BR112019018378A2

BR112019018378A2 - proteínas de ligação ao antígeno anti-tigit e métodos de utilização destas

Info

Publication number: BR112019018378A2
Application number: BR112019018378A
Authority: BR
Inventors: James Nirschl Christopher; Seidel-Dugan Cynthia; Hicklin Daniel; Brodkin Heather; Salmeron-Garcia Jose-Andres; P Nielson Nels; Steiner Philipp; Winston William
Original assignee: Potenza Therapeutics Inc
Priority date: 2017-03-30
Filing date: 2018-03-30
Publication date: 2020-04-07
Also published as: CO2019009612A2; KR20190134605A; US11453720B2; CN110546163A; CN110546163B; RU2019127786A; MX2019010440A; WO2018183889A1; CA3055289A1; RU2019127786A3; EP3601340A1; AU2018243665A1; IL269074A; JP7335164B2; JOP20190203A1; PH12019502025A1; JP2020512973A; US20200095324A1; SG11201908092RA

Abstract

são aqui fornecidas proteínas de ligação ao antígeno (abps) que se ligam seletivamente ao tigit e suas isoformas e homólogos, e composições compreendendo as abps. também são fornecidos métodos de utilização das abps, tais como métodos terapêuticos e diagnósticos.

Description

“PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO ANTI-TIGIT E MÉTODOS DE UTILIZAÇÃO DESTAS” [001]Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. N²62/479.042, depositado em 30 de março de 2017; que é aqui incorporado por referência em sua totalidade para todos os propósitos.

CAMPO [002]São aqui fornecidas proteínas de ligação ao antígeno (ABPs) com especificidade de ligação para o imunoreceptor de célula T com domínios Ig e ITIM (TIGIT) e composições compreendendo tais ABPs, incluindo composições farmacêuticas, composições de diagnóstico e kits. Também são fornecidos métodos de fabricação de ABPs TIGIT, e métodos de utilização de ABPs TIGIT, por exemplo, para propósitos terapêuticos, propósitos de diagnósticos e propósitos de pesquisa.

FUNDAMENTOS [003]O TIGIT foi identificado como um receptor co-inibitório que limita a resposta de células T para o câncer e infecção crônica. Ver Grogan et al., J. Immunol., 2014, 192: (1 Supplement) 203.15, incorporado por referência em sua totalidade. O bloqueio de TIGIT mostrou contribuir para o aumento da função efetora de célula T CD8+, e melhoria da depuração viral e rejeição de tumor. Ver id.

[004]Assim, existe uma necessidade de terapêutica que possa antagonizar TIGIT. São aqui fornecidas ABPs que atendem a essa necessidade.

[005]Este pedido está relacionado ao Pedido Provisório U.S. N² 62/235.990, depositado em 01 de outubro de 2015, Publicação Internacional N^ WO/2017/059095 e Patente U.S. N^ 9.713.641; cada um dos quais é aqui incorporado por referência em sua totalidade para todos os propósitos.

SUMÁRIO [006]São aqui fornecidas ABPs que se ligam especificamente ao TIGIT e métodos de utilização de tais ABPs. Em algumas modalidades, o TIGIT é selecionado

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2/166 de TIGIT humano (“hTIGIT”, SEQ ID NO: 1), TIGIT de macacos cynomolgus (“cTIGIT”, SEQ ID NO: 2) e TIGIT murino (“mTIGIT”, SEQ ID NO: 3 ou 138).

[007]Em um aspecto, é fornecida uma proteína de ligação ao antígeno isolada (ABP) que se liga especificamente a um epítopo de TIGIT humano (hTIGIT; SEQ ID NO: 1) e é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloquear ligação de MAB7, MAB9, MAB10, MAB11 e MAB12 ao TIGIT humano; b) bloquear a ligação de TIGIT humano à CD155; e c) se ligar especificamente aos resíduos H76, I77, S78 e P79 de hTIGIT.

[008]Em uma outra modalidade, a ABP se liga especificamente um ou mais resíduos de hTIGIT adicionais do grupo consistindo em T55, Q56, N58, L65, I68, N70, D72, L73, H111, T117, S129e S130.

[009]Em uma outra modalidade, a ABP não se liga especificamente aos resíduos Q61, Q62, D63, Q64, Y113 ou P114 de hTIGIT.

[010]Em uma modalidade, a ABP é MAB7, MAB9, MAB10, MAB11 ou MAB12. Em uma outra modalidade, a ABP é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloquear a ligação de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4 e MAB5 ao TIGIT humano, bloquear a ligação de TIGIT humano ao CD155; e ligar especificamente aos resíduos Q56 e I77 de hTIGIT. Em uma outra modalidade, a ABP não se liga especificamente aos resíduos I68, L73, H76, S78 e P79 de hTIGIT.

[011]Em uma modalidade, a ABP é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloquear a ligação de MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17 e MAB18 ao TIGIT humano; b) bloquear a ligação de TIGIT humano à CD155; e c) se ligar especificamente aos resíduos Q56, I68, L73, H76 e I77 de hTIGIT. Em uma modalidade, a ABP não se liga especificamente ao resíduo S78 de hTIGIT.

[012]Em uma modalidade, a ABP é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloquear a ligação de MAB19, MAB20 e MAB21 ao TIGIT humano; b) bloquear a ligação de TIGIT humano à CD155; e c) se ligar especificamente aos resíduos Q56,

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I68, L73 e I77 de hTIGIT.

[013]Em uma modalidade, a ABP é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) inibir a ligação de hTIGIT à CD112; b) aumentar a função de uma célula efetora T; c) aumentar a função de uma célula exterminadora natural (NK); d) diminuir o número de células T reguladoras em tecidos ou em circulação; e) suprimir uma célula T reguladora ou uma atividade de célula T reguladora; f) inibir a associação de TIGIT e CD226; e g) não se ligar especificamente à Nectina-4 (também conhecida como receptor de poliovirus tipo 4, PVRL4).

[014]Em uma outra modalidade, a ABP é MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB8, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 ou MAB21.

[015]Em um outro aspecto é fornecido um método de tratar ou prevenir uma doença ou condição em um sujeito em necessidade deste, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de: (i) uma ABP que se liga especificamente ao hTIGIT, escolhida do grupo consistindo em MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 e MAB21; e um ou mais de (ii) um agente imunoterapêutico adicional que bloqueia a sinalização de um receptor inibitório de uma célula imune ou um ligante deste; e (iii) agente imunoterapêutico adicional que modula sinalização do receptor co-estimulador; ou um ácido nucleico que codifica tal agente.

[016]Em uma modalidade, o receptor inibitório ou ligante deste é selecionado de CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, Tim-3, neuritina, BTLA, CECAM-1, CECAM-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2B4, KIR e combinações destes.

[017]Em uma modalidade, o receptor co-estimulador é CD3, GITR, 0X40, ICOS, LAG-2, CD27, CD28, CD40 ou 4-1 BB.

[018]Em uma modalidade, o terapêutico adicional é MAB22. Em uma outra

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4/166 modalidade, o imunoterapeutico adicional é MAB23. Em várias modalidades, a ABP é MAB10, MAB2, MAB15 ou MAB21.

[019]Em uma modalidade, o agente imunoterapêutico adicional é um anticorpo contra Tim-3, 4-1 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou é 0X40. Em algumas modalidades, a terapia de combinação produz um efeito aditivo ou sinérgico na resposta imune do sujeito que recebe tal terapia.

[020]Em uma modalidade, a doença ou condição é um câncer, e o câncer é selecionado de um tumor sólido e um tumor hematológico. Em algumas modalidades, o câncer é um tumor sólido.

[021 ]Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é formulado na mesma composição farmacêutica que a ABP, e a ABP e o agente terapêutico adicional são coadministrados. Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é formulado em uma composição farmacêutica diferente da ABP, e a ABP e o agente terapêutico adicional são administrados separadamente. Tal administração separada pode ocorrer no mesmo dia ou em dias diferentes. Em algumas modalidades, a ABP é administrada antes do agente terapêutico adicional; em outras modalidades, o agente terapêutico adicional é administrado antes de administrar a ABP.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [022]As Figuras 1A-1L são uma série de gráficos mostrando um ensaio de linfoproliferação para testar respostas de células T em células T positivas para citomegalovírus (CMV+), utilizando PBMCs de doadores individuais. As células foram estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e pembrolizumabe individualmente ou em combinação (Figuras 1A-1C, respectivamente); células estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e anticorpo anti-TIM-3, individualmente ou em combinação (Figuras 1D-1F); células estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e um anticorpo anti-41BB,

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5/166 individualmente ou em combinação (Figuras 1G-1I); e células estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e rhOX40L, individualmente ou em combinação (Figuras 1J-1L). As diferenças estatísticas foram calculadas tanto entre os dois grupos de tratamento individuais e seus controles correspondentes, bem como entre os dois grupos de tratamentos individuais e suas combinações utilizando um Teste T de Student não pareado (*=p<0,05, **=p<0,01, ***=p<0,005, ****=p<0,001).

[023]As Figuras 2A-2B são gráficos mostrando um ensaio de células tumorais dissociadas (DTC) para testar as respostas de células T em DTCs de pacientes com câncer sem tratamento prévio. A Figura 2A mostra a ativação de DTCs de um homem com 50 anos de idade com melanoma de estágio IV, como evidenciado pela produção de IFNy. As células foram cultivadas e estimuladas com um peptídio OVA de controle (3 pg/ml) ou uma mistura de peptídio de melanoma compatível de 1 pg/mL de NYESO-1 + 1 pg/mL de MelanA/MART-1 + 1 pg/mL de gp100. O anticorpo anti-GITR MAB22, pembrolizumabe e anticorpo anti-TIGIT MAB10 foram adicionados às amostras estimuladas com peptídio, sozinhos ou em combinações de pares. Como um controle, quantidades iguais de anticorpos de controle de isotipo foram utilizados. Para a estimulação de anticorpo único, a quantidade total de anticorpo foi mantida constante suplementando-se com o anticorpo de controle de isotipo. MAB10 e pembrolizumabe foram utilizados em uma concentração final de 10 pg/ml, e MAB22 foi utilizada em uma concentração final de 1 pg/ml. Para avaliar a ativação, as células foram cultivadas por 7 dias, os sobrenadantes foram coletados, e o nível de IFNy produzido foi quantificado utilizando AlphaLISA® (PerkinElmer). A significância estatística foi calculada utilizando One-Way ANOVA com múltiplas comparações. A Figura 2B mostra a ativação de DTCs de uma mulher com 80 anos de idade com câncer de pulmão de células não pequenas em estágio Ila (NSCLC). As células foram culticadas e deixadas sem estimulação (controle) ou foram estimuladas com

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6/166 anticorpos anti-CD3 + anti-CD28 solúveis por dois dias. Como um controle, uma quantidade igual de um anticorpo de controle de isotipo (lgG4) foi utilizada. Para a estimulação de anticorpo único, a quantidade total de anticorpo foi mantida constante suplementando-se as amostras com o anticorpo de controle de isotipo. MAB10 e pembrolizumabe foram utilizados em uma concentração final de 10 pg/ml. Para avaliar a ativação, Brefeldina A foi adicionada às células durante as últimas 5 horas de cultura e análise de FACS e quantificação de células T CD4+ e CD8+ produtoras de IFNy foram realizadas utilizando ICS. A significância estatística foi calculada utilizando OneWay ANOVA com múltiplas comparações.

[024]As Figuras 3A-3D são gráficos mostrando os resultados como medidos pelo volume do tumor de uma combinação de um anticorpo anti-TIGIT e um anti-NRP1 no modelo de camundongo com câncer de mama EMT6. As combinações de mMAB23 com 1B4 em comparação com a monoterapia de mMAB23 e a monoterapia de aPD-1 são mostradas nas Figuras 3A (volume médio do tumor) e 3C (volume individual do tumor para cada camundongo), e as combinações de mMAB23 com 1B4 em comparação com a monoterapia 1B4 e a monoterapia de aPD-1 são mostradas nas Figuras 3B (volume médio do tumor) e 3D (volume individual do tumor). Nas Figuras 3A-3B, 1x10⁵ de células EMT6 de camundongo foram implantadas subcutaneamente em camundongos BALB/c fêmeas. Uma vez que os tumores tenham atingido um tamanho médio de 80 a 120 mm³, os camundongos foram randomizados em grupos de tratamento e os anticorpos indicados foram administrados intraperitonealmente a 1.000 pg/animal (lgG2b e 1B4 de controle), 500 pg/animal (mMAB23 e 1B4), 250 pg/animal (mMAB23 e 1B4) ou 200 pg/animal (aPD1). As setas pretas indicam os dias de tratamento. O erro padrão +/- médio do volume do tumor médio (SEM) de 8 camundongos por grupo é mostrado para cada grupo de tratamento. A significância estatística (diferenças de mínimas médias quadráticas com ajuste de Tukey-Kramer) dos camundongos tratados em comparação com os

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7/166 camundongos controle foi calculada no dia 14. O controle, aPD-1 anti-camundongo de rato (clone RMP1-14), agente único (250 pg) e curvas de combinação (250 pg cada) foram avaliados com o passar do tempo utilizando uma análise de modelos mistos. Nas Figuras 3C-3D os volumes de tumores EMT6 individuais para cada um dos 8 camundongos por grupo são mostrados para todos os grupos de tratamento (indicados no topo de cada gráfico). As células tumorais de camundongo EMT6 foram injetadas em camundongos BALB/c fêmeas e randomizadas em um tamanho médio de 80 a 120 mm³. O tratamento começou à randomização e os anticorpos indicados foram administrados intraperitonealmente a 1.000 pg/animal (lgG2b e 1B4 de controle), 500 pg/animal (mMAB23 e 1B4), 250 pg/animal (mMAB23 e 1B4) ou 200 pg/animal (aPD-1). As setas pretas indicam os dias de tratamento. Os eixos y indicam o volume do tumor e os eixos x indicam o tempo após o início do tratamento em dias. A conclusão do estudo foi definida como Dia 40 ou volume médio do tumor de 2.000 mm³ dependente do grupo de tratamento.

DESCRIÇÃO DETALHADA

1. Definições [025]A menos que de outro modo definido, todos os termos da técnica, notações e outras terminologias científicas aqui utilizados são intencionados a terem os significados comumente entendidos pelos especialistas na técnica à qual esta invenção pertence. Em alguns casos, os termos com significados comumente entendidos são definidos aqui para clareza e/ou para referência imediata, e a inclusão de tais definições aqui não devem necessariamente ser interpretadas como representando uma diferença sobre o que é geralmente entendido na técnica. As técnicas e os procedimentos descritos ou referenciados aqui são geralmente bem entendidos e comumente utilizados utilizando metodologias convencionais pelos especialistas na técnica, tais como, por exemplo, as metodologias de clonagem molecular amplamente utilizadas descritas em Sambrook et al., Molecular Clonagem:

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A Laboratory Manual 4^â ed. (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. Como apropriado, os procedimentos envolvendo a utilização de kits e reagentes comercialmente disponíveis são geralmente realizados de acordo com protocolos e condições definidos pelo fabricante, a menos que de outro modo observado.

[026]Como aqui utilizado, as formas singulares “um/uma” e “o/a” incluem os referentes plurais a menos que o contexto indique claramente de outro modo. Os termos “incluem”, “tais como” e semelhantes são intencionados a incluir sem limitação, a menos que de outro modo especificamente indicado.

[027]Como aqui utilizado, o termo “compreendendo” também inclui especificamente as modalidades “consistindo em” e “consistindo essencialmente em” os elementos citados, a menos que especificamente indicado de outro modo.

[028]O termo “cerca de” indica e abrange um valor indicado e uma faixa acima e abaixo do valor. Em certas modalidades, o termo “cerca de” indica o valor designado ± 10 %, ± 5 % ou ± 1 %. Em certas modalidades, quando aplicável, o termo “cerca de” indica o(s) valor(es) designado(s) ± um desvio padrão daquele(s) valor(es).

[029]Os termos “TIGIT”, “proteína TIGIT” e “antígeno TIGIT” são utilizados permutavelmente aqui para referir-se ao TIGIT humano ou quaisquer variantes (por exemplo, variantes de splice e variantes alélicas), isoformas e espécies homólogas de TIGIT humano que são naturalmente expressadas por células ou que são expressadas por células transfectadas com um gene tigit. Em alguns aspectos, a proteína TIGIT é uma proteína TIGIT naturalmente expressada por um primata (por exemplo, um macaco ou um humano), um roedor (por exemplo, um camundongo ou um rato), um cão, um camelo, um gato, uma vaca, cabra, cavalo ou uma ovelha. Em alguns aspectos, a proteína TIGIT é TIGIT humana (hTIGIT; SEQ ID NO: 1). Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que as posições 1 a 21 da SEQ ID NO: 1 codificam um peptídio sinal; as posições 22 a 141 da SEQ ID NO: 1 codificam o

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9/166 domínio extracelular da proteína TIGIT madura; as posições 142 a 162 da SEQ ID NO: 1 codificam um domínio transmembranar; e as posições 163 a 244 da SEQ ID NO: 1 codificam um domínio citoplasmático. Ver UniProt KB - Q495A1 (TIGIT HUMAN), em www.uniprot.org/uniprot/Q495AI, acessado em 28 de setembro de 2015. Em alguns aspectos, a proteína TIGIT é uma TIGIT de macacos cynomolgus (cTIGIT; SEQ ID NO: 2). Em alguns aspectos, a proteína TIGIT é uma TIGIT murina (mTIGIT) tendo a sequência fornecida na SEQ ID NO: 1. Em alguns aspectos, a proteína TIGIT é uma TIGIT murina (mTIGIT) tendo a sequência fornecida na SEQ ID NO: 138. Como aqui utilizado, se uma SEQ ID NO não é especificada, os termos “mTIGIT”, “TIGIT murina” e “TIGIT de camundongo” significam SEQ ID NO: 3 e/ou SEQ ID NO: 138. Em alguns aspectos, a proteína TIGIT é uma proteína TIGIT de comprimento total ou não processada. Em alguns aspectos, a proteína TIGIT é uma proteína TIGIT truncada ou processada produzida por modificação pós-traducional. A TIGT também é conhecida por uma variedade de sinônimos, incluindo WUCAM, VSIG9 e Vstm3.

[030]Q termo “imunoglobulina” refere-se a uma classe de proteínas estruturalmente relacionadas geralmente compreendendo dois pares de cadeias de polipeptídios: um par de cadeias leves (L) e um par de cadeias pesadas (H). Em uma “imunoglobulina intacta”, todas as quatro destas cadeias estão interconectadas por ligações dissulfeto. A estrutura das imunoglobulinas foi bem caracterizada. Ver, por exemplo, Paul, Fundamental Immunology, 7^â ed., Ch. 5 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Filadélfia, PA. Brevemente, cada cadeia pesada tipicamente compreende uma região variável de cadeia pesada (Vl) e uma região constante de cadeia pesada (Ch). A região constante de cadeia pesada tipicamente compreende três domínios, abreviados como Ch-i, Ch2 e Chs. Cada cadeia leve tipicamente compreende uma região variável de cadeia leve (Vl) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve tipicamente compreende um domínio, abreviado como Cl.

[031 ]0 termo “proteína de ligação ao antígeno” (ABP) refere-se a uma

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10/166 proteína compreendendo um ou mais domínios de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno ou epítopo. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno liga o antígeno ou epítopo com especificidade e afinidade similares àquelas de anticorpos de ocorrência natural. Em algumas modalidades, a ABP compreende um anticorpo. Em algumas modalidades, a ABP consiste em um anticorpo. Em algumas modalidades, a ABP consiste essencialmente em um anticorpo. Em algumas modalidades, a ABP compreende uma estrutura alternativa. Em algumas modalidades, a ABP consiste em uma estrutura alternativa. Em algumas modalidades, a ABP consiste essencialmente em uma estrutura alternativa. Em algumas modalidades, a ABP compreende um fragmento de anticorpo. Em algumas modalidades, a ABP consiste em um fragmento de anticorpo. Em algumas modalidades, a ABP consiste essencialmente em um fragmento de anticorpo. Uma “ABP TIGIT”, “ABP anti-TIGIT” ou “ABP TIGIT-específica” é uma ABP, como aqui fornecida, que se liga especificamente ao antígeno TIGIT. Em algumas modalidades, a ABP se liga ao domínio extracelular de TIGIT. Em certas modalidades, uma ABP TIGIT aqui fornecida se liga a um epítopo de TIGIT que é conservado entre proteínas TIGIT de diferentes espécies.

[032]O termo “anticorpo” é aqui utilizado em seu sentido mais amplo e inclui certos tipos de moléculas de imunoglobulina compreendendo um ou mais domínios de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno ou epítopo. Um anticorpo inclui especificamente anticorpos intactos (por exemplo, imunoglobulinas intactas), fragmentos de anticorpo e anticorpos multiespecíficos. Um anticorpo é um tipo de ABP.

[033]O termo “domínio de ligação ao antígeno” significa a porção de uma ABP que é capaz de se ligar especificamente a um antígeno ou epítopo. Um exemplo de um domínio de ligação ao antígeno é um domínio de ligação ao antígeno formado por um dímero Vl-Vl de um anticorpo. Outro exemplo de um domínio de ligação ao

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11/166 antígeno é um domínio de ligação ao antígeno formado pela diversificação de certas alças do décimo domínio de fibronectina tipo III de uma Adnectina.

[034]Os termos “anticorpo de comprimento total”, “anticorpo intacto” e “anticorpo completo” são utilizados aqui permutavelmente para referir-se a um anticorpo tendo uma estrutura substancialmente similar à estrutura de um anticorpo de ocorrência natural e tendo cadeias pesadas que compreendem uma região Fc. Por exemplo, quando utilizado para referir-se a uma molécula de IgG, um “anticorpo de comprimento total” é um anticorpo que compreende duas cadeias pesadas e duas cadeias leves.

[035]O termo “região Fc” significa a região C-terminal de uma cadeia pesada de imunoglobulina que, em anticorpos de ocorrência natural, interage com receptores Fc e certas proteínas do sistema complementar. As estruturas das regiões Fc de várias imunoglobulinas e os sítios de glicosilação contidos nelas, são conhecidos na técnica. Ver Schroeder e Cavacini, J. Alergia Clin. Immunol., 2010, 125: S41 - 52, incorporado por referência em sua totalidade. A região Fc pode ser uma região Fc de ocorrência natural ou uma região Fc modificada, como descrito na técnica ou em outro local desta divulgação.

[036]As regiões Vh e Vl podem ainda ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade (“regiões hipervariáveis (HVRs)”; também chamadas “regiões determinantes de complementaridade” (CDRs)) intercaladas com regiões que são mais conservadas. As regiões mais conservadas são chamadas regiões de estrutura (FRs). Cada Vh e Vl geralmente compreende três CDRs e quatro FRs, organizadas na seguinte ordem (de N-terminal a C-terminal): FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 CDR3 - FR4. As CDRs estão envolvidas na ligação ao antígeno e influenciam a especificidade do antígeno e afinidade de ligação do anticorpo. Ver Kabat et al., Sequências of Proteínas of I mu nológico Interest 5^â ed. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, incorporado por referência em sua

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12/166 totalidade.

[037]A cadeia leve de qualquer espécie vertebrada pode ser atribuída a um dos dois tipos, chamados kappa (κ) e lambda (λ), com base na sequência de seu domínio constante.

[038]A cadeia pesada de qualquer espécie vertebrada pode ser atribuída a uma das cinco diferentes classes (ou isotipos): IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. Estas classes também são designadas α, δ, ε, γ e μ, respectivamente. As classes IgG e IgA são ainda divididas em subclasses com base nas diferenças de sequência e função. Os serem humanos expressam as seguintes subclasses: lgG1, lgG2, lgG3, lgG-4, lgA1 e lgA2.

[039]Os limites da sequência de aminoácidos de uma CDR podem ser determinados por um especialista na técnica utilizando qualquer um dos vários esquemas de numeração conhecidos, incluindo aqueles descritos por Kabat et al., supra (“Kabat” numbering scheme); Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biot, 273: 927 948 (“Chothia” numbering scheme); MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262: 732 745 (“Contact” numbering scheme); Lefranc etal., Dev. Comp. Immunol., 2003, 27: 55

- 77 (“IMGT” numbering scheme); e Honegge e Pliickthun, J. Mol. Biol., 2001, 309: 657

- 70 (“AHo” numbering scheme); cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[040]A Tabela 1 fornece as posições de CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 conforme identificadas pelos esquemas de Kabat e Chothia. Para CDR-H1, numeração de resíduos é fornecida utilizando os esquemas de numeração de Kabat e Chothia.

[041 ]As CDRs podem ser atribuídas, por exemplo, utilizando um software de numeração de anticorpo, tal como Abnum, disponível em www.bioinf.orq.uk/abs/abnum/, e descrito em Abhinandan e Martin, Immunology, 2008, 45: 3832 - 3839, incorporado por referência em sua totalidade.

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Tabela 1. Resíduos em CDRs de acordo com os esquemas de numeração de Kabat e Chothia.

CDR	Kabat	Chothia
L1	L24-L34	L24-L34
L2	L50-L56	L50-L56
L3	F89-F97	F89-F97
H1 (Numeração de Kabat)	H31-H35B	H26-H32 ou H34*
H1 (Numeração de Chothia)	H31-H35	H26-H32
H2	H50-H65	H52-H56
H3	H95-H102	H95-H102

* O C-terminal de CDR-H1, quando numerado utilizando a convenção de numeração de Kabat, varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento da CDR.

[042]O “esquema de numeração de EU” é geralmente utilizado quando se refere a um resíduo em uma região constante de cadeia pesada de anticorpo (por exemplo, como relatado em Kabat et al., acima). A menos que estabelecido de outro modo, o esquema de numeração de EU é utilizado para referir-se aos resíduos em regiões constantes de cadeia pesada de anticorpo aqui descritos.

[043]Um “fragmento de anticorpo” compreende uma porção de um anticorpo intacto, tal como a região variável ou de ligação ao antígeno de um anticorpo intacto. Fragmentos de anticorpo incluem, por exemplo, fragmentos Fv, fragmentos Fab, fragmentos F(ab’)2, fragmentos Fab’, fragmentos scFv (sFv) e fragmentos scFv-Fc.

[044]Os fragmentos “Fv” compreendem um dímero ligado não covalentemente de um domínio variável de cadeia pesada e um domínio variável de cadeia leve.

[045]Os fragmentos “Fab” compreendem, além dos domínios variáveis de cadeia pesada e leve, o domínio constante da cadeia leve e o primeiro domínio constante (Chi) da cadeia pesada. Os fragmentos Fab podem ser gerados, por exemplo, por métodos recombinantes ou por digestão com papaína de um anticorpo de comprimento total.

[046]Os fragmentos “F(ab’)2” contêm dois fragmentos Fab’ unidos, próximo à

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14/166 região de dobradiça, por ligações dissulfeto. Os fragmentos F(ab’)2 podem ser gerados, por exemplo, por métodos recombinantes ou por digestão com pepsina de um anticorpo intacto. Os fragmentos F(ab’) podem ser dissociados, por exemplo, por tratamento com β-mercaptoetanol.

[047]Os fragmentos de anticorpo “Fv de cadeia simples” ou “sFv” ou “scFv” compreendem um domínio Vh e um domínio Vl em uma única cadeia de polipeptídios. Os Vh e Vl são geralmente ligados por um conector peptídico. Ver Pliickthun A. (1994). Qualquer conector adequado pode ser utilizado. Em algumas modalidades, o conector é um (GGGGS)n (SEQ ID NO: 127). Em algumas modalidades, n = 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Ver Antibodies from Escherichia coli. em Rosenberg Μ. & Moore G.P. (Eds.), The Pharmacology of Anticorpos monoclonais vol. 113 (páginas 269 - 315). SpringerVerlag, Nova Iorque, incorporado por referência em sua totalidade.

[048]Os fragmentos “scFv-Fc” compreendem um domínio scFv ligado a um Fc. Por exemplo, um domínio Fc pode estar ligado ao C-terminal do scFv. O domínio Fc pode seguir o Vh ou Vl, dependendo da orientação dos domínios variáveis no scFv (isto é, Vh-Vl ou Vl-Vh). Qualquer domínio Fc adequado conhecido na técnica ou aqui descrito pode ser utilizado. Em alguns casos, o domínio Fc compreende um domínio Fc de lgG4.

[049]Uma “ABP monoespecífica” é uma ABP que compreende um ou mais sítios de ligação que se ligam especificamente a um único epítopo. Um exemplo de uma ABP monoespecífica é uma molécula de IgG de ocorrência natural que, embora divalente (isto é, tendo dois domínios de ligação ao antígeno), reconhece o mesmo epítopo em cada um dos dois domínios de ligação ao antígeno. A especificidade de ligação pode estar presente em qualquer valência adequada.

[050]O termo “anticorpo monoclonal” refere-se a um anticorpo de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos. Uma população de anticorpos substancialmente homogêneos compreende anticorpos que são

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15/166 substancialmente similares e que se ligam ao(s) mesmo(s) epítopo(s), exceto pelas variantes que podem normalmente surgir durante a produção do anticorpo monoclonal. Tais variantes estão geralmente presentes apenas em quantidades menores. Um anticorpo monoclonal é tipicamente obtido por um processo que inclui a seleção de um único anticorpo de uma pluralidade de anticorpos. Por exemplo, o processo de seleção pode ser a seleção de um único clone de uma pluralidade de clones, tal como um pool de clones de hibridoma, clones de fagos, clones de levedura, clones bacterianos ou outros clones de DNA recombinante. O anticorpo selecionado pode ainda ser alterado, por exemplo, para melhorar a afinidade para o alvo (“maturação de afinidade”), para humanizar o anticorpo, para melhorar sua produção na cultura de células, e/ou para reduzir sua imunogenicidade em um sujeito.

[051 ]O termo “anticorpo quimérico” refere-se a um anticorpo em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie particular, enquanto o restante da cadeia pesada e/ou leve é derivado de uma fonte ou espécie diferente.

[052]As formas “humanizadas” de anticorpos não humanos são anticorpos quiméricos que contêm uma sequência mínima derivada do anticorpo não humano. Um anticorpo humanizado é geralmente um anticorpo humano (anticorpo receptor) em que os resíduos de uma ou mais CDRs são substituídas por resíduos de uma ou mais CDRs de um anticorpo não humano (anticorpo doador). O anticorpo doador pode ser qualquer anticorpo não humano adequado, tal como um anticorpo de camundongo, rato, coelho, galinha ou primata não humano tendo uma especificidade, afinidade ou efeito biológico desejado. Em alguns casos, resíduos da região de estrutura selecionados do anticorpo receptor são substituídos peloa resíduos correspondentes da região de estrutura do anticorpo doador. Os anticorpos humanizados também podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador. Tais modificações podem ser feitas refinar

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16/166 ainda mais função do anticorpo. Para mais detalhes, ver Jones et al., Nature, 1986, 321: 522 - 525; Riechmann et al., Nature, 1988, 332: 323 - 329; e Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2: 593 - 596, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[053]Um “anticorpo humano” é um que possui uma sequência de aminoácidos correspondente àquela de um anticorpo produzido por um ser humano ou uma célula humana ou derivado de uma fonte não humana que utiliza um repertório de anticorpos humanos ou sequências que codificam anticorpo humano (por exemplo, obtidos de fontes humanas ou designados de novo). Os anticorpos humanos especificamente excluem anticorpos humanizados.

[054]Uma “ABP isolada” ou “ácido nucleico isolado” é uma ABP ou ácido nucleico que foi separado e/ou recuperado de um componente do seu ambiente natural. Os componentes do ambiente natural podem incluir enzimas, hormônios e outro materiais proteináceos ou não proteináceos. Em algumas modalidades, uma ABP isolada é purificada a um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos de uma sequência de aminoácidos N- terminal ou interna, por exemplo, pela utilização de um sequenciador de copo giratório. Em algumas modalidades, uma ABP isolada é purificada para homogeneidade por eletroforese em gel (por exemplo, SDS-PAGE) sob condições redutoras ou não redutoras, com detecção por coloração com azul de Coomassie ou prata. Em algumas modalidades, uma ABP isolada pode incluir uma ABP in situ dentro de células recombinantes, visto que pelo menos um componente do ambiente natural da ABP não está presente. Em alguns aspectos, uma ABP isolada ou ácido nucleico isolado é preparado por pelo menos uma etapa de purificação. Em algumas modalidades, uma ABP isolada ou ácido nucleico isolado é purificado a pelo menos 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 99 % em peso. Em algumas modalidades, uma ABP isolada ou ácido nucleico isolado é purificado a pelo menos 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 99 % em volume. Em algumas modalidades, uma ABP isolada ou ácido

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17/166 nucleico isolado é fornecido como uma solução compreendendo pelo menos 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % a 100 % de ABP ou ácido nucleico em peso. Em algumas modalidades, uma ABP isolada ou ácido nucleico isolado é fornecido como uma solução compreendendo pelo menos 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % a 100 % de ABP ou ácido nucleico em volume.

[055]“Afinidade” refere-se à força da soma total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, uma ABP) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno ou epítopo). A menos que indicado de outro modo, como aqui utilizado, “afinidade” refere-se à afinidade de ligação intrínseca, que reflete uma interação 1:1 entre os membros de um par de ligação (por exemplo, ABP e antígeno ou epítopo). A afinidade de uma molécula X para seu parceiro Y pode ser representada pela constante de equilíbrio de dissociação (Kd). Os componentes cinéticos que contribuem para a constante de equilíbrio de dissociação são descritos em mais detalhe abaixo. A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles aqui descritos, tais como tecnologia de ressonância plasmônica de superfície (SPR) (por exemplo, BIACORE®) ou interferometria de biolayer (por exemplo, FORTEBIO®).

[056]Com relação à ligação de uma ABP a uma molécula alvo, os termos “ligar”, “ligação específica”, “se liga especificamente a”, “específica para”, “se liga seletivamente” e “seletiva para” um antígeno particular (por exemplo, um polipeptídio alvo) ou um epítopo em um antígeno particular significa uma ligação que é measuravelmente diferente de uma interação não específica ou não seletiva (por exemplo, com uma molécula não alvo). A ligação específica pode ser medida, por exemplo, medindo-se a ligação a uma molécula alvo e comparando-se com a ligação a uma molécula não alvo. A ligação específica também pode ser determinada pela competição com uma molécula controle que imita o epítopo reconhecido na molécula alvo. Neste caso, a ligação específica é indicada se a ligação da ABP à molécula alvo

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18/166 for inibida competitivamente pela molécula controle. Em alguns aspectos, a afinidade de uma ABP TIGIT para uma molécula não alvo é menor que cerca de 50 % da afinidade para TIGIT. Em alguns aspectos, a afinidade de uma ABP TIGIT para uma molécula não alvo é menor que cerca de 40 % da afinidade para TIGIT. Em alguns aspectos, a afinidade de uma ABP TIGIT para uma molécula não alvo é menor que cerca de 30 % da afinidade para TIGIT. Em alguns aspectos, a afinidade de uma ABP TIGIT para uma molécula não alvo é menor que cerca de 20 % da afinidade para TIGIT. Em alguns aspectos, a afinidade de uma ABP TIGIT para uma molécula não alvo é menor que cerca de 10 % da afinidade para TIGIT. Em alguns aspectos, a afinidade de uma ABP TIGIT para uma molécula não alvo é menor que cerca de 1 % da afinidade para TIGIT. Em alguns aspectos, a afinidade de uma ABP TIGIT para uma molécula não alvo é menor que cerca de 0,1 % da afinidade para TIGIT.

[057]O termo “kd” (see¹), como aqui utilizado, refere-se à constante de taxa de dissociação de uma interação ABP-antígeno particular. Este valor também é referido como o valor koff.

[058]O termo “k_a” (Μ’¹ x see¹), como aqui utilizado, refere-se à constante de taxa de associação de uma interação ABP-antígeno particular. Este valor também é referido como o valor kon.

[059]O termo “Kd” (M), como aqui utilizado, refere-se à constante de equilíbrio de dissociação de uma interação ABP-antígeno particular. Kd = kd/k_a. Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP é descrita em termos da Kd para uma interação entre tal ABP e seu antígeno. Para maior clareza, como conhecido na técnica, um valor menor de Kd indica uma interação de afinidade mais alta, enquanto um valor maior de Kd indica uma interação de afinidade mais baixa.

[060]O termo “Ka” (M’¹), como aqui utilizado, refere-se à constante de equilíbrio de associação de uma interação ABP-antígeno particular. Ka = k_a/kd.

[061]Uma ABP “amadurecida por afinidade” é uma ABP com uma ou mais

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19/166 alterações (por exemplo, em uma ou mais CDRs ou FRs) em relação a uma ABP precursora (isto é, uma ABP a partir da qual a ABP alterada é derivada ou projetada) que resulta em uma melhoria na afinidade da ABP para o seu antígeno, em comparação com a ABP precursora que não possui as alterações. Em algumas modalidades, uma ABP amadurecida por afinidade tem afinidade nanomolar ou picomolar para o antígeno alvo. As ABPs amadurecidas por afinidade podem ser produzidas utilizando uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, Marks et al. (Bio/Technology, 1992, 10: 779 - 783, incorporado por referência em sua totalidade) descreve a maturação de afinidade por embaralhamento dos domínios Vh e Vl. A mutagênese aleatória de CDR e/ou resíduos estruturais é descrita por, por exemplo, Barbas et al. (Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A., 1994, 91: 3809 -3813); Schieref al., Gene, 1995, 169: 147 - 155; Yelton et al., J. Immunol., 1995, 155: 1994 - 2004; Jackson et al., J. Immunol., 1995, 154: 3310 - 33199; e Hawkins et al, J. Mol. Biot, 1992, 226: 889 - 896; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[062]Um “imunoconjugado” é uma ABP conjugada com uma ou mais moléculas heterólogas, tais como um agente terapêutico ou de diagnóstico.

[063]“Funções efetoras” referem-se àquelas atividades biológicas mediadas pela região Fc de um anticorpo, cujas atividades podem variar dependendo do isotipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpo incluem ligação de C1q para ativar a citotoxicidade dependente de complemento (CDC), ligação do receptor Fc para ativar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e a fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP).

[064]Quando aqui utilizado no contexto de duas ou mais ABPs, o termo “compete com” ou “concorre com” indica que as duas ou mais ABPs competem pela ligação a um antígeno (por exemplo, TIGIT). Em um ensaio exemplar, o TIGIT é revestido em uma superfície e contatado com uma primeira ABP TIGIT, após a qual

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20/166 uma segunda ABP TIGIT é adicionada. Em outro ensaio exemplar, uma primeira ABP TIGIT é revestida em uma superfície e contatada com TIGIT, e então uma segunda ABP TIGIT é adicionada. Se a presença da primeira ABP TIGIT reduz a ligação da segunda ABP TIGIT, em ambos os ensaios, então as ABPs competem entre si. O termo “compete com” também inclui combinações de ABPs onde uma ABP reduz a ligação de outra ABP, mas onde nenhuma competição é observada quando as ABPs são adicionadas na ordem inversa. Entretanto, em algumas modalidades, a primeira e segunda ABPs inibem a ligação uma da outra, independentemente da ordem em que elas são adicionadas. Em algumas modalidades, uma ABP reduz a ligação de outra ABP ao seu antígeno por pelo menos 25 %, pelo menos 50 %, pelo menos 60 %, pelo menos 70 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 % ou pelo menos 95 %. Um técnico habilitado pode selecionar as concentrações dos anticorpos utilizados nos ensaios de competição com base nas afinidades das ABPs para TIGIT e na valência das ABPs. Os ensaios descritos nesta definição são ilustrativos, e um técnico habilitado pode utilizar qualquer ensaio adequado para determinar se os anticorpos competem entre si. Ensaios adequados são descritos, por exemplo, em Cox etal., “Immunoassay Methods”, em Assay Guidance Manual [Internet], atualizado em 24 de dezembro de 2014 (www.ncbi.nlm.nih.Qov/books/NBK92434/; acessado em 29 de setembro de 2015); Silman etal., Cytometry, 2001, 44: 30-37; e Finco etal., J. Pharm. Biomed. Anal., 2011, 54: 351 - 358; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[065]O termo “epítopo” significa uma porção de um antígeno que se liga especificamente a uma ABP. Epítopos frequentemente consistem em resíduos de aminoácido acessíveis de superfície e/ou cadeias laterais de açúcar e podem ter três características estruturais dimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Epítopos conformacionais e não conformacionais distinguem-se pelo fato de que a ligação ao primeiro, mas não ao último, pode ser perdida na

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21/166 presença de solventes desnaturantes. Um epítopo pode compreender resíduos de aminoácido que estão diretamente envolvidos na ligação, e outros resíduos de aminoácido, que não estão diretamente envolvidos na ligação. O epítopo ao qual uma ABP se liga pode ser determinado utilizando técnicas conhecidas para determinação de epítopo tais como, por exemplo, teste para ligação de ABP às variantes de TIGIT com diferentes mutações pontuais ou as variantes de TIGIT quiméricas.

[066]Similarmente, o termo “parótopo” refere-se aos resíduos de aminoácido em um anticorpo que se ligam ao epítopo de uma proteína alvo.

[067]A porcentagem de “identificação” entre uma sequência polipeptídica e uma sequência de referência, é definida como a porcentagem de resíduos de aminoácido na sequência polipeptídica que são idênticos aos resíduos de aminoácido na sequência de referência, após o alinhamento das sequências e introdução de gaps, se necessário, para obter a porcentagem máxima de identidade de sequência. O alinhamento para fins de determinação de porcentagem de identidade de sequência de aminoácidos pode ser obtido de várias maneiras que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, utilizando software de computador disponível publicamente tal como software BLAST, BLAST-2, ALIGN, MEGALIGN (DNASTAR), CLUSTALW, CLUSTAL OMEGA ou MUSCLE. Os peritos na técnica podem determinar parâmetros apropriados para o alinhamento de sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para obter o máximo alinhamento ao longo de todo o comprimento das sequências sendo comparadas.

[068]Uma “substituição conservadora” ou uma “substituição conservadora de aminoácido”, refere-se à substituição de um aminoácido com um aminoácido quimicamente ou funcionalmente similar. As tabelas de substituição conservadora fornecendo aminoácidos similares são bem conhecidas na técnica. A título de exemplo, os grupos de aminoácidos fornecidos nas tabelas 2 a 4 são, em algumas modalidades, considerados substituições conservadoras uns para os outros.

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Tabela 2. Grupos selecionados de aminoácidos que são considerados substituições conservadoras uns para os outros, em certas modalidades.___________

Resíduos Ácidos	D e E
Resíduos Básicos	K, R e H
Resíduos Não Carregados Hidrofílicos	S, T, N e Q
Resíduos Não Carregados Alifáticos	G, A, V, L e 1
Resíduos Não Carregados Não-polares	C, M e P
Resíduos Aromáticos	F, Ye W

Tabela 3. Grupos adicionais selecionados de aminoácidos que são considerados substituições conservadoras uns para os outros, em certas modalidades.

Grupo 1	A, S eT
Grupo 2	D e E
Grupo 3	N e Q
Grupo 4	Re K
Grupo 5	I, LeM
Grupo 6	F, Ye W

Tabela 4. Outros grupos selecionados de aminoácidos que são considerados substituições conservadoras uns para os outros, em certas modalidades.___________

Grupo A	Ae G
Grupo B	D e E
Grupo C	N eQ
Grupo D	R, K e H
Grupo E	I, L, Μ, V
Grupo F	F, Ye W
Grupo G	S e T
Grupo H	C e M

[069]Substituições conservadoras adicionais podem ser encontradas, por exemplo, em Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties 2^ ed. (1993) W. H. Freeman & Co., Nova Iorque, NY. Uma ABP gerada pela realização de uma ou

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23/166 mais substituições conservadoras de resíduos de aminoácido em uma ABP precursora é referida como uma “variante conservativamente modificada”.

[070]O termo “aminoácido” refere-se aos vinte aminoácidos comuns de ocorrência natural. Os aminoácidos de ocorrência natural incluem alanina (Ala; A), arginina (Arg; R), asparagina (Asn; N), ácido aspártico (Asp; D), cisteína (Cys; C); ácido glutâmico (Glu; E), glutamina (Gin; Q), Glicina (Gly; G); histidina (His; H), isoleucina (lie; I), leucina (Leu; L), lisina (Lys; K), metionina (Met; M), fenilalanina (Phe; F), prolina (Pro; P), serina (Ser; S), treonina (Thr; T), triptofano (Trp; W), tirosina (Tyr; Y) e valina (Vai; V).

[071 ]O termo “vetor”, como aqui utilizado, refere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de propagar outro ácido nucleico ao qual está ligado. O termo inclui o vetor como uma estrutura de ácido nucleico de auto replicação bem como o vetor incorporado no genoma de uma célula hospedeira na qual foi introduzido. Certos vetores são capazes de dirigir a expressão de ácidos nucleicos aos quais eles estão operativamente ligados. Tais vetores são referidos aqui como “vetores de expressão”.

[072]Os termos “célula hospedeira”, “linhagem de célula hospedeira” e “cultura de célula hospedeira” são utilizados permutavelmente e referem-se às células nas quais um ácido nucleico exógeno foi introduzido e a progênie de tais células. As células hospedeiras incluem “transformantes” (ou “células transformadas”) e “transfectantes” (ou “células transfectadas”) em que cada uma inclui a célula primária transformada ou transfectada e a progênie derivada da mesma. Tal progênie pode não ser completamente idêntica em conteúdo de ácido nucleico a uma célula precursora e pode conter mutações.

[073]O termo “tratando” (e variações deste, tais como “tratar” ou “tratamento”) refere-se à intervenção clínica na tentativa de alterar o curso natural de uma doença ou condição em um sujeito em necessidade deste. O tratamento pode ser realizado para profilaxia e durante o curso da patologia clínica. Os efeitos desejáveis de

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24/166 tratamento incluem prevenir a ocorrência ou recorrência de doença, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, prevenção de metástase, diminuição da taxa de progressão da doença, melhoria ou paliação do estado da doença e prognóstico de remissão ou melhorado.

[074]Como aqui utilizado, o termo “quantidade terapeuticamente eficaz” ou “quantidade eficaz” refere-se a uma quantidade de uma ABP ou composição farmacêutica aqui fornecida que, quando administrada a um sujeito, é eficaz para tratar uma doença ou transtorno.

[075]Como aqui utilizado, o termo “sujeito” significa um sujeito mamífero. Sujeitos exemplares incluem humanos, macacos, cachorros, gatos, camundongos, ratos, vacas, cavalos, camelos, cabras, coelhos e ovelhas. Em certas modalidades, o sujeito é um ser humano. Em algumas modalidades, o sujeito tem uma doença ou condição que pode ser tratada com uma ABP aqui fornecida. Em alguns aspectos, a doença ou condição é um câncer. Em alguns aspectos, a doença ou condição é uma infecção viral.

[076]O termo “folheto informativo” é utilizado para referir-se às instruções costumeiramente incluídas em embalagens comerciais de produtos terapêuticos ou de diagnóstico (por exemplo, kits) que contêm informação cerca das indicações, utilização, dosagem, administração, terapia de combinação, contraindicações e/ou advertências relativas à utilização de tais produtos terapêuticos ou de diagnóstico.

[077]O termo “agente citotóxico”, como aqui utilizado, refere-se a uma substância que inibe ou previne uma função celular e/ou causa morte ou destruição celular.

[078]Um “agente quimioterapêutico” refere-se a um composto químico útil no tratamento de câncer. Agentes quimioterápicos incluem “agentes anti-hormonais” ou “terapêuticos endócrinos” que atuam para regular, reduzir, bloquear ou inibir os efeitos de hormônios que podem promover o crescimento de câncer.

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25/166 [079]O termo “agente citostático” refere-se a um composto ou composição que impede crescimento de uma célula in vitro ou in vivo. Em algumas modalidades, um agente citostático é um agente que reduz a porcentagem de células na fase S. Em algumas modalidades, um agente citostático reduz a porcentagem de células na fase S por pelo menos cerca de 20 %, pelo menos cerca de 40 %, pelo menos cerca de 60 % ou pelo menos cerca de 80 %.

[080]O termo “tumor” refere-se a todo crescimento e proliferação de célula neoplásica, seja maligno ou benigno, e todas células e tecidos pré-cancerosos e cancerosos. Os termos “câncer”, “canceroso”, “transtorno proliferative celular”, “transtorno proliferativo” e “tumor” não são mutuamente exclusivos como referido aqui. Os termos “transtorno proliferativo celular” e “transtorno proliferativo” referem-se a transtornos que estão associados com algum grau de proliferação celular anormal. Em algumas modalidades, o transtorno proliferativo celular é um câncer. Em alguns aspectos, o tumor é um tumor sólido. Em alguns aspectos, o tumor é uma malignidade hematológica.

[081 ]O termo “composição farmacêutica” refere-se a uma preparação que é de tal forma que permita que a atividade biológica de um ingrediente ativo nela contido seja eficaz no tratamento de um sujeito, e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para o sujeito nas quantidades fornecidas na composição farmacêutica.

[082]Os termos “modular” e “modulação” referem-se à redução ou inibição ou, alternativamente, ativação ou aumento, de uma variável mencionada.

[083]Os termos “aumentar” e “ativar” referem-se a um aumento de 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou mais em uma variável mencionada.

[084]Os termos “reduzir” e “inibir” referem-se a uma diminuição de 10 %, 20

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26/166 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou mais em uma variável mencionada.

[085]O termo “agonizar” refere-se à ativação de sinalização do receptor para induzir uma resposta biológica associada com a ativação do receptor. Um “agonista” é um ente que se liga e agoniza um receptor.

[086]O termo “antagoniza” refere-se à inibição de sinalização do receptor para inibir uma resposta biológica associada com a ativação do receptor. Um “antagonista” é um ente que se liga e antagoniza um receptor.

[087]O termo “célula T efetora” inclui células T auxiliares (isto é, CD4+) e células T citotóxicas (isto é, CD8+). As células T efetoras CD4+ contribuem para o desenvolvimento de vários processos imunológicos, incluindo a maturação de células B em células plasmáticas e células B de memória, e a ativação de células T citotóxicas e macrófagos. As células T efetoras CD8+ destroem células infectadas por vírus e células tumorais. Ver Seder e Ahmed, Nature Immunol., 2003, 4: 835 - 842, incorporado por referência em sua totalidade, para informação adicional em células T efetoras.

[088]O termo “célula T reguladora” inclui células que regulam a tolerância imunológica, por exemplo, suprimindo-se as células T efetoras. Em alguns aspectos, a célula T reguladora tem um fenótipo CD4+CD25+Foxp3+. Em alguns aspectos, a célula T reguladora tem um fenótipo CD8+CD25+. Ver Nocentini et al., Br. J. Pharmacol., 2012, 165: 2089 - 2099, incorporado por referência em sua totalidade, para informação adicional em células T reguladoras que expressam TIGIT.

[089]O termo “célula dendrítica” refere-se a uma célula apresentadora de antígeno profissional capaz de ativar uma célula T naive e estimular o crescimento e diferenciação de uma célula B.

2. Proteínas de Ligação ao Antígeno TIGIT

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2.1 Ligação ao TIGIT e Células Alvo [090]São aqui fornecidas ABPs que se ligam especificamente ao TIGIT. Em alguns aspectos, o TIGIT é hTIGIT (SEQ ID NO: 1). Em alguns aspectos, o TIGIT é cTIGIT (SEQ ID NO: 2). Em alguns aspectos, o TIGIT é mTIGIT com a sequência fornecida na SEQ ID NO: 3. Em alguns aspectos, o TIGIT é mTIGIT com a sequência fornecida na SEQ ID NO: 138.

[091 ]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao hTIGIT (SEQ ID NO: 1), cTIGIT (SEQ ID NO: 2) e mTIGIT da SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao hTIGIT (SEQ ID NO: 1), cTIGIT (SEQ ID NO: 2) e mTIGIT da SEQ ID NO: 138. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao hTIGIT (SEQ ID NO: 1) e cTIGIT (SEQ ID NO: 2). Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao hTIGIT (SEQ ID NO: 1). Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas não se ligam ao mTIGIT da SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas não se ligam ao mTIGIT da SEQ ID NO: 138.

[092]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao domínio extracelular de TIGIT.

[093]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é um anticorpo. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é um fragmento de anticorpo. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é uma estrutura alternativa.

[094]Q TIGIT pode ser expressado na superfície de qualquer célula alvo adequada. Em algumas modalidades, a célula alvo é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula alvo é uma célula T efetora. Em algumas modalidades, a célula alvo é uma célula T reguladora. Em algumas modalidades, a célula alvo é uma célula exterminadora natural (NK). Em algumas modalidades, a célula alvo é uma célula T exterminadora natural (NKT).

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28/166 [095]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem uma molécula de imunoglobulina. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem em uma molécula de imunoglobulina. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem essencialmente em uma molécula de imunoglobulina. Em alguns aspectos, a molécula de imunoglobulina compreende um anticorpo. Em alguns aspectos, a molécula de imunoglobulina consiste em um anticorpo. Em alguns aspectos, a molécula de imunoglobulina consiste essencialmente em um anticorpo.

[096]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem uma cadeia leve. Em alguns aspectos, a cadeia leve é uma cadeia leve kappa. Em alguns aspectos, a cadeia leve é uma cadeia leve lambda.

[097]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem uma cadeia leve kappa compreendendo a SEQ ID NO: 126.

[098]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem uma cadeia pesada. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma IgA. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma IgD. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma IgE. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma IgG. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma IgM. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma lgG1. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma lgG2. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma lgG3. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma lgG4. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma lgA1. Em alguns aspectos, a cadeia pesada é uma lgA2.

[099]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem uma cadeia pesada de lgG4 compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem uma cadeia pesada de lgG1 compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NO: 57 e SEQ ID NO: 125.

[0100]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem um fragmento de anticorpo. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas

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29/166 consistem em um fragmento de anticorpo. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem essencialmente em um fragmento de anticorpo. Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo é um fragmento Fv. Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo é um fragmento Fab. Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo é um fragmento F(ab’)2. Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo é um fragmento Fab’. Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo é um fragmento scFv (sFv). Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo é um fragmento scFv-Fc. Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo é um fragmento de um anticorpo de domínio único.

[0101]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido é derivado de um anticorpo ilustrativo aqui fornecido. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido não é derivado de um anticorpo ilustrativo aqui fornecido e pode, por exemplo, ser isolado de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter fragmentos de anticorpo.

[0102]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo fornecido se liga especificamente ao hTIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido se liga especificamente ao cTIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido se liga especificamente ao mTIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido se liga especificamente ao hTIGIT e ao cTIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido se liga especificamente ao hTIGIT e ao mTIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido se liga especificamente ao cTIGIT e ao mTIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido se liga especificamente ao hTIGIT, cTIGIT e mTIGIT.

[0103]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo derivado de um anticorpo aqui fornecido retém a afinidade, como medido por Kd, para hTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes,

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30/166 cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal anticorpo. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo derivado de um anticorpo aqui fornecido retém a afinidade, como medido por Kd, para cTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal anticorpo. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo derivado de um anticorpo aqui fornecido retém a afinidade, como medido por Kd, para mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal anticorpo. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo derivado de um anticorpo aqui fornecido retém a afinidade, como medido por Kd, para hTIGIT e cTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal anticorpo. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo derivado de um anticorpo aqui fornecido retém a afinidade, como medido por Kd, para hTIGIT e mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal anticorpo. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo derivado de um anticorpo aqui fornecido retém a afinidade, como medido por Kd, para cTIGIT e mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal anticorpo. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo derivado de um anticorpo aqui fornecido retém a afinidade, como medido por Kd, para todos os três de hTIGIT,

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31/166 cTIGIT e mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal anticorpo.

[0104]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido retém a capacidade para antagonizar TIGIT, como medido por um ou mais ensaios ou efeitos biológicos aqui descritos. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido retém a capacidade para impedir TIGIT de interagir com um ou mais de seus ligantes, como aqui descrito.

[0105]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido compete pela ligação ao TIGIT com um anticorpo selecionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 ou MAB21, cada qual como fornecido na Tabela 5 desta divulgação.

[0106]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido inibe a ligação de CD155 ao TIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido inibe a ligação de CD112 ao TIGIT. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido inibe a associação de CD226 com TIGIT.

[0107]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido ativa uma célula T efetora ou uma célula exterminadora natural (NK). Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido diminui o número de células T reguladoras em um tecido ou em circulação. Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido inibe a supressão de uma célula T efetora por uma célula T reguladora.

[0108]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido não se liga especificamente a qualquer um de PVRL1, PVRL2, PVRL3 ou PVRL4.

[0109]Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo aqui fornecido se

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32/166 liga ao TIGIT murino (mTIGIT; SEQ ID NO: 3) com uma afinidade mais baixa (como indicado por Kd maior) que a afinidade do fragmento de anticorpo para hTIGIT ou não se liga ao mTIGIT.

[0110]Em algumas modalidades, um fragmento de um anticorpo aqui fornecido se liga ao mesmo epítopo de TIGIT como tal anticorpo.

[0111]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são anticorpos monoclonais. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são anticorpos policlonais.

[0112]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem um anticorpo quimérico. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem em um anticorpo quimérico. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem essencialmente em um anticorpo quimérico. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem em um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem essencialmente em um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem um anticorpo humano. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem em um anticorpo humano. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem essencialmente em um anticorpo humano.

[0113]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são amadurecidas por afinidade. Em alguns aspectos, as ABPs amadurecidas por afinidade são ABP amadurecidas por afinidade derivadas de uma ABP ilustrativa aqui fornecida.

[0114]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas compreendem uma estrutura alternativa. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem em uma estrutura alternativa. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas consistem essencialmente em uma estrutura alternativa. Qualquer estrutura alternativa adequada pode ser utilizada. Em alguns aspectos, a estrutura alternativa é

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33/166 selecionada de Adnectin™, iMab, Anticalin®, EETI-II/AGRP, domínio Kunitz, aptâmero de peptidio de tioredoxina, Affibody®, DARPin, Affilin, Tetranectin, Fynomer e Avimer.

[0115]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de TIGIT a um ou mais ligantes de TIGIT. Em alguns aspectos, o ligante de TIGIT é selecionado de um ou mais de receptores de poliovirus (PVR; CD155) e nectina-2 (CD112, PVRL2). Em alguns aspectos, a ABP inibe a ligação de TIGIT a urn ou mais ligantes de TIGIT por pelo menos cerca de 50 %. Em alguns aspectos, a ABP inibe a ligação de TIGIT a urn ou mais ligantes de TIGIT por pelo menos cerca de 75 %. Em alguns aspectos, a ABP inibe a ligação de TIGIT a urn ou mais ligantes de TIGIT por pelo menos cerca de 90 %. Em alguns aspectos, a ABP inibe a ligação de TIGIT a urn ou mais ligantes de TIGIT por pelo menos cerca de 95 %.

[0116]Em algumas modalidades, uma ABP da invenção é uma ABP que compete com uma ABP ilustrativa aqui fornecida. Em alguns aspectos, a ABP que compete com a ABP ilustrativa aqui fornecida se liga ao mesmo epítopo como uma ABP ilustrativa aqui fornecida.

[0117]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida não se liga a PVRL4.

[0118]É conhecido que quando um anticorpo é expressado em células, o anticorpo é modificado após a tradução. Exemplos da modificação pós-traducional incluem divagem de lisina no C terminal da cadeia pesada por uma carboxipeptidase; modificação de glutamina ou ácido glutâmico no N terminal da cadeia pesada e da cadeia leve em ácido piroglutâmico por piroglutamilação; glicosilação; oxidação; deaminação; e glicação, e é conhecido que tais modificações pós-traducionais ocorrem em vários anticorpos (Ver Journal of Pharmaceutical Sciences, 2008, Vol. 97, p. 2426 - 2447, incorporado por referência em sua totalidade). Em algumas modalidades, uma ABP da invenção é um anticorpo ou fragmento de ligação antígeno deste que sofreu modificação pós-traducional. Exemplos de um anticorpo ou

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34/166 fragmento de ligação antígeno deste, o qual sofreu modificação pós-traducional, incluem um anticorpo ou fragmentos de ligação ao antígeno deste que sofreu piroglutamilação no N terminal da região variável de cadeia pesada e/ou deleção de lisina no C terminal da cadeia pesada. É conhecido na técnica que tal modificação pós-traducional devido à piroglutamilação no N terminal e deleção de lisina no C terminal não têm qualquer influência na atividade do anticorpo ou fragmento deste (Analytical Biochemistry, 2006, Vol. 348, p. 24 - 39, incorporado por referência em sua totalidade).

2.2 Sequências de Proteínas de Ligação ao Antígeno TIGIT

2.2.1 Domínios Vh [0119]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh selecionada das SEQ ID NOs: 4 - 24. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 6. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 9. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 11. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 15. Em algumas modalidades, uma

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ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 17. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 19. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 20. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 21. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 24.

[0120]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh tendo pelo menos cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % de identidade com uma sequência Vh ilustrativa fornecida nas SEQ ID NOs: 4 - 24. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh fornecida nas SEQ ID NOs: 4-24, com até 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

2.2.2 Domínios Vl [0121]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma

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36/166 sequência Vl selecionada das SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0122]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vl tendo pelo menos cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % de identidade com uma sequência Vl ilustrativa fornecida nas SEQ ID NOs: 25 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vl fornecida nas SEQ ID NOs: 25-28, com até 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24 ou 25 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

2.2.3 Combinações Vh - Vl [0123]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh selecionada das SEQ ID NOs: 4 - 24 e uma sequência Vl selecionada das SEQ ID NOs: 25-28.

[0124]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 4 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

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37/166 e um Vl sequência da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 6 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 7 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 8 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ IDNO:9 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 10 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 11 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 12 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 13 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 14 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 15 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 16 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 17 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 18 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 19 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 20 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 21 e uma sequência Vl da

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SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 22 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 23 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vl da SEQ ID NO: 24 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0125]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 4 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 4 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0126]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 5 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 5 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0127]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 6 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 6 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0128]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 7 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

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39/166 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 7 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0129]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 8 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 8 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0130]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 9 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 9 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0131]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 10 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 10 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0132]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 11 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 11 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

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40/166 [0133]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 12 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 12 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0134]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 13 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 13 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0135]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 14 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 14 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0136]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 15 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 15 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0137]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 16 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 50/201

41/166 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 16 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0138]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 17 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 17 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0139]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 18 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 18 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0140]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 19 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 19 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0141]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 20 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 20 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 51/201

42/166 [0142]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 21 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 21 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 28.

[0143]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 22 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 22 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27.

[0144]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 23 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 23 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27.

[0145]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 24 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO:

e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 24 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 27.

[0146]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh tendo pelo menos cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % de identidade com uma sequência Vh ilustrativa fornecida nas SEQ ID NOs: 4 - 24,

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 52/201

43/166 e uma sequência Vl tendo pelo menos cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % de identidade com uma sequência Vl ilustrativa fornecida nas SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma sequência Vh fornecida nas SEQ ID NOs: 4 - 24, com até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24ou 25 substituições de aminoácido, e uma sequência Vl fornecida nas SEQ ID NOs: 25 - 28, com até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

2.2.4 CDRs [0147]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende de uma a três CDRs de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende de duas a três CDRs de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende três CDRs de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 -24. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de Kabat. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de Chothia. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de IMGT.

[0148]Em algumas modalidades, as CDRs são CDRs tendo pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H1, CDR-H2 ou CDR-H3 da SEQ ID NOs: 4 - 24. Em algumas modalidades, a CDR-H1 é uma CDRH1 de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24, com até 1, 2, 3, 4 ou 5

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 53/201

44/166 substituições de aminoácido. Em algumas modalidades, a CDR-H2 é uma CDR-H2 de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24, com até 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido. Em algumas modalidades, a CDR-H3 é uma CDR-H3 de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24, com até 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0149]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende de uma a três CDRs de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende de duas a três CDRs de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende três CDRs de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de Kabat. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de Chothia. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de IMGT.

[0150]Em algumas modalidades, as CDRs são CDRs tendo pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L1, CDR-L2 ou CDR-L3 da SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, a CDR-L1 é uma CDR-L1 de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28, com até 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 substituições de aminoácido. Em algumas modalidades, a CDR-L2 é uma CDRL2 de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28, com até 1, 2, 3 ou 4

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 54/201

45/166 substituições de aminoácido. Em algumas modalidades, a CDR-L3 é uma CDR-L3 de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28, com até 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0151]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende de uma a três CDRs de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24 e uma a três CDRs de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende de duas a três CDRs de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24 e duas a três CDRs de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende três CDRs de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24 e três CDRs de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de Kabat. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de Chothia. Em alguns aspectos, as CDRs são CDRs de IMGT.

[0152]Em algumas modalidades, as CDRs são CDRs tendo pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H1, CDR-H2 ou CDR-H3 da SEQ ID NOs: 4 - 24 e pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L1, CDR-L2 ou CDR-L3 da SEQ ID NOs: 25 - 28. Em algumas modalidades, a CDR-H1 é uma CDR-H1 de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24, com até 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 55/201

46/166 aminoácido; a CDR-H2 é uma CDR-H2 de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24, com até 1,2,3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido; a CDR-H3 é uma CDR-H3 de um domínio Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 - 24, com até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido; a CDR-L1 é uma CDR-L1 de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28, com até 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 substituições de aminoácido; a CDR-L2 é uma CDR-L2 de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28, com até 1, 2, 3 ou 4 substituições de aminoácido; e a CDR-L3 é uma CDR-L3 de um domínio Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 - 28, com até 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0153]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 29 - 35. Em alguns aspectos, a CDR-H3 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H3 da SEQ ID NOs: 29 - 35. Em alguns aspectos, a CDR-H3 é uma CDR-H3 de acordo com o sistema de numeração IMGT. Em algumas modalidades, a CDR-H3 é uma CDR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 29 - 35, com até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por

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47/166 exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0154]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 36 - 47. Em alguns aspectos, a CDR-H2 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H2 da SEQ ID NOs: 36 - 47. Em alguns aspectos, a CDR-H2 é uma CDR-H2 de acordo com o sistema de numeração de Kabat. Em algumas modalidades, a CDR-H2 é uma CDR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 36 - 47, com até 1,2,3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0155]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 58 - 62. Em alguns aspectos, a CDR-H1 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H1 da SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 58 - 62. Em alguns aspectos, a CDR-H1 é uma CDR-H1 que se estende a CDR-H1 como definido por ambos os sistemas de numeração Chothia e Kabat. Em algumas modalidades, a CDR-H1 é uma CDR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 58 - 62, com até 1, 2, 3, 4 ou 5

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48/166 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0156]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 29 - 35 e uma CDR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 36 - 47. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 29 - 35, uma CDR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 36 - 47 e uma CDR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 58 - 62. Em algumas modalidades, a CDR-H3 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H3 da SEQ ID NOs: 29- 35, a CDR-H2 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H2 da SEQ ID NOs: 36 - 47 e a CDR-H1 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H1 da SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 58 - 62. Em algumas modalidades, a CDR-H3 é uma CDR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 29 - 35, com até 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido; a CDR-H2 é uma CDR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 36 - 47, com até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido; e a CDR-H1 é uma CDR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 58 - 62, com até 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais

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49/166 variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0157]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-L3 selecionada das SEQ ID NOs: 63 - 66. Em alguns aspectos, a CDR-L3 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L3 da SEQ ID NOs: 63 - 66. Em alguns aspectos, a CDR-L3 é uma CDR-L3 de acordo com os sistemas de numeração de Kabat, Chothia e IMGTs. Em algumas modalidades, a CDR-L3 é uma CDR-L3 selecionada das SEQ ID NOs: 63 - 66, com até 1,2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0158]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-L2 selecionada das SEQ ID NOs: 67 - 69. Em alguns aspectos, a CDR-L2 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L2 da SEQ ID NOs: 67 - 69. Em alguns aspectos, a CDR-L2 é uma CDR-L2 de acordo com os sistemas de numeração de Kabat e Chothia. Em algumas modalidades, a CDR-L2 é uma CDR-L2 selecionada das SEQ ID NOs: 67 - 69, com até 1,2, 3 ou 4 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de

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50/166 aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0159]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-L1 selecionada das SEQ ID NOs: 70 - 72. Em alguns aspectos, a CDR-L1 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L1 da SEQ ID NOs: 70 - 72. Em alguns aspectos, a CDR-L1 é uma CDR-L1 de acordo com os sistemas de numeração de Kabat e Chothia. Em algumas modalidades, a CDR-L1 é uma CDR-L1 selecionada das SEQ ID NOs: 70 - 72, com até 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0160]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-L3 selecionada das SEQ ID NOs: 63 - 66 e uma CDR-L2 selecionada das SEQ ID NOs: 67 - 69. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-L3 selecionada das SEQ ID NOs: 63 - 66, uma CDR-L2 selecionada das SEQ

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ID NOs: 67 - 69 e uma CDR-L1 selecionada das SEQ ID NOs: 70 - 72. Em algumas modalidades, a CDR-L3 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L3 da SEQ ID NOs: 63 - 66, a CDR-L2 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDRL2 da SEQ ID NOs: 67 - 69 e a CDR-L1 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L1 da SEQ ID NOs: 70 - 72. Em algumas modalidades, a CDR-L3 é uma CDR-L3 selecionada das SEQ ID NOs: 63 66, com até 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido; a CDR-L2 é uma CDR-L2 selecionada das SEQ ID NOs: 67 - 69, com até 1, 2, 3 ou 4 substituições de aminoácido; e a CDR-L1 é uma CDR-L1 selecionada das SEQ ID NOs: 70 - 72, com até 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0161]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 29 - 35, uma CDR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 36 - 47, uma CDR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 48- 54 ou 58 - 62, uma CDR-L3 selecionada das SEQ ID NOs: 63 - 66, uma CDR-L2 selecionada das SEQ ID NOs: 67- 69 e uma CDR-L1 selecionada das SEQ ID NOs: 70 - 72. Em algumas modalidades, a CDR-H3 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H3 da SEQ ID NOs: 29 - 35, a CDR-H2 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR

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H2 da SEQ ID NOs: 36- 47, a CDR-H1 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-H1 da SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 58 - 62, a CDR-L3 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L3 da SEQ ID NOs: 63 - 66, a CDR-L2 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L2 da SEQ ID NOs: 67 - 69 e a CDR-L1 tem pelo menos cerca de 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de identidade com uma CDR-L1 da SEQ ID NOs: 70 - 72. Em algumas modalidades, a CDR-H3 é uma CDR-H3 selecionada das SEQ ID NOs: 29 - 35, com até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido; a CDR-H2 é uma CDR-H2 selecionada das SEQ ID NOs: 36 - 47, com até 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições de aminoácido; a CDR-H1 é uma CDR-H1 selecionada das SEQ ID NOs: 48 - 54 ou 5862, com até 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido; a CDR-L3 é uma CDR-L3 selecionada das SEQ ID NOs: 63 - 66, com até 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido; a CDR-L2 é uma CDR-L2 selecionada das SEQ ID NOs: 67 - 69, com até 1, 2, 3 ou 4 substituições de aminoácido; e a CDR-L1 é uma CDR-L1 selecionada das SEQ ID NOs: 70 - 72, com até 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 substituições de aminoácido. Em alguns aspectos, as substituições de aminoácido são substituições conservadoras de aminoácido. Em algumas modalidades, as ABPs descritas neste parágrafo são referidas aqui como “variantes”. Em algumas modalidades, tais variantes são derivadas de uma sequência fornecida aqui, por exemplo, por maturação de afinidade, mutagênese sítio-dirigida, mutagênese aleatória ou qualquer outro método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em algumas modalidades, tais variantes não são derivadas de uma sequência fornecida aqui e podem, por exemplo, ser isoladas de novo de acordo com os métodos aqui fornecidos para obter as ABPs.

[0162]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 29, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 36, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 48, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 63, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 67 e uma

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CDR-L1 da SEQ ID NO: 70.

[0163]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 29, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 37, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 49, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 63, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 67 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 70.

[0164]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 29, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 37, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 50, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 63, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 67 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 70.

[0165]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 30, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 37, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 50, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 63, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 67 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 70.

[0166]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 29, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 38, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 50, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 63, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 67 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 70.

[0167]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 31, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 39, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 51, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71.

[0168]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 31, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 40, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 52, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71.

[0169]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 31, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 41, uma CDR-H1 da SEQ

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ID NO: 53, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71.

[0170]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 31, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 40, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 54, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71.

[0171]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 32, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 40, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 54, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71.

[0172]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 32, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 40, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 54, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71.

[0173]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 32, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 40, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 54, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71.

[0174]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 33, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 42, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 58, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 65, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0175]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 33, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 42, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 59, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 65, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0176]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma

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CDR-H3 da SEQ ID NO: 33, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 43, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 60, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 65, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0177]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 34, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 43, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 60, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 65, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0178]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 34, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 44, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 61, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 65, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0179]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 33, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 44, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 59, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 65, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0180]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 35, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 45, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 62, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 66, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0181]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 35, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 46, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 62, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 66, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

[0182]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 35, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 47, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 62, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 66, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 69 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 72.

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2.2.5 Cadeias Pesadas e Cadeias Leves [0183]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma Vh selecionado de uma Vh da SEQ ID NO: 4-24 (ou uma variante aqui descrita) e uma região constante selecionada das SEQ ID NOs: 55 - 57 ou 125. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma Vl selecionado de uma Vl da SEQ ID NO: 25 - 28 (ou uma variante aqui descrita) e uma região constante da SEQ ID NO: 126.

[0184]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 79. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 80. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 79 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 80 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81.

[0185]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 82. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 83. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 82 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 83 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81.

[0186]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 84. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 85. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 84 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida

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57/166 compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 85 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81.

[0187]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 86. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 87. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 86 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 87 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81.

[0188]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 88. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 89. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 88 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 89 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 81.

[0189]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 90. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 91. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 90 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 91 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0190]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 93. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 94. Em algumas modalidades, uma

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58/166

ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 93 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 94 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0191]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 95. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 96. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 95 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 96 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0192]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 97. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 98. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 97 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 98 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0193]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 99. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 100. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 99 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 100 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0194]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 101. Em algumas modalidades, uma ABP aqui

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59/166 fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 102. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 101 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 102 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0195]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 103. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 104. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 103 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 104 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0196]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 105. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 106. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 105 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 106 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107.

[0197]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 108. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 109. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 108 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 109 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107.

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60/166 [0198]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 110. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 111. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 110 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 111 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107.

[0199]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 112. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 113. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 112 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 113 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107.

[0200]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 114. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 115. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 114 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 115 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107.

[0201 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 116. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 117. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 116 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 107. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 117 e uma cadeia

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61/166 leve da SEQ ID NO: 107.

[0202]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 118. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 119. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia leve da SEQ ID NO: 120. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 118 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 120. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 119 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 120.

[0203]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 121. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 122. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 121 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 120. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 122 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 120.

[0204]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 123. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 124. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 123 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 120. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 124 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 120.

2.2.6. Sequências Consenso [0205]Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma primeira família de ABPs, em que uma ABP de tal família compreende as seguintes seis sequências de CDR: (a) uma CDR-H3 tendo a sequência A-R-D-G-V-L-X-i-L-N-K-R-S-F-D-l, em que

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Xi é A ou T (SEQ ID NO: 128); (b) uma CDR-H2 tendo a sequência S-I-Y-Y-S-G-X2T-Y-Y-N-P-S-L-K-S, em que X2 é S, Q ou G (SEQ ID NO: 129); (c) uma CDR-H1 tendo a sequência G-S-I-X3-S-G-X4-Y-Y-W-G, em que X3 é E ou A, e X4 é L, V ou S (SEQ ID NO: 130); (d) uma CDR-L3 tendo a sequência QQHTVRPPLT (SEQ ID NO: 64); (e) uma CDR-L2 tendo a sequência GASSRAT (SEQ ID NO: 68); e (f) uma CDR-L1 tendo a sequência RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 71). Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP dentro dessa primeira família.

[0206]Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma segunda família de ABPs, em que uma ABP de tal família compreende as seguintes seis sequências de CDR: (a) uma CDR-H3 tendo a sequência A-R-D-A-N-Y-Y-G-X1-A-W-A-F-D-P, em que Xi é S ou G (SEQ ID NO: 131); (b) uma CDR-H2 tendo a sequência S-l-Y-Y-S-GX2-T-F-Y-N-P-S-L-K-X3, em que X2 é S ou A, e X3 é S ou G (SEQ ID NO: 132); (c) uma CDR-H1 tendo a sequência G-S-I-X4-S-X5-X6-X7-Y-W-G, em que X4 é S ou T, X5 é S ou T, Xe é S ou K, e X7 é H ou Y (SEQ ID NO: 133); (d) uma CDR-L3 tendo a sequência QQHFNLPT (SEQ ID NO: 63); (e) uma CDR-L2 tendo a sequência DASNRAT (SEQ ID NO: 67); e (f) uma CDR-L1 tendo a sequência RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 70). Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP dentro dessa segunda família.

[0207]Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma terceira família de ABPs, em que uma ABP de tal família compreende as seguintes seis sequências de CDR: (a) uma CDR-H3 tendo a sequência A-R-G-G-R-T-T-W-I-G-A-X1-D-I, em queXí é F ou L (SEQ ID NO: 134); (b) uma CDR-H2 tendo a sequência I- I-N-P-S-X2-G-L-TS-Y-A-X3-K-F-Q-G, em que X2 é L ou I, e X3 é Q ou R (SEQ ID NO: 135); (c) uma CDR-H1 tendo a sequência Y-T-F-X4-X5-Y-Y-X6-H, em que X4 é G, P ou R, X5 é N, A ou E e Xe é M ou I (SEQ ID NO: 136); (d) uma CDR-L3 tendo a sequência QQYVVWPPLT (SEQ ID NO: 65); (e) uma CDR-L2 tendo a sequência GASTRAT (SEQ ID NO: 69); e (f) uma CDR-L1 tendo a sequência RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 72). Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP dentro dessa terceira

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63/166 família.

[0208]Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma quarta família de ABPs, em que uma ABP de tal família compreende as seguintes seis sequências de CDR: (a) uma CDR-H3 tendo a sequência ARLHVSGSYYPAYLDY (SEQ ID NO: 35); (b) uma CDR-H2 tendo a sequência X,-l-N-P-S-M-G-A-T-S-Y-X2-Q-K-F-X3-G, em que Xi é V ou I, X2 é A ou T e X3 é Q ou R (SEQ ID NO: 137); (c) uma CDR-H1 tendo a sequência YTFTSHYMG (SEQ ID NO: 62); (d) uma CDR-L3 tendo a sequência QQYIVFPWT (SEQ ID NO: 66); (e) uma CDR-L2 tendo a sequência GASTRAT (SEQ ID NO: 69); e (f) uma CDR-L1 tendo a sequência RASQSVSSNLA, (SEQ ID NO: 72). Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP dentro dessa quarta família.

2.2.7. Propriedades Funcionais de Variantes de ABP [0209]Como descrito acima, e em outro local desta divulgação, são aqui fornecidas ABP variantes definidas com base na porcentagem de identidade para uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui ou substituição de resíduos de aminoácido em comparação com uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui.

[0210]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida tem especificidade para hTIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida tem especificidade para cTIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida tem especificidade para mTIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida tem especificidade para hTIGIT e cTIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida tem especificidade para hTIGIT e mTIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida tem especificidade para cTIGIT e mTIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida tem especificidade para hTIGIT, cTIGIT e mTIGIT.

[0211]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP que é derivada de uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui retém a afinidade, como medido

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64/166 por Kd, para hTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal ABP ilustrativa. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP que é derivada de uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui retém a afinidade, como medido por Kd, para cTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal ABP ilustrativa. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP que é derivada de uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui retém a afinidade, como medido por Kd, para mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal ABP ilustrativa. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP que é derivada de uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui retém a afinidade, como medido por Kd, para hTIGIT e cTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal ABP ilustrativa. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP que é derivada de uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui retém a afinidade, como medido por Kd, para hTIGIT e mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal ABP ilustrativa. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP que é derivada de uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui retém a afinidade, como medido por Kd, para cTIGIT e mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 74/201

65/166 de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal ABP ilustrativa. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP que é derivada de uma sequência de ABP ilustrativa fornecida aqui retém a afinidade, como medido por Kd, para todos os três de hTIGIT, cTIGIT e mTIGIT que está dentro de cerca de 1,5 vezes, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 7 vezes, cerca de 8 vezes, cerca de 9 vezes ou cerca de 10 vezes a afinidade de tal ABP ilustrativa.

[0212]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida retém a capacidade para antagonizar TIGIT, como medido por um ou mais ensaios ou efeitos biológicos aqui descritos. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida retém a capacidade para impedir TIGIT de interagir com um ou mais de seus ligantes, como aqui descrito.

[0213]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida compete pela ligação ao TIGIT com um anticorpo selecionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 ou MAB21, cada qual como fornecido na Tabela 5 desta divulgação.

[0214]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de CD155 ao TIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de CD112 ao TIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida inibir a associação de CD226 com TIGIT.

[0215]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida ativa uma célula T efetora ou uma célula exterminadora natural (NK). Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida diminui o número de células T reguladoras em um tecido ou em circulação. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida inibe a supressão de uma célula T efetora por uma célula T reguladora.

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 75/201

66/166 [0216]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida não se liga especificamente a qualquer um de PVRL1, PVRL2, PVRL3 ou PVRL4.

[0217]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida se liga ao TIGIT murino (SEQ ID NO: 3) com uma afinidade mais baixa (como indicado por Kd maior) que a afinidade da ABP para hTIGIT ou não se liga ao mTIGIT. Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida se liga ao TIGIT murino (SEQ ID NO: 138) com uma afinidade mais baixa (como indicado por Kd maior) que a afinidade da ABP para hTIGIT ou não se liga ao mTIGIT.

[0218]Em algumas modalidades, uma variante de uma ABP aqui fornecida se liga ao mesmo epitopo de TIGIT como tal ABP.

2.2.8. Outras Propriedades Funcionais das ABPs [0219]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma ou mais das características listadas a seguir (a)-(j): (a) compete pela ligação ao TIGIT com um anticorpo selecionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 ou MAB21, cada qual como fornecido na Tabela 5 desta divulgação; (b) inibira ligação de CD155 ao TIGIT; (c) inibira ligação de CD112 ao TIGIT; (d) inibir a associação de CD226 com TIGIT; (e) ativa uma célula T efetora ou uma célula exterminadora natural (NK); (f) diminuir o número de células T reguladoras em um tecido ou em circulação; (g) inibir a supressão de uma célula T efetora por uma célula T reguladora; (h) não se ligar especificamente a qualquer um de PVRL1, PVRL2, PVRL3 ou PVRL4; (i) se liga especificamente ao TIGIT de macacos cynomolgus (cTIGIT; SEQ ID NO: 2); ou 0) se liga ao TIGIT murino (mTIGIT; SEQ ID NO: 3) com uma afinidade mais baixa (como indicado por Kd maior) que a afinidade da ABP para hTIGIT ou não se liga ao mTIGIT. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem duas ou mais das características listadas acima (a)-(j). Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem três ou mais das características listadas acima (a)-(j).

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67/166

Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem quatro ou mais das características listadas acima (a)-(j). Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem cinco ou mais das características listadas acima (a)-(j). Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem seis ou mais das características listadas acima (a)-(j). Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem sete ou mais das características listadas acima (a)-(j). Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem oito ou mais das características listadas acima (a)-(j). Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem nove ou mais das características listadas acima (a)-(j). Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem todas as dez das características listadas acima (a)-(j).

[0220]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida exibe uma combinação das características listadas a seguir (a)-(j): (a) compete pela ligação ao TIGIT com um anticorpo selecionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 ou MAB21, cada qual como fornecido na Tabela 5 desta divulgação; (b) inibir a ligação de CD155 ao TIGIT; (c) inibir a ligação de CD112 ao TIGIT; (d) inibir a associação de CD226 com TIGIT; (e) ativa uma célula T efetora ou uma célula exterminadora natural (NK); (f) diminuir o número de células T reguladoras em um tecido ou em circulação; (g) inibir a supressão de uma célula T efetora por uma célula T reguladora; (h) não se ligar especificamente a qualquer um de PVRL1, PVRL2, PVRL3 ou PVRL4; (i) se liga especificamente ao TIGIT de macacos cynomolgus (cTIGIT; SEQ ID NO: 2); ou (j) se liga ao TIGIT murino (mTIGIT; SEQ ID NO: 3) com uma afinidade mais baixa (como indicado por Kd maior) que a afinidade da ABP para hTIGIT ou não se liga ao mTIGIT. Em algumas modalidades, tal ABP exibe uma combinação das características selecionadas de (a e b), (a e c), (a e d), (a e e), (a e f), (a e g), (a e h), (a e i), (a e j), (b e a), (b e c), (b e d), (b e e), (b e f), (b e g), (b e h), (b e i), (b e j), (c e a), (c e b), (c e d), (c e e), (c e f), (c e g), (c e h),

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 77/201

68/166 (c e i), (c e j), (d e a), (d e b), (d e c), (d e e), (d e f), (d e g), (d e h), (d e i), (d e j), (e e

a) , (e e b), (e e c), (e e d), (e e f), (e e g), (e e h), (e e i), (e e j), (f e a), (f e b), (f e c), (f e d), (f e e), (f e g), (f e h), (f e i), (f e j), (g e a), (g e b), (g e c), (g e d), (g e e), (g e f), (g e h), (g e i), (g e j), (h e a), (h e b), (h e c), (h e d), (h e e), (h e f), (h e g), (h e i), (h e j), (i e a), (i e b), (i e c), (i e d), (i e e), (i e f), (i e g), (i e h), (i e j), (j e a), (j e b), (j e

c), (j e d), (j e e), (j e f), (j e g), (j e h) e (j e i). Em algumas modalidades, tal ABP exibe uma combinação das características selecionadas de (a e b e c), (a e b e d), (a e b e

e), (a e b e f), (a e b e g), (a e b e h), (a e b e i), (a e b e j), (a e c e b), (a e c e d), (a e c e e), (a e c e f), (a e c e g), (a e c e h), (a e c e i), (a e c e j), (a e d e b), (a e d e c), (a e d e e), (a e d e f), (a e d e g), (a e d e h), (a e d e i), (a e d e j), (a e e e b), (a e e e c), (a e e e d), (a e e e f), (a e e e g), (a e e e h), (a e e e i), (a e e e j), (a e f e b), (a e f e c), (a e f e d), (a e f e e), (a e f e g), (a e f e h), (a e f e i), (a e f e j), (a e g e b), (a e g e c), (a e g e d), (a e g e e), (a e g e f), (a e g e h), (a e g e i), (a e g e j), (a e h e

b) , (a e h e c), (a e h e d), (a e h e e), (a e h e f), (a e h e g), (a e h e i), (a e h e j), (a e i e b), (a e i e c), (a e i e d), (a e i e e), (a e i e f), (a e i e g), (a e i e h), (a e i e j), (a e j e b), (a e j e c), (a e j e d), (a e j e e), (a e j e f), (a e j e g), (a e j e h), (a e j e i), (b e a e j), (b e a e c), (b e a e d), (b e a e e), (b e a e f), (b e a e g), (b e a e h), (b e a e i), (b e c e j), (b e c e a), (b e c e d), (b e c e e), (b e c e f), (b e c e g), (b e c e h), (b e c e i), (b e d e j), (b e d e a), (b e d e c), (b e d e e), (b e d e f), (b e d e g), (b e d e h), (b e d e i), (b e e e j), (b e e e a), (b e e e c), (b e e e d), (b e e e f), (b e e e g), (b e e e h), (b e e e i), (b e f e j), (b e f e a), (b e f e c), (b e f e d), (b e f e e), (b e f e g), (b e f e h), (b e f e i), (b e g e j), (b e g e a), (b e g e c), (b e g e d), (b e g e e), (b e g e f), (bege h), (b e g e i), (b e h e j), (b e h e a), (b e h e c), (b e h e d), (b e h e e), (b e h e f), (b e h e g), (b e h e i), (b e i e j), (b e i e a), (b e i e c), (b e i e d), (b e i e e), (b e i e f), (b e i e g), (b e i e h), (b e j e i), (b e j e a), (b e j e c), (b e j e d), (b e j e e), (b e j e f), (b e j e g), (b e j e h), (c e a e i), (c e a e j), (c e a e b), (c e a e d), (c e a e e), (c e a e f), (c e a e g), (c e a e h), (c e b e i), (c e b e j), (c e b e a), (c e b e d), (c e b e e), (c e b e f),

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69/166 (c e b e g), (c e b e h), (c e d e i), (c e d e j), (c e d e a), (c e d e b), (c e d e e), (c e d e e), (c e d e g), (c e d e h), (c e e e i), (c e e e j), (c e e e a), (c e e e b), (c e e e d), (c e e e f), (c e e e g), (c e e e h), (c e f e i), (c e f e j), (c e f e a), (c e f e b), (c e f e d), (c e f e e), (c e f e g), (c e f e h), (c e g e i), (c e g e j), (c e g e a), (c e g e b), (c e g e d), (c e g e e), (c e g e f), (c e g e h), (c e h e i), (c e h e j), (c e h e a), (c e h e b), (c e h e d), (c e h e e), (c e h e f), (c e h e g), (c e i e h), (c e i e j), (c e i e a), (c e i e b), (c e i e d), (c e i e e), (c e i e f), (c e i e g), (c e j e h), (c e j e i), (c e j e a), (c e j e b), (c e j e d), (c e j e e), (c e j e f), (c e j e g), (d e a e h), (d e a e g), (d e a e j), (d e a e b), (d e a e c), (d e a e e), (d e a e f), (d e a e g), (d e b e h), (d e b e i), (d e b e j), (d e b e a), (d e b e c), (d e b e e), (d e b e f), (d e b e g), (d e c e h), (d e c e i), (d e c e j), (d e c e a), (d e c e b), (d e c e e), (d e c e f), (d e c e g), (d e e e h), (d e e e i), (d e e e j), (d e e e a), (d e e e b), (d e e e c), (d e e e f), (d e e e g), (d e f e h), (d e f e i), (d e f e j), (def e a), (d e f e b), (d e f e c), (d e f e e), (d e f e g), (d e g e h), (d e g e i), (d e g e j), (d e g e a), (d e g e b), (d e g e c), (d e g e d), (d e g e f), (d e h e g), (d e h e i), (d e h e j), (d e h e a), (d e h e b), (d e h e c), (d e h e e), (d e h e f), (d e i e g), (d e i e h), (d e i e j), (d e i e a), (d e i e b), (d e i e c), (d e i e e), (d e i e f), (d e j e g), (d e j e h), (d e j e

i), (d e j e a), (d e j e b), (d e j e c), (d e j e e), (d e j e f), (e e a e g), (e e a e h), (e e a e i), (e e a e j), (e e a e b), (e e a e c), (e e a e d), (e e a e f), (e e b e g), (e e b e h), (e e b e i), (e e b e j), (e e b e a), (e e b e c), (e e b e d), (e e b e f), (e e c e g), (e e c e

h), (e e c e i), (e e c e g), (e e c e a), (e e c e b), (e e c e d), (e e c e f), (e e d e g), (e e d e h), (e e d e i), (e e d e j), (e e d e a), (e e d e b), (e e d e c), (e e d e f), (e e f e g), (e e f e h), (e e f e i), (e e f e j), (e e f e a), (e e f e b), (e e f e c), (e e f e d), (e e g e f), (e e g e h), (e e g e i), (e e g e j), (e e g e a), (e e g e b), (e e g e c), (e e g e d), (e e h e f), (e e h e g), (e e h e i), (e e h e j), (e e h e a), (e e h e b), (e e h e c), (e e h e d), (e e i e f), (e e i e g), (e e i e h), (e e i e j), (e e i e a), (e e i e b), (e e i e c), (e e i e d), (e e j e f), (e e j e g), (e e j e h), (e e j e i), (e e j e a), (e e j e b), (e e j e c), (e e j e d), (f e a e e), (f e a e g), (f e a e h), (f e a e i), (f e a e j), (f e a e b), (f e a e c), (f e a e d), (f e

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70/166 b e e), (f e b e g), (f e b e h), (f e b e i), (f e b e j), (f e b e a), (f e b e c), (f e b e d), (f e c e e), (f e c e g), (f e c e h), (f e c e i), (f e c e j), (f e c e a), (f e c e b), (f e c e d), (f e d e e), (f e d e g), (f e d e h), (f e d e i), (f e d e j), (f e d e a), (f e d e b), (f e d e c), (f e e e d), (f e e e g), (f e e e h), (f e e e i), (f e e e j), (f e e e a), (f e e e b), (f e e e c), (f e g e d), (f e g e e), (f e g e h), (f e g e i), (f e g e j), (f e g e a), (f e g e b), (f e g e c), (f e h e d), (f e h e e), (f e h e g), (f e h e i), (f e h e j), (f e h e a), (f e h e b), (f e h e c), (f e i e d), (f e i e e), (f e i e g), (f e i e h), (f e i e j), (f e i e a), (f e i e b), (f e i e c), (f e j e d), (f e j e e), (f e j e g), (f e j e h), (f e j e i), (f e j e a), (f e j e b), (f e j e c), (g e a e d), (g e a e e), (g e a e f), (g e a e h), (g e a e i), (g e a e j), (g e a e b), (g e a e c), (g e b e d), (g e b e e), (g e b e f), (g e b e h), (g e b e i), (g e b e j), (g e b e a), (g e b e c), (g e c e d), (g e c e e), (g e c e d), (g e c e h), (g e c e i), (g e c e j), (g e c e a), (g e c e b), (g e d e c), (g e d e e), (g e d e f), (g e d e h), (g e d e i), (g e d e j), (g e d e a), (g e d e b), (g e e e c), (g e e e d), (g e e e f), (g e e e h), (g e e e i), (g e e e j), (g e e e a), (g e e e b), (g e f e c), (g e f e d), (g e f e e), (g e f e h), (g e f e i), (g e f e j), (g e f e a), (g e f e b), (g e h e c), (g e h e d), (g e h e d), (g e h e f), (g e h e i), (g e h e j), (g e h e a), (g e h e b), (g e i e c), (g e i e d), (g e i e e), (g e i e f), (g e i e h), (g e i e j), (g e i e a), (g e i e b), (g e j e c), (g e j e d), (g e j e e), (g e j e f), (g e j e h), (g e j e i), (g e j e a), (g e j e b), (h e a e c), (h e a e d), (h e a e e), (h e a e f), (h e a e d), (h e a e i), (h e a e j), (h e a e b), (h e b e c), (h e b e d), (h e b e e), (h e b e f), (h e b e g), (h e b e i), (h e b e j), (h e b e a), (h e c e b), (h e c e d), (h e c e e), (h e c e f), (h e c e g), (h e c e i), (h e c e j), (h e c e a), (h e d e b), (h e d e c), (h e d e e), (h e d e f), (h e d e g), (h e d e i), (h e d e j), (h e d e a), (h e e e b), (h e e e c), (h e e e d), (h e e e f), (h e e e e), (h e e e i), (h e e e j), (h e e e a), (h e f e b), (h e f e c), (h e f e d), (h e f e e), (h e f e

g), (h e f e i), (h e f e j), (h e f e a), (h e g e b), (h e g e c), (h e g e d), (h e g e e), (h e g e f), (h e g e i), (h e g e j), (h e g e a), (h e i e b), (h e i e c), (h e i e d), (h e i e e), (h e i e f), (h e i e g), (h e i e j), (h e i e a), (h e j e b), (h e j e c), (h e j e d), (h e j e e), (h e j e f), (h e j e g), (h e j e i), (h e j e a), (i e a e b), (i e a e c), (i e a e d), (i e a e e), (i e

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71/166 a e f), (i e a e g), (i e a e h), (i e a e j), (i e b e a), (i e b e c), (i e b e d), (i e b e e), (i e b e f), (i e b e g), (i e b e h), (i e b e j), (i e c e a), (i e c e b), (i e c e d), (i e c e e), (i e c e f), (i e c e g), (i e c e h), (i e c e j), (i e d e a), (i e d e b), (i e d e c), (i e d e e), (i e d e

f), (i e d e g), (i e d e h), (i e d e j), (i e e e a), (i e e e b), (i e e e c), (i e e e d), (i e e e f), (i e e e g), (i e e e h), (i e e e j), (i e f e a), (i e f e b), (i e f e c), (i e f e d), (i e f e e), (i e f e g), (i e f e h), (i e f e j), (i e g e a), (i e g e b), (i e g e c), (i e g e d), (i e g e e), (i e g e f), (i e g e h), (i e g e j), (i e h e a), (i e h e b), (i e h e c), (i e h e d), (i e h e e), (i e h e f), (i e h e g), (i e h e j), (i e j e a), (i e j e b), (i e j e c), (i e j e d), (i e j e e), (i e j e

f) , (i e j e g), (i e j e h), (j e a e i), (j e a e b), (j e a e c), (j e a e d), (j e a e e), (j e a e f), (j e a e g), (j e a e h), (j e b e i), (j e b e a), (j e b e c), (j e b e d), (j e b e e), (j e b e f), (j e b e g), (j e b e h), (j e c e i), (j e c e a), (j e c e b), (j e c e d), (j e c e e), (j e c e f), (j e c e g), (j e c e h), (j e d e i), (j e d e a), (j e d e b), (j e d e c), (j e d e e), (j e d e f), (j e d e g), (j e d e h), (j e e e i), (j e e e a), (j e e e b), (j e e e c), (j e e e d), (j e e e f), (j e e e g), (j e e e h), (j e f e i), (j e f e a), (j e f e b), (j e f e c), (j e f e d), (j e f e e), (jefe

g) , (j e f e h), (j e g e i), (j e g e a), (j e g e b), (j e g e c), (j e g e d), (j e g e e), (j e g e

f), (j e g e h), (j e h e i), (j e h e a), (j e h e b), (j e h e c), (j e h e d), (j e h e e), (j e h e

f), (j e h e g), (j e i e h), (j e i e a), (j e i e b), (j e i e c), (j e i e d), (j e i e e), (j e i e f) e (j e i e g).

2.3. Linhagens Germinativas [0221 ]As ABPs aqui fornecidas podem compreender quaisquer sequências de linhagem germinativa Vh e Vladequadas.

[0222]Em algumas modalidades, a região Vh de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VH4. Em algumas modalidades, a região Vh de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VH1.

[0223]Em algumas modalidades, a região Vh de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VH4-39. Em algumas modalidades, a região Vh de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VH4-31. Em algumas

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72/166 modalidades, a região Vh de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germ inativa VH1-46.

[0224]Em algumas modalidades, a região Vl de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VK3.

[0225]Em algumas modalidades, a região Vl de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VK3-11. Em algumas modalidades, a região Vl de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VK3-20. Em algumas modalidades, a região Vl de uma ABP aqui fornecida é a partir da linhagem germinativa VK3-15.

Tabela 5 Sequências e Linhagens Germinativas (GL) de ABPs T GIT.

Ab	VH GL	CDR- H1¹	CDR- H2²	CDR- H3³	Proteína VH	VL GL	CDR- L1⁴	CDR- L2⁵	CDR- L3⁶	Proteína VL
MAB1lgG4	VH4 -39	GSITS SSYY WG (SEQ ID NO: 48)	SIYYS GATE YNPS LKS (SEQ ID NO: 36)	ARDA NYYG SAWA FDP (SEQ ID NO: 29)	QLQLQESGPGLVKPSETLSL TCTVSGGSITSSSYYWG Wl R QPPGKGLEWIGSIYYSGATF YNPSLKSRVTISVDTSKNQF SLKLSSVTAADTAVYYCARD ANYYGSAWAFDPWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 4)	VK3- 11	RAS QSVS SYLA (SEQ ID NO: 70)	DASN RAT (SEQ ID NO: 67)	QQHF NLPT (SEQ ID NO: 63)	EIVLTQSPATLSLS PGERATLSCRASQ SVSSYLAWYQQKP GQAPRLLIYDASN RATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQHFN LPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 25)
MAB2lgG4	VH4 -39	GSISS SKYY WG (SEQ ID NO: 49)	SIYYS GSTF YNPS LKS (SEQ ID NO: 37)	ARDA NYYG SAWA FDP (SEQ ID NO: 29)	QLQLQESGPGLVKPSETLSL TCTVSGGS ISSSKYYWGWIR QPPGKGLEWIGSIYYSGSTF YNPSLKSRVTISVDTSKNQF SLKLSSVTAADTAVYYCARD ANYYGSAWAFDPWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 5)	VK3- 11	RAS QSVS SYLA (SEQ ID NO: 70)	DASN RAT (SEQ ID NO: 67)	QQHF NLPT (SEQ ID NO: 63)	EIVLTQSPATLSLS PGERATLSCRASQ SVSSYLAWYQQKP GQAPRLLIYDASN RATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQHFN LPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 25)
MAB3lgG4	VH4 -39	GSISS TSHY WG (SEQ ID NO: 50)	SIYYS GSTF YNPS LKS (SEQ ID NO: 37)	ARDA NYYG SAWA FDP (SEQ ID NO: 29)	QLQLQESGPGLVKPSETLSL TCTVSGGS ISSTSHYWGWIR QPPGKGLEWIGSIYYSGSTF YNPSLKSRVTISVDTSKNQF SLKLSSVTAADTAVYYCARD ANYYGSAWAFDPWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 6)	VK3- 11	RAS QSVS SYLA (SEQ ID NO: 70)	DASN RAT (SEQ ID NO: 67)	QQHF NLPT (SEQ ID NO: 63)	EIVLTQSPATLSLS PGERATLSCRASQ SVSSYLAWYQQKP GQAPRLLIYDASN RATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQHFN LPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 25)
MAB4lgG4	VH4 -39	GSISS TSHY WG (SEQ ID NO: 50)	SIYYS GSTF YNPS LKS (SEQ ID NO:	ARDA NYYG GAWA FDP (SEQ ID NO:	QLQLQESGPGLVKPSETLSL TCTVSGGS ISSTSHYWGWIR QPPGKGLEWIGSIYYSGSTF YNPSLKSRVTISVDTSKNQF SLKLSSVTAADTAVYYCARD ANYYGGAWAFDPWGQGTL	VK3- 11	RAS QSVS SYLA (SEQ ID NO:	DASN RAT (SEQ ID NO: 67)	QQHF NLPT (SEQ ID NO: 63)	EIVLTQSPATLSLS PGERATLSCRASQ SVSSYLAWYQQKP GQAPRLLIYDASN RATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEP

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 82/201

73/166

			37)	30)	VTVSS (SEQ ID NO: 7)		70)			EDFAVYYCQQHFN LPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 25)
MAB5lgG4	VH4 -39	GSISS TSHY WG (SEQ ID NO: 50)	SIYYS GSTF YNPS LKG (SEQ ID NO: 38)	ARDA NYYG SAWA FDP (SEQ ID NO: 29)	QLQLQESGPGLVKPSETLSL TCTVSGGS ISSTSHYWGWIR QPPGKGLEWIGSIYYSGSTF YNPSLKGRVTISVDTSKNQF SLKLSSVTAADTAVYYCARD ANYYGSAWAFDPWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 8)	VK3- 11	RAS QSVS SYLA (SEQ ID NO: 70)	DASN RAT (SEQ ID NO: 67)	QQHF NLPT (SEQ ID NO: 63)	EIVLTQSPATLSLS PGERATLSCRASQ SVSSYLAWYQQKP GQAPRLLIYDASN RATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQHFN LPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 25)
MAB6lgG4	VH4 -39	GSIES GSYY WG (SEQ ID NO: 51)	SIYYS GGTY YNPS LKS (SEQ ID NO: 39)	ARDG VLTL NKRS FDI (SEQ ID NO: 31)	QLQLQESGPGLVKPSETLSL TCTVSGGSIESGSYYWG Wl RQPPGKGLEWIGSIYYSGGT YYNPSLKSRVTISVDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCAR DGVLTLNKRSFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 9)	VK320	RAS QSVS SSYL A (SEQ ID NO: 71)	GASS RAT (SEQ ID NO: 68)	QQHT VRPPL T (SEQ ID NO: 64)	EIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQ SVSSSYLAWYQQK PGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLE PEDFAVYYCQQHT VRPPLTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO: 26)
MAB7lgG4	VH4 -31	GSIES GVYY WG (SEQ ID NO: 52)	SIYYS GSTY YNPS LKS (SEQ ID NO: 40)	ARDG VLTL NKRS FDI (SEQ ID NO: 31)	QVQLQESGPGLVKPSQTLS LTCTVSGGSIESG VYYWG Wl RQPPGKGLEWIGSIYYSGST YYNPSLKSRVTISVDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCAR DGVLTLNKRSFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 10)	VK320	RAS QSVS SSYL A (SEQ ID NO: 71)	GASS RAT (SEQ ID NO: 68)	QQHT VRPPL T (SEQ ID NO: 64)	EIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQ SVSSSYLAWYQQK PGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLE PEDFAVYYCQQHT VRPPLTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO: 26)
MAB8lgG4	VH4 -39	GSIAS GSYY WG (SEQ ID NO: 53)	SIYYS GQTY YNPS LKS (SEQ ID NO: 41)	ARDG VLTL NKRS FDI (SEQ ID NO: 31)	QLQLQESGPGLVKPSETLSL TCTVSGGS IASGSYYWG Wl RQPPGKGLEWIGSIYYSGQT YYNPSLKSRVTISVDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCAR DGVLTLNKRSFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 11)	VK320	RAS QSVS SSYL A (SEQ ID NO: 71)	GASS RAT (SEQ ID NO: 68)	QQHT VRPPL T (SEQ ID NO: 64)	EIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQ SVSSSYLAWYQQK PGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLE PEDFAVYYCQQHT VRPPLTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO: 26)
MAB9lgG4	VH4 -31	GSIES GLYY WG (SEQ ID NO: 54)	SIYYS GSTY YNPS LKS (SEQ ID NO: 40)	ARDG VLTL NKRS FDI (SEQ ID NO: 31)	QVQLQESGPGLVKPSQTLS LTCTVSGGSIESGLYYWGWI RQPPGKGLEWIGSIYYSGST YYNPSLKSRVTISVDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCAR DGVLTLNKRSFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 12)	VK320	RAS QSVS SSYL A (SEQ ID NO: 71)	GASS RAT (SEQ ID NO: 68)	QQHT VRPPL T (SEQ ID NO: 64)	EIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQ SVSSSYLAWYQQK PGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLE PEDFAVYYCQQHT VRPPLTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO: 26)
MAB1 0-lgG4	VH4 -31	GSIES GLYY WG	SIYYS GSTY YNPS	ARDG VLAL NKRS	QVQLQESGPGLVKPSQTLS LTCTVSGGSIESGLYYWGWI RQPPGKGLEWIGSIYYSGST	VK320	RAS QSVS SSYL	GASS RAT (SEQ	QQHT VRPPL T	EIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQ SVSSSYLAWYQQK

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74/166

		(SEQ ID NO: 54)	LKS (SEQ ID NO: 40)	FDI (SEQ ID NO: 32)	YYNPSLKSRATISVDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCAR DGVLALNKRSFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 13)		A (SEQ ID NO: 71)	ID NO: 68)	(SEQ ID NO: 64)	PGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLE PEDFAVYYCQQHT VRPPLTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO: 26)
MAB1 1-lgG4	VH4 -31	GSIES GLYY WG (SEQ ID NO: 54)	SIYYS GSTY YNPS LKS (SEQ ID NO: 40)	ARDG VLAL NKRS FDI (SEQ ID NO: 32)	QVQLQESGPGLVKPSQTLS LTCTVSGGSIESGLYYWGWI RQPPGKGLEWIGSIYYSGST YYNPSLKSRVTISVDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCAR DGVLALNKRSFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 14)	VK320	RAS QSVS SSYL A (SEQ ID NO: 71)	GASS RAT (SEQ ID NO: 68)	QQHT VRPPL T (SEQ ID NO: 64)	EIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQ SVSSSYLAWYQQK PGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLE PEDFAVYYCQQHT VRPPLTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO: 26)
MAB1 2-lgG4	VH4 -31	GSIES GLYY WG (SEQ ID NO: 54)	SIYYS GSTY YNPS LKS (SEQ ID NO: 40)	ARDG VLAL NKRS FDI (SEQ ID NO: 32)	QVQLQESGPGLVKPSQTLS LTCTASGGSIESGLYYWGWI RQPPGKGLEWIGSIYYSGST YYNPSLKSRVTISVDTSKNQ FSLKLSSVTAADTAVYYCAR DGVLALNKRSFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 15)	VK320	RAS QSVS SSYL A (SEQ ID NO: 71)	GASS RAT (SEQ ID NO: 68)	QQHT VRPPL T (SEQ ID NO: 64)	EIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQ SVSSSYLAWYQQK PGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLE PEDFAVYYCQQHT VRPPLTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO: 26)
MAB1 3-lgG4	VH1 -46	YTFG NYYM H (SEQ ID NO: 58)	IINPS LGLT SYAQ KFQG (SEQ ID NO: 42)	ARGG RTTW IGAFD I (SEQ ID NO: 33)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFGNYYMHWVR QAPGQGLEWMGIINPSLGLT SYAQKFQGRVTMTRDTSTS TVYMELSSLRSEDTAVYYCA RGGRTTWIGAFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 16)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYV VWPP LT (SEQ ID NO: 65)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRLLIYGAST RATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQS EDFAVYYCQQYVV WPPLTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 27)
MAB1 4-lgG4	VH1 -46	YTFPA YYMH (SEQ ID NO: 59)	IINPS LGLT SYAQ KFQG (SEQ ID NO: 42)	ARGG RTTW IGAFD I (SEQ ID NO: 33)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFPAYYMHWVR QAPGQGLEWMGIINPSLGLT SYAQKFQGRVTMTRDTSTS TVYMELSSLRSEDTAVYYCA RGGRTTWIGAFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 17)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYV VWPP LT (SEQ ID NO: 65)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRLLIYGAST RATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQS EDFAVYYCQQYVV WPPLTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 27)
MAB1 5-lgG4	VH1 -46	YTFRE YYMH (SEQ ID NO: 60)	IINPSI GLTS YARK FQG (SEQ ID NO: 43)	ARGG RTTW IGAFD I (SEQ ID NO: 33)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFREYYMHWVR QAPGQGLEWMGIINPSIGLT SYARKFQGRVTMTRDTSTS TVYMELSSLRSEDTAVYYCA RGGRTTWIGAFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 18)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYV VWPP LT (SEQ ID NO: 65)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRLLIYGAST RATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQS EDFAVYYCQQYVV WPPLTFGGGTKVE

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 84/201

75/166

										IK (SEQ ID NO: 27)
MAB1 6-lgG4	VH1 -46	YTFRE YYMH (SEQ ID NO: 60)	IINPSI GLTS YARK FQG (SEQ ID NO: 43)	ARGG RTTW IGALD I (SEQ ID NO: 34)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFREYYMHWVR QAPGQGLEWMGIINPSIGLT SYARKFQGRVTMTRDTSTS TVYMELSSLRSEDTAVYYCA RGGRTTWIGALDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 19)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYV VWPP LT (SEQ ID NO: 65)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRLLIYGAST RATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQS EDFAVYYCQQYVV WPPLTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 27)
MAB1 7-lgG4	VH1 -46	YTFPA YYIH (SEQ ID NO: 61)	IINPS LGLT SYAR KFQG (SEQ ID NO: 44)	ARGG RTTW IGALD I (SEQ ID NO: 34)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFPAYYIHWVR QAPGQGLEWMGIINPSLGLT SYARKFQGRVTMTRDTSTS TVYMELSSLRSEDTAVYYCA RGGRTTWIGALDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 20)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYV VWPP LT (SEQ ID NO: 65)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRLLIYGAST RATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQS EDFAVYYCQQYVV WPPLTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 27)
MAB1 8-lgG4	VH1 -46	YTFPA YYMH (SEQ ID NO: 59)	IINPS LGLT SYAR KFQG (SEQ ID NO: 44)	ARGG RTTW IGAFD I (SEQ ID NO: 33)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFPAYYMHWVR QAPGQGLEWMGIINPSLGLT SYARKFQGRVTMTRDTSTS TVYMELSSLRSEDTAVYYCA RGGRTTWIGAFDIWGQGTM VTVSS (SEQ ID NO: 21)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYV VWPP LT (SEQ ID NO: 65)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRLLIYGAST RATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQS EDFAVYYCQQYVV WPPLTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 27)
MAB1 9-lgG4	VH1 -46	YTFTS HYMG (SEQ ID NO: 62)	VINPS MGAT SYAQ KFQG (SEQ ID NO: 45)	ARLH VSGS YYPA YLDY (SEQ ID NO: 35)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFTSHYMGWVR QAPGQGLEWMGVINPSMG ATSYAQKFQGRVTMTRDTS TSTVYMELSSLRSEDTAVYY CARLHVSGSYYPAYLDYWG QGTMVTVSS (SEQ ID NO: 22)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYIV FPWT (SEQ ID NO: 66)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRHLIYGAS TRATGIPARFSGS GSGTEFTLTISSLQ SEDFAVYYCQQYI VFPWTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 28)
MAB2 0-lgG4	VH1 -46	YTFTS HYMG (SEQ ID NO: 62)	IINPS MGAT SYAQ KFQG (SEQ ID NO: 46)	ARLH VSGS YYPA YLDY (SEQ ID NO: 35)	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFTSHYMGWVR QAPGQGLEWVGIINPSMGA TSYAQKFQGRVTMTRDTST STVYMELSSLRSEDTAVYYC ARLHVSGSYYPAYLDYWGQ GTMVTVSS (SEQ ID NO: 23)	VK3- 15	RAS QSVS SNLA (SEQ ID NO: 72)	GAST RAT (SEQ ID NO: 69)	QQYIV FPWT (SEQ ID NO: 66)	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK PGQAPRHLIYGAS TRATGIPARFSGS GSGTEFTLTISSLQ SEDFAVYYCQQYI VFPWTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 28)
MAB2 1-lgG4	VH1 -46	YTFTS HYMG (SEQ	IINPS MGAT SYTQ	ARLH VSGS YYPA	QVQLVQSGAEVKKPGASVK VSCKASGYTFTSHYMGWVR QAPGQGLEWMGIINPSMGA	VK3- 15	RAS QSVS SNLA	GAST RAT (SEQ	QQYIV FPWT (SEQ	EIVMTQSPATLSVS PGERATLSCRASQ SVSSNLAWYQQK

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76/166

ID NO: 62)

KFRG (SEQ ID NO: 47)

YLDY (SEQ ID NO: 35)

TSYTQKFRGRVTMTRDTST STVYMELSSLRSEDTAVYYC ARLHVSGSYYPAYLDYWGQ GTMVTVSS (SEQ ID NO: 24)

(SEQ ID NO: 72)

ID NO: 69)

ID NO: 66)

PGQAPRHLIYGAS TRATGIPARFSGS GSGTEFTLTISSLQ SEDFAVYYCQQYI VFPWTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 28)

’Inclui CDR-H1 como definido pelos sistemas de numeração de Chothia e Kabat, incluindo os limites de ambos os sistemas de numeração. ²De acordo com o sistema de numeração de Kabat.

³De acordo com o sistema de numeração IMGT.

⁴De acordo com os sistemas de numeração de Kabat e Chothia.

⁵De acordo com os sistemas de numeração de Kabat e Chothia.

⁶De acordo com os sistemas de numeração de Kabat, Chothia e IMGT.

2.4. Antagonismo de TIGIT [0226]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas antagonizam o TIGIT após a ligação.

[0227]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na dimerização e/ou ativação de CD226 (também conhecido como DNAM-1), um receptor co-estimulador cuja dimerização e função são prejudicadas pela interação direta com TIGIT. Ver Grogan et al., J. Immunol., 2014, 192 (1 Supplement) 2013.15, incorporado por referência em sua totalidade.

[0228]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida aumenta a quantidade de CD226 e CD155 que interage em comparação com a quantidade que interage na ausência da ABP.

[0229]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na ativação de uma célula T efetora. Em alguns aspectos, a célula T efetora é uma célula T CD8+. Em alguns aspectos, a célula T efetora é uma célula T CD4+.

[0230]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na ativação de uma célula NK. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na ativação de uma célula NKT.

[0231 ]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta em uma redução da atividade inibitória de uma célula T reguladora

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 86/201

77/166 para uma célula T efetora.

[0232]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta no aumento de secreção de IL-2, IL-6, GM-CSF, TNF, LT-α e/ou IFNY por uma célula alvo.

[0233]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida aumenta a proliferação, sobrevivência e/ou função de uma célula T efetora. Em alguns aspectos a célula T efetora é uma célula T efetora CD4+. Em alguns aspectos, a célula T efetora é uma célula T efetora CD8+.

[0234]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida anula a supressão de uma célula T efetora por uma célula T reguladora. Em alguns aspectos, a célula T reguladora é uma célula T reguladora CD4+CD25+Foxp3+. Em alguns aspectos, a célula T reguladora é uma célula T reguladora CD8+CD25+.

[0235]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta em um aumento de uma resposta imune.

[0236]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na prevenção de um tumor. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta no atraso do início de um tumor. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta em uma redução do tamanho de um tumor. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na eliminação de um tumor. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta em uma redução no número de metastases.

[0237]Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na prevenção de uma doença viral. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta no atraso do início de uma doença viral. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui

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78/166 fornecida resulta em uma redução da carga viral em um sujeito. Em algumas modalidades, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta na eliminação de uma infecção viral.

2.5. Afinidade e Cinética de Proteínas de Ligação ao Antígeno para TIGIT; Potência [0238]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para TIGIT é medida pelos métodos divulgados na seção de Exemplos da Publicação Internacional l\P WO/2017/059095 e Patente U.S. NP 9.713.641, ambos os quais são aqui incorporados por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para TIGIT, como indicado por Kd, é menor que cerca de 10-⁵ M, menor que cerca de 10’⁶ M, menor que cerca de 10’⁷ M, menor que cerca de 10’⁸ M, menor que cerca de 10’⁹ M, menor que cerca de 10’¹⁰ M, menor que cerca de 10’¹¹ M ou menor que cerca de 10’¹² M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁷Me 10’¹² M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁷ M e 10’¹¹ M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁷Me 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁷ M e 10’⁹ M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁷ M e 10’⁸ M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁸ M e 10’¹² M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁸ M e 10’¹¹ M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’⁹M e 10’¹¹ M. Em algumas modalidades, a afinidade da ABP é entre cerca de 10’¹⁰ M e 10-¹¹ M.

[0239]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para hTIGIT, como indicado por Kd medida por ForteBio, é selecionada de cerca de 5,24 x 10’¹⁰ M, cerca de 4,57 x 10’¹⁰ M, cerca de 3,32 x 10’¹⁰M, cerca de 2,46 x 10’¹⁰ M, cerca de 1,96 x 10’¹⁰ M, cerca de 3,11 x 10’⁹ M, cerca de 2,54 x 10’⁹ M, cerca de 3,13 x 10’ ⁹ M, cerca de 2,83 x 10’⁹ M, cerca de 1,71 x 10’⁹ M, cerca de 2,47 x 10’⁹ M, cerca de

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2,35 x 10-⁹ M, cerca de 1,44 χ 10^-9 Μ, cerca de 1,23 χ 10^-9 Μ, cerca de 5,26 x 10^-10 Μ, cerca de 3,78 x 10^-10 M, cerca de 4,29 x 10^-10 M ou cerca de 4,48 x 10^-10 M. Em algumas modalidades, essa afinidade varia de cerca de 3,13 x 10^-9 M a cerca de 1,96 x 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 3,13 x 10^-9 M ou menos.

[0240]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para cTIGIT, como indicado por Kd medida por ForteBio, é selecionada de cerca de 2,64 x 10’⁹ M, cerca de 6,55 x 10^-9 M, cerca de 8,14 x 10^-9 M, cerca de 6,57 x 10^-9 M, cerca de 7,94 x 10^-8 M, cerca de 7,04 x 10^-8 M, cerca de 1,10 x 10’⁷ M, cerca de 7,20 x 10^-8M, cerca de 1,57 x 10^-9 M, cerca de 8,02 x 10’¹⁰ M, cerca de 3,67 x 10’¹⁰ M, cerca de 8,98 x 10’¹⁰ M, cerca de 1,75 x 10^-8 M ou cerca de 2,58 x 10^-8 M, cerca de 9,35 x 10^-9M. Em algumas modalidades, essa afinidade varia de cerca de 1,10 x 10^-7 M a cerca de 3,69 x 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 1,10 x 10^-7 M ou menos.

[0241 ]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para hTIGIT, como indicado por Kd medida por métodos de equilíbrio de solução (MSDSET), é selecionada de cerca de 5,40 x 10^-11 M, cerca de 1,10 x 10’¹⁰ M, cerca de 1,50 x 10’¹⁰ M, cerca de 5,60 x 10’¹¹ M, cerca de 4,00 x 10’¹⁰ M, cerca de 3,80 x 10’¹⁰ M, cerca de 2,10 x 10’¹⁰ M, cerca de 7,00 x 10^-11 M, cerca de 4,10 x 10^-11 M, cerca de 2,50 x 10-¹¹ M, cerca de 3,00 x 10’¹¹ M, cerca de 8,00 x 10’¹¹ M, cerca de 8,10 x 10’¹²M, cerca de 5,00 x 10^-12 M ou cerca de 4,90 x 10^-12 M. Em algumas modalidades, essa afinidade varia de cerca de 4,00 x 10’¹⁰ M a cerca de 4,90 x 10^-12 M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 4,00 x 10’¹⁰ M ou menos.

[0242]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para cTIGIT como indicado por Kd medida por MSD-SET, é selecionada de cerca de 3,20 x 10’¹⁰ M, cerca de 2,30 x 10’¹⁰ M, cerca de 3,50 x 10’¹¹ M, cerca de 1,50 x 10’¹¹ M ou cerca de 4,60 x 10^-11 M. Em algumas modalidades, essa afinidade varia de cerca de 3,20 x 10^-10 M a cerca de 1,50 x 10^-11 M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca

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80/166 de 3,20 x 10’¹⁰ M ou menos.

[0243]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para hTIGIT, como indicado por Kd medida por ForteBio, é selecionada de cerca de 7,1 x 10’¹⁰ M, cerca de 8,1 x 10’¹¹ M, cerca de 1,9 x 10’¹⁰ M, cerca de 5,6 x 10’¹⁰ M, cerca de 2,4 x 10’¹⁰ M, cerca de 2,8 x 10’¹⁰ M, cerca de 1,6 x 10’¹⁰ M, cerca de 5,8 x 10’¹⁰ M, cerca de 1,1 x 10’⁹ M, cerca de 8,1 x 10’¹⁰ M, cerca de 4,6 x 10’¹⁰ M ou cerca de 3,6 x 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, essa afinidade varia de cerca de 1,1 x 10’⁹ M a cerca de 8,1 x 10’¹¹ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 1,1 x 10’⁹ M ou menos.

[0244]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para hTIGIT como indicado por Kd medida por ForteBio, é de cerca de 2,4 x 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para cTIGIT, como indicado por Kd medida por ForteBio, é de cerca de 6,2 x 10’⁹ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 6,2 x 10’⁹ M ou menos.

[0245]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para hTIGIT expressado na superfície de uma célula Jurkat, como indicado por Kd, é de cerca de 5,1 x 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 5,1 x 10’¹⁰ M ou menos.

[0246]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para cTIGIT expressado na superfície de uma célula Jurkat, como indicado por Kd, é de cerca de 4,0 x 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 4,0 x 10’¹⁰ M ou menos.

[0247]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para mTIGIT (SEQ ID NO: 3) expressado na superfície de uma célula Jurkat, como indicado por Kd, é de cerca de 9,8 x 10’⁹ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 9,8 x 10’⁹ M ou menos. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 9,8 x 10’⁹ M ou maior.

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81/166 [0248]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para hTIGIT expressado na superfície de uma célula T CD8+ humana, como indicado por Kd, é de cerca de 1,3 χ 10’⁹ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 1,3 x 10-⁹ M ou menos.

[0249]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para cTIGIT expressado na superfície de uma célula T CD8+ de macacos cynomolgus, como indicado por Kd, é de cerca de 2,8 χ 10’⁹ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 2,8 χ 10’⁹ M ou menos.

[0250]Em algumas modalidades, a afinidade de uma ABP aqui fornecida para mTIGIT expressado na superfície de uma célula reguladora T murina (isto é, mTIGIT como ocorre naturalmente em tais células, independente de esse mTIGIT ter ou não as SEQ ID NOs: 3 ou 138, mas incluir essas SEQ ID NOs), como indicado por Kd, é de cerca de 2,5 χ 10’⁸ M. Em algumas modalidades, essa Kd é de cerca de 2,5 χ 10’⁸M ou menos.

[0251 ]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao hTIGIT (SEQ ID NO: 1) com uma Kd de X e ao cTIGIT (SEQ ID NO: 2) ou mTIGIT (SEQ ID NO: 3 ou 138) com uma Kd de <10X. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao hTIGIT (SEQ ID NO: 1) com uma Kd deXe ao cTIGIT (SEQ ID NO: 2) ou mTIGIT (SEQ ID NO: 3 ou 138) com uma Kd de <5X. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas se ligam especificamente ao hTIGIT (SEQ ID NO: 1) com uma Kd de Xe ao cTIGIT (SEQ ID NO: 2) ou mTIGIT (SEQ ID NO: 3 ou 138) com uma Kd de <2X. Em alguns aspectos, Xé qualquer Kd descrito nesta divulgação. Em alguns aspectos, Xé 0,01 nM, 0,1 nM, 1 nM, 10 nM, 20 nM, 50 nM ou 100 nM.

[0252]Em algumas modalidades, a razão de Kd^tigit) : Kd(ctigit) para uma ABP aqui fornecida, como medida por ForteBio, é selecionada de cerca de 1,98 χ 10^-1, cerca de 2,61 χ 10^-1, cerca de 3,03 x 10^-1, cerca de 3,58 χ 10^-1, cerca de 6,62 x 10^-3,

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82/166 cerca de 1,98 x 10’¹, cerca de 5,37 x 10^-3, cerca de 3,90 x 10^-3, cerca de 6,22 x 10^-3, cerca de 2,91 x 10^-1, cerca de 4,14 x 10’¹, cerca de 6,67 x 10^-1, cerca de 2,18 x 10^-1, cerca de 1,78 x 10^-1, cerca de 1,21 x 10’¹ ou cerca de 3,03 x 10’¹. Em algumas modalidades, essa razão varia de cerca de 3,90 x 10’³ a cerca de 6,67 x 10’¹.

[0253]Em algumas modalidades, a razão de Kd^tigit) : Kd(ctigit) para uma ABP aqui fornecida, como medida por ForteBio, é de cerca de 3,87 x 10’².

[0254]Em algumas modalidades, a razão de Kd^tigit) : Kd(ctigit) para uma ABP aqui fornecida, como medido por MSD-SET, é selecionada de cerca de 3,33 x 10^-1, cerca de 2,31 x 10^-1, cerca de 1,09 x 10^-1, cerca de 1,07 x 10’¹ ou cerca de 1,69 x 10’ ¹. Em algumas modalidades, essa razão varia de cerca de 1,07 x 10’¹ M a cerca de 3,33 x 10-¹ M.

[0255]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma K_a de pelo menos cerca de 10⁴ M’¹/sec·¹. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Ka de pelo menos cerca de 10⁵ M’¹/sec·¹. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Kade pelo menos cerca de 10⁶ M’¹/sec·¹. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Ka entre cerca de 10⁴ M’¹/sec·¹ e cerca de 10⁵ M’¹/sec·¹. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Ka entre cerca de 10⁵ M’¹/sec·¹ e cerca de 10⁶ M’¹/sec·¹. Em algumas modalidades, essa K_a é pelo menos cerca de 10⁵ M’¹/sec·¹.

[0256]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma K_a para hTIGIT, como medida por ForteBio, selecionada de cerca de 3,2 x 10⁵ M’¹ x see¹, cerca de 7,0 x 10⁵ M’¹ x see¹, cerca de 7,7 x 10⁵ M’¹ x see¹, cerca de 1,6 x 10⁶ M’¹ x see¹, cerca de 2,0 x 10⁶ M’¹ x see¹, cerca de 1,3 x 10⁶ M’¹ x see¹, cerca de 1,5 x 10⁶M’¹ x see¹, cerca de 1,1 x 10⁶ M’¹ x see¹, cerca de 4,5 x 10⁵ M’¹ x see¹, cerca de 7,5 x 10⁵ M’¹ x see¹, cerca de 8,9 x 10⁵ M’¹ x see¹ ou cerca de 1,4 x 10⁶ M’¹ x sec¹. Em algumas modalidades, essa Ka varia de cerca de 3,2 x 10⁵ M’¹ x sec¹ a cerca de 2,0 x 10⁶ M’¹ x see¹. Em algumas modalidades, essa Ka é de cerca de 2,0 x 10⁶ M ou menos.

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83/166 [0257]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma K_a para hTIGIT, como medida por ForteBio como, de cerca de 2,0 x 10⁶ M’¹ x sec¹. Em algumas modalidades, essa K_a é pelo menos cerca de 2,0 x 10⁶ M’¹ x see¹.

[0258]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma K_a para cTIGIT, como medida por ForteBio, de cerca de 7,9 x 10⁵ M’¹ x see¹. Em algumas modalidades, essa K_a é pelo menos cerca de 7,9 x 10⁵ M’¹ x see¹.

[0259]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Kd de cerca de 10’⁵ see¹ ou menos. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Kd de cerca de 10’⁴ see¹ ou menos. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Kd de cerca de 10’ ³ see¹ ou menos. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Kd entre cerca de 10’²see¹ e cerca de 10’⁵ see¹. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Kd entre cerca de 10’² see¹ e cerca de 10’⁴ sec¹. Em algumas modalidades, a ABP tem uma Kd entre cerca de 10’³ see^-1 e cerca de 10’⁵ see^-1.

[0260]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Kd para hTIGIT, como medida por ForteBio, selecionada de cerca de 2,3 x 10’⁴ see¹, cerca de 6,3 x 10’⁵ see¹, cerca de 1,4 x 10’⁴ see¹, cerca de 8,5 x 10’⁴ see¹, cerca de 3,8 x 10’⁴see¹, cerca de 3,5 x 10’⁴ see¹, cerca de 2,4 x 10’⁴ see¹, cerca de 6,6 x 10’⁴ see¹, cerca de 5,9 x 10’⁴ see¹ ou cerca de 5,0 x 10’⁴ sec¹. Em algumas modalidades, essa Kd varia de cerca de 6,3 x 10’⁵ sec¹ a cerca de 8,5 x 10’⁴ sec¹. Em algumas modalidades, essa Kd é menor que cerca de 8,5 x 10’⁴ see¹.

[0261 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Kd para hTIGIT, como medida por ForteBio, de cerca de 3,8 x 10’⁴ sec¹. Em algumas modalidades, essa Kd é menor que cerca de 3,8 x 10’⁴ see¹.

[0262]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Kd para cTIGIT, como medida por ForteBio, de cerca de 4,6 x 10’³ sec¹. Em algumas modalidades, essa Kd é menor que cerca de 4,6 x 10’³ see¹.

[0263]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma K_a para

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84/166 hTIGIT de cerca de 3,2 x 10⁵ Μ’¹ x sec¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 2,3 χ 10’⁴sec¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 7,1 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 7,0 x 10⁵ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 6,3 χ 10’⁵ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 8,1 x 10’ ¹¹ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 7,7 x 10⁵ M’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 1,4 x 10’⁴sec’¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 1,9 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 1,6 χ 10⁶ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 8,5 χ 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 5,6 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 2,0 x 10⁶ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 3,8 χ 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 2,4 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 1,3 χ 10⁶ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 3,5 χ 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 2,8 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 1,5 x 10⁶ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 2,4 χ 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 1,6 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 1,1 x 10⁶ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 6,6 x 10’⁴sec’¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 5,8 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 4,5 x 10⁵ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 3,5 χ 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 1,1 χ 10’⁹ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 7,5 χ 10⁵ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 5,9 χ 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 8,1 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma Ka para hTIGIT de cerca de 8,9 χ 10⁵ Μ’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 3,8 χ 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 4,6 χ 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, uma ABP aqui

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85/166 fornecida tem uma K_a para hTIGIT de cerca de 1,4 x 10⁶ M’¹ x see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 5,0 x 10’⁴ see¹ e uma Kd para hTIGIT de cerca de 3,6 x 10’¹⁰ M. Em algumas modalidades, esses k_a, kd e ko são determinados de acordo com os métodos descritos, por exemplo, no Exemplo 6 da Patente U.S. I\P 9.713.641.

[0264]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma K_a para hTIGIT de cerca de 2,0 x 10⁶ M’¹ x see¹ uma Kd para hTIGIT de cerca de 3,8 x 10’⁴see¹, uma Kd para hTIGIT de cerca de 2,4 x 10’¹⁰ M, uma Ka para cTIGIT de cerca de 7,9 x 10⁵ M’¹ x see¹, uma Kd para cTIGIT de cerca de 4,6 x 10’³ see¹, uma Kd para cTIGIT de cerca de 6,2 x 10’⁹ M e uma Kd para mTIGIT (SEQ ID NO: 3) maior que cerca de 7,0 x 10’⁷ M. Em algumas modalidades, esses ka, kd e Kd são determinados de acordo com os métodos descritos, por exemplo, no Exemplo 6 da Patente U.S. N²9.713.641.

[0265]Em algumas modalidades, Kd, k_a e kd são determinados utilizando ressonância plasmônica de superfície (SPR). Em alguns aspectos, a análise por SPR utiliza um instrumento BIACORE®. Em alguns aspectos, o antígeno é imobilizado em um chip biosensor de dextrano carboximetilatado (CM4 ou CM5) e contatado com uma ABP aqui fornecida. As constantes de taxa de associação e dissociação podem ser calculadas utilizando o software B devaluation® e um modelo de ligação de Langmuir um-para-um. Em alguns aspectos, o ensaio é realizado a 25 °C. Em alguns aspectos, o ensaio é realizado a 37 °C.

[0266]Em algumas modalidades, Kd, k_a e kd são determinados utilizando interferometria de biolayer (BLI). Qualquer método adequado de BLI pode ser utilizado. Em alguns aspectos, a análise por BLI utiliza um instrumento LORTEBIO®. Em alguns aspectos, um biosensor de captura de Fc da IgG anti-humana (AHC) é utilizado para capturar ABPs na superfície de um sensor. Subsequentemente, a associação da ABP e antígeno é monitorada contatando-se a ABP imobilizada com diferentes concentrações de TIGIT. A dissociação do antígeno e ABP é então medida

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86/166 em um tampão sem TIGIT. As constantes de taxa de associação e dissociação são calculadas utilizando os módulos cinéticos do Software de Análise LORTEBIO®. Em alguns aspectos, o ensaio é realizado a 30 °C.

[0267]Em outras modalidades, a Kd pode ser determinada por um ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado, como descrito em Chen et al. J. Mol. Biol., 1999, 293: 865 - 881, incorporado por referência em sua totalidade.

[0268]Em outras modalidades, Kd pode ser determinada utilizando-se MSDSET, como descrito, por exemplo, no Exemplo 4 da Patente U.S. N^e 9.713.641.

[0269]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma n ECso, como medida pela produção de IL-2 em um ensaio de co-cultura TIGIT Jurkat humana como descrito, por exemplo, no Exemplo 7 da Patente U.S. I\P 9.713.641, de cerca de 0,22 nM, cerca de 0,31 nM, cerca de 0,33 nM, cerca de 0,34 nM, cerca de 0,25 nM, cerca de 0,24 nM, cerca de 0,11 nM, cerca de 0,06 nM, cerca de 0,14 nM, cerca de 0,16 nM, cerca de 1,40 nM, cerca de 0,71 nM, cerca de 0,21 nM, cerca de 1,11 nM, cerca de 0,13 nM, cerca de 0,20 nM, cerca de 0,68 nM ou cerca de 0,61 nM. Em algumas modalidades, essa ECso varia de cerca de 0,06 nM a cerca de 1,40 nM. Em algumas modalidades, essa ECso é de cerca de 1,40 nM ou menos.

[0270]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma ECso, como medida pela produção de IL-2 em um ensaio de co-cultura de TIGIT Jurkat de macacos cynomolgus de cerca de 2,87 nM. Em algumas modalidades, essa ECso é de cerca de 2,87 nM ou menos. Em algumas modalidades, a razão de ECso(ctigit) : ECso(hTiGiT) nesse ensaio varia de cerca de 2,05 a cerca de 47,8.

[0271 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10, como medida pela produção de TNF nas PBMCs isoladas de um doador humano e tratadas como descrito, por exemplo, no Exemplo 9 da Patente U.S. I\P 9.713.641, em uma faixa de cerca de 5,02 nM a cerca de 18,86 nM. Em algumas modalidades, essa EC10 é de cerca de 18,86 nM ou menos.

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87/166 [0272]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma ECso, como medida pela produção de TNF nas PBMCs isoladas de um doador humano, em uma faixa de cerca de 12,60 nM a cerca de 20,60 nM. Em algumas modalidades, essa ECso é de cerca de 20,60 nM ou menos.

[0273]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC90, como medida pela produção de TNF nas PBMCs isoladas de um doador humano, em uma faixa de cerca de 22,49 nM a cerca de 31,59 nM. Em algumas modalidades, essa EC90 é de cerca de 31,59 nM ou menos.

[0274]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 em uma faixa de cerca de 5,02 nM a cerca de 18,86 nM, uma ECso em uma faixa de cerca de 12,60 nM a cerca de 20,60 nM e EC90 em uma faixa de cerca de 22,49 nM a cerca de 31,59 nM, em cada caso como medida pela produção de TNF nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0275]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 de cerca de 11,94 nM ou menos, uma ECso de cerca de 16,60 nM ou menos e EC90 de cerca de 27,04 nM ou menos, em cada caso como medida pela produção de TNF nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0276]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 de cerca de 18,86 nM ou menos, uma ECso de cerca de 20,06 nM ou menos e EC90 de cerca de 31,59 nM ou menos, em cada caso como medida pela produção de TNF nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0277]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 de cerca de 5,02 nM ou menos, uma ECso de cerca de 12,60 nM ou menos e EC90 de cerca de 22,49 nM ou menos, em cada caso como medida pela produção de TNF nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0278]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10, como medida pela produção de IFN-γ em células T CD4+ isoladas de um doador

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88/166 humano, em uma faixa de cerca de 0,37 nM a cerca de 1,05 nM. Em algumas modalidades, essa EC10 é de cerca de 1,05 nM ou menos.

[0279]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma ECso, como medida pela produção de IFN-γ em células T CD4+ isoladas de um doador humano, em uma faixa de cerca de 0,94 nM a cerca de 1,12 nM. Em algumas modalidades, essa ECso é de cerca de 1,12 nM ou menos.

[0280]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC90, como medida pela produção de IFN-γ em células T CD4+ isoladas de um doador humano e tratadas como descrito no Exemplo 9, em uma faixa de cerca de 1,4 nM a cerca de 2,72 nM. Em algumas modalidades, essa EC90 é de cerca de 2,72 nM ou menos.

[0281 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 em uma faixa de cerca de 0,37 nM a cerca de 1,05 nM, uma ECso em uma faixa de cerca de 0,94 nM a cerca de 1,12 nM, e EC90 em uma faixa de cerca de 1,4 nM a cerca de 2,72 nM, em cada caso como medida pela produção de IFN-γ nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0282]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 de cerca de 0,37 nM ou menos, uma ECso de cerca de 1,00 nM ou menos e EC90 de cerca de 2,72 nM ou menos, em cada caso como medida pela produção de IFN-γ nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0283]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 de cerca de 0,85 nM ou menos, uma ECso de cerca de 0,94 nM ou menos e EC90 de cerca de 1,04 nM ou menos, em cada caso como medida pela produção de IFN-γ nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0284]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 de cerca de 1,05 nM ou menos, uma ECso de cerca de 1,12 nM ou menos e EC90 de cerca de 1,19 nM ou menos, em cada caso como medida pela produção de IFN-γ nas

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PBMCs isoladas de um doador humano.

[0285]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma EC10 de cerca de 0,75 nM ou menos, uma ECso de cerca de 1,02 nM ou menos e EC90 de cerca de 1,65 nM ou menos, em cada caso como medida pela produção de IFN-γ nas PBMCs isoladas de um doador humano.

[0286]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 5,24 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 2,64 x 10’⁹ M (como determinada por ForteBio), hTIGIT com uma Kd de cerca de 5,40 x 10’¹¹ M (como determinada por MSD-SET) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 3,20 x 10’¹⁰ M (como determinada por MSD-SET).

[0287]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 4,57 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 1,57 x 10’⁹ M (como determinada por ForteBio), hTIGIT com uma Kd de cerca de 2,50 x 10’¹¹ M (como determinada por MSD-SET) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 2,30 x 10’¹⁰ M (como determinada por MSD-SET).

[0288]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 3,32 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 8,02 x 10’¹⁰ M (como determinada por ForteBio), hTIGIT com uma Kd de cerca de 8,10 x 10’¹² M (como determinada por MSD-SET) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 3,50 x 10’¹ M (como determinada por MSD-SET).

[0289]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 2,46 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 3,69 x 10’¹⁰ M (como determinada por ForteBio), hTIGIT com uma Kd de cerca de 5,00 x 10’¹² M (como determinada por MSD-SET) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 1,50 x 10’¹¹ M (como determinada por MSD-SET).

[0290]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 1,96 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com

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90/166 uma Kd de cerca de 8,98 x 10’¹⁰ M (como determinada por ForteBio), hTIGIT com uma Kd de cerca de 4,90 χ 10’¹² M (como determinada por MSD-SET) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 4,60 χ 10’¹¹ M (como determinada por MSD-SET).

[0291 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 3,11 x 10’⁹M (como determinada por ForteBio) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 1,75 χ 10’⁸ M (como determinada por ForteBio).

[0292]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 2,54 χ 10’⁹ M, como determinada por ForteBio.

[0293]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 3,13 x 10’⁹M (como determinada por ForteBio) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 2,58 χ 10’⁸ M (como determinada por ForteBio).

[0294]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 2,83 x 10’⁹ M (como determinada por ForteBio) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 9,35 χ 10’⁹ M (como determinada por ForteBio).

[0295]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 1,71 x 10’⁹M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 6,55 χ 10’⁹ M (como determinada por ForteBio), e hTIGIT com uma Kd de cerca de 1,10 χ 10’¹⁰ M (como determinada por MSD-SET).

[0296]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 2,47 χ 10’⁹ M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 8,14 χ 10’⁹ M (como determinada por ForteBio) e hTIGIT com uma Kd de cerca de 1,50 χ 10’¹⁰ M (como determinada por MSD-SET).

[0297]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 2,35 χ 10’⁹ M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 6,57 χ 10’⁹ M (como determinada por ForteBio) e hTIGIT com uma Kd de cerca de 5,60 χ 10’¹¹ M (como determinada por MSD-SET).

[0298]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT

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91/166 com uma Kd de cerca de 1,44 x 10’⁹ M (como determinada por ForteBio) e hTIGIT com uma Kd de cerca de 4,00 x 10’¹⁰ M (como determinada por MSD- SET).

[0299]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 1,23 x 10’⁹ M (como determinada por ForteBio) e hTIGIT com uma Kd de cerca de 3,80 χ 10’¹⁰ M (como determinada por MSD- SET).

[0300]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 5,26 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 7,94 χ 10’⁸ M (como determinada por ForteBio) e hTIGIT com uma Kd de cerca de 2,10 χ 10’¹⁰ M (como determinada por MSD-SET).

[0301 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 3,78 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 7,04 χ 10’⁸ M (como determinada por ForteBio) e hTIGIT com uma Kd de cerca de 7,00 χ 10’¹¹ M (como determinada por MSD-SET).

[0302]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 4,29 x 10’¹⁰M (como determinada por ForteBio), cTIGIT com uma Kd de cerca de 1,10 χ 10’⁷ M (como determinada por ForteBio) e hTIGIT com uma Kd de cerca de 4,10 χ 10’¹¹ M (como determinada por MSD-SET).

[0303]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 4,48 χ 10’¹⁰ M (como determinada por ForteBio) e cTIGIT com uma Kd de cerca de 7,20 χ 10’⁸ M (como determinada por ForteBio).

[0304]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 3,00 χ 10’¹¹ M.

[0305]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida se liga ao hTIGIT com uma Kd de cerca de 8,00 χ 10’¹¹ M.

[0306]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,2 nM, cerca de 2,3 nM, cerca de 1,6 nM, cerca de 1,9 nM, cerca de 1,7 nM, cerca de 3,2 nM, cerca de 2,6 nM, cerca de 2,9 nM,

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92/166 cerca de 3,3 nM, cerca de 2 nM, cerca de 2,2 nM, cerca de 2,1 nM, cerca de 1,8 nM, cerca de 6,4 nM ou cerca de 1 nM. Em algumas modalidades, essa ICso varia de cerca de 1 nM a cerca de 6,4 nM. Em algumas modalidades, essa ICso é de cerca de 6,4 nM ou menos. Em algumas modalidades, essa ICso é determinada como descrito no Exemplo 5 da Patente U.S. I\P 9.713.641.

[0307]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,4 nM, cerca de 1,3 nM, cerca de 1,2 nM, cerca de 1,6 nM, cerca de 2 nM, cerca de 1,2 nM, cerca de 1,1 nM, cerca de 1 nM, cerca de 1,8 nM, cerca de 1,9 nM, cerca de 2 nM ou cerca de 0,8 nM. Em algumas modalidades, essa ICso varia de cerca de 0,8 nM a cerca de 2 nM. Em algumas modalidades, essa ICso é de cerca de 2 nM ou menos.

[0308]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,2 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,4 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,3 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,3 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,6 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,2 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,9 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,6 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,7 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,4 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 3,2 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,4 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,6 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2

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93/166 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,9 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,2 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,9 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,1 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 3,3 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,2 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,7 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,2 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,1 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,8 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,6 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,6 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,2 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,1 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,1 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,3 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 2,6 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,9 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,8 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma ICso de cerca de 1,9 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma ICso de cerca de 6,4 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com

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94/166 uma ICso de cerca de 2 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma IC50 de cerca de 2,3 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma IC50 de cerca de 1,9 nM. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida inibe a ligação de PVR ao TIGIT com uma IC50 de cerca de 1 nM e inibe a ligação de PVRL2 ao TIGIT com uma IC50 de cerca de 0,8 nM. Em algumas modalidades, essa IC50 é de cerca de 2 nM ou menos.

2.5.1. Variantes de Glicosilação [0309]Em certas modalidades, uma ABP aqui fornecida pode ser alterada para aumentar, diminuir ou eliminar a extensão em que é glicosilada. A glicosilação de polipeptídios é tipicamente “ligada a N” ou “ligada a O”.

[0310]A glicosilação “ligada a N” refere-se à fixação de uma porção de carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências tripeptídicas asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as sequências de reconhecimento para a fixação enzimática da porção de carboidrato à cadeia lateral asparagina. Deste modo, a presença de qualquer uma dessas sequências tripeptídicas em um polipeptídio cria um potencial sítio de glicosilação.

[0311]A glicosilação “ligada a O” refere-se à fixação de um dos açúcares Nacetilgalactosamina, galactose ou xilose a um ácido hidroxiamino, o mais comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina também possam ser utilizadas.

[0312]A adição ou deleção de sítios de glicosilação ligados a N a ou de uma ABP aqui fornecida pode ser realizada alterando-se a sequência de aminoácidos de tal modo que uma ou mais das sequências tripeptídicas acima descritas seja criada ou removida. A adição ou deleção de sítios de glicosilação ligados a O pode ser realizada pela adição, deleção ou substituição de um ou mais resíduos de serina ou treonina em ou para (conforme o caso) a sequência de uma ABP.

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95/166 [0313]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende um motivo de glicosilação que é diferente de uma ABP de ocorrência natural. Qualquer motivo de glicosilação de ocorrência natural adequado pode ser modificado nas ABPs aqui fornecidas. As propriedades estruturais e de glicosilação de imunoglobulinas, por exemplo, são conhecidas na técnica e resumidas, por exemplo, em Schroeder e Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125: S41 - 52, incorporado por referência em sua totalidade.

[0314]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma região Fc de lgG1 com modificação no oligossacarídeo ligado à asparagina 297 (Asn 297). Os anticorpos lgG1 de ocorrência natural produzidos por células de mamíferos tipicamente compreendem um oligossacarídeo biantenário ramificado que é geralmente ligado por uma ligação de N à Asn 297 do domínio Ch2 da região Fc. Ver Wright et al., TIBTECH, 1997, 15: 26 - 32, incorporado por referência em sua totalidade. O oligossacarídeo ligado à Asn 297 pode incluir vários carboidratos tais como manose, N-acetil glicosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, bem como uma fucose ligada à uma GlcNAc na “haste” da estrutura do oligossacarídeo biantenário.

[0315]Em algumas modalidades, o oligossacarídeo ligado à Asn 297 é modificado para criar ABPs tendo a ADCC alterada. Em algumas modalidades, o oligossacarídeo é alterado para melhorar a ADCC. Em algumas modalidades, o oligossacarídeo é alterado para reduzir a ADCC.

[0316]Em alguns aspectos, uma ABP aqui fornecida compreende um domínio IgG 1 com teor de fucose reduzido na posição da Asn 297 em comparação com um domínio lgG1 de ocorrência natural. Tais domínios Fc são conhecidos por melhorarem a ADCC. Ver Shields etal., J. Biol. Chem., 2002, 277: 26733 - 26740, incorporado por referência em sua totalidade. Em alguns aspectos, tal ABPs não compreendem qualquer fucose na posição da Asn 297. A quantidade de fucose pode ser determinada

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96/166 utilizando qualquer método adequado, por exemplo, como descrito em WO 2008/077546, incorporado por referência em sua totalidade.

[0317]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende um oligossacarídeo bissectado, tal como um oligossacarídeo biantenário ligado à região Fc da ABP que é bissectada por GlcNAc. Tais variantes de ABP podem terfucosilação reduzida e/ou função de ADCC melhorada. Exemplos de tais variantes de ABP são descritos, por exemplo, em WO 2003/011878; Pat. U.S. NP 6.602.684; e Pub. de Pat. U.S. I\P 2005/0123546; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[0318]Outras variantes de glicosilação ilustrativas que podem ser incorporadas nas ABPs aqui fornecidas são descritas, por exemplo, em Pub. de Pat. U.S. 2003/0157108, 2004/0093621, 2003/0157108, 2003/0115614,

2002/0164328, 2004/0093621, 2004/0132140, 2004/0110704, 2004/0110282, 2004/0109865; Pub. de Pat. Internacional 2000/61739, 2001/29246, 2003/085119, 2003/084570, 2005/035586, 2005/035778; 2005/053742, 2002/031140; Okazaki et al., J.Mol. Biol., 2004, 336: 1239- 1249; e Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614 - 622; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[0319]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma região Fc com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc. Tais variantes de ABP podem ter função de CDCm elhorada. Exemplos de tais variantes de ABP são descritos, por exemplo, em WO 1997/30087; WO 1998/58964; e WO 1999/22764; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[0320]Exemplos de linhagens de células capazes de produzir ABPs desfucosiladas incluem células CHO Led 3, que são deficientes em fucosilação de proteínas (ver Ripka etal., Arch. Biochem. Biophys., 1986, 249: 533- 545; Pub. de Pat. U.S. NP 2003/0157108; WO 2004/056312; cada um dos quais é incorporado por

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97/166 referência em sua totalidade), e linhagens de células knockout, tal como o gene alfa1,6-fucosiltransferase ou células CHO knockout FUT8 (ver Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614 - 622; Kanda etal., Biotechnol. Bioeng., 2006, 94: 680 - 688; e WO 2003/085107; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade).

[0321 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é uma ABP aglicosilada. Uma ABP aglicosilada pode ser produzida utilizando qualquer método conhecido na técnica ou aqui descrito. Em alguns aspectos, uma ABP aglicosilada é produzida modificando-se a ABP para remover todos os sítios de glicosilação. Em alguns aspectos, os sítios de glicosilação são removidos apenas da região Fc da ABP. Em alguns aspectos, uma ABP aglicosilada é produzida expressando-se a ABP em um organismo que não é capaz de glicosilação, tal como E. coli ou expressando-se a ABP em uma mistura de reação livre de células.

[0322]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida tem uma região constante com função efetora reduzida em comparação com um anticorpo lgG1 nativo. Em algumas modalidades, a afinidade de uma região constante de uma região Fc de uma ABP aqui fornecida para o receptor Fc é menor que a afinidade de uma região constante lgG1 nativa para esse receptor Fc.

2.6. Variantes da Sequência de Aminoácidos da Região Fc [0323]Em certas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma região Fc com uma ou mais substituições, inserções ou deleções de aminoácidos em comparação com uma região Fc de ocorrência natural. Em alguns aspectos, essas substituições, inserções ou deleções produzem ABPs com estabilidade, glicosilação ou outras características alteradas. Em alguns aspectos, essas substituições, inserções ou deleções produzem ABP aglicosiladas.

[0324]Em alguns aspectos, a região Fc de uma ABP aqui fornecida é modificada para produzir uma ABP com afinidade alterada para um receptor Fc ou

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98/166 uma ABP que é mais imunologicamente inerte. Em algumas modalidades, as variantes da ABP aqui fornecidas possuem algumas, mas não todas, as funções efetoras. Tais ABPs podem ser úteis, por exemplo, quando a meia-vida da ABP é importante in vivo, mas quando certas funções efetoras (por exemplo, ativação do complemento e ADCC) são desnecessárias ou deletérias.

[0325]Em algumas modalidades, a região Fc de uma ABP aqui fornecida é uma região Fc de lgG4 humana compreendendo uma ou mais das mutações estabilizadoras de dobradiça S228P e F235E. Ver Aalberse etal., Immunology, 2002, 105: 9 -19, incorporado por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, a região Fc de lgG4 compreende uma ou mais das seguintes mutações: E233P, F234V e F235A. Ver Armour et aí,Mol. Immunol., 2003,40: 585 -593, incorporado por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, a região Fc de lgG4 compreende uma deleção na posição G236.

[0326]Em algumas modalidades, a região Fc de uma ABP aqui fornecida é uma região Fede lgG1 humana compreendendo uma ou mais mutações para reduzir ligação ao receptor Fc. Em alguns aspectos, uma ou mais mutações são em resíduos selecionados de S228 (por exemplo, S228A), L234 (por exemplo, L234A), L235 (por exemplo, L235A), D265 (por exemplo, D265A) e N297 (por exemplo, N297A). Em alguns aspectos, a ABP compreende uma mutação PVA236. PVA236 significa que a sequência de aminoácidos ELLG, da posição de aminoácido 233 a 236 de lgG1 ou EFLG de lgG4, é substituída por PVA. Ver Pat. U.S. NP 9.150.641, incorporada por referência em sua totalidade.

[0327]Em algumas modalidades, a região Fc de uma ABP aqui fornecida é modificada como descrito em Armour et aí, Eur. J. Immunol., 1999, 29: 2613 - 2624; WO 1999/058572; e/ou App. Pat. U.K. 98099518; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[0328]Em algumas modalidades, a região Fc de uma ABP aqui fornecida é

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99/166 uma região Fc de lgG2 humana compreendendo uma ou mais das mutações A330S e P331S.

[0329]Em algumas modalidades, a região Fc de uma ABP aqui fornecida tem uma substituição de aminoácido em uma ou mais posições selecionadas de 238, 265, 269, 270, 297, 327 e 329. Ver Pat. U.S. I\P 6.737.056, incorporada por referência em sua totalidade. Tais mutantes de Fc incluem mutantes de Fc com substituições em duas ou mais das posições de aminoácido 265, 269, 270, 297 e 327, incluindo o assim chamado mutante de Fc “DANA” com substituição dos resíduos 265 e 297 com alanina. Ver Pat. U.S. N² 7.332.581, incorporado por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, a ABP compreende uma alanina na posição de aminoácido 265. Em algumas modalidades, a ABP compreende uma alanina na posição de aminoácido 297.

[0330]Em certas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma região Fc com uma ou mais substituições de aminoácido que melhoram a ADCC, tal como uma substituição em uma ou mais das posições 298, 333 e 334 da região Fc. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma região Fc com uma ou mais substituições de aminoácido nas posições 239, 332 e 330, como descrito em Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2006,103: 4005 - 4010, incorporado por referência em sua totalidade.

[0331 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma ou mais alterações que melhoram ou diminuem a ligação de C1q e/ou CDC. Ver Pat. U.S. N² 6.194.551; WO 99/51642; e Idusogie et al., J. Immunol., 2000, 164: 4178 4184; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[0332]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma ou mais alterações para aumentar a meia-vida. As ABPs com meia-vida aumentada e ligação melhorada ao receptor Fc neonatal (FcRn) são descritas, por exemplo, em Hinton et al., J. Immunol., 2006, 176: 346 - 356; e Pub. de Pat. U.S. N^2005/0014934;

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100/166 cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade. Tais variantes de Fc incluem aquelas com substituições em uma ou mais dos resíduos da região Fc: 238, 250, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 314, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428 e 434 de uma IgG.

[0333]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida compreende uma ou mais região variantes de Fc como descrito em Pat. U.S. 7.371.826, 5.648.260 e 5,624,821; Duncan e Winter, Nature, 1988, 322: 738 - 740; e WO 94/29351; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

2.7. Piroglutamato [0334]Como é conhecido na técnica, tanto o glutamato (E) quanto a glutamina (Q) no N-terminal de proteínas recombinantes podem ciclizar espontaneamente para formar piroglutamato (pE) in vitro e in vivo. Ver Liu et al., J. Biol. Chem., 2011, 286: 11211 -11217, incorporado por referência em sua totalidade.

[0335]Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo uma sequência polipeptídica tendo um resíduo de pE na posição N-terminal. Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo uma sequência polipeptídica em que o resíduo N-terminal foi convertido de Q para pE. Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo uma sequência polipeptídica em que o resíduo N-terminal foi convertido de E para pE.

[0336]Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo sequências Vh tendo um resíduo de pE na posição N-terminal. Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo uma sequência Vh em que o resíduo N-terminal foi convertido de Q para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP compreendendo uma sequência Vh selecionada das SEQ ID NOs: 4 a 24, em que o resíduo Q N-terminal foi convertido para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma composição compreendendo uma ABP, em que a ABP compreende um Vh selecionado das SEQ ID NOs: 4 a 24, em que pelo menos

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101/166 cerca de 20 %, pelo menos cerca de 40 %, pelo menos cerca de 60 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 % ou pelo menos cerca de 99 % dos resíduos N-terminais de tal Vh em tal composição foram convertidos de Q para pE.

[0337]Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo sequências Vl tendo um resíduo de pE na posição N-terminal. Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo uma sequência Vl em que o resíduo N-terminal foi convertido de E para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP compreendendo uma sequência Vl selecionada das SEQ ID NOs: 25 a 28, em que o resíduo E N-terminal foi convertido para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma composição compreendendo uma ABP, em que a ABP compreende um Vl selecionado das SEQ ID NOs: 25 a 28, em que pelo menos cerca de 20 %, pelo menos cerca de 40 %, pelo menos cerca de 60 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 % ou pelo menos cerca de 99 % dos resíduos N-terminais de tal Vl em tal composição foram convertidos de E para pE.

[0338]Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo sequências de cadeia pesada tendo um resíduo de pE na posição N-terminal. Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo uma sequência de cadeia pesada em que o resíduo N-terminal foi convertido de Q para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP compreendendo uma sequência de cadeia pesada selecionada das SEQ ID NOs: 79, 80, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123 ou 124, em que o resíduo Q Nterminal foi convertido para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma composição compreendendo uma ABP, em que a ABP compreende uma cadeia pesada selecionada das SEQ ID NOs: 79, 80, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,

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93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123 ou 124, em que pelo menos cerca de 20 %, pelo menos cerca de 40 %, pelo menos cerca de 60 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 % ou pelo menos cerca de 99 % dos resíduos N-terminais de tal cadeia pesada em tal composição foram convertidos de Q para pE.

[0339]Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo sequências de cadeia leve tendo um resíduo de pE na posição N-terminal. Em algumas modalidades, são aqui fornecidas ABPs compreendendo uma sequência de cadeia leve em que o resíduo N-terminal foi convertido de E para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma ABP compreendendo uma sequência de cadeia leve selecionada das SEQ ID NOs: 81,92, 107 ou 120, em que o resíduo E N-terminal foi convertido para pE. Em algumas modalidades, é aqui fornecida uma composição compreendendo uma ABP, em que a ABP compreende uma cadeia leve selecionada das SEQ ID NOs: 81,92, 107 ou 120, em que pelo menos cerca de 20 %, pelo menos cerca de 40 %, pelo menos cerca de 60 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 % ou pelo menos cerca de 99 % dos resíduos N-terminais de tal cadeia leve em tal composição foram convertidos de E para pE.

2.8. Variantes de Proteína de Ligação ao Antígeno Manipuladas com Cisteína [0340]Em certas modalidades, são aqui fornecidas ABPs manipuladas com cisteína, também conhecidas como “tioMAbs”, em que um ou mais resíduos da ABP são substituídos por resíduos de cisteína. Em modalidades particulares, os resíduos substituídos ocorrem em sítios acessíveis de solvente da ABP. Substituindo-se esses resíduos com cisteína, grupos tiol reativos são introduzidos nos sítios acessíveis de solvente da ABP e podem ser utilizados para conjugar a ABP a outras porções, tais como porções de fármaco ou porções conector- fármaco, por exemplo, para criar um imunoconjugado.

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103/166 [0341 ]Em certas modalidades, qualquer um ou mais dos seguintes resíduos podem ser substituídos por cisteína: V205 de cadeia leve; A118 de região Fc de cadeia pesada; e S400 de região Fc de cadeia pesada. As ABPs manipuladas com cisteína podem ser geradas como descrito, por exemplo, na Pat. U.S. hP 7.521.541, que é incorporado por referência em sua totalidade.

2.8.1. Imunoconjugados

2.8.1.1. Conjugados de Proteína-Polímero de Ligação ao Antígeno [0342]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é derivatizada pela conjugação com um polímero. Qualquer polímero adequado pode ser conjugado com a ABP.

[0343]Em algumas modalidades, o polímero é um polímero solúvel em água. Exemplos ilustrativos de polímeros solúveis em água incluem polietilenoglicol (PEG), copolímeros de etileno glicol/propileno glicol, carboximetilcelulose, dextrano, álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, poli-1,3-dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros ou copolímeros aleatórios), poli(n-vinil pirrolidona)-co-polietilenoglicol, homopolímeros de propropileno glicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polióis polioxietilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico e misturas destes. Em alguns aspectos, propionaldeído de polietilenoglicol pode ser útil para fins de fabricar devido à sua estabilidade na água.

[0344]Q polímero pode ser de qualquer peso molecular e pode ser ramificado ou não ramificado. O número de polímeros ligados a cada ABP pode variar e, se mais de um polímero estiver ligado, eles podem ser o mesmo polímero ou polímeros diferentes. Em geral, o número e/ou tipo de polímeros utilizados para derivatização pode ser determinado com base em considerações incluindo as propriedades ou funções particulares da ABP a ser melhorada e a utilização intencionada da ABP.

2.8.1.2. Conjugado de Proteína-Fármaco de Ligação ao Antígeno

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104/166 [0345]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são conjugadas com um ou mais agentes terapêuticos. Qualquer agente terapêutico adequado pode ser conjugado com a ABP. Agentes terapêuticos exemplares incluem citocinas, quimocinas e outros agentes que induzem uma atividade de célula T desejada, tal como QX40L, 4-1BBL, TNF-alfa (como aqui utilizado, “TNF”), fusão IL-2 e IL-15, CXCF9, CXCF10, IL-10 trap, IL-27 trap e IL-35 trap. Traps de citocina e seus usos são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Economides et al., Nature Medicine, 2003, 9: 47 - 52, incorporado por referência em sua totalidade.

3. Métodos de Fabricação Proteínas de Ligação ao Antígeno TIGIT

3.1. Preparação do Antígeno TIGIT [0346]Q antígeno TIGIT utilizado para o isolamento das ABPs aqui fornecidas pode ser TIGIT intacto ou um fragmento de TIGIT. O antígeno TIGIT pode ser, por exemplo, na forma de uma proteína isolada ou uma proteína expressada na superfície de um célula.

[0347]Em algumas modalidades, o antígeno TIGIT é uma variante de ocorrência não natural de TIGIT, tal como uma proteína TIGIT tendo uma sequência de aminoácidos ou modificação pós-traducional que não ocorre na natureza.

[0348]Em algumas modalidades, o antígeno TIGIT é truncado pela remoção de, por exemplo, sequências intracelulares ou membranas de abrangência ou sequências sinal. Em algumas modalidades, o antígeno TIGIT é fundido em seu Cterminal a um domínio Fc de lgG1 humana ou um marcador de poli-histidina.

3.2. Métodos de Fabricação de Anticorpos Monoclonais [0349]Qs anticorpos monoclonais podem ser obtidos, por exemplo, utilizando o método de hibridoma descrito pela primeira vez por Kohler etal., Nature, 1975, 256: 495 - 497 (incorporado por referência em sua totalidade) e/ou por métodos de DNA recombinante (ver, por exemplo, Patente U.S. N² 4.816.567, incorporado por referência em sua totalidade). Os anticorpos monoclonais também podem ser obtidos,

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105/166 por exemplo, utilizando biblioteca de exibição de fagos ou apresentação à base de leveduras. Ver, por exemplo, Patente U.S. 8.258.082 e 8.691.730, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

[0350]No método de hibridoma, um camundongo ou outro animal hospedeiro apropriado é imunizado para induzir os linfócitos que produzem ou são capazes de produzir anticorpos que se ligarão especificamente à proteína utilizada para imunização. Alternativamente, os linfócitos podem ser imunizados in vitro. Os linfócitos são então fundidos com células de mieloma utilizando um agente de fusão adequado, tal como polietilenoglicol, para formar uma célula de hibridoma. Ver Coding J.W., Monoclonal Antibodies: Principles e Practice 3^ ed. (1986) Academic Press, San Diego, CA, incorporado por referência em sua totalidade.

[0351 ]As células de hibridoma são semeadas e cultivadas em um meio de cultura adequado que contém uma ou mais substâncias que inibem o crescimento ou sobrevivência das células de mieloma parentais não fundidas. Por exemplo, se as células de mieloma parentais carecem da enzima hipoxantina guanina fosfombosil transferase (HGPRT ou HPRT), o meio de cultura para os hibridomas tipicamente irão incluir hipoxantina, aminopterina e timidina (meio HAT), substâncias essas que impedem o crescimento de células deficientes em HGPRT.

[0352]As células de mieloma úteis são aquelas que se fundem eficientemente, suportam a produção estável de altos níveis de anticorpo pelas células produtoras de anticorpo selecionadas e são sensíveis às condições do meio, tal como a presença ou ausência de meio HAT. Dentre essas, as linhagens de células de mieloma preferidas são linhagens de mieloma murino, tal como aquelas derivadas de tumores de camundongo MOP-21 e MC-11 (disponível da Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CA) e células SP-2 ou X63-Ag8-653 (disponível da American Type Culture Collection, Rockville, MD). Linhagens de células de mieloma humano e heteromieloma camundongo-humano também foram descritas para a produção de

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106/166 anticorpos monoclonais humanos. Ver, por exemplo, Kozbor, J. Immunol., 1984, 133: 3001, incorporado por referência em sua totalidade.

[0353]Depois da identificação de células de hibridoma que produzem anticorpos da especificidade, afinidade e/ou atividade biológica desejada, os clones selecionados pode ser subclonados por procedimentos de diluição limitante e cultivados por métodos padrão. Ver Goding, supra. Os meios de cultura adequados para este propósito incluem, por exemplo, meio D-MEM ou RPMI-1640. Além disso, as células de hibridoma podem ser cultivadas in vivo como tumores ascíticos em um animal.

[0354]O DNA que codifica os anticorpos monoclonais pode ser prontamente isolado e sequenciado utilizando procedimentos convencionais (por exemplo, utilizando-se sondas oligonucleotídicas que são capazes de se ligar especificamente aos genes que codificam as cadeias leves e pesadas dos anticorpos monoclonais). Deste modo, as células de hibridoma podem servir como uma fonte útil de DNA que codifica os anticorpos com as propriedades desejadas. Uma vez isolado, o DNA pode ser colocado em vetores de expressão, que são então transfectados em células hospedeiras tais como bactérias (por exemplo, E. coll), leveduras (por exemplo, Saccharomyces ou Pichia sp.), células COS, células de ovário de hamster Chinês (CHO) ou células de mieloma que de outro modo não produzem anticorpos, para produzir os anticorpos monoclonais.

3.3. Métodos de Fabricação Anticorpos Quiméricos [0355]Os métodos de fabricação anticorpos quiméricos ilustrativos são descritos, por exemplo, em Pat. U.S. NM.816.567; e Morrison etal., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1984, 81: 6851 - 6855; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico é feito utilizando-se técnicas recombinantes para combinar uma região variável não humana (por exemplo, uma região variável derivada de um camundongo, rato, hamster, coelho ou primata

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107/166 não humano, tal como um macaco) com uma região constante humana.

3.4. Métodos de Fabricação de Anticorpos Humanizados [0356]Os anticorpos humanizados podem ser gerados substituindo-se a maioria ou todas as porções estruturais de um anticorpo monoclonal não humano com sequências do anticorpo humano correspondente. Consequentemente, uma molécula híbrida é gerada na qual apenas a variável específica do antígeno ou CDR, é composta de sequência não humana. Os métodos para obter anticorpos humanizados incluem aqueles descritos em, por exemplo, Winter e Milstein, Nature, 1991,349: 293 -299; Rader et al., Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A., 1998, 95: 8910 -8915; Steinberger et al., J. Biol. Chem., 2000, 275: 36073 - 36078; Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 1989, 86: 10029 -10033; e Patente U.S. 5.585.089, 5.693.761, 5.693.762 e 6.180.370; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

3.5. Métodos de Fabricação de Anticorpos humanos [0357]Os anticorpos humanos podem ser gerados por uma variedade de técnicas conhecidas na arte, por exemplo, utilizando-se animais transgênicos (por exemplo, camundongos humanizados). Ver, por exemplo, Jakobovits etal., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 1993, 90: 2551; Jakobovits et al., Nature, 1993, 362: 255 - 258; Bruggermann et al., Year in Immuno., 1993, 7: 33; e Patente U.S. N²⁵ 5.591.669, 5.589.369 e 5.545.807; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade. Os anticorpos humanos também podem ser derivados de bibliotecas de exibição de fagos (ver, por exemplo, Hoogenboom etal., J. Mol. Biol., 1991,227: 381 - 388; Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222: 581 - 597; e Pat. U.S. 5.565.332 e 5.573.905; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade). Os anticorpos humanos também podem ser gerados por células B ativadas in vitro (ver, por exemplo, Patente. U.S. 5.567.610 e 5.229.275, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade). Os anticorpos humanos também podem ser derivados de bibliotecas de apresentação à base de leveduras (ver, por

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108/166 exemplo, Patente U.S. I\P 8.691.730, incorporado por referência em sua totalidade).

3.6. Métodos de Fabricação de Fragmentos de Anticorpo [0358]Os fragmentos de anticorpo aqui fornecidos podem ser feitos por qualquer método adequado, incluindo os métodos ilustrativos aqui descritos ou aqueles conhecidos na técnica. Os métodos adequados incluem técnicas recombinantes e digestão proteolítica de anticorpos inteiros. Os métodos ilustrativos de fabricação fragmentos de anticorpo são descritos, por exemplo, em Hudson et al., Nat. Med., 2003, 9: 129 - 134, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de fabricação de anticorpos scFv são descritos, por exemplo, em Pliickthun, em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds., Springer-Verlag, Nova Iorque, páginas 269 - 315 (1994); WO 93/16185; e Pat. U.S. N°s 5.571.894 e 5.587.458; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

3.7. Métodos de Fabricação de Estruturas Alternativas [0359]As estruturas alternativas aqui fornecidas podem ser feitas por qualquer método adequado, incluindo os métodos ilustrativos aqui descritos ou aqueles conhecidos na técnica. Por exemplo, os métodos de preparação de Adnectins™ são descritos em Emanuel et al., mAbs, 2011, 3: 38 - 48, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de iMabs são descritos em Pub. de Pat. U.S. N² 2003/0215914, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de Anticalins® são descritos em Vogt e Skerra, Chem. Biochem., 2004, 5: 191 - 199, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de domínio Kunitzs são descritos em Wagner etal., Biochem. & Biophys. Res. Comm., 1992, 186: 118- 1145, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de aptâmeros de peptídio de tiorredoxina são fornecidos em Geyer e Brent, Meth. Enzymol., 2000, 328: 171 - 208, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de Affibodies são fornecidos em Fernandez,

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Curr. Opinion em Biotech., 2004, 15: 364 - 373, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de DARPins são fornecidos em Zahnd etal., J. Mol. Biol., 2007, 369: 1015 - 1028, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de Affilins são fornecidos em Ebersbach et al., J. Mol. Biol., 2007, 372: 172 - 185, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação deTetranectinas são fornecidos em Graversen etal., J. Biol. Chem., 2000, 275: 37390 - 37396, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de Avímeros são fornecidos em Silverman et al., Nature Biotech., 2005, 23: 1556 - 1561, incorporado por referência em sua totalidade. Os métodos de preparação de Fynomers são fornecidos em Silacci et al., J. Biol. Chem., 2014, 289: 14392 -14398, incorporado por referência em sua totalidade.

[0360]Mais informações sobre estruturas alternativas são fornecidas em Binz et al., Nat. Biotechnol., 2005 23: 1257 - 1268; e Skerra, Current Opin. em Biotech., 2007 18: 295 - 304, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

3.8. Métodos de Fabricação de Variantes [0361 ]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é uma variante amadurecida por afinidade de uma ABP precursora, que pode ser gerada, por exemplo, utilizando técnicas de maturação por afinidade com base em exibição de fago. Brevemente, um ou mais resíduos de CDR podem ser mutados e as ABPs variantes ou porções destas, exibidas no fago e tríadas por afinidade. Essas alterações podem ser feitas em “hotspots” de CDR, ou resíduos codificados por códons que sofrem mutação em alta frequência durante o processo de maturação somática (ver Chowdhury, Methods Mol. Biol., 2008, 207: 179 - 196, incorporado por referência em sua totalidade), e/ou resíduos que contatam o antígeno. Alternativamente, a variante amadurecida por afinidades de uma ABP precursora pode ser gerada ou, de outro modo, selecionada para usar em uma plataforma de apresentação à base de leveduras (ver, por exemplo, W02009/036379, WO

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2010/105256, WO 2012/009568 e Xu et al., Protein Eng Des Sei., Vol. 26(10), páginas 663-670 (2013)).

[0362]Qualquer método adequado pode ser utilizado para introduzir variabilidade em uma sequência polinucleotídica que codifica uma ABP, incluindo PCR propensa a erro, embaralhamento de cadeia e mutagênese dirigida por oligonucleotídeo tal como mutagênese dirigida por trinucleotídio (TRIM). Em alguns aspectos, vários resíduos de CDR (por exemplo, 4 a 6 resíduos de uma vez) são randomizados. Os resíduos de CDR involvidos na ligação ao antígeno podem ser especificamente identificados, por exemplo, utilizando mutagênese de varredura de alanina ou modelagem. As CDR-H3 e CDR-L3, em particular, são frequentemente alvejadas por mutação.

[0363]A introdução de diversidade nas regiões variáveis e/ou CDRs pode ser utilizada para produzir uma biblioteca secundária. A biblioteca secundária é então tríada para identificar as variantes de ABP com afinidade melhorada. A maturação de afinidade pela construção e re-seleção de bibliotecas secundárias foi descrita, por exemplo, em Hoogenboom et at, Methods in Molecular Biology, 2001, 178: 1 - 37, incorporado por referência em sua totalidade.

3.9. Vetores, Células Hospedeiras e Métodos Recombinantes [0364]Também são fornecidos ácidos nucleicos isolados que codificam ABPs TIGIT, vetores compreendendo os ácidos nucleicos e células hospedeiras compreendendo os vetores e ácidos nucleicos, bem como técnicas recombinantes para a produção das ABPs.

[0365]Para a produção recombinante de uma ABP, os ácidos nucleicos que a codificam podem ser isolados e inseridos em um vetor replicável para posterior clonagem (isto é, amplificação do DNA) ou expressão. Em alguns aspectos, o ácido nucleico pode ser produzido por recombinação homóloga, por exemplo, como descrito em Patente U.S. N² 5.204.244, incorporado por referência em sua totalidade.

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111/166 [0366]Muitos diferentes vetores são conhecidos na técnica. Os componentes do vetor geralmente incluem um ou mais dos seguintes: uma sequência sinal, uma origem de replicação, um ou mais genes marcadores, um elemento realçador, um promotor e uma sequência de terminação de transcrição, por exemplo, como descrito em Patente U.S. I\P 5.534.615, incorporado por referência em sua totalidade.

[0367]Exemplos ilustrativos de células hospedeiras adequadas são fornecidos abaixo. Essas células hospedeiras não pretendem ser limitantes, e qualquer célula hospedeira adequada pode ser utilizada para produzir as ABPs aqui fornecidas.

[0368]As células hospedeiras adequadas incluem qualquer célula procariótica (por exemplo, bacteriana), eucariótica inferior (por exemplo, leveduras) ou eucariótica superior (por exemplo, mamífero). Os procariontes adequados incluem eubactéha, tal como organismos Gram-negativos ou Gram-positivos, por exemplo, Enterobacteriaceae tais como Escherichia (E. coli), Enterohacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella (S. typhimurium), Serratia (S. marcescans), Shigella, Bacilli (B. subtilis e B. licheniformis), Pseudomonas (P. aeruginosa) e Streptomyces. Um hospedeiro de clonagem de E. coli útil é a E. coli 294, embora outras cepas tais como E. coli B, E. coHKA776, e E. coli W3110 também sejam adequadas.

[0369]Além de procariontes, micróbios eucahontes tais como fungos filamentosos ou leveduras também são adequados como hospedeiros de clonagem ou expressão para vetores que codificam ABP TIGIT. A Saccharomyces cerevisiae ou levedura de padeiro comum, é um microorganismo hospedeiro eucariótico inferior comumente utilizado. Entretanto, vários outros gêneros, espécies e cepas são disponíveis e úteis, tais como Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces (K. lactis, K. fragilis, K. bulgaricus K. wickeramii, K. waltii, K. drosophilarum, K. thermotolerans, eK. marxianus), Yarrowia, Pichia pastoris, Candida (C. albicans), Trichoderma reesia, Neurospora crassa, Schwanniomyces (S. occidentalis), e fungos filamentosos tais como, por exemplo, Penicillium, Tolypocladium e Aspergillus (A. nidulans e A. niger).

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112/166 [0370]As células hospedeiras de mamíferos úteis incluem células COS-7, células HEK293; células de rim de hamster neonato (BHK); ovário de hamster Chinês (CHO); células de sertoli de camundongo; células de rim do macaco verde Africano (VERO- 76) e semelhantes.

[0371 ]As células hospedeiras utilizadas para produzir a ABP TIGIT desta invenção podem ser cultivadas em uma variedade de meios. Os meios comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, F10 de Ham, Meio Essencial Mínimo (MEM), RPMI-1640 e Meio de Eagle Modificado com Dulbecco (DMEM) são adequados para cultivar as células hospedeiras. Além disso, qualquer um dos meios descritos em Ham etal., Meth. Enz., 1979, 58: 44; Bames etal., Anal. Biochem., 1980, 102: 255; e Patente U.S. 4.767.704, 4.657.866, 4.927.762, 4.560.655 e 5.122.469; ou WO 90/03430 e WO 87/00195 podem ser utilizados. Cada uma das referências anteriores é incorporada por referência em sua totalidade.

[0372]Qualquer um desses meios pode ser suplementado conforme necessário com hormônios e/ou outros fatores de crescimento (tais como insulina, transferrina ou fator crescimento epidermal), sais (tais como cloreto de sódio, cálcio, magnésio e fosfato), tampões (tais como HEPES), nucleotídeos (tais como adenosina e timidina), antibióticos, elementos residuais (definidos como compostos inorgânicos usualmente presentes em concentrações finais na faixa micromolar) e glicose ou uma fonte de energia equivalente. Quaisquer outros suplementos necessários também podem ser incluídos nas concentrações apropriadas que devem ser conhecidas pelos peritos na técnica.

[0373]As condições de cultura, tais como temperatura, pH e semelhantes, são aquelas previamente utilizadas com a célula hospedeira selecionada para a expressão, e serão evidentes para o técnico habilitado.

[0374]Quando do uso de técnicas recombinantes, a ABP pode ser produzida intracelularmente no espaço periplásmico ou diretamente secretada no meio. Se a

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ABP é produzida intracelularmente, como uma primeira etapa, os detritos particulados, sejam células hospedeiras ou fragmentos lisados, são removidos, por exemplo, por centrifugação ou ultrafiltração. Por exemplo, Carter et a/. (Bio/Technology, 1992, 10: 163 - 167, incorporado por referência em sua totalidade) descreve um procedimento para isolar as ABPs que são secretadas para o espaço periplásmico da E. coli. Brevemente, a pasta de células é descongelada na presença de acetato de sódio (pH 3,5), EDTA e fenilmetilsulfonilfluoreto (PMSF) durante cerca de 30 min. Os detritos celulares podem ser removidos por centrifugação.

[0375]Em algumas modalidades, a ABP é produzida em um sistema livre de célula. Em alguns aspectos, o sistema livre de célula é um sistema de transcrição e tradução in vitro como descrito em Yin et al., mAbs, 2012, 4: 217- 225, incorporado por referência em sua totalidade. Em alguns aspectos, o sistema livre de célula utiliza um extrato livre de célula de uma célula eucariótica ou de uma célula procariótica. Em alguns aspectos, a célula procariótica é E. coli. A expressão livre de célula da ABP pode ser útil, por exemplo, onde a ABP se acumula em uma célula como um agregado insolúvel ou onde os rendimentos da expressão periplasmática são baixos.

[0376]Onde a ABP é secretada no meio, os sobrenadantes de tais sistemas de expressão são geralmente primeiro concentrados utilizando um filtro de concentração de proteína comercialmente disponível, por exemplo, uma unidade de ultrafiltração Amicon® ou Millipore® ou Pellcon®. Um inibidor de protease tal como PMSF pode ser incluído em qualquer uma das seguintes etapas para inibir a proteólise e podem ser incluídos antibióticos para impedir o crescimento de contaminantes adventícios.

[0377]A composição de ABP preparada a partir das células pode ser purificada utilizando, por exemplo, cromatografia de hidroxilapatita, eletroforese em gel, diálise e cromatografia de afinidade, com a cromatografia de afinidade sendo uma técnica de purificação particularmente útil. A adequação da proteína A como um

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114/166 ligante de afinidade depende da espécie e isotipo de qualquer domínio Fc de imunoglobulina que estiver presente na ABP. A proteína A pode ser utilizada para purificar ABPs que compreendem cadeias pesadas γ1, γ2 ou γ4 humanas (Lindmark et al., J. Immunol. Meth., 1983, 62: 1 - 13, incorporado por referência em sua totalidade). A proteína G é útil para todos os isotipos de camundongo e para γ3 humana (Guss et al., EMBOJ., 1986, 5: 1567 - 1575, incorporado por referência em sua totalidade).

[0378]A matriz à qual o ligante de afinidade está ligado é, na maioria das vezes, agarose, mas outras matrizes estão disponíveis. As matrizes mecanicamente estáveis tais como vidro de poro controlado ou poli(estirenodivinil)benzeno permitem taxas de fluxo mais rápidas e tempos de processamento mais curtos do que os que podem ser obtidos com a agarose. Quando a ABP compreende um domínio Ch3, a resina BakerBond ABX® é útil para a purificação.

[0379]Qutras técnicas para a purificação de proteína, tais como fracionamento em uma coluna de troca iônica, precipitação de etanol, HPLC de Fase Reversa, cromatografia em silica, cromatografia em heparina Sepharose®, cromatofocagem, SDS-PAGE e precipitação de sulfato de amônio também estão disponíveis e podem ser aplicados por um especialista na técnica.

[0380]Após qualquer etapa de purificação preliminar, a mistura compreendendo a ABP de interesse e contaminantes pode ser submetida à cromatografia de interação hidrofóbica de baixo pH utilizando um tampão de eluição em um pH entre cerca de 2,5 a cerca de 4,5, geralmente realizada em baixas concentrações de sal (por exemplo, de cerca de 0 a cerca de 0,25 M de sal).

4. Ensaios [0381 ]Uma variedade de ensaios conhecidos na técnica pode ser utilizada para identificar e caracterizar as ABPs TIGIT aqui fornecidas.

4.1. Ensaios de Mapeamento de Ligação, Competição e Epitopo

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115/166 [0382]A atividade de ligação ao antígeno específica das ABPs aqui fornecidas pode ser avaliada por qualquer método adequado, incluindo utilizando SPR, BLI, RIA e MSD-SET, como descrito em outro local desta divulgação. Adicionalmente, a atividade de ligação ao antígeno pode ser avaliada por ensaios de ELISA e ensaios de western blot.

[0383]Os ensaios para medir a competição entre duas ABPs ou uma ABP e outra molécula (por exemplo, um ou mais ligantes de TIGIT) são descritos em outro local desta divulgação e, por exemplo, em Harlow e Lang, Antibodies: A Laboratory Manual ch. 14, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y, incorporado por referência em sua totalidade.

[0384]Os ensaios para mapear os epitopos aos quais as ABPs aqui fornecidas se ligam são descritos, por exemplo, em Morris “Epitope Mapping Protocols”, em Methods in Molecular Biology vol. 66, 1996, Humana Press, Totowa, N.J., incorporado por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, o epítopo é determinado por competição de peptídios. Em algumas modalidades, o epítopo é determinado por espectrometria de massa. Em algumas modalidades, o epítopo é determinado por cristalografia.

[0385]Em algumas modalidades, a “varredura de alanina” ou “mapeamento de alanina” é utilizado para mapear os epitopos de uma proteína alvo e/ou parátopos de um anticorpo. A varredura de alanina é utilizada para determinar a contribuição de um resíduo específico para a estabilidade ou função de uma dada proteína. Ver, por exemplo, Weiss et al., Proc Natl Acad Sei 1 de agosto de 2.000; 97(16): 8950 - 8954.

4.2. Ensaios de Antagonismo de TIGIT [0386]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são tríadas para identificar ou caracterizar as ABPs com atividade antagonista contra TIGIT. Qualquer ensaio adequado pode ser utilizado para identificar ou caracterizar tais ABPs. Em alguns aspectos, o ensaio mede a quantidade de uma citocina secretada por uma

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116/166 célula T efetora depois de contatar a célula T efetora com uma ABP aqui fornecida. Em alguns aspectos, a citocina é selecionada de IL-2, IL-6, LT-α, TNF, GM-CSF, IFNy e combinações destes. Em alguns aspectos, a citocina é selecionada de sCD40L, VEGF, TGF-α, RANTES, PDGF-AB/BB, PDGF-AA, MIP-1 β, MIP-la, MDC (CCL22), MCP-3, MCP-1, IP-10, IL-17A, IL-2Ra, IL-15, IL-13, IL-12 (p70), IL-12 (p40), IL-10, IL9, IL-8, IL-7, IL-5, IL-4, IL-3, IL-2, IL-2Ra, IL-1RA, IL-1 β, IL-1a, ΙΡΝγ, IFNa2, GRO, GMCSF, G-CSF, fractalcina, ligante Flt-3, FGF-2, eotaxina, EGF e combinações destes.

[0387]Em algumas modalidades, as células efetoras são co-estimuladas com um agonista de CD3, para promover a secreção de citocinas pela célula efetora. Em alguns aspectos, o agonista de CD3 é fornecido em um nível submáximo.

[0388]Em alguns aspectos, esses ensaios podem medir a proliferação de uma célula T efetora depois de contatar a célula T efetora com uma ABP aqui fornecida. Em alguns aspectos, a proliferação da célula T efetora é medida pela diluição de um corante (por exemplo, éster succinimidélico de diacetato de carboxifluoresceína; CFSE), pela captação de timidina tritiada, por ensaios de viabilidade celular luminescente ou por outros ensaios conhecidos na técnica.

[0389]Em alguns aspectos, esses ensaios podem medir a diferenciação, produção de citocina, viabilidade (por exemplo, sobrevivência), proliferação ou atividade supressora de uma célula T reguladora depois de contatar a célula T reguladora com uma ABP aqui fornecida.

[0390]Em alguns aspectos, esses ensaios podem medir a atividade citotóxica de uma célula NK depois de contatar a célula NK com uma ABP aqui fornecida. Em alguns aspectos, a atividade citotóxica da célula NKé medida utilizando um ensaio de citotoxicidade que quantifica a morte mediada por NK de célula alvos (por exemplo, uma linhagem de células K562). Ver Jang et al., Ann. Clin. Lab. Sci., 2012, 42: 42 49, incorporado por referência em sua totalidade.

[0391 ]Em alguns aspectos, esses ensaios podem medir a quantidade de

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117/166 granzima B. Em alguns aspectos, esses ensaios podem medir a quantidade de perforina.

4.3. Ensaios para Funções Efetoras [0392]A função efetora após o tratamento com as ABPs aqui fornecidas pode ser avaliada utilizando uma variedade de ensaios in vitro e in vivo conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos em Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol., 1991, 9: 457-492; Pat. U.S. 5.500.362, 5.821.337; Hellstrom etal., Proc. Nat’IAcad. Sei. USA, 1986, 83: 7059-7063; Hellstrom etal., Proc. Nat’IAcad. Sei. USA, 1985,82: 14991502; Bruggemannetal, J. Exp. Med., 1987, 166: 1351 - 1361: Clynes etal.. Proc. Nat ‘lAcad. Sei. USA, 1998, 95: 652-656; WO 2006/029879; WO 2005/100402; GazzanoSantoro et al., J. Immunol. Methods, 1996, 202: 163 - 171; Cragg et al., Blood, 2003, 101: 1045 - 1052; Cragg et al. Blood, 2004, 103: 2738- 2743; e Petkova et al., Int’1. Immunol., 2006, 18: 1759 -1769; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

5. Composições Farmacêuticas [0393]As ABPs aqui fornecidas podem ser formuladas em qualquer composição farmacêutica apropriada e administradas por qualquer via adequada de administração. As vias adequadas de administração incluem, mas não estão limitadas às vias intra-arterial, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, nasal, parenteral, pulmonar e subeutânea.

[0394]A composição farmacêutica pode compreender um ou mais excipientes farmacêuticos. Qualquer excipiente farmacêutico adequado pode ser utilizado e um perito na técnica é capaz de selecionar os excipientes farmacêuticos adequados. Consequentemente, os excipientes farmacêuticos fornecidos abaixo estão intencionados a ser ilustrativos, e não limitativos. Excipientes farmacêuticos adicionais incluem, por exemplo, aqueles descritos no Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe et al. (Eds.) 6^â Ed. (2009), incorporado por referência em sua totalidade.

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118/166 [0395]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um agente anti-espumante. Qualquer agente anti-espumante adequado pode ser utilizado. Em alguns aspectos, o agente anti-espumante é selecionado de um álcool, um éter, um óleo, uma cera, um silicone, um tensoativo e combinações destes. Em alguns aspectos, o agente anti-espumante é selecionado de um óleo mineral, um óleo vegetal, etileno bis estearam ida, uma cera de parafina, uma cera de éster, uma cera de álcool graxo, um álcool graxo de cadeia longa, um sabão de ácido graxo, um éster de ácido graxo, um silício glicol, um fluorosilicone, um copolímero de polietilenoglicolpolipropilenoglicol, dióxido polidimetilsiloxano-silício, éter, álcool octílico, álcool caprílico, trioleato de sorbitano, álcool etílico, 2-etila-hexanol, dimeticona, álcool oleílico, simeticona e combinações destes.

[0396]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um co-solvente. Exemplos ilustrativos de co-solventes incluem etanol, poli(etileno) glicol, butileno glicol, dimetilacetamida, glicerina, propileno glicol e combinações destes.

[0397]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um tampão. Exemplos ilustrativos de tampões incluem acetato, borato, carbonato, lactato, malato, fosfato, citrato, hidróxido, dietanolamina, monoetanolamina, glicina, metionina, goma guar, glutamato monossódico e combinações destes.

[0398]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um portador ou enchedor. Exemplos ilustrativos de portadores ou enchedores incluem lactose, maltodextrina, manitol, sorbitol, quitosana, ácido esteárico, goma xantana, goma guar e combinações destes.

[0399]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um tensoativo. Exemplos ilustrativos de tensoativos incluem d-alfa tocoferol, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, cetrimida, cloreto de cetilpiridínio, docusate de sódio, be-henato de glicerila, mono-oleato de glicerila, ácido láurico, hidroxiestearato de macrogol 15, álcool miristílico, fosfolipídios, éteres alquílicos de polioxietileno,

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119/166 ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, estearatos de polioxietileno, polioxilglicerídeos, lauril sulfato de sódio, ésteres de sorbitano, succinato de polietileno (glicol) de vitamina E e combinações destes.

[0400]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um agente antiaglomerante. Exemplos ilustrativos de agentes antiaglomerantes incluem fosfato de cálcio (tribásico), hidroximetil celulose, hidroxipropil celulose, óxido de magnésio e combinações destes.

[0401]0utros excipientes que podem ser utilizados com as composições farmacêuticas incluem, por exemplo, albumina, antioxidantes, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, polímeros bioabsorvíveis, agentes quelantes, agentes de liberação controlada, diluentes, agentes dispersantes, melhoradores de dissolução, agentes emulsificadores, agentes gelificantes, bases de unguento, realçadores de penetração, conservantes, agente solubilizantes, solventes, agentes estabilizadores, açúcares e combinações destes. Exemplos específicos de cada um desses agentes são descritos, por exemplo, no Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe et al. (Eds.) Ed. (2009), The Pharmaceutical Press, incorporado por referência em sua totalidade.

[0402]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um solvente. Em alguns aspectos, o solvente é uma solução salina, tal como uma solução salina isotônica estéril ou solução de dextrose. Em alguns aspectos, o solvente é água para injeção.

[0403]Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas estão em uma forma particulada, tal como uma micropartícula ou uma nanopartícula. As micropartículas e nanopartículas podem ser formadas de qualquer material adequado, tal como um polímero ou um lipídio. Em alguns aspectos, as micropartículas ou nanopartículas são micelas, liposomas ou polimerossomas.

[0404]São ainda aqui fornecidas composições farmacêuticas anidras e formas

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120/166 de dosagem compreendendo uma ABP, visto que a água pode facilitar a degradação de algumas ABPs.

[0405]As composições farmacêuticas anidras e formas de dosagem aqui fornecidas podem ser preparadas utilizando ingredientes contendo anidro ou baixa umidade e condições de baixa umidade. As composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem lactose e pelo menos um ingrediente ativo que compreende uma amina primária ou secondária podem ser anidras se for esperado um contato substancial com umidade e/ou umidade durante a fabricação, empacotamento e/ou armazenamento.

[0406]Uma composição farmacêutica anidra deve ser preparada e armazenada de tal modo que sua natureza anidra seja mantida. Consequentemente, composições anidras podem ser empacotadas utilizando materiais conhecidos para impedir a exposição à água de tal modo que elas possam ser incluídas em kits de formulários adequados. Os exemplos de empacotamento adequado incluem, mas não estão limitados a folhas seladas hermeticamente, plásticos, recipientes de dose unitária (por exemplo, frascos), embalagens tipo blister e embalagens em tira.

5.1. Formas de Dosagem Parenteral [0407]Em certas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são formuladas como formas de dosagem parenteral. As formas de dosagem parenteral podem ser administradas aos sujeitos por várias vias incluindo, mas não limitadas a subcutânea, intravenosa (incluindo infusões e injeção em bolus), intramuscular e intra-arterial. Como sua administração tipicamente ultrapassa as defesas naturais dos sujeitos contra contaminantes, as formas de dosagem parenteral são, tipicamente, estéris ou capazes de ser esterilizadas antes da administração a um sujeito. Exemplos de formas de dosagem parenteral incluem, mas não estão limitadas às soluções prontas para injeção, produtos secos (por exemplo, liofilizados) prontos para serem dissolvidos ou colocados em suspensão em um veículo farmaceuticamente aceitável para injeção,

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121/166 suspensões prontas para injeção e emulsões.

[0408]0s veículos adequados que podem ser utilizados para fornecer formas de dosagem parenteral são bem conhecidos pelos peritos na técnica. Exemplos incluem, mas não estão limitadas a: água para injeção USP; veículos aquosos tais como, mas não limitado a Injeção de Cloreto de Sódio, Injeção de Ringer, Injeção de Dextrose, Injeção de Dextrose e Cloreto de Sódio e Injeção de Ringer com Lactato; veículos miscíveis em água tais como, mas não limitados a álcool etílico, polietilenoglicol e polipropileno glicol; e veículos não aquosos tais como, mas não limitados a óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de gergelim, oleato de etila, miristato de isopropila e benzoato de benzila.

[0409]Excipientes que aumentam a solubilidade de uma ou mais das ABPs aqui divulgadas também podem ser incorporados nas formas de dosagem parenteral.

[0410]Em algumas modalidades, a forma de dosagem parenteral é liofilizada. Formulações liofilizadas exemplares são descritas, por exemplo, em Pat. U.S. N²⁵6.267.958 e 6.171.586; e WO 2006/044908; cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

6. Dosagem e Formas de Dosagem Unitária [0411]Na terapêutica humana, o médico determinará a posologia que ele considera mais apropriada de acordo com um tratamento preventivo ou curativo e de acordo com a idade, peso, condição e outro fatores específicos do o sujeito a ser tratado.

[0412]Em certas modalidades, uma composição aqui fornecida é uma composição farmacêutica ou uma forma de dosagem unitária. As composições farmacêuticas e formas de dosagem unitária aqui fornecidas compreendem uma quantidade profilática ou terapeuticamente eficaz de uma ou mais ABPs profiláticas ou terapêuticas.

[0413]A quantidade da ABP ou composição que será eficaz na prevenção ou

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122/166 tratamento de um transtorno ou um ou mais sintomas deste vai variar de acordo com a natureza e severidade da doença ou condição, e a via pela qual a ABP é administrada. A frequência e dosagem também vai variar de acordo com fatores específicos para cada sujeito dependendo da terapia específica (por exemplo, agentes terapêuticos ou profiláticos) administrada, a severidade do transtorno, doença ou condição, a via de administração, bem como idade, corpo, peso, resposta e o histérico médico do sujeito. As doses eficazes podem ser extrapoladas a partir de curvas de dose-resposta derivadas de sistemas de teste in vitro ou em modelo animal.

[0414]Em certas modalidades, doses exemplares de uma composição incluem quantidades em miligrama ou microgroma da ABP por quilograma de peso do sujeito ou da amostra (por exemplo, cerca de 10 microgramas por quilograma a cerca de 50 miligramas por quilograma, cerca de 100 microgramas por quilograma a cerca de 25 miligramas por quilograma ou cerca de 100 microgramas por quilograma a cerca de 10 miligramas por quilograma). Em certa modalidade, a dosagem da ABP aqui fornecida, com base em peso da ABP, administrada para prevenir, tratar, controlar ou melhorar um transtorno ou um ou mais sintomas deste em um sujeito é de 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg ou 15 mg/kg ou mais de peso corpóreo de um sujeito. Pode ser necessário utilizar dosagens da ABP fora das faixas aqui divulgadas em alguns casos, como será evidente para aqueles com habilidade comum na técnica. Além disso, é observado que o clínico ou médico assistente saberão como e quando interromper, ajustar ou terminar a terapia em conjunto com a resposta do sujeito.

[0415] Diferentes quantidades terapeuticamente eficazes podem ser aplicáveis para diferentes doenças e condições, como será prontamente conhecido por um perito na técnica. Similarmente, quantidades suficientes para impedir, controlar, tratar ou melhorar tais transtornos, mas insuficientes para causar ou suficientes para reduzir efeitos adversos associados com as ABPs aqui fornecidas são

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123/166 também abrangidas pelas quantidades de dosagem e cronogramas de frequência de dosagem aqui fornecidos. Além disso, quando um sujeito é administrado com múltiplas dosagens de uma composição aqui fornecida, nem todas as dosagens precisam ser as mesmas. Por exemplo, a dosagem administrada ao sujeito pode ser aumentada para melhorar o efeito profilático ou terapêutico da composição ou pode ser diminuída para reduzir um ou mais efeitos colaterais que um sujeito particular esteja experimentando.

[0416]Em certas modalidades, o tratamento ou prevenção pode ser iniciado com uma ou mais doses de carga de uma ABP ou composição aqui fornecida seguida por uma ou mais doses de manutenção.

[0417]Em certas modalidades, uma dose de uma ABP ou composição aqui fornecida pode ser administrada para obter uma concentração da ABP em estado estacionário no sangue ou soro do sujeito. A concentração no estado estacionário pode ser determinada por medição de acordo com as técnicas disponíveis para os especialistas ou pode ser determinada com base nas características físicas do sujeito tais como altura, peso e idade.

[0418]Em certas modalidades, a administração da mesma composição pode ser repetida e as administrações podem ser separadas por pelo menos 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 10 dias, 15 dias, 30 dias, 45 dias, 2 meses, 75 dias, 3 meses ou 6 meses.

[0419]Como discutido em mais detalhes em outro local desta divulgação, uma ABP aqui fornecida pode, opcionalmente, ser administrada com um ou mais agentes adicionais úteis para impedir ou tratar uma doença ou transtorno. A quantidade eficaz de tais agentes adicionais pode depender da quantidade de ABP presente na formulação, o tipo de transtorno ou tratamento, e os outros fatores conhecidos na técnica ou aqui descritos.

7. Aplicações Terapêuticas

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124/166 [0420]Para aplicações terapêuticas, as ABPs da invenção são administradas a um mamífero, geralmente um ser humano, em uma forma de dosagem farmaceuticamente aceitável tal como aquelas conhecidas na técnica e aquelas discutidas acima. Por exemplo, as ABPs da invenção podem ser administradas a um ser humano intravenosamente como um bolus ou por infusão contínua durante um período de tempo, pelas vias intramuscular, intraperitoneal, intra-cerebrospinal, subcutânea, intra-articular, intrasinovial, intratecal ou intratumoral. As ABPs também são adequadamente administradas pelas vias peritumoral, intralesional ou perilesional, para exercer efeitos terapêuticos locais bem como sistêmicos. A via intraperitoneal pode ser particularmente útil, por exemplo, no tratamento de tumores de ovário.

[0421 ]As ABPs aqui fornecidas podem ser úteis para o tratamento de qualquer doença ou condição envolvendo TIGIT. Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma doença ou condição que pode beneficiar-se do tratamento com uma ABP anti-TIGIT. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um tumor. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um transtorno proliferative celular. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um câncer. Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma infecção viral.

[0422]Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são fornecidas para o uso como um medicamento. Em algumas modalidades, as ABPs aqui fornecidas são fornecidas para o uso na fabricação ou preparação de um medicamento. Em algumas modalidades, o medicamento é para o tratamento de uma doença ou condição que pode beneficiar-se de uma ABP anti-TIGIT. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um tumor. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um transtorno proliferative celular. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um câncer. Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma infecção viral.

[0423]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método de tratamento

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125/166 de uma doença ou condição em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito. Em alguns aspectos, a doença ou condição é um câncer. Em alguns aspectos, a doença ou condição é uma infecção viral.

[0424]Qualquer câncer adequado pode ser tratado com as ABPs aqui fornecidas. Cânceres adequados ilustrativos incluem, por exemplo, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), carcinoma adrenocortical, câncer anal, câncer de apêndice, astrocitoma, carcinoma de células basais, tumor cerebral, câncer das vias biliares, câncer de bexiga, câncer ósseo, câncer de mama, tumor brônquico, carcinoma de origem primária desconhecida, tumor cardíaco, câncer cervical, cordoma, câncer de cólon, câncer coloretal, craniofaringioma, carcinoma ductal, tumor embrionário, câncer do endométrio, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, histiocitoma fibroso, sarcoma de Ewing, câncer de olho, tumor de células germ inativas, câncer da vesícula biliar, câncer gástrico, tumor carcinoide gastrointestinal, tumor estromal gastrointestinal, doença trofoblástica gestational, glioma, câncer de cabeça e pescoço, câncer hepatocelular, histiocitose, linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, melanoma intraocular, tumor de células ilhotas, sarcoma de Kaposi, câncer de rim, histiocitose de células de Langerhans, câncer de laringe, câncer de lábio e cavidade oral, câncer de fígado, carcinoma lobular in situ, câncer de pulmão, macroglobulinemia, histiocitoma fibroso maligno, melanoma, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, câncer de pescoço de células escamosas metastático com início oculto, carcinoma do trato medular envolvendo gene NUT, câncer de boca, síndrome das neoplasias endócrinas múltiplas, mieloma múltiplo, micose fungoide, síndrome mielodisplásica, neoplasma mielodisplasico/mieloproliferativo, câncer de cavidade nasal e seio paranasal, câncer nasofaríngeo, neuroblastoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer orofaríngeo, osteossarcoma, câncer ovariano, câncer pancreático, papilomatose,

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126/166 paraganglioma, câncer da paratireoide, câncer de pênis, câncer de faringe, feocromocitomas, tumor pituitário, blastoma pleuropulmonar, linfoma do sistema nervoso central primário, câncer de próstata, câncer de reto, câncer de células renais, câncer de pelve e ureter renal, retinoblastoma, tumor rabdóide, câncer de glândulas salivares, síndrome de Sezary, câncer de pele, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecidos moles, tumor da medula espinhal, câncer de estômago, linfoma de células T, tumor teratóide, câncer testicular, câncer de garganta, timoma e carcinoma tímico, câncer da tireoide, câncer de uretra, câncer uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e tumor de Wilms.

[0425]Quaisquer vírus adequados podem ser tratados com as ABPs aqui fornecidas. Os vírus adequados ilustrativos incluem, por exemplo, vírus adenoassociado, vírus Aichi, Lyssavírus do morcego Australiano, poliomavírus BK, vírus Banna, vírus da floresta de Barmah, vírus Bunyamwera, Bunyavírus La Crosse, Bunyavírus da lebre-da-neve, herpesvirus Cercopithecine, vírus Chandipura, vírus Chikungunya, Cosavírus A, vírus da varíola bovina, vírusCoxsackie, vírus da febre hemorrágica da Crimeia-Congo, vírus da Dengue, vírus Dhori, vírus Dugbe, vírus Duvenhage, vírus da encefalite equina oriental, vírus ebola, echovirus, vírus da encefalomiocardite, vírus Epstein-Barr, Lyssavírus do morcego Europeu, vírus GB/C da Hepatite G, vírus Hantaan, vírus Hendra, vírus da hepatite A, vírus da hepatite B, vírus da hepatite C, vírus da hepatite E, vírus da hepatite delta, vírus da varicela, adenovirus humano, astrovírus humano, coronavirus humano, citomegalovírus humano, enterovirus humano, herpesvirus 1 humano, herpesvirus 2 humano, herpesvirus 6 humano, herpesvirus 7 humano, herpesvirus 8 humano, vírus da imunodeficiência humana, papilomavírus humano 1, papilomavírus humano 2, papilomavírus humano, parainfluenza humana, parvovirus B19 humano, vírus sincicial respiratório humano, rinovírus humano, coronavirus SARS humano, spumaretrovírus humano, vírus T-limfotrópico humano, torovírus humano, vírus influenza A, vírus

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127/166 influenza B, virus influenza C, virus Isfahan, poliomavirus JC, virus da encefalite Japonesa, arenavirus Junin, poliomavirus KI, virus Kunjin, virus do morcego dos Lagos, virus de marburg do Lago Victoria, vírus Langat, vírus de Lassa, virus Lordsdale, virus Louping ill, virus da coriomeningite linfocitica, virus Machupo, virus Mayaro, coronavirus MERS, virus do sarampo, virus Mengo da encefalomiocardite, poliomavirus de células Merkel, virus Mokola, virus do molusco contagioso, vírus de monkeypox, vírus da caxumba, virus da encefalite do Vale Murray, virus de Nova Iorque, virus de Nipah, virus de Norwalk, virus O’nyong-nyong, virus Orf, virus Oropouche, virus Pichinde, poliovirus, flebovirus Puntatoro, virus Puumala, virus da raiva, vírus da febre do Vale Rift, Rosavirus A, virus Ross River, rotavirus A, rotavirus B, rotavirus C, vírus da rubéola, virus Sagiyama, salivirus A, virus Siciliano da febre por flebómos, virus Sapporo, vírus da Floresta de Semliki, vírus de Seul, vírus símio espumoso, vírus símio 5, vírus Sindbis, vírus de Southampton, vírus da encefalite de St. Louis, vírus powassan transmitido por carrapatos, vírus torque teno, vírus da Toscana, vírus Uukuniemi, vírus vaccinia, vírus varicela-zoster, vírus da varíola, vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus da estomatite vesicular, vírus da encefalite equina ocidental, poliomavirus WU, vírus West do Nilo, vírus do tumor do macaco Yaba, vírus da doença tipo Yaba, vírus da febre amarela e vírus Zika.

[0426]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método de antagonização de TIGIT em uma célula alvo de um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito. Em alguns aspectos, o antagonismo de TIGIT por uma ABP aqui fornecida resulta no aumento da secreção de IL-2, LT-α, IL-6, TNF, GM-CSF, IFNy ou combinações destes por uma célula alvo.

[0427]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para aumentar a proliferação, sobrevivência e/ou função de uma célula T efetora em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui

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128/166 fornecida ao sujeito. Em alguns aspectos a célula T efetora é uma célula T efetora CD4+. Em alguns aspectos, a célula T efetora é uma célula T efetora CD8+.

[0428]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método de anular a supressão de uma célula T efetora por uma célula T reguladora em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito. Em alguns aspectos, a célula T reguladora é uma célula T reguladora CD4+CD25+Foxp3+. Em alguns aspectos, a célula T reguladora é uma célula T reguladora CD8+CD25+.

[0429]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para aumentar a atividade de uma célula exterminadora natural (NK) ou exterminadora natural T (NKT) em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0430]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para melhorar uma resposta imune em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0431 ]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para atrasar o início de um tumor em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0432]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para prevenir o início de um tumor em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0433]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para retardar o aparecimento de um câncer em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0434]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para evitar o início de um câncer em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

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129/166 [0435]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para reduzir o tamanho de um tumor em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0436]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para reduzir o número de metastases em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0437]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para retardar o início de uma infecção viral em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0438]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para evitar o início de uma infecção viral em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0439]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para reduzir o título viral um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0440]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para eliminar um vírus de sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0441 ]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para extender o período de sobrevivência global, tempo médio de sobrevivência ou sobrevivência livre de progressão em um sujeito em necessidade deste administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito.

[0442]Em algumas modalidades, é aqui fornecido um método para tratar um sujeito que se tomou resistente a um padrão de cuidado terapêutico administrando-se uma quantidade eficaz de uma ABP aqui fornecida ao sujeito. Em algumas modalidades, o padrão de cuidado terapêutico ao qual o sujeito se tomou resistente é um inibidor de PD-1. Em outras modalidades, o padrão de cuidado terapêutico ao qual

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130/166 o sujeito se tornou resistente é um inibidor de PD-L1. Em outras modalidades, o padrão de cuidado terapêutico ao qual o sujeito se tornou resistente é um inibidor de CTLA-4.

8. Terapias de Combinação [0443]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é administrada com pelo menos um agente terapêutico adicional. Qualquer agente terapêutico adicional adequado pode ser administrado com uma ABP aqui fornecida. Em alguns aspectos, o agente terapêutico adicional é selecionado de radiação, um agente citotóxico, um agente quimioterapêutico, um agente citostático, um agente anti-hormonal, um inibidor de EGFR, um agente imunoestimulador, um agente antiangiogênico e combinações destes.

[0444]Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida é administrada depois de uma resecção sirúrgica de um tumor.

[0445]Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um modificador epigenético. Modificadores epigenéticos exemplares incluem DNA metiltransferase (DNMT) inibidores tais como 5-aza-2’-desoxicitidina ou 5-azacitidina, que foram aprovados em síndrome mielodisplásica (MDS) e leucemia mielógena aguda (AML), e inibidores de histona deacetilase (HDIs) incluindo vorinostat, romidepsina, panobinostat, belinostato e entinostat, que mostraram ser ativos no linfoma cutâneo e periférico de células T. Em algumas modalidades, o pelo menos um agente terapêutico adicional é um modificador epigenético combinado com um inibidor de PD-1 ou PD-L1.

[0446]Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um agente imunoestimulador.

[0447]Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador é um agente que bloqueia a sinalização de um receptor inibitório de uma célula imune ou um ligante desta. Em alguns aspectos, o receptor inibitório ou ligante é selecionado de proteína

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131/166 associada ao linfócito T citotóxico (CTLA-4, também conhecida como CD152), proteína 1 de morte celular programada (também PD-1 ou CD279), ligante 1 de morte programada (também PD-L1 ou CD274), fator de transformação do crescimento beta (TGFJ3), gene 3 de ativação de linfócito (LAG-3, também CD223), Tim-3 (receptor celular 2 do vírus da hepatite A ou HAVCR2 ou CD366), neuritina, atenuador de linfócitos B e T (também BTLA ou CD272), receptores tipo imunoglobulina de células exterminadoras (KIRs) e combinações destes. Em alguns aspectos, o agente é selecionado de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe ou nivolumabe) e anticorpo anti-PD-L1 (por exemplo, atezolizumabe), um anticorpo antiCTLA-4 (por exemplo, ipilimumabe), um anticorpo anti-TIM3, molécula 1 de adesão à célula relacionada antígeno carcinoembrionário (CECAM-1, também CD66a) e 5 (CEACAM-5, também CD66e), receptor imunoregulador vset (também VISR ou VISTA), receptor 1 tipo imunoglobulina associado aos leucócitos (também LAIR1 ou CD305), CD160, receptor 2B4 de célula exterminadora natural (também CD244 ou SLAMF4) e combinações destes. Em alguns aspectos, o agente é pembrolizumabe. Em alguns aspectos, o agente é nivolumabe. Em alguns aspectos, o agente é atezolizumabe.

[0448]Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente que inibe a interação entre PD-1 e PD-L1. Em alguns aspectos, o agente terapêutico adicional que inibe a interação entre PD-1 e PD-L1 é selecionado de um anticorpo, um peptidomimético e uma molécula pequena. Em alguns aspectos, o agente terapêutico adicional que inibe a interação entre PD-1 e PD-L1 é selecionado de pembrolizumabe (KEYTRUDA), nivolumabe (OPDIVO), atezolizumabe, avelumabe, pidilizumabe, durvalumabe, BMS-936559, sulfamonometoxina 1 e sulfametizol 2. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional que inibe a interação entre PD1 e PD-L1 é qualquer terapêutico conhecido na técnica para ter tal atividade, por exemplo, como descrito em Weinmann et al., Chem Med Chem, 2016, 14: 1576 (DOI:

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10.1002/cmdc.201500566), incorporado por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, o agente que inibe a interação entre PD-1 e PD-L1 é formulado na mesma composição farmacêutica uma ABP aqui fornecida. Em algumas modalidades, o agente que inibe a interação entre PD-1 e PD-L1 é formulado em uma composição farmacêutica diferente de uma ABP aqui fornecida. Em algumas modalidades, o agente que inibe a interação entre PD-1 e PD-L1 é administrado antes da administração de uma ABP aqui fornecida. Em algumas modalidades, o agente que inibe a interação entre PD-1 e PD- L1 é administrado depois da administração de uma ABP aqui fornecida. Em algumas modalidades, o agente que inibe a interação entre PD-1 e PD-L1 é administrado simultaneamente com uma ABP aqui fornecida, mas o agente e a ABP são administrados em composições farmacêuticas separadas.

[0449]Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador é um agonista de um receptor co-estimulador de uma célula imune. Em alguns aspectos, o receptor co-estimulador é selecionado de GITR, 0X40, ICOS, LAG-2, CD27, CD28, 4-1 BB, CD40, STING, um receptor do tipo Toll, RIG-1 e um receptor do tipo NOD. Em algumas modalidades, o agonista é um anticorpo.

[0450]Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador modula a atividade de arginase, indoleamina-2 3-dioxigenase ou o receptor A2A de adenosina.

[0451 ]Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador é uma citocina. Em alguns aspectos, a citocina é selecionada de IL-2, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 e combinações destas.

[0452]Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador é um vírus oncolítico. Em alguns aspectos, o vírus oncolítico é selecionado de um vírus do herpes simples, um vírus da estomatite vesicular, um adenovirus, um vírus da doença de Newcastle, um vírus vaccinia e um vírus maraba.

[0453]Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador é uma célula T com um receptor de antígeno quimérico (célula CAR-T). Em algumas modalidades, o

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133/166 agente imunoestimulador é um anticorpo dirigido à célula T bi ou multiespecífica. Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador é um anticorpo anti-TGF-B. Em algumas modalidades, o agente imunoestimulador é um trap TGF-B.

[0454]Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é uma vacina contra um antígeno tumoral. Qualquer antígeno adequado pode ser alvejado pela vacina fornecida, desde que esteja presente em um tumor tratado pelos métodos aqui fornecidos. Em alguns aspectos, o antígeno tumoral é um antígeno tumoral que é superexpressado em comparação com seus níveis de expressão em tecido normal. Em alguns aspectos, o antígeno tumoral é selecionado de antígeno do câncer de testículo, antígeno de diferenciação, NY-ESO-1, MAGE-A1, MART e combinações destes.

[0455]Qutros exemplos de agentes terapêuticos adicionais incluem um taxano (por exemplo, paclitaxel ou docetaxel); um agente de platina (por exemplo, carboplatina, oxaliplatina e/ou cisplatina); um inibidor de topoisomerase (por exemplo, irinotecano, topotecano, etoposídeo e/ou mitoxantrona); ácido folínico (por exemplo, leucovorina); ou um inibidor metabólico de nucleosídeo (por exemplo, fluorouracil, capecitabina e/ou gencitabina). Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é ácido folínico, 5-fluorouracila e/ou oxaliplatina. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é 5-fluorouracila e irinotecano. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um taxano e um agente de platina. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é paclitaxel e carboplatina. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é pemetrexato. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um terapêutico direcionado tal como um agente direcionado a EGFR, RAF ou MEK.

[0456]Q agente terapêutico adicional pode ser administrado por qualquer meio adequado. Em algumas modalidades, uma ABP aqui fornecida e o agente terapêutico adicional estão incluídos na mesma composição farmacêutica. Em algumas

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134/166 modalidades, uma ABP aqui fornecida e o agente terapêutico adicional estão incluídos em composições farmacêuticas diferentes.

[0457]Em modalidades onde uma ABP aqui fornecida e o agente terapêutico adicional estão incluídos em composições farmacêuticas diferentes, a administração da ABP pode ocorrer antes, simultaneamente e/ou após a administração do agente terapêutico adicional. Em alguns aspectos, a administração de uma ABP aqui fornecida e do agente terapêutico adicional ocorre dentro de cerca de um mês um do outro. Em alguns aspectos, administração de uma ABP aqui fornecida e do agente terapêutico adicional ocorre dentro de cerca de uma semana um do outro. Em alguns aspectos, administração de uma ABP aqui fornecida e do agente terapêutico adicional ocorre dentro de cerca de um dia um do outro. Em alguns aspectos, administração de uma ABP aqui fornecida e do agente terapêutico adicional ocorre dentro de cerca de algumas horas um do outro. Em alguns aspectos, administração de uma ABP aqui fornecida e do agente terapêutico adicional ocorre dentro de cerca de uma hora um do outro.

[0458]Em um aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-hTIGIT para tratar ou prevenir câncer em um sujeito, em que a composição é administrada em combinação com um anticorpo contra Tim-3, 4-1 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou OX40L, em que o anticorpo anti-hTIGIT compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 32, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 40, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 54, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71. Em um aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-hTIGIT para tratar ou prevenir câncer em um sujeito, em que a composição é administrada em combinação com um anticorpo contra Tim-3, 41 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou QX40L, em que o anticorpo anti-hTIGIT compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 13 e uma

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135/166 sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em um aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-hTIGIT para tratar ou prevenir câncer em um sujeito, em que a composição é administrada em combinação com um anticorpo contra Tim-3, 41 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou OX40L, em que o anticorpo anti-hTIGIT compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 99 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

[0459]Em um aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo anti-hTIGIT para o uso no tratamento ou prevenção de câncer em um sujeito, em que o anticorpo anti-hTIGIT é administrado em combinação com um anticorpo contra Tim-3, 41 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou OX40L, em que o anticorpo anti-hTIGIT compreende uma CDR-H3 da SEQ ID NO: 32, uma CDR-H2 da SEQ ID NO: 40, uma CDR-H1 da SEQ ID NO: 54, uma CDR-L3 da SEQ ID NO: 64, uma CDR-L2 da SEQ ID NO: 68 e uma CDR-L1 da SEQ ID NO: 71. Em um aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo anti-hTIGIT para o uso no tratamento ou prevenção de câncer em um sujeito, em que o anticorpo anti-hTIGIT é administrado em combinação com um anticorpo contra Tim-3, 41 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou OX40L, em que o anticorpo anti-hTIGIT compreende uma sequência Vh da SEQ ID NO: 13 e uma sequência Vl da SEQ ID NO: 26. Em um aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo anti-hTIGIT para o uso no tratamento ou prevenção de câncer em um sujeito, em que o anticorpo antihTIGIT é administrado em combinação com um anticorpo contra Tim-3, 41 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou OX40L, em que o anticorpo anti-hTIGIT compreende uma cadeia pesada da SEQ ID NO: 99 e uma cadeia leve da SEQ ID NO: 92.

9. Métodos Diagnósticos [0460]Também são fornecidos métodos para detectar a presença de TIGIT em células de um sujeito. Tais métodos podem ser utilizados, por exemplo, para prever e avaliar a capacidade de resposta ao tratamento com uma ABP aqui fornecida.

[0461 ]Em algumas modalidades, uma amostra de sangue é obtida de um

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136/166 sujeito e a fração de células expressando TIGIT é determinada. Em alguns aspectos, a quantidade relativa de TIGIT expressado por tais células é determinada. A fração de células expressando TIGIT e a quantidade relativa de TIGIT expressado por tais células pode ser determinada por qualquer método adequado. Em algumas modalidades, a citometria de fluxo é utilizada para fazer tais medições. Em algumas modalidades, a triagem de célula auxiliada por fluorescência (FACS) é utilizada para fazer tal medição. Ver, Li et al., J. Autoimmunity, 2003, 21: 83 - 92 para métodos de avaliar a expressão de TIGIT no sangue periférico.

10. Kits [0462]Também fornecido são kits compreendendo as ABPs aqui fornecidas. Os kits podem ser utilizados para o tratamento, prevenção, e/ou diagnóstico de uma doença ou transtorno, como aqui descrito.

[0463]Em algumas modalidades, o kit compreende um recipiente e um rótulo ou folheto informativo ou associado com o recipiente. Recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas e sacolas de solução IV. O recipientes pode ser formado de uma variedade de materiais, tais como vidro ou plástico. O recipiente detém uma composição que é por si própria ou quando combinada com uma outra composição, eficaz para tratar, prevenir e/ou diagnosticar uma doença ou transtorno. O recipiente pode ter uma porta de acesso estéril. Por exemplo, se o recipiente for uma sacola ou frasco de solução intravenosa, pode ter uma porta que pode ser perfurada. Pelo menos um agente ativo na composição é uma ABP aqui fornecida. O rótulo ou folheto informativo indica que a composição é utilizada para tratar a condição selecionada.

[0464]Em algumas modalidades, o kit compreende (a) um primeiro recipiente com uma primeira composição contida nele, em que a primeira composição compreende uma ABP aqui fornecida; e (b) um segundo recipiente com uma segunda composição contida nele, em que a segunda composição compreende um agente

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137/166 terapêutico. O kit nesta modalidade da invenção pode compreender um folheto informativo indicando que as composições podem ser utilizadas para tratar uma condição particular.

[0465]Alternativa ou adicionalmente, o kit pode compreender um segundo (ou terceiro) recipiente compreendendo um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em alguns aspectos, o excipiente é um tampão. O kit pode incluir outros materiais desejáveis de um ponto de vista comercial e de usuário, incluindo filtros, agulgas e seringas.

EXEMPLOS [0466]A seguir são exemplos de métodos e composições da invenção. É entendido que várias outras modalidades podem ser praticadas, fornecendo a descrição geral aqui fornecida.

Exemplo 1: Análise mutacional para determinação de epítopo

Varredura de Alanina [0467]Para identificar o epítopo para ligação de MAB10 ao TIGIT humano, 18 mutações de ponto único de alanina foram feitas. As proteínas foram expressadas em células HEK-293, secretadas como proteína solúvel, purificadas com resina onNi-NTA e caracterizadas por SDS-PAGE. Ligação foi avaliada por Interferemetria de BioCamada (BLI) utilizando a plataforma Octet. MAB10 foi capturada em sensores de Fc anti-humano, lavada e exposta ao TIGIT humano do tipo selvagem monomérico ou a uma de uma seleção de mutantes de ponto. Os resíduos considerados parte da epítopo de ligação demonstraram ligação reduzida (por exemplo, uma Kd mais do que 5 vezes mais pobre do que aquela de ligação ao TIGIT humano do tipo selvagem). A substituição de alanina em resíduos Q56, N58, L65, I68, N70, L73, H76, 177 e P79 resultou em ligação reduzida. A substituição de alanina em resíduos M23, T24, T55, Q62, S78, S80, K82, Y113 e P114 não resultou em ligação reduzida.

[0468]Para identificar o epítopo para ligação de MAB2, MAB15 e MAB21 ao

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TIGIT humano, a ligação de 7 mutações de ponto único de alanina foi avaliada utilizando BLI como descrito no parágrafo precedente.

[0469]Para MAB2, a substituição de alanina em resíduos Q56 e I77 resultou em ligação reduzida, e a substituição de alanina em resíduos I68, L73, H76, S78 e P79 não resultou em ligação reduzida.

[0470]Para MAB15, a substituição de alanina em resíduos Q56, I68, L73, H76 e I77 resultou em ligação reduzida, e a substituição de alanina em resíduos S78 e P79 não resultou em ligação reduzida.

[0471]Para MAB21, a substituição de alanina em resíduos Q56, I68, L73 e I77 resultou em ligação reduzida, e a substituição de alanina em resíduos H76, S78 e P79 não resultou em ligação reduzida.

Espectrometria de Massas [0472]Para identificar o epítopo das amostras de TIGIT humano de ligação a MAB10, MAB10 purificadas e TIGIT HIS humano, foram submetidas à CovalX (Saugus, MA EUA) para análise por espectrometria de massas utilizando uma abordagem de reticulação que permite a detecção de interações não covalentes. A MAB10 e o TIGIT HIS humano foram incubados com reticuladores deuterados e submetidos a divagem multi-enzimática. Após o enriquecimento dos peptídeos reticulados, as amostras foram analisadas por espectrometria de massas de alta resolução. A proteólise com tripsina e elastase não produziu nenhum peptídeo reticulado, enquanto a proteólise com quimotripsina, ASP-N e termolisina detectou pelo menos um peptídeo reticulado, para um total de 11 peptídeos reticulados. Os resultados indicam que o epítopo de ligação inclui resíduos que foram reticulados. Estes incluem resíduos em duas regiões, uma incluindo os resíduos S78 e R84 e outra incluindo os resíduos T117, S129 e S130.

Método cristalográfico pata determinação de epítopo [0473]O epítopo de ligação do MAB10 também foi identificado através de

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139/166 estudos cristalográficos. O Fab MAB10 foi complexado com TIGIT humano, purificado por cromatografia de exclusão por tamanho e concentrado até 10 mg/ml. Os cristais foram crescidos a partir de PEG4000 a 14 %, MES a 0,1 M, pH 6, hidrato de dinucleotídeo de p-nicotinamida adenina 10 mM de adenina, n-dodecil-p-D-maltosídeo a 0,5 %. Os dados de raios-X foram coletados nos Laboratórios Nacionais de Argonne (GM/CA CAT 23ID-D) e processados utilizando o CCP4 (Projeto Computacional Colaborativo N² 4, Software para Cristalografia Macromolecular de Raios-X) e Phenix (Ambiente Hierárquico para Python Integrado para Xtallografia Integrada). ) Os resíduos TIGIT a uma distância de contato de 3,8A da cadeia pesada e leve foram considerados parte do epítopo de ligação e incluem T55, Q56, L65, D65, L73, H76, I77, S78, P79 e H111.

Exemplo 2: Terapias de Combinação Compreendendo ABPs Anti-TIGIT e Imunoterapêuticos [0474]Um ensaio de linfoproliferação foi utilizado para testar as respostas das células T em células T específicas para citomegalovírus (CMV+). PBMCs de doadores individuais que foram rastreados quanto à reatividade ao antígeno CMV foram adquiridos na Astarte Biologies (Bothell, WA). Os lisados celulares de células infectadas com CMV também foram adquiridos na Astarte Biologies. As PBMCs foram plaqueadas a 5 x 105 células/poço e a estimulação específica ao antígeno foi realizada pela adição de lisado celular, o que estimula as células T CMV+ na amostra, a 1 mg/ml, 0,1 mg/ml ou 0,01 mg/ml. Os controles utilizados foram células não estimuladas, células estimuladas sem tratamento com imunoterapia e células estimuladas com ambos os anticorpos de controle para o grupo de tratamento combinado. Os grupos experimentais foram tratados com MAB10 (20 pg/ml) juntamente com o anticorpo controle para o agente imunoterapêutico adicional, um agente imunoterapêutico adicional com anticorpo controle lgG4 (como controle para MAB 10) (consulte a Tabela 6) ou uma combinação de MAB10 e o agente terapêutico adicional. Cada tratamento

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140/166 foi realizado em células estimuladas com todas as três concentrações de lisado. A dosagem do imunoterapêutico foi determinada com base em uma mistura de doses funcionais relatadas, valores de ED50 e dados empíricos. As células foram cultivadas por quatro dias, e os sobrenadantes foram coletados e analisados quanto à produção do citocina efetor TNF como quantificação da ativação.

Tabela 6.

Imunoterapêutico	Dose	Fonte	CAT#	Clone	Função
aTIM-3	25 pg/mF	eBioscience®	16-3109-85	F38-2E2	Antagonista
aTGFp	10 pg/mF	R&D Systems®	MAB1835	1D11	Antagonista
OX40F	500 ng/mF	R&D Systems®	1054-OX-010	N/A	Agonista
a41BB	30 pg/mF	R&D Systems®	AF838	Policlonal	Agonista
aFAG-3	20 pg/mF	Novus Biologicals®	NBP1-97657	17B4	Antagonista
PD-1	10 pg/mF	Potenza Therapeutics™	N/A	pembrolizumabe	Antagonista
aCTFA-4	20 pg/mF	BioLegend®	349902	F3D10	Antagonista

Resultados [0475]Resultados são mostrados na Figura 1 como a seguir: células foram estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e pembrolizumabe individualmente ou em combinação (Figuras 1A-1C, respectivamente); células estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e anticorpo anti-TIM-3, individualmente ou em combinação (Figuras 1D-1F); células estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e anticorpo anti-41 BB, individualmente ou em combinação (Figuras 1G-11); e células estimuladas com 1 pg/ml, 0,1 pg/ml ou 0,01 pg/ml de lisado de CMV e tratadas com MAB10 e rhOX40L, individualmente ou em combinação (Figuras 1J-1L). Cada tratamento de combinação compreendendo pembrolizumabe, anticorpo anti-TIM-3, anticorpo anti-41 BB ou ligante 0X40 mostrou um efeito aditivo na ativação imune (como medido por produção de TNFa) em comparação com os tratamentos individuais sozinhos.

[0476]No caso de tratamento com anti-LAG-3 e anti-TGF3, os tratamentos individuais dominaram os resultados e não foi possível determinar se houve efeitos

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141/166 aditivos ou sinérgicos neste ensaio. Tratamento com anti-CTLA-4 sozinho não resultou em uma resposta imune aumentada, e assim um diferente ensaio deve ser utilizado para determinar quaisquer efeitos combinatoriais potenciais.

[0477]Outra determinação da capacidade de combinações de MAB10 para ativar células foi realizada utilizando células tumorais dissociadas (DTCs, Conversant Bio) de pacientes com câncer sem tratamento prévio. DTCs são uma suspensão celular sozinha contendo todas as células de um espécime tumoral incluindo células imunes, células tumorais e células de suporte.

[0478]DTCs de um homem de 50 anos com melanoma em estágio IV foram colocados em cultura e estimulados com um peptídeo OVA de controle (3 pg/ml, Miltenyi Biotec, Cat# 130-099-771) ou uma mistura peptídica de melanoma consistente de 1 pg/mL de NY-ESO-1 + 1 pg/mL de MelanA/MART-1 + 1 pg/mL de gplOO (Miltenyi Biotec, Cats 130-095-381, 130-094-477 e 130-094-450, respectivamente). Uma MAB22 de anticorpo anti-GITR (ver, por exemplo, Pedido de Patente Internacional copendente N² PCT/US2017/062443), pembrolizumabe, e MAB10 foram adicionadas às amostras estimuladas por peptídeo, sozinhas ou em combinações de pares. Como um controle, as quantidades iguais de anticorpos de controle de isotipo foram utilizados. Para a estimulação de anticorpo único, a quantidade total de anticorpo foi mantida constante suplementando-se com o anticorpo controle de isotipo. MAB10 e pembrolizumabe foram utilizados em uma concentração final de 10 pg/ml, e MAB22 foi utilizada em uma concentração final de 1 pg/ml. Para avaliar a ativação, as células foram cultivadas por 7 dias, os sobrenadantes foram coletados, e o nível de IFNy produzido foi quantificado utilizando AlphaLISA® (PerkinElmer). A significância estatística foi calculada utilizando One-Way ANOVA com múltiplas comparações.

Resultados [0479]Como pode ser observado em Figura 2A, cada tratamento de terapia de

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142/166 combinação resultou em maior estimulação de produção de IFNy do que o tratamento com agentes únicos sozinhos, sugerindo um efeito aditivo.

[0480]Em seguida, DTCs de uma mulher com 80 anos de idade com câncer de pulmão de células não pequenas em estágio Ila (NSCLC) foram colocadas em cultura e deixadas sem estimulação ou foram estimuladas com anticorpos anti-CD3+ anti-CD28 solúveis (Becton Dickenson Cat#s 555336 e 555726, respectivamente) por dois dias. Como um controle, uma quantidade igual de um anticorpo controle de isotipo (lgG4) foi utilizada. Para a estimulação de anticorpo único, a quantidade total de anticorpo foi mantida constante suplementando-se as amostras com o anticorpo controle de isotipo. MAB10 e pembrolizumabe foram utilizados em uma concentração final de 10 mg/ml. Para avaliar a ativação, Brefeldina A (EBioscience, Cat# 00-450651) foi adicionada às células durante as últimas 5 horas de cultura e análise de FACS e a quantificação da produção de IFNy em células T CD4+ e CD8+ foi realizada utilizando coloração de citocina intracelular. A significância estatística foi calculada utilizando One-Way ANOVA com múltiplas comparações.

Resultados [0481]Como pode ser observado na Figura 2B, o tratamento de células com a combinação de MAB10 e pembrolizumabe resultou em um efeito aditivo sobre o tratamento com agente único sozinho, como medido por produção de IFNy em ambas células T CD4+ e CD8+.

Exemplo 3: Terapias de Combinação Compreendendo ABPs Anti-TIGIT e Imunoterapêuticos In Vivo [0482]De modo a determinar se uma combinação de um anticorpo anti-TIGIT e um anticorpo anti-neuropilin-1 fornece atividade anti-tumoral melhorada sobre os agentes únicos sozinhos in vivo, a combinação foi testada no modelo de camundongo com câncer de mama EMT6 (Charles River Labs).

[0483]Anticorpos anti-NRP-1 são descritos, por exemplo, em Pedido de

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Patente Internacional copendente hP PCT/US2017/067782, depositado em 21 de dezembro de 21, 2017, que também divulga um painel de versões murino dos anticorpos anti-NRP-1, que foram testados como anticorpos de lgG2a de camundongo quiméricos contendo a mutação N297A que abole a função efetora de ADCC e CDC.

[0484]De modo a testar a combinação de anticorpos anti-NRP e anti-TIGIT em camundongos, a versão murino do MAB23 de anticorpo anti-human-NRP-1 (versão murino “mMAB23”, SEQ ID NOS: 143-144, Apêndice A) foi utilizada em combinação com o anticorpo contra TIGIT murino, 1B4 (camundongo lgG1, Célula Essenciais). Um anticorpo controle utilizado foi MPC-11 de lgG2b de camundongo (BioXCell, Cat#BE0086).

Modelo de Tumor EMT6 [0485]Camundongos Balb/c fêmeas foram inoculados com 1 χ 10⁵ células EMT6. Os camundongos foram randomizados com base no volume do tumor em 12 grupos quando os tumores atingiram um tamanho médio de 80 a 120 mm³. O tratamento começou no mesmo dia da randomização (tratamento terapêutico). Os anticorpos foram administrados por injeções intraperitoneais (i.p.). Tumores e pesos corporais foram medidos três vezes por semana. O ponto final do estudo foi definido como o dia 40 ou o volume médio do tumor de 2.000 mm³, dependendo do grupo de tratamento.

Resultados [0486]No estudo do tumor EMT6 de camundongo, o tratamento combinado de mMAB23 e 1B4 inibiu o crescimento do tumor em maior grau do que seus controles de agente único (Figura 3A-3B). O tratamento de combinação compreendendo 250 pg de mMAB23 de murino + 250 pg de 1B4 produziu 57,4% de TGI (inibição do crescimento do tumor), e o tratamento de combinação compreendendo 500 pg de mMAB23 + 500 pg de 1B4 produziu 69,4% de TGI em comparação com o tratamento com anticorpo controle. O tratamento combinado de mMAB23 + 1B4 em ambas as

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144/166 concentrações foi estatisticamente significativo após 14 dias de tratamento (p <0,05). O tratamento com anti-PD1 produziu 60,2 % de TGI no dia 14. Avaliação do controle, curvas de aPD-1 de camundongo anti- camundongo (clone RMP1-14), agente único (250 pg) e curvas de combinação (250 pg cada) ao longo do tempo utilizando uma análise de modelos mistos (semelhante à RM ANOVA) mostrou que os tratamentos combinados aPD-1 e mMAB239 + 1B4 foram significativamente diferentes do grupo controle e dos dois agentes isolados (p <0,03).

[0487]Uma análise de gráfico de aranha das curvas de crescimento de tumores individuais de todos os camundongos tratados mostrou um atraso acentuado do crescimento do tumor em camundongos tratados com a combinação de mMAB23 e 1B4 (Figura 3C-3D). Os volumes tumorais individuais de EMT6 para cada um dos 8 camundongos por grupo são mostrados para todos os grupos de tratamento (indicados na parte superior de cada gráfico). As células tumorais de camundongo EMT6 foram injetadas em camundongos BALB/c fêmeas e randomizadas com um tamanho médio de 80 a 120 mm³. O tratamento começou na randomização e os anticorpos indicados foram administrados intraperitonealmente a 1000 pg/animal (controle lgG2b e 1B4), 500 pg/animal (mMAB23 e 1B4), 250 pg/animal (mMAB23 e 1B4) ou 200 pg/animal (aPD-1). As setas pretas indicam os dias de tratamento. O ponto final do estudo foi definido como o dia 40 ou o volume médio do tumor de 2.000 mm³, dependendo do grupo de tratamento.

[0488]Estes dados demonstram que a combinação de mMAB23 e 1B4 fornece uma melhor inibição do crescimento antitumoral sobre os agentes únicos. Os camundongos tratados com esta combinação exibiram uma inibição acentuada do crescimento do tumor (57,4 % de TGI e 69,4 % de TGI para 250 pg e 500 pg de cada anticorpo, respectivamente) que foi semelhante ao tratamento anti-PD-1 (60,2 % de TGI).

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

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145/166 [0489]As divulgações completas de todas as publicações de patentes e não patentes citadas aqui são incorporadas por referência na sua totalidade para todos os fins.

OUTRAS MODALIDADES [0490]A divulgação estabelecida acima pode abranger várias invenções distintas com utilidade independente. Embora cada uma dessas invenções tenha sido divulgada em sua(s) forma(s) prefehda(s), as modalidades específicas da mesma, conforme divulgadas e ilustradas neste documento, não devem ser consideradas em um sentido limitative, porque inúmeras variações são possíveis. O objeto das invenções inclui todas as combinações e subcombinações novas e não óbvias dos vários elementos, características, funções e/ou propriedades aqui divulgados. As reivindicações a seguir apontam particularmente certas combinações e subcombinações consideradas novas e não óbvias. As invenções incorporadas em outras combinações e subcombinações de recursos, funções, elementos e/ou propriedades podem ser reivindicadas neste pedido, em pedidos que reivindicam prioridade deste pedido ou em pedidos relacionados. Tais reivindicações, sejam direcionadas a uma invenção diferente ou à mesma invenção, e com escopo mais amplo, mais estreito, igual ou diferente em comparação com as reivindicações originais, também são consideradas como incluídas no objeto das invenções da presente divulgação.

APÊNDICE A: TABELA DE REFERÊNCIA DE SEQUÊNCIAS

SEQ ID NO	Molécula	Região	SEQUÊNCIA
1	hTIGIT		MRWCLLLIWAQGLRQAPLASGMMTGTIETTGNISAEKGGSIILQCHLSS TTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRVAPGPGLGLTLQ SLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLESSVAEHGARFQIPLLGA MAATLVVICTAVIVWALTRKKKALRIHSVEGDLRRKSAGQEEWSPSAP SPPGSCVQAEAAPAGLCGEQRGEDCAELHDYFNVLSYRSLGNCSFFT ETG
2	cTIGIT		MRWCLFLIWAQGLRQAPLASGMMTGTIETTGNISAKKGGSVILQCHLS STMAQVTQVNWEQHDHSLLAIRNAELGWHIYPAFKDRVAPGPGLGLT LQSLTMNDTGEYFCTYHTYPDGTYRGRIFLEVLESSVAEHSARFQIPLL GAMAMMLVVICIAVIWVVLARKKKSLRIHSVESGLQRKSTGQEEQIPS

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			APSPPGSCVQAEAAPAGLCGEQQGDDCAELHDYFNVLSYRSLGSCSF FTETG
3	mTIGIT		MHGWLLLVWVQGLIQAAFLATGATAGTIDTKRNISAEEGGSVILQCHFS SDTAEVTQVDWKQQDQLLAIYSVDLGWHVASVFSDRVVPGPSLGLTF QSLTMNDTGEYFCTYHTYPGGIYKGRIFLKVQESSVAQFQTAPLGGTM AAVLGLICLMVTGVTVLARKKSIRMHSIESGLGRTEAEPQEWNLRSLSS PGSPVQTQTAPAGPCGEQAEDDYADPQEYFNVLSYRSLESFIAVSKT G
4	MAB1-lgG4	VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGATFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSS
5	MAB2-lgG4	VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSKYYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSS
6	MAB3-lgG4	VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSS
7	MAB4-lgG4	VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGGAWAFDPWGQGTL VTVSS
8	MAB5-lgG4	VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSS
9	MAB6-lgG4	VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIESGSYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGGTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSS
10	MAB7-lgG4	VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGVYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFD I WGQGTMVTVSS
11	MAB8-lgG4	VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIASGSYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGQTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFD I WGQGTMVTVSS
12	MAB9-lgG4	VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFD I WGQGTMVTVSS
13	MAB10-lgG4	VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRATISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSS
14	MAB11-lgG4	VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSS
15	MAB12-lgG4	VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTASGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSS
16	MAB13-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSS
17	MAB14-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYMHWVRQAPGQGLE

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			WMGIINPSLGLTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSS
18	MAB15-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFREYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSIGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSS
19	MAB16-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFREYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSIGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGALDIWGQGTMVTVSS
20	MAB17-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYIHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGALDIWGQGTMVTVSS
21	MAB18-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSS
22	MAB19-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WMGVINPSMGATSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAV YYCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSS
23	MAB20-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WVGIINPSMGATSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSS
24	MAB21-lgG4	VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WMGIINPSMGATSYTQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSS
25	MAB1-lgG4	VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIK
25	MAB2-lgG4	VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIK
25	MAB3-lgG4	VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIK
25	MAB4-lgG4	VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIK
25	MAB5-lgG4	VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIK
26	MAB6-lgG4	VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIK
26	MAB7-lgG4	VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIK
26	MAB8-lgG4	VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIK
26	MAB9-lgG4	VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL

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			IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIK
26	MAB10-lgG4	VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIK
26	MAB11-lgG4	VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIK
26	MAB12-lgG4	VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIK
27	MAB13-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIK
27	MAB14-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIK
27	MAB15-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIK
27	MAB16-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIK
27	MAB17-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIK
27	MAB18-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIK
28	MAB19-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRHLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYIVFPWT FGGGTKVEIK
28	MAB20-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRHLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYIVFPWT FGGGTKVEIK
28	MAB21-lgG4	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRHLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYIVFPWT FGGGTKVEIK
29	MAB1-lgG4	H3-IMGT	ARDANYYGSAWAFDP
29	MAB2-lgG4	H3-IMGT	ARDANYYGSAWAFDP
29	MAB3-lgG4	H3-IMGT	ARDANYYGSAWAFDP
30	MAB4-lgG4	H3-IMGT	ARDANYYGGAWAFDP
29	MAB5-lgG4	H3-IMGT	ARDANYYGSAWAFDP
31	MAB6-lgG4	H3-IMGT	ARDGVLTLNKRSFDI
31	MAB7-lgG4	H3-IMGT	ARDGVLTLNKRSFDI
31	MAB8-lgG4	H3-IMGT	ARDGVLTLNKRSFDI
31	MAB9-lgG4	H3-IMGT	ARDGVLTLNKRSFDI

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 158/201

149/166

32	MAB10-lgG4	H3-IMGT	ARDGVLALNKRSFDI
32	MAB11-lgG4	H3-IMGT	ARDGVLALNKRSFDI
32	MAB12-lgG4	H3-IMGT	ARDGVLALNKRSFDI
33	MAB13-lgG4	H3-IMGT	ARGGRTTWIGAFDI
33	MAB14-lgG4	H3-IMGT	ARGGRTTWIGAFDI
33	MAB15-lgG4	H3-IMGT	ARGGRTTWIGAFDI
34	MAB16-lgG4	H3-IMGT	ARGGRTTWI GALDI
34	MAB17-lgG4	H3-IMGT	ARGGRTTWI GALDI
33	MAB18-lgG4	H3-IMGT	ARGGRTTWIGAFDI
35	MAB19-lgG4	H3-IMGT	ARLHVSGSYYPAYLDY
35	MAB20-lgG4	H3-IMGT	ARLHVSGSYYPAYLDY
35	MAB21-lgG4	H3-IMGT	ARLHVSGSYYPAYLDY
36	MAB1-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGATFYNPSLKS
37	MAB2-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTFYNPSLKS
37	MAB3-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTFYNPSLKS
37	MAB4-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTFYNPSLKS
38	MAB5-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTFYNPSLKG
39	MAB6-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGGTYYNPSLKS
40	MAB7-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTYYNPSLKS
41	MAB8-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGQTYYNPSLKS
40	MAB9-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTYYNPSLKS
40	MAB10-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTYYNPSLKS
40	MAB11-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTYYNPSLKS
40	MAB12-lgG4	H2-Kabat	SIYYSGSTYYNPSLKS
42	MAB13-lgG4	H2-Kabat	IINPSLGLTSYAQKFQG
42	MAB14-lgG4	H2-Kabat	IINPSLGLTSYAQKFQG
43	MAB15-lgG4	H2-Kabat	IINPSIGLTSYARKFQG
43	MAB16-lgG4	H2-Kabat	IINPSIGLTSYARKFQG
44	MAB17-lgG4	H2-Kabat	IINPSLGLTSYARKFQG
44	MAB18-lgG4	H2-Kabat	IINPSLGLTSYARKFQG
45	MAB19-lgG4	H2-Kabat	VINPSMGATSYAQKFQG
46	MAB20-lgG4	H2-Kabat	IINPSMGATSYAQKFQG
47	MAB21-lgG4	H2-Kabat	IINPSMGATSYTQKFRG
48	MAB1-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSITSSSYYWG
49	MAB2-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSISSSKYYWG
50	MAB3-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSISSTSHYWG
50	MAB4-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSISSTSHYWG
50	MAB5-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSISSTSHYWG
51	MAB6-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSIESGSYYWG
52	MAB7-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSIESGVYYWG
53	MAB8-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSIASGSYYWG
54	MAB9-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSIESGLYYWG
54	MAB10-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSIESGLYYWG
54	MAB11-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSIESGLYYWG
54	MAB12-lgG4	H1-Chothia + Kabat	GSIESGLYYWG
55	lgG4	Constante,	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 159/201

150/166

		estabilizadora de dobradiça S228P	GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDK RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVW DVSQEDPEVQFNVWVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
56	lgG4	Constante S228P, N297A, C terminal Lys deletadas	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDK RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVW DVSQEDPEVQFNVWVDGVEVHNAKTKPREEQFASTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
57	Igd	Constante (alotipo G1m(3))	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK RVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
58	MAB13-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFGNYYMH
59	MAB14-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFPAYYMH
60	MAB15-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFREYYMH
60	MAB16-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFREYYMH
61	MAB17-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFPAYYIH
59	MAB18-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFPAYYMH
62	MAB19-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFTSHYMG
62	MAB20-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFTSHYMG
62	MAB21-lgG4	H1-Chothia + Kabat	YTFTSHYMG
63	MAB1-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHFNLPT
63	MAB2-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHFNLPT
63	MAB3-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHFNLPT
63	MAB4-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHFNLPT
63	MAB5-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHFNLPT
64	MAB6-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHTVRPPLT

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 160/201

151/166

64	MAB7-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHTVRPPLT
64	MAB8-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHTVRPPLT
64	MAB9-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHTVRPPLT
64	MAB10-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHTVRPPLT
64	MAB11-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHTVRPPLT
64	MAB12-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQHTVRPPLT
65	MAB13-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYWWPPLT
65	MAB14-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYWWPPLT
65	MAB15-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYWWPPLT
65	MAB16-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYWWPPLT
65	MAB17-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYWWPPLT
65	MAB18-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYWWPPLT
66	MAB19-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYIVFPWT
66	MAB20-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYIVFPWT
66	MAB21-lgG4	L3- Chothia/Kabat/IMG T	QQYIVFPWT
67	MAB1-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	DASNRAT
67	MAB2-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	DASNRAT

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 161/201

152/166

67	MAB3-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	DASNRAT
67	MAB4-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	DASNRAT
67	MAB5-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	DASNRAT
68	MAB6-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASSRAT
68	MAB7-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASSRAT
68	MAB8-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASSRAT
68	MAB9-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASSRAT
68	MAB10-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASSRAT
68	MAB11-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASSRAT
68	MAB12-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASSRAT
69	MAB13-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB14-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB15-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB16-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB17-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB18-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB19-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB20-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
69	MAB21-lgG4	L2 - Chothia/Kabat	GASTRAT
70	MAB1-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSYLA
70	MAB2-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSYLA
70	MAB3-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSYLA
70	MAB4-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSYLA
70	MAB5-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSYLA
71	MAB6-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSSYLA
71	MAB7-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSSYLA
71	MAB8-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSSYLA
71	MAB9-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSSYLA
71	MAB10-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSSYLA
71	MAB11-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSSYLA
71	MAB12-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSSYLA
72	MAB13-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB14-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB15-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB16-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB17-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB18-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB19-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB20-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
72	MAB21-lgG4	L1 - Chothia/Kabat	RASQSVSSNLA
73	SEC1	Cadeia Pesada de S228P de lgG4 Humana	EVQLVESGGGLTQPGKSLKLSCEASGFTFSSFTMHWVRQSPGKGLE WVAFIRSGSGIVFYADAVRGRFTISRDNAKNLLFLQMNDLKSEDTAMY YCARRPLGHNTFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 162/201

153/166

			KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSLGK
74	SEC1	Região Variável de Cadeia Pesada	EVQLVESGGGLTQPGKSLKLSCEASGFTFSSFTMHWVRQSPGKGLE WVAFIRSGSGIVFYADAVRGRFTISRDNAKNLLFLQMNDLKSEDTAMY YCARRPLGHNTFDSWGQGTLVTVSS
75	SEC1	Cadeia Kappa de SEC1 Humana	DIVMTQSPSSLAVSPGEKVTMTCKSSQSLYYSGVKENLLAWYQQKPG QSPKLLIYYASIRFTGVPDRFTGSGSGTDYTLTITSVQAEDMGQYFCQQ GINNPLTFGDGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
76	SEC1	Região Variável de Cadeia Leve	DIVMTQSPSSLAVSPGEKVTMTCKSSQSLYYSGVKENLLAWYQQKPG QSPKLLIYYASIRFTGVPDRFTGSGSGTDYTLTITSVQAEDMGQYFCQQ GINNPLTFGDGTKLEIK
77	SEC1	Cadeia Pesada de N297A de lgG2a de Camundongo	EVQLVESGGGLTQPGKSLKLSCEASGFTFSSFTMHWVRQSPGKGLE WVAFIRSGSGIVFYADAVRGRFTISRDNAKNLLFLQMNDLKSEDTAMY YCARRPLGHNTFDSWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSS VTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTV TSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLG GPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHT AQTQTHREDYASTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIER TISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWT NNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVH EGLHNHHTTKSFSRTPGK
74	SEC1	Região Variável de Cadeia Pesada	EVQLVESGGGLTQPGKSLKLSCEASGFTFSSFTMHWVRQSPGKGLE WVAFIRSGSGIVFYADAVRGRFTISRDNAKNLLFLQMNDLKSEDTAMY YCARRPLGHNTFDSWGQGTLVTVSS
78	SEC1	Cadeia Kappa de Camundongo	DIVMTQSPSSLAVSPGEKVTMTCKSSQSLYYSGVKENLLAWYQQKPG QSPKLLIYYASIRFTGVPDRFTGSGSGTDYTLTITSVQAEDMGQYFCQQ GINNPLTFGDGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNF YPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEY ERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
76	SEC1	Região Variável de Cadeia Leve	DIVMTQSPSSLAVSPGEKVTMTCKSSQSLYYSGVKENLLAWYQQKPG QSPKLLIYYASIRFTGVPDRFTGSGSGTDYTLTITSVQAEDMGQYFCQQ GINNPLTFGDGTKLEIK
79	MAB1	S228P de lgG4 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGATFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSES TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
80	MAB1	IgGIde comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGATFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 163/201

154/166

			GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
81	MAB1	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
82	MAB2	S228P de lgG4 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSKYYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSES TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
83	MAB2	IgGIde comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSKYYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
81	MAB2	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
84	MAB3	S228P de lgG4 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSES TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
85	MAB3	lgG1 de	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 164/201

155/166

		comprimento total	WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
81	MAB3	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
86	MAB4	S228P de lgG4 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGGAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
87	MAB4	lgG1 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGGAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
81	MAB4	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
88	MAB5	S228P de lgG4 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSES TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 165/201

156/166

			SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
89	MAB5	lgG1 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSHYWGWIRQPPGKGLE WIGSIYYSGSTFYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDANYYGSAWAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
81	MAB5	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQHFNLPTFG GGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
90	MAB6	S228P de lgG4 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIESGSYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGGTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
91	MAB6	lgG1 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIESGSYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGGTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
92	MAB6	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
93	MAB7	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGVYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 166/201

157/166

			SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
94	MAB7	lgG1 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGVYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
92	MAB7	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
95	MAB8	S228P de lgG4 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIASGSYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGQTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
96	MAB8	lgG1 de comprimento total	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIASGSYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGQTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
92	MAB8	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
97	MAB9	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 167/201

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			GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
98	MAB9	lgG1 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLTLNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
92	MAB9	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
99	MAB10	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRATISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
100	MAB10	lgG1 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRATISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
92	MAB10	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
101	MAB11	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 168/201

159/166

			STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
102	MAB11	lgG1 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
92	MAB11	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
103	MAB12	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTASGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
104	MAB12	lgG1 de comprimento total	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTASGGSIESGLYYWGWIRQPPGKGL EWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CARDGVLALNKRSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
92	MAB12	Kappa de comprimento total	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHTVRPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
105	MAB13	S228P de lgG4 de	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYYMHWVRQAPGQGLE

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 169/201

160/166

		comprimento total	WMGIINPSLGLTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
106	MAB13	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
107	MAB13	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
108	MAB14	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
109	MAB14	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
107	MAB14	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 170/201

161/166

			YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
110	MAB15	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFREYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSIGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
111	MAB15	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFREYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSIGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
107	MAB15	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
112	MAB16	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFREYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSIGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGALDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
113	MAB16	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFREYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSIGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGALDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
107	MAB16	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 171/201

162/166

			LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
114	MAB17	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYIHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGALDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
115	MAB17	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYIHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGALDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
107	MAB17	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
116	MAB18	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
117	MAB18	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPAYYMHWVRQAPGQGLE WMGIINPSLGLTSYARKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARGGRTTWIGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 172/201

163/166

107	MAB18	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYVVWPP LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
118	MAB19	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WMGVINPSMGATSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAV YYCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRS TSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAP EFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKG LPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
119	MAB19	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WMGVINPSMGATSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAV YYCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
120	MAB19	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRHLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYIVFPWT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
121	MAB20	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WVGIINPSMGATSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
122	MAB20	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WVGIINPSMGATSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPA PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 173/201

164/166

			DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
120	MAB20	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRHLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYIVFPWT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
123	MAB21	S228P de lgG4 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WMGIINPSMGATSYTQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
124	MAB21	lgG1 de comprimento total	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMGWVRQAPGQGLE WMGIINPSMGATSYTQKFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY YCARLHVSGSYYPAYLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPA PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
120	MAB21	Kappa de comprimento total	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRHLI YGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYIVFPWT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
125	lgG1	Constante (alotipo G1m(17,1), N297A	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
126	Kappa	Constante	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQ SGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS PVTKSFNRGEC
127	Conector		GGGGS
128 . . . 137 - l/eroutras porção desta divulgação e a versão eletrônica da listagem de sequências apresentadas em anexo.
138	mTIGIT2		MHGWLLLVWVQGLIQAAFLATAIGATAGTIDTKRNISAEEGGSVILQCH FSSDTAEVTQVDWKQQDQLLAIYSVDLGWHVASVFSDRVVPGPSLGL TFQSLTMNDTGEYFCTYHTYPGGIYKGRIFLKVQESSDDRNGLAQFQT

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 174/201

165/166

			APLGGTMAAVLGLICLMVTGVTVLARKDKSIRMHSIESGLGRTEAEPQE WNLRSLSSPGSPVQTQTAPAGPCGEQAEDDYADPQEYFNVLSYRSLE SFIAVSKTG
139	MAB22	Pesada Total	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGLGWGWIRQPPGKGLE WIGGIYESGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC AHERVRGYGDYGGHHAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCGGGGSQVQL QESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGLGWGWIRQPPGKGLEWIGGI YESGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAHERV RGYGDYGGHHAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWT VPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSLGK
140	MAB22	Leve total	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQEYATPPT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
141	MAB23	Pesada Total, S228P de lgG4	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSVAMVWVRQAPGKGLE WVSAISGSGGATYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCAKDPGYDSSRYYYSNYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPP CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRW QEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
142	MAB23	Leve total, constante kappa humana	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIY GASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYSLYTF GGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
143	mMAB23 (MAB23 com regiões de N297A de lgG2a de camundongo e constante kappa de camundongo)	Cadeia pesada,	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSVAMVWVRQAPGKGLE WVSAISGSGGATYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCAKDPGYDSSRYYYSNYGMDVWGQGTTVTVSSAKTTAPSVYPLAPV CGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLY TLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCK CPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVWDVSEDDPDVQISWF VNNVEVHTAQTQTHREDYASTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNN KDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFM PEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVER NSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

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166/166

144

mMAB23 (MAB23 com regiões de N297A de lgG2a de camundongo e constante kappa de camundongo)

Cadeia Leve,

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIY GASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYSLYTF GGGTKVEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVK WKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTC EATHKTSTSPIVKSFNRNEC

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Proteína de ligação ao antígeno isolada (ABP), CARACTERIZADA pelo fato de que se liga especificamente a um epítopo de TIGIT humano (hTIGIT; SEQ ID NO: 1) e é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloquear ligação de MAB7, MAB9, MAB10, MAB11 e MAB12 ao TIGIT humano; b) bloquear a ligação de TIGIT humano à CD155; e c) se ligar especificamente aos resíduos H76, I77, S78 e P79 de hTIGIT.
2. ABP, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) inibir a ligação de hTIGIT à CD112; b) aumentar a função de uma célula efetora T; c) aumentar a função de uma célula exterminadora natural (NK); d) diminuir o número de células T reguladoras em tecidos ou em circulação; e) suprimir uma célula T reguladora ou uma atividade de célula T reguladora; f) inibir a associação de TIGIT e CD226; e g) não se ligar especificamente a Nectina-4 (também conhecido como receptor de poliovirus tipo 4, PVRL4).
3. ABP, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que se liga especificamente a um ou mais resíduos de hTIGIT adicionais do grupo consistindo em T55, Q56, N58, L65, I68, N70, D72, L73, H111, T117, S129eS130.
4. ABP, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que se liga especificamente T55, Q56, L65, D72, L73, H76, I77, S78, P79 e H111.
5. ABP, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que não se liga especificamente aos resíduos de hTIGIT Q61, Q62, D63, Q64, Y113 ou P114.
6. ABP, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é MAB7, MAB9, MAB10, MAB11 ou MAB12.
7. Proteína de ligação ao antígeno isolada (ABP), CARACTERIZADA pelo fato de que se liga especificamente a um epítopo de TIGIT humano (hTIGIT; SEQ ID NO: 1) e é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloquear a ligação de MAB1,

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2/5

MAB2, MAB3, MAB4 e MAB5 ao TIGIT humano; b) bloquear a ligação de TIGIT humano à CD155; e c) se ligar especificamente aos resíduos Q56 e I77 de hTIGIT.
8. ABP, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADA pelo fato de que é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) inibir a ligação de hTIGIT à CD112; b) aumentar a função de uma célula efetora T; c) aumentar a função de uma célula exterminadora natural (NK); d) diminuir o número de células T reguladoras em tecidos ou em circulação; e) suprimir uma célula T reguladora ou uma atividade de célula T reguladora; f) inibir a associação de TIGIT e CD226; e g) não se ligar especificamente a Nectina-4 (também conhecido como receptor de poliovirus tipo 4, PVRL4).
9. ABP, de acordo com a reivindicação 7 ou reivindicação 8, CARACTERIZADA pelo fato de que não se liga especificamente aos resíduos de hTIGIT I68, L73, H76, S78 e P79.
10. Proteína de ligação ao antígeno isolada (ABP), CARACTERIZADA pelo fato de que se liga especificamente a um epítopo de TIGIT humano (hTIGIT; SEQ ID NO: 1) e é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloqueara ligação de MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17 e MAB18 ao TIGIT humano; b) bloquear a ligação de TIGIT humano à CD155; e c) se ligar especificamente aos resíduos de hTIGIT Q56, I68, L73, H76 e I77.
11. ABP, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADA pelo fato de que é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) inibir a ligação de hTIGIT à CD112; b) aumentar a função de uma célula efetora T; c) aumentar a função de uma célula exterminadora natural (NK); d) diminuir o número de células T reguladoras em tecidos ou em circulação; e) suprimir uma célula T reguladora ou uma atividade de célula T reguladora; f) inibir a associação de TIGIT e CD226; e g) não se ligar especificamente a Nectina-4 (também conhecido como receptor de poliovirus tipo 4, PVRL4).
12. ABP, de acordo com a reivindicação 10 ou reivindicação 11, CARACTERIZADA pelo fato de que não se liga especificamente ao resíduo S78 de

Petição 870190086775, de 04/09/2019, pág. 178/201

3/5 hTIGIT.
13. Proteína de ligação ao antígeno isolada (ABP), CARACTERIZADA pelo fato de que se liga especificamente a um epítopo de TIGIT humano (hTIGIT; SEQ ID NO: 1) e é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) bloquear MAB19, MAB20 e MAB21 ligação ao TIGIT humano; b) bloquear a ligação de TIGIT humano à CD155; e c) se ligar especificamente aos resíduos de hTIGIT Q56, I68, L73 e I77.
14. ABP, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADA pelo fato de que é capaz de pelo menos um dos seguintes: a) inibir a ligação de hTIGIT à CD112; b) aumentar a função de uma célula efetora T; c) aumentar a função de uma célula exterminadora natural (NK); d) diminuir o número de células T reguladoras em tecidos ou em circulação; e) suprimir uma célula T reguladora ou uma atividade de célula T reguladora; f) inibir a associação de TIGIT e CD226; e g) não se ligar especificamente a Nectina-4 (também conhecido como receptor de poliovirus tipo 4, PVRL4).
15. ABP, de acordo com a reivindicação 13 ou reivindicação 14, CARACTERIZADA pelo fato de que não se liga especificamente aos resíduos de hTIGIT H76, S78 e P79.
16. Método de tratar ou prevenir uma doença ou condição em um sujeito em necessidade deste, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de: (i) uma ABP do grupo consistindo em MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 e MAB21; e um ou mais de (ii) um agente imunoterapêutico adicional que bloqueia a sinalização de um receptor inibitório de uma célula imune ou um ligante desta; e (iii) agente imunoterapêutico adicional que modula sinalização do receptor co-estimulador; ou um ácido nucleico que codifica tal agente.
17. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o receptor inibitório ou ligante deste é selecionado de CTLA-4, PD-1, PD-L1,

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PD-L2, Tim-3, neuritina, BTLA, CECAM-1, CECAM-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2B4, KIR e combinações destes.
18. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o receptor co-estimulador é CD3, GITR, 0X40, ICOS, LAG-2, CD27, CD28, CD40ou4-1BB.
19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 18, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença ou condição é um câncer, e o câncer é selecionado de um tumor sólido e um tumor hematológico.
20. Método, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é um tumor sólido.
21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 20, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente imunoterapêutico adicional é um anticorpo contra Tim-3, 41 BB, GITR, PD-1 ou PD-L1 ou é 0X40.
22. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunoterapêutico adicional é MAB22.
23. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o imunoterapêutico adicional é MAB23.
24. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, CARACTERIZADO pelo fato de que a ABP é MAB10.
25. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, CARACTERIZADO pelo fato de que a ABP é MAB2.
26. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, CARACTERIZADO pelo fato de que a ABP é MAB15.
27. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, CARACTERIZADO pelo fato de que a ABP é MAB21.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 27, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia de combinação tem um efeito aditivo

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5/5 na ativação imune.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 27, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia de combinação tem um efeito sinérgico na ativação imune.
30. Método, de acordo com a reivindicação 28 ou reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de que a determinação de um efeito aditivo ou sinérgico na ativação imune é determinado utilizando um ensaio recall de CMV.
31. Método, de acordo com a reivindicação 28 ou reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de que a determinação de um efeito aditivo ou sinérgico na ativação imune é determinada utilizando um ensaio de células tumorais dissociadas.
32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicional é formulado na mesma composição farmacêutica como a ABP.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicional é formulado em uma composição farmacêutica diferente da ABP.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicional é administrado antes de administrar a ABP.
35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicional é administrado depois de administrar a ABP.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicional é administrado contemporaneamente com a ABP.