CN111566110A - 作为激活tp53的治疗剂的1,2,3’,5’-四氢-2’h-螺[吲哚-3,1’-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3’-二酮化合物 - Google Patents

作为激活tp53的治疗剂的1,2,3’,5’-四氢-2’h-螺[吲哚-3,1’-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3’-二酮化合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)所示的1,2,3',5'‑四氢‑2'H‑螺吲哚‑3,1'‑吡咯并[3,4‑c]吡咯]‑2,3'‑二酮化合物，其中所有符号和变量如说明书所定义。该化合物可用于预防和/或治疗选自癌症、免疫疾病、炎性病况、与过度增生有关的变应性皮肤病、致盲性疾病和病毒感染的疾病的方法中。

Description

作为激活TP53的治疗剂的1,2,3′,5′-四氢-2′H-螺[吲哚-3, 1′-吡咯并[3,4-C]吡咯]-2,3′-二酮化合物
技术领域
本发明涉及新的1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮化合物和这些化合物用作药物，特别是用于治疗p53-Mdm2蛋白-蛋白相互作用受到干扰和/或对p53-Mdm2相互作用敏感的疾病，包括诸如癌症等增生性疾病。此外，本发明提供了包含上述化合物的药物组合物。
背景技术
p53通过调节决定细胞命运的许多基因的转录来响应细胞应激的转录因子。在应激条件下，p53可以触发细胞周期停滞和DNA修复过程或细胞死亡程序，例如凋亡或衰老。这些响应之间的选择取决于应激信号的类型和强度。在人类细胞中，p53的活性受到其负调节剂即称为Mdm2的蛋白的严格控制。Mdm2与p53反式激活结构域形成紧密的复合物，从而阻断了其调节靶基因和发挥抗增殖作用的能力。另外，Mdm2通过泛素-蛋白酶体系统促进p53的核输出和快速降解。
作为细胞响应应激的关键因素，p53成为肿瘤发生的主要障碍。继承了突变的p53的Li-Fraumeni综合征患者非常容易患癌症。p53基因受损的小鼠看起来正常，但到6个月大时很容易自发形成多种肿瘤。p53的这种突出的肿瘤抑制作用，通过p53基因突变或通过诸如Mdm2等充当其负调节剂的蛋白质的异常表达导致其在几乎所有人类癌症中都无法发挥作用。
在8000多种人类癌症中，包括肉瘤、肺肿瘤和胃肿瘤，有10％以上的癌症报告了Mdm2基因的扩增，其中p53基因并未受损。多个其他肿瘤在Mdm2启动子中获得单核苷酸多态性，导致Mdm2表达增加2-3倍，与肿瘤加速形成有关。这些改变被认为是在保留野生型p53的癌症中抑制p53功能的主要机制。
对小鼠的功能性基因研究表明，失活的p53的恢复足以引起几种不同肿瘤类型的快速消退。遵循这条线，通过小分子靶向p53-Mdm2相互作用以释放和重新激活p53已成为治疗p53野生型人类癌症的有前途的治疗策略。近年来，已经报道了几组p53-Mdm2相互作用的小分子非肽抑制剂，包括nutlin、哌嗪-4-苯基衍生物、查耳酮、磺胺类、苯并二氮杂二酮、螺-吲哚。MDM2抑制剂在正常细胞和肿瘤细胞中产生共同的和不同的细胞反应，这与遗传学研究的先前结果一致。在正常细胞中，MDM2抑制剂激活p53诱导细胞周期停滞，但不诱导细胞死亡。在肿瘤细胞中，该抑制剂激活p53不仅诱导细胞周期停滞，而且还诱导细胞死亡。该特征提供了潜在疗法的高选择性和低毒性的前景。然而，这些Mdm2拮抗剂均未在人类临床试验中证明其有效性。因此，仍然需要具有增强的效力、有利的药代动力学和毒性特征的新化合物。
我们的先前申请WO2015/189799公开了包含1,1',2,5'-四氢螺[吲哚-3,2'-吡咯]-2,5'-二酮系的化合物，其在体外研究中显示有效且特异性的抗肿瘤活性。然而，进一步的研究表明，它们的体内功效是中等的，并且最有效的化合物在人微粒体中表现出不可接受的高清除率，从而排除了其临床功效。
因此，仍然需要具有优异的体外活性并具有改善的药代动力学并因此在小鼠体内模型和未来临床试验中均表现出优异的抗癌功效的化合物。
本发明通过提供具有1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮系的新化合物解决了该问题。
发明概述
在第一方面，本发明提供了具有下述结构的化合物：
Figure BDA0002562353430000021
其中R1是任选地进一步被1-2个独立地选自以下的取代基取代的间卤代苯基：卤素、-OH、-NH2、-NO2、-CN、-C1-C6-烷基、-O-(C1-C6-烷基)、-S-(C1-C6-烷基)、-C(O)O-(C1-C6-烷基)、-NH(C1-C6-烷基)和-N(C1-C6-烷基)2,
R2和R3独立地是H或卤素；
R4是-C1-C6-烷基；
R7是-OCH3；
R5、R6、R8、R9独立地是H、卤素、-OCH3、-NH(CH3)或-N(CH3)2。
Z是C-R8或N，Y是C-R9或N，前提是Z不是C-R8以及同时Y不是C-R9，
优选在式(I)中，R1是任选地进一步被1-2个独立地选自以下的取代基取代的间卤代苯基：卤素、-C1-C6-烷基、-O-(C1-C6-烷基)、-NH(C1-C6-烷基)和-N(C1-C6-烷基)2。更优选，在式(I)的R1取代基的定义中，C1-C6-烷基是C1-C3-烷基。
甚至更优选地，在式(I)中，R1是任选地进一步被1-2个独立地选自以下的取代基取代的间卤代苯基：卤素、-CH3、-OCH3、-NH(CH3)和-N(CH3)2。甚至更优选地，R1是任选地进一步被1-2个独立地选自以下的取代基取代的间卤代苯基：卤素、-CH3和-OCH3。最优选地，R1是任选地进一步被1-2个独立地选自卤素的取代基取代的间卤代苯基。
优选地，在式(I)中，R2是H，且R3是Cl。
优选地，在式(I)中，R4是异丙基或异丁基。
优选地，在式(I)中，Z和Y都是N。更优选，在这种实施方案中，R5和R6都是-OCH3。
优选地，在式(I)中，Z是C-R8，且Y是N。更优选地，在这种实施方案中，R8是H，且R5和R6中的至少一个是-OCH3，且另一个选自H、-N(CH3)2和-OCH3。
作为本发明的具体化合物，可以提及下组中的一个：
(1)(3S)-6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(2)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(3)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-甲基苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(4)(3S)-6-氯-2'-(3-氯-4-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(5)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(5)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基吡啶-3-基]-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(6)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(7)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(8)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(9)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(10)(3S)-6'-(丁-2-基)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮。
作为本发明的更具体化合物，可以提及下组中的一个：
(1)(3S)-6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(2)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(3)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-甲基苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(4)(3S)-6-氯-2'-(3-氯-4-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(5)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(7)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(10)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(11)(3S)-6'-(丁-2-基)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
或者，作为本发明的更具体化合物，可以提及下组中的一个：
(6)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基吡啶-3-基]-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(8)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(9)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮。
本发明特别优选的化合物是下述结构所示的化合物：
Figure BDA0002562353430000051
其表示：
(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3′,5′-四氢-2′H-螺[吲哚-3,1′-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3′-二酮。
本发明的第二特别优选的化合物是下述结构所示的化合物
Figure BDA0002562353430000061
其表示：
(3S)-6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮。
本发明的另一方面涉及式(I)化合物用作药物。
优选地，该药物可用于预防和/或治疗选自癌症、免疫疾病、炎性病况、与过度增生有关的变应性皮肤病、致盲性疾病和病毒感染的疾病。
本发明的下一个方面涉及包含作为活性成分的式(I)的化合物与至少一种药学上可接受的赋形剂的组合的药物组合物。
本发明的最后一个方面涉及治疗和/或预防选自癌症、免疫疾病、炎性病况、与过度增生有关的变应性皮肤病、致盲疾病和病毒感染的疾病的方法，包括施用治疗有效量的如上定义的式(I)的化合物或药物组合物。
附图简述
图1显示了在人骨肉瘤(SJSA-1)小鼠模型中作为参考化合物的国际公开WO2015/189799的化合物107的体内功效。将SJSA-1细胞以3x106/小鼠的量细胞皮下(s.c.)接种；以q1dx14时间表口服(p.o.)施用受试化合物；7只小鼠/组。
图2显示了在人骨肉瘤(SJSA-1)小鼠模型中本发明的化合物7、8和11的体内功效。将SJSA-1细胞以3x106个细胞/小鼠的量皮下(s.c.)接种；以q1dx14时间表口服(p.o.)施用受试化合物；8只小鼠/组。
发明详述
当本发明的化合物可以以一种或多种互变异构形式存在时，所有这些形式尽管在上式中没有明确指出，但均在本发明的范围内。因此，该化合物可以以互变异构体的混合物形式或单独的互变异构体形式存在。
本发明所用的术语具有以下含义。以下未定义的其他术语具有本领域技术人员所理解的含义。
术语“C1-C6烷基”是具有1-6个碳原子的饱和直链或支链烃。C1-C6烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基和正己基。更优选，C1-C6烷基是C1-C4烷基、C1-C3烷基或C1-C2烷基。符号C1-C4烷基、C1-C3烷基、C1-C2烷基分别是指具有1-4、3或2个碳原子的饱和直链或支链烃。最优选，C1-C6烷基是为甲基的C1-烷基(缩写为Me)。
术语“卤素”选自F、Cl、Br和I。优选，卤素选自F和Cl。
在R1基团的定义中存在的术语“间卤代苯基”是指相对于苯基与吡咯并[3,4-c]吡咯环系的氮原子的连接点在间位上被如上所定义的卤素取代的苯基。
Figure BDA0002562353430000071
表述“Z是C-R8或N，Y是C-R9或N，前提是Z不是C-R8以及同时Y不是C-R9”是指，在本发明的化合物中，Z是C-R8且Y为N，或Z为N且Y为C-R9，或Z为N且Y为N。
由于本发明的化合物可以是酸性或碱性的，因此它们可以分别与碱或酸形成合适的酸加成盐。
药学上可接受的酸加成盐是指保留游离碱的生物有效性并且在生物学上不是不希望的那些盐。酸加成盐可以用无机(矿物)酸或有机酸来形成。作为酸的实例，可以提及的是盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、硝酸、碳酸、琥珀酸、马来酸、甲酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、诸如2-萘磺酸等萘磺酸、双羟萘酸、羟萘甲酸(xinafoic acid)、己酸。
酸加成盐可以以简单的方式通过使式(I)的化合物与合适的无机或有机酸以与式(I)的化合物基本等摩尔的量，任选地在诸如有机溶剂等合适的溶剂中反应来制备，以形成通常通过例如结晶和过滤来分离的盐。例如，可以通过用甲醇、乙醇或乙醚中化学计量的盐酸或氯化氢处理该化合物在例如甲醇中的溶液，然后蒸发溶剂，将该化合物的游离碱转化为相应的盐酸盐。
类似地，药学上可接受的碱加成盐包括衍生自诸如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等无机碱的盐。衍生自药学上可接受的无毒有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括天然存在的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺以及乙醇胺和三乙醇胺。
式(I)的化合物可以使用以下方法获得。
可以根据以下反应方案1获得基于与吡咯环稠合的1',2,5'-四氢螺[吲哚-3,2'-吡咯并]-2,5'-二酮的化合物(式(I)的化合物)。
Figure BDA0002562353430000091
反应方案1
首先，在碱(通常为二乙胺(DEA)或双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(LiHMDS))的存在下，用靛红C-2处理甲基酮C-1。
随后，在酸性条件下使用通常的浓硫酸(12M)将所得的羟醛C-3脱水，得到不饱和化合物C-4。
同时，通过将胺C-5与丙-2-炔酸偶联，优选通过使用偶联剂，通常是碳二亚胺试剂，如二环己基碳二亚胺(DCC)或(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)来制备酰胺C-6。
炔C-6与胺C-7的氢氨化反应以及随后与烯酮C-4的反应生成取代的吡咯C-8。这种一锅法反应通常可以在乙酸中在微波辐射下进行。
可以在过量的碱，通常为叔丁醇钠，适当的亚磷酸三烷基酯，通常为亚磷酸三甲酯或亚磷酸三乙酯和大气氧的存在下将中间体C-8氧化为3-羟基-2-羟吲哚衍生物。
将这样制备的化合物C-9在酸性介质，通常是三氟乙酸中环化，得到所需的外消旋稠合的螺环羟吲哚。
最后，使用手性HPLC条件分离所需的S-对映异构体。
在我们先前的专利申请WO 2015/189799 A1中描述了关于制备1,1'，2,5'-四氢螺[吲哚-3,2'-吡咯并(pirolo)]-2,5'-二酮核心的更多细节。
各酮C-1、靛红C-2和胺可商购获得，或可以使用以下方法获得。
方案2说明了一种通过甲氧基亲核取代2,4-二氯-5-硝基嘧啶(C-7A1)中2位和4位上的氯，随后还原2,4-二甲氧基-5-硝基嘧啶(C-7A2)中的硝基，制备5-氨基-2,4-二甲氧基嘧啶(C-7A)的代表性方法。
Figure BDA0002562353430000101
反应方案2
方案3说明了通过甲氧基亲核取代2,4-二氯-5-硝基吡啶(C-7B1)中2位和4位上的氯，然后还原2,4-二甲氧基-5-硝基吡啶(C-7B2)中的硝基，制备3-氨基-4,6-二甲氧基吡啶(C-7B)的代表性方法。
Figure BDA0002562353430000102
反应方案3
方案4说明了通过甲氧基亲核取代2-氯-4-甲氧基-5-硝基吡啶(C-7C1)中2位上的氯，随后在4-甲氧基-2-(二甲基氨基)-5-硝基吡啶(C-7C2)中还原硝基，制备5-氨基-4-甲氧基-2-(二甲基氨基)吡啶(C-7C)的代表性方法。
Figure BDA0002562353430000111
反应方案4
方案5说明了在通过甲氧基亲核取代2-氯-4,6-二甲氧基-5-硝基嘧啶(C-7D2)中2位上的氯之后，经由5-位硝化2-氯-4,6-二甲氧基嘧啶(C-7D1)，制备5-氨基-2,4,6-三甲氧基嘧啶(C-7D)的代表性方法。最后一步是还原2,4,6-三甲氧基-5-硝基嘧啶(C-7D3)中的硝基。
Figure BDA0002562353430000112
反应方案5
如上所述，本发明的化合物用作可用于预防和/或治疗选自癌症、免疫疾病、炎性病况、与过度增生有关的变应性皮肤病、致盲疾病和病毒感染的疾病的药物。
特别是，本发明的化合物可用于预防和/或治疗与细胞周期失调和细胞凋亡相关的疾病，即免疫疾病，例如自身免疫性疾病，和与组织/器官移植排斥相关的病症，如类风湿关节炎、移植物抗宿主病、系统性红斑狼疮、干燥综合征(Sjorgen’s syndrome)、多发性硬化症、桥本甲状腺样炎、多发性肌炎；慢性炎性病况是哮喘、骨关节炎、动脉粥样硬化、大肠克罗恩病(Morbus Crohn)；皮肤的炎性或变应性病况是牛皮癣、接触性皮炎、特应性皮炎、斑秃、多形性红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白癜风、变应性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、天疱疮、大疱性表皮松解症；过度增生性病症是Li-Fraumeni综合征；癌症或肿瘤疾病分别是良性或恶性肿瘤、肉瘤(例如横纹肌肉瘤)、骨癌(例如骨肉瘤)、脑癌(例如软组织脑肿瘤)、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、胃肿瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道或甲状腺癌、成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠道癌，尤其是结肠癌或结肠直肠腺瘤，颈部和头部肿瘤、黑色素瘤、前列腺增生、瘤形成、上皮特征瘤形成、乳腺癌、白血病(例如B细胞或T细胞淋巴瘤)、真性红细胞增多症、血小板增多症、肾上腺皮质癌，包括其他器官的转移；增生性玻璃体视网膜病变、病毒感染为疱疹、乳头状瘤、HIV、肝炎。
在上述疾病的治疗过程中，本发明的化合物可以以化学化合物的形式给药，但是通常以药物组合物的形式使用，该药物组合物包含作为活性成分的上文所定义的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体和赋形剂。
在上述疾病的治疗过程中，本发明的药物组合物可以通过任何途径给药，优选口服或胃肠外给药，并且取决于预期的给药途径，会具有用于药物的制剂形式。
固体制剂可以采取例如通过常规方式用药学上可接受的非活性成分制备的片剂或胶囊剂形式，所述药学上可接受的非活性成分为例如粘合剂(例如，预糊化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)、填充剂(例如乳糖、蔗糖、羧甲基纤维素、微晶纤维素或磷酸氢钙)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)、崩解剂(如交聚维酮、马铃薯淀粉或羟乙酸淀粉钠)、润湿剂(例如月桂基硫酸钠)。可以根据本领域众所周知的方法用常规包衣或肠溶衣涂覆片剂，包衣用于延迟/控制释放。用于口服给药的液体制剂可以采取例如溶液剂、糖浆剂或悬浮剂的形式，或者可以以在使用前用水或其他合适的载体(vehicle)重构的干燥产品呈现。此类液体制剂可以通过常规方法用药学上可接受的非活性成分制备，所述药学上可接受的非活性成分为例如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)、乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)、非水载体(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。制剂还可以包含合适的缓冲剂、调味剂、着色剂和甜味剂。
口服给药的制剂可以通过本领域技术人员已知的方法适当地配制以获得活性化合物的控释。
肠胃外给药包括通过肌肉内和静脉内注射以及静脉内输注(输注)给药。肠胃外给药的制剂可以是单位剂型，例如在安瓿中或在多剂量容器中，并添加了防腐剂。该组合物可以采取在油性或水性载体中的悬浮剂、溶液剂或乳剂的形式，并且可以包含诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等配制剂。
或者，活性成分可以是用合适的载体例如无菌无热原水重构的粉末形式。
使用本发明的化合物进行治疗的方法会涉及向需要这种治疗的个体施用治疗有效量的本发明的化合物，优选以药物组合物的形式。
本发明化合物的建议剂量为每天约0.1mg至约1000mg，以单剂量或分剂量形式。技术人员应当理解，实现期望的生物学效果所需的剂量的选择会取决于许多因素，例如具体的化合物、用途、给药方式、患者的年龄和状况，精确的剂量应最终由主治医生决定。
实施例
以下实施例并非意图限制本发明，而仅用作本发明的说明。
缩略语
Figure BDA0002562353430000131
Figure BDA0002562353430000141
Figure BDA0002562353430000151
使用适当的溶剂系统，在铝箔(Sigma-Aldrich,Merck)上用硅胶60F254上进行TLC。可视化通常通过UV光(254nm)完成。
UPLC-MS方法
在配备有PDA检测器和SQDMS检测器的UPLC液相色谱仪上进行UPLCMS分析，使用C18色谱柱，2.1mm×100mm，1.7μm(AQUITY UPLC BEH或等效产品)在ESI(+)或ESI(-)下操作。HPLC或LC/MS级甲醇、HPLC级水、HPLC或LC/MS级甲酸，p.a级25％的氨溶液及其混合物用作流动相。操作条件如下：流动相流量0.45mL/min，波长210-400nm，进样体积1μL，柱温60℃，自动进样器温度5℃。对于“下一次进样延迟”进行了5.5min+1.5min的分析。线性过程的梯度洗脱：
时间[min] ％A ％B 梯度曲线
0.0 80.0 20.0 -
4.0 0.1 99.9 线性(6)
5.5 80.0 20.0 直接(11)
溶液制备如下：
流动相A1-碱性梯度的制备：将25μL甲酸和250μL 25％的氨溶液添加到250mL水中。使用超声波浴脱气10min(分钟)。
流动相A2-酸性梯度的制备：将50μL甲酸添加到250mL水中。使用超声波浴脱气10min。
流动相B：甲醇超级梯度。
合成程序：
中间体C-4A：6-氯-3-(3-甲基-2-氧代亚丁基)-1H-吲哚-2-酮
Figure BDA0002562353430000161
在5L反应容器中装入羟醛C-3A(1015g，3.79mol，1eq)，并加入EtOH(2.85L)。将悬浮液加热至55℃，并一次性加入12M HCl(202mL，2.42mol，0.64eq)。然后，继续加热至乙醇的沸腾温度。发现，由于产物C-4A快速沉淀，需要更多的EtOH(500mL)。1h后，UPLCMS分析显示出98％的产物峰面积。停止加热并开始冷却反应混合物。当反应混合物的温度达到50℃时，将整个混合物转移到烧杯中并冷却至0-5℃。过滤固体残留物，并用1.3L冷EtOH洗涤。将固体产物在实验室干燥机(40℃)中干燥3h，然后在空气中干燥过夜。结果，获得为橙色固体的化合物C-4A(692g，产率73％，根据UPLCMS分析，纯度为98.1％)。
中间体C-3A：6-氯-3-羟基-3-(3-甲基-2-氧代丁基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-酮
Figure BDA0002562353430000162
在15L的反应容器中加入6-氯靛红(1000g，5.5mol，1eq)和EtOH(7L)，然后一次性加入3-甲基丁酮(2.94L，27.5mol，5eq)。将反应混合物加热至40℃，并一次性加入DEA(250mL，2.41mol，0.44eq)。然后，继续加热至乙醇的沸腾温度。1h后，UPLCMS分析显示反应混合物中有71％的产物。继续加热另外1h，之后UPLCMS分析显示出93％的产物。将反应混合物冷却至50℃，然后将整个混合物转移至圆底烧瓶中，并除去所有液体成分。将残留物悬浮在DCM(3.4L)中，并在回流下煮沸1h。在那之后，停止加热，并一次性加入正己烷(2L)。将烧瓶内容物冷却至约5℃，并在该温度下搅拌1.5h。过滤所得混合物，并将所得固体用500mLDCM/正己烷(1:1)混合物洗涤，然后在空气中干燥过夜。结果，获得了为灰色固体的预期羟醛产物C-3A(965g，根据UPLCMS分析，纯度为98.5％)。将过滤后的溶剂混合物真空浓缩至约1.5L，加入正己烷(700mL)，并将得到的悬浮液在室温搅拌0.5h。再次过滤，然后用DCM/正己烷混合物洗涤两次(每次洗涤150mL，1:1)，并在空气中干燥，得到第二部分羟醛产物C-3A(50g，纯度为99.1％)。羟醛C-3A的总产率为69％(1015g，根据UPLCMS分析，纯度为98.5％)。
中间体C-4B：6-氯-3-(3-甲基-2-氧代亚戊基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-酮
Figure BDA0002562353430000171
在250mL反应烧瓶中装入羟醛C-3B(11g，39mmol，1eq)，并一次性加入EtOH(32mL)。将悬浮液加热至55℃，并一次性加入12M HCl(1.63mL，19.5mmol，0.5eq)。然后，继续加热至乙醇的沸腾温度。1h后，UPLCMS分析显示出98％的产物。将反应混合物冷却至0-5℃，并搅拌0.5h。过滤固体残留物，并用一小部分冷EtOH洗涤。将固体产物在空气中干燥过夜。结果，获得为橙色固体的化合物C-4B(5g，产率49％，根据UPLCMS分析，纯度为99％)。
中间体C-3B：6-氯-3-羟基-3-(3-甲基-2-氧代戊基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-酮
Figure BDA0002562353430000172
在圆底烧瓶(250mL)中，将6-氯靛红(15g，83mmol，1eq)悬浮在EtOH(70mL)中，然后一次性加入3-甲基戊-2-酮(51.3mL，415mmol，5eq)。将反应混合物加热至40℃，并一次性加入DEA(4.34mL，42mol，0.5eq)。然后，继续加热至乙醇的沸腾温度。1h后，UPLCMS分析显示出60％的产物。继续加热另外2h，然后，UPLCMS分析显示出99％的产物。冷却至室温后，真空除去所有液体成分。将残留物悬浮在AcOEt(50mL)中，并在室温搅拌1h。之后，将烧瓶内容物冷却至约5℃，并在该温度下搅拌1.5h。过滤所得混合物，并将所得的固体用少量冷EtOH洗涤，然后在空气中干燥过夜。结果，获得了浅棕色固体的预期羟醛产物C-3B(5.1g，根据UPLCMS分析，纯度为98.5％)。将过滤后的残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(在正己烷中30％至60％的AcOEt)纯化。色谱分离后，获得第二部分产物C-3B，为浅棕色固体(5.9g)，纯度为97％(根据UPLCMS分析)。羟醛C-3B的总产率为47％(11g，根据UPLCMS分析，纯度为98％)。
中间体C-6A：N-(3-氯苯基)丙-2-炔基酰胺
Figure BDA0002562353430000181
在配备有机械搅拌的2L两颈圆底烧瓶中，将3-氯苯胺(75g，590mmol，1eq)溶于500mL DCM(HPLC级)中。然后，滴加溶于100mL DCM中的丙-2-炔酸(53.5g，760mmol，1.3eq)(出现胺的盐)。在下一步中，分几部分加入EDC·HCl(145g，760mmol，1.3eq)(添加过程中，将反应烧瓶在冰浴中冷却，以避免DCM回流)。完全加入EDC·HCl后，将反应混合物在室温下搅拌2h，然后将混合物缓慢转移至含有500mL水和250g冰的烧杯中。在0-5℃下继续搅拌约15min，然后滤出白色沉淀，用100mL冷水洗涤，并在空气中干燥。结果，获得了为白色固体的预期酰胺C-6A(102g，产率96.6％，根据UPLCMS分析，纯度为96.3％)。
中间体C-6B：N-(5-氯-2-氟苯基)丙-2-炔基酰胺
Figure BDA0002562353430000191
将丙-2-炔酸(15.16g，216.4mmol，1.05eq)一次性加入到5-氯-2-氟苯胺(30g，206.1mmol，1eq)在甲苯(400mL)的于冰/水浴中冷却的搅拌溶液中。将混合物搅拌15min，然后在保持温度低于10℃的同时分批加入DCC(44.65g，216.4mmol，1.05eq)。在5℃下继续搅拌2h，然后通过过滤收集固体DCU，并用甲苯(150mL)洗涤，最后用AcOEt/正己烷的混合物(150mL，1:9)洗涤。将滤液浓缩至约100mL的体积，并在室温下搅拌15min。通过过滤收集得到的沉淀，用甲苯/正己烷(20mL，1:1)、正己烷(20mL)的混合物洗涤，风干16h，得到15.29g为白色固体的所需产物。将滤液置于冰箱中3h，并通过过滤收集所得沉淀，用甲苯/正己烷(20mL，1:1)、正己烷(20mL)的混合物洗涤，并风干16h得到13.29g酰胺C-6B。将滤液浓缩至约20mL的体积，然后缓慢加入己烷(400mL)，同时搅拌。将混合物回流30min，并将热溶液过滤、浓缩至约100mL，并置于冰箱中18h。通过过滤收集得到的沉淀，用正己烷(2×20mL)洗涤，风干16h，另外得到7.19g酰胺C-6B。产物C-B6的总产率为88％(35.77g)。
中间体C-6C：N-(5-氯-2-甲基苯基)丙-2-炔基酰胺
Figure BDA0002562353430000192
在配备有机械搅拌的2L两颈圆底烧瓶中，将5-氯-2-甲基苯胺(75g，530mmol，1eq)溶于1000mL DCM(HPLC级)中。然后，滴加溶于100mL DCM(HPLC级)的丙-2-炔酸(49g，690mmol，1.3eq)(出现胺的盐)。在下一步骤中，分几部分添加EDC·HCl(添加期间，将反应烧瓶在冰浴中冷却，以避免DCM回流)。完全加入EDC·HCl后，将反应混合物在室温下搅拌1h。将整个混合物转移至含有750mL水和250g冰的烧杯中。在0-5℃下继续搅拌约15min，然后滤出白色沉淀，用100mL冷水洗涤，并在空气中干燥。结果，获得为白色固体的期望酰胺C-6C(81g，产率80％，根据UPLCMS分析，纯度为99.1％)。
中间体C-6D：N-(3-氯-4-氟苯基)丙-2-炔基酰胺
Figure BDA0002562353430000201
向配备有磁力搅拌棒和温度计的1L双颈圆底烧瓶中加入3-氯-4-氟苯胺(14.8g，100mmol，1eq)，然后加入DCM(200mL，HPLC级)和丙-2-炔酸(9.1g，130mmol，1.3eq)。将反应混合物冷却至0℃，并分几部分加入EDC·HCl(25.2g，130mmol，1.3eq)。反应是放热的，在加入过程中应避免超过+5℃。完全加入EDC·HCl后，将混合物在5℃下搅拌1h。此后，移去冰浴，并向反应混合物中加入200mL冷水。将反应搅拌约0.5h，并将得到的沉淀滤出，并用100mL冷水洗涤。将由此获得的固体重新溶于氯仿中，并将溶液用水洗涤，用Na2SO4干燥，并将溶剂蒸发至干。将得到的产物真空干燥。结果，获得为浅黄色固体的期望酰胺C-6D(19.2g，产率98％，根据UPLCMS分析，纯度为98％)。
中间体C-6E：N-(3,4-二氟苯基)丙-2-炔基酰胺
Figure BDA0002562353430000202
向配备有磁力搅拌棒和温度计的1L双颈圆底烧瓶中加入3,4-二氟苯胺(12.9g，9.9mL，100mmol，1eq)，随后加入DCM(300mL，HPLC级)和丙-2-炔酸(9.1g，130mmol，1.3eq)。将反应混合物冷却至0℃，并分几部分加入EDC·HCl(24.9g，130mmol，1.3eq)。反应是放热的，在添加过程中应避免超过+5℃。完全加入EDC·HCl后，将混合物在5℃下搅拌1h。此后，移去冰浴，并向反应混合物中加入300mL冷水。将反应搅拌约0.5h，并将得到的沉淀滤出并用100mL冷水洗涤。将由此获得的固体重新溶于AcOEt中，并将溶液用水洗涤，用Na2SO4干燥，并将溶剂蒸发至干。接下来，将产物用10mL冷DCM洗涤，并真空干燥。结果，获得了为灰白色固体的预期酰胺C-6E(17.3g，产率96％，根据UPLCMS分析，纯度为100％)。
中间体C-6F：N-(5-氯-2,4-二氟苯基)丙-2-炔基酰胺
Figure BDA0002562353430000211
在配备有磁力搅拌器的500mL两颈圆底烧瓶中，将5-氯2,4-二氟苯胺(10g，61mmol，1eq)溶于DCM(150mL，HPLC级)中。然后，滴加丙-2-炔酸(5.5g，78mmol，1.3eq)(出现胺的盐)。接下来分几部分加入EDC·HCl(14g，78mmol，1.3eq)(在加入过程中，将反应烧瓶在冰浴中冷却以保持室温)。在完全加入EDC·HCl后，在室温下将反应混合物另外搅拌1h。之后，加入150ml水，将混合物转移至分液漏斗中，分离各相。水相用DCM(2×100mL)萃取两次。合并有机级分，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并真空浓缩至约50ml，得到浓稠的悬浮液。过滤固体并干燥，得到8g奶油色晶体。将滤液浓缩，然后通过快速色谱法(正己烷/AcOEt；8:1→5:1)纯化，得到另外4.4g酰胺C-6F。结果，得到为奶油色固体的预期酰胺C-6F(12.4g，产率94％，根据UPLCMS分析，纯度为100％)。
中间体C-7A：5-氨基-2,4-二甲氧基嘧啶
Figure BDA0002562353430000212
向配备有磁力搅拌器的QianCap玻璃反应器(1850mL)中加入C-7A2(100g，540mmol)，随后加入THF(800mL)。接下来，一次性加入10％的钯碳(2g)，并将反应器连接到氢源。将氢气压力设置为2巴，并在连续的氢气流下将反应充分搅拌16h。在那之后，UPLCMS分析表明原始材料已完全转化。将反应混合物通过Cellite垫过滤，并将滤液真空浓缩至约150-200mL。然后，滴加正己烷(500mL)，并将悬浮液在室温下搅拌2h。过滤沉淀，用正己烷(2×50mL)洗涤两次并真空干燥。结果，获得为黄色/绿色固体的胺C-7A(77.94g，产率93％，根据UPLCMS分析，纯度为99％)。
中间体C-7A2：2,4-二甲氧基-5-硝基嘧啶
Figure BDA0002562353430000221
向包含温度计、水冷凝器、与惰性气体源(氩气)相连和机械搅拌器的2L三颈圆底烧瓶中加入甲醇(1L，HPLC级)，并在氩气气氛下缓慢加入小块钠(65g，2.83mol，2.2eq)，持续约1h，同时搅拌(反应是放热的，但是不冷却反应混合物；通常在第一块钠消耗时加入另一块钠)。在将全部钠溶解后，将反应混合物冷却至-5℃，并小心地分小批加入新鲜制备的C-7A1(250g，1.29mol，1eq)在甲醇(500mL，HPLC级)中的悬浮液(约40min)，同时充分搅拌。(注意：反应是高度放热的)，在加入过程中应避免超过+10℃。此外，在反应过程中形成许多固体产物。在加入全部量的底物悬浮液后，将反应混合物在0-5℃下保持约0.5h时，然后使其达到室温(通常花费约2h)。在那之后，UPLCMS分析显示底物完全消耗。然后，将反应混合物冷却至约5℃，将固体产物过滤，并用少量(100mL)的冷甲醇洗涤。将粗产物置于具有水(1L)的烧杯中，并用机械搅拌器使其充分悬浮(充分搅拌约10min)。然后将悬浮液过滤，并将所得固体用水(500mL)、正己烷(200mL)洗涤，并在空气中干燥过夜。结果，获得211.5g为浅黄色固体的化合物C-7A2(产率88％，根据UPLCMS分析，纯度为99％)。
中间体C-7B：5-氨基-2,4-二甲氧基吡啶
Figure BDA0002562353430000222
向配备有磁力搅拌器的QianCap玻璃反应器(1850mL)中加入C-7B2(40g，217mmol)，随后加入THF(500mL)。接下来，一次性加入10％的钯碳(1.5g)，并将反应器连接到氢源。将氢气压力设置为2巴，并在连续的氢气流下将反应充分搅拌7h。在那之后，UPLCMS分析表明原始材料已完全转化。将反应混合物通过Cellite垫过滤，并将滤液真空浓缩。结果，获得为棕色固体的胺C-7B(33g，产率99％)。
中间体C-7B2：2,4-二甲氧基-5-硝基吡啶
Figure BDA0002562353430000231
向包含温度计、水冷凝器、与惰性气体源(氩气)相连和机械搅拌器的2升三颈圆底烧瓶中加入甲醇(900mL，HPLC级)，并在氩气气氛下缓慢加入小块钠(26.7g，1.16mol，2.1eq)，持续约1h，同时充分搅拌(注意：反应是放热的，但不冷却反应混合物；通常在第一块钠消耗时添加另一块钠)。在将全部钠溶解后，将反应混合物冷却至-5℃，并小心地分小批加入新鲜制备的化合物C-7B1(106.25g，0.55mol，1eq)在甲醇(100mL，HPLC级)中的悬浮液(约30min)，同时充分搅拌(注意：反应是高度放热的，在加入过程中应避免超过+10℃)。加入全部量的底物C-7B1悬浮液后，将反应混合物在0-5℃下保持约40min，然后将其温热至室温，并在40℃下搅拌3.5h。在那之后，UPLCMS分析显示底物完全消耗。然后，将反应混合物冷却至低于10℃，将固体产物过滤并用少量(50mL)冷甲醇、水(100mL)、正己烷(100mL)洗涤，并在空气中干燥过夜。结果，获得99.3g为浅黄色固体的化合物C-7B2(产率98％，根据UPLCMS分析，纯度为97％)。
中间体C-7C：5-氨基-4-甲氧基-2-(二甲基氨基)吡啶
Figure BDA0002562353430000232
向配备有磁力搅拌器的QianCap玻璃反应器(500mL)中加入C-7C2(4.5g，22.8mol)，随后加入THF(70mL)和甲醇(70mL)。接下来，一次性加入10％的钯碳(0.48g)，将反应器连接到氢源。将氢气压力设置为2巴，并且在室温下、连续的氢气流下使反应充分进行17h。在那之后，UPLCMS分析表明原始材料已完全转化。将反应混合物通过Cellite垫过滤，并将滤液真空浓缩至干。结果，获得为深色固体的胺C-7C(3.9g；产率96％；根据UPLCMS分析，纯度为95％)。
中间体C-7C2：4-甲氧基-2-(二甲基氨基)-5-硝基吡啶
Figure BDA0002562353430000241
在包含温度计、水冷凝器和滴液漏斗的0.5L三颈圆底烧瓶中装入C-7C1(10g，50.4mmol，1eq)、THF(50mL)和甲醇(200mL)。将整个混合物在22℃下搅拌10min，然后滴加二甲胺(13.7mL，60％的水溶液)。1h后，浅黄色固体开始沉淀。加入下一部分二甲胺(2mL，60％的水溶液)，并将反应继续另外的24h。在那之后，将反应混合物真空浓缩，并将粗物质悬浮在甲醇(70mL)和水(140mL)中。在0℃下剧烈搅拌1h后，滤出浅黄色固体，用少量甲醇-水溶液洗涤并真空干燥。结果，获得为浅黄色固体的化合物C-7C2(10g；产率100％；根据UPLCMS分析，纯度为99％)。
中间体C-7D：5-氨基-2,4,6-三甲氧基嘧啶
Figure BDA0002562353430000242
向配备有磁力搅拌器的QianCap玻璃反应器(1850mL)中加入C-7D3(46g，231mmol)，随后加入MeOH(750mL)。接下来，一次性加入10％的钯碳(2.5g)，并将反应器连接到氢源。将氢气压力设置为2巴，并在连续的氢气流下将反应充分搅拌24h。在那之后，TLC分析表明原料材料已完全转化。将反应混合物通过Cellite垫过滤，并将滤液真空浓缩至干。结果，获得为米色固体的胺C-7D(38.3g，产率97％，根据UPLCMS分析，纯度为99％)。
中间体C-7D3：2,4,6-三甲氧基-5-硝基嘧啶
Figure BDA0002562353430000251
将甲醇(1000mL)加入到包含温度计和磁力搅拌器的2L圆底烧瓶中，并将整体在水/冰浴中冷却至0℃。然后分小批加入氢化钠(13g，327mmol，1.2eq，在矿物油中的60％)，持续30min(注意：反应是放热的)。搅拌30min后，分几部分加入底物C-7D2(60g，272mmol，1eq)。反应是高度放热的，并且在加入过程中，将反应烧瓶在水/冰浴中冷却。在反应过程中，观察到黄色固体的形成。使反应混合物达到室温(1h)，在那之后，TLC分析(DCM作为洗脱液)显示原始材料已完全转化。向反应混合物中加入1L水，并蒸发甲醇。滤出沉淀，用200mL正己烷洗涤，并在空气中干燥。结果，获得为黄色固体的化合物C-7D3(46.5g，产率79％，根据UPLCMS分析，纯度为100％)。
中间体C-7D2：2-氯-4,6-二甲氧基-5-硝基嘧啶
Figure BDA0002562353430000252
向包含温度计并配备有磁力搅拌器的0.5L两颈圆底烧瓶中加入化合物C-7D1(50g，286mmol，1eq)，随后加入TFAA(80mL，572mmol，2eq)/DCM混合物(1:1)。然后将混合物在盐水冰浴中冷却至-5℃。在不超过+40℃的温度下，将浓缩的发烟硝酸(14.3mL，343mmol，1.2eq)滴加至充分搅拌的混合物中(注意：反应是高度放热的)。在反应过程中，形成许多固体产物。加入全部量的硝酸后，使反应混合物达到室温。在那之后，TLC分析显示底物(等分试样，将其用水淬灭并用DCM萃取；平板用DCM洗脱)已完全消耗。将所得的浓白色沉淀倒入冰中，并继续搅拌10min。用DCM(3×100mL)萃取水溶液。然后将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，直到洗涤液保持在pH7。该溶液用MgSO4干燥，真空除去溶剂，得到黄白色晶体化合物C-7D2(61g，产率97％，根据UPLCMS分析，纯度为99％)。
化合物(1)，C1：(3S)-6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'- (丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000261
在外消旋化合物C-10.C1的制备型手性SFC(方法A)或手性RP-HPLC分离(方法R)分离后获得标题化合物；>99％ee；tr:7.77min.(方法R’)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),8.55–8.42(m,1H),7.37(s,1H),7.36–7.27(m,2H),7.14(s,1H),7.08(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),6.98(d,J＝7.8Hz,1H),6.93(d,J＝1.9Hz,1H),3.98(s,3H),3.94(br s,3H),2.43(sep,J＝7.0Hz,1H),0.86(d,J＝7.0Hz,3H),0.43(d,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ175.42,166.58,164.87,164.85,157.89,144.17,138.80,135.26,134.00,133.38,130.76,127.52,127.42,127.30,126.96,126.02,123.70,123.04,120.65,118.41,116.45,111.18,70.20,55.52,54.85,25.47,21.41,21.25。
化合物C-10.C1:6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2- 基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000262
将50mL的TFA置于配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中。然后，分几部分加入中间体C-9.C1(17.8g，30.6mmol)，并将反应混合物在40℃下剧烈搅拌3h。在那之后，UPLCMS分析显示出89％的产物峰，其中一些次要峰来自杂质。然后将大部分酸蒸发，并将残留物溶于DCM(100mL)中。加入100mL水，并将混合物用3M NaOH处理至pH8。分离各相，并用DCM(2×100mL)萃取水相。将合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，并蒸发至干，以提供18g纯度为90％的米色固体化合物C-10.C1。将粗产物C-10.C1溶于50mL甲醇(HPLC级)中。然后，在10min内滴加25％的甲醇钠溶液(10mL)，并将混合物在室温下搅拌。24h后，UPLCMS分析显示了97％预期产物C-10.C1。将混合物浓缩至一半体积，并缓慢转移至冰的搅拌混合物(100g)中，然后用3M HCl酸化至中性pH。滤出沉淀，用50mL水冲洗并真空干燥，得到为米黄色-橙色固体的化合物C-10.C1(14.5g，产率84％，根据UPLCMS分析，纯度为98％)。
制备C-10.C1的替代方法：将12.0g(19mmol)中间体C-9.C1溶于50mL冰AcOH中。加入MsOH(1eq)，并将混合物在40℃下搅拌。16h后，将混合物转移到含有100g冰和100mL 25％氨的烧杯中。过滤固体产物，用50mL水冲洗，并在空气中干燥。通过快速色谱法(DCM/MeOH，100:0→98:2)纯化得到9.6g米黄色-橙色固体，纯度为94％(根据UPLCMS分析)。产率：78％。
化合物C-9.C1：4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3-氯苯 基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000271
向配备有磁力搅拌棒的500mL烧瓶中加入化合物C-8.C1(15g，26.6mmol，1eq)和THF(200mL)，随后加入亚磷酸三乙酯(6.81mL，39.8mmol，1.5eq)。然后，分几部分加入叔丁醇钠(5.11g，53.2mmol，2eq)。将反应混合物在室温、空气气氛下搅拌3h(烧瓶配备有CaCl2管)。在那之后，UPLCMS分析显示出82％的所需产物和10％的主要杂质。将反应混合物缓慢转移至水(150mL)和12M HCl(5mL)的冷却(0-5℃)混合物中。加入AcOEt(100mL)后，将整个混合物转移至分液漏斗中。分离各层，并用AcOEt(100mL)再次萃取水相。合并的有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并真空除去溶剂。使用快速色谱法(CHCl3/MeOH 100:0→98:2)纯化粗产物。结果，获得5.86g纯度为93.7％的C-9.C1。产率：38％。
化合物C-8.C1：4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3-氯苯基)-1-(2, 4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000281
在配备有磁力搅拌棒的500mL圆底烧瓶中，将化合物C-4A(21g，117mmol，1eq)、C-6A(29.25g，117mmol，1eq)和C-7A(20g，将130mmol，1.1eq)悬浮于90％AcOH水溶液中，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至70℃，并在该温度下搅拌24h。在那之后，UPLCMS分析显示出60％的预期产物。将反应混合物冷却至室温，并蒸发至干。重复反应，将来自两个批次的残留物合并，并按照以下步骤纯化：
将固体残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(正己烷中30％至
50％的AcOEt)纯化。将所有含有产物的级分浓缩至500mL，并在室温下放置。24h后，滤出粉红色固体，用50mL正己烷冲洗，并在空气中干燥(40.8g，根据UPLCMS分析，纯度为96.5％)。将滤液蒸发至干，以提供另外的6.6g产物C-8.C1，其纯度为50％。产率：33％。
化合物(2),C2：(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)- 6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000282
在外消旋化合物C-10.C2的制备型手性SFC(方法B)或手性RP-HPLC(方法N)分离后获得标题化合物；>99％ee；tr:9.31min.(方法N’)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.23(br s,1H),8.50(br s,1H),7.45(ddd,J＝8.9,4.1,2.7Hz,1H),7.39(s,1H),7.32(t,J＝9.1Hz,1H),7.21–7.13(m,1H),7.08(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.05(dd,J＝6.3,2.7Hz,1H),6.90(d,J＝1.9Hz,1H),3.98(s,3H),3.94(br s,3H),2.48–2.39(m,1H),0.85(d,J＝7.0Hz,3H),0.44(d,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ175.51,166.44,164.70,164.24,158.75,157.96,156.74,144.03,135.39,134.14,130.82,130.75,129.58,128.33,127.30,125.99,125.66,125.54,123.64,123.04,119.63,118.75,118.68,118.57,116.25,111.12,70.04,55.67,55.01,49.04,25.34,22.00,21.50-20.80。
化合物C-10.C2：6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'- (丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000291
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中加入化合物C-9.C2(2.86g，4.76mmol)，并将该烧瓶在冰浴上冷却。然后，加入TFA(25mL)(约2mL/min)。除去冷却浴，并将反应在室温搅拌2h。在那之后，UPLCMS分析显示出72％的产物峰面积。然后将混合物倒入冰(约100g)中，并用DCM(50mL)稀释。分离各相，水相用DCM萃取3次。用水和盐水洗涤合并的有机相，并真空除去溶剂。将粗混合物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(AcOEt/己烷40％→60％)纯化。将色谱法后得到的棕色固体(1.51g)在正己烷(10mL)中的60％AcOEt中搅拌0.5h，然后过滤，用正己烷中的60％AcOEt洗涤，并在空气中干燥。结果，获得为浅棕色固体的化合物C-10.C2(1.35g，产率46％)，根据UPLCMS分析，纯度为96％。
化合物C-9.C2：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲 哚-3-基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000301
向配备有磁力搅拌棒的500mL烧瓶中加入化合物C-8.C2(5g，8.6mmol，1eq)和THF(80mL)，随后加入亚磷酸三甲酯(2mL，17.2mmol，2eq)。然后，将反应混合物在冰浴中冷却，并一次性加入叔戊醇钠(3.79g，34.4mmol，4eq)。移去冷却浴，将反应在室温下搅拌1h(烧瓶配备有CaCl2管)。在那之后，UPLCMS分析显示出91％的产物峰面积。除去约90％的溶剂，并将所得混合物用100mL水稀释。将得到的悬浮液用3M HCl酸化至约pH5，并用100mL DCM稀释。分离各相，将水相用DCM萃取3次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂。获得为红棕色固体/泡沫的粗产物C-9.C2(根据UPLCMS分析，纯度为72％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
化合物C-8.C2：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)- 1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000302
向配备有磁力搅拌棒的500mL烧瓶中加入化合物C-4A(12.48g，50mmol，1eq)、C-7A(7.76g，50mmol，1eq)和C-6B(9.88g，50mmol，1eq)，随后加入冰AcOH(125mL)，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至90℃(加热浴的温度)，并在该温度下搅拌16h。在那之后，UPLCMS分析显示原始材料几乎全部消耗(等于40％的产物峰面积)。将反应混合物冷却至室温，并将AcOH蒸发至干。将残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(在正己烷中30％至60％的AcOEt)纯化。除去溶剂后，获得为深红色固体/泡沫的产物C-8.C2(8.7g，产率30％)，根据UPLCMS分析，纯度为84％。
化合物(3),C3：(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-甲基苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(三甲氧基 嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000311
在外消旋化合物C-10.C3的制备型手性SFC(方法C)或手性RP-HPLC(方法T)分离后获得标题化合物；>99％ee；tr:16.7min(方法T’).1H NMR(600MHz,DMSO-d6)旋转异构体混合物：δ11.31(br s,1H),10.90(br s,1H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.33–7.18(m,4H),7.02(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),6.91(d,J＝1.9Hz,1H),6.86(d,J＝1.9Hz,1H),6.44(d,J＝2.2Hz,1H),3.97(d,J＝1.4Hz,3H),3.93(d,J＝4.3Hz,3H),3.90(d,J＝2.4Hz,3H),2.38–2.32(m,1H),2.24(s,1H),2.07(s,2H),0.80(dd,J＝13.5,7.0Hz,3H),0.41(dd,J＝10.0,7.0Hz,3H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)旋转异构体混合物：δ176.16,174.19,167.19,167.05,166.99,166.89,163.67,163.37,162.67,143.81,137.44,136.75,136.68,136.17,134.82,134.74,133.24,133.19,132.37,132.31,129.95,129.22,128.11,127.96,127.92,127.45,127.11,127.05,125.63,122.64,122.44,122.19,119.53,119.28,117.89,110.67,110.59,99.16,70.13,69.70,55.04,54.78,54.74,54.71,40.41,40.03,39.89,24.99,24.97,21.84,21.06,21.02,20.85,20.78,17.97,17.82。
化合物C-10.C3：6-氯-2'-(5-氯-2-甲基苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(三甲氧基嘧 啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000312
在室温下，向配备有磁力搅拌棒的25mL烧瓶中加入化合物C-9.C3(6.7g，1.19mmol)和AcOH(10mL)。然后加入MsOH(0.077mL，1.19mmol)，并将反应混合物在80℃搅拌3h。1h后，UPLCMS分析显示出93％的产物峰面积。蒸发AcOH，将残留物溶于AcOEt，用饱和NaHCO3盐水洗涤，用MgSO4干燥。将混合物浓缩至约5mL AcOEt，并将悬浮液过滤。将收集的固体用5mL AcOEt洗涤并真空干燥。获得为白色固体的所需产物C-10.C3(0.31g，产率43％，根据UPLCMS分析，纯度为98％)。
化合物C-9.C3：N-(5-氯-2-甲基苯基)-4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲 哚-3-基)-5-(丙-2-基)-1-(三甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000321
向配备有磁力搅拌棒的50mL烧瓶中加入化合物C-8.C3(0.8g，1.3mmol，1eq)和THF(15mL)。然后将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，并添加亚磷酸三乙酯(0.45mL，2.6mmol，2eq)。在0℃下10min后，分几部分添加叔戊醇钠(0.6g，5.2mmol，4eq)。将反应混合物在室温下搅拌(烧瓶配备有CaCl2管)并通过TLC(CHCl3中5％的MeOH溶液)监控。24h后，将混合物倒在冰上，并用1M HCl将反应酸化至约pH5。加入AcOEt(50mL)后，将混合物转移至分液漏斗中。分离各层，并用AcOEt(25mL)再次萃取水相。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂。使用CHCl3中1％的MeOH溶液为洗脱液，通过柱色谱法纯化残留物。获得为粉红色固体的所需产物C-9.C3(0.8g，产率90％，根据UPLCMS分析，纯度为93％)。
化合物C-8.C3：N-(5-氯-2-甲基苯基)-4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3- 基)-5-(丙-2-基)-1-(三甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000331
在配备有磁力搅拌棒的25mL圆底烧瓶中，加入化合物C-4A(0.67g，2.7mmol，1eq)、C-7D(0.5g，2.7mmol，1eq)和C-6C(0.52g，2.7mmol，1eq)，随后加入冰AcOH(10mL)，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至90℃，并在该温度下搅拌过夜。在那之后，UPLCMS分析显示原始材料几乎完全消耗(其等于45％的产物峰面积)。然后真空蒸发AcOH。残留物通过快速色谱法(正己烷/AcOEt，4:1→1:1)加以纯化，得到为红色固体的预期产物C-8.C3(0.8g，产率40％，根据UPLCMS分析，纯度为82％)。
化合物(4)，C4：(3S)-6-氯-2'-(3-氯-4-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)- 6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000332
在外消旋化合物C-10.C4的制备型手性SFC(方法D)或手性RP-HPLC(方法K)分离后得到标题化合物；>99％ee；tr:3.79min(方法K’).1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.47(br s,1H),8.23(s,1H),7.24–7.19(m,1H),7.18–7.12(m,1H),7.12–7.06(m,1H),7.05–6.96(m,2H),6.96–6.86(m,2H),4.07(s,3H),3.99(s,3H),2.49-2.38(m,1H),0.90(d,J＝7.0Hz,3H),0.52(d,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ175.2,166.5,165.6,164.9,158.5,157.0,156.5,142.0,136.4,134.3,132.6,132.5,131.0,128.6,128.5,126.5,126.2,123.8,122.8,121.4,121.3,120.7,117.8,117.0,116.8,116.2,111.6,70.1,55.6,54.7,25.6,21.2,1.9。
化合物C-10.C4：6-氯-2'-(3-氯-4-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'- (丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000341
在室温下，向配备有磁力搅拌棒的250mL烧瓶中加入化合物C-9.C4(10.34mmol)和TFA(70mL)(以约5mL/min的速度加入TFA)。然后，将反应在40℃下搅拌3h，并通过TLC监控。此后，UPLCMS分析显示出71％的产物峰面积。将混合物冷却至室温并蒸发至干。粗产物通过柱色谱法(10％至50％AcOEt/正己烷)纯化。除去溶剂后，获得为浅棕色固体/泡沫的产物C-10.C4(5.44g，两步后，从C-8.C4开始约80％的产率)，根据UPLCMS分析，纯度为88％。
化合物C-9.C4：4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3-氯-4- 氟苯基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000342
向配备有磁力搅拌棒的500mL烧瓶中加入化合物C-8.C4(6.04g,10.34mmol,1eq)和THF(140mL)。然后，将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，并一次性加入亚磷酸三甲酯(1.83mL,15.51mmol,1.5eq)、叔戊醇钠(2.28g,20.68mmol,2eq)。将反应混合物在此温度下搅拌4h(烧瓶配备有CaCl2管)，并通过TLC监控。在那之后，UPLCMS分析显示出87％的所需产物峰面积。接着，向混合物中加入冷水(50mL)，并用5％HCl将反应酸化至约pH5。将反应混合物在室温搅拌约0.5h，并将所得到的沉淀滤出，用100mL冷水洗涤。将如此获得的固体重新溶于AcOEt中，用水洗涤，用Na2SO4干燥，并蒸发溶剂。获得为棕色固体的粗产物C-9.C4(根据UPLCMS分析，纯度为85％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
化合物C-8.C4：4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)- 1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000351
向配备有磁力搅拌棒的250mL微波反应器中加入化合物C-4A(12.48g，50mmol，1eq)、C-7A(8.5g，55mmol，1.1eq)和C-6D(9.9g，50mmol，1eq)，随后加入冰AcOH，并紧密密封MW反应器。将混合物加热至90℃(300瓦)，并在该温度下搅拌5h。此后，UPLCMS分析显示原始材料几乎全部消耗(其等于40％的产物峰面积)。将反应混合物冷却至室温，并将AcOH蒸发至干。将残留物预吸附到硅胶上，并通过柱色谱法(10％的丙酮/DCM)纯化。除去溶剂后，获得为深棕色固体/泡沫的产物C-8.C4(6.96g，产率20.7％)，根据UPLCMS分析，纯度为87％。
化合物(5),C5：(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(三甲氧嘧 啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000352
在外消旋化合物C-10.C5的制备型手性SFC(方法E)或手性RP-HPLC(方法L)分离后获得标题化合物；>99％ee；tr:7.18min.(方法L’)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H),7.44(ddd,J＝8.9,4.1,2.7Hz,1H),7.31(t,J＝9.1Hz,1H),7.25(s,1H),7.15(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.08(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.05(dd,J＝6.3,2.7Hz,1H),6.89(d,J＝1.9Hz,1H),3.97(s,3H),3.93(s,3H),3.89(s,3H),2.40-2.31(m,1H),0.82(d,J＝7.1Hz,3H),0.41(d,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ175.64,167.54,167.40,164.33,163.18,158.6,156.93,144.05,135.29,133.95,130.69,129.61,128.30,127.19,126.20,125.74,125.65,123.01,119.35,118.69,118.55,111.07,99.55,70.08,55.50,55.20,49.02,25.42,21.46,21.26。
化合物C-10.C5：6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(三甲氧基嘧啶- 5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000361
在室温下，向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中加入化合物C-9.C5(6.7g，10.6mmol)和TFA(15mL)。将反应混合物在室温搅拌3h。此后，UPLCMS分析显示出85％的产物峰面积。将反应混合物倒在冰上，并用DCM萃取两次(2×30mL)。将合并的有机相用水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并蒸发至干。将AcOEt(50mL)加入到残留物中，并观察到粉红色沉淀的形成。滤出固体，用几份冷AcOEt洗涤，并在空气中干燥。获得为浅粉红色固体的所需产物C-10.C5(5.17g，产率80％，根据UPLCMS分析，纯度为99％)。
化合物C-9.C5：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲 哚-3-基)-5-(丙-2-基)-1-(三甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000362
向配备有磁力搅拌棒的500mL烧瓶中加入化合物C-8.C5(5g，8.14mmol，1eq)和THF(150mL)。然后将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，并加入亚磷酸三甲酯(1.92mL，16.3mmol，2eq)。在0℃下10min后，分几部分加入叔戊醇钠(3.6g，32.6mmol，4eq)。将反应混合物在室温下搅拌(烧瓶配备有CaCl2管)并通过TLC(正己烷中40％的AcOEt)监控。然后将混合物倒在冰上，并用0.5M HCl水溶液将反应酸化至约pH5。在加入DCM(100mL)后，将混合物转移至分液漏斗中。分离各层，并用DCM(100mL)再次萃取水相。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂。将残留物通过柱色谱法(30％-50％AcOEt/正己烷)纯化。获得为褐色固体的所需产物C-9.C5(2.41g，产率47％，根据UPLCMS分析，纯度为96％)。
化合物C-8.C5：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)- 5-(丙-2-基)-1-(三甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000371
在配备有磁力搅拌棒的150mL圆底烧瓶中加入化合物C-4A(6.3g，25.3mmol，1eq)、C-6B(4.7g，130mmol，1eq)和C-7D(5g，117mmol，1eq)，随后加入AcOH(40mL)，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至80℃，并在该温度下搅拌过夜。在那之后，UPLCMS分析显示原始材料几乎完全消耗(其等于66％的产物峰面积)。将反应混合物冷却至室温，并将产物C-8.C5的红色固体滤出，用AcOH洗涤并在空气中干燥(10g，产率64％，根据UPLCMS分析，纯度为82％)。
化合物(6),C6：(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基 吡啶-3-基]-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2, 3'-二酮
Figure BDA0002562353430000372
在外消旋化合物C-10.C6的制备型手性NP-HPLC(方法F)或手性RP-HPLC(方法J)分离后获得标题化合物；>99％ee；tr:14.66min.(方法J’)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.20(br s,1H),7.91(d,J＝22.0Hz,1H)7.43(ddd,J＝8.9,4.1,2.7Hz,1H),7.30(t,J＝9.1Hz,1H),7.23(s,1H),7.16(dd,J＝8.0,2.1Hz,1H),7.10–7.03(m,2H),6.89(d,J＝1.9Hz,1H),6.25(d,J＝5.6Hz,1H),3.82(d,J＝20.8Hz,3H),3.09(s,6H),2.47–2.37(m,1H),0.83(dd,J＝12.2,7.0Hz,3H),0.41(t,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ175.77,175.72,164.50,162.08,161.95,161.08,158.79,156.79,147.23,144.06,135.26,134.43,134.39,130.67,130.60,129.61,128.30,127.36,127.20,126.29,126.23,125.85,125.75 123.20,122.99,122.94,118.84,118.71,118.64,118.53,115.45,111.06,88.48,70.09,56.06,56.03,38.38,25.38,22.01,21.63,21.27,21.04。
化合物C-10.C6：6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基吡 啶-3-基]-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2, 3'-二酮
Figure BDA0002562353430000381
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中加入化合物C-9.C6(2.96g，4.8mmol)和TFA(30mL)。将反应混合物在40℃下搅拌1h。在此时间之后，UPLCMS分析显示出97％的所需产物C-10.C6。将反应混合物蒸发至干。向残留物中加入20ml甲醇和饱和NaHCO3(200mL)。将该悬浮液回流2h，然后冷却至室温。滤出沉淀，并在甲醇(20mL)中浸软。通过过滤收集固体，用少量甲醇洗涤并真空干燥，得到为灰白色固体的期望产物C-10.C6(2.3g，产率83％，根据UPLCMS分析，纯度＞99％)。
化合物C-9.C6：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲 哚-3-基)-1-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基吡啶-3-基]-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000382
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中加入化合物C-8.C6(4g，6.7mmol，1eq)和THF(30mL)，随后加入亚磷酸三乙酯(1.72mL，10.1mmol，1.5eq)。然后，将混合物冷却至3℃，并分几部分添加叔戊醇钠(1.48g，13.4mmol，2eq)。加热至室温后，将反应混合物搅拌22h(烧瓶配备有CaCl2管)。在那之后，UPLCMS分析显示出94％的所需产物C-9.C6。向混合物中加入水(200mL)和1M HCl以达到约pH8。用AcOEt(3×150mL)萃取水相。合并有机相，并用MgSO4干燥。浓缩后，将粗物质通过色谱法(10-30％的i-PrOH/正己烷)进一步纯化，得到化合物C-9.C6(3g，产率72％，根据UPLCMS分析，纯度为94％)。
化合物C-8.C6：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)- 1-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基吡啶-3-基]-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000391
在配备有磁力搅拌棒的圆底压力烧瓶(250mL)中，将化合物C-4A(5.37g，21.5mmol，1eq)、C-7C(3.6g，21.5mmol，1eq)、C-6B(4.25g，21.5mmol，1eq)和PTSA H2O(4.09g，21.5mmol，1eq)悬浮于水(9mL)和甲醇(36mL)中。将烧瓶紧密密闭，然后将混合物加热至60℃，并在该温度下搅拌23h。在那之后，UPLCMS分析显示出17％的预期产物C-8.C6。然后，加入另外一部分化合物C-6B(1.06g，5.4mmol)，并将混合物加热至75℃，并在该温度下搅拌42h。采集样品，UPLCMS分析显示出58％的预期产物C-8.C6。将反应混合物蒸发至干。向残留物中加入DCM(200mL)、5％NaHCO3溶液(150mL)，并将混合物搅拌20min。用DCM(4×200mL)萃取水相。合并有机相，并用MgSO4干燥。浓缩后，粗物质通过柱色谱法(20-50％AcOEt/正己烷)加以纯化，得到化合物C-8.C6(4.1g，产率32％，根据UPLCMS分析，纯度为90％)。
化合物(7),C7：(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)- 6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000401
在外消旋化合物C-10.C7的制备型手性SFC(方法G)或手性RP-HPLC(方法O)分离之后获得标题化合物；>99％ee；tr:5.61min(方法O’).1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.76(br s,1H),8.23(s,1H),7.23–7.18(m,1H),7.11–7.06(m,1H),7.06–6.98(m,2H),6.98–6.90(m,1H),6.90–6.85(m,1H),6.83-6.76(m,1H),4.06(s,3H),3.99(s,3H),2.49–2.39(m,1H),0.90(d,J＝7.0Hz,3H),0.51(d,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ175.3,166.5,165.7,164.9,157.0,150.9,149.0,148.9,148.8,142.2,136.4,134.3,132.3,126.5,126.2,124.9,123.7,122.9,120.6,118.1,118.0,117.8,117.5,117.4,116.1,111.7,77.3,77.0,76.7,70.2,55.6,54.7,25.6,21.3。
化合物C-10.C7：6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'- (丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000402
在室温下，向配备有磁力搅拌棒的250mL烧瓶中加入化合物C-9.C7(7.34g，15.57mmol)和TFA(80mL)(以约5mL/min的速度加入TFA)。然后，将反应在40℃下搅拌3h。此后，UPLCMS分析显示出84％的产品峰面积。将混合物冷却至室温并蒸发至干。粗产物通过快速柱色谱法(20％至50％AcOEt/正己烷)纯化。除去溶剂后，获得为浅棕色固体/泡沫的产物C-10.C7(4.45g，两步合成后产率为～63％)，根据UPLCMS分析，纯度为93％。
化合物C-9.C7：4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3,4-二氟 苯基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000411
向配备有磁力搅拌棒的500mL烧瓶中加入化合物C-8.C7(7.14g，12.57mmol，1eq)和THF(140mL)。然后，将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，并加入亚磷酸三甲酯(2.25mL，18.86mmol，1.5eq)，随后一次性加入叔戊醇钠(2.77g，25.14mmol，2eq)。将反应混合物在0℃搅拌1.5h(烧瓶配备有CaCl2管)。此后，UPLCMS分析显示出88％的产物峰面积。加入冷水(50mL)，并用5％HCl将反应酸化至约pH5。将反应混合物在室温下搅拌约0.5h，滤出得到的沉淀，并用100mL冷水洗涤。将由此获得的固体重新溶于AcOEt中，用水洗涤，用Na2SO4干燥，并将溶剂蒸发。获得为棕色固体的粗产物C-9.C7(根据UPLCMS分析，纯度为83％)，并且其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
化合物C-8.C7：4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3,4-二氟苯基)- 1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000412
在配备有磁力搅拌棒的250mL密封管中加入化合物C-4A(12.48g，50mmol，1eq)、C-7A(7.76g，50mmol，1eq)和C-6E(9.06g，50mmol,1eq)，随后加入AcOH(100mL)，并用塑料塞将管紧密密封。将混合物加热至80℃(加热浴的温度)，并在该温度下搅拌过夜。在那之后，UPLCMS分析显示原始材料几乎全部消耗(其等于40％的产物峰面积)。将反应混合物冷却至室温，并将AcOH蒸发至干。将残留物预吸附到硅胶上，并通过色谱法(50％的AcOEt/正己烷)纯化。除去溶剂后，得到为深棕色固体/泡沫的产物C-8.C7(7.63g，产率24.9％，根据UPLCMS分析，纯度为84％)。
化合物(8),C8：(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)- 6'-(丙-2-基)-1,2,3'，5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000421
在外消旋化合物C-10.C8的制备型手性SFC(方法H)或手性RP-HPLC(方法N)分离后得到标题化合物；>99％ee；tr:6.2min.(方法N’)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.15(br s,1H),8.07(d,J＝34.9Hz,1H),7.46–7.37(m,1H),7.37–7.27(m,2H),7.15(m,1H),7.08(dd,J＝8.0,1.9Hz,1H),6.92(m,J＝2.2Hz,1H),6.85(m,1H),6.64(d,J＝4.0Hz,1H),3.90(s,3H),3.83(d,J＝23.6Hz,3H),2.37(m,1H),0.85(dd,J＝13.0,7.0Hz,3H),0.41(dd,J＝9.4,6.9Hz,3H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ175.18,175.05,165.31,164.56,162.80,162.74,149.75,149.64,147.79,147.68,147.33,147.24,145.92,145.79,143.48,143.43,134.62,134.59,133.42,127.08,126.18,126.10,122.71,122.67,122.58,120.23,119.41,117.79,117.70,117.55,117.23,117.09,110.62,93.37,93.29,69.61,56.21,53.64,24.90,21.39,21.08,20.64,20.50。
化合物C-10.C8：6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'- (丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000422
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中加入化合物C-9.C8(2g，3.5mmol)，并将烧瓶在冰浴中冷却。然后，缓慢加入TFA(20mL)(大约2mL/min)。除去冷却浴，并将反应在室温搅拌1h。此后，UPLCMS分析显示出75％的产物峰。将反应另外搅拌1h，并将混合物倒入冰(约50g)中，并用DCM(50mL)稀释。分离各相，并将水相用DCM萃取三次(3×50mL)。用水、盐水洗涤合并的有机相，并真空除去溶剂。将残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(在正己烷中50％的AcOEt)纯化。除去溶剂后，获得为红棕色固体/泡沫的产物C-10.C8(815mg，产率41％)，根据UPLCMS分析，纯度为98％。将上述反应再重复三次，并将所有获得的化合物C-10.C8样品(5.76g)合并，并在25mL AcOEt/正己烷的混合物(1:5)中搅拌。将混合物加热至回流，并加入AcOEt直至所有剩余固体溶解。然后滴加75mL正己烷，并将混合物在室温搅拌16h。过滤固体，用AcOEt/正己烷(1:10，25mL)洗涤，并在高真空下干燥。结果，获得为浅红色固体的终产物C-10.C8(4.77g，根据UPLCMS分析，纯度为98％)。
化合物C-9.C8：4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3,4-二氟 苯基)-1-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000431
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中加入化合物C-8.C8(2g，3.5mmol，1eq)和THF(35mL)，随后加入亚磷酸三甲酯(0.83mL，7mmol，2eq)。然后，将反应混合物在冰浴中冷却，并一次性加入叔戊醇钠(1.54g，14mmol，4eq)。移去冷却浴，将反应在室温下搅拌1h(烧瓶配备有CaCl2管)。在那之后，UPLCMS分析显示出80％的产物峰面积。再搅拌一小时后，除去约90％的溶剂，并将所得混合物用50g冰稀释。将获得的悬浮液用1M HCl酸化至约pH5，并另外用50mL DCM稀释。分离各相，用DCM(2×30mL)萃取水相。合并的有机相用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂。获得为红黑色固体/泡沫的粗产物C-9.C8(根据UPLCMS分析，纯度为70％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(产率超过100％)。
化合物C-8.C8：4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)-N-(3,4-二氟苯基)- 1-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000441
向配备有磁力搅拌棒的500mL烧瓶中，加入化合物C-4A(8.1g，32.4mmol，1eq)，C-7B(5g，32.4mmol，1eq)和C-6E(5.9g，32.4mmol，1eq)，随后加入AcOH(80mL)，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至85℃(加热浴的温度)，并在该温度下搅拌16h。此后，UPLCMS分析显示原始材料几乎全部消耗掉(其等于55％的产物峰面积)。将反应混合物冷却至室温，并将AcOH蒸发至干。将残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(正己烷中30％至60％的AcOEt)纯化。除去溶剂后，获得为浅红色固体的产物C-8.C8(8g，产率44％)，根据UPLCMS分析，纯度为87％。
化合物(9),C9：(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)- 6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000442
在外消旋化合物C-10.C9的制备型手性SFC(方法I)或手性RP-HPLC(方法S)分离后得到标题化合物；>99％ee；tr:8.85min(方法S’).1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.23(br s,1H),8.10(d,J＝26.0Hz,1H),7.44(ddd,J＝8.9,4.1,2.7Hz,1H),7.35–7.27(m,2H),7.17(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),7.10–7.02(m,2H),6.90(d,J＝1.9Hz,1H),6.64(d,J＝2.1Hz,1H),3.90(s,3H),3.83(d,J＝20.7Hz,3H),2.45–2.32(m,1H),0.84(dd,J＝9.4,7.0Hz,3H),0.42(dd,J＝7.1,4.0Hz,3H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ175.68,165.85,164.38,163.36,163.24,158.77,156.77,146.44,144.17,135.31,134.21,130.70,129.60,128.33,127.33,126.18,125.78,125.66,123.46,122.92,120.71,119.27,118.72,118.54,111.11,93.90,70.08,56.78,54.18,25.42,22.00,21.64,21.24,21.04。
化合物C-10.C9：6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'- (丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000451
在配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中，将化合物C-9.C9(5.8g，9.68mmol)溶于30mL无水DCM中，并一次性加入10mL TFA。将反应在室温下搅拌3h。此后，UPLCMS分析显示出54％的产物峰面积。将反应混合物蒸发至干。将残留物在30mL AcOEt中搅拌1h，并且从混合物中沉淀出浅灰色固体。通过过滤分离固体，并在空气中干燥。结果，得到产物C-10.C9(2.2g，从C-8.C9开始，2步后产率为34.1％，根据UPLCMS分析，纯度为94％)。
化合物C-9.C9：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲 哚-3-基)-1-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000452
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中，加入化合物C-8.C9(6.08g，10.5mmol，1eq)和THF(62mL)，随后加入亚磷酸三甲酯(2.47ml，21mmol，2eq)。然后，将反应混合物在冰浴中冷却，并一次性批加入叔戊醇钠(3.47g，31.5mmol，3eq)。移去冷却浴，将反应液在室温下搅拌1h(烧瓶配备有CaCl2管)。此后，UPLCMS分析显示出94％的产物峰面积。将反应混合物冷却至-10℃左右，然后将其倒在冰上，将反应用0.5M HCl酸化至约pH5。水相用AcOEt(3x100mL)萃取，用Na2SO4干燥，并真空蒸发溶剂。获得为红黑色固体/泡沫的粗产物C-9.C9(根据UPLCMS分析，纯度为68％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(产率超过100％)。
化合物C-8.C9：N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-3-基)- 1-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000461
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中，加入化合物C-4A(7.79g，30mmol，1eq)、C-7B(4.68g，30mmol，1eq)和C-6B(6g，30mmol，1eq)，随后加入AcOH(60mL)，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至85℃(加热浴的温度)，并在该温度下搅拌16h。在那之后，UPLCMS分析显示原始材料几乎全部消耗(其等于40％的产物峰面积)。将反应混合物冷却至约15℃，并通过过滤从反应混合物中分离出大量红色固体沉淀。将滤液蒸发至干。将残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(正己烷中10％至60％的AcOEt)纯化。除去溶剂后，获得为浅红色固体的产物C-8.C9(5.58g，产率31.5％)，根据UPLCMS分析，纯度为93％。
化合物(10),C10：(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶- 5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二 酮
Figure BDA0002562353430000462
在外消旋化合物C-10.C10的制备型手性RP-HPLC分离后，使用方法P获得标题化合物；>99％ee；tr:9.96min.(方法P’)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.22(br s,1H),8.50(brs,1H),7.64(t,J＝9.4Hz,1H),7.40(s,1H),7.20(t,J＝7.5Hz,2H),7.10(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),6.91(d,J＝1.9Hz,1H),3.98(s,3H),3.95(s,,3H),2.47–2.41(m,1H),0.85(d,J＝7.0Hz,3H),0.44(d,J＝6.9Hz,3H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ175.36,170.76,166.43,164.71,164.35,159.05,158.96,158.36,158.26,157.95,157.03,156.93,156.36,156.26,144.01,135.46,134.20,131.13,127.41,125.84,123.55,123.09,121.72,121.63,119.46,118.77,116.23,115.59,115.44,111.19,107.31,107.10,106.90,70.05,60.19,55.66,55.01,25.34,22.31-20.83。
化合物C-10.C10：6-氯-2'-(5-氯-2,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5- 基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000471
将AcOH(25mL)置于配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中。然后，以一次性加入C-9.C10(2.3g，4mmol，1eq)。滴加MsOH(0.25mL，4.85mmol，1.2eq)，并将混合物在45℃下搅拌2h。蒸发大部分AcOH，将残留物溶于DCM(100mL)中，然后加入100mL水，并将混合物用3MNaOH处理，达到约pH 8。分离各相，将水相用DCM(2x 100mL)萃取。合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。残留物通过快速色谱法(CHCl3:MeOH；100:0→98:2)纯化，获得1.7g产物C-10.C10，根据UPLCMS分析，纯度为91％。
化合物C-9.C10：N-(5-氯-2,4-二氟苯基)-4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2,3-二氢- 1H-吲哚-3-基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000472
向配备有磁力搅拌棒的100mL烧瓶中加入化合物C-8.C10(8.9g，14.8mmol，1eq)和THF(50mL)，随后加入亚磷酸三乙酯(3.8mL，22.2mmol，1.5eq)。将溶液冷却至0℃，然后分几部分加入叔丁醇钠(2.85g，29.6mmol，2eq)。将反应混合物在室温搅拌3h(烧瓶配备有CaCl2管)。在那之后，UPLCMS分析显示出82％的所需产物。将反应混合物缓慢倒入水(150mL)和36％HCl(5mL)的冷却(0-5℃)混合物中。加入乙酸乙酯(100mL)后，将混合物转移至分液漏斗中。分离各层，并用AcOEt(100mL)再次萃取水相。合并的有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并真空浓缩。将油状残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(DCM/MeOH 100:0→98:2)纯化。分离出产物C-9.C10d的两个级分：根据UPLCMS分析，3g，纯度为85％，3g，纯度为41％。产率：50％(包括两个级分)。
化合物C-8.C10：N-(5-氯-2,4-二氟苯基)-4-(6-氯-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚- 3-基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(丙-2-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000481
在配备有磁力搅拌棒的250mL圆底烧瓶中，将化合物C-4A(11.6g，47mmol，1eq)、C-7A(8.7g，56mmol，1.2eq)和C-6F(10g，47mmol，1eq)悬浮于75mL的AcOH中，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至70℃，并在该温度下搅拌24h。在那之后，UPLCMS分析显示出47％的预期产物。将反应混合物蒸发至干。将固体残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(在正己烷中20％至50％的AcOEt)纯化。将含有产物的所有级分蒸发至干，以提供6.6g所需产物C-8.C10，根据UPLCMS分析，纯度为83％。产率：32％。
化合物(11),C11：(3S)-6'-(丁-2-基)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲 氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000482
在外消旋化合物C-10.C11的制备性手性HPLC-RP分离后，使用方法M，得到标题化合物(非对映异构体混合物)；>99％ee；tr:9.96min.(方法M’)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.24(s,1H),8.50(br s,1H),7.44(ddd,J＝8.9,4.2,2.7Hz,1H),7.38(s,1H),7.31(t,J＝9.1Hz,1H),7.23–7.14(m,1H),7.03(dd,J＝6.4,2.7Hz,1H),6.84(ddd,J＝10.5,8.4,2.4Hz,1H),6.72(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),3.98(s,3H),3.95(br s,3H),3.09(q,J＝7.3Hz,2H),2.48–2.39(m,1H),1.18(t,J＝7.2Hz,3H),0.85(d,J＝7.0Hz,2H),0.44(d,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ175.83,166.45,164.83,164.70,164.26,162.87,158.76,157.95,156.76,144.36,144.26,134.08,130.72,130.66,129.55,128.30,128.28,127.61,127.53,125.73,125.61,123.86,122.88,119.71,118.70,118.59,118.52,116.26,109.68,109.50,99.43,99.21,70.02,55.66,55.01,46.14,25.33,21.51,11.45,9.08。
化合物C-10.C11：6'-(丁-2-基)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基 嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
Figure BDA0002562353430000491
向配备有磁力搅拌棒的250mL烧瓶中加入化合物C-9.C11(2.8g，4.56mmol)以及DCM(60mL)。然后，加入TFA(30mL)(约2mL/min)。将反应在室温下搅拌2h。在那之后，UPLCMS分析显示出65％的预期产物峰面积。然后将混合物倒在冰上(约200mL)，并用DCM(100mL)稀释。分离各相，水相用DCM萃取3次(3×50mL)。将合并的有机相用水、盐水洗涤，用MgSO4干燥，并在真空下浓缩。使用柱色谱法(在正己烷中10％至40％的丙酮)纯化粗产物C-10.C11。结果，获得1.5g棕色固体C-10.C11。将该固体在AcOEt(5mL)中搅拌，通过过滤分离，用20mLAcOEt洗涤，并在空气中干燥。结果，获得为白色参与物的产物C-10.C11(1.4g，根据UPLCMS分析，纯度为98％)。
化合物C-9.C11：5-(丁-2-基)-N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-3-羟基-2-氧代-2, 3-二氢-1H-吲哚-3-基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000501
向配备有磁力搅拌棒的250mL烧瓶中加入化合物C-8.C11(3g，5mmol，1eq)和THF(80mL)，随后加入亚磷酸三甲酯(1.21mL，10mmol，2eq)。然后，将反应混合物在冰浴中冷却，并分小部分加入叔戊醇钠(2.2g，20mmol，4eq)。移去冷却浴，将反应在室温下搅拌5h(烧瓶配备有CaCl2管)。在那之后，UPLCMS分析显示出产物C-9.C11的两个(非对映异构体)峰的71％。将反应混合物用200mL具有冰的水稀释。将获得的悬浮液用3M HCl酸化至约pH 5，并用100mL AcOEt稀释。分离各相，并将水相用AcOEt萃取3次(3×50mL)。合并的有机相用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂。获得为深红色油的粗产物C-9.C11(根据UPLCMS分析，纯度为72％)，其无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。
化合物C-8.C11：5-(丁-2-基)-N-(5-氯-2-氟苯基)-4-(6-氯-2-氧-2,3-二氢-1H- 吲哚-3-基)-1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
Figure BDA0002562353430000502
向配备有磁力搅拌棒的250mL烧瓶中加入化合物C-4B(4.44g，16.8mmol，1eq)、C-7A(2.87g，18.5mmol，1.1eq)和C-6F(3.32g，16.8mmol，1eq)，随后加入AcOH(30mL)，并用塑料塞将烧瓶紧密密封。将混合物加热至90℃(加热浴的温度)，并在该温度下搅拌16h。在那之后，UPLCMS分析显示原始材料几乎完全消耗(其等于50％的产物峰面积)。将反应混合物冷却至室温，并蒸发至干。将残留物预吸附到硅胶上，并使用快速色谱法(在正己烷中30％至60％的AcOEt)纯化。除去溶剂后，获得为深红色固体/泡沫的产物C-8.C11(3.5g，产率35％)，根据UPLCMS分析，纯度为83％。
对映异构体的获得和分析
所有对映异构体均在制备型SFC或HPLC上用手性柱分离。
手性纯化条件-SFC
方法A：色谱柱：Lux Amylose-1(21.2mm x 250mm，5μm)，流速50mL/min，等度洗脱MeOH:CO2，25:75，检测：UV 210nm
方法B：色谱柱：Lux Cellulose-1(21.2mm x 250mm，5μm)，流速50mL/min，等度洗脱MeOH:CO2，25:75，检测：UV 210nm
方法C：色谱柱：Lux Cellulose-4(21.2mm x 250mm，5μm)，流速50mL/min，等度洗脱MeOH:CO2，45:55，检测：紫外215nm
方法D：色谱柱：Chiralpak IC(20mm x 250mm，5μm)，流速21mL/min，等度洗脱EtOH:CO2，45:55，检测：UV 210nm
方法E：色谱柱：Lux Cellulose-4(21.2mm x 250mm，5μm)，流速50mL/min，等度洗脱MeOH:CO2，40:60，检测：UV 210nm
方法F：色谱柱：Chiralpak AS-H(20mm x 250mm，5μm)，流速50mL/min，等度洗脱MeOH:CO2，25:75，检测：UV 210nm
方法G：色谱柱：Chiralpak IC(20mm x 250mm，5μm)，流速50mL/min，等度洗脱MeOH:CO2，45:55，检测：UV 210nm
方法H：色谱柱：Lux Cellulose-4(30mm x 250mm，5μm)，流速50mL/min，等度洗脱MeOH:CO2，40:60，检测：UV 210nm
手性纯化条件-NP-HPLC
方法I：色谱柱：Chiralpak IC(20mm x 250mm，5μm)流速21mL/min，等度洗脱MeOH，检测：UV 220nm
手性纯化条件-RP-HPLC
方法J：色谱柱：Lux Cellulose-2(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:MeOH：H2O，50:20:30，检测：UV 254nm
方法K：色谱柱：Lux Cellulose-2(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，80:20，检测：UV 254nm
方法L：色谱柱：Lux Cellulose-2(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，65:35，检测：UV 254nm
方法M：色谱柱：Lux Cellulose-2(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:H2O+HCO2NH4(流动相A1)，90:10，检测：UV 254nm
方法N：色谱柱：Lux Cellulose-2(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，70:30，检测：UV 254nm
方法O：色谱柱：Lux Cellulose-2(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，梯度洗脱，A＝ACN，B＝H2O，检测：UV 254nm
时间[min] ％A ％B 梯度曲线
0.0 60 40 -
1.0 60 40 线性(6)
5.0 90 10 线性(6)
10.0 60 40 直接(11)
方法P：色谱柱：Lux Amylose-2(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，50:50，检测：UV 254nm
方法R：色谱柱：Lux Amylose-2(21mm x 250mm，5μm)，流速：30mL/min，梯度洗脱；A＝ACN，B＝H2O，检测：UV 254nm
时间[min] ％A ％B 梯度曲线
0.0 60 40 -
1.0 60 40 线性(6)
7.0 90 10 线性(6)
12.0 60 40 直接(11)
方法S：色谱柱：Lux Amylose-2(21mm x 250mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，60:40，检测：UV 254nm
方法T：色谱柱：Lux Cellulose-4(21mm x 150mm，5μm)，流速：30mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，60:40，检测：UV 254nm
手性纯度分析条件-SFC
方法A'：色谱柱：Lux Amylose-1(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，MeOH:CO2，25:75，检测：UV211nm和254nm
方法B'：色谱柱：Lux Cellulose-1(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，MeOH:CO2，25:75，检测：UV211nm和254nm
方法C'：色谱柱：Lux Cellulose-4(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，MeOH:CO2，50:50，检测：UV210-400nm
方法D'：色谱柱：Chiralpak IC(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，EtOH:CO2，45:55，检测：UV 210-400nm
方法E'：色谱柱：Lux Cellulose-4(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，MeOH:CO2，40:60，检测：UV210-400nm
方法F'：色谱柱：AMS(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，MeOH:CO2，30:70，检测：UV 211nm和254nm
方法G'：色谱柱：Chiralpak IC(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，MeOH:CO2，40:60，检测：UV 210-400nm
方法H'：色谱柱：Lux Cellulose-4(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：40℃，流速：4mL/min，等度洗脱，MeOH:CO2，40:60，检测：UV211nm和254nm
手性纯度分析-NP-HPLC
方法I'：色谱柱：Lux Cellulose-5(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1mL/min，等度洗脱，EtOH，检测：UV 254nm
手性纯度分析条件-RP-HPLC
方法J'：色谱柱：Lux Cellulose-2(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:MeOH:H2O，50:20:30，检测：UV 254nm
方法K'：色谱柱：Lux Cellulose-2(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，80:20，检测：UV 254nm
方法L'：色谱柱：Lux Cellulose-2(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，65:35，检测：UV 254nm
方法M'：色谱柱：Lux Cellulose-2(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:H2O+HCO2NH4(流动相A1)，90:10，检测：UV 254nm
方法N'：色谱柱：Lux Cellulose-2(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，70:30，检测：UV 254nm
方法O'：色谱柱：Lux Cellulose-2(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，梯度洗脱，A＝ACN，B＝H2O，检测：UV 254nm
Figure BDA0002562353430000541
Figure BDA0002562353430000551
方法P'：色谱柱：Lux Amylose-2(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，50:50，检测：UV 254nm
方法R'：色谱柱：Lux Amylose-2(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温：环境温度，流速：1.23mL/min，梯度洗脱；A＝ACN，B＝H2O，检测：UV 254nm
时间[min] ％A ％B 梯度曲线
0.0 60 40 -
1.0 60 40 线性(6)
7.0 90 10 线性(6)
12.0 60 40 直接(11)
方法S'：色谱柱：Lux Amylose-2(4.6mm x 250mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，60:40，检测：UV 254nm
方法T'：色谱柱：Lux Cellulose-4(4.6mm x 150mm，5μm)，色谱柱温度：环境温度，流速：1.23mL/min，等度洗脱，ACN:H2O，60:40，检测：UV 254nm
根据本文所述的方法或已知文献方法，使用本领域技术人员已知的适当原始材料和方法，合成了以下实施例：
Figure BDA0002562353430000561
Figure BDA0002562353430000571
Figure BDA0002562353430000581
Figure BDA0002562353430000591
生物学实施例：
生物实施例1.荧光偏振测定
使用荧光偏振(FP)结合测定法测量p53-Mdm2相互作用的抑制。FP测量均匀悬浮液中分子的旋转运动。对于该测定，将Mdm2蛋白的N末端结构域(氨基酸1-111)与衍生自p53反式激活结构域的荧光素标记的(FAM)肽(序列：5-FAM-TSFAEYWNLLSP)组合。在用线性偏振光激发荧光配体时，肽发射垂直偏振光。如果肽与Mdm2结合，旋转会减慢，垂直分量会成比例地降低。相反，由于抑制剂与Mdm2的p53结合位点的结合而导致的肽-Mdm2复合物的破坏导致肽的释放和发射光偏振的降低。
在Biotek Cytation 5阅读器上使用470nm激发光和520nm发射滤光片对荧光素进行荧光偏振实验。在室温下，在黑色96孔板(Corning,CLS3991)中测量荧光偏振。将Mdm2的纯度控制在>95％。通过添加5mM DTT和0.1％两性离子洗涤剂CFIAPS来优化反应缓冲液，以减少非特异性相互作用的影响。
通过将在二甲亚砜(DMSO，终浓度为5％)中稀释的化合物的连续稀释液与反应缓冲液(PBS，0.1％CFIAPS，5mM DTT(二硫苏糖醇))中75nM Mdm2合并进行测试。在室温下孵育15min后，加入10nM FAM标记的肽。孵育90min后进行最终阅读。使用GraphPad Prism5计算剂量依赖性结合曲线和IC50值，然后使用Kenakin方程将其转换为Ki值(表2)。
表2
Figure BDA0002562353430000601
Figure BDA0002562353430000611
检查测量的Ki值表明，所有公开的化合物都是Mdm2-p53相互作用的有效抑制剂(Ki在1.7-2.5nM的范围内)。
生物实施例2.细胞活力测定
已经使用MTT测定评估了本发明的p53-Mdm2抑制剂对细胞活力的影响。它是测量可溶性黄色染料(MTT)的四唑环转化成不溶性紫色甲瓒的比色测定法。该方法仅在活细胞的线粒体脱氢酶中催化。死细胞不会引起这种变化。为了测量Mdm2-p53抑制剂的特异性细胞毒性，用表现出MDM2基因扩增的SJSA-1骨肉瘤细胞系和野生型p53进行了MTT测定。
将细胞接种在96孔板上，然后用受试化合物的连续稀释液处理。孵育72h后，加入MTT，至终浓度为0.5mg/ml。将细胞进一步孵育接下来的4h。然后将溶液排干，并将剩余的甲瓒晶体溶于100μl DMSO中。在570nm处进行吸光度读数，揭示了用评估的化合物处理的细胞与DMSO对照之间的相对细胞活力。所有MTT实验均独立重复2-5次。使用GraphPad Prism 5计算剂量依赖性的结合曲线和IC50值。给出的IC50值代表所有进行的实验的平均值(表3)。
表3
Figure BDA0002562353430000612
Figure BDA0002562353430000621
生物实施例3.使用微粒体进行体外固有清除率的测量
已经通过测量鼠和人微粒体中的体外固有清除率来评估本发明化合物的代谢稳定性。
在DMSO中制备标记物和测试化合物的10mM储备溶液。将它们在91:9MeCN:DMSO中稀释100倍，以获得100μM的测定原液。在0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.4)中配制10mM NADPH。
将微粒体在37℃的水浴中解冻，并稀释以使最终的测定浓度为0.5mg/ml。
向含有缓冲液和NADPH的孵育管中加入100μM测定原液，以使最终浓度为1μM(最终测定浓度为1mM)。将孵育管和微粒体在37℃下预热3min。然后将微粒体添加至保持在37℃的孵育管中，并在测定持续期间使用轨道振荡器进行振荡。在长达1h的6个预定时间点采集样品，并将其转移到含有适当溶剂和内标的制备的淬灭管中。
将淬灭的样品充分混合，蛋白质在-20℃沉淀至少12h。然后将样品在4℃下离心。将上清液转移至与自动进样器兼容的新鲜96孔板中。用预切开的硅胶垫密封板，并通过LC-MS/MS进行分析。
Figure BDA0002562353430000631
与WO2015/189799描述的化合物相比，所有当前公开的化合物在人和鼠微粒体中均显示出低固有清除率。唯一的例外是化合物6。但是，该化合物稍差的稳定性由其出色的体外功效加以补偿(SJSA-1IC50＝0.03μM)。
生物实施例4.小鼠中SJSA-1异种移植模型的体内功效
在来自Crl:CD-1-Foxn1nu品系的雌性小鼠中进行实验。在小鼠的右侧腹接种癌细胞系SJSA-1，每只小鼠的接种量为3x106个悬浮于100μl 3:1的HBSS:Matrigel基质中的细胞。接种后第17天，将小鼠分组，以使每组中的平均肿瘤体积相似，平均约为200mm3。选择实验组，每组由8只小鼠组成：对照NaCl 0.9％和化合物。将化合物1-11溶于56.60％PEG 400、9.43％Cremophor RH40、9.43％ETOH、18.87％Labrafil M1944CS、5.67％DMSO中。对于来自WO2015/189799的化合物107，使用7只小鼠组，并将其溶于15％PEG400、10％Cremophor EL、75％H2O中。
按q1dx14时间表(每天14剂量)经口服(p.o.)对实验所用的小鼠施用化合物或0.9％NaCl。在实验过程中，每次给药前都要对小鼠称重，每周两次/三次。每天监测动物福利。在研究期间和研究结束时，没有观察到各实验组之间体重或福利的显著差异。
从给药的第一天开始，每周两次/三次监测肿瘤体积的变化。根据用电子卡尺测量的长度和宽度计算肿瘤体积：
V[mm3]＝d2 x D/2
其中d-宽度，D-长度。
在接种后直至101天(最后一次给药后72天)测量各组的肿瘤体积。实验结果表示为肿瘤生长抑制(TGI)的平均值±SEM(表4)。使用以下公式计算肿瘤生长抑制：
TGI[％]＝[100-(T/C x 100)]
其中C为对照组的平均肿瘤大小，T为治疗组的平均肿瘤大小。所有计算和图形均使用GraphPad Prism 5软件进行。
表4
Figure BDA0002562353430000641
Figure BDA0002562353430000651
该实验的结果总结在表4以及图1和2中。可以看出，当前公开的化合物的改善的代谢稳定性转化为优异的体内功效。7剂量(差异36.0-46.6％)和12剂量(差异35,9-39,9％)后，观察到的化合物1-11的肿瘤生长抑制值均显著高于WO2015/189799中公开的最佳化合物。此外，如在图1中所观察到的，用WO2015/189799的14剂量12.5mg/kg p.o处理SJSA-1异种移植物仅减慢了肿瘤的生长。相同的治疗方案，但使用化合物7、8和11导致肿瘤完全根除。此外，在随后的第101天随访期间，所有病变均未显示出再生长。

Claims (18)

1.化合物，具有以下结构：
Figure FDA0002562353420000011
其中
R1是任选地进一步被1-2个独立地选自以下的取代基取代的间卤代苯基：卤素、-OH、-NH2、-NO2、-CN、-C1-C6-烷基、-O-(C1-C6-烷基)、-S-(C1-C6-烷基)、-C(O)O-(C1-C6-烷基)、-NH(C1-C6-烷基)和-N(C1-C6-烷基)2，
R2和R3独立地是H或卤素；
R4是-C1-C6-烷基；
R7是-OCH3；
Z是C-R8或N，Y是C-R9或N，前提是在同一化合物中，Z不是C-R8以及Y不是C-R9，
R5、R6、R8、R9独立地是H、卤素、-OCH3、-NH(CH3)或-N(CH3)2。
2.如权利要求2所述的化合物，其中
R1是任选地进一步被1-2个独立地选自以下的取代基取代的间卤代苯基：卤素、C1-C6-烷基、-O-(C1-C6-烷基)、-NH(C1-C6-烷基)和-N(C1-C6-烷基)2。
3.如权利要求3所述的化合物，其中
R1是任选地进一步被1-2个独立地选自以下的取代基取代的间卤代苯基：卤素、-CH3、-OCH3、-NH(CH3)和-N(CH3)2。
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中
R2是H，且
R3是Cl。
5.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中
R4是异丙基或异丁基。
6.如权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中
Z和Y都是N。
7.如权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中
Z是C-R8且Y是N。
8.如权利要求6所述的化合物，其中
R5和R6都是OMe。
9.如权利要求7所述的化合物，其中
R8是H，且
R5和R6中的至少一个是OMe，且另一个选自H、-N(Me)2和OMe。
10.如权利要求2所述的化合物，选自：
(1)(3S)-6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(2)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(3)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-甲基苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(4)(3S)-6-氯-2'-(3-氯-4-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(5)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(6)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基吡啶-3-基]-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(7)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(8)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(9)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(10)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(11)(3S)-6'-(丁-2-基)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮。
11.如权利要求6所述的化合物，选自：
(1)(3S)-6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(2)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(3)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-甲基苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(4)(3S)-6-氯-2'-(3-氯-4-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(5)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-6'-(丙-2-基)-5'-(2,4,6-三甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(7)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(10)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2,4-二氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(11)(3S)-6'-(丁-2-基)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮。
12.如权利要求7所述的化合物，选自：
(6)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-[6-(二甲基氨基)-4-甲氧基吡啶-3-基]-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺邻[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(8)(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
(9)(3S)-6-氯-2'-(5-氯-2-氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮
13.下式的化合物：
Figure FDA0002562353420000041
所述化合物是
(3S)-6-氯-2'-(3,4-二氟苯基)-5'-(4,6-二甲氧基吡啶-3-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮。
14.下式的化合物：
Figure FDA0002562353420000042
所述化合物是：
(3S)-6-氯-2'-(3-氯苯基)-5'-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-6'-(丙-2-基)-1,2,3',5'-四氢-2'H-螺[吲哚-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡咯]-2,3'-二酮。
15.权利要求1-14中任一项的化合物，所述化合物用作药物。
16.如权利要求15所述化合物，其用于预防和/或治疗选自癌症、免疫疾病、炎性病况、与过度增生有关的变应性皮肤病、致盲性疾病和病毒感染的疾病的方法中。
17.如权利要求16所述化合物，其中所述疾病是癌症。
18.药物组合物，包含作为活性成分的权利要求1-14中任一项所定义的化合物，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
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