BR112020010483A2 - formulação liofilizada de um anticorpo monoclonal contra transtirretina - Google Patents

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BR112020010483A2
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Jay Soto
Andrea HAWE
Ruedeeporn TANTIPOLPHAN
Stefan Heindl
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Prothena Biosciences Limited
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Abstract

A invenção fornece formulações de anticorpos e métodos úteis para profilaxia ou tratamento de amiloidose relacionada à transtiretina.

Description

FORMULAÇÃO LIOFILIZADA DE UM ANTICORPO MONOCLONAL CONTRA TRANSTIRRETINA REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício da US 62/592.294 depositada em 29 de novembro de 2018, que é incorporada por referência na sua totalidade para todos os fins.
REFERÊNCIA A UMA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0002] Este pedido inclui uma listagem de sequências eletrônica em um arquivo chamado 519102 SEQLST.txt, criado em 28 de novembro de 2018 e contendo 140.679 bytes, que é incluído por referência.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[0003] Pensa-se que várias doenças são causadas pelo dobramento e agregação anormais de proteínas específicas da doença. Essas proteínas podem se acumular em acumulações patologicamente diagnósticas, conhecidas como amiloides, que são visualizadas por certas manchas histológicas. Pensa-se que os amiloides desencadeiam respostas inflamatórias e têm múltiplas consequências negativas para os tecidos envolvidos. Além disso, agregados menores de proteína dobrada anormalmente podem existir e exercer efeitos citotóxicos.
[0004] A Transtirretina (TTR) é uma das muitas proteínas que são conhecidas por dobrar incorretamente e agregar (por exemplo, sofrer amiloidogênese). A amiloidose relacionada à transtirretina engloba duas formas de doença: doença familiar decorrente da dobragem incorreta de uma TTR mutada ou variante e uma doença esporádica e não genética causada pela agregação incorreta da TTR do tipo selvagem. O processo de amiloidogênese da TTR pode causar patologia no sistema nervoso e/ou no coração, assim como em outros tecidos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO REIVINDICADA
[0005] A invenção fornece formulações farmacêuticas que compreendem (a) um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem cada um ser independentemente N ou S, ou um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 16, em que o anticorpo está presente em uma concentração no intervalo de cerca de 25 mg/mL a cerca de 75 mg/mL; (b) um tampão presente a uma concentração de cerca de 20 mM, em que o tampão é citrato, histidina, fosfato ou succinato; (c) um açúcar presente a uma concentração no intervalo de cerca de 205 mM a cerca de 260 mM, em que o açúcar é sacarose ou trealose ou, se o açúcar estiver ausente, arginina a cerca de 160 mM está presente; e (d) um surfactante presente em uma concentração no intervalo de cerca de 0,01% a cerca de 1% em peso; em que a formulação é caracterizada por um pH no intervalo de cerca de 5,0 a cerca de 6,5; desde que: (i) se houver tampão de histidina ou de succinato, o pH é de cerca de 6,0; (ii) se houver tampão fosfato, o pH é de cerca de 6,5; e (li) se houver histidina e trealose, o surfactante é a. PS80; ou b. PS20, desde que, se PS20 estiver presente, também esteja presente L-arginina a cerca de 25 mM. Opcionalmente, a formulação é essencialmente livre de manitol ou sorbitol. Opcionalmente, a formulação compreendendo um anticorpo monoclional conforme descrito em (a) é essencialmente livre de manitol e sorbitol.
[0006] Em algumas formulações, o tampão é histidina. Opcionalmente, o açúcar está presente em um intervalo de cerca de 230 mM a cerca de 250 mM, opcionalmente de cerca de 230 mM a cerca de 240 mM. Opcionalmente, o açúcar é trealose. Opcionalmente, o açúcar é sacarose e o surfactante é PS20 ou PX188. Opcionalmente, o surfactante é PS20 a uma concentração de 0,02% p/p. Opcionalmente, o surfactante é PX188 a uma concentração de 0,04% p/p. Em algumas formulações, arginina a 160 mM está presente. Opcionalmente, o açúcar está presente e é trealose. Opcionalmente, a trealose está presente a uma concentração de 205 mM. Opcionalmente, o surfactante é o PS20.
[0007] Em algumas formulações, o tampão é citrato. Opcionalmente, o açúcar está presente a 230 mM. Opcionalmente, o surfactante é PS20 a 0,02%. Em algumas formulações, o tampão é fosfato. Opcionalmente, o açúcar está presente e é sacarose. Em algumas formulações, o tampão é succinato. Opcionalmente, o açúcar está presente e é sacarose.
[0008] Algumas formulações compreendem (a) citrato a 20 mM, trealose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 5; (b) histidina a 20 mM, sacarose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p; (c) fosfato a 20 mM, sacarose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 6,5; (d) citrato a 20 mM, sacarose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 6,5; (e) histidina a 20 MM, trealose a 230 mM e PS80 a 0,02% p/p; (f) histidina a 20 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 160 mM; (g) histidina a 20 mM, sacarose a 240 mM e PX188 a 0,04% p/p; (h) succinato a 20 mM, sacarose a 240 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 6,0; ou (i) histidina a 20 mM, trealose a 205 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 25 mM. Opcionalmente, a formulação consiste essencialmente no anticorpo e cerca de: (a) citrato a 20 mM, trealose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 5; (b) histidina a 20 mM, sacarose a 230 mM e PS20 a 0,02%; (c) fosfato a 20 MM, sacarose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 6,5; (d) citrato a 20 MM, sacarose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 6,5; (e) histidina a 20 mM, trealose a 230 mM e PS80 a 0,02% p/p; (f) histidina a 20 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 160 mM; (g) histidina a 20 MM, sacarose a 240 mM e PX188 a 0,04% p/p; (h) succinato a 20 mM, sacarose a 240 mM e PS20 a 0,02% p/p a um pH 6,0; ou (i) histidina a mM, trealose a 205 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 25 mM. Opcionalmente, a formulação consiste essencialmente no anticorpo e cerca de: (a) histidina a 20 MM, sacarose a 240 mM e PX188 a 0,04% p/p; (b) succinato a 20 MM, sacarose a 240 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 6,0; ou (c) histidina a 20 mM, trealose a 205 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 25 mM.
[0009] Em algumas formulações, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 76. Opcionalmente, a formulação consiste essencialmente no anticorpo a cerca de 50 mg/ml e histidina a cerca de 20 mM, e sacarose a cerca de 240 mM e PX188 a cerca de 0,04% p/p.
[0010] Em algumas formulações, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e L26 por cada numeração Kabat pode ser independentemente N ou S.
[0011] Em algumas formulações, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 16.
[0012] Em algumas formulações, o anticorpo monocional é um anticorpo humanizado, quimérico ou folheado. Opcionalmente, o anticorpo monoclonal é humanizado. Opcionalmente, a região variável da cadeia pesada madura possui uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 64-66 e a região variável da cadeia leve madura possui uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ |D NOs: 74-76. Opcionalmente, a região variável da cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 5-12 e a região variável da cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 19-23. Opcionalmente, a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 11 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 19. Opcionalmente, a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 65 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 76.
[0013] Em formulações compreendendo um anticorpo humanizado, a região variável da cadeia pesada madura é fundida com uma região constante da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve madura é fundida com uma região constante da cadeia leve. Opcionalmente, a região variável da cadeia pesada madura é fundida com uma região constante da cadeia pesada com a sequência da SEQ ID NO: 103, desde que a lisina C-terminal possa estar ausente e/ou a região variável da cadeia leve madura seja fundida com uma região constante da cadeia leve com a sequência da SEQ ID NO: 104 ou 105.
[0014] Em algumas formulações, o anticorpo monoclional está presente a uma concentração de cerca de 50 mg/mL. Em algumas formulações, o tampão histidina está a uma concentração de cerca de 20 mM. Em algumas formulações, o pH é de 5,75 a 6,25. Em algumas formulações, o açúcar/poliol é sacarose presente a uma concentração de cerca de 240 mM. Em algumas formulações, o poloxâmero é o poloxâmero 188 a uma concentração de cerca de 0,04% em peso. Em algumas formulações, menos do que cerca de 5% ou 3% do anticorpo estão presentes como um agregado na formulação. Em algumas formulações, pelo menos 95% ou 97% do anticorpo em peso é executado como um único pico na análise HP-SEC. Algumas formulações são estéreis. Algumas formulações são estáveis ao congelar e descongelar. Algumas formulações têm uma osmolaridade de cerca de 270 mOsmol/kg a cerca de 330 mOsmol/kg.
[0015] A invenção também fornece uma formulação liofiizada de um anticorpo que compreende (a) um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem ser independentemente N ou S, ou um anticorpo monoclional compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs de SEQ ID NO: 16; (b) histidina; (c) um açúcar/poliol; e (d) um poloxâmero. Opcionalmente, a formulação liofilizada é preparada liofilizando as formulações acima mencionadas. Opcionalmente, a formulação liofilizada é reconstituível com água a um pH entre cerca de 5,5 e cerca de 6,5. Opcionalmente, a formulação liofilizada é reconstituível com água a um pH de cerca de 6,0. Opcionalmente, a formulação liofilizada contém cerca de 10 mg a cerca de 40 mg do anticorpo.
[0016] A invenção também fornece uma formulação liofilizada, que é reconstituível com água para produzir uma solução aquosa compreendendo: (a) um anticorpo compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem ser cada uma independentemente N ou S, ou um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 16, em que o anticorpo está presente em uma concentração no intervalo de cerca de 25 mg/mL a cerca de 75 mg/mL; (b) tampão presente em uma concentração em um intervalo de cerca de 10 MM a cerca de 30 mM; (c) açúcar/poliol presente em uma concentração no intervalo de cerca de 220 mM a cerca de 260 mM; (d) surfactante presente em uma concentração em um intervalo de cerca de 0,01% a cerca de 0,1% em peso; e (e) um pH em um intervalo de cerca de 5,5 a cerca de 7,0.
[0017] Em algumas formulações liofilizadas, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 64-66 e uma região variável da cadeia leve madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 74-76, ou um anticorpo compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 5-12 e uma região variável da cadeia leve madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 19-23. Opcionalmente, a formulação liofilizada é reconstituível com água, de modo que o anticorpo esteja presente a uma concentração de cerca de 50 mg/mL. Opcionalmente, o tampão compreende histidina. Opcionalmente, a formulação liofilizada é reconstituível com água, de modo que o pH é de cerca de 6,0. Opcionalmente, o açúcar/poliol é sacarose. Opcionalmente, o surfactante é poloxâmero. Opcionalmente, o poloxâmero é PX188.
[0018] Em algumas formulações liofilizadas, (a) o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 64-66 e uma região variável da cadeia leve madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 74-76 e é reconstituível para uma concentração de cerca de 50 mg/ml; (b) o tampão é histidina e é reconstituível para uma concentração de cerca de 20 mM; (c) o açúcar/poliol é sacarose e é reconstituível a uma concentração de cerca de 240 mM; e (d) o surfactante é o poloxâmero 188 e é reconstituível a uma concentração de cerca de 0,04% em peso. Opcionalmente, a formulação liofilizada é reconstituível com água, de modo que o pH é de cerca de 6,0. Opcionalmente, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 65 e uma região variável da cadeia leve madura com uma sequência de aminoácidos
7I7TO compreendendo SEQ ID NO: 76. Opcionalmente, a região variável da cadeia pesada madura é fundida a uma região constante da cadeia pesada tendo a sequência de SEQ ID NO: 103 e a região variável da cadeia leve madura é fundida a uma região constante da cadeia leve tendo a sequência de SEQ ID NO: 104. Nestas formulações liofilizadas, pelo menos 95 ou 97% do anticorpo é executado como um pico único sob HP-SEC após armazenamento por até 3 meses a 2-8ºC.
[0019] A invenção também fornece um método para reconstituir a formulação liofilizada que compreende combinar a formulação liofilizada com água estéril para produzir uma formulação líquida. Opcionalmente, compreende ainda a introdução da formulação reconstituída em um saco de fluido isotônico para infusão. Opcionalmente, a formulação liofilizada está na forma de pó ou na forma de uma espuma sólida em um frasco.
[0020] A invenção fornece ainda uma forma de dosagem liofilizada estéril de uma formulação de anticorpo em um frasco de 20 ml consistindo essencialmente em: (i) um anticorpo em um intervalo de cerca de 225-275 mg; (ii) histidina em um intervalo de cerca de 15-19 mg; (li) poloxâmero PX188 em um intervalo de cerca de 2-2,5 mg; e; (iv) sacarose em um intervalo de cerca de 400-490 mg; em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem cada um seja independentemente N ou S, ou um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 16. Opcionalmente, o frasco possui conteúdo constituído essencialmente por: (i) cerca de 250 mg do anticorpo; (ii) cerca de 16,8 mg de L- histidina; (iii) cerca de 2,2 mg de poloxâmero PX188; e (iv) cerca de 445,3 mg de sacarose. Opcionalmente, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat cada um pode ser independentemente N ou S. Opcionalmente, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 16. Opcionalmente, a região variável da cadeia pesada madura possui uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 64-66 e a região variável da cadeia leve madura possui uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 74-76. Opcionalmente, a região variável da cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 5-12 e a região variável da cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs: 19-23. Opcionalmente, a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 65 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 76. Opcionalmente, a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 6 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 21. Opcionalmente, a região variável da cadeia pesada madura é fundida com uma região constante da cadeia pesada com a sequência da SEQ ID NO: 103, desde que a lisina C-terminal possa estar ausente e/ou a região variável da cadeia leve madura seja fundida com uma região constante da cadeia leve com a sequência da SEQ ID NO: 104 ou 105. Opcionalmente, a cadeia pesada madura tem a sequência da SEQ ID NO: 82, exceto a lisina C-terminal pode estar ausente, e a cadeia leve madura tem a sequência da SEQ ID NO: 86.
[0021] A invenção também fornece um método para preparar a forma de dosagem liofiizada para administração a um sujeito, compreendendo: (i) reconstituir a formulação de anticorpo para um volume de cerca de 5,0 mL com água estéril e (ii) diluir a formulação de anticorpo reconstituído da etapa (i) em solução salina normal para infusão. Opcionalmente, o volume total para infusão é de 250 mL. Opcionalmente, o volume total para infusão é de 100 mL. Opcionalmente, o volume total para infusão é de 500 mL.
[0022] A invenção também fornece uma formulação reconstituída resultante da reconstituição de formulações liofilizadas. Algumas formulações reconstituídas compreendem o anticorpo a uma concentração de cerca de 50 mg/mL, o tampão histidiha a uma concentração de cerca de 20 mM, o poloxâmero a uma concentração de cerca de 0,04% em peso e a um pH de cerca de 6,0. Opcionalmente, pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99% do anticorpo é executado como um único pico na cromatografia de exclusão por tamanho de alta pressão.
[0023] A invenção também fornece um método para tratar ou efetuar profilaxia de um sujeito com ou em risco de uma amiloidose mediada por transtirretina, compreendendo administrar ao sujeito um regime eficaz da formulação farmacêutica ou uma forma reconstituída da formulação liofilizada. Opcionalmente, o sujeito foi tratado previamente com um estabilizador de tetrâmero TTR, uma terapia à base de oligonucleotídeo antisense, uma terapia à base de interferência por RNA (RNAi) ou um degradador de amiloide. Opcionalmente, o sujeito não recebe mais o tratamento com o estabilizador de tetrâmero TTR, terapia baseada em oligonucleotídeo antisense, terapia baseada em interferência por RNA (RNAi) ou degradador de amiloide. Opcionalmente, o sujeito está recebendo tratamento simultaneamente com diflunisal. Opcionalmente, o sujeito está recebendo tratamento com tafamidis simultaneamente. Opcionalmente, o sujeito está recebendo simultaneamente tratamento com um estabilizador de tetrâmero TTR, uma terapia à base de oligonucleotídeo antisense, uma terapia à base de interferência por RNA (RNAi) ou um degradador de amiloide. Opcionalmente, o sujeito está recebendo tratamento simultâneo com tafamidis, difluisal, patisiran, inoteren, — 4iiodo-4' —-desoxidoxorrubicina —(IDOX), doxicicliha9 ácido tauroursodesoxicólico (TUDCA), ciclodextrina (CyD) ou um anticorpo anti-SAP. Opcionalmente, o sujeito foi diagnosticado com amiloidose por ATTR. Opcionalmente, o sujeito tem cardiomiopatia ATTR do tipo selvagem. Opcionalmente, o sujeito tem cardiomiopatia ATTR hereditária ou polineuropatia ATTR hereditária ou ambos. Opcionalmente, o sujeito tem envolvimento cardíaco ATTR. Opcionalmente, o sujeito tem envolvimento de neuropatia periférica de amiloidose por ATTR. Opcionalmente, o sujeito está recebendo tafamidis concomitantes.
[0024] A invenção também fornece que uma formulação farmacêutica, a forma reconstituída da formulação liofilizada ou a forma reconstituída da formulação de anticorpo liofilizado seja administrada ao sujeito por via intravenosa na forma diluída. Opcionalmente, o diluente para a forma diluída é solução salina normal. Opcionalmente, o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 100 mL. Opcionalmente, o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 250 mL. Opcionalmente, o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 500 mL. Opcionalmente, o volume total é de cerca de 250 mL. Opcionalmente, 0,1, 0,2, 0,3, 1, 3, 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito aproximadamente uma vez a cada 28 dias. Opcionalmente, 0,1, 0,2, 0,3, 1 ou 3 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 60 a 120 minutos. Opcionalmente, 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 90 a 180 minutos. Opcionalmente, o sujeito é pré-medicado com um anti-histamínico. Opcionalmente, o sujeito é administrado com difenidramina em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo. Opcionalmente, o sujeito é administrado com acetaminofeno em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo. Opcionalmente, a duração do regime é de pelo menos 3 meses. Opcionalmente, a duração do regime é de pelo menos 12 meses.
[0025] A invenção fornece ainda um método de tratamento ou efetividade da profilaxia de um sujeito com ou em risco de amiloidose mediada por transtirretina que compreende administrar um regime eficaz de um estabilizador de tetrâmero TTR, uma terapia baseada em oligonucleotídeo antisense, uma terapia baseada em interferência por RNA (RNAi), ou um degradador de amiloide, em que o sujeito foi tratado anteriormente com a formulação farmacêutica ou uma forma reconstituída da formulação liofilizada, conforme descrito acima. Opcionalmente, o sujeito não recebe mais o tratamento com a formulação farmacêutica. Opcionalmente, o estabilizador de tetrâmero TTR é tafamidis ou diflunisal. Opcionalmente, a terapia baseada em oligonucleotídeo antisense é inotersen. Opcionalmente, a terapia baseada em interferência por RNA (RNAi) é patisiran ou revusiran. Opcionalmente, os degradadores de amiloide são 4"-iodo-4"- desoxidoxorrubicina (IDOX), doxiciclina, ácido tauroursodeoxicólico (TUDCA), ciclodextrina (CyD) ou um anticorpo anti-SAP. Opcionalmente, os degradadores de amiloide são doxiciclina em combinação com ácido tauroursodeoxicólico (TUDCA). Opcionalmente, o sujeito foi diagnosticado com amiloidose por ATTR. Opcionalmente, o sujeito tem cardiomiopatia ATTR do tipo selvagem. Opcionalmente, o sujeito tem cardiomiopatia ATTR hereditária. Opcionalmente, o sujeito tem polineuropatia ATTR hereditária. Opcionalmente, o sujeito tem envolvimento cardíaco ATTR. Opcionalmente, o sujeito tem envolvimento de neuropatia periférica de amiloidose por ATTR. Opcionalmente, a formulação farmacêutica, forma reconstituída da formulação liofilizada ou a forma reconstituída da formulação de anticorpo liofilizado é administrada ao sujeito por via intravenosa na forma diluída. Opcionalmente, o diluente para a forma diluída é solução salina normal. Opcionalmente, o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 100 mL. Opcionalmente, o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 250 mL. Opcionalmente, o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 500 mL. Opcionalmente, o volume total é de cerca de 250 mL. Opcionalmente, 0,1, 0,2, 0,3, 1, 3, 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito aproximadamente uma vez a cada 28 dias. Opcionalmente, 0,1, 0,2, 0,3, 1 ou 3 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 60 a 120 minutos. Opcionalmente, 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 90 a 180 minutos. Opcionalmente, o sujeito é pré-medicado com um anti-histamínico. Opcionalmente, o sujeito é administrado com difenidramina em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo. Opcionalmente, o sujeito é administrado com acetaminofeno em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo. Opcionalmente, a duração do regime é de pelo menos 3 meses. Opcionalmente, a duração do regime é de pelo menos 12 meses.
BREVE DESCRIÇÃO DAS SEQUÊNCIAS
[0026] A SEQ ID NO: 1 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0027] A SEQ ID NO: 2 estabelece a sequência de aminoácidos do modelo de estrutura 1SEQ H da região variável da cadeia pesada de camundongo.
[0028] A SEQ ID NO: 3 apresenta a sequência de aminoácidos do aceitador variável da cadeia pesada ACC Nº BACO2114.
[0029] A SEQ ID NO: 4 apresenta a sequência de aminoácidos do aceitador variável da cadeia pesada ACC Nº AAX82494.1.
[0030] A SEQ ID NO: 5 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão | do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv1).
[0031] A SEQ ID NO: 6 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 2 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv2).
[0032] A SEQ ID NO: 7 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 2b do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv2b).
[0033] A SEQ ID NO: 8 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 3 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv3).
[0034] A SEQ ID NO: 9 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 3b do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv3b).
[0035] A SEQ ID NO: 10 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 4 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv4).
[0036] A SEQ ID NO: 11 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 4b do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv4b).
[0037] A SEQ ID NO: 12 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 5 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv5).
[0038] A SEQ ID NO: 13 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-H1 do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0039] A SEQ ID NO: 14 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-H2 do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0040] A SEQ ID NO: 15 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-H3 do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0041] A SEQ ID NO: 16 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0042] A SEQ ID NO: 17 apresenta a sequência de aminoácidos do modelo de estrutura 1IMJU L da região variável da cadeia leve de camundongo.
[0043] A SEQ ID NO: 18 apresenta a sequência de aminoácidos do aceitador variável da cadeia leve ACC Nº ABC66952.
[0044] A SEQ ID NO: 19 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 1 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv1).
[0045] A SEQ ID NO: 20 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 2 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv2).
[0046] A SEQ ID NO: 21 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 3 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv3).
[0047] A SEQ ID NO: 22 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 4 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9DS5VLv4).
[0048] A SEQ ID NO: 23 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 5 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLvV5).
[0049] A SEQ ID NO: 24 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-L1 do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0050] A SEQ ID NO: 25 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-L2 do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0051] A SEQ ID NO: 26 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-L3 do anticorpo 9D5 de camundongo.
[0052] A SEQ ID NO: 27 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 1 do 9D5 humanizado.
[0053] A SEQ ID NO: 28 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 2 do 9D5 humanizado.
[0054] A SEQ ID NO: 29 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 2b do 9D5 humanizado.
[0055] A SEQ ID NO: 30 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 3 do 9D5 humanizado.
[0056] A SEQ ID NO: 31 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 3b do 9D5 humanizado.
[0057] A SEQ ID NO: 32 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 4 do 9D5 humanizado.
[0058] A SEQ ID NO: 33 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 4b do 9D5 humanizado.
[0059] A SEQ ID NO: 34 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 5 do 9D5 humanizado.
[0060] A SEQ ID NO: 35 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 1 do 9D5 humanizado.
[0061] A SEQ ID NO: 36 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 2 do 9D5 humanizado.
[0062] A SEQ ID NO: 37 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 3 do 9D5 humanizado.
[0063] A SEQ ID NO: 38 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 4 do 9D5 humanizado.
[0064] A SEQ ID NO: 39 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 5 do 9D5 humanizado.
[0065] SEQ ID NO: 40 apresenta a sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada do anticorpo 9D5 de camundongo com peptídeo sinal.
[0066] A SEQ ID NO: 41 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada do anticorpo 9D5 de camundongo com peptídeo sinal.
[0067] A SEQ ID NO: 42 apresenta a sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve do anticorpo 9D5 de camundongo com peptídeo sinal.
[0068] A SEQ ID NO: 43 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve do anticorpo 9D5 de camundongo com peptídeo sinal.
[0069] A SEQ ID NO: 44 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia pesada da versão 1 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv1).
[0070] A SEQ ID NO: 45 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia pesada da versão 2 do anticorpo 9D5 humanizado (Hug9D5VHv2).
[0071] À SEQ ID NO: 46 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia pesada da versão 2b do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv2b).
[0072] A SEQ ID NO: 47 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 3 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv3).
[0073] A SEQ ID NO: 48 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia pesada da versão 3b do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv3b).
[0074] A SEQ ID NO: 49 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 4 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv4).
[0075] A SEQ ID NO: 50 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 4b do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VHv4b).
[0076] A SEQ ID NO: 51 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável de cadeia pesada da versão 5 do 9D5 humanizado (HuU9D5VHv5).
[0077] A SEQ ID NO: 52 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 1 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv1).
[0078] A SEQ ID NO: 53 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 2 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv2).
[0079] A SEQ ID NO: 54 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 3 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv3).
[0080] A SEQ ID NO: 55 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 4 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv4).
[0081] A SEQ ID NO: 56 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 5 do anticorpo 9D5 humanizado (Hu9D5VLv5).
[0082] A SEQ ID NO: 57 apresenta a sequência de aminoácidos do peptídeo sinal da região variável da cadeia pesada do 9D5 de camundongo.
[0083] A SEQ ID NO: 58 apresenta a sequência de ácido nucleico do peptídeo sinal da região variável da cadeia pesada do 9D5 de camundongo.
[0084] A SEQ ID NO: 59 apresenta a sequência de aminoácidos do peptídeo sinal da região variável da cadeia leve do 9D5 de camundongo.
[0085] A SEQ ID NO: 60 apresenta a sequência de ácido nucleico do peptídeo sinal da região variável da cadeia leve do 9D5 camundongo.
[0086] A SEQ ID NO: 61 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada do anticorpo 14G8 de camundongo.
[0087] A SEQ ID NO: 62 apresenta a sequência de aminoácidos do modelo de estrutura 1IMQK H da região variável da cadeia pesada de camundongo.
[0088] A SEQ ID NO: 63 apresenta a sequência de aminoácidos do aceitador variável da cadeia pesada ACC Nº AAD30410.1.
[0089] A SEQ ID NO: 64 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 1 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VHv1).
[0090] A SEQ ID NO: 65 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 2 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VHv2).
[0091] A SEQ ID NO: 66 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da versão 3 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VHv3).
[0092] A SEQ ID NO: 67 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-H1 do anticorpo 14G8 de camundongo.
[0093] A SEQ ID NO: 68 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-H2 do anticorpo 14G8 de camundongo.
[0094] A SEQ ID NO: 69 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-H3 do anticorpo 14G8 de camundongo.
[0095] A SEQ ID NO: 70 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve do anticorpo 14G8 de camundongo.
[0096] A SEQ ID NO: 71 apresenta a sequência de aminoácidos do modelo de estrutura 1IMJU L da região variável da cadeia leve de camundongo.
[0097] A SEQ |D NO: 72 apresenta a sequência de aminoácidos do aceitador variável da cadeia leve ACC Nº ABA71374.1.
[0098] A SEQ ID NO: 73 apresenta a sequência de aminoácidos do aceitador variável da cadeia leve ACC Nº ABC66952.1.
[0099] A SEQ ID NO: 74 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 1 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VLv1).
[00100] A SEQ ID NO: 75 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 2 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VLv2).
[00101] A SEQ ID NO: 76 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da versão 3 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VLv3).
[00102] A SEQ ID NO: 77 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-L1 do anticorpo 14G8 de camundongo.
[00103] A SEQ ID NO: 78 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-L2 do anticorpo 14G8 de camundongo.
[00104] A SEQ ID NO: 79 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-L3 do anticorpo 14G8 de camundongo.
[00105] A SEQ ID NO: 80 apresenta a sequência de aminoácidos de Kabat CDR-L1 da versão 3 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VLv3).
[00106] A SEQ ID NO: 81 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 1 do 14G8 humanizado.
[00107] A SEQ ID NO: 82 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 2 do 14G8 humanizado.
[00108] A SEQ ID NO: 83 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia pesada da versão 3 do 14G8 humanizado.
[00109] A SEQ ID NO: 84 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 1 do 14G8 humanizado.
[00110] A SEQ ID NO: 85 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 2 do 14G8 humanizado.
[00111] A SEQ ID NO: 86 apresenta a sequência de aminoácidos da cadeia leve da versão 3 do 14G8 humanizado.
[00112] A SEQ ID NO: 87 apresenta a sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada do anticorpo 14G8 de camundongo com peptídeo sinal.
[00113] A SEQ ID NO: 88 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada do anticorpo 14G8 de camundongo com peptídeo sinal.
[00114] A SEQ ID NO: 89 apresenta a sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve do anticorpo 14G8 de camundongo com peptídeo sinal.
[00115] A SEQ ID NO: 90 apresenta a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve do anticorpo 14G8 de camundongo com peptídeo sinal.
[00116] A SEQ ID NO: 91 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia pesada da versão 1 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VHv1).
[00117] A SEQ ID NO: 92 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia pesada da versão 2 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VHv2).
[00118] A SEQ ID NO: 93 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia pesada da versão 3 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VHv3).
[00119] A SEQ ID NO: 94 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 1 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VLv1).
[00120] A SEQ ID NO: 95 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 2 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VLv2).
[00121] A SEQ ID NO: 96 apresenta a sequência de ácidos nucleicos da região variável da cadeia leve da versão 3 do anticorpo 14G8 humanizado (Hu14G8VLv3).
[00122] A SEQ |D NO: 97 apresenta a sequência de aminoácidos do peptídeo sinal da região variável da cadeia pesada do 14G8 de camundongo.
[00123] A SEQ ID NO: 98 apresenta a sequência de ácido nucleico do peptídeo sinal da região variável da cadeia pesada do 14G8 de camundongo.
[00124] A SEQ ID NO: 99 apresenta a sequência de aminoácidos do peptídeo sinal da região variável da cadeia leve 14G8 de camundongo.
[00125] A SEQ ID NO: 100 apresenta a sequência de ácido nucleico do peptídeo sinal da região variável da cadeia leve 14G8 do camundongo.
[00126] A SEQ ID NO: 101 apresenta a sequência de aminoácidos de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 exemplificativa.
[00127] A SEQ ID NO: 102 apresenta a sequência de aminoácidos de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 humana exemplificativa do alótipo IgG1 GIm3 com alaninas que ocupam as posições 234 e 235 por numeração EU.
[00128] A SEQ ID NO: 103 apresenta a sequência de aminoácidos de uma região constante da cadeia pesada I9gG1 exemplificativa do alótipo I9G1 GIm3.
[00129] A SEQ ID NO:104 apresenta a sequência de aminoácidos de uma região constante da cadeia leve kappa humana exemplificativa com arginina N- terminal.
[00130] A SEQ ID NO: 105 apresenta a sequência de aminoácidos de uma região constante da cadeia leve de kappa humana exembplificativa sem uma arginina N-terminal.
[00131] A SEQ ID NO: 106 apresenta a sequência de ácido nucleico de uma região constante da cadeia pesada exemplificativa do alótipo G1m3.
[00132] A SEQ ID NO:107 apresenta a sequência de ácido nucleico de uma região constante da cadeia leve de exemplificativa com uma arginina N-terminal.
[00133] A SEQ ID NO: 108 apresenta a sequência de aminoácidos de uma região constante da cadeia leve de kappa humano exemplificativa sem uma arginina N-terminal.
[00134] A SEQ ID NO:109 apresenta a sequência de aminoácidos da transtirretina humana estabelecida no número de acesso P02766.1 (UniProt).
[00135] A SEQ ID NO:110 apresenta a sequência de aminoácidos da transtirretina humana apresentada no número de acesso AAB35639.1 (GenBank).
[00136] A SEQ ID NO:111 apresenta a sequência de aminoácidos da transtirretina humana apresentada no número de acesso AAB35640.1 (GenBank).
[00137] A SEQ ID NO: 112 apresenta a sequência de aminoácidos da transtirretina humana apresentada no número de acesso ABI63351.1 (GenBank).
[00138] A SEQ ID NO: 113 apresenta a sequência de aminoácidos dos resíduos 89-97 de transtirretina humana.
[00139] A SEQ ID NO: 114 apresenta a sequência de aminoácidos de um potencial imunógeno de transtirretina.
[00140] A SEQ ID NO: 115 apresenta a sequência de aminoácidos de um potencial imunógeno de transtirretina.
[00141] A SEQ ID NO: 116 apresenta a sequência de aminoácidos de um potencial imunógeno de transtirretina.
[00142] A SEQ ID NO: 117 apresenta a sequência de aminoácidos do composto Chothia-Kabat CDR-H1 do anticorpo 9D5 de camundongo.
[00143] A SEQ ID NO: 118 apresenta a sequência de aminoácidos do composto Chothia-Kabat CDR-H1 do anticorpo 14G8 de camundongo.
DEFINIÇÕES
[00144] O termo "anticorpo" inclui anticorpos intactos e fragmentos de ligação deste. Tipicamente, os fragmentos competem com o anticorpo intacto do qual foram derivados para ligação específica ao alvo. Os fragmentos incluem cadeias pesadas separadas, cadeias leves separadas, Fab, Fab', F(ab')2, F(ab)c, Fv, anticorpos de cadeia única e anticorpos de domínio único O termo "anticorpo" também inclui um anticorpo biespecífico. Um anticorpo biespecífico ou bifuncional é um anticorpo híbrido artificial que tem dois diferentes pares de cadeia pesada/leve e dois sítios de ligação diferentes (ver, por exemplo., Songsivilai e Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol., 148:1547-53 (1992)).
[00145] A unidade estrutural básica do anticorpo é um tetrâmero de subunidades. Cada tetrâmero inclui dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, possuindo cada par uma cadeia "leve" (cerca de 25 kDa) e uma cadeia "pesada" (cerca de 50-70 kDa). A porção amino terminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos principalmente responsáveis pelo reconhecimento de antígeno. Quando inicialmente expressa, esta região variável está tipicamente ligada a um peptídeo sinal clivável. A região variável sem peptídeo sinal é por vezes referida como uma região variável madura. Assim, por exemplo, uma região variável madura da cadeia leve significa uma região variável da cadeia leve sem o peptídeo sinal da cadeia leve. A porção carboxi-terminal de cada cadeia define uma região constante essencialmente responsável pela função efetora. Uma região constante pode incluir qualquer uma ou todas as regiões CH1, região de dobradiça, região CH2 e região CH3.
[00146] As cadeias leves são classificadas como kappa ou lambda. As cadeias pesadas são classificadas como gama, mu, alfa, delta ou épsilon e definem o isotipo do anticorpo como IgG como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes são unidas por uma região "J" de cerca de 12 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada incluindo também uma região "D" de cerca de 10 aminoácidos ou mais. (Ver, em geral, Fundamental Immunology (Paul, W,, ed., 2º ed. Raven Press, N.Y., 1989), Ch. 7 (incorporado por referência na sua totalidade para todos os fins).
[00147] As regiões variáveis maduras de cada par de cadeia leve/pesada formam o sítio de ligação ao anticorpo. Assim, um anticorpo intacto tem dois sítios de ligação. Exceto para anticorpos bifuncionais ou biespecíficos, os dois sítios de ligação são os mesmos. Todas as cadeias apresentam a mesma estrutura geral das regiões framework relativamente conservadas (FR) juntas às três regiões hipervariáveisó,, “também chamadas de regiõêes determinantes de complementaridade ou CDRs. As CDRs das duas cadeias de cada par são alinhadas pelas regiões de framework, permitindo ligação a um epítopo específico. Da extremidade N-terminal à C-terminal, tanto a cadeia leve quanto a pesada compreende as regiões FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FRA4. A atribuição de aminoácidos para cada região está em conformidade com as definições de Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991), ou Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901- 917 (1987); Chothia et al, Nature 342:878-883 (1989) ou CDRs podem ser definidas pelas definições alternativas na Tabela 1 abaixo. Kabat também fornece uma convenção de numeração amplamente usada (numeração Kabat) na qual os resíduos correspondentes entre cadeias pesadas diferentes ou entre cadeias leves diferentes recebem o mesmo número.
[00148] Tabela 1: Definições convencionais de CDRs usando numeração Kabat Tabela 1
Composto Alça Kabat Chothia Chothia e ADM Contato Kabat [o fes Jeans fes ease *CDR-H1 por Chothia pode terminar em H32, H33 ou H34 (dependendo do comprimento da alça). Isto ocorre porque o esquema de numeração Kabat coloca inserções de resíduos extras em 35A e 35B, enquanto a numeração Chothia os coloca em 31A e 31B. Se nem H35A nem H35B (numeração Kabat) estiverem presentes, a alça Chothia CDR-H1 termina em H32. Se apenas H35A estiver presente, termina em H33. Se ambas H35A e H35B estiverem presentes, terminará em H34.
[00149] A região variável madura de uma cadeia pesada ou leve está sendo comparada com a mesma região de um anticorpo de referência, a identidade de sequência percentual entre as regiões de anticorpos do sujeito e de referência é o número de posições ocupadas pelo mesmo aminoácido na região, tanto do sujeito quanto do anticorpo de referência, dividido pelo número total de posições alinhadas das duas regiões (com intervalos não contados) multiplicado por 100 para converter a porcentagem.
[00150] Para efeitos de classificação de substituições de aminoácidos como conservadoras ou não conservadoras, os aminoácidos são agrupados da seguinte forma: Grupo | (cadeias laterais hidrofóbicas): Norleucina, met, ala, val, leu, ile; Grupo |l (cadeias hidrofílicas laterais neutras): cys, ser, thr; Grupo Ill (cadeias laterais ácidas): asp, glu; Grupo IV (cadeias laterais básicas): asn, gln, his, lys, arg; Grupo V (resíduos que influenciam a orientação da cadeia): gly, pro; e Grupo VI (cadeias laterais aromáticas): trp, tyr, phe. As substituições conservadoras envolvem substituições entre aminoácidos na mesma classe.
[00151] As substituições não conservadoras constituem a troca de um membro de uma destas classes por um membro de outra.
[00152] Os anticorpos da invenção tipicamente se ligam ao seu alvo designado com uma constante de afinidade de pelo menos 106, 107, 108, 10º, ou 10ºº M. Tal ligação é ligação específica em que é detectavelmente maior em magnitude e distinta da ligação não específica que ocorre a pelo menos um alvo não relacionado. A ligação específica pode ser o resultado da formação de ligações entre grupos funcionais específicos ou ajuste espacial particular (por exemplo, tipo de fechadura e chave), enquanto a ligação não específica é geralmente o resultado de forças de van der Waals. No entanto, a ligação específica não implica necessariamente que um anticorpo monoclional se ligue a um e apenas um alvo.
[00153] O termo “sintoma” refere-se a uma evidência subjetiva de uma doença, como a marcha alterada, conforme percebida por um sujeito. Um "sinal" refere-se à evidência objetiva de uma doença, conforme observado por um médico.
[00154] Um indivíduo está em risco aumentado de uma doença se o sujeito tiver pelo menos um fator de risco conhecido (por exemplo, genético, bioquímico, história familiar e exposição situacional) colocando os indivíduos com esse fator de risco em um risco estatisticamente significativo maior de desenvolver a doença do que indivíduos sem o fator de risco. A significância estatística significa p<0,05.
[00155] Salvo indicação em contrário do contexto, o termo "sobre" abrange valores dentro de +5 ou +10% de um valor declarado.
[00156] A menos que seja aparente a partir do contexto, a referência a um intervalo inclui qualquer número inteiro dentro do intervalo.
[00157] O termo "nativo" em relação à estrutura transtirretina (TTR) refere- se à estrutura dobrada normal da TTR em seu estado de funcionamento adequado (ou seja, um tetrâmero TTR). Como a TTR é um tetrâmero em sua forma dobrada de forma nativa, as formas não nativas de TTR incluem, por exemplo, tetrâmeros de TTR dobrados incorretamente, monômeros de TTR, formas agregadas de TTR e formas fibrilas de TTR. As formas não nativas de TTR podem incluir moléculas compreendendo sequências ou mutações de aminoácidos de TTR do tipo selvagem.
[00158] O termo "dobrado incorretamente" em relação à TTR refere-se à estrutura secundária e terciária de um monômero ou multímero de polipeptídeo TTR e indica que o polipeptídeo adotou uma conformação que não é normal para essa proteína em seu estado de funcionamento adequado. Embora a dobragem incorreta da TTR possa ser causada por mutações na proteína (por exemplo, deleção, substituição ou adição), as proteínas TTR do tipo selvagem também podem ser dobradas incorretamente em doenças, expondo epítopos específicos.
[00159] O termo "farmaceuticamente aceitável" significa que o carreador, diluente, excipiente ou auxiliar é compatível com os outros ingredientes da formulação e não substancialmente prejudicial para o receptor deste.
[00160] O termo “paciente” inclui humanos e outros mamíferos que recebem tratamento profilático ou terapêutico.
[00161] Um indivíduo está em risco aumentado de uma doença se o sujeito tiver pelo menos um fator de risco conhecido (por exemplo, genético, bioquímico, história familiar e exposição situacional) colocando os indivíduos com esse fator de risco em um risco estatisticamente significativo maior de desenvolver a doença do que indivíduos sem o fator de risco.
[00162] O termo “doença” refere-se a qualquer condição anormal que prejudique a função fisiológica. O termo é usado amplamente para abranger qualquer distúrbio, doença, anormalidade, patologia, doença, condição ou síndrome em que a função fisiológica é prejudicada, independentemente da natureza da etiologia.
DESCRIÇÃO DETALHADA |. GERAL
[00163] 14G8 e 9G5 são anticorpos que se ligam à transtirretina (TTR). As formas humanizadas dos anticorpos são descritas no documento WO2016/120810, incorporado por referência na sua totalidade para todos os fins. O presente pedido fornece formulações líquidas e liofilizadas que incorporam anticorpos possuindo as CDRs do anticorpo 14G8 ou 9G5, particularmente formas quiméricas, folheadas ou humanizadas de 14G8 ou 9G5. As formulações incluem combinações de carreadores farmaceuticamente aceitáveis que conferem estabilidade ao anticorpo, conforme descrito mais adiante abaixo.
11. Moléculas alvo
[00164] A Transtirretina (TTR) é uma proteína de transporte de 127 aminoácidos, soro de 55 kDa e líquido cefalorraquidiano sintetizada principalmente pelo fígado. Também foi referido como pré-albumina, pré-albumina de ligação à tiroxina, ATTR e TBPA. Em seu estado nativo, a TTR existe como um tetrâmero. Nos homozigotos, os tetrâmeros compreendem subunidades idênticas ricas em folhas beta de 127 aminoácidos. Nos heterozigotos, os tetrânmneros TTR são compostos de subunidades variantes e/ou de tipo selvagem, tipicamente combinadas de maneira estatística.
[00165] A função estabelecida da TTR no sangue é transportar a proteína de ligação ao holo -retinol. Embora a TTR seja o principal carreador de tiroxina (Ta) no sangue de roedores, ao utilizar sítios de ligação ortogonais aos usados para a proteína de ligação ao holo-retinol, os sítios de ligação de Ta são efetivamente desocupados em humanos.
[00166] Pensa-se que a TTR é uma das pelo menos trinta proteínas humanas diferentes cuja dobragem incorreta e/ou desmontagem extracelular (amiloidogênese) em um espectro de estruturas agregadas é pensada para causar doenças degenerativas referidas como doenças amiloides. A TTR sofre alterações conformacionais para se tornar amiloidogênico. O desdobramento parcial expõem expansões de resíduos hidrofóbicos em grande parte não carregados em uma conformação estendida que desmonta eficientemente em agregados esféricos em grande parte não estruturados que acabam por sofrer conversão de conformação em estruturas amiloides de folhas cruzadas.
[00167] Salvo indicação contrária do contexto, a referência à transtirretina (TTR) ou aos seus fragmentos ou domínios inclui as sequências naturais de aminoácidos humanos incluindo isoformas, mutantes e variantes alélicas destes. Sequências polipeptídicas de TTR exemplificativas são designadas pelos números de acesso P02766.1 (UniProt), AAB35639.1 (GenBank), AAB35640.1 (GenBank) e ABI63351.1 (GenBank) (SEQ ID NOS: 109-112, respectivamente). Os resíduos são numerados de acordo com Swiss Prot P02766.1, com o primeiro aminoácido da proteína madura (ou seja, não incluindo a sequência sinal de 20 aminoácidos) designada como resíduo 1. Em qualquer outra proteína TTR, os resíduos são numerados de acordo com os resíduos correspondentes em P02766.1 no alinhamento máximo.
Ill. Amiloidose por Transtirretina
[00168] A amiloidose por transtirretina (TTR) é um distúrbio sistêmico caracterizado por TTR patogênica e dobrada incorretamente e pela deposição extracelular de fibrilas amiloides compostas pela TTR. A amiloidose por TTR é geralmente causada pela desestabilização da forma nativa do tetrânero TTR (devido a condições ambientais ou genéticas), levando à dissociação, dobramento incorreto e agregação da TTR em fibrilas amiloides que se acumulam em vários órgãos e tecidos, causando disfunção progressiva. Ver por exemplo, Almeida and Saraiva, FEBS Letters 586:2891-2896 (2012); Ando et al., Orphanet Journal of Rare Diseases 8:31 (2013).
[00169] Nos seres humanos, os tetrâmeros TTR do tipo selvagem e os tetrâmeros mistos compostos por subunidades mutantes e do tipo selvagem podem dissociar, dobrar incorretamente e agregar, com o processo de amiloidogênese, levando à degeneração do tecido pós-mitótico. Assim, as amiloidoses por TTR abrangem doenças causadas pela TTR patogênica dobrada incorretamente resultante de mutações na TTR ou resultantes de TTR dobrada incorretamente e não-mutada.
[00170] Por exemplo, amiloidose sistêmica senil (SSA) e amiloidose cardíaca senil (SCA) são tipos de amiloidose relacionados à idade que resultam da deposição de amiloide TTR do tipo selvagem fora e dentro dos cardiomiócitos do coração. A amiloidose por TTR também é a forma mais comum de amiloidose hereditária (familiar), causada por mutações que desestabilizam a proteína TTR. As amiloidose por TTR associadas a mutações pontuais no gene TTR incluem polineuropatia amiloide familiar (FAP), cardiomiopatia amiloide familiar (FAC) e a amiloidose seletiva rara do sistema nervoso central (CNSA). Pacientes com amiloidose por TTR hereditária (familiar) são quase sempre heterozigotos, o que significa que os tetrâmeros TTR são compostos por subunidades TTR mutantes e/ou selvagens, geralmente distribuídas estatisticamente. As versões hereditárias (familiares) da amiloidose por TTR são geralmente autossômicas dominantes e geralmente são mais precoces que as doenças esporádicas (SSA e SCA).
[00171] Existem mais de 100 mutações no gene que codifica TTR que foram implicadas nos distúrbios autossômicos dominantes FAP e FAC. Ver por exemplo, US 2014/0056904; Saraiva, Hum. Mutat. 17(6):493-503 (2001); Damas e Saraiva, J. Struct. Biol. 130:290-299; Dwulet e Benson, Biochem. Biophys. Res. Commun. 114:657-662 (1983). Essas mutações causadoras de amiloide são distribuídas por toda a molécula de TTR. Geralmente, quanto mais desestabilizadoras forem as subunidades mutantes da estrutura do tetrâmero TTR, mais cedo será o início da doença amiloide. O potencial patogênico de uma variante de TTR é geralmente determinado por uma combinação de sua instabilidade e eficiência de secreção celular. A patologia inicial causada por algumas variantes de TTR provém da destruição seletiva do tecido cardíaco, enquanto a de outras variantes de TTR provém do comprometimento do sistema nervoso periférico e autônomo. O dano tecidual causado pela amiloidogênese por TTR parece originar- se amplamente da toxicidade de agregados pequenos e difusíveis de TTR, embora o acúmulo de amiloide extracelular possa contribuir e quase certamente comprometer a estrutura do órgão nos estágios finais da amiloidose por TTR.
[00172] A amiloidose por TTR se apresenta de muitas formas diferentes, com considerável variação fenotípica entre indivíduos e localizações geográficas. Por exemplo, a amiloidose por TTR pode se apresentar como uma neuropatia autonômica e motora sensorial axonal progressiva. A amiloidose por TTR também pode se apresentar como cardiomiopatia infiltrativa,
[00173] A idade de início dos sintomas relacionados à doença varia entre a segunda e a nona décadas de vida, com grandes variações entre diferentes populações. O envolvimento multissistêmico da amiloidose por TTR é uma pista para seu diagnóstico. Por exemplo, o diagnóstico de amiloidose por TTR é considerado quando um ou vários dos seguintes estão presentes: (1) história familiar de doença neuropática, especialmente associada a insuficiência cardíaca; (2) dor neuropática ou distúrbios sensoriais progressivos de etiologia desconhecida; (3) síndrome do túnel do carpo sem causa óbvia, particularmente se for bilateral e requer liberação cirúrgica; (4) distúrbios da motilidade gastrointestinal ou disfunção do nervo autônomo de etiologia desconhecida (por exemplo, disfunção erétil, hipotensão ortostática, bexiga neurogênica); (5) doença cardíaca caracterizada por paredes ventriculares engrossadas na ausência de hipertensão; (6) bloqueio atrioventricular avançado de origem desconhecida, particularmente quando acompanhado por um coração engrossado; e (6) inclusões do corpo vítreo do tipo algodão-lã. Ver Ando et al., Orphanet Journal of Rare Diseases 8:31 (2013). Outros sintomas podem incluir, por exemplo, polineuropatia, perda sensorial, dor, fraqueza nos membros inferiores, disidrose, diarreia, constipação, perda de peso e incontinência/retenção urinária.
[00174] A neuropatia periférica pode ser detectada e quantificada por várias escalas clínicas. Por exemplo, Clinical Neuropathy Assessment (CAN), (Dyck PJ, Hughes RAC, O'Brien PC. Quantitating overall neuropathic symptoms, impairments and outcomes. In: Dyck PJ, Thomas PK,, editors. Neuropatia periférica. 4º ed. Filadélfia, PA: Elsevier Saunders; 2005. P 1031-51), fornece uma escala compreendendo uma pontuação de Função de Membros Inferiores (LLF), e capacidade (pontuação 0) ou incapacidade (pontuação 1) para andar na ponta dos dedos, andas nos calcanhares e subir de uma posição ajoelhada; os itens são pontuados separadamente para cada lado A pontuação de Prejuízo de Neuropatia (NIS) fornece uma avaliação que testa a força muscular, atividade reflexa e sensação dos dedos dos pés e das mãos. Para sujeitos com neuropatia periférica hATTR, a função neurológica pode ser avaliada com o tempo usando NIS. A NIS envolve um exame neurológico dos membros inferiores, membros superiores e nervos cranianos com pontuação total de 244 (fraqueza 192, sensação 32, reflexos 20). O Sintomas e Alterações de Neuropatia (NSC) é um questionário de 38 itens que avalia a gravidade e a alteração dos sintomas (fraqueza, sensorial, autonômica) da neuropatia periférica em 3 escalas: número de sintomas, gravidade dos sintomas (leve = 1, moderado = 2, grave = 3) que pode ser usado para avaliar a mudança ao longo do tempo e uma categoria de mudança (comparando um sintoma à linha de base). Outras escalas são o estágio de Polineuropatia Amiloidótica Familiar (FAP) e pontuação de Deficiência de Polineuropatia (PND).
[00175] O diagnóstico de amiloidose por TTR depende, geralmente, de biópsias de órgãos alvo, seguido de coloração histológica do tecido excisado com corante específico de amiloide, vermelho Congo. Se for observado um teste positivo para amiloide, a coloração imuno-histoquímica para TTR é realizada subsequentemente para garantir que a proteína precursora responsável pela formação de amiloide seja de fato TTR. Para as formas familiares das doenças, a demonstração de uma mutação no gene que codifica TTR é então necessária antes que um diagnóstico possa ser feito. Isso pode ser realizado, por exemplo, por meio de eletroforese de foco isoelétrico, reação em cadeia da polimerase ou espectrometria de massa em dissecção a laser/cromatografia líquida em tandem. Ver, por exemplo, US 2014/0056904; Ruberg and Berk, Circulation 126:1286-1300 (2012); Ando et al., Orphanet Journal of Rare Diseases 8:31 (2013).
IV. ANTICORPOS A. Especificidade de ligação e propriedades funcionais
[00176] O anticorpo 14G8 foi originalmente isolado como um anticorpo de camundongo possuindo uma região variável da cadeia pesada madura definida pela SEQ ID NO: 61 e uma variável da cadeia leve madura definida pela SEQ ID NO: 70. Kabat CDRH1, H2 e H3 têm SEQ ID NOs: 67-69 e CDRL1, L2 e L3 têm SEQ ID NOs: 77-79. Um composto Chothia-Kabat CDR-H1 composto é fornecido como SEQ ID NO: 118.
[00177] O anticorpo 9G5 foi também originalmente isolado como um anticorpo de camundongo possuindo uma região variável da cadeia pesada madura definida pela SEQ ID NO: 61 e uma variável da cadeia leve madura definida pela SEQ ID NO: 70. Kabat CDRH1, H2 e H3 têm SEQ ID NOs: 13-15 e Kabat CDRL1, L2 e L3 têm SEQ ID NOs: 24-26. As CDRs Kabat de 9G5 são as mesmas que as de 14G8, exceto que nas posições 9G5 H52 e L26 pela numeração Kabat estão ocupadas por N e em 9G5 por S. Um composto Chothia-Kabat CDR-H1 é fornecido como SEQ ID NO: 117.
[00178] CDRs podem, alternativamente, ser definidos por qualquer uma das convenções a seguir descritas acima.
[00179] As formulações da invenção incluem um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada madura compreendendo CDRs H1, H2 e H3 de 14G8 e CDRs L1,L2 e L3 de 14G8, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração de Kabat podem cada uma ser independentemente N ou S. Alguns anticorpos incluem CDRs H1, H2 e H3 de 14G8 e CDRs L1, L2 e L3 de 14G8 em que as posições H52 e L26 são ambas ocupadas por N. Alguns anticorpos incluem uma cadeia pesada madura compreendendo CDRs H1, H2, H3 de 9G5 e uma cadeia leve madura compreendendo CDRs L1, L2 e L3 de 9G5, em que as posições H52 e L26 são S.
[00180] A menos que de outra forma aparente do contexto, a referência a 14G8 ou 9G5 deve ser entendida como referente a qualquer uma das formas de camundongo, quiméricas, revestidas e humanizadas do anticorpo de camundongo desses anticorpos. Esses anticorpos se ligam especificamente aos resíduos de aminoácidos 89-97 (SEQ ID NO: 113) de TTR. Tais epítopos são enterrados no tetrânero TTR nativo e expostos em formas monoméricas, dobradas incorretamente, agregadas ou de fibrilas de TTR.
[00181] Outros anticorpos podem ser obtidos por mutagênese de cDNA que codifica as cadeias pesada e leve de um anticorpo exemplificativo, como 14G8 ou 9G5. Os anticorpos monoclonais que são pelo menos 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticos a 14G8 na sequência de aminoácidos das regiões variáveis da cadeia pesada e/ou leve maduras e mantêm suas propriedades funcionais, e/ou que diferem do respectivo anticorpo por um pequeno número de substituições de aminoácidos funcionalmente inconsequentes (por exemplo, substituições conservativas), deleções ou inserções também estão incluídas na invenção.
[00182] Anticorpos incluindo as CDRs de 14G8 ou 9G5, como geralmente descrito acima são caracterizados por sua capacidade de se ligar a formas monoméricas, dobradas incorretamente, agregadas ou fibrlas de TTR, preferencialmente sobre formas tetraméricas nativas de TTR. Além disso, esses anticorpos são caracterizados por sua imunorreatividade preferencial no tecido cardíaco de amiloidose mediada por TTR, mas não no tecido cardíaco saudável. A ligação ou imunorreatividade preferencial pode ser relativa, por exemplo, pelo menos 2 vezes melhor ou absoluta (ou seja, nenhuma ligação ou imunorreatividade à TTR nativa ou tecido cardíaco saudável).
[00183] Alguns anticorpos podem inibir ou reduzir a agregação de TTR, inibir ou reduzir a formação de fibrilas de TTR, reduzir ou limpar depósitos de TTR ou TTR agregado ou estabilizar conformações não tóxicas de TTR em um modelo animal ou ensaio clínico. Alguns anticorpos podem tratar, efetuar profilaxia ou retardar o início de uma amiloidose por TTR, como mostrado em um modelo animal ou em um ensaio clínico. Modelos animais exemplificativos para testar a atividade contra uma amiloidose por TTR incluem aqueles descritos em Kohno et al., Am. J.
Path. 150(4):1497-1508 (1997); Teng et al., Laboratory Investigations 81:385-396 (2001); Wakasugi et al., Proc. Japan Acad. 63B:344-347 (1987); Shimada et al. Mol. Biol. Med. 6:333-343 (1989); Nagata et al., J. Biochem. 117:169-175 (1995); Sousa et al., Am. J. Path. 161:1935-1948 (2002); and Santos et al., Neurobiology of Aging 31:280-289 (2010).
B. Anticorpos Humanizados
[00184] Um anticorpo humanizado é um anticorpo geneticamente manipulado em que as CDRs de um anticorpo "doador" não humano são enxertadas em sequências de anticorpo "aceitadoras" humanas (ver, por exemplo, Queen, US 5.530.101 e 5.585.089; Winter, US 5.225.539, Carter, US 6.407.213, Adair, US 5.859.205; e Foote, US 6.881.557). As sequências de anticorpo aceitadora podem ser, por exemplo, uma sequência de anticorpo humana madura, um composto de tais sequências, uma sequência consenso de sequências de anticorpos humanos ou uma sequência da região da linhagem germinativa. Assim, um anticorpo humanizado é um anticorpo que possui pelo menos três, quatro, cinco ou todas as CDR total ou substancialmente de um anticorpo doador e sequências de framework da região variável e das regiões constantes, se presentes, no todo ou substancialmente a partir de sequências de anticorpos humanos. Da mesma forma uma cadeia pesada humanizada tem, pelo menos, uma, duas e, normalmente, todas as três CDR inteiramente, ou substancialmente, de uma cadeia pesada de um anticorpo doador, e uma sequência de framework da região variável da cadeia pesada e região constante da cadeia pesada, se presente, substancialmente a partir da framework da região variável da cadeia pesada humana e sequências da região constante. Da mesma forma uma cadeia leve humanizada tem, pelo menos, uma, duas e, normalmente, todas as três CDRs total, ou substancialmente, de uma cadeia leve de um anticorpo doador, e uma sequência de framework da região da cadeia leve e região constante da cadeia leve, se presente, substancialmente a partir da framework da região variável da cadeia leve humana e das sequências da região constante. Além de nanocorpos e dAbs, um anticorpo humanizado compreende uma cadeia pesada humanizada e uma cadeia leve humanizada. Uma CDR em um anticorpo humanizado é substancialmente de uma CDR correspondente num anticorpo não humano quando, pelo menos, 85%,
90%, 95% ou 100% dos resíduos correspondentes (conforme definido por qualquer definição convencional, como, por exemplo, por Kabat) são idênticos entre as respectivas CDRs. As sequências de framework da região variável de uma cadeia de anticorpo ou a região constante de uma cadeia de anticorpo são substancialmente de uma sequência de framework da região variável humana ou região constante humana, respectivamente, quando, pelo menos, 85%, 90%, 95% ou 100% de resíduos definidos por qualquer definição convencional, como, por exemplo, por Kabat, são idênticos.
[00185] Embora os anticorpos humanizados muitas vezes incorporem todas as seis CDRs (definido por qualquer definição convencional, como, por exemplo, por Kabat) a partir de um anticorpo de camundongo, eles também pode ser feitos com menos do que todas as CDRs (por exemplo, pelo menos 3, 4, ou 5 CDRs) de um anticorpo de camundongo (por exemplo, Pascalis et al., J. Immunol. 169:3076, 2002; Vajdos et al., J. of Mol. Biol., 320: 415-428, 2002; Iwahashi et al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999; Tamura et al, J. Immunol., 164:1432-1441, 2000).
[00186] Em alguns anticorpos apenas uma parte das CDR, a saber, o subconjunto de resíduos de CDR necessários para a ligação, denominadas SDRs, é necessária para manter a ligação de um anticorpo humanizado. Resíduos de CDR não entram em contato com o antígeno e que não estão nas SDRs podem ser identificados com base em estudos anteriores (por exemplo, os resíduos H60-H65 em CDR H2 frequentemente não são necessários), a partir de regiões de CDR de Kabats que se encontram fora das alças hipervariáveis de Chothia (Chothia, J. Mol. Biol. 196:901, 1987), por modelação molecular e/ou empiricamente, ou como descrito em Gonzales et al, Mol. Biol. Imnmunol. 41: 863, 2004. Em tais anticorpos humanizados em posições nas quais um ou mais resíduos de CDR doadores estão ausentes ou em que todo um doador de CDR é omitido, o aminoácido que ocupa a posição pode ser um aminoácido que ocupa a posição correspondente (por numeração Kabat) na sequência de anticorpo aceitador. O número de tais substituições de aceitador para aminoácidos doadores nas CDRs para incluir reflete um equilíbrio de considerações concorrentes. Tais substituições são potencialmente vantajosas na diminuição do número de aminoácidos do camundongo num anticorpo humanizado e, consequentemente, diminuição na imunogenicidade potencial. No entanto, as substituições também podem causar mudanças de afinidade e reduções substanciais na afinidade são preferencialmente evitadas. Posições de substituição dentro de CDRs e aminoácidos a substituir também podem ser selecionadas empiricamente.
[00187] As sequências de anticorpo humano aceitador podem ser, opcionalmente, selecionadas dentre as muitas sequências de anticorpos humanos conhecidas por fornecer um elevado grau de identidade de sequência (por exemplo, 65-85% de identidade) entre frameworks de região variável de sequência aceitadora humana e as correspondentes frameworks da região variável de um doador da cadeia de anticorpo.
[00188] Exemplos de sequências aceitadoras para a cadeia pesada são as regiões variáveis da cadeia pesada humana madura com códigos de acesso NCBI BACO2114 e AAX82494.1 (SEQ ID NOS: 3 e 4) e regiões variáveis da cadeia pesada do subgrupo 3 de Kabat humana. BACO2114 compartilha da mesma forma canônica que a cadeia pesada de 9D5 de camundongo. Outros exemplos de sequências aceitadoras para a cadeia pesada são as regiões variáveis da cadeia pesada humana madura com códigos de acesso NCBI AAD30410.1 e AAX82494.1 (SEQ ID NOS: 63 e 4, respectivamente) e regiões variáveis da cadeia pesada do subgrupo 1 de Kabat humana. AAD30410.1 e AAX82494.1 incluem duas CDRs com a mesma forma canônica que a cadeia pesada do 14G8 de camundongo. Exemplos de sequências aceitadoras para a cadeia leve são a região variável da cadeia leve humana madura com código de acesso NCBI ABC66952 (SEQ ID NO: 18) e regiões variáveis da cadeia leve do subgrupo 3 de Kabat humana. ABC66952 inclui duas CDRs com a mesma forma canônica que a cadeia leve de 9D5 de camundongo. Outros exemplos de sequências aceitadoras para a cadeia leve são as regiões variáveis da cadeia leve humana madura com códigos de acesso NCBI ABA71374.1 e ABC66952.1 (SEQ ID NOS: 72 e 73, respectivamente) e regiões variáveis da cadeia leve do subgrupo 2 de Kabat humana. ABA71374.1 e ABC66952.1 têm a mesma forma canônica que a cadeia leve de 14G8 de camundongo.
[00189] Se for selecionada mais do que uma sequência de anticorpos aceitadores humanos, pode ser usado um composto ou híbrido desses aceitadores e os aminoácidos usados em diferentes posições nas regiões variáveis da cadeia leve humanizada e da cadeia pesada podem ser retirados de qualquer uma das sequências de anticorpos aceitadores humanos usadas. Por exemplo, as regiões variáveis da cadeia pesada humana madura com códigos de acesso NCBI BACO?2114 e AAX82494.1 (SEQ ID NOs: 3 e 4) foram utilizadas como sequências aceitadoras para humanização da região variável da cadeia pesada madura 9D5. Exemplos de posições em que estes dois aceitadores diferem incluem posições H19 (R ou K), H40 (A ou T), H44 (G ou R), H49 (S ou A), H77 (S ou T), H82a (N ou S), H83 (R ou K), H84 (A ou S) e H89 (V ou M). As versões humanizadas da região variável da cadeia pesada 9D5 podem incluir qualquer aminoácido em qualquer uma dessas posições. Da mesma forma, as regiões variáveis da cadeia pesada humana madura com códigos de acesso NCBI AAD30410.1 e AAX82494.1 (SEQ ID NOs: 63 e 4, respectivamente) foram utilizadas como sequências aceitadoras para humanização da região variável da cadeia pesada madura 14G8. Exemplos de posições em que estes dois aceitadores diferem incluir posições H82a (Nou S), H83 (R ou K), H84 (A ou S) e H89 (V ou M). As versões humanizadas da região variável da cadeia pesada 14G8 podem incluir qualquer aminoácido em qualquer uma dessas posições. De modo semelhante, as regiões variáveis da cadeia leve humana madura com códigos de acesso NCBI ABA71374.1 e ABC66952.1 (SEQ ID NOs: 72 e 73, respectivamente) foram utilizadas como sequências aceitadoras para a humanização da região variável da cadeia leve madura 14G8. Um exemplo de uma posição em que estes dois aceitadores diferem é a posição L18 (S ou P). As versões humanizadas da região variável da cadeia leve 14G8 podem incluir qualquer aminoácido nesta posição.
[00190] Certos aminoácidos dos resíduos da framework de região variável humana são selecionados para substituição com base em sua possível influência na conformação e/ou ligação de CDR a antígeno. Investigação de tais possíveis influências é por modelação, análise das características dos aminoácidos em determinadas localizações ou observação empírica dos efeitos de substituição ou mutagênese de determinados aminoácidos.
[00191] Por exemplo, quando um aminoácido difere entre um resíduo de framework de região variável de murino madura e um resíduo de framework de região humana variável madura selecionado, o aminoácido de framework humana pode ser substituído pelo aminoácido de framework equivalente do anticorpo de camundongo quando for razoavelmente esperado que o aminoácido: (1) ligue-se de forma não covalente ao antígeno diretamente, (2) seja adjacente a uma região CDR, (3) de outra forma interaja com uma região CDR (por exemplo, está dentro de cerca de 6 À de uma região CDR) (4) medeie a interação entre as cadeias pesadas e leves.
[00192] Resíduos de framework das classes (1) até (3) como definido por Queen, US 5.530.101, são algumas vezes alternadamente referidos como resíduos canônicos e de vernier. Os resíduos de framework que ajudam a definir a conformação de uma alça de CDR são por vezes referidos como resíduos canônicos (Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Thornton & Martin, J. Mol. Biol. 263:800815 (1996)) Os resíduos de framework que suportam conformações de alça de ligação ao antígeno e desempenham um papel no aperfeiçoamento do ajuste de um anticorpo contra o antígeno são por vezes referidos como resíduos de vernier (Foote & Winter, J. Mol. Biol 224:487-499 (1992)).
[00193] Outros resíduos de framework que são candidatos à substituição são os resíduos que criam um sítio potencial de glicosilação. Ainda outros candidatos para substituição são aminoácidos de framework humanos aceitadores que são incomuns para uma imunoglobulina humana nessa posição. Estes aminoácidos podem ser substituídos por aminoácidos da posição equivalente do anticorpo de camundongo doador ou a partir das posições equivalentes de imunoglobulinas humanas mais típicas.
[00194] Por razões como a possível influência sobre a conformação CDR e/ou a ligação ao antígeno, interação mediadora entre cadeias pesadas e leves, interação com a região constante, sendo um sítio para modificação pós-tradução desejada ou indesejada, sendo um resíduo incomum para sua posição em uma sequência de região variável humana e, portanto, potencialmente imunogênicas, obtendo potencial de agregação e outras razões, as 15 posições de framework da região variável seguintes foram consideradas como candidatos para substituições nas oito regiões variáveis da cadeia pesada madura Hu9D5 exemplificadas e as cinco variáveis da cadeia leve maduras HuU9D5 exemplificadas de acordo com os exemplos: H42 (G42E), H47 (W47L), H69 (I69F), H82 (M82S), H82b (S82 (b) L), H108 (T108L), L8 (P8A), L9 (L9P), L18 (P18S), L19 (A19V), L36 (Y36F), L39 (K39R), L60 (D60S), L70 (D70A) e L74 (K74R). Do mesmo modo, as seguintes 11 posições de framework da região variável foram consideradas como candidatas para substituições nas três regiões variáveis da cadeia pesada madura Hu14G8 exemplificadas e as três regiões variáveis da cadeia leve madura Hu14G8 exemplificadas, conforme especificado adicionalmente nos exemplos: H1 (Q1E), H3 (Q3K), H47 (W47L), H105 (Q105T), Lê (P8A), L9 (L9P), L19 (A1Q9V), L26 (N26S), L36 (Y36F), L60 (D60S) e L70 (D70A).
[00195] Aqui, como em qualquer outro lugar, o resíduo mencionado em primeiro lugar é o resíduo de um anticorpo humanizado formado por enxerto de CDR de Kabat ou um composto Chothia-Kabat de CDR no caso de CDR-H1 em uma framework aceitadora humana (por exemplo, uma framework aceitadora humana composta ou híbrida), e o resíduo mencionado em segundo é um resíduo considerado para substituir esse resíduo. Portanto, dentro das frameworks de regiões variáveis, o primeiro resíduo mencionado é humano, e dentro das CDRs, o primeiro resíduo mencionado é de camundongo.
[00196] Os anticorpos Hu9D5 exemplificados incluem quaisquer permutações ou combinações das regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve exemplificadas (por exemplo, VHvl/VLvl ou H1IL1, VHvi/VLv2 ou H1L2, VHvi/VLv3 ou H1L3, VHvi/VLv4 ou H1L4, VHvi/VLv5 ou H1L5, VHv2/VLvl| ou H2L1, VHv2/VLv2 ou H2L2, VHv2/VLv3 ou H2L3, VHv2/VLv4 ou H2L4, VHv2/VLv5 ou H2L5, VHv2b/VLvi ou H2bL1, VHv2b/VLv2 ou H2bL2, VHv2b/VLv3 ou H2bL3, VHv2b/VLv4 ou H2bL4, VHv2b/VLv5 ou H2bL5, VHv3/VLvl ou H3L1, VHv3/VLv2 ou H3L2, VHv3/VLv3 ou H3L3, VHv3/VLv4 ou H3L4, VHv3/VLv5 ou H3L5, VHv3bNLvl ou H3bL1, VHv3b/VLv2 ou H3bL2, VHv3b/VLv3 ou H3bL3, VHv3b/VLv4 ou H3bl4, VHv3b/VLv5 ou H3bL5, VHv4/VLvl ou H4L1, VHv4/VLv2 ou HA4L2, VHv4/VLv3 ou H4L3, VHv4/VLv4 ou H4L4, VHv4/VLv5 ou H4L5, VHv4b/VLvl ou H4bL1, VHv4b/VLv2 ou H4bL2, VHv4b/VLv3 ou H4blL3, VHv4b/VLv4 ou H4bL4, VHv4b/VLv5 ou H4blL5, VHv5/VLvi ou H5L1, VHv5/VLv2 ou H5L2, VHv5/VLv3 ou
H5L3, VHv5/VLv4 ou H5L4 e VHv5/VLv5 ou H5L5).
[00197] A invenção fornece formulações de variantes de anticorpos 9D5 humanizados em que a região variável da cadeia pesada madura humanizada mostra pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com um Hu9D5VHv4b humanizado (SEQ ID NO: 11) e a região variável da cadeia leve madura humanizada mostra pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para um Hu9D5VLv1 (SEQ ID NO: 19). Em alguns desses anticorpos, pelo menos 1, 2 ou todas as 3 das alterações reversas ou outras mutações em Hu9D5 H4bL1 são mantidas. A invenção também fornece variantes dos outros anticorpos 9D5 humanizados exemplificados. Tais variantes possuem regiões variáveis da cadeia leve e pesada maduras que mostram pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência para as regiões variáveis da cadeia leve e pesada maduras dos anticorpos humanizados exemplificados 9D5 H1L1, H1L2, H1L3, H1L4, H1L5, H2L1, H2L2, H2L3, H2L4, H2L5, H2bL1, H2bL2, H2bL3, H2bL4, H2bL5, H3L1, H3L2, H3L3, H3L4, H3L5, H3bL1, Hb3L2, H3bL3, Hb3L4, H3blL5, H4L1, H4L2, H4L3, H4L4, H4L5, H4bL1, H4bl.2, H4bL3, H4bLA4, H4bL5, H5L1, H5L2, H5L3, H5L4, ou H5L5.
[00198] As posições da framework das regiões variáveis estão de acordo com a numeração Kabat, salvo indicação em contrário. Outras variantes tais tipicamente diferem das sequências das cadeias pesadas e leves Hu9D5 exemplificadas por um pequeno número (por exemplo, tipicamente não superior a 1,2,3,5, 10 ou 15) de substituições, exclusões ou inserções. Tais diferenças estão geralmente na framework, mas também podem ocorrer nas CDRs.
[00199] Os anticorpos Hu1l4G8 exemplificados incluem quaisquer permutações ou combinações das regiões variáveis da cadeia leve e pesada madura exemplificativa (por exemplo, VHv1/VLv1 ou H1L1, VHv1/VLv2 ou H1L2, VHv1/VLv3 ou H1L3, VHV2NLV1 ou H2L1, VHv2/VLv2 ou H2L2, VHv2/VLv3 ou H2L3, VHv3/VLvl ou H3L1, VHv3/VLv2 ou H3L2 e VHv3/VLv3 ou H3L3).
[00200] A invenção fornece formulações de variantes de anticorpos 14G8 humanizados em que a região variável da cadeia pesada madura humanizada mostra pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com um Hu14G8VHv2 (Hu14G8 H2) (SEQ ID NO: 65) e a região variável da cadeia leve madura humanizada mostra pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para um Hu14G8VLv3 (Hu14G8L3) (SEQ ID NO: 76). Em alguns desses anticorpos, são retidos pelo menos 1, 2, 3, 4 ou todas as 5 das mutações reversas ou outras mutações em Hu14G8 H2L3. A invenção também fornece variantes dos outros anticorpos 14G8 humanizados exemplificados. Tais variantes possuem regiões variáveis da cadeia leve e pesada maduras que mostram pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência para as regiões variáveis da cadeia leve e pesada maduras dos anticorpos humanizados exemplificativos 14G8 H1L1, H1L2, H1L3, H2L1, H2L2, H2L3, H3L1, H3L2, ou H3L3.
[00201] Em alguns anticorpos, pelo menos uma das posições H1 e H47 na região Vh é ocupada por E e L, respectivamente. Em alguns anticorpos, as posições H1 e H47 na região Vh são ocupadas por E L, respectivamente, como em Hu14G8VHv2 e Hu14G8VHv3. Em alguns anticorpos, pelo menos uma das posições H3 e H105 na região Vh é ocupada por K e T, respectivamente. Em alguns anticorpos, as posições H3 e H105 na região Vh são ocupadas por K e T, respectivamente, como em Hu14G8VHv1. Em alguns anticorpos, a posição L36 na região de Vk é ocupada por F, como em Hu14G8VLv2. Em alguns anticorpos, pelo menos uma das posições L8, L9, L19, L26, L60 e L70 na região de Vk é ocupada por A, P, V, S, Se A, respectivamente. Em alguns anticorpos, as posições L8, L9, L19 e L70 na região Vk são ocupadas por A, P, Ve A, respectivamente, como em Hu14G8VLv1. Em alguns anticorpos, as posições L26 e L60 na região de Vk são ocupadas por S, como em Hu14G8VLv3. As regiões CDR de tais anticorpos humanizados podem ser idênticas ou substancialmente idênticas às regiõêês CDR do anticorpo doador de camundongo 14G8. As regiões CDR podem ser definidas por qualquer definição convencional (por exemplo, Chothia, ou composto Chothia e Kabat), por exemplo, conforme definidos por Kabat.
[00202] As posições da framework das regiões variáveis estão de acordo com a numeração Kabat, salvo indicação em contrário. Outras variantes tais tipicamente diferem das sequências das cadeias pesadas e leves Hu14G8 exemplificadas por um pequeno número (por exemplo, tipicamente não superior a 1,2,3,5, 10 ou 15) de substituições, exclusões ou inserções. Tais diferenças estão geralmente na framework, mas também podem ocorrer nas CDRs.
[00203] Uma possibilidade de variação adicional em variantes humanizadas de 14G8 ou 9G5 é de mutações reversas (backmutations) adicionais nas frameworks da região variável. Muitos dos resíduos de framework que não estão em contato com as CDR no mAb humanizado podem acomodar substituições de aminoácidos das posições correspondentes do mAb de camundongo doador ou outros anticorpos de camundongo ou humanos, e mesmo muitos resíduos de contato CDR potenciais também são suscetíveis de substituição. Mesmo os aminoácidos dentro das CDRs podem ser alterados, por exemplo, com resíduos encontrados na posição correspondente da sequência aceitadora humana usada para fornecer framework de regiões variáveis. Além disso, podem ser utilizadas sequências aceitadoras humanas alternativas, por exemplo, para a cadeia pesada e/ou leve. Se diferentes sequências aceitadoras forem usadas, uma ou mais das mutações reversas recomendadas acima podem não ser realizadas porque os resíduos correspondentes do doador e do aceitador já são os mesmos sem mutações reversas.
[00204] De preferência, as substituições ou mutações reversas em variantes humanizadas de 14G8 ou 9G5 (conservadoras ou não conservadoras) não têm um efeito substancial sobre a afinidade ou potência de ligação do mAb humanizado, ou seja, a sua capacidade de se ligar a TTR monomérica (por exemplo, a potência em alguns ou todos os ensaios descritos nos presentes exemplos da variante de anticorpo 14G8 ou 9G5 humanizado é essencialmente o mesmo ou pelo menos 90% de, ou seja, dentro do erro experimental, como o anticorpo murino 14G8 ou 9G5).
C. Seleção da Região Constante
[00205] As regiões variáveis das cadeias pesada e leve de anticorpos humanizados podem ser ligadas a pelo menos uma porção de uma região constante humana. A escolha de uma região constante depende, em parte, da citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos, fagocitose celular dependente de anticorpo e/ou citotoxicidade dependente de complemento são desejadas. Por exemplo, os isotipos humanos IgG1 e IgG3 têm citotoxicidade dependente de complemento e os isotipos humanos IgG2 e IgG4 não. IgG1 e IgG3 humanos também induzem funções efetoras mediadas por células mais fortes do que IgG2 e IgG4 humanos. As regiões constantes da cadeia leve podem ser lambda ou kappa.
[00206] Um ou vários aminoácidos no terminal amino ou carboxi da cadeia leve e/ou cadeia pesada, tal como a lisina do terminal C da cadeia pesada, podem estar faltando ou derivatizados em uma proporção ou na totalidade das moléculas. As substituições podem ser feitas nas regiões constantes para reduzir ou aumentar a função efetora, tais como citotoxicidade mediada pelo complemento ou ADCC (ver, por exemplo, Winter et al., Patente US Nº 5.624.821; Tso et al., Patente US Nº 5.834.597; e Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 103: 4005, 2006), ou para prolongar a meia-vida em seres humanos (ver, por exemplo, Hinton et al, J. Biol. Chem. 279:6213, 2004). As substituições exemplificativas incluem uma Gln na posição 250 e/ou uma Leu na posição 428 (numeração EU é usada neste parágrafo para a região constante) para aumentar a meia-vida de um anticorpo. Substituição em qualquer ou todas as posições 234, 235, 236 e/ou 237 reduz a afinidade para os receptores Fcy, particularmente o receptor FcyRI (Ver, por exemplo, US
6.624.821). Uma substituição de alanina nas posições 234, 235, e 237 da IgG1 humana pode ser usada para reduzir as funções efetoras. Alguns anticorpos têm substituição de alanina nas posições 234, 235 e 237 da IgG1 humana para reduzir as funções efetoras. Opcionalmente, as posições 234, 236 e/ou 237 em I1gG2 humana são substituídas com alanina e a posição 235 com glutamina (ver, por exemplo, US 5.624.821). Em alguns anticorpos, uma mutação numa ou mais das posições 241, 264, 265, 270, 296, 297, 322, 329 e 331 por numeração EU de IgG1 humana é usada. Em alguns anticorpos, uma mutação numa ou mais das posições 318, 320, e 322 por numeração EU de IgG1 humana é usada. Em alguns anticorpos, as posições 234 e/ou 235 são substituídas com alanina e/ou a posição 329 é substituída por glicina. Em alguns anticorpos, as posições 234 e 235 são substituídas com alanina, tal como em SEQ ID NO: 102. Em alguns anticorpos, o isotipo é I9gG2 ou IgG4 humano.
[00207] Uma região constante de kappa da cadeia leve humana exemplificativa tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 104. A arginina N- terminal da SEQ ID NO: 104 pode ser omitida, caso em que a região constante de kappa da cadeia leve tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 105.
Anticorpos podem ser expressos como tetrâmeros que contém duas cadeias leves e duas pesadas, como distintas cadeias pesadas, leves, como Fab, Fab', F(ab') 2 e Fv, ou como anticorpos de cadeia única, em que domínios variáveis da cadeia leve e pesada maduros são ligados através de um espaçador.
[00208] Regiões constantes humanas mostram uma variação alotípica e uma variação isoalotípica entre indivíduos diferentes, isto é, as regiões constantes podem diferir de indivíduo para indivíduo em uma ou mais posições polimórficas. Isoaolotipos diferem dos alotipos em que os soros que reconhecem um isoalotipo se ligam a uma região não polimórfica de um ou mais outros isotipos. A referência a uma região constante humana inclui uma região constante com qualquer alotipo natural ou qualquer permutação de resíduos que ocupam posições em alotipos naturais. Preferem-se sequências da cadeia pesada exemplificativas, incluindo aquelas que possuem as sequências de aminoácidos SEQ ID NOs: 101-103 com SEQ ID NO: 103, que é do alotipo I9G1 G1m3. A referência a uma região constante humana inclui uma região constante com qualquer alotipo natural ou qualquer permutação de resíduos que ocupam posições em alotipos naturais.
D. Expressão de anticorpos recombinantes
[00209] Os anticorpos podem ser produzidos por expressão recombinante. Os ácidos nucleicos que codificam os anticorpos podem ser otimizados por códons para a expressão no tipo de célula desejado (por exemplo, células CHO ou Sp2/0). Construtos de ácido nucleico recombinante incluem tipicamente uma sequência de controle de expressão operativamente ligada às sequências de codificação de cadeias de anticorpo, incluindo regiões promotoras naturalmente associadas ou heterólogas. As sequências de controle de expressão podem ser sistemas promotores eucarióticos em vetores capazes de transformar ou transfectar células eucarióticas hospedeiras. Uma vez que o vetor foi incorporado no hospedeiro apropriado, o hospedeiro é mantido em condições adequadas para expressão de nível alto das sequências de nucleotídeos e a coleção e a purificação dos anticorpos de reação cruzada. O vetor ou vetores que codificam as cadeias de anticorpos também podem conter um gene selecionável, tal como diidrofolato redutase, para permitir a amplificação do número de cópias dos ácidos nucleicos que codificam as cadeias de anticorpo.
[00210] E. coli é um hospedeiro procariótico particularmente útil para a expressão de anticorpos, particularmente os fragmentos de anticorpo. Micróbios, tais como levedura, também são úteis para expressão. Saccharomyces é um hospedeiro de levedura preferido com vetores adequados tendo sequências de controle de expressão, uma origem de replicação, sequências de terminação e semelhantes, como desejado. Os promotores típicos incluem 3-fosfoglicerato quinase e outras enzimas glicolíticas. Promotores de levedura indutíveis incluem, dentre outros, promotores a partir de álcool desidrogenase, isocitocromo C e enzimas responsáveis pela utilização de maltose e a galactose.
[00211] As células de mamíferos podem ser utilizadas para expressar os segmentos de nucleotídeos que codificam as imunoglobulinas ou fragmentos destes. Ver Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987). Uma variedade de linhagens celulares hospedeiras adequadas capazes de secretar proteínas heterólogas intactas foram desenvolvidas na técnica e incluem as linhagens celulares CHO, várias linhagens celulares COS, células HeLa, células HEK293, células L, e mielomas não-produtores de anticorpos, incluindo SP2/0 e NSO. Pode ser vantajosa a utilização de células não humanas. Vetores de expressão para essas células podem incluir sequências de controle de expressão, tais como uma origem de replicação, um promotor, um potencializador (Queen et al., Inmunol. Rev. 89:49 (1986)) e sítios de informação de processamento necessários, como sítios de ligação de ribossomos, sítios de divisão de RNA, sítios de poliadenilação e sequências de terminação transcricional. As sequências de controle de expressão adequadas são os promotores derivados de genes endógenos, citomegalovírus, SV40, adenovírus, vírus do papiloma bovino e semelhantes. Ver Co et al., J. Immunol. 148:1149 (1992).
[00212] Uma vez que vetor(es) que codificam cadeias pesadas e leves de anticorpo sejam introduzidos em cultura de células, agrupamentos de células podem ser triados para uma produtividade de crescimento e qualidade do produto em meio livre de soro. Agrupamentos de células produtoras superiores podem então ser submetidos a clonagem de célula única baseada em FACS para gerar linhagens monoclonais. Produtividades específicas superiores a 50 pg ou 100 pg por célula por dia, que correspondem a títulos de produtos de maior do que 7,5 g/L de cultura, podem ser vantajosas. Os anticorpos produzidos por clones de células individuais também podem ser testados quanto às propriedades de turvação, de filtragem, PAGE, IEF, varredura UV, HP-SEC, o mapeamento de carboidrato- oligossacarídeos, espectrometria de massa, e ensaio Bining, tais como ELISA ou Biacore. Um clone selecionado pode então ser depositado em vários frascos e armazenado em congelamento para uso posterior.
[00213] Metodologia para a produção comercial de anticorpos incluindo a otimização de códons, seleção de promotores, elementos de transcrição, e terminadores, clonagem de célula única livre de soro, depósitos de células, a utilização de marcadores de seleção para a amplificação do número de cópias, terminador de CHO, clonagem de célula única livre de soro, melhoria dos títulos de proteína (ver, por exemplo, US 5.786.464, US 6.114.148, US 6.063.598, US
7.569.339, WO2004/050884, WO2008/012142, WO2008/012142, WOZ2005/019442, WO2008/107388 e WO2009/027471, e US 5.888.809).
[00214] Uma vez expressos, os anticorpos podem ser purificados de acordo com procedimentos padrão da técnica, incluindo a captura de proteína A, cromatografia em coluna (por exemplo, interação hidrofóbica ou de troca iônica), pH baixo para inativação viral e semelhantes (ver geralmente, Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)).
[00215] Os anticorpos utilizados para preparar as formulações divulgadas são tipicamente isolados ou purificados, ou seja, substancialmente livres de material celular ou outras proteínas contaminantes das células em que são produzidos, ou substancialmente livres de precursores químicos ou outras substâncias químicas quando sintetizados quimicamente. Por exemplo, um anticorpo que é substancialmente livre de material celular inclui preparações de anticorpo tendo menos do que cerca de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1%, ou menos (em peso seco) de proteína contaminante. Quando um anticorpo é produzido de forma recombinante, é também substancialmente livre de meio de cultura de tal modo que o meio de cultura representa menos do que cerca de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1%, ou menos, do volume da preparação de proteína. Quando um anticorpo é produzido por síntese química, é de preferência substancialmente livre ou separado de precursores químicos ou outros produtos químicos envolvidos na síntese da proteína. Por conseguinte, tais preparações de anticorpos têm menos do que cerca de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1%, ou menos (em peso seco) de precursores químicos ou outros compostos que não a substância de droga de anticorpo. O anticorpo expresso de forma recombinante pode ser purificado por métodos, tais como, por exemplo, cromatografia de afinidade, tratamento ácido, filtração profunda, cromatografia de troca aniônica, cromatografia de troca catiônica, nanofiltração, ultrafiltração, diálise e diafiltração.
[00216] A substância de droga de anticorpo purificada pode ser ajustada a uma solução que compreende qualquer uma das formulações descritas neste documento, diluídas para a concentração desejada e armazenadas até estarem prontas para utilização. Opcionalmente, a formulação pode ser armazenada na forma concentrada até estar pronta para utilização.
E. Conjugados
[00217] Os anticorpos utilizados nas formulações divulgadas podem ser acoplados com uma porção terapêutica, tal como um agente citotóxico, um agente radioterapêutico, um imunomodulador, um segundo anticorpo (por exemplo, para formar um heteroconjugado de anticorpo), ou qualquer outro agente biologicamente ativo que facilita ou potencializa a atividade de um 14G8 ou 9G5 quimérico, folheado ou humanizado. Exemplos de porções terapêuticas adequadas incluem drogas que reduzem os níveis de TTR, estabilizam a estrutura tetramérica nativa de TTR, inibem a agregação de TTR, interrompem a formação de fibrila ou amiloide da TTR ou neutralizam a toxicidade celular.
[00218] Os anticorpos divulgados neste documento também podem ser acoplados ou conjugados com um ou mais outros anticorpos (por exemplo, para formar anticorpos heteroconjugados). Estes outros anticorpos podem ligar-se a epítopos diferentes dentro de TTR ou uma porção deste ou podem ligar-se a um antígeno alvo diferente.
[00219] Os anticorpos também podem ser acoplados com um marcador detectável. Tais anticorpos podem ser usados, por exemplo, para diagnosticar uma amiloidose por TTR, para monitorar a progressão de uma amiloidose por TTR e/ou para avaliar a eficácia do tratamento. Tais anticorpos são particularmente úteis para realizar tais determinações em sujeitos que têm ou são suscetíveis a uma amiloidose por TTR, ou em amostras biológicas apropriadas obtidas a partir de tais sujeitos. Os marcadores detectáveis representativos que podem ser acoplados ou ligados a um anticorpo incluem várias enzimas, tais como peroxidase de rabanete, fosfatase alcalina, beta-galactosidase ou acetilcolinesterase; grupos prostéticos, tais como estreptavidina/biotina e avidina/biotina; materiais fluorescentes, tais como umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina fluoresceína, cloreto de dansil ou ficoeritrina; materiais luminescentes, como luminol; materiais bioluminescentes, como luciferase, luciferina e aequorina; materiais radioativos, como o ítrioºº (90Y), radiosilver-111 (radioisótopo de prata), radiosilver-199 (radioisótopo de prata), Bismuto2?'3, iodo (1311, 125], 1231, 1211), carbono (ºC), enxofre (SS), trítio (?H), índio (ln, ln, ln, 11h), tecnécio (Tc), tálio (2º Ti), gálio (ººGa, 6”Ga), paládio (1*ºPd), molibdênio (Mo), xenônio (*3%Xe), flúor (*6F), Sm, *”7Lu, 1*ºGd, **ºPm, 1%ºLa, 175Yb, *66Ho, ºY, Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rn, Ru, Ge, 57Co, Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, Mn, 75Se, *1?Sn e "Estanho; metais emissores de pósitrons usando várias tomografias de emissão de pósitrons; íons de metal paramagnéticos não radioativos; e moléculas que são radiomarcadas ou conjugadas com radioisótopos específicos.
[00220] A ligação dos radioisótopos aos anticorpos pode ser realizada com quelatos bifuncionais convencionais. Para a ligação de radiosilver-111 (radioisótopo de prata) e de radiosilver-199 (radioisótopo de prata), podem ser usados ligantes à base de enxofre. Ver Hazra et al., Cell Biophys. 24-25:1-7 (1994). A ligação de radioisótopos de prata pode envolver a redução da imunoglobulina com ácido ascórbico. Para radioisótopos, tais como 111In e 90Y, ibibritumomabe tiuxetano pode ser usado e reagirá com esses isótopos para formar 111In- ibritumomabe tiuxetano e 90Y-ibritumomabe tiuxetano, respectivamente. Ver Witzig, Cancer Chemother. Phannacol., 48 Suppl 1:891-S95 (2001).
[00221] As porções terapêuticas, outras proteínas, outros anticorpos e/ou marcadores detectáveis podem ser acopladas ou conjugadas, direta ou indiretamente, através de um intermediário (por exemplo, um ligante), a um anticorpo da invenção. Ver por exemplo, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For
Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et a/. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery," in Controlled Drug Delivery (2º Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et a/. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985); and Thorpe et al., Immunol. Rev., 62:119-58 (1982). Os ligantes adequados incluem, por exemplo, ligantes cliváveis e não-cliváveis. Diferentes ligantes que liberam porções terapêuticas acopladas, proteínas, anticorpos e/ou marcadores detectáveis em condições ácidas ou de redução, quando exposto às proteases específicas ou sob outras condições definidas, podem ser empregados.
V. Formulações
[00222] As formulações (também conhecidas como composições farmacêuticas) da invenção compreendem qualquer um dos anticorpos monoclonais descritos neste pedido, incluindo a versão quimérica, folheada ou humanizada do anticorpo 14G8 ou 9G5, um tampão, um ou mais açúcares e/ou poliois e um surfactante, e tem um pH em um intervalo de cerca de 4,5 a cerca de 7,5. Outros componentes (além da água em formulações líquidas), como, por exemplo, arginina, lisina, NaCl, sorbitol ou manitol podem ou não estar presentes. As formulações podem estar na forma líquida ou liofilizada. As formulações líquidas podem se referir a uma formulação antes da liofilização ou após a reconstituição de uma formulação liofilizada. Em geral, os componentes de uma formulação diferente da água ocorrem nas mesmas proporções relativas em peso ou moles em uma formulação liofilizada e em uma formulação líquida antes da liofilização. Da mesma forma, os componentes da formulação após a reconstituição com água estão em geral nas mesmas proporções relativas que na pré-liofilização da formulação ou na formulação liofiizada, mas as concentrações absolutas podem mudar em proporção aos volumes relativos da formulação pré e pós-reconstituição. A pós- reconstituição do volume pode ser a mesma, menor ou maior que a pré-liofilização do volume. Normalmente, o volume pós-reconstituição é o mesmo dentro de um fator de 5, 3, 2, 1,5, 1,2 ou 1,1 da pré-liofiização do volume. Se, por exemplo, o volume pós-reconstituição for o dobro da pré-liofiização por volume, as concentrações dos componentes são aproximadamente metade da pós- reconstituição como pré-liofilização.
[00223] Nas formulações líquidas, o anticorpo pode estar presente em uma concentração em um intervalo de cerca de 10-100, 15-80, 20-65, 25-75, 40-65, 45- 65 mg/mL, entre outros. Em algumas formulações, o anticorpo está presente a 55- 65 mg/ml de pré-liofilização e 45-55 mg/ml após a reconstituição. Em algumas formulações, o anticorpo está presente a 50 mg/ml após a reconstituição.
[00224] As formulações incluem um tampão, como, por exemplo, citrato, histidina, fosfato ou succinato, para conferir um intervalo de pH de cerca de 4,5 a cerca de 7,5, por exemplo, um pH de 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 ou 7,0. Algumas formulações têm um pH entre cerca de 5,5 a cerca de 7,0, ou cerca de 5,5 a cerca de 6,5, ou cerca de 5,5 a cerca de 6,0, ou cerca de 6,0 a cerca de 6,5, ou cerca de 6,0 a cerca de 7,0, ou cerca de 5,75-6,25. Algumas formulações têm um pH de cerca de 6,0 e algumas formulações têm um pH de cerca de 6,5. Em algumas formulações, a histidina está presente em uma concentração em um intervalo de cerca de 10-30 mM, ou 15-25 mM, por exemplo, em uma concentração de cerca de 10 mM, 20 mM ou 25 mM. Em algumas formulações, o citrato está presente em uma concentração em um intervalo de cerca de 10 a 30 mM, por exemplo, a uma concentração de cerca de 10 mM ou 20 mM. Em algumas formulações, o fosfato está presente a uma concentração de cerca de 20 mM. Em algumas formulações, o succinato está presente a uma concentração de cerca de 20 mM.
[00225] As formulações incluem um açúcar/poliol, tal como, por exemplo, trealose ou sacarose. O açúcar/poliol pode estar presente em cerca de 30 mM a cerca de 260 mM, ou cerca de 150-350 mM, ou cerca de 200-300 mM, ou cerca de 220-260 mM, ou cerca de 230-250 mM, ou cerca de 205-240 mM ou cerca de 205- 250 mM ou cerca de 205-260 mM, ou, ou cerca de 230-250 mM, ou cerca de 230- 240 mM, ou cerca de 30 mM, cerca de 205 mM ou cerca de 240 mM. Em algumas formulações, a trealose está presente em uma concentração em um intervalo de cerca de 205-260 mM, cerca de 205-250 mM ou cerca de 205-240 mM, como, por exemplo, cerca de 205 mM, cerca de 230 mM ou cerca de 240 mM. Em algumas formulações, a sacarose está presente em uma concentração em um intervalo de cerca de 30-260 mM, cerca de 30-250 mM ou cerca de 30-240 mM, como, por exemplo, cerca de 30 mM, cerca de 230 mM ou cerca de 240 mM.
[00226] As formulações incluem um surfactante, como, por exemplo, polissorbato 20 (PS20), polissorbato 80 (PS80) ou um poloxâmero, por exemplo, poloxâmero 188 (também conhecido como PX188, PLURONIC F68 ou FLOCOR). O surfactante pode estar presente em uma concentração no intervalo de cerca de 0,01%-0,1%, 0,02%-0,04% ou 0,03%-0,05% em peso. Por exemplo, a concentração pode ser de 0,005%, 0,01%, 0,015%, 0,02%, 0,025%, 0,03%, 0,035%, 0,04%, 0,045%, ou 0,05% em peso. Poloxâmeros são copolímeros triblocos compostos de uma cadeia hidrofóbica central de polioxipropileno(poli(óxido de propileno)) flanqueado por duas cadeias hidrofílicas de polioxietileno (polilóxido de etileno)). Algumas formulações incluem PS20 a cerca de 0,02% p/p, PS80 a cerca de 0,02% p/p ou poloxâmero a cerca de 0,04%, por exemplo, poloxâmero PX188 a 0,04% em peso.
[00227] Algumas dessas formulações são caracterizadas por uma osmolaridade no intervalo de cerca de 270 mOsm/kg a cerca de 330 mOsm/Kkg, como, por exemplo, cerca de 335 mOsm/kg.
[00228] Uma formulação exemplificativa caracterizada por um pH no intervalo de cerca de 5,0 a cerca de 6,5 inclui (a) uma versão quimérica, folheada ou humanizada do anticorpo 14G8 compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 61 e uma luz madura região variável da cadeia compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e/ou L26 pela numeração Kabat podem ser N ou S, ou uma versão quimérica, folheada ou humanizada do anticorpo anti-TTR 9G5 que compreende uma região variável madura da cadeia pesada compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO: 16, em que o anticorpo está presente em uma concentração no intervalo de cerca de 25 mg/mL a cerca de 75 mg/mL; (b) histidina, citrato, fosfato ou succinato presente a uma concentração de cerca de 20 mM; (c) sacarose ou trealose presente em uma concentração no intervalo de cerca de 295 mM a cerca de 240 mM ou se o açúcar estiver ausente, arginina a 160 mM está presente; e (d) um surfactante presente em uma concentração no intervalo de cerca de 0,01% a cerca de 0,1% em peso; desde que (i) se houver histidina ou tampão succinato, o pH seja de cerca de 6,0, (ii) se houver tampão de fosfato, o pH seja de cerca de 6,5 e se houver histidina e trealose, o surfactante seja PS80 ou PS20, desde que se PS20 estiver presente, L-arginina a 25 mM também estará presente.
[00229] Algumas formulações são essencialmente livres de manitol ou sorbitol ou ambos, manitol e sorbitol. Em algumas formulações, o tampão compreende histidina, como, por exemplo, um tampão de histidina. Em algumas dessas formulações, o açúcar pode estar presente em um intervalo de cerca de 230 mM a cerca de 240 mM. Em algumas formulações, o açúcar é sacarose e o surfactante é PS20 ou PX188, por exemplo PS20 a uma concentração de 0,02% p/p ou PX188 a uma concentração de 0,04% p/p. Em outras formulações, o açúcar é trealose. Em algumas formulações, 160 mM de arginina está presente. O tampão de algumas formulações pode ser citrato. Em algumas dessas formulações, o açúcar está presente a 230 mM. Em algumas dessas formulações, o surfactante é 0,02% de PS20, Alternativamente, o tampão pode ser fosfato. Em algumas dessas formulações, a sacarose está presente. Em outras formulações, o tampão é succinato. Em algumas dessas formulações, a sacarose está presente. Em algumas formulações compreendendo histidina, a trealose está presente, por exemplo, a uma concentração de 205 mM.
[00230] As formulações exemplificativas incluem cerca de (a) citrato a 20 MM, trealose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p de pH 5; (b) histidina a 20 mM, sacarose a 230 mM e 0,02% p/p de PS20; (c) fosfato a 20 mM, sacarose a 230 mM e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (d) citrato a 20 mM, sacarose a 230 mM e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (e) histidina a 20 mM, trealose a 230 mM e PS80 a 0,02% p/p; (f) histidina a 20 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 160 mM; (g) histidina a mM, sacarose a 240 mM e 0,04% p/p de PX188; (h) succinato a 20 mM, sacarose a 240 mM e PS20 a 0,022% p/p a pH 6,0 e (i) histidina a 20 mM, trealose a 205 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 25 MM. Algumas dessas formulações consistem essencialmente no anticorpo e (a) citrato a 20 mM, trealose a 230 mM e PS20 a 0,02% p/p de pH 5; (b) histidina a 20 mM, sacarose a 230 mM e 0,02% p/p de PS20; (c) fosfato a 20 mM, sacarose a 230 mM e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (d) citrato a 20 MM, sacarose a 230 mM e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (e) histidina a 20 mM, trealose a 230 mM e PS80 a 0,02% p/p; (f) histidina a 20 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 160 mM; (g) histidina a 20 mM, sacarose a 240 mM e 0,04% p/p de PX188; (h) succinato a 20 mM, sacarose a 240 mM e PS20 a 0,022% p/p a pH 6,0 ou (i) histidina a 20 mM, trealose a 205 mM, PS20 a 0,02% p/p e L- arginina a 25 mM. Por exemplo, a formulação pode consistir essencialmente no anticorpo e cerca de: (a) histidina a 20 MM, sacarose a 240 mM e PX188 a 0,04% p/p; (b) succinato a 20 mM, sacarose a 240 mM e PS20 a 0,02% p/p a pH 6,0; ou (c) histidina a 20 mM, trealose a 205 mM, PS20 a 0,02% p/p e L-arginina a 25 mM.
[00231] Por exemplo, a formulação pode incluir (a) um anticorpo compreendendo uma cadeia leve madura com a sequência de aminoácidos estabelecida como SEQ ID NO:65 e uma cadeia pesada madura compreendendo uma sequência de aminoácidos estabelecida como SEQ ID NO:76, que está presente a uma concentração de cerca de 45-65 mg/mL; (b) um tampão de histidina a uma concentração de cerca de 15-25 mM; (c) sacarose a uma concentração de cerca de 220-260 mM; (d) poloxâmero a uma concentração de cerca de 0,03- 0,05%; e um pH de cerca de 5,75-6,25. A formulação pode incluir (a) um anticorpo compreendendo uma cadeia leve madura com a sequência de aminoácidos estabelecida como SEQ ID NO:65 e uma cadeia pesada madura compreendendo uma sequência de aminoácidos estabelecida como SEQ ID NO:76, que está presente a uma concentração de cerca de 45-65 mg/mL; (b) um tampão de histidina a uma concentração de cerca de 20 mM; (c) sacarose a uma concentração de cerca de 240 mM; (d) poloxâmero a uma concentração de cerca de 0,04%; e um pH de cerca de 6. Por exemplo, a formulação pode consistir essencialmente em um anticorpo compreendendo uma cadeia leve madura com a sequência de aminoácidos estabelecida como SEQ ID NO:65 e uma cadeia pesada madura compreendendo uma sequência de aminoácidos estabelecida como SEQ ID NO:76 e cerca de 20 mM de histidina, cerca de 240 mM de sacarose e cerca de 0,04% p/p de PX188.
[00232] As formulações liofilizadas incluem qualquer um dos anticorpos descritos neste documento, (b) um tampão, tal como histidina; (c) um açúcar/poliol, tal como sacarose; e (d) um surfactante, tal como um poloxâmero. Em algumas formulações liofilizadas, qualquer água residual constitui menos de 5% em peso e em algumas dessas formulações menos de 2 ou 1% em peso da formulação. As quantidades de componentes dependem do volume liofilizado, mas podem ser, por exemplo, cerca de 100-300, 150-250 ou 225-275 mg de anticorpo, cerca de 15-35 ou 15-19 mg de tampão e cerca de 0,2-2,5 ou 2,0-2,5 mg de surfactante e cerca de 400-490 mg de açúcar ou poliol. Uma formulação liofilizada exemplificativa inclui 225-275 mg de um anticorpo 14G8 humanizado, cerca de 15-19 mg de L-histidina, cerca de 400-490 mg de sacarose e cerca de 2,0-2,5 mg de poloxâmero, ou os mesmos componentes presentes nas mesmas proporções, mas em quantidades diferentes. As formulações liofilizadas podem ser preparadas a partir de qualquer uma das formulações líquidas descritas acima. Uma dessas formulações liofilizadas consiste essencialmente em cerca de 250 mg de um anticorpo 14G8 humanizado, cerca de 16,8 mg de L-histidina, cerca de 2,2 mg de poloxômero PX188 e cerca de 445,3 mg de sacarose ou quantidades diferentes dos mesmos componentes nas mesmas proporções. As formulações liofilizadas podem ser armazenadas congeladas (por exemplo, -20ºC), no frio (por exemplo, 4ºC) ou em temperatura ambiente (por exemplo, 22ºC). Um tamanho de frasco exemplificativo para uma formulação liofilizada é de 20 ml.
[00233] As formulações liofilizadas podem ser reconstituídas combinando- se com líquido adequado, por exemplo, água estéril. As formulações liofilizadas podem ser reconstituíveis com água estéril a uma solução livre de partículas pelo olho em menos de 5, 4, 3, 2 minutos. A reconstituição pode ser medida no mesmo volume (+/- 20%) que o da formulação líquida antes da liofilização. A reconstituição para um determinado volume final desejado, por exemplo, cerca de 5 ml, pode ser alcançada adicionando uma certa quantidade de líquido, levando em consideração o volume ocupado pelos componentes secos. Por exemplo, algumas formulações liofilizadas podem ser reconstituídas para um volume total de cerca de 5 ml adicionando cerca de 4,9 ml de água estéril. A reconstituição pode resultar nos componentes que possuem aproximadamente as mesmas concentrações, relativas e absolutas, que antes da liofiização ou podem resultar em aproximadamente as mesmas concentrações relativas que antes da liofiização, mas concentrações absolutas diminuídas ou aumentadas. Algumas formulações liofiizadas são constituídas em um volume de cerca de 1,2 vezes o volume da formulação pré- liofilizada, resultando em uma diminuição das concentrações de cerca de 17%. Algumas formulações reconstituídas incluem uma concentração de anticorpo de cerca de 40-60 mg/mL, por exemplo, cerca de 50 mg/mL; (b) um tampão de histidina presente a uma concentração de cerca de 15-25 mM, por exemplo, cerca de 20 MM; (c) sacarose presente a uma concentração de cerca de 200-300 mM, por exemplo, cerca de 240 mM; (d) poloxâmero presente a uma concentração de cerca de 0,01% a cerca de 0,1% em peso, por exemplo, cerca de 0,04% em peso; e (e) um pH de cerca de 5,5-6,5, por exemplo, cerca de 6,0.
[00234] As formulações liofilizadas reconstituídas ou líquidas podem ser substancialmente isotônicas, implicando uma osmolalidade de cerca de 250-350 mOsm/kg de água. Algumas formulações têm uma osmolalidade de cerca de 335 mOsm/Kkg. Algumas formulações têm uma osmolalidade de 270-300 mOsm/Kkg. Formulações liofilizadas líquidas ou reconstituídas também pode ser hipertônicas > 350 mOsm/kg de água ou hipotônicas (<250 mOsm/kg de água).
[00235] Formulações líquidas (normalmente após reconstituição) podem ser adicionadas à bolsa de infusão contendo um diluente, tal como solução salina normal ou solução de Ringer, antes da administração ao paciente. O volume da bolsa de infusão é geralmente relativamente grande (por exemplo, 50 ml a 1 L, ou 100-500 ml) em comparação com o volume da formulação líquida ou formulação liofilizada constituída (por exemplo, 1-10 mL). Vários líquidos podem ser usados na bolsa de infusão, tais como solução salina normal, solução de Ringer com lactato, ou solução de dextrose a 5%, cada um dos quais é substancialmente isotônico. Em um regime exemplificativo, cerca de 5 ml de formulação liofilizada líquida ou reconstituída são injetados através da porta de uma bolsa de 100 ml de solução salina normal e administrados por infusão intravenosa durante um período de cerca de uma hora a uma taxa de fluxo de cerca de 1,75 ml/min.
[00236] As formulações destinadas à administração a seres humanos são preferencialmente feitas sob boas práticas de fabricação (GMP) aprovadas ou aprovadas pelo FDA ou por uma agência reguladora de um país que não seja os Estados Unidos, por exemplo, a Agência Europeia de Medicamentos, para a preparação de fármacos para administração a seres humanos. Tipicamente, as formulações são esterilizadas, por exemplo, como conseguido por filtração estéril através de um filtro de 0,2 um ou 0,22 um.
[00237] A estabilidade da formulação pode ser avaliada após armazenamento na forma liofilizada seguida de reconstituição. As formulações exemplificativas são estáveis a 38ºC-42ºC (por exemplo, conforme avaliadas por cromatografia de exclusão de tamanho de alto desempenho (HPSEC)) após armazenamento em forma liofilizada por pelo menos cerca de 30 dias, formulações com estabilidade a 20ºC-24ºC após armazenamento por pelo menos | ano e formulações com estabilidade a 2ºC-4ºC após armazenamento por pelo menos cerca de 3 anos. Uma formulação é considerada estável se, após incubação a uma ou mais destas combinações especificadas de tempo e temperatura, se enquadra na definição abaixo para fragmentação baixa a indetectável e/ou agregação baixa para indetectável. Mais particularmente, as formulações divulgadas exibem níveis baixos a indetectáveis de agregação de anticorpos e/ou de fragmentação, ou um aumento baixo ou indetectável na fragmentação do anticorpo e/ou agregação acima de um nível inicial (por exemplo, menor do que cerca de 10% de agregação). Algumas formulações exibem < cerca de 5% de agregação e/ou de fragmentação combinada. Uma formulação com níveis baixos a indetectáveis de fragmentação contém pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, ou 99%, do total de proteínas, por exemplo, em um único pico, tal como determinado por cromatografia de exclusão de tamanho de alta eficiência (HPSEC), ou em dois picos (que correspondem cada um às cadeias pesadas e cadeias leves do anticorpo) por Eletroforese em Gel Capilar reduzida (rCGE), representando o anticorpo não- degradado, e não contendo outros picos individuais que têm mais de 5%, mais do que 4%, mais do que 3%, mais do que 2%, mais do que 1%, ou mais do que 0,5% do total de proteína cada um. Uma formulação com níveis baixos a indetectáveis de agregação não contém mais do que cerca de 15%, não mais do que cerca de 10%, não mais do que cerca de 5%, não mais do que cerca de 4%, não mais do que cerca de 3%, não mais do que cerca de 2%, não mais do que cerca de 1%, ou não mais do que cerca de 0,5% em peso de proteína de agregação, tal como medido por cromatografia de exclusão de tamanho de elevado desempenho (HPSEC). Por exemplo, em algumas formulações, menos do que cerca de 10% do anticorpo anti-sinucleína estão presentes como um agregado. Formulações estáveis da invenção também mostram pouca ou nenhuma perda de atividade(s) biológica(s) de anticorpo com, por exemplo, afinidade de ligação mensurável por ELISA e/ou ensaio funcional adicional, que é, pelo menos, cerca de 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, ou 99% de um valor mensurável inicial. Algumas formulações têm uma afinidade de ligação que é de cerca de 60% a cerca de 140% de um valor mensurável inicial do material de referência.
VI. Métodos de Tratamento
[00238] As formulações da invenção podem ser usadas para tratar ou efetuar a profilaxia de uma doença em um paciente que tenha ou esteja em risco para a doença mediada pelo menos em parte por transtirretina (TTR) e particularmente por formas monoméricas, dobradas incorretamente, agregadas ou de fibrilas de TTR. Em alguns métodos de tratamento, o paciente foi diagnosticado com amiloidose por ATTR. Alguns desses pacientes podem ter comprometimento cardíaco ATTR e/ou comprometimento de neuropatia periférica. Alguns pacientes têm cardiomiopatia ATTR do tipo selvagem, na qual as proteínas TTR normais do tipo selvagem se agrupam e formam depósitos amiloides. Alguns pacientes têm cardiomiopatia ATTR hereditária. Alguns pacientes têm polineuropatia hereditária.
[00239] As formulações são administradas em um regime eficaz, o que significa que uma dosagem, via de administração e frequência de administração que atrasa o início, reduz a gravidade, inibe a continuação da degradação e/ou melhora, pelo menos, um sinal ou sintoma de um distúrbio a ser tratado. Se um paciente já sofre de uma doença, o regime pode ser referido como um regime terapeuticamente eficaz. Se o paciente está em risco elevado da doença em relação à população em geral, mas ainda não sente os sintomas, o regime pode ser referido como um regime profilaticamente eficaz. Em alguns casos, a eficácia terapêutica ou profilática pode ser observada em um paciente individual em relação aos controles históricos ou a experiências anteriores no mesmo paciente. Em outros casos, a eficácia terapêutica ou profilática pode ser demonstrada em um ensaio pré-clínico ou clínico em uma população de pacientes tratados em relação a uma população de pacientes não-tratados de controle.
[00240] A frequência de administração depende da meia-vida do anticorpo na circulação, a condição do paciente e da via de administração, entre outros fatores. A frequência pode ser diária, semanal, mensal, trimestral ou em intervalos irregulares em resposta a mudanças na condição ou a progressão do distúrbio do paciente sendo tratado. Uma frequência exemplificativa para a administração intravenosa é entre semanal e trimestral por uma causa contínua de tratamento, por exemplo, uma vez a cada quatro semanas, embora uma dosagem mais ou menos frequente também seja possível. Para administração subcutânea, uma frequência de dosagem exemplificativa é diária a mensal, embora uma dosagem mais ou menos frequente também seja possível.
[00241] O número de doses administradas depende do fato de o distúrbio ser agudo ou crônico e da resposta do distúrbio ao tratamento. Para distúrbios agudos ou exacerbações agudas de um distúrbio crônico, entre 1 e 10 doses muitas vezes basta. Por vezes, uma dose única de bólus, opcionalmente dividida, é suficiente para uma doença aguda ou exacerbação aguda de uma doença crônica. O tratamento pode ser repetido para a recorrência de um distúrbio agudo ou uma exacerbação aguda. Para doenças crônicas, um anticorpo pode ser administrado em intervalos regulares, por exemplo, semanal, quinzenal, mensal, trimestral, de seis em seis meses durante pelo menos 3 meses, 12 meses, 5 anos, 10 anos, ou a vida do paciente.
[00242] Um regime é considerado terapeuticamente ou profilaticamente eficaz se um paciente tratado individual alcançar um resultado mais favorável do que o resultado médio de uma população de pacientes comparáveis de controle não tratada pelos métodos da invenção, ou se um resultado mais favorável é demonstrado em doentes tratados versus pacientes de controle em um ensaio clínico controlado (por exemplo, uma fase Il, fase II/Ill ou ensaio de fase Ill) no p < 0,05 ou 0,01 ou até mesmo nível de 0,001.
[00243] As doses eficazes variam dependendo de muitos fatores diferentes, como meios de administração, local alvo, estado fisiológico do sujeito, se o sujeito é humano ou animal, outros medicamentos administrados e se o tratamento é profilático ou terapêutico.
[00244] Um intervalo de dose exemplificativo para anticorpos pode ser de cerca de 0,1 a 80 mg/kg, 0,1-30, 0,5-5 ou 1-10 mg/kg de peso corporal (por exemplo, 0,1, 0,2, 0,3, 1,0, 3,0, 10,0 ou 30,0 mg/kg) ou 10-5000, por exemplo, 10- 1500 mg como uma dose fixa. Alguns métodos aumentam a dose com o tempo. À dose pode ser aumentada em incrementos de um (ou seja, uma mudança de dose), dois, três ou mais. Pode haver 1, 2, 3 ou mais dosagens em cada nível antes do nível final. O nível final pode ser continuado por, pelo menos, 15 dosagens. Por exemplo, uma dose inicial pode estar no intervalo de 0,1 mg/kg a 3 mg/kg para três infusões, uma a cada 28 dias, depois três infusões em nível intermediário, também a cada 28 dias, seguidas de dosagem em um nível mais alto, por exemplo, 10-30 mg/kg a cada 38 horas, opcionalmente pelo menos 15 vezes. A dosagem depende da condição do paciente e da resposta ao tratamento prévio, se houver, se o tratamento é profilático ou terapêutico e se a doença é aguda ou crônica, entre outros fatores.
[00245] As formulações podem ser administradas por uma via periférica. As vias de administração incluem tópica, intravenosa, oral, subcutânea, intra-arterial, intracraniana, intratecal, intraperitoneal, intranasal ou intramuscular. Por exemplo, as vias para administração das formulações fornecidas neste documento podem ser intravenosas ou subcutâneas. A administração intravenosa pode ser, por exemplo, por infusão durante um período de 30-180 minutos, tal como 30-90 minutos, 60-120 minutos ou 90-180 minutos. Esse tipo de injeção é feito com mais frequência nos músculos do braço ou da perna. Em alguns desses métodos, o paciente pode ser pré-medicado com um analgésico ou um anti-histamínico ou difenidramina. Por exemplo, a difenidramina pode ser administrada ao paciente em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo. Alguns pacientes podem ser pré-medicados com acetominofeno em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo. Em alguns métodos, os agentes são injetados diretamente em um tecido em particular onde se acumularam os depósitos, por exemplo, por injeção intracraniana.
[00246] As formulações líquidas podem ser administradas diretamente ao paciente, por exemplo, por injeção subcutânea ou por infusão. As formulações liofilizadas são reconstituídas em um líquido, por exemplo, água estéril antes da administração ao paciente. Para infusão, a formulação líquida é introduzida em uma bolsa de fluido isotônico, por exemplo, solução salina normal. Por exemplo, uma forma de dosagem liofilizada da formulação pode ser reconstituída para um volume de cerca de 5,0 mL com água estéril e diluída em solução salina normal para infusão, por exemplo, para um volume total de infusão de 100 mL, 250 mL ou 500 mL.
[00247] Os regimes que compreendem os anticorpos formulados neste documento podem ser administrados em combinação com outras terapias a um sujeito que tem ou corre o risco de uma amiloidose mediada por transtiretina. Opcionalmente, além de administrar o anticorpo formulado neste documento, essas terapias são administradas sequencialmente ou separadamente a um sujeito em necessidade. Opcionalmente, o sujeito não recebe mais o tratamento com a formulação farmacêutica compreendendo os anticorpos formulados.
[00248] Essas terapias incluem estabilizadores de TTR, tais como tafamidis e diflunisal, terapias genéticas para suprimir a expressão de TTR e subsequente produção de proteínas de TTR, incluindo o uso de pequenos RNAs interferentes, tais como patisiran e inotersen, e oligonucleotídeos antisense, bem como degradadores amiloides, incluindo o 4"-iodo-4"-desoxidoxorrubicina (IDOX), doxiciclina, ácido tauroursodeoxicólico (TUDCA) e ciclodextrina (CyD) e anticorpos anti-SAP.
[00249] Estabilizadores de TTR, tal como tafamidis (Pfizer Vyndaquel) (ver, por exemplo, WOZ2011116123, US 9.150.489) e diflunisal (genérico), podem ser usados para manter a estrutura tetramérica solúvel normal do TTR e para limitar o número de monômeros de TTR na circulação. Por exemplo, o tafamidis está sob investigação ativa como um novo composto que se liga aos sítios de ligação à tiroxina do tetrâmero TTR, inibindo sua dissociação em monômeros e bloqueando a etapa de limitação da taxa na cascata de amiloidogênese do TTR. Diflunisal se liga e estabiliza variantes familiares comuns de TTR contra a formação de fibrilas mediadas por ácidos.
[00250] As terapias de inibição de RNA ligam o mMRNA alvo e, assim, suprimem a expressão de mMRNA e impedem a tradução da proteína correspondente. Os resultados clínicos até agora indicaram que pequenos RNA interferentes, por exemplo, patisiran ou revusiran (ver, por exemplo, WO 2016033326), e oligonucleotídeo antisense, por exemplo, inotersen (ver, por exemplo, US 8.101.743 e 9.061.044), são abordagens potentes para eliminar a produção de proteína TTR, desencadeando a degradação do MRNA de TTR ou inibindo a tradução.
[00251] Patisiran, uma terapia de siRNA está sendo investigada em um ensaio clínico multicêntrico de Fase Ill para pacientes com amiloidose por ATTR hereditária com polineuropatia (hnATTR-PN). Também está sob investigação o inotersen (IONIS-TTRRx), um oligonucleotídeo antisense administrado por via subcutânea, visando o mesmo grupo de pacientes que o patisiran.
[00252] Os oligonucleotídeos antisense (ASOs) estão sob investigação clínica por sua capacidade de inibir a expressão hepática da proteína TTR amiloidogênica. Atualmente, o composto ASO, ISIS-TTRrx está sob investigação em um ensaio clínico de fase 3, multicêntrico, randomizado, duplo-cego e controlado por placebo em pacientes com polineuropatia amiloide familiar (FAP).
[00253] Os degradadores de amiloide, tal como a terapia combinada de doxiciclina/ácido tauroursodeoxicólico, têm o potencial de remover o amiloide de TTR depositado nos órgãos. Por exemplo, doxiciclina combinada e ácido tauroursodeoxicólico (TUDCA) interrompem as fibrilas amiloides de TTR e pareciam ter um perfil de segurança aceitável em um pequeno estudo aberto de fase 2 entre 20 pacientes com TTR.
[00254] Outro exemplo de degradadores de TTR são os anticorpos anti- SAP. Os anticorpos anti-SAP são anticorpos contra uma glicoproteína SAP não fibrilar normal, que promove uma reação de células gigantes que remove os depósitos amiloides viscerais.
X. Exemplos Exemplo 1. Teste de Pré-formulação em Baixa Concentração
[00255] Os estudos de desenvolvimento de pré-formulação foram conduzidos em um anticorpo 14G8 humanizado com a sequência de cadeia pesada madura de SEQ ID NO:82 (exceto que a lisina C-terminal pode estar ausente) e a sequência de cadeia leve madura de SEQ ID NO:86. O teste de pré-formulação foi realizado com o anticorpo 14G8 humanizado em 20 formulações contendo combinações de vários tampões em um intervalo de pH de cerca de 4,5 a cerca de 7,0 com e sem certos açúcares, surfactantes e outros excipientes.
[00256] As propriedades das formulações foram testadas por métodos que incluem inspeção visual, imagem por microfluxo (MFI) de dispersão dinâmica de luz (DLS), fluorimetria de varredura diferencial (DSF), calorimetria de varredura diferencial (DSC) e cromatografia de exclusão por tamanho de alto desempenho (HP- SEC).
[00257] Os tampões testados foram citrato, histidina, succinato e fosfato em uma concentração variando de cerca de 10 mM a cerca de 20 mM. Os açúcares testados foram trealose e sacarose em uma concentração variando de cerca de 205 mM a cerca de 230 mM. As formulações com trealose em um tampão de citrato ou histidina foram testadas, assim como as formulações com sacarose em qualquer um dos quatro tampões.
[00258] Os surfactantes testados foram PS20, PS80 e poloxâmero 188 em uma concentração variando de cerca de 0,02% p/p a cerca de 0,04% p/p. O PS20 foi testado em várias formulações. O poloxômero e o PS80 foram testados apenas em uma formulação, que continha trealose em um tampão de histidina.
[00259] Excipientes adicionais testados foram L-arginina, L-lisina e NaCl em concentrações variando de cerca de 25 mM a cerca de 160 mM em formulações de histidina com e sem trealose ou PS20.
[00260] Os resultados das formulações sob cada um desses testes (F1- F20) receberam valores de acordo com a extensão relativa da mudança em comparação com TO. As circunstâncias mais favoráveis foram aquelas em que nenhuma mudança foi observada. As circunstâncias inaceitáveis foram aquelas em que grandes mudanças foram observadas. Valores adicionais foram atribuídos a circunstâncias em que pequenas mudanças foram observadas e em que mudanças intermediárias foram observadas. As Tabelas 2-3 relatam os resultados de submeter as amostras à tensão de congelamento e descongelamento (T-FT) e armazenamento por | semana a 50ºC (T-50), conforme determinado por inspeção visual, MFI, DLS e HP-SEC. A Tabela 2 fornece uma lista de propriedades comuns de formulações para as quais não foram observadas grandes mudanças em nenhum dos testes. No geral, as formulações F13 e F20, ambas sem surfactante, apresentaram o pior desempenho sob tensão. As formulações com um pH de 4,5 ou menos ou 7,0 ou mais geralmente não tiveram um desempenho tão bom quanto outras formulações. As concentrações de 10 mM de tampão não tiveram um desempenho tão bom quanto as concentrações de 20 mM de tampão. A presença de açúcares foi benéfica, embora formulações sem açúcar e uma alta concentração de L-arginina tenham um desempenho melhor do que formulações sem açúcares e altas concentrações de L-arginina.
[00261] A Tabela 2 fornece uma lista de conclusões de formulações que exibem desempenho respeitável em todos os testes (ou seja, sem grandes mudanças).
Tabela 2 Presença de açúcares ou alta concentração de L-arginina é230 mM de trealose ou sacarose benéfica
[00262] A Tabela 3 fornece uma lista de combinações específicas de excipientes que não mostraram grandes mudanças em nenhum teste específico. Tabela 3 [Tm] remo aan eumcana jucenes Tampão ão (açúcar) (surfactante) lexcipientes [—F8 [60] 20mMde | 230mMde [002%ppde| —- | | FIO 65) 20mMde | 230mMde [002%ppde| —- | | F1I1 [65 20mMdecitrato| 230mMde [002%ppde| —- | [ FIM [60] 20mMde | 230mMde [002%ppde| —- | F16 f6o| 2omMde PUÚÂÃSNNN o,02%p/pde | 160 mM de |
[00263] No entanto, como todas as formulações exibiram mudanças intermediárias em pelo menos um dos testes, outras modificações das formulações foram realizadas, conforme discutido no Exemplo 2, para criar formulações que forneceriam as condições mais estabilizadoras para o anticorpo. Exemplo 2: Triagem da Formulação a 50 mg/ml
[00264] Com base nos resultados da triagem pré-formulação, as formulações F21-F31 listadas na Tabela 4 foram submetidas a testes a uma concentração de 50 mg/ml de anticorpo.
[00265] Tabela 4: Lista de Formulações Testadas a 50 mg/ml Tabela 4 Formulaç Excipiente 1 | Excipiente 2 Outros Tampão ão (açúcar) (surfactante) | excipientes | F21 [65] 25mMde 230 mM de | 0,02% p/p de - | F22 |60| 20mMde 240 mMde [0,02%p/pde] - | | F23 [65] 20mMde 240mMde j|o02%ppde | - | | F24 [70] 20mMde 240mMde j|o02%ppde | - | | F25 [60] 20mMde 240mMde j|oo4%ppde |] - | | F26 [60] 20mMde 240 mMde [002%ppde] - | | F27 [60] 20mMde 240 mMde [002%ppde] - | | F28 [60] 20mMde 240 mMde [002%ppde] - | | F29 [60] 20mMde 30mMde [0,02% p/pde | 220 mM de | F30 [60] 20mMde 205 mM de [0,02% p/p de [25 mM de L- | F31 [60] 20mMde 205 mM de | 0,02% p/p de [25 mM de L-
[00266] As amostras foram submetidas a inspeção visual, temperatura de transição vítrea, testes de MFI, HP-SEC e cIEF conforme apropriado após a preparação (T-líquido), liofiização (TO), armazenamento de duas semanas em estado líquido a 25ºC e armazenamento de um mês e três meses de formas liofiizadas a 2-8ºC, 25ºC e 40ºC. Os resultados das formulações sob cada um desses testes receberam valores de "ruim", "aceitável", "bom" e "muito bom". As formulações aceitáveis tinham 4000-6000 partículas 2 10 um/ml (F27), maior que 94,0% de monômero e menos de 3% de espécies de alto peso molecular (F22-F27 e F30) e maior que 74% de isoformas principais após armazenamento por três meses a 40ºC/75% r.h.. A Tabela 5 fornece uma lista de propriedades comuns de formulações que não receberam uma pontuação “ruim” em nenhum dos testes realizados.
[00267] Tabela 5: Lista de conclusões de formulações que exibem desempenho aceitável a muito bom em todos os testes. Tabela 5 pr as Rg
[00268] Tabela 6: Lista de formulações que exibem desempenho aceitável a muito bom em todos os testes.
Tabela 6 [Rm] rente amais ntsma) scenes | Tampão ão (açúcar) |(surfactante)| excipientes mM de 240 mM de |0,04% p/p de [LP 199] tara | se | mae | | [LP 199] seco | came | neo | succinato Sacarose PS20 20 mM de 205 mM de |0,02% p/pde| 25mM deL- [o eo Eu | teaess | esco | aguns
[00269] A formulação F25 foi superior a todas as formulações testadas, exibindo menos de 4000 partículas/ml, maior que 96,0% de monômero com menos de 2,5% de espécies de alto peso molecular e 77% de isoformas principais (determinadas pelo clIEF) na formulação líquida armazenada por 2 semanas a 25ºC e nas formas liofiizadas armazenadas por 1 mês e 3 meses nas temperaturas testadas (40ºC). Com base nesses estudos, a Formulação 25 (20 mM de histidina- HCI, 240 mM de sacarose, 0,04% de poloxâmero, pH 6,0) foi identificada como a principal candidata a um desenvolvimento adicional, conforme descrito no Exemplo
3.
Exemplo 3: Preparação e Caracterização da Formulação F25
[00270] Preparação da Amostra: A pré-lipofilização da formulação líquida foi de 61 mg/ml de 14G8 humanizado, 20 mM de histidina, 240 mM de sacarose e 0,04% de poloxâmero. Após a liofilização, a formulação foi reconstituída para uma concentração de anticorpo de cerca de 50 mg/ml.
[00271] A matéria prima congelada, conforme descrito acima, foi descongelada em banho-maria a 20ºC. Após o descongelamento, o material de dois lotes foi misturado e a concentração de proteínas foi determinada. A alíquota para o segundo lote foi congelada novamente a -80ºC até uso posterior. À concentração da amostra foi ajustada por diluição com tampão de formulação para obter uma concentração alvo de 50 mg/ml. O surfactante foi adicionado aumentando uma alíquota de uma solução-mãe concentrada em água diretamente na formulação. Em seguida, a amostra foi filtrada através de filtros de membrana PVDF de 0,22 um sob uma cobertura de fluxo laminar. Finalmente, a formulação filtrada foi colocada em frascos de vidro pré-limpos tipo |, 20R; cada frasco com um volume de enchimento de 5 ml antes do carregamento nas prateleiras do liofilizador.
[00272] Liofilização: A liofilização das amostras foi realizada usando um liofilizador em escala piloto Epsilon 2-12D (Martin Christ, Osterode, Alemanha). Os processos de liofilização foram baseados nas temperaturas críticas do produto da formulação escolhida (Tg de -25,7ºC e um Tconset de -25,3ºC) e foram desenvolvidos para o DP ativo. O ponto de partida para condições selecionadas para realizar a liofiização foi baseado em diretrizes publicadas (ver, por exemplo, Carpenter JF et al., Pharm Res. agosto de 1997, 4(8): 969-75; Jameel F et al., Livro capítulo 30 em Formulation and Process Development Strategies for Manufacturing Biopharmaceuticals, publicado on-line: agosto de 2010 e Remmele RL et al., Curr Pharm Biotechnol., março de 2012, 13(3): 471-96). Foi aplicado um protocolo de congelamento padrão usado para formulações à base de sacarose, esfriando a - 45ºC com uma taxa de 0,5ºC/minuto. A estimativa inicial da temperatura da prateleira durante a secagem primária foi mantida de modo que a temperatura resultante do produto seja igual ou inferior à Tg' medida e à temperatura de colapso medida da formulação, a fim de evitar colapso durante a secagem primária. Foi escolhida uma pressão da câmara de 0,13 mbar, para que o vácuo estivesse em um intervalo prático para a secagem em escala laboratorial, piloto e comercial (o intervalo recomendado de pressão da câmara é de 0,07-0,20 mbar), considerando também o teor de sólidos da formulação. Assim, a pressão da câmara selecionada garantiria a sublimação ideal e a conclusão da secagem primária dentro de um período de tempo razoável (em uma escala laboratorial, aproximadamente 25 h). A temperatura da prateleira durante a secagem secundária foi mantida a 25ºC sob uma pressão de câmara de 0,13 mbar. Para formulações à base de sacarose com alto teor de sólidos. Uma temperatura de prateleira de 25-45ºC durante a secagem secundária deve ser apropriada para a dessorção de água em um tempo razoável para atingir um baixo teor de umidade sem um impacto adverso na qualidade do produto (Pikal MJ, International Journal of Pharmaceutics, 1990, 60:203-217; Startzel P et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 2015, 104:2345-2358; and Davis JM et al, Pharm Dev Technol. julho-agosto de 2013, 18(4): 883-96.). As taxas de rampa da secagem primária para a secundária foram mantidas baixas (conservativas) para evitar o aumento da temperatura do produto acima da temperatura de prateleira (e possivelmente acima de Tg) durante as fases iniciais da secagem secundária, quando o teor de umidade no produto é alto. O vácuo durante o processo de liofilização foi controlado por um calibrador de capacitância (MKS). Durante o processo de liofilização, a porta de Plexiglas do liofilizador foi coberta com uma blindagem de aço inoxidável para reduzir a radiação de calor. Para produzir amostras de diferentes umidades residuais e caracterizar o comportamento de secagem da formulação no decorrer dos processos, foi realizado o fechamento de prateleira única nos seguintes pontos de tempo de amostragem: 1) T-IPC1: ao final da secagem primária; 2) T-IPC2: após a rampa até a temperatura de secagem secundária (25ºC); 3) T-IPC3: após 5 h (DevRuntt1) e 6 h (DevRunt2) de secagem secundária a 25ºC; 4) T-final (=TO): no final da secagem secundária.
Caracterização Analítica da Formulação Liofilizada 25:
[00273] Aparência Óptica: Em geral, as formulações liofilizadas durante a secagem (T-IPC1, T-IPC2, T-IPC3) mostraram excelente retenção da estrutura de bolo com bolos esbranquiçados.
[00274] Titulação de Karl Fischer: O teor de água dos bolos liofilizados foi determinado usando o titulador coulométrico Karl Fischer Aqua 40.00 (Analytik Jena GmbH, Jena, Alemanha), que é equipado com um módulo de headspace. Para a medição, cerca de 15 mg de amostra foram pesadas em frascos de vidro 2R em um porta-luvas sob condições controladas de umidade (umidade relativa < 5%) e aquecidas a 120ºC no forno conectado ao recipiente de reação através de um sistema de tubulação. A água evaporada foi transferida para a solução de titulação e a quantidade de água foi determinada. A medição foi realizada até que não fosse mais detectada a evaporação da água. O teor de água da amostra foi calculado considerando a umidade ambiental, conforme determinado em três brancos. No final de ambos os ciclos, todas as amostras apresentavam uma umidade residual de <1,0%.
[00275] Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC): a calorimetria de varredura diferencial (DSC) em um Mettler Toledo DSC1 943 (Mettler Toledo, Giessen, Alemanha) foi usada para determinar eventos térmicos da formulação congelada, por exemplo, a temperatura de transição vítrea dos produtos liofilizados (Tg). Para a análise físico-química do produto seco, 10 mg do produto liofilizado foram analisados em cadinhos de Al frisados (Mettler Toledo, Giessen, Alemanha). As amostras foram resfriadas a 0ºC com 10 K/min e reaquecidas a 120ºC com uma taxa de varredura de 10 K/min. Este perfil de temperatura foi repetido em um segundo ciclo. O ponto médio do desvio endotérmico da linha de base durante a varredura de aquecimento foi tomado como Tg. A temperatura de transição vítrea variava inversamente com o teor de umidade residual.
[00276] Difração de raio X pelo método de pó (XRD): A difração de raio X pelo método de pó (XRD) de ângulo amplo foi usada para estudar a morfologia de produtos liofilizados. O difratômetro de raio X Empyrean (Panalytical, Almelo, Holanda) equipado com um ânodo de cobre (emissão de 45 kV, 40 mA, Ka1 a um comprimento de onda de 0,154 nm) e um detector PIXcel3D foi usado. Aproximadamente 100 mg das amostras liofilizadas foram analisadas no modo de reflexão no intervalo angular de 5-45º 20, com uma duração de etapa de 0,04º 20 e um tempo de contagem de 100 segundos por etapa. A morfologia/cristalinidade dos bolos liofilizados das amostras geradas no decorrer da liofilização (T-IPC1, T- IPC2, T-IPC3, TO) em ambos os processos de liofilização foram determinadas por XRD. Todas as amostras exibiram uma estrutura de bolo totalmente amorfa e não foram detectados picos distintos referentes à cristalização de sais tampão ou outros excipientes. Em todas as amostras, apenas um pico amplo com um máximo de aproximadamente 20 graus 28 foi observado, o que é característico de amostras amorfas (Liu W et al, AAPS Pharmscitech, 2005, Vol. 6(2)).
[00277] Reconstituição das Formulações Lipofilizadas: O volume de reconstituição foi determinado pesando quatro frascos por prateleira pré e pós-lio nos dois ciclos para determinar a massa da água removida. As amostras dos produtos liofilizados (placebo e frascos ativos) foram reconstituídas sob uma cobertura de fluxo laminar, de acordo com o seguinte procedimento: a quantidade necessária de água ultra pura (água Milli-Q) foi adicionada ao produto liofilizado (no centro do frasco) usando uma pipeta. O frasco foi cuidadosamente girado (evitou- se agitação). O tempo de reconstituição foi medido como o tempo para alcançar uma reconstituição completa do produto liofilizado após adição do líquido. O comportamento de reconstituição foi julgado, principalmente em relação à formação de espuma. O tempo de reconstituição (dissolução de todos os sólidos visíveis) das amostras geradas no decorrer da liofiização (T-IPC1, T-IPC2, T-IPC3, TO) em ambos os processos de liofilização, conforme determinados após adição de água ultra pura aos liofilizados, é mostrado na Tabela 7. Após a adição de 4,5 ml de água ultra pura, a reconstituição dos produtos finais foi concluída em menos de 4 minutos.
[00278] Tabela 7: Tempos de reconstituição das amostras geradas em diferentes pontos de tempo durante a liofilização Tabela 7 aaa IS
[00279] pH: Formulação do pH foi medida com um medidor de pH calibrado (SevenEasyGO, Mettler Toledo AG, Schwerzenbach, Suíça) usando um eletrodo de força iônica baixa (InLab& Pure Pro) ou um eletrodo de força iônica alta/normal (Inhab& Micro). O valor de pH de todas as amostras geradas no decorrer da liofilização (T-IPC1, T-IPC2, T-IPC3, TO) em ambos os processos de liofilização após a reconstituição é mostrado na Tabela 8. Não foi observada mudança no pH antes e após a liofilização. Após a preparação (T-líquido), o valor alvo de pH de 6,0 foi alcançado em ambos os ciclos e os valores de pH permaneceram em um intervalo alvo de 6,0 + 0,1 no decorrer e após os dois processos de liofilização.
[00280] Tabela 8: Valores de pH das amostras geradas em diferentes pontos de tempo durante a liofilização.
Tabela 8 E — — Ponto de tempo rs
A O O A E | sw LL A, O E RR gg
[00281] Osmolalidade: A osmolalidade das amostras foi medida pelo método de depressão no ponto de congelamento usando um Osmômetro Semi- Micro Automático Knauer No. AO0300 (Knauer, Berlim, Alemanha). A osmolaridade de todas as amostras geradas no decorrer da liofilização (T-IPC1, T-IPC2, T-IPC3, TO) em ambos os processos de liofilização após a reconstituição é mostrada na Tabela 9. A osmolaridade após a preparação (T-líquido) estava em um intervalo fisiológico (270 — 330 mOsmol/kg) e permaneceu basicamente inalterada no decorrer e após a liofilização.
[00282] Tabela 9: Osmolaridade das amostras geradas em diferentes pontos de tempo durante a liofilização.
Tabela 9 [ ronesias [O QCEIEaTEn Ponto de tempo
[00283] Espectroscopia UV-Vis: Um leitor de placas Tecan Safire? (Tecan Austria GmbH, Grôdig, Áustria) foi usado para determinação da concentração e avaliação da turbidez. Triplicados de 200 ul das amostras foram preparados em placas de 96 poços (Corning Incorporation, NY, EUA). Após a medição, os valores de absorção obtidos foram corrigidos para o comprimento do caminho e subtraídos com o branco correspondente. Todas as amostras foram diluídas para 0,5º mg/ml em tampão placebo antes da medição. Um coeficiente de extinção com base em uma concentração de 1 mg/ml no comprimento do caminho de 1 cm de 1,404 ml mg” cm” a 280 nm foi usado para o cálculo da concentração (informações de Rentschler). Além disso, um aumento na densidade óptica a 350 nm a partir da dispersão da luz das partículas foi usado para avaliar a turbidez das amostras. Para calcular o índice de agregação (A.l.), a seguinte equação foi usada: Al. = 100*(A350 / (A280 — A350)). A concentração de proteínas de todas as amostras (n=3) geradas no decorrer da liofilização (T-IPC1, T-IPC2, T-IPC3, TO) em ambos os processos de liofilização após a reconstituição é mostrada na Tabela 10. Após a preparação (T-líquido), a concentração alvo de 50 + 2,5 mg/ml foi alcançada para todas as amostras e permaneceu dentro da especificação no decorrer e após a liofilização.
[00284] Tabela 10: Concentração de proteínas das amostras geradas em diferentes pontos de tempo durante a liofilização.
Tabela 10 Concentração de
[00285] Cromatografia de Exclusão por Tamanho de Alto Desempenho (HP-SEC): O HP-SEC foi realizado de acordo com as informações obtidas da Rentschler. Do padrão de filtração em gel Bio-Rad (GFS) e das amostras de anticorpo, uma quantidade de 20 ug foi carregada na coluna (uma concentração de
1 mg/ml foi usada). Conforme mostrado na Tabela 11, nenhuma mudança nos sólidos de baixo peso molecular foi observada e com a liofilização, e a mudança nos sólidos de alto peso molecular foi pequena ou nenhuma. Assim, a liofilização retém a grande maioria dos anticorpos na forma de monômero.
[00286] Tabela 11: Teor relativo de diferentes espécies em amostras geradas em diferentes pontos de tempo durante a liofilização. Tabela 11 a Área de pico total e tempo DevRun | DevRun | DevRun | DevRun | DevRun | DevRun | DevRun | DevRun el *2 Hl *2 ES *2 1 *2
97.4 97.4 14 12 41.5 1.4 762.7 746.8 TJíquido . * -. + * -. * +
0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.4 85.2
97.6 97.3 0.9 1.3 1.5 14 757.6 649.9 T-IPCI + + + + + + + + oo oo oo 0.0 oo 0.0 o3 65.5
97.6 97.3 0: 1.3 1.5 1.4 761.3 687.9 T-IPC2 + E + + + d+ 4 *
01. 0.0 0.0 0.0 o.1 o.1 o3 8.2
97.6 96.7 0.9 1.9 1.5 1.3 753.6 534.3 T-IPC3 = a + + * * *: *
0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 29 119.2
97.6 9%.7 0.9 1.9 1.5: 1.4 770.3 503.9 T-final + + + + + + & +
0.0 0.0 0.0 0.0 o1 0.0 03 82.6
[00287] Várias mudanças na forma e nos detalhes podem ser feitas sem se afastar do espírito e escopo da invenção. A menos que seja aparente de outra forma a partir do contexto, qualquer modalidade, aspecto, elemento, característica, etapa ou semelhante pode ser usada em combinação com qualquer outra. No caso das informações associadas a uma citação que podem mudar com o tempo, entende- se a informação associada à citação na data efetiva mais antiga, a data efetiva mais antiga de uma citação, ou seja, a data de apresentação do presente pedido ou pedido de prioridade anterior que divulga a citação. Todas as referências, patentes emitidas e pedidos de patente citados no corpo do presente relatório descritivo são incorporados neste documento por referência na sua totalidade, para todos os fins. Qualquer modalidade, aspecto, característica, elemento, etapa ou semelhante pode ser combinada com qualquer outra, a menos que o contexto indique o contrário.
Quando se diz que uma composição compreende certos componentes especificados, o pedido deve ser lido, a menos que o contexto exija de outra forma, como divulgando que, em alternativa, a composição pode consistir ou consistir essencialmente nos componentes especificados.
Por exemplo, quando se diz que uma cadeia de anticorpos tem uma sequência de aminoácidos compreendendo uma SEQ ID NO. especificada, deve ser entendido, a menos que o contexto exija de outro modo que, alternativamente, a cadeia de anticorpos pode consistir ou consistir essencialmente na SEQ ID NO. "Consistindo essencialmente em" é usado de acordo com a convenção para designar os componentes básicos e novos de uma composição.
A menos que seja aparente do contexto, a água também pode estar presente em qualquer quantidade.
Outros componentes podem estar presentes em pequenas quantidades, sem efeito significativo na atividade ou estabilidade da composição. "Essencialmente livre de" também é definido para indicar que um componente pode estar presente, se houver, apenas em quantidades menores.
Quando se diz que um componente de uma composição está presente em uma concentração de "cerca de" um valor ou intervalo de valores designado, o pedido deve ser lido como divulgando, em alternativa, que o componente pode estar presente no valor ou intervalo de valores designado.

Claims (138)

REIVINDICAÇÕES
1. Formulação farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende: (a) um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável de cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem ser independentemente N ou S, ou um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável de cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve madura compreendendo três CDRs de SEQ ID NO:16; em que o anticorpo está presente em uma concentração que varia de cerca de 25 mg/mL a cerca de 75 mg/mL; (b) um tampão presente em uma concentração de cerca de 20 mM, em que o tampão é citrato, histidina, fosfato ou succinato; (c) um açúcar presente em uma concentração que varia de cerca de 205 mM a cerca de 260 mM, em que o açúcar é sacarose ou trealose ou, se o açúcar estiver ausente, cerca de 160 mM de arginina está presente, e (d) um surfactante presente em uma concentração que varia de cerca de 0,01% a cerca de 1% em peso; em que a formulação é caracterizada por um pH que varia de cerca de 5,0 a cerca de 6,5; desde que: (i) se o tampão de histidina ou succinato estiver presente, o pH é de cerca de 6,0; (ii) se o tampão de fosfato estiver presente, o pH é de cerca de 6,5; e (iii) se a histidina e trealose estiverem presentes, o surfactante é a. PS80; ou b. PS20, desde que, se PS20 estiver presente, cerca de 25 mM de L-arginina também está presente.
2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é essencialmente livre de manitol ou sorbitol.
3. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o tampão é histidina.
4. Formulação, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente em um intervalo de cerca de 230 mM a cerca de 250 mM
5. Formulação, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente a cerca de 230-240 mM.
6. Formulação, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o açúcar é sacarose e o surfactante é PS20 ou PX188.
7. Formulação, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o surfactante é PS20 em uma concentração de 0,02% p/p.
8. Formulação, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o surfactante é PX188 em uma concentração de 0,04% p/p.
9. Formulação, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o açúcar é trealose.
10. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que 160 mM de arginina está presente.
11. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o tampão é citrato.
12. Formulação, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente a 230 mM.
13. Formulação, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que o surfactante é 0,02% de PS20.
14. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o tampão é fosfato.
15. Formulação, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente e é sacarose.
16. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o tampão é succinato.
17. Formulação, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente e é sacarose.
18. Formulação, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o açúcar está presente e é trealose.
19. Formulação, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que a trealose está presente em uma concentração de 205 mM.
20. Formulação, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o surfactante é PS20.
21. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende: (a) 20 mM de citrato, 230 mM de trealose e 0,02% p/p de PS20 a pH 5; (b) 20 mM de histidina, 230 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20; (c) 20 mM de fosfato, 230 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (d) 20 mM de citrato, 230 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (e) 20 mM de histidina, 230 mM de trealose e 0,02% p/p de PS80; (f) 20 MM de histidina, 0,02% p/p de PS20 e 160 mM de L-arginina; (g) 20 mM de histidina, 240 mM de sacarose e 0,04% p/p de PX188; (h) 20 mM de succinato, 240 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20 a um pH de 6,0; ou (1) 20 mM de histidina, 205 mM de trealose, 0,02% p/p de PS20 e 25 mM de L-arginina.
22. Formulação, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que a formulação consiste essencialmente no anticorpo e cerca de: (a) 20 mM de citrato, 230 mM de trealose e 0,02% p/p de PS20 a pH 5; (b) 20 mM de histidina, 230 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20; (c) 20 mM de fosfato, 230 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (d) 20 mM de citrato, 230 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20 a pH 6,5; (e) 20 mM de histidina, 2380 mM de trealose e 0,02% p/p de PS80; (f) 20 MM de histidina, 0,02% p/p de PS20 e 160 mM de L-arginina; (9) 20 mM de histidina, 240 mM de sacarose e 0,04% p/p de PX188; (h) 20 mM de succinato, 240 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20 a um pH de 6,0; ou (i) 20 MM de histidina, 205 mM de trealose, 0,02% p/p de PS20 e 25 mM de L-arginina.
23. Formulação, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a formulação consiste essencialmente no anticorpo e cerca de: (a) 20 mM de histidina, 240 mM de sacarose e 0,04% p/p de PX188; (b) 20 MM de succinato, 240 mM de sacarose e 0,02% p/p de PS20 a um pH de 6,0; ou (c) 20 mM de histidina, 205 mM de trealose, 0,02% p/p de PS20 e 25 mM de L-arginina.
24. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada madura compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:65 e uma região variável de cadeia leve madura compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:76.
25. Formulação, de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que a formulação consiste essencialmente no anticorpo a cerca de 50 mg/ml e histidina a cerca de 20 mM, e sacarose a cerca de 240 mM e PX188 a cerca de 0,04% p/p.
26. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 70, exceto que as posições H52 e L26 por cada numeração Kabat pode ser independentemente N ou S.
27. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 25, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO: 16.
28. Formulação farmacêutica, conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo monoclonal é um anticorpo humanizado, quimérico ou com superfície modificada.
29. Formulação, de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que o anticorpo monoclonal é humanizado.
30. Formulação, de acordo com a reivindicação 29, caracterizada pelo fato de que a região variável da cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:64-66 e a região variável da cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:74-76.
31. Formulação, de acordo com a reivindicação 29, caracterizada pelo fato de que a região variável madura da cadeia pesada tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:5-12 e a região variável madura da cadeia leve tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:19-23.
32. Formulação, de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:65 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:76.
33. Formulação, de acordo com a reivindicação 31, caracterizada pelo fato de que a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:11 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:19,
34. Anticorpo humanizado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 28 a 33, caracterizado pelo fato de que a região variável da cadeia pesada madura é fundida com uma região constante da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve madura é fundida com uma região constante da cadeia leve.
35. Anticorpo humanizado, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que a região variável da cadeia pesada madura é fundida com uma região constante da cadeia pesada com a sequência da SEQ ID NO: 103, desde que a lisina C-terminal possa estar ausente e/ou a região variável da cadeia leve madura seja fundida com uma região constante da cadeia leve com a sequência da SEQ ID NO: 104 ou 105.
36. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo monocional está presente em uma concentração de cerca de 50 mg/mL.
37. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o tampão de histidina está a uma concentração de cerca de 20 mM.
38. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores,
caracterizada pelo fato de que o pH é de cerca de 5,75 a 6,25.
39. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o açúcar/poliol é sacarose presente a uma concentração de cerca de 240 mM.
40. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o poloxâmero é o poloxâmero 188 a uma concentração de cerca de 0,04% em peso.
41. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que menos do que cerca de 5% ou 3% do anticorpo estão presentes como um agregado na formulação.
42. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que pelo menos 95% ou 97% do anticorpo em peso é executado como um único pico na análise HP-SEC.
43. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 42, caracterizada pelo fato de que é estéril.
44, Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 43, caracterizada pelo fato de que é estável no congelamento e descongelamento.
45. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 44, caracterizada pelo fato de que tem uma osmolaridade de cerca de 270 mOsmol/kg a cerca de 330 mOsmol/kg.
46. Formulação liofilizada de um anticorpo, caracterizada pelo fato de que compreende (a) um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável de cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem ser independentemente N ou S, ou um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs de SEQ ID NO:16; (b) histidina; (c) um açúcar/poliol; e (d) um poloxâmero.
47. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 46, caracterizada pelo fato de que é preparada liofilizando a formulação conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 45.
48. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 46, caracterizada pelo fato de que é reconstituível com água a um pH entre cerca de 5,5 e cerca de 6,5.
49. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 46, caracterizada pelo fato de que é reconstituível com água a um pH de cerca de 6,0.
50. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 46, caracterizada pelo fato de que contém cerca de 10 mg a cerca de 40 mg do anticorpo.
51. Formulação liofilizada, caracterizada pelo fato de que é reconstituível com água para render uma solução aquosa que compreende: (a) um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem ser independentemente Nou S, ou um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável de cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve madura compreendendo três CDRs de SEQ ID NO:16, em que o anticorpo está presente a uma concentração que varia de cerca de 25 mg/mL a cerca de 75 mg/mL; (b) tampão presente a uma concentração que varia de cerca de 10 MM a cerca de 30 mM; (c) açúcar/poliol presente em uma concentração que varia de cerca de 220 MM a cerca de 260 mM; (d) surfactante presente a uma concentração em um intervalo de cerca de 0,01% a cerca de 0,1% em peso; e (e) um pH que varia de cerca de 5,5 a cerca de 7,0.
52. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:64-66 e uma região variável de cadeia leve madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOs:74-76, ou um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:5-12 e uma região variável de cadeia leve madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:19-23.
53. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 52, caracterizada pelo fato de que é reconstituível com água, de modo que o anticorpo esteja presente a uma concentração de cerca de 50 mg/mL.
54. Formulação liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 51 a 53, caracterizada pelo fato de que o tampão compreende histidina.
55. Formulação liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 51 a 54, caracterizada pelo fato de que é reconstituível com água, de modo que o pH seja de cerca de 6,0.
56. Formulação liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 51 a 55, caracterizada pelo fato de que o açúcar/poliol é sacarose.
57. Formulação liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 51 a 56, caracterizada pelo fato de que o surfactante é poloxômero.
58. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 57, caracterizada pelo fato de que o poloxômero é PX188.
59. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que: (a) o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:64-66 e uma região variável de cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ |D NOs:74-76 e é reconstituível para uma concentração de cerca de 50 mg/ml; (b) o tampão é histidina e é reconstituível a uma concentração de cerca de mM; (c) o açúcar/poliol é sacarose e é reconstituível a uma concentração de cerca de 240 mM; e (d) o surfactante é poloxômero 188 e é reconstituível a uma concentração de cerca de 0,04% em peso.
60. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 59, caracterizada pelo fato de que é reconstituível com água, de modo que o pH seja de cerca de 6,0.
61. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 60, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:65 e uma região variável da cadeia leve madura com uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:76.
62. Formulação liofilizada, de acordo com a reivindicação 61, caracterizada pelo fato de que a região variável da cadeia pesada madura é fundida com uma região constante da cadeia pesada com a sequência da SEQ ID NO:103, desde que a lisina C-terminal possa estar ausente e a região variável da cadeia leve madura seja fundida com uma região constante da cadeia leve com a sequência da SEQ ID NO:104.
63. Formulação liofilizada, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que pelo menos 95% ou 97% do anticorpo é executado como um pico único sob HP-SEC após armazenamento por até 3 meses a 2-8ºC.
64. Método para reconstituir a formulação liofilizada, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 46 a 63, caracterizado pelo fato de que compreende: combinar a formulação liofilizada com água estéril para produzir uma formulação líquida.
65. Método, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que compreende ainda introduzir a formulação reconstituída em uma bolsa de fluido isotônico para infusão.
66. Método, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que a formulação liofilizada está na forma de pó ou na forma de uma espuma sólida em um frasco.
67. Forma de dosagem liofilizada estéril de uma formulação de anticorpo em um frasco de 20 ml caracterizada pelo fato de que consiste essencialmente em: (i) um anticorpo no intervalo de cerca de 225-275 mg; (ii) histidina no intervalo de cerca de 15-19 mg;
(iii) poloxâmero PX188 em um intervalo de cerca de 2-2,5 mg; e; (iv) sacarose em um intervalo de cerca de 400-490 mg; em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável de cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:70, exceto que as posições H52 e L26 pela numeração Kabat podem ser independentemente N ou S, ou um anticorpo monoclonal compreendendo uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo três CDRs da SEQ ID NO:1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo três CDRs de SEQ ID NO:16.
68. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67, caracterizada pelo fato de que o frasco tem teores que consistem essencialmente em: (i) cerca de 250 mg do anticorpo; (ii) cerca de 16,8 mg de L-histidina; (iii) cerca de 2,2 mg de poloxômero PX188; e (iv) cerca de 445,3 mg de sacarose.
69. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO:61 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO:70, exceto que as posições H52 e L26 por cada numeração Kabat pode ser independentemente N ou S.
70. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQID NO:1 e uma região variável da cadeia leve madura compreendendo as três CDRs de Kabat da SEQ ID NO:16.
71. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que a região variável da cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ |D NOs:64-66 e a região variável da cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:74-76.
72. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que a região variável da cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:5- 12 e a região variável da cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:19-23.
73. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:65 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:76.
74. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que a cadeia pesada madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:11 e a cadeia leve madura tem uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO:19,
75. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que a região variável da cadeia pesada madura é fundida com uma região constante da cadeia pesada com a sequência da SEQ ID NO:103, desde que a lisina C-terminal possa estar ausente e/ou a região variável da cadeia leve madura seja fundida com uma região constante da cadeia leve com a sequência da SEQ ID NO:104 ou 105.
76. Forma de dosagem liofilizada, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que a cadeia pesada madura tem a sequência da SEQ ID NO:82, exceto a lisina C-terminal que pode estar ausente, e a cadeia leve madura tem a sequência da SEQ ID NO:86.
77. Método para preparar a forma de dosagem liofilizada, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 67 a 76, para administração a um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) reconstituir a formulação de anticorpo para um volume de cerca de 5,0 mL com água estéril, e (ii) diluir a formulação de anticorpo reconstituído da etapa (i) em solução salina normal para infusão.
78. Método, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que o volume total para infusão é de 250 mL.
79. Método, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que o volume total para infusão é de 100 mL.
80. Método, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que o volume total para infusão é de 500 mL.
81. Formulação reconstituída caracterizada pelo fato de que é resultante da reconstituição da formulação liofilizada, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 46 a 80.
82. Formulação reconstituída, de acordo com a reivindicação 81, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo a uma concentração de cerca de 50 mg/mL, o tampão de histidina a uma concentração de cerca de 20 mM, o poloxâmero a uma concentração de cerca de 0,04% em peso e a um pH de cerca de 6,0.
83. Formulação reconstituída, de acordo com a reivindicação 81 ou 82, caracterizada pelo fato de que pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% do anticorpo é executado como um único pico na cromatografia de exclusão por tamanho de alta pressão.
84. Método para tratar ou efetuar profilaxia de um sujeito com ou em risco de uma amiloidose mediada por transtirretina, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito um regime eficaz da formulação farmacêutica, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 23, ou uma forma reconstituída da formulação liofilizada, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 46 a 63.
85. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito foi tratado previamente com um estabilizador de tetrâmero TTR, uma terapia à base de oligonucleotídeo antisense, uma terapia à base de interferência por RNA (RNAi) ou um degradador de amiloide.
86. Método, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que o sujeito não recebe mais o tratamento com o estabilizador de tetrâmero TTR, terapia baseada em oligonucleotídeo antisense, terapia baseada em interferência por RNA (RNAi) ou degradador de amiloide.
87. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito está recebendo tratamento simultaneamente com diflunisal.
88. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito está recebendo tratamento simultaneamente com tafamidis.
89. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito está recebendo tratamento simultaneamente com um estabilizador de tetrâmero TTR, uma terapia à base de oligonucleotídeo antisense, uma terapia à base de interferência por RNA (RNAi) ou um degradador de amiloide.
90. Método, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que o sujeito está recebendo tratamento simultâneo com tafamidis, difluisal, patisiran, inoteren, 4"'-iodo4'-desoxidoxorrubicina (IDOX), doxiciclinay ácido tauroursodesoxicólico (TUDCA), ciclodextrina (CyD) ou um anticorpo anti-SAP.
91. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito foi diagnosticado com amiloidose por ATTR.
92. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem cardiomiopatia ATTR do tipo selvagem.
93. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem cardiomiopatia ATTR hereditária.
94. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem polineuropatia ATTR hereditária.
95. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem envolvimento cardíaco ATTR.
96. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem envolvimento de neuropatia periférica de amiloidose por ATTR.
97. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que a formulação farmacêutica, forma reconstituída da formulação liofilizada ou a forma reconstituída da formulação de anticorpo liofilizado é administrada ao sujeito por via intravenosa na forma diluída.
98. Método, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que o diluente para a forma diluída é solução salina normal.
99. Método, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 100 mL.
100. Método, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 250 mL.
101. Método, de acordo com a reivindicação 100, caracterizado pelo fato de que o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 500 mL.
102. Método, de acordo com a reivindicação 100, caracterizado pelo fato de que o volume total é de cerca de 250 mL.
103. Método, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que 0,1, 0,2, 0,3, 1, 3, 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito aproximadamente uma vez a cada 28 dias.
104. Método, de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que 0,1, 0,2, 0,3, 1 ou 3 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 60 a 120 minutos.
105. Método, de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 90 a 180 minutos.
106. Método, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que o sujeito é pré-medicado com um anti-histamínico.
107. Método, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que o sujeito é administrado com difenidramina em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo.
108. Método, de acordo com a reivindicação 107, caracterizado pelo fato de que o sujeito é administrado com acetaminofeno em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo.
109. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que a duração do regime é de pelo menos 3 meses.
110. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a duração do regime é de pelo menos 12 meses.
111. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o sujeito está recebendo tafamidis concomitante.
112. Método de tratamento ou efetividade da profilaxia de um sujeito com ou em risco de amiloidose mediada por transtirretina, caracterizado pelo fato de que compreende administrar um regime eficaz de um estabilizador de tetrâmero TTR, uma terapia baseada em oligonucleotídeo antisense, uma terapia baseada em interferência por RNA (RNAi), ou um degradador de amiloide, em que o sujeito foi tratado anteriormente com a formulação farmacêutica, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 23, ou uma forma reconstituída da formulação liofilizada, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 46 a 63.
113. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o sujeito não recebe mais o tratamento com a formulação farmacêutica, conforme definido em uma das reivindicações de 1 a 45.
114. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o estabilizador de tetrânero TTR é tafamidis ou diflunisal.
115. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que a terapia à base de oligonucleotídeo antisense é inotersen.
116. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que a terapia baseada em interferência por RNA (RNAi) é patisiran ou revusiran.
117. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o degradador de amiloide é 4'-iodo-4"-desoxidoxorrubicina (IDOX), doxiciclina, ácido tauroursodeoxicólico (TUDCA), ciclodextrina (CyD) ou um anticorpo anti- SAP.
118. Método, de acordo com a reivindicação 117, caracterizado pelo fato de que os degradadores de amiloide são doxiciclina em combinação com ácido tauroursodeoxicólico (TUDCA).
119. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o sujeito foi diagnosticado com amiloidose por ATTR.
120. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem cardiomiopatia ATTR do tipo selvagem.
121. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem cardiomiopatia ATTR hereditária.
122. Método, de acordo com a reivindicação 112 ou 121, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem polineuropatia ATTR hereditária.
123. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem envolvimento cardíaco ATTR.
124. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem envolvimento de neuropatia periférica de amiloidose por ATTR.
125. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que a formulação farmacêutica, forma reconstituída da formulação liofilizada ou a forma reconstituída da formulação de anticorpo liofilizado é administrada ao sujeito por via intravenosa na forma diluída.
126. Método, de acordo com a reivindicação 125, caracterizado pelo fato de que o diluente para a forma diluída é solução salina normal.
127. Método, de acordo com a reivindicação 126, caracterizado pelo fato de que o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 100 mL.
128. Método, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 250 mL.
129. Método, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que o volume total da forma diluída administrada ao sujeito é de pelo menos cerca de 500 mL.
130. Método, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que o volume total é de cerca de 250 mL.
131. Método, de acordo com a reivindicação 125, caracterizado pelo fato de que 0,1, 0,2, 0,3, 1, 3, 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito aproximadamente uma vez a cada 28 dias.
132. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que 0,1, 0,2, 0,3, 1 ou 3 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 60 a 120 minutos.
133. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que 10 ou 30 mg/kg do anticorpo são administrados ao sujeito como uma infusão ao longo de um intervalo de cerca de 90 a 180 minutos.
134. Método, de acordo com a reivindicação 125, caracterizado pelo fato de que o sujeito é pré-medicado com um anti-histamínico.
135. Método, de acordo com a reivindicação 125, caracterizado pelo fato de que o sujeito é administrado com difenidramina em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo.
136. Método, de acordo com a reivindicação 135, caracterizado pelo fato de que o sujeito é administrado com acetaminofeno em um intervalo de cerca de 30 a 90 minutos antes da administração do anticorpo.
137. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que a duração do regime é de pelo menos 3 meses.
138. Método, de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que a duração do regime é de pelo menos 12 meses.
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