BR112020006001A2 - método para produção de sais de ácido orgânico a partir de caldo de fermentação - Google Patents

método para produção de sais de ácido orgânico a partir de caldo de fermentação Download PDF

Info

Publication number
BR112020006001A2
BR112020006001A2 BR112020006001-1A BR112020006001A BR112020006001A2 BR 112020006001 A2 BR112020006001 A2 BR 112020006001A2 BR 112020006001 A BR112020006001 A BR 112020006001A BR 112020006001 A2 BR112020006001 A2 BR 112020006001A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
acid
salts
organic
fermentation broth
organic acids
Prior art date
Application number
BR112020006001-1A
Other languages
English (en)
Inventor
Antoine Sevenier
Cédric Colomb
Benjamin Martin
Original Assignee
Metabolic Explorer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Metabolic Explorer filed Critical Metabolic Explorer
Publication of BR112020006001A2 publication Critical patent/BR112020006001A2/pt

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/42Hydroxy-carboxylic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/52Propionic acid; Butyric acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/54Acetic acid
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/56Lactic acid

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

A invenção refere-se a um método para produzir sais de ácido butírico, ácido láctico, ácido propiônico, ácido valérico, ácido acético, ácido glicólico, ácido sórbico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, derivados dos referidos ácidos orgânicos e misturas dos mesmos, compreendendo pelo menos as etapas sucessivas de: i) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo o(s) ácido(s) orgânico(s); ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação compreendendo pelo menos a clarificação do caldo de fermentação e separação dos ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil contendo ácidos orgânicos (CVAF); v) adição de bases inorgânicas à referida CVAF, vii) eliminação da água restante da CVAF, e recuperação dos sais de ácido orgânico.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “MÉTODO
PARA PRODUÇÃO DE SAIS DE ÁCIDO ORGÂNICO A PARTIR DE CALDO DE FERMENTAÇÃO” CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a um método para a produção fermentativa de sais de ácido orgânico com alto grau de pureza a partir de um caldo de fermentação.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] Ácidos orgânicos são definidos como compostos construídos sobre um esqueleto de carbono, contendo um grupo funcional com propriedades ácidas, geralmente mais fracas do que ácidos minerais.
[003] Ácidos orgânicos são amplamente distribuídos na natureza como constituintes normais de micro-organismos, plantas ou tecidos animais. Eles são produzidos durante o metabolismo de carboidratos, através da fermentação microbiana e durante a degradação de aminoácidos e outros compostos orgânicos.
[004] A disponibilidade de ácidos orgânicos e seus derivados é de grande interesse econômico, já que vários usos industriais foram identificados.
[005] Ácidos orgânicos, tais como ácido succínico e ácido láctico, podem ser usados para gerar polímeros biodegradáveis. O ácido glicólico é usado na preparação de ácido poliglicólico e outros copolímeros biocompatíveis (por exemplo, PLGA).
[006] Ácidos orgânicos são usados na conservação de alimentos devido à sua atividade antibacteriana.
[007] Além disso, os ácidos orgânicos são usados com sucesso, em vez de antibióticos e sem as mesmas preocupações de saúde, na alimentação de animais. Após a proibição europeia de promotores de crescimento de antibióticos em 2006, o uso de ácidos orgânicos na nutrição animal ganhou importância significativa na indústria de rações. Entre os ácidos orgânicos, o ácido butírico é de particular importância, devido a sua capacidade significativa de reduzir a colonização bacteriana patogênica.
[008] Ácidos orgânicos podem ser isolados de fontes naturais, produzidos por síntese química, ou obtidos por fermentação microbiológica.
[009] Vantajosamente, a fermentação microbiológica pode permitir a produção de enantiômeros específicos de ácido orgânico (L ou D) após àa manipulação genética dos micro-organismos, cada um desses isômeros isolados (L ou D) exibindo características específicas como, por exemplo, os isômeros ácido L-láctico e ácido D-láctico.
[010] Modificações genéticas dos micro-
organismos também foram usadas para melhorar o rendimento da produção de ácidos orgânicos.
[011] Além disso, foram feitas melhorias no processo de cultura, por exemplo, controle do pH do meio de fermentação para a produção de ácido glicólico (WO 2011/036213).
[012] Na meta de otimizar a recuperação dos ácidos orgânicos produzidos, diferentes técnicas foram desenvolvidas para a purificação e recuperação desses ácidos orgânicos.
[013] EP 1 094 054 e EP 350 355 divulgam métodos para separação e purificação de ácido láctico e ácidos butíricos, respectivamente, produzidos por fermentação.
[014] Us 4,490,295 divulga um processo Para produção de ácido clavulânico e sais de lítio do mesmo, a partir de um caldo de fermentação de Streptomyces clavuligerus. Observou-se que o isolamento do ácido clavulânico é altamente facilitado se for convertido anteriormente em seu sal, clavulanato de lítio, que pode ser precipitado com baixa co-precipitação de impurezas.
[015] Sais de ácido orgânico são formas combinadas da base conjugada de um ácido orgânico com um ou mais cátions, eletricamente neutros.
[016] Sais de ácido orgânico são mais fáceis de recuperar do que seus ácidos orgânicos correspondentes e também são utilizáveis como aditivos para ração animal.
[017] US 2004/0048344 está relacionado a um processo para produzir sais de ácido D-pantotênico compreendendo as seguintes etapas: - Fermentação de um micro-organismo específico (preferencialmente do gênero Bacillus); - Passar o caldo de fermentação através de um trocador de cátions, ácido pantotênico livre sendo formado a partir da separação com cátions; - Adicionar uma base de cálcio e/ou base de magnésio para ajustar o pH para 3-10, obtendo assim sais de pantotenato de cálcio e/ou magnésio; - Submeter a solução à secagem e/ou formulação.
[018] US 2004/0077057 divulga um processo para produzir sais de ácido D-pantotênico compreendendo as seguintes etapas: - Fermentação de um micro-organismo específico (preferencialmente do gênero Bacillus); - Passar o caldo de fermentação através de um trocador de ânions; - Eluir o D-pantotenato ligado ao trocador de ânion usando solução contendo sais (cálcio e/ou magnésio) ou uma solução de HCl; - Submeter o eluato à secagem e/ou formulação.
[019] Todas essas técnicas envolvem um tratamento direto do caldo de fermentação. No entanto, ácidos orgânicos são diluídos no meio de fermentação, isto é, eles estão presentes em uma concentração compreendida entre cerca de 0,1% e cerca de 10% e, portanto, no final do processo, os rendimentos de sais de ácido orgânico recuperados são baixos.
[020] Processos que compreendem uma etapa de clarificação do caldo de fermentação, por exemplo, por ultrafiltração, foram relatados anteriormente.
[021] A patente US 3,720,584 se refere à um processo para produzir sais de ácido carboxílico, em particular sais de ácido láctico, a partir de um caldo de fermentação clarificado de micro-organismos do gênero Arthrobacter, Alcaligenes ou Fusarium. No entanto, este processo não inclui uma etapa de evaporação do caldo de fermentação clarificado e, portanto, os ácidos orgânicos ainda estão altamente diluídos no meio tratado.
[022] Além disso, os pedidos de patente CN101475464 e WO 2013/169447 divulgam processos para produzir sais de ácido succínico a partir de um caldo de fermentação, compreendendo uma etapa de clarificação do referido caldo. No entanto, esses processos não se relacionam à produção de sais de ácido orgânico escolhidos dentre o grupo que consiste em: sais de ácido butírico, ácido láctico, ácido propiônico, ácido valérico, ácido acético, ácido glicólico, ácido sórbico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, derivados e misturas dos mesmos.
[023] Finalmente, com os processos já conhecidos, a pureza dos sais de ácido orgânico recuperados é baixa, uma vez que o nível de impurezas e subprodutos no meio de fermentação não tratado é importante.
[024] O presente pedido destina-se a melhorar o rendimento e a pureza dos sais de ácido orgânico escolhidos entre sais de ácido butírico, ácido láctico, ácido propiônico, ácido valérico, ácido acético, ácido glicólico, ácido sórbico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, derivados dos referidos ácidos orgânicos e misturas dos mesmos, recuperados de caldos de fermentação.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[025] A presente invenção refere-se a um método para produzir sais de ácido orgânico que compreende, pelo menos, as etapas sucessivas de: 1) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos;
ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas:
a. clarificação do caldo de fermentação;
b. opcionalmente, ajuste do pH do caldo de fermentação clarificado; e
Cc. separação dos ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil contendo os referidos ácidos orgânicos, designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF);
iii) opcionalmente, passagem da CVAF por um trocador de cátions capaz de ligar os cátions de amônio;
iv) opcionalmente, passagem da CVAF ou da fração tratada com resina catiônica por um trocador de ânions capaz de ligar as bases conjugadas dos ácidos orgânicos;
v) adição de bases inorgânicas à referida CVAF ou à referida fração tratada com resina catiônica ou ao referido trocador de ânions para eluir as bases conjugadas ligadas;
vi) eliminação da água restante da CVAF ou da fração tratada com resina catiônica ou do eluato, e recuperação dos sais de ácido orgânico formados,
em que os sais de ácido orgânico são escolhidos entre o grupo que consiste em: sais de ácido butírico, ácido láctico, ácido propiônico, ácido valérico, ácido acético, ácido glicólico, ácido sórbico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, derivados dos referidos ácidos orgânicos e misturas dos mesmos.
[026] O processo divulgado neste documento para recuperação de sais de ácido orgânico a partir de um caldo de fermentação compreende, curiosamente, uma etapa (ii) de pré-tratamento do caldo de fermentação: durante este pré-tratamento, o caldo de fermentação é (a) clarificado, (b) opcionalmente, o pH é ajustado e (ce) submetido a uma etapa de evaporação/condensação que permite a separação dos ácidos orgânicos voláteis e a eliminação do material residual, em particular de sais e compostos pesados (sais inorgânicos, açúcares...).
[027] Essas etapas de pré-tratamento permitem a concentração de ácidos orgânicos na solução, antes de executar as etapas (v) e (vi) da geração de sais de ácido orgânico.
[028] O uso dessas etapas de pré-tratamento do caldo de fermentação aumentou significativamente o rendimento e a pureza dos sais de ácidos orgânicos recuperados. Além disso, este processo permite aumentar a lucratividade de outros processos de fermentação: o método para produzir sais de ácido orgânico de acordo com a invenção permite o uso de águas residuais provenientes de outros processos, com essas águas residuais se tornando um produto valioso.
[029] A presente invenção refere-se também a uma mistura de pelo menos dois sais de ácido orgânico, tais como obtidos pelo método descrito acima.
[030] Esta mistura de pelo menos dois sais de ácido orgânico pode ser, em particular, caracterizada pelo fato de que os sais de ácido butírico e seu derivado são os principais componentes da referida mistura.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[031] Figura 1. Representação esquemática das etapas incluídas no processo de acordo com o esquema 1
[032] Figura 2. Representação esquemática das etapas incluídas no processo de acordo com o esquema 2
[033] Figura 3. Representação esquemática das etapas incluídas no processo de acordo com o esquema 3
[034] Figura 4. Representação esquemática das etapas incluídas no processo de acordo com o esquema 4
[035] Figura 5. Representação esquemática das etapas incluídas no processo de acordo com o esquema 5
DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES DA INVENÇÃO
[036] Antes de descrever a presente invenção em detalhes, deve ser entendido que a prática da presente invenção emprega, a menos que indicado de outra forma, técnicas convencionais de purificação de produtos químicos e microbiológicos dentro da técnica. Tais técnicas são bem conhecidas para o técnico no assunto e são totalmente explicadas na literatura.
[037] Além disso, nas reivindicações e na descrição da invenção, exceto onde o contexto exija o contrário devido à linguagem expressa ou implicação necessária, a palavra "compreende", "contém", "envolve" ou "inclui" ou variações tais como "compreendem", "compreendendo", "contendo", "envolvido", "incluem", "incluindo" são usadas em um sentido inclusivo, isto é, para especificar a presença dos recursos declarados, mas não para impedir a presença ou adição de outros recursos em diversas modalidades da invenção.
[038] Nas reivindicações e descrição, os termos "processo" e "método" são usados permutavelmente.
[039] A presente invenção refere-se a um método para produzir sais de ácido orgânico que compreende, pelo menos, as etapas sucessivas de: i) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos; ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas:
a. clarificação do caldo de fermentação;
b. opcionalmente, ajuste do pH do caldo de fermentação clarificado; e ec. separação dos ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil contendo os referidos ácidos orgânicos, designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF);
iii) opcionalmente, passagem da CVAF por um trocador de cátions capaz de ligar os cátions de amônio;
iv) opcionalmente, passagem da CVAF ou da fração tratada com resina catiônica por um trocador de ânions capaz de ligar as bases conjugadas dos ácidos orgânicos;
v) adição de bases inorgânicas à referida CVAF ou à referida fração tratada com resina catiônica ou ao referido trocador de ânions para eluir as bases conjugadas ligadas;
vi) eliminação da água restante da CVAF (fração de ácidos voláteis condensados) ou da fração tratada com resina catiônica ou do eluato, e recuperação dos sais de ácido orgânico formados,
em que os sais de ácido orgânico são escolhidos entre o grupo que consiste em: sais de ácido butírico, ácido láctico, ácido propiônico, ácido valérico, ácido acético, ácido glicólico, ácido sórbico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico,
derivados dos referidos ácidos orgânicos e misturas dos mesmos.
Ácidos orgânicos
[040] o termo "ácido orgânico" designa geralmente compostos orgânicos com propriedades ácidas. Este termo inclui, em particular, ácidos carboxílicos e ácidos sulfônicos, contendo o grupo -SO20H.
[041] Os ácidos orgânicos mais comuns são ácidos carboxílicos, caracterizados pela presença de um grupo carboxila (-COOH) composto por dois grupos funcionais: um grupo hidroxila (-OH) que é ligado a um grupo carbonila (C=O). Ácidos orgânicos são escritos em uma forma condensada R-COOH. Ácidos carboxílicos incluem ácidos carboxílicos alifáticos, aromáticos e cicloalifáticos, dependendo da estrutura do esqueleto de carbono (R).
[042] os ácidos orgânicos comumente encontrados no caldo de fermentação são os seguintes: ácido láctico, ácido acético, ácido succínico, ácido propiônico, ácido butírico, ácido metil butírico, ácido hidroxibutírico, ácido aminobutírico (em particular, GABA, ácido gama-aminobutírico), ácido valérico, ácido fórmico, ácido aspártico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido orótico, ácidos cetoglutáricos, ácido cítrico, ácido glutâmico, ácido glioxílico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido málico, ácido sórbico e ácido tartárico.
[043] Os ácidos orgânicos estão presentes em solução aquosa sob duas formas químicas: AH e A-. Esta forma A- é chamada de "base conjugada" do ácido AH. Por exemplo, para o ácido acético AH, a base conjugada A- será designada como acetato.
[044] No presente pedido, entende-se que, quando um ácido orgânico é designado como "ácido", ele designa a combinação em equilíbrio, em uma solução aquosa, de ambas as formas AH e A-. A forma AH é designada como “a forma associada ou protonada” do ácido e a forma A- é designada como a base conjugada ou “a forma dissociada ou desprotonada” do ácido. A proporção da forma AH versus forma A- é dependente do valor do pH da solução e pKa do ácido orgânico A.
[045] A base conjugada, carregada negativamente, tende a se associar com íons carregados positivamente (cátions), tais como íons de sódio (Na+), amônio (NH), cálcio (Ca2+), potássio (K+) e magnésio (Mg2+).
[046] Sais de ácido orgânico são definidos como uma combinação, eletricamente neutra, da base conjugada de um ácido orgânico e de um ou mais cátions.
[047] Em uma modalidade do presente pedido, o método para produzir sais de ácido orgânico é um método para produzir sais de ácido carboxílico.
[048] Em outra modalidade do presente pedido, o método é um método para produzir sais de ácido orgânico escolhidos entre o grupo que consiste em: sais de ácido láctico, ácido acético, ácido succínico, ácido propiônico, ácido butírico, ácido metil butírico, ácido hidroxibutírico, ácido aminobutírico (em particular, GABA, ácido gama-aminobutírico), ácido valérico, ácido fórmico, ácido aspártico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido orótico, ácidos cetoglutáricos, ácido cítrico, ácido glutâmico, ácido glioxílico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido málico, ácido sórbico, ácido tartárico, derivados dos referidos ácidos orgânicos e misturas dos mesmos.
[049] o método da invenção destina-se especificamente à produção de sais de ácido orgânico escolhidos entre o grupo que consiste em: sais de ácido butírico, ácido láctico, ácido propiônico, ácido valérico, ácido acético, ácido glicólico, ácido sórbico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, derivados dos referidos ácidos orgânicos e misturas dos mesmos.
[050] Ácido butírico (Nº CAS 107-92-6) é produzido como produto final de um processo de fermentação realizado unicamente por bactérias anaeróbicas obrigatórias, sejam do tipo selvagem ou recombinantes. Exemplos de espécies de bactérias produtoras de butirato são os seguintes: . Clostridium acetobutylicum . Clostridium butyricum . Clostridium kluyveri . Clostridium pasteurianum . Faecalibacterium prausnitzii . Fusobacterium nucleatum o. Butyrivibrio fibrisolvens . Eubacterium limosum
[051] O ácido láctico ocorre em duas formas isoméricas: isômero L (+), Nº CAS 79-33-4, isômero D (-), Nº CAS 10326-41-7 e como uma mistura racêmica: Ácido DL-láctico, Nº CAS 50-21-5. As bactérias produtoras de ácido láctico são amplamente categorizadas em dois tipos: - Bactérias heterofermentativas que produzem outros produtos além do ácido láctico, e - Bactérias homofermentativas que são especializadas na produção exclusiva de ácido láctico, tais como Lactobacillus sp.
[052] O ácido propiônico (CAS Nº 79-094) e seus sais propionatos ou propanoatos são compostos de ocorrência natural. Na indústria, o ácido propiônico é produzido principalmente quimicamente, pela hidrocarboxilação de etileno, ou pela oxidação aeróbica de propionaldeído. O ácido propiônico também é produzido biologicamente sob a forma de um éster de coenzima A, propionil-CoA, a partir da quebra metabólica de certos ácidos graxos e também da degradação de alguns aminoácidos. Bactérias do gênero Propionibacterium produzem ácido propiônico como o produto final de seu metabolismo anaeróbico.
[053] Ácido valérico (CAS Nº 109-52-4, também chamado de ácido pentanoico), apresenta a fórmula química CsHioO2. Embora pouco seja conhecido sobre a possibilidade de produzi-lo por fermentação, o pedido de patente WO 2012/030860 relata a biossíntese de seu ácido levulínico derivado, também conhecido como ácido 4-oxopentanoico, com enzimas específicas.
[054] O ácido acético (sistemicamente chamado ácido etanoico, Nº CAS 64-19-7) pode ser produzido tanto sinteticamente quanto por fermentação bacteriana com bactérias aeróbicas fixadoras de nitrogênio. Entre inúmeras cepas capazes de produzir ácido acético, Gluconobacter, Eubacterium limosum e Acetobacter (A. aceti, A. peroxidans, A. pasteurianus), um grupo de bactérias Gram-negativas incluído na família Acetobacteraceae, podem ser citados.
[055] O ácido glicólico (Nº CAS 79-14-1) é produzido por síntese química, é purificado a partir de fontes naturais ou é obtido por bioconversão. Também pode ser obtido a partir da fermentação das leveduras Saccharomyces cerevisiae e Kluyveromyces lactis. Métodos para produzir ácido glicólico por fermentação de recursos renováveis usando bactérias (E. coli, C. glutamicum) ou levedura (S. cerevisiae) são divulgados em pedidos de patente do Depositante (WO 2007/141316, Wo 2010/108909, WO 2011/157728, WO 2011/036213, WO 2012/025780).
[056] O ácido sórbico (Nº CAS 110-44-1), ou ácido 2,4-hexadienoico, é usado como conservante de alimentos. Foi primeiramente isolado dos frutos imaturos da sorveira (Sorbus aucuparia).
[057] O ácido fumárico (Nº CAS 110-17-8), ou ácido trans-butenodioico, é usado como um acidulante para alimentos. É encontrado naturalmente na fumária (Fumaria officinalis), cogumelos boletos, líquen, e musgo da Islândia. O ácido fumárico é um intermediário no ciclo do ácido cítrico: é formado pela oxidação do succinato e é então convertido em malato. O ácido fumárico também é um produto do ciclo da ureia. Portanto, muitos micro-organismos produzem ácido fumárico e a produção por fermentação, por exemplo, por espécies Rhizopus, é considerada atualmente.
[058] o ácido fórmico (Nº CAS 64-18-6), sistematicamente chamado ácido metanoico, ocorre amplamente na natureza como seu formiato de base conjugada. Pode ser produzido pela oxidação hidrotérmica do material de biomassa, tal como glicose, amido e celulose. Além disso, através da fermentação de Acetobacterium woodii, o formiato pode ser obtido por hidrogenação de CO2 com uma enzima dióxido de carbono redutase.
[059] O ácido málico (Nº CAS 617-48-1 e 6915- 15-7) é usado principalmente como um acidulante e realçador de sabor na indústria de bebidas e alimentos. Quando adicionado a produtos alimentícios, o ácido málico é designado pelo Número E E296. O ácido málico é o principal ácido em muitas frutas. Ele contribui para a acidez das maçãs verdes e do ruibarbo. O ácido málico ocorre naturalmente em todas as frutas e muitos vegetais e é gerado pelo metabolismo da fruta. O ácido málico é um intermediário no ciclo de Calvin e no ciclo do ácido cítrico. Também pode ser formado a partir de piruvato por meio de reações anapleróticas. Em 1924, o ácido málico foi identificado como um produto da fermentação de leveduras. Desde então, a produção de ácido málico foi observada para uma ampla variedade de micro-organismos. A produção fermentativa de ácido málico foi demonstrada com mais sucesso com Aspergillus flavus, Saccharomyces cerevisiae e Zygosaccharomyces rouxii.
[060] O ácido tartárico (Nº CAS 526-83-0)
ocorre naturalmente em muitas plantas, mais notavelmente em uvas e é usado como um acidulante em alimentos. Ele pode ser produzido por fermentação, em particular com micro- organismos pertencentes ao gênero Pseudomonas, Agrobacterium ou Rhizobium.
[061] O ácido cítrico (Nº CAS 77-92-9) foi isolado primeiramente do suco de limão. O ácido cítrico é usado principalmente na indústria alimentícia devido ao seu gosto ácido agradável e sua alta solubilidade em água. O ácido cítrico é o ácido orgânico mais importante produzido em toneladas e é extensivamente usado nas indústrias de alimentos e farmacêutica. É produzido principalmente por fermentação usando Aspergillus niger, Saccharomcopsis sp. ou Candida sp. a partir de diferentes fontes de carboidratos. Também pode ser produzido por fermentação da levedura Yarrowia lipolytica e espécies relacionadas.
[062] No significado da invenção, o termo "derivados de ácidos orgânicos" designam compostos químicos com um esqueleto de carbono apresentando o mesmo número de átomos de carbono e a mesma função acila que o ácido orgânico considerado, mas cuja fórmula química é modificada: - por substituição do grupo hidroxila por substituintes, tais como um átomo de halogênio, um grupo alcoxila, e um amino e um acilóxi; ou - pela adição de outros grupos funcionais, tais como grupos hidroxila.
Classes comuns de derivados de ácido orgânico incluem: - alfa-hidroxiácidos (AHA), em que um ácido carboxílico compreende um grupo hidroxila no carbono adjacente do grupo carboxila; - haleto de acila, em que a hidroxila foi substituída por um halogênio (F, Cl, Br ou I); - anidrido, em que dois ácidos orgânicos são ligados com um átomo de oxigênio entre os dois grupos acila; - éster, em que o grupo hidroxila foi substituído por um grupo alcoxila; e - amida, em que o grupo hidroxila foi substituído por um grupo NH2 ou NRº, R sendo hidrogênio ou uma alquila.
[063] Entende-se que o processo da invenção não compreende uma etapa de seleção de sais de ácido orgânico específicos. Portanto, os sais de ácido orgânico produzidos são recuperados sob a forma de uma mistura de pelo menos dois sais de ácido orgânico diferentes e seus derivados. No entanto, há geralmente um ou dois compostos principais na mistura. Este ponto será discutido mais extensivamente abaixo.
Etapa (i) do processo: cultura de um micro-organismo
[064] O termo "micro-organismo", conforme usado neste documento, refere-se a uma bactéria, uma levedura ou um fungo. O micro-organismo pode ser selecionado dentre bactérias pertencentes às famílias Eubacteriaceae, Enterobacteriaceae, Bacillaceae, Clostridiaceae ou Corynebacteriaceae. Alternativamente, o micro-organismo pode ser selecionado dentre leveduras pertencentes à família Saccharomycetaceae. Alternativamente, o micro-organismo pode ser selecionado dentre fungos pertencentes à família Ascomycota.
[065] Em uma modalidade, o micro-organismo cultivado com o método da invenção é uma bactéria, preferencialmente escolhida dentre o grupo de espécies consistindo em: Escherichia coli, Bacillus subtilis, Corynebacterium glutamicum, Clostridium acetobutylicum, Clostridium pasteurianum, e Eubacterium limosum.
[066] Preferencialmente, o micro-organismo cultivado com o método da invenção é qualquer um dentre as espécies Clostridium acetobutylicum, Eubacterium limosum ou Escherichia coli.
[067] Em uma modalidade específica da invenção, o micro-organismo cultivado é Clostridium acetobutylicum.
[068] Em uma modalidade, o micro-organismo cultivado com o método da invenção é um fungo,
preferencialmente escolhido dentre o grupo de espécies consistindo em: Saccharomyces .cerevisiae, Pichia kudriavzevii e Kluyveromyces lactis.
[069] Em uma modalidade, o micro-organismo cultivado com o método da invenção é um fungo, preferencialmente da espécie Aspergillus niger.
[070] De acordo com a invenção, o micro- organismo cultivado é um micro-organismo do tipo selvagem ou um micro-organismo recombinante geneticamente modificado.
[071] Preferencialmente, o micro-organismo cultivado na etapa i) do método de acordo com a invenção é o único micro-organismo na cultura, o que significa que uma única cepa do micro-organismo é fermentada.
[072] De acordo com a invenção, os termos "produção fermentativa", "cultura" ou "fermentação" são usados permutavelmente para denotar o crescimento de micro-organismos. Este crescimento é geralmente conduzido em fermentadores com um meio de cultura apropriado adaptado ao micro-organismo e contendo pelo menos uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio.
[073] Um "meio de cultura apropriado" designa um meio (por exemplo, um meios líquidos estéreis) que compreende nutrientes essenciais ou benéficos para a manutenção e/ou crescimento da célula, tais como fontes de carbono ou substratos de carbono, fontes de nitrogênio, por exemplo, peptona, extratos de levedura, extratos de carne, extratos de malte, ureia, sulfato de amônio, cloreto de amônio, nitrato de amônio e fosfato de amônio; fontes de fósforo, por exemplo, fosfato monopotássico ou fosfato dipotássico; elementos-traço (por exemplo, sais metálicos), por exemplo, sais de magnésio, sais de cobalto e/ou de manganês; bem como fatores de crescimento, tais como aminoácidos e vitaminas.
[074] O termo "fonte de carbono" ou "substrato de carbono" ou "fonte de carbono", de acordo com a presente invenção, denota qualquer fonte de carbono que possa ser usada pelos aqueles versados na técnica para fomentar o crescimento normal de um micro-organismo, incluindo monossacarídeos (como glicose, galactose, xilose, frutose ou lactose), oligossacarídeos, dissacarídeos (como sacarose, celobiose ou maltose), polióis, como glicerol ou glicerina, melaços, amido ou seus derivados, hemiceluloses e combinações dos mesmos. Uma fonte de carbono simples especialmente preferencial é a glicose. Outra fonte de carbono simples preferencial é sacarose.
[075] A fonte de carbono pode ser derivada de uma matéria-prima renovável. A matéria-prima renovável é definida como matéria-prima necessária para determinados processos industriais que podem ser regenerados em um breve espaço de tempo e em quantidade suficiente para permitir sua transformação no produto desejado. Como exemplo, a biomassa vegetal, tratada ou não, é uma matéria-prima renovável que pode ser usada como fonte de carbono.
[076] o termo "fonte de nitrogênio" corresponde a um sal de amônio ou gás amoníaco. A fonte de nitrogênio é fornecida sob a forma de amônio, amoníaco ou ureia.
[077] De acordo com a invenção, os termos "meio fermentativo", "meio", "caldo fermentativo", "caldo de fermentação" e "caldo" são usados permutavelmente e designam o meio fermentativo compreendendo micro- organismos cultivados. Estes termos significam que a cultura de micro-organismos foi realizada durante um tempo suficiente para que os micro-organismos cresçam e sintetizem ácidos orgânicos.
[078] De acordo com a invenção, a expressão "um tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos" designa um tempo de cultura suficiente para que os micro-organismos cresçam significativamente, em particular, para replicar e colonizar todo o meio de fermentação. Este tempo dependerá da natureza do micro-organismo, do volume da cultura e de outras condições de cultura (temperatura, agitação, PH). Este tempo suficiente pode ser determinado pelos versados na técnica da cultura de micro- organismos. Por exemplo, para um volume de cultura de 1000 litros, um tempo suficiente é geralmente cerca de 2 dias de cultura em condições ideais de cultura para Escherichia coli, e é geralmente cerca de 7 dias de cultura em condições ideais de cultura para Clostridium acetobutylicum.
[079] Em particular, os micro-organismos são fermentados a uma temperatura entre 20ºC e 55ºC, preferencialmente entre 25ºC e 40ºC, e mais especificamente cerca de 35ºC para Clostridium, cerca de 37ºC para Eubacterium, e cerca de 37ºC para E. coli. Para cepas induzíveis por calor, a temperatura de cultura é vantajosamente cerca de 30ºC, em alguns pontos do processo.
[080] Para E. coli, o meio de cultura pode ter uma composição idêntica ou semelhante a um meio M9 (Anderson, 1946), um meio M63 (Miller, 1992); ou um meio tal como definido em (Schaefer et al., 1999).
[081] Para Clostridium acetobutylicum, o meio de cultura pode ter uma composição idêntica ou semelhante a um CGM (meio de crescimento de Clostridium) ou um RCM (meio reforçado para Clostridium), tal como definido em (Zhao et al., 2016).
[082] Para Eubacterium limosum, o meio de cultura pode ter uma composição idêntica ou semelhante ao meio mineral descrito em (Pacaud et al. 1985).
[083] Quando um ácido é feito por fermentação, o ácido acumulado diminui o pH do meio até um ponto no qual o micro-organismo já não cresce, e a produção de ácido consequentemente pára. Por esta razão, é necessário adicionar um reagente à reação de fermentação que neutralizará, pelo menos em parte, oO ácido e manterá o pH em um nível suficiente para permitir o crescimento contínuo do micro-organismo.
[084] Um reagente neutralizante comumente usado é a solução básica de amônia, cuja fórmula química é NH3.
[085] Vantajosamente, durante esta etapa de cultura, o caldo de fermentação é coletado continuamente, sem interferir no processo de cultura, em particular sem remover a biomassa do recipiente da cultura.
[086] Alternativamente, o caldo de fermentação pode ser coletado em certos momentos, mas também sem interferir no processo de cultura.
[087] De acordo com essas modalidades, a etapa de cultura é referida como "contínua".
[088] Os benefícios industriais e econômicos desta implementação são um ganho de tempo e matérias- primas, uma vez que a cultura está na fase inicial apenas uma vez; outro benefício é um risco menor de contaminação da cultura de micro-organismos.
[089] De acordo com outra modalidade da invenção, o processo para produzir sais de ácido orgânico é realizado em condições descontínuas ou semidescontínuas. Neste caso, oO caldo de fermentação é coletado no final da cultura.
Etapa (ii) do processo: pré-tratamento do caldo de fermentação
[090] O processo de acordo com a invenção é caracterizado com uma etapa (ii) de pré-tratamento do caldo de fermentação compreendendo pelo menos as seguintes subetapas: a. Etapa de clarificação; c. Separação de ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil contendo os referidos ácidos orgânicos (CVAF) e, portanto, eliminação de impurezas sólidas não voláteis, principalmente sais do caldo de fermentação.
[091] A etapa de clarificação (a) do caldo de fermentação significa clarificar o meio de fermentação e remover as impurezas orgânicas insolúveis do referido meio de fermentação. A clarificação do meio é realizada por qualquer método conhecido como tal por aqueles versados na técnica, cujo método é escolhido, por exemplo, do grupo consistindo em aquecimento, floculação, decantação, técnicas de membrana (microfiltração, ultrafiltração, diafiltração,
nanofiltração e osmose reversa) e centrifugação.
[092] Uma etapa opcional (b) de ajuste de pH pode ser realizada, consistindo na adição de ácidos minerais no caldo a fim de reduzir o pH abaixo do pKa dos ácidos orgânicos contidos no caldo, que se destinam a ser recuperados .
[093] Esta etapa opcional é realizada a fim de maximizar a proporção de ácido(s) orgânico(s) sob sua forma protonada e, portanto, otimizar sua recuperação na fração volátil condensada da etapa (c)
[094] Este ajuste do pH (acidificação) é realizado por qualquer método conhecido pelos versados na técnica, cujo método é escolhido, por exemplo, pela adição de ácidos minerais escolhidos do grupo consistindo em: ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e ácido clorídrico.
[095] Os técnicos no assunto conhecem o pKa do ácido orgânico diferente destinado a ser recuperado, e são capazes de ajustar o pH de acordo com qualquer pKa, para obter o pH do caldo clarificado abaixo do pKa do ácido orgânico destinado a ser recuperado.
[096] A Tabela 1 abaixo apresenta o pKa de uma pluralidade de ácidos orgânicos. Esta tabela lista as constantes de dissociação ácido-base de compostos orgânicos, incluindo muitos aminoácidos. Todos os dados se aplicam a soluções aquosas diluídas e são apresentadas na forma de pKa, que é o negativo do logaritmo da constante de dissociação de ácido Ka.
Tabela 1. pKa de uma pluralidade de ácidos orgânicos Fórmula Molecular Nome TIºC pKa CcH202 Ácido fórmico 20 3,75 C2HC1302 Ácido tricloroacético 25 0,70 C2H2C1202 Ácido dicloroacético 25 1,48 cC2H203 Glioxílico 25 3,18 C2H204 Ácido oxálico 25 1,23 C2H3BroO2 Ácido bromoacético 25 2,69 C2H3Cl02 Ácido cloroacético 25 2,85 C2H31I02 Ácido iodoacético 25 3,12 C2H40S Ácido tioacético 25 3,33 C2H402 Ácido acético 25 4,76 c2H403 Ácido glicólico 25 3,83 C2H7AsO2 Ácido cacodílico 25 1,57 C3H3NO2 Ácido cianoacético 25 2,45 C3H402 Ácido acrílico 25 4,25 C3H403 Ácido pirúvico 25 2,39 C3H404 Ácido malônico 25 2,83 C3H5ClO2 Ácido 2-cloropropanoico 25 2,83
Fórmula Molecular Nome TIºC pKa C3H5ClO2 Ácido 3-cloropropanoico 25 3,98 C3H602 Ácido propanoico 25 4,86 C3H603 Ácido 3-hidroxipropanoico 25 4,51 C3H603 Ácido láctico 100 3,08 C3H604 Ácido glicérico 25 3,52 C4H4N203 Ácido barbitúrico 25 4,01 C4H4N205 Ácido aloxânico 25 6,64 C4H404 Ácido trans-fumárico 18 3,03 C4H404 Ácido maleico 25 1,83 C4H405 Ácido oxalacético 25 2,22 C4H602 Ácido 3-butenoico 25 4,34 Cc4H603 Ácido acetoacético 18 3,58 C4H603 Ácido 2-oxobutanoico 25 2,50 C4H604 Ácido metilmalônico 25 3,07 C4H604 Ácido succínico 25 4,16 C4H605 Ácido málico 25 3,40 C4H606 Ácido a-tartárico 25 2,98 C4H606 Ácido meso-tartárico 25 3,22 C4H608 Ácido di-hidroxitartárico 25 1,92 C4H7NO2 Ácido 4-cianobutanoico 25 2,42 C4H7NO4 Ácido aspártico 25 1,99
Fórmula Molecular Nome TIºC pKa C4H802 Ácido butanoico 25 4,83 C4H802 Ácido 2-metilpropanoico 25 4,88 C4H803 Ácido 3-hidroxibutanoico 25 4,70 C4H803 Ácido 4-hidroxibutanoico 25 4,72 C4H9NO2 Ácido 2-aminobutanoico 25 2,29 C4H9NO2 Ácido 4-aminobutanoico 25 4,03 CSH4N403 Ácido úrico 12 3,89 C5H604 Ácido itacônico 25 3,85 C5H804 Ácido glutárico 25 4,31 C6H1004 Ácido adípico 25 4,43 C6H1004 Ácido 3-metilglutárico 25 4,24 C6H11NO02 Ácido l-pipecólico 25 2,28 C7H1402 Ácido heptanoico 25 4,89 CBH604 Ácido o-ftálico 25 2,89 C8BH604 Ácido tereftálico 25 3,51 CBH1404 Ácido octanodioico 25 4,52
[097] A etapa (c) é uma etapa de separação por duas etapas sucessivas de evaporação e condensação.
[098] Em primeiro lugar, a fermentação clarificada é aquecida em uma unidade de evaporação para separar uma parte gasosa e uma parte sólida. Os parâmetros operacionais da unidade de evaporação são otimizados para cada caldo clarificado tratado. Baixas pressões (<1 bara) podem ser aplicadas e a temperatura depende do valor de pressão (por exemplo, a 500mbara, a temperatura do concentrado é de cerca de 110ºC para um determinado caldo de fermentação de Clostridium). Dependendo dos ácidos orgânicos visados, as condições podem ser adaptadas pelos versados na técnica para maximizar a evaporação dos referidos ácidos orgânicos visados na fração volátil.
[099] Em segundo lugar, a parte gasosa volátil contendo água, amônio e ácidos orgânicos é coletada, enquanto a parte sólida insolúvel contendo impurezas, tais como sais, é eliminada.
[100] A parte gasosa coletada é então condensada por refrigeração da parte, para obter uma parte líquida daqui por diante designada como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF).
[101] Em uma modalidade, esta etapa de separação pode ser realizada por destilação, um processo de separação dos componentes voláteis do caldo de fermentação por evaporação seletiva e condensação, explorando diferenças na volatilidade dos componentes do caldo. De acordo com esta modalidade, os ácidos orgânicos recuperados seriam selecionados entre outros compostos voláteis, e a CVAF compreenderia apenas ácidos orgânicos e compostos com a mesma volatilidade que os ácidos orgânicos.
[102] Outras etapas podem ser aplicadas para o pré- tratamento do caldo de fermentação para melhorar a eliminação de impurezas orgânicas. Essas etapas são opcionais. Elas podem ser de particular importância quando o caldo de fermentação contiver uma alta quantidade de álcoois. Elas incluem, em particular, subetapa(s) de destilação, a fim de melhorar o rendimento de recuperação para ácidos orgânicos (principalmente usada quando o caldo de fermentação é um caldo de Clostridium) e/ou osmose reversa, a fim de remover água e concentrar ácidos orgânicos.
Etapa opcional (iii)
[103] Entende-se que o método da invenção é definido com uma sequência de pelo menos quatro etapas sucessivas, mas que as etapas complementares opcionais podem ser integradas à sequência do método.
[104] Em particular, as etapas complementares podem ser realizadas logo após a etapa (ii) do pré-tratamento do caldo de fermentação.
[105] Essas etapas opcionais destinam-se a aumentar o rendimento e a pureza dos sais de ácido orgânico recuperados, quando o caldo de fermentação apresenta um alto nível de impurezas ou amoníaco.
[106] Conforme discutido anteriormente, durante a fermentação, os ácidos orgânicos produzidos se acumulam no meio e reduzem o pH, até um ponto em que os micro-organismos não crescem mais. Por esta razão, uma solução básica de amônia ou ureia, ou gás amoníaco, é adicionada continuamente durante a fermentação para manter o pH em um nível suficiente para permitir o crescimento contínuo de micro-organismos.
[107] Como consequência, o caldo de fermentação pode conter alto nível de amoníaco, transformado em uma solução ácida em cátions de amônio NH4e1.
[108] Em uma modalidade da invenção, o método compreende uma etapa (iii) de eliminação dos cátions de amônio presentes na CVAF.
[109] Esta etapa é realizada após a etapa (ii) do pré-tratamento do caldo de fermentação, passando a CVAF por um trocador de cátions capaz de ligar os cátions de amônio, preferencialmente uma resina catiônica forte.
[110] Assim, obteve-se uma "fração catiônica tratada com resina".
Etapa opcional (iv)
[111] Em uma modalidade da invenção, uma etapa opcional (iv) é realizada a fim de purificar os ácidos orgânicos contidos na CVAF ou na fração tratada com resina catiônica.
[112] Esta etapa consiste em passar a CVAF ou fração tratada com resina catiônica da etapa opcional (iii) por um trocador de ânions, preferencialmente uma resina aniônica forte, capaz de ligar as bases conjugadas dos ácidos orgânicos.
[113] Um trocador de ânion é uma resina do trocador iônico capaz de fixar as bases conjugadas (forma A-) dos ácidos orgânicos; o desacoplamento (eluição) dessas bases conjugadas é obtido com a adição de bases inorgânicas sobre o referido trocador de àânions. As bases inorgânicas compreendem ânions (tais como hidróxido) que se ligarão à resina; e cátions (tais como cátions de sódio) que se complexarão com as bases conjugadas, na fração de eluato.
Etapa (v) do processo: adição de bases inorgânicas
[114] Após o pré-tratamento do caldo de fermentação, a CVAF obtida é submetida à adição de bases inorgânicas para gerar os sais de ácido orgânico.
[115] Se a etapa opcional (iii) tiver sido realizada, as bases inorgânicas serão adicionadas à fração tratada com resina catiônica do trocador de cátions.
[116] Se a etapa opcional (iv) tiver sido realizada, as bases inorgânicas serão adicionadas ao trocador de ânions onde as bases conjugadas são ligadas. A presença de bases inorgânicas permitirá a eluição das bases conjugadas sob a forma de sais de ácido orgânico.
[117] As bases inorgânicas usadas para gerar os sais de ácido orgânico são vantajosamente escolhidas entre bases inorgânicas que são adequadas para uma administração oral a humanos e/ou animais.
[118] As bases inorgânicas são preferencialmente escolhidas entre o grupo que consiste em: sais de sódio, cálcio, potássio, magnésio e misturas dos mesmos.
[119] As bases inorgânicas usadas para obter sais de ácido orgânico são preferencialmente escolhidas entre o grupo que consiste em: hidróxido de sódio, hidróxido de cálcio, hidróxido de potássio, hidróxido de magnésio, carbonatos de sódio, carbonatos de cálcio, carbonatos de potássio, carbonatos de magnésio, óxidos de sódio, óxidos de cálcio, óxidos de potássio, óxidos de magnésio e misturas dos mesmos.
[120] Mais preferencialmente, a base inorgânica adicionada é escolhida entre hidróxido de sódio, carbonato de sódio e óxido de sódio.
[121] Em uma modalidade da invenção, pelo menos duas bases inorgânicas diferentes (isto é, uma mistura) são adicionadas à CVAF ou à fração tratada com resina catiônica ou ao trocador de ânions.
[122] Em uma modalidade da invenção, apenas uma base inorgânica, escolhida entre as bases inorgânicas listadas acima, é adicionada na etapa (v) do método.
[123] De acordo com esta modalidade, a mistura de sais de ácido orgânico, tal como obtida pelo método, é composta por diferentes ácidos orgânicos, combinados com um único cátion: íons de sódio, magnésio, potássio ou cálcio, preferencialmente com íons de sódio.
[124] Em uma modalidade preferencial da invenção, a base inorgânica adicionada é hidróxido de sódio (NaOH, consistindo em cátions de sódio Na: e ânions de hidróxido OH-) .
[125] Entende-se que estas bases inorgânicas são adicionadas em uma quantidade eficiente, isto é, em proporções estequiométricas necessárias para transformar a presente quantidade de ácido orgânico em sais de ácido orgânico.
[126] Os técnicos no assunto são capazes de determinar a quantidade eficiente de bases inorgânicas a serem adicionadas à CVAF ou à fração tratada com resina catiônica ou ao trocador de ânions, em função do volume da fração. Esta quantidade também dependerá do tipo de sal inorgânico e do tipo de micro-organismos cultivados e, portanto, do ácido orgânico principal produzido. Quantidades típicas de bases inorgânicas adicionadas estão compreendidas entre 5 gramas a 500 gramas por quilograma de CVAF.
Etapa (vi) do processo: eliminar a água restante da CVAF ou da fração tratada com resina catiônica ou do eluato, e recuperar os sais de ácido orgânico formados
[127] A última etapa fundamental do método de acordo com a invenção consiste na recuperação dos sais de ácido orgânico da CVAF ou da fração tratada com resina catiônica ou do eluato.
[128] Uma vez que os sais de ácido orgânico estejam em uma solução, é necessária uma etapa de eliminação da água restante.
[129] A eliminação da água restante pode ser realizada por qualquer técnica conhecida pelos versados na técnica, tais como secagem, evaporação, desidratação a vácuo ou usos de compostos higroscópicos.
[130] Esta etapa (vi) pode compreender uma ou mais subetapas escolhidas entre o grupo que consiste em: evaporação, atomização, granulação, aglomeração, cristalização, separação de líquido/sólido, filtração e centrifugação.
[131] Evaporação refere-se à remoção de água em uma unidade de evaporação. A pressão e a temperatura são controladas a fim de destilar uma parte da água restante. O concentrado contém os sais de ácido orgânico e a concentração é otimizada em relação à solubilidade dos diferentes sais de ácido orgânico. Esta etapa gera economia de custos para as próximas.
[132] A atomização indica a transformação de um líquido em uma multiplicidade de gotículas. Esta transformação procede através da formação de perturbações na superfície do líquido, seguida por sua amplificação devido à energia e transferência de força cinética do gás circundante.
[133] A granulação refere-se a um processo em que a CVAF concentrada ou a fração ou eluato é processado em bicos de pulverização para um leito fluidizado de pó. O pó poderia ser obtido por atomização ou diretamente no granulador de pulverização ou recuperado de uma produção anterior. A solução de sais ácidos orgânicos é pulverizada na superfície de partícula e o ar aquecido elimina a água, de modo que os sais de ácido orgânico se cristalizam diretamente na partícula. O tamanho da partícula será controlado pela variação do fluxo de alimentação, pela pressão do ar do bico de pulverização, pela taxa de reciclagem do produto seco e pelo tempo de permanência no equipamento.
[134] A aglomeração refere-se a um processo em que as partículas de pó são feitas para aderir para formar entidades de múltiplas partículas maiores chamadas grânulos. É o processo de coletar partículas juntas, criando ligações entre elas. As ligações são formadas usando um agente de ligação, preferencialmente a solução de sais de ácido orgânico. Partículas sólidas de sais contidos na CVAF ou na fração ou eluato são aglomeradas a fim de criar partículas de sais de ácido orgânico. A aglomeração pode ser realizada por granulação por via úmida ou granulação por via seca, dependendo se for realizada antes ou após a etapa de secagem.
[135] Uma etapa de cristalização consiste na cristalização dos sais orgânicos de modo a recuperar os sais na forma sólida. Esta etapa de cristalização pode ser realizada por meio de tecnologia escolhida do grupo que consiste em cristalização por resfriamento, cristalização por evaporação e cristalização adiabática. A cristalização é geralmente seguida de uma etapa de centrifugação ou filtração para separar os sais orgânicos cristalizados do líquido.
[136] As técnicas de separação de líquido/sólido, filtração e centrifugação destinam-se a separar os sais de ácido orgânico quando estão sob a forma de partículas sólidas, por exemplo, após a cristalização, a partir do líquido remanescente da CVAF ou da fração ou do eluato.
[137] Entende-se que esta última etapa (vi) pode ser realizada de acordo com qualquer método conhecido pelos versados na técnica, para a recuperação de sais de ácido orgânico em uma forma sólida seca.
Modalidades específicas
[138] Cinco esquemas exemplificando o método da invenção são apresentados abaixo. Todas essas sequências de etapas compreendem as quatro etapas necessárias e podem também compreender algumas etapas opcionais em sua sequência.
Esquema 1
[139] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico compreende as etapas sucessivas de: 1) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos; ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas: U clarificação do caldo de fermentação; e . separação dos ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil contendo os referidos ácidos orgânicos,
designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF); v) adição de bases inorgânicas à referida CVAF, preferencialmente hidróxido de sódio; vi) atomização ou granulação ou cristalização; e secagem e/ou evaporação dos sais de ácido orgânico formados.
[140] Neste esquema apresentado na Figura 1, a etapa (vi) de eliminação de água é ajustada a fim de otimizar o processamento final do produto. Em uma modalidade da invenção, esta etapa compreende uma atomização ou granulação dos sais de ácido orgânico.
[141] Vantajosamente, a etapa de eliminação da água pode ser realizada pela técnica de cristalização seguida com uma separação de líquido/sólido, ou uma centrifugação, antes de uma secagem final.
[142] Entende-se que uma subetapa de filtração também possa ser introduzida durante o processo, a fim de separar o material cristalino, em vez de centrifugação ou separação de líquido/sólido.
[143] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico consiste nas etapas sucessivas listadas no esquema 1.
Esquema 2
[144] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico compreende as etapas sucessivas de: i) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos; ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas: U clarificação do caldo de fermentação; e . separação de ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil, designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF); iv) passagen da CVAF por um trocador de ânions, preferencialmente por uma resina aniônica forte; v) adição de bases inorgânicas ao trocador de ânions para eluir as bases conjugadas ligadas dos referidos ácidos orgânicos e obter um eluente contendo as referidas bases conjugadas; vi) evaporação do eluato, em seguida, atomização Ou granulação ou cristalização, em seguida, centrifugação e secagem a fim de coletar os sais de ácido orgânico formados.
[145] Este esquema é representado esquematicamente na figura 2.
[146] Preferencialmente, uma resina aniônica forte é usada devido ao alto nível de cátions de amônio que podem interferir com a ligação das bases conjugadas na resina aniônica.
[147] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico consiste nas etapas sucessivas listadas no esquema 2.
Esquema 3
[148] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico compreende as etapas sucessivas de: i) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos; ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas: U clarificação do caldo de fermentação; e . separação de ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil, designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF);
iii) eliminação dos cátions de amônio presentes na CVAF, passando a CVAF por um trocador de cátions, para ligar os cátions de amônio; iv) passagem da fração tratada com resina catiônica obtida na etapa (iii) por um trocador de ânions; v) adição das bases inorgânicas ao trocador de ânions para eluir as bases conjugadas ligadas; vi) evaporação do eluato, em seguida, atomização ou granulação ou cristalização, em seguida, centrifugação e secagem a fim de coletar os sais de ácido orgânico formados.
[149] O trocador de cátions é uma resina do trocador iônico capaz de fixar os cátions de amônio (NH4+) presentes na CVAF; a fração tratada com resina catiônica obtida, após a passagem através da resina, compreende as bases conjugadas dos ácidos orgânicos. A resina catiônica é preferencialmente uma resina catiônica forte.
[150] Na etapa (iv), a fração tratada com resina catiônica é passada por um trocador de ânions capaz de fixar as bases conjugadas (forma A-) dos ácidos orgânicos; O desacoplamento (eluição) dessas bases conjugadas pode ser obtido com a adição de bases inorgânicas, compreendendo ânions (tais como hidróxido) que serão fixados no trocador iônico; e cátions (tais como cátions de sódio) que se complexarão com as bases conjugadas, na fração do eluato.
[151] Neste esquema, apresentado na Figura 3, O trocador de ânions é indiferentemente uma resina aniônica forte ou fraca, uma vez que os cátions de amônio foram eliminados anteriormente.
[152] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico consiste nas etapas sucessivas listadas no esquema 3.
Esquema 4
[153] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico compreende as etapas sucessivas de: i) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos; ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas: º clarificação do caldo de fermentação; e .º separação de ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil, designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF); iii) eliminação dos cátions de amônio da CVAF passando a CVAF com o pH ajustado por um trocador de cátions; v) adição de bases inorgânicas à fração tratada com resina catiônica; vi) eliminação da água restante da fração tratada com resina catiônica e coleta dos sais de ácido orgânico formados.
[154] Este esquema é representado esquematicamente na Figura 4.
[155] O trocador de cátions é uma resina do trocador iônico capaz de fixar os cátions de amônio (NH4+) presentes na CVAF; a fração tratada com resina catiônica obtida, após a passagem através da resina, compreende as bases conjugadas dos ácidos orgânicos. A resina catiônica é preferencialmente uma resina catiônica forte.
[156] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico consiste nas etapas sucessivas listadas no esquema 4.
Esquema 5
[157] De acordo com outra modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido orgânico consiste nas etapas sucessivas de: 1) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos;
ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas: . clarificação do caldo de fermentação; e . separação de ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil, designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF); . eliminação dos cátions de amônio da CVAF adicionando-se um ácido mineral e, em seguida, a cristalização por evaporação da CVAF com o pH ajustado, os ácidos orgânicos serão recuperados em destilados condensados (DCVAF para fração de ácido volátil condensado duplo) e a base inorgânica formada a partir de amônio será recuperada por centrifugação/secagem dos cristais; v) adição das bases inorgânicas à referida DCVAF; vi) eliminação da água restante da DCVAF, e recuperação dos sais de ácido orgânico formados.
[158] Neste esquema 5, apresentado na figura 5, uma etapa opcional de adição de um ácido mineral (inorgânico) é realizada entre as etapas (ii) e (v).
[159] A adição de um ácido mineral, tal como ácido nítrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico, é feita em uma quantidade estequiométrica com cátions de amônio a fim de gerar sais de amônio. Esta etapa permite a neutralização do pH da CVAF: o pH fica então baixo, de modo que os ácidos orgânicos fiquem na forma protonada AH.
[160] Em uma modalidade preferencial da invenção, o ácido mineral é ácido sulfúrico.
[161] A etapa seguinte de cristalização por evaporação é realizada a fim de recuperar os ácidos orgânicos voláteis na parte gasosa (DCVAF) e separar os sais de amônio que estão contidos no material cristalino. O referido material cristalino pode ser tratado por filtração e secagem a fim de recuperar os ácidos orgânicos que foram perdidos na primeira etapa de destilação, os sais de amônio diretamente valiosos em vez da água residual.
[162] A DCVAF é então processada de acordo com as etapas (v) e (vi) conforme descrito anteriormente.
Combinações específicas
[163] Em uma primeira modalidade, o método de acordo com esta invenção é um método para produzir sais de ácido butírico.
[164] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido butírico compreende a cultura de um micro-organismo da família Clostridiaceae, preferencialmente da espécie Clostridium acetobutylicum.
[165] De acordo com uma modalidade mais específica da invenção, o método destina-se a produzir sais de sódio de ácido butírico.
[166] Em uma segunda modalidade, o método de acordo com esta invenção é um método para produzir sais de ácido acético, ou um método para produzir sais de ácido acético e de ácido butírico.
[167] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir os sais de ácido acético e ácido butírico compreende a cultura de um micro-organismo da família Eubacteriaceae, preferencialmente da espécie Eubacterium limosum.
[168] Em uma terceira modalidade, o método de acordo com esta invenção é um método para produzir sais de ácido glicólico.
[169] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido glicólico compreende a cultura de um micro-organismo da família Enterobacteriaceae, preferencialmente da espécie Escherichia coli.
[170] De acordo com uma modalidade específica da invenção, o método para produzir sais de ácido glicólico compreende a cultura de um micro-organismo da família Saccharomyces, preferencialmente da espécie Pichia kudriavzevii.
[171] Em uma quarta modalidade, o método de acordo com esta invenção é um método para produzir sais de ácido láctico, compreendendo a cultura de pelo menos um micro- organismo produtor de ácido láctico.
[172] Em uma quinta modalidade, o método de acordo com esta invenção é um método para produzir sais de ácido propiônico, compreendendo a cultura de pelo menos um micro- organismo produtor de ácido propiônico.
[173] Em uma sexta modalidade, o método de acordo com esta invenção é um método para produzir sais de ácido valérico, compreendendo a cultura de pelo menos um micro- organismo produtor de ácido valérico.
[174] Em uma sétima modalidade, o método de acordo com esta invenção é um método para produzir sais de ácido acético, compreendendo a cultura de pelo menos um micro- organismo produtor de ácido acético.
Sais de ácido orgânico tais como obtidos
[175] O método da invenção não compreende uma etapa de seleção de sais de ácido orgânico específicos. Portanto, os sais de ácido orgânico produzidos são recuperados na forma de uma mistura de pelo menos dois sais de ácido orgânico diferentes.
[176] A presente invenção refere-se a uma mistura de sais de ácido orgânico, tais como obtidos pelo método descrito anteriormente.
[177] Esses sais de ácido orgânico são compostos por bases conjugadas de ácidos orgânicos e cátions inorgânicos, tais como cátions de sódio, magnésio, potássio ou cálcio.
[178] Em uma modalidade preferencial, esta mistura de sais de ácido orgânico é composta exclusivamente de sais compreendendo um único tipo de cátions, preferencialmente cátions de sódio. Por exemplo, a mistura conforme obtida compreenderá sais de sódio de ácido butírico e sais sódicos de ácido acético.
[179] Em outra modalidade preferencial, esta mistura de sais de ácido orgânico compreende um componente principal, o que significa que o peso do referido componente principal representa mais de 50% do peso da mistura.
[180] Em outra modalidade preferencial, esta mistura de sais de ácido orgânico compreende pelo menos dois componentes principais, o que significa que o peso dos referidos componentes principais representa mais de 50% do peso da mistura.
[181] A avaliação do peso de cada componente da mistura pode ser realizada pelos versados na técnica, após o isolamento de cada sal de ácido orgânico presente na mistura, por técnicas usuais, tais como HPLC e espectroscopia de massa.
[182] A proporção de cada ácido orgânico recuperado depende, pelo menos, do micro-organismo cultivado e do tempo de fermentação do referido micro-organismo.
[183] Em uma modalidade específica da invenção, o componente principal da mistura são sais de ácido butírico e seus derivados.
[184] Preferencialmente, estes sais de ácido butírico e seus derivados são sais sódicos de ácido butírico.
[185] Em outra modalidade da invenção, os principais componentes da mistura são sais de ácido butírico e sais de ácido acético, e derivados destes preferencialmente sais sódicos de ácido butírico e sódicos de ácido acético.
[186] Em outra modalidade da invenção, o componente principal da mistura são sais de ácido glicólico e seus derivados, preferencialmente sais sódicos de ácido glicólico.
EXEMPLOS
[187] A presente invenção é definida ainda nos exemplos a seguir. Deve ser entendido que estes exemplos, embora indiquem modalidades preferenciais da invenção, são dados somente a título de ilustração. A partir da divulgação acima e destes exemplos, os versados na técnica podem fazer várias mudanças da invenção para adaptá-la a vários usos e condições sem modificar os meios essenciais da invenção.
Exemplo 1: Recuperação de sais de ácidos orgânicos a partir do caldo de fermentação da produção de 1,3-
[188] As cepas recombinantes de Clostridium acetobutylicum são fermentadas em fermentador contínuo para produzir 1,3-propanodiol, conforme descrito nos pedidos de patente EP 2 427 562, EP 2 638 172 e EP
17305187.1 ainda não publicado.
[189] Vários ácidos orgânicos produzidos durante a execução da fermentação são considerados subprodutos, como, por exemplo; ácido butírico, ácidos fórmico e acético. A composição típica do caldo de fermentação é dada abaixo, após a etapa (1) de fermentação do processo.
Tabela 2: composição típica de um caldo de fermentação resultante da etapa i. me ee Ts Composto Título (9/kg) (%) es [um | | 1,2 + 0,6 1,5% (residual)
[190] Após a clarificação do caldo de fermentação (etapa ii.a), a composição quase não muda, pois apenas a biomassa foi eliminada do caldo de fermentação.
[191] A etapa (ii.c) é realizada a fim de separar ácidos orgânicos voláteis, usando mais de um estágio de evaporação e condensação, mais uma etapa de osmose reversa de alguns condensados. A CVAF obtida no final da etapa ii.c tem aproximadamente a seguinte composição.
Tabela 3: Composição típica da CVAF após a etapa (ii.c).
Título Pureza Composto pureza vs (9/kg) relativa (%) caldo eee | | om [cm | 0,1 0,1% x 0,07 (residual)
[192] A pureza do ácido orgânico volátil aumentou aproximadamente 4 vezes em relação à composição do caldo de fermentação.
[193] Nenhuma etapa opcional (entre iii e iv) é realizada nesta CVAF.
[194] A etapa (v) de adição de ácido inorgânico é realizada pela adição de soda (bicarbonato de sódio). A quantidade de soda é 32g/kg de CVAF, a fim de obter uma razão estequiométrica de soda/ácidos orgânicos.
[195] Etapa (vi): esta solução foi então concentrada por evaporação. Um evaporador de filme descendente foi usado em pressão atmosférica e a temperatura do concentrado final foi de cerca de 112ºC. Água e amônia foram recuperadas nos destilados, enquanto ambos os sais sódicos de ácidos orgânicos foram recuperados no concentrado. A composição do concentrado é dada na tabela abaixo. Tabela 4: composição típica do concentrado Título Pureza Composto pureza vs (9/kg) relativa (%) caldo me | | | 0,3 0,1% x 0,05 (residual)
[196] Ao substituir o amônio por sódio, o teor global de matéria seca aumentou, de modo que as purezas relativas diminuíram. Após esta etapa, a composição em sais de sódio é mostrada abaixo na tabela 5.
Tabela 5: composição típica de sais de sódio do concentrado TT e eo | Composto (9/kg) relativa (%)
[197] Este concentrado foi então processado em um secador de leito fluidizado usando um bico de granulação por pulverização. O equipamento usado foi um Procell Labsystem da Glatto. O ar aquecido foi usado para secar o produto enquanto a solução de sais sódicos de ácidos orgânicos foi pulverizada na câmara. Um sistema de classificação foi usado na saída do equipamento para otimizar a distribuição de tamanho de partícula do produto seco.
Tabela 6: Composição final típica em sais de ácido orgânico TT e je Composto (9/kg) relativa (%) ss
[198] A distribuição do tamanho de partícula do produto seco foi medida usando um Mastersizer 3000 (MalvernO) que mostrou que o produto tem um perfil fino e uma boa resistência mecânica sob pressão de ar.
[199] A tabela abaixo apresenta a composição do produto seco usando concentrações de ácido orgânico, de modo que as purezas relativas possam ser comparadas com a composição do caldo.
Tabela 7: Composição típica do produto seco usando concentrações de ácido orgânico Título Pureza Composto pureza vs (9/kg) relativa (%) caldo
A
[200] Aplicando-se as etapas principais da invenção, foi obtido um produto seco contendo sais sódicos de ácido orgânico, com uma pureza aumentada em cerca de 4 vezes em relação à composição inicial do caldo de fermentação.
Exemplo 2: Recuperação de sal de butirato de sódio puro a partir de um caldo de fermentação da produção de 1,3-
[201] O processo de acordo com a invenção pode permitir a produção de um sal orgânico específico, a partir de uma solução pura do referido ácido orgânico específico como, por exemplo, ácido butírico.
[202] o caldo de fermentação das cepas de Clostridium acetobutylicum é pré-tratado de acordo com a etapa (ii). A CVAF é então submetida a um processo de purificação para recuperar o ácido butírico puro.
[203] A etapa (v) do processo (adição de bases inorgânicas, em particular, sais de sódio) é então realizada, de modo que uma solução de butirato de sódio puro seja obtida e, em seguida, processada na etapa (vi) usando o mesmo equipamento de secagem descrito no exemplo 1.
[204] O produto seco obtido por granulação por pulverização tem um teor de butirato de sódio de 98,5% (1,5% de água). A composição é dada na tabela 8 abaixo.
Tabela 8: Composição do sal de butirato de sódio ee [E E || Título Pureza Composto pureza vs (9/kg) relativa (%) caldo
A
[205] O butirato de sódio puro obtido é um pó branco composto por pequenas bolas esféricas.
[206] A distribuição do tamanho de partícula do produto seco foi medida usando um Mastersizer 3000 (MalvernO) que mostrou que o produto tem um perfil fino e uma boa resistência mecânica sob pressão de ar.
[207] Este exemplo mostra que o processo da invenção pode compreender etapas de purificação complementares e que, neste caso, a pureza do produto pode ser aprimorada a partir do mesmo caldo de fermentação. A pureza do ácido butírico aumentou mais de 5 vezes em relação a sua pureza inicial em caldo líquido (vs 4 vezes no exemplo 1).
REFERÊNCIAS
PATENTES - EP 1 094 054 - EP 350 355 - US 4,490,295 - US 2004/0048344 - US 2004/0077057 - US 3,720,584 - CN 101475464 - WO 2013/169447
NÃO PATENTES - Anderson, 1946, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 32:120-
128.
= Miller, 1992, Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and Related Bacteria, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nova York - Schaefer et al. 1999, Anal. Biochem. 270: 88-96.
- Zhao X, Condruz S&S, Chen 4, Jolicoeur M. A quantitative metabolomics study of high sodium response in
Clostridium acetobutylicum ATCC 824 acetone-butanol- ethanol (ABE) fermentation.
Scientific Report. 20 de junho de 2016; 6:28307
- S Pacaud, P Loubiere, G Goma.
Methanol metabolism by Eubacterium limosum B2: Effects of pH and carbon dioxide on growth and organic acid production.
Current Microbiology, Vol 12, 1985.

Claims (11)

REIVINDICAÇÕES
1. Método para produzir sais de ácido orgânico, caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos as etapas sucessivas de: i) cultura de um micro-organismo em um meio de cultura apropriado compreendendo uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, durante tempo suficiente para obter um caldo de fermentação compreendendo ácidos orgânicos; ii) pré-tratamento do referido caldo de fermentação com pelo menos as seguintes etapas: a. clarificação do caldo de fermentação; b. opcionalmente, ajuste do pH do caldo de fermentação clarificado; e c. separação dos ácidos orgânicos por evaporação do caldo de fermentação clarificado e depois condensação da fração volátil contendo os referidos ácidos orgânicos, designada adiante como a fração de ácidos voláteis condensados (CVAF); iii) opcionalmente, passagem da CVAF por um trocador de cátions capaz de ligar os cátions de amônio; iv) opcionalmente, passagem da CVAF ou da fração tratada com resina catiônica por um trocador de ânions capaz de ligar as bases conjugadas dos ácidos orgânicos; v) adição de bases inorgânicas à referida CVAF ou à referida fração tratada com resina catiônica ou ao referido trocador de ânions para eluir as bases conjugadas ligadas; vi) eliminação da água restante da CVAF ou da fração tratada com resina catiônica ou do eluato, e recuperação dos sais de ácido orgânico formados, em que os sais de ácido orgânico são escolhidos entre o grupo que consiste em: sais de ácido butírico, ácido láctico, ácido propiônico, ácido valérico, ácido acético, ácido glicólico, ácido sórbico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, derivados dos referidos ácidos orgânicos e misturas dos mesmos.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido micro- organismo é uma bactéria, preferencialmente escolhida entre o grupo que consiste em: Escherichia coli, Bacillus subtilis, Corynebacterium glutamicum, Clostridium acetobutylicum, Clostridium pasteurianum e Eubacterium limosum.
3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o referido micro- organismo é uma bactéria Clostridium acetobutylicum.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido micro- organismo é uma levedura, preferencialmente escolhida entre o grupo que consiste em: Saccharomyces cerevisiae, Pichia kudriavzevii e Kluyveromyces lactis.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a etapa (ii) de pré-tratamento compreende uma ou mais subetapas de destilação e/ou osmose reversa.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que, na etapa (v), as bases inorgânicas adicionadas são escolhidas entre o grupo que consiste em: sais de sódio, cálcio, potássio, magnésio e misturas destes.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que, na etapa (v), as bases inorgânicas adicionadas são escolhidas entre hidróxido de sódio, carbonato de sódio e óxido de sódio.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a base inorgânica adicionada é hidróxido de sódio.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a etapa (vi) de secagem compreende uma ou mais subetapas escolhidas entre o grupo que consiste em: evaporação, atomização, granulação, aglomeração, cristalização, separação de líquido/sólido, filtração e centrifugação.
10. Mistura de pelo menos dois sais de ácido orgânico,
caracterizada pelo fato de que é obtida pelo método conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.
11. Mistura de sais de ácido orgânico, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que sais de ácido butírico e seus derivados são os componentes principais da mistura.
BR112020006001-1A 2017-10-02 2018-10-01 método para produção de sais de ácido orgânico a partir de caldo de fermentação BR112020006001A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17306317.3 2017-10-02
EP17306317 2017-10-02
PCT/EP2018/076648 WO2019068642A1 (en) 2017-10-02 2018-10-01 PROCESS FOR PRODUCING ORGANIC ACID SALTS FROM A FERMENTATION BROTH

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112020006001A2 true BR112020006001A2 (pt) 2020-10-13

Family

ID=60080734

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112020006001-1A BR112020006001A2 (pt) 2017-10-02 2018-10-01 método para produção de sais de ácido orgânico a partir de caldo de fermentação

Country Status (8)

Country Link
US (1) US11293039B2 (pt)
EP (1) EP3692159A1 (pt)
JP (1) JP2020535826A (pt)
KR (1) KR20200060482A (pt)
CN (1) CN111164215A (pt)
BR (1) BR112020006001A2 (pt)
CA (1) CA3076745A1 (pt)
WO (1) WO2019068642A1 (pt)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2022016046A (es) * 2020-06-16 2023-03-10 Superbrewed Food Inc Métodos de elaboración de productos de butirato.
CN112335810B (zh) * 2020-10-20 2022-10-25 安徽绿微康生物科技有限公司 食用抗氧化剂及其制备方法和应用
CN113321339B (zh) * 2021-05-06 2022-04-29 江南大学 一种蒸发冷凝水资源化处理并回用生产燃料乙醇的方法
WO2022240818A1 (en) * 2021-05-12 2022-11-17 Lygos, Inc. Methods and organisms for producing glycolic acid
CN114507611B (zh) * 2022-02-17 2023-10-13 大自然生物集团有限公司 α-酮戊二酸生产用耐高温酵母及发酵方法

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4814074B1 (pt) * 1969-07-09 1973-05-02
NL7601227A (nl) 1975-02-07 1976-08-10 Glaxo Lab Ltd Werkwijze ter bereiding van een nieuw antibioti- cum.
JPS5294476A (en) * 1976-02-02 1977-08-09 Mitsubishi Gas Chem Co Inc Method of immobilizing microorganisms
JPS6156086A (ja) * 1984-08-27 1986-03-20 Asahi Chem Ind Co Ltd α−オキシ酸およびその塩の微生物学的製造法
JPH0789942B2 (ja) * 1987-09-30 1995-10-04 株式会社島津製作所 乳酸の精製法
FR2633939B1 (fr) 1988-07-06 1991-05-31 Inst Francais Du Petrole Procede de production d'acide butyrique normal par fermentation a partir d'un substrat sucre en presence d'au moins une souche de l'espece clostridium
JPH0564590A (ja) * 1991-05-27 1993-03-19 Nippon Synthetic Chem Ind Co Ltd:The ソルビン酸の製造方法
US5264623A (en) * 1993-01-04 1993-11-23 Energy Mines & Resources Canada Method of producing calcium salts from biomass
ES2225112T3 (es) * 1999-03-22 2005-03-16 Purac Biochem Bv Procedimiento de purificacion de acido lactico a escala industrial.
FR2799754A1 (fr) 1999-10-18 2001-04-20 Roquette Freres Procede de separation et de purification d'acide lactique a partir d'un milieu de fermentation
DE10108225A1 (de) 2001-02-21 2002-10-10 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salze als Zusatz zu Tierfuttermitteln
ES2278906T3 (es) 2001-02-21 2007-08-16 Basf Aktiengesellschaft Metodo para producir acido d-pantotenico y/o las sales de este como un aditivo para alimento animal.
CN1297529C (zh) * 2003-05-15 2007-01-31 河北科技大学 丙酸菌发酵液的天然丙、乙酸酸化蒸馏提取法
JP2005211042A (ja) * 2004-02-02 2005-08-11 Nippon Shokubai Co Ltd フマル酸の製造方法
JP3959403B2 (ja) * 2004-03-25 2007-08-15 財団法人地球環境産業技術研究機構 有機酸の精製方法
WO2006119052A2 (en) * 2005-05-03 2006-11-09 Anaerobe Systems Anaerobic production of hydrogen and other chemical products
DE102005056667A1 (de) * 2005-11-28 2007-05-31 Basf Ag Fermentative Herstellung organischer Verbindungen
WO2007140816A1 (en) 2006-06-09 2007-12-13 Metabolic Explorer Glycolic acid production by fermentation from renewable resources
CN100469746C (zh) * 2007-04-16 2009-03-18 清华大学 一种发酵法生产1,3-丙二醇的提取工艺
CN101348774B (zh) * 2008-09-02 2010-06-16 清华大学 一种驯化1,3-丙二醇产生菌的方法及其应用
CN101475464B (zh) 2009-02-09 2011-08-31 南京工业大学 一种利用纳滤从丁二酸发酵液中分离提取丁二酸的方法
EP2233562A1 (en) 2009-03-24 2010-09-29 Metabolic Explorer Method for producing high amount of glycolic acid by fermentation
EP2248904A1 (en) * 2009-05-05 2010-11-10 Metabolic Explorer Continuous culture for 1,3-propanediol production using high glycerine concentration
WO2011036213A2 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Metabolic Explorer Fermentation process for producing glycolic acid
WO2011082378A2 (en) * 2009-12-31 2011-07-07 Myriant Technologies Llc Purification of succinic acid from the fermentation broth containing ammonium succinate
JP2011177159A (ja) * 2010-03-04 2011-09-15 Daiso Co Ltd 乳酸発酵液からの乳酸の単離・精製方法
US9121043B2 (en) 2010-06-15 2015-09-01 Metabolic Explorer Method for producing glycolic acid using an inducible promoter
EP2609208A1 (en) 2010-08-27 2013-07-03 Metabolic Explorer Improved glycolic acid fermentative production with a modified microorganism
BR112013004868B1 (pt) 2010-08-30 2021-06-22 Arzeda Corp. Método para produzir ácido 2,4-dihidroxipentanoico e método para produzir um material polimérico ou produto contendo polímero
AR083799A1 (es) 2010-11-10 2013-03-20 Metabolic Explorer Sa Microorganismos para la produccion de 1,3-propanodiol usando concentracion de glicerina alta
FI123518B (en) * 2011-12-01 2013-06-14 Kemira Oyj Process for the recovery and purification of propionic acid
EP2847342B1 (en) 2012-05-07 2020-08-12 Archer Daniels Midland Co. Purification of succinic acid
KR101843586B1 (ko) * 2012-05-23 2018-03-30 에스케이이노베이션 주식회사 탄소원 기질과 염기의 유가식 공급에 의한 유기산 제조 방법
HUE032752T2 (en) * 2013-06-03 2017-10-30 Evonik Degussa Gmbh A method for the preparation of L-valine using recombinant corynebacteria containing propionate-inducible ilvBN operon
JP2017521422A (ja) * 2014-07-10 2017-08-03 アーチャー−ダニエルズ−ミッドランド カンパニー 新規な乳酸回収方法
CN105585431A (zh) * 2014-10-22 2016-05-18 中国石油化工股份有限公司大连石油化工研究院 一种含盐发酵液的脱盐方法
CN104628549B (zh) * 2015-01-20 2016-04-06 温州大学 一种用PEG/Na2SO4双水相萃取发酵液丁酸的方法
WO2017033925A1 (ja) * 2015-08-24 2017-03-02 株式会社ヤクルト本社 酪酸産生菌

Also Published As

Publication number Publication date
EP3692159A1 (en) 2020-08-12
US11293039B2 (en) 2022-04-05
WO2019068642A1 (en) 2019-04-11
KR20200060482A (ko) 2020-05-29
JP2020535826A (ja) 2020-12-10
CA3076745A1 (en) 2019-04-11
US20200231995A1 (en) 2020-07-23
CN111164215A (zh) 2020-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11293039B2 (en) Method for producing organic acid salts from fermentation broth
Quitmann et al. Acidic organic compounds in beverage, food, and feed production
JP7127987B2 (ja) ジアミンの製造および処理方法
EP1025254B1 (en) Low ph lactic acid fermentation
EP2265723B1 (fr) Procédés de production d&#39;acide succinique
EP2038422B1 (en) Lactic acid production from concentrated raw sugar beet juice
EP2681182B1 (en) Production of carboxylic acid and ammonium salts
Kamzolova et al. The production of succinic acid by yeast Yarrowia lipolytica through a two-step process
Milsom Organic acids by fermentation, especially citric acid
Kumar et al. A brief review on propionic acid: a renewal energy source
EP2224011B1 (en) Method for manufacturing a fermentation product containing propionate and acetate comprising a step of removing carbonate-derived compounds
CN106868061A (zh) 一种柠檬酸的制备方法
Cordero-Soto et al. Recent advances in the bioconversion of 2-phenylethanol through biotechnological processes for using as a natural food additive
CN108753854B (zh) 一种富马酸与香草醛联产发酵的方法
Kumar et al. Propionic acid production via fermentation route using renewable sources
US20140093926A1 (en) Integrated systems and methods for organic acid production
Mishra et al. Role of Downstream Processing for Production and Purification of Fermentation-Based Products Produced via Whole-Cell Biotransformation
CN115960973A (zh) 十一碳二元酸发酵液、十一碳二元酸发酵处理液、十一碳二元酸及其制备方法
JPH05163193A (ja) 酒石酸の分離法
BR102020011317A2 (pt) Processo de produção de ácidos orgânicos pela bactéria oxidativa acetobacter aceti a partir de fermentado alcoólico produzido com matérias-primas residuárias
CN116970658A (zh) 一种基于生物炭发酵产丁二酸的方法
JPH03290195A (ja) 発酵法によるd―イソクエン酸の製造法
Cotton Evaluation of continuous lactic acid fermentation using a plastic composite support biofilm reactor and lactic acid recovery using emulsion liquid membrane extraction
JPH03290194A (ja) 発酵法によるd―イソクエン酸の製造法
JPS58152480A (ja) 膜結合型アルデヒド脱水素酵素の製造法

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]