirribonucleotídeo ou ribonucleotídeo ou seus análogos de qualquer comprimento isolados de seu ambiente natural ou sintetizados artificialmente. As moléculas de ácido nucleico do presente pedido podem ser isoladas. Por exemplo, pode ser produzido ou sintetizado das seguintes maneiras: (i) amplificação in vitro, como a amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR), (ii) recombinação clonal, (iii) purificação, por exemplo, fracionamento por digestão com enzimas de restrição e eletroforese em gel ou (iv) síntese, por exemplo, síntese química. Em algumas modalidades, o referido ácido nucleico isolado é uma molécula de ácido nucleico preparada por uma tecnologia de DNA recombinante. No presente pedido, o ácido nucleico que codifica o referido anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno pode ser preparado por uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Estes métodos incluem, mas não estão limitados a, PCR de extensão de sobreposição pelo uso de operações de fragmento de restrição ou oligonucleotídeos sintéticos. Operações específicas podem ser encontradas em Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989; and Ausube et al. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York NY, 1993.
[0097] No presente pedido, o termo "vetor" geralmente se refere a uma molécula de ácido nucleico capaz de auto-replicação em um hospedeiro adequado, que transfere a molécula de ácido nucleico inserida em uma célula hospedeira e/ou entre células hospedeiras. O referido vetor pode compreender um vetor usado principalmente para inserir DNA ou RNA em células, um vetor usado principalmente para replicar DNA ou RNA e um vetor usado principalmente para a transcrição de DNA ou RNA e/ou expressão da tradução. O referido vetor também compreende um vetor com múltiplas funções descritas acima. O referido vetor pode ser um polinucleotídeo que pode ser transcrito e traduzido em um polipeptídeo quando introduzido em uma célula hospedeira adequada. Geralmente, ao cultivar uma célula hospedeira adequada contendo o referido vetor, o referido vetor pode produzir o produto de expressão desejado. No presente pedido, o referido vetor pode incluir uma ou mais das referidas moléculas de ácido nucleico. Por exemplo, o referido vetor pode compreender todas as moléculas de ácido nucleico necessárias para codificar a referida proteína de fusão. Neste caso, apenas um vetor é necessário para obter a proteína de fusão do presente pedido. Em algumas modalidades, o referido vetor pode compreender uma molécula de ácido nucleico que codifica uma parte da referida proteína de fusão, por exemplo, uma molécula de ácido nucleico que codifica o referido domínio da SIRPα humana na proteína de fusão do presente pedido. Alternativamente, o referido vetor pode compreender, por exemplo, uma molécula de ácido nucleico que codifica a referida região Fc da imunoglobulina na referida proteína de fusão. Neste momento, dois ou mais vetores são necessários para obter a proteína de fusão do presente pedido.
[0098] Além disso, o referido vetor também pode incluir outros genes, como um gene marcador que permite selecionar o vetor em uma célula hospedeira adequada e sob condições adequadas. Além disso, o referido vetor também pode incluir um elemento de controle de expressão que permite que a região de codificação seja adequadamente expressa em um hospedeiro adequado. Tal elemento de controle é bem conhecido dos especialistas na técnica. Por exemplo, eles podem compreender promotores, sítios de ligação ao ribossoma, intensificadores e outros elementos de controle que regulam a transcrição do gene ou tradução do mRNA. Em algumas modalidades, a referida sequência de controle de expressão é um elemento regulador. A estrutura específica da referida sequência de controle de expressão pode variar dependendo da função das espécies ou tipos de células, mas geralmente compreende sequências 5’ não transcritas e sequências 5' e 3’ não traduzidas envolvidas na transcrição e iniciação da tradução, como TATA box, sequências capeadas, sequências CAAT, etc. Por exemplo, a sequência de controle de expressão 5’ não transcrita pode compreender uma região promotora e a região promotora pode compreender uma sequência promotora para controle transcricional do ácido nucleico funcionalmente ligado. No presente pedido, o referido vetor pode ser um vetor pTM.
[0099] No presente pedido, os termos "célula hospedeira", "célula" e "hospedeiro" são usados indistintamente e geralmente se referem a um plasmídeo ou vetor que pode incluir ou ter incluído a molécula de ácido nucleico do presente pedido, ou pode expressar células individuais, linhagens celulares ou culturas de células da proteína de fusão do presente pedido, seus fragmentos ou suas variantes. A referida célula hospedeira pode compreender a progênie de uma única célula hospedeira. Devido a mutações naturais, acidentais ou deliberadas, as células descendentes e as células parentais originais não podem ser necessariamente completamente idênticas em morfologia ou genoma, desde que possam expressar os anticorpos do presente pedido ou seus fragmentos de ligação ao antígeno. A referida célula hospedeira pode ser obtida por transfecção de células in vitro com o vetor do presente pedido. A referida célula hospedeira pode ser uma célula procariótica (por exemplo, Escherichia coli) ou uma célula eucariótica (por exemplo, células de levedura, por exemplo, células COS, células de ovário de hamster chinês (CHO), células HeLa, células HEK293, células COS-1, células NS0 ou células de mieloma). No presente pedido, a referida célula hospedeira pode ser uma célula CHO. COMPOSIÇÃO, MÉTODO DE PREPARAÇÃO E USO
[00100] Em outro aspecto, o presente pedido pode fornecer um método de preparação da referida proteína de fusão, incluindo a cultura de uma célula hospedeira sob condições que permitem a expressão da referida proteína de fusão.
[00101] Em outro aspecto, o presente pedido pode fornecer uma composição compreendendo a referida proteína de fusão, a referida molécula de ácido nucleico, o referido vetor e/ou a referida célula hospedeira e, opcionalmente, um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
[00102] No presente pedido, o termo "adjuvante farmaceuticamente aceitável"
pode compreender tampões, antioxidantes, conservantes, polipeptídeos de baixo peso molecular, proteínas, polímeros hidrofílicos, aminoácidos, açúcares, agentes quelantes, contra-íons, complexos metálicos e/ou surfactantes não iônicos, etc.
[00103] O referido adjuvante farmaceuticamente aceitável pode compreender tampões, antioxidantes, conservantes, polipeptídeos de baixo peso molecular, proteínas, polímeros hidrofílicos, aminoácidos, açúcares, agentes quelantes, contra- íons, complexos metálicos e/ou surfactantes não iônicos, etc.
[00104] No presente pedido, a referida composição farmacêutica pode ser formulada com um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável e quaisquer outros adjuvantes e excipientes conhecidos de acordo com os meios técnicos convencionais na técnica, por exemplo, após as operações em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, nineteenth edition, edited by Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1995.
[00105] No presente pedido, a referida composição pode ser formulada para administração oral, administração intravenosa, administração intramuscular, administração in situ no local do tumor, inalação, administração retal, administração vaginal, administração transdérmica ou o fármaco é administrado por meio de um depósito subcutâneo.
[00106] No presente pedido, a referida composição pode ser usada para inibir o crescimento do tumor. Por exemplo, a composição do presente pedido pode inibir ou atrasar o desenvolvimento ou progressão de doenças (por exemplo, tumores ou doenças autoimunes), (por exemplo, reduzir o tamanho do tumor ou mesmo eliminar substancialmente os tumores) e/ou pode reduzir e/ou estabilizar o estado da doença.
[00107] A composição farmacêutica do presente pedido pode compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz da referida proteína de fusão. A referida quantidade terapeuticamente eficaz é uma dose necessária para prevenir e/ou tratar (pelo menos tratar parcialmente) doenças (por exemplo, tumores ou doenças autoimunes) e/ou quaisquer complicações das mesmas em um sujeito com ou em risco de doenças.
[00108] Em outro aspecto, o presente pedido fornece o uso da proteína de fusão, a molécula de ácido nucleico, o vetor, a célula hospedeira e/ou a composição do presente pedido na preparação de um fármaco e/ou kit para uso na prevenção ou tratamento de tumores ou doenças autoimunes.
[00109] No presente pedido, o termo "tumor" geralmente se refere a novos crescimentos formados pela proliferação de células de tecidos locais de organismos. Como esses novos crescimentos são apresentados principalmente como protuberâncias que ocupam massa, eles também são chamados de neoplasias. De acordo com as características celulares dos novos crescimentos e o grau de dano ao organismo, os tumores são subdivididos em duas classes, ou seja, tumores benignos e tumores malignos. Câncer é o termo geral para tumores malignos. Os tumores do presente pedido podem ser selecionados do grupo de tumores hematológicos positivos para CD47 e/ou tumores sólidos positivos para CD47.
[00110] No presente pedido, o termo "tumor hematológico positivo para CD47" geralmente se refere aos tumores hematológicos que sobre-expressam CD47, que podem compreender uma variedade de leucemias, linfomas e mielomas. A referida "leucemia" geralmente se refere a um câncer do sangue, no qual muitos glóbulos brancos são produzidos que não são eficazes no combate à infecção, comprimindo assim outras partes do sangue, como plaquetas e glóbulos vermelhos. As leucemias podem ser divididas em leucemias agudas ou crônicas. Algumas formas de leucemia podem ser, por exemplo, leucemia linfocítica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), distúrbio/tumor mieloproliferativo (MPDS) e síndrome mielodisplásica. O referido "linfoma" pode se referir aos linfomas de Hodgkin, linfomas não-Hodgkin indolentes e agressivos, linfoma de Burkitt, linfoma folicular (células pequenas e células grandes),
etc. Os referidos mielomas podem se referir a mieloma múltiplo (MM), mieloma de células gigantes, mieloma de cadeia pesada (mieloma de cadeia pesada), mieloma de cadeia leve (mieloma de cadeia leve) ou mieloma de Bence-Jones (mieloma de Bence-Jones).
[00111] No presente pedido, o termo "tumor sólido positivo para CD47" geralmente se refere a um tumor sólido ou um tumor visível que sobre-expressa CD47, que pode ser detectado por exame clínico, como filme de raios-X, varredura de TC, ultrassom B ou palpação. As categorias principais podem incluir carcinomas e sarcomas. Por exemplo, os referidos tumores sólidos positivos para CD47 podem incluir sarcoma de Ewing, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, câncer de bexiga, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer de pulmão, câncer de cólon, câncer de mama, câncer pancreático, carcinoma astrocítico, glioblastoma, carcinoma de células renais, etc.
[00112] No presente pedido, as referidas doenças autoimunes podem incluir doença de Crohn, asma alérgica e artrite reumatoide.
[00113] No presente pedido, o termo "doença de Crohn" geralmente se refere a uma doença inflamatória intestinal de causa desconhecida, que pode ocorrer em qualquer parte do trato gastrointestinal. Tanto a doença de Crohn quanto a colite ulcerativa crônica inespecífica são referidas coletivamente como doença inflamatória intestinal (DII).
[00114] No presente pedido, o termo "asma alérgica" geralmente se refere a inflamações crônicas das vias aéreas envolvidas por uma variedade de células, especialmente mastócitos, eosinófilos e linfócitos T.
[00115] No presente pedido, o termo "artrite reumatoide" geralmente se refere a uma doença autoimune sistêmica crônica dominada por doença articular.
[00116] Em outro aspecto, a proteína de fusão, a molécula de ácido nucleico, o vetor, a célula hospedeira e/ou a composição do presente pedido podem ser usados na prevenção ou tratamento dos referidos tumores ou referidas doenças autoimunes.
[00117] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um método para prevenir ou tratar tumores ou doenças autoimunes, incluindo a administração da proteína de fusão, a molécula de ácido nucleico, o vetor, a célula hospedeira e/ou a composição do presente pedido a um sujeito.
[00118] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um método para bloquear a interação da proteína CD47 e a SIRPα, compreendendo administrar a proteína de fusão ou a composição do presente pedido (por exemplo, administrar a um sujeito ou célula ou amostra biológica em necessidade).
[00119] Em outro aspecto, o presente pedido fornece um método para inibir o crescimento e/ou a proliferação de tumores ou células tumorais, compreendendo o contato da proteína de fusão ou a composição do presente pedido com os tumores ou células tumorais. Por exemplo, o referido contato pode ocorrer in vitro.
[00120] No presente pedido, o termo "sujeito" geralmente se refere a qualquer animal humano ou não humano. O termo "animal não humano" pode incluir todos os vertebrados, como mamíferos e não mamíferos, por exemplo, primatas não humanos, cabras, ovelhas, cães, vacas, galinhas, anfíbios, répteis, etc.
[00121] No presente pedido, o termo "cerca de" geralmente se refere a uma variação dentro de 0,5% a 10% do valor especificado, por exemplo, dentro de 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 3,5%, 4%, 4,5%, 5%, 5,5%, 6%, 6,5%, 7%, 7,5%, 8%, 8,5%, 9%, 9,5% ou 10% do valor especificado.
[00122] No presente pedido, o termo "compreendendo" geralmente significa incluindo, contendo, tendo ou englobando. Em alguns casos, também se refere ao significado de "ser" ou "consistir em".
[00123] Sem serem limitados por qualquer teoria, os seguintes exemplos são apenas com o propósito de ilustrar os modos de funcionamento do aparelho, método e sistema do presente pedido, ao invés de limitar o escopo da invenção como reivindicado no presente pedido. Exemplos Exemplo 1: Triagem de Variantes
[00124] O domínio truncado da variante 1 da SIRPα humana (NP_542970.1) com uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 63 (ou seja, resíduos nas posições 33-149 na SEQ ID NO: 62) foram tomadas, e o software Discovery Studio (Neotrident) foi usado para construir a estrutura no domínio truncado que interagiu com a CD47 humana (CEJ95640.1). Os sítios de interação nas duas proteínas e os modos de interação das mesmas foram teoricamente analisados para determinar que os sítios de aminoácidos nos domínios truncados que direta ou indiretamente participaram da interação com CD47 eram I61, V63, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, D96, K98, N100, R107, G109, e V132 (em que as posições dos resíduos de aminoácidos nas substituições de aminoácidos foram numeradas pelo uso da sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 62 como referência). Esses sítios de ação foram mutados aleatoriamente e uma biblioteca de mutantes foi construída. Em seguida, a biblioteca mutante foi clonada no vetor pTM. O referido vetor pTM compreendia um peptídeo sinal e uma sequência da região transmembranar (como mostrado na FIG. 1), que poderia exibir o gene clonado no vetor na superfície da célula.
[00125] O vetor de expressão da biblioteca mutante construída foi transfectado em células CHO (ATCC), de modo a exibir e expressar a biblioteca mutante na superfície celular. Em seguida, uma proteína CD47 (Yiqiao Shenzhou) foi marcada por fluorescência com FITC para obter CD47-FITC. De acordo com a diferença da atividade de ligação entre CD47-FITC e os mutantes do domínio truncado na superfície das células CHO, os mutantes que se ligam a CD47-FITC foram enriquecidos e selecionados por meio de tecnologia de citometria de fluxo. O princípio de triagem específica pode ser visto na FIG. 2, em que o domínio truncado e o mutante se ligaram à proteína CD47 com a molécula fluorescente, portanto, os resultados da ligação poderiam ser refletidos pelo nível da molécula fluorescente.
[00126] Após quatro rodadas de triagem e enriquecimento, as células que se ligaram fortemente a CD47-FITC foram coletadas (como mostrado na FIG. 3). Em seguida, o mRNA foi extraído e sujeito à transcrição reversa para gerar o cDNA, e o mutante de domínio truncado foi submetido a análise de sequenciamento (como mostrado na FIG. 4). Os resultados de sequenciamento mostraram que as posições supracitadas I61, V63, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, D96, K98, N100, R107, G109, V132 têm diferentes combinações de sítios de mutação.
[00127] Pode ser visto a partir dos resultados que um mutante do domínio truncado variante 1 da SIRPα humana que pode reconhecer especificamente CD47 pode ser obtido através da introdução de diferentes combinações de sítios de mutação nos resíduos I61, V63, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, D96, K98, N100, R107, G109 e/ou V132.
[00128] Uma análise posterior gerou os possíveis tipos de aminoácidos mutados dos sítios de mutação mencionados: I61L/V/F, V63I, E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L, Q82S/R/G/N, K83R, E84K/H/D/R/G, V93L/A, D95H/R/E, D96S/T, K98R, N100G/K/D/E, R107N/S, G109R/H, V132L/R/I/S.
[00129] Os mutantes contendo essas mutações foram denominados M1, M5, M12, M35, M37, M41, M57, M67, M81, M82, M84, M91, M99, M102, M111, M122, M126, M130, M135 e M145, que incluíram sequencialmente as sequências de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NO: 1-20, respectivamente. Ao mesmo tempo, esses mutantes compreenderam sequencialmente as seguintes combinações de mutações de aminoácidos com base na sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 63: (1) I61L, V63I, E77I, E84K, V93L, L96S, K98R, N100G e V132L; (2) I61V, E77N, Q82S, K83R e E84H;
(3) I61F, V63I, K83R, E84K e V132I; (4) I61L, E77Q, E84D, R107N e V132I; (5) I61L, V63I, E77K, K83R, E84D e N100G; (6) I61V, E77H, Q82R, K83R, E84H e R107S; (7) I61L, E77I, Q82G, E84R, V93L, L96T, N100G, R107S, G109R e V132R; (8) I61L, E77M, Q82G, K83R, E84D e V132L; (9) I61L; (10) I61F, D95H, L96S, G109H e V132S; (11) I61F, D95H, L96S, K98R, G109H e V132S; (12) I61L, E77Q, E84D, V93A, R107N e V132I; (13) E77K, L96S, N100K, G109H e V132L; (14) I61L, V63I, Q82G, E84G, D95R, L96S, N100D e V132I; (15) I61L, E77R, Q82N, K83R, E84G, V93L, D95E, L96T, K98R, N100D e V132L; (16) I61V, E77N, Q82S, K83R, E84H e V93A; (17) I61V, V63I, E77V, K83R, E84D, D95E, L96T, K98R e N100E; (18) I61L, V63I, E77V, K83R, D95E, L96S, K98R, N100D e G109R; (19) I61V, E77L, Q82G, E84G, V93L, D95E, L96T, K98R e N100G; e (20) I61L, V63I, E77N, Q82G e E84G. Exemplo 2 Medição da atividade de ligação da proteína de fusão
[00130] O domínio truncado da variante 1 da SIRPα humana (ou denominado domínio truncado de SIRPα de tipo selvagem) no Exemplo 1 e o mutante do domínio da SIRPα humana obtido no Exemplo 1 (ou seja, M1, M5, M12, M35, M37, M41, M57, M67, M81, M82, M84, M91, M99, M102, M111, M122, M126, M130, M135 e M145) foram fundidos e expressos com o IgG1-Fc humano (a sequência de aminoácidos do qual foi apresentada em SEQ ID NO: 67) respectivamente, de modo a gerar a proteína de fusão Fc humana de domínio truncado correspondente do mutante 1 de SIRPα
(resumidamente, proteína de fusão). Essas proteínas de fusão foram nomeadas SS002, SS002M1, SS002M5, SS002M12, SS002M35, SS002M37, SS002M41, SS002M57, SS002M67, SS002M81, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M99, SS002M102, SS002M111, SS002M122, SS002M126, SS002M130, SS002M135 e SS002M145, respectivamente.
Estas proteínas de fusão compreenderam a sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NO: 61 e 21 a 40, respectivamente.
Tabela 1 O domínio truncado de Mutante 1 de SIRPα e Mutante e Proteína de Fusão Correspondente
Domínio truncado do SIRPα Mutante 1 ou Seu Mutante Proteína de fusão
Domínio truncado SIRPα de tipo selvagem SS002
M1 SS002M1
M5 SS002M5
M12 SS002M12
M35 SS002M35
M37 SS002M37
M41 SS002M41
M57 SS002M57
M67 SS002M67
M81 SS002M81
M82 SS002M82
M84 SS002M84
M91 SS002M91
M99 SS002M99
M102 SS002M102
M111 SS002M111
M122 SS002M122 M126 SS002M126 M130 SS002M130 M135 SS002M135 M145 SS002M145
[00131] Como exemplo, as proteínas de fusão SS002, SS002M12, SS002M5, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M102 e SS002M130 foram selecionadas para análise de atividade biológica.
[00132] A afinidade de várias proteínas de fusão incluindo SS002, SS002M5, SS002M12, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M102, SS002M130 e semelhantes para CD47 foi determinada por meio de um método ELISA.
[00133] A placa de ELISA foi revestida com 1 g/ml de antígeno alvo CD47-His a 4º C durante a noite. Após lavagem com PBST, foi adicionado soro fetal bovino a 10% e a mistura foi bloqueada a 37º C durante 1 hora. Em seguida, SS002, SS002M5, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M102 e SS002M130 foram adicionados aos mesmos, respectivamente, e reagiram a 37º C por 1 hora. Em seguida, a mistura de reação foi lavada com PBST, e anti-IgG humana HRP de cabra marcado com peroxidase de rábano (Thermo Fisher Scientific) foi adicionado e reagido em temperatura ambiente por 30 minutos. Em seguida, a placa foi lavada repetidamente com PBST por 5 vezes e seca para remover o líquido residual possível com papel absorvente. Em seguida, 100 ml de TMB (eBioscience) foram adicionados a cada poço, e permaneceram em temperatura ambiente (20 ± 5ºC) no escuro por 1-5 min. 100 ml de 2 N de H2SO4 foram adicionados a cada poço para interromper a reação do substrato. O valor de OD foi lido a 450 nm com um leitor de microplaca e a afinidade entre cada proteína de fusão e molécula de CD47 foi analisada (como mostrado na FIG. 5).
[00134] Os resultados na FIG. 5 mostraram que várias proteínas de fusão,
incluindo SS002, SS002M5, SS002M12, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M102, SS002M130 e semelhantes podem reconhecer eficazmente a molécula de CD47. Exemplo 3 Análise de Afinidade
[00135] Como exemplo, o método Biacore foi usado para medir a afinidade de cada proteína de fusão, incluindo SS002, SS002M5, SS002M12, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M102, SS002M130 e semelhantes para a molécula de CD47, e os resultados foram mostrados na Tabela 2 abaixo. Tabela 2 Afinidade de ligação para CD47 Proteína de fusão Ka (106 1/Ms) Kd (10-4 1/s) KD (10-9 M) SS002 1,32±0,09 63,00±1,35 4,80±0,20 SS002M5 1,72±0,12 86,20±9,65 5,00±0,22 SS002M12 1,87±0,05 86,10±2,94 4,62±0,08 SS002M82 1,29±0,05 21,13±0,42 1,65±0,03 SS002M84 1,10±0,02 14,30±0,20 1,30±0,02 SS002M91 1,56±0,13 2,72±0,44 0,18±0,04 SS002M102 1,79±0,20 28,97±7,83 1,60±0,24 SS002M130 1,43±0,09 88,20±8,67 6,20±0,99
[00136] Os resultados na Tabela 2 mostraram que SS002, SS002M5, SS002M12, SS002M82, SS002M84, SS002M91, SS002M102, SS002M130 e outras proteínas de fusão podem reconhecer moléculas de CD47 com alta afinidade. Exemplo 4 Especificidade do Reconhecimento de Espécies da Proteína de Fusão
[00137] As proteínas de fusão SS002 e SS002M91 foram tomadas como exemplos para realizar uma análise da atividade de reconhecimento específica.
[00138] Para realizar a análise de espécies das proteínas de fusão, 1 mg/mL de CD47 humano e CD47 de camundongo (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.) foram revestidos em placas de ELISA, respectivamente, e permaneceram a 4º C durante a noite. Após lavagem com PBST, foi adicionado soro fetal bovino a 10% e a mistura foi bloqueada a 37º C durante 1 hora. Em seguida, SS002 e SS002M91 foram adicionados, respectivamente, e reagiram a 37º C por 1 hora. Após lavagem com PBST, Anti IgG humana HRP de cabra marcado com peroxidase de rábano (Thermo Fisher Scientific) foi adicionado e reagido em temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, a placa foi lavada repetidamente com PBST por 5 vezes, e seca para remover as gotas de líquido residual quanto possível com papel absorvente. Em seguida, 100 ml de TMB (eBioscience) foram adicionados a cada poço e permaneceram em temperatura ambiente (20 ± 5º C) no escuro por 1-5 min. 100 ml de 2 N de H2SO4 foram adicionados a cada poço para parar a reação do substrato. O valor de DO foi lido a 450 nm com um leitor de microplaca e a capacidade de ligação da proteína de fusão a diferentes espécies de CD47 foi analisada (os resultados experimentais da proteína de fusão SS002 e SS002M91 foram mostrados nas FIGS. 6A e 6B, respectivamente).
[00139] Os resultados das FIGS. 6A-6B mostraram que ambos SS002 e SS002M91 podem reconhecer especificamente moléculas de CD47 humanas, mas não podem reconhecer moléculas de CD47 de camundongo. Exemplo 5 As proteínas de fusão reconhecem especificamente o antígeno alvo
[00140] As proteínas de fusão SS002 e SS002M91 foram tomadas como exemplos. 1 mg/ml de SS002, SS002M91, bem como Milk (Beijing Bomed Biotechnology Co., Ltd.), BSA (BOVOGEN), CD19 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), TROP2 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), CD47 (Beijing Magppel Biotech Co., Ltd.), CD38 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), Gas6 (R&D) e outras proteínas, e AXL (ACRO Biosystems)
foram revestidos em placas ELISA, respectivamente, e permaneceu a 4º C durante a noite. Após lavagem com PBST, foi adicionado soro fetal bovino a 10% e a mistura foi bloqueada a 37º C durante 1 hora. Em seguida, SS002 e SS002M91 foram adicionados, respectivamente, e reagiram a 37º C por 1 hora. Após lavagem com PBST, Anti IgG humana HRP de cabra marcado com peroxidase de rábano (Thermo Fisher Scientific) foi adicionado e reagido em temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, a placa foi lavada repetidamente com PBST por 5 vezes, e seca para remover as gotas de líquido residual quanto possível com papel absorvente. Em seguida, 100 ml de TMB (eBioscience) foram adicionados a cada poço e permaneceram em temperatura ambiente (20 ± 5º C) no escuro por 1-5 min. 100 ml de 2 N de H2SO4 foram adicionados a cada poço para parar a reação do substrato. O valor de OD foi lido a 450 nm com um leitor de microplaca e a capacidade de ligação da proteína de fusão a várias proteínas mencionadas foi analisada (como mostrado na FIG. 7).
[00141] Os resultados na FIG. 7 mostraram que as proteínas de fusão SS002 e SS002M91 apenas reconhecem a molécula CD47 humana e não sofrem nenhuma reação cruzada com outras proteínas. Exemplo 6 As proteínas de fusão bloqueiam especificamente a interação CD47/SIRPα
[00142] SS002M91 foi tomado como um exemplo para realizar a análise de bloqueio específico da atividade de interação CD47/SIRPα, e a expressão do congênere americano TTI-621 (ver CN105073780A) foi usada como um controle positivo.
[00143] 1 μg/ml de SIRPα-His foi revestido na placa de ELISA e permaneceu a 4º C durante a noite. Após lavagem com PBST, foi adicionado soro fetal bovino a 10% e a mistura foi bloqueada a 37º C durante 1 hora. SS002M91 e TTI-621 foram diluídos em série com 10% de sangue fetal bovino, respectivamente, e Biotina-Fc-
CD47 foi adicionada às amostras para uma concentração final de 2 μg/ml. A mistura foi pré-incubada a 37º C por 30 min para uso como o anticorpo primário. Após a placa de ELISA ter sido lavada com PBST, o anticorpo primário foi adicionado e incubado a 37º C durante 1 hora. Em seguida, após lavagem com PBST por 5 vezes, avidina marcada com peroxidase de rábano (Streptavidin-HRP, Jiaxuan Bio) foi adicionada e incubada a 37º C por 30 minutos. Após a lavagem com PBST por 5 vezes, 100 μL de TMB (eBioscience) foram adicionados a cada poço e permaneceram em temperatura ambiente (20 ± 5ºC) no escuro por 1-5min. 100 μL de 2N H2SO4 foram adicionados a cada poço para extinguir a reação do substrato. O valor de OD foi lido a 450 nm com um leitor de microplaca e o efeito de bloqueio da proteína de fusão SIRPα em CD47/SIRPα foi analisado (como mostrado na FIG. 8).
[00144] Os resultados na FIG. 8 mostraram que SS002M91 e TTI-621 podem bloquear competitivamente a ligação de CD47 ao seu ligante SIRPα. No entanto, a proteína de fusão SS002M91 tem uma atividade de bloqueio significativamente maior do que TTI-621. O valor IC50 de SS002M91 é 5,47μg/mL, enquanto o valor IC50 de TTI-621 é 493,5μg/mL. Exemplo 7 A proteína de fusão reconhece especificamente a molécula de CD47 na superfície das células tumorais
[00145] As proteínas de fusão SS002 e SS002M91 foram tomadas como exemplos para analisar a atividade de reconhecimento da molécula de CD47 na superfície das células tumorais.
[00146] A citometria de fluxo (BD Calibur) foi usada para detectar, respectivamente, as atividades de SS002 e SS002M91 que reconheceram especificamente as moléculas de CD47 na superfície das células Raji, células Jurkat e células A549. As células citadas na fase de crescimento logarítmico foram coletadas, respectivamente, ajustadas para uma densidade celular de 5 × 106 células/mL, e pré- resfriadas em gelo por 10 minutos. As proteínas de fusão SIRPα SS002 e SS002M91 foram diluídas para diferentes concentrações com solução salina normal pré-resfriada contendo 2% de FBS. 100 μL de células foram adicionados a um volume igual da proteína de fusão SIRPα diluída acima mencionada e reagiram a 4º C no escuro por 30 min. Após a conclusão, as células foram lavadas duas vezes com solução salina normal pré-resfriada contendo 2% de FBS. As células foram ressuspensas em 100 μL de anticorpo secundário anti-Fc de IgG humana de cabra PE diluído (eBioscience) e reagidas a 4º C no escuro por 30 min. Após a conclusão da reação, as células foram lavadas duas vezes com solução salina normal pré-resfriada contendo 2% de FBS e ressuspensas em 400 μL de paraformaldeído a 1%. A citometria de fluxo (BD Calibur) foi usada para analisar a capacidade de ligação da proteína de fusão ao CD47 na superfície das células (como mostrado nas FIGS. 9A-9C que mostraram que as proteínas de fusão SS002 e SS002M91 reconhecem especificamente o CD47 de superfície de células Raji, células Jurkat e células A549, respectivamente).
[00147] Os resultados mostraram que a proteína de fusão SS002M91 pode reconhecer especificamente CD47 na superfície de células Raji, células Jurkat e células A549 com uma atividade de reconhecimento significativamente maior do que a de SS002 e apresentou uma dependência da dose. Entre estes, o valor de EC50 de ligação a células Raji foi de 197,0ng/mL para SS002M91 e 1140,0ng/mL para SS002 (como mostrado na FIG. 9A). Para o valor de EC50 de ligação a células Jurkat, SS002M91 foi de 796,0ng/mL e SS002 foi de 4529,0ng/mL (como mostrado na FIG. 9B). Para o valor de EC50 de ligação às células A549, SS002M91 foi de 321,9 ng/mL e SS002 foi de 1655,0 ng/mL (como mostrado na FIG. 9C).
[00148] Da mesma forma, o método deste exemplo foi usado para comparar as atividades de SS002M91 e TTI-621 para reconhecer moléculas de CD47 nas superfícies celulares de células Raji (como mostrado na FIG. 10A), células Jurkat (como mostrado na FIG. 10B) e células A549 (como mostrado na FIG. 10C). Os resultados mostraram que, em um aspecto, a intensidade máxima de fluorescência de
SS002M91 que reconhece especificamente as moléculas de CD47 na superfície das células tumorais foi significativamente maior do que a de TTI-621: a intensidade máxima de fluorescência de SS002M91 ligando-se às células Raji foi de cerca de 1200, enquanto a intensidade máxima de fluorescência de ligação de TTI-621 às células Raji foi de cerca de 600; a intensidade máxima de fluorescência da ligação SS002M91 às células Jurkat foi cerca de 5000, enquanto a intensidade máxima da fluorescência da ligação TTI-621 às células Jurkat foi cerca de 3000; a intensidade máxima de fluorescência de ligação SS002M91 às células A549 foi de cerca de 180, enquanto a intensidade máxima de fluorescência de ligação de TTI-621 às células A549 foi de cerca de 60. Em outro aspecto, a dose semi-ideal de SS002M91 que reconheceu especificamente as moléculas de CD47 na superfície das células tumorais foi significativamente superior a TTI-621: o valor de EC50 de SS002M91 de ligação a células Raji foi de 13,06ng/mL, enquanto o valor de EC50 de ligação de TTI-621 às células Raji foi de 40,37 ng/Ml; o valor EC50 da ligação de SS002M91 às células Jurkat foi de 28,09 ng/mL, enquanto o valor EC50 da ligação de TTI-621 às células Jurkat foi de 53,92 ng/Ml; o valor EC50 da ligação SS002M91 às células A549 foi de 26,95 ng/mL e o valor EC50 da ligação TTI-621 às células A549 foi 1003 ng/mL. Pode ser visto que SS002M91 que reconhece especificamente as moléculas de CD47 na superfície das células tumorais é significativamente melhor do que TT1-621. Exemplo 8 Detecção de reação de coagulação do sangue
[00149] SS002 e SS002M91 foram tomados como exemplos para realizar a análise da atividade de coagulação do sangue, usando o anticorpo CD47 Hu5F9-G4 como controle (ver Guerriero JL, Sotayo A, Ponichtera HE, et al. A inibição de HDAC Classe IIa reduz tumores de mama e metástases por meio de macrófagos antitumorais. [J] Nature, 2017, 543(7645): 428.432 and Gholamin S, Mitra SS, Feroze AH et al. Disrupting the CD47-SIRPα anti-phagocytic axis by a humanized anti-CD47 antibody is an efficacious treatment for malignant pediatric brain tumors. Sci. Transl. Med 2017).
[00150] Um sangue total de doadores saudáveis foi usado para preparar glóbulos vermelhos humanos (coletados do sangue periférico de voluntários). O sangue total foi diluído 5 vezes com PBS, lavado 3 vezes e preparado em uma solução fresca de 1% de glóbulos vermelhos. 50μL de diferentes concentrações de proteínas de fusão SIRPα SS002, SS002M91 e anticorpo anti-CD47 Hu5F9-G4 foram adicionados a cada poço da placa de hemaglutinação e, em seguida, 50μL de solução de glóbulos vermelhos a 1% foram adicionados a cada poço. A mistura foi suavemente misturada para uniformizar e incubada a 37ºC sob 5% de CO2 durante a noite. Em seguida, a placa foi fotografada para interpretação pelo uso dos padrões de que todos os glóbulos vermelhos coagulavam, afundavam até o fundo do poço e achatavam em forma de malha como 100% de coagulação (++++) e o fenômeno de que o glóbulos vermelhos afundados no fundo do poço e apresentados em forma de ponto sem coagulação (-) (como mostrado na FIG. 11).
[00151] Os resultados na FIG. 11 mostraram que as proteínas de fusão SS002M91 e SS002 não induzem aglutinação de glóbulos vermelhos, enquanto o anticorpo CD47 Hu5F9-G4 pode causar aglutinação de glóbulos vermelhos significativamente dentro de um determinado intervalo de dosagem. Exemplo 9 Detecção de atividade de inibição de tumor in vivo
[00152] A proteína de fusão SS002M91 foi tomada como exemplo para analisar a atividade de inibição de tumor in vivo.
[00153] Camundongos B-NSG foram inoculados com células Raji-Luc para estabelecer um modelo de tumor para avaliar a atividade de inibição de tumor do anticorpo SS002M91. Camundongos B-NSG fêmeas com 8 semanas de idade (Beijing Biocytogene Biotechnology Co., Ltd.) foram tomados como animais experimentais e células Raji-Luc (Beijing Biocytogene Biotechnology Co., Ltd.) foram selecionadas para teste. As células Raji-Luc foram transferidas para a linhagem celular estável obtida pelo gene repórter de fluoresceína. Depois de ressuscitar e cultivar até o número necessário, as células de crescimento em fase log foram coletadas e suspensas a uma concentração de 5 × 106 células/0,2mL. Em seguida, os camundongos B-NSG foram inoculados através da veia da cauda a 0,2mL/camundongo. Após a inoculação, o crescimento do tumor e o peso corporal foram observados no Dia 0 e no Dia 3 com um pequeno animal imageador. E no Dia 3, 12 camundongos com sinal de imagem de tumores moderado (cerca de 1,00 x 106 P/S) foram selecionados e divididos aleatoriamente em 2 grupos (6 camundongos por grupo), ou seja, grupo de controle de solvente (G1, solução salina normal) e grupo experimental (G2, SS002M91). O grupo experimental foi administrado na dose de 10mg/kg no Dia 0 e D3 após o agrupamento, duas vezes no total. O crescimento do tumor dos camundongos e a taxa de sobrevivência dos camundongos foram observados (como mostrado nas FIGS. 12A e 12B respectivamente).
[00154] Os resultados mostraram que no Dia 10 após o agrupamento, o grupo de controle exibe uma intensidade média de fluorescência de tumores de 6,75 × 108 P/S, enquanto o grupo de dosagem exibe uma intensidade média de fluorescência de tumores de 1,76 × 106 P/S e um taxa de inibição de cerca de 95%. Exemplo 10 Detecção de efeitos em glóbulos vermelhos e plaquetas
[00155] A proteína de fusão SS002M91 foi tomada como exemplo, e camundongos B-NSG foram usados como modelo para realizar uma avaliação preliminar da segurança in vivo.
[00156] 18 camundongos B-NSG fêmeas de 8 semanas de idade (Beijing Biocytogene Biotechnology Co., Ltd.) foram selecionados e divididos aleatoriamente em 3 grupos, isto é, um grupo de controle de solvente (administrado com solução salina normal), um grupo experimental (administrado com a proteína de fusão SS002M91) e um grupo de controle positivo (administrado com TTI-621) (6 camundongos por grupo). Os camundongos foram administrados com uma dose de 10 mg/kg no Dia 0 e no Dia 3 e no Dia 7 após o agrupamento, 3 vezes no total. No dia seguinte à terceira administração (ou seja, Dia 8), o sangue periférico dos camundongos foi analisado quanto aos níveis de glóbulos vermelhos e plaquetas (o nível de glóbulos vermelhos e o nível de plaquetas são mostrados na FIG. 13A e a FIG. 13B, respectivamente).
[00157] Os resultados mostraram que, em comparação com o grupo controle, SS002M91 não causa uma diminuição significativa nos glóbulos vermelhos (P = 0,4483) e plaquetas (P = 0,9199); enquanto o TTI-621 teve um pequeno efeito nas plaquetas (P = 0,9447), mas causou uma diminuição nos glóbulos vermelhos (P = 0,0246). Exemplo 11 Efeito da fusão com diferentes subtipos de Fc de IgG na atividade da proteína de fusão
[00158] De acordo com o método de construção da proteína de fusão no Exemplo 2, os mutantes M1, M5, M12, M35, M37, M41, M57, M67, M81, M82, M82, M84, M91, M99, M102, M111, M122, M126, M130, M135 e M145 do domínio SIRPα obtido no Exemplo 1 foram fundidos e expressos com IgG4-Fc humano (das quais as sequências de aminoácidos foram apresentadas em SEQ ID NO: 68), respectivamente, para obter os domínios truncados do mutante 1 de SIRPα correspondentes - proteína de fusão Fc humana (referida como proteína de fusão). Essas proteínas de fusão foram nomeadas SS002M1G4, SS002M5G4, SS002M12G4, SS002M35G4, SS002M37G4, SS002M41G4, SS002M57G4, SS002M67G4, SS002M81G4, SS002M82G4, SS002M84G4, SS002M91G4, SS002M99G4, SS002M102G4, SS002M111G4, SS002M122G4, SS002M126G4, SS002M130G4, SS002M135G4 e SS002M145G4 (das quais o as sequências de aminoácidos foram estabelecidas em SEQ ID NO: 41-60, respectivamente).
[00159] Como exemplo, a proteína de fusão SS002M91G4 foi selecionada para análise de atividade biológica.
[00160] De acordo com o método de medição da atividade de ligação no
Exemplo 2, a atividade de ligação de SS002M91G4 ao antígeno CD47 foi analisada e os resultados foram mostrados na FIG. 14. Os resultados da FIG. 14 mostraram que SS002M91G4 tem boa atividade para se ligar ao antígeno CD47 com um valor de EC50 de 0,0157μg/mL, que é substancialmente consistente com a EC50 (0,0195μg/mL) de SS002M91.
[00161] De acordo com o método de análise do bloqueio específico da interação CD47/SIRPα no Exemplo 6, a atividade de SS002M91G4 bloqueando a interação CD47/SIRPα foi analisada e os resultados foram mostrados na FIG. 15. Os resultados da FIG. 15 mostraram que SS002M91G4 tem boa atividade de bloqueio da interação CD47/SIRPα com um valor de IC50 de 3,46 µg/mL, que é substancialmente consistente com o valor de IC50 (5,47 µg/mL) de SS002M91.
[00162] Pode ser visto a partir dos resultados acima que a fusão de diferentes subtipos de Fc da IgG não tem efeito significativo sobre a atividade da proteína de fusão construída pelo presente pedido. Exemplo 12 Detecção da reação de coagulação do sangue da proteína de fusão
[00163] Tomando SS002M91G4 como um exemplo, e por referência ao método de detecção da reação de coagulação do sangue no Exemplo 8, a reação de coagulação do sangue da proteína de fusão com base em Fc da IgG4 foi avaliada. Um sangue total de doadores saudáveis foi usado para preparar glóbulos vermelhos humanos. O sangue total foi diluído 5 vezes com PBS, lavado 3 vezes e preparado em uma solução fresca de 1% de glóbulos vermelhos. 50 μL de diferentes concentrações de proteínas de fusão SS002M91G4, o controle positivo TTI-621 e o anticorpo anti-CD47 Hu5F9-G4 foram adicionados a cada poço da placa de hemaglutinação e, em seguida, 50 μL de solução de glóbulos vermelhos a 1% foram adicionados a cada poço. A mistura foi suavemente misturada para uniformizar e incubada a 37ºC sob 5% de CO2 durante a noite. Em seguida, a placa foi fotografada para interpretação pelo uso dos padrões de que todos os glóbulos vermelhos coagulavam, afundavam até o fundo do poço e achatavam em forma de malha como 100% de coagulação (++++) e o fenômeno de que o glóbulos vermelhos afundados no fundo do poço e apresentados em forma de ponto sem coagulação (-).
[00164] Os resultados são mostrados na figura 16. Os resultados mostraram que as proteínas de fusão SS002M91G4 e TTI-621 com base em Fc de IgG4 não causam aglutinação de glóbulos vermelhos, enquanto o anticorpo CD47 Hu5F9-G4 causou aglutinação de glóbulos vermelhos significativamente dentro de uma determinada faixa de dosagem. Exemplo 13: Análise da atividade biológica da proteína de fusão
[00165] Tomando SS002M91G4 como exemplo, o sistema de células Jurkat- CSR (Immune Onco Biomedical Technology (Shanghai) Co., Ltd.) foi usado para avaliar a atividade biológica da referida proteína de fusão com base em IgG4 Fc pelo uso de TTI-621 como controle positivo.
[00166] A proteína CD47-Fc (Cat # 12283-H02H, Sino Biological) foi diluída para 0,2 μg/mL e 50 μL de diluente de proteína foram adicionados a cada poço. Em seguida, TTI-621 e SS002M91G4 foram diluídos para 0,4mg/mL, respectivamente, e depois diluídos em série para diferentes concentrações. 50 µL foram adicionados a cada poço e co-incubados com CD47-Fc em uma incubadora a 37ºC, 5% de CO2 por 45 min. As células Jurkat-CSR foram retiradas e ajustadas a uma densidade de 5 × 105/mL, 100 µL de suspensão de células foram adicionadas a cada poço, enquanto um grupo de controle em branco foi estabelecido. A suspensão foi co-cultivada com a mistura de proteínas em incubadora a 37ºC, 5% CO2 por 20 horas. Após a conclusão da cultura, 20 µL de CCK-8 (Dojindo, Japan Institute of Chemistry) foram adicionados a cada poço e cultivadas em uma incubadora a 37ºC, 5% de CO2 por 4 horas. O valor de OD foi medido em um comprimento de onda de 450 nm com um leitor de microplaca. A taxa de inibição do crescimento celular foi calculada de acordo com a seguinte fórmula: Percentual de inibição = (OD450 (amostra) - OD450 (em branco)/(OD450 (Jurkat-CSR) -OD450 (em branco)) × 100
[00167] De acordo com o princípio do sistema de células Jurkat-CSR, a interação CD47/SIRPα pode induzir a apoptose de células alvo; e a adição de um inibidor que inibe a interação CD47/SIRPα pode bloquear o sinal de apoptose. Quanto mais forte o efeito do inibidor, mais completamente o sinal apoptótico é bloqueado. O resultado é mostrado na FIG. 17. Os resultados mostraram que SS002M91G4 pode bloquear significativamente a apoptose de células Jurkat-CSR induzida por CD47-Fc, o efeito de bloqueio é mais forte do que o de TTI-621 e a IC50 é cerca de 1/100 de TTI-
621. Pode-se observar que a atividade biológica de SS002M91G4 no bloqueio da interação CD47/SIRPα é significativamente melhor do que a de TTI-621. Exemplo 14 Atividade de inibição de tumor in vivo da proteína de fusão Fc de diferentes subtipos de IgG e efeito sobre glóbulos vermelhos e plaquetas
[00168] Tomando as proteínas de fusão SS002M91 e SS002M91G4 como um exemplo, a atividade de inibição do tumor in vivo e o efeito sobre os glóbulos vermelhos e plaquetas foram analisados.
[00169] Por inoculação subcutânea de células Raji em camundongos NOD/SCID, um modelo de tumor transplantado subcutâneo de linfoma humano foi estabelecido para avaliar a atividade de inibição de tumor in vivo de SS002M91 e SS002M91G4.
[00170] Camundongos NOD/SCID fêmeas, de 6-7 semanas de idade (Shanghai Lingchang Biotechnology Co., Ltd.) foram selecionados e as células Raji foram cultivadas em um meio RPMI1640 contendo 10% de soro fetal bovino. 1 × 107 células Raji na fase de crescimento exponencial foram coletadas e ressuspensas a uma concentração apropriada em PBS e, em seguida, misturadas com matrigel (BD Matrigel™) a 1: 1 para inoculação de tumor subcutâneo em camundongos. Após a inoculação, quando o volume médio de tumores é de cerca de 98,6 mm3, os camundongos foram divididos aleatoriamente em 4 grupos (6 camundongos por grupo) de acordo com o tamanho do tumor (ou seja, um grupo de controle de veículo, um grupo SS002M91, um grupo SS002M91G4 e um grupo TTI-621). Os camundongos foram administrados por meio de injeção intraperitoneal a uma dose de 10 mg/kg por vez (em que os 4 grupos acima foram administrados com solução de PBS, SS002M91, SS002M91G4 e TTI-621, respectivamente) e uma frequência de duas vezes por semana, para um total de duas semanas.
[00171] O experimento foi encerrado no Dia 6 após a última administração e o sangue foi coletado para exames de sangue de rotina. Os glóbulos vermelhos e as plaquetas no sangue periférico dos camundongos foram analisados quanto aos seus níveis (o nível de glóbulos vermelhos e o nível de plaquetas foram apresentados na FIG. 18A e a FIG. 18B, respectivamente). Durante a administração, os camundongos foram observados quanto ao crescimento do tumor. O efeito terapêutico foi avaliado de acordo com a inibição do crescimento tumoral relativo (TGI) (os resultados foram mostrados na FIG. 19), e a segurança foi avaliada com base na mudança de peso dos animais e mortes (os resultados foram mostrados na FIG. 20). A fórmula para calcular o TGI (%), ou seja, a inibição relativa do crescimento tumoral foi a seguinte: % de TGI= (1-T/C) × 100%. Destes, T e C são o volume relativo do tumor (RTV) ou peso do tumor (TW) dos grupos de tratamento (por exemplo, grupo SS002M91, grupo SS002M91G4 e grupo TTI-621) e o grupo de controle (ou seja, o grupo de controle de veículo) em um ponto específico do tempo.
[00172] Os resultados mostraram que o grupo SS002M91, o grupo SS002M91G4 e o grupo TTI-621 (10 mg/kg) mostraram um efeito de inibição tumoral significativo no Dia 6 após a retirada do fármaco e exibem inibições de crescimento tumoral relativo TGI (%) de 74,09%, 66,65% e 54,75%, respectivamente. Em comparação com o grupo de controle de veículo, há diferenças estatisticamente significativas (todos os valores de p são menores que 0,01). O grupo SS002M91 e o grupo SS002M91G4 têm efeitos inibidores de tumor semelhantes e são melhores do que o grupo de controle positivo TTI-621.
[00173] Durante o tratamento, nenhum animal morreu ou exibiu toxicidade de drogas óbvia, e todos eles são bem tolerados. Os resultados dos exames de sangue de rotina mostraram que, em comparação com o grupo de controle positivo TTI-621, os glóbulos vermelhos e as plaquetas do grupo SS002M91 foram reduzidos, as plaquetas do grupo TTI-621 também diminuíram ligeiramente, mas os glóbulos vermelhos não foram substancialmente afetados por SS002M91G4.
[00174] A descrição detalhada anterior foi fornecida a título de ilustração e exemplos, e não se destinava a limitar o escopo das reivindicações anexas. No momento, várias alterações das modalidades, conforme listadas neste documento, são óbvias para os especialistas na técnica e permanecem no escopo das reivindicações anexas e suas soluções equivalentes.
Claims (24)
1. Proteína de fusão CARACTERIZADA pelo fato de que se liga especificamente a uma proteína CD47 e apresenta pelo menos uma das seguintes características: (a) se ligar à proteína CD47 com um valor de KD de 1 x 10-8 M ou inferior; (b) bloquear especificamente uma interação entre a proteína CD47 e SIRPα; (c) não causar reação de coagulação do sangue; e (d) inibir o crescimento e/ou proliferação de tumores ou células tumorais.
2. Proteína de fusão, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida proteína CD47 é uma proteína CD47 humana.
3. Proteína de fusão, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um domínio SIRPα humano que pode se ligar especificamente à proteína CD47 e uma região Fc da imunoglobulina, em que o referido domínio SIRPα humano está diretamente ou indiretamente ligado à região Fc da imunoglobulina.
4. Proteína de fusão, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido domínio SIRPα humano compreende um domínio extracelular de uma SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos.
5. Proteína de fusão, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido domínio SIRPα humano compreende um domínio IgV da SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos.
6. Proteína de fusão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 5, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido domínio SIRPα humano compreende um domínio da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos.
7. Proteína de fusão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido domínio SIRPα humano compreende resíduos de aminoácidos nas posições 33 a 149 da variante 1 de SIRPα humana, seu fragmento ou sua variante que sofre uma ou mais substituições de aminoácidos.
8. Proteína de fusão, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido mutante compreende substituições de aminoácidos em um ou mais resíduos selecionados do grupo que consiste em I61, V63, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, D96, K98, N100, R107, G109 e V132.
9. Proteína de fusão, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido mutante compreende uma ou mais substituições de aminoácidos selecionadas do grupo que consiste em R22C, I29L, I61L/V/F, V63I, E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L, Q82S/R/G/N, K83R, E84K/H/D/R/G, V93L/A, D95H/R/E, D96S/T, K98R, N100G/K/D/E, R107N/S, G109R/H e V132L/R/I/S.
10. Proteína de fusão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 9, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido domínio SIRPα humano compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NOS: 1 a 20, 62 a 65.
11. Proteína de fusão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 10, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida região Fc da imunoglobulina compreende uma região Fc de IgG.
12. Proteína de fusão, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida IgG é selecionada do grupo que consiste em IgG1 e/ou IgG4.
13. Proteína de fusão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 12, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido domínio SIRPα humano está localizado no N-terminal da região Fc da imunoglobulina.
14. Proteína de fusão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a
13, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida região Fc da imunoglobulina compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NOS: 67 a 68.
15. Proteína de fusão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma das SEQ ID NOS: 21 a 61.
16. Molécula de ácido nucleico CARACTERIZADA pelo fato de que codifica uma proteína de fusão, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.
17. Vetor CARACTERIZADO pelo fato de compreende a molécula de ácido nucleico, como definida na reivindicação 16.
18. Célula hospedeira CARACTERIZADA pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucleico, como definida na reivindicação 16, ou o vetor, como definido na reivindicação 17.
19. Método de preparação da proteína de fusão, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende cultivar a célula hospedeira, como definida na reivindicação 18, sob condições que permitem a expressão da proteína de fusão.
20. Composição CARACTERIZADA pelo fato de que compreende a proteína de fusão, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15 e, opcionalmente, um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
21. Uso da proteína de fusão, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, da molécula de ácido nucleico, como definida na reivindicação 16, do vetor, como definido na reivindicação 17, da célula hospedeira, como definida na reivindicação 18 e/ou da composição, como definida na reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de um fármaco e/ou kit para prevenir ou tratar tumores ou doenças autoimunes.
22. Uso, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que os referidos tumores são selecionados do grupo que consiste em tumores hematológicos positivos para CD47 e/ou tumores sólidos positivos para CD47.
23. Uso, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que as referidas doenças autoimunes são selecionadas do grupo que consiste em doença de Crohn, asma alérgica e/ou artrite reumatoide.
24. Uso da proteína de fusão, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou da composição, como definida na reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de um agente para bloquear uma interação entre uma proteína CD47 e SIRPα.
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DK2429574T3 (da) * | 2009-05-15 | 2015-06-22 | Univ Health Network | Sammensætninger og fremgangsmåder til behandling af hæmatologiske cancere der targeterer sirp-cd47-interaktionen |
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WO2018014068A1 (en) * | 2016-07-19 | 2018-01-25 | Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd | Attenuated type i ifn cd47 combination therapy |
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