BR112020011202A2 - tetrassacarídeos secos por pulverização - Google Patents

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Abstract

É revelado um método para a fabricação de um pó seco por pulverização consistindo essencialmente em LNT e/ou LNnT, o pó seco por pulverização, seu uso para a fabricação de composições nutricionais, e composições nutricionais contendo o pó seco por pulverização.

Description

TETRASSACARÍDEOS SECOS POR PULVERIZAÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a preparações de oligossacarídeo de leite humano. Mais especificamente, a presente invenção refere-se a preparações sólidas de oligossacarídeos de leite humano e a métodos para a fabricação das referidas preparações sólidas de oligossacarídeos de leite humano. Antecedentes
[002] O leite materno humano contém uma quantidade substancial de carboidratos. Esses carboidratos incluem monossacarídeos, tais como L-fucose e ácido-N-acetilneuramínico (Neu5Ac). O dissacarídeo lactose também está presente no leite materno humano. Além da lactose, um litro de leite materno contém até 20 g/L de oligossacarídeos, os chamados "oligossacarídeos de leite humano (HMOs)". Os HMOs representam o terceiro constituinte mais abundante do leite materno humano. Presume-se que mais de 150 oligossacarídeos estruturalmente distintos estejam presentes no leite humano. O leite humano geralmente contém entre 10 e 13 HMOs principais, os quais estão presentes em uma concentração entre gramas e várias centenas de miligramas por litro (Thurl et al., (2017), Nutrition Reviews 75 (11) 920-933). Os HMOs incluem HMOs neutros, bem como HMOs ácidos, que contêm uma ou mais frações de ácido siálico. Os HMOs mais proeminentes são mostrados na Tabela 1. A complexidade estrutural e a abundância desses oligossacarídeos são únicas para o leite humano e não foram encontrados no leite de outros mamíferos, como - por exemplo - animais leiteiros domesticados.
[003] Uma vez que os HMOs não são digeridos por seres humanos, o papel fisiológico desses sacarídeos está sob investigação há várias décadas. O efeito prebiótico dos HMOs foi descoberto há mais de 100 anos. Os HMOs são capazes de modular o microbioma intestinal humano ao alimentar bactérias benéficas.
Vários outros efeitos funcionais dos HMOs foram investigados nos últimos anos, especialmente seus efeitos no desenvolvimento de recém-nascidos. Sabe-se que os HMOs atuam como chamariz para reduzir o risco de infecções por patógenos bacterianos e virais que aderem às células humanas por ligação às glicoproteínas da superfície celular. Adicionalmente, vários HMOs possuem um efeito anti- inflamatório e atuam como imunomoduladores. Por isso, foi proposto que os HMOs reduzissem os riscos de desenvolver alergias alimentares. Um efeito positivo dos HMOs sialilados no desenvolvimento cerebral de recém-nascidos é intensamente discutido (revisado em “Prebiotics and Probiotics in Human Milk, Origins and functions of milk-borne oligosaccharides and bacteria”, Academic Press (2017) editors: McGuire M., McGuire M., and Bode L).
[004] Os HMOs proeminentes são as tetraoses lacto-N-tetraose (LNT; Gal (β1,3) GlcNAc (β1,3) Gal (β1,4)Glc) e lacto-N-neotetraose (LNnT, Gal (β1,4) GlcNAc (β1,3) Gal (β1,4) Glc) que diferem na ligação glicosídica da porção terminal de galactose. A lacto-N-tetraose e a lacto-N-neo-tetraose podem ser sintetizadas enzimaticamente por adições consecutivas de resíduos GlcNAc e Gal à lactose. Propõe-se que a Lacto-N-tetraose e a Lacto-N-neo-tetraose sejam substratos para o desenvolvimento da microflora intestinal e do sistema imunológico da mucosa.
[005] Uma primeira etapa para tirar proveito dos efeitos benéficos dos HMOs para bebês alimentados com mamadeira é a adição de HMOs individuais à fórmula infantil. No entanto, a suplementação de fórmulas infantis com uma combinação de HMOs estruturalmente distintos seria melhor, uma vez que uma combinação de HMOs estruturalmente distintos terá efeitos que são mais semelhantes aos efeitos de sua fonte original, o leite humano, e que não podem ser causados por HMOs individuais.
[006] O fornecimento limitado de HMOs individuais para suplementar as fórmulas infantis levou primeiro ao desenvolvimento de sínteses químicas de HMOs, seguidas de abordagens biocatalíticas usando enzimas purificadas. Hoje, a fermentação de células bacterianas geneticamente modificadas é usada para produzir diferentes HMOs em escalas comerciais (WO 2015/150328 A1, WO 2017/043382 A1, WO 2010/070104 A1, WO 2012/097950 A1). Os HMOs que são sintetizados pelas células bacterianas podem ser purificados do caldo de fermentação ou lisado celular para obter preparações substancialmente puras dos HMOs, de modo que possam ser usados em alimentos humanos, especialmente em alimentos infantis.
[007] Durante a sua purificação, a LNT e/ou LNnT está/estão geralmente presentes na forma de uma corrente de processo líquida. Juntamente com a purificação, a concentração de LNT e/ou LNnT na corrente de processo é aumentada. No entanto, uma solução aquosa de LNT e/ou LNnT é muito vulnerável à contaminação bacteriana ou fúngica. Portanto, é preferencial fornecer a LNT e/ou LNnT como um produto seco tendo um baixo teor de água, de tal modo que o crescimento microbiano seja impossível.
[008] Normalmente, um sacarídeo é obtido na forma sólida por cristalização. A cristalização de HMOs individuais foi descrita: para 3-fucosil- lactose (WO 2014/075680 A), para 2’-fucosil-lactose (WO 2011/150939 A), Di- fucosil-lactose (WO 2016/086947 A), lacto-N-tetraose (WO 2017/101953 A), lacto-N-neotetraose (WO 2014/094783 A). A cristalização de HMOs envolve o uso de solventes orgânicos, tais como álcoois, principalmente etanol ou metanol, ou ácidos orgânicos, tais como o ácido acético glacial. No entanto, o uso de solventes orgânicos para cristalizar HMOs como última etapa no processo de obtenção do produto final na forma sólida não é apropriado se os HMOs forem usados como ingredientes alimentares. Além disso, os solventes orgânicos são prejudiciais ao meio ambiente e a qualquer indivíduo que os manipule.
Assim, o uso de solventes orgânicos exige medidas de segurança ocupacional e descarte adequado, o que torna o uso de solventes orgânicos dispendioso. Portanto, a cristalização de HMOs para fornecer os HMOs na forma sólida deve ser considerada uma desvantagem na produção de HMOs em escala industrial.
[009] Portanto, é desejado um processo que forneça HMOs, particularmente LNT e/ou LNnT, na forma sólida, aplicável na produção em escala industrial de HMOs, e que não envolva o uso de um solvente orgânico no final do esquema de purificação para fornecer uma preparação sólida do referido HMO.
[010] O problema é resolvido por um processo para fornecer um pó que consiste essencialmente no HMO purificado, em que o referido método compreende a secagem por pulverização de uma solução aquosa que contém o HMO. Sumário
[011] Em um primeiro aspecto, é fornecido um método de pó seco por pulverização, consistindo essencialmente em um ou mais tetrassacarídeos, preferencialmente LNT e/ou LNnT.
[012] Em um segundo aspecto, um processo para a fabricação de um pó seco por pulverização consistindo essencialmente em um ou mais tetrassacarídeos, preferencialmente LNT e/ou LNnT.
[013] Em um terceiro aspecto, é fornecido o uso do pó seco por pulverização consistindo essencialmente em um ou mais tetrassacarídeos, preferencialmente LNT e/ou LNnT para a fabricação de uma composição nutricional.
[014] Em um quarto aspecto, é fornecida uma composição nutricional contendo o pó seco por pulverização consistindo essencialmente em um ou mais tetrassacarídeos, preferencialmente LNT e/ou LNnT.
Descrição da Figura
[015] A Fig. 1 mostra um gráfico ilustrando os resultados de uma difração de raio X em pó de 3-fucosil-lactose seca por pulverização.
[016] A Fig. 2 mostra um gráfico ilustrando os resultados de uma difração de raio X em pó de lacto-N-tetraose seca por pulverização.
[017] A Fig. 3 mostra um gráfico que ilustra os resultados de uma difração de raios X em pó de 6'-sialil-lactose seca por pulverização.
[018] A Fig. 4 mostra um gráfico que ilustra os resultados de uma difração de raios X em pó de 3'-sialil-lactose seca por pulverização.
[019] A Fig. 5 mostra um gráfico ilustrando os resultados de uma difração de raio X em pó de uma mistura seca por pulverização de 2’-fucosil-lactose e lacto-N-tetraose.
[020] A Fig. 6 mostra um gráfico ilustrando os resultados de uma difração de raio X em pó de uma mistura seca por pulverização de 2’-fucosil-lactose, 3- fucosil-lactose, lacto-N-tetraose, 3’-sialil-lactose, e 6’-sialil-lactose. Descrição Detalhada
[021] De acordo com o primeiro aspecto, é fornecido um pó seco por pulverização consistindo essencialmente em LNT e/ou LNnT produzido por fermentação microbiana.
[022] A LNT e/ou LNnT é produzida por fermentação microbiana como descrito na presente invenção abaixo. O termo "consistindo essencialmente em", conforme usado na presente invenção, significa que o pó seco por pulverização consiste em LNT e/ou LNnT e - opcionalmente - por produtos que são gerados durante a fermentação microbiana para a produção da LNT e/ou LNnT, mas que não poderiam ser removidos de uma corrente de processo obtida da fermentação microbiana. O termo “consistindo essencialmente em” inclui pós secos por pulverização consistindo em pelo menos 80% em peso, pelo menos 85% em peso, pelo menos 90% em peso, pelo menos 93% em peso, pelo menos 95% em peso ou pelo menos 98% em peso de LNT e/ou LNnT.
[023] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a LNT e/ou LNnT está presente no pó seco por pulverização na forma amorfa.
[024] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o pó seco por pulverização contém ≤ 15% em peso de água, preferencialmente ≤ 10% em peso de água, mais preferencialmente ≤ 7% em peso de água, ainda mais preferencialmente ≤ 5% em peso de água.
[025] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o pó seco por pulverização é livre de microrganismos geneticamente modificados e moléculas de ácido nucleico derivadas de microrganismos geneticamente modificados.
[026] De acordo com um segundo aspecto, é fornecido um processo para fabricação de um pó seco por pulverização consistindo essencialmente em LNT e/ou LNnT que foi produzido por fermentação microbiana. O processo compreende as etapas de: a) purificar a LNT e/ou LNnT de um caldo de fermentação; b) fornecer uma solução aquosa contendo a LNT e/ou LNnT da etapa a); e c) submeter a solução da etapa b) a secagem por pulverização.
[027] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, purificar a LNT e/ou LNnT de um caldo de fermentação inclui uma ou mais das etapas de: i. remover as células microbianas do caldo de fermentação para obter uma corrente de processo limpa; ii. submeter a corrente de processo limpa a pelo menos uma ultrafiltração; iii. tratar a corrente de processo limpa pelo menos uma vez com uma resina de troca catiônica e/ou pelo menos uma vez com uma resina de troca aniônica; iv. submeter a corrente de processo limpa a pelo menos uma nanofiltração; v. submeter a corrente de processo limpa a pelo menos uma eletrodiálise;
vi. tratar a corrente de processo limpa pelo menos uma vez com carvão ativado; e/ou vii. submeter a corrente de processo limpa pelo menos uma vez a uma etapa de cristalização e/ou precipitação.
[028] A LNT e/ou LNnT pode ser produzida por fermentação microbiana, em que um microrganismo geneticamente modificado que é capaz de sintetizar um LNT e/ou LNnT é cultivado em um meio de cultura (caldo de fermentação) e sob condições que são permissivas para a síntese de LNT e/ou LNnT por meio do referido microrganismo geneticamente modificado. A purificação de LNT e/ou LNnT produzida por fermentação microbiana compreende a etapa de separar as células microbianas do caldo de fermentação para obter uma corrente de processo limpa, essencialmente livre de células e que contém a LNT e/ou LNnT. Essa etapa é a primeira etapa no processo de purificação dos oligossacarídeos desejados.
[029] Os métodos adequados para separar as células microbianas do caldo de fermentação incluem centrifugação, em que as células microbianas são obtidas como um pellet e o caldo de fermentação como um sobrenadante. Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, as células microbianas são separadas do caldo de fermentação por meio de filtração. Os métodos de filtração adequados para separar as células do caldo de fermentação incluem microfiltração e ultrafiltração.
[030] A microfiltração, como tal, é um processo de filtração física em que um fluido contendo partículas é passado através de uma membrana especial do tamanho de poro para separar as partículas do fluido. O termo "microfiltração" conforme usado na presente invenção refere-se a um processo de filtração física em que as células são separadas do caldo de fermentação.
[031] A ultrafiltração é uma variedade de filtração por membrana e não é fundamentalmente diferente. Na ultrafiltração, forças como gradientes de pressão ou concentração levam a uma separação através de uma membrana semipermeável. Células, sólidos em suspensão e solutos de alto peso molecular são retidos no chamado retentado, enquanto a água e os solutos de baixo peso molecular, como o desejado oligossacarídeo sialilado, atravessam a membrana para o permeado (filtrado).
[032] As membranas de ultrafiltração são definidas por meio do peso molecular de corte (MWCO) da membrana usada. A ultrafiltração é aplicada no modo de fluxo cruzado ou sem saída.
[033] Normalmente, as células microbianas sintetizam a LNT e/ou LNnT de maneira intracelular e o secretam no caldo de fermentação. A LNT e/ou LNnT assim produzido acaba no caldo de fermentação que é então submetido a etapas adicionais do processo para a purificação de LNT e/ou LNnT, como descrito na presente invenção a seguir. Desde que a LNT e/ou LNnT estejam presentes no caldo de fermentação no final da fermentação, o referido caldo de fermentação se torna a corrente de processo limpa após a as células terem sido removidas. Desde que todo ou parte da LNT e/ou LNnT permaneça intracelularmente, as células podem ser removidas do caldo de fermentação e lisadas. Os constituintes insolúveis podem ser removidos do lisado celular, que então se torna a corrente de processo limpa que contém a LNT e/ou LNnT
[034] Não obstante que o processo é usado para a purificação de LNT e/ou LNnT produzidos por fermentação microbiana, referido processo também pode ser empregado para purificar LNT e/ou LNnT produzidos por catálise enzimática in vitro. A LNT e/ou LNnT podem ser purificadas da mistura de reação no final da reação biocatalítica. A referida mistura de reação é submetida ao processo para a purificação como corrente de processo limpa.
[035] A corrente de processo limpa contém LNT e/ou LNnT, bem como subprodutos e impurezas indesejadas, como - por exemplo - monossacarídeos, dissacarídeos, subprodutos de oligossacarídeos indesejados, íons, aminoácidos, polipeptídeos, proteínas e/ou ácidos nucleicos.
[036] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende a etapa de pelo menos um tratamento de troca catiônica para remover compostos carregados positivamente da corrente de processo limpa.
[037] As resinas de troca catiônica adequadas para remover compostos carregados positivamente incluem Lewatit S2568 (H+) (Lanxess AG, Cologne, DE).
[038] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende a etapa de um tratamento de troca aniônica para remover compostos indesejados carregados negativamente, da corrente de processo limpa.
[039] As resinas de troca aniônica adequadas incluem Lewatit S6368 A, Lewatit S4268, Lewatit S5528, Lewatit S6368A (Lanxess AG. Cologne, DE), Dowex AG 1x2 (Mesh 200-400), Dowex 1x8 (Mesh 100-200), Purolite Chromalite CGA100x4 (Purolite GmbH, Ratingen, DE), Dow Amberlite FPA51 (Dow Chemicals, MI, EUA).
[040] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende a etapa de nanofiltração e/ou diafiltração para remover impurezas com um baixo peso molecular, e para concentrar os oligossacarídeos desejados.
[041] A diafiltração envolve a adição de água fresca a uma solução para remover (lavar) os componentes permeáveis à membrana. A diafiltração pode ser usada para separar componentes com base em seu tamanho molecular e carga usando membranas apropriadas, em que uma ou mais espécies são retidas de maneira eficiente e outras espécies são permeáveis à membrana. Particularmente, a diafiltração usando uma membrana de nanofiltração é eficaz para a separação de compostos de baixo peso molecular, como pequenas moléculas e sais. As membranas de nanofiltração possuem, normalmente, um peso molecular de corte na faixa de 150 a 1000 Daltons. A nanofiltração é amplamente utilizada na indústria de laticínios para a concentração e desmineralização do soro de leite.
[042] Membranas adequadas para nanofiltração e/ou diafiltração incluem Dow Filmtec NF270-4040, Trisep 4040-XN45-TSF (Microdyn-Nadir GmbH, Wiesbaden, DE), GE4040F30 e GH4040F50 (GE Water & Process Technologies, Ratingen, DE).
[043] Verificou-se que a diafiltração usando membranas de nanofiltração é eficiente como um pré-tratamento para remover quantidades significativas de contaminantes antes do tratamento por eletrodiálise da solução contendo o oligossacarídeo. O uso de membranas de nanofiltração para concentração e diafiltração durante a purificação de HMOs resulta em menores custos de energia e processamento e melhor qualidade do produto devido à menor exposição térmica, levando a reações de Maillard e reações aldólicas reduzidas.
[044] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende pelo menos uma etapa de eletrodiálise.
[045] A eletrodiálise (ED) combina diálise e eletrólise e pode ser usada para a separação ou concentração de íons em soluções baseadas em sua eletromigração seletiva através de membranas semipermeáveis.
[046] O princípio básico da eletrodiálise consiste em uma célula eletrolítica compreendendo um par de eletrodos submersos em um eletrólito para a condução de íons, conectado a um gerador de corrente contínua. O eletrodo conectado ao polo positivo do gerador de corrente contínua é o ânodo, e o eletrodo conectado ao polo negativo é o cátodo. A solução eletrolítica suporta, então, o fluxo de corrente que resulta do movimento de íons negativos e positivos em direção ao ânodo e ao cátodo, respectivamente. As membranas usadas para eletrodiálise são essencialmente folhas de resinas de troca iônica porosas com grupos de carga negativa ou positiva e, portanto, são descritas como membranas catiônicas ou aniônicas, respectivamente. Normalmente, as membranas de troca iônica são feitas de poliestireno contendo um grupo funcional adequado (como ácido sulfônico para membranas catiônicas ou um grupo de amônio quaternário para membranas aniônicas) reticulado com divinilbenzeno. O eletrólito pode ser, por exemplo, cloreto de sódio, acetato de sódio, propionato de sódio ou ácido sulfâmico. A pilha de eletrodiálise é, então, montada de modo que as membranas aniônicas e catiônicas sejam paralelas como em um filtro prensa entre dois blocos de eletrodos, de modo que o fluxo que sofre depleção de íons seja bem separado da corrente que sofre enriquecimento de íons (as duas soluções também são referidas como diluído (que sofre depleção de íons) e concentrado (que sofre enriquecimento de íons). O núcleo do processo de eletrodiálise é a pilha de membranas, que consiste em várias membranas de troca aniônica e membranas de troca catiônica separadas por espaçadores, instaladas entre dois eletrodos. Ao aplicar uma corrente elétrica contínua, os ânions e cátions migrarão através das membranas em direção aos eletrodos.
[047] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende adicionalmente uma etapa de cromatografia contínua como cromatografia de leito móvel simulado (SMB).
[048] A cromatografia de leito móvel simulado (SMB) originada nas indústrias petroquímica e mineral. Atualmente, a cromatografia SMB é usada pela indústria farmacêutica para isolar enantiômeros de misturas racêmicas. A cromatografia SMB em larga escala já foi usada para separar o monossacarídeo frutose de soluções de frutose-glicose e para separar o dissacarídeo sacarose de beterraba sacarina ou xaropes de cana-de-açúcar.
[049] Os processos SMB usados para separar sacarídeos usam, por exemplo, resinas de poliestireno reticulado, carregadas com cálcio, resinas de ânions na forma de bissulfito (Bechthold M., et al., Chemie Ingenieur Technik, 2010, 82, 65-75), ou gel poliestirênico, resina catiônica de ácido forte na forma de hidrogênio (Purolite PCR833H) (Purolite, Bala Cynwyd, EUA).
[050] Dado o modo contínuo de operação, a reciclagem da fase móvel e também o potencial para o uso de grandes tamanhos de coluna, os sistemas SMB podem, em princípio, ser dimensionados para alcançar volumes de produção de centenas de toneladas.
[051] A etapa do processo de cromatografia de leito móvel estimulado é vantajosa na medida em que essa etapa do processo permite a remoção adicional de oligossacarídeos que são intimamente relacionados, de maneira estrutural, ao oligossacarídeo desejado.
[052] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende um tratamento da corrente de processo com carvão ativado para remover substâncias contaminantes, como corantes da corrente de processo.
[053] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende pelo menos uma etapa de cristalização ou precipitação de LNT e/ou LNnT da corrente de processo limpa. A cristalização ou precipitação de LNT e/ou LNnT da corrente de processo pode ser desempenhada ao adicionar uma quantidade adequada de um solvente orgânico que é miscível em água à corrente de processo contendo LNT e/ou LNnT. O solvente orgânico pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em álcoois -C1 a -C6 e ácidos de carbono -C1 a -C4.
[054] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa do processo para a purificação da LNT e/ou LNnT compreende uma etapa de filtração estéril e/ou remoção de endotoxina, preferencialmente por filtração da corrente de processo através de um filtro de 3 kDa ou filtro de 6 kDa.
[055] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o processo para a purificação de LNT e/ou LNnT compreende uma etapa de aumentar a concentração de LNT e/ou LNnT na corrente de processo. A concentração de LNT e/ou LNnT na corrente de processo pode ser aumentada ao submeter a corrente de processo a evaporação a vácuo, osmose reversa ou nanofiltração (por exemplo, nanofiltração com uma membrana de nanofiltração com um limite de exclusão de tamanho de ≤ 20 Å). Alternativamente, LNT cristalizado ou precipitado e/ou LNnT é dissolvido em água, para obter uma solução da LNT e/ou LNnT possuindo a concentração desejada de LNT e/ou LNnT.
[056] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a corrente de processo resultante é uma solução aquosa que contém LNT e/ou LNnT em uma concentração de ≥ 20 g/L, ≥ 25 g/L, ≥ 30 g/L, ≥ 40 g/L, ≥ 60 g/L, ≥ 100 g/L, ≥ 200 g/L ou mesmo ≥ 300 g/L.
[057] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a solução aquosa contém a LNT e/ou LNnT com uma pureza de pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 93%, pelo menos 95% ou pelo menos 98% em relação ao peso de matéria seca/solutos dentro da solução.
[058] O concentrado obtido contendo LNT e/ou LNnT purificado pode ser armazenado sob condições apropriadas.
[059] O processo para a purificação de LNT e/ou LNnT é econômico e fácil de expandir, tornando-o adequado como base para um processo de fabricação em escala de múltiplas toneladas.
[060] O processo para a purificação de LNT e/ou LNnT também é vantajoso, pois a solução aquosa é livre de microrganismos geneticamente modificados e moléculas de ácido nucleico derivadas de microrganismos geneticamente modificados. Além disso, a solução aquosa está livre de proteínas. A remoção total de proteínas elimina o risco de causar alergias a um consumidor em potencial.
[061] O processo para a fabricação do pó seco por pulverização compreende a etapa de fornecer uma solução aquosa contendo a LNT e/ou LNnT.
[062] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a solução aquosa contém a LNT e/ou LNnT em uma quantidade de pelo menos 20% (p/v), 30% (p/v), 35% (p/v) e até 45% (p/v), 50% (p/v), 60% (p/v).
[063] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a solução aquosa contém a LNT e/ou LNnT com uma pureza de pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 93%, pelo menos 95% ou pelo menos 98% em relação ao peso de matéria seca/solutos dentro da solução.
[064] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a solução aquosa não contém microrganismos geneticamente modificados, moléculas de ácido nucleico derivadas de microrganismos geneticamente modificados e proteínas.
[065] No processo de fabricação do pó seco por pulverização, a solução aquosa contendo LNT e/ou LNnT é submetida a secagem por pulverização.
[066] A secagem por pulverização é um método para obter pós secos, em que a solução contendo a substância de interesse (isto é, LNT e/ou LNnT) é primeiro pulverizada em gotículas que são rapidamente secas por ar quente. A secagem por pulverização é muito rápida e a exposição da substância a ser seca a altas temperaturas é bastante curta.
[067] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a solução aquosa contendo a LNT e/ou LNnT que foi purificado de um caldo de fermentação ou corrente de processo é seca por pulverização a uma temperatura de bocal de pelo menos 110°C, preferencialmente pelo menos 120°C, mais preferencialmente pelo menos 125°C, e menos que 150°C, preferencialmente menos que 140°C e mais preferencialmente menos que 135°C.
[068] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a solução aquosa contendo a LNT e/ou LNnT que foi purificada de um caldo de fermentação ou fluxo de processo é seca por pulverização a uma temperatura de saída de pelo menos 60° C, preferencialmente pelo menos 65°C e menos que 80°C, preferencialmente menos que 70°C. Em uma modalidade particularmente preferencial, a solução aquosa contendo a LNT e/ou LNnT é seca por pulverização a uma temperatura de bocal de cerca de 68°C a cerca de 70°C.
[069] Entende-se que LNT e LNnT podem ser purificados e secos por pulverização individualmente, e que os pós secos por pulverização resultantes podem ser misturados em qualquer razão desejada. Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, soluções aquosas separadas contendo LNT ou LNnT, respectivamente, podem ser misturadas em qualquer razão desejada, e a solução aquosa resultante contendo LNT e LNnT em uma razão desejada pode ser submetida a secagem por pulverização. A razão de LNT e LNnT no pó seco por pulverização resultante corresponde à proporção de LNT e LNnT na solução aquosa.
[070] A secagem por pulverização da solução aquosa contendo 3-fucosil- latose fornece um pó de baixa higroscopia, em que LNT e/ou LNnT está presente na forma amorfa, e em que o tamanho das partículas é homogêneo.
[071] De acordo com o terceiro aspecto, é fornecido o uso do pó seco por pulverização contendo LNT e/ou LNnT que foi purificado de uma corrente de processo para a fabricação de uma composição nutricional. O pó seco por pulverização consistindo essencialmente em LNT e/ou LNnT é adequado para consumos humanos e pode, portanto, ser incluído em preparações para consumo humano, tais como formulações medicinais, fórmulas infantis, bebidas lácteas ou suplementos dietéticos.
[072] De acordo com o quarto aspecto, são fornecidas composições nutricionais que contêm um pó seco por pulverização conforme descrito no primeiro aspecto, conforme fabricado de acordo com o segundo aspecto.
[073] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a composição nutricional contém pelo menos um HMO adicional que não é LNT e/ou LNnT. O pelo menos um HMO adicional pode ser um HMO neutro, selecionado preferencialmente a partir do grupo consistindo em 2’-fucosil-lactose (2’-FL), 3- fucosil-lactose (3-FL), lacto-N-tetraose (LNT), lacto-N-neotetraose (LNnT) e lacto- N-fucopentaose I (LNFPI). Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o pelo menos um HMO adicional pode ser um HMO sialilado, preferencialmente selecionado a partir do grupo consistindo em 3'-sialil-lactose (3'-SL), 6'-sialil- lactose (6'-SL ), sialil-lacto-N-tetraose (LST)-a, LST-b, LST-c e disialil-lacto-N- tetraose (DSLNT). Composto Proporção em mistura Concentração final na (porcentagem em peso) fórmula infantil (g/L) 2’-FL 34 2,5 3-FL 11 0,8 LNT 20 1,5 LNnT 2 0,15 LNFPI 13 1,0 3’-SL 3 02 6’-SL 4 0,3
Neu5Ac 8 0,6 L-Fucose 5 0,4 Total 100 7,45 Tabela 1: Composição de uma mistura exemplar contendo adequado como suplemento para fórmulas infantis.
[074] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a composição nutricional inclui uma mistura consistindo essencialmente em Neu5Ac, 2’-FL, 3- FL, LNT, LNnT, LNFPI, 3’-SL, 6’-SL, ácido siálico e L-fucose. Uma composição nutricional incluindo quantidades preferenciais de cada um dos referidos compostos é fornecida na Tabela 1.
[075] A composição de acordo com a segunda coluna na Tabela 1 é particularmente vantajosa para suplementar a fórmula infantil, de modo que a fórmula infantil final para consumo direto possa conter os compostos da mistura em concentrações conforme especificado na terceira coluna da Tabela 1.
[076] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a composição nutricional contém um ou mais ingredientes adicionais. O referido um ou mais ingredientes adicionais são selecionados do grupo consistindo em óleo, gordura e ácidos graxos (tais como azeite de oliva, óleo de girassol, óleo de coco, óleo de noz, óleo de colza, óleo de palma, óleo de linhaça, óleo de peixe, ácido linolênico, óleo de soja, etc.), carboidratos (como glucose, frutose, lactose, maltodextrina, amido, sacarose, inositol, etc.), proteínas (de leite desnatado, de soro de leite, de caseína (derivada de qualquer animal leiteiro domesticado), ou soja), vitaminas (A, B1, B2, B5, B6, B12, C, D, E, K, biotina, ácido fólico, niacina, colina) minerais e oligoelementos (sódio, potássio, cloreto, cálcio, fósforo, magnésio ferro, zinco, manganês, fluoreto, selênio, iodo, cobre).
[077] Em uma modalidade preferencial, a composição nutricional contendo os oligossacarídeos do leite humano secos por pulverização ou a mistura de oligossacarídeos do leite humano ou a mistura de oligossacarídeos do leite humano com monossacarídeos funcionais ou a mistura de oligossacarídeos do leite humano com outras fibras é uma fórmula infantil que atende aos requisitos de composição estabelecidos no Regulamento (EU) 2016/127 e/ou no Código Federal de Regulamentos (EUA), título 21 107.100 (especificações de nutrientes). As composições representativas das fórmulas infantis são especificadas nas Tabelas 2 e 3. Fórmula infantil: Leite desnatado Óleos vegetais (óleo de palma, óleo de colza, óleo de girassol) Oligossacarídeos de leite humano 3-fucosil-lactose Leite em pó desnatado Óleo de Mortierella alpine Óleo de peixe Carbonato de cálcio Cloreto de potássio Vitamina C Cloreto de sódio Vitamina E Acetato de Ferro Sulfato de zinco Niacina D-pantotenato de cálcio Sulfato de cobre Vitamina A Vitamina B1 Vitamina B6 Sulfato de magnésio Iodato de potássio Ácido fólico Vitamina K Selenito de sódio Vitamina D Tabela 2: Componentes de uma fórmula infantil exemplar.
por 100 g de pó por 100 mL de fórmula infantil Energia kJ 2094-2145 283 kcal 500-512 67-68 Gorduras da mesma: g 24,2-26,2 3,3-3,5 ácidos graxos saturados g 8,7-9,4 1,2-1,3 ácidos graxos monoinsaturados g 10,4 1,4 ácidos graxos poliinsaturados g 5,5-5,9 0,7-0,8 Carboidratos da mesma: g 56-58 7,4-7,9
Açúcares g 44-56 6-7,4 da mesma: Lactose g 44-56 6-7,4 Neu5Ac mg 440 60 L-fucose mg 300 40 HMOs g 4,22-4,81 0,57-0,65 da mesma 2'-FL g 1,85-2,22 0,25-0,30 3-FL mg 555,56-592,6 75-80 LNT g 1,11 0,15 LNnT mg 0-111,11 0-15 LNPF-I mg 0-740,74 0-100 3'-SL mg 148,15-170,37 20-23 6'-SL mg 207,4-222,22 28-30 Proteína g 11,11-11,85 1,5-1,6 Sal g 0,47-0,59 0,06-0,08
Vitaminas Vitamina A µg 357-358 47,3-48,2 Vitamina D µg 7,8 1,05 Vitamina E mg 8,15 1,1 Vitamina K µg 43,7-44,4 5,9-6,0 Vitamina C mg 115-118 15-16 Vitamina B1 mg 0,51-0,60 0,068-0,079 Vitamina B2 mg 1,3-1,7 0,18-0,23 Niacina mg 3,63 0,49 Vitamina B6 µg 526-600 71-81 Ácido fólico µg 160-164 21,6-21,7 Vitamina B12 µg 1,7-1,9 0,23-0,25 Biotina µg 22-30 3,0-3,9 Ácido pantotênico mg 4,6-5,4 0,62-0,72 Minerais Sódio mg 187-236 25,3-31,2 Potássio mg 673-675 88,8-91,2 Cloreto mg 327-333 43,1-44,9 Cálcio mg 460-504 62,1-66,5 Fósforo mg 335-352 45,2-46,5 Magnésio mg 49,3-56,3 6.66-7.43 Ferro mg 4,15 0,56 por 100 g de pó por 100 mL de fórmula infantil Zinco mg 3,7-3,8 0,49-0,51 Cobre µg 274 37
Manganês µg 96,3 13 Fluoreto µg 30,4-32,6 4,1-4,4 Selênio µg 11,1-12,3 1,5-1,6 Iodo µg 101,5-103,7 13,7-14 Tabela 3: Composição de uma fórmula infantil exemplar. A concentração final é baseada em uma preparação de 13,5 g do pó em 90 mL de água.
[078] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a composição nutricional também contém microrganismos, preferencialmente microrganismos probióticos. Para aplicações alimentares infantis, os microrganismos preferenciais são derivados do ou podem ser encontrados no microbioma de um humano saudável. Preferencialmente, mas sem limitações, os microrganismos são selecionados a partir dos gêneros Bifidobacterium, Lactobacillus, Enterococcus, Streptococcus, Staphylococcus, Peptostreptococos, Leuconostoc, Clostridium, Eubacterium, Veilonella, Fusobacterium, Bacterioides, Prevotella, Escherichia, Propionibacterium e Saccharomyces. Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, o microrganismo é selecionado a partir do grupo que consiste em Bifidobacterium adolescentis, B. animalis, B. bifidum, B. breve, B. infantis, B. lactis, B. longum; Enterococcus faecium; Escherichia coli, Klyveromyces marxianus; Lactobacillus acidophilus, L. bulgaricus, L. casei, L. crispatus, L. fermentum, L. gasseri, L. helveticus, L. johnsonii, L. paracasei, L. plantarum, L. reuteri, L. rhamnosus, L. salivarius, L. sakei, Lactococcus lactis (incluindo, mas não limitado as subespécies lactis, cremoris e diacetilactis); Leuconostoc mesenteroides (incluindo, mas não limitado as subespécies mesenteroides); Pedicoccus acidilactici, P. pentosaceus; Propionibacterium acidipropionici, P. freudenreichii ssp. shermanii; Staphylococcus carnosus; e Streptococcus thermophilus.
[079] Adicionalmente à combinação de organismos vivos, a composição nutricional também pode incluir culturas de células mortas. No campo dos probióticos, às vezes são usadas culturas de células mortas (por exemplo, bactérias tindalizadas). Essas culturas mortas podem fornecer proteínas, peptídeos, oligossacarídeos, fragmentos da parede externa da célula e produtos naturais, levando à estimulação a curto prazo do sistema imunológico.
[080] A inclusão de microrganismos probióticos na composição nutricional, especialmente na presença de HMOs, é particularmente vantajosa, pois também promove o estabelecimento de um microbioma intestinal saudável.
[081] Em uma modalidade adicional e/ou alternativa, a composição nutricional também inclui prebióticos, como galactooligossacarídeos (GOS), frutooligossacarídeos (FOS), inulina ou combinações dos mesmos.
[082] A composição nutricional está presente em forma sólida incluindo, mas não limitada a, pós, grânulos, flocos, pellets ou combinações dos mesmos.
[083] Em uma modalidade adicional, a composição nutricional é selecionada a partir do grupo consistindo em formulações medicinais, fórmulas infantis, bebidas lácteas e suplementos dietéticos.
[084] Como formulação medicinal, a composição nutricional pode ser usada para melhorar o desempenho cognitivo, especialmente para melhorar a atenção, aprendizado e/ou memória.
[085] A presente invenção será descrita no que diz respeito às modalidades particulares e com referência aos desenhos, mas a invenção não é limitada aos mesmos, mas somente às reivindicações. Além disso, os termos primeiro, segundo e similares na descrição e nas reivindicações são utilizados para distinguir entre elementos semelhantes e não necessariamente para descrever uma sequência, seja temporal, espacial, em classificação ou em qualquer outra maneira. Deve-se entender que os termos assim utilizados são intercambiáveis sob circunstâncias apropriadas e que as modalidades da invenção descrita na presente invenção são capazes de operar em outras sequências do que descrito ou ilustrado na presente invenção.
[086] Deve-se notar que o termo “compreendendo”, como usado nas reivindicações, não deve ser interpretado como sendo restrito aos meios listados, por conseguinte; este não exclui outros elementos ou etapas. Deve-se, portanto, ser interpretado como especificando a presença das características, números inteiros, etapas ou componentes declarados, como referido, mas não impede a presença ou adição de uma ou mais outras características, números inteiros, etapas ou componentes ou grupos do mesmo. Assim, o escopo da expressão "um dispositivo compreendendo os meios A e B" não deve ser limitado aos dispositivos que consistem apenas em componentes A e B. Isso significa que, com relação à presente invenção, os únicos componentes relevantes do dispositivo são A e B.
[087] A referência ao longo deste relatório descritivo a “uma modalidade” ou “uma modalidade” significa que um traço, estrutura ou característica específicos descritos em conexão com a modalidade estão incluídos em pelo menos uma modalidade da presente invenção. Assim, as aparições das frases “em uma modalidade” ou “em uma modalidade” em vários lugares ao longo deste relatório descritivo não se referem, necessariamente, sempre à mesma modalidade. Além disso, as características, estruturas ou traços específicos podem ser combinados de qualquer forma adequada, como seria evidente para uma pessoa com habilidade comum no assunto desta divulgação, em uma ou mais modalidades.
[088] Da mesma forma, deve-se apreciar que, na descrição de modalidades representativas da invenção, várias características da invenção às vezes são agrupadas em uma única modalidade, figura ou descrição da mesma com a finalidade de racionalizar a invenção e facilitar a compreensão de um ou mais dos vários aspectos inventivos. Este método de invenção não deve ser interpretado como refletindo uma intenção de que a invenção reivindicada requer mais características do que são expressamente listadas em cada reivindicação. Em vez disso, como as seguintes reivindicações refletem, os aspectos inventivos podem exigir menos do que todas as características de qualquer uma das modalidades reveladas. Assim, as reivindicações que seguem a descrição detalhada são por meio desta incorporadas expressamente nesta descrição detalhada, com cada reivindicação por conta própria como uma modalidade separada desta invenção.
[089] Além disso, enquanto algumas modalidades descritas na presente invenção incluem algumas, mas não outras características incluídas em outras modalidades, combinações de características de diferentes modalidades devem estar dentro do escopo da invenção e formar diferentes modalidades, como seria compreendido por aqueles técnicos no assunto. Por exemplo, nas seguintes reivindicações, qualquer uma das modalidades reivindicadas pode ser usada em qualquer combinação.
[090] Além disso, algumas das modalidades são descritas na presente invenção como um método ou combinação de elementos de um método que pode ser implementado por um processador de um sistema de computador ou por outros meios de realizar a função. Assim, um processador com as instruções necessárias para a realização de tal método ou elemento de um método forma um meio para a realização do método ou elemento de um método. Além disso, um elemento descrito na presente invenção de uma modalidade do aparelho é um exemplo de um meio para a realização da função desempenhada pelo elemento com a finalidade de realizar a invenção.
[091] Na descrição e desenhos providos na presente invenção, numerosos detalhes específicos são estabelecidos. No entanto, deve-se entender que as modalidades da invenção podem ser praticadas sem esses detalhes específicos. Em outros casos, métodos, estruturas e técnicas bem conhecidos não foram mostrados em detalhes a fim de facilitar a compreensão do relatório descritivo e desenhos.
[092] A invenção será descrita agora por uma descrição detalhada de diversas modalidades da invenção. É claro que outras modalidades da invenção podem ser configuradas de acordo com o conhecimento de técnicos no assunto sem se afastar do verdadeiro espírito ou mérito técnico da invenção, a invenção sendo limitada apenas pelos termos das reivindicações anexas. Exemplo 1: Purificação de 2’-fucosil-lactose do caldo de fermentação
[093] A produção de 2’-fucosil-lactose por fermentação usando uma cepa de E. coli modificada geneticamente foi realizada como descrito no Pedido de patente europeu Nº. 16 196 486.1. A 2’-fucosil-lactose foi purificada do caldo de fermentação por filtração, cromatografia de troca iônica, nanofiltração, diafiltração ou eletrodiálise, e tratamento com carvão, conforme descrito no WO 2015/106943 A1. A solução resultante contendo 2’-fucosil-lactose foi submetida a secagem por pulverização para obter um produto sólido estável. Exemplo 2: Purificação de 3-fucosil-lactose do caldo de fermentação
[094] 3-Fucosil-lactose foi produzida por fermentação usando uma cepa de E. coli modificada geneticamente como descrito no Pedido de patente europeu Nº. 16 196 486.1.
[095] As células foram separadas do meio de cultura por ultrafiltração (corte de 0,05 µm) (tecnologia de membrana CUT, Erkrath, Alemanha) seguida por um filtro de fluxo cruzado com um MWCO de 150 kDa (Microdyn-Nadir, Wiesbaden, Alemanha). O meio de fermentação sem células contendo cerca de 30 g/L de 3-fucosil-lactose foi passado sobre um forte trocador de íons catiônicos (Lewatit S 2568 (Lanxess, Colônia, Alemanha) em H+ para remover contaminantes carregados positivos. Em seguida, a solução foi ajustada para pH 7,0 usando hidróxido de sódio e aplicada a um trocador de íons aniônicos (Lewatit S6368 A, Lanxess) na forma de cloreto. Ambos os trocadores de íons foram utilizados em volume de 200 L. Após uma segunda filtração (150 kDa; Microdyn-Nadir, Wiesbaden, Alemanha), a solução livre de partículas foi concentrada 5 vezes por nanofiltração usando uma membrana Filmtech NF270 (Dow, Midland, EUA) e 2,5 vezes por evaporação a vácuo. A solução concentrada e uma condutividade de cerca de 15 mS cm ⁻¹ foi filtrada (10 kDa; Microdyn- Nadir, Wiesbaden, Alemanha), clarificada por carvão vegetal ativado (CAS: 7440- 44-0, Carl Roth, Karlsruhe, Alemanha) e deionizada por eletrodiálise. Para isso, foi utilizado um aparelho de eletrodiálise PC-Cell BED 1-3 (PC-Cell, Heusweiler, Alemanha) com uma pilha de membranas PC-Cell E200 contendo as seguintes membranas: membrana de troca catiônica CEM: PC SK e membrana de troca aniônica AEM: PCAcid60. No processo foi utilizado ácido sulfâmico 0,25 M como eletrólito. Para redução da coloração acastanhada causada pelas reações de Maillard e produtos aldólicos originários do processo de fermentação, foi realizada uma segunda rodada de cromatografia de troca iônica usando o mesmo material de troca iônica mencionado anteriormente nas formas Na + e Cl⁻, porém em um volume de 50 L. Após concentrar a solução de açúcar por evaporação, novamente a condutividade foi reduzida de 4 mS cm⁻¹ para 0,4 mS cm⁻¹ ou menos por eletrodiálise usando o PC-Cell BED 1-3 mencionado anteriormente. Para descoloração adicional, a solução foi misturada com carvão ativado (CAS: 7440-44-0, Carl Roth, Karlsruhe, Alemanha) e uma solução quase incolor foi obtida por filtração. Exemplo 3: Purificação de lacto-N-tetraose do caldo de fermentação
[096] A produção fermentativa de Lacto-N-tetraose foi conduzida usando uma cepa ∆lacZ geneticamente modificada de E. coli BL21 (DE3), com genes genomicamente integrados essenciais para a síntese in vivo de Lacto-N- tetraose., a saber, uma N-acetilglucosamina glucosiltransferase (lgtA de Neisseria meningitidis MC58), uma β-1,3-galactosil-transferase (wbdO de Salmonella enterica. subsp. salamae serovar Greenside), lacY de E. coli K12, a UDP-glucose-4-epimerase galE ， e a UTP-glicose-1-fosfato uridiltransferase galU ， ambos de E. coli K12. Adicionalmente, o gene galS que codifica uma sintase de glucosamina-6-fosfato foi superexpressado. Para a produção fermentativa de Lacto-N-tetraose a cepa foi cultivada em um meio de sais minerais definido compreendendo 2% de glicose como fonte de carbono. Foi adicionado antiespumante quando necessário. O pH foi controlado usando uma solução de amônia de 25%. Lactose foi adicionada passo a passo a uma concentração final de 15 mM de um estoque de lactose de 216 g L⁻¹, a concentração de lactose no meio de cultura foi mantida constante ao longo do processo de fermentação. A lactose residual e a Lacto-N-triose II, acumuladas durante o processo como subprodutos, foram hidrolisadas por uma segunda cepa de E. coli que foi adicionada ao fermentador. Esta cepa expressou uma beta-lactamase funcional, uma beta-N-acetilhexo-saminidase (bbhl de Bifidobacterium bifidum JCM1254) e um operon gal funcional para a degradação de monossacarídeos (EP 2 845 905 A).
[097] As células foram separadas do caldo de fermentação, e o fluido contendo a lacto-N-tetraose foi purificado a uma pureza de 75-80%, determinada por balanço de massa, de acordo com o procedimento descrito no exemplo 2.
[098] Os subprodutos contaminantes de carboidratos resultantes de degradação e metabolização enzimática ineficiente foram removidos por cromatografia usando uma cromatografia de leito móvel estimulado (SMB), de acordo com o WO2015/049331. Alternativamente, a lacto-N-tetraose foi purificada por cristalização com isopropanol. Para a cristalização, a solução contendo lacto-N-tetraose foi concentrada por evaporação até uma concentração de 20% e seca por pulverização. Utilizando um secador por pulverização NUBILOSA LTC-GMP (NUBILOSA, Konstanz, Alemanha), a solução foi passada sob fluxo de nitrogênio através dos bocais dos secadores por pulverização com uma temperatura de entrada de 130°C, enquanto o fluxo de produto foi controlado para manter a temperatura de saída de 67°C a 68°C.
[099] O material sólido foi adicionado a uma mistura de isopropanol e água (3:1 (vol/vol)) em uma proporção de 1 kg de pó em 12 L de isopropanol/água. A suspensão foi agitada vigorosamente, em seguida a lacto-N-tetraose insolúvel foi filtrada e seca a 40°C. Começando com um material puro de 73-89%, a Lacto- N-tetraose cristalizada foi purificada para cerca de 95%, com uma recuperação de 85%. O açúcar foi dissolvido em água até uma concentração de 25% e passado sequencialmente através de um filtro de 6 kDa (módulo de ultrafiltração Pall Microza SIP-2013, Pall Corporation, Dreieich, Alemanha) e um filtro estéril de 0,2 µm. O material sólido foi obtido por secagem por pulverização do material estéril sob as condições descritas acima. Exemplo 4: Purificação de 3’- e 6’-sialil-lactose do caldo de fermentação
[100] Para a produção de 3’-sialil-lactose e 6’-sialil-lactose, foram usadas cepas de E. coli BL21 (DE3) ΔlacZ recombinantes. As cepas tinham modificações genéticas comuns: expressão cromossômica e constitutiva da glucosamina-6- fosfato sintase GlmS de E. coli, a N-acetilglucosamina2-epimerase Slr1975 de Synechocystis sp., a glucosamina 6-fosfato N-acetiltransferase Gna1 de Saccharomyces cerevisiae, a fosfoenolpiruvato sintase PpsA de E. coli, e a N- acetilneuraminato sintase NeuB, e a CMP-ácido siálico sintetase NeuA de Campylobacter jejuni. Adicionalmente, os genes que codificam a permease de lactose LacY de E. coli, cscB (permease de sacarose), cscK (fructoquinase), cscA
(hidrolase de sacarose) e cscR (regulador de transcrição) E. coliW e um operon funcional gal-, constituído pelos genes galE (UDP-glicose-4-epimerase), galT (galactose-1-fosfato uridililtransferase), galK(galactoquinase) e galM (galactose- 1-epimerase) de E.coli K12 foram integrados no genoma da cepa BL21 e expressos constitutivamente.
[101] A cepa que sintetiza 3'-sialil-lactose abriga o gene da alfa-2,3-sialil- transferase de Vibrio sp. JT-FAJ-16, enquanto a cepa produtora de 6'-sialil- lactose contém a alfa-2,6-sialil-transferase plsT6 de Photobacterium leiognathi JT-SHIZ-119.
[102] As cepas que produzem sialil-lactose foram cultivadas em um meio de sais minerais definido contendo 2% de sacarose como fonte de carbono. O alimento para sacarose (500 g L⁻¹), alimentado na fase de lote alimentado, foi suplementado com 8 mM de MgSO₄, 0,1 mM de CaCl₂, oligoelementos e 5 g L⁻¹ de NH₄Cl.
[103] Para a formação de sialil-lactose, foi empregada uma alimentação de lactose de 216 gl⁻¹. O pH foi controlado ao usar solução de amônia (25% v/v). A fermentação em lote alimentado foi conduzida a 30°C sob aeração e agitação constante. A fim de remover a lactose residual no final da fermentação, foi adicionada β-galactosidase ao vaso de fermentação. Os monossacarídeos resultantes foram metabolizados por meio da cepa de produção.
[104] O líquido livre de células foi então desionizado por cromatografia de troca iônica. Primeiro, os contaminantes catiônicos foram removidos em um trocador catiônico forte em um volume de 200 L (Lewatit S 2568 (Lanxess, Colônia, Alemanha)) em forma de H+. Ao usar NaOH, o pH da solução obtida foi definido para 7,0. Em uma segunda etapa, os íons aniônicos e os corantes indesejados foram removidos da solução utilizando o trocador aniônico forte (Lewatit S 6368 S (Lanxess, Colónia, Alemanha)) na forma de cloreto. O trocador de íons tinha um volume de leito de 200 L. Usando uma segunda etapa de filtração no filtro de fluxo cruzado (corte de 150 kDa) (Microdyn-Nadir, Wiesbaden, Alemanha), foram removidos precipitados provenientes da acidificação da solução. Para concentração do açúcar, a solução foi nanofiltrada em uma Dow FILMTECH NF270-4040 (Inaqua, Mönchengladbach, Alemanha) ou, alternativamente, em uma membrana Trisep 4040-XN45-TSF (corte de 0,5 kDa) (Microdyn-Nadir, Wiesbaden Alemanha). Usando essa última, o monossacarídeo N-acetilglucosamina, proveniente do processo de fermentação e contaminando a solução de sialil-lactose, foi separado do produto. A solução concentrada de sialil-lactose foi então tratada com carvão vegetal ativado (CAS: 7440-44-0, Carl Roth, Karlsruhe, Alemanha) para remover corantes como produtos de reação de Maillard e produtos de reação adólica. A fim de separar a sialil-lactose dos subprodutos provenientes do processo de fermentação, como ácido siálico e N- acetilglucosmina, a solução foi filtrada com uma membrana de corte GE4040F30 de 1 kDa (GE water & process technologies, Ratingen, Alemanha), e diafiltrada para a uma condutividade de 0,6 a 0,8 mS cm⁻¹. A solução diluída foi concentrada num evaporador rotativo até uma concentração de cerca de 300 g/L. Numa separação cromatográfica final, outros açúcares contaminantes, como a disialil- lactose, foram removidos. Para isso, a solução concentrada foi aplicada a uma resina de troca iônica ânionica fraca na forma de acetato (Amberlite FPA51, Dow Chemical, Michigan, EUA). Enquanto a sialil-lactose raramente se liga à resina, a disialil-lactose é adsorvida. Assim, a sialil-lactose é eluída com 10 mM de acetato de amônio, enquanto a disialil-lactose é eluída com 1 M de acetato de amônio. Para a remoção do acetato de amônio, a sialil-lactose foi precipitada com um excesso de 10 vezes de etanol. A fração sólida foi filtrada e seca.
[105] O produto foi finalizado ao passar uma solução com 20% de sialil- lactose sequencialmente através de um filtro de 6 kDa (módulo de ultrafiltração
Pall Microza SIP-2013, Pall Corporation, Dreieich, Alemanha) e um filtro estéril de 0,2 µm.
[106] Uma parte da solução foi seca por pulverização usando um secador por pulverização Büchi (Mini Spray Dryer B-290 Büchi) (Büchi, Essen, Alemanha), aplicando os seguintes parâmetros: Temperatura de entrada: 130°C, temperatura de saída 67°C-71°C, fluxo de gás 670 Uh, aspirador 100%.
[107] A 6’-sialil-lactose seca por pulverização tinha uma pureza de 91%, enquanto o material de 3’-sialil-lactose tinha uma pureza de 93%. Exemplo 5: Preparações de misturas de HMO
[108] As misturas de HMOs foram preparadas de produtos sólidos. Para isso, os HMOs individuais foram secos por pulverização e o pó foi misturado. A mistura de HMO I continha 2’-fucosil-lactose e lacto-N-tetraose em uma razão de 70% a 30%; a mistura de HMO II continha 2’-fucosil-lactose (52%), 3-fucosil- lactose (13%), lacto-N-tetraose (26%), 3’-sialil-lactose (4%) e 6’-sialil-lactose (5%). Os pós misturados foram dissolvidos em água a uma solução de 20% de açúcar, e secos por pulverização novamente usando o secador por pulverização Büchi, como descrito no exemplo 4. Exemplo 6: Caracterização de oligossacarídeos de leite humano secos por pulverização
6.1 Calorimetria de varredura diferencial (DSC)
[109] Usando calorimetria de varredura diferencial (DSC) em um Mettler Toledo 821e (Mettler Toledo, Giessen, Alemanha), eventos térmicos de oligossacarídeos de leite humano secos por pulverização, a saber, 3-fucosil- lactose, 6’-sialil-lactose, 3’-sialil-lactose, lacto-N-tetraose e misturas secas por pulverização de oligossacarídeos de leite humano, uma mistura (mistura HMO I) de 2’-fucosil-lactose/lacto-N-tetraose e uma mistura (mistura HMO II) de 2’- fucosil-lactose, 3-fucosil-lactose, lacto-N-tetraose, 6’-sialil-lactose, 3’-sialil-
lactose, respectivamente, foram determinados.
[110] Um Mettler Toledo 821e (Mettler Toledo, Giessen, Alemanha) foi usado para determinar eventos térmicos dos produtos secos por pulverização (temperatura de transição vítrea (Tg), além de eventos exotérmicos e endotérmicos).
[111] Aproximadamente 25 mg dos oligossacarídeos de leite humano secos por pulverização foram analisados em cadinhos de alumínio frisados As amostras foram resfriadas a 0°C com 10 K/min e reaquecidas a 100°C com uma taxa de varredura de 10 K/min. Após resfriar as amostras para 0°C em um segundo ciclo de aquecimento, as amostras foram reaquecidas para 150°C. O ponto médio do deslocamento endotérmico da linha de base durante a varredura de aquecimento foi tomado como temperatura de transição vítrea (Tg). Os picos exotérmicos e endotérmicos são reportados por meio da temperatura de pico e da energia normalizada do evento.
[112] A primeira varredura de aquecimento em todas as amostras mostrou um evento de transição vítrea principal no fluxo total de calor, como evidenciado por uma transição de etapa principal na faixa de aproximadamente 48-58°C, na maioria das amostras, o principal evento de transição vítrea observado na primeira varredura de aquecimento ocorreu novamente na segunda varredura de aquecimento. Os resultados das análises de DSC estão resumidos na Tabela 4: Amostra 1ª varredura de 2ª varredura de aquecimento aquecimento Tg [°C] Tg [°C] 3-fucosil-lactose 57,6 59,9 lacto-N-tetraose 49,9 79,4 6'-sialil-lactose 47,6 49,6
3'-sialil-lactose 48,8 54,3 2'-fucosil-lactose/lacto-N-tetraose 56,3 59 Mistura de HMO II 54,2 55,6 Tabela 4: Eventos térmicos de HMOs como determinados por calorimetria de varredura diferencial
[113] Para a 3-fucosil-lactose, foi detectado um pico de relaxamento endotérmico após a Tg na primeira varredura de aquecimento. Para a lacto-N- tetraose, uma Tg muito mais alta de cerca de 79°C foi detectada na 2ª varredura de aquecimento em comparação com as das outras amostras. Isso pode ser causado por um evento endotérmico durante a primeira varredura de aquecimento a cerca de 89°C (-6,04 J/g). Tal como para a 3-fucosil-lactose, também para a 6’-sialil-lactose, foi detectado um pico de relaxamento endotérmico após a Tg, no entanto, nessa amostra, adicionalmente, ocorreu um evento endotérmico a 77°C (-0,22 J/g). Não foram detectados eventos endotérmicos para a 3’-sialil-lactose e a mistura de HMO I, para a mistura de HMO II o evento endotérmico durante a 1ª varredura de aquecimento foi a 79°C (0,34 J/g).
6.2 Difração de raio X em pó (XRD)
[114] A difração de raios X em pó (XRD) de ângulo amplo foi usada para estudar a morfologia de produtos liofilizados. Foi usado o difratômetro de raios X Empyrean (Panalytical, Almelo, Países Baixos) equipado com um ânodo de cobre (45 kV, 40 mA, Kα₁ de emissão em um comprimento de onda de 0,154 nm) e um detector PIXcel3D. Aproximadamente 100 mg das amostras secas por pulverização foram analisadas no modo de reflexão na faixa angular de 5-45° 2θ, com um tamanho de etapa de 0,04° 2θ e um tempo de contagem de 100 segundos por etapa.
[115] Todos os oligossacarídeos isolados, bem como as misturas de HMO I e II mostraram um estado totalmente amorfo (Figuras 1 a 6). Para lacto-N- tetraose, um segundo sinal (amorfo) foi detectado em torno de 9-10°.
6.3. Difração a laser
[116] O tamanho das partículas de pó foi avaliado por difração a laser. O sistema detecta luz dispersa e difratada por meio de uma matriz de elementos de sensor dispostos concentricamente. O algoritmo de software então aproxima a contagem de partículas calculando os valores z dos valores de intensidade da luz, que chegam aos diferentes elementos do sensor. A análise foi executada usando um sistema de difração a laser quantitativo (qLD) SALD-7500 Aggregate Sizer (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japão).
[117] Uma pequena quantidade (ponta da espátula) de cada amostra foi dispersa em 2 mL de iso-octano e homogeneizada por ultra-som por cinco minutos. A dispersão foi transferida para uma célula de lote preenchida com iso- octano e analisada em modo manual.
[118] As configurações de aquisição de dados foram as seguintes: Contagem Média de sinal por medição: 128, Contagem de Acumulação de Sinal: 3, e intervalo: 2 segundos.
[119] Antes da medição, o sistema foi apagado. Cada dispersão da amostra foi medida 3 vezes e os valores médios e o desvio padrão são reportados. Os dados foram avaliados usando o software WING SALD II versão V3.1. Uma vez que o índice de refração da amostra era desconhecido, o índice de refração das partículas de açúcar (dissacarídeo) (1,530) foi utilizado para a determinação dos perfis de distribuição de tamanho. Valores de tamanho para média e diâmetro mediano são reportados.
[120] Os tamanhos de partículas médios para todas as amostras foram muito semelhantes, valores ligeiramente inferiores foram medidos para a mistura de HMO II. As características de tamanho de partícula são resumidas na
Tabela 5. Além disso, a distribuição de tamanho de partícula mostrou a presença de uma população de tamanho principal para todas as amostras.
Tamanho 3- lacto-N- 6'-sialil- 3'-sialil- Mistura Mistura fucosil- tetraose lactose lactose de HMO I de HMO lactose II Média 119,2 117,3 113,8 115,4 113,1 97,3 [nm] ± 0,5 ± 0,7 ± 1,5 ± 0,6 ± 0,3 ± 5,3 Mediana 141,3 141,3 141,3 121,9 141,3 112,2 [nm] ± 0,0 ± 0,0 ± 0.0 ± 16,7 ± 0,0 ± 0,0 Tabela 5: Tamanho de partícula para HMOs como determinado por difração a laser

Claims (17)

REIVINDICAÇÕES
1. Pó seco por pulverização, caracterizado pelo fato de que consiste essencialmente em LNT e/ou LNnT que foi produzida por fermentação microbiana.
2. Pó seco por pulverização, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o pó seco por pulverização contém pelo menos 80% em peso, pelo menos 85% em peso, pelo menos 90% em peso, pelo menos 93% em peso, pelo menos 95% em peso ou pelo menos 98% em peso de LNT e/ou LNnT.
3. Pó seco por pulverização, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a LNT e/ou LNnT está presente na forma amorfa.
4. Pó seco por pulverização, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o pó seco por pulverização contém ≤ 15% em peso de água, preferencialmente ≤ 10% em peso de água, mais preferencialmente ≤ 7% em peso de água, ainda mais preferencialmente ≤ 5% em peso de água.
5. Pó seco por pulverização, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o pó seco por pulverização é livre de microrganismos geneticamente modificados e moléculas de ácido nucleico derivadas de microrganismos geneticamente modificados.
6. Processo para a fabricação de um pó seco por pulverização, definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, o processo caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) purificar a LNT e/ou LNnT de um caldo de fermentação; b) fornecer uma solução aquosa contendo a LNT e/ou LNnT da etapa a); e c) submeter a solução da etapa b) a secagem por pulverização.
7. Processo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a etapa de purificação da LNT e/ou LNnT de um caldo de fermentação (etapa a) inclui uma ou mais das etapas de: i. remover as células microbianas do caldo de fermentação para obter uma corrente de processo limpa; ii. submeter a corrente de processo limpa a pelo menos uma ultrafiltração; iii. tratar a corrente de processo limpa pelo menos uma vez com uma resina de troca catiônica e/ou pelo menos uma vez com uma resina de troca aniônica; iv. submeter a corrente de processo limpa a pelo menos uma nanofiltração e/ou diafiltração; v. submeter a corrente de processo limpa a pelo menos uma eletrodiálise; vi. tratar a corrente de processo limpa pelo menos uma vez com carvão ativado; e/ou vii. submeter a corrente de processo limpa pelo menos uma vez a uma etapa de cristalização e/ou precipitação.
8. Processo, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que a solução aquosa contém a LNT e/ou LNnT em uma quantidade de pelo menos 20% (p/v), 30% (p/v), 35% (p/v), e até 45% (p/v), 50% (p/v), 60% (p/v).
9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizado pelo fato de que a solução aquosa contendo LNT e/ou LNnT é seca por pulverização a uma temperatura de bocal de pelo menos 110°C, preferencialmente pelo menos 120°C, mais preferencialmente pelo menos 125°C, e menos que 150°C, preferencialmente menos que 140°C e mais preferencialmente menos que 135°C.
10. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 9, caracterizado pelo fato de que a solução aquosa contendo LNT e/ou LNnT é seca por pulverização a uma temperatura de saída de pelo menos 60°C,
preferencialmente pelo menos 65°C, e menos que 80°C, preferencialmente menos que 70°C.
11. Uso do pó seco por pulverização, definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de uma composição nutricional, preferencialmente uma fórmula infantil.
12. Composição nutricional, caracterizada pelo fato de que contém o pó seco por pulverização, definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5.
13. Composição nutricional, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que contém adicionalmente pelo menos um HMO adicional, em que o referido pelo menos um HMO adicional é um HMO neutro ou um HMO sialilado.
14. Composição nutricional, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizada pelo fato de que pelo menos um HMO neutro é selecionado a partir do grupo que consiste em 2'-fucosil-lactose, 3'-fucosil-lactose lacto-N- tetraose, lacto-N-neotetraose e lacto-N-fucopentaose I.
15. Composição nutricional, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, caracterizada pelo fato de que pelo menos um HMO sialilado é selecionado a partir do grupo que consiste em 3'-sialil-lactose, 6'-sialil- lactose, sialil-lacto-N-tetraose (LST)-a, LST-b, LST-c e disialil-lacto-N-tetraose.
16. Composição nutricional, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, caracterizada pelo fato de que a composição nutricional contém pelo menos um microrganismo probiótico.
17. Invenção de produto, processo, sistema, kit, ou uso, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais elementos descritos no presente pedido de patente.
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Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3546060A1 (en) * 2018-03-27 2019-10-02 DuPont Nutrition Biosciences ApS Process for spray drying fucosyllactose solutions and related product compositions
EP3741770A1 (en) * 2019-05-21 2020-11-25 Jennewein Biotechnologie GmbH Purification of oligosaccharides from a fermentation broth by using filtration
EP3789495A1 (en) * 2019-09-03 2021-03-10 Jennewein Biotechnologie GmbH Production of sialylated oligosaccharides in bacillus cells
US20220330584A1 (en) * 2019-09-04 2022-10-20 Dupont Nutrition Biosciences Aps Process for removing an antifoam agent from a solution comprising a human milk oligosaccharide and related compositions
EP3821717A1 (en) * 2019-11-15 2021-05-19 Jennewein Biotechnologie GmbH A method for drying human milk oligosaccharides
GB2623899A (en) * 2019-12-11 2024-05-01 Mjn Us Holdings Llc Staged nutritional compositions containing human milk oligosaccharides and uses thereof
GB2590375B (en) * 2019-12-11 2024-05-08 Mjn Us Holdings Llc Staged nutritional compositions containing human milk oligosaccharides and uses thereof
WO2021124234A1 (en) * 2019-12-19 2021-06-24 Glycom A/S Separation of sialylated oligosaccharides from fermentation broth
JP2023514026A (ja) * 2020-01-29 2023-04-05 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． ヒトミルクオリゴ糖を回収して精製する方法
JP2023519115A (ja) * 2020-03-20 2023-05-10 グリコム・アクティーゼルスカブ 固形のｈｍｏ製品を提供するための方法及びそれにより得られる固形のｈｍｏ製品
EP4052712A4 (en) * 2020-09-18 2023-08-23 Institute Of Process Engineering Chinese Acadamy Of Sciences SUGAR CHAIN AND COMPOSITIONS THEREOF AND THEIR USE IN THE PREVENTION AND/OR TREATMENT OF CORONAVIRUS INFECTIONS
WO2022096613A1 (en) * 2020-11-09 2022-05-12 Basf Se Obtaining highly concentrated hmo solutions by reverse osmosis
WO2022124800A1 (ko) 2020-12-11 2022-06-16 (주)에이피테크놀로지 푸코실락토스를 유효성분으로 함유하는 항바이러스 조성물
EP4346450A1 (en) * 2021-06-04 2024-04-10 N.V. Nutricia Infant formula for feeding infants receiving infant formula and human breast milk
CN114014896B (zh) * 2021-10-09 2023-12-05 中国科学院合肥物质科学研究院 一种高纯度3`-唾液酸乳糖的分离纯化方法
CN114539433B (zh) * 2021-12-29 2022-11-01 北京三元食品股份有限公司 一种乳低聚糖的制备方法及制备的低聚糖粉、食品
KR102645729B1 (ko) 2022-05-11 2024-03-12 (주)에이피테크놀로지 코리네박테리움 글루타미쿰을 이용한 락토-n-테트라오스 및 락토-n-네오테트라오스의 생산 방법
WO2023219437A1 (ko) 2022-05-11 2023-11-16 (주)에이피테크놀로지 코리네박테리움 글루타미쿰을 이용한 락토-n-테트라오스 및 락토-n-네오테트라오스의 생산 방법
KR20240081664A (ko) * 2022-11-30 2024-06-10 씨제이제일제당 (주) 발효 제품 제조 공정 및 제조 장치
CN117088923B (zh) * 2023-10-20 2024-02-13 山东星光首创生物科技有限公司 一种高流动性2’-岩藻糖基乳糖的生产方法

Family Cites Families (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003047402A (ja) * 2001-08-06 2003-02-18 Meiji Milk Prod Co Ltd 中性オリゴ糖含有育児用調製乳
BRPI0923433B1 (pt) 2008-12-19 2021-06-01 Jennewein Biotechnologie Gmbh Método para produzir uma célula geneticamente modificada tendo a capacidade de produzir compostos fucosilados e método para fazer um composto fucosilado
GB0904562D0 (en) * 2009-03-17 2009-04-29 Separation Technologies Invest Isolation and purification of components of whey
KR20120138772A (ko) * 2010-02-19 2012-12-26 글리콤 에이/에스 ６’?ｏ?시알릴락토오스 및 중간체의 제조
WO2011136647A1 (en) 2010-04-27 2011-11-03 N.V. Nutricia Use of 6'-sialyl lactose in infant and toddler nutrition
CN103025749B (zh) 2010-06-01 2016-06-01 格礼卡姆股份公司 2’-o-岩藻糖基乳糖的多晶型物及其制备
EP2455387A1 (en) * 2010-11-23 2012-05-23 Nestec S.A. Oligosaccharide mixture and food product comprising this mixture, especially infant formula
US20120171166A1 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Abbott Laboratories Synbiotic combination of probiotic and human milk oligosaccharides to promote growth of beneficial microbiota
CN102154163A (zh) 2010-12-31 2011-08-17 朱莉 一种3′-唾液酸乳糖的制备方法
ES2439507T3 (es) 2011-01-20 2014-01-23 Jennewein Biotechnologie Gmbh Fucosiltransferasas novedosas y sus aplicaciones
US9453230B2 (en) * 2011-02-16 2016-09-27 Glycosyn LLC Biosynthesis of human milk oligosaccharides in engineered bacteria
EP2522232A1 (en) 2011-05-13 2012-11-14 Nestec S.A. Nutritional products comprising human milk oligosaccharides and methods for manufacture thereof
TW201249349A (en) * 2011-05-24 2012-12-16 Nestec Sa Milk oligosaccharide-galactooligosaccharide composition for infant formula containing the soluble oligosaccharide fraction present in milk, and having a low level of monosaccharides, and a process to produce the composition
WO2013185780A1 (en) * 2012-06-14 2013-12-19 Glycom A/S Enhancing the stability and purity and increasing the bioavailability of human milk oligosaccharides or precursors or blends thereof
CN104812768B (zh) 2012-11-13 2019-06-21 格礼卡姆股份公司 晶体3-o-岩藻糖基乳糖
WO2014086373A1 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Glycom A/S Crystallisation of human milk oligosaccharides (hmo)
BR112015014420A2 (pt) 2012-12-18 2017-07-11 Abbott Lab oligossacarídeos do leite humano para melhorar sintomas de estresse
WO2014094783A1 (en) 2012-12-18 2014-06-26 Glycom A/S Novel polymorphs of lnnt
US11160817B2 (en) * 2012-12-18 2021-11-02 Abbott Laboratories Nutritional compositions comprising neuroprotective dietary oligosaccharides
ES2875327T3 (es) 2013-09-10 2021-11-10 Chr Hansen Hmo Gmbh Producción de oligosacáridos
EP2857410A1 (en) * 2013-10-04 2015-04-08 Jennewein Biotechnologie GmbH Process for purification of 2´-fucosyllactose using simulated moving bed chromatography
CN105682664A (zh) * 2013-11-15 2016-06-15 雀巢产品技术援助有限公司 利用岩藻糖基化低聚糖预防或治疗非分泌型母亲诞下或喂养的婴儿的变态反应的组合物，尤其适用于有风险的婴儿或剖腹产婴儿
PT3071208T (pt) * 2013-11-15 2021-10-26 Nestle Sa Composições para utilização na prevenção ou tratamento de enterocolite necrosante em bebés e crianças pequenas
MX2016005961A (es) * 2013-11-15 2016-12-16 Nestec Sa Composiciones para usar en la prevencion o tratamiento de infecciones del trs en infantes o niños jovenes en riesgo.
CN105722514A (zh) 2013-11-15 2016-06-29 雀巢产品技术援助有限公司 用于预防或治疗剖腹产婴儿或幼儿的坏死性小肠结肠炎的组合物
PL2896628T3 (pl) * 2014-01-20 2019-03-29 Jennewein Biotechnologie Gmbh Sposób wydajnego oczyszczania obojętnych oligosacharydów ludzkiego mleka (HMO) z fermentacji mikrobiologicznej
EP3461890A1 (en) 2014-03-31 2019-04-03 Jennewein Biotechnologie GmbH Total fermentation of oligosaccharides
US20150305385A1 (en) * 2014-04-25 2015-10-29 Mead Johnson Nutrition Company Pediatric nutritional composition with human milk oligosaccahrides, prebiotics and probiotics
EP3191499A4 (en) 2014-09-09 2018-06-06 Glycosyn LLC Alpha (1,3) fucosyltransferases for use in the production of fucosylated oligosaccharides
CN107073021A (zh) * 2014-10-29 2017-08-18 格礼卡姆股份公司 合成组合物以及用于治疗肠易激综合症的方法
US10500221B2 (en) 2014-12-05 2019-12-10 Glycom A/S Crystalline difucosyllactose
WO2017043382A1 (ja) 2015-09-09 2017-03-16 カルソニックカンセイ株式会社 流体加熱装置及びその製造方法
WO2017103850A1 (en) * 2015-12-15 2017-06-22 Glycom A/S Mixture of hmos
US10696705B2 (en) 2015-12-17 2020-06-30 Glycom A/S Crystalline forms of LNT
EP3390652A4 (en) * 2015-12-18 2019-06-12 Glycom A/S Fermentative preparation of oligosaccharides
CN105532883A (zh) * 2015-12-21 2016-05-04 海普诺凯营养品有限公司 一种婴幼儿用配方羊奶粉及其制备方法
DE202017007249U1 (de) * 2016-03-07 2020-04-23 Glycom A/S Abtrennung von Oligosacchariden aus der Fermentationsbrühe
US11224605B2 (en) * 2016-05-19 2022-01-18 Glycom A/S Synthetic composition
EP3450443A1 (en) * 2017-08-29 2019-03-06 Jennewein Biotechnologie GmbH Process for purifying sialylated oligosaccharides
EP3486326A1 (en) 2017-11-21 2019-05-22 Jennewein Biotechnologie GmbH Method for the purification of n-acetylneuraminic acid from a fermentation broth
EP3494804A1 (en) 2017-12-08 2019-06-12 Jennewein Biotechnologie GmbH Spray-dried 3-fucosyllactose
EP3494805A1 (en) 2017-12-08 2019-06-12 Jennewein Biotechnologie GmbH Spray-dried tetrasaccharides
EP3494807A1 (en) 2017-12-11 2019-06-12 Jennewein Biotechnologie GmbH Spray-dried sialyllactose
EP3494806A1 (en) 2017-12-08 2019-06-12 Jennewein Biotechnologie GmbH Spray-dried lacto-n-fucopentaose

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