BR112020014427A2 - compostos 1,2,3',5'-tetraidro-2'h-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona como agentes terapêuticos que ativam tp53 - Google Patents

Abstract

A invenção refere-se aos compostos de 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiroindol-3,1' - pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona representados pela fórmula (I), em que todos os símbolos e variáveis são como definidos na descrição. Os compostos podem ser utilizados em um método de prevenção e/ou tratamento de doenças selecionadas do grupo que consiste em câncer, doenças imunológicas, condições inflamatórias, doenças alérgicas da pele associadas a proliferação excessiva, cegueira e infecções virais.

Description

"COMPOSTOS 1,2,3',5'-TETRAIDRO-2'H-ESPIRO[INDOL-3,1'- PIRROLO[3,4-C]PIRROL]-2,3'-DIONA COMO AGENTES TERAPÊUTICOS QUE ATIVAM TP53" Campo de Invenção

[0001] A presente invenção refere-se a novos compostos 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona e esses compostos para uso como medicamento, especialmente para o tratamento de doenças nas quais as interações proteína-proteína p53-Mdm2 são perturbadas e/ou que são sensíveis à inibição das interações de p53-Mdm2, incluindo doenças proliferativas, tais como, o câncer. Além disso, a presente invenção fornece composições farmacêuticas compreendendo os compostos acima mencionados. Antecedentes da Invenção

[0002] A p53 é um fator de transcrição que responde ao estresse celular regulando a transcrição de vários genes que determinam o destino das células. Em condições de estresse, a p53 pode desencadear processos de parada do ciclo celular e de reparo do DNA ou programas de morte celular como apoptose ou senescência. A escolha entre essas respostas depende do tipo e intensidade dos sinais de estresse. Nas células humanas, a atividade da p53 é estritamente controlada por seu regulador negativo, a proteína denominada Mdm2. A Mdm2 forma um complexo estreito com o domínio de transativação de p53, bloqueando sua capacidade de regular os genes alvo e de exercer efeitos antiproliferativos. Além disso, a Mdm2 promove a exportação nuclear e a rápida degradação de p53 pelo sistema ubiquitina-proteassoma.

[0003] Sendo uma participante chave na resposta celular ao estresse, a p53 serve como a principal obstrução para a tumorigênese. Pacientes com síndrome de Li-Fraumeni que herdam a p53 mutada são muito suscetíveis ao câncer. Os camundongos com o gene p53 danificado parecem normais, mas são propensos ao desenvolvimento espontâneo de uma variedade de neoplasias aos 6 meses de idade. Esse proeminente papel supressor de tumores de p53 faz com que sua função seja desativada em praticamente todos os cânceres humanos, seja por mutação do gene p53 ou por expressão aberrante de proteínas que atuam como seus reguladores negativos, como a Mdm2.

[0004] A amplificação do gene Mdm2 é relatada em mais de 10% de 8000 vários cânceres humanos, incluindo sarcomas, tumores de pulmão e estômago, em que o gene p53 não é danificado. Vários outros tumores adquirem um polimorfismo de nucleotídeo único no promotor de Mdm2 que leva a um aumento de 2-3 vezes na expressão de Mdm2 correlacionada com a formação acelerada de tumores. Essas alterações são percebidas como os principais mecanismos de inibição da função de p53 em cânceres que retêm p53 do tipo selvagem.

[0005] Estudos genéticos funcionais em camundongos mostraram que a restauração da p53 inativada é suficiente para causar regressão rápida de vários tipos diferentes de tumores. Seguindo essa linha, o direcionamento da interação p53-Mdm2 por pequenas moléculas para liberar e reativar p53 surgiu como estratégia terapêutica promissora para o tratamento de cânceres humanos que são do tipo p53 selvagem. Vários grupos de inibidores não peptídicos de moléculas pequenas da interação p53-Mdm2 foram relatados nos últimos anos, incluindo nutlins, derivados de piperazina-4-fenila, chalconas, sulfonamidas, benzodiazepinadionas, espiro- oxindóis. Os inibidores de MDM2 produzem respostas celulares comuns e diferentes em células normais e tumorais que estão de acordo com os resultados anteriores de estudos genéticos. Nas células normais, a ativação do p53 pelos inibidores do MDM2 induz a parada do ciclo celular, mas não a morte celular. Nas células tumorais, a ativação de p53 pelos inibidores induz não apenas a parada do ciclo celular, mas também a morte celular. Esse perfil fornece uma perspectiva de alta seletividade e baixa toxicidade da terapia em potencial. No entanto, nenhum desses antagonistas de Mdm2 provou sua eficácia em ensaios clínicos em humanos. Assim, ainda há necessidade de novos compostos com maior potência, farmacocinética favorável e perfil de toxicidade.

[0006] Nosso Pedido anterior WO2015/189799 divulga compostos compreendendo o sistema 1,1',2,5'- tetraidroespiro [indol-3,2'-pirrol]-2,5'-diona que mostram atividade antitumoral potente e específica em estudos in vitro. No entanto, estudos posteriores revelaram que sua eficácia in vivo é moderada e os compostos mais eficazes exibem alta depuração inaceitável em microssomas humanos que impedem sua eficácia clínica.

[0007] Portanto, ainda há necessidade de compostos com excelente atividade in vitro com farmacocinética aprimorada e, portanto, exibindo excelente eficácia anticâncer tanto em modelos in vivo de camundongos quanto em futuros ensaios clínicos.

[0008] A presente invenção resolve o problema fornecendo novos compostos compreendendo sistema 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona. Sumário da Invenção

[0009] No primeiro aspecto, a presente invenção fornece um composto com a seguinte estrutura: 1

O 7

R R 2

R N Z

N 6 Formula (I) 3 R OR 4 Y

R N 5

R H Fórmula (I) em que: R1 é meta-halo-fenil que é opcionalmente substituído por um a dois substituintes selecionados independentemente do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -NO2, -CN, - alquila C1-C6, -O-(alquila C1-C6), -S-(alquila C1- C6), -C(O)O-(alquila C1-C6), -NH (alquila C1-C6) e -N (alquila C1-C6)2, R2 e R3 são independentemente H ou halogênio; R4 é -alquila C1-C6; R7 é -OCH3; R5, R6, R8, R9 são independentemente H, halogênio, -OCH3, -NH(CH3) ou -N (CH3)2. Z é C-R8 ou N, Y é C-R9 ou N, com a condição de que Z não seja C-R8 e Y não seja C-R9 ao mesmo tempo.

[0010] De preferência, na fórmula (I), R1 é meta- halo-fenil que é opcionalmente substituído por um a dois substituintes selecionados independentemente do grupo que consiste em halogênio, alquila C1-C6, -O-(alquila C1-C6), - NH(alquila C1-C6) e -N(alquila C1-C6)2. Mais preferencialmente, na definição do substituinte R1 na fórmula (I), alquila C1-C6 é alquila C1-C3.

[0011] Ainda mais preferencialmente, na fórmula (I), R1 é meta-halo-fenil que é opcionalmente substituído por um a dois substituintes selecionados independentemente do grupo que consiste em halogênio, -CH3, -OCH3, -NH(CH3) e -N(CH3)2. Ainda mais preferencialmente, R1 é meta-halo-fenil que é opcionalmente ainda substituído por um a dois substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, -CH3 e -OCH3. Mais preferencialmente, R1 é meta-halo-fenil que é opcionalmente ainda substituído por um a dois substituintes selecionados independentemente do grupo que consiste em halogênio.

[0012] De preferência, na fórmula (I), R2 é H e R3 é Cl.

[0013] De preferência, na fórmula (I), R4 é isopropila ou isobutila.

[0014] De preferência, na fórmula (I), Z e Y são ambos N. Mais preferencialmente, em tal modalidade, R5 e R6 são ambos -OCH3.

[0015] De preferência, na fórmula (I), Z é C-R8 e Y é N. Mais preferencialmente, nessa modalidade, R8 é H, e pelo menos um de R5 e R6 é -OCH3 e o segundo é selecionado entre H, -N(CH3)2 e -OCH3.

[0016] Um dos grupos que se segue pode ser mencionado como um composto específico da invenção: (1) (3S) -6-cloro-2'-(3-clorofenil) -5' -(2,4- dimetoxipirimidin-5-il) -6'-(propan-2-il) -1, 2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona

(2) (3S)-6- cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil) - 5'- (2,4-dimetoxipirimidin-5- il)- 6'-(propan-2- il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona

(3) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-metilfenil) - 6'- (propan-2-il) - 5'-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5- il) - 1,2,3',5'-tetraidro- 2'H-espiro [indol- 3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona

(4) (3S)-6- cloro- 2'-(3-cloro-4- flúorfenil)- 5'- (2,4-dimetoxipirimidin-5-il)- 6'-(propan-2- il) - 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona

(5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil)-6'- (propan-2-il)-5'-(2,4,6- trimetoxipirimidin-5- il) - 1,2,3',5'-tetraidro- 2'H-espiro [indol- 3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona

(5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil) - 5'- [6- (dimetilamino) - 4- metoxipiridin- 3- il] - 6'- (propan-2- il)- 1,2,3',5'-tetraidro- 2'H-espiro [indol- 3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona

(6) (3S)-6- cloro-2'-(3,4-diflúorfenil) - 5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2- il)- 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona

(7) (3S)- 6- cloro-2'-(3,4-diflúorfenil) - 5'-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)- 6'-(propan-2- il)- 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo [3,4- c] pirrol] - 2,3'-diona

(8) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil) - 5'-(4,6- dimetoxipiridin-3-il) - 6'-(propan-2-il)- 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1' - pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona

(9) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2,4-diflúorfenil) - 5'- (2,4- dimetoxipirimidin- 5- il) - 6'-(propan-2- il) - 1,2,3', 5'-tetraidro- 2'H-espiro [indol- 3,1' - pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona

(10) (3S) -6'-(butan-2-il) -6-cloro-2' -(5-cloro-2- flúorfenil) -5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il) - 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] -2,3'-diona

[0017] Um dos grupos que se seguem pode ser mencionado como um composto mais específico da invenção: (1) (3S) -6-cloro-2'-(3-clorofenil) -5' -(2,4- dimetoxipirimidin-5-il) -6'- (propan-2-il) - 1, 2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol- 3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona (2) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil) - 5'- (2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il) - 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona (3) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-metilfenil) - 6'- (propan-2-il) - 5'-(2, 4,6-trimetoxipirimidin-5- il) - 1,2,3',5'-tetraidro- 2'H-espiro [indol- 3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona (4)

(3S)-6-cloro-2'-(3-cloro-4- flúorfenil)- 5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5- il) - 6'-(propan-2- il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona

(5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil)-6'- (propan-2-il)-5'-(2,4,6- trimetoxipirimidin-5- il) - 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona

(7) (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil) - 5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)- 6'-(propan-2-il) - 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona

(10) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2,4-diflúorfenil) - 5'- (2,4- dimetoxipirimidin- 5- il) - 6'-(propan-2- il)-1,2,3',5'-tetraidro- 2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona

(11) (3S)-6'-(butan-2-il) -6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)- 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] -2,3'-diona.

[0018] Um dos grupos que se seguem pode ser mencionado, alternativamente, como um composto mais específico da invenção: (6) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil)- 5'- [6- (dimetilamino)- 4- metoxipiridin- 3- il] - 6'- (propan-2- il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol- 3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona (8) (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil)- 5'-(4,6- dimetoxipiridin-3- il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona (9) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil) - 5'-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)- 6'-(propan-2-il) - 1,2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4- c] pirrol] - 2,3'-diona

[0019] O composto particularmente preferível da invenção é um composto representado pela seguinte estrutura

F F O O N

N Cl O

O N N

H que significa (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil)-5'-(4,6- dimetoxipiridin-3- il) - 6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-

tetraidro- 2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona.

[0020] O segundo composto particularmente preferível da invenção é um composto representado pela seguinte estrutura: Cl

O O N N N

O Cl O N

N

H que significa que (3S) -6-cloro-2'-(3-clorofenil) -5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1, 2,3', 5'- tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol] - 2,3'-diona.

[0021] Outro aspecto da invenção refere-se a um composto de fórmula (I) para uso como medicamento.

[0022] De preferência, o medicamento é útil para a prevenção e/ou tratamento de doenças selecionadas do grupo que consiste em câncer, doenças imunológicas, condições inflamatórias, doenças alérgicas da pele associadas à proliferação excessiva, cegueira e infecções virais.

[0023] O próximo aspecto da invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo como ingrediente ativo um composto de fórmula (I), em combinação com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0024] O último aspecto da invenção refere-se a um método de tratamento e/ou prevenção de doenças selecionadas do grupo que consiste em câncer, doenças imunológicas, condições inflamatórias, doenças alérgicas da pele associadas à proliferação excessiva, cegueira e infecções virais, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula (I) ou de uma composição farmacêutica como definido acima. Breve descrição das Figuras

[0025] A Figura 1 mostra a eficácia in vivo do Composto 107 da Publicação Internacional WO2015/189799 como um Composto de Referência no modelo de camundongo de osteossarcoma humano (SJSA-1). As células de SJSA-1 foram inoculadas por via subcutânea (s.c.) na quantidade de 3x106/camundongo; o composto testado foi administrado por via oral (p.o.) em um esquema q1dx14; 7 camundongos por grupo.

[0026] A Figura 2 mostra a eficácia in vivo para os Compostos 7, 8 e 11 da presente invenção no modelo de camundongo de osteossarcoma humano (SJSA-1). As células SJSA-1 foram inoculadas por via subcutânea (s.c.) na quantidade de 3x106/camundongo; os compostos testados foram administrados por via oral (p.o.) em um esquema q1dx14; 8 camundongos por grupo. Descrição detalhada da invenção

[0027] Onde os compostos da invenção podem existir em uma ou mais formas tautoméricas, todas essas formas, embora não explicitamente indicadas na fórmula acima, estão dentro do escopo da presente invenção. Por conseguinte, os compostos podem estar presentes como uma mistura de tautômeros ou como um tautômero individual.

[0028] Os termos utilizados na presente invenção têm os seguintes significados. Outros termos não definidos abaixo têm os significados entendidos pelos versados na técnica.

[0029] O termo "alquila C1-C6" é um hidrocarboneto saturado, de cadeia linear ou ramificada com 1 a 6 átomos de carbono. Exemplos de alquila C1-C6 são metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, sec-butila, n- pentila e n-hexila. Mais preferencialmente, alquila C1-C6 é uma alquila C1-C4, alquila C1-C3 ou alquila C1-C2. Notação alquila C1-C4, alquila C1-C3, alquila C1-C2 significa um hidrocarboneto saturado, de cadeia linear ou ramificada com 1 a 4, 3 ou 2 átomos de carbono, respectivamente. Mais preferencialmente, a alquila C1-C6 é alquila C1 que é grupo metila (abreviado como Me).

[0030] O termo "halogênio" é selecionado dentre F, Cl, Br e I. De preferência, o halogênio é selecionado entre F e Cl.

[0031] O termo "m-halo-fenil", como presente na definição do grupo R, significa grupo fenila que é substituído por um halogênio, como definido acima, na posição meta em relação ao ponto de ligação do grupo fenila ao átomo de nitrogênio do sistema de anel pirrolo [3,4-c] pirrol.

[0032] A expressão "Z é C-R8 ou N, Y é C-R9 ou N, com a condição de que Z não seja C-R8 e Y não seja C-R9 ao mesmo tempo" significa que no composto da invenção, Z é CR 8 e Y é N, ou Z é N e Y é C-R9, ou Z é N e Y é N.

[0033] Uma vez que os compostos da invenção podem ser ácidos ou básicos, podem formar sais de adição de ácido adequados com uma base ou um ácido, respectivamente.

[0034] Sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável refere-se aos sais que retêm a eficácia biológica das bases livres e que não são biologicamente indesejáveis. Os sais de adição de ácido podem ser formados com ácidos inorgânicos (minerais) ou ácidos orgânicos. Como exemplos de ácidos, podem ser mencionados o ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, fosfórico, sulfúrico, nítrico, carbônico, succínico, maleico, fórmico, acético, propiônico, fumárico, cítrico, tartárico, lático, benzóico, salicílico, glutâmico, aspártico, ácido p- toluenossulfônico, benzenossulfônico, metanossulfônico, etanossulfônico, naftalenossulfônico, tal como ácido 2- naftalenossulfônico, pamoico, xinafóico e hexanóico.

[0035] Um sal de adição de ácido pode ser preparado de uma maneira simples fazendo reagir um composto de fórmula (I) com um ácido inorgânico ou orgânico adequado em uma quantidade substancialmente equimolar ao composto da fórmula (I), opcionalmente em um solvente adequado, como um solvente orgânico para formar um sal que é normalmente isolado, por exemplo, por cristalização e filtração. Por exemplo, as bases livres dos compostos podem ser convertidas nos sais de cloridrato correspondentes, tratando uma solução do composto, por exemplo, em metanol, com uma quantidade estequiométrica de ácido clorídrico ou cloreto de hidrogênio em metanol, etanol ou éter dietílico, e em seguida evaporação de solventes.

[0036] Da mesma forma, os sais de adição de bases farmaceuticamente aceitáveis incluem sais derivados de bases inorgânicas, tais como sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio e similares. Os sais derivados de bases orgânicas não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, incluindo aminas substituídas naturalmente, aminas cíclicas e resinas básicas de troca iônica, como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina e etanolamina, além de trietanolamina.

[0037] Os compostos de fórmula (I) podem ser obtidos usando os seguintes métodos.

[0038] Os compostos à base de 1',2,5'- tetraidroespiro [indolo-3,2'-pirrolo] -2,5'-diona fundido com anel pirrol (compostos de fórmula (I)) podem ser obtidos de acordo com o seguinte esquema de reação 1.

Esquema de Reação 1

[0039] Inicialmente, a metil cetona C-1 foi tratada com isatina C-2, na presença de uma base, tipicamente dietilamina (DEA) ou bis (trimetilsilil) amida de lítio (LiHMDS).

[0040] O aldol C-3 resultante foi subsequentemente desidratado em condições acídicas usando ácido clorídrico tipicamente concentrado (12 M), proporcionando o composto insaturado C-4.

[0041] Paralelamente, uma amida C-6 foi preparada acoplando uma amina C-5 ao ácido prop-2-inóico, de preferência pelo uso de reagentes de acoplamento,

tipicamente reagentes de carbodiimida como diciclohexilcarbodiimida (DCC) ou cloridrato de (3- dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC.HCl).

[0042] A hidroaminação da alquina C-6 com a amina C-7 e a reação subsequente com a enona C-4 levam a um pirrol C-8 substituído. Esta reação em um único recipiente (one-pot reaction) pode ser realizada tipicamente em ácido acético em irradiação por micro-ondas.

[0043] O intermediário C-8 pode ser oxidado no derivado de 3-hidróxi-2-oxindol na presença de um excesso de uma base, tipicamente t-butóxido de sódio, fosfito de trialquila apropriado, tipicamente fosfito de trimetila ou de trietila e oxigênio atmosférico.

[0044] Tais compostos preparados C-9 foram ciclizados em meio ácido, tipicamente ácido trifluoracético, fornecendo os oxindóis espirocíclicos fundidos racêmicos desejados.

[0045] Finalmente, o enantiômero S desejável foi separado utilizando condições de HPLC quiral.

[0046] Mais detalhes sobre a preparação do núcleo de 1,1',2,5'-tetraidroespiro [indolo-3,2'-pirrolo] - 2,5'- diona foram descritos em nosso Pedido de Patente anterior WO 2015/189799 A1.

[0047] As respectivas cetonas C-1, isatinas C-2 e aminas estão disponíveis comercialmente ou podem ser obtidas usando os métodos a seguir.

[0048] O esquema 2 ilustra um método representativo para a preparação de 5-amino-2,4- dimetoxipirimidina (C-7A) por substituição nucleofílica de cloro nas posições 2 e 4 na 2,4-dicloro-5-nitropirimidina

(C-7A1) por grupo metóxi e subsequente redução do grupo nitro na 2,4-dimetóxi-5-nitropirimidina (C-7A2).

NO 2 NO 2 NH2 Cl O H2, Pd/C O Na, MeOH

N N N N THF N N Cl O O C-7A1 C-7A2 C-7A Esquema de Reação 2

[0049] O esquema 3 ilustra um método representativo para a preparação de 3-amino-4,6- dimetoxipiridina (C-7B) por substituição nucleofílica de cloro nas posições 2 e 4 na 2,4-dicloro-5-nitropiridina (C- 7B1) pelo grupo metóxi, seguida por redução do grupo nitro na 2,4-dimetóxi-5-nitropiridina (C-7B2).

NO 2 NO 2 NH2 Cl O H2, Pd/C O Na, MeOH

N N THF N Cl O O C-7B1 C-7B2 C-7B Esquema de Reação 3

[0050] O esquema 4 ilustra um método representativo para a preparação de 5-amino-4-metóxi-2- (dimetilamino) piridina (C-7C) via substituição nucleofílica de cloro na posição 2 na 2-cloro-4-metóxi-5- nitropiridina (C-7C1) pelo grupo metóxi e subsequente redução do grupo nitro na 4-metóxi-2-(dimetilamino) -5- nitropiridina (C-7C2).

NO 2 NO 2 NH2 O Me2NH (aq) O H2, Pd/C O N MeOH/THF N N MeOH/THF Cl N N C-7C1 C-7C2 C-7C Esquema de Reação 4

[0051] O esquema 5 ilustra um método representativo para a preparação de 5-amino-2,4,6- trimetoxipirimidina (C-7D) por nitração de 2-cloro-4,6- dimetoxipirimidina (C-7D1) na posição 5, seguindo a substituição nucleofílica de cloro na posição 2 na 2-cloro- 4,6-dimetóxi-5-nitropirimidina (C-7D2) pelo grupo metóxi. A última etapa foi a redução do grupo nitro na 2,4,6- trimetóxi-5-nitropirimidina (C-7D3).

NO 2

O O HNO3, O O NaH, MeOH

N N TFAA, DCM N N Cl Cl C-7D1 C-7D2 NO 2 NH2

O O O O H2 (2bar), Pd/C

N N N N MeOH

O O C-7D3 C-7D Esquema de Reação 5

[0052] Como mencionado acima, os compostos da invenção são para uso como um medicamento útil para a prevenção e/ou tratamento de doenças selecionadas do grupo que consiste em câncer, doenças imunológicas, condições inflamatórias, doenças alérgicas da pele associadas à proliferação excessiva, cegueira e infecções virais.

[0053] Em particular, os compostos de acordo com a invenção são úteis para a prevenção e/ou tratamento de doenças associadas à desregulação do ciclo celular e apoptose, isto é, doenças imunológicas, como por exemplo doenças autoimunes e condições associadas à rejeição de transplantes de tecidos/órgãos, tais como, artrite reumatoide, doença do enxerto contra o hospedeiro, lúpus eritematoso sistêmico, síndrome de Sjorgen, esclerose múltipla, tireoidite de Hashimoto, polimiosite; condições inflamatórias crônicas são asma, osteoartrite, aterosclerose, Morbus Crohn; condições inflamatórias ou alérgicas da pele são psoríase, dermatite de contato, dermatite atópica, alopecia areata, eritema multiforma, dermatite herpetiforme, esclerodermia, vitiligo, angiite de hipersensibilidade, urticária, penfigóide bolhoso, pênfigo, epidermólise bolhosa adquirida; distúrbio iterativo hiperprol é a síndrome de Li-Fraumeni; doenças cancerígenas ou tumorais são tumores benignos ou malignos, sarcomas, como rabdomiossarcoma, câncer ósseo, por exemplo, osteossarcomas, carcinoma do cérebro, por exemplo, tumor cerebral de tecidos moles, rim, fígado, glândula adrenal, bexiga, mama, estômago, tumores gástricos ovários, cólon, reto, próstata, pâncreas, pulmão, vagina ou tireoide, glioblastomas, mieloma múltiplo, câncer gastrointestinal, especialmente carcinoma do cólon ou adenoma colorretal, tumor do pescoço e da cabeça, melanoma, hiperplasia da próstata, neoplasia, neoplasia de caráter epitelial, carcinoma mamário, leucemia, como linfomas de células B ou

T, policitemia vera, trombocitemia, carcinoma adrenocortical, incluindo metástase em outros órgãos, respectivamente; vitreorretinopatia proliferativa, infecções virais são herpes, papiloma, HIV, hepatite.

[0054] No tratamento das doenças mencionadas acima, os compostos da invenção podem ser administrados como um composto químico, mas tipicamente serão utilizados na forma de composições farmacêuticas, compreendendo um composto de acordo com a invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido acima como ingrediente ativo, em combinação com veículos e excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0055] No tratamento das doenças acima mencionadas, as composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas por qualquer via, preferencialmente por via oral ou parentérica, e terão a forma de uma preparação destinada ao uso em medicina, dependendo da via de administração pretendida.

[0056] As preparações sólidas podem assumir a forma, por exemplo, de comprimidos ou cápsulas preparadas por meios convencionais com ingredientes inativos farmaceuticamente aceitáveis, como agentes de ligação (por exemplo, amido de milho pré-gelatinizado, polivinilpirrolidona ou hidroxipropilmetilcelulose); cargas (por exemplo, lactose, sacarose, carboximetilcelulose, celulose microcristalina ou hidrogenofosfato de cálcio); lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco ou sílica); desintegrantes (por exemplo, crospovidona, amido de batata ou amido glicolato de sódio); agentes umectantes (por exemplo, lauril sulfato de sódio). Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na arte com revestimentos convencionais, revestimentos para retardar/controlar a libertação ou revestimentos entéricos. As preparações líquidas para administração oral podem assumir a forma, por exemplo, de soluções, xaropes ou suspensões, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes do uso. Tais preparações líquidas podem ser preparadas por meios convencionais com ingredientes inativos farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de suspensão (por exemplo, xarope de sorbitol, derivados de celulose ou gorduras comestíveis hidrogenadas); agentes emulsionantes (por exemplo, lecitina ou acácia); veículos não aquosos (por exemplo, óleo de amêndoa, ésteres oleosos, álcool etílico ou óleos vegetais fracionados); e conservantes (por exemplo, p- ou propil hidroxibenzoato de metila ou ácido sórbico). As preparações também podem compreender tampões, agentes aromatizantes, corantes e adoçantes adequados.

[0057] As preparações para administração oral podem ser adequadamente formuladas por métodos conhecidos dos versados na técnica para obter uma liberação controlada do composto ativo.

[0058] A administração parenteral inclui a administração por injeção intramuscular e intravenosa e infusão (infusão) intravenosa. As formulações para administração parentérica podem estar na forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes multidose, com um conservante adicionado. As composições podem assumir formas de suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos e podem conter agentes de formulação, tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão.

[0059] Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar na forma de pó para reconstituição com um veículo adequado, por exemplo, água livre de pirogênio estéril.

[0060] O método de tratamento utilizando os compostos desta invenção envolverá a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, preferencialmente na forma de uma composição farmacêutica a um indivíduo necessitado de tal tratamento.

[0061] Uma dose proposta dos compostos da presente invenção é de cerca de 0,1 a cerca de 1.000 mg por dia, em doses únicas ou divididas. O versado na técnica apreciará que a seleção da dose necessária para alcançar o efeito biológico desejado dependerá de vários fatores, por exemplo, do composto específico, do uso, do modo de administração, da idade e condição do paciente e a precisão a dosagem será determinada, a critério do médico assistente.

EXEMPLOS

[0062] Os exemplos a seguir não se destinam a limitar a invenção, mas servem apenas como ilustração da presente invenção. Abreviações AcOEt acetato de etila AcOH ácido acético brs singleto amplo CaCl2 cloreto de cálcio CHCl3 clorofórmio d dupleto dd dupleto de dupletos ddd dupleto de dupleto de dupletos dq dupleto de quartetos DEA N,N'- dietilamina DCC N,N'- diciclo-hexilcarbodiimida DCM Diclorometano EDC.HCl Cloridrato de N-(3- dimetilaminopropil)-N'- etilcarbodiimida EtOH etanol eq equivalentes ESI Ionização por eletropulverização h Hora(s) HCl Cloreto de hidrogênio HPLC Cromatografia em líquido de alto desempenho L litro LiHMDS Bis(trimetilsilil)amida de lítio m multipleto MeOH metanol MgSO4 Sulfato de magnésio mL Mililitro(s) MsOH Ácido metanossulfônico MW Micro-ondas NaHCO3 Bicarbonato de sódio NaOH Hidróxido de sódio Na2SO4 Sulfato de sódio NMR Ressonância nuclear magnética NP HPLC Cromatografia em líquido de alto desempenho de fase normal -OMe Grupo metóxi -OEt Grupo etóxi p.a. Puriss pro anlysi PTSA.H2O Monoidrato do ácido p- toluenossulfônico q quarteto RP-HPLC Cromatografia em líquido de alto desempenho de fase reversa s singleto sep septeto SFC Cromatografia de fluido supercrítica SQD MS Espectrômetro de Massa com Detector Quadrupolo Único t tripleto TFA Ácido trifluoracético TFAA Anidrido trifluoracético THF tetraidrofurano TLC Cromatografia de camada fina UPLCMS Espectrometria de massa de cromatografia em líquido de ultra desempenho µL microlitro

[0063] A TLC foi realizada com folhas de alumínio de sílica gel 60 F254 (Sigma-Aldrich, Merck) usando sistemas de solventes apropriados. A visualização foi geralmente feita por luz UV (254 nm).

Método UPLC-MS:

[0064] As análises UPLCMS foram realizadas em um cromatógrafo de líquido UPLC equipado com detector PDA e detector SQD MS, operando sob ESI (+) ou ESI (-) usando a coluna C18, 2,1 mm x 100 mm, 1,7 pm (AQUITY UPLC BEH ou equivalente). Metanol para HPLC ou LC/MS, água para HPLC, ácido fórmico para HPLC ou LC/MS, p.a. solução de amônia de classificação 25% e sua mistura foram usadas como fase móvel. As condições de operação foram as seguintes: fluxo da fase móvel 0,45 mL/min., comprimento de onda 210 - 400 nm, volume de injeção 1 μL, temperatura da coluna 60ºC, temperatura do amostrador automático 5ºC. A análise foi realizada 5,5 min. + 1,5 min. para "o atraso da próxima injeção". Eluição de gradiente com um curso linear: Tempo %A %B Curva de gradiente [min.] 0,0 80,0 20,0 - 4,0 0,1 99,9 linear (6) 5,5 80,0 20,0 imediata (11) As soluções foram preparadas da seguinte forma:

[0065] Preparação da fase móvel A1 - gradiente básico: foram adicionados 25 μL de ácido fórmico e 250 μL de solução de amônia a 25% a 250 mL de água. Degas usando um banho ultrassônico por 10 min.

[0066] Preparação da fase móvel A2 – gradiente ácido: 50 µL de ácido fórmico foram adicionados a 250 mL de água. Degas usando um banho ultrassônico por 10 min.

[0067] Fase móvel B: Super Gradiente de Metanol.

Procedimentos sintéticos:

[0068] Intermediário C-4A: 6-cloro- 3-(3- metil- 2- oxobutilideno) - 1H-indol-2- ona

O

O Cl N

H

[0069] Um vaso de reação de 5 L foi carregado com aldol C-3A (1015 g, 3,79 mol, 1 eq) e EtOH (2,85 L) foi adicionado. A suspensão foi aquecida a 55ºC e HCl 12 M (202 mL, 2,42 mol, 0,64 eq) foi adicionado em uma porção. Em seguida, o aquecimento foi continuado até a temperatura de ebulição do etanol. Verificou-se que mais EtOH (500 mL) era necessário devido à precipitação rápida do produto C-4A. Após 1 h, a análise UPLCMS mostrou 98% da área de pico do produto. O aquecimento foi interrompido e o resfriamento da mistura reacional foi iniciado. Quando a temperatura da mistura reacional foi atingida a 50ºC, toda a mistura foi transferida para um copo e resfriada a 0-5ºC. O resíduo sólido foi filtrado e lavado com 1,3 L de EtOH frio. O produto sólido foi seco em um secador de laboratório (40ºC) durante 3 h e depois seco ao ar durante a noite. Como resultado, o composto C-4A foi obtido como um sólido laranja (692 g, 73% de rendimento, 98,1% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0070] Intermediário C-3A: 6- cloro- 3- hidróxi- 3-(3- metil-2- oxobutil) - 2,3-diidro- 1H- indol- 2- ona

O NH

OH O Cl

[0071] Um vaso de reação de 15 L foi carregado com 6-cloroisatina (1.000 g, 5,5 mol, 1 eq) e EtOH (7 L), e depois 3-metilbutanona (2,94 L, 27,5 mol, 5 eq) foi adicionada em uma porção. A mistura de reação foi aquecida a 40ºC e DEA (250 mL, 2,41 mol, 0,44 eq) foi adicionado em uma porção. Em seguida, o aquecimento foi continuado até a temperatura de ebulição do etanol. Após 1 h, a análise UPLCMS mostrou 71% do produto na mistura de reação. O aquecimento foi continuado por mais 1 hora e, após esse período, a análise UPLCMS mostrou 93% do produto. A mistura reacional foi resfriada a 50ºC e depois toda a mistura foi transferida para um balão de fundo redondo e todos os ingredientes líquidos foram removidos. O resíduo foi suspenso em DCM (3,4 L) e fervido sob refluxo durante 1 h. Após esse período, o aquecimento foi interrompido e foi adicionado n-hexano (2 L) em uma porção. O conteúdo do balão foi resfriado a cerca de 5ºC e agitado durante 1,5 h a esta temperatura. A mistura resultante foi filtrada e o sólido obtido foi lavado com 500 mL de mistura DCM/n-hexano (1:1) seguido de secagem ao ar durante a noite. Como resultado, o produto aldol esperado C-3A foi obtido como um sólido cinza (965 g, 98,5% de pureza de acordo com a análise UPLCMS). A mistura de solventes após a filtração foi reduzida ao vácuo para cerca de 1,5 L, foi adicionado n-hexano (700 mL) e a suspensão obtida foi agitada por 0,5 h à temperatura ambiente. Outra filtração seguida de uma lavagem dupla com mistura DCM/n-hexano (150 mL, 1: 1, para cada lavagem) e secagem ao ar proporcionou a segunda parte do produto aldol C-3A (50 g, 99,1% de pureza). O rendimento total do aldol C-3A foi de 69% (1015 g, 98,5% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0072] Intermediário C-4B:6- cloro- 3-(3- metil- 2- oxopentilideno) - 2,3-diidro-1H-indol-2- ona

O

O Cl N

H

[0073] Um balão de reação de 250 mL foi carregado com aldol C-3B (11 g, 39 mmol, 1 eq) e EtOH (32 mL) foi adicionado em uma porção. A suspensão foi aquecida a 55ºC e HCl 12 M (1,63 mL, 19,5 mmol, 0,5 eq) foi adicionado em uma porção. Em seguida, o aquecimento foi continuado até a temperatura de ebulição do etanol. Após 1 h, a análise UPLCMS mostrou 98% do produto. A mistura de reação foi resfriada a 0 - 5ºC e agitada por 1/2 h. O resíduo sólido foi filtrado e lavado com uma pequena porção de EtOH frio. O produto sólido foi seco ao ar durante a noite. Como resultado, o composto C-4B foi obtido como um sólido laranja (5 g, 49% de rendimento, 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0074] Intermediário C-3B:6- cloro- 3- hidróxi-3-(3- metil-2- oxopentil) - 2,3-diidro-1H- indol- 2- ona

O NH

OH O Cl

[0075] Em um balão de fundo redondo (250 mL), 6- cloroisatina (15 g, 83 mmol, 1 eq) foi suspensa em EtOH (70 mL) e, em seguida, 3-metilpent-2-ona (51,3 mL, 415 mmol, 5 eq) foi adicionada em uma porção. A mistura de reação foi aquecida a 40ºC e DEA (4,34 mL, 42 mol, 0,5 eq) foi adicionado em uma porção. Em seguida, o aquecimento foi continuado até a temperatura de ebulição do etanol. Após 1 h, a análise UPLCMS mostrou 60% do produto. O aquecimento continuou por mais 2 horas e, após esse período, a análise UPLCMS mostrou 99% do produto. Após resfriamento até à temperatura ambiente, todos os ingredientes líquidos foram removidos ao vácuo. O resíduo foi suspenso em AcOEt (50 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 1 h. Após esse tempo, o conteúdo do balão foi resfriado a cerca de 5ºC e agitado durante 1,5 h a esta temperatura. A mistura resultante foi filtrada e o sólido obtido foi lavado com uma pequena quantidade de EtOH frio seguido de secagem ao ar durante a noite. Como resultado, o produto aldol esperado C-3B foi obtido como um sólido marrom claro (5,1 g, 98,5% de pureza de acordo com a análise UPLCMS). O resíduo após a filtração foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (30% a 60% de AcOEt em n-hexano). Após cromatografia, a segunda parte do produto C-3B foi obtida como um sólido marrom claro (5,9 g) com 97% de pureza (de acordo com a análise UPLCMS). O rendimento total do aldol C-3B foi de 47% (11 g, 98% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0076] Intermediário C-6A: N-(3-clorofenil) prop- 2-iamida

O Cl NH

[0077] Em um balão de 2 L de fundo redondo e de dois tubos equipado com agitação mecânica, dissolveu-se 3- cloroanilina (75 g, 590 mmol, 1 eq) em 500 mL de DCM (grau HPLC). Em seguida, foi adicionado gota a gota ácido prop-2- inóico (53,5 g, 760 mmol, 1,3 eq) dissolvido em 100 mL de DCM (o sal da amina apareceu). Na etapa seguinte, adicionou-se EDC-HCl (145 g, 760 mmol, 1,3 eq) em várias porções (durante a adição o balão de reação foi resfriado em um banho de gelo para evitar o refluxo do DCM). Após adição completa de EDC-HCl, a mistura de reação foi agitada por 2 h à temperatura ambiente e, em seguida, a mistura foi transferida lentamente para o copo contendo 500 mL de água e 250 g de gelo. A agitação continuou a 0 - 5ºC durante cerca de 15 minutos e depois o precipitado branco foi separado por filtração, lavado com 100 mL de água fria e seco ao ar. Como resultado, a amida C-6A esperada foi obtida como um sólido branco (102 g, 96,6% de rendimento, 96,3% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0078] Intermediário C-6B: N-(5-cloro-2- flúorfenil) prop-2-inamida Cl

O NH F

[0079] O ácido prop-2-inóico (15,16 g, 216,4 mmol, 1,05 eq) foi adicionado em uma porção a uma solução agitada de 5-cloro-2-fluoranilina (30 g, 206,1 mmol, 1 eq) em tolueno (400 mL) que foi resfriado e um banho de gelo/água. A mistura foi agitada durante 15 min., depois foi adicionada DCC (44,65 g, 216,4 mmol, 1,05 eq), em porções, enquanto se mantinha a temperatura abaixo de 10ºC.

A agitação continuou a 5ºC por 2 h, em seguida, o DCU sólido foi coletado por filtração e lavado com tolueno (150 mL) e finalmente com mistura de AcOEt/n-hexano (150 mL, 1: 9). O filtrado foi concentrado até um volume de cerca de 100 mL e agitado por 15 min. à temperatura ambiente. O precipitado resultante foi coletado por filtração, lavado com a mistura de tolueno/n-hexano (20 mL, 1: 1), n-hexano (20 mL) e seco ao ar por 16 h para fornecer 15,29 g do produto desejado como um sólido branco. O filtrado foi colocado em uma geladeira por 3 h e o precipitado resultante foi coletado por filtração, lavado com a mistura de tolueno/n-hexano (20 mL, 1: 1), n-hexano (20 mL) e seco ao ar por 16 h para fornecer 13,29 g da amida C-6B. O filtrado foi concentrado até um volume de aproximadamente 20 mL e depois foi adicionado lentamente hexano (400 mL) enquanto se agitava. A mistura foi submetida ao refluxo por 30 min. e a solução quente foi filtrada, concentrada até aproximadamente 100 mL e colocada em uma geladeira por 18 h. O precipitado resultante foi coletado por filtração, lavado com n-hexano (2 x 20 mL) e seco ao ar por 16 h para fornecer adicionalmente 7,19 g da amida C-6B. O rendimento total do produto C-B6 foi de 88% (35,77 g).

[0080] Intermediário C-6C: N-(5-cloro-2- metilfenil) prop-2-inamida Cl

O NH

[0081] Em um balão de 2 L de fundo redondo e dois gargalos, equipado com agitação mecânica, 5-cloro-2- metilanilina (75 g, 530 mmol, 1 eq) foi dissolvida em 1.000 mL de DCM (grau HPLC). Em seguida, foi adicionado gota a gota ácido prop-2-inóico (49 g, 690 mmol, 1, 3 eq) dissolvido em 100 mL de DCM (grau HPLC) (o sal da amina apareceu). Na etapa seguinte, adicionou-se EDC-HCl em várias porções (durante a adição o balão de reação foi resfriado em um banho de gelo para evitar o refluxo de DCM). Após adição completa de EDC-HCl, a mistura reacional foi agitada durante 1 h à temperatura ambiente. Toda a mistura foi transferida para um copo contendo 750 mL de água e 250 g de gelo. A agitação continuou a 0 - 5ºC durante cerca de 15 minutos e depois o precipitado branco foi separado por filtração, lavado com 100 mL de água fria e seco ao ar. Como resultado, a amida C-6C esperada foi obtida como um sólido branco (81 g, 80% de rendimento, 99,1% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0082] Intermediário C-6D: N-(3-cloro-4- flúorfenil) prop-2-iamida Cl

F O NH

[0083] A um balão de 1 L de fundo redondo e bocal de 1 L equipado com barra de agitação magnética e termômetro, foi adicionada 3-cloro-4-fluoranilina (14,8 g, 100 mmol, 1 eq), seguida por DCM (200 mL, classificação HPLC ) e ácido 2-prop-inóico (9,1 g, 130 mmol, 1,3 eq). A mistura de reação foi resfriada a 0ºC e EDC-HCl (25,2 g, 130 mmol, 1,3 eq) foi adicionado em várias porções. A reação é exotérmica e deve-se evitar exceder +5ºC durante a adição. Após adição completa de EDC.HCl, a mistura foi agitada durante 1 h a 5ºC. Após esse tempo, um banho de gelo foi removido e à mistura de reação foram adicionados 200 mL de água fria. A reação foi agitada por cerca de 1/2 h e o precipitado resultante foi separado por filtração e lavado com 100 mL de água fria. O sólido assim obtido foi redissolvido em clorofórmio e a solução foi lavada com água, seca sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado até à secura. O produto resultante foi seco ao vácuo. Como resultado, a amida C-6D esperada foi obtida como um sólido amarelo claro (19,2 g, rendimento de 98%, pureza de 98% de acordo com a análise UPLCMS).

[0084] Intermediário C-6E: N-(3,4-diflúorfenil) prop-2-inamida

F F O NH

[0085] A um frasco de fundo redondo de dois gargalos de 1 litro equipado com barra de agitação magnética, termômetro, foi adicionada 3,4-difluoranilina (12,9 g, 9,9 mL, 100 mmol, 1 eq) e em seguida DCM (300 mL, grau HPLC) e ácido prop-2-inóico (9,1 g, 130 mmol, 1.3 eq). A mistura de reação foi resfriada para 0ºC e EDC.HCl (24,9 g, 130 mmol, 1,3 eq) foi adicionado em várias porções. A reação é exotérmica e deve-se evitar exceder +5ºC durante a adição. Após adição completa de EDC.HCl, a mistura foi agitada durante 1 h a 5ºC. Após esse tempo, um banho de gelo foi removido e à mistura de reação foram adicionados 300 mL de água fria. A reação foi agitada por cerca de 1/2 h e o precipitado resultante foi separado por filtração e lavado com 100 mL de água fria. O sólido assim obtido foi redissolvido em clorofórmio e a solução foi lavada com água, seca sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado até à secura. O produto resultante foi seco ao vácuo. Como resultado, a amida C-6E esperada foi obtida como um sólido esbranquiçado (17,3 g, rendimento de 96%, pureza de 98% de acordo com a análise UPLCMS).

[0086] Intermediário C-6F: N- (5-cloro-2,4- difluorfenil) prop-2-inamida Cl

F O NH F

[0087] Em um balão de 500 mL de fundo redondo, de dois gargalos equipado com agitador magnético foi dissolvida 5-cloro-2,4-difluoroanilina (10 g, 61 mmol, 1 eq) em DCM (150 mL, grau HPLC). Então, ácido prop-2-inóico (5,5 g, 78 mmol, 1,3 eq) foi adicionado gota a gota (o sal da amina apareceu). Em seguida, foi adicionado EDC • HCl (14 g, 78 mmol, 1,3 eq) em várias porções (durante a adição, o balão de reação foi resfriado em um banho de gelo para manter a temperatura ambiente. Após a adição completa de EDC • HCl, a mistura de reação foi agitado por mais 1 h em temperatura ambiente. Depois desse tempo, foram adicionados 150 mL de água e a mistura foi transferida para um funil de separação. As fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída duas vezes com o DCM (2 x 100 mL). As frações orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4 e concentradas a aproximadamente 50 mL ao vácuo, resultando em uma suspensão espessa. Os sólidos foram filtrados e secos para fornecer 8 g de cristais creme. O filtrado foi concentrado e depois purificado por cromatografia flash (n-hexano/AcOEt; 8:1  5:1),

fornecendo 4,4 g adicionais da amida C-6F. Como resultado, a amida C-6F esperada foi obtida como um sólido creme (12,4 g, rendimento de 94%, 100% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0088] Intermediário C-7A: 5-amino-2,4- dimetoxipirimidina NH2

O N N O

[0089] A um reator de vidro QianCap (1850 mL) equipado com agitador magnético foi adicionado C-7A2 (100 g, 540 mmol) e em seguida THF (800 mL). Em seguida, paládio a 10% sobre carbono (2 g) foi adicionado em uma porção e o reator foi conectado à fonte de hidrogênio. A pressão de hidrogênio foi ajustada em 2 bar e a reação foi bem agitada por 16 h sob fluxo contínuo de hidrogênio. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou a conversão completa do material de partida. A mistura de reação foi filtrada através da almofada de Cellite e o filtrado foi concentrado ao vácuo a cerca de 150 - 200 mL. Em seguida, n-hexano (500 mL) foi adicionado gota a gota e a suspensão foi agitada por 2 h à temperatura ambiente. O precipitado foi filtrado, lavado duas vezes com n-hexano (2 x 50 mL) e seco ao vácuo. Como resultado, a amina C-7A foi obtida como um sólido amarelo/verde (77,94 g, rendimento de 93%, 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0090] Intermediário C-7A2: 2,4-dimetóxi-5- nitropirimidina

NO 2

O N N O

[0091] A um balão de fundo redondo de 2 litros e três gargalos, contendo termômetro, condensador de água, conexão à fonte de gás inerte (argônio) e agitador mecânico, foi adicionado metanol (1 L, grau HPLC) e sob atmosfera de argônio, pequenos pedaços de sódio (65 g, 2,83 mol, 2,2 eq) foram adicionados lentamente por cerca de 1 h com boa agitação (a reação é exotérmica, mas a mistura de reação não foi resfriada; geralmente outra peça de sódio foi adicionada quando foi consumida pela primeira vez). Após dissolver toda a porção de sódio, a mistura de reação foi resfriada a -5ºC e a suspensão recém-preparada do C-7A1 (250 g, 1,29 mol, 1 eq) em metanol (500 mL, grau HPLC) foi cuidadosamente adicionada (em torno de 40 minutos) em pequenas porções com bastante agitação. (CUIDADO: a reação é altamente exotérmica), evite exceder +10ºC durante a adição. Além disso, no decurso da reação, foi formado muito produto sólido. Após a adição de toda a suspensão do substrato, a mistura de reação foi mantida a 0 - 5ºC por cerca de 1/2 h e, em seguida, foi deixada atingir a temperatura ambiente (geralmente isso levou cerca de 2 h). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo completo do substrato. Em seguida, a mistura de reação foi resfriada a cerca de 5ºC e o produto sólido foi filtrado e lavado com pequena quantidade (100 mL) de metanol frio. O produto bruto foi colocado em um copo com água (1 L) e foi bem suspenso com agitador mecânico (cerca de 10 minutos de agitação do poço). A suspensão foi então filtrada e o sólido obtido foi lavado com água (500 mL), n-hexano (200 mL) e seco ao ar durante a noite. Como resultado, 211,5 g do composto C-7A2 foram obtidos como um sólido amarelo claro (88% de rendimento, 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0092] Intermediário C-7B: 5-amino-2,4- dimetoxipiridina NH2

O N O

[0093] A um reator de vidro QianCap (1.850 mL) equipado com agitador magnético foi adicionado C-7B2 (40 g, 217 mmol) seguido de THF (500 mL). Em seguida, paládio a 10% sobre carbono (1,5 g) foi adicionado em uma porção e o reator foi conectado à fonte de hidrogênio. A pressão de hidrogênio foi ajustada em 2 bar e a reação foi bem agitada por 7 h sob fluxo contínuo de hidrogênio. Após esse tempo, a análise UPLCMS mostrou a conversão completa do material de partida. A mistura de reação foi filtrada através da almofada de Cellite e o filtrado foi concentrado ao vácuo. Como resultado, a amina C-7B foi obtida como um sólido marrom (33 g, 99% de rendimento).

[0094] Intermediário C-7B2: 2,4-dimetóxi-5- nitropiridina NO2

O N O

[0095] A um balão de fundo redondo de 2 litros e três gargalos, contendo termômetro, condensador de água, conexão à fonte de gás inerte (argônio) e agitador mecânico, foi adicionado metanol (900 mL, classe HPLC) e sob atmosfera de argônio pequenos pedaços de sódio (26,7 g, 1,16 mol, 2,1 eq) foram adicionados lentamente por cerca de 1 h com agitação do poço (CUIDADO: a reação é exotérmica, mas a mistura de reação não foi resfriada; geralmente outro pedaço de sódio foi adicionado quando foi consumido pela primeira vez). Após dissolver toda a porção de sódio, a mistura de reação foi resfriada a -5ºC e a suspensão recém- preparada do composto C-7B1 (106,25 g, 0,55 mol, 1 eq) em metanol (100 mL, grau HPLC) foi cuidadosamente adicionada (cerca de 30 minutos) em pequenas porções com agitação do poço (CUIDADO: a reação é altamente exotérmica, deve-se evitar exceder +10ºC durante a adição). Após a adição de toda a quantidade da suspensão do substrato C-7B1, a mistura de reação foi mantida a 0 - 5ºC por cerca de 40 min. e depois foi aquecida à temperatura ambiente e agitada a 40ºC por 3,5 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo completo do substrato. Em seguida, a mistura de reação foi resfriada abaixo de 10ºC e o produto sólido foi filtrado e lavado com uma pequena quantidade (50 mL) de metanol frio, água (100 mL), n-hexano (100 mL) e seco ao ar durante a noite. Isso resultou em 99,3 g do composto C-7B2, como um sólido amarelo claro (rendimento de 98%, pureza de 97% de acordo com Análise UPLCMS).

[0096] Intermediário C-7C: 5-amino-4-metóxi-2- (dimetilamino) piridina NH2

O N N

[0097] A um reator de vidro QianCap (500 mL) equipado com agitador magnético foi adicionado C-7C2 (4,5 g, 22,8 mol) seguido de THF (70 mL) e metanol (70 mL). Em seguida, paládio a 10% sobre carbono (0,48 g) foi adicionado em uma porção, o reator foi conectado à fonte de hidrogênio. A pressão de hidrogênio foi ajustada em 2 bar e a reação transcorreu bem por 17 h sob fluxo contínuo de hidrogênio à temperatura ambiente. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou uma conversão completa do material de partida. A mistura reacional foi filtrada através da almofada de Cellite e o filtrado foi concentrado ao vácuo até à secura. Como resultado, a amina C-7C foi obtida como um sólido escuro (3,9 g; 96% de rendimento; 95% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[0098] Intermediário C-7C2: 4-metóxi-2- (dimetilamino) -5-nitropendina NO 2

O N N

[0099] Um balão de 1/2 L de fundo redondo e três gargalos, contendo termômetro, condensador de água e funil de gotejamento, foi carregado com C-7C1 (10 g, 50,4 mmol, 1 eq), THF (50 mL) e metanol (200 mL). Toda a mistura foi agitada a 22ºC por 10 min. e depois foi adicionada gota a gota dimetilamina (13,7 mL, solução a 60% em água). Após 1 h, um sólido amarelo pálido começou a precipitar. A porção seguinte de dimetilamina (2 mL, solução a 60% em água) foi adicionada e a reação continuou por mais 24 h. Após esse período, a mistura de reação foi concentrada ao vácuo e o material bruto foi suspenso em metanol (70 mL) e água (140 mL). Após agitação vigorosa durante 1 h a 0ºC, o sólido amarelo pálido foi separado por filtração, lavado com uma pequena quantidade de solução de metanol-água e seco ao vácuo. Como resultado, o composto C-7C2 foi obtido como um sólido amarelo pálido (10 g; 100% de rendimento; 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00100] Intermediário C-7D: 5-amino-2,4,6- trimetoxipirimidina NH2

O O N N O

[00101] A um reator de vidro QianCap (1850 mL) equipado com agitador magnético foi adicionado C-7D3 (46 g, 231 mmol) seguido de MeOH (750 mL). A seguir, paládio sobre carbono a 10% (2,5 g) foi adicionado em uma porção e o reator foi conectado à fonte de hidrogênio. A pressão de hidrogênio foi ajustada em 2 bar e a reação foi agitada no poço por 24 h sob fluxo contínuo de hidrogênio. Após esse tempo, a análise por TLC mostrou a conversão completa do material de partida. A mistura reacional foi filtrada através da almofada de Cellite e o filtrado foi concentrado ao vácuo até à secura. Como resultado, a amina C-7D foi obtida como um sólido bege (38,3 g, 97% de rendimento, 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00102] Intermediário C-7D3: 2,4,6-trimetóxi-5- nitropirimidina NO 2

O O N N O

[00103] Um metanol (1.000 mL) foi adicionado a um balão de fundo redondo de 2 L contendo um termômetro e um agitador magnético e o conjunto foi resfriado a 0ºC em um banho de água/gelo. Em seguida, hidreto de sódio (13 g, 327 mmol, 1,2 eq, 60% em óleo mineral) foi adicionado em pequenas porções por 30 minutos (CUIDADO: A reação é exotérmica). Após 30 minutos de agitação, o substrato C-7D2 (60 g, 272 mmol, 1 eq) foi adicionado em várias porções. A reação é altamente exotérmica e durante a adição o balão de reação foi resfriado em um banho de água/gelo. Durante a reação foi observada a formação de um produto amarelo sólido. A mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente (1 h) e após esse tempo, a análise por TLC (DCM como eluente) mostrou a conversão completa do material de partida. À mistura reacional foi adicionado 1 L de água e o metanol foi evaporado. O precipitado foi removido por filtração, lavado com 200 mL de n-hexano e seco ao ar. Como resultado, o composto C-7D3 foi obtido como um sólido amarelo (46,5 g, 79% de rendimento, 100% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00104] Intermediário C-7D2: 2-cloro-4,6- dimetóxi-5-nitropirimidina NO 2

O O

N N Cl

[00105] A um balão de fundo redondo de dois litros de 1/2 L, contendo termômetro e equipado com agitador magnético, foi adicionado o composto C-7D1 (50 g, 286 mmol, 1 eq) e em seguida adição de mistura de TFAA (80 mL, 572 mmol, 2 eq)/DCM (1:1). A mistura foi então resfriada em um banho de gelo-salmoura a -5ºC. Foi adicionado ácido nítrico fumegante concentrado (14,3 mL, 343 mmol, 1,2 eq) gota a gota à mistura bem agitada (CUIDADO: A reação é altamente exotérmica) como tal não exceder +40ºC. No decurso da reação, foi formado muito produto sólido. Após a adição de toda a quantidade de ácido nítrico, a mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente. Após esse tempo, a análise por TLC mostrou o consumo completo do substrato (uma alíquota que foi extinta com água e extraída com DCM; placa eluída com DCM). O precipitado branco espesso resultante foi vertido sobre gelo e a agitação foi continuada durante 10 minutos. A solução aquosa foi extraída com DCM (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram então lavadas com solução aquosa saturada de NaHCO3 até as lavagens permanecerem em pH 7. A solução foi seca sobre MgSO4 e o solvente foi removido ao vácuo para fornecer um composto cristalino amarelo-branco C-7D2 (61 g, 97% de rendimento, 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00106] Composto (1), C1: (3S)-6-cloro-2'-(3- clorofenil) -5' -(2,4-dimetoxipirimidin-5-il) -6'-(propan- 2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol]- 2,3'-diona Cl

O O N N N

O Cl O N

N H

[00107] O composto do título foi obtido após SFC quiral preparativo (método A) ou separação quiral de RP-

HPLC (método R) do composto racêmico C-10. C1; > 99% ee; 1 tr: 7,77 min. (método R'); HNMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,18 (s, 1H), 8,55 – 8,42 (m, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,36 – 7,27 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 7,08 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,94 (br s, 3H), 2,43 (sep, J = 7,0 Hz, 1H), 0,86 (d, 13 J = 7,0 Hz, 3H), 0,43 (d, J = 7,0 Hz, 3H); C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 175,42, 166,58, 164,87, 164,85, 157,89, 144,17, 138,80, 135,26, 134,00, 133,38, 130,76, 127,52, 127,42, 127,30, 126,96, 126,02, 123,70, 123,04, 120,65, 118,41, 116,45, 111,18, 70,20, 55,52, 54,85, 25,47, 21,41, 21,25, Composto C-10.C1: 6-cloro-2'-(3-clorofenil) -5'- (2,4-dimetoxipirimidin-5-il)- 6'-(propan-2-il) -1,2,3',5' - tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol]2,3'- diona Cl

O O N

N N Cl

N O O N H

[00108] TFA, 50 mL, foi colocado em um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética. Então, o intermediário C-9.C1 (17,8 g, 30,6 mmol) foi adicionado em várias porções e a mistura de reação foi vigorosamente agitada por 3 h a 40ºC. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 89% de pico do produto, com alguns pequenos picos de impurezas. A maior parte do ácido foi então evaporada e o resíduo foi dissolvido em DCM (100 mL). Foram adicionados 100 mL de água e a mistura foi tratada com NaOH 3 M até pH

8. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 100 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas sobre MgSO4 e evaporadas até a secura para fornecer 18 g de um composto sólido bege C-10.C1 com 90% de pureza. O produto bruto C-

10.C1 foi dissolvido em 50 mL de metanol (grau HPLC). Em seguida, foi adicionada gota a gota solução de metóxido de sódio a 25% (10 mL) dentro de 10 minutos e a mistura foi agitada à temperatura ambiente. Após 24 h, a análise UPLCMS mostrou 97% do produto esperado C-10.C1. A mistura foi concentrada até metade do volume e transferida lentamente para uma mistura agitada de gelo (100 g) e depois acidificada com HCl 3M a pH neutro. O precipitado foi removido por filtração, lavado com 50 mL de água e seco ao vácuo para fornecer o composto C-10.C1 como um sólido bege- alaranjado (14,5 g, 84% de rendimento, 98% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00109] Procedimento alternativo para a preparação C-10.C1: 12,0 g (19 mmol) de Intermediário C-

9.C1 foram dissolvidos em 50 mL de AcOH glacial. Foi adicionado MsOH (1 eq) e a mistura foi agitada a 40ºC. Após 16 horas, a mistura foi transferida para um copo contendo 100 g de gelo e 100 mL de amônia a 25%. O produto sólido foi filtrado, lavado com 50 mL de água e seco ao ar. A purificação por cromatografia flash (DCM/MeOH, 100: 0 -> 98: 2) resultou em 9,6 g de um sólido bege-alaranjado com 94% de pureza (de acordo com a análise UPLCMS). Rendimento: 78%.

[00110] Composto C-9.C1: 4-(6-cloro-3-hidróxi-2- oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il)-N-(3- clorofenil) -1-(2,4-

dimetoxipirimidin-5-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida Cl

NH HO O O N NH N

O N O Cl

[00111] A um balão de 500 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados composto C-8.C1 (15 g, 26,6 mmol, 1 eq) e THF (200 mL), e em seguida fosfito de trietila (6,81 mL, 39,8 mmol, 1,5 eq). Em seguida, t- butóxido de sódio (5,11 g, 53,2 mmol, 2 eq) foi adicionado em várias porções. A mistura de reação foi agitada por 3 h à temperatura ambiente sob atmosfera de ar (o balão foi equipado com tubo de CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 82% do produto desejado e 10% da impureza principal. A mistura de reação foi transferida lentamente para uma mistura gelada (0 - 5ºC) de água (150 mL) e HCl 12 M (5 mL). Após adição de AcOEt (100 mL), toda a mistura foi transferida para um funil de separação. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída mais uma vez com AcOEt (100 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4 e o solvente foi removido ao vácuo. Os produtos em bruto foram purificados utilizando cromatografia flash (CHCl3/MeOH 100: 0 -> 98: 2). Como resultado, 5,86 g de C-9.C1 foram obtidos com 93,7% de pureza. Rendimento: 38%.

[00112] Composto C-8.C1: 4-(6-cloro-2-oxo-2,3- diidro-1H-indol-3-il)-N-(3-clorofenil)-1-(2,4-

dimetoxipirimidin-5-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida

H Cl N

O O N NH N

O N O Cl

[00113] Em um balão de fundo redondo de 500 mL equipado com barra de agitação magnética, os compostos C-4A (21 g, 117 mmol, 1 eq), C-6A (29,25 g, 117 mmol, 1 eq) e C- 7A (20 g, 130 mmol, 1,1 eq) foram suspensos em AcOH aquoso a 90% e o balão foi bem fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 70ºC e agitada a esta temperatura durante 24 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 60% do produto esperado. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e evaporada até à secura. A reação foi repetida e o resíduo de dois lotes foi combinado e purificado de acordo com o seguinte procedimento:

[00114] O resíduo sólido foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (30% a 50% de AcOEt em n-hexano). Todas as frações que continham o produto foram concentradas em 500 mL e deixadas à temperatura ambiente. Após 24 horas, o sólido rosa foi filtrado, lavado com 50 mL de n-hexano e seco ao ar (40,8 g, 96,5% de pureza de acordo com a análise UPLCMS). O filtrado foi evaporado até à secura para fornecer 6,6 g adicionais de produto C-8.C1, com 50% de pureza. Rendimento: 33%.

[00115] Composto (2),C2: (3S)-6-cloro-2'-(5- cloro-2-flúorfenil) -5' -(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-

(propan-2 -il)-1, 2,3',5'-tetraidro-2H -espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c] pirrol]-2,3'-diona

F O

O Cl N

N N Cl O

O N N H

[00116] O composto do título foi obtido após a separação quiral preparativa de SFC (método B) ou quiral RP-FIPLC (método N) do composto racêmico C-10.C2; > 99% ee; 1 tr: 9,31 min. (método N'); H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,23 (br s, 1H), 8,50 (br s, 1H), 7,45 (ddd, J = 8,9, 4,1, 2,7 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,32 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 – 7,13 (m, 1H), 7,08 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 6,3, 2,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,94 (br s, 3H), 2,48 – 2,39 (m, 1H), 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 13 3H), 0,44 (d, J = 7,0 Hz, 3H); C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 175,51, 166,44, 164,70, 164,24, 158,75, 157,96, 156,74, 144,03, 135,39, 134,14, 130,82, 130,75, 129,58, 128,33, 127,30, 125,99, 125,66, 125,54, 123,64, 123,04, 119,63, 118,75, 118,68, 118,57, 116,25, 111,12, 70,04, 55,67, 55,01, 49,04, 25,34, 22,00, 21,50-20,80.

[00117] Composto C-10.C2: 6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2- il) -1,2,3',5'-tetraidro-2H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol]-2,3'-diona

F

O Cl

O N

N N Cl

O O N N H

[00118] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética, foi adicionado o composto C-9.C2 (2,86 g, 4,76 mmol) e o balão foi resfriado em um banho de gelo. Em seguida, foi adicionado TFA (25 mL) (cerca de 2 mL/min.). O banho de resfriamento foi removido e a reação foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 72% da área de pico do produto. A mistura foi então vertida em gelo (cerca de 100 g) e diluída com DCM (50 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM três vezes. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura e o solvente foi removido ao vácuo. A mistura bruta foi pré- absorvida em gel de sílica e purificada usando cromatografia flash (AcOEt/hexano 40% -> 60%). O sólido marrom obtido após cromatografia (1,51 g) foi agitado em 60% de AcOEt em n-hexano (10 mL) por 0,5 h e depois filtrado, lavado com 60% de AcOEt em n-hexano e seco ao ar. Como resultado, o composto C-10.C2 foi obtido como um sólido marrom claro (1,35 g, 46% de rendimento) com 96% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00119] Composto C-9.C2: N-(5-cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-3-hidróxi-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il) -1 - (2,4-dimetoxipirimidin-5-il) -5-(propan-2-il) -1H-pirrol-3- carboxamida Cl

NH HO O

O Cl

N NH N O N O F

[00120] A um balão de 500 mL equipado com barra de agitação magnética, foram adicionados o composto C-8. C2 (5 g, 8,6 mmol, 1 eq) e THF (80 mL), e em seguida fosfito de trimetila (2 mL, 17,2 mmol, 2 eq). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em um banho de gelo e foi adicionado t-pentóxido de sódio (3,79 g, 34,4 mmol, 4 eq) em uma porção. O banho de resfriamento foi removido e a reação foi agitada por 1 h à temperatura ambiente (o balão foi equipado com tubo de CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 91% da área de pico do produto. Cerca de 90% do solvente foram removidos e a mistura obtida foi diluída com 100 mL de água. A suspensão resultante foi acidificada com HC1 3 M até pH ~ 5 e diluída com 100 mL de DCM. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM três vezes. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina, secas sobre Na2SO4 e o solvente foi removido ao vácuo. O produto bruto C-9.C2 foi obtido como um sólido/espuma marrom-avermelhado (72% de pureza de acordo com a análise UPLCMS) e foi usado na próxima etapa sem qualquer purificação adicional.

[00121] Composto C-8.C2: N-(5-cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il)-1-(2,4- dimetoxipirinidina-5-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida

H Cl N

O Cl O

N NH N F O N O

[00122] A um balão de 500 mL equipado com barra de agitação magnética, compostos C-4A (12,48 g, 50 mmol, 1 eq), C-7A (7,76 g, 50 mmol, 1 eq) e C-6B (9,88 g, 50 mmol, 1 eq) foram adicionados seguidos por AcOH glacial (125 mL) e o balão foi bem fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 90ºC (temperatura do banho de aquecimento) e agitada a esta temperatura durante 16 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 40% da área de pico do produto). A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e o AcOH foi evaporado até à secura. O resíduo foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (30% a 60% de AcOEt em n- hexano). Após a remoção dos solventes, o produto C-8.C2 foi obtido como um sólido/espuma vermelho escuro (8,7 g, 30% de rendimento) com 84% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00123] Composto (3),C3: (3S) -6-cloro-2'-(5- cloro-2-metilfenil)-6'-(propan-2-il) -5'- (trimetoxipirimidin-5-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol]1-2,3'-diona

O Cl O

N N N

O Cl N

N O O H

[00124] O composto título foi obtido após a separação quiral preparativa de SFC (método C) ou quiral RP-HPLC (método T) do composto racêmico C-10.C3; > 99% ee; 1 tr: 16,7 min. (método T). Mistura de rotâmeros H NMR (600 MHz, DMSO-d6): 11,31 (br s, 1H), 10,90 (br s, 1H), 7,35 (d,

J = 8,1 Hz, 1H), 7,33 – 7,18 (m, 4H), 7,02 (dd, J = 8,1, 2,0 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 1,4 Hz, 3H), 3,93 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 3,90 (d, J = 2,4 Hz, 3H), 2,38 – 2,32 (m, 1H), 2,24 (s, 1H), 2,07 (s, 2H), 0,80 (dd, J = 13,5, 7,0 Hz, 3H), 0,41 (dd, J = 10,0, 7,0 Hz, 3H); Mistura 13 de rotâmeros: C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 176,16, 174,19, 167,19, 167,05, 166,99, 166,89, 163,67, 163,37, 162,67, 143,81, 137,44, 136,75, 136,68, 136,17, 134,82, 134,74, 133,24, 133,19, 132,37, 132,31, 129,95, 129,22, 128,11, 127,96, 127,92, 127,45, 127,11, 127,05, 125,63, 122,64, 122,44, 122,19, 119,53, 119,28, 117,89, 110,67, 110,59, 99,16, 70,13, 69,70, 55,04, 54,78, 54,74, 54,71, 40,41, 40,03, 39,89, 24,99, 24,97, 21,84, 21,06, 21,02, 20,85, 20,78, 17,97, 17,82.

[00125] Composto C-10.C3: 6-cloro-2'-(5-cloro-2- metilfenil)-6' -(propan-2-il) -5'-(trimetoxipirimidin-5-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c] pirrol]2,3'-diona

O Cl O

N N N

O Cl N

N O O H

[00126] A um balão de 25 mL equipado com barra de agitação magnética, composto C-9.C3 (6,7 g, 1,19 mmol) e AcOH (10 mL) foram adicionados à temperatura ambiente. Em seguida, foi adicionado MsOH (0,077 mL, 1,19 mmol) e a mistura de reação foi agitada por 3 h a 80ºC. Após 1 h, a análise UPLCMS mostrou 93% da área de pico do produto. O AcOH foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em AcOEt,

lavado com NaHCO3 saturado, salmoura e seco sobre MgSO4. A mistura foi concentrada até cerca de 5 mL de AcOEt e a suspensão foi filtrada. O sólido recolhido foi lavado com 5 mL de AcOEt e seco ao vácuo. O produto desejado C-10.C3 foi obtido como um sólido branco (0,31 g, 43% de rendimento, 98% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00127] Composto C-9.C3: N-(5-cloro-2-metilfenil) -4-(6-cloro-3-hidróxi-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il) -5- (propan-2-il)-1-(trimetoxipirimidin-5-il)-1H-pirrol-3- carboxamida Cl

H N O NH

O Cl

HO O N N O N O

[00128] A um balão de 50 mL equipado com barra de agitação magnética, foram adicionados composto C-8.C3 (0,8 g, 1,3 mmol, 1 eq) e THF (15 mL). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em banho de gelo a 0ºC e fosfito de trietil (0,45 mL, 2,6 mmol, 2 eq) foi adicionado. Após 10 minutos em 0ºC, foi adicionado t-pentóxido de sódio (0,6 g, 5,2 mmol, 4 eq) em várias porções. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente (o balão foi equipado com tubo de CaCl2) e monitorada por TLC (5% de MeOH em CHCl3). Após 24 h, a mistura foi vertida em gelo e a reação foi acidificada com HC1 1 M para pH ~ 5. Após adição de AcOEt (50 mL), a mistura foi transferida para um funil de separação. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída mais uma vez com AcOEt (25 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e o solvente foi removido ao vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna usando 1% de MeOH em CHCl3 como eluente. O produto desejado C-9.C3 foi obtido como um sólido rosa (0,8 g, 90% de rendimento, 93% de pureza de acordo com a análise UPLCMS). Composto C-8.C3: N-(5-cloro-2-metilfenil) -4-(6- cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il) -5-(propan-2-il) - 1 -(trimetoxipirimidin-5-il)-1H-pirrol-3-carboxamida

H

N Cl O

O O Cl N

N NH O N O

[00129] Em um balão de fundo redondo de 25 mL equipado com barra de agitação magnética, os compostos C-4A (0,67 g, 2,7 mmol, 1 eq), C-7D (0,5 g, 2,7 mmol, 1 eq) e C- 6C (0,52 g, 2,7 mmol, 1 eq) foram adicionados e em seguida AcOH glacial (10 mL) e o balão foi bem fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 90ºC e agitada a esta temperatura durante a noite. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 45% da área de pico do produto). O AcOH foi então evaporado ao vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (n-hexano/AcOEt, 4: 1 -> 1: 1) fornecendo o produto esperado C-8.C3 como um sólido vermelho (0,8 g, 40% de rendimento, 82% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00130] Composto (4), C4: (3S)-6-cloro-2'-(3- cloro-4- flúorfenil) -5' -(2,4- dimetoxipirimidin-5-il) -

6'-(propan-2-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2H-espiro [indol-3, 1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona Cl

F O O N

N N Cl O

O N N H

[00131] O composto do título foi obtido após a separação quiral preparativa de SFC (método D) ou separação quiral RP-HPLC (método K) do composto racêmico C-10.C4; > 1 99% ee; tr: 3,79 min. (método K'). H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,47 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,24 – 7,19 (m, 1H), 7,18 – 7,12 (m, 1H), 7,12 – 7,06 (m, 1H), 7,05 – 6,96 (m, 2H), 6,96 – 6,86 (m, 2H), 4,07 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 2,49 – 2,38 (m, 1H), 0,90 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,52 (d, J = 7,0 13 Hz, 3H); C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 175,2, 166,5, 165,6, 164,9, 158,5, 157,0, 156,5, 142,0, 136,4, 134,3, 132,6, 132,5, 131,0, 128,6, 128,5, 126,5, 126,2, 123,8, 122,8, 121,4, 121,3, 120,7, 117,8, 117,0, 116,8, 116,2, 111,6, 70,1, 55,6, 54,7, 25,6, 21,2, 1,9.

[00132] Composto C-10.C4: 6-cloro-2'-(3-cloro-4- flúorfenil) -5' -(2,4-dimetoxipirimidin-5-il) -6'-(propan- 2-il)-1, 2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-cl]pirrol]-2,3'-diona Cl

F O O N

N N Cl O

O N N H

[00133] A um balão de 250 mL equipado com barra de agitação magnética, composto C-9.C4 (10,34 mmol) e TFA (70 mL) foram adicionados à temperatura ambiente (TFA foi adicionado em torno de 5 mL/min.). Em seguida, a reação foi agitada por 3 h a 40ºC e monitorada por TLC. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 71% da área de pico do produto. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e evaporada até à secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (10% - 50% AcOEt/n-hexano). Após a remoção dos solventes, o produto C-10.C4 foi obtido como um sólido/espuma marrom claro (5,44 g, ~ 80% de rendimento após duas etapas, a partir do C-8.C4) com 88% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00134] Composto C-9.C4: 4-(6-cloro-3-hidróxi-2- oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il)-N-(3-cloro-4- flúorfenil) -1- (2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida Cl

NH HO O O N NH N F

O N O Cl

[00135] A um balão de 500 mL equipado com barra de agitação magnética, foram adicionados composto C-8.C4 (6,04 g, 10,34 mmol, 1 eq) e THF (140 mL). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em banho de gelo a 0ºC e fosfito de trimetila (1,83 mL, 15,51 mmol, 1,5 eq), t- pentóxido de sódio (2,28 g, 20,68 mmol, 2 eq) foram adicionados em uma porção. A mistura de reação foi agitada por 4 h a esta temperatura (o balão foi equipado com tubo de CaCl2) e monitorado por TLC. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 87% da área de pico do produto desejada. Em seguida, à mistura foi adicionada água fria (50 mL) e a reação foi acidificada com HCl a 5% até pH ~ 5. A mistura reacional foi agitada durante cerca de 1/2 h à temperatura ambiente e o precipitado resultante foi removido por filtração, lavado com 100 mL de água fria. O sólido assim obtido foi redissolvido em AcOEt, lavado com água, seco sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado. O produto bruto C-9.C4 foi obtido como um sólido marrom (85% de pureza de acordo com a análise UPLCMS) e foi usado na próxima etapa sem qualquer purificação adicional.

[00136] Composto C-8.C4: 4-(6-cloro-2-oxo-2,3- diidro-1H-indol-3-il)-N-(3-cloro-4- flúorfenil) -1 -(2,4- dimetoxipirimidina -5-il) -5-(propan-2-il) -1H-pirrol-3- carboxamida

H Cl N

O O N F NH

N Cl O N O

[00137] A um reator de micro-ondas de 250 mL, equipado com barra de agitação magnética foram adicionados os compostos C-4A (12,48 g, 50 mmol, 1 eq), C-7A (8,5 g, 55 mmol,1,1 eq) e C-6D (9,9 g, 50 mmol, 1 eq), e em seguida AcOH glacial e o reator MW foi bem fechado. A mistura foi aquecida até 90ºC (300 Watt) e agitada durante 5 h a esta temperatura. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 40% da área de pico do produto). A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e o AcOH foi evaporado até à secura. O resíduo foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado por cromatografia em coluna (10% de acetona/DCM). Após a remoção dos solventes, o produto C-

8.C4 foi obtido como um sólido/espuma marrom escuro (6,96 g, 20,7% de rendimento) com 87% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00138] Composto (5),C5: (3S) -6-cloro-2'-(5- cloro-2-flúorfenil)-6'-(propan-2-il)-5'- (trimetoxipirimidin-5-il) - 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]2,3'-diona

F

O Cl O

N N N

O Cl N

O N O H

[00139] O composto do título foi obtido após a separação quiral preparativa de SFC (método E) ou quiral RP-HPLC (método L) do composto racêmico C-10.C5; > 99% ee; 1 tr: 7,18 min. (método L'); H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11,20 (s, 1H), 7,44 (ddd, J = 8,9, 4,1, 2,7 Hz, 1H), 7,31 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,15 (dd, J = 8,1, 1,7 Hz, 1H), 7,08 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 6,3, 2,7 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 2,40-2,31 (m, 1H), 0,82 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 13 0,41 (d, J = 7,0 Hz, 3H); C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 175,64, 167,54, 167,40, 164,33, 163,18, 158,6, 156,93, 144,05, 135,29, 133,95, 130,69, 129,61, 128,30, 127,19, 126,20, 125,74, 125,65, 123,01, 119,35, 118,69, 118,55, 111,07, 99,55, 70,08, 55,50, 55,20, 49,02, 25,42, 21,46, 21,26.

[00140] Composto C-10.C5: 6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil) -6' -(propan-2-il) -5'-(trimetoxipirimidin-5- il) -1, 2,3', 5' -tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F

O Cl O

N N N

O Cl N

O N O H

[00141] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados composto C-9.C5 (6,7 g, 10,6 mmol) e TFA (15 mL) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada por 3 h em temperatura ambiente. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 85% da área de pico do produto. A mistura de reação foi vertida em gelo e extraída com DCM duas vezes (2 x 30 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL), secas sobre Na2SO4 e evaporadas até à secura. Foi adicionado AcOEt (50 mL) ao resíduo e foi observada a formação de um precipitado rosado. O sólido foi separado por filtração, lavado com várias porções de AcOEt frio e seco ao ar. O produto desejado C-10.C5 foi obtido como um sólido rosa pálido (5,17 g, 80% de rendimento, 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00142] Composto C-9.C5: N-(5-cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-3-hidróxi-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il) -5- (propan- 2-il) -1 -(trimetoxipirimidin-5-il) -1H-pirrol-3- carboxamida

H

N Cl O

HO O

O Cl N

NH N O N O F

[00143] A um balão de 500 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados composto C-8.C5 (5 g, 8,14 mmol, 1 eq) e THF (150 mL). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em banho de gelo a 0ºC e foi adicionado fosfito de trimetila (1,92 mL, 16,3 mmol, 2 eq). Após 10 minutos em 0ºC, foi adicionado t-peróxido de sódio (3,6 g, 32,6 mmol, 4 eq) em várias porções. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente (o balão foi equipado com tubo CaCl2) e monitorado por TLC (40% de AcOEt em n-hexano). Em seguida, a mistura foi vertida em gelo e a reação foi acidificada com solução aquosa de HCl 0,5 M para pH ~ 5. Após adição de DCM (100 mL), a mistura foi transferida para um funil de separação. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída mais uma vez com DCM (100 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e o solvente foi removido ao vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (30% - 50% AcOEt/n-hexano). O produto desejado C-9.C5 foi obtido como um sólido acastanhado (2,41 g, 47% de rendimento, 96% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00144] Composto C-8.C5: N-(5-cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H- indol-3-il) -5-(propan-2- il) -1-(trimetoxipirimidin-5-il) -1H-pirrol-3-carboxamida

H

N Cl O

O O Cl N

NH N O N O F

[00145] Em um balão de fundo redondo de 150 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados os compostos C-4A (6,3 g, 25,3 mmol, 1 eq), C-6B (4,7 g, 130 mmol, 1 eq) e C-7D (5 g, 117 mmol, 1 eq) e em seguida AcOH (40 mL), e o balão foi bem fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 80ºC e agitada a esta temperatura durante a noite. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 66% da área de pico do produto). A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e sólido vermelho do produto C-8.C5 foi separado por filtração, lavado com AcOH e seco ao ar (10 g, 64% de rendimento, 82% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00146] Composto (6), C6: (3S) -6-cloro-2'-(5- cloro-2-flúorfenil) -5' - [6-(dimetilamino) -4- metoxipiridin-3-il]-6'-(propan-2-il) -1,2,3', 5'-tetraidro- 2'H - espiro [indol-3,1'-pirrolo [3, 4-c]pirrol]-2,3'-diona

F

O Cl

O N

N Cl N

N O N H

[00147] O composto do título foi obtido após a separação quiral preparativa de NP-HPLC (método F) ou quiral RP-HPLC (método J) do composto racêmico C-10.C6; > 1 99% ee; tr: 14,66 min. (método J'); H NMR (500 MHz, DMSO-

d6) δ 11,20 (br s, 1H), 7,91 (d, J = 22,0 Hz, 1H) 7,43 (ddd, J = 8,9, 4,1, 2,7 Hz, 1H), 7,30 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,16 (dd, J = 8,0, 2,1 Hz, 1H), 7,10 – 7,03 (m, 2H), 6,89 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,25 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 20,8 Hz, 3H), 3,09 (s, 6H), 2,47 – 2,37 (m, 1H), 0,83 (dd, J = 12,2, 7,0 Hz, 3H), 0,41 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 175,77, 175,72, 164,50, 162,08, 161,95, 161,08, 158,79, 156,79, 147,23, 144,06, 135,26, 134,43, 134,39, 130,67, 130,60, 129,61, 128,30, 127,36, 127,20, 126,29, 126,23, 125,85, 125,75 123,20, 122,99, 122,94, 118,84, 118,71, 118,64, 118,53, 115,45, 111,06, 88,48, 70,09, 56,06, 56,03, 38,38, 25,38, 22,01, 21,63, 21,27, 21,04.

[00148] Composto C-10. C6: 6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil) -5' - [6-(dimetilamino) -4- metoxipiridin-3- il]-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol- 3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F

O Cl

O N

N Cl N

N O N H

[00149] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados o composto C-9.C6 (2,96 g, 4,8 mmol) e TFA (30 mL). A mistura de reação foi agitada por 1 h a 40ºC. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 97% do produto desejado C-10.C6 A mistura de reação foi evaporada até a secura. Ao resíduo foram adicionados 20 mL de metanol e NaHCO3 saturado (200 mL). A suspensão foi submetida ao refluxo durante 2 h e depois foi resfriada até à temperatura ambiente. O precipitado foi removido por filtração e macerado em metanol (20 mL). O sólido foi recolhido por filtração, lavado com pequena quantidade de metanol e seco ao vácuo, para fornecer o produto desejado C-10.C6 como o sólido esbranquiçado (2,3 g, 83% de rendimento, > 99% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00150] Composto C-9.C6: N-(5-cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-3-hidróxi-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il) -1 - [6-( dimetilamino) -4-metoxipiridin-3-il]-5-(propan-2-il) - 1H-pirrol-3-carboxamida Cl

NH

HO O Cl O

N NH N O N F

[00151] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados o composto C-8.C6 (4 g, 6,7 mmol, 1 eq) e THF (30 mL), e em seguida fosfito de trietila (1,72 mL, 10,1 mmol, 1,5 eq). Em seguida, a mistura foi resfriada a 3ºC e t-pentóxido de sódio (1,48 g, 13,4 mmol, 2 eq) foi adicionado em várias porções. Após aquecimento até a temperatura ambiente, a mistura de reação foi agitada por 22 h (o balão foi equipado com tubo de CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 94% do produto desejado C-9. C6. À mistura foi adicionada água (200 mL) e HC1 1 M para atingir pH ~ 8. A fase aquosa foi extraída com AcOEt (3 x 150 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas sobre MgSO4. Após concentração, o material bruto foi ainda purificado por cromatografia (10 - 30% i-PrOH/n-hexano) para proporcionar o composto C-9.C6 (3 g, rendimento de 72%, pureza de 94% de acordo com a análise UPLCMS).

[00152] Composto C-8.C6: N-(5-cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H- indol-3-il) -1 - [6- (dimetilamino) - 4-metoxipiridin-3-il]-5-(propan-2-il) -1H- pirrol-3-carboxamida

H Cl N

O

O Cl

N NH N O N F

[00153] Em um balão de pressão de fundo redondo (250 mL) equipado com barra de agitação magnética, os compostos C-4A (5,37 g, 21,5 mmol, 1 eq), C-7C (3,6 g, 21,5 mmol, 1 eq), C-6B (4,25 g, 21,5 mmol, 1 eq) e PTSA H2O (4,09 g, 21,5 mmol, 1 eq) foram suspensos em água (9 mL) e metanol (36 mL). O balão foi bem fechado e depois a mistura foi aquecida até 60ºC e agitada a esta temperatura durante 23 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 17% do produto esperado C-8. C6 Em seguida, porção adicional do composto C-6B (1,06 g, 5,4 mmol) foi adicionada e a mistura foi aquecida até 75ºC e agitada a esta temperatura por 42 h. A amostra foi coletada e a análise UPLCMS mostrou 58% do produto esperado C-8.C6. A mistura de reação foi evaporada até a secura. Ao resíduo foram adicionados DCM (200 mL), solução de NaHCO3 a 5% (150 mL) e a mistura foi agitada por 20 min. A fase aquosa foi extraída com DCM (4 x 200 mL). As fases orgânicas foram combinadas e secas sobre MgSO4. Após concentração, o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna (20 - 50% AcOEt/n-hexano) para proporcionar o composto C-8.C6 (4,1 g, rendimento de 32%, pureza de 90% de acordo com a análise UPLCMS).

[00154] Composto (7), C7: (3S) -6-cloro-2'-(3,4- diflúorfenil)-5' -(2,4-dimetoxipirimidin-5-il) -6'-(propan- 2-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H- espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F F O O N

N N Cl O

O N N H

[00155] O composto do título foi obtido após a separação quiral preparativa de SFC (método G) ou separação quiral RP-HPLC (método O) do composto racêmico C-10.C7; > 1 99% ee; tr: 5,61 min. (método O'). H NMR (500 MHz, CDCl3) ) δ 8,76 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,23 – 7,18 (m, 1H), 7,11 – 7,06 (m, 1H), 7,06 – 6,98 (m, 2H), 6,98 – 6,90 (m, 1H), 6,90 – 6,85 (m, 1H), 6,83 - 6,76 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 2,49 – 2,39 (m, 1H), 0,90 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,51 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 175,3, 166,5, 165,7, 164,9, 157,0, 150,9, 149,0, 148,9, 148,8, 142,2, 136,4, 134,3, 132,3, 126,5, 126,2, 124,9, 123,7, 122,9, 120,6, 118,1, 118,0, 117,8, 117,5, 117,4, 116,1, 111,7, 77,3, 77,0, 76,7, 70,2, 55,6, 54,7, 25,6, 21,3.

[00156] Composto C-10.C7: 6-cloro-2'-(3,4- diflúorfenil) -5' -(2,4-dimetoxipirimidin-5- il) -6'- (propan-2-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F F O O N

N N Cl O

O N N H

[00157] A um balão de 250 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados composto C-9.C7 (7,34 g, 15,57 mmol) e TFA (80 mL) à temperatura ambiente (TFA foi adicionado em torno de 5 mL/min.). Em seguida, a reação foi agitada por 3 h a 40ºC. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 84% da área de pico do produto. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e evaporada até à secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (20% - 50% AcOEt/n-hexano). Após a remoção dos solventes, o produto C-10.C7 foi obtido como um sólido/espuma marrom claro (4,45 g, ~ 63% de rendimento após a síntese de duas etapas) com 93% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00158] Composto C-9.C7: 4-(6-cloro-3-hidróxi-2- oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il)-(3,4-difluorfenil)-1-(2,4- dimetoxipirinidin-5-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida Cl

NH HO O O N NH N F O N O F

[00159] A um balão de 500 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados composto C-8.C7 (7,14 g, 12,57 mmol, 1 eq) e THF (140 mL). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em banho de gelo a 0ºC e fosfito de trimetila (2,25 mL, 18,86 mmol, 1,5 eq), seguido de t-pentóxido de sódio (2,77 g, 25,14 mmol, 2 eq) foram adicionados em uma porção. A mistura de reação foi agitada por 1 hora e meia a 0ºC (o balão foi equipado com tubo de CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 88% da área de pico do produto. Foi adicionada água fria (50 mL) e a reação foi acidificada com HCl a 5% até pH ~ 5. A mistura de reação foi agitada por cerca de 1/2 h à temperatura ambiente e o precipitado resultante foi filtrado e lavado com 100 mL de água fria. O sólido assim obtido foi redissolvido em AcOEt, lavado com água, seco sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado. O produto bruto C-9.C7 foi obtido como um sólido marrom (83% de pureza de acordo com a análise UPLCMS) e foi usado na próxima etapa sem qualquer purificação adicional.

[00160] Composto C-8.C7: 4-(6-cloro-2-oxo-2,3- diidro-1H-indol-3-il)-N-(3,4-diflúorfenil)-1-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida

H Cl N

O O N F NH N F O N O

[00161] A um tubo vedado de 250 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados os compostos C-4A (12,48 g, 50 mmol, 1 eq), C-7A (7,76 g, 50 mmol, 1 eq) e C-6E (9,06 g, 50 mmol, 1 eq) e em seguida AcOH (100 mL) e o tubo foi bem fechado com rolha plástica. A mistura foi aquecida até 80ºC (temperatura do banho de aquecimento) e agitada a esta temperatura durante a noite. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 40% da área de pico do produto). A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e o AcOH foi evaporado até à secura. O resíduo foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado por cromatografia (50% de AcOEt/n-hexano). Após a remoção do produto solvente C-8.C7 foi obtido como um sólido/espuma marrom escuro (7,63 g, rendimento de 24,9%, 84% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00162] Composto (8), C8: (3S) -6-cloro-2'-(3,4- diflúorfenil) -5' -(4,6-dimetoxipiridin-3-il) -6'-(propan- 2-il)-1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol]-3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F F O O N

N Cl O

O N N H

[00163] O composto título foi obtido após a separação quiral preparativa de SFC (método H) ou quiral RP-HPLC (método N) do composto racêmico C-10. C8; > 99% ee; tr: 6,2 min. (método N'); 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,15 (br s, 1H), 8,07 (d, J = 34,9 Hz, 1H), 7,46 – 7,37 (m, 1H), 7,37 – 7,27 (m, 2H), 7,15 (m, 1H), 7,08 (dd, J = 8,0, 1,9 Hz, 1H), 6,92 (m, J = 2,2 Hz, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,64 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,83 (d, J = 23,6 Hz, 3H), 2,37 (m, 1H), 0,85 (dd, J = 13,0, 7,0 Hz, 3H), 0,41 (dd, J = 9,4, 6,9 Hz, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 175,18,

175,05, 165,31, 164,56, 162,80, 162,74, 149,75, 149,64, 147,79, 147,68, 147,33, 147,24, 145,92, 145,79, 143,48, 143,43, 134,62, 134,59, 133,42, 127,08, 126,18, 126,10, 122,71, 122,67, 122,58, 120,23, 119,41, 117,79, 117,70, 117,55, 117,23, 117,09, 110,62, 93,37, 93,29, 69,61, 56,21, 53,64, 24,90, 21,39, 21,08, 20,64, 20,50.

[00164] Composto C-10.C8: 6-cloro-2'-(3,4- diflúorfenil) -5' -(4,6-dimetoxipiridin-3-il) - 6'-(propan- 2-il) -1, 2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]1-2,3'-diona

F F O O N

N Cl O

O N N H

[00165] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética foi adicionado composto C-9.C8 (2 g, 3,5 mmol) e o balão foi resfriado em um banho de gelo. Então, TFA (20 mL) foi adicionado lentamente (cerca de 2 mL/min.). O banho de resfriamento foi removido e a reação foi agitada 1 h à temperatura ambiente. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 75% de pico do produto. A reação foi agitada por mais 1 h e a mistura foi vertida em gelo (cerca de 50 g) e diluída com DCM (50 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM três vezes (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina e o solvente foi removido ao vácuo. O resíduo foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (50% de AcOEt em n- hexano). Após a remoção dos solventes, o produto C-10.C8 foi obtido como um sólido/espuma vermelho-marrom (815 mg, 41% de rendimento) com 98% de pureza, de acordo com a análise UPLCMS. A reação acima foi repetida mais três vezes e todas as amostras obtidas (5,76 g) do composto C-10.C8 foram combinadas e agitadas na mistura de 25 mL de AcOEt/n- hexano (1:5). A mistura foi aquecida ao refluxo e foi adicionado AcOEt até todo o sólido restante ser dissolvido. Em seguida, 75 mL de n-hexano foram adicionados gota a gota e a mistura foi agitada 16 h à temperatura ambiente. O sólido foi filtrado, lavado com AcOEt/n-hexano (1:10, 25 mL) e seco em alto vácuo. Como resultado, o produto final C-10.C8 foi obtido como um sólido vermelho claro (4,77 g, 98% de pureza, de acordo com a análise UPLCMS).

[00166] Composto C-9. C8: 4-(6-cloro-3-hidróxi-2- oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il)N-(3,4- diflúorfenil) -1-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida Cl

NH HO O O N NH N F O O F

[00167] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados composto C-8. C8 (2 g, 3,5 mmol, 1 eq) e THF (35 mL), seguido por fosfito de trimetila (0,83 mL, 7 mmol, 2 eq). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em um banho de gelo e foi adicionado t-pentóxido de sódio (1,54 g, 14 mmol, 4 eq) em uma porção. O banho de resfriamento foi removido e a reação foi agitada 1 h à temperatura ambiente (o balão foi equipado com tubo de CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 80% da área de pico do produto. Após mais uma hora de agitação, cerca de 90% do solvente foram removidos e a mistura obtida foi diluída com 50 g de gelo. A suspensão obtida foi acidificada com HC1 1 M a pH ~ 5 e adicionalmente diluída com 50 mL de DCM. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 30 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina, secas sobre Na2SO4 e o solvente foi removido ao vácuo. O produto bruto C-9.C8 foi obtido como um sólido/espuma vermelho- preto (pureza de 70% de acordo com a análise UPLCMS) e foi usado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional (o rendimento foi excedido em 100%).

[00168] Composto C-8.C8: 4-(6-cloro-2-oxo-2,3- diidro-1H-indol-3-il)-N-(3,4-diflúorfenil)-1-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida

H Cl N

O O N F NH N F O O

[00169] A um balão de 500 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados os compostos C-4A (8,1 g, 32,4 mmol, 1 eq), C-7B (5 g, 32,4 mmol, 1 eq) e C- 6E (5,9 g, 32,4 mmol, 1 eq) e em seguida AcOH (80 mL) e o balão foi bem fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 85ºC (temperatura do banho de aquecimento) e agitada a esta temperatura durante 16 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 55% da área de pico do produto). A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e o AcOH foi evaporado até à secura. O resíduo foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (30% a 60% de AcOEt em n- hexano). Após a remoção dos solventes, o produto C-8.C8 foi obtido como um sólido vermelho claro (8 g, 44% de rendimento) com 87% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00170] Composto (9), C9: (3S) -6-cloro-2'-(5- cloro-2-flúorfenil) -5' -(4,6- dimetoxipiridin-3-il) -6'- (propan-2 -il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3, 1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F

O Cl O

N

N Cl O

O N N H

[00171] O composto do título foi obtido após a separação quiral preparativa de SFC (método I) ou separação quiral RP-HPLC (método S) do composto racêmico C-10. C9; > 1 99% ee; tr: 8,85 min. (método S'). H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,23 (br s, 1H), 8,10 (d, J = 26,0 Hz, 1H), 7,44 (ddd, J = 8,9, 4,1, 2,7 Hz, 1H), 7,35 – 7,27 (m, 2H), 7,17 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1H), 7,10 – 7,02 (m, 2H), 6,90 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,83 (d, J = 20,7 Hz, 3H), 2,45 – 2,32 (m, 1H), 0,84 (dd, J = 9,4, 7,0 13 Hz, 3H), 0,42 (dd, J = 7,1, 4,0 Hz, 3H); C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 175,68, 165,85, 164,38, 163,36, 163,24, 158,77, 156,77, 146,44, 144,17, 135,31, 134,21, 130,70, 129,60, 128,33, 127,33, 126,18, 125,78, 125,66, 123,46, 122,92,

120,71, 119,27, 118,72, 118,54, 111,11, 93,90, 70,08, 56,78, 54,18, 25,42, 22,00, 21,64, 21,24, 21,04.

[00172] Composto C-10. C9: 6-cloro-2'-(5- cloro-2-flúorfenil) -5' -(4,6-dimetoxipiridin-3-il) -6'- (propan-2-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro [indol- 3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]- 2,3'-diona

F

O Cl O

N

N Cl O

O N N H

[00173] Em um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética, composto C-9. C9 (5,8 g, 9,68 mmol) foi dissolvido em 30 mL de DCM anidro e 10 mL de TFA foram adicionados em uma porção. A reação foi agitada 3 h à temperatura ambiente. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 54% da área de pico do produto. A mistura de reação foi evaporada até a secura. O resíduo foi agitado em 30 mL de AcOEt por 1 h e o sólido cinza pálido precipitou da mistura. O sólido foi separado por filtração e seco ao ar. Como resultado, produto C-10.C9 foi obtido (2,2 g, rendimento de 34,1% após 2 etapas, partindo de C-8. C9, 94% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00174] Composto C-9.C9: N-(5-cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-3-hidróxi-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il) -1 - (4,6-dimetoxipiridin-3-il)-5-(propan-2-il)-1H-pirrol-3- carboxamida

H Cl N

O Cl O HO

N NH N O O F

[00175] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados o composto C-8. C9 (6,08 g, 10,5 mmol, 1 eq) e THF (62 mL), seguido por fosfito de trimetila (2,47 ml, 21 mmol, 2 eq). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em um banho de gelo e t- pentóxido de sódio (3,47 g, 31,5 mmol, 3 eq) foi adicionado em uma porção. O banho de resfriamento foi removido e a reação foi agitada 1 h à temperatura ambiente (o balão foi equipado com tubo CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 94% da área de pico do produto. A mistura de reação foi resfriada a cerca de -10ºC, depois foi vertida em gelo e a reação foi acidificada com HCl 0,5 M para pH ~

5. A fase aquosa foi extraída com AcOEt (3 x 100 mL), seca sobre Na2SO4 e o solvente foi evaporado ao vácuo. O produto bruto C-9.C9 foi obtido como um sólido/espuma vermelho- preto (68% de pureza de acordo com a análise UPLCMS) e foi usado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional (o rendimento foi excedido em 100%).

[00176] Composto C-8. C9: N-(5-cloro-2- flúorfenil) -4-(6-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H- indol-3-il) -1 -(4,6-dimetoxipiridin- 3-il) -5-(propan-2-il) -1H-pirrol-3- carboxamida

H Cl N

O Cl O

N NH N O O F

[00177] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados os compostos C-4A (7,79 g, 30 mmol, 1 eq), C-7B (4,68 g, 30 mmol, 1 eq) e C- 6B (6 g, 30 mmol, 1 eq) e na sequência AcOH (60 mL) e o balão foi firmemente fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 85ºC (temperatura do banho de aquecimento) e agitada a esta temperatura durante 16 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 40% da área de pico do produto). A mistura de reação foi resfriada a cerca de 15ºC e o precipitado sólido vermelho abundante foi separado por filtração da mistura de reação por filtração. O filtrado foi evaporado até à secura. O resíduo foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (10% a 60% de AcOEt em n- hexano). Após isso a remoção do produto solvente C-8. C9 foi obtida como um sólido vermelho claro (5,58 g, 31,5% de rendimento) com 93% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00178] Composto (10), C10: (3S) -6-cloro-2'-(5- cloro-2,4-diflúorfenil) -5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il) - 6'-(propano -2-il) -1 2,3',5'-tetraidro-2'H- espiro [indol- 3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F F

O Cl O

N

N N Cl O

O N N H

[00179] O composto em epígrafe foi obtido após a separação por RP-HPLC quiral preparativa do composto racêmico C-10. C10 usando o método P; > 99% ee; tr: 9,96 1 min. (método P'); H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,22 (br s, 1H), 8,50 (br s, 1H), 7,64 (t, J = 9,4 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,20 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,10 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 2,47 – 2,41 (m, 1H), 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,44 (d, J = 13 6,9 Hz, 3H); C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 175,36, 170,76, 166,43, 164,71, 164,35, 159,05, 158,96, 158,36, 158,26, 157,95, 157,03, 156,93, 156,36, 156,26, 144,01, 135,46, 134,20, 131,13, 127,41, 125,84, 123,55, 123,09, 121,72, 121,63, 119,46, 118,77, 116,23, 115,59, 115,44, 111,19, 107,31, 107,10, 106,90, 70,05, 60,19, 55,66, 55,01, 25,34, 22,31 – 20,83.

[00180] Composto C-10. C10: 6-cloro-2'-(5-cloro- 2,4-diflúorfenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'- (propan-2-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H- espiro [indol-3,1'- pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F F

O Cl O

N

N N Cl O

O N N H

[00181] AcOH (25 mL) foi colocado em um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética. Então, C-

9. C10 foi adicionado (2,3 g, 4 mmol, 1 eq) em uma porção. MsOH foi adicionado (0,25 mL, 4,85 mmol, 1,2 eq), gota a gota, e a mistura foi agitada por 2 h a 45ºC. A maior parte do AcOH foi evaporada e o resíduo foi dissolvido em DCM (100 mL), em seguida foram adicionados 100 mL de água e a mistura foi tratada com NaOH 3 M para atingir pH ~ 8. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 100 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre MgSO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (CHCl3: MeOH; 100: 0 -> 98: 2) obtendo 1,7 g do produto C-10. C10 com 91% de pureza de acordo com a análise UPLCMS.

[00182] Composto C-9. C10: N-(5-cloro-2,4- diflúorfenil)-4-(6-cloro-3-hidróxi-2-oxo-2,3-diidro-1H- indol-3-il) -1 -( 2,4-dimetoxipirimidin-5-il) -5-(propan-2- il) -1H-pirrol-3-carboxamida

H N

O Cl

O HO Cl N N

NH O O N F F

[00183] A um balão de 100 mL equipado com barra de agitação magnética, foram adicionados composto C-8. C10 (8,9 g, 14,8 mmol, 1 eq) e THF (50 mL), seguido de fosfito de trietila (3,8 mL, 22,2 mmol, 1,5 eq). A solução foi resfriada a 0ºC e, em seguida, foi adicionado t-butóxido de sódio (2,85 g, 29,6 mmol, 2 eq) em várias porções. A mistura de reação foi agitada por 3 h em temperatura ambiente (o balão foi equipado com tubo CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 82% do produto desejado.

A mistura reacional foi vertida lentamente sobre uma mistura gelada (0 - 5ºC) de água (150 mL) e HCl a 36% (5 mL). Após adição de acetato de etila (100 mL), a mistura foi transferida para um funil de separação. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída mais uma vez com AcOEt (100 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4 e concentradas ao vácuo. O resíduo oleoso foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (DCM/MeOH 100: 0 -> 98: 2). Duas frações do produto C-9. C10 foram isoladas: 3 g com 85% de pureza e 3 g com 41% de pureza de acordo com a análise UPLCMS. Rendimento: 50% (incluindo as duas frações).

[00184] Composto C-8. C10: N-(5-cloro-2,4- diflúorfenil) -4-(6-cloro-2-oxo-2,3-diidro-1H-indol-3-il) - 1 -(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-5-(propan-2-il) -1H-pirrol- 3-carboxamida

H N

O Cl

O Cl N N

NH O O N F F

[00185] Em um balão de fundo redondo de 250 mL equipado com barra de agitação magnética, os compostos C-4A (11,6 g, 47 mmol, 1 eq), C-7A (8,7 g, 56 mmol, 1,2 eq) e C- 6F (10 g, 47 mmol, 1 eq) foram suspensos em 75 mL de AcOH e o balão foi bem fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 70ºC e agitada a esta temperatura durante 24 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 47% do produto esperado. A mistura de reação foi evaporada até a secura. O resíduo sólido foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (20% a 50% de AcOEt em n-hexano). Todas as facções que continham o produto foram evaporadas até à secura para fornecer 6,6 g do produto desejado C-8. C10, com 83% de pureza, de acordo com a análise UPLCMS. Rendimento: 32%.

[00186] Composto (11), C11: (3S) -6'-(butan-2-il) -6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5 -il) -1, 2,3', 5'-tetraidro-2'H-espiro [indol-3,1' -pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F O O

N Cl N N O

N

O Cl N

H

[00187] O composto título (mistura diastereomérica) foi obtido após separação quiral preparativa por HPLC-RP do composto racêmico C-10. C11 1 usando o método M; > 99% ee; tr: 9,96 min. (método M'); H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,24 (s, 1H), 8,50 (br s, 1H), 7,44 (ddd, J = 8,9, 4,2, 2,7 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,31 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 – 7,14 (m, 1H), 7,03 (dd, J = 6,4, 2,7 Hz, 1H), 6,84 (ddd, J = 10,5, 8,4, 2,4 Hz, 1H), 6,72 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,95 (br s, 3H), 3,09 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,48 – 2,39 (m, 1H), 1,18 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 0,44 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 175,83, 166,45, 164,83, 164,70, 164,26, 162,87, 158,76, 157,95, 156,76, 144,36, 144,26, 134,08, 130,72, 130,66, 129,55, 128,30, 128,28, 127,61, 127,53, 125,73, 125,61, 123,86, 122,88, 119,71, 118,70, 118,59, 118,52, 116,26, 109,68, 109,50,

99,43, 99,21, 70,02, 55,66, 55,01, 46,14, 25,33, 21,51, 11,45, 9,08.

[00188] Composto C-10. C11: 6'-(butan-2-il) -6- cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin- 5-il) -1,2,3',5'-tetraidro-2'H- espiro [indol-3,1'-pirrolo [3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

F O O

N Cl N N O

N

O Cl N

H

[00189] A um balão de 250 mL equipado com barra de agitação magnética o composto C-9. C11 (2,8 g, 4,56 mmol) foi adicionado juntamente com DCM (60 mL). Em seguida, foi adicionado TFA (30 mL) (cerca de 2 mL/min.). A reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 65% da área esperada de pico do produto. A mistura foi então vertida em gelo (cerca de 200 mL) e diluída com DCM (100 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM três vezes (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina, secas sobre MgSO4 e concentradas ao vácuo. O produto bruto C-10.Cl1 foi purificado utilizando cromatografia em coluna (10% a 40% de acetona em n-hexano). Como resultado, 1,5 g de sólido marrom C-10. C11 foram obtidos. Este sólido foi agitado em AcOEt (5 mL), separado por filtração, lavado com 20 mL de AcOEt e seco ao ar. Como resultado, o produto C-10.C11 foi obtido como um participante branco (1,4 g, 98% de pureza de acordo com a análise UPLCMS).

[00190] Composto C-9. C11: 5-(butan-2-il) -N-(5- cloro-2-flúorfenil)-4-(6-cloro-3- hidróxi-2-oxo-2,3-diidro- 1H-indol- 3-il) -1 -(2,4-dimetoxipirimidin-5-il) -1H- pirrol-3-carboxamida

H

N Cl O

O HO Cl N N

NH N O O F

[00191] A um balão de 250 mL equipado com barra de agitação magnética foram adicionados composto C-8. C11 (3 g, 5 mmol, 1 eq) e THF (80 mL), seguido por fosfito de trimetila (1,21 mL, 10 mmol, 2 eq). Em seguida, a mistura de reação foi resfriada em um banho de gelo e foi adicionado t-pentóxido de sódio (2,2 g, 20 mmol, 4 eq) em pequenas porções. O banho de resfriamento foi removido e a reação foi agitada por 5 h à temperatura ambiente (o balão foi equipado com tubo CaCl2). Após esse período, a análise UPLCMS mostrou 71% de dois picos (diastereoméricos) do produto C-9. C11. A mistura de reação foi diluída com 200 mL de água com gelo. A suspensão obtida foi acidificada com HCl3 M até pH ~ 5 e diluída com 100 mL de AcOEt. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com AcOEt três vezes (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina, secas sobre Na2SO4 e o solvente foi removido ao vácuo. O produto bruto C-9. C11 foi obtido como um óleo vermelho escuro (72% de pureza de acordo com a análise UPLCMS) e foi usado na próxima etapa sem qualquer purificação adicional.

[00192] Composto C-8. C11: 5-(butan-2-il)-N-(5- cloro-2-flúorfenil) -4-(6-cloro-2-oxo- 2,3-diidro-1H-indol- 3-il)-1-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-1H-pirrol-3- carboxamida

H

N Cl O

O Cl N N

NH N O O F

[00193] A um balão de 250 mL equipado com barra de agitação magnética, os compostos C-4B (4,44 g, 16,8 mmol, 1 eq), C-7A (2,87 g, 18,5 mmol, 1,1 eq) e C-6F (3,32 g, 16,8 mmol, 1 eq) foram adicionados e em seguida AcOH (30 mL) foi adicionado e o balão foi firmemente fechado com rolha de plástico. A mistura foi aquecida até 90ºC (temperatura do banho de aquecimento) e agitada a esta temperatura durante 16 h. Após esse período, a análise UPLCMS mostrou um consumo quase total de materiais de partida (o que equivale a 50% da área de pico do produto). A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e evaporada até à secura. O resíduo foi pré-absorvido em gel de sílica e purificado usando cromatografia flash (30% a 60% de AcOEt em n-hexano). Após a remoção dos solventes, o produto C-8. C11 foi obtido como um sólido/espuma vermelho escuro (3,5 g, 35% de rendimento) com 83% de pureza de acordo com a análise UPLCMS. Obtenção e análise de enantiômeros

[00194] Todos os enantiômeros foram separados em SFC ou FIPLC preparativo com colunas quirais.

Condições de purificação quiral – SFC

[00195] Método A: coluna: Lux Amilose-1 (21,2 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo 50 mL/min., eluição isocrática MeOH: CO2, 25:75, detecção: UV 210 nm.

[00196] Método B: coluna: Lux Celulose-1 (21,2 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo 50 mL/min., eluição isocrática MeOH: CO2, 25:75, detecção: UV 210 nm.

[00197] Método C: coluna: Lux Cellulose-4 (21,2 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo 50 mL/min., eluição isocrática MeOH: CO2, 45:55, detecção: UV 215 nm.

[00198] Método D: coluna: Chiralpak IC (20 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo 21 mL/min., eluição isocrática EtOH: CO2,45: 55, detecção: UV 210 nm.

[00199] Método E: coluna: Lux Celulose-4 (21,2 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo 50 mL/min., eluição isocrática MeOH: CO2, 40:60, detecção: UV 210 nm.

[00200] Método F: coluna: Chiralpak AS-H (20 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo de 50 mL/min., eluição isocrática MeOH: CO2, 25:75, detecção: UV 210 nm.

[00201] Método G: coluna: Chiralpak IC (20 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo 50 mL/min., eluição isocrática MeOH: CO2, 45:55, detecção: UV 210 nm.

[00202] Método H: coluna: Lux Cellulose -4 (30 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo de 50 mL/min., eluição isocrática MeOH: CO2, 40:60, detecção: UV 210 nm. Condições de purificação quiral - NP-HPLC

[00203] Método I: coluna: Chiralpak IC (20 mm x 250 mm, 5 µm) fluxo 21 mL/min., eluição isocrática detecção de MeOH: UV 220 nm.

Condições de purificação quiral - RP-HPLC

[00204] Método J: coluna: Lux Celulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: MeOH: H2O, 50:20:30, detecção: UV 254 nm.

[00205] Método K: coluna: Lux Celulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 80:20, detecção: UV 254 nm.

[00206] Método L: coluna: Lux Celulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 65:35, detecção: UV 254 nm.

[00207] Método M: coluna: Lux Celulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O + HCO2NH4 (fase móvel A1), 90:10, detecção: UV 254 nm.

[00208] Método N: coluna: Lux Celulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 70:30, detecção: UV 254 nm.

[00209] Método O: coluna: Lux Celulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição com gradiente, A = ACN, B = H2O, detecção: UV 254 nm.

Tempo[min,] % A % B Curva de Gradiente 0,0 60 40 - 1,0 60 40 linear (6) 5,0 90 10 linear (6) 10,0 60 40 imediata (11)

[00210] Método P: coluna: Lux Amilose-2 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 50:50, detecção: UV 254 nm.

[00211] Método R: coluna: Lux Amilose-2 (21 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição com gradiente; A = ACN, B = H2O, detecção: UV 254 nm.

Tempo [min.] % A % B Curva de Gradiente 0,0 60 40 - 1,0 60 40 linear (6) 7,0 90 10 linear (6) 12,0 60 40 immediate (11)

[00212] Método S: coluna: Lux Amilose-2 (21 mm x 250 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 60:40, detecção: UV 254 nm Método T: coluna: Lux Cellulose-4 (21 mm x 150 mm, 5 µm), fluxo: 30 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 60:40, detecção: UV 254 nm. Condições de Análise de Pureza Quiral – SFC

[00213] Método A': coluna: Lux Amilose-1 (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, MeOH: CO2, 25:75, detecção: UV 211 nm e 254 nm.

[00214] Método B': coluna: Lux Celulose-1 (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, MeOH: CO2, 25:75, detecção: UV 211 e 254 nm.

[00215] Método C': coluna: Lux Celulose-4 (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, MeOH: CO2,50:50, detecção: UV 210 - 400 nm.

[00216] Método D': coluna: Chiralpak IC (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, EtOH: CO2,45: 55, detecção: UV 210 - 400 nm.

[00217] Método E': coluna: Lux Celulose-4 (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, MeoH: CO2, 40:60, detecção: UV 210 - 400 nm.

[00218] Método F': coluna: AMS (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, MeOH: CO2, 30:70, detecção: UV 211 e 254 nm.

[00219] Método G': coluna: Chiralpak IC (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, MeOH: CO2, 40:60, detecção: UV 210 - 400 nm.

[00220] Método H': coluna: Lux Celulose-4 (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: 40ºC, fluxo: 4 mL/min., eluição isocrática, MeOH: CO2, 40:60, detecção: UV 211 e 254 nm. Análise de pureza quiral - NP-HPLC Método i': coluna: Lux Cellulose-5 (4,6 mm x 150 mm, 5 µM), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1 mL/min., eluição isocrática, EtOH, detecção: UV 254 nm.

Condições de análise de pureza quiral - RP-HPLC

[00221] Método J': coluna: Lux Celulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 17:00), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: MeOH: H2O, 50:20:30, detecção: UV 254 nm.

[00222] Método K': coluna: Lux Celulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 80:20, detecção: UV 254 nm.

[00223] Método L': coluna: Lux Celulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 65:35, detecção: UV 254 nm.

[00224] Método M': coluna: Lux Celulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O + HCO2NH4 (fase móvel A1), 90:10, detecção: UV 254 nm.

[00225] Método N': coluna: Lux Celulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 70:30, detecção: UV 254 nm.

[00226] Método O': coluna: Lux Celulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 17:00), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição com gradiente, A = ACN, B = H2O, detecção: UV 254 nm.

Tempo [min.] % A % B Curva de Gradiente 0,0 60 40 - 1,0 60 40 linear (6)

5,0 90 10 linear (6) 10,0 60 40 imediata (11)

[00227] Método P': coluna: Lux Amilose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 50:50, detecção: UV 254 nm.

[00228] Método R': coluna: Lux Amilose-2 (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição com gradiente; A = ACN, B = H2O, detecção: UV 254 nm.

Tempo [min.] % A % B Curva de Gradiente 0,0 60 40 - 1,0 60 40 linear (6) 7,0 90 10 linear (6) 12,0 60 40 imediata (11)

[00229] Método S': coluna: Lux Amilose-2 (4,6 mm x 250 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 60:40, detecção: UV 254 nm.

[00230] Método T': coluna: Lux Cellulose-4 (4,6 mm x 150 mm, 5 µm), temperatura da coluna: ambiente, fluxo: 1,23 mL/min., eluição isocrática, ACN: H2O, 60:40, detecção: UV 254 nm.

[00231] Os exemplos a seguir foram sintetizados de acordo com os procedimentos descritos neste documento ou métodos conhecidos da literatura, usando os materiais de partida e métodos apropriados conhecidos do versado na técnica.

Tabela 1 Método Nú- de mero análi- Dados do Estrutura Denominação se da analíticos Com- pureza posto quiral análise em gradiente ácido: 98,08%, 564 + [M+H] , tempo de retenção: 3,52 min.; (3S)-6-cloro-2'-(3- Cl clorofenil)-5'-(2,4- análise em O dimetoxipirimidin-5-il)- gradiente 1 O 6'-(propan-2-il)- básico: N R’ N N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H- 98,13%, 564 O espiro[indol-3,1'- [M+H]+, tempo Cl O N

N pirrolo[3,4-c]pirrol]- de retenção:

H 2,3'-diona 3,52 min.; análise quiral: 99,71%, tempo de retenção: 7,77 min.

(3S)-6-cloro-2'-(5-cloro- análise em

F O 2-flúorfenil)-5'-(2,4- gradiente 2 O Cl N dimetoxipirimidin-5-il)- ácido: N N N’ 6'-(propan-2-il)- 99,43%, 582 Cl O

N O N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H- [M+H]+, tempo H espiro[indol-3,1'- de retenção: pirrolo[3,4-c]pirrol]-

Método Nú- de mero análi- Dados do Estrutura Denominação se da analíticos Com- pureza posto quiral 2,3'-diona 3,48 min.; análise em gradiente básico: 99,02%, 582 + [M+H] , tempo de retenção: 3,48 min.; análise quiral: 99,44%, tempo de retenção: 9,31 min.

análise em gradiente ácido: 97,4%, 608 + [M+H] , tempo de retenção: (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro- 3,71 min.; 2-metilfenil)-6'-(propan- análise em O 2-il)-5'-(2,4,6- 3 Cl O gradiente trimetoxipirimidin-5-il)- N N T’ básico: N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H- O 97,4%, 608 Cl N espiro[indol-3,1'- N O + O [M+H] , tempo H pirrolo[3,4-c]pirrol]- de retenção: 2,3'-diona 3,71 min.; análise quiral: 99,7%, tempo de retenção: 16,70 min.

Método Nú- de mero análi- Dados do Estrutura Denominação se da analíticos Com- pureza posto quiral análise em gradiente ácido: 98,96%, 582 [M+H]+, tempo de retenção: 3,58 min.; (3S)-6-cloro-2'-(3-cloro- Cl F 4-flúorfenil)-5'-(2,4- análise em O dimetoxipirimidin-5-il)- gradiente 4 O 6'-(propan-2-il)- básico: N K’ N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H- 99,08%, 582

N + Cl O espiro[indol-3,1'- [M+H] , tempo

O N N pirrolo[3,4-c]pirrol]- de retenção:

H 2,3'-diona 3,57 min.; análise quiral: 99,97%, tempo de retenção: 3,79 min.

análise em gradiente ácido: (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro- 99,89%, 612 F 2-flúorfenil)-6'-(propan- [M+H]+, tempo O 2-il)-5'-(2,4,6- 5 Cl O de retenção: N trimetoxipirimidin-5-il)- N L’ 3,65 min.; N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-

O Cl N espiro[indol-3,1'- O análise em

N O H pirrolo[3,4-c]pirrol]- gradiente 2,3'-diona básico: 99,95%, 612 + [M+H] , tempo de retenção:

Método Nú- de mero análi- Dados do Estrutura Denominação se da analíticos Com- pureza posto quiral 3,65 min.; análise quiral: 99,74%, tempo de retenção: 7,18 min.

análise em gradiente ácido: 99,88%, 594 [M+H]+, tempo de retenção: (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro- 3,94 min.; 2-flúorfenil)-5'-[6-

F (dimetilamino)-4- análise em

O 6 Cl metoxipiridin-3-il]-6'- gradiente

O N J’ (propan-2-il)-1,2,3',5'- básico:

N Cl tetraidro-2'H- 99,89%, 594

O N N N espiro[indol-3,1'- + [M+H] , tempo

H pirrolo[3,4-c]pirrol]- de retenção: 2,3'-diona 3,58 min.; análise quiral: 100%, tempo de retenção: 14,66 min.

Método Nú- de mero análi- Dados do Estrutura Denominação se da analíticos Com- pureza posto quiral análise em gradiente ácido: 98,89%, 566 [M+H]+, tempo de retenção: (3S)-6-cloro-2'-(3,4- 3,48 min.;

F F diflúorfenil)-5'-(2,4- análise em O dimetoxipirimidin-5-il)- 7 gradiente O 6'-(propan-2-il)- N O’ básico: N N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H- 98,79%, 566 Cl O espiro[indol-3,1'- + O N [M+H] , tempo

N pirrolo[3,4-c]pirrol]- H de retenção: 2,3'-diona 3,47 min.; análise quiral: 100%, tempo de retenção: 5,61 min.

análise em gradiente ácido: 99,75%, 565 (3S)-6-cloro-2'-(3,4- F [M+H]+, tempo F diflúorfenil)-5'-(4,6- de retenção: O dimetoxipiridin-3-il)-6'- 8 3,57 min. O (propan-2-il)-1,2,3',5'- N N’ N tetraidro-2'H- análise em Cl O espiro[indol-3,1'- O N gradiente

N pirrolo[3,4-c]pirrol]- H básico: 2,3'-diona 99,77%, 565 [M+H]+, tempo de retenção: 3,57 min.

Método Nú- de mero análi- Dados do Estrutura Denominação se da analíticos Com- pureza posto quiral análise quiral: 100%, tempo de retenção: 6,20 min.

análise em gradiente ácido: 99,68%, 581 [M+H]+, tempo de retenção: (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro- 3,60 min.

F 2-flúorfenil)-5'-(4,6- análise em O dimetoxipiridin-3-il)-6'- 9 Cl O gradiente N (propan-2-il)-1,2,3',5'- S’ básico: N tetraidro-2'H- O 99,63%, 581 Cl O N espiro[indol-3,1'- N [M+H]+, tempo H pirrolo[3,4-c]pirrol]- de retenção: 2,3'-diona 3,59 min.

análise quiral: 100%, tempo de retenção: 8,85 min.

análise em (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro- gradiente F F 2,4-diflúorfenil)-5'- ácido: O (2,4-dimetoxipirimidin-5- 10 Cl 97,97%, 600 O il)-6'-(propan-2-il)- N + P’ [M+H] , tempo N N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H- de retenção: Cl O espiro[indol-3,1'-

O N N 3,59 min. H pirrolo[3,4-c]pirrol]- 2,3'-diona análise em gradiente

Método Nú- de mero análi- Dados do Estrutura Denominação se da analíticos Com- pureza posto quiral básico: 97,47%, 600 [M+H]+, tempo de retenção: 3,59 min.

análise quiral: 100%, tempo de retenção: 9,96 min.

análise em gradiente ácido: 97,73%, 596 [M+H]+, tempo de retenção: (3S)-6'-(butan-2-il)-6- 3,62 min.

F cloro-2'-(5-cloro-2-

O O análise em flúorfenil)-5'-(2,4- 11 N gradiente N N O dimetoxipirimidin-5-il)- Cl M’ básico: N 1,2,3',5'-tetraidro-2'H- O 99,54%, 596 N espiro[indol-3,1'- Cl + [M+H] , tempo H pirrolo[3,4-c]pirrol]- de retenção: 2,3'-diona 3,62 min.

análise quiral: 100%, tempo de retenção: 9,96 min.

Exemplos Biológicos: Exemplo Biológico 1. Ensaio de polarização fluorescente

[00232] A inibição da interação p53-Mdm2 foi medida usando um ensaio de ligação de polarização de fluorescência (FP). FP mede o movimento rotacional das moléculas em uma suspensão homogênea. Para este ensaio, o domínio N-terminal da proteína Mdm2 (aminoácidos 1-111) é combinado com um peptídeo marcado com fluoresceína (FAM) derivado do domínio de transativação p53 (Sequência: 5-FAM- TSFAEYWNLLSP). Por excitação do ligando fluorescente com luz polarizada linearmente, o peptídeo emite luz polarizada perpendicularmente. Se o peptídeo estiver ligado a Mdm2, a rotação diminuirá e o componente perpendicular diminuirá proporcionalmente. Em oposição, a ruptura do complexo peptídeo-Mdm2 devido à ligação de um inibidor ao local de ligação de p53 de Mdm2, resulta na liberação do peptídeo e na diminuição da polarização da luz emitida.

[00233] As experiências de polarização de fluorescência foram lidas no leitor Biotek Cytation 5 com os filtros de excitação de 470 nm e emissão de 520 nm para fluoresceína. A polarização da fluorescência foi medida em placas pretas de 96 poços (Corning, CLS3991) em temperatura ambiente. A pureza de Mdm2 foi controlada em > 95%. O tampão de reação foi otimizado adicionando DTT 5 mM e detergente zwitteriônico a 0,1% CHAPS para reduzir o efeito de interações não específicas.

[00234] O teste foi realizado combinando diluição sucessiva de compostos diluídos em dimetilsulfóxido (DMSO, concentração final de 5%) com 75 nM Mdm2 em tampão de reação (PBS, 0,1% CHAPS, 5 mM DTT (ditiotreitol)). Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, foi adicionado peptídeo marcado com FAM 10 nM. A leitura final foi realizada após 90 minutos de incubação. As curvas de ligação dependentes da dose e os valores de IC50 foram calculados usando o GraphPad Prism5 e depois transformados em valores de Ki usando a equação de Kenakin (Tabela 2). Tabela 2 Composto Ki (nM) p53-Mdm2 1 1,8 2 1,7 3 2,4 4 1,7 5 2,2 6 1,7 7 1,9 8 1,9 9 2,0 10 2,0 11 2,5

[00235] A inspeção dos valores medidos de Ki mostra que todos os compostos divulgados são inibidores potentes (Ki na faixa de 1,7-2,5 nM) das interações Mdm2- p53. Exemplo Biológico 2. Ensaio de viabilidade celular

[00236] O efeito dos inibidores inventados de p53-Mdm2 na viabilidade celular foi avaliado utilizando o ensaio MTT. É um ensaio colorimétrico que mede a conversão do anel tetrazólio do corante amarelo solúvel (MTT) em formazan roxo insolúvel. Este processo é catalisado apenas nas desidrogenases mitocondriais das células vivas. Células mortas não causam essa alteração. Para medir a citotoxicidade específica dos inibidores de Mdm2-p53, o ensaio MTT foi realizado com a linha celular de osteossarcoma SJSA-1 que exibe amplificação do gene MDM2 e o tipo selvagem p53.

[00237] As células foram semeadas em placas de 96 poços e depois tratadas com diluições sucessivas dos compostos testados. Após 72 h de incubação, MTT foi adicionado à concentração final de 0,5 mg/mL. As células foram incubadas por mais 4 horas. Em seguida, a solução foi drenada e os cristais de formazan restantes foram dissolvidos em 100 µL de DMSO. A leitura da absorvância foi realizada a 570 nm, revelando a viabilidade celular relativa entre as células tratadas com os compostos avaliados e o controle DMSO. Todas as experiências com MTT foram repetidas independentemente 2-5 vezes. As curvas de ligação dependentes da dose e os valores de IC50 foram calculados usando o GraphPad Prism 5. Os valores de IC50 apresentados representam o valor médio de todas as experiências realizadas (Tabela 3).

Tabela 3 Composto IC50 (µM) SJSA-1 1 0,18 2 0,16 3 0,07 4 0,32 5 0,18 6 0,03 7 0,22 8 0,15 9 0,12 10 0,40 11 0,05 Exemplo Biológico 3. Medição da depuração intrínseca in vitro usando microssomas

[00238] A estabilidade metabólica dos compostos da invenção foi avaliada por medição da depuração intrínseca in vitro em microssomas murinos e humanos. 10 mL de soluções de

[00239] Quantidades de 10 mM de soluções padrão de marcadores e compostos de teste foram preparadas em

DMSO. Estas foram diluídas 100 vezes em MeCN: DMSO 91:9 para obter um padrão de ensaio de 100 mM. O NADPH 10 mM foi preparado em tampão fosfato 0,1 M (pH 7,4). Os microssomas foram descongelados em banho-maria a 37ºC e diluídos para fornecer uma concentração final de ensaio de 0,5 mg/mL.

[00240] Foram adicionados 100 mM de padrão de ensaio para fornecer uma concentração final de 1 mM a tubos de incubação contendo tampão e NADPH (a concentração final do ensaio é de 1 mM). Os tubos de incubação e os microssomas foram pré-aquecidos a 37ºC por 3 minutos. Os microssomas foram então adicionados aos tubos de incubação que foram mantidos a 37ºC e agitados usando o agitador orbital durante a duração do ensaio. As amostras foram colhidas em 6 pontos de tempo pré-determinados até 1 hora e transferidas para os tubos de resfriamento preparados contendo um solvente apropriado com padrão interno.

[00241] As amostras extintas são bem misturadas e a proteína precipitada a -20ºC por um período mínimo de 12 horas. As amostras foram então centrifugadas a 4ºC. Os sobrenadantes foram transferidos para uma placa nova de 96 poços, compatível com o autoamostrador. A placa foi selada com um tapete de silicone pré-cortado e analisada por LC- MS/MS.

Composto MS Depuração MS Depuração intrínseca intrínseca de de murino humano [µL/min./mg] [µL/min./mg] WO2015/189799 - 107 9,5 49,7

Composto MS Depuração MS Depuração intrínseca intrínseca de de murino humano [µL/min./mg] [µL/min./mg] 1 8,8 <3,0 2 <4,0 <3,0 3 <3,0 <3,0 4 <3,0 <3,0 5 <3,0 <3,0 6 33,6 19,8 7 6,6 <3 8 12,8 <3 9 N.D. N.D.

10 <3 <3,2 11 N,D, N,D,

[00242] Em comparação com os compostos descritos no documento WO2015/189799, todos os compostos atualmente divulgados exibem baixa depuração intrínseca nos microssomas humanos e murinos. A única exceção é o composto

6. Contudo, ligeiramente menos estabilidade deste composto é compensada pela excelente eficácia in vitro (SJSA-1 IC50 = 0,03 mM).

Exemplo Biológico 4. Eficácia in vivo no modelo de xenoenxerto SJSA-1 em camundongos

[00243] A experiência foi conduzida em camundongos fêmeas da cepa Crl: CD-1-Foxn1 nu. Os camundongos foram inoculados subcutaneamente no flanco direito com a linhagem de células cancerígenas SJSA-1 na quantidade de 3x106 células suspensas em 100 µL de HBSS: Matriz matrigel em uma proporção de 3:1 por camundongo. No 17º dia após a inoculação, os camundongos foram divididos em grupos, de modo que em cada grupo o volume médio do tumor foi semelhante e teve uma média de cerca de 200 mm³. Grupos de experimentos foram selecionados, cada um constituído por 8 camundongos: NaCl de controle 0,9% e compostos. Os compostos 1-11 foram dissolvidos em 56,60% de PEG 400, 9,43% de Cremophor RH40, 9,43% de ETOH, 18,87% de Labrafil M1944CS, 5,67% de DMSO. O Composto 107 do documento WO2015/189799, empregou um grupo de 7 camundongos e o composto foi dissolvido em 15% de PEG400, 10% de Cremophor EL, 75% de H2O.

[00244] Os camundongos empregados na experiência foram administrados per os (p.o.) com compostos ou NaCl a 0,9% em um esquema q1dx14 (14 doses, diariamente). Durante o curso da experiência, os camundongos foram pesados antes de cada administração - duas vezes/três vezes por semana. O bem-estar animal foi monitorado diariamente. Não foi observada diferença significativa no peso corporal ou no bem-estar entre os grupos de experimentos durante e no final do estudo.

[00245] A mudança no volume do tumor foi monitorada duas/três vezes por semana a partir do primeiro dia de administração. O volume do tumor foi calculado com base em seu comprimento e largura medidos com pinças eletrônicas: V [mm³] = d² x D/2 onde d - largura, D - comprimento.

[00246] O volume do tumor nos grupos foi medido até 101 dias após a inoculação (72 dias após a última administração). Os resultados da experiência foram expressos como valores médios de inibição do crescimento tumoral (TGI) ± SEM (Tabela 4). A inibição do crescimento tumoral foi calculada usando a seguinte fórmula: TGI [%] = [100 -(T/C x 100)] onde C - tamanho médio do tumor no grupo controle, T - tamanho médio do tumor no grupo tratado. Todos os cálculos e gráficos foram realizados no software GraphPad Prism 5.

Tabela 4 TGI P.O. TGI P.O. 12,5 Composto 12,5mg/kg (7 ± SEM mg/kg (12 ± SEM doses) [%] doses) [%] Referência: Composto 107 do 49,8 17,3 60,1 13,4 WO2015/189799 1 94,97 1,09 99,53 0,30 2 94,36 1,23 98,91 0,44

3 94,22 1,25 99,57 0,29 4 94,89 1,57 99,47 0,34 5 85,78 5,59 95,99 2,29 6 92,03 1,88 99,09 0,46 7 95,00 1,29 99,97 0,01 8 96,39 1,57 99,71 0,27 9 89,46 2,72 97,73 0,92 10 93,48 1,44 98,79 0,50 11 93,74 1,35 99,69 0,28

[00247] Os resultados desta experiência estão resumidos na Tabela 4 e nas Figuras 1 e 2. Como pode ser visto, a estabilidade metabólica melhorada dos compostos atualmente divulgados se traduz em eficácia in vivo excepcional. Os valores de inibição do crescimento tumoral observados para os compostos 1-11 são significativamente mais altos do que para o melhor composto divulgado no documento WO2015/189799, tanto após as 7 doses (diferença 36,0-46,6%) quanto nas 12 doses (diferença 35,9-39,9%) de uma substância. Além disso, como pode ser observado na Figura 1, tratamento do xenoenxerto SJSA-1 com 14 doses de 12,5 mg/kg p.o. do documento WO2015/189799 apenas retarda o crescimento do tumor. O mesmo protocolo de tratamento, mas com os compostos 7, 8 e 11, resultou na erradicação completa dos tumores.

Além disso, nenhuma das lesões apresentou rebrota subsequente ao dia 101.

Claims (18)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto com a seguinte estrutura: 1 O 7

R R 2

R N Z N 6 3 4

R

R OR Y N 5

R

H R1 é meta-halo-fenil que é opcionalmente substituído por um a dois substituintes selecionados independentemente do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -alquila C1-C6, -O-(alquila C1-C6), -S- (alquila C1-C6), -C(O)O-(alquila C1-C6), -NH (alquila C1-C6) e -N (alquila C1-C6)2, R2 e R3 são independentemente H ou halogênio; R4 é -alquila C1-C6; R7 é -OCH3; Z é C-R8 ou N, Y é C-R9 ou N, com a condição de que Z não seja C-R8 e Y não seja C-R9 no mesmo composto, R5, R6, R8, R9 são independentemente H, halogênio, -OCH3, -NH(CH3) ou -N (CH3)2.

2. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que: que R1 é meta-halo-fenil que é opcionalmente substituído por um a dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, alquila C1-C6, -O- (alquila C1-C6), -NH(alquila C1-C6) e -N (alquila C1-C6)2.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 3, em que:

R1 é meta-halo-fenil que é opcionalmente substituído por um a dois substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halogênio, - CH3, -OCH3, -NH (CH3) e - N(CH3)2.

4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que: R2 é H, e R3 é Cl.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que: R4 é isopropila ou isobutila.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que: Z e Y são ambos N.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que: Z é C-R8 e Y é N.

8. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que: R5 e R6 são ambos OMe.

9. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que: R8 é H e pelo menos um de R5 e R6 é OMe, e o segundo é selecionado dentre H, - N (Me)2 e OMe.

10. Composto de acordo com a reivindicação selecionado dentre: (1) (3S)-6-cloro-2'-(3-clorofenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-

1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(2) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(3) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-metilfenil)-6'- (propan-2-il)-5'-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(4) (3S)-6-cloro-2'-(3-cloro-4-flúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-6'- (propan-2-il)-5'-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(6) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-[6- (dimetilamino)-4-metoxipiridin-3-il]-6'-(propan- 2-il)-1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-

pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(7) (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(8) (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil)-5'-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'- tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4- c]pirrol]-2,3'-diona

(9) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'- tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4- c]pirrol]-2,3'-diona

(10) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2,4-diflúorfenil)-5'- (2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(11) (3S)-6'-(butan-2-il)-6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-

pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

11. Composto de acordo com a reivindicação 6, selecionado dentre: (1) (3S)-6-cloro-2'-(3-clorofenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona (2) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona (3) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-metilfenil)-6'- (propan-2-il)-5'-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona (4) (3S)-6-cloro-2'-(3-cloro-4-flúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona (5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-6'- (propan-2-il)-5'-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)-

1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona (7) (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona (10) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2,4-diflúorfenil)-5'- (2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona (11) (3S)-6'-(butan-2-il)-6-cloro-2'-(5-cloro-2- flúorfenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)- 1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

12. Composto de acordo com a reivindicação 7, selecionado dentre: (6) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-[6- (dimetilamino)-4-metoxipiridin-3-il]-6'-(propan- 2-il)-1,2,3',5'-tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'- pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(8) (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil)-5'-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'- tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4- c]pirrol]-2,3'-diona (9) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-flúorfenil)-5'-(4,6- dimetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'- tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4- c]pirrol]-2,3'-diona.

13. Composto de acordo com a fórmula:

F

F

O

O

N

N Cl O

O N

N

H isto é (3S)-6-cloro-2'-(3,4-diflúorfenil)-5'- (4,6-dimetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'- tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'- diona.

14. Composto de acordo com a fórmula: Cl

O

O

N N

N

O Cl O N

N

H isto é (3S)-6-cloro-2'-(3-clorofenil)-5'-(2,4- dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'- tetraidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-

diona

15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, para uso como medicamento.

16. Composto para uso da reivindicação 15 em um método de prevenção e/ou tratamento de doenças selecionadas do grupo que consiste em câncer, doenças imunológicas, condições inflamatórias, doenças alérgicas da pele associadas à proliferação excessiva, cegueira e infecções virais.

17. Composto para uso de acordo com a reivindicação 16, em que a doença é um câncer.

18. Composição farmacêutica compreendendo como ingrediente ativo um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, em combinação com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.