ES2911229T3 - Compuestos de 1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona como agentes terapéuticos activadores de tp53 - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la siguiente estructura **(Ver fórmula)** en donde R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -alquilo C1-C6, -0-(alquilo C1-C6), -S-(alquilo C1-C6), -C(0)0-(alquilo C1-C6), -NH(alquilo C1-C6) y -N(alquilo Ci- C6)2, R2 y R3 son independientemente H o halógeno; R4es -alquilo C1-C6; 20 R7 es -OCH3; Z es C-R8 o N, Y es C-R9 o N, con la condición de que Z no sea C-R8 y Y no sea C-R9 en el mismo compuesto, R5, R6, R8, R9 son independientemente H, halógeno, -OCH3, -NH(CH3) o -N(CH3)2.

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos de 1,2,3,,5,-tetrahidro-2,H-esp¡ro[¡ndol-3,1'-p¡rrolo[3,4-c]pirrol]-2,3,-diona como agentes terapéuticos activadores de tp53

Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevos compuestos de 1,2,3',5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3-diona y estos compuestos para su uso como medicamento, especialmente para el tratamiento de enfermedades en las que se alteran las interacciones proteína-proteína p53-Mdm2 y/o que son sensibles a la inhibición de las interacciones p53-Mdm2, que incluyen enfermedades proliferativas tales como el cáncer. Además, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos antes mencionados.

Antecedentes de la invención

p53 es un factor de transcripción que responde al estrés celular mediante la regulación de la transcripción de numerosos genes que determinan el destino de las células. En condiciones de estrés, p53 puede desencadenar la detención del ciclo celular y procesos de reparación del ADN o programas de muerte celular como la apoptosis o la senescencia. La elección entre estas respuestas depende del tipo y la intensidad de las señales de estrés. En las células humanas, la actividad de p53 está estrictamente controlada por su regulador negativo, la proteína denominada Mdm2. Mdm2 forma un complejo estrecho con el dominio de transactivación de p53, lo que bloquea su capacidad para regular los genes diana y ejercer efectos antiproliferativos. Adicionalmente, Mdm2 promueve la exportación nuclear y la rápida degradación de p53 por el sistema ubiquitina-proteasoma.

Al ser un jugador clave en la respuesta celular al estrés, p53 sirve como la principal obstrucción para la tumorigénesis. Los pacientes con síndrome de Li-Fraumeni que heredan p53 mutado son muy susceptibles al cáncer. Los ratones con el gen p53 dañado parecen normales, pero tienden al desarrollo espontáneo de una variedad de neoplasias a los 6 meses de edad. Este destacado papel supresor de tumores de p53 hace que su función esté desactivada en prácticamente todos los cánceres humanos, ya sea por mutación del gen p53 o por expresión aberrante de proteínas que actúan como sus reguladores negativos, tal como Mdm2.

La amplificación del gen Mdm2 se informa en más del 10% de 8000 diversos cánceres humanos, Incluidos sarcomas, tumores de pulmón y estómago, en donde el gen p53 no está dañado. Muchos otros tumores adquieren un polimorfismo de un solo nucleótido en el promotor de Mdm2 que conduce a un aumento de 2-3 veces en la expresión de Mdm2 que se correlaciona con la formación acelerada de tumores. Estas alteraciones se perciben como los principales mecanismos para la inhibición de la función de p53 en cánceres que retienen p53 de tipo salvaje.

Los estudios genéticos funcionales en ratones han demostrado que el restablecimiento de p53 inactivado es suficiente para provocar una regresión rápida de varios tipos de tumores diferentes. Siguiendo esta línea, el uso de la interacción p53-Mdm2 como diana de moléculas pequeñas para liberar y reactivar p53 se ha convertido en una estrategia terapéutica prometedora para tratar los cánceres humanos con p53 de tipo salvaje. En los últimos años se han informado varios gmpos de inhibidores no peptídicos de molécula pequeña de la interacción p53-Mdm2, que incluyen nutlinas, derivados de piperazina-4-fenilo, chalconas, sulfonamidas, benzodiazepinodionas, espirooxindoles. Los inhibidores de MDM2 producen respuestas celulares tanto comunes como diferentes en células normales y tumorales que están de acuerdo con los resultados previos de estudios genéticos. En células normales, la activación de p53 por inhibidores de MDM2 induce la detención del ciclo celular pero no la muerte celular. En las células tumorales, la activación de p53 por los inhibidores induce no sólo la detención del ciclo celular sino también la muerte celular. Este perfil proporciona una perspectiva de alta selectividad y baja toxicidad de la terapia potencial. Sin embargo, ninguno de estos antagonistas de Mdm2 demostró su efectividad en ensayos clínicos en seres humanos. Por lo tanto, todavía existe la necesidad de nuevos compuestos con mayor potencia, farmacocinética favorable y perfil de toxicidad.

Nuestra solicitud anterior WO2015/189799 describe compuestos que comprenden el sistema 1,1 ',2,5'-tetrahidroespiro[indol-3,2'-pirrol]-2,5'-diona que muestran una actividad antitumoral potente y específica en estudios in vitro. Sin embargo, estudios posteriores revelaron que su eficacia in vivo es moderada y que los compuestos más efectivos exhiben un alto aclaramiento inaceptable en los microsomas humanos que impide su eficacia clínica.

Por lo tanto, todavía existe la necesidad de compuestos con excelente actividad in vitro que tengan una farmacocinética mejorada y, por lo tanto, exhiban una eficacia anticancerígena destacada tanto en modelos in vivo de ratones como en ensayos clínicos futuros.

La presente invención resuelve el problema al proporcionar nuevos compuestos que tienen sistema 1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona.

Resumen de la invención

En el primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto que tiene la siguiente estructura

en donde

R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -alquilo C1-C6, -0-(alquilo C^t C6), -S-(alquilo Ci-C6), -C(0)0-(alquilo Ci-C6), -NH(alquilo C^t C6) y -N(alquilo Ci-C6)2,

R2 y R3 son independientemente H o halógeno;

R4 es -alquilo C-i-Ca;

R7 es -OCH3;

R5, R6, Ra, R9 son independientemente H, halógeno, -OCH3, -NH(CH3) o -N(CH3)2.

Z es C-Ra o N, Y es C-R9 o N, con la condición de que Z no sea C-R8 y Y no sea C-R9 al mismo tiempo, Preferentemente, en la Fórmula (I), R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -alquilo C1-C6, -0-(alquilo C1-C6), -NH(alquilo C1-C6) y -N(alquilo Ci-C6)2. Con mayor preferencia, en la definición de sustituyente R1 en la Fórmula (I), alquilo C1-C6 es alquilo C1-C3.

Aún con mayor preferencia, en la Fórmula (I), R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CH3, -OCH3, -NH(CH3) y -N(CH3)2. Aún con mayor preferencia, R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CH3 y -OCH3. Con la máxima preferencia, R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno.

Preferentemente, en la Fórmula (I), R2 es H y R3 es Cl.

Preferentemente, en la Fórmula (I), R4 es isopropilo o isobutilo.

Preferentemente, en la Fórmula (I), Z y Y son ambos N. Con mayor preferencia, en dicha modalidad, R5 y R6 son ambos -OCH3

Preferentemente, en la Fórmula (I), Z es C-R8 y Y es N. Con mayor preferencia, en dicha modalidad, R8 es H, y al menos uno de R5 y R8 es -OCH3, y el segundo se selecciona de H, -N(CH3)2 y -OCH3.

Como compuesto específico de la invención, se puede mencionar uno del siguiente grupo:

(1) (3S)-6-cloro-2'-(3-clorofen¡l)-5'-(2,4-d¡metoxipirimid¡n-5-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 ,-pirroío[3,4-c]pin'ol]-2,3,-diona

(2) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5,-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(3) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-metilfenil)-6,-(propan-2-il)-5,-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(4) (3S)-6-cíoro-2,-(3-cloro-4-fluorofenil)-5,-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(5) (3S)-6-cíoro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-6,-(propan-2-il)-5,-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-d¡ona

(5) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5,-[6-(dimetilamino)-4-metoxipiridin-3-il]-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 ’-pirrolo[3,4-c] pirrol]-2,3'-diona

(6) (3S)-6-cloro-2,-(3,4-difluorofenil)-5,-(2,4-dimetoxipirimidin-5-¡l)-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(7) (3S)-6-cloro-2,-(3,4-difluorofenil)-5,-(4,6-dimetoxip¡ridin-3-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 ’-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(8) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5,-(4,6-dimetoxipiridin-3-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(9) (3S)-6-cloro-2,-(5-doro-2,4-difluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2lH-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirral]-2,3’-diona

(10) (3S)-6,-(butan-2-il)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5,-(2,4-dimetoxip¡rimidin-5-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

Como un compuesto más específico de la invención, se puede mencionar uno del siguiente grupo:

(1) (3S)-6-cloro-2'-(3-clorofenil)-5,-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'/-/-espiro[indol-3.1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(2) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3,,5'-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(3) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-met¡lfenil)-6,-(propan-2-¡l)-5,-(2,4,6-trimetox¡p¡rimidin-5-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(4) (3S)-6-cloro-2,-(3-cloro-4-fluorofenil)-5,-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-6'-(propan-2-il)-5'-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)-1,2,3,,5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(7) (3S)-6-cloro-2,-(3,4-difluorofen¡l)-5,-(2,4-d¡metoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(10) (3S)-6-cíoro-2'-(5-cloro-2,4-difluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(11) (3S)-6'-(butan-2-il)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

Alternativamente, como un compuesto más específico de la invención, se puede mencionar uno del siguiente grupo:

(6) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-[6-(dimetilamino)^1-metoxipiridin-3-il]-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

(8) (3S)-6-cloro-2'-(3,4-difluorofenil)-5’-(4,6-climetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'/-/-espiro[indol-3.1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(9) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5,-(4,6-dimetoxipiridin-3-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona

El compuesto particularmente preferible de la invención es un compuesto representado por la siguiente estructura

lo que significa

(SS^e-cloro^'-ÍS^-difluorofeniO-S'^.e-dimetoxipiridin-S-IO-e'-Ípropan^-iO-I^.S'.S'-tetrahidro^'H-espiropndol-S.I'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3’-diona.

El segundo compuesto particularmente preferible de la invención es un compuesto representado por la siguiente estructura

lo que significa (3S)-6-cloro-2'-(3-clorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona.

Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de Fórmula (I) para el uso como un medicamento.

Preferentemente, el medicamento es útil para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en cáncer, enfermedades inmunitarias, afecciones inflamatorias, enfermedades alérgicas de la piel asociadas con proliferación excesiva, enfermedad que causa ceguera e infecciones virales.

El siguiente aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo un compuesto de Fórmula (I) en combinación con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

El último aspecto de la invención se refiere a un método de tratamiento y/o prevención de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en cáncer, enfermedades inmunitarias, afecciones inflamatorias, enfermedades alérgicas de la piel asociadas con proliferación excesiva, enfermedad que causa ceguera e infecciones virales, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de Fórmula (I) o una composición farmacéutica como se definió anteriormente.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 muestra la eficacia in vivo del Compuesto 107 de la publicación internacional WO2015/189799 como Compuesto de Referencia en un modelo de osteosarcoma humano (SJSA-1) en ratón. Se inocularon células SJSA-1 por vía subcutánea (s.c.) en una cantidad de 3><106/ratón; el compuesto probado se administró por vía oral (p.o.) en un programa q1dx14; 7 ratones por grupo.

La Figura 2 muestra la eficacia in vivo de los Compuestos 7, 8 y 11 de la presente invención en un modelo de osteosarcoma humano (SJSA-1) en ratón. Se inocularon células SJSA-1 por vía subcutánea (s.c.) en una cantidad de 3x106/ratón; los compuestos probados se administraron por vía oral (p.o.) en un programa q1dx14; 8 ratones por grupo.

Descripción detallada de la invención

Cuando los compuestos de la invención pueden existir en una o más formas tautoméricas, todas esas formas, aunque no se indiquen explícitamente en la fórmula anterior, están dentro del alcance de la presente invención. Por consiguiente, los compuestos pueden estar presentes como una mezcla de tautómeros o como un tautómero individual.

Los términos utilizados en la presente invención tienen los siguientes significados. Otros términos no definidos a continuación tienen los significados que entienden los expertos en la técnica.

El término "alquilo Ci-C6" es un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de alquilo C1-C6 son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, tere-butilo, sec-butilo, n-pentilo y n-hexilo. Con mayor preferencia, alquilo C1-C6 es un alquilo C1-C4, alquilo C1-C3 o alquilo C1-C2. La notación alquilo C1-C4, alquilo C1-C3, alquilo C1-C2 significa un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 4, 3 o 2 átomos de carbono, respectivamente. Con mayor preferencia, el alquilo C1-C6 es alquilo C1 que es un grupo metilo (abreviado como Me).

El término "halógeno” se selecciona de F, Cl, Br y I. Preferentemente, el halógeno se selecciona de F y Cl.

El término "m-halo-fenilo”, tal como está presente en la definición del grupo R1, significa un grupo fenilo que está sustituido por un halógeno como se definió anteriormente en posición meta en relación con el punto de unión del grupo fenilo al átomo de nitrógeno del sistema de anillos pirrolo[3,4-c]pirrol.

halógeno

La expresión "Z es C-Ra o N, Y es C-R9 o N, con la condición de que Z no sea C-Ra y Y no sea C-R9 al mismo tiempo" significa que en el compuesto de la invención, Z es C-R8 y Y es N, o Z es N y Y es C-R9, o Z es N y Y es N.

Dado que los compuestos de la invención pueden ser ácidos o básicos, pueden formar sales de adición de ácido adecuadas con una base o un ácido, respectivamente.

La sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable se refiere a aquellas sales que retienen la efectividad biológica de las bases libres y que no son biológicamente indeseables. Las sales de adición de ácido se pueden formar con ácidos inorgánicos (minerales) o ácidos orgánicos. Como ejemplos de ácidos, se pueden mencionar clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, fosfórico, sulfúrico, nítrico, carbónico, succínico, maleico, fórmico, acético, propiónico, fumárico, cítrico, tartárico, láctico, benzoico, salicílico, glutámico, aspártico, p-toluenosulfónico, bencenosulfónico, metanosulfónico, etanosulfónico, naftalenosulfónico tal como ácido 2-naftalenosulfónico, pamoico, xinafoico, hexanoico.

Una sal de adición de ácido puede prepararse de manera sencilla al hacer reaccionar un compuesto de Fórmula (I) con un ácido inorgánico u orgánico adecuado en una cantidad sustancialmente equimolar al compuesto de Fórmula (I), opcionalmente en un solvente adecuado tal como un solvente orgánico para formar una sal que usualmente se aísla, por ejemplo, por cristalización y filtración. Por ejemplo, las bases libres de los compuestos se pueden convertir en las correspondientes sales de clorhidrato mediante el tratamiento de una solución del compuesto, por ejemplo, en metanol, con una cantidad estequiométrica de ácido clorhídrico o cloruro de hidrógeno en metanol, etanol o éter dietílico, seguido de evaporación de solventes.

De manera similar, las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables incluyen sales derivadas de bases inorgánicas tales como sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso, aluminio y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarías y terciarías, que incluyen aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas y resinas de intercambio iónico básicas, tales como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina y etanolamina y trietanolamina.

Los compuestos de Fórmula (I) se pueden obtener mediante el uso de los siguientes métodos.

Los compuestos basados en 1,,2,5'-tetrahidroespiro[indolo-3,2,-pirrolo]-2,5,-diona condensada con anillo pirrol (compuestos de Fórmula (I)) se pueden obtener de acuerdo con el siguiente Esquema de reacción 1.

Esquema de reacción 1.

Inicialmente, la metilcetona C-1 se trató con ¡satina C-2 en presencia de una base, típicamente dietilamina (DEA) o bis(trímetilsilil)amida de litio (LiHMDS).

El aldol C-3 resultante se deshidrató posteriormente en condiciones ácidas mediante el uso típicamente de ácido clorhídrico conc. (12 M), para proporcionar el compuesto C-4 insaturado.

Paralelamente, se preparó una amida C-6 mediante el acoplamiento de una amina C-5 con ácido prop-2-inoico, preferentemente mediante el uso de reactivos de acoplamiento, típicamente reactivos de carbodiimida como diciclohexilcarbodiimida (DCC) o clorhidrato de (3-d¡metilaminopropil)-N'etilcarbodiim¡da (EDC HCI).

La hidroaminación del alquino C-6 con la amina C-7 y la posterior reacción con la enona C-4 conduce a un pirrol C-8 sustituido. Esta reacción de un solo recipiente se puede realizar típicamente en ácido acético bajo irradiación de microondas.

El intermediario C-8 se puede oxidar a un derivado de 3-hidroxi-2-oxindol en presencia de un exceso de una base, típicamente ferc-butóxido de sodio, fosfito de tríalquilo apropiado, típicamente fosfito de trimetilo o trietilo, y oxígeno atmosférico.

Dichos compuestos C-9 preparados se ciclaron en medio ácido, típicamente ácido trifluoroacético, para dar los oxindoles espirocíclicos condensados racémicos deseados.

Por último, el enantiómero S deseable se separó mediante el uso de condiciones de HPLC quiral.

Más detalles sobre la preparación del núcleo de 1.l'^.S'-tetrahidroespiropndolo-S^'-piroloJ^.S'-diona se han descrito en nuestra solicitud de patente WO 2015/189799 A1 anterior.

Las cetonas C-1, las ¡satinas C-2 y las aminas respectivas están disponibles comercialmente o se pueden obtener mediante el uso de los siguientes métodos.

El Esquema 2 ilustra un método representativo para la preparación de 5-amino-2,4-dimetoxipirimidina (C-7A) mediante sustitución nucleofílica del cloro en las posiciones 2 y 4 en la 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (C-7A1) con el grupo metoxi, y posterior reducción del grupo nitro en la 2,4-dimetoxi-5-nitropirimidina (C-7A2).

Esquema de reacción 2.

El esquema 3 ilustra un método representativo para la preparación de 3-amino-4,6-dimetoxipiridina (C-7B) mediante sustitución nucleofílica del cloro en las posiciones 2 y 4 en la 2,4-dicloro-5-nitropiridina (C-7B1) con el grupo metoxi, seguido de la reducción del grupo nitro en la 2,4-dimetoxi-5-nitropiridina (C-7B2).

Esquema de reacción 3.

El Esquema 4 ¡lustra un método representativo para la preparación de 5-amino-4-metox¡-2-(dimet¡lamlno)p¡r¡d¡na (C-7C) mediante sustitución nucleofílica del cloro en la posición 2 en la 2-cloro-4-metoxl-5-n¡tropir¡d¡na (C-7C1) con el grupo metoxi y posterior reducción del gmpo nitro en la 4-metoxi-2-(dimet¡lamino)-5-nitropiridina (C-7C2).

C-7C1 C-7C2 C-7C

Esquema de reacción 4.

El Esquema 5 ilustra un método representativo para la preparación de 5-amino-2,4,6-trimetoxipirimidina (C-7D) mediante la nltraclón de 2-cloro-4,6-d¡metoxiplr¡m¡d¡na (C-7D1) en la posición 5, seguido de la sustitución nucleofílica del cloro en la posición 2 en la 2-cloro-4,6-dimetoxl-5-n¡tropirim¡d¡na (C-7D2) con el grupo metoxi. La última etapa fue la reducción del grupo nitro en la 2,4,6-trimetoxi-5-n¡tropirimld¡na (C-7D3).

C-7D3 C-7D

Esquema de reacción 5

Como se mencionó anteriormente, los compuestos de la invención son para el uso como un medicamento que es útil para la prevención y/o tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en cáncer, enfermedades inmunitarias, afecciones inflamatorias, enfermedades alérgicas de la piel asociadas con proliferación excesiva, enfermedad que causa ceguera e infecciones virales.

En particular, los compuestos de acuerdo con la invención son útiles para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades asociadas con la desregulación del ciclo celular y la apoptosis, es decir, enfermedades inmunitarias tales como, por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias y afecciones asociadas con el rechazo de trasplantes de tejidos/órganos, tales como artritis reumatoide, enfermedad de injerto contra huésped, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjorgen, esclerosis múltiple, tiroiditis de Hashimoto, polimiositis; las afecciones inflamatorias crónicas son asma, osteoartritis, aterosclerosis, enfermedad de Crohn; las afecciones inflamatorias o alérgicas de la piel son psoriasis, dermatitis de contacto, dermatitis atópica, alopecia areata, eritema multiforme, dermatitis herpetiforme, esclerodermia, vitÍligo, angeítis por hipersensibilidad, urticaria, penfigoide ampolloso, pénfigo, epidermólisis ampollosa adquirida; el trastorno hiperproliferativo es el síndrome de Li-Fraumeni; las enfermedades cancerosas o tumorales son tumores benignos o malignos, sarcomas, tales como rabdomiosarcoma, cáncer de huesos, por ejemplo, osteosarcomas, carcinoma del cerebro, por ejemplo, tumor cerebral de tejidos blandos, riñón, hígado, glándula suprarrenal, vejiga, mama, estómago, tumores gástricos, ovarios, colon, recto, próstata, páncreas, pulmón, vagina o tiroides, glioblastomas, mieloma múltiple, cáncer gastrointestinal, especialmente carcinoma de colon o adenoma colorrectal, un tumor de cuello y cabeza, melanoma, hiperplasia prostática, una neoplasia, una neoplasia de carácter epitelial, un carcinoma mamarlo, una leucemia, tal como linfomas de células B o T, policitemia vera, trombocitemia, carcinoma adrenocortical, que incluye metástasis en otros órganos, respectivamente; vitreorretinopatía proliferativa, las infecciones virales son herpes, papiloma, VIH, hepatitis.

En el tratamiento de las enfermedades antes mencionadas, los compuestos de la invención se pueden administrar como un compuesto químico, pero típicamente se usarán en forma de composiciones farmacéuticas, que comprenden un compuesto de acuerdo con la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se definió anteriormente como ingrediente activo, en combinación con vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables.

En el tratamiento de las enfermedades antes mencionadas, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden administrarse por cualquier vía, preferentemente por vía oral o parenteral, y tendrán la forma de un preparado destinado al uso en medicina, dependiendo de la vía de administración prevista.

Las preparaciones sólidas pueden tomar la forma de, por ejemplo, comprimidos o cápsulas preparadas por medios convencionales con ingredientes inactivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); cargas (por ejemplo, lactosa, sacarosa, carboximetilcelulosa, celulosa microcristalina o hidrógeno fosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); desintegrantes (por ejemplo, crospovidona, almidón de patata o glicolato de almidón sódico); agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio). Los comprimidos se pueden recubrir de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica con recubrimientos convencionales, recubrimientos para retardar/controlar la liberación o recubrimientos entéricos. Las preparaciones líquidas para administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o pueden presentarse como un producto seco para la reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden prepararse por medios convencionales con ingredientes inactivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitlna o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados); y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico). Las preparaciones también pueden comprender tampones, aromatizantes, agentes colorantes y edulcorantes adecuados.

Las preparaciones para la administración oral pueden formularse adecuadamente mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica para obtener una liberación controlada del compuesto activo.

La administración parenteral incluye la administración por inyección intramuscular e intravenosa y la infusión (infusión) intravenosa. Las formulaciones para administración parenteral pueden estar en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en envases multidosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar formas de suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o de dispersión.

Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos.

El método de tratamiento que usa los compuestos de esta invención implicará la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención, preferentemente en forma de una composición farmacéutica a un sujeto que necesite dicho tratamiento.

Una dosis propuesta de los compuestos de la presente invención es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1000 mg por día, en dosis únicas o divididas. El experto en la técnica apreciará que la selección de la dosis requerida para lograr el efecto biológico deseado dependerá de una serie de factores, por ejemplo, el compuesto específico, el uso, el modo de administración, la edad y afección del paciente y la dosis precisa se determinará en última instancia a criterio del médico tratante.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos no pretenden limitar la invención, sino que simplemente sirven como ilustración de la presente invención.

Abreviaturas

AcOEt acetato de etilo

AcOH ácido acético

brs singlete amplio

CaCI2 cloruro de calcio

CHCIa cloroformo

d doblete

dd doblete de dobletes

ddd doblete de doblete de dobletes

dq doblete de cuartetos

DEA A/,A/'-dietilamina

CCD A/.Af-dicicIohexilcarbodiimida

MCD diclorometano

EDC-HCI Clorhidrato de A/-(3-dimetilaminopropil)-/V'-etilcarbodiimida

EtOH etanol

equivalente equivalentes

ESI ionización por electropulverización

h hora(s)

HCI cloruro de hidrógeno

HPLC Cromatografía líquida de alta resolución

L litro

LiHMDS bis(trímetilsilil)amida de litio

m multiplete

MeOH metanol

M g S 04 sulfato de magnesio

mL mililitro(s)

MsOH ácido metanosulfónico

MW microondas

NaHC03 bicarbonato de sodio

NaOH hidróxido de sodio

Na2S04 sulfato de sodio

NMR Resonancia magnética nuclear

NP HPLC Cromatografía líquida de alta resolución de fase normal

-OMe grupo metoxi

-OEt grupo etoxi

p.a. Puriss pro anlysi

PTSAHzO monohidrato de ácido p-toluenosulfónico

q cuarteto

RP-HPLC Cromatografía líquida de alta resolución de fase inversa

singlete

sep septeto

Cromatografía de fluidos supercríticos

SQD MS Espectrómetro de masas con detector de cuadrupolo simple

t triplete

ATF ácido trifluoroacético

TFAA anhídrido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

TLC Cromatografía en capa fina

UPLCMS Espectrometría de masas acoplada a cromatografía líquida de ultrarresolución

ml microlitro

Se realizaron TLC con gel de sílice 60 F254 sobre láminas de aluminio (Sigma-Aldrich, Merck) utilizando sistemas de solventes apropiados. La visualización se realizó generalmente con luz ultravioleta (254 nm).

Método UPLC-MS:

Los análisis UPLCMS se realizaron en un cromatógrafo de líquidos UPLC equipado con detector PDA y detector SQD MS, operando bajo ESI(+) o ESI(-) mediante el uso de una columna C18, 2,1 mm x 100 mm, 1,7 pm (AQUITY UPLC BEH o equivalente). Como fase móvil se usó metanol de grado HPLC o LC/MS, agua de grado HPLC, ácido fórmico de grado HPLC o LC/MS, solución de amoniaco al 25 % de grado p.a. y una mezcla de ellos. Las condiciones de operación fueron las siguientes: flujo de fase móvil 0,45 mL/min, longitud de onda 210 - 400 nm, volumen de inyección 1 pL, temperatura de la columna 60 °C, temperatura del automuestreador 5 °C. El análisis se realizó 5,5 min 1,5 min para "el retraso de la siguiente inyección". Gradiente de elución con un curso lineal:

Las soluciones se prepararon de la siguiente manera:

Preparación de la fase móvil A1 - gradiente básico: Se añadieron 25 pL de ácido fórmico y 250 pL de solución de amoniaco al 25 % a 250 mL de agua. Desgasificar mediante el uso de un baño ultrasónico durante 10 min.

Preparación de la fase móvil A2 - gradiente ácido: se añadieron 50 pL de ácido fórmico a 250 mL de agua. Desgasificar mediante el uso de un baño ultrasónico durante 10 min.

Fase móvil B: Metanol Super Gradiente.

Procedimientos de síntesis:

Intermediario C-4A: 6-doro-3-(3-metil-2-oxobut¡l¡deno)-1H-indol-2-ona

Se cargó un recipiente de reacción de 5 L con aldol C-3A (1015 g, 3,79 mol, 1 eq) y se añadió EtOH (2,85 L). La suspensión se calentó a 55 °C y se añadió HC112 M (202 mL, 2,42 mol, 0,64 eq) en una porción. Luego, se continuó el calentamiento hasta la temperatura de ebullición del etanol. Se descubrió que se necesita más EtOH (500 mL) debido a la rápida precipitación del producto C-4A. Después de 1 h, el análisis UPLCMS mostró el 98 % del área del pico del producto. Se detuvo el calentamiento y se comenzó el enfriamiento de la mezcla de reacción. Cuando la temperatura de la mezcla de reacción alcanzó los 50 °C, toda la mezcla se transfirió a un vaso de precipitados y se enfrió a 0 - 5 °C. El residuo sólido se filtró y se lavó con 1,3 L de EtOH frío. El producto sólido se secó en un secador de laboratorio (40 °C) durante 3 h y luego se secó al aire durante toda la noche. Como resultado, se obtuvo el compuesto C-4A como un sólido naranja (692 g, 73 % de rendimiento, 98,1 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-3A: 6-doro-3-hidroxi-3-(3-metil-2-oxobuti0-2.3-dihidro-1H-indol-2-ona

Se cargó un recipiente de reacción de 15 L con 6-cloroisatina (1000 g, 5,5 mol, 1 eq) y EtOH (7 L), y luego se añadió 3-metilbutanona (2,94 L, 27,5 mol, 5 eq) en una porción. La mezcla de reacción se calentó a 40 °C y se añadió DEA (250 mL, 2,41 mol, 0,44 eq) en una porción. Luego, se continuó el calentamiento hasta la temperatura de ebullición del etanol. Después de 1 h, el análisis UPLCMS mostró un 71 % del producto en la mezcla de reacción. Se continuó el calentamiento durante 1 h adicional y después de ese tiempo el análisis UPLCMS mostró un 93 % del producto. La mezcla de reacción se enfrió a 50 °C y luego toda la mezcla se transfirió a un matraz de fondo redondo y se eliminaron todos los ingredientes líquidos. El residuo se suspendió en DCM (3,4 L) y se hirvió a reflujo durante 1 h. Pasado ese tiempo se detuvo el calentamiento y se añadió n-hexano (2 L) en una porción. El contenido del matraz se enfrió a alrededor de 5 °C y se agitó durante 1,5 h a esta temperatura. La mezcla resultante se filtró y dicho sólido obtenido se lavó con 500 mL de una mezcla de DCM/n-hexano (1:1) seguido de secado al aire durante toda la noche. Como resultado, se obtuvo el producto aldólico C-3A esperado como un sólido gris (965 g, 98,5 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS). La mezcla de solventes después de la filtración se redujo al vacío a alrededor de 1,5 L, se añadió n-hexano (700 mL) y la suspensión obtenida se agitó durante 0,5 h a temperatura ambiente. Otra filtración seguida de un doble lavado con una mezcla de DCM/n-hexano (150 mL, 1:1, para cada lavado) y secado al aire proporcionó una segunda parte del producto aldólico C-3A (50 g, 99,1 % de pureza). El rendimiento total del aldol C-3Afue del 69 % (1015 g, 98,5 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-4B: 6-doro-3-í3-metil-2-oxopentilidenoV2.3-dihidro-1/-/-indol-2-ona

Se cargó un matraz de reacción de 250 mL con aldol C-3B (11 g, 39 mmol, 1 eq) y se añadió EtOH (32 mL) en una porción. La suspensión se calentó a 55 °C y se añadió HCI 12 M (1,63 mL, 19,5 mmol, 0,5 eq) en una porción. Luego, se continuó el calentamiento hasta la temperatura de ebullición del etanol. Después de 1 h, el análisis UPLCMS mostró un 98 % del producto. La mezcla de reacción se enfrió a 0 - 5 °C y se agitó durante 0,5 h. El residuo sólido se filtró y se lavó con una pequeña porción de EtOH frío. El producto sólido se secó al aire durante la noche. Como resultado, se obtuvo el compuesto C-4B como un sólido naranja (5 g, 49 % de rendimiento, 99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-3B: 6-doro-3-hidroxi-3-(3-metil-2-oxopent¡n-2.3-dihidro-1H-indol-2-ona

En un matraz de fondo redondo (250 mL) se suspendió 6-cloroisatina (15 g, 83 mmol, 1 eq) en EtOH (70 mL) y luego se añadió 3-metilpent-2-ona (51,3 mL, 415 mmol, 5 eq) en una porción. La mezcla de reacción se calentó a 40 °C y se añadió DEA (4,34 mL, 42 mol, 0,5 eq) en una porción. Luego, se continuó el calentamiento hasta la temperatura de ebullición del etanol. Después de 1 h, el análisis UPLCMS mostró un 60 % del producto. Se continuó el calentamiento durante 2 horas adicionales y después de ese tiempo el análisis UPLCMS mostró 99 % del producto. Después de enfriar a temperatura ambiente, todos los ingredientes líquidos se eliminaron al vacío. El residuo se suspendió en AcOEt (50 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Pasado ese tiempo se enfrió el contenido del matraz a alrededor de 5 °C y se agitó durante 1,5 h a esta temperatura. La mezcla resultante se filtró y dicho sólido obtenido se lavó con una pequeña cantidad de EtOH frío seguido de secado al aire durante la noche. Como resultado, se obtuvo el producto aldólico C-3B esperado como un sólido de color pardo claro (5,1 g, 98,5 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS). El residuo después de la filtración se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (30 % a 60 % de AcOEt en n-hexano). Después de la cromatografía, se obtuvo la segunda parte del producto C-3B como un sólido de color pardo claro (5,9 g) con un 97 % de pureza (de acuerdo con el análisis UPLCMS). El rendimiento total del aldol C-3B fue del 47 % (11 g, 98 % de pureza según análisis UPLCMS).

Intermediario C-6A: A/-(3-clorofenil)prop-2-inamida

En un matraz de fondo redondo de dos bocas de 2 L equipado con agitación mecánica, se disolvió 3-cloroanilina (75 g, 590 mmol, 1 eq) en 500 mL de DCM (grado HPLC). Luego, se añadió gota a gota ácido prop-2-inoico (53,5 g, 760 mmol, 1,3 eq) disuelto en 100 mL de DCM (apareció la sal de la amina). En la etapa siguiente, se añadió EDC-HCI (145 g, 760 mmol, 1,3 eq) en varias porciones (durante la adición, el matraz de reacción se enfrió en un baño de hielo para evitar el reflujo del DCM). Después de la adición completa de EDC-HCI, la mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente y luego la mezcla se transfirió lentamente al vaso de precipitados que contenía 500 mL de agua y 250 g de hielo. Se continuó la agitación a 0 - 5 °C durante alrededor de 15 min y luego se filtró el precipitado blanco, se lavó con 100 mL de agua fría y se secó al aire. Como resultado, se obtuvo la amida C-6A esperada como un sólido blanco (102 g, 96,6% de rendimiento, 96,3% de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-6B: A/-(5-cloro-2-fluorofenil)prop-2-inamida

El ácido prop-2-inoico (15,16 g, 216,4 mmol, 1,05 eq) se añadió en una porción a una solución agitada de 5-cloro-2-fluoroanilina (30 g, 206,1 mmol, 1 eq) en tolueno (400 mL) que se enfrió en un baño de hielo/agua. La mezcla se agitó durante 15 min, luego se añadió DCC (44,65 g, 216,4 mmol, 1,05 eq) en porciones mientras se mantenía la temperatura por debajo de 10 °C. Se continuó la agitación a 5 °C durante 2 h, luego se recogió el DCU sólido por filtración y se lavó con tolueno (150 mL) y por último con una mezcla de AcOEt/n-hexano (150 mL, 1:9). El filtrado se concentró a un volumen de aproximadamente 100 mL y se agitó durante 15 min a temperatura ambiente. El precipitado resultante se recogió por filtración, se lavó con la mezcla de tolueno/n-hexano (20 mL, 1:1), n-hexano (20 mL) y se secó al aire durante 16 h para dar 15,29 g del producto deseado como un sólido blanco. El filtrado se colocó en un refrigerador durante 3 h y el precipitado resultante se recogió por filtración, se lavó con la mezcla de tolueno/n-hexano (20 mL, 1:1), n-hexano (20 mL)y se secó al aire durante 16 h para dar 13,29 g de la amida C-6B. El filtrado se concentró a un volumen de aproximadamente 20 mL y luego se añadió lentamente hexano (400 mL) mientras se agitaba. La mezcla se calentó a reflujo durante 30 min y la solución caliente se filtró, se concentró hasta aproximadamente 100 mL y se colocó en un refrigerador durante 18 h. El precipitado resultante se recogió por filtración, se lavó con n g-hexano (2 x 20 mL) y se secó al aire durante 16 h para dar adicionalmente 7,19 g de la amida C-6B. El rendimiento total del producto C-B6 fue del 88 % (35,77 g).

Intermediarlo C-6C: A/-(5-cloro-2-met¡lfen¡l)prop-2-inamida

En un matraz de fondo redondo de dos bocas de 2 L equipado con agitación mecánica, se disolvió 5-cloro-2-metilanilina (75 g, 530 mmol, 1 eq) en 1000 mL de DCM (grado HPLC). Luego, se añadió gota a gota ácido prop-2-inoico (49 g, 690 mmol, 1,3 eq) disuelto en 100 mL de DCM (grado HPLC) (apareció la sal de la amina). En la etapa siguiente, se añadió EDC-HCI en varias porciones (durante la adición, el matraz de reacción se enfrió en un baño de hielo para evitar el reflujo del DCM). Después de la adición completa de EDC-HCI, la mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Toda la mezcla se transfirió a un vaso de precipitados que contenía 750 mL de agua y 250 g de hielo. Se continuó la agitación a 0 - 5 °C durante alrededor de 15 min y luego se filtró el precipitado blanco, se lavó con 100 mL de agua fría y se secó al aire. Como resultado, se obtuvo la amida C-6C esperada como un sólido blanco (81 g, 80 % de rendimiento, 99,1 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C^6D: A/-(3-cloro-4-fluorofenil)prop-2-in m

A un matraz de fondo redondo de dos bocas de 1 L equipado con barra de agitación magnética y termómetro, se añadió 3-cloro-4-fluoroanilina (14,8 g, 100 mmol, 1 eq) seguido de DCM (200 mL, grado HPLC) y ácido prop-2-inoico (9,1 g, 130 mmol, 1,3 eq). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió EDCHCI (25,2 g, 130 mmol, 1,3 eq) en varias porciones. La reacción es exotérmica y se debe evitar superar los 5 °C durante la adición. Después de la adición completa de EDC HCI, la mezcla se agitó durante 1 h a 5 °C. Pasado este tiempo, se retiró un baño de hielo y se añadieron 200 mL de agua fría a la mezcla de reacción. La reacción se agitó durante alrededor de 0,5 h y el precipitado resultante se filtró y se lavó con 100 mL de agua fría. El sólido así obtenido se redisolvió en cloroformo y la solución se lavó con agua, se secó con Na2S04 y el solvente se evaporó a sequedad. El producto resultante se secó al vacío. Como resultado, se obtuvo la amida C-6D esperada como un sólido amarillo claro (19,2 g, 98 % de rendimiento, 98 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-6E: A/-(3.4-difluorofenil)prop-2-inamida

A un matraz de fondo redondo de dos bocas de 1 L equipado con barra de agitación magnética y termómetro, se añadió 3,4-difluoroanilina (12,9 g, 9,9 mL, 100 mmol, 1 eq) seguido de DCM (300 mL, grado HPLC) y ácido prop-2-inoico (9,1 g, 130 mmol, 1,3 eq). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió EDC HCI (24,9 g, 130 mmol, 1,3 eq) en varias porciones. La reacción es exotérmica y se debe evitar superar los 5 °C durante la adición. Después de la adición completa de EDC HCI, la mezcla se agitó durante 1 h a 5 °C. Pasado este tiempo, se retiró un baño de hielo y se añadieron 300 mL de agua fría a la mezcla de reacción. La reacción se agitó durante alrededor de 0,5 h y el precipitado resultante se filtró y se lavó con 100 mL de agua fría. El sólido así obtenido se redisolvió en AcOEt y la solución se lavó con agua, se secó con Na2S04 y el solvente se evaporó a sequedad. A continuación, el producto se lavó con 10 mL de DCM frío y se secó al vacío. Como resultado, se obtuvo la amida C-6E esperada como un sólido blanquecino (17,3 g, 96 % de rendimiento, 100 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-6F: A/-f5-doro-2.4-difluorofenihprop-2-¡nam¡da

En un matraz de fondo redondo de dos bocas de 500 mL equipado con agitador magnético, se disolvió 5-cloro-2,4-difluoroanilina (10 g, 61 mmol, 1 eq) en DCM (150 mL, grado HPLC). Luego, se añadió gota a gota ácido prop-2-inoico (5,5 g, 78 mmol, 1,3 eq) (apareció la sal de la amina). A continuación, se añadió EDC HCI (14 g, 78 mmol, 1,3 eq) en varias porciones (durante la adición, el matraz de reacción se enfrió en un baño de hielo para mantener la temperatura ambiente). Después de la adición completa de EDC HCI, la mezcla de reacción se agitó durante 1 h adicional a temperatura ambiente. Pasado ese tiempo se añadieron 150 mL de agua y la mezcla se transfirió a un embudo de decantación. Las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo dos veces con el DCM (2 x 100 mL). Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04 y se concentraron hasta aproximadamente 50 mL al vacío, para dar como resultado una suspensión espesa. Los sólidos se filtraron y secaron para proporcionar 8 g de cristales color crema. El filtrado se concentró y luego se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (n-hexano/AcOEt; 8:1 —► 5:1) para dar 4,4 g adicionales de la amida C-6F. Como resultado, se obtuvo la amida C-6F esperada como un sólido de color crema (12,4 g, 94 % de rendimiento, 100 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7A: 5-amino-2.4-dimetoxipirim¡d¡na

A un reactor de vidrio QianCap (1850 mL) equipado con agitador magnético se le añadió C-7A2 (100 g, 540 mmol) seguido de THF (800 mL). A continuación, se añadió paladio sobre carbono al 10 % (2 g) en una porción y el reactor se conectó a la fuente de hidrógeno. La presión de hidrógeno se ajustó a 2 bar y la reacción se agitó bien durante 16 h bajo un flujo continuo de hidrógeno. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS ha mostrado una conversión completa del material de partida. La mezcla de reacción se filtró a través de la almohadilla de Cellite y el filtrado se concentró al vacío hasta alrededor de 150 - 200 mL. Luego, se añadió gota a gota n-hexano (500 mL) y la suspensión se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. El precipitado se filtró, se lavó dos veces con n-hexano (2 x 50 mL) y se secó al vacío. Como resultado, se obtuvo la amina C-7A como un sólido amarillo/verde (77,94 g, 93 % de rendimiento, 99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7A2: 2.4-dimetoxi-5-nitropirimidina

A un matraz de fondo redondo de tres bocas de 2 L, que contenía termómetro, condensador de agua, conexión a una fuente de gas inerte (argón) y agitador mecánico, se añadió metanol (1 L, grado HPLC) y bajo atmósfera de argón se añadieron lentamente pequeños trozos de sodio (65 g, 2,83 mol, 2,2 eq) durante alrededor de 1 h con buena agitación (la reacción es exotérmica, pero la mezcla de reacción no se enfrió; usualmente se añadía otro trozo de sodio cuando se consumía el primero). Después de disolver toda la porción de sodio, la mezcla de reacción se enfrió a -5 “C y se añadió cuidadosamente una suspensión recién preparada de C-7A1 (250 g, 1,29 mol, 1 eq) en metanol (500 mL, grado HPLC) (alrededor de 40 minutos) en porciones pequeñas buena agitación. (PRECAUCIÓN: la reacción es muy exotérmica), se debe evitar superar los 10 °C durante la adición. Además, en el curso de la reacción se formaron lotes de producto sólido. Después de añadir la cantidad total de la suspensión de sustrato, la mezcla de reacción se mantuvo a 0 - 5 °C durante alrededor de 0,5 h y luego se dejó que alcanzara la temperatura ambiente (usualmente tomó alrededor de 2 h). Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo completo del sustrato. Luego, la mezcla de reacción se enfrió a alrededor de 5 °C y el producto sólido se filtró y se lavó con una pequeña cantidad (100 mL) de metanol frío. El producto crudo se colocó en un vaso de precipitados con agua (1 L) y se suspendió bien con agitador mecánico (alrededor de 10 minutos de buena agitación). A continuación, la suspensión se filtró y el sólido obtenido se lavó con agua (500 mL), n-hexano (200 mL) y se secó al aire durante la noche. Como resultado, se obtuvieron 211,5 g del compuesto C-7A2 en forma de un sólido amarillo claro (88 % de rendimiento, 99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7B: 5-amino-2.4-dimetoxipiridina

A un reactor de vidrio QianCap (1850 mL) equipado con agitador magnético se le añadió C-7B2 (40 g, 217 mmol) seguido de THF (500 mL). A continuación, se añadió paladio sobre carbono al 10% (1,5 g) en una porción y el reactor se conectó a la fuente de hidrógeno. La presión de hidrógeno se ajustó a 2 bar y la reacción se agitó bien durante 7 h bajo un flujo continuo de hidrógeno. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró una conversión completa del material de partida. La mezcla de reacción se filtró a través de la almohadilla de Cellite y el filtrado se concentró al vacio. Como resultado, se obtuvo la amina C-7B como un sólido de color pardo (33 g, 99 % de rendimiento).

Intermediario C-7B2: 2.4-dimetoxi-5-nitropiridina

A un matraz de fondo redondo de tres bocas de 2 L, que contenía termómetro, condensador de agua, conexión a una fuente de gas inerte (argón) y agitador mecánico, se añadió metanol (900 mL, grado HPLC) y bajo atmósfera de argón se añadieron lentamente pequeños trozos de sodio (26,7 g, 1,16 mol, 2,1 eq) durante alrededor de 1 h con buena agitación (PRECAUCIÓN: la reacción es exotérmica, pero la mezcla de reacción no se enfrió; usualmente se añadía otro trozo de sodio cuando se consumía el primero). Después de disolver toda la porción de sodio, la mezcla de reacción se enfrió a -5 °C y se añadió cuidadosamente la suspensión recién preparada del compuesto C-7B1 (106,25 g, 0,55 mol, 1 eq) en metanol (100 mL, grado HPLC) (alrededor de 30 minutos) en pequeñas porciones con buena agitación (PRECAUCIÓN: la reacción es muy exotérmica, se debe evitar superar los 10 °C durante la adición). Después de añadir la cantidad total de la suspensión de sustrato C-7B1, la mezcla de reacción se mantuvo a 0 - 5 °C durante alrededor de 40 min y luego se calentó a temperatura ambiente y se agitó a 40 °C durante 3,5 h. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo completo del sustrato. Luego, la mezcla de reacción se enfrió por debajo de 10 °C y el producto sólido se filtró y se lavó con una pequeña cantidad (50 mL) de metanol frío, agua (100 mL), n-hexano (100 mL) y se secó al aire durante la noche. Como resultado, se obtuvieron 99,3 g del compuesto C-7B2 en forma de un sólido amarillo claro (98 % de rendimiento, 97 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7C: 5-amino-4-metoxi-2-(dimetilamino)piridina

A un reactor de vidrio QianCap (500 mL) equipado con agitador magnético se añadió C-7C2 (4,5 g, 22,8 mol) seguido de THF (70 mL) y metanol (70 mL). A continuación, se añadió paladio sobre carbono al 10 % (0,48 g) en una porción, el reactor se conectó a la fuente de hidrógeno. La presión de hidrógeno se ajustó a 2 bar y la reacción transcurrió bien durante 17 h bajo un flujo continuo de hidrógeno a temperatura ambiente. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró una conversión completa del material de partida. La mezcla de reacción se filtró a través de la almohadilla de Cellite y el filtrado se concentró al vacío a sequedad. Como resultado, se obtuvo la amina C-7C como un sólido oscuro (3,9 g; 96 % de rendimiento; 95 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7C2: 4-metoxi-2-(dimetilamino)-5-n¡tropirid¡na

Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 0,5 L, que contenía termómetro, condensador de agua y embudo de goteo, se cargó con C-7C1 (10 g, 50,4 mmol, 1 eq), THF (50 mL) y metanol (200 mL). Toda la mezcla se agitó a 22 °C durante 10 min y luego se añadió gota a gota dlmetllamina (13,7 mL, solución al 60 % en agua). Después de 1 h comenzó a precipitar un sólido amarillo pálido. Se añadió la siguiente porción de dlmetllamina (2 mL, solución al 60 % en agua) y la reacción continuó durante 24 h adicionales. Pasado ese tiempo la mezcla de reacción se concentró al vacío y el material crudo se suspendió en metanol (70 mL) y agua (140 mL). Después de agitar vigorosamente durante 1 h a 0 °C, se filtró el sólido amarillo pálido, se lavó con una pequeña cantidad de solución de metanol y agua y se secó al vacío. Como resultado, se obtuvo el compuesto C-7C2 como un sólido amarillo pálido (10 g; 100 % de rendimiento; 99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7D: 5-amino-2.4.6-trimetoxipirimld¡na

A un reactor de vidrio QianCap (1850 mL) equipado con agitador magnético se le añadió C-7D3 (46 g, 231 mmol) seguido de MeOH (750 mL). A continuación, se añadió paladio sobre carbono al 10 % (2,5 g) en una porción y el reactor se conectó a la fuente de hidrógeno. La presión de hidrógeno se ajustó a 2 bar y la reacción se agitó bien durante 24 h bajo un flujo continuo de hidrógeno. Después de ese tiempo, el análisis de TLC mostró una conversión completa del material de partida. La mezcla de reacción se filtró a través de la almohadilla de Cellite y el filtrado se concentró al vacío a sequedad. Como resultado, se obtuvo la amina C-7D como un sólido beige (38,3 g, 97 % de rendimiento, 99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7D3: 2.4.6-trimetoxi-5-nitropirimid¡na

Se añadió metanol (1000 mL) a un matraz de fondo redondo de 2 L que contenía un termómetro y un agitador magnético y el conjunto se enfrió a 0 °C en un baño de agua/hielo. Luego se añadió hidruro de sodio (13 g, 327 mmol, 1,2 eq, 60% en aceite mineral) en pequeñas porciones durante 30 minutos (PRECAUCIÓN: la reacción es exotérmica). Después de 30 minutos de agitación, se añadió el sustrato C-7D2 en varias porciones (60 g, 272 mmol, 1 eq). La reacción es muy exotérmica y durante la adición el matraz de reacción se enfrió en un baño de agua/hielo. Durante la reacción se observó la formación de un producto sólido amarillo. Se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente (1 h) y después de ese tiempo el análisis por TLC (DCM como eluyente) mostró una conversión completa del material de partida. A la mezcla de reacción se le añadió 1 L de agua y se evaporó el metanol. El precipitado se filtró, se lavó con 200 mL de n-hexano y se secó al aire. Como resultado, se obtuvo el compuesto C-7D3 como un sólido amarillo (46,5 g, 79 % de rendimiento, 100 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Intermediario C-7D2: 2-doro-4.6-dimetoxi-5-nitropirim¡d¡na

A un matraz de fondo redondo de dos bocas de 0,5 L, que contenía termómetro y equipado con agitador magnético, se añadió el compuesto C-7D1 (50 g, 286 mmol, 1 eq) seguido de la adición de mezcla TFAA (80 mL, 572 mmol, 2 eq)/DCM (1:1). Luego la mezcla se enfrió en un baño de salmuera y hielo a -5 °C. Se añadió gota a gota ácido nítrico fumante concentrado (14,3 mL, 343 mmol, 1,2 eq) a la mezcla bien agitada (PRECAUCIÓN: la reacción es muy exotérmica) a una temperatura que no superara los 40 °C. En el transcurso de la reacción se formaron lotes de producto sólido. Después de añadir la cantidad total de ácido nítrico, se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente. Después de ese tiempo, el análisis de TLC mostró el consumo completo del sustrato (una alícuota que se inactivó con agua y se extrajo con DCM; placa eluida con DCM). El precipitado blanco espeso resultante se vertió sobre hielo y la agitación continuó durante 10 minutos. La solución acuosa se extrajo con DCM (3 x 100 mL). Luego las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de NaHCOa hasta que los lavados se mantuvieron a pH 7. La solución se secó con MgSCTt y el solvente se eliminó al vacío para dar un compuesto cristalino amarillo-blanco C-7D2 (61 g, 97 % de rendimiento, 99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto (1), C1: (3S)-6-doro-2'-(3-clorofenil)-5'-(2.4-d¡metoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'H-espironndol-3.1'-pirrolof3.4-clpirrol1-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por SFC quiral (método A) o RP-HPLC quinal (método R) del compuesto racémlco C-10.C1; > 99 % ee; tr: 7,77 mln. (método R'); 1H NMR (500 MHz, DMSO-de) 5 11,18 (s, 1H), 8 ,55-8,42 (m, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,36-7,27 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 7,08 (dd, J= 8,1, 1,9 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,94 (br s, 3H), 2,43 (sep, J = 7,0 Hz, 1H), 0,86 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,43 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-efe) 5175,42, 166,58, 164,87, 164,85, 157,89, 144,17, 138,80, 135,26, 134,00, 133,38, 130,76, 127,52, 127,42, 127,30, 126,96, 126,02, 123,70, 123,04, 120,65, 118,41, 116,45, 111,18, 70,20, 55,52, 54,85, 25,47, 21,41, 21,25.

Compuesto C-10.C1: 6-doro-2'-(3-clorofenil)-5'-(2.4-d¡metoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'H-espironndol-3.T-pirrolof3.4-clpirrol1-2.3'-diona

Se colocaron 50 mL de TFA en un matraz de 100 mL equipado con barra de agitación magnética. Luego, se añadió en varias porciones el intermediario C-9.C1 (17,8 g, 30,6 mmol) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente durante 3 h a 40 °C. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 89 % del pico del producto con algunos picos menores de impurezas. A continuación, la mayor parte del ácido se evaporó y el residuo se disolvió en DCM (100 mL). Se añadieron 100 mL de agua y la mezda se trató con NaOH 3 M a pH 8. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 * 100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (30 mL), se secaron con MgS04 y se evaporaron a sequedad para proporcionar 18 g de un compuesto sólido beige C-10.C1 con un 90 % de pureza. El producto crudo C-10.C1 se disolvió en 50 mL de metanol (grado HPLC). Luego, se añadió gota a gota una solución al 25 % de metóxido de sodio (10 mL) en 10 minutos y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Después de 24 h, el análisis UPLCMS mostró un 97 % del producto C-10.C1 esperado. La mezcla se concentró a la mitad del volumen y se transfirió lentamente a una mezcla agitada de hielo (100 g) y luego se acidificó con HCI 3 M a pH neutro. El precipitado se filtró, se enjuagó con 50 mL de agua y se secó al vacío para dar el compuesto C-10.C1 como un sólido beige anaranjado (14,5 g, 84 % de rendimiento, 98 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Procedimiento alternativo para la preparación de C-10.C1: se disolvieron 12,0 g (19 mmol) del Intermediario C-9.C1 en 50 mL de AcOH glacial. Se añadió MsOH (1 eq) y la mezcla se agitó a 40 °C. Después de 16 horas, la mezcla se transfirió a un vaso de precipitados que contenía 100 g de hielo y 100 mL de amoniaco al 25 %. El producto sólido se filtró, se enjuagó con 50 mL de agua y se secó al aire. La purificación mediante cromatografía ultrarrápida (DCM/MeOH, 100:0 —► 98:2) dio como resultado 9,6 g de un sólido beige anaranjado con una pureza del 94 % (de acuerdo con el análisis UPLCMS). Rendimiento: 78 %.

Compuesto C-9.C1: 4-(6-cloro-3-hidroxi-2-oxo-2.3-dihidro-7H-¡ndol-3-il)-A/-(3-clorofen¡l)-1-(2.4-dimetoxipirimid¡n-5-¡l)-5-( propan-2-i I)- 7H-piirol-3-carboxamida

A un matraz de 500 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C1 (15 g, 26.6 mmol, 1 eq) y THF (200 mL), seguido de fosfito de trietilo (6,81 mL, 39,8 mmol, 1,5 eq). Luego, se añadió terc-butóxido de sodio (5,11 g, 53,2 mmol, 2 eq) en varias porciones. La mezcla de reacción se agitó durante 3 h a temperatura ambiente en atmósfera de aire (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2). Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 82 % del producto deseado y un 10 % de impureza principal. La mezcla de reacción se transfirió lentamente a una mezcla enfriada (0 - 5 °C) de agua (150 mL) y HC112 M (5 mL). Después de la adición de AcOEt (100 mL), toda la mezcla se transfirió a un embudo de decantación. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo una vez más con AcOEt (100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSOí y el solvente se eliminó al vacío. Los productos crudos se purificaron mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (CHCb/MeOH 100:0 —> 98:2). Como resultado se obtuvieron 5,86 g de C-9.C1 con un 93.7 % de pureza. Rendimiento: 38 %.

Compuesto C-8.C1: 4~f6-cloro-2-oxo-2.3-d¡hidro-,?H-indol-3-ih-A/-(3-clorofen¡l)-1-(2.4-dimetoxipirim¡d¡n-5-i0-5-(propan-2-ilMH-pirrol-3-carboxamida

En un matraz de fondo redondo de 500 mL equipado con barra de agitación magnética, los compuestos C-4A (21 g, 117 mmol, 1 eq), C-6A (29,25 g, 117 mmol, 1 eq) y C-7A (20 g, 130 mmol, 1,1 eq) se suspendieron en AcOH acuoso al 90 % y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 70 °C y se agitó a esta temperatura durante 24 h. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 60 % del producto esperado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a sequedad. Se repitió la reacción y se combinaron y purificaron los residuos de dos lotes de acuerdo con el siguiente procedimiento:

El residuo sólido se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (30 % a 50 % de AcOEt en n-hexano). Todas las fracciones que contenían el producto se concentraron a 500 mL y se dejaron a temperatura ambiente. Después de 24 horas se filtró el sólido de color rosa, se enjuagó con 50 mL de n-hexano y se secó al aire (40,8 g, 96,5 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS). El filtrado se evaporó a sequedad para proporcionar 6,6 g adicionales del producto C-8.C1, con un 50 % de pureza. Rendimiento: 33 %.

Compuesto (2), C2: (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-(2.4-d¡metoxip¡rimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'/-/-espironndol-3.1'-pinoloí3.4-clpirrol1-2,3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por SFC quiral (método B) o RP-HPLC quiral (método N) del compuesto racémico C-10.C2; > 99 % ee; tr: 9,31 min. (método N'); 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 5 11,23 (br s, 1H), 8,50 (br s, 1H), 7,45 (ddd, J = 8,9, 4,1, 2,7 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,32 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 - 7,13 (m, 1H), 7,08 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 6,3, 2,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,94 (br s, 3H), 2 ,48-2,39 (m, 1H), 0,85 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 0,44 (d, J= 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-cfe) 5175,51, 166,44, 164,70, 164,24, 158,75, 157,96, 156,74, 144,03, 135,39, 134,14, 130,82, 130,75, 129,58, 128,33, 127,30, 125,99, 125,66, 125,54, 123,64, 123,04, 119,63, 118,75, 118,68, 118,57, 116,25, 111,12, 70,04, 55,67, 55,01,49,04, 25,34, 22,00, 21,50-20,80.

Compuesto C-10.C2: 6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofeniD-5'-(2.4-dimetox¡p¡rimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1.2,3'.5'-tetrahidro-2'/-/-esp¡ro[¡ndol-3,1'-p¡rrolo[3.4-c1pirrol1-2.3'-diona

A un matraz de 100 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadió el compuesto C-9.C2 (2,86 g, 4,76 mmol) y el matraz se enfrió en un baño de hielo. Luego, se añadió TFA (25 mL) (alrededor de 2 mL/min). Se retiró el baño de enfriamiento y la reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 72 % del área del pico del producto. Luego, la mezcla se vertió en hielo (alrededor de 100 g) y se diluyó con DCM (50 mL). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con DCM. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y el solvente se eliminó al vacío. La mezcla cruda se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (AcOEt/hexano 40 % —> 60 %). El sólido de color pardo obtenido después de la cromatografía (1,51 g) se agitó en AcOEt al 60 % en n-hexano (10 mL) durante 0,5 h y luego se filtró, se lavó con AcOEt al 60 % en n-hexano y se secó al aire. Como resultado, se obtuvo el compuesto C-10.C2 como un sólido de color pardo claro (1,35 g, 46 % de rendimiento) con 96 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto C-9.C2: A/-(5-cloro-2-fluorofenin-4-(6-cloro-3-hidroxi-2-oxo-2.3-dihidro-7F/-indol-3-in-1-(2.4-dimetoxÍpirimidin-5-ih-5-(propan-2-in-7H-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 500 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C2 (5 g, 8,6 mmol, 1 eq) y THF (80 mL), seguido de fosfito de trimetilo (2 mL, 17,2 mmol, 2 eq). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se añadió ferc-pentóxido de sodio (3,79 g, 34,4 mmol, 4 eq) en una porción. Se retiró el baño de enfriamiento y la reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2). Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 91 % del área del pico del producto. Se eliminó alrededor del 90 % del solvente y dicha mezcla obtenida se diluyó con 100 mL de agua. La suspensión resultante se acidificó con HCI 3 M a pH - 5 y se diluyó con 100 mL de DCM. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con DCM. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron con Na2SC>4 y el solvente se eliminó al vacío. El producto crudo C-9.C2 se obtuvo como un sólido/espuma de color pardo rojizo (72 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS) y se usó en la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional.

Compuesto C-8.C2: A/-(5-doro-2-fluorofenil)-4-(6-cloro-2-oxo-2.3-dih¡dro-ÍH-indol-3-il)-1-(2.4-dimetoxipirim¡d¡n-5-¡l)-5-( propan-2-i I)- 1H-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 500 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron los compuestos C-4A (12,48 g, 50 mmol, 1 eq), C-7A (7,76 g, 50 mmol, 1 eq) y C-6B (9,88 g, 50 mmol, 1 eq) seguido de AcOH glacial (125 mL), y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 90 °C (temperatura del baño de calentamiento) y se agitó a esta temperatura durante 16 h. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi completo de los materiales de partida (lo que equivale al 40 % del área del pico del producto). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el AcOH se evaporó a sequedad. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (del 30 % al 60 % de AcOEt en n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-8.C2 como un sólido/espuma de color rojo oscuro (8,7 g, 30 % de rendimiento) con un 84 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto (3), C3: (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-met¡lfenil)-6'-(propan-2-il)-5'-(trimetoxipirim¡din-5-il)-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'H-esp¡roíindol-3,1 '-pirrolof3.4-clpirrol1-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por SFC quiral (método C) o RP-HPLC quiral (método T) del compuesto racémico C-10.C3; > 99 % ee; tr: 16,7 min (método T'). 1H NMR (600 MHz, DMSO-cís) mezcla de rotámeros: 511,31 (br s, 1H), 10,90 (br s, 1H), 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,33 — 7,18 (m, 4H), 7,02 (dd, J = 8.1.2.0 Hz, 1H), 6,91 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,86 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 1,4 Hz, 3H), 3,93 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 3,90 (d, J = 2,4 Hz, 3H), 2,38 - 2,32 (m, 1H), 2,24 (s, 1H), 2,07 (s, 2H), 0,80 (dd, J = 13,5, 7.0 Hz, 3H), 0,41 (dd, J = 10,0, 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (151 MHz, DMSO-cf6) mezcla de rotámeros: 5176,16,174,19, 167,19, 167,05, 166,99, 166,89, 163,67, 163,37, 162,67, 143,81, 137,44, 136,75, 136,68, 136,17, 134,82, 134,74, 133,24, 133,19, 132,37, 132,31, 129,95, 129,22, 128,11, 127,96, 127,92, 127,45, 127,11, 127,05, 125,63, 122,64, 122,44, 122,19, 119,53, 119,28, 117,89, 110,67, 110,59, 99,16, 70,13, 69,70, 55,04, 54,78, 54,74, 54,71, 40,41, 40,03, 39,89, 24,99, 24,97, 21,84, 21,06, 21,02, 20,85, 20,78, 17,97, 17,82.

Compuesto C-10.C3: 6-doro-2'-í5-cloro-2-met¡lfenin-6'-Ípropan-2-ih-5'-(trimetoxipirim¡din-5-in-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'H-espirofindol-3.1 '-pirrolof3.4-clPirroll-2.3'-d¡ona

A un matraz de 25 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron a temperatura ambiente el compuesto C-9.C3 (6,7 g, 1,19 mmol) y AcOH (10 mL). Luego se añadió MsOH (0,077 mL. 1,19 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 3 h a 80 °C. Después de 1 h, el análisis UPLCMS mostró un 93 % del área del pico del producto. Se evaporó AcOH y el residuo se disolvió en AcOEt, se lavó con NaHCOa saturado, salmuera y se secó con MgS04. La mezcla se concentró hasta alrededor de 5 mL de AcOEt y la suspensión se filtró. El sólido recogido se lavó con 5 mL de AcOEt y se secó al vacío. El producto deseado C-10.C3 se obtuvo como un sólido blanco (0,31 g, 43 % de rendimiento, 98 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-9.C3: A/-(5-doro-2-met¡lfenil)-4-(6-cloro-3-h¡droxi-2-oxo-2.3-dihidro-'fH-indol-3-il)-5-(propan-2-il)-1-(trimetoxip¡rimidin-5-il)-'/H-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 50 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C3 (0,8 g, 1,3 mmol, 1 eq) y THF (15 mL). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo a 0 °C y se añadió fosfito de trietilo (0,45 mL, 2,6 mmol, 2 eq). Después de 10 minutos a 0 °C, se añadió feropentóxido de sodio (0,6 g, 5,2 mmol, 4 eq) en varias porciones. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2) y se monitoreó por TLC (5 % de MeOH en CHCI3). Después de 24 h, la mezcla se vertió en hielo y la reacción se acidificó con HCI 1 M a pH - 5. Después de la adición de AcOEt (50 mL), la mezcla se transfirió a un embudo de decantación. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo una vez más con AcOEt (25 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SC>4 y el solvente se eliminó al vacio. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna mediante el uso de MeOH al 1 % en CHCI3 como eluyente. El producto deseado C-9.C3 se obtuvo como un sólido de color rosa (0,8 g, 90 % de rendimiento, 93 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-8.C3: A/-(5-cloro-2-met¡lfenil)-4-(6-cloro-2-oxo-2.3-dih¡dro-ffl-indol-3-il)-5-(propan-2-il)-1-(trimetoxipirimidin-5-il)-7H-pirrol-3-carboxamida

En un matraz de fondo redondo de 25 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron los compuestos C-4A (0,67 g, 2,7 mmol, 1 eq), C-7D (0,5 g, 2,7 mmol, 1 eq) y C-6C (0,52 g, 2,7 mmol, 1 eq) seguido de AcOH glacial (10 mil) y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 90 °C y se agitó a esta temperatura durante la noche. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi total de los materiales de partida (lo que equivale al 45 % del área del pico del producto). A continuación, el AcOH se evaporó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (n-hexano/AcOEt, 4:1 —► 1:1) para dar el producto esperado C-8.C3 como un sólido rojo (0,8 g, 40 % de rendimiento, 82 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto (4), C4: f3S)-6-cloro-2'-(3-cloro-4-fluorofenil)-5'-(2.4-dimetox¡p¡rimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1.2,3'.5'-tetrahidro-2'/-/-espironndol-3.1'-pirroloí3.4-clpirrol1-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por SFC quiral (método D) o RP-HPLC quiral (método K) del compuesto racémico C-10.C4; > 99 % ee; tr: 3,79 min (método K'). 1H NMR (500 MHz, CDCI3) 58,47 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,24 - 7,19 (m, 1H), 7,18 - 7,12 (m, 1H), 7,12 - 7,06 (m, 1H), 7,05 - 6,96 (m, 2H), 6,96 -6,86 (m, 2H), 4,07 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 2,49 - 2,38 (m, 1H), 0,90 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,52 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDCI3) 5175,2, 166,5, 165,6, 164,9, 158,5, 157,0, 156,5, 142,0, 136,4, 134,3, 132,6, 132,5, 131,0, 128,6, 128,5, 126,5, 126,2, 123,8, 122,8, 121,4, 121,3, 120,7, 117,8, 117,0, 116,8, 116,2, 111,6, 70,1, 55,6, 54,7, 25,6,21,2,1,9.

Compuesto C-10.C4: 6-cloro-2'-(3-cloro-4-fluorofenil)-5'-(2.4-dimetox¡p¡rimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'H-espirofindol-3.1'-pirroloí3.4-clpirrol1-2.3'-diona

A un matraz de 250 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-9.C4 (10,34 mmol) y TFA (70 mL) a temperatura ambiente (se añadió TFA alrededor de 5 mL/min). Luego, la reacción se agitó durante 3 h a 40 °C y se monitoreó por TLC. Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 71 % del área del pico del producto. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a sequedad. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (10 % - 50 % AcOEt/n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-10.C4 como un sólido/espuma de color pardo claro (5,44 g, - 80 % de rendimiento después de dos etapas, que comienzan desde C-8.C4) con un 88 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto C-9.C4: 4-(6-cloro-3-h¡drox¡-2-oxo-2.3-d¡h¡dro-7H-indol-3-iD-A/-(3-cloro-4-fluorofen¡0-1-(2.4-d¡metoxipirimidin-5-il)-5-(propan-2-in-íAV-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 500 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C4 (6,04 g, 10,34 mmol, 1 eq) y THF (140 mL). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo a 0 °C y se añadieron en una porción fosfito de trimetilo (1,83 mL, 15,51 mmol, 1,5 eq), fero-pentóxido de sodio (2,28 g, 20,68 mmol, 2 eq). La mezcla de reacción se agitó durante 4 h a esta temperatura (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2) y se monitoreó por TLC. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 87 % del área del pico del producto deseado. A continuación, se añadió agua fría (50 mL) a la mezcla y la reacción se acidificó con HCI al 5 % hasta pH ~ 5. La mezcla de reacción se agitó durante alrededor de 0,5 h a temperatura ambiente y el precipitado resultante se filtró y se lavó con 100 mL de agua fría. El sólido así obtenido se redisolvió en AcOEt, se lavó con agua, se secó con Na2S04 y se evaporó el solvente. El producto crudo C-9.C4 se obtuvo como un sólido de color pardo (85 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS) y se usó en la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional.

Compuesto C-8.C4: 4-(6-cloro-2-oxo-2.3-d¡h¡dro-fH-indol-3-¡l)-A/-(3-cloro-4-fluorofen¡l)-1-(2.4-dimetoxipirim¡d¡n-5-¡l)-5-( propan-2-i I)- 1/-/-pirrol-3-carboxamida

A un reactor de microondas de 250 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron los compuestos C-4A (12,48 g, 50 mmol, 1 eq), C-7A (8,5 g, 55 mmol, 1,1 eq) y C-6D (9,9 g, 50 mmol, 1 eq) seguido de AcOH glacial y el reactor de MW se cerró herméticamente. La mezcla se calentó hasta 90 °C (300 Watt) y se agitó durante 5 h a esta temperatura. Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi completo de los materiales de partida (lo que equivale al 40 % del área del pico del producto). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el AcOH se evaporó a sequedad. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía en columna (10 % de acetona/DCM). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-8.C4 como un sólido/espuma de color pardo oscuro (6,96 g, 20,7 % de rendimiento) con un 87 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto (5), C5: (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-6'-(propan-2-il)-5'-(tr¡metoxipirim¡d¡n-5-il)-1.2,3',5'-tetrahidro-2'/-/-espirofindol-3.1'-pirrolof3,4-clpirrol1-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa porSFC quiral (método E) o RP-HPLC quiral (método L) del compuesto racémico C-10.C5; > 99 % ee; tr: 7,18 min. (método L'); 1H NMR (600 MHz, DMSO-cfe) 5 11,20 (s, 1H), 7,44 (ddd, J=8,9, 4,1,2,7 Hz, 1H), 7,31 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,15 (dd, J= 8,1, 1,7 Hz, 1H), 7,08 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 6,3, 2,7 Hz, 1H), 6,89 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 2,40-2,31 (m, 1H), 0,82 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,41 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (151 MHz, DMSO-cfe) 5 175,64, 167,54, 167,40, 164,33, 163,18, 158,6, 156,93, 144,05, 135,29, 133,95, 130,69, 129,61, 128,30, 127,19, 126,20, 125,74, 125,65, 123,01, 119,35, 118,69, 118,55, 111,07, 99,55, 70,08, 55,50, 55,20, 49,02, 25,42, 21,46, - . - - - - - - - - - - - - - - - . . . - -2'fí-esDiroíindol-3.1 '-pirrp|pf3.4-olPirrol1-2.3'-d¡pna

A un matraz de 100 mL equipada con una barra de agitación magnética, se añadieren a temperatura ambiente el cempueste C-9.C5 (6,7 g, 10,6 mmel) y TFA (15 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. Después de este tiempe, el análisis UPLCMS mostró un 85 % del área del picc del prcductc. La mezcla de reacción se vertió sebre hiele y se extraje des veces ccn DCM (2 x 30 mL). Las fases crgánicas ccmbinadas se lavaren cen agua (30 mL), se secaren con Na2SO* y se evaporaron a sequedad. Se añadió AcOEt (50 mL) al residuo y se observó la formación de un precipitado rosado. El sólido se filtró, se lavó con varias porciones de AcOEt frío y se secó al aire. El producto deseado C-10.C5 se obtuvo como un sólido de color rosa pálido (5,17 g, 80 % de rendimiento, 99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-9.C5: A/-(5-cloro-2-fluorofenil)-4-(6-cloro-3-hidroxi-2-oxo-2.3-dihidro-7F/-indol-3-il)-5-(propan-2-il)-1-(trimetoxipirimidin-5-il)-ffl-pirrol-3-carfaoxamida

A un matraz de 500 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C5 (5 g, 8,14 mmol, 1 eq) y THF (150 mL). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo a 0 °C y se añadió fosfito de trimetilo (1,92 mL, 16,3 mmol, 2 eq). Después de 10 minutos a 0 °C, se añadió tere -pentóxido de sodio (3,6 g, 32,6 mmol, 4 eq) en varias porciones. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2) y se monitoreó por TLC (AcOEt al 40 % en n-hexano). Luego, la mezcla se vertió en hielo y la reacción se acidificó con una solución acuosa de HCI 0,5 M a pH - 5. Después de la adición de DCM (100 mL), la mezcla se transfirió a un embudo de decantación. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo una vez más con DCM (100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con NajS04 y el solvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (30 % - 50 % AcOEt/nhexano). El producto deseado C-9.C5 se obtuvo como un sólido parduzco (2,41 g, 47 % de rendimiento, 96 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-8.C5: A/-(5-cloro-2-fluorofeni|)-4-(6-cloro-2-oxo-2.3-dihidro-7H-indol-3-i|)-5-(propan-2-i|)-1-(trimetoxip¡rimidin-5-il)-7H-pirrol-3-carboxamida

En un matraz de fondo redondo de 150 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron los compuestos C-4A (6,3 g, 25,3 mmol, 1 eq), C-6B (4,7 g, 130 mmol, 1 eq) y C-7D (5 g, 117 mmol, 1 eq) seguido de AcOH (40 mL), y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 80 °C y se agitó a esta temperatura durante la noche. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi completo de los materiales de partida (lo que equivale al 66 % del área del pico del producto). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el sólido rojo del producto C-8.C5 se filtró, se lavó con AcOH y se secó al aire (10 g, 64 % de rendimiento, 82 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto (6), C6: (3SV6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-f6-(dimetilamino)-4-metoxipiridin-3-il[-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3.1'-pirrolo[3,4-clpirrol1-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por NP-HPLC quiral (método F) o RP-HPLC quiral (método J) del compuesto racémlco C-10.C6; > 99 % ee; tr: 14,66 min. (método J'); 1H NMR (500 MHz, DMSO-de) 511,20 (br s, 1H), 7,91 (d, J = 22,0 Hz, 1H) 7,43 (ddd, J = 8,9, 4,1, 2,7 Hz, 1H), 7,30 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,16 (dd, J = 8,0, 2,1 Hz, 1H), 7,10-7,03 (m, 2H), 6,89 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,25 (d, J= 5,6 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 20,8 Hz, 3H), 3,09 (s, 6H), 2 ,47 -2 ,37 (m, 1H), 0,83 (dd, J= 12,2, 7,0 Hz, 3H), 0,41 (t, J= 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-de) 5 175,77, 175,72, 164,50, 162,08, 161,95, 161,08, 158,79, 156,79, 147,23, 144,06, 135,26, 134,43, 134,39, 130,67, 130,60, 129,61, 128,30, 127,36, 127,20, 126,29, 126,23, 125,85, 125,75 123,20, 122,99, 122,94, 118,84, 118,71, 118,64, 118,53, 115,45, 111,06, 88,48, 70,09, 56,06, 56,03, 38,38, 25,38, 22,01, 21,63, 21,27,21,04.

Compuesto C-10.C6: 6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofeni0-5'-f6-(dimetilamino)-4-metox¡piridin-3-il1-6'-(propan-2-¡0-1,2.3',5'-tetrah¡dro-2'/-/-esp¡rof¡ndol-3,1'-p¡rrolof3,4-clp¡rroll-2.3'-d¡ona

A un matraz de 100 ml_ equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-9.C6 (2,96 g, 4,8 mmol) y TFA (30 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a 40 °C. Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 97 % del producto deseado C-10.C6. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad. Al residuo se añadieron 20 mL de metanol y NaHCC>3 saturado (200 mL). La suspensión se calentó a reflujo durante 2 h y luego se enfrió a temperatura ambiente. El precipitado se filtró y se maceró en metanol (20 mL). El sólido se recogió por filtración, se lavó con una pequeña cantidad de metanol y se secó al vacío para dar el producto deseado C-10.C6 como el sólido blanquecino (2,3 g, 83 % de rendimiento, >99 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-9.C6: A/-(5-doro-2-fluorofeni0-4-(6-cloro-3-h¡drox¡-2-oxo-2.3-dih¡dro-1H-indol-3-il)-1-f6-(dimetilamino1-4-metoxipiridin-3-ill-5-(prooan-2-in-7H-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 100 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C6 (4 g, 6,7 mmol, 1 eq) y THF (30 mL), seguido de fosfito de trietilo (1,72 mL, 10,1 mmol, 1,5 eq). Luego, la mezcla se enfrió a 3 °C y se añadió ferc-pentóxido de sodio (1,48 g, 13,4 mmol, 2 eq) en varias porciones. Después de calentar hasta temperatura ambiente, la mezcla de reacción se agitó durante 22 h (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2). Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 94 % del producto deseado C-9.C6. A la mezcla se le añadió agua (200 mL) y HCI 1 M para alcanzar un pH de ~ 8. La fase acuosa se extrajo con AcOEt (3 x 150 mL). Las fases orgánicas se combinaron y secaron con MgS04. Después de la concentración, el material crudo se purificó adicionalmente por cromatografía (10-30 % ^PrOH/n-hexano) para proporcionar el compuesto C-9.C6 (3 g, 72 % de rendimiento, 94 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-8.C6: A/-(5-cloro-2-fluorofenil)-4-(6-cloro-2-oxo-2.3-dihidro-'fH-indol-3-il)-1-[6-(dimetilamino)-4-metoxipiridin-3-in-5-(propan-2-il)-7H-pirrol-3-carboxamida

En un matraz a presión de fondo redondo (250 mL) equipado con una barra de agitación magnética, se suspendieron los compuestos C-4A (5,37 g, 21,5 mmol, 1 eq), C-7C (3,6 g, 21,5 mmol, 1 eq), C-6B (4,25 g, 21,5 mmol, 1 eq) y PTSA H2O (4,09 g, 21,5 mmol, 1 eq) en agua (9 mL) y metanol (36 mL). El matraz se cerró herméticamente y luego la mezcla se calentó hasta 60 °C y se agitó a esta temperatura durante 23 h. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 17 % del producto esperado C-8.C6. Luego, se añadió una porción adicional del compuesto C-6B (1,06 g, 5,4 mmol), y la mezcla se calentó hasta 75 °C y se agitó a esta temperatura durante 42 h. Se tomó la muestra y el análisis UPLCMS mostró un 58 % del producto esperado C-8.C6. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad. Al residuo se le añadieron DCM (200 mL), solución al 5 % de NaHC03 (150 mL) y la mezcla se agitó durante 20 min. La fase acuosa se extrajo con DCM (4 * 200 mL). Las fases orgánicas se combinaron y secaron con MgSCU. Después de la concentración, el material crudo se purificó por cromatografía en columna (20 - 50 % AcOEt/n-hexano) para proporcionar el compuesto C-8.C6 (4,1 g, 32 % de rendimiento, 90 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto (7), C7: (3S)-6-cloro-2'-(3.4-d¡fluorofen¡l)-5'-(2.4-dimetox¡p¡rimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrah¡dro-2'H-espironndol-3.1'-pirrolo[3.4-clpirrol1-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por SFC quiral (método G) o RP-HPLC quiral (método O) del compuesto racémico C-10.C7; > 99 % ee; tr: 5,61 min (método O'). 1H NMR (500 MHz, CDCb) 58,76 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,23 - 7,18 (m, 1H), 7,11 - 7,06 (m, 1H), 7,06 - 6,98 (m, 2H), 6,98 - 6,90 (m, 1H), 6,90 -6,85 (m, 1H), 6,83 - 6,76 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 2,49 - 2,39 (m, 1H), 0,90 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,51 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDCI3) 5 175,3, 166,5, 165,7, 164,9, 157,0, 150,9, 149,0, 148,9, 148,8, 142,2, 136,4, 134,3, 132,3, 126,5, 126,2, 124,9, 123,7, 122,9, 120,6, 118,1, 118,0, 117,8, 117,5, 117,4, 116,1, 111,7, 77,3, 77,0, 76,7, 70,2, 55,6, 54,7, 25,6, 21,3.

Compuesto C-10.C7: 6-doro-2'-(3.4-d¡fluorofenin-5'-(2.4-d¡metoxip¡rimidin-5-i0-6'-fpropan-2-in-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'H-espiroíindol-3.1 '-pirrolof3.4-clPirroll-2.3'-d¡ona

A un matraz de 250 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-9.C7 (7,34 g, 15,57 mmol) y TFA (80 mL) a temperatura ambiente (se añadió TFA alrededor de 5 mL/min). Luego, la reacción se agitó durante 3 h a 40 °C. Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 84 % del área del pico del producto. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a sequedad. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (20 % - 50 % AcOEt/n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-10.C7 como un sólido/espuma de color pardo claro (4,45 g, ~ 63 % de rendimiento después de dos etapas de síntesis) con un 93 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto C-9.C7: 4-(6-doro-3-hidroxi-2-oxo-2.3-dihidro-'ffí-¡ndol-3-il)-A/-(3.4-difluorofenil)-1-(2.4-dimetoxipirimid¡n-5-¡l)-5-( prooan-2-i I)- 1H-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 500 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C7 (7,14 g, 12,57 mmol, 1 eq) y THF (140 mL). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo a 0 °C y se añadió fosfito de trimetilo (2,25 mL, 18,86 mmol, 1,5 eq), seguido de ferc-pentóxido de sodio (2,77 g, 25,14 mmol, 2 eq) en una porción. La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h a 0 °C (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCfe). Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 88 % del área del pico del producto. Se añadió agua fría (50 mL) y la reacción se acidificó con HCI al 5% hasta pH ~ 5. La mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente 0,5 h a temperatura ambiente y el precipitado resultante se filtró y se lavó con 100 mL de agua fría. El sólido así obtenido se redisolvió en AcOEt, se lavó con agua, se secó con Na2SC>4 y se evaporó el solvente. El producto crudo C-9.C7 se obtuvo como un sólido de color pardo (83 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS) y se usó en la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional.

Compuesto C-8.C7: 4-(6-doro-2-oxo-2.3-dihidro-fH-indol-3-iP-A/-(3.4-difluorofenih-1-(2.4-dimetoxipirimidin-5-iP-5-(propan-2-il)-7H-pirrol-3-carboxamida

A un tubo sellado de 250 mL equipado con barra de agitación magnética, los compuestos C-4A (12,48 g, 50 mmol, 1 eq), C-7A (7,76 g, 50 mmol, 1 eq) y C-6E (9,06 g, 50 mmol, 1 eq) seguido de AcOH (100 mL), y el tubo se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 80 °C (temperatura del baño de calentamiento) y se agitó a esta temperatura durante la noche. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi completo de los materiales de partida (lo que equivale al 40 % del área del pico del producto). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el AcOH se evaporó a sequedad. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía (50 % de AcOEt/n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-8.C7 como un sólido/espuma de color pardo oscuro (7,63 g, 24,9 % de rendimiento, 84 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto (8), C8: (3S)-6-doro-2'-(3.4-d¡fluorofenil)-5'-(4.6-d¡metoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-iD-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'/-/-espironndol-3.1'-pirrolof3.4-clpirroll-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por SFC quiral (método H) o RP-HPLC quiral (método N) del compuesto racémico C-10.C8; > 99 % ee; tr: 6,2 min. (método N'); 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 5 11,15 (brs, 1H), 8,07 (d, J=34,9 Hz, 1H), 7,46 - 7,37 (m, 1H), 7 ,37-7 ,27 (m, 2H), 7,15 (m, 1H), 7,08 (dd, J = 8,0, 1,9 Hz, 1H), 6,92 (m, J = 2,2 Hz, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,64 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,83 (d, J = 23,6 Hz, 3H), 2,37 (m, 1H), 0,85 (dd, J = 13,0, 7,0 Hz, 3H), 0,41 (dd, J = 9,4, 6,9 Hz, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-afe) 5175,18, 175,05, 165,31, 164,56, 162,80, 162,74, 149,75, 149,64, 147,79, 147,68, 147,33, 147,24, 145,92, 145,79, 143,48, 143,43, 134,62, 134,59, 133,42, 127,08, 126,18, 126,10, 122,71, 122,67, 122,58, 120,23, 119,41, 117,79, 117,70, 117,55, 117,23, 117,09, 110,62, 93,37, 93,29, 69,61, 56,21, 53,64, 24,90, 21,39, 21,08, 20,64, 20,50.

Compuesto C-10.C8: 6-doro-2'-(3.4-d¡fluorofeniD-5'-(4.6-dimetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrahidro-2'f7-esp¡rof¡ndol-3.1'-pirrolo[3.4-c1p¡rro1e1-2.3'-d¡

A un matraz de 100 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadió el compuesto C-9.C8 (2 g, 3,5 mmol) y el matraz se enfrió en un baño de hielo. Luego, se añadió lentamente TFA (20 mL) (alrededor de 2 mL/min). Se retiró el baño de enfriamiento y la reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 75 % del pico del producto. La reacción se agitó durante 1 h adicional y la mezcla se vertió en hielo (alrededor de 50 g) y se diluyó con DCM (50 mL). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM tres veces (3 x 50 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera y el solvente se eliminó al vacío. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (50 % de AcOEt en n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-10.C8 como un sólido/espuma de color pardo rojizo (815 mg, 41 % de rendimiento) con un 98 % de pureza, de acuerdo con el análisis UPLCMS. La reacción anterior se repitió tres veces más y todas las muestras obtenidas (5,76 g) del compuesto C-10.C8 se combinaron y agitaron en la mezcla de 25 mL de AcOEt/n-hexano (1:5). La mezcla se calentó a reflujo y se añadió AcOEt hasta que se disolvió todo el sólido restante. Luego se añadieron gota a gota 75 mL de n-hexano y la mezcla se agitó 16 h a temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con AcOEt/n-hexano (1:10, 25 mL) y se secó a alto vacío. Como resultado, se obtuvo el producto final C-10.C8 como un sólido rojo claro (4,77 g, 98 % de pureza, de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-9.C8: 4-(6-cloro-3-hidroxi-2-oxo-2.3-dihidro-7/-/-indol-3-il)-/V-(3,4-difluorofenil)-1 -(4,6-dimetoxipiridin-3-il)-5-( propan-2-i I)- 7H-pirrol-3-carboxam ida

A un matraz de 100 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C8 (2 g, 3,5 mmol, 1 eq) y THF (35 mL), seguido de fosfito de trimetilo (0,83 mL, 7 mmol, 2 eq). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se añadió ferc-pentóxido de sodio (1,54 g, 14 mmol, 4 eq) en una porción. Se retiró el baño de enfriamiento y la reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2). Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 80 % del área del pico del producto. Después de una hora más de agitación, se eliminó alrededor del 90 % del solvente y la mezcla obtenida se diluyó con 50 g de hielo. La suspensión obtenida se acidificó con HCI 1 M a pH ~ 5 y adicionalmente se diluyó con 50 mL de DCM. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 30 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron con Na2S04 y el solvente se eliminó al vacío. El producto crudo C-9.C8 se obtuvo como un sólido/espuma de color rojo-negro (70 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS) y se usó en la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional (el rendimiento superó el 100 %).

Compuesto C-8.C8: 4-í6-cloro-2-oxo-2.3-dihidro-1/-/-indol-3-in-N-í3.4-difluorofenih-1-í4.6-dimetoxÍpiridin-3-in-5-(propan-2-ih-1/7-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 500 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron los compuestos C-4A (8,1 g, 32,4 mmol, 1 eq), C-7B (5 g, 32,4 mmol, 1 eq) y C-6E (5,9 g, 32,4 mmol, 1 eq) seguido de AcOH (80 mL), y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 85 °C (temperatura del baño de calentamiento) y se agitó a esta temperatura durante 16 h. Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi completo de los materiales de partida (lo que equivale al 55 % del área del pico del producto). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el AcOH se evaporó a sequedad. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (del 30 % a 60 % de AcOEt en n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-8.C8 como un sólido rojo claro (8 g, 44 % de rendimiento) con un 87 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto (9), C9: í3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofeniD-5'-(4.6-dimetoxipiridin-3-il)-6'-(propan-2-il)-1.2.3'.5'-tetrah¡dro-2'H-espironndol-3.1'-pirrolo[3.4-clpirrol1-2.3'-diona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por SFC quinal (método I) o RP-HPLC quinal (método S) del compuesto nacémico C-10.C9; > 99 % ee; tr: 8,85 min (método S'). 1H NMR (500 MHz, DMSO-ofs) 5 11,23 (bn s, 1H), 8,10 (d, J = 26,0 Hz, 1H), 7,44 (ddd, J = 8,9, 4,1,2,7 Hz, 1H), 7,35 - 7,27 (m, 2H), 7,17 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1H), 7 ,10-7,02 (m, 2H), 6,90 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,83 (d, J = 20,7 Hz, 3H), 2,45-2,32 (m, 1H), 0,84 (dd, J= 9,4, 7,0 Hz, 3H), 0,42 (dd, J= 7,1,4,0 Hz, 3H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-ofe) 5 175,68, 165,85, 164,38, 163.,36, 163,24, 158,77, 156,77,146,44, 144,17, 135,31, 134,21, 130,70, 129,60, 128,33, 127,33, 126,18, 125,78, 125,66, 123,46, 122,92, 120,71, 119,27, 118,72, 118,54, 111,11, 93,90, 70,08, 56,78, 54,18, 25,42, 22,00, 21,64, 21,24, 21,04.

Compuesto C-10.C9: 6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofeni0-5'-(4.6-dimetoxÍpiridin-3-i0-6'-(proDan-2-in-1.2,3'.5'-tetrahidro-2'H-espironndol-3.r-pirrolof3.4-clpirrol1-2.3'-diona

En un matraz de 100 mL equipado con barra de agitación magnética, se disolvió el compuesto C-9.C9 (5,8 g, 9,68 mmol) en 30 mL de DCM anhidro y se añadieron 10 mL de TFA en una porción. La reacción se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 54 % del área del pico del producto. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad. El residuo se agitó en 30 mL de AcOEt durante 1 h y un sólido gris pálido precipitó de la mezcla. El sólido se separó por filtración y se secó al aire. Como resultado se obtuvo el producto C-10.C9 (2,2 g, 34,1 % de rendimiento después de 2 etapas, que comienza desde C-8.C9, 94 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-9.C9: A/-(5-cloro-2-fluorofen¡l)-4-(6-cloro-3-h¡drox¡-2-oxo-2.3-d¡h¡dro-ÍH-¡ndol-3-¡l)-1-(4,6-dimetoxipiridin-3-il)-5-(propan-2-il)-7A7-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 100 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C9 (6,08 g, 10,5 mmol, 1 eq) y THF (62 mL), seguido de fosfito de trimetilo (2,47 mL, 21 mmol, 2 eq). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se añadió ferc-pentóxido de sodio (3,47 g, 31,5 mmol, 3 eq) en una porción. Se retiró el baño de enfriamiento y la reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2). Después de este tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 94 % del área del pico del producto. La mezcla de reacción se enfrió a alrededor de -10 °C, luego se vertió sobre hielo y la reacción se acidificó con HCI 0,5 M a pH - 5. La fase acuosa se extrajo con AcOEt (3 x 100 mL), se secó con Na2SÜ4 y el solvente se evaporó al vacío. El producto crudo C-9.C9 se obtuvo como un sólido/espuma de color rojo-negro (pureza del 68 % de acuerdo con el análisis UPLCMS) y se usó en la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional (el rendimiento superó el 100 %).

Compuesto C-8.C9: A/-(5-doro-2-fluorofenil)-4-(6-cloro-2-oxo-2.3-dihidro-1H-indol-3-il)-1-(4.6-dimetoxipiridin-3-il)-5-(propan-2-il)-7H-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 100 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron los compuestos C-4A (7,79 g, 30 mmol, 1 eq), C-7B (4,68 g, 30 mmol, 1 eq) y C-6B (6 g, 30 mmol, 1 eq) seguido de AcOH (60 mL), y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 85 °C (temperatura del baño de calentamiento) y se agitó a esta temperatura durante 16 h. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi completo de los materiales de partida (lo que equivale al 40 % del área del pico del producto). La mezcla de reacción se enfrió a alrededor de 15 °C y un abundante precipitado sólido rojo se separó por filtración de la mezcla de reacción. El filtrado se evaporó a sequedad. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (10 % a 60 % de AcOEt en n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-8.C9 como un sólido rojo claro (5,58 g, 31,5 % de rendimiento) con un 93 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto (10), C10: f3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2.4-difluorofenil)-5'-(2.4-dimetox¡p¡rimidin-5-il)-6'-(propan-2-¡l)-1.2.3'.5'-tetrah¡dro-2'H-esp¡ronndol-3.1'-pirroloí3.4-clp¡rrol1-2.3'-d¡ona

El compuesto del título se obtuvo después de la separación preparativa por RP-HPLC quiral del compuesto racémico C-10.C10 mediante el uso del método P; > 99 % ee; tr: 9,96 min. (método P'); 1H NMR (500 MHz, DMSO-rfe) 511,22 (brs, 1H), 8,50 (brs, 1H), 7,64 (t, J = 9,4 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,20 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,10 (dd, J= 8,0, 2,0 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,95 (s„ 3H), 2,47 - 2,41 (m, 1H), 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,44 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-cfe) 5 175,36, 170,76, 166,43, 164,71, 164,35, 159,05, 158,96, 158,36, 158,26, 157,95, 157,03, 156,93, 156,36, 156,26, 144,01, 135,46, 134,20, 131,13, 127,41, 125,84, 123,55, 123,09, 121,72, 121,63, 119,46, 118,77, 116,23, 115,59, 115,44, 111,19, 107,31, 107,10, 106,90, 70,05, 60,19, 55,66, 55,01, 25,34, 22,31 -20,83

Compuesto C-10.C10: 6-cloro-2'-(5-cloro-2.4-d¡fluorofen¡l)-5'-(2.4-d¡metox¡p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)-6'-(propan-2-¡l)-1.2.3'.5'-tetrah¡dro-2'H-espironndol-3,1'-pirrolo[3,4-clpirrolel-2.3'-d¡ona

Se colocó AcOH (25 mL) en un matraz de 100 mL equipado con una barra de agitación magnética. Luego, se añadió C-9.C10 (2,3 g, 4 mmol, 1 eq) en una porción. Se añadió gota a gota MsOH (0,25 mL, 4,85 mmol, 1,2 eq) y la mezcla se agitó durante 2 h a 45 °C. La mayor parte del AcOH se evaporó y el residuo se disolvió en DCM (100 mL), luego se añadieron 100 mL de agua y la mezcla se trató con NaOH 3 M hasta alcanzar un pH de ~ 8. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron con MgSCU y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (CHCbiMeOH; 100:0 -«■ 98:2) para obtener 1,7 g del producto C-10.C10 con un 91 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Compuesto C-9.C10: A/-(5-cloro-2.4-d¡fluorofenil)-4-(6-cloro-3-h¡droxi-2-oxo-2.3-dihidro-W-indol-3-il)-1-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-5-Ípropan-2-il)-1H-pirrol-3-carboxamida

A un matraz de 100 mL equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C10 (8,9 g, 14,8 mmol, 1 eq) y THF (50 mL), seguido de fosfito de trietilo (3,8 mL, 22,2 mmol, 1,5 eq). La solución se enfrió a 0 °C y luego se añadió íerc-butóxido de sodio (2,85 g, 29,6 mmol, 2 eq) en varias porciones. La mezcla de reacción se agitó durante 3 h a temperatura ambiente (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2). Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 82 % del producto deseado. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una mezcla enfriada ( 0 - 5 °C) de agua (150 mL) y HCI al 36 % (5 mL). Después de la adición de acetato de etilo (100 mL), la mezcla se transfirió a un embudo de decantación. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo una vez más con AcOEt (100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04 y se concentraron al vacío. El residuo oleoso se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (DCM/MeOH 100:0 —> 98:2). Se aislaron dos fracciones del producto C-9.C10: 3 g con 85 % de pureza y 3 g con 41 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS. Rendimiento: 50 % (que incluye ambas fracciones).

Compuesto C-8.C10: N-(5-cloro-2.4-difluorofeni0-4-(6-cloro-2-oxo-2.3-dih¡dro-7H-indol-3-iD-1-(2.4-dimetoxipirim¡d¡n-5-¡P-5-( propan-2-i I)- 7 H-pirrol-3-carboxamida

En un matraz de fondo redondo de 250 mL equipado con barra de agitación magnética, los compuestos C-4A (11,6 g, 47 mmol, 1 eq), C-7A (8,7 g, 56 mmol, 1,2 eq) y C-6F (10 g, se suspendieron 47 mmol, 1 eq) en 75 mL de AcOH y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 70 °C y se agitó a esta temperatura durante 24 h. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 47 % del producto esperado. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad. Él residuo sólido se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (20 % a 50 % de AcOEt en n-hexano). Todas las fracciones que contenían el producto se evaporaron a sequedad para dar 6,6 g del producto deseado C-8.C10, con un 83 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS. Rendimiento: 32 %.

Compuesto (11), C11: (3S)-6'-(butan-2-il1-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenin-5'-(2.4-dimetoxipirimidin-5-il1-1,2.3',5'-tetrah¡dro-2'fV-esp¡ronndol-3.1'-p¡rrolo[3.4-c1pirrol1-2.3'-d¡ona

El compuesto del título (mezcla diastereomérica) se obtuvo después de la separación preparativa por HPLC-RP quiral del compuesto racémico C-10.C11 mediante el uso del método M; > 99 % ee; tr: 9,96 min. (método M'); 1H NMR (500 MHz, DMSO-de) ó 11,24 (s, 1H), 8,50 (brs, 1H), 7,44 (ddd, J = 8,9, 4,2, 2,7 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,31 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23-7,14 (m, 1H), 7,03 (dd, J = 6,4, 2,7 Hz, 1H), 6,84 (ddd, J = 10,5, 8,4, 2,4 Hz, 1H), 6,72 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,95 (br s, 3H), 3,09 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,48 - 2,39 (m, 1H), 1,18 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 0,44 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-de) 5175,83, 166,45, 164,83, 164,70, 164,26, 162,87, 158,76, 157,95, 156,76, 144,36, 144,26, 134,08, 130,72, 130,66, 129,55, 128,30, 128,28, 127,61, 127,53, 125,73, 125,61, 123,86, 122,88, 119,71, 118,70, 118,59, 118,52, 116,26, 109,68, 109,50, 99,43, 99,21, 70,02, 55,66, 55,01,46,14, 25,33, 21,51, 11,45, 9,08.

Compuesto C-10.C11: 6'-(butan-2-il)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-5l-(2.4-dimetoxip¡rim¡d¡n-5-il)-1.2,3'.5'-tetrahidro-2'H-espironndol-3.1'-pirrolo[3.4-clpirrol1-2.3'-diona

A un matraz de 250 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadió el compuesto C-9.C11 (2,8 g, 4,56 mmol) junto con DCM (60 mL). Luego, se añadió TFA (30 mL) (alrededor de 2 mL/min). La reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 65 % del área del pico del producto esperado. Luego la mezcla se vertió en hielo (alrededor de 200 mL) y se diluyó con DCM (100 mL). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con DCM (3 * 50 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron con MgS04 y se concentraron al vacío. El producto crudo C-10.C11 se purificó mediante el uso de cromatografía en columna (10 % a 40 % de acetona en n-hexano). Como resultado, se obtuvieron 1,5 g de un sólido de color pardo C-10.C11. Este sólido se agitó en AcOEt (5 mL), se separó por filtración, se lavó con 20 mL de AcOEt y se secó al aire. Como resultado se obtuvo el producto C-10.C11 como un precipitado blanco (1,4 g, 98 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS).

Compuesto C-9.C11: 5-fbutan-2-ih-A/-(5-cloro-2-fluorofenilM-(6-cloro-3-hidroxi-2-oxo-2.3-dihidro-7H-indol-3-ih-1-(2.4-dimetox¡D¡rimidin-5-ih-7H-piiTol-3-carboxa

A un matraz de 250 ml_ equipado con una barra de agitación magnética, se añadieron el compuesto C-8.C11 (3 g, 5 mmol, 1 eq) y THF (80 mL), seguido de fosfito de trimetilo (1,21 mL, 10 mmol, 2 eq). Luego, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se añadió ferc-pentóxido de sodio (2,2 g, 20 mmol, 4 eq) en pequeñas porciones. Se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la reacción durante 5 h a temperatura ambiente (el matraz estaba equipado con un tubo de CaCI2). Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un 71 % de dos picos (diastereoisómeros) del producto C-9.C11. La mezcla de reacción se diluyó con 200 mL de agua con hielo. La suspensión obtenida se acidificó con HCI3 M a pH ~ 5 y se diluyó con 100 mL de AcOEt. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con AcOEt (3 x 50 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron con Na2S04 y el solvente se eliminó al vacío. El producto crudo C-9.C11 se obtuvo como un aceite de color rojo oscuro (72 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS) y se usó en la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional.

Compuesto C-8.C11: 5-(butan-2-¡l)-A/-(5-cloro-2-fluorofen¡l)-4-(6-cloro-2-oxo-2.3-dih¡dro-ÍH-¡ndol-3-¡l)-1-(2.4-d¡metox¡p¡r¡rn¡d¡n-5-¡l)-1H-p¡rrol-3-carboxamida

A un matraz de 250 mL equipado con barra de agitación magnética, se añadieron los compuestos C-4B (4,44 g, 16,8 mmol, 1 eq), C-7A (2,87 g, 18,5 mmol, 1,1 eq) y C-6F (3,32 g, 16,8 mmol, 1 eq) seguido de AcOH (30 mL), y el matraz se cerró herméticamente con un tapón de plástico. La mezcla se calentó hasta 90 'C (temperatura del baño de calentamiento) y se agitó a esta temperatura durante 16 h. Después de ese tiempo, el análisis UPLCMS mostró un consumo casi total de los materiales de partida (lo que equivale al 50 % del área del pico del producto). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a sequedad. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante el uso de cromatografía ultrarrápida (30 % a 60 % de AcOEt en n-hexano). Después de eliminar los solventes, se obtuvo el producto C-8.C11 como un sólido/espuma de color rojo oscuro (3,5 g, 35 % de rendimiento) con un 83 % de pureza de acuerdo con el análisis UPLCMS.

Obtención y análisis de enantiómeros

Todos los enantiómeros se separaron en SFC o HPLC preparativa con columnas quirales.

Condiciones de purificación quiral - SFC

Método A: columna: Lux Amylose-1 (21,2 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 50 mL/min, elución ¡socrática MeOH:C02, 25:75, detección: UV 210 nm

Método B: columna: Lux Cellulose-1 (21,2 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 50 mL/min, elución ¡socrática MeOH:C02, 25:75, detección: UV 210 nm

Método C: columna: Lux Cellulose-4 (21,2 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 50 mL/min, elución ¡socrática MeOH:C02, 45:55, detección: UV 215 nm

Método D: columna: Chiralpak IC (20 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 21 mL/min, elución ¡socrática EtOH:CC>2, 45:55, detección: UV 210 nm

Método E: columna: Lux Cellulose-4 (21,2 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 50 mL/min, elución ¡socrática MeOH:C02, 40:60, detección: UV 210 nm

Método F: columna: Chiralpak AS-H (20 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 50 mL/min, elución ¡socrática MeOH:C02, 25:75, detección: UV 210 nm

Método G: columna: Chiralpak IC (20 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 50 mL/min, elución ¡socrática MeOH:C02, 45:55, detección: UV 210 nm

Método H: columna: Lux Cellulose -4 (30 mm x 250 mm, 5 pm), flujo 50 mL/min, elución ¡socrática MeOH:C02, 40:60, detección: UV 210 nm

Condiciones de purificación quiral - NP-HPLC

Método I: columna: Chiralpak IC (20 mm x 250 mm, 5 pm) flujo 21 mL/min, elución ¡socrática con MeOH detección: ÜV 220 nm

Condiciones de purificación quinal - RP-HPLC

Método J: columna: Lux Cellulose-2 (21 mm * 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, ACN:MeOH:H20, 50:20:30, detección: UV 254 nm

Método K: columna: Lux Cellulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 80:20, detección: UV 254 nm

Método L: columna: Lux Cellulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 65:35, detección: UV 254 nm

Método M: columna: Lux Cellulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20+HC02NH4 (fase móvil A1), 90:10, detección: ultravioleta 254 nm

Método N: columna: Lux Cellulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 70:30, detección: UV 254 nm

Método O: columna: Lux Cellulose-2 (21 mm x 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, gradiente de elución, A=ACN, B=H20, detección: UV 254

Método P: columna: Lux Amylose-2 (21 mm x 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 50:50, detección: UV 254 nm

Método R: columna: Lux Amylose-2 (21 mm x 250 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, gradiente de elución; A=ACN, B=H20, detección: UV 254 nm

Método S: columna: Lux Amylose-2 (21 mm x 250 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, A C N ^O , 60:40, detección: UV 254 nm

Método T: columna: Lux Cellulose-4 (21 mm x 150 mm, 5 pm), flujo: 30 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 60:40, detección: UV 254 nm

Condiciones de análisis de pureza quiral - SFC

Método A': columna: Lux Amylose-1 (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna: 40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Me0H:C02, 25:75, detección: UV 211 nm y 254 nm

Método B': columna: Lux Cellulose-1 (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna:

40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Me0H:C02, 25:75, detección: UV 211 y 254 nm

Método C': columna: Lux Cellulose-4 (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna:

40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Me0H:C02, 50:50, detección: UV 210 - 400 nm

Método D': columna: Chiralpak IC (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna: 40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Et0H:C02, 45:55, detección: UV 210-400 nm

Método E': columna: Lux Cellulose-4 (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna: 40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Me0H:C02, 40:60, detección: UV 210-400 nm

Método F: columna: AMS (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna: 40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Me0H:C02| 30:70, detección: UV 211 y 254 nm Método G': columna: Chiralpak IC (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna: 40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Me0H:C02, 40:60, detección: UV 210 -400 nm

Método H': columna: Lux Cellulose-4 (4,6 mm x 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna:

40 °C, flujo: 4 mL/min, elución ¡socrática, Me0H:C02, 40:60, detección: UV 211 y 254 nm

Análisis de pureza quiral - NP-HPLC

Método I': columna: Lux Cellulose-5 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1 mL/min, elución ¡socrática, EtOH, detección: UV 254 nm

Condiciones de análisis de pureza quiral - RP-HPLC

Método J': columna: Lux Cellulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACN:MeOH:H20, 50:20:30, detección: UV 254 nm

Método K': columna: Lux Cellulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 80:20, detección: UV 254 nm

Método L': columna: Lux Cellulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACNLLMD, 65:35, detección: UV 254

Método M': columna: Lux Cellulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, caudal: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACNLLMD+HCC^NhU (fase móvil A1), 90:10, detección: UV 254 nm

Método N': columna: Lux Cellulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACNihfeO, 70:30, detección: UV 254

Método O': columna: Lux Cellulose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, gradiente de elución, A=ACN, B=H20, detección: UV 254

Método P': columna: Lux Amylose-2 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACISLLMD, 50:50, detección: UV 254 nm Método R': columna: Lux Amylose-2 (4,6 mm 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, gradiente de elución; A=ACN, B=H20, detección: UV 254 nm

Método S': columna: Lux Amylose-2 (4,6 mm 250 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 60:40, detección: UV 254 nm Método T': columna: Lux Cellulose-4 (4,6 mm x 150 mm, 5 pm), temperatura de la columna: ambiente, flujo: 1,23 mL/min, elución ¡socrática, ACN:H20, 60:40, detección: UV 254 nm Los siguientes ejemplos se han sintetizado de acuerdo con los procedimientos descritos en este documento o métodos conocidos de la literatura mediante el uso de los materiales de partida apropiados y métodos conocidos por los expertos en la técnica:

Tabla 1

(continuación)

(continuación)

Ejemplos Biológicos:

Ejemplo biológico 1. Ensayo de polarización de la fluorescencia

La inhibición de la interacción p53-Mdm2 se midió mediante el uso de un ensayo de unión de polarización de la fluorescencia (FP). FP mide el movimiento de rotación de las moléculas en una suspensión homogénea. Para este ensayo, el dominio N-terminal de la proteína Mdm2 (aminoácidos 1-111) se combina con un péptido marcado con fluoresceína (FAM) derivado del dominio de transactivación p53 (Secuencia: 5-FAM-TSFAEYWNLLSP). Tras la excitación del ligando fluorescente con luz polarizada linealmente, el péptido emite luz polarizada perpendicularmente. Si el péptido está unido a Mdm2, la rotación se ralentizará y el componente perpendicular disminuirá proporcionalmente. Por el contrario, la interrupción del complejo péptido-Mdm2 debido a la unión de un inhibidor al sitio de unión de p53 de Mdm2 da como resultado la liberación del péptido y la disminución de la polarización de la luz emitida.

Los experimentos de polarización de la fluorescencia se leyeron en un lector Biotek Cytation 5 con filtros de excitación de 470 nm y de emisión de 520 nm para fluoresceína. La polarización de la fluorescencia se midió en placas negras de 96 pocilios (Corning, CLS3991) a temperatura ambiente. La pureza de Mdm2 se controló a >95 %. El tampón de reacción se optimizó mediante la adición de DTT 5 mM y detergente zwitteriónico CHAPS al 0,1 % para reducir el efecto de las interacciones inespecíficas.

La prueba se realizó mediante la combinación de dilución sucesiva de los compuestos diluidos en dimetilsulfóxido (DMSO, concentración final al 5%) con Mdm2 75 nM en tampón de reacción (PBS, CHAPS al 0,1 %, DTT (ditiotreitol) 5 mM). Después de 15 minutos de incubación a temperatura ambiente, se añadió péptido marcado con FAM 10 nM. La lectura final se realizó después de 90 minutos de incubación. Las curvas de unión dependientes de la dosis y los valores de IC50 se calcularon mediante el uso de GraphPad Prism5 y luego se transformaron en valores de Ki mediante el uso de la ecuación de Kenakin (Tabla 2).

Tabla 2

(continuación)

La inspección de los valores de Ki medidos muestra que todos los compuestos descritos son inhibidores potentes (Ki en el rango de 1,7-2,5 nM) de las interacciones Mdm2-p53.

Ejemplo Biológico 2. Ensayo de viabilidad celular

El efecto de los inhibidores de p53-Mdm2 inventados sobre la viabilidad celular se ha evaluado mediante el uso del ensayo MTT. Es un ensayo colorimétrico que mide la conversión del anillo de tetrazolio del colorante amarillo soluble (MTT) en formazán púrpura insoluble. Este proceso está catalizado únicamente en las deshidrogenasas mitocondriales de las células vivas. Las células muertas no provocan este cambio. Para medir la citotoxicidad específica de los inhibidores de Mdm2-p53, se realizó el ensayo MTT con la línea celular de osteosarcoma SJSA-1 que exhibe amplificación del gen MDM2 y el p53 de tipo salvaje.

Las células se sembraron en placas de 96 pocilios y luego se trataron con diluciones sucesivas de los compuestos probados. Después de 72 h de incubación, se añadió MTT a la concentración final de 0,5 mg/mL. Las células se incubaron adicionalmente durante las siguientes 4 h. Luego, la solución se drenó y los cristales de formazán restantes se disolvieron en 100 pL de DMSO. La lectura de absorbancia se realizó a 570 nm y reveló la viabilidad celular relativa entre las células tratadas con los compuestos evaluados y el control de DMSO. Todos los experimentos de MTT se repitieron independientemente 2-5 veces. Las curvas de unión dependientes de la dosis y los valores de IC50 se calcularon mediante el uso de GraphPad Prism 5. Los valores de IC50 presentados representan el valor promedio de todos los experimentos realizados (Tabla 3).

Tabla 3

Ejemplo Biológico 3. Medición del aclaramiento intrínseco in vitro mediante el uso de microsomas

La estabilidad metabólica de los compuestos de la invención se ha evaluado mediante la medición del aclaramiento intrínseco in vitro en microsomas murinos y humanos.

Se prepararon soluciones de reserva 10 mM de marcadores y compuestos de prueba en DMSO. Estas se diluyeron 100 veces en MeCN:DMSO 91:9 para obtener una reserva de ensayo 100 pM. Se preparó NADPH 10 mM en tampón de fosfato 0,1 M (pH 7,4). Los microsomas se descongelaron en un baño de agua a 37 °C y se diluyeron para dar una concentración de ensayo final de 0,5 mg/mL.

Se añadieron reservas de ensayo 100 pM para dar una concentración final de 1 pM a los tubos de incubación que contenían tampón y NADPH (la concentración final del ensayo es 1 mM). Los tubos de incubación y los microsomas se precalentaron a 37 °C durante 3 minutos. Luego se añadieron los microsomas a los tubos de incubación que se mantuvieron a 37 °C y se agitaron mediante el uso del agitador orbital durante el ensayo. Se tomaron muestras en 6 puntos de tiempo predeterminados hasta 1 h y se transfirieron a los tubos de inactivación preparados que contenían un solvente apropiado con estándar intemo.

Las muestras ¡nactivadas se mezclan bien y la proteína precipita a -20 °C durante un mínimo de 12 horas. Las muestras se centrifugaron luego a 4 °C. Los sobrenadantes se transfirieron a una placa nueva de 96 pocilios, compatible con el automuestreador. La placa se selló con una esterilla de silicona precortada y se analizó por LC-MS/MS.

En comparación con los compuestos descritos en el documento WO2015/189799 todos los compuestos descritos en el presente documento exhiben un aclaramiento intrínseco bajo tanto en microsomas humanos como murinos. La única excepción es el compuesto 6. Sin embargo, la estabilidad levemente menor de este compuesto se compensa con una excelente eficacia in vitro (SJSA-1 IC50 = 0,03 pM).

Ejemplo Biológico 4. Eficacia in vivo en el modelo de xenoinjerto SJSA-1 en ratones

El experimento se realizó en ratones hembra de la cepa Crl:CD-1-Foxn1nu. Los ratones se inocularon por vía subcutánea en el flanco derecho con la línea celular de cáncer SJSArl en una cantidad de 3><106 células suspendidas en 100 pL de matriz HBSS: Matrigel en una proporción de 3:1 por ratón. El día 17 después de la inoculación, los ratones se dividieron en grupos, de modo que en cada grupo el volumen tumoral medio fue similar y promedió alrededor de 200 mm3. Se seleccionaron grupos de experimentación, cada uno consistía en 8 ratones: Control NaCI 0,9% y compuestos. Los compuestos 1-11 se disolvieron en 56,60% de PEG 400, 9,43% de Cremophor RH40, 9,43 % de ETOH, 18,87 % de Labrafil M1944CS, 5,67 % de DMSO. Para el Compuesto 107 del documento WO2015/189799, se usó un grupo de 7 ratones, y se disolvió en PEG400 al 15%, Cremophor EL al 10 %, H20 al 75 %.

A los ratones usados en el experimento se les administraron compuestos o NaCI al 0,9% orales (p.o.) en un programa q1dx14 (14 dosis, diariamente). Durante el transcurso del experimento, los ratones se pesaron antes de cada administración, dos o tres veces por semana. El bienestar animal se monitoreó diariamente. No se observaron diferencias significativas en el peso corporal o el bienestar entre los grupos experimentales durante y al final del estudio.

El cambio en el volumen tumoral se monitoreó dos o tres veces por semana con comienzo desde el primer día de administración. El volumen del tumor se calculó en base a su longitud y ancho medidos con un calibrador electrónico:

V [mm3] = d2x D/2

donde d - ancho, D - longitud.

Se midió el volumen tumoral en los grupos hasta 101 días después de la inoculación (72 días después de la última administración). Los resultados del experimento se expresaron como valores medios de inhibición del crecimiento tumoral (TGI) ± SEM (Tabla 4). La inhibición del crecimiento tumoral se calculó mediante el uso de la siguiente fórmula:

TGI [%] = [100 -(T/C x 100)]

donde C - media del tamaño tumoral en el grupo de control, T - media del tamaño tumoral en el grupo tratado. Todos los cálculos y gráficos se realizaron mediante el uso del software GraphPad Prism 5.

Tabla 4

Los resultados de este experimento se resumen en la Tabla 4 y las Figuras 1 y 2. Como puede verse, la estabilidad metabólica mejorada de los compuestos descritos en el presente documento se traduce en una eficacia in vivo excepcional. Los valores de inhibición del crecimiento tumoral observados para los compuestos 1-11 son significativamente más altos que para el mejor compuesto descrito en el documento WO2015/189799 tanto tras 7 (diferencia 36,0-46,6%) como 12 (diferencia 35,9-39,9%) dosis de una sustancia. Además, como se puede observar en la Figura 1 el tratamiento del xenoinjerto de SJSA-1 con 14 dosis de 12,5 mg/kg p.o. del documento WO2015/189799 solo ralentiza el crecimiento tumoral. El mismo protocolo de tratamiento, pero con los compuestos 7, 8 y 11 dio como resultado la erradicación completa de los tumores. Además, ninguna de las lesiones exhibió nuevo crecimiento durante el seguimiento posterior hasta el día 101.

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que tiene la siguiente estructura

en donde

R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -alquilo Ci-Ce, -0-(alquilo C i-C 6), -S-(alquilo C i-C 6), -¿(O)O-(alquilo C i-C 6), -NH(alquilo C i-C 6) y -N(alquilo C1-Ce)2,

Rz y R3 son independientemente H o halógeno;

R4 es -alquilo Ci-Ce;

R7 es -OCH3;

Z es C-Ra o N, Y es C-R8910o N, con la condición de que Z no sea C-Ra y Y no sea C-R9 en el mismo compuesto,

R5, R6, Ra, R9 son independientemente H, halógeno, -OCH3, -NH(CH3) o -N(CH3)2.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, alquilo C1-C6, -0-(alquilo C^Ce), -NH(alquilo C1-C6) y -N(alquilo Ci-C6)2.

3. El compuesto de la reivindicación 2, en donde

R1 es meta-halo-fenilo que está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CH3, -OCH3, -NH(CH3) y -N(CH3)2.

4. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde

R2 es H, y

R3 es Cl.

5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde

R4 es isopropilo o isobutilo.

6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde

Z y Y son ambos N.

7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde

Z es C-Rs y Y es N.

8. El compuesto de la reivindicación 6, en donde

R5 y R6 son ambos OMe.

9. El compuesto de la reivindicación 7, en donde

Ra es H, y

al menos uno de R5 y R6 es OMe, y el segundo se selecciona de H, -N(Me)2 y OMe.

10. Compuesto de la reivindicación 2, seleccionado de:

(1) (3S)-6-cloro-2,-(3-clorofen¡l)-5,-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3',5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(2) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-(2,4-d¡metoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro^'H-espiroIindol-S.I'-pirroloIS^-cJpirrol^.S'-diona

(3) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-met¡lfenil)-6'-(propan-2-¡l)-5,-(2,4,6-trimetox¡p¡rimidin-5-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]p¡rrol]-2,3,-diona

(4) (3S)-6-cloro-2'-(3-cloro-4-fluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6'-(propan-2-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-6'-(propan-2-¡l)-5'-(2,4,6-trimetoxipirimidin-5-il)-1,2,3',5'-tetrah¡dro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(6) (3S)-6-cloro2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-[6-(dimetilamino)-4-metoxipiridin-3-il]-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3,-diona

(7) (3S)-6-cloro-2,-(3,4-difluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1l2I3'I5,-tetr,ahidro-2,H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(8) (3S)-6-cloro-2,-(3,4-difluorofenil)-5l-(4,6-d¡metoxipiridin-3-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirro|o[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(9) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-f|uorofeni|)-5'-(4,6-dimetox¡p¡ridin-3-i|)-6'-(propan-2-i|)-1,2,3',5'-tetrah¡dro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(10) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2,4-cl¡fluorofen¡l)-5'-(2,4-d¡metox¡p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)-6'-(propan-2-¡l)-1,2,3',5'-tetrah¡dro-2'H-esp¡ro[¡ndol-3,1'-pirrolo[3,4-c]p¡rrol]-2,3'-d¡ona

(11) (3S)-6,-(butan-2-il)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5,-(2,4-dimetoxip¡rim¡din-5-il)-1,2,3',5'-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]piiTol]-2,3,-d¡ona.

11. Compuesto de la reivindicación 6, seleccionado de:

(1) (3S)-6-cloro-2,-(3-clorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3,5'-tetrahidro-27-/-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(2) (3S)-6-clQro-2,-(5-cloro-2-fluorofen¡l)-5'-(2,4-dimetox¡p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)-6,-(propan-2-¡l)-1,2,3',5'-tetrahidro-2,H-esp¡ro[¡ndol-3,1,-pirrolo[3p4-c]p¡rrol]-2p3,-d¡ona

(3) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-met¡lfen¡¡)-6'-(propan-2-il)-5,-(2,4,6-tmetox¡p¡rid¡n-5-¡l)-1,2,3,,5'-tetrah¡dro-2'Á7-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]pirral]-2,3'-diona

(4) (3S)-6-cloro-2,-(3-cloro-4-fluorofenil)-5'-(2,4-dimetox¡p¡rimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1 P2P3,P5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3p1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(5) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-6'-(propan-2-¡l)-5'-(2p4p6-trimetoxipiridin-5-il)-1p2p3'p5'-tetrah¡dro-2'H-esp¡ro[¡ndol-3p1'-p¡rrolo[3,4-c]p¡rrol]-2,3'-d¡ona

(7) (3S)-6-cloro-2,-(3l4-difluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1,213,,5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1 '-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(10) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2p4-difluorofenil)-5,-(2p4-dimetoxipirimidin-5-il)-6,-(propan-2-il)-1p2p3,p5,-tetrah¡dro-2,H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]piirol]-2,3,-diona

(11) (3S)-6'-(butan-2-il)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-(2,4-dimetoxipiridin-5-il)-1,2,3,,5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1'-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona.

12. Compuesto de la reivindicación 7, seleccionado de:

(6) (3S)-6-cloro-2'-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-[6-(dimet¡lamino)-4-metoxipiridin-3-il]-6'-(propan-2-il)-1,2,3'p5'-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3p1'-p¡rrolo[3,4-c]p¡rrol]-2p3'-diona

(8) (3S)-6-cloro-2,-(3p4-difluorofeni|)-5'-(4,6-dimetoxipiridin-3-il)-6,-(propan-2-i|)-1,2,3'p5,-tetrahidro-2,H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona

(9) (3S)-6-cloro-2,-(5-cloro-2-fluorofenil)-5'-(4,6-dimetoxipiridin-3-il)-6,-(propan-2-il)-1,2,3,,5,-tetrah¡dro-2'H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3'-diona.

13. Compuesto de la reivindicación 2 de fórmula

es decir (3S)-6-cloro-2'-(3,4-difluorofenil)-5'-(4,6-dimetoxipiridin-3-il)-6,-(propan-2-il)-1,2p3,p5,-tetrahidro-2'H-espiro[indol-3,1,-pirrolo[3,4-c]pirrol]-2,3,-diona.

14. Compuesto de la reivindicación 2 de fórmula

que es (3S)-6-doro-2-(3-clorofenil)-5-(2,4-dimetoxipinmidin-5-il)-6-(propan-2-il)-1,2,3,5-tetrahidro-2 H-espirotindol-S.I'-pirrolotS^-clpirroll^.S'-diona.

15. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para el uso como un medicamento.

16. El compuesto para el uso de la reivindicación 15 para el uso en un método de prevención y/o tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en cáncer, enfermedades inmunitarias, afecciones inflamatorias, enfermedades alérgicas de la piel asociadas con proliferación excesiva, enfermedad que causa ceguera e infecciones virales.

17. El compuesto para el uso de la reivindicación 16, en donde la enfermedad es un cáncer.

18. Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en combinación con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.