BR112020012077A2 - composições de ração animal e usos das mesmas - Google Patents

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Abstract

A presente invenção se refere a composições de ração animal que compreendem polipeptídeos que têm atividade de muramidase e usos dos mesmos.

Description

“COMPOSIÇÕES DE RAÇÃO ANIMAL E USOS DAS MESMAS” REFERÊNCIA A UMA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0001] Este pedido contém uma Listagem de Sequências em forma legível por computador, que é incorporada ao presente documento a título de referência.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo da Invenção
[0002] A presente invenção se refere ao uso de composições de ração animal que compreendem polipeptídeos que têm atividade de muramidase para aprimorar a absorção de nutriente em animais. Descrição da Técnica Relacionada
[0003] Muramidase, também conhecida como lisozima, é uma O-glicosil hidrolase produzida como um mecanismo de defesa contra bactérias por muitos organismos. A enzima causa a hidrólise de paredes de célula bacteriana clivando-se as ligações glicosídicas de peptidoglicano; uma molécula estrutural importante nas bactérias. Após deixar suas paredes “celulares enfraquecidas por meio da ação de muramidase, ocorre a lise das células bacterianas como resultado da pressão osmótica não balanceada.
[0004] Muramidase Ocorre naturalmente em muitos organismos como vírus, plantas, insetos, aves, répteis e mamíferos. Em mamíferos, a Muramidase foi isolada das secreções nasais, saliva, lágrimas, conteúdo intestinal, urina e leite. A enzima cliva a ligação glicosídica entre o carbono número 1 de ácido N-acetilmurâmico e carbono número 4 de N-acetil-D-glucosamina. In vivo, esses dois carboidratos são polimerizados para formar o polissacarídeo de parede celular de muitos microrganismos.
[0005] Muramidase foi classificada em cinco famílias de glicosídeo hidrolase (GH) diferentes (CAZy, wWWW.Cazy.0org) muramidase de clara de ovo de galinha (GH22), muramidase de clara de ovo de ganso (GH23), muramidase de bacteriófago T4 (GH24), proteína flagelar de Sphingomonas (GH73) e muramidases de Chalaropsis (GH25). A muramidase extraída da clara de ovo de galinha (uma muramidase GH22) é o produto primário disponível no mercado e, tradicionalmente, foi apenas referida como muramidase muito embora nos dias de hoje haja muitas outras muramidases conhecidas.
[0006] Surpreendentemente, os inventores da presente invenção constataram que a muramidase pode ser usada em uma ração animal ou aditivo de ração animal para aprimorar a absorção de nutriente e, então, é benéfica para a saúde do animal e pode aprimorar as propriedade da carne como qualidade e pigmentação.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0007] A presente invenção se refere a uma ração animal ou aditivo de ração animal que compreende um ou mais polipeptídeos que têm atividades de muramidase. A invenção também se refere à um método de aprimoramento da absorção de nutriente em um animal que compreende administrar ao animal tal ração animal ou aditivo de ração animal; e uso de tal ração animal ou aditivo de ração animal para aprimorar a absorção de nutriente em um animal.
VISÃO GERAL DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0008] SEQ ID NO: 1 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Acremonium alcalophilum conforme descrito no documento WO2013/076253 (SEQ ID NO: 4).
[0009] SEQ ID NO: 2 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Acremonium alcalophilum conforme descrito no documento WO2013/076253 (SEQ ID NO: 8).
[0010] SEQ ID NO: 3 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Aspergillus fumigatus conforme descrito no documento WO2011/104339 (SEQ ID NO: 3).
[0011] SEQ ID NO: 4 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Trichoderma reesei conforme descrito no documento WO2009/102755 (SEQ ID NO: 4).
[0012] SEQ ID NO: 5 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Trametes cinnabarina conforme descrito no documento WO2005/080559 (SEQ ID NO: 2).
[0013] SEQ ID NO: 6 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Sporormia fimetaria conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 3).
[0014] SEQ ID NO: 7 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Poronia punctata conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 6).
[0015] SEQ ID NO: 8 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Poronia punctata conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 9).
[0016] SEQ ID NO: 9 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Lecanicillium sp. WMM742 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 12).
[0017] SEQ ID NO: 10 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Lecanicillium sp. WMM742 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 15).
[0018] SEQ ID NO: 11 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Onygena equina conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 18).
[0019] SEQ ID NO: 12 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Purpureocillium lilacinum conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 21).
[0020] SEQ ID NO: 13 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Trichobolus zukalii conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 24).
[0021] SEQ ID NO: 14 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Penicillium citrinum conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 27).
[0022] SEQ ID NO: 15 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Cladorrhinum bulbillosum conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 30).
[0023] SEQ ID NO: 16 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Umbelopsis westeae conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 33).
[0024] SEQ ID NO: 17 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Zygomycetes sp. XZ2655 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 36).
[0025] SEQ ID NO: 18 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Chaetomium cupreum conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 39).
[0026] SEQ ID NO: 19 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Cordyceps cardinalis conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 42).
[0027] SEQ ID NO: 20 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Penicillium sp. 'gii' conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 45).
[0028] SEQ ID NO: 21 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Aspergillus sp. nov XZ2609 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 48).
[0029] SEQ ID NO: 22 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Paecilomyces sp. XZ2658 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 51).
[0030] SEQ ID NO: 23 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Paecilomyces sp. XZ2658 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 54).
[0031] SEQ ID NO: 24 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Pycnidiophora cf dispera conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 60).
[0032] SEQ ID NO: 25 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Thermomucor indicae-seudaticae conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 63).
[0033] SEQ ID NO: 26 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Isaria farinosa conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 66).
[0034] SEQ ID NO: 27 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Lecanicillium sp. WMM742 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 69).
[0035] SEQ ID NO: 28 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Zopfiella sp. tl180-6 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 72).
[0036] SEQ ID NO: 29 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Malbranchea flava conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 75).
[0037] SEQ ID NO: 30 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Hypholoma polytrichi conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 80).
[0038] SEQ ID NO: 31 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Aspergillus deflectus conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 83).
[0039] SEQ ID NO: 32 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Ascobolus stictoideus conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 86).
[0040] SEQ ID NO: 33 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Coniochaeta sp. conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 89).
[0041] SEQ ID NO: 34 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Daldinia fissa conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 92).
[0042] SEQ ID NO: 35 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Rosellinia Sp. conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 95).
[0043] SEQ ID NO: 36 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Ascobolus sp. ZY179 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 98).
[0044] SEQ ID NO: 37 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Curreya sp. XZ2623 conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 101).
[0045] SEQ ID NO: 38 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Coniothyrium sp. conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 104).
[0046] SEQ ID NO: 39 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Hypoxylon sp. conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 107).
[0047] SEQ ID NO: 40 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Xylariaceae sp. 1653h conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 110).
[0048] SEQ ID NO: 41 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Hypoxylon sp. conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 113).
[0049] SEQ ID NO: 42 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Yunnania penicillata conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 116).
[0050] SEQ ID NO: 43 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Engyodontium album conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 119).
[0051] SEQ ID NO: 44 é à sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Metapochonia bulbillosa conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 122).
[0052] SEQ ID NO: 45 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Hamigera paravellanea conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 125).
[0053] SEQ ID NO: 46 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Metarhizium iadini conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 128).
[0054] SEQ ID NO: 47 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Thermoascus aurantiacus conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 131).
[0055] SEQ ID NO: 48 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Clonostachys rossmaniae conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 134).
[0056] SEQ ID NO: 49 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Simplicillium obclavatum conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 137).
[0057] SEQ ID NO: 50 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Aspergillus inflatus conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 140).
[0058] SEQ ID NO: 51 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Paracremonium inflatum conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 143).
[0059] SEQ ID NO: 52 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Westerdykella sp. conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 146).
[0060] SEQ ID NO: 53 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Stropharia semiglobata conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 155).
[0061] SEQ ID NO: 54 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Gelasinospora cratophora conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 158).
[0062] SEQ ID NO: 55 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Flammulina velutipes conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 221).
[0063] SEQ ID NO: 56 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Deconica coprophila conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 224).
[0064] SEQ ID NO: 57 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Rhizomucor pusillus conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 227).
[0065] SEQ ID NO: 58 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Stropharia semiglobata conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 230).
[0066] SEQ ID NO: 59 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Stropharia semiglobata conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978 (SEQ ID NO: 233).
[0067] SEQ ID NO: 60 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Myceliophthora fergusii conforme descrito no documento PCT/CN2017/075960 (SEQ ID NO: 3).
[0068] SEQ ID NO: 61 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Mortierella alpina conforme descrito no documento PCT/CN2017/075960 (SEQ ID NO: 15).
[0069] SEQ ID NO: 62 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH25 de Penicillium atrovenetum conforme descrito no documento PCT/CN2017/075960 (SEQ ID NO: 27).
[0070] SEQ ID NO: 63 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Trichophaea saccata conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 257).
[0071] SEQ ID NO: 64 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Chaetomium thermophilum conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 264).
[0072] SEQ ID NO: 65 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Trichoderma harzianum conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 267).
[0073] SEQ ID NO: 66 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Trichophaea minuta conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 291).
[0074] SEQ ID NO: 67 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Chaetomium sp. 2ZY287 conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 294).
[0075] SEQ ID NO: 68 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Mortierella sp. Z2Y002 conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 297).
[0076] SEQ ID NO: 69 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Metarhizium sp. XZ2431 conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 300).
[0077] SEQ ID NO: 70 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de Geomyces auratus conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 303).
[0078] SEQ ID NO: 71 é a sequência de aminoácidos madura de uma muramidase GH24 de TIlyonectria rufa conforme descrito no documento WO2017/000922 (SEQ ID NO: 306).
DEFINIÇÕES
[0079] Animal: O termo “animal” se refere a qualquer animal exceto seres humanos. Exemplos de animais são animais monogástricos, incluindo, mas sem limitação, porcos ou suínos (incluindo, mas sem limitação, leitões, porcos em crescimento e porcas gestantes); aves como perus, patos, codornas, galinha-da-angola, gansos, pombos (incluindo pombos jovens) e galinha (incluindo, mas sem limitação, frangos que servem para corte (referido ao presente documento como frangos de corte), frangos, galinhas poedeiras (referidas no presente documento como poedeiras)); animais de estimação como gatos e cachorros; cavalos (incluindo, mas sem limitação, de sangue quente, de sangue frio e de sangue morno), crustáceos (incluindo, mas sem limitação, camarões e pitus) e peixe (incluindo, mas sem limitação, seriola, pirarucu, barbo, achigã, anchova, bocachico, brema, peixe-gato, cachama, carpa, bagre, catla, chanos, truta-de-lago, acará-grande, bijupirá, bacalhau, tipo de peixe branco, dourada, corvina, moreia, góbio, peixe-dourado, gourami, garoupa, guapote, linguado, java, labeo, lai, botia, cavala, peixe-leite, carapeba, salamandra, tainha, paco, peixe-mexerica, peixe-rei, perca, pike, pampo-galhudo, rutilis, salmão, sampa, sauger, robalo, dourada, shiner, góbio-dorminhoco, peixe cabeça-de- cobra, pargo, robalo comum, linguado, spinefoot, esturjão, peixe-lua, curimatã, peixe-médico, peixe terror, tilápia, truta, atum, rodovalho, cisco europeia, Ppicão-verde e peixe-branco).
[0080] Ração animal: O termo “ração animal” se refere a qualquer composto, preparação ou mistura solúvel para, Ou destinada para consumo por um animal. A ração animal para um animal monogástrico compreende tipicamente concentrados assim como vitaminas, minerais, enzimas, ingredientes microbianos de alimentação direta, aminoácidos e/ou outros ingredientes de ração (como em uma pré-mistura) enquanto a ração animal para ruminantes geralmente compreende forragem (incluindo fibras e silagem) e pode compreender adicionalmente concentrados assim como vitaminas, minerais, ingredientes microbianos de alimentação direta de enzimas, aminoácido e/ou outros ingredientes de ração (como em uma pré-mistura).
[0081] Concentrados: O termo “concentrados” significa ração com altas concentrações de proteína e energia, como farinha de peixe, melaços, oligossacarídeos, sorgo, sementes e grãos (sejam integrais ou preparados por meio de trituração, moagem, etc., de, por exemplo, milho, aveia, centeio, cevada, trigo), torta de prensagem de semente oleaginosa (por exemplo, de semente de algodão, cártamo, girassol, soja (como farinha de soja), colza/canola, amendoim ou planta oleaginosa da família do amendoim), torta de semente de palma, material derivado de levedura e grãos destiladores (como grãos úmidos de destiladores (WDS) e grãos secos de destiladores com solúveis (DDGS)).
[0082] Eficiência da ração: O termo “eficiência da ração” significa a quantidade de ganho de peso por unidade de ração quando o animal é alimentado à vontade ou uma quantidade especificada de alimento durante um período de tempo. Por "eficiência da ração aumentada" significa que oO uso de uma composição de aditivo de ração de acordo com a presente invenção na ração resulta em um ganho de peso aumentado por unidade de consumo de ração em comparação com um animal alimentado sem a dita composição de aditivo de ração estar presente.
[0083] Forragem: O termo “forragem” conforme definido No presente documento também inclui fibra. Forragem é O material vegetal fresco como feno e silagem de plantas de forragem, gramíneas e outras plantas de forragem, alga do mar, grãos germinados e legumes, ou qualquer combinação dos mesmos. Exemplos de plantas de forragem são Alfalfa (luzerna), cornichão perene, brassica (por exemplo, couve- frisada, colza (canola), rutabaga (couve-nabo), nabo), trevo (por exemplo, trevo alsike, trevo vermelho, trevo subterrâneo, trevo branco), gramínea (por exemplo, grama- bermudas, capim, aveia-perene, festucas, cambaleia-grama, prados, panasco, azevém, erva-dos-prados), milho (maís), painço, cevada, aveia, centeio, sorgo, sojas e trigo e vegetais como beterrabas. Forragem inclui adicionalmente resíduos de cultura de produção de grãos (como palha de milho; palha de trigo, cevada, aveia, centeio e outros grãos); resíduos de vegetais como colos de beterraba; resíduos da produção de semente como caules e folhas da soja, colza e outros legumes; e frações do refino de grãos para consumo animal ou humano ou da produção de combustível ou outras indústrias.
[0084] Fragmento: O termo “fragmento” significa um polipeptídeo ou um domínio catalítico que tem um ou mais (por exemplo, diversos) aminoácidos ausentes do terminal amino e/ou carboxila de um polipeptídeo maduro ou domínio; em que o fragmento tem atividade de muramidase.diversos) aminoácidos ausentes do terminal amino e/ou carboxila de um polipeptídeo maduro ou domínio; em que o fragmento tem atividade de muramidase.
[0085] Em um aspecto, um fragmento de uma muramidase GH24 (como uma da SEQ ID NO: 63 a 71) compreende pelo menos 230 aminoácidos, como pelo menos 235 aminoácidos, pelo menos 240 aminoácidos, ou pelo menos 245 aminoácidos e tem atividade de muramidase. Em um outro aspecto, um fragmento de uma muramidase GH24 (como uma da SEQ ID NO: 63 a 71) compreende pelo menos 90 % do comprimento do polipeptídeo maduro, como pelo menos 92 %, pelo menos 94 %, pelo menos 96 %, pelo menos 98 % ou pelo menos 99 % do comprimento do polipeptídeo maduro e tem atividade de muramidase.
[0086] Em um aspecto, um fragmento de uma muramidase GH25 (como uma da SEQ ID NO: 1 a 72) compreende pelo menos 180 aminoácidos, como pelo menos 185 aminoácidos, pelo menos 190 aminoácidos, pelo menos 195 aminoácidos, pelo menos 200 aminoácidos, pelo menos 205 aminoácidos ou pelo menos 210 aminoácidos e tem atividade de muramidase. Em um outro aspecto, um fragmento de uma muramidase GH25 (como uma da SEQ ID NO: 1 a 72) compreende pelo menos 90 % do comprimento do polipeptídeo maduro, como pelo menos 92 %, pelo menos 94 %, pelo menos 96 %, pelo menos 98 % ou pelo menos 99 % do comprimento do polipeptídeo maduro e tem atividade de muramidase.
[0087] Isolado: o termo “isolado” significa uma substância em uma forma ou ambiente que não ocorre na natureza. Os exemplos não limitantes de substâncias isoladas incluem (1) qualquer substância de ocorrência não natural, (2) qualquer substância que inclui, mas sem limitação a, qualquer enzima, variação, ácido nucleico, proteína, peptídeo ou cofator, que é pelo menos parcialmente removida de um ou mais ou todos os constituintes de ocorrência natural com os quais a mesma está associada por natureza; (3) qualquer substância modificada pela mão do homem em relação àquela substância encontrada na natureza; ou (4) qualquer substância modificada pelo aumento da quantidade da substância em relação a outros componentes aos quais está naturalmente associada (por exemplo, múltiplas cópias de um gene que codifica a substância; uso de um promotor maior forte do que o promotor naturalmente associado ao gene que codifica a substância). Uma substância isolada pode estar presente em uma amostra de caldo de fermentação.
[0088] Atividade de muramidase: O termo “atividade de muramidase” significa a hidrólise enzimática das 1,4-beta- ligações entre resíduos de ácido N-acetilmurâmico e N- acetil-D-glucosamina em um peptidoflicano ou entre resíduos de N-acetil-D-glucosamina em quitodextrinas, resultando em bacteriolise devido à pressão osmótica. A muramidase pertence à classe enzimática EC 3.2.1.17. A atividade de muramidase é tipicamente medida por meio de determinação turbidimétrica. O método se baseia nas alterações na turbidez de uma suspensão de Micrococcus luteus ATCC 4698 induzida pela ação lítica da muramidase. Em condições experimentais adequadas, essas alterações são proporcionais à quantidade de muramidase no meio (conforme INS 1105 do Combined Compendium of Food Additive Specifications da Food and Agriculture Organisation da UN (www.fao.org)). Para os fins da presente invenção, a atividade de muramidase é determinada de acordo com o ensaio de turbidez descrito no exemplo 3 (“Determinação de Atividade de Muramidase”) e o polipeptídeo tem atividade de muramidase se o mesmo mostrar atividade contra uma ou mais bactérias, como Micrococcus luteus ATCC 4698 e/ou Exiguobacterium undea (DSM14481). Em um aspecto, a muramidase GH25 da presente invenção tem pelo menos 20 %, por exemplo, pelo menos 40 %, pelo menos 50 %, pelo menos 60 %, pelo menos 70 %, pelo menos 80 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou pelo menos 100 % da atividade de muramidase da SEQ ID NO: l. Em um aspecto, a muramidase GH24 da presente invenção tem pelo menos 20 &%, por exemplo, pelo menos 40 %, pelo menos 50 %, pelo menos 60 %, pelo menos 70 %, pelo menos 80 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou pelo menos 100 % da atividade de muramidase da SEQ ID NO: 63.
[0089] Polipeptídeo maduro: o termo “polipeptídeo maduro” significa um polipeptídeo em sua forma final que segue a tradução e quaisquer modificações pós-traducionais, como processamento de N-terminal, truncamento de C-terminal, glicosilação, fosforilação, etc.
[0090] Obtido ou obtenível de: O termo “obtido ou obtenível de” significa que o polipeptídeo pode ser encontrado em um organismo de uma classificação taxonômica específica. Em uma modalidade, o polipeptídeo é obtido ou obtenível do reino Fungi, em que o termo reino é a classificação taxonômica. Em uma modalidade preferencial, o polipeptídeo é obtido ou obtenível do filo Ascomycota, em que o termo filo é a classificação taxonômica. Em outra uma modalidade preferencial, o polipeptídeo é obtido ou obtenível do subfilo Pezizomycotina, em que o termo subfilo é a classificação taxonômica. Em outra uma modalidade preferencial, o polipeptídeo é obtido ou obtenível da classe Eurotiomycetes, em que o termo classe é a classificação taxonômica.
[0091] Se a classificação taxonômica de um polipeptídeo não é conhecido, a mesma pode ser facilmente determinada por uma pessoa versada na técnica realizando-se uma busca BLASTP do polipeptídeo (com o uso, por exemplo, do site do National Center for Biotechnology Information (NCIB) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) e comparando o mesmo aos homólogos mais próximos. A pessoa versada na técnica também pode comparar a sequência àquela do pedido conforme depositado. Um polipeptídeo desconhecido que é um fragmento de um polipeptídeo conhecido é considerado como da mesma espécie taxonômica. Um polipeptídeo natural desconhecido ou variante artificial que compreende uma substituição, deleção e/ou inserção em até 10 posições é considerado como sendo da mesma espécie taxonômica que o polipeptídeo conhecido.
[0092] Fibra: O termo “fibra” significa material vegetal seco com altos níveis de fibra, como fibra, farelo, cascas de sementes e grãos e resíduos de culturas (como paleta, copra, palha, joio, resíduo de beterraba sacarina).
[0093] Identidade de sequência: O parentesco entre duas sequências de aminoácido ou entre duas sequências de nucleotídeo é descrito pelo parâmetro “identidade de sequência”.
[0094] Para propósitos da presente invenção, a identidade de sequência entre duas sequências de aminoácidos é determinada com o uso do algoritmo Needleman- Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443- 453) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), de preferência, versão 5.0.0 ou posterior. Os parâmetros usados são penalidade de abertura de lacuna de 10 penalidade de extensão de lacuna de 0,5 e a matriz de substituição EBLOSUM62 (versão EMBOSS de BLOSUM62). O resultado de Needle identificado como “identidade mais longa” (obtido com o uso da opção -nobrief) é usado como a identidade percentual e é calculado como a seguir: (Resíduos idênticos x 100)/(Comprimento de Alinhamento - Número Total de Lacunas em Alinhamento)
[0095] Polipeptídeo substancialmente puro: O termo “polipeptídeo substancialmente puro” significa uma preparação que contém no máximo 10 %, no máximo 8 %, no máximo 6 %, no máximo 5 %, no máximo 4 %, no máximo 3 %, no máximo 2 %, no máximo 1 %, e no máximo 0,5 % em peso do outro material de polipeptídeo com o qual é associado de nativa ou recombinantemente. De preferência, o polipeptídeo é pelo menos 92 % puro, por exemplo, pelo menos 94 % puro, pelo menos 95 % puro, pelo menos 96 % puro, pelo menos 97 % puro, pelo menos 98 % puro, pelo menos 99 %, pelo menos 99,5 % puro, e 100 % puro em peso do material de polipeptídeo total presente na preparação. Os polipeptídeos da presente invenção estão, de preferência, em uma forma substancialmente pura. Isso é alcançado, por exemplo, preparando-se o polipeptídeo por meio de métodos recombinantes bem conhecidos ou por meio de métodos de purificação clássicos.
[0096] Variante: o termo “variante” significa um polipeptídeo que tem atividade de muramidase que compreende uma alteração, isto é, Variante: O termo “variante” significa um polipeptídeo que tem atividade de muramidase que compreende uma alteração, isto é, uma substituição, inserção e/ou deleção de um ou mais (diversos) resíduos de aminoácido em uma ou mais (por exemplo, diversas) posições. Uma substituição significa a substituição do aminoácido que ocupa uma posição com um aminoácido diferente; uma deleção significa a remoção do aminoácido que ocupa uma posição; Ee uma inserção significa adicional 1, 2, ou 3 aminoácidos adjacentes e imediatamente seguintes ao aminoácido que ocupa a posição.
[0097] Em um aspecto, uma variante de muramidase pode compreender de 1 a 10 alterações, isto é, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 alterações e ter pelo menos 20 %, por exemplo, pelo menos 40 %, pelo menos 50 %, pelo menos 60 %, pelo menos 70 %, pelo menos 80 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou pelo menos 100 % da atividade de muramidase da muramidase parental, como SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 63.
[0098] Nutriente: O termo “nutriente” na presente invenção significa componentes ou elementos contidos em ração dietária para um animal, incluindo ingredientes solúveis em água, ingredientes solúveis em gordura e outros. O exemplo de ingredientes solúveis em água inclui mas sem limitação, carboidratos como sacarídeos incluindo glicose, frutose, galactose e amido; minerais como cálcio, magnésio, zinco, fósforo, potássio, sódio e enxofre; fonte de nitrogênio como aminoácidos e proteínas, vitaminas como uma vitamina Bl, vitamina B2, vitamina B3, vitamina B6, ácido fólico, vitamina Bl2, biotina e ácido fatotênico. O exemplo dos ingredientes solúveis em gordura inclui, mas sem limitação, gorduras como ácidos graxos incluindo ácidos graxos saturados (SFA); ácidos graxos monossaturados (MUFA) e ácidos graxos poli-insaturados (PUFA), fibra, carotenoides como beta-caroteno, alfa-caroteno, beta- criptoxantina, gama-caroteno, luteína, zeaxantina e mistura dos mesmos; vitaminas como vitamina A, vitamina E e vitamina K. De preferência, o nutriente na invenção se refere a lutina, zeaxantina, vitaminas como vitamina A e vitamina E.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Ração Animal que compreende polipeptídeos que têm atividade de muramidase
[0099] Em um primeiro aspecto, a invenção se refere a uma ração animal que compreende um aditivo de ração animal, uma ou mais fontes de proteína e uma ou mais fontes de energia, sendo a ração animal caracterizada por compreender um ou mais polipeptídeos que têm atividade de muramidase.
[0100] Em uma modalidade, a muramidase é uma muramidase GH24, de preferência, uma muramidase fúngica GH24, de preferência, obtida ou obtenível do filo Ascomycota, com mais preferência, da classe Eurotiomycetes. Em uma modalidade, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é uma muramidase GH25, de preferência, uma muramidase fúngica GH25, de preferência, obtida ou obtenível do filo Ascomycota, com mais preferência, da classe Eurotiomycetes.
[0101] Em uma modalidade, a invenção se refere a uma ração animal que compreende um aditivo de ração animal, uma ou mais fontes de proteína e uma ou mais fontes de energia, sendo a ração animal caracterizada por compreender adicionalmente um ou mais polipeptídeos que têm atividade de muramidase, em que o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é selecionado a partir do grupo que consiste em:
(a) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 1;
(b) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 2;
(c) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 3;
(d) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 4;
(e) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 5;
(£) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 6;
(9) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 7;
(h) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 8;
(1) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 9;
(3) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 10;
(k) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 11;
(1) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 12;
(m) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 13;
(n) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 14;
(o) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 15;
(p) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 16;
(q) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 17;
(r) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18;
(s) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 19;
(t) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20;
(u) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 21;
(v) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 22;
(w) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 23;
(x) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 24;
(y) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 25;
(z) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 26;
(aa) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 27;
(ab) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 28;
(ac) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 29;
(ad) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 30;
(ae) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 31;
(af) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 32;
(ag) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 33;
(ah) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 34;
(ai) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35;
(aj) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36;
(ak) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 37;
(al) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38;
(am) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39;
(an) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 40;
(ao) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 41;
(ap) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 42;
(aq) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 43;
(ar) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 44;
(as) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 45;
(at) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 46;
(au) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 47;
(av) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 48;
(aw) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 49;
(ax) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 50;
(ay) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 51;
(az) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 52;
(ba) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 53;
(bb) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 54;
(bc) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 55;
(bd) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 56;
(be) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 57;
(bf) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 58;
(bg) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 59;
(bh) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 60;
(bi) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 61;
(bj) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 62;
(bk) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 63;
(bl) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 64;
(bm) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 65;
(bn) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 66;
(bo) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 67;
(bb) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 68;
(ba) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 69;
(br) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 70;
(bs) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 71;
(bt) uma variante de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO:
29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 ou SEQ ID NO: 71 que compreende uma ou mais substituições de aminoácido (de preferência, substituições conservativas), e/ou uma ou mais deleções de aminoácido, e/ou uma ou mais inserções de aminoácido ou qualquer combinação dos mesmos em 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 posições;
(bu) um polipeptídeo que compreende o polipeptídeo de (a), (b), (oc), (d), (e), (£), (9), (h), (i), (3), (kk), (1), (mM), (nN), (0), (Pp), (a), (1), (Ss), (E), (UU), (V), (W), (XxX), (y), (2), (aa), (ab), (ac), (ad), (ae), (af), (ag), (ah), (ai), (aj), (ak), (al), (am), (an), (ao), (ap), (aq), (ar), (as), (at), (au), (av), (aw), (ax), (ay), (az), (ba), (bb), (bc), (bd), (be), (bf), (bg), (bh), (bi), (bj), (bk), (bl), (bm), (bn), (bo), (bp), (ba), (br), (bs) ou (bt) e uma extensão N-terminal e/ou C-terminal entre 1 e 10 aminoácidos; e
(bv) um fragmento de um polipeptídeo de (a), (b), (cc), (d), (e), (£), (9), (h), (i), (3), (k), (1), (M), (n), (o), (Pp), (q), (1), (Ss), (E), (U), (VU), (W), (XxX), (y), (27), (aa), (ab), (ac), (ad), (ae), (af), (ag), (ah), (ai), (aj), (ak), (al), (am), (an), (ao), (ap), (aq), (ar), (as), (at), (au), (av), (aw), (ax), (ay), (az), (ba), (bb), (bc), (bd), (be), (bf), (ba), (bh), (bi), (bj), (bk), (bl), (bm), (bn), (bo), (bp), (ba), (br), (bs) ou (bt) que tem atividade de muramidase e que tem pelo menos 90 % do comprimento do polipeptídeo maduro.
[0102] Em uma modalidade, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase compreende ou consiste em aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 1, aminoácidos 1 a 213 da SEQ ID NO: 2, aminoácidos 1 a 218 da SEQ ID NO: 3, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 4, aminoácidos 1 a 215 da SEQ ID NO: 5, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 6, aminoácidos 1 a 201 da SEQ ID NO: 7, aminoácidos 1 a 201 da SEQ ID NO: 8, aminoácidos 1 a 203 da SEQ ID NO: 9, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 10, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 11, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 12, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 13, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 14, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 15, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 16, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 17, aminoácidos 1 a 206 da SEQ ID NO: 18, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 19, aminoácidos 1 a 216 da SEQ ID NO: 20, aminoácidos 1 a 218 da SEQ ID NO: 21, aminoácidos 1 a 204 da SEQ ID NO: 22, aminoácidos 1 a 203 da SEQ ID NO: 23, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 24,
aminoácidos 1 a 210 da SEQ ID NO: 25, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 26, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 27, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 28, aminoácidos 1 a 217 da SEQ ID NO: 29, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 30, aminoácidos 1 a 201 da SEQ ID NO: 31, aminoácidos 1 a 202 da SEQ ID NO: 32, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 33, aminoácidos 1 a 202 da SEQ ID NO: 34, aminoácidos 1 a 201 da SEQ ID NO: 35, aminoácidos 1 a 202 da SEQ ID NO: 36, aminoácidos 1 a 206 da SEQ ID NO: 37, aminoácidos 1 a 202 da SEQ ID NO: 38, aminoácidos 1 a 202 da SEQ ID NO: 39, aminoácidos 1 a 202 da SEQ ID NO: 40, aminoácidos 1 a 202 da SEQ ID NO: 41, aminoácidos 1 a 206 da SEQ ID NO: 42, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 43, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 44, aminoácidos 1 a 215 da SEQ ID NO: 45, aminoácidos 1 a 217 da SEQ ID NO: 46, aminoácidos 1 a 214 da SEQ ID NO: 47, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 48, aminoácidos 1 a 203 da SEQ ID NO: 49, aminoácidos 1 a 216 da SEQ ID NO: 50, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 51, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 52, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 53, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 54, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 55, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 56, aminoácidos 1 a 208 da SEQ ID NO: 57, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 58, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 59, aminoácidos 1 a 207 da SEQ ID NO: 60, aminoácidos 1 a 204 da SEQ ID NO: 61, aminoácidos 1 a 216 da SEQ ID NO: 62, aminoácidos 1 a 245 da SEQ ID NO: 63, aminoácidos 1 a 249 da SEQ ID NO: 64, aminoácidos 1 a 248 da SEQ ID NO: 65, aminoácidos 1 a 245 da SEQ ID NO: 66, aminoácidos 1 a 249 da SEQ ID NO: 67, aminoácidos 1 a 245 da SEQ ID NO: 68, aminoácidos 1 a 247 da SEQ ID NO: 69,
aminoácidos 1 a 250 da SEQ ID NO: 70 ou aminoácidos 1 a 240 da SEQ ID NO: 71.
[0103] Exemplos de substituições conservativas estão dentro dos grupos de aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoácidos ácidos (ácido glutâmico e ácido aspártico), aminoácidos polares (glutamina e asparagina), aminoácidos hidrofóbicos (leucina, isoleucina e valina), aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptofano e tirosina), e aminoácidos pequenos (glicina, alanina, serina, treonina e metionina). As substituições de aminoácido que não alteram, geralmente, a atividade específica são conhecidas na técnica e são descritas, por exemplo, por H. Neurath e R.L. Hill, 1979, In, The Proteins, Academic Press, Nova York. As substituições comuns são Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu e Asp/Gly. Outros exemplos de substituições conservativas são G para A; A para G, S; V para I, L, A, T, S; I para V, L, M; L para I, M, V; M para L, I, V; P para A, S, N; F para Y, W, H; Y para F, W, H; W para Y, F, H; R para K, E, D; K para R, E, D; H para OQ, N, S; D para N, E, K, R, Q; E para Q, D, K, R, N; S para T, A; T para S, V, A; C para S, T, A; N para D, OQ, H, S; Q para E, N, H, K, R.
[0104] Os aminoácidos essenciais em um polipeptídeo podem ser identificados de acordo com os procedimentos conhecidos na técnica, como mutagênese sítio-dirigida Ou mutagênese por varredura de alanina (Cunningham e Wells, 1989, Science 244: 1081-1085). Na última técnica, as mutações de única alanina são introduzidas em todo resíduo na molécula, e as moléculas mutantes resultantes são testadas para atividade de muramidase para identificar resíduos de aminoácido que são críticos para a atividade da molécula. Vide também, Hilton et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4699-4708. O sítio ativo da enzima ou outra interação biológica também pode ser determinada por meio de análise física da estrutura, conforme determinado por tais técnicas como ressonância magnética nuclear, cristalografia, difração de elétron ou marcação por fotoafinidade, em combinação com a mutação de aminoácidos de sítio de contato putativo. Vide, por exemplo, de Vos et al., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899- 904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64. A identidade de aminoácidos essenciais também pode ser inferida a partir de um alinhamento com um polipeptídeo relacionado.
[0105] O documento WO 2013/076253 revelou que resíduos de aminoácido D95 e E97 da SEQ ID NO: 8 do documento WO 2013/076253 são resíduos catalíticos. o documento PCT/CN2017/075960 revela os aminoácidos catalíticos de muramidases 12 GH25. Esse alinhamento pode ser usado para determinar a posição dos aminoácidos catalíticos para as muramidases reivindicadas. Em uma modalidade, nenhuma alteração é feita a um aminoácido que corresponde a E97 e D95 quando se usa SEQ ID NO: 39 para numeração. Os aminoácidos catalíticos para as muramidases de GH24 podem ser determinados alinhando-se as sequências com sequências conhecidas em que o aminoácido (ou aminoácidos) catalítico já foi determinado (vide www.uniprot.org).
[0106] Em uma modalidade, a invenção se refere a uma ração animal que compreende um aditivo de ração animal, uma ou mais fontes de proteína e uma ou mais fontes de energia, sendo a ração animal caracterizada por compreender adicionalmente um ou mais polipeptídeos que têm atividade de muramidase conforme especificado acima para aprimorar a absorção de nutriente em animais.
[0107] Em uma modalidade, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é dosado em um nível de 100 a 1000 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, como 200 a 900 mg, 300 a 800 mg, 400 a 700 mg, 500 a 600 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, ou qualquer combinação desses intervalos.
[0108] Em uma modalidade, o animal é um animal monogástrico, por exemplo, porcos ou suínos (incluindo, mas sem limitação, leitões, porcos em crescimento e porcas gestantes); aves (incluindo, mas sem limitação, ave, peru, pato, codorna, galinha-da-angola, ganso, pombo, pombo jovem, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto); animais de estimação (incluindo, mas sem limitação, gatos e cachorros); peixe (incluindo, mas sem limitação, seriola, pirarucu, barbo, achigã, anchova, bocachico, brema, peixe- gato, cachama, carpa, bagre, catla, chanos, truta-de-lago, acará-grande, bijupirá, bacalhau, tipo de peixe branco, dourada, corvina, moreia, góbio, peixe-dourado, gourami, garoupa, guapote, linguado, java, labeo, lai, botia, cavala, peixe-leite, carapeba, salamandra, tainha, paco, peixe-mexerica, peixe-rei, perca, pike, pampo-galhudo, rutilis, salmão, sampa, sauger, robalo, dourada, shiner, góbio-dorminhoco, peixe cabeça-de-cobra, pargo, robalo comum, linguado, spinefoot, esturjão, peixe-lua, curimatã,
peixe-médico, peixe terror, tilápia, truta, atum, rodovalho, cisco europeia, picão-verde e peixe-branco); e crustáceos (incluindo, mas sem limitação, camarões e pitus). Em uma modalidade mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, ave, crustáceos e peixe. Em uma modalidade ainda mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, leitão, porco em crescimento, porca gestante, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto.
[0109] A ração animal da presente invenção pode ser uma formulação líquida. Em uma modalidade, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é dosado entre 0,001 % a 25 &% p/p de uma formulação líquida, de preferência, 0,01 % a 25 % p/p, com mais preferência, 0,05 % a 20 % p/p, com mais preferência, 0,2 % a 15 % p/p, ainda com mais preferência, 0,5 % a 15 % p/p ou, com máxima preferência, 1,0 % a 10 % p/p de polipeptídeo.
[0110] Em uma modalidade, a formulação líquida compreende adicionalmente 20 &%-80 % de poliol (isto é quantidade total de poliol), de preferência 25 %-75 % de poliol, com mais preferência 30 %-70 % de poliol, com mais preferência, 35 %-65 % de poliol ou com máxima preferência, 40 %-60 % de poliol. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 20 %-80 % de poliol, de preferência, 25 %-75 % de poliol, com mais preferência, 30 %-70 % de poliol, com mais preferência, 35 %-65 % de poliol ou com máxima preferência, 40 %-60 % de poliol em que o poliol é selecionado a partir do grupo que consiste em glicerol, sorbitol, propileno glicol (MPG), etileno glicol, dietileno glicol, trietileno glicol, 1, 2-propileno glicol ou 1, 3- propileno glicol, dipropileno glicol, polietileno glicol (PEG) que tem um peso molecular médio abaixo de cerca de 600 e polipropileno glicol (PPG) que tem um peso molecular médio abaixo de cerca de 600. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 20 %-80 % de poliol (isto é, a quantidade total de poliol), de preferência, 25 %-75 % de poliol, com mais preferência, 30 %-70 % de poliol, com mais preferência, 35 %-65 % de poliol ou, com máxima preferência, 40 %-60 % de poliol em que o poliol é selecionado a partir do grupo que consiste em glicerol, sorbitol e propileno glicol (MPG).
[0111] Em uma modalidade, a formulação líquida compreende adicionalmente conservante, de preferência, selecionado a partir do grupo que consiste em sorbato de sódio, sorbato de potássio, benzoato de sódio e benzoato de potássio ou qualquer combinação dos mesmos. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 0,02 % a 1,5 & p/p de conservante, com mais preferência, 0,05 % a 1,0 % p/p de conservante ou, com máxima preferência, 0,1 % a 0,5 % p/p de conservante. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 0,001 % a 2,0 % p/p de conservante (isto é, quantidade total de conservante), de preferência, 0,02 % a 1,5 % p/p de conservante, com mais preferência, 0,05 % a 1,0 % p/p de conservante ou, com máxima preferência, 0,1 % a 0,5 % p/p de conservante, em que o conservante é selecionado a partir do grupo que consiste em sorbato de sódio, sorbato de potássio, benzoato de sódio e benzoato de potássio ou qualquer combinação dos mesmos.
[0112] Em uma modalidade, a formulação líquida compreende um ou mais agentes de formulação (como aqueles descritos no presente documento), de preferência, um agente de formulação selecionado a partir da lista que consiste em glicerol, etileno glicol, 1, 2-propileno glicol ou 1, 3- propileno glicol, cloreto de sódio, benzoato de sódio, sorbato de potássio, sulfato de sódio, sulfato de potássio, sulfato de magnésio, tiossulfato de sódio, carbonato de cálcio, citrato de sódio, dextrina, glicose, Sacarose, sorbitol, lactose, amido, PVA, acetato e fosfato, de preferência, selecionado a partir da lista que consiste em 1, 2-propileno glicol, 1, 3-propileno glicol, sulfato de sódio, dextrina, celulose, tiossulfato de sódio, caulim e carbonato de cálcio.
[0113] Em uma modalidade, a fonte de proteína é selecionada a partir do grupo que consiste em soja, soja selvagem, feijão, tremoço, feijão Tepary, feijão-da- Espanha, feijão slimjim, feijão-de-lima, vagem francesa, fava comum (feijão-fava), grão de bico, lentilha, amendoim, amendoim Spanish, canola, semente de girassol, semente de algodão, colza (semente oleaginosa de colza) ou ervilha ou em uma forma processada como farinha de soja, farinha de soja integral, concentrado de proteína de soja (SPC), farinha de soja fermentada (FSBM), farinha de girassol, farinha de semente de algodão, farinha de colza, farinha de peixe, farinha de osso, farinha de pena, soro ou qualquer combinação dos mesmos.
[0114] Em uma modalidade, a fonte de energia é selecionada a partir do grupo que consiste em maís, milho, sorgo, trigo, cevada, aveia, arroz, triticale, centeio, beterraba, beterraba sacarina, espinafre, batata, mandioca,
quinoa, repolho, switchgrass, painço, milheto, milho-da- Itália ou em uma forma processada como milho moído, maís moído, amido de batata, amido de mandioca, sorgo moído, switchgrass moído, painço moído, milho-da-Itália moído, milheto moído, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0115] Em uma modalidade, o aditivo de ração animal compreende adicionalmente um ou mais componentes selecionados dentre a lista que consiste em uma ou mais enzimas adicionais; um ou mais micróbios; uma ou mais vitaminas; um ou mais minerais; um ou mais aminoácidos; e um ou mais outros ingredientes de ração, conforme descritos no presente documento.
[0116] Em uma modalidade, o aditivo de ração animal compreende adicionalmente uma ou mais enzimas adicionais de preferência, em que a enzima é selecionada a partir do grupo que consiste em fitase, galactanase, alfa- galactosidase, beta-galactosidase, protease, xilanase, fosfolipase Al, fosfolipase A2, lisofosfolipase, fosfolipase C, fosfolipase D, amilase, arabinofuranosidase, beta-xilosidase, acetil xilano esterase, feruloíla esterase, celulase, celobio-hidrolases, beta-glucosidase, pululanase, manosidase, mananase e beta-glucanase ou qualquer combinação dos mesmos.
[0117] Em uma modalidade, o aditivo de ração animal compreende "adicionalmente um ou mais micróbios, de preferência, em que o micróbio é selecionado a partir do grupo que consiste em Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Bacillus pumilus, Bacillus polymyxa, Bacillus megaterium, Bacillus coagulans, Bacillus circulans, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium Ssp., Carnobacterium sp., Clostridium butyricum, Clostridium sp., Enterococcus faecium, Enterococcus sp., Lactobacillus Sp., Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Lactococcus lactis, Lactococcus sp., Leuconostoc sp., Megasphaera elsdenii, Megasphaera sP., Pediococsus acidilactici, Pediococceus sP., Propionibacterium thoenii, Propionibacterium sp. and Streptococcus sp. ou qualquer combinação dos mesmos.
[0118] Em uma modalidade, o aditivo de ração animal compreende adicionalmente uma ou mais vitaminas conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, O aditivo de ração animal compreende adicionalmente um ou mais minerais conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, oO aditivo de ração animal compreende adicionalmente um ou mais eubióticos conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, o aditivo de ração animal compreende adicionalmente um ou mais pré-bióticos conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, o aditivo de ração animal compreende adicionalmente um ou mais ácidos orgânicos conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, o aditivo de ração animal compreende adicionalmente um ou mais eubióticos conforme descrito no presente documento. Formulação de Enzima
[0119] O polipeptídeo que tem atividade de muramidase da invenção pode ser formulado como um líquido ou um sólido. Para uma formulação líquida, o agente de formulação pode compreender um poliol (como, por exemplo, glicerol, etileno glicol ou propileno glicol), um sal (como, por exemplo, cloreto de sódio, benzoato de sódio, sorbato de potássio ou um açúcar ou derivado de açúcar (como, por exemplo, dextrina, glicose, sacarose e sorbitol). Então, em uma modalidade, a composição é uma composição líquida que compreende o polipeptídeo da invenção e um ou mais agentes de formulação selecionados a partir da lista que consiste em glicerol, etileno glicol, 1,2-propileno glicol, 1,3- propileno glicol, cloreto de sódio, benzoato de sódio, sorbato de potássio, dextrina, glicose, Sacarose e sorbitol. A formulação líquida pode ser aspergida na ração após a mesma ter sido colocada em pélete ou pode ser adicionada à água potável dada aos animais.
[0120] Para uma formulação sólida, a formulação pode ser, por exemplo, como um grânulo, pó seco em aspersão ou aglomerado (por exemplo, conforme revelado no documento WO2000/70034). O agente de formulação pode compreender um sal (sais orgânicos ou inorgânicos de zinco, sódio, potássio ou cálcio como, por exemplo, como acetato de cálcio, benzoato de cálcio, carbonato de cálcio, cloreto de cálcio, citrato de cálcio, sorbato de cálcio, sulfato de cálcio, acetato de potássio, benzoato de potássio, carbonato de potássio, cloreto de potássio, citrato de potássio, sorbato de potássio, sulfato de potássio, acetato de sódio, benzoato de sódio, carbonato de sódio, cloreto de sódio, citrato de sódio, sulfato de sódio, acetato de zinco, benzoato de zinco, carbonato de zinco, cloreto de zinco, citrato de zinco, sorbato de zinco, sulfato de zinco), amido ou um açúcar ou derivado de açúcar (como, por exemplo, sacarose, dextrina, glicose, lactose, sorbitol).
[0121] Em uma modalidade, a composição é uma composição sólida, como uma composição seca em aspersão, que compreende o polipeptídeo que tem atividade de muramidase da invenção e um ou mais agentes de formulação selecionados a partir da lista que consiste em cloreto de sódio, benzoato de sódio, sorbato de potássio, sulfato de sódio, sulfato de potássio, sulfato de magnésio, tiossulfato de sódio, carbonato de cálcio, citrato de sódio, dextrina, glicose, sacarose, sorbitol, lactose, amido e celulose. Em uma modalidade preferencial, o agente de formulação é selecionado dentre um ou mais dos seguintes compostos: sulfato de sódio, dextrina, celulose, tiossulfato de sódio, sulfato de magnésio e carbonato de cálcio.
[0122] A presente invenção também se refere a grânulos/partículas enzimáticas que compreendem o polipeptídeo que tem atividade de muramidase da invenção opcionalmente combinados com uma ou mais enzimas adicionais. O grânulo é composto de um núcleo, e opcionalmente um ou mais revestimentos (camadas externas) que circundam o núcleo.
[0123] Tipicamente, o tamanho de grânulo/partícula, medido como diâmetro esférico equivalente (tamanho médio de partícula baseado em volume), do grânulo é 20-2000 um, particularmente, 50-1500 um, 100-1500 um ou 250-1200 um.
[0124] O núcleo pode ser preparado granulando-se uma mescla dos ingredientes, por exemplo, por meio de um método que compreende técnicas de granulação como cristalização, precipitação, revestimento em recipiente rotativo, revestimento em leito fluidizado, aglomeração de leito fluidizado, atomização giratória, extrusão, perolação,
esferonização, métodos de redução de tamanho, granulação em tambor e/ou granulação de alto cisalhamento.
[0125] Métodos para preparar o núcleo podem ser encontrados em Handbook of Powder Technology; Particle size enlargement de C. E. Capes; Volume 1; 1980; Elsevier. Os métodos de preparação incluem tecnologias de formulação de ração e grânulo conhecidos, por exemplo: a) produtos secos em aspersão, em que uma solução que contém enzima líquida é atomizada em uma torre de secagem em aspersão para formar pequenas gotículas que, durante sua descida, a torre de secagem seca para formar um material de particulado que contém enzima; b) produtos em camadas, em que a enzima é revestida como uma camada ao redor de uma partícula de núcleo inerte pré-formada, em que uma solução que contém enzima é atomizada, tipicamente, em um aparelho de leito fluidizado em que as partículas de núcleo pré-formadas são fluidizadas, e a solução que contém enzima adere às partículas de núcleo e secam para deixar uma camada de enzima seca na superfície da partícula de núcleo. As partículas de um tamanho desejado podem ser obtidas desse modo se uma partícula de núcleo útil do tamanho desejado puder ser encontrada. Esse tipo de produto é descrito, por exemplo, no documento WO 97/23606; Cc) partículas de núcleo absorvidas, em que ao invés de revestir a enzima como uma camada ao redor do núcleo, a enzima é absorvida na superfície do núcleo. Tal processo é descrito no documento WO 97/39116.
d) produtos de extrusão ou peletizados, em que uma pasta que contém enzima é prensada nos péletes ou sob pressão é extrusada através de uma pequena abertura e cortada em partículas que são subsequentemente secas.
Tais partículas têm, usualmente, um tamanho considerável devido ao fato de que o material em que a abertura de extrusão é feita (usualmente uma placa com furos) define um limite na queda de pressão permissível na abertura de extrusão.
Também, as pressões de extrusão muito altas quando se usa uma pequena abertura aumentam a geração de calor na pasta enzimática, que é nociva à enzima;
e) produtos perolados, em que um pó que contém enzima é suspenso em cera derretida e a suspensão é aspergida, por exemplo, através de um atomizador de disco giratório, em uma câmara de resfriamento em que as gotículas rapidamente se solidificam (Michael S.
Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; páginas 140-142; Marcel Dekker). O produto obtido é um em que a enzima é uniformemente distribuída por todo um material inerte ao invés de ser concentrada em sua superfície.
Também, US 4.016.040 e US 4.713.245 são documentos relacionados a essa técnica;
£f) produtos de granulação em misturador, em que um líquido é adicionado a uma composição em pó seco de, por exemplo, componentes de granulação convencionais, sendo que a enzima é introduzida por meio do líquido ou do pó ou ambos.
O líquido e o pó são misturados e à medida que a umidade do líquido é absorvida no pó seco, os componentes do pó seco começarão a aderir e o aglomerado e as partículas irão se constituir, formando granulados que compreendem a enzima.
Tal processo é descrito no documento US 4.106.991 e documentos relacionados EP 170360, EP
304332, EP 304331, WO 90/09440 e WO 90/09428. Em um produto específico desse processo em que vários misturadores de alto cisalhamento podem ser usados como granuladores, granulados que consistem em enzima como enzima, cargas e aglutinantes etc. são misturados com fibras de celulose para reforçar as partículas para render o denominado T- granulado. As partículas reforçadas, que são mais robustas, liberam menos poeira enzimática.
g) redução de tamanho, em que os núcleos são produzidos através de moagem ou trituração de partículas maiores, péletes, tabletes, briquetas etc. que contêm a enzima. A fração de partícula de núcleo desejada é obtida peneirando- se o produto moído ou triturado. As partículas sob ou subdimensionada podem ser recicladas. A redução de tamanho é descrita em (Martin Rhodes (editor); Principles of Powder Technology; 1990; Capítulo 10; John Wiley & Sons); h) granulação de leito fluidizado, que envolve suspender particulados em um fluxo de ar e aspergir um líquido nas partículas fluidizadas por meio de bocais. As partículas atingidas por gotículas da aspersão ficam úmidas e se tornam pegajosas. As partículas pegajosas colidem com outras partículas e aderem às mesmas e formam um grânulo; i) os núcleos podem ser submetidos à secagem, como em um secador de leito fluidizado. Outros métodos conhecidos para secar grânulos na indústria alimentícia ou de detergente podem ser usados pela pessoa versado. A secagem ocorre, de preferência, em uma temperatura de produto de 25 a 90 ºC. Para algumas enzimas é importante que os núcleos que compreendem a enzima contenham uma baixa quantidade de água antes do revestimento. Se as enzimas sensíveis a água forem revestidas antes da água em excesso ser removida, a mesma será presa dentro do núcleo e pode afetar a atividade da enzima negativamente. Após a secagem, os núcleos, de preferência, contêm 0,1-10 % p/p de água.
[0126] O núcleo pode incluir materiais adicionais como cargas, materiais de fibra (celulose ou fibras sintéticas), agentes estabilizadores, agentes solubilizantes, agentes de suspensão, agentes de regulação de viscosidade, esferas de luz, plastificantes, sais, lubrificantes e fragrâncias.
[0127] O núcleo pode incluir um aglutinante, como polímero sintético, cera, gordura ou carboidrato.
[0128] O núcleo pode incluir um sal de um cátion multivalente, um agente de redução, um antioxidante, um catalisador de decomposição de peróxido e/ou um componente de tampão ácido, tipicamente como uma mescla homogênea.
[0129] Em uma modalidade, o núcleo compreende um material selecionado a partir do grupo que consiste em sais (como acetato de cálcio, benzoato de cálcio, carbonato de cálcio, cloreto de cálcio, citrato de cálcio, sorbato de cálcio, sulfato de cálcio, acetato de potássio, benzoato de potássio, carbonato de potássio, cloreto de potássio, citrato de potássio, sorbato de potássio, sulfato de potássio, acetato de sódio, benzoato de sódio, carbonato de sódio, cloreto de sódio, citrato de sódio, sulfato de sódio, acetato de zinco, benzoato de zinco, carbonato de zinco, cloreto de zinco, citrato de zinco, sorbato de zinco, sulfato de zinco), amido ou à açúcar ou derivado de açúcar (como por exemplo sacarose, dextrina, glicose, lactose, sorbitol), açúcar ou derivado de açúcar (como, por exemplo, sacarose, dextrina, glicose, lactose, sorbitol),
pequenas moléculas orgânicas, amido, farinha, celulose e minerais e minerais de argila (também conhecidos como filossilicatos de alumínio hidroso). Em uma modalidade, o núcleo compreende um mineral de argila como caulimita ou caulim.
[0130] O núcleo pode incluir uma partícula inerte com a enzima absorvida na mesma, ou aplicada na superfície, por exemplo, através de revestimento em leito fluidizado.
[0131] O núcleo pode ter um diâmetro de 20-2000 um, particularmente, 50-1500 um, 100-1500 um ou 250-1200 um.
[0132] O núcleo pode ser circundado por pelo menos um revestimento, por exemplo, para aprimorar a estabilidade em armazenamento, para reduzir a formação de poeira durante a manipulação ou para colorir o grânulo. O revestimento (ou revestimentos) opcional pode incluir um revestimento de sal e/ou cera e/ou farinha ou outros materiais de revestimento adequados.
[0133] o revestimento pode ser aplicado em uma quantidade de pelo menos 0,l % em peso do núcleo, por exemplo, pelo menos 0,5 %, 1 % ou 5 %. A quantidade pode ser, no máximo, 100 %, 70 %, 50 %, 40 % ou 30 %.
[0134] O revestimento tem, de preferência, pelo menos 0,1 um de espessura, particularmente, pelo menos 0,5 um, pelo menos 1 um ou pelo menos 5 um. Em algumas modalidades, a espessura do revestimento está abaixo de 100 um, como abaixo de 60 um, ou abaixo de 40 um.
[0135] O revestimento deve encapsular a unidade de núcleo formando-se uma camada substancialmente contínua. Uma camada substancialmente contínua deve ser compreendida como um revestimento que tem menos ou nenhum furo, de modo que a unidade de núcleo seja encapsulada ou envolvida com poucas áreas ou nenhuma área não revestida. A camada ou revestimento deve, em particular, ser homogêneo em espessura.
[0136] O revestimento pode conter adicionalmente outros materiais conforme conhecidos na técnica, por exemplo, cargas, agentes antiaderentes, pigmentos, corantes plastificantes e/ou aglutinantes, como dióxido de titânio, caulim, carbonato de cálcio ou talco.
[0137] o grânulo pode compreender um núcleo que compreende o polipeptídeo que tem atividade de muramidase da invenção, um ou mais revestimentos de sal e um ou mais revestimentos de cera. Exemplos de grânulos enzimáticos com múltiplos “revestimentos são mostrados nos documentos WO1993/07263, WO1997/23606 e WO2016/149636.
[0138] Um revestimento de sal pode compreender pelo menos 60 % em de um sal, por exemplo, pelo menos 65 %, pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou pelo menos 99 % em peso.
[0139] O sal pode ser adicionado a partir de uma solução de sal em que o sal é completamente dissolvido ou a partir de uma suspensão de sal em que as partículas finas são menores que 50 um, como menores que 10 um ou menores que 5 um.
[0140] O revestimento de sal pode compreender um único sal ou uma mistura de dois ou mais sais. O sal pode ser solúvel em água, em particular, que tem uma solúvel em água pelo menos 0,1 g em 100 g de água a 20 “C, de preferência, pelo menos 0,5 g por 100 gq de água, por exemplo, pelo menos
1 g per 100 g de água, por exemplo, pelo menos 5 g per 100 g de água.
[0141] O sal pode ser um sal inorgânico, por exemplo, sais de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloreto ou carbonato ou sais de ácidos orgânicos simples (menores que 10 átomos de carbono, por exemplo, 6 ou menos átomos de carbono) como citrato, malonato ou acetato. Exemplos de cátions nesses sais são íons de metal alcalino ou metal alcalinoterroso, o íon de amônio ou íons de metal da primeira série de transição, como sódio, potássio, magnésio, cálcio, zinco ou alumínio. Exemplos de ânions incluem cloreto, brometo, iodeto, sulfato, sulfito, bissulfito, tiossulfato, fosfato, fosfato monobásico, fosfato dibásico, hipofosfito, pirofosfato de di- hidrogênio, tetraborato, borato, carbonato, bicarbonato, metassilicato, citrato, malato, maleato, malonato, succinato, sorbato, lactato, formato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartrato, ascorbato ou gluconato. Em particular, sais de metal alcalino ou metal alcalinoterroso de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloreto ou carbonato ou sais de ácidos orgânicos simples como citrato, malonato ou acetato podem ser usados.
[0142] O sal no revestimento pode ter uma umidade constante a 20 ºC acima de 60 %, particularmente acima de 70 %, acima de 80 % ou acima de 85 % ou pode ser uma outra forma de hidrato de tal sal (por exemplo, anidrato). O revestimento de sal pode ser conforme descrito nos documentos WO1997/05245, WO1998/54980, WO1998/55599, WO2000/70034, WO2006/034710, WO2008/017661, WO2008/017659, WO2000/020569, MWO2001/004279, WO1l997/05245, WO2000/01793,
WO2003/059086, WO2003/059087, WO2007/031483, WO2007/031485 WO2007/044968, WO2013/192043, WO2014/014647 e WO2015/197719 ou revestimento polimérico como descritos no documento WO 2001/00042.
[0143] Exemplos específicos de sais adequados são NaCl (CH20 ºC = 76 %), Na2CO3 (CH20 ºC = 92 %), NaNO3 (CH20 “ºC = 73 %), Na2HPO4 (CH20 ºC = 95 %), Na3PO4 (CH25 ºC = 92 %), NH4Cl (CH20 ºC = 79.5 %), (NH4)2HPO4 (CH20 “C = 93,0 3%), NH4H2PO4 (CH20 ºC = 93,1 %), (NH4)2SO4 (CH20 ºC = 81.1 %), KCl (CH20 ºC = 85 %), K2HPO4 (CH20 “ºC = 92 %), KH2PO4 (CH20 ºc=96,5 %), KNO3 (CH20 ºC = 93,5 %), Na2SO4 (CH20 ºC = 93 %), K2S04 (CH20 “ºC = 98 %), KHSO4 (CH20 ºC = 86 %), MgSO4 (CH20 ºC = 90 %), ZnSO4 (CH20 ºC = 90 %) e citrato de sódio (CH25 “ºC = 86 %). Outros exemplos incluem NaH2PO4, (NH4) H2PO4, CuSO4, Mg(NO3)2, magnésio acetato, acetato de cálcio, benzoato de cálcio, carbonato de cálcio, cloreto de cálcio, citrato de cálcio, sorbato de cálcio, sulfato de cálcio, acetato de potássio, benzoato de potássio, carbonato de potássio, cloreto de potássio, citrato de potássio, sorbato de potássio, acetato de sódio, benzoato de sódio, citrato de sódio, sulfato de sódio, acetato de zinco, benzoato de zinco, carbonato de zinco, cloreto de zinco, citrato de zinco e sorbato de zinco.
[0144] O sal pode estar na forma anidra, ou pode ser um sal hidratado, isto é, um hidrato de sal cristalino com água (ou águas) ligada de cristalização, como descrito no documento WO 99/32595. Exemplos específicos incluem sulfato de sódio anidro (Naz2S04), sulfato de magnésio anidro (MgS0O4), hepta-hidrato de sulfato de magnésio (MgSO4.7H20), hepta-hidrato de sulfato de zinco (ZnSO04.7H20), hepta-
hidrato dibásico de fosfato de sódio (Na2HPO4.7H20), hexa- hidrato de nitrato de magnésio (Mg(NO3)2(6H20)), di-hidrato de citrato de sódio e tetra-hidrato de acetato de magnésio.
[0145] De preferência, o sal é aplicado como uma solução do sal, por exemplo, com o uso de um leito fluidizado.
[0146] Um revestimento de cera pode compreender pelo menos 60 % em de uma cera, por exemplo, pelo menos 65 %, pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou pelo menos 99 % em peso.
[0147] Exemplos específicos de ceras são polietileno glicóis; polipropilenos; cera de carnaúba; cera de candelila; cera de abelha; óleo vegetal hidrogenado ou sebo animal como polietileno glicol (PEG), metil hidroxi-propil celulose (MHPC), álcool polivinílico (PVA), sebo de boi hidrogenado, óleo de palma hidrogenado, sementes de algodão hidrogenadas e/ou óleo de soja hidrogenado; álcoois de ácido graxo; monoglicerídeos e/ou diglicerídeos, como estearato de glicerila, em que o estearato é uma mistura de ácido esteárico e palmítico; cera microcristalina; parafinas; e ácidos graxos, como ácidos graxos de cadeia longa linear hidrogenados e derivados dos mesmos. Uma cera preferencial é o óleo de palma ou óleo de palma hidrogenado.
[0148] Os granulados de não pulverização podem ser produzidos, por exemplo, conforme revelado nos documentos de Patente nºs US 4.106.991 e 4.661.452 e podem ser opcionalmente revestidos por meio de métodos conhecidos na técnica. Os materiais de revestimento podem ser materiais de revestimento de cera e materiais de revestimento de formação de filme. Exemplos de materiais de revestimento de cera são produtos de poli (etileno oxide) produtos (polietilenoglicol, PEG) com pesos molares médios de 1000 a 20000; nonilfenóis etoxilados que têm de 16 a 50 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos etoxilados em que o álcool contém de 12 a 20 átomos de carbono e em que há 15 a 80 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos; ácidos graxos; e mono- e di- e triglicerídeos de ácidos graxos. Exemplos de materiais de revestimento de formação de filme adequados para aplicação por meio de técnicas de leito fluidizado são dados no documento GB 1483591.
[0149] O granulado pode compreender adicionalmente uma ou mais enzimas adicionais. Cada enzima estará presente, então, em mais grânulos garantindo uma distribuição mais uniforme das enzimas, e também reduz a segregação física de diferentes enzimas devido aos diferentes tamanhos de partícula. Métodos para produzir cogranulados de múltiplas enzimas são revelados na revelação ip.com IPCOMOOO0200739D.
[0150] Um outro exemplo de formulação de enzimas através do uso de cogranulados é revelado no documento WO 2013/188331.
[0151] A presente invenção também se refere a enzimas protegidas preparadas de acordo com o método revelado no documento EP 238.216.
[0152] Então, em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um grânulo, que compreende: (a) um núcleo que compreende o polipeptídeo que tem atividade de muramidase de acordo com a invenção, e (b) um revestimento que consiste em uma ou mais camada (ou camadas) que circunda o núcleo.
[0153] Em uma modalidade, o revestimento compreende um revestimento de sal conforme descrito ao presente documento. Em uma modalidade, o revestimento compreende um revestimento de cera conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, o revestimento compreende um revestimento de sal seguido por um revestimento de cera conforme descrito no presente documento. Formulações líquidas que compreendem polipeptídeos que têm atividade de muramidase
[0154] Em um terceiro aspecto, a invenção se refere a uma formulação líquida que compreende um ou mais polipeptídeos que têm atividade de muramidase.
[0155] Em uma modalidade, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é uma muramidase GH24, de preferência, uma muramidase fúngica GH24, de preferência, obtida ou obtenível do filo Ascomycota, com mais preferência, da classe Eurotiomycetes. Em uma modalidade, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é uma muramidase GH25, de preferência, uma muramidase fúngica GH25, de preferência, obtida ou obtenível do filo Ascomycota, com mais preferência, da classe Eurotiomycetes.
[0156] Em uma modalidade, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é dosado entre 0,001 % a 25 % p/p de formulação líquida, de preferência, 0,01 % a 25 % p/p, com mais preferência, 0,05 % a 20 % p/p, com mais preferência, 0,2 % a 15 % p/p, ainda com mais preferência, 0,5 % a 15 % p/p ou, com máxima preferência, 1,0 % a 10 % p/p de polipeptídeo.
[0157] Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 20 %-80 % de poliol (isto é quantidade total de poliol), de preferência 25 %-75 % de poliol, com mais preferência 30 %-70 % de poliol, com mais preferência, 35 %-65 % de poliol ou com máxima preferência, 40 %-60 % de poliol. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende %-80 % de poliol, de preferência, 25 %-75 % de poliol, com mais preferência, 30 %-70 % de poliol, com mais preferência, 35 %-65 % de poliol ou com máxima preferência, 40 %-60 % de poliol em que o poliol é selecionado a partir do grupo que consiste em glicerol, sorbitol, propileno glicol (MPG), etileno glicol, dietileno glicol, trietileno glicol, 1, 2-propileno glicol ou 1, 3-propileno glicol, dipropileno glicol, polietileno glicol (PEG) que tem um peso molecular médio abaixo de cerca de 600 e polipropileno glicol (PPG) que tem um peso molecular médio abaixo de cerca de 600. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 20 %-80 % de poliol (isto é, a quantidade total de poliol), de preferência, 25 %-75 % de poliol, com mais preferência, 30 %-70 % de poliol, com mais preferência, 35 %-65 % de poliol ou, com máxima preferência, 40 %-60 % de poliol em que o poliol é selecionado a partir do grupo que consiste em glicerol, sorbitol e propileno glicol (MPG).
[0158] Em uma modalidade, a formulação líquida compreende "adicionalmente conservante, de preferência, selecionado a partir do grupo que consiste em sorbato de sódio, sorbato de potássio, benzoato de sódio e benzoato de potássio ou qualquer combinação dos mesmos. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 0,02 % a 1,5 % p/p de conservante, com mais preferência, 0,05 % a 1,0 % p/p de conservante ou, com máxima preferência, 0,1 % a 0,5 % p/p de conservante. Em uma modalidade, a formulação líquida compreende 0,001 % a 2,0 % p/p de conservante (isto é, quantidade total de conservante), de preferência, 0,02 % a 1,5 % p/p de conservante, com mais preferência, 0,05 % a 1,0 % p/p de conservante ou, com máxima preferência, 0,1 % a 0,5 % p/p de conservante, em que oO conservante é selecionado a partir do grupo que consiste em sorbato de sódio, sorbato de potássio, benzoato de sódio e benzoato de potássio ou qualquer combinação dos mesmos.
[0159] Em uma modalidade, a formulação líquida compreende um ou mais agentes de formulação (como aqueles descritos no presente documento), de preferência, um agente de formulação selecionado a partir da lista que consiste em glicerol, etileno glicol, 1, 2-propileno glicol ou 1, 3- propileno glicol, cloreto de sódio, benzoato de sódio, sorbato de potássio, sulfato de sódio, sulfato de potássio, sulfato de magnésio, tiossulfato de sódio, carbonato de cálcio, citrato de sódio, dextrina, glicose, Sacarose, sorbitol, lactose, amido, PVA, acetato e fosfato, de preferência, selecionado a partir da lista que consiste em 1, 2-propileno glicol, 1, 3-propileno glicol, sulfato de sódio, dextrina, celulose, tiossulfato de sódio, caulim e carbonato de cálcio.
[0160] Em uma modalidade, a formulação líquida compreende adicionalmente um ou mais componentes selecionados dentre a lista que consiste em uma ou mais enzimas adicionais; um ou mais micróbios; uma ou mais vitaminas; um ou mais minerais, conforme descrito no presente documento. Ração Animal
[0161] Dietas ou composições de ração animal têm um teor relativamente alto de proteína. As dietas de aves e porcos podem ser caracterizadas conforme indicado na Tabela B do documento WO 01/58275, colunas 2-3. As dietas de peixes podem ser caracterizadas conforme indicado na coluna 4 desta Tabela B. Ademais, tais dietas de peixe normalmente têm um teor de gordura bruta de 200-310 9g/kg.
[0162] Uma composição de ração animal de acordo com a invenção tem um teor de proteína bruta de 50-800 g/kg e, ademais, compreende um ou mais polipeptídeos que têm atividade de muramidase conforme descrito no presente documento.
[0163] Além disso, ou de modo alternativo (ao teor de proteína bruta indicado acima), a composição de ração animal da presente invenção tem um teor de energia metabolizável de 10-30 MJI/kg; e/ou um teor de cálcio de 0,1-200 9g/kg; e/ou um teor de fósforo disponível de 0,1-200 g9/kg; e/ou um teor de metionina de 0,1-100 g/kg; e/ou um teor de metionina mais cisteína de 0,1-150 9g/kg; e/ou um teor de lisina de 0,5-50 g/kg.
[0164] Em modalidades particulares, o teor de energia metabolizável, proteína bruta, cálcio, fósforo, metionina, metionina mais cisteína, e/ou lisina está dentro de qualquer das faixas 2, 3, 4 ou 5, na Tabela B do documento WO 01/58275 (R. 2-5).
[0165] A proteína bruta é calculada como nitrogênio (N) multiplicado por um fator 6,25, isto é, proteína bruta (9/kg)= N (g9/kg) x 6,25. O teor de nitrogênio é determinado através do método de Kjeldahl (A.O.A.C., 1984, Official Methods of Analyse 14º edição, Association of Official Analytical Chemists, Washington DC).
[0166] A energia metabolizável pode ser calculada com base nos requisitos de Nutrientes da publicação de NRC em suíno, nona edição revisada 1988, subcomitê em nutrição suína, comitê em nutrição animal, junta de agricultura, conselho de pesquisa nacional. National Academy Press, Washington, D.C., páginas 2-6, e o European Table of Energy Values for Poultry Feed-stuffs, Spelderholt centre for poultry research and extension, 7361 DA Beekbergen, The Países-Baixos. Grafisch bedrijf Ponsen & looijen bv, Wageningen. ISBN 90-71463-12-5.
[0167] O teor dietário de cálcio, fósforo e aminoácidos disponíveis em dietas animais completas é calculado com base nas tabelas alimentícias como Veevoedertabel 1997, gegevens over chemische samenstelling, verteerbaarheid en voederwaarde van voedermiddelen, Central Veevoederbureau, Runderweg 6, 8219 pk Lelystad. ISBN 90-72839-13-7.
[0168] Em uma modalidade específica, a composição de ração animal da invenção contém pelo menos uma proteína vegetal conforme definido acima.
[0169] A composição de ração animal da invenção também pode conter proteína animal, como Farinha de carne e ossos, Farinha de penas e/ou Farinha de peixe, tipicamente em uma quantidade de 0-25 %. A composição de ração animal da invenção também pode compreender grão seco de destiladores com solúveis (DDGS), tipicamente em quantidades de 0-30 %.
[0170] Em modalidades ainda adicionalmente específicas a composição de ração animal da invenção contém 0-80 % de maís; e/ou 0-80 % de sorgo; e/ou 0-70 % de trigo; e/ou 0-70 % de cevada; e/ou 0-30 % de aveia; e/ou 0-40 % de farinha de soja; e/ou 0-25 % de farinha de peixe; e/ou 0-25 % de farinha de carne e ossos; e/ou 0-20 % de soro.
[0171] A ração animal pode compreender — proteínas vegetais. Em modalidades específicas, o teor de proteína das proteínas vegetais é pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, ou 90 % (p/p). As proteínas vegetais podem ser derivadas de fontes de proteína vegetal, como legumes e cereais, por exemplo, materiais de plantas das famílias Fabaceae (Leguminosae), Cruciferaceae, Chenopodiaceae, e Poaceae, como farinha de soja, farinha de tremoço, farinha de colza e combinações das mesmas.
[0172] Em uma modalidade específica, a fonte de proteína vegetal é material de uma ou mais plantas da família Fabaceae, por exemplo, soja, tremoço, ervilha ou feijão. Em uma outra modalidade específica, a fonte de proteína vegetal é material de uma ou mais plantas da família Chenopodiaceae, por exemplo, beterraba, beterraba sacarina, espinafre ou quinoa. Outros exemplos de fontes de proteína vegetal são colza e repolho. Em uma outra modalidade específica, soja é uma fonte de proteína vegetal preferencial. Outros exemplos de fontes de proteína vegetal são cereais como cevada, trigo, centeio, aveia, maís (milho), arroz e sorgo.
[0173] As dietas animais podem, por exemplo, ser fabricadas como ração amassada (não peletizada) ou ração peletizada. Tipicamente, os gêneros alimentícios moídos são misturados e quantidades suficientes de vitaminas e minerais essenciais são adicionados de acordo com as especificações para as espécies em questão. As enzimas podem ser adicionadas como formulações enzimáticas sólidas ou líquidas. Por exemplo, para ração amassada uma formulação enzimática sólida ou líquida pode ser adicionada antes ou durante a etapa de misturação de ingrediente. Para a ração peletizada (líquida ou sólida) a preparação de muramidase/enzima também pode ser adicionada antes ou durante a etapa de ingrediente de ração. Tipicamente, uma preparação de enzima líquida compreende a muramidase da invenção opcionalmente com um poliol, como glicerol, etileno glicol ou propileno glicol, e é adicionada após a etapa de peletização, como aspergindo-se a formulação líquida nos péletes. A muramidase também pode ser incorporada em um aditivo de ração ou pré-mistura.
[0174] Em uma modalidade, a composição compreende uma ou mais enzimas adicionais. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais micróbios. Em uma modalidade, a composição compreende uma ou mais vitaminas. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais minerais. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais aminoácidos. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais outros ingredientes de ração.
[0175] Em uma outra modalidade, a composição compreende um ou mais do polipeptídeos da invenção, um ou mais agentes de formulação e uma ou mais enzimas adicionais. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais do polipeptídeos da invenção, um ou mais agentes de formulação e um ou mais micróbios. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais do polipeptídeos da invenção, um ou mais agentes de formulação e uma ou mais vitaminas. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais do polipeptídeos da invenção e um ou mais minerais. Em uma modalidade, a composição compreende o polipeptídeo da invenção, um ou mais agentes de formulação e um ou mais aminoácidos. Em uma modalidade, a composição compreende um ou mais do polipeptídeos da invenção, um ou mais agentes de formulação e um ou mais outros ingredientes de ração.
[0176] Em uma modalidade adicional, a composição compreende um ou mais dos polipeptídeos da invenção, um ou mais agentes de formulação e um ou mais componentes selecionados dentre a lista que consiste em: uma ou mais enzimas adicionais; um ou mais micróbios; uma ou mais vitaminas; um ou mais minerais; um ou mais aminoácidos; e um ou mais outros ingredientes de ração.
[0177] A concentração de muramidase final na dieta está dentro da faixa de 100 a 1000 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, como 200 a 900 mg, 300 a 800 mg, 400 a 700 mg, 500 a 600 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, ou qualquer combinação desses intervalos. Enzimas Adicionais
[0178] Em uma outra modalidade, as composições descritas ao presente documento opcionalmente incluem uma ou mais enzimas. As enzimas podem ser classificadas com base no handbook Enzyme Nomenclature de NC-IUBMB, 1992), vide também o site na internet: http://www.expasy.ch/enzyme/. ENZYME é um repositório de informações relativas à nomenclatura de enzimas. É principalmente baseado nas recomendações do Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUB-MB), Academic Press, Inc., 1992, e descreve cada tipo de enzima caracterizada para a qual um número de EC (Comissão de Enzima) foi fornecido (Bairoch A. The ENZYME database, 2000, Nucleic Acids Res 28:304-305). Essa nomenclatura de IUB-MB Enzyme se baseia em sua especificidade de substrato e, ocasionalmente em seu mecanismo molecular; como uma classificação não reflete as características estruturais dessas enzimas.
[0179] Uma outra classificação de determinadas enzimas de glicosídeo hidrolase, como endoglucanase, galactanase, mananase, dextranase e galactosidase é descrita em Henrissat et al, “The carbohydrate-active enzymes database (CAZy) in 2013”, Nucl. Acids Res. (1 de janeiro de 2014) 42 (D1): D490-D495; vide também www.Cazy.0org.
[0180] Então, a composição da invenção também pode compreender pelo menos uma outra enzima selecionada a partir do grupo que consiste em acetilxilan esterase (EC
3.1.1.23), acilglicerol lipase (EC 3.1.1.72), alfa-amilase (EC 3.2.1.1), beta-amilase (EC 3.2.1.2), arabinofuranosidase (EC 3.2.1.55), celobio-hidrolases (EC
3.2.1.91), celulase (EC 3.2.1.4), feruloil esterase (EC
3.1.1.73), galactanase (EC 3.2.1.89), alfa-galactosidase (EC 3.2.1.22), beta-galactosidase (EC 3.2.1.23), beta- glucanase (EC 3.2.1.6), beta-glucosidase (EC 3.2.1.21), triacilglicerol lipase (EC 3.1.1.3), lisofosfolipase (EC
3.1.1.5), alfa-manosidase (EC 3.2.1.24), beta-manosidase (mananase) (EC 3.2.1.25), fitase (EC 3.1.3.8, EC 3.1.3.26, EC 3.1.3.72), fosfolipase Al (EC 3.1.1.32), fosfolipase A2 (EC 3.1.1.4), fosfolipase D (EC 3.1.4.4), pululanase (EC
3.2.1.41), pectinesterase (EC 3.1.1.11), beta-xilosidase (EC 3.2.1.37), ou qualquer combinação dos mesmos.
[0181] Em uma modalidade específica, a composição da invenção compreende uma galactanase (EC 3.2.1.89) e uma beta-galactosidase (EC 3.2.1.23).
[0182] Em uma modalidade específica, a composição da invenção compreende uma fitase (EC 3.1.3.8 ou 3.1.3.26). Exemplos de fitases comercialmente disponíveis incluem Bio- Feed"" Phytase (Novozymes), RonozymeG P, RonozymeG NP e RonozymeG HiPhos (DSM Nutritional Products), Natuphos"" (BASF), Natuphos"" E (BASF), FinaseG e Quantumb Blue (AB Enzymes), OptiPhos8& (Huvepharma), AveMixO Phytase (Aveve Biochem), Phyzyme6 XP (Verenium/DuPont) e Axtrao PHY (DuPont). Outras fitases preferenciais incluem aquelas descritas, por exemplo, nos documentos WO 98/28408, WO 00/43503 e WO 03/066847.
[0183] Em uma modalidade específica, a composição da invenção compreende uma alfa-amilase (EC 3.2.1.1). Exemplos de alfa-amilases comercialmente disponíveis incluem RonozymeG A e RONOZYMEG RumiStar" (DSM Nutritional Products).
[0184] Em uma modalidade, a composição da invenção compreende um produto enzimático de múltiplos componentes, como FRAG Octazyme (Framelco), RonozymeG6 G2, RonozymeO VP e RonozymeG6 MultiGrain (DSM Nutritional Products), RovabioO Excel ou RovabioO Advance (Adisseo). Eubióticos
[0185] Os eubióticos são compostos que são projetados para fornecer um equilíbrio saudável da microflora no trato gastrointestinal. Os eubióticos cobrem um número de aditivos de ração diferentes, como probióticos, pré- bióticos, fitogênicos (óleos essenciais) e ácidos orgânicos que são descritos em mais detalhes abaixo. Probióticos
[0186] Em uma modalidade, a composição de ração animal compreende adicionalmente um ou mais probióticos adicionais. Em uma modalidade específica, a composição de ração animal compreende adicionalmente uma bactéria de um ou mais dos seguintes gêneros: Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, Bacillus, Pediococcus, Enterococcus, Leuconostoc, Carnobacterium, Propionibacterium, Bifidobacterium, Clostridium e Megasphaera ou qualquer combinação dos mesmos.
[0187] Em uma modalidade preferencial, a composição de ração animal compreende adicionalmente uma bactéria de uma ou mais das seguintes cepas: Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Bacillus pumilus, Bacillus polymyxa, Bacillus megaterium, Bacillus coagulans, Bacillus circulans, Enterococcus faecium, Enterococcus spp, e Pediococcus spp, Lactobacillus SPP, Bifidobacterium SPP, Lactobacillus acidophilus, Pediococsus acidilactici, Lactococcus lactis, Bifidobacterium bifidum, Propionibacterium thoenii, Lactobacillus farciminus, lactobacillus rhamnosus, Clostridium butyricum, Bifidobacterium animalis ssp. animalis, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius ssp. salivarius, Megasphaera elsdenii, Propionibacteria sp.
[0188] Em uma modalidade mais preferencial, a composição, aditivo de ração animal ou ração animal compreende adicionalmente uma bactéria de uma ou mais das seguintes cepas de Bacillus subtilis: 3A-P4 (PTA-6506), 15A-P4 (PTA-6507), 22C-Pl (PTA-6508), 2084 (NRRL B-500130), LSSAO1l (NRRL-B-50104), BS27 (NRRL B-501 O5), BS 18 (NRRL B- 50633), BS 278 (NRRL B-50634), DSM 29870, DSM 29871, DSM 32315, NRRL B-50136, NRRL B-50605, NRRL B-50606, NRRL B-
50622 e PTA-7547.
[0189] Em uma modalidade mais preferencial, a composição, aditivo de ração animal ou ração animal compreende adicionalmente uma bactéria de uma ou mais das seguintes cepas de Bacillus pumilus: NRRL B-50016, ATCC 700385, NRRL B-50885 ou NRRL B-50886.
[0190] Em uma modalidade mais preferencial, a composição, aditivo de ração animal ou ração animal compreende adicionalmente uma bactéria de uma ou mais das seguintes cepas de Bacillus lichenformis: NRRL B 50015, NRRL B-50621 ou NRRL B-50623.
[0191] Em uma modalidade mais preferencial, a composição, aditivo de ração animal ou ração animal compreende adicionalmente uma bactéria de uma ou mais das seguintes cepas de Bacillus amyloliquefaciens: DSM 29869, DSM 29869, NRRL B 50607, PTA-7543, PTA-7549, NRRL B-50349, NRRL B-50606, NRRL B-50013, NRRL B-50151, NRRL B-50141, NRRL B-50147 ou NRRL B-50888.
[0192] A contagem bacteriana de cada uma das cepas bacterianas na composição de ração animal é entre 1l1x10º e 1x10!º CFU/kg de matéria seca, de preferência, entre l1x10º e 1x10º? CFU/kg de matéria seca, e com mais preferência, entre 1x107 e 1x10º CFU/kg de matéria seca. Em uma modalidade mais preferencial a contagem bacteriana de cada uma das cepas bacterianas na composição de ração animal é entre 1x10º e 1x10ºº CFU/kg de matéria seca.
[0193] A contagem bacteriana de cada uma das cepas bacterianas na composição de ração animal é entre 1x10º e 1x10º? CFU/animal/dia, de preferência entre 1x107 e 1x10%3 CFU/animal/dia, e com mais preferência, entre 1x10º e 1x10%?
CFU/animal/dia. Em uma modalidade mais preferencial a contagem bacteriana de cada uma das cepas bacterianas na composição de ração animal é entre 1x10º e 1x104 CFU/animal/dia. Em uma modalidade, a quantidade de probióticos é 0,001 % a 10 % em peso da composição.
[0194] Em uma outra modalidade, a uma ou mais cepas bacterianas estão presentes na forma de um esporo estável.
[0195] Exemplos de produtos comerciais são Cylactino (DSM Nutritional Products), Alterion (Adisseo), Enviva PRO (DuPont Animal Nutrition), SyncraO (mistura de enzima + probiótico, DuPont Animal Nutrition), EcobiolO e Fecinor6O (Norel/Evonik) e GutCareG PYl (Evonik). Pré-bioticos
[0196] Os pré-bióticos são substâncias que induzem o crescimento ou a atividade de microrganismos (por exemplo, bactérias e fungos) que contribuem para o bem-estar de seu hospedeiro. Os pré-bióticos são tipicamente compostos de fibra não digeríveis que passam não digeridas através da parte superior do trato gastrointestinal e estimulam o crescimento ou a atividade de bactérias vantajosas que colonizam o intestino grosso agindo-se como substrato para os mesmos. Normalmente, os pré-bióticos aumentam o número ou a atividade de bactérias bífidas e bactérias formadoras de ácido láctico no trato GI.
[0197] Os derivados de levedura (leveduras integrais inativadas ou paredes celulares de levedura) também podem ser considerados como pré-bióticos. os mesmos frequentemente compreendem manan-oligossacarídeos, beta-r glucanos de levedura ou teores de proteína e são normalmente derivados da parede celular da levedura,
Saccharomyces cerevisiae.
[0198] Em uma modalidade, a quantidade de pré-bióticos é 0,001 % a 10 % em peso da composição. Exemplos de produtos de levedura são Yangê e Agrimos (Lallemand Animal Nutrition). Fitogênicos
[0199] Os fitogênicos são um grupo de promotores de crescimento natural ou promotores de crescimento não antibiótico usados como aditivos de ração, derivados de ervas, especiarias ou outras plantas. Os fitogênicos podem ser substâncias únicas preparadas a partir de óleos essenciais/extratos, óleos essenciais/extratos, plantas únicas e misturas de plantas (produtos herbais) ou mistura de óleos essenciais/extratos/ plantas (produtos especializados).
[0200] Exemplos de fitogênicos são alecrim, sálvia, orégano, tomilho, cravo e capim-limão. Exemplos de óleos essenciais são timol, eugenol, meta-cresol, vanilina, salicilato, resorcina, guajacol, gingerol, óleo de lavanda, iononas, irona, eucaliptol, mentol, óleos de hortelã, alfa- pineno; limoneno, anetol, linalol, metil di-hidrojasmonato, carvacrol, ácido propiônico/propionato, ácido acético/acetato, ácido butírico/butirato, óleo de alecrim, óleo de cravo, geraniol, terpineol, citronelol, salicilato de amila e/ou benzila, cinamaldeído, polifenol vegetal (tanina), extrato de açafrão e cúrcuma.
[0201] Em uma modalidade, a quantidade de fitogênicos é 0,001 % a 10 % em peso da composição. Exemplos de produtos comerciais são Crinao (DSM Nutritional Products); Cinergy"", Biacid*", ProHacidTM Classic e ProHacidTM
Advance"! (todos Promivi/Cargill) e Envivo EO (DuPont Animal Nutrition). Ácidos Orgânicos
[0202] os ácidos orgânicos (C1-C7) são amplamente distribuídos na natureza como constituintes normais de tecidos vegetais ou animais. Os mesmos também são formados através de fermentação microbiana de carboidratos principalmente no intestino grosso. os mesmos são frequentemente usados em produção suína ou de aves como uma substituição de promotores de crescimento antibiótico uma vez que os mesmos têm um efeito preventivo nos problemas intestinais como enterite necrótica em galinhas e infecções por Escherichia coli em porcos jovens. Os ácidos orgânicos podem ser vendidos como monocomponente ou misturas de tipicamente 2 ou 3 ácidos orgânicos diferentes. Exemplos de ácidos orgânicos são ácidos graxos de cadeia curta (por exemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido butírico), ácidos graxos de cadeia média (por exemplo, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido láurico), ácidos di/tricarboxílicos (por exemplo, ácido fumárico), hidróxi ácidos (por exemplo, ácido láctico), ácidos aromáticos (por exemplo, ácido benzoico) ácido cítrico, ácido sórbico, ácido málico e ácido tartárico ou seu sal (tipicamente sal de sódio ou potássio como diformato de potássio ou butirato de sódio).
[0203] Em uma modalidade, a quantidade de ácido orgânico é 0,001 % a 10 % em peso da composição. Exemplos de produtos “comerciais são VevoVitallO (DSM Nutritional Products), AmasilG, LuprisilG, Lupro-Graino, Lupro-Cido, Lupro-MixO (BASF), n-Butyric Acid AF (OXEA) e Adimix
Precision (Nutriad). Pré-mistura
[0204] A incorporação da composição de aditivos de ração, conforme exemplificado no presente documento acima, para rações animais, por exemplo, rações de aves, é realizada na prática com o uso de um concentrado ou uma pré-mistura. Uma pré-mistura designa uma mistura preferencialmente uniforme de um ou mais microingredientes com diluente e/ou carreador. As pré-misturas são usadas para facilitar a dispersão uniforme de microingredientes em uma mistura maior. Uma pré-mistura de acordo com a presente invenção pode ser adicionada aos ingredientes da ração ou à água potável como sólidos (por exemplo, como pó solúvel em água) ou líquidos. Aminoácidos
[0205] A composição da invenção pode compreender adicionalmente um ou mais aminoácidos. Exemplos “de aminoácidos que são usados na ração animal são lisina, alanina, beta-alanina, treonina, metionina e triptofano. Em uma modalidade, a quantidade de aminoácido é 0,001 % a 10 % em peso da composição. Vitaminas e Minerais
[0206] Em uma outra modalidade, a ração animal pode incluir uma ou mais vitaminas, como uma ou mais vitaminas solúveis em gordura e/ou uma ou mais vitaminas solúveis em água. Em uma outra modalidade, a ração animal pode incluir opcionalmente um ou mais minerais, como um ou mais minerais traço e/ou um ou mais macrominerais.
[0207] Geralmente, vitaminas solúveis em água e em gordura, bem como minerais traço formam parte de uma denominada pré-mistura pretendida para a adição à ração, ao passo que macrominerais geralmente são adicionados separadamente à ração.
[0208] Exemplos não limitantes de vitaminas solúveis em gordura incluem vitamina A, vitamina D3, vitamina E, e vitamina K, por exemplo, vitamina K3.
[0209] Exemplos não limitantes de vitaminas solúveis em água incluem vitamina C, vitamina Bl2, biotina e colina, vitamina Bl, vitamina B2, vitamina B6, niacina, ácido fólico e pantotenato, por exemplo, Ca-D-pantotenato.
[0210] Exemplos não limitantes de minerais traço incluem boro, cobalto, cloreto, cromo, cobre, fluoreto, iodeto, ferro, manganês, molibdênio, iodo, selênio e zinco.
[0211] Exemplos não limitantes de macrominerais incluem cálcio, magnésio, fósforo, potássio e sódio.
[0212] Em uma modalidade, a quantidade de vitaminas é 0,001 % a 10 % em peso da composição. Em uma modalidade, a quantidade de minerais é 0,001] % a 10 % em peso da composição.
[0213] Os requisitos nutricionais desses componentes (exemplificados com aves e leitões/porcos) são listados na Tabela A do documento WO 01/58275. Requisitos nutricionais significa que esses componentes devem ser fornecidos na dieta nas concentrações indicadas.
[0214] Na alternativa, O aditivo de ração animal da invenção compreende pelo menos um dos componentes individuais especificados na Tabela A do documento WO 01/58275. Pelo menos um significa qualquer um dentre, um ou mais de, um, ou dois, ou três, ou quatro e assim por diante até todos os treze ou até todos os quinze componentes individuais. Mais especificamente, esse pelo menos um componente individual está incluído no aditivo da invenção em tal quantidade de modo a fornecer uma concentração em ração dentro da faixa indicada na coluna quatro, ou coluna cinco, ou coluna seis da Tabela A.
[0215] Em ainda uma modalidade adicional, o aditivo de ração animal da invenção compreende pelo menos uma das vitaminas abaixo, de preferência, para fornecer uma concentração em ração dentro das faixas especificadas na Tabela 1 abaixo (para dietas de leitão e dietas de frango de corte, respectivamente). Tabela 1: Recomendações de vitamina típicas Vitamina Dieta de leitão Dieta de frango de corte Vitamina A 10.000-15.000 8-12.500 IU/kg de IU/kg de ração ração Vitamina D3 1800-2000 IU/kg de 3000-5000 IU/kg ração de ração Vitamina E 60-100 mg/kg de 150-240 mg/kg de ração ração Vitamina K3 2-4 mg/kg de ração 2-4 mg/kg de ração Vitamina Bl 2-4 mg/kg de ração 2-3 mg/kg de ração Vitamina B2 6-10 mg/kg de 7-9 mg/kg de ração ração Vitamina B6 4-8 mg/kg de ração 3-6 mg/kg de ração Vitamina B12 0,03-0,05 mg/kg de | 0,015-0,04 mg/kg ração de ração Niacina (Vitamina 30-50 mg/kg de 50-80 mg/kg de B3) ração ração de corte ração ração ração ração ração ração ração Outros ingredientes de ração
[0216] A composição da invenção pode compreender adicionalmente agentes de coloração, estabilizadores, aditivos de aprimoramento de crescimento e compostos de aroma/saborizantes, ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs); espécie de geração de oxigênio reativo, antioxidantes, peptídeos antimicrobianos, polipeptídeos antifúngicos e compostos de gerenciamento de micotoxina.
[0217] Exemplos de agentes de coloração são carotenoides como beta-caroteno, astaxantina e luteina.
[0218] Exemplos de compostos de aroma/saborizantes são creosol, anetol, deca-, undeca- e/ou dodeca-lactonas, iononas, irona, gingerol, piperidina, ftaleto de propilideno, ftaleto de butilideno fataleto, capsaicina e tanina.
[0219] Exemplos de peptídeos antimicrobianos (AMP's) são CAP18, Leucocina A, Tritrpticina, Protegrina-l, Tanatina, Defensina, Lactoferrina, Lactoferricina e Ovispirina como Novispirina (Robert Lehrer, 2000), Plectasinas e Estatinas, incluindo os compostos e polipeptídeos revelados nos documentos WO 03/044049 e WO 03/048148, assim como variantes ou fragmentos dos expostos acima que retêm atividade antimicrobiana.
[0220] Exemplos de polipeptídeos antifúngicos (AFP's) são os peptídeos Aspergillus giganteus, e Aspergillus niger, assim como variantes e fragmento dos mesmos que retêm atividade antifúngica, conforme revelado nos documentos WO 94/01459 e WO 02/090384.
[0221] Exemplos de ácidos graxos poli-insaturados são ácidos graxos poli-insaturados C18, C20 e C22, tais como ácido araquidônico, ácido docoso-hexaenoico, ácido eicosapentaenoico e ácido gama-linoleico.
[0222] Exemplos de espécies geradoras de oxigênio reativo são substâncias químicas tais como perborato, persulfato ou percarbonato; e enzimas tais como uma oxidase, uma oxigenase ou uma sintetase.
[0223] Os antioxidantes podem ser usados para limitar o número de espécies de oxigênio reativo que podem ser geradas de modo que o nível de espécies de oxigênio reativo esteja em equilíbrio com os antioxidantes.
[0224] Micotoxinas, como desoxinivalenol, aflatoxina, zearalenona e fumonisina podem ser encontradas em ração animal e podem resultar em desempenho negativo ou doença animal. Os compostos que podem gerenciar os níveis de micotoxina, como por meio de desativação da micotoxina ou por meio de ligação da micotoxina, podem ser adicionados à ração para melhorar esses efeitos negativos. Exemplos de compostos de gerenciamento de micotoxina são VitafixO, Vitafix Ultra (Nuscience), Mycofixo, MycofixO Secure, FUMzymeG, Biomino BBSH, Biomino MTV (Biomin), Mold-NilG,
Toxy-NilG e Unike& Plus (Nutriad). Métodos de Aprimoramento de Digestibilidade Animal
[0225] Em uma modalidade adicional, a invenção se refere a um método para aprimorar a absorção de nutriente em um animal que compreende administrar ao animal as composições de ração animal que compreendem polipeptídeos que têm atividade de muramidase conforme definido acima.
[0226] Na presente invenção, o aprimoramento é comparado à mesma ração, mas exclui a muramidase.
[0227] Na presente invenção, o teor de sangue de um nutriente na ração animal com muramidase pode ser aprimorado em pelo menos 0,5 %, como em pelo menos 1,0 %, pelo menos 1,5 % ou pelo menos 2,0 %.
[0228] Na presente invenção, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase pode ser dosado em um nível de 100 a 1000 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, como 200 a 900 mg, 300 a 800 mg, 400 a 700 mg ou 500 a 600 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, ou qualquer combinação desses intervalos.
[0229] Na presente invenção, o animal é um animal monogástrico, por exemplo, porcos ou suínos (incluindo, mas sem limitação, leitões, porcos em crescimento e porcas gestantes); aves (incluindo, mas sem limitação, ave, peru, pato, codorna, galinha-da-angola, ganso, pombo, pombo jovem, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto); animais de estimação, como gatos e cachorros, peixe (incluindo, mas sem limitação, seriola, pirarucu, barbo, achigã, anchova, bocachico, brema, peixe-gato, cachama, carpa, bagre, catla, chanos, truta-de-lago, acará-grande, bijupirá, bacalhau, tipo de peixe branco, dourada, corvina,
moreia, góbio, peixe-dourado, gourami, garoupa, quapote, linguado, java, labeo, lai, botia, cavala, peixe-leite, carapeba, salamandra, tainha, paco, peixe-mexerica, peixe- rei, perca, pike, pampo-galhudo, rutilis, salmão, sampa, sauger, robalo, dourada, shiner, góbio-dorminhoco, peixe cabeça-de-cobra, pargo, robalo comum, linguado, spinefoot, esturjão, peixe-lua, curimatã, peixe-médico, peixe terror, tilápia, truta, atum, rodovalho, cisco europeia, picão- verde e peixe-branco); e crustáceos (incluindo, mas sem limitação, camarões e pitus). Em uma modalidade mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, ave, crustáceos e peixe. Em uma modalidade ainda mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, leitão, porco em crescimento, porca gestante, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto. Uso para Aprimorar a Digestibilidade Animal
[0230] Em uma modalidade adicional, a invenção se refere ao uso de composições de ração animal que compreendem polipeptídeos que têm atividade de muramidase, conforme definido acima, para aprimorar a absorção de nutriente em um animal.
[0231] Na presente invenção, o aprimoramento é comparado à mesma ração, mas exclui a muramidase.
[0232] Na presente invenção, o teor de sangue de um nutriente na ração animal com muramidase pode ser aprimorado em pelo menos 0,5 %, como em pelo menos 1,0 %, pelo menos 1,5 % ou pelo menos 2,0 %.
[0233] Na presente invenção, o polipeptídeo que tem atividade de muramidase pode ser dosado em um nível de 100 a 1000 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, como 200 a 900 mg, 300 a 800 mg, 400 a 700 mg ou 500 a 600 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, ou qualquer combinação desses intervalos.
[0234] Na presente invenção, oO animal é um animal monogástrico, por exemplo, porcos ou suínos (incluindo, mas sem limitação, leitões, porcos em crescimento e porcas gestantes); aves (incluindo, mas sem limitação, ave, peru, pato, codorna, galinha-da-angola, ganso, pombo, pombo jovem, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto); animais de estimação, como gatos e cachorros, peixe (incluindo, mas sem limitação, seriola, pirarucu, barbo, achigã, anchova, bocachico, brema, peixe-gato, cachama, carpa, bagre, catla, chanos, truta-de-lago, acará-grande, bijupirá, bacalhau, tipo de peixe branco, dourada, corvina, moreia, góbio, peixe-dourado, gourami, garoupa, guapote, linguado, java, labeo, lai, botia, cavala, peixe-leite, carapeba, salamandra, tainha, paco, peixe-mexerica, peixe- rei, perca, pike, pampo-galhudo, rutilis, salmão, sampa, sauger, robalo, dourada, shiner, góbio-dorminhoco, peixe cabeça-de-cobra, pargo, robalo comum, linguado, spinefoot, esturjão, peixe-lua, curimatã, peixe-médico, peixe terror, tilápia, truta, atum, rodovalho, cisco europeia, picão- verde e peixe-branco); e crustáceos (incluindo, mas sem limitação, camarões e pitus). Em uma modalidade mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, ave, crustáceos e peixe. Em uma modalidade ainda mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, leitão, porco em crescimento, porca gestante, galinha, frango de corte,
poedeira, franga e pinto.
[0235] As modalidades preferenciais da invenção são descritas no conjunto de reivindicações.
EXEMPLOS Exemplo 1: Determinação de Atividade de Muramidase
[0236] A atividade de muramidase foi determinada medindo-se a diminuição (queda) na absorvância/densidade óptica de uma solução de Micrococcus lisodeikticus suspenso ATTC nº 4698 (Sigma-Aldrich M3770) medida em um leitor de microplaca (Tecan Infinite M200) a 450 nm. Preparação de substrato de Micrococcus Iysodeikticus
[0237] Antes do uso as células foram suspensas em água desionizada para uma concentração de 10 mg de células/ml e a absorvância/densidade óptica (OD) a 450 nm foi medida. A suspensão celular foi, então, ajustada para que a concentração celular no ensaio de turbidez (180 1nl de tampão + 20 91pnl de amostra + 20 upl de substrato) se igualasse a um OD450 = 1,0. A suspensão celular ajustada foi, então, armazenada à temperatura ambiente antes do uso. As células suspensas foram usadas em 3 horas. Preparação de tampão de ácido cítrico-fosfato pH 4
[0238] 61,45 ml de ácido cítrico a 0,1 M foi medido com 38,55 ml de hidrogenofosfato dissódico a 0,2 M, e o pH foi ajustado com ácido clorídrico ou hidróxido de sódio para pH 4, Medição de atividade antimicrobiana de muramidase no ensaio de turbidez
[0239] A amostra de muramidase a ser medida foi diluída para uma concentração de 50 mg de proteína enzimática/l em água desionizada, e mantida em gelo até o uso. Em uma placa de microtitulação de 96 poços (Nunc) 180 n1ul de tampão de ácido cítrico-fosfato pH 4 e 20 ul da amostra de muramidase diluída foram adicionados e mantidos frios (5 ºC). Para começar a medição de atividade 20 p1nl do substrato (Micrococcus Iysodeikticus) foram adicionados a cada poço, e a medição cinética de absorvância a 450 nm foi iniciada por 1 hora a 37 ºC em um leitor de microplaca. A absorvância medida a 450 nm foi monitorada para cada poço e ao longo do tempo, uma queda na absorvância foi vista se a muramidase tiver atividade de muramidase.
[0240] Seguindo a incubação, a atividade de muramidase contra Micrococcus Iysodeikticus foi determinada como À de absorvância a 450 nm (valor de partida - valor final) de cada poço após 1 hora. A significância foi calculada com o uso de Dunnett's com nível de teste de controle de 0,05 em JMPO versão 12.1.0 de pacote de software estatístico do SAS Institute Inc. Exemplo 2: Clonagem, Expressão e Purificação das Muramidases
[0241] As muramidases GH25 da SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 2 foram clonadas e expressas conforme descrito no exemplo 2 do documento WO 2013/076253. A muramidase GH25 da SEQ ID NO: 3 pode ser clonada com o uso de técnicas moleculares básicas (Ausubel et al., 2003, Curr. Prot. Mol.Biol., John Wiley & Sons, Cambridge, EUA; Christgau et al. 1995, Curr. Genet. 27, 1135-141). A muramidase GH25 da SEQ ID NO: 4 pode ser clonada e expressa conforme descrito no documento WO2009/102755. A muramidase GH25 da SEQ ID NO: 5 foi clonada e expressa conforme descrito no documento WO2005/080559. As muramidases GH25 da SEQ ID NO: 6 a SEQ ID
NO: 59 foram clonadas e expressas conforme descrito no documento PCT/CN2017/075978. As muramidases GH25 da SEQ ID NO: 60 a SEQ ID NO: 62 foram clonadas e expressas conforme descrito no documento PCT/CN2017/075960. As muramidases GH24 da SEQ ID NO: 63 a SEQ ID NO: 71 foram clonadas e expressas conforme descrito no documento WO2017/000922. Exemplo 3: Experimento in vivo 1 Projeto experimental
[0242] Local: Innovation & Applied Science Center Mairinque - SP, Brasil (I&ASC-MQ).
Data de início: maio de 2016 Data do fim: junho de 2016 Animal e alojamento
[0243] Foram usados 600 frangos de corte, machos, Ross com um dia de idade, alojados em caixas em um projeto completamente randomizado. Os frangos cresceram em uma areia sanitária fresca.
[0244] Programa de vacinação: nenhuma vacina foi manipulada durante o teste. As aves só receberam vacinas de rotina no incubatório e a vacina anticocídia para o desafio.
[0245] As aves foram criadas em um celeiro para frango de corte brasileiro convencional, com aquecedor elétrico e a gás, ventiladores e persianas de gerenciamento, que permitem a troca de ar e controle de temperatura. Água e ração estavam disponíveis ad libitum.
[0246] Alojamento: piso dos frangos: 32 gaiolas de piso de 2,2 m? com 25 aves cada. As aves foram distribuídas em 3 tratamentos, 8 réplicas com 25 aves cada. Total de 200 aves por tratamento. O período de teste foi de 42 dias.
Tratamentos:
[0247] 1- Controle Negativo (NC) = O LSU(F)/kg de muramidase; 2- NC + 25.000 LSU(F)/kg (466 mg/kg) de muramidase; 3- NC + 35.000 LSU(F)/kg (653 mg/kg) de muramidase. Alimentação e tratamentos
[0248] As dietas experimentais foram formuladas de acordo com as condições práticas no Brasil, com base no farinha de milho e soja (fase inicial, de crescimento e final), com fitase (RONOZYMEG HiPhos GT) - adição de 1000 FYT/kg de ração e pré-mistura de vitamina e mineral em níveis comerciais (Tabela 2). Tabela 2: Composição e teores de nutrientes das dietas experimentais basais Ingredientes Partida 1-21 Crescimento Final 36-42 (%) dias 22-35 dias dias MILHO 54,8000 55,8100 55,0500
SOJA ARROZ
CARNE E OSSO SAL 0,3300 0,3500 0,3500 DL-METIONINA 0,3100 0,2800 0,2600 L-LISINA 0,1900 0,2100 0,2200 PX ROVIMIX 0,1500 0,1500 0,1500 [aves |O | rm pe |
Ingredientes Partida 1-21 Crescimento Final 36-42 (%) dias 22-35 dias dias PX ROLIGOMIX 0,0500 0,0500 0,0500 [neon | RES Lo | 200,0000 | 100,0000 | 100,0000 | Análise calculada, % Bruta Av. P 0,4700 0,4000 0,4000 AAS dig 0,8900 0,8100 0,7700 Arg dig 1,3800 1,2400 1,1700 Éter *PX ROVIMIX AVES (DSM): Vit. A 9.000.000 UI/kg; Vit. D3
2.500.000 UI/kg; Vit. E 20.000 UI/kg; Vit. K3 2.500 mg/kg; Vit. Bl 2.000 mg/kg; Vit. B2 6.000 mg/kg; Ácido pantotênico 12 g/kg; Vit. B6 3.000 mg/kg; Vit. B12 15.000 mcg/kg; Ácido nicotínico 35 g/kg; Ácido fólico 1 500 mg/kg; Biotina 100 mg/kg; Selênio 250 mg por kg de pré-mistura. **PX ROLIGOMIX AVES (DSM): Ferro 100 g/kg; Cobre 20 g/kg; Manganês 130 g/kg; Cobalto 2.000 mg/kg; Zinco 130 mg/kg;
Iodo 2.000 mg por kg de pré-mistura.
[0249] 4 ppm de Apo-éster na dieta do frango de corte (40 mg/kg de CAROPHYLLO yellow 10 %) foram adicionados a todos os tratamentos para medição em soro, com 28 dias de idade, o teor total de carotenoide. Parâmetros experimentais e análises
[0250] Carotenoides totais: Li Foram adicionados 4 ppm de Apo-éster na dieta do frango de corte (40 mg/kg de CAROPHYLLO yellow 10 %); .º Foi coletado sangue com EDTA de pelo menos 20 aves por tratamento nos 28 dias de idade; . Teor de carotenoides total medido em Caroteno iCheck *". Análise estatística
[0251] Todos os dados foram analisados com o uso do procedimento de GLM de pacote estatístico SAS e os meios foram comparados pelo teste de Tukey a 5 % de nível de probabilidade. Quando considerado necessário, as análises não paramétricas foram realizadas no ambiente R para computação estatística (versão 3.2.2).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0252] As aves de 35.000 LSU(F) / kg de dieta de muramidase tiveram níveis de carotenoides totais no sangue maiores que o grupo de controle negativo. Em 25.000 LSU(F) / kg do grupo de muramidase, os níveis de carotenoide eram semelhantes a outros tratamentos (Tabela 3). Tabela 3. Níveis de carotenoide no sangue de aves nos 28 dias de idade
Tratamentos | Controle 25.000 35.000 valor cv% Negativo | LSU/kg de LSU/kg de Pp (NC) muramidase | muramidase Carotenoides 3,57 b 3,97 ab 4,38 a 0,0055 | 20,83 totais (mg/1) Letras diferentes na mesma fileira diferem pelo teste de Tukey (P <0,05). CV = coeficiente de variação.
CONCLUSÃO
[0253] Nesse teste, a suplementação de muramidase levou ao aprimoramento significativo de absorção de carotenoide. Exemplo 4. Experimento in vivo 2 Localização e alojamento
[0254] O experimento foi realizado no Servei de Granges i Camps Experimentals da Universitat Autônoma de Barcelona (UAB) .
[0255] Os animais foram alojados em uma única sala com 16 gaiolas de chão (8 gaiolas (1,5m x 1l1m) em cada lado da sala). As condições ambientais (temperatura, umidade relativa e taxas de ventilação) foram controladas de acordo com as diretrizes de gerenciamento de frangos de corte de Ross. Os animais foram receberam bebedores do tipo chupeta (3 bebedores/gaiola) e alimentadores por calha manuais (1 calha/gaiola). Animais Experimentais
[0256] 408 frangos de corte machos de um dia de idade (Ross 308) foram usados (30/gaiola). Os mesmos foram obtidos a partir de um incubatório local, pesados, individualmente marcados nas asas e alocados para tratamentos dietéticos em um projeto completamente randomizado. Os animais foram vacinados em ovo contra Gumboro e Marek e também contra cocidiose (Hypracox, aspersão grossa em 1 dia) e bronquite (aspersão fina) após o nascimento. Grupos Experimentais
[0257] Cada gaiola foi alocada para um de dois tratamentos experimentais: Uma dieta de controle (Tl) ou a mesma dieta incluindo lisozima (T2). Programa de Alimentação
[0258] As dietas experimentais basais foram formuladas para satisfazer ou exceder os requisitos de nutrientes recomendados para frangos de corte Ross. Os ingredientes pré-mistura de mineral-vitamina, as análises calculadas e reais das dietas são apresentadas na Tabela 4. As dietas basais não continham quaisquer enzimas ou aditivos de ração (além de Lisozima), cocidiostatos, antibióticos veterinários ou quaisquer outros promotores de crescimento. Todas as dietas incluíram Carophyll Yellow (10 %) a 60 mg/kg. Tabela 4: Composição e teores de nutrientes das dietas experimentais basais Farinha de soja 48 % 34,97 27,23 Trigo 20,00 20,00 IEF a
[Fosse Pré-mistura de 0,30 0,30 | mineral-vitamina | | L-lisina 0,17 0,19 Cloreto de Colina 0,04
LEE DE E Gordura 5 FYSFEED 5,54 TiO, 0,5 0,5 | EB, OO A Energia metabolizável gen 1 Pré-mistura de vitamina-mineral fornecida por quilograma de dieta: Vitamina A: 10 000 I.U.; vitamina E: 40 I.U.; vitamina K3: 3,0 mg; vitamina C: 100 mg; vitamina Bl: 2,50 mg; vitamina B2: 8,00 mg; vitamina B6: 5,00 mg; vitamina Bl12: 0,03 mg; niacina: 50,0 mg; pantotenato cálcico: 12,0 mg; ácido fólico: 1,50 mg; biotina 0,15 mg; colina: 450 mg; etoxiquina: 54 mg; Na: 1,17 g; Mg: 0,8 g; Mn: 80 mg; Fe: 60 mg; Cu: 30 mg; Zn: 54 mg; I: 1,24 mg; Co: 0,6 mg; Se: 0,3 mg
[0259] Os animais foram aleatoriamente alocados em dois tratamentos experimentais que consistem em uma dieta equilibrada suplementada ou não com lisozima a 35.000 LSU(F)/kg de ração (534 mg de lisozima/kg de ração). Durante o período experimental os animais receberam duas dietas (de partida de 0-21 dias e de crescimento de 21-35 dias) a dieta de partida foi na forma esmigalhada e a de crescimento está na forma de pélete. Todas as dietas incluíram dióxido de titânio (0,5 %) como marcador de digestibilidade. Projeto experimental
[0260] No dia 9, 21 aves por gaiola (aleatoriamente selecionadas) foram sacrificadas e uma amostra agrupada de sangue (de 2-3 animais) até chegar a 5 ml de volume total foi tirada (nos tubos heparinizados) de cada gaiola para análise de carotenoides. Análise
[0261] As concentrações de plasma de carotenoides (luteína, zeaxantina), vitamina A, E e ácido siálico foram determinadas por meio de HPLC. Análise Estatística
[0262] Os resultados foram expressos como meios com seus erros padrão a menos que seja definido de outro modo. Os dados foram analisados com ANOVA com o uso do procedimento de GLM que leva em consideração as dietas experimentais como efeito principal. Quando as frequências foram analisadas, o teste exato de Fisher foi usado. Todas as análises estatísticas foram realizadas com o uso do Software de Análise Estatística SAS versão 9.2 (SAS Institute Inc.). O nível a usado para a determinação de significância para toda a análise foi P=0,05. A tendência estatística também foi considerada para valores P >0,05 e <0,10. Resultados e Discussão
[0263] Os resultados de Teor de carotenoides, Vitamina
A, Vitamina E e ácido siálico em plasma de frangos de corte são mostrados na Tabela 5. Tabela 5: Teor de carotenoides, Vitamina A, Vitamina E e ácido siálico em plasma de frangos de corte no dia 9 Lo mm e jvaorp | [125 de zeaxantina [o [ng/ml] [ng/ml] Vitamina A 521,4 615,6 0,040 (como retinol total) [ng/ml] Vitamina E 8456,3 8560,1 0,941 (como a-tocoferol) [ng/ml] Ácido siálico 213,9 232,4 0,056 (como ácido N- acetilneurâminico total) [pg/ml]
[0264] O teor de carotenoides e vitaminas que inclui vitamina A e vitamina E em plasma aumentou significativamente no dia 9 em comparação com o grupo de controle (T1).
[0265] Ácido siálico, um derivado acetilado de ácido neuroamínico, é um componente terminal da extremidade não redutora de cadeias de carboidrato de glicoproteínas e glicolipídieos. A concentração de SA aumenta rapidamente seguindo o processo inflamatório e de lesão. Esse é a primeira vez que o ácido siálico foi medido em aves saudáveis suplementadas ou não com muramidase. Para ambos os grupos, o teor de SA em plasma aumentou significativamente no Dia 9 enquanto o grupo suplementado com muramidase aumentou mais.
Conclusão
[0266] Os resultados obtidos no estudo mostraram que a inclusão de muramidase microbiana foi eficaz no aprimoramento de absorção de nutriente em frangos de corte.
[0267] A invenção descrita e reivindicada no presente documento não deve ter o escopo limitado pelos aspectos específicos revelados no presente documento, visto que esses aspectos se destinam a ser ilustrações de vários aspectos da presente invenção. Quaisquer aspectos equivalentes se destinam a estar dentro do escopo desta invenção. De fato, várias modificações da presente invenção além daquelas mostradas e descritas no presente documento ficarão claras para os indivíduos versados na técnica a partir da descrição anterior. Tais modificações também se destinam a estar dentro do escopo das reivindicações anexas. No caso de conflito, a presente revelação que inclui definições prevalecerá.

Claims (1)

  1. REIVINDICAÇÕES l. Ração animal que compreende um aditivo de ração animal, uma ou mais fontes de proteína e uma ou mais fontes de energia, sendo a ração animal caracterizada por compreender adicionalmente um ou mais polipeptídeos fúngicos que têm atividade de muramidase.
    2. Ração animal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é uma muramidase GH24 ou muramidase fúngica GH25.
    3. Ração animal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo que tem atividade de muramidase degrada detritos de parede celular de Lactobacillus johnsonii.
    4, Ração animal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo que tem atividade de muramidase é selecionado a partir do grupo que consiste em: (a) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 1; (b) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 2; (ec) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 3;
    (d) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 4;
    (e) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 5;
    (£) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 6;
    (9) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 7;
    (h) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 8;
    (1) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 9;
    (3) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 10;
    (k) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 11;
    (1) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 12;
    (m) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 13;
    (n) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 14;
    (o) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 15;
    (Pp) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 16;
    (q) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 17;
    (r) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18;
    (s) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 19;
    (t) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20;
    (u) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 21;
    (v) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 22;
    (w) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 23;
    (x) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 24;
    (y) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 25;
    (2) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 26;
    (aa) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 27;
    (ab) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 28;
    (ac) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 29;
    (ad) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 30;
    (ae) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 31;
    (af) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 32;
    (ag) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 33;
    (ah) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 34;
    (ai) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35;
    (aj) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36;
    (ak) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 37;
    (al) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38;
    (am) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39;
    (an) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 40;
    (ao) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 41;
    (ap) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 42;
    (aq) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 43;
    (ar) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 44;
    (as) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 45;
    (at) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 46;
    (au) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 47;
    (av) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 48;
    (av) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 49;
    (ax) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 50;
    (ay) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 51;
    (az) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 52;
    (ba) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 53;
    (bb) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 54;
    (bc) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 55;
    (bd) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 56;
    (be) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 57;
    (bf) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 58;
    (bg) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 59;
    (bh) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 60;
    (bi) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 61;
    (bj) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 62;
    (bk) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 63;
    (bl) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 64;
    (bn) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 65;
    (bn) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 66;
    (bo) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 67;
    (bb) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 68;
    (ba) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 69;
    (br) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 &%, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 70;
    (bs) um polipeptídeo que tem pelo menos 80 %, por exemplo, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 71;
    (bt) uma variante de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 ou SEQ ID NO: 71 que compreende uma ou mais substituições de aminoácido (de preferência, substituições conservativas), e/ou uma ou mais deleções de aminoácido, e/ou uma ou mais inserções de aminoácido ou qualquer combinação dos mesmos em
    1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 posições; (bu) um polipeptídeo que compreende o polipeptídeo de (a), (b), (c), (d), (e), (£), (9), (h), (1), (3), (kk), (1), (mM), (n), (0), (Pp), (q), (À), (s), (E), (UU), (v), (W), (XX), (y), (2), (aa), (ab), (ac), (ad), (ae), (af), (ag), (ah), (ai), (aj), (ak), (al), (am), (an), (ao), (ap), (aq), (ar), (as), (at), (au), (av), (aw), (ax), (ay), (az), (ba), (bb), (bc), (bd), (be), (bf), (bg), (bh), (bi), (bj), (bk), (bl), (bm), (bn), (bo), (bp), (ba), (br), (bs) ou (bt) e uma extensão N-terminal e/ou C-terminal entre 1 e 10 aminoácidos; e (bv) um fragmento de um polipeptídeo de (a), (b), (c), (d), (e), (£), (9), (h), (1), (3), (K), (1), (M), (n), (o), (p), (a), (1), (s), (E), (U), (vV), (Ww), (XxX), (y), (27), (aa), (ab), (ac), (ad), (ae), (af), (ag), (ah), (ai), (aj), (ak), (al), (am), (an), (ao), (ap), (aq), (ar), (as), (at), (au), (av), (aw), (ax), (ay), (az), (ba), (bb), (bc), (bd), (be), (bf), (ba), (bh), (bi), (bj), (bk), (bl), (bm), (bn), (bo), (bp), (ba), (br), (bs) ou (bt) que tem atividade de muramidase e que tem pelo menos 90 % do comprimento do polipeptídeo maduro.
    5. Ração animal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a fonte de proteína é selecionada a partir do grupo que consiste em soja, soja selvagem, feijão, tremoço, feijão Tepary, feijão-da-Espanha, feijão slimjim, feijão-de-lima, vagem francesa, fava comum (feijão-fava), grão de bico,
    lentilha, amendoim, amendoim Spanish, canola, semente de girassol, semente de algodão, colza (semente oleaginosa de colza) ou ervilha ou em uma forma processada como farinha de soja, farinha de soja integral, concentrado de proteína de soja (SPC), farinha de soja fermentada (FSBM), farinha de girassol, farinha de semente de algodão, farinha de colza, farinha de peixe, farinha de osso, farinha de pena, soro ou qualquer combinação dos mesmos.
    6. Ração animal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a fonte de energia é selecionada a partir do grupo que consiste em maís, milho, sorgo, trigo, cevada, aveia, arroz, triticale, centeio, beterraba, beterraba sacarina, espinafre, batata, mandioca, quinoa, repolho, switchgrass, painço, milheto, milho-da-Itália ou em uma forma processada como milho moído, maís moído, amido de batata, amido de mandioca, sorgo moído, switchgrass moído, painço moído, milho-da-Itália moído, milheto moído, ou qualquer combinação dos mesmos.
    7. Ração animal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o aditivo de ração animal aprimora a absorção de nutriente.
    8. Método para aprimorar a absorção de nutriente em um animal caracterizado por compreender administrar ao animal a ração animal conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 7.
    9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo que tem atividade de muramidase pode ser dosado em um nível de 100 a 1000 mg de proteína enzimática por kg de ração animal,
    como 200 a 900 mg, 300 a 800 mg, 400 a 700 mg ou 500 a 600 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, ou qualquer combinação desses intervalos.
    10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 9, caracterizado pelo fato de que o animal é um animal monogástrico, por exemplo, porcos Ou suínos (incluindo, mas sem limitação, leitões, porcos em crescimento e porcas gestantes); aves (incluindo, mas sem limitação, ave, peru, pato, codorna, galinha-da-angola, ganso, pombo, pombo jovem, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto); animais de estimação, como gatos e cachorros, peixe (incluindo, mas sem limitação, seriola, pirarucu, barbo, achigã, anchova, bocachico, brema, peixe- gato, cachama, carpa, bagre, catla, chanos, truta-de-lago, acará-grande, bijupirá, bacalhau, tipo de peixe branco, dourada, corvina, moreia, góbio, peixe-dourado, gourami, garoupa, qguapote, linguado, java, labeo, lai, Dbotia, cavala, peixe-leite, carapeba, salamandra, tainha, paco, peixe-mexerica, peixe-rei, perca, pike, pampo-galhudo, rutilis, salmão, sampa, sauger, robalo, dourada, shiner, góbio-dorminhoco, peixe cabeça-de-cobra, pargo, robalo comum, linguado, spinefoot, esturjão, peixe-lua, curimatã, peixe-médico, peixe terror, tilápia, truta, atum, rodovalho, cisco europeia, picão-verde e peixe-branco); e crustáceos (incluindo, mas sem limitação, camarões &e pitus). Em uma modalidade mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, ave, crustáceos e peixe. Em uma modalidade ainda mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, leitão, porco em crescimento, porca gestante, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto.
    11. Uso de uma ração animal, ou aditivo de ração, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por ser para aprimorar a absorção de nutriente.
    12. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo que tem atividade de muramidase pode ser dosado em um nível de 100 a 1000 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, como 200 a 900 mg, 300 a 800 mg, 400 a 700 mg ou 500 a 600 mg de proteína enzimática por kg de ração animal, Ou qualquer combinação desses intervalos.
    13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 12, caracterizado pelo fato de que o animal é um animal monogástrico, por exemplo, porcos ou suínos (incluindo, mas sem limitação, leitões, porcos em crescimento e porcas gestantes); aves (incluindo, mas sem limitação, ave, peru, pato, codorna, galinha-da-angola, ganso, pombo, pombo jovem, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto); animais de estimação, como gatos e cachorros, peixe (incluindo, mas sem limitação, seriola, pirarucu, barbo, achigã, anchova, bocachico, brema, peixe- gato, cachama, carpa, bagre, catla, chanos, truta-de-lago, acará-grande, bijupirá, bacalhau, tipo de peixe branco, dourada, corvina, moreia, góbio, peixe-dourado, gourami, garoupa, guapote, linguado, java, labeo, lai, botia, cavala, peixe-leite, carapeba, salamandra, tainha, paco, peixe-mexerica, peixe-rei, perca, pike, pampo-galhudo, rutilis, salmão, sampa, sauger, robalo, dourada, shiner,
    góbio-dorminhoco, peixe cabeça-de-cobra, pargo, robalo comum, linguado, spinefoot, esturjão, peixe-lua, curimatã, peixe-médico, peixe terror, tilápia, truta, atum, rodovalho, cisco europeia, picão-verde e peixe-branco); e crustáceos (incluindo, mas sem limitação, camarões &e pitus). Em uma modalidade mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, ave, crustáceos e peixe.
    Em uma modalidade ainda mais preferencial, o animal é selecionado a partir do grupo que consiste em suíno, leitão, porco em crescimento, porca gestante, galinha, frango de corte, poedeira, franga e pinto.
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