JP2020512973A - 抗ｔｉｇｉｔ抗原結合タンパク質及びその使用方法 - Google Patents

抗ｔｉｇｉｔ抗原結合タンパク質及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

本明細書では、ＴＩＧＩＴ並びにそのアイソフォーム及び相同体に選択的に結合する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）と、ＡＢＰを含む組成物とが提供される。また、治療方法及び診断方法など、ＡＢＰの使用方法も提供される。

Description

本出願は、２０１７年３月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／４７９，０４２号明細書の利益を主張し、あらゆる目的のために参照によりその全体を本明細書に組み込む。
本明細書では、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）に対して結合特異性を有する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）と、医薬組成物、診断用組成物などのそのようなＡＢＰを含む組成物と、キットとが提供される。また、ＴＩＧＩＴ ＡＢＰを作製する方法と、例えば、治療目的、診断目的及び研究目的のためにＴＩＧＩＴ ＡＢＰを使用する方法とが提供される。
ＴＩＧＩＴは、癌及び慢性感染症に対するＴ細胞の応答を制限する共阻害受容体として特定されている。参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＧｒｏｇａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１４， １９２：（１ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）２０３．１５．を参照されたい。ＴＩＧＩＴの遮断は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のエフェクター機能の増強と、ウイルスクリアランス及び腫瘍拒絶の改善とに寄与することが示されている。上記の文献を参照されたい。
したがって、ＴＩＧＩＴに拮抗することができる治療薬が必要とされる。本明細書では、この必要性を満たすＡＢＰが提供される。
本出願は、２０１５年１０月１日に出願された米国仮特許出願第６２／２３５，９９０号明細書、国際公開番号ＷＯ／２０１７／０５９０９５号パンフレット及び米国特許第９，７１３，６４１号明細書に関連し、これらは各々、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書では、ＴＩＧＩＴに特異的に結合するＡＢＰと、そのようなＡＢＰの使用方法とが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴは、ヒトＴＩＧＩＴ（「ｈＴＩＧＩＴ」、配列番号１）、カニクイザルＴＩＧＩＴ（「ｃＴＩＧＩＴ」、配列番号２）及びマウスＴＩＧＩＴ（「ｍＴＩＧＩＴ」、配列番号３又は１３８）から選択される。
一態様では、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ；配列番号１）のエピトープに特異的に結合し、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ７、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１及びＭＡＢ１２を遮断すること、ｂ）ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｃ）ｈＴＩＧＩＴ残基Ｈ７６、Ｉ７７、Ｓ７８及びＰ７９に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能な単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される。
別の実施形態では、ＡＢＰは、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｌ６５、Ｉ６８、Ｎ７０、Ｄ７２、Ｌ７３、Ｈ１１１、Ｔ１１７、Ｓ１２９及びＳ１３０からなる群からの１つ以上の追加のｈＴＩＧＩＴ残基に特異的に結合する。
別の実施形態では、ＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ６１、Ｑ６２、Ｄ６３、Ｑ６４、Ｙ１１３又はＰ１１４に特異的に結合しない。
一実施形態では、ＡＢＰはＭＡＢ７、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１又はＭＡＢ１２である。別の実施形態では、ＡＢＰは、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４及びＭＡＢ５を遮断すること、ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ５６及びＩ７７に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能である。別の実施形態では、ＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ残基Ｉ６８、Ｌ７３、Ｈ７６、Ｓ７８及びＰ７９に特異的に結合しない。
一実施形態では、ＡＢＰは、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７及びＭＡＢ１８を遮断すること、ｂ）ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｃ）ｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ５６、Ｉ６８、Ｌ７３、Ｈ７６及びＩ７７に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能である。一実施形態では、ＡＢＰはｈＴＩＧＩＴ残基Ｓ７８に特異的に結合しない。
一実施形態では、ＡＢＰは、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０及びＭＡＢ２１を遮断すること、ｂ）ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｃ）ｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ５６、Ｉ６８、Ｌ７３及びＩ７７に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能である。
一実施形態では、ＡＢＰは、ａ）ＣＤ１１２に対するｈＴＩＧＩＴの結合を阻害すること、ｂ）Ｔエフェクター細胞の機能を増大させること、ｃ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を増大させること、ｄ）組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させること、ｅ）制御性Ｔ細胞又は制御性Ｔ細胞活性を抑制すること、ｆ）ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６との会合を阻害すること、及びｇ）ネクチン−４（ポリオウイルス受容体様４、ＰＶＲＬ４としても知られる）に特異的に結合しないことのうちの少なくとも１つが可能である。
別の実施形態では、ＡＢＰは、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ８、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０又はＭＡＢ２１である。
別の態様では、それを必要とする対象の疾患又は症状を治療又は予防する方法であって、有効量の（ｉ）ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０及びＭＡＢ２１からなる群から選択される、ｈＴＩＧＩＴに特異的に結合するＡＢＰ、並びに（ｉｉ）免疫細胞の阻害性受容体もしくはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する追加の免疫療法剤及び（ｉｉｉ）共刺激受容体のシグナル伝達を調節する追加の免疫療法剤のうちの１つ以上、又はそのような薬剤をコードする核酸を対象に投与することを含む方法が提供される。
一実施形態では、阻害性受容体又はそのリガンドは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｔｉｍ−３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＫＩＲ及びそれらの組合せから選択される。
一実施形態では、共刺激受容体は、ＣＤ３、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ−２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０又は４−１ＢＢである。
一実施形態では、追加の治療薬はＭＡＢ２２である。別の実施形態では、追加の免疫療法薬はＭＡＢ２３である。様々な実施形態では、ＡＢＰは、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ２、ＭＡＢ１５又はＭＡＢ２１である。
一実施形態では、追加の免疫療法剤は、Ｔｉｍ−３、４−１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１に対する抗体であるか、ＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、併用療法は、そのような療法を受けている対象の免疫応答に相加効果又は相乗効果をもたらす。
一実施形態では、疾患又は症状は癌であり、癌は固形腫瘍及び血液腫瘍から選択される。いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍である。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＡＢＰと同じ医薬組成物に製剤化され、ＡＢＰと追加の治療剤とは同時投与される。別の実施形態では、追加の治療剤は、ＡＢＰとは異なる医薬組成物に製剤化され、ＡＢＰと追加の治療剤とは別個に投与される。そのような別個の投与は、同じ日に行われても、異なる日に行われてもよい。いくつかの実施形態では、追加の治療剤の前にＡＢＰが投与される。他の実施形態では、ＡＢＰを投与する前に追加の治療剤が投与される。
個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。 個々のドナー由来のＰＢＭＣを使用して、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するリンパ球増殖アッセイを示す一連のグラフである。細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及びペンブロリズマブをそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（それぞれ図１Ａ〜図１Ｃ）。細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及び抗ＴＩＭ−３抗体をそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（図１Ｄ〜図１Ｆ）。細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及び抗４１ＢＢ抗体をそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（図１Ｇ〜図１Ｉ）。細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及びｒｈＯＸ４０Ｌをそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（図１Ｊ〜図１Ｌ）。統計的有意差は、ｕｎｐａｉｒｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｔ検定を用いて、２つの個々の治療群とそれらのマッチさせた対照群との間、並びに２つの個々の治療群とそれらの併用群との間の両方で計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
未治療の癌患者から得られた解離腫瘍細胞（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ）（ＤＴＣ）のＴ細胞応答を試験するためのＤＴＣアッセイを示すグラフである。 未治療の癌患者から得られた解離腫瘍細胞（ＤＴＣ）のＴ細胞応答を試験するためのＤＴＣアッセイを示すグラフである。図２Ａは、ＩＦＮγの産生から明らかなように、ステージＩＶのメラノーマを有する５０歳男性から得られたＤＴＣの活性化を示している。細胞を培養し、対照ＯＶＡペプチド（３μｇ／ｍｌ）、又は１μｇ／ｍＬのＮＹ−ＥＳＯ−１＋１μｇ／ｍＬのＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ−１＋１μｇ／ｍＬのｇｐ１００からなるメラノーマペプチド混合物により刺激した。ペプチド刺激試料に、抗ＧＩＴＲ抗体ＭＡＢ２２、ペンブロリズマブ及び抗ＴＩＧＩＴ抗体ＭＡＢ１０を単独又はペアワイズ組合せで加えた。対照として、等量のアイソタイプ対照抗体を使用した。単一抗体刺激では、アイソタイプ対照抗体を補充することにより、抗体の総量を一定に保った。ＭＡＢ１０及びペンブロリズマブは１０μｇ／ｍｌの最終濃度で使用し、ＭＡＢ２２は１μｇ／ｍｌの最終濃度で使用した。活性化を評価するために、細胞を７日間培養し、上清を収集し、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、産生されたＩＦＮγの量を定量した。統計的有意性は、多重比較とともに一元配置分散分析を使用して計算した。図２Ｂは、ステージＩＩａの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する８０歳女性から得られたＤＴＣの活性化を示している。細胞を培養し、刺激せずに放置したか（対照）、可溶性抗ＣＤ３抗体＋抗ＣＤ２８抗体により２日間刺激した。対照として、等量のアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）を使用した。単一抗体刺激では、試料にアイソタイプ対照抗体を補充することにより、抗体の総量を一定に保った。ＭＡＢ１０及びペンブロリズマブは、１０μｇ／ｍｌの最終濃度で使用した。活性化を評価するために、培養の最後の５時間にわたりブレフェルジンＡを細胞に加え、ＩＣＳを使用してＩＦＮγ産生ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析及び定量を行った。統計的有意性は、多重比較とともに一元配置分散分析を使用して計算した。
ＥＭＴ６乳癌マウスモデルに対する抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＮＲＰ−１抗体との併用の腫瘍体積により測定された結果を示すグラフである。 ＥＭＴ６乳癌マウスモデルに対する抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＮＲＰ−１抗体との併用の腫瘍体積により測定された結果を示すグラフである。 ＥＭＴ６乳癌マウスモデルに対する抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＮＲＰ−１抗体との併用の腫瘍体積により測定された結果を示すグラフである。 ＥＭＴ６乳癌マウスモデルに対する抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＮＲＰ−１抗体との併用の腫瘍体積により測定された結果を示すグラフである。ｍＭＡＢ２３単独療法及びａＰＤ−１単独療法と比較したｍＭＡＢ２３と１Ｂ４との併用を図３Ａ（平均腫瘍体積）及び図３Ｃ（各マウスの個々の腫瘍体積）に示し、１Ｂ４単独療法及びａＰＤ−１単独療法と比較したｍＭＡＢ２３と１Ｂ４との併用を図３Ｂ（平均腫瘍体積）及び図３Ｄ（個々の腫瘍体積）に示す。図３Ａ〜図３Ｂでは、１ｘ１０５個のマウスＥＭＴ６細胞を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に移植した。腫瘍が８０〜１２０ｍｍ３の平均サイズに達した後に、マウスを治療群に無作為に分け、示された抗体を１０００μｇ／動物（対照ＩｇＧ２ｂ及び１Ｂ４）、５００μｇ／動物（ｍＭＡＢ２３及び１Ｂ４）、２５０μｇ／動物（ｍＭＡＢ２３及び１Ｂ４）又は２００μｇ／動物（αＰＤ−１）の用量で腹腔内投与した。黒い矢印は治療日を示す。各治療群について、１群当たり８匹のマウスの平均＋／−標準誤差（ＳＥＭ）腫瘍体積が示されている。対照マウスと比較した処置マウスの統計的有意性（Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ調整による最小二乗平均の差）を１４日目に計算した。混合モデル分析を使用して、対照、ラット抗マウスαＰＤ−１（クローンＲＭＰ１−１４）、単剤（２５０μｇ）及び併用（各２５０μｇ）の曲線を経時的に評価した。図３Ｃ〜図３Ｄでは、全治療群（各グラフの上部に表示）について、１群当たり８匹のマウス各々の個々のＥＭＴ６腫瘍体積を示した。ＥＭＴ６マウス腫瘍細胞を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに注射し、平均サイズ８０〜１２０ｍｍ３で無作為化した。無作為化の時点で治療を開始し、示された抗体を１０００μｇ／動物（対照ＩｇＧ２ｂ及び１Ｂ４）、５００μｇ／動物（ｍＭＡＢ２３及び１Ｂ４）、２５０μｇ／動物（ｍＭＡＢ２３及び１Ｂ４）又は２００μｇ／動物（αＰＤ−１）の用量で腹腔内投与した。黒い矢印は治療日を示す。ｙ軸は腫瘍体積を示し、ｘ軸は治療開始後の時間を日数で示す。試験のエンドポイントは、治療群に応じて４０日目又は平均腫瘍体積２，０００ｍｍ３として規定した。
１．定義
特に定義されない限り、本明細書で使用されるあらゆる専門用語、表記及び他の科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般に理解される意味を有するように意図されている。場合によっては、明確に及び／又は即座に参照できるように、一般に理解される意味を有する用語が本明細書で定義されており、本明細書にそのような定義を含めることは、当技術分野で一般に理解されているものとの違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。本明細書に記載又は参照される技術及び手順は、一般によく理解されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ４ｔｈ ｅｄ．（２０１２） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹに記載の広く利用されている分子クローニング手法など、当業者による従来の手法を用いて一般に使用される。必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を含む手順は、特に明記しない限り、一般に製造業者が定義したプロトコル及び条件に従って実施される。
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が他のことを明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「など（ｓｕｃｈ ａｓ）」などの用語は、特に明記しない限り、限定されることなく包含を伝えるように意図されている。
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、特に他に明記しない限り、列挙した要素「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び列挙した要素「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」実施形態も明確に含む。
用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、示された値及びその値の上下の範囲を示し、包含する。特定の実施形態では、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、指定された値±１０％、±５％又は±１％を示す。特定の実施形態では、適用可能な場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、指定された値±その値の１標準偏差を示す。
用語「ＴＩＧＩＴ」、「ＴＩＧＩＴタンパク質」及び「ＴＩＧＩＴ抗原」は、本明細書では、細胞によって天然に発現されるか、ｔｉｇｉｔ遺伝子をトランスフェクトされた細胞によって発現されるヒトＴＩＧＩＴ、又はヒトＴＩＧＩＴの任意の変異体（例えば、スプライス変異体及び対立遺伝子変異体）、アイソフォーム及び種相同体を指すために区別なく使用される。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、霊長類（例えば、サル又はヒト）、齧歯類（例えば、マウス又はラット）、イヌ、ラクダ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマ又はヒツジによって天然に発現されるＴＩＧＩＴタンパク質である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質はヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ；配列番号１）である。理論に拘束されるものではないが、配列番号１の１〜２１位はシグナルペプチドをコードし、配列番号１の２２〜１４１位は成熟ＴＩＧＩＴタンパク質の細胞外ドメインをコードし、配列番号１の１４２〜１６２位は膜貫通ドメインをコードし、配列番号１の１６３〜２４４位は細胞質ドメインをコードすると考えられている。ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ４９５Ａ１のＵｎｉＰｒｏｔ ＫＢ−Ｑ４９５Ａ１（ＴＩＧＩＴ＿ＨＵＭＡＮ）（２０１５年９月２８日にアクセス）を参照されたい。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質はカニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ；配列番号：２）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、配列番号３に示される配列を有するマウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、配列番号１３８に示される配列を有するマウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ）である。本明細書で使用される場合、配列番号が明記されていなければ、用語「ｍＴＩＧＩＴ」、「マウス（ｍｕｒｉｎｅ）ＴＩＧＩＴ」及び「マウス（ｍｏｕｓｅ）ＴＩＧＩＴは、配列番号３及び／又は配列番号１３８を意味する。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、完全長又は未処理のＴＩＧＩＴタンパク質である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、翻訳後修飾により生成される切断又は処理されたＴＩＧＩＴタンパク質である。ＴＩＧＩＴは、ＷＵＣＡＭ、ＶＳＩＧ９及びＶｓｔｍ３を含む様々な同義語によっても知られている。
用語「免疫グロブリン」は、２対のポリペプチド鎖、すなわち１対の軽（Ｌ）鎖及び１対の重（Ｈ）鎖を一般に含む構造的に関連したタンパク質のクラスを指す。「インタクト免疫グロブリン」では、これらの鎖の４ついずれもがジスルフィド結合によって相互接続されている。免疫グロブリンの構造は十分に特徴付けられている。例えば、Ｐａｕｌ， Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７ｔｈ ｅｄ．， Ｃｈ．５ （２０１３） Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡを参照されたい。要約すると、各重鎖は典型的には、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）とを含む。重鎖定常領域は、典型的には、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３と略される３つのドメインを含む。各軽鎖は典型的には、軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域とを含む。軽鎖定常領域は典型的には、ＣＬと略される１つのドメインを含む。
用語「抗原結合タンパク質」（ＡＢＰ）は、抗原又はエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含むタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、天然抗体と同等の特異性及び親和性で抗原又はエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは抗体からなる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは抗体から本質的になる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは代替足場を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは代替足場からなる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは代替足場から本質的になる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは抗体断片から本質的になる。「ＴＩＧＩＴ ＡＢＰ」、「抗ＴＩＧＩＴ ＡＢＰ」又は「ＴＩＧＩＴ特異的ＡＢＰ」は、本明細書に提供されるように、抗原ＴＩＧＩＴに特異的に結合するＡＢＰである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰはＴＩＧＩＴの細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、本明細書に提供されるＴＩＧＩＴ ＡＢＰは、異なる種由来のＴＩＧＩＴタンパク質間又はそれらのうちで保存されているＴＩＧＩＴのエピトープに結合する。
用語「抗体」は、本明細書ではその最も広い意味で使用され、抗原又はエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含む特定の種類の免疫グロブリン分子を含む。抗体には、具体的には、インタクト抗体（例えば、インタクト免疫グロブリン）、抗体断片及び多重特異性抗体が挙げられる。抗体はＡＢＰの一種である。
用語「抗原結合ドメイン」は、抗原又はエピトープに特異的に結合することができるＡＢＰの部分を意味する。抗原結合ドメインの一例は、抗体のＶＨ−ＶＬ二量体によって形成される抗原結合ドメインである。抗原結合ドメインの別の例は、Ａｄｎｅｃｔｉｎの第１０フィブロネクチンタイプＩＩＩドメイン由来の特定のループの多様化によって形成される抗原結合ドメインである。
用語「完全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」は、本明細書では、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有し、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指すために区別なく使用される。例えば、ＩｇＧ分子を指すために使用される場合、「完全長抗体」とは、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含む抗体である。
用語「Ｆｃ領域」は、天然抗体ではＦｃ受容体、及び補体系の特定のタンパク質と相互作用する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。様々な免疫グロブリンのＦｃ領域の構造、及びそこに含まれるグリコシル化部位は、当技術分野で知られている。参照によりその全体が組み込まれるＳｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ， Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１０， １２５：Ｓ４１−５２を参照されたい。Ｆｃ領域は、天然のＦｃ領域であっても、当技術分野又は本開示の他の箇所に記載されているように改変されたＦｃ領域であってもよい。
ＶＨ領域及びＶＬ領域は、保存度が高い領域が点在する超可変の領域（「超可変領域（ＨＶＲ）」、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも呼ばれる）にさらに細分化され得る。保存度が高い領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。各ＶＨ及びＶＬは一般に、（Ｎ末端からＣ末端に向かって）ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で並ぶ３つのＣＤＲと４つのＦＲとを含む。ＣＤＲは抗原結合に関与し、抗体の抗原特異性及び結合親和性に影響を及ぼす。参照によりその全体が組み込まれるＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ ５ｔｈ ｅｄ．（１９９１） Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤを参照されたい。
いずれの脊椎動物種の軽鎖も、その定常ドメインの配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のいずれかに割り当てることができる。
いずれの脊椎動物種の重鎖も、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５種類のクラス（又はアイソタイプ）のいずれかに割り当てることができる。これらのクラスは、それぞれα、δ、ε、γ及びμとも称される。ＩｇＧクラス及びＩｇＡクラスは、配列及び機能の違いに基づいて、サブクラスにさらに分けられる。ヒトは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２のサブクラスを発現する。
ＣＤＲのアミノ酸配列の境界は、当業者であれば、各々参照によりその全体が組み込まれるＫａｂａｔらの上記文献（「Ｋａｂａｔ」の番号付け体系）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２７３：９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」の番号付け体系）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（「Ｃｏｎｔａｃｔ」の番号付け体系）；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ２７：５５−７７（「ＩＭＧＴ」の番号付け体系）；及びＨｏｎｅｇｇｅ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２００１， ３０９：６５７−７０（「ＡＨｏ」の番号付け体系）によって説明されているものを含め、多くの既知の番号付け体系のいずれかを使用して決定することができる。
表１は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの体系によって同定されるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３の位置を示している。ＣＤＲ−Ｈ１については、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両番号付け体系を使用して残基の番号付けが示されている。
ＣＤＲは、例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／で入手可能であり、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２００８， ４５：３８３２−３８３９（参照によりその全体が組み込まれる）に記載されているＡｂｎｕｍなどの抗体番号付けソフトウェアを使用して割り当ててもよい。
抗体重鎖定常領域の残基に言及する場合、（例えば、Ｋａｂａｔらの上記文献に報告されているように）「ＥＵ番号付け体系」が一般に使用される。特に明記しない限り、ＥＵ番号付け体系を使用して、本明細書に記載の抗体重鎖定常領域の残基に言及する。
「抗体断片」は、インタクト抗体の抗原結合領域又は可変領域など、インタクト抗体の一部を含む。抗体断片には、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片及びｓｃＦｖ−Ｆｃ断片が挙げられる。
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとが非共有結合した二量体を含む。
「Ｆａｂ」断片は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む。Ｆａｂ断片は、例えば、組換え方法により、又は完全長抗体のパパイン消化により作製され得る。
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ヒンジ領域付近でジスルフィド結合により結合された２つのＦａｂ’断片を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えば、組換え方法又はインタクト抗体のペプシン消化によって作製され得る。Ｆ（ａｂ’）断片は、例えば、β−メルカプトエタノールを用いて処理することにより解離させることができる。
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓＦｖ」もしくは「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖にＶＨドメインとＶＬドメインとを含む。ＶＨ及びＶＬは、一般にペプチドリンカーにより連結されている。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ．（１９９４）を参照されたい。任意の好適なリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１２７）である。いくつかの実施形態では、ｎ＝１、２、３、４、５又は６である。参照によりその全体が組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ． Ｉｎ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｍ．＆ Ｍｏｏｒｅ Ｇ．Ｐ．（Ｅｄｓ．）， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｖｏｌ． １１３ （ｐｐ． ２６９−３１５）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。
「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに結合したｓｃＦｖを含む。例えば、ＦｃドメインはｓｃＦｖのＣ末端に結合し得る。Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖ内の可変ドメインの配向（すなわち、ＶＨ−ＶＬ又はＶＬ−ＶＨ）に応じて、ＶＨ又はＶＬの後に位置し得る。当技術分野で既知の又は本明細書に記載の任意の好適なＦｃドメインが使用され得る。場合によっては、ＦｃドメインはＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。
「単一特異性ＡＢＰ」は、単一のエピトープに特異的に結合する１つ以上の結合部位を含むＡＢＰである。単一特異性ＡＢＰの例には、二価（すなわち、２つの抗原結合ドメインを有する）であるが、２つの抗原結合ドメインのそれぞれで同じエピトープを認識する天然のＩｇＧ分子が挙げられる。結合特異性は、任意の好適な結合価で存在し得る。
用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団に由来する抗体を指す。実質的に均一な抗体の集団は、モノクローナル抗体の産生中に通常生じる可能性のある変異体を除いて、実質的に類似し、かつ同じエピトープに結合する抗体を含む。そのような変異体は、一般に、微量に存在するに過ぎない。モノクローナル抗体は、典型的には、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含むプロセスによって得られる。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン又は他の組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンから固有のクローンを選択することであり得る。選択された抗体をさらに改変して、例えば、標的に対する親和性を改善し（「親和性成熟」）、抗体をヒト化し、細胞培養でのその産生を改善し、及び／又は対象のその免疫原性を低下させることができる。
用語「キメラ抗体」は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重鎖及び／又は軽鎖の残部が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。
非ヒト抗体の「ヒト化」形態とは、その非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体とは、一般に、１つ以上のＣＤＲ由来の残基が非ヒト抗体（ドナー抗体）の１つ以上のＣＤＲ由来の残基に置き換えられたヒト抗体（レシピエント抗体）である。ドナー抗体は、所望の特異性、親和性又は生物学的効果を有するマウス、ラット、ウサギ、ニワトリ又は非ヒト霊長類抗体などの任意の好適な非ヒト抗体であり得る。場合によっては、レシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域残基が、ドナー抗体由来の対応するフレームワーク領域残基に置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでもよい。そのような改変を行って、抗体機能をさらに改良してもよい。詳細については、各々参照によりその全体が組み込まれるＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９８６， ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９８８， ３３２：３２３−３２９；及びＰｒｅｓｔａ， Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．， １９９２， ２：５９３−５９６を参照されたい。
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞により産生される抗体、又はヒト抗体レパートリーもしくはヒト抗体コード配列（例えば、ヒト供給源から得たか、デノボで設計したもの）を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体からは、ヒト化抗体が明確に除外される。
「単離ＡＢＰ」又は「単離核酸」は、その天然環境の成分から分離及び／又は回収されたＡＢＰ又は核酸である。天然環境の成分には、酵素、ホルモン、及びその他のタンパク質性又は非タンパク質性物質が含まれ得る。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰは、例えばスピニングカップ配列決定装置を使用することにより、Ｎ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで精製される。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰは、還元又は非還元条件下でのゲル電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を行い、クマシーブルー又は銀染色により検出することによって、均質になるまで精製される。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、単離ＡＢＰは組換え細胞内のインサイチュのＡＢＰを含み得る。いくつかの態様では、単離ＡＢＰ又は単離核酸は、少なくとも１つの精製工程により調製される。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰ又は単離核酸は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％又は９９重量％まで精製される。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰ又は単離核酸は、少なくとも８０体積％、８５体積％、９０体積％、９５体積％又は９９体積％まで精製される。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰ又は単離核酸は、少なくとも８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％〜１００重量％のＡＢＰ又は核酸を含む溶液として提供される。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰ又は単離核酸は、少なくとも８５体積％、９０体積％、９５体積％、９８体積％、９９体積％〜１００体積％のＡＢＰ又は核酸を含む溶液として提供される。
「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、ＡＢＰ）とその結合パートナー（例えば、抗原又はエピトープなど）との間の非共有結合性相互作用の合計の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書で使用される「親和性」は、結合対のメンバー（例えば、ＡＢＰ及び抗原又はエピトープ）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、解離平衡定数（ＫＤ）によって表すことができる。解離平衡定数に寄与する動態成分については、以下でさらに詳しく説明される。親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））又はバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））など、本明細書に記載の方法を含め、当技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。
標的分子へのＡＢＰの結合に関して、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）又は特定の抗原上のエピトープ「に結合する」、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）又は特定の抗原上のエピトープ「への特異的結合」、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）又は特定の抗原上のエピトープ「に特異的に結合する」、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）又は特定の抗原上のエピトープ「に特異的な」、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）又は特定の抗原上のエピトープ「に選択的に結合する」、及び特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）又は特定の抗原上のエピトープ「に対して選択的な」という用語は、（例えば、非標的分子との）非特異的又は非選択的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子への結合を測定し、それと非標的分子への結合とを比較することにより測定することができる。特異的結合はまた、標的分子上で認識されるエピトープを模倣する対照分子との競合によって決定することができる。その場合、標的分子へのＡＢＰの結合が対照分子により競合的に阻害されると、特異的結合が示される。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約５０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約４０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約３０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約２０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約１０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約１％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約０．１％未満である。
本明細書で使用される用語「ｋｄ」（ｓｅｃ−１）は、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の解離速度定数を指す。この値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
本明細書で使用される用語「ｋａ」（Ｍ−１×ｓｅｃ−１）は、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の会合速度定数を指す。この値は、ｋｏｎ値とも呼ばれる。
本明細書で使用される用語「ＫＤ」（Ｍ）は、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の解離平衡定数を指す。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は、そのようなＡＢＰとその抗原との間の相互作用のＫＤに関して記載される。明確にするために、当技術分野で知られているように、ＫＤ値が小さいほど親和性相互作用が高いことが示され、ＫＤ値が大きいほど親和性相互作用が低いことを示される。
本明細書で使用される用語「ＫＡ」（Ｍ−１）は、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の会合平衡定数を指す。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄである。
「親和性成熟」ＡＢＰとは、親ＡＢＰ（すなわち、改変されたＡＢＰの由来元又は設計元であるＡＢＰ）に対して、（例えば、１つ以上のＣＤＲ又はＦＲに）１つ以上の改変を有するＡＢＰであり、この改変により、改変を有しない親ＡＢＰと比較して、その抗原に対するＡＢＰの親和性に改善がもたらされる。いくつかの実施形態では、親和性成熟ＡＢＰは、標的抗原に対してナノモル又はピコモルの親和性を有する。親和性成熟ＡＢＰは、当技術分野で既知の様々な方法を使用して作製されてもよい。例えば、Ｍａｒｋｓら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９２， １０：７７９−７８３、参照によりその全体が組み込まれる）は、ＶＨ及びＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟について説明している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれるＢａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９４， ９１：３８０９−３８１３）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， １９９５， １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９５， １５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９５， １５４：３３１０−３３１９９；及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， １９９２， ２２６：８８９−８９６によって説明されている。
「免疫コンジュゲート」は、治療剤又は診断剤などの１つ以上の異種分子にコンジュゲートされたＡＢＰである。
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域によって媒介される生物学的活性を指し、この活性は、抗体のアイソタイプによって異なり得る。抗体エフェクター機能の例には、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を活性化するＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化するＦｃ受容体結合、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）が挙げられる。
本明細書で２つ以上のＡＢＰに関して使用される場合、用語「と競合する」又は「と交差競合する」は、２つ以上のＡＢＰが抗原（例えば、ＴＩＧＩＴ）に対する結合について競合することを示す。１つの例示的なアッセイでは、ＴＩＧＩＴを何らかの表面にコーティングし、第１のＴＩＧＩＴ ＡＢＰと接触させ、その後、第２のＴＩＧＩＴ ＡＢＰを加える。別の例示的なアッセイでは、第１のＴＩＧＩＴ ＡＢＰを何らかの表面にコーティングし、ＴＩＧＩＴと接触させ、その後、第２のＴＩＧＩＴ ＡＢＰを加える。いずれかのアッセイで、第１のＴＩＧＩＴ ＡＢＰの存在が第２のＴＩＧＩＴ ＡＢＰの結合を低下させる場合、ＡＢＰは互いに競合している。用語「と競合する」は、一方のＡＢＰがもう一方のＡＢＰの結合を低下させるが、ＡＢＰを逆の順序で加えても競合が観察されないＡＢＰの組合せも含む。しかし、いくつかの実施形態では、第１及び第２のＡＢＰは、それらが加えられる順序に関係なく、互いの結合を阻害する。いくつかの実施形態では、一方のＡＢＰは、もう一方のＡＢＰのその抗原への結合を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％低下させる。当業者であれば、ＴＩＧＩＴに対するＡＢＰの親和性と、ＡＢＰの結合価とに基づいて、競合アッセイに使用される抗体の濃度を選択することができる。この定義に記載されるアッセイは例示的であり、当業者であれば、抗体が互いに競合するかどうかを決定するために任意の好適なアッセイを利用することができる。好適なアッセイは、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる、２０１４年１２月２４日に更新されたＡｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ［インターネット］のＣｏｘ ｅｔ ａｌ．， “Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ”（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／；２０１５年９月２９日にアクセス）；Ｓｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ， ２００１， ４４：３０−３７；及びＦｉｎｃｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．， ２０１１， ５４：３５１−３５８に記載されている。
用語「エピトープ」は、ＡＢＰに特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは、表面に到達可能なアミノ酸残基及び／又は糖側鎖からなることが多く、特異的な三次元構造特性並びに特異的な電荷特性を有し得る。立体配座及び非立体配座のエピトープは、変性溶媒の存在下では前者への結合は喪失し得るが、後者への結合は喪失しないという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、結合に直接関与しない他のアミノ酸残基とを含み得る。ＡＢＰが結合するエピトープは、例えば、様々な点変異を有するＴＩＧＩＴ変異体又はキメラＴＩＧＩＴ変異体へのＡＢＰ結合の試験など、エピトープ決定のための既知の技術を使用して決定することができる。
同様に、用語「パラトープ」は、標的タンパク質のエピトープに結合する抗体のアミノ酸残基を指す。
ポリペプチド配列と参照配列との間の「同一」率は、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して、最大の配列同一率を達成した後に、参照配列のアミノ酸残基と同一であるポリペプチド配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一率を決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ ＯＭＥＧＡ又はＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当技術分野の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするための適切なパラメーターを決定することができる。
「保存的置換」又は「保存的アミノ酸置換」は、化学的又は機能的に類似したアミノ酸によるアミノ酸の置換を指す。類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野で周知である。例として、表２〜表４に示されるアミノ酸群は、いくつかの実施形態では、互いに対する保存的置換と考えられる。


追加の保存的置換は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ２ｎｄ ｅｄ．（１９９３）Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹに見出され得る。親ＡＢＰのアミノ酸残基の１つ以上の保存的置換を行うことによって作製されたＡＢＰは、「保存的に改変された変異体」と呼ばれる。
用語「アミノ酸」は、２０個の一般的な天然アミノ酸を指す。天然アミノ酸には、アラニン（Ａｌａ；Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）及びバリン（Ｖａｌ；Ｖ）が挙げられる。
本明細書で使用される用語「ベクター」は、それが連結されている別の核酸を伝搬することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそのベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが機能的に連結されている核酸の発現を誘導することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」は区別なく使用され、外因性の核酸が導入されている細胞と、そのような細胞の子孫とを指す。宿主細胞には、「形質転換体」（又は「形質転換細胞」）及び「形質移入体」（又は「形質移入細胞」）が含まれ、これらはそれぞれ、初代形質転換細胞又は初代形質移入細胞及びそれらに由来する子孫を含む。そのような子孫は、親細胞と核酸含有量が完全に同一ではない場合があり、変異を含む場合がある。
用語「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などのその変形例）は、それを必要とする対象の疾患又は症状の自然経過を変えようとする臨床的介入を指す。治療は、予防と、臨床病態の過程との両方で実施することができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の何らかの直接的又は間接的な病理学的帰結の軽減、転移の予防、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が挙げられる。
本明細書で使用される用語「治療有効量」又は「有効量」は、対象に投与された際に疾患又は障害を治療するのに有効な、本明細書に提供されるＡＢＰ又は医薬組成物の量を指す。
本明細書で使用される用語「対象」は、哺乳動物の対象を意味する。例示的な対象には、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、ヤギ、ウサギ及びヒツジが挙げられる。特定の実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に提供されるＡＢＰによって治療することができる疾患又は症状を有する。いくつかの態様では、疾患又は症状は癌である。いくつかの態様では、疾患又は症状はウイルス感染症である。
用語「添付文書」は、治療用製品又は診断用製品の市販パッケージ（例えばキット）に通常含まれる指示であって、そのような治療用製品又は診断用製品の使用に関する適応症、使用、投与量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む指示を指すために使用される。
本明細書で使用される用語「細胞傷害剤」は、細胞機能を阻害又は阻止し、及び／又は細胞死又は破壊を引き起こす物質を指す。
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学化合物を指す。化学療法剤には、癌の増殖を促進することができるホルモンの影響を調節、低減、遮断又は阻害するように作用する「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療薬」が挙げられる。
用語「細胞増殖抑制剤」は、インビトロ又はインビボのいずれかで細胞の増殖を停止させる化合物又は組成物を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖抑制剤とは、Ｓ期の細胞のパーセンテージを低下させる薬剤である。いくつかの実施形態では、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期の細胞のパーセンテージを少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％又は少なくとも約８０％減少させる。
用語「腫瘍」は、悪性又は良性に関わらず、あらゆる新生細胞の増殖と、あらゆる前癌性及び癌性の細胞及び組織とを指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」及び「腫瘍」という用語は、本明細書で言及される場合、相互に排他的ではない。用語「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は癌である。いくつかの態様では、腫瘍は固形腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍は血液悪性腫瘍である。
用語「医薬組成物」は、その中に含有される有効成分の生物学的活性が対象の治療に有効であるような形態であり、医薬組成物に提供される量で、対象が許容できないほどの毒性を示す追加の成分を含有しない調製物を指す。
用語「調節する」及び「調節」は、列挙された変数を低減又は阻害するか、あるいは活性化又は増加させることを指す。
用語「増加させる」及び「活性化させる」は、列挙された変数の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍又はそれ以上の増加を指す。
用語「低減する」及び「阻害する」は、列挙された変数の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍又はそれ以上の減少を指す。
用語「刺激する（ａｇｏｎｉｚｅ）」は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を誘導する受容体シグナル伝達の活性化を指す。「アゴニスト」とは、受容体に結合し、その受容体を刺激する物質である。
用語「拮抗する」は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を阻害する受容体シグナル伝達の阻害を指す。「アンタゴニスト」とは、受容体に結合し、その受容体に拮抗する物質である。
用語「エフェクターＴ細胞」は、Ｔヘルパー（すなわちＣＤ４＋）細胞及び細胞傷害性（すなわちＣＤ８＋）Ｔ細胞を含む。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞は、Ｂ細胞の形質細胞及びメモリーＢ細胞への成熟、並びに細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージの活性化など、いくつかの免疫プロセスの発達に寄与する。ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞は、ウイルス感染細胞と腫瘍細胞とを破壊する。エフェクターＴ細胞に関する追加情報については、参照によりその全体が組み込まれるＳｅｄｅｒ ａｎｄ Ａｈｍｅｄ， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ４：８３５−８４２を参照されたい。
用語「制御性Ｔ細胞」は、例えば、エフェクターＴ細胞を抑制することにより免疫寛容を調節する細胞を含む。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋表現型を有する。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞はＣＤ８＋ＣＤ２５＋表現型を有する。ＴＩＧＩＴを発現する制御性Ｔ細胞に関する追加情報については、参照によりその全体が組み込まれるＮｏｃｅｎｔｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２０１２， １６５：２０８９−２０９９を参照されたい。
用語「樹状細胞」は、ナイーブＴ細胞を活性化し、Ｂ細胞の増殖及び分化を刺激することができる専門的な抗原提示細胞を指す。
２．ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質
２．１．ＴＩＧＩＴの結合及び標的細胞
本明細書では、ＴＩＧＩＴに特異的に結合するＡＢＰが提供される。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴはｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴはｃＴＩＧＩＴ（配列番号：２）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴは、配列番号３に示される配列を有するｍＴＩＧＩＴである。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴは、配列番号１３８に示される配列を有するｍＴＩＧＩＴである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）、ｃＴＩＧＩＴ（配列番号２）、及び配列番号３のｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）、ｃＴＩＧＩＴ（配列番号２）、及び配列番号１３８のｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）及びｃＴＩＧＩＴ（配列番号２）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３のｍＴＩＧＩＴに結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１３８のｍＴＩＧＩＴに結合しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインに特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは抗体断片である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは代替足場である。
ＴＩＧＩＴは、任意の好適な標的細胞の表面上に発現され得る。いくつかの実施形態では、標的細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞はエフェクターＴ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は制御性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは免疫グロブリン分子を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは免疫グロブリン分子からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは免疫グロブリン分子から本質的になる。いくつかの態様では、免疫グロブリン分子は抗体を含む。いくつかの態様では、免疫グロブリン分子は抗体からなる。いくつかの態様では、免疫グロブリン分子は抗体から本質的になる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは軽鎖を含む。いくつかの態様では、軽鎖はκ軽鎖である。いくつかの態様では、軽鎖はλ軽鎖である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２６を含むκ軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは重鎖を含む。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＡである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＤである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＥである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＭである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ１である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ２である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ３である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ４である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＡ１である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＡ２である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号５５及び配列番号５６から選択される配列を含むＩｇＧ４重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号５７及び配列番号１２５から選択される配列を含むＩｇＧ１重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは抗体断片から本質的になる。いくつかの態様では、抗体断片はＦｖ断片である。いくつかの態様では、抗体断片はＦａｂ断片である。いくつかの態様では、抗体断片はＦ（ａｂ’）２断片である。いくつかの態様では、抗体断片はＦａｂ’断片である。いくつかの態様では、抗体断片はｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片である。いくつかの態様では、抗体断片はｓｃＦｖ−Ｆｃ断片である。いくつかの態様では、抗体断片は単一ドメイン抗体の断片である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、本明細書に提供される例示的な抗体に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、本明細書に提供される例示的な抗体に由来せず、例えば、抗体断片を得るための本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、提供される抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ｃＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴ、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体に由来する抗体断片は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴに対して、そのような抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体に由来する抗体断片は、ＫＤによって測定された場合、ｃＴＩＧＩＴに対して、そのような抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体に由来する抗体断片は、ＫＤによって測定された場合、ｍＴＩＧＩＴに対して、そのような抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体に由来する抗体断片は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴの両方に対して、そのような抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体に由来する抗体断片は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴの両方に対して、そのような抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体に由来する抗体断片は、ＫＤによって測定された場合、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴの両方に対して、そのような抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体に由来する抗体断片は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴ、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴの３ついずれに対しても、そのような抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、本明細書に記載される１つ以上のアッセイ又は生物学的効果によって測定された場合、ＴＩＧＩＴに拮抗する能力を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、本明細書に記載されるように、ＴＩＧＩＴがそのリガンドのうちの１つ以上と相互作用するのを防ぐ能力を保持する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ＴＩＧＩＴへの結合について、それぞれ本開示の表５に示されるＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０又はＭＡＢ２１から選択される抗体と競合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１５５の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１１２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴとの会合を阻害する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、エフェクターＴ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３又はＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴに対する抗体断片の親和性よりも低い親和性（高いＫＤによって示される）でマウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ；配列番号３）に結合するか、ｍＴＩＧＩＴに結合しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体の断片は、そのような抗体と同じＴＩＧＩＴのエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはポリクローナル抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはキメラ抗体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはキメラ抗体からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはキメラ抗体から本質的になる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはヒト化抗体からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはヒト化抗体から本質的になる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはヒト抗体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはヒト抗体からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはヒト抗体から本質的になる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは親和性成熟している。いくつかの態様では、親和性成熟ＡＢＰは、本明細書に提供される例示的なＡＢＰに由来する親和性成熟ＡＢＰである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは代替足場を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは代替足場からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは代替足場から本質的になる。任意の好適な代替足場が使用され得る。いくつかの態様では、代替足場は、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標）、ｉＭａｂ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）、ＥＥＴＩ−ＩＩ／ＡＧＲＰ、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、チオレドキシンペプチドアプタマー、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｆｆｉｌｉｎ、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ及びＡｖｉｍｅｒから選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を阻害する。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴのリガンドは、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ；ＣＤ１５５）及びネクチン−２（ＣＤ１１２、ＰＶＲＬ２）のうちの１つ以上から選択される。いくつかの態様では、ＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの態様では、ＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの態様では、ＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約９０％阻害する。いくつかの態様では、ＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約９５％阻害する。
いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰは、本明細書に提供される例示的なＡＢＰと競合するＡＢＰである。いくつかの態様では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰと競合するＡＢＰは、本明細書に提供される例示的なＡＢＰと同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰはＰＶＲＬ４に結合しない。
抗体が細胞内で発現すると、抗体が翻訳後に修飾されることが知られている。翻訳後修飾の例には、カルボキシペプチダーゼによる重鎖のＣ末端でのリジンの切断；重鎖及び軽鎖のＮ末端でのグルタミン又はグルタミン酸のピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾；グリコシル化；酸化；脱アミド化；及び糖化が挙げられ、そのような翻訳後修飾が様々な抗体で起こることが知られている（参照によりその全体が組み込まれるＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００８， Ｖｏｌ． ９７， ｐ． ２４２６−２４４７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰは、翻訳後修飾を受けた抗体又はその抗原結合断片である。翻訳後修飾を受けた抗体又はその抗原結合断片の例には、重鎖可変領域のＮ末端でピログルタミル化を受けた、及び／又は重鎖のＣ末端でリジンの欠失を受けた抗体又はその抗原結合断片が挙げられる。Ｎ末端でのピログルタミル化及びＣ末端でのリジンの欠失によるこのような翻訳後修飾が、抗体又はその断片の活性に影響を及ぼさないことが当技術分野で知られている（参照によりその全体が組み込まれるＡｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００６， Ｖｏｌ． ３４８， ｐ． ２４−３９）。
２．２．ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質の配列
２．２．１．ＶＨドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号５のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号７のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１３のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１４のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１５のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１６のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１７のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１８のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１９のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２０のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２１のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２２のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２３のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２４のＶＨ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４に示される例示的なＶＨ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４に示されるＶＨ配列を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
２．２．２．ＶＬドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２５〜２８に示される例示的なＶＬ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８に示されるＶＬ配列を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
２．２．３．ＶＨ−ＶＬの組合せ
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨ配列及び配列番号２５〜２８から選択されるＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号５のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号７のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１３のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１４のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１９のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２３のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２４のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号５のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号５のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号５のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号７のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号７のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号７のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１３のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１３のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１３のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１４のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１４のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１４のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１８のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１８のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１８のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１９のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１９のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１９のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２８のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２３のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２３のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２３のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２４のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２４のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２４のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４に示される例示的なＶＨ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列と、配列番号２５〜２８に示される例示的なＶＬ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４に示されるＶＨ配列と、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８に示されるＶＬ配列とを含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
２．２．４．ＣＤＲ
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインの１〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインの２〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインの３個のＣＤＲを含む。いくつかの態様では、ＣＤＲはＫａｂａｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲはＩＭＧＴ ＣＤＲである。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、配列番号４〜２４のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２又はＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインの１〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインの２〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインの３個のＣＤＲを含む。いくつかの態様では、ＣＤＲはＫａｂａｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲはＩＭＧＴ ＣＤＲである。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、配列番号２５〜２８のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２又はＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個又は６個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２は、最大１個、２個、３個又は４個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインの１〜３個のＣＤＲと、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインの１〜３個のＣＤＲとを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインの２〜３個のＣＤＲと、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインの２〜３個のＣＤＲとを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインの３個のＣＤＲと、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインの３個のＣＤＲとを含む。いくつかの態様では、ＣＤＲはＫａｂａｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲはＩＭＧＴ ＣＤＲである。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、配列番号４〜２４のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２又はＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性及び配列番号２５〜２８のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２又はＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有するＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ１であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ２であり、ＣＤＲ−Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ３であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個又は６個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ１であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、最大１個、２個、３個又は４個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ２であり、ＣＤＲ−Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号２９〜３５のＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＩＭＧＴの番号付け体系によるＣＤＲ−Ｈ３である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号３６〜４７のＣＤＲ−Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ２は、Ｋａｂａｔの番号付け体系によるＣＤＲ−Ｈ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４８〜５４又は５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号４８〜５４又は５８〜６２のＣＤＲ−Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ１は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔの両番号付け体系によって定義されているＣＤＲ−Ｈ１に及ぶＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号４８〜５４又は５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号４８〜５４又は５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１とを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号２９〜３５のＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号３６〜４７のＣＤＲ−Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号４８〜５４又は５８〜６２のＣＤＲ−Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２であり、ＣＤＲ−Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号４８〜５４又は５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号６３〜６６のＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ３は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴの番号付け体系によるＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号６７〜６９のＣＤＲ−Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ２は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの番号付け体系によるＣＤＲ−Ｌ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２は、最大１個、２個、３個又は４個のアミノ酸置換を有する、配列番号６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号７０〜７２のＣＤＲ−Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ１は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの番号付け体系によるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個又は６個のアミノ酸置換を有する、配列番号７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１とを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号６３〜６６のＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号６７〜６９のＣＤＲ−Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号７０〜７２のＣＤＲ−Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、最大１個、２個、３個又は４個のアミノ酸置換を有する、配列番号６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個又は６個のアミノ酸置換を有する、配列番号７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号４８〜５４又は５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１とを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号２９〜３５のＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号３６〜４７のＣＤＲ−Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号４８〜５４又は５８〜６２のＣＤＲ−Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号６３〜６６のＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号６７〜６９のＣＤＲ−Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有し、ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号７０〜７２のＣＤＲ−Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２であり、ＣＤＲ−Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号４８〜５４又は５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１であり、ＣＤＲ−Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換を有する、配列番号６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、最大１個、２個、３個又は４個のアミノ酸置換を有する、配列番号６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個又は６個のアミノ酸置換を有する、配列番号７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では「変異体」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、又は当技術分野で既知の任意の他の方法もしくは本明細書に記載の任意の他の方法により、本明細書に提供される配列から得られる。いくつかの実施形態では、そのような変異体は、本明細書に提供される配列に由来せず、例えば、ＡＢＰを得るために本明細書に提供される方法に従ってデノボで単離され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号４８のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７０のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号４９のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７０のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５０のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７０のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５０のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７０のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５０のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７０のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号３９のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４１のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３１のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４２のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５８のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６５のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４２のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５９のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６５のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４３のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号６０のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６５のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３４のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４３のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号６０のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６５のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３４のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４４のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号６１のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６５のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３３のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４４のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号５９のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６５のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４５のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号６２のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６６のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４６のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号６２のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６６のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ３と、配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ２と、配列番号６２のＣＤＲ−Ｈ１と、配列番号６６のＣＤＲ−Ｌ３と、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２と、配列番号７２のＣＤＲ−Ｌ１とを含む。
２．２．５．重鎖及び軽鎖
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号４〜２４のＶＨから選択されるＶＨ（又は本明細書に記載の変異体）と、配列番号５５〜５７又は１２５から選択される定常領域とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号２５〜２８のＶＬから選択されるＶＬ（又は本明細書に記載の変異体）と、配列番号１２６の定常領域とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号７９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８０の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８１の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号７９の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８０の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８２の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８３の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８４の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８５の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８７の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８６の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８７の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号８９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８８の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号８９の重鎖と、配列番号８１の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９０の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９０の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９１の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９３の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９４の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９５の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９６の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９７の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９７の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９８の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号９９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１００の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号９９の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１００の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０１の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０２の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０３の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０４の重鎖と、配列番号９２の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０５の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０６の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１０９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０８の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１０９の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１０の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１０の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１１の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１２の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１３の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１４の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１５の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１７の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１６の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１７の重鎖と、配列番号１０７の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１１９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２０の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１８の重鎖と、配列番号１２０の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１１９の重鎖と、配列番号１２０の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１２１の重鎖と、配列番号１２０の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１２２の重鎖と、配列番号１２０の軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、配列番号１２４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１２３の重鎖と、配列番号１２０の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＰＢは、配列番号１２４の重鎖と、配列番号１２０の軽鎖とを含む。
２．２．６．コンセンサス配列
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＡＢＰの第１のファミリーであり、そのようなファミリーのＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列を含む：（ａ）配列Ａ−Ｒ−Ｄ−Ｇ−Ｖ−Ｌ−Ｘ１−Ｌ−Ｎ−Ｋ−Ｒ−Ｓ−Ｆ−Ｄ−Ｉ（式中、Ｘ１はＡ又はＴである）（配列番号１２８）を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列Ｓ−Ｉ−Ｙ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ｘ２−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｌ−Ｋ−Ｓ（式中、Ｘ２はＳ、Ｑ又はＧである）（配列番号１２９）を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列Ｇ−Ｓ−Ｉ−Ｘ３−Ｓ−Ｇ−Ｘ４−Ｙ−Ｙ−Ｗ−Ｇ（式中、Ｘ３はＥ又はＡであり、Ｘ４はＬ、Ｖ又はＳである）（配列番号１３０）を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列ＱＱＨＴＶＲＰＰＬＴ（配列番号６４）を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６８）を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号７１）を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、そのような第１のファミリー内のＡＢＰである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＡＢＰの第２のファミリーであり、そのようなファミリーのＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列を含む：（ａ）配列Ａ−Ｒ−Ｄ−Ａ−Ｎ−Ｙ−Ｙ−Ｇ−Ｘ１−Ａ−Ｗ−Ａ−Ｆ−Ｄ−Ｐ（式中、Ｘ１はＳ又はＧである）（配列番号１３１）を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列Ｓ−Ｉ−Ｙ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ｘ２−Ｔ−Ｆ−Ｙ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｌ−Ｋ−Ｘ３（式中、Ｘ２はＳ又はＡであり、Ｘ３はＳ又はＧである）（配列番号１３２）を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列Ｇ−Ｓ−Ｉ−Ｘ４−Ｓ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｙ−Ｗ−Ｇ（式中、Ｘ４はＳ又はＴであり、Ｘ５はＳ又はＴであり、Ｘ６はＳ又はＫであり、Ｘ７はＨ又はＹである）（配列番号１３３）を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列ＱＱＨＦＮＬＰＴ（配列番号６３）を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号６７）を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号７０）を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、そのような第２のファミリー内のＡＢＰである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＡＢＰの第３のファミリーであり、そのようなファミリーのＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列を含む：（ａ）配列Ａ−Ｒ−Ｇ−Ｇ−Ｒ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｉ−Ｇ−Ａ−Ｘ１−Ｄ−Ｉ（式中、Ｘ１はＦ又はＬある）（配列番号１３４）を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｘ２−Ｇ−Ｌ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ａ−Ｘ３−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（式中、Ｘ２はＬ又はＩであり、Ｘ３はＱ又はＲである）（配列番号１３５）を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｘ４−Ｘ５−Ｙ−Ｙ−Ｘ６−Ｈ（式中、Ｘ４はＧ、Ｐ又はＲであり、Ｘ５はＮ、Ａ又はＥであり、Ｘ６はＭ又はＩである）（配列番号：１３６）を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列ＱＱＹＶＶＷＰＰＬＴ（配列番号６５）を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号６９）を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号７２）を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、そのような第３のファミリー内のＡＢＰである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＡＢＰの第４のファミリーであり、そのようなファミリーのＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列を含む：（ａ）配列ＡＲＬＨＶＳＧＳＹＹＰＡＹＬＤＹ（配列番号３５）を有するＣＤＲ−Ｈ３；（ｂ）配列Ｘ１−Ｉ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｍ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｘ２−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｘ３−Ｇ（式中、Ｘ１はＶ又はＩであり、Ｘ２はＡ又はＴであり、Ｘ３はＱ又はＲである）（配列番号１３７）を有するＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列ＹＴＦＴＳＨＹＭＧ（配列番号６２）を有するＣＤＲ−Ｈ１；（ｄ）配列ＱＱＹＩＶＦＰＷＴ（配列番号６６）を有するＣＤＲ−Ｌ３；（ｅ）配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号６９）を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号７２）を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、そのような第４のファミリー内のＡＢＰである。
２．２．７．ＡＢＰ変異体の機能特性
上記及び本開示の他の箇所で説明したように、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に対する同一率、又は本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列と比較したアミノ酸残基の置換に基づいて定義されるＡＢＰ変異体である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｈＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｃＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｈＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｈＴＩＧＩＴ、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰの変異体は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴに対して、そのような例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰの変異体は、ＫＤによって測定された場合、ｃＴＩＧＩＴに対して、そのような例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰの変異体は、ＫＤによって測定された場合、ｍＴＩＧＩＴに対して、そのような例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰの変異体は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴの両方に対して、そのような例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰの変異体は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴの両方に対して、そのような例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰの変異体は、ＫＤによって測定された場合、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴの両方に対して、そのような例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰの変異体は、ＫＤによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴ、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴの３ついずれに対しても、そのような例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍又は約１０倍以内の親和性を保持する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、本明細書に記載される１つ以上のアッセイ又は生物学的効果によって測定された場合、ＴＩＧＩＴに拮抗する能力を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、本明細書に記載されるように、ＴＩＧＩＴがそのリガンドのうちの１つ以上と相互作用するのを防ぐ能力を保持する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ＴＩＧＩＴへの結合について、それぞれ本開示の表５に示されるＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０又はＭＡＢ２１から選択される抗体と競合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１５５の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１１２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴとの会合を阻害する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、エフェクターＴ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３又はＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｈＴＩＧＩＴに対するＡＢＰの親和性よりも低い親和性（高いＫＤによって示される）でマウスＴＩＧＩＴ（配列番号３）に結合するか、ｍＴＩＧＩＴに結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、ｈＴＩＧＩＴに対するＡＢＰの親和性よりも低い親和性（高いＫＤによって示される）でマウスＴＩＧＩＴ（配列番号１３８）に結合するか、ｍＴＩＧＩＴに結合しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの変異体は、そのようなＡＢＰと同じＴＩＧＩＴのエピトープに結合する。
２．２．８．ＡＢＰのその他の機能特性
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、以下の（ａ）〜（ｊ）に列挙される特徴のうちの１つ以上を有する：（ａ）ＴＩＧＩＴへの結合について、それぞれ本開示の表５に示されるＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０又はＭＡＢ２１から選択される抗体と競合するか、（ｂ）ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１５５の結合を阻害するか、（ｃ）ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１１２の結合を阻害するか、（ｄ）ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴとの会合を阻害するか、（ｅ）エフェクターＴ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、（ｆ）組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させるか、（ｇ）制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害するか、（ｈ）ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３又はＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しないか、（ｉ）カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ；配列番号２）に特異的に結合するか、（ｊ）ｈＴＩＧＩＴに対するＡＢＰの親和性よりも低い親和性（高いＫＤによって示される）でマウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ；配列番号３）に結合するか、ｍＴＩＧＩＴに結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの２つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの３つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの４つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの５つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの６つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの７つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの８つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された特徴のうちの９つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、上記（ａ）〜（ｊ）に列挙された１０個の特徴をいずれも有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、以下（ａ）〜（ｊ）に列挙される特徴の組合せを示す：（ａ）ＴＩＧＩＴへの結合について、それぞれ本開示の表５に示されるＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０又はＭＡＢ２１から選択される抗体と競合するか、（ｂ）ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１５５の結合を阻害するか、（ｃ）ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１１２の結合を阻害するか、（ｄ）ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴとの会合を阻害するか、（ｅ）エフェクターＴ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、（ｆ）組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させるか、（ｇ）制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害するか、（ｈ）ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３又はＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しないか、（ｉ）カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ；配列番号２）に特異的に結合するか、（ｊ）ｈＴＩＧＩＴに対するＡＢＰの親和性よりも低い親和性（高いＫＤによって示される）でマウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ；配列番号３）に結合するか、ｍＴＩＧＩＴに結合しない。いくつかの実施形態では、そのようなＡＢＰは、（ａ及びｂ）、（ａ及びｃ）、（ａ及びｄ）、（ａ及びｅ）、（ａ及びｆ）、（ａ及びｇ）、（ａ及びｈ）、（ａ及びｉ）、（ａ及びｊ）、（ｂ及びａ）、（ｂ及びｃ）、（ｂ及びｄ）、（ｂ及びｅ）、（ｂ及びｆ）、（ｂ及びｇ）、（ｂ及びｈ）、（ｂ及びｉ）、（ｂ及びｊ）、（ｃ及びａ）、（ｃ及びｂ）、（ｃ及びｄ）、（ｃ及びｅ）、（ｃ及びｆ）、（ｃ及びｇ）、（ｃ及びｈ）、（ｃ及びｉ）、（ｃ及びｊ）、（ｄ及びａ）、（ｄ及びｂ）、（ｄ及びｃ）、（ｄ及びｅ）、（ｄ及びｆ）、（ｄ及びｇ）、（ｄ及びｈ）、（ｄ及びｉ）、（ｄ及びｊ）、（ｅ及びａ）、（ｅ及びｂ）、（ｅ及びｃ）、（ｅ及びｄ）、（ｅ及びｆ）、（ｅ及びｇ）、（ｅ及びｈ）、（ｅ及びｉ）、（ｅ及びｊ）、（ｆ及びａ）、（ｆ及びｂ）、（ｆ及びｃ）、（ｆ及びｄ）、（ｆ及びｅ）、（ｆ及びｇ）、（ｆ及びｈ）、（ｆ及びｉ）、（ｆ及びｊ）、（ｇ及びａ）、（ｇ及びｂ）、（ｇ及びｃ）、（ｇ及びｄ）、（ｇ及びｅ）、（ｇ及びｆ）、（ｇ及びｈ）、（ｇ及びｉ）、（ｇ及びｊ）、（ｈ及びａ）、（ｈ及びｂ）、（ｈ及びｃ）、（ｈ及びｄ）、（ｈ及びｅ）、（ｈ及びｆ）、（ｈ及びｇ）、（ｈ及びｉ）、（ｈ及びｊ）、（ｉ及びａ）、（ｉ及びｂ）、（ｉ及びｃ）、（ｉ及びｄ）、（ｉ及びｅ）、（ｉ及びｆ）、（ｉ及びｇ）、（ｉ及びｈ）、（ｉ及びｊ）、（ｊ及びａ）、（ｊ及びｂ）、（ｊ及びｃ）、（ｊ及びｄ）、（ｊ及びｅ）、（ｊ及びｆ）、（ｊ及びｇ）、（ｊ及びｈ）及び（ｊ及びｉ）から選択される特徴の組合せを示す。いくつかの実施形態では、そのようなＡＢＰは、（ａ及びｂ及びｃ）、（ａ及びｂ及びｄ）、（ａ及びｂ及びｅ）、（ａ及びｂ及びｆ）、（ａ及びｂ及びｇ）、（ａ及びｂ及びｈ）、（ａ及びｂ及びｉ）、（ａ及びｂ及びｊ）、（ａ及びｃ及びｂ）、（ａ及びｃ及びｄ）、（ａ及びｃ及びｅ）、（ａ及びｃ及びｆ）、（ａ及びｃ及びｇ）、（ａ及びｃ及びｈ）、（ａ及びｃ及びｉ）、（ａ及びｃ及びｊ）、（ａ及びｄ及びｂ）、（ａ及びｄ及びｃ）、（ａ及びｄ及びｅ）、（ａ及びｄ及びｆ）、（ａ及びｄ及びｇ）、（ａ及びｄ及びｈ）、（ａ及びｄ及びｉ）、（ａ及びｄ及びｊ）、（ａ及びｅ及びｂ）、（ａ及びｅ及びｃ）、（ａ及びｅ及びｄ）、（ａ及びｅ及びｆ）、（ａ及びｅ及びｇ）、（ａ及びｅ及びｈ）、（ａ及びｅ及びｉ）、（ａ及びｅ及びｊ）、（ａ及びｆ及びｂ）、（ａ及びｆ及びｃ）、（ａ及びｆ及びｄ）、（ａ及びｆ及びｅ）、（ａ及びｆ及びｇ）、（ａ及びｆ及びｈ）、（ａ及びｆ及びｉ）、（ａ及びｆ及びｊ）、（ａ及びｇ及びｂ）、（ａ及びｇ及びｃ）、（ａ及びｇ及びｄ）、（ａ及びｇ及びｅ）、（ａ及びｇ及びｆ）、（ａ及びｇ及びｈ）、（ａ及びｇ及びｉ）、（ａ及びｇ及びｊ）、（ａ及びｈ及びｂ）、（ａ及びｈ及びｃ）、（ａ及びｈ及びｄ）、（ａ及びｈ及びｅ）、（ａ及びｈ及びｆ）、（ａ及びｈ及びｇ）、（ａ及びｈ及びｉ）、（ａ及びｈ及びｊ）、（ａ及びｉ及びｂ）、（ａ及びｉ及びｃ）、（ａ及びｉ及びｄ）、（ａ及びｉ及びｅ）、（ａ及びｉ及びｆ）、（ａ及びｉ及びｇ）、（ａ及びｉ及びｈ）、（ａ及びｉ及びｊ）、（ａ及びｊ及びｂ）、（ａ及びｊ及びｃ）、（ａ及びｊ及びｄ）、（ａ及びｊ及びｅ）、（ａ及びｊ及びｆ）、（ａ及びｊ及びｇ）、（ａ及びｊ及びｈ）、（ａ及びｊ及びｉ）、（ｂ及びａ及びｊ）、（ｂ及びａ及びｃ）、（ｂ及びａ及びｄ）、（ｂ及びａ及びｅ）、（ｂ及びａ及びｆ）、（ｂ及びａ及びｇ）、（ｂ及びａ及びｈ）、（ｂ及びａ及びｉ）、（ｂ及びｃ及びｊ）、（ｂ及びｃ及びａ）、（ｂ及びｃ及びｄ）、（ｂ及びｃ及びｅ）、（ｂ及びｃ及びｆ）、（ｂ及びｃ及びｇ）、（ｂ及びｃ及びｈ）、（ｂ及びｃ及びｉ）、（ｂ及びｄ及びｊ）、（ｂ及びｄ及びａ）、（ｂ及びｄ及びｃ）、（ｂ及びｄ及びｅ）、（ｂ及びｄ及びｆ）、（ｂ及びｄ及びｇ）、（ｂ及びｄ及びｈ）、（ｂ及びｄ及びｉ）、（ｂ及びｅ及びｊ）、（ｂ及びｅ及びａ）、（ｂ及びｅ及びｃ）、（ｂ及びｅ及びｄ）、（ｂ及びｅ及びｆ）、（ｂ及びｅ及びｇ）、（ｂ及びｅ及びｈ）、（ｂ及びｅ及びｉ）、（ｂ及びｆ及びｊ）、（ｂ及びｆ及びａ）、（ｂ及びｆ及びｃ）、（ｂ及びｆ及びｄ）、（ｂ及びｆ及びｅ）、（ｂ及びｆ及びｇ）、（ｂ及びｆ及びｈ）、（ｂ及びｆ及びｉ）、（ｂ及びｇ及びｊ）、（ｂ及びｇ及びａ）、（ｂ及びｇ及びｃ）、（ｂ及びｇ及びｄ）、（ｂ及びｇ及びｅ）、（ｂ及びｇ及びｆ）、（ｂ及びｇ及びｈ）、（ｂ及びｇ及びｉ）、（ｂ及びｈ及びｊ）、（ｂ及びｈ及びａ）、（ｂ及びｈ及びｃ）、（ｂ及びｈ及びｄ）、（ｂ及びｈ及びｅ）、（ｂ及びｈ及びｆ）、（ｂ及びｈ及びｇ）、（ｂ及びｈ及びｉ）、（ｂ及びｉ及びｊ）、（ｂ及びｉ及びａ）、（ｂ及びｉ及びｃ）、（ｂ及びｉ及びｄ）、（ｂ及びｉ及びｅ）、（ｂ及びｉ及びｆ）、（ｂ及びｉ及びｇ）、（ｂ及びｉ及びｈ）、（ｂ及びｊ及びｉ）、（ｂ及びｊ及びａ）、（ｂ及びｊ及びｃ）、（ｂ及びｊ及びｄ）、（ｂ及びｊ及びｅ）、（ｂ及びｊ及びｆ）、（ｂ及びｊ及びｇ）、（ｂ及びｊ及びｈ）、（ｃ及びａ及びｉ）、（ｃ及びａ及びｊ）、（ｃ及びａ及びｂ）、（ｃ及びａ及びｄ）、（ｃ及びａ及びｅ）、（ｃ及びａ及びｆ）、（ｃ及びａ及びｇ）、（ｃ及びａ及びｈ）、（ｃ及びｂ及びｉ）、（ｃ及びｂ及びｊ）、（ｃ及びｂ及びａ）、（ｃ及びｂ及びｄ）、（ｃ及びｂ及びｅ）、（ｃ及びｂ及びｆ）、（ｃ及びｂ及びｇ）、（ｃ及びｂ及びｈ）、（ｃ及びｄ及びｉ）、（ｃ及びｄ及びｊ）、（ｃ及びｄ及びａ）、（ｃ及びｄ及びｂ）、（ｃ及びｄ及びｅ）、（ｃ及びｄ及びｆ）、（ｃ及びｄ及びｇ）、（ｃ及びｄ及びｈ）、（ｃ及びｅ及びｉ）、（ｃ及びｅ及びｊ）、（ｃ及びｅ及びａ）、（ｃ及びｅ及びｂ）、（ｃ及びｅ及びｄ）、（ｃ及びｅ及びｆ）、（ｃ及びｅ及びｇ）、（ｃ及びｅ及びｈ）、（ｃ及びｆ及びｉ）、（ｃ及びｆ及びｊ）、（ｃ及びｆ及びａ）、（ｃ及びｆ及びｂ）、（ｃ及びｆ及びｄ）、（ｃ及びｆ及びｅ）、（ｃ及びｆ及びｇ）、（ｃ及びｆ及びｈ）、（ｃ及びｇ及びｉ）、（ｃ及びｇ及びｊ）、（ｃ及びｇ及びａ）、（ｃ及びｇ及びｂ）、（ｃ及びｇ及びｄ）、（ｃ及びｇ及びｅ）、（ｃ及びｇ及びｆ）、（ｃ及びｇ及びｈ）、（ｃ及びｈ及びｉ）、（ｃ及びｈ及びｊ）、（ｃ及びｈ及びａ）、（ｃ及びｈ及びｂ）、（ｃ及びｈ及びｄ）、（ｃ及びｈ及びｅ）、（ｃ及びｈ及びｆ）、（ｃ及びｈ及びｇ）、（ｃ及びｉ及びｈ）、（ｃ及びｉ及びｊ）、（ｃ及びｉ及びａ）、（ｃ及びｉ及びｂ）、（ｃ及びｉ及びｄ）、（ｃ及びｉ及びｅ）、（ｃ及びｉ及びｆ）、（ｃ及びｉ及びｇ）、（ｃ及びｊ及びｈ）、（ｃ及びｊ及びｉ）、（ｃ及びｊ及びａ）、（ｃ及びｊ及びｂ）、（ｃ及びｊ及びｄ）、（ｃ及びｊ及びｅ）、（ｃ及びｊ及びｆ）、（ｃ及びｊ及びｇ）、（ｄ及びａ及びｈ）、（ｄ及びａ及びｉ）、（ｄ及びａ及びｊ）、（ｄ及びａ及びｂ）、（ｄ及びａ及びｃ）、（ｄ及びａ及びｅ）、（ｄ及びａ及びｆ）、（ｄ及びａ及びｇ）、（ｄ及びｂ及びｈ）、（ｄ及びｂ及びｉ）、（ｄ及びｂ及びｊ）、（ｄ及びｂ及びａ）、（ｄ及びｂ及びｃ）、（ｄ及びｂ及びｅ）、（ｄ及びｂ及びｆ）、（ｄ及びｂ及びｇ）、（ｄ及びｃ及びｈ）、（ｄ及びｃ及びｉ）、（ｄ及びｃ及びｊ）、（ｄ及びｃ及びａ）、（ｄ及びｃ及びｂ）、（ｄ及びｃ及びｅ）、（ｄ及びｃ及びｆ）、（ｄ及びｃ及びｇ）、（ｄ及びｅ及びｈ）、（ｄ及びｅ及びｉ）、（ｄ及びｅ及びｊ）、（ｄ及びｅ及びａ）、（ｄ及びｅ及びｂ）、（ｄ及びｅ及びｃ）、（ｄ及びｅ及びｆ）、（ｄ及びｅ及びｇ）、（ｄ及びｆ及びｈ）、（ｄ及びｆ及びｉ）、（ｄ及びｆ及びｊ）、（ｄ及びｆ及びａ）、（ｄ及びｆ及びｂ）、（ｄ及びｆ及びｃ）、（ｄ及びｆ及びｅ）、（ｄ及びｆ及びｇ）、（ｄ及びｇ及びｈ）、（ｄ及びｇ及びｉ）、（ｄ及びｇ及びｊ）、（ｄ及びｇ及びａ）、（ｄ及びｇ及びｂ）、（ｄ及びｇ及びｃ）、（ｄ及びｇ及びｅ）、（ｄ及びｇ及びｆ）、（ｄ及びｈ及びｇ）、（ｄ及びｈ及びｉ）、（ｄ及びｈ及びｊ）、（ｄ及びｈ及びａ）、（ｄ及びｈ及びｂ）、（ｄ及びｈ及びｃ）、（ｄ及びｈ及びｅ）、（ｄ及びｈ及びｆ）、（ｄ及びｉ及びｇ）、（ｄ及びｉ及びｈ）、（ｄ及びｉ及びｊ）、（ｄ及びｉ及びａ）、（ｄ及びｉ及びｂ）、（ｄ及びｉ及びｃ）、（ｄ及びｉ及びｅ）、（ｄ及びｉ及びｆ）、（ｄ及びｊ及びｇ）、（ｄ及びｊ及びｈ）、（ｄ及びｊ及びｉ）、（ｄ及びｊ及びａ）、（ｄ及びｊ及びｂ）、（ｄ及びｊ及びｃ）、（ｄ及びｊ及びｅ）、（ｄ及びｊ及びｆ）、（ｅ及びａ及びｇ）、（ｅ及びａ及びｈ）、（ｅ及びａ及びｉ）、（ｅ及びａ及びｊ）、（ｅ及びａ及びｂ）、（ｅ及びａ及びｃ）、（ｅ及びａ及びｄ）、（ｅ及びａ及びｆ）、（ｅ及びｂ及びｇ）、（ｅ及びｂ及びｈ）、（ｅ及びｂ及びｉ）、（ｅ及びｂ及びｊ）、（ｅ及びｂ及びａ）、（ｅ及びｂ及びｃ）、（ｅ及びｂ及びｄ）、（ｅ及びｂ及びｆ）、（ｅ及びｃ及びｇ）、（ｅ及びｃ及びｈ）、（ｅ及びｃ及びｉ）、（ｅ及びｃ及びｊ）、（ｅ及びｃ及びａ）、（ｅ及びｃ及びｂ）、（ｅ及びｃ及びｄ）、（ｅ及びｃ及びｆ）、（ｅ及びｄ及びｇ）、（ｅ及びｄ及びｈ）、（ｅ及びｄ及びｉ）、（ｅ及びｄ及びｊ）、（ｅ及びｄ及びａ）、（ｅ及びｄ及びｂ）、（ｅ及びｄ及びｃ）、（ｅ及びｄ及びｆ）、（ｅ及びｆ及びｇ）、（ｅ及びｆ及びｈ）、（ｅ及びｆ及びｉ）、（ｅ及びｆ及びｊ）、（ｅ及びｆ及びａ）、（ｅ及びｆ及びｂ）、（ｅ及びｆ及びｃ）、（ｅ及びｆ及びｄ）、（ｅ及びｇ及びｆ）、（ｅ及びｇ及びｈ）、（ｅ及びｇ及びｉ）、（ｅ及びｇ及びｊ）、（ｅ及びｇ及びａ）、（ｅ及びｇ及びｂ）、（ｅ及びｇ及びｃ）、（ｅ及びｇ及びｄ）、（ｅ及びｈ及びｆ）、（ｅ及びｈ及びｇ）、（ｅ及びｈ及びｉ）、（ｅ及びｈ及びｊ）、（ｅ及びｈ及びａ）、（ｅ及びｈ及びｂ）、（ｅ及びｈ及びｃ）、（ｅ及びｈ及びｄ）、（ｅ及びｉ及びｆ）、（ｅ及びｉ及びｇ）、（ｅ及びｉ及びｈ）、（ｅ及びｉ及びｊ）、（ｅ及びｉ及びａ）、（ｅ及びｉ及びｂ）、（ｅ及びｉ及びｃ）、（ｅ及びｉ及びｄ）、（ｅ及びｊ及びｆ）、（ｅ及びｊ及びｇ）、（ｅ及びｊ及びｈ）、（ｅ及びｊ及びｉ）、（ｅ及びｊ及びａ）、（ｅ及びｊ及びｂ）、（ｅ及びｊ及びｃ）、（ｅ及びｊ及びｄ）、（ｆ及びａ及びｅ）、 （ｆ及びａ及びｇ）、（ｆ及びａ及びｈ）、（ｆ及びａ及びｉ）、（ｆ及びａ及びｊ）、（ｆ及びａ及びｂ）、（ｆ及びａ及びｃ）、（ｆ及びａ及びｄ）、（ｆ及びｂ及びｅ）、（ｆ及びｂ及びｇ）、（ｆ及びｂ及びｈ）、（ｆ及びｂ及びｉ）、（ｆ及びｂ及びｊ）、（ｆ及びｂ及びａ）、（ｆ及びｂ及びｃ）、（ｆ及びｂ及びｄ）、（ｆ及びｃ及びｅ）、（ｆ及びｃ及びｇ）、（ｆ及びｃ及びｈ）、（ｆ及びｃ及びｉ）、（ｆ及びｃ及びｊ）、（ｆ及びｃ及びａ）、（ｆ及びｃ及びｂ）、（ｆ及びｃ及びｄ）、（ｆ及びｄ及びｅ）、（ｆ及びｄ及びｇ）、（ｆ及

びｄ及びｈ）、（ｆ及びｄ及びｉ）、（ｆ及びｄ及びｊ）、（ｆ及びｄ及びａ）、（ｆ及びｄ及びｂ）、（ｆ及びｄ及びｃ）、（ｆ及びｅ及びｄ）、（ｆ及びｅ及びｇ）、（ｆ及びｅ及びｈ）、（ｆ及びｅ及びｉ）、（ｆ及びｅ及びｊ）、（ｆ及びｅ及びａ）、（ｆ及びｅ及びｂ）、（ｆ及びｅ及びｃ）、（ｆ及びｇ及びｄ）、（ｆ及びｇ及びｅ）、（ｆ及びｇ及びｈ）、（ｆ及びｇ及びｉ）、（ｆ及びｇ及びｊ）、（ｆ及びｇ及びａ）、（ｆ及びｇ及びｂ）、（ｆ及びｇ及びｃ）、（ｆ及びｈ及びｄ）、（ｆ及びｈ及びｅ）、（ｆ及びｈ及びｇ）、（ｆ及びｈ及びｉ）、（ｆ及びｈ及びｊ）、（ｆ及びｈ及びａ）、（ｆ及びｈ及びｂ）、（ｆ及びｈ及びｃ）、（ｆ及びｉ及びｄ）、（ｆ及びｉ及びｅ）、（ｆ及びｉ及びｇ）、（ｆ及びｉ及びｈ）、（ｆ及びｉ及びｊ）、（ｆ及びｉ及びａ）、（ｆ及びｉ及びｂ）、（ｆ及びｉ及びｃ）、（ｆ及びｊ及びｄ）、（ｆ及びｊ及びｅ）、（ｆ及びｊ及びｇ）、（ｆ及びｊ及びｈ）、（ｆ及びｊ及びｉ）、（ｆ及びｊ及びａ）、（ｆ及びｊ及びｂ）、（ｆ及びｊ及びｃ）、（ｇ及びａ及びｄ）、（ｇ及びａ及びｅ）、（ｇ及びａ及びｆ）、（ｇ及びａ及びｈ）、（ｇ及びａ及びｉ）、（ｇ及びａ及びｊ）、（ｇ及びａ及びｂ）、（ｇ及びａ及びｃ）、（ｇ及びｂ及びｄ）、（ｇ及びｂ及びｅ）、（ｇ及びｂ及びｆ）、（ｇ及びｂ及びｈ）、（ｇ及びｂ及びｉ）、（ｇ及びｂ及びｊ）、（ｇ及びｂ及びａ）、（ｇ及びｂ及びｃ）、（ｇ及びｃ及びｄ）、（ｇ及びｃ及びｅ）、（ｇ及びｃ及びｆ）、（ｇ及びｃ及びｈ）、（ｇ及びｃ及びｉ）、（ｇ及びｃ及びｊ）、（ｇ及びｃ及びａ）、（ｇ及びｃ及びｂ）、（ｇ及びｄ及びｃ）、（ｇ及びｄ及びｅ）、（ｇ及びｄ及びｆ）、（ｇ及びｄ及びｈ）、（ｇ及びｄ及びｉ）、（ｇ及びｄ及びｊ）、（ｇ及びｄ及びａ）、（ｇ及びｄ及びｂ）、（ｇ及びｅ及びｃ）、（ｇ及びｅ及びｄ）、（ｇ及びｅ及びｆ）、（ｇ及びｅ及びｈ）、（ｇ及びｅ及びｉ）、（ｇ及びｅ及びｊ）、（ｇ及びｅ及びａ）、（ｇ及びｅ及びｂ）、（ｇ及びｆ及びｃ）、（ｇ及びｆ及びｄ）、（ｇ及びｆ及びｅ）、（ｇ及びｆ及びｈ）、（ｇ及びｆ及びｉ）、（ｇ及びｆ及びｊ）、（ｇ及びｆ及びａ）、（ｇ及びｆ及びｂ）、（ｇ及びｈ及びｃ）、（ｇ及びｈ及びｄ）、（ｇ及びｈ及びｅ）、（ｇ及びｈ及びｆ）、（ｇ及びｈ及びｉ）、（ｇ及びｈ及びｊ）、（ｇ及びｈ及びａ）、（ｇ及びｈ及びｂ）、（ｇ及びｉ及びｃ）、（ｇ及びｉ及びｄ）、（ｇ及びｉ及びｅ）、（ｇ及びｉ及びｆ）、（ｇ及びｉ及びｈ）、（ｇ及びｉ及びｊ）、（ｇ及びｉ及びａ）、（ｇ及びｉ及びｂ）、（ｇ及びｊ及びｃ）、（ｇ及びｊ及びｄ）、（ｇ及びｊ及びｅ）、（ｇ及びｊ及びｆ）、（ｇ及びｊ及びｈ）、（ｇ及びｊ及びｉ）、（ｇ及びｊ及びａ）、（ｇ及びｊ及びｂ）、（ｈ及びａ及びｃ）、（ｈ及びａ及びｄ）、（ｈ及びａ及びｅ）、（ｈ及びａ及びｆ）、（ｈ及びａ及びｇ）、（ｈ及びａ及びｉ）、（ｈ及びａ及びｊ）、（ｈ及びａ及びｂ）、（ｈ及びｂ及びｃ）、（ｈ及びｂ及びｄ）、（ｈ及びｂ及びｅ）、（ｈ及びｂ及びｆ）、（ｈ及びｂ及びｇ）、（ｈ及びｂ及びｉ）、（ｈ及びｂ及びｊ）、（ｈ及びｂ及びａ）、（ｈ及びｃ及びｂ）、（ｈ及びｃ及びｄ）、（ｈ及びｃ及びｅ）、（ｈ及びｃ及びｆ）、（ｈ及びｃ及びｇ）、（ｈ及びｃ及びｉ）、（ｈ及びｃ及びｊ）、（ｈ及びｃ及びａ）、（ｈ及びｄ及びｂ）、（ｈ及びｄ及びｃ）、（ｈ及びｄ及びｅ）、（ｈ及びｄ及びｆ）、（ｈ及びｄ及びｇ）、（ｈ及びｄ及びｉ）、（ｈ及びｄ及びｊ）、（ｈ及びｄ及びａ）、（ｈ及びｅ及びｂ）、（ｈ及びｅ及びｃ）、（ｈ及びｅ及びｄ）、（ｈ及びｅ及びｆ）、（ｈ及びｅ及びｇ）、（ｈ及びｅ及びｉ）、（ｈ及びｅ及びｊ）、（ｈ及びｅ及びａ）、（ｈ及びｆ及びｂ）、（ｈ及びｆ及びｃ）、（ｈ及びｆ及びｄ）、（ｈ及びｆ及びｅ）、（ｈ及びｆ及びｇ）、（ｈ及びｆ及びｉ）、（ｈ及びｆ及びｊ）、（ｈ及びｆ及びａ）、（ｈ及びｇ及びｂ）、（ｈ及びｇ及びｃ）、（ｈ及びｇ及びｄ）、（ｈ及びｇ及びｅ）、（ｈ及びｇ及びｆ）、（ｈ及びｇ及びｉ）、（ｈ及びｇ及びｊ）、（ｈ及びｇ及びａ）、（ｈ及びｉ及びｂ）、（ｈ及びｉ及びｃ）、（ｈ及びｉ及びｄ）、（ｈ及びｉ及びｅ）、（ｈ及びｉ及びｆ）、（ｈ及びｉ及びｇ）、（ｈ及びｉ及びｊ）、（ｈ及びｉ及びａ）、（ｈ及びｊ及びｂ）、（ｈ及びｊ及びｃ）、（ｈ及びｊ及びｄ）、（ｈ及びｊ及びｅ）、（ｈ及びｊ及びｆ）、（ｈ及びｊ及びｇ）、（ｈ及びｊ及びｉ）、（ｈ及びｊ及びａ）、（ｉ及びａ及びｂ）、（ｉ及びａ及びｃ）、（ｉ及びａ及びｄ）、（ｉ及びａ及びｅ）、（ｉ及びａ及びｆ）、（ｉ及びａ及びｇ）、（ｉ及びａ及びｈ）、（ｉ及びａ及びｊ）、（ｉ及びｂ及びａ）、（ｉ及びｂ及びｃ）、（ｉ及びｂ及びｄ）、（ｉ及びｂ及びｅ）、（ｉ及びｂ及びｆ）、（ｉ及びｂ及びｇ）、（ｉ及びｂ及びｈ）、（ｉ及びｂ及びｊ）、（ｉ及びｃ及びａ）、（ｉ及びｃ及びｂ）、（ｉ及びｃ及びｄ）、（ｉ及びｃ及びｅ）、（ｉ及びｃ及びｆ）、（ｉ及びｃ及びｇ）、（ｉ及びｃ及びｈ）、（ｉ及びｃ及びｊ）、（ｉ及びｄ及びａ）、（ｉ及びｄ及びｂ）、（ｉ及びｄ及びｃ）、（ｉ及びｄ及びｅ）、（ｉ及びｄ及びｆ）、（ｉ及びｄ及びｇ）、（ｉ及びｄ及びｈ）、（ｉ及びｄ及びｊ）、（ｉ及びｅ及びａ）、（ｉ及びｅ及びｂ）、（ｉ及びｅ及びｃ）、（ｉ及びｅ及びｄ）、（ｉ及びｅ及びｆ）、（ｉ及びｅ及びｇ）、（ｉ及びｅ及びｈ）、（ｉ及びｅ及びｊ）、（ｉ及びｆ及びａ）、（ｉ及びｆ及びｂ）、（ｉ及びｆ及びｃ）、（ｉ及びｆ及びｄ）、（ｉ及びｆ及びｅ）、（ｉ及びｆ及びｇ）、（ｉ及びｆ及びｈ）、（ｉ及びｆ及びｊ）、（ｉ及びｇ及びａ）、（ｉ及びｇ及びｂ）、（ｉ及びｇ及びｃ）、（ｉ及びｇ及びｄ）、（ｉ及びｇ及びｅ）、（ｉ及びｇ及びｆ）、（ｉ及びｇ及びｈ）、（ｉ及びｇ及びｊ）、（ｉ及びｈ及びａ）、（ｉ及びｈ及びｂ）、（ｉ及びｈ及びｃ）、（ｉ及びｈ及びｄ）、（ｉ及びｈ及びｅ）、（ｉ及びｈ及びｆ）、（ｉ及びｈ及びｇ）、（ｉ及びｈ及びｊ）、（ｉ及びｊ及びａ）、（ｉ及びｊ及びｂ）、（ｉ及びｊ及びｃ）、（ｉ及びｊ及びｄ）、（ｉ及びｊ及びｅ）、（ｉ及びｊ及びｆ）、（ｉ及びｊ及びｇ）、（ｉ及びｊ及びｈ）、（ｊ及びａ及びｉ）、（ｊ及びａ及びｂ）、（ｊ及びａ及びｃ）、（ｊ及びａ及びｄ）、（ｊ及びａ及びｅ）、（ｊ及びａ及びｆ）、（ｊ及びａ及びｇ）、（ｊ及びａ及びｈ）、（ｊ及びｂ及びｉ）、（ｊ及びｂ及びａ）、（ｊ及びｂ及びｃ）、（ｊ及びｂ及びｄ）、（ｊ及びｂ及びｅ）、（ｊ及びｂ及びｆ）、（ｊ及びｂ及びｇ）、（ｊ及びｂ及びｈ）、（ｊ及びｃ及びｉ）、（ｊ及びｃ及びａ）、（ｊ及びｃ及びｂ）、（ｊ及びｃ及びｄ）、（ｊ及びｃ及びｅ）、（ｊ及びｃ及びｆ）、（ｊ及びｃ及びｇ）、（ｊ及びｃ及びｈ）、（ｊ及びｄ及びｉ）、（ｊ及びｄ及びａ）、（ｊ及びｄ及びｂ）、（ｊ及びｄ及びｃ）、（ｊ及びｄ及びｅ）、（ｊ及びｄ及びｆ）、（ｊ及びｄ及びｇ）、（ｊ及びｄ及びｈ）、（ｊ及びｅ及びｉ）、（ｊ及びｅ及びａ）、（ｊ及びｅ及びｂ）、（ｊ及びｅ及びｃ）、（ｊ及びｅ及びｄ）、（ｊ及びｅ及びｆ）、（ｊ及びｅ及びｇ）、（ｊ及びｅ及びｈ）、（ｊ及びｆ及びｉ）、（ｊ及びｆ及びａ）、（ｊ及びｆ及びｂ）、（ｊ及びｆ及びｃ）、（ｊ及びｆ及びｄ）、（ｊ及びｆ及びｅ）、（ｊ及びｆ及びｇ）、（ｊ及びｆ及びｈ）、（ｊ及びｇ及びｉ）、（ｊ及びｇ及びａ）、（ｊ及びｇ及びｂ）、（ｊ及びｇ及びｃ）、（ｊ及びｇ及びｄ）、（ｊ及びｇ及びｅ）、（ｊ及びｇ及びｆ）、（ｊ及びｇ及びｈ）、（ｊ及びｈ及びｉ）、（ｊ及びｈ及びａ）、（ｊ及びｈ及びｂ）、（ｊ及びｈ及びｃ）、（ｊ及びｈ及びｄ）、（ｊ及びｈ及びｅ）、（ｊ及びｈ及びｆ）、（ｊ及びｈ及びｇ）、（ｊ及びｉ及びｈ）、（ｊ及びｉ及びａ）、（ｊ及びｉ及びｂ）、（ｊ及びｉ及びｃ）、（ｊ及びｉ及びｄ）、（ｊ及びｉ及びｅ）、（ｊ及びｉ及びｆ）及び（ｊ及びｉ及びｇ）から選択される特徴の組合せを示す。
２．３．生殖細胞系列
本明細書に提供されるＡＢＰは、任意の好適なＶ−Ｈ及びＶＬ生殖細胞系列配列を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＨ領域は、ＶＨ４生殖細胞系列に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＨ領域は、ＶＨ１生殖細胞系列に由来する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＨ領域は、ＶＨ４−３９生殖細胞系列に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＨ領域は、ＶＨ４−３１生殖細胞系列に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＨ領域は、ＶＨ１−４６生殖細胞系列に由来する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＬ領域は、ＶＫ３生殖細胞系列に由来する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＬ領域は、ＶＫ３−１１生殖細胞系列に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＬ領域は、ＶＫ３−２０生殖細胞系列に由来する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＶＬ領域は、ＶＫ３−１５生殖細胞系列に由来する。









２．４．ＴＩＧＩＴの拮抗作用
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、結合するとＴＩＧＩＴに拮抗する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、ＴＩＧＩＴとの直接相互作用によって二量体化及び機能が損なわれる共刺激受容体であるＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１としても知られる）の二量体化及び／又は活性化をもたらす。参照によりその全体が組み込まれるＧｒｏｇａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１４， １９２（１ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）２０１３．１５を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、ＡＢＰの非存在下で相互作用する量と比較して、相互作用するＣＤ２２６及びＣＤ１５５の量を増加させる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、エフェクターＴ細胞の活性化をもたらす。いくつかの態様では、エフェクターＴ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、エフェクターＴ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、ＮＫ細胞の活性化をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、ＮＫＴ細胞の活性化をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、エフェクターＴ細胞に対する制御性Ｔ細胞の阻害活性の低下をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、標的細胞によるＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ、ＬＴ−α及び／又はＩＦＮ−γの分泌の増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、エフェクターＴ細胞の増殖、生存及び／又は機能を増大させる。いくつかの態様では、エフェクターＴ細胞はＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。いくつかの態様では、エフェクターＴ細胞はＣＤ８＋エフェクターＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を抑止する。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞はＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、免疫応答の増強をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、腫瘍の予防をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、腫瘍の発症の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、腫瘍のサイズの縮小をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、腫瘍の消失をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、転移の数の減少をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、ウイルス性疾患の予防をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、ウイルス性疾患の発症の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、対象のウイルス量の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、ウイルス感染症の除去をもたらす。
２．５．ＴＩＧＩＴに対する抗原結合タンパク質の親和性及び動態；効力
いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、いずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開番号ＷＯ／２０１７／０５９０９５号パンフレット及び米国特許第９，７１３，６４１号明細書の例の項に開示された方法によって測定される。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＫＤによって示された場合、約１０−５Ｍ未満、約１０−６Ｍ未満、約１０−７Ｍ未満、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満又は約１０−１２Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−７Ｍ〜１０−１２Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−７Ｍ〜１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−７Ｍ〜１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−７Ｍ〜１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−７Ｍ〜１０−８Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−８Ｍ〜１０−１２Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−９Ｍ〜１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は約１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍである。
いくつかの実施形態では、ｈＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示された場合、約５．２４×１０−１０Ｍ、約４．５７×１０−１０Ｍ、約３．３２×１０−１０Ｍ、約２．４６×１０−１０Ｍ、約１．９６×１０−１０Ｍ、約３．１１×１０−９Ｍ、約２．５４×１０−９Ｍ、約３．１３×１０−９Ｍ、約２．８３×１０−９Ｍ、約１．７１×１０−９Ｍ、約２．４７×１０−９Ｍ、約２．３５×１０−９Ｍ、約１．４４×１０−９Ｍ、約１．２３×１０−９Ｍ、約５．２６×１０−１０Ｍ、約３．７８×１０−１０Ｍ、約４．２９×１０−１０Ｍ又は約４．４８×１０−１０Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、そのような親和性は、約３．１３×１０−９Ｍ〜約１．９６×１０−１０Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約３．１３×１０−９Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、ｃＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示された場合、約２．６４×１０−９Ｍ、約６．５５×１０−９Ｍ、約８．１４×１０−９Ｍ、約６．５７×１０−９Ｍ、約７．９４×１０−８Ｍ、約７．０４×１０−８Ｍ、約１．１０×１０−７Ｍ、約７．２０×１０−８Ｍ、約１．５７×１０−９Ｍ、約８．０２×１０−１０Ｍ、約３．６７×１０−１０Ｍ、約８．９８×１０−１０Ｍ、約１．７５×１０−８Ｍ、又は約２．５８×１０−８Ｍ、約９．３５×１０−９Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、そのような親和性は、約１．１０×１０−７Ｍ〜約３．６９×１０−１０Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約１．１０×１０−７Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、ｈＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、溶解平衡法（ＭＳＤ−ＳＥＴ）によって測定されたＫＤによって示された場合、約５．４０×１０−１１Ｍ、約１．１０×１０−１０Ｍ、約１．５０×１０−１０Ｍ、約５．６０×１０−１１Ｍ、約４．００×１０−１０Ｍ、約３．８０×１０−１０Ｍ、約２．１０×１０−１０Ｍ、約７．００×１０−１１Ｍ、約４．１０×１０−１１Ｍ、約２．５０×１０−１１Ｍ、約３．００×１０−１１Ｍ、約８．００×１０−１１Ｍ、約８．１０×１０−１２Ｍ、約５．００×１０−１２Ｍ又は約４．９０×１０−１２Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、そのような親和性は、約４．００×１０−１０Ｍ〜約４．９０×１０−１２Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約４．００×１０−１０Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、ｃＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＭＳＤ−ＳＥＴによって測定されたＫＤによって示された場合、約３．２０×１０−１０Ｍ、約２．３０×１０−１０Ｍ、約３．５０×１０−１１Ｍ、約１．５０×１０−１１Ｍ又は約４．６０×１０−１１Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、そのような親和性は、約３．２０×１０−１０Ｍ〜約１．５０×１０−１１Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約３．２０×１０−１０Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、ｈＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示された場合、約７．１×１０−１０Ｍ、約８．１×１０−１１Ｍ、約１．９×１０−１０Ｍ、約５．６×１０−１０Ｍ、約２．４×１０−１０Ｍ、約２．８×１０−１０Ｍ、約１．６×１０−１０Ｍ、約５．８×１０−１０Ｍ、約１．１×１０−９Ｍ、約８．１×１０−１０Ｍ、約４．６×１０−１０Ｍ又は約３．６×１０−１０Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、そのような親和性は、約１．１×１０−９Ｍ〜約８．１×１０−１１Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約１．１×１０−９Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、ｈＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示された場合、約２．４×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、ｃＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示された場合、約６．２×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約６．２×１０−９Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、Ｊｕｒｋａｔ細胞の表面に発現されるｈＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＫＤによって示された場合、約５．１×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約５．１×１０−１０Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、Ｊｕｒｋａｔ細胞の表面に発現されるｃＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＫＤによって示された場合、約４．０×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約４．０×１０−１０Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、Ｊｕｒｋａｔ細胞の表面に発現されるｍＴＩＧＩＴ（配列番号３）に対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＫＤによって示された場合、約９．８×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約９．８×１０−９Ｍ以下である。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約９．８×１０−９Ｍ以上である。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の表面に発現されるｈＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＫＤによって示された場合、約１．３×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約１．３×１０−９Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、カニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞の表面に発現されるｃＴＩＧＩＴに対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＫＤによって示された場合、約２．８×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約２．８×１０−９Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、マウス制御性Ｔ細胞の表面に発現されるｍＴＩＧＩＴ（すなわち、そのようなｍＴＩＧＩＴが配列番号３又は１３８であるかどうかに関わらず、そのような配列番号を含む、そのような細胞で天然に発生するｍＴＩＧＩＴ）に対する、本明細書に提供されるＡＢＰの親和性は、ＫＤによって示された場合、約２．５×１０−８Ｍである。いくつかの実施形態では、そのようなＫＤは約２．５×１０−８Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＸのＫＤでｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）に、≦１０ＸのＫＤでｃＴＩＧＩＴ（配列番号２）又はｍＴＩＧＩＴ（配列番号３又は１３８）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＸのＫＤでｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）に、≦５ＸのＫＤでｃＴＩＧＩＴ（配列番号２）又はｍＴＩＧＩＴ（配列番号３又は１３８）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＸのＫＤでｈＴＩＧＩＴ（配列番号１）に、≦２ＸのＫＤでｃＴＩＧＩＴ（配列番号２）又はｍＴＩＧＩＴ（配列番号３又は１３８）に特異的に結合する。いくつかの態様では、Ｘは本開示に記載される任意のＫＤである。いくつかの態様では、Ｘは、０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ又は１００ｎＭである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＫＤ（ｈＴＩＧＩＴ）：ＫＤ（ｃＴＩＧＩＴ）の比は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、約１．９８×１０−１、約２．６１×１０−１、約３．０３×１０−１、約３．５８×１０−１、約６．６２×１０−３、約１．９８×１０−１、約５．３７×１０−３、約３．９０×１０−３、約６．２２×１０−３、約２．９１×１０−１、約４．１４×１０−１、約６．６７×１０−１、約２．１８×１０−１、約１．７８×１０−１、約１．２１×１０−１又は約３．０３×１０−１から選択される。いくつかの実施形態では、そのような比は、約３．９０×１０−３〜約６．６７×１０−１の範囲である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＫＤ（ｈＴＩＧＩＴ）：ＫＤ（ｃＴＩＧＩＴ）の比は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、約３．８７×１０−２である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＫＤ（ｈＴＩＧＩＴ）：ＫＤ（ｃＴＩＧＩＴ）の比は、ＭＳＤ−ＳＥＴよって測定された場合、約３．３３×１０−１、約２．３１×１０−１、約１．０９×１０−１、約１．０７×１０−１又は約１．６９×１０−１から選択される。いくつかの実施形態では、そのような比は、約１．０７×１０−１Ｍ〜約３．３３×１０−１Ｍの範囲である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、少なくとも約１０４Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、少なくとも約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、少なくとも約１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、約１０４Ｍ−１×ｓｅｃ−１〜約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１〜約１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋａは少なくとも約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴに対して、約３．２×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約７．０×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約７．７×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．６×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．３×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．５×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．１×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約４．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約７．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約８．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１又は約１．４×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１から選択されるｋａを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋａは、約３．２×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１〜約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１の範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなｋｄは約２．０×１０６Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴに対して、約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋａは少なくとも約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、ｃＴＩＧＩＴに対して、約７．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋａは少なくとも約７．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１０−５ｓｅｃ−１以下のｋｄを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは約１０−４ｓｅｃ−１以下のｋｄを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは約１０−３ｓｅｃ−１以下のｋｄを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、約１０−２ｓｅｃ−１〜約１０−５ｓｅｃ−１のｋｄを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、約１０−２ｓｅｃ−１〜約１０−４ｓｅｃ−１のｋｄを有する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、約１０−３ｓｅｃ−１〜約１０−５ｓｅｃ−１のｋｄを有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴに対して、約２．３×１０−４ｓｅｃ−１、約６．３×１０−５ｓｅｃ−１、約１．４×１０−４ｓｅｃ−１、約８．５×１０−４ｓｅｃ−１、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１、約３．５×１０−４ｓｅｃ−１、約２．４×１０−４ｓｅｃ−１、約６．６×１０−４ｓｅｃ−１、約５．９×１０−４ｓｅｃ−１又は約５．０×１０−４ｓｅｃ−１から選択されるｋｄを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋｄは、約６．３×１０−５ｓｅｃ−１〜約８．５×１０−４ｓｅｃ−１の範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなｋｄは約８．５×１０−４ｓｅｃ−１未満である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、ｈＴＩＧＩＴに対して、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋｄは約３．８×１０−４ｓｅｃ−１未満である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定された場合、ｃＴＩＧＩＴに対して、約４．６×１０−３ｓｅｃ−１のｋｄを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋｄは約４．６×１０−３ｓｅｃ−１未満である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約３．２×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約２．３×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約７．１×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約７．０×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約６．３×１０−５ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約８．１×１０−１１ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約７．７×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約１．４×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約１．９×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約１．６×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約８．５×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約５．６×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約３．８×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約２．４×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約１．３×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約３．５×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約２．８×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約１．５×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約２．４×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約１．６×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約１．１×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約６．６×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約５．８×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約４．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約３．５×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約１．１×１０−９ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約７．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約５．９×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約８．１×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約８．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約３．８×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約４．６×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約１．４×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約５．０×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、及びｈＴＩＧＩＴに対して約３．６×１０−１０ＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋａ、ｋｄ及びＫＤは、例えば、米国特許第９，７１３，６４１号明細書の例６に記載されている方法に従って決定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに対して約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｈＴＩＧＩＴに対して約３．８×１０−４ｓｅｃ−１のｋｄ、ｈＴＩＧＩＴに対して約２．４×１０−１０ＭのＫＤ、ｃＴＩＧＩＴに対して約７．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１のｋａ、ｃＴＩＧＩＴに対して約４．６×１０−３ｓｅｃ−１のｋｄ、ｃＴＩＧＩＴに対して約６．２×１０−９ＭのＫＤ、及びｍＴＩＧＩＴ（配列番号３）に対して約７．０×１０−７Ｍ超のＫＤを有する。いくつかの実施形態では、そのようなｋａ、ｋｄ及びＫＤは、例えば、米国特許第９，７１３，６４１号明細書の例６に記載されている方法に従って決定される。
いくつかの実施形態では、ＫＤ、ｋａ及びｋｄは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定される。いくつかの態様では、ＳＰＲ分析はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）機器を利用する。いくつかの態様では、抗原をカルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ４又はＣＭ５）上に固定し、本明細書に提供されるＡＢＰと接触させる。会合及び解離速度定数は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（登録商標）ソフトウェア及び１：１ラングミュア結合モデルを使用して計算してもよい。いくつかの態様では、アッセイは２５℃で行われる。いくつかの態様では、アッセイは３７℃で行われる。
いくつかの実施形態では、ＫＤ、ｋａ及びｋｄは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して決定される。任意の好適なＢＬＩ法を使用してもよい。いくつかの態様では、ＢＬＩ分析はＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）機器を利用する。いくつかの態様では、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサーを使用して、センサーの表面にＡＢＰを捕捉する。その後、固定したＡＢＰと様々な濃度のＴＩＧＩＴとを接触させることにより、ＡＢＰと抗原との会合をモニタリングする。次いで、ＴＩＧＩＴを含まない緩衝液中で、抗原とＡＢＰとの解離を測定する。会合及び解離速度定数は、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）分析ソフトウェアの動態モジュールを使用して計算する。いくつかの態様では、アッセイは３０℃で行われる。
他の実施形態では、参照によりその全体が組み込まれるＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， １９９９， ２９３：８６５−８８１に記載されているように、放射性標識化抗原結合アッセイによってＫＤが決定されてもよい。
他の実施形態では、例えば、米国特許第９，７１３，６４１号明細書の例４に記載されているように、ＭＳＤ−ＳＥＴを使用してＫＤが決定されてもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、例えば、米国特許第９，７１３，６４１号明細書の例７に記載されているヒトＴＩＧＩＴ Ｊｕｒｋａｔ共培養アッセイでのＩＬ−２産生によって測定された場合、約０．２２ｎＭ、約０．３１ｎＭ、約０．３３ｎＭ、約０．３４ｎＭ、約０．２５ｎＭ、約０．２４ｎＭ、約０．１１ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．１４ｎＭ、約０．１６ｎＭ、約１．４０ｎＭ、約０．７１ｎＭ、約０．２１ｎＭ、約１．１１ｎＭ、約０．１３ｎＭ、約０．２０ｎＭ、約０．６８ｎＭ又は約０．６１ｎＭのＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ５０は、約０．０６ｎＭ〜約１．４０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ５０は約１．４０ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、カニクイザルＴＩＧＩＴ Ｊｕｒｋａｔ共培養アッセイでのＩＬ−２産生によって測定された場合、約２．８７ｎＭのＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ５０は約２．８７ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、そのようなアッセイでのＥＣ５０（ｃＴＩＧＩＴ）：ＥＣ５０（ｈＴＩＧＩＴ）の比は、約２．０５〜約４７．８の範囲である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ヒトドナーから単離され、例えば、米国特許第９，７１３，６４１号明細書の例９に記載されているように処理されたＰＢＭＣ中のＴＮＦ産生によって測定された場合、約５．０２ｎＭ〜約１８．８６ｎＭの範囲のＥＣ１０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ１０は約１８．８６ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＴＮＦ産生によって測定された場合、約１２．６０ｎＭ〜約２０．６０ｎＭの範囲のＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ５０は約２０．６０ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＴＮＦ産生によって測定された場合、約２２．４９ｎＭ〜約３１．５９ｎＭの範囲のＥＣ９０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ９０は約３１．５９ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＴＮＦ産生によって測定された場合、約５．０２ｎＭ〜約１８．８６ｎＭの範囲のＥＣ１０、約１２．６０ｎＭ〜約２０．６０ｎＭの範囲のＥＣ５０及び約２２．４９ｎＭ〜約３１．５９ｎＭの範囲のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＴＮＦ産生によって測定された場合、約１１．９４ｎＭ以下のＥＣ１０、約１６．６０ｎＭ以下のＥＣ５０及び約２７．０４ｎＭ以下のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＴＮＦ産生によって測定された場合、約１８．８６ｎＭ以下のＥＣ１０、約２０．０６ｎＭ以下のＥＣ５０及び約３１．５９ｎＭ以下のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＴＮＦ産生によって測定された場合、約５．０２ｎＭ以下のＥＣ１０、約１２．６０ｎＭ以下のＥＣ５０及び約２２．４９ｎＭ以下のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ヒトドナーから単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約０．３７ｎＭ〜約１．０５ｎＭの範囲のＥＣ１０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ１０は約１．０５ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ヒトドナーから単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約０．９４ｎＭ〜約１．１２ｎＭの範囲のＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ５０は約１．１２ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ヒトドナーから単離され、例９に記載されているように処理されたＣＤ４＋Ｔ細胞中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約１．０４ｎＭ〜約２．７２ｎＭの範囲のＥＣ９０を有する。いくつかの実施形態では、そのようなＥＣ９０は約２．７２ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約０．３７ｎＭ〜約１．０５ｎＭの範囲のＥＣ１０、約０．９４ｎＭ〜約１．１２ｎＭの範囲のＥＣ５０及び約１．０４ｎＭ〜約２．７２ｎＭの範囲のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約０．３７ｎＭ以下のＥＣ１０、約１．００ｎＭ以下のＥＣ５０及び約２．７２ｎＭ以下のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約０．８５ｎＭ以下のＥＣ１０、約０．９４ｎＭ以下のＥＣ５０及び約１．０４ｎＭ以下のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約１．０５ｎＭ以下のＥＣ１０、約１．１２ｎＭ以下のＥＣ５０及び約１．１９ｎＭ以下のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、それぞれヒトドナーから単離されたＰＢＭＣ中のＩＦＮ−γ産生によって測定された場合、約０．７５ｎＭ以下のＥＣ１０、約１．０２ｎＭ以下のＥＣ５０及び約１．６５ｎＭ以下のＥＣ９０を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約５．２４×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約２．６４×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約５．４０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約３．２０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約４．５７×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約１．５７×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約２．５０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約２．３０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約３．３２×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約８．０２×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約８．１０×１０−１２ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約３．５０×１０−１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．４６×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約３．６９×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約５．００×１０−１２ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約１．５０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．９６×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約８．９８×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約４．９０×１０−１２ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約４．６０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約３．１１×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約１．７５×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合、約２．５４×１０−９ＭのＫＤでｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約３．１３×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約２．５８×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．８３×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約９．３５×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．７１×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約６．５５×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約１．１０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．４７×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約８．１４×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約１．５０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．３５×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約６．５７×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約５．６０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．４４×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約４．００×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．２３×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約３．８０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約５．２６×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約７．９４×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約２．１０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約３．７８×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約７．０４×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約７．００×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約４．２９×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約１．１０×１０−７ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに、約４．１０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約４．４８×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｈＴＩＧＩＴに、約７．２０×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定された場合）でｃＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約３．００×１０−１１ＭのＫＤでｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約８．００×１０−１１ＭのＫＤでｈＴＩＧＩＴに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．２ｎＭ、約２．３ｎＭ、約１．６ｎＭ、約１．９ｎＭ、約１．７ｎＭ、約３．２ｎＭ、約２．６ｎＭ、約２．９ｎＭ、約３．３ｎＭ、約２ｎＭ、約２．２ｎＭ、約２．１ｎＭ、約１．８ｎＭ、約６．４ｎＭ又は約１ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害する。いくつかの実施形態では、そのようなＩＣ５０は、約１ｎＭ〜約６．４ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＩＣ５０は約６．４ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、そのようなＩＣ５０は、米国特許第９，７１３，６４１号明細書の例５に記載されているように決定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．４ｎＭ、約１．３ｎＭ、約１．２ｎＭ、約１．６ｎＭ、約２ｎＭ、約１．２ｎＭ、約１．１ｎＭ、約１ｎＭ、約１．８ｎＭ、約１．９ｎＭ、約２ｎＭ又は約０．８ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、そのようなＩＣ５０は、約０．８ｎＭ〜約２ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、そのようなＩＣ５０は約２ｎＭ以下である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．４ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．３ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．３ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．６ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．９ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．６ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．７ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．４ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約３．２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．４ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．６ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．９ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．９ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．１ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約３．３ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．７ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．１ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．８ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．６ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．６ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．１ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．１ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．３ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．６ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．９ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１．８ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．９ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約６．４ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約２ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約２．３ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約１．９ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、約１ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合を阻害し、約０．８ｎＭのＩＣ５０でＴＩＧＩＴに対するＰＶＲＬ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、そのようなＩＣ５０は約２ｎＭ以下である。
２．５．１．グリコシル化変異体
特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、グリコシル化される程度が増大又は低下するか、グリコシル化されないように改変されてもよい。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には「Ｎ結合型」又は「Ｏ結合型」のいずれかである。
「Ｎ結合型」グリコシル化は、アスパラギン残基の側鎖に糖鎖が結合することを指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖に糖鎖が酵素的に結合するための認識配列である。したがって、ポリペプチドにこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が作られる。
「Ｏ−結合型」グリコシル化は、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースのいずれかの糖がヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンに結合することを指すが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
本明細書に提供されるＡＢＰへのＮ結合型グリコシル化部位の付加、又は本明細書に提供されるＡＢＰからのＮ結合型グリコシル化部位の欠失は、上記のトリペプチド配列のうちの１つ以上が作製又は除去されるようにアミノ酸配列を改変することにより達成され得る。Ｏ−結合型グリコシル化部位の付加又は欠失は、ＡＢＰの配列内への、又は（場合によって）ＡＢＰの配列に対する１つ以上のセリン又はスレオニン残基の付加、欠失又は置換によって達成され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、天然のＡＢＰとは異なるグリコシル化モチーフを含む。任意の好適な天然のグリコシル化モチーフは、本明細書に提供されるＡＢＰで改変され得る。例えば、免疫グロブリンの構造的特性及びグリコシル化特性は、当技術分野で知られており、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＳｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ， Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１０， １２５：Ｓ４１−５２に要約されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７）に結合したオリゴ糖が修飾されたＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。哺乳動物細胞により産生される天然のＩｇＧ１抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合により一般に結合されている分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。参照によりその全体が組み込まれるＷｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．， ＴＩＢＴＥＣＨ， １９９７， １５：２６−３２を参照されたい。Ａｓｎ２９７に結合したオリゴ糖には、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸などの様々な炭水化物、並びに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」でＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが挙げられ得る。
いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７に結合したオリゴ糖は、改変されたＡＤＣＣを有するＡＢＰを作製するように修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、ＡＤＣＣを改善するように改変される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、ＡＤＣＣを低下させるように改変される。
いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰは、天然のＩｇＧ１ドメインと比較してＡｓｎ２９７の位置でのフコース含有量が低下したＩｇＧ１ドメインを含む。そのようなＦｃドメインはＡＤＣＣが改善されていることが知られている。参照によりその全体が組み込まれるＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．， ２００２， ２７７：２６７３３−２６７４０を参照されたい。いくつかの態様では、そのようなＡＢＰは、Ａｓｎ２９７の位置にフコースを含まない。フコースの量は、例えば、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２００８／０７７５４６号パンフレットに記載されているような任意の好適な方法を使用して決定され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ＧｌｃＮＡｃにより二分された（ｂｉｓｅｃｔｅｄ）ＡＢＰのＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖などの二分されたオリゴ糖を含む。そのようなＡＢＰ変異体は、フコシル化が減少している、及び／又はＡＤＣＣ機能が改善されている場合がある。そのようなＡＢＰ変異体の例は、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２００３／０１１８７８号パンフレット、米国特許第６，６０２，６８４号明細書及び米国特許公開第２００５／０１２３５４６号明細書に記載されている。
本明細書に提供されるＡＢＰに組み込まれ得る他の例示的なグリコシル化変異体は、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許公開第２００３／０１５７１０８号明細書、米国特許公開第２００４／００９３６２１号明細書、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号明細書、米国特許公開第２００３／０１１５６１４号明細書、米国特許公開第２００２／０１６４３２８号明細書、米国特許公開第２００４／００９３６２１号明細書、米国特許公開第２００４／０１３２１４０号明細書、米国特許公開第２００４／０１１０７０４号明細書、米国特許公開第２００４／０１１０２８２号明細書、米国特許公開第２００４／０１０９８６５号明細書、国際特許公開第２０００／６１７３９号明細書、国際特許公開第２００１／２９２４６号明細書、国際特許公開第２００３／０８５１１９号明細書、国際特許公開第２００３／０８４５７０号明細書、国際特許公開第２００５／０３５５８６号明細書、国際特許公開第２００５／０３５７７８号明細書、国際特許公開第２００５／０５３７４２号明細書、国際特許公開第２００２／０３１１４０号明細書、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２００４， ３３６：１２３９−１２４９、及びＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００４， ８７：６１４−６２２に記載されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖に少なくとも１つのガラクトース残基を有するＦｃ領域を含む。そのようなＡＢＰ変異体は、ＣＤＣ機能が改善されている場合がある。そのようなＡＢＰ変異体の例は、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる国際公開第１９９７／３００８７号パンフレット、国際公開第１９９８／５８９６４号パンフレット及び国際公開第１９９９／２２７６４号パンフレットに記載されている。
脱フコシル化ＡＢＰを産生することができる細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（各々参照によりその全体が組み込まれるＲｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．， １９８６， ２４９：５３３−５４５；米国特許公開第２００３／０１５７１０８号明細書；国際公開第２００４／０５６３１２号パンフレットを参照されたい）と、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子又はＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（各々参照によりその全体が組み込まれるＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００４， ８７：６１４−６２２；Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００６， ９４：６８０−６８８；及び国際公開第２００３／０８５１０７号パンフレットを参照されたい）とが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、アグリコシル化ＡＢＰである。アグリコシル化ＡＢＰは、当技術分野で既知の任意の方法又は本明細書に記載の任意の方法を使用して作製することができる。いくつかの態様では、アグリコシル化ＡＢＰは、ＡＢＰを改変して、あらゆるグリコシル化部位を除去することにより作製される。いくつかの態様では、グリコシル化部位はＡＢＰのＦｃ領域からのみ除去される。いくつかの態様では、アグリコシル化ＡＢＰは、大腸菌などのグリコシル化できない生物にＡＢＰを発現させることにより、又は無細胞反応混合物中でＡＢＰを発現させることにより作製される。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ネイティブＩｇＧ１抗体と比較してエフェクター機能が低下した定常領域を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体に対する、本明細書に提供されるＡＢＰのＦｃ領域の定常領域の親和性は、そのようなＦｃ受容体に対するネイティブＩｇＧ１定常領域の親和性よりも低い。
２．６．Ｆｃ領域のアミノ酸配列変異体
特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、天然のＦｃ領域と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入又は欠失を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、そのような置換、挿入又は欠失により、安定性、グリコシル化又はその他の特徴が変化したＡＢＰが得られる。いくつかの態様では、そのような置換、挿入又は欠失により、アグリコシル化ＡＢＰが得られる。
いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ｆｃ受容体に対する親和性が変化したＡＢＰ、又は免疫学的にさらに不活性なＡＢＰが得られるように改変される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰ変異体は、全部ではないが一部のエフェクター機能を有する。そのようなＡＢＰは、例えば、ＡＢＰの半減期がインビボで重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体活性化及びＡＤＣＣ）が不要又は有害である場合に有用であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、ヒンジ安定化変異Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅのうちの１つ以上を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。参照によりその全体が組み込まれるＡａｌｂｅｒｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２００２， １０５：９−１９を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、以下の変異、すなわち、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ及びＬ２３５Ａのうちの１つ以上を含む。参照によりその全体が組み込まれるＡｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ４０：５８５−５９３を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｇ２３６の位置に欠失を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合を低下させる１つ以上の変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、Ｓ２２８（例えば、Ｓ２２８Ａ）、Ｌ２３４（例えば、Ｌ２３４Ａ）、Ｌ２３５（例えば、Ｌ２３５Ａ）、Ｄ２６５（例えば、Ｄ２６５Ａ）及びＮ２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ）から選択される残基にある。いくつかの態様では、ＡＢＰはＰＶＡ２３６変異を含む。ＰＶＡ２３６とは、ＩｇＧ１の２３３〜２３６位のアミノ酸のアミノ酸配列ＥＬＬＧ、又はＩｇＧ４のＥＦＬＧがＰＶＡに置き換わっていることを意味する。参照によりその全体が組み込まれる米国特許第９，１５０，６４１号明細書を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、各々参照によりその全体が組み込まれるＡｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９９， ２９：２６１３−２６２４；国際公開第１９９９／０５８５７２号パンフレット；及び／又は英国特許出願第９８０９９５１８号明細書に記載されているように改変される。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、変異Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓのうちの１つ以上を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、３２７位及び３２９位から選択される１つ以上の位置にアミノ酸置換を有する。参照によりその全体が組み込まれる米国特許第６，７３７，０５６号明細書を参照されたい。そのようなＦｃ変異体には、２６５位及び２９７位の残基がアラニンに置換されたいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含め、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位及び３２７位のアミノ酸のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体が挙げられる。参照によりその全体が組み込まれる米国特許第７，３３２，５８１号明細書を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、２６５位のアミノ酸にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、２９７位のアミノ酸にアラニンを含む。
特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位及び３３４位のうちの１つ以上での置換など、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、参照によりその全体が組み込まれるＬａｚａｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ， ２００６，１０３：４００５−４０１０に記載されているように、２３９位、３３２位及び３３０位に１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、Ｃ１ｑ結合及び／又はＣＤＣを改善又は低下させる１つ以上の改変を含む。各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第６，１９４，５５１号明細書；国際公開第９９／５１６４２号パンフレット；及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０００， １６４：４１７８−４１８４を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、半減期を延長させる１つ以上の改変を含む。半減期が増大し、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善されたＡＢＰは、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれるＨｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００６， １７６：３４６−３５６；及び米国特許公開第２００５／００１４９３４号明細書に記載されている。そのようなＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基、すなわち、ＩｇＧの２３８位、２５０位、２５６位、２６５位、２７２位、２８６位、３０３位、３０５位、３０７位、３１１位、３１２位、３１４位、３１７位、３４０位、３５６位、３６０位、３６２位、３７６位、３７８位、３８０位、３８２位、４１３位、４２４位、４２８位及び４３４位のうちの１つ以上に置換を有するものが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第７，３７１，８２６号明細書、米国特許第５，６４８，２６０号明細書及び米国特許第５，６２４，８２１号明細書；Ｄｕｎｃａｎ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ， １９８８， ３２２：７３８−７４０；並びに国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに記載されているような１つ以上のＦｃ領域変異体を含む。
２．７．ピログルタマート
当技術分野で知られているように、組換えタンパク質のＮ末端のグルタマート（Ｅ）及びグルタミン（Ｑ）はいずれも、インビトロ及びインビボで自発的に環化してピログルタマート（ｐＥ）を形成することができる。参照によりその全体が組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．， ２０１１， ２８６：１１２１１−１１２１７を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端位置にｐＥ残基を有するポリペプチド配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されているポリペプチド配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されているポリペプチド配列を含むＡＢＰである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端位置にｐＥ残基を有するＶＨ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されているＶＨ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、配列番号４〜２４から選択されるＶＨ配列を含むＡＢＰであり、ここでＮ末端のＱ残基はｐＥに変換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＡＢＰを含む組成物であり、ここでＡＢＰは配列番号４〜２４から選択されるＶＨを含み、そのような組成物中のそのようなＶＨのＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％はＱからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端位置にｐＥ残基を有するＶＬ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されているＶＬ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、配列番号２５〜２８から選択されるＶＬ配列を含むＡＢＰであり、ここでＮ末端のＥ残基はｐＥに変換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのはＡＢＰを含む組成物であり、ここでＡＢＰは配列番号２５〜２８から選択されるＶＬを含み、そのような組成物中のそのようなＶＬのＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％はＥからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端位置にｐＥ残基を有する重鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されている重鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、配列番号７９、８０、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２１、１２２、１２３又は１２４から選択される重鎖配列を含むＡＢＰであり、ここでＮ末端のＱ残基はｐＥに変換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＡＢＰを含む組成物であり、ここでＡＢＰは、配列番号７９、８０、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２１、１２２、１２３又は１２４から選択される重鎖を含み、そのような組成物中のそのような重鎖のＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％はＱからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端位置にｐＥ残基を有する軽鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されている軽鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、配列番号８１、９２、１０７又は１２０から選択される軽鎖配列を含むＡＢＰであり、ここでＮ末端のＥ残基はｐＥに変換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＡＢＰを含む組成物であり、ここでＡＢＰは配列番号８１、９２、１０７又は１２０から選択される軽鎖を含み、そのような組成物中のそのような軽鎖のＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％はＥからｐＥに変換されている。
２．８．システイン操作抗原結合タンパク質変異体
特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、「チオＭＡｂ」としても知られており、ＡＢＰの１つ以上の残基がシステイン残基に置換されたシステイン操作ＡＢＰである。特定の実施形態では、置換残基は、ＡＢＰの溶媒接触部位に存在する。そのような残基をシステインで置換することによって、ＡＢＰの溶媒接触部位に反応性チオール基を導入し、反応性チオール基を用いて、薬物部分又はリンカー−薬物部分などの他の部分にＡＢＰをコンジュゲートして、例えば免疫コンジュゲートを作製してもよい。
特定の実施形態では、以下の残基、すなわち、軽鎖のＶ２０５、重鎖Ｆｃ領域のＡ１１８及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００のうちの任意の１つ以上がシステインで置換されていてもよい。システイン操作ＡＢＰは、例えば、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第７，５２１，５４１号明細書に記載されているように作製されてもよい。
２．８．１．免疫コンジュゲート
２．８．１．１．抗原結合タンパク質−ポリマーコンジュゲート
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、ポリマーとコンジュゲートすることによって誘導体化される。任意の好適なポリマーをＡＢＰにコンジュゲートさせてもよい。
いくつかの実施形態では、ポリマーは水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの例示的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）−コ−ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びそれらの混合物が挙げられる。いくつかの態様では、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドが、水中での安定性により製造目的に有用であり得る。
ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、分岐していても分岐していなくてもよい。各ＡＢＰに結合するポリマーの数は様々であってよく、複数のポリマーが結合する場合、それらは同じポリマーであっても異なるポリマーであってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、改善されるＡＢＰの特定の特性又は機能と、ＡＢＰの使用目的とを含む考慮事項に基づいて決定することができる。
２．８．１．２．抗原結合タンパク質−薬物コンジュゲート
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、１つ以上の治療剤にコンジュゲートされる。任意の好適な治療剤をＡＢＰにコンジュゲートさせてもよい。例示的な治療剤には、サイトカイン、ケモカイン、並びにＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＮＦ−α（本明細書で使用される場合、「ＴＮＦ」）、ＩＬ−２、ＩＬ−１５融合体、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−１０トラップ、ＩＬ−２７トラップ及びＩＬ−３５トラップなどの所望のＴ細胞活性を誘導する他の薬剤が挙げられる。サイトカイントラップ及びそれらの使用は、当技術分野で知られており、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＥｃｏｎｏｍｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２００３， ９：４７−５２に記載されている。
３．ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質の作製方法
３．１．ＴＩＧＩＴ抗原の調製
本明細書に提供されるＡＢＰの単離に使用されるＴＩＧＩＴ抗原は、インタクトＴＩＧＩＴであってもＴＩＧＩＴの断片であってもよい。ＴＩＧＩＴ抗原は、例えば、単離されたタンパク質、又は細胞の表面に発現されるタンパク質の形態であり得る。
いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ抗原は、ＴＩＧＩＴの非天然型変異体、例えば、天然に生じないアミノ酸配列又は翻訳後修飾を有するＴＩＧＩＴタンパク質である。
いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ抗原は、例えば、細胞内もしくは膜貫通配列、又はシグナル配列を除去することにより切断される。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ抗原は、そのＣ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン又はポリヒスチジンタグに融合する。
３．２．モノクローナル抗体の作製方法
モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９７５， ２５６：４９５−４９７（参照によりその全体が組み込まれる）によって初めて記載されたハイブリドーマ法を用いて、及び／又は組換えＤＮＡ法（例えば、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）により得られ得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ファージディスプレイライブラリー又は酵母ベースの提示ライブラリーを用いて得られ得る。例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８，２５８，０８２号明細書及び米国特許第８，６９１，７３０号明細書を参照されたい。
ハイブリドーマ法では、マウス又は他の適切な宿主動物を免疫して、免疫に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生する又は産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、インビトロでリンパ球を免疫してもよい。次いで、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用してリンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。参照によりその全体が組み込まれるＧｏｄｉｎｇ Ｊ．Ｗ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ３ｒｄ ｅｄ．（１９８６）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡを参照されたい。
融合していない親骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養培地にハイブリドーマ細胞を播種し、増殖させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマの培養培地には典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含ませる。
有用な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体産生を補助し、ＨＡＴ培地の有無などの培地条件に感受性を示す骨髄腫細胞である。これらのうち、好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株、例えば、ＭＯＰ−２１及びＭＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの（カリフォルニア州サンディエゴのＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒから入手可能）、並びにＳＰ−２又はＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞（メリーランド州ロックビルのＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能）である。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株についても記載されている。例えば、参照によりその全体が組み込まれるＫｏｚｂｏｒ， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９８４， １３３：３００１を参照されたい。
所望の特異性、親和性及び／又は生物学的活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、限界希釈手順によって、選択されたクローンをサブクローニングし、標準的な方法により増殖させてもよい。Ｇｏｄｉｎｇの上記文献を参照されたい。この目的に適した培養培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物の腹水腫瘍としてインビボで増殖させてもよい。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離及び配列決定され得る。したがって、ハイブリドーマ細胞は、所望の特性を有する抗体をコードするＤＮＡの有用な供給源として機能することができる。単離後、ＤＮＡを発現ベクターに挿入してもよく、これを、普通なら抗体を産生しない細菌（例えば、大腸菌）、酵母（例えば、サッカロミセス又はピキア種）、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトして、モノクローナル抗体を産生させる。
３．３．キメラ抗体の作製方法
キメラ抗体を作製する例示的な方法は、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第４，８１６，５６７号明細書及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ， １９８４， ８１：６８５１−６８５５に記載されている。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、組換え技術を使用して、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）とヒト定常領域とを組み合わせることによって作製される。
３．４．ヒト化抗体の作製方法
ヒト化抗体は、非ヒトモノクローナル抗体の構造部分の大部分又は全部を、対応するヒト抗体配列に置き換えることによって作製されてもよい。その結果、抗原特異的な可変、又はＣＤＲのみが非ヒト配列から構成されるハイブリッド分子が生成される。ヒト化抗体を得る方法には、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれるＷｉｎｔｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ， １９９１， ３４９：２９３−２９９；Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９８， ９５：８９１０−８９１５；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．， ２０００， ２７５：３６０７３−３６０７８；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９８９， ８６：１００２９−１００３３；並びに米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，６９３，７６１号明細書、米国特許第５，６９３，７６２号明細書及び米国特許第６，１８０，３７０号明細書に記載されているものが挙げられる。
３．５．ヒト抗体の作製方法
ヒト抗体は、例えば、トランスジェニック動物（例えば、ヒト化マウス）を使用することにより、当技術分野で既知の様々な技術によって作製することができる。例えば、各々参照によりその全体が組み込まれるＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９３， ９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９９３， ３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．， １９９３， ７：３３；並びに米国特許第５，５９１，６６９号明細書、米国特許第５，５８９，３６９号明細書及び米国特許第５，５４５，８０７号明細書を参照されたい。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーから得ることもできる（例えば、各々参照によりその全体が組み込まれるＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， １９９１， ２２７：３８１−３８８；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， １９９１， ２２２：５８１−５９７；並びに米国特許第５，５６５，３３２号明細書及び米国特許第５，５７３，９０５号明細書を参照されたい）。ヒト抗体はまた、インビトロで活性化されたＢ細胞によって作製されてもよい（例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第５，５６７，６１０号明細書及び米国特許第５，２２９，２７５号明細書を参照されたい）。ヒト抗体はまた、酵母ベースの提示ライブラリーから得られてもよい（例えば、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８，６９１，７３０号明細書を参照されたい）。
３．６．抗体断片の作製方法
本明細書に提供される抗体断片は、本明細書に記載の例示的な方法又は当技術分野で既知の方法を含む任意の好適な方法によって作製されてもよい。好適な方法には、組換え技術と、抗体全体のタンパク質消化とが挙げられる。抗体断片を作製する例示的な方法は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ．Ｍｅｄ．， ２００３， ９：１２９−１３４に記載されている。ｓｃＦｖ抗体の作製方法は、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれるＰｌｕｃｋｔｈｕｎ， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ． １１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ２６９−３１５（１９９４）；国際公開第９３／１６１８５号パンフレット；並びに米国特許第５，５７１，８９４号明細書及び米国特許第５，５８７，４５８号明細書に記載されている。
３．７．代替足場の作製方法
本明細書に提供される代替足場は、本明細書に記載の例示的な方法又は当技術分野で既知の方法を含む任意の好適な方法によって作製されてもよい。例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標）の調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＥｍａｎｕｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｍＡｂｓ， ２０１１， ３：３８−４８に記載されている。ｉＭａｂの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれる米国特許公開第２００３／０２１５９１４号明細書に記載されている。Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）の調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＶｏｇｔ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ， Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２００４， ５：１９１−１９９に記載されている。Ｋｕｎｉｔｚドメインの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＷａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ．＆ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．， １９９２， １８６：１１８−１１４５に記載されている。チオレドキシンペプチドアプタマーの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＧｅｙｅｒ ａｎｄ Ｂｒｅｎｔ， Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．， ２０００， ３２８：１７１−２０８に示されている。Ａｆｆｉｂｏｄｙの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＦｅｒｎａｎｄｅｚ， Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００４， １５：３６４−３７３に示されている。ＤＡＲＰｉｎの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＺａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２００７， ３６９：１０１５−１０２８に示されている。Ａｆｆｉｌｉｎの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＥｂｅｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２００７， ３７２：１７２−１８５に示されている。Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＧｒａｖｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．， ２０００， ２７５：３７３９０−３７３９６に示されている。Ａｖｉｍｅｒの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＳｉｌｖｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００５， ２３：１５５６−１５６１に示されている。Ｆｙｎｏｍｅｒの調製方法が、参照によりその全体が組み込まれるＳｉｌａｃｃｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．， ２０１４， ２８９：１４３９２−１４３９８に示されている。
代替足場の詳細については、各々参照によりその全体が組み込まれるＢｉｎｚ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， ２００５ ２３：１２５７−１２６８及びＳｋｅｒｒａ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００７ １８：２９５−３０４に示されている。
３．８．変異体の作製方法
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、例えばファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して作製され得る親ＡＢＰの親和性成熟変異体である。要約すると、１つ以上のＣＤＲ残基を変異させ、変異体ＡＢＰ又はその一部をファージに提示させ、親和性についてスクリーニングしてもよい。そのような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（参照によりその全体が組み込まれるＣｈｏｗｄｈｕｒｙ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２００８， ２０７：１７９−１９６を参照されたい）及び／又は抗原と接触する残基で行われてもよい。あるいは、親ＡＢＰの親和性成熟変異体が、酵母ベースの提示プラットフォームを使用するために作製又は選択されてもよい（例えば、国際公開第２００９／０３６３７９号パンフレット、国際公開第２０１０／１０５２５６号パンフレット、国際公開第２０１２／００９５６８号パンフレット、及びＸｕ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．， Ｖｏｌ． ２６（１０）， ｐｐ． ６６３−６７０（２０１３）を参照されたい）。
エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、及びトリヌクレオチド特異的変異誘発（ＴＲＩＭ）などのオリゴヌクレオチド特異的変異誘発を含め、任意の好適な方法を使用して、ＡＢＰをコードするポリヌクレオチド配列に可変性を導入することができる。いくつかの態様では、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）がランダム化される。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して特異的に同定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３は、変異の標的になることが多い。
可変領域及び／又はＣＤＲへの多様性の導入は、二次ライブラリーの作製に使用することができる。次いで、二次ライブラリーをスクリーニングして、親和性が改善されたＡＢＰ変異体を同定する。二次ライブラリーの構築と、二次ライブラリーからの再選択とによる親和性成熟は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ２００１， １７８：１−３７に記載されている。
３．９．ベクター、宿主細胞及び組換え方法
ＴＩＧＩＴ ＡＢＰをコードする単離核酸、核酸を含むベクター、及びベクターと核酸とを含む宿主細胞、並びにＡＢＰの産生のための組換え技術も提供される。
ＡＢＰの組換え産生では、それをコードする核酸を単離し、その後のクローニング（すなわち、ＤＮＡの増幅）又は発現のために複製可能なベクターに挿入してもよい。いくつかの態様では、核酸は、例えば、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第５，２０４，２４４号明細書に記載されているように、相同組換えにより作製されてもよい。
当技術分野では多くの異なるベクターが知られている。ベクター成分は、一般に、例えば、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第５，５３４，６１５号明細書に記載されているように、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター及び転写終結配列のうちの１つ以上を含む。
好適な宿主細胞の例示的な例を以下に示す。これらの宿主細胞は限定することを意味するものではなく、任意の好適な宿主細胞を使用して、本明細書に提供されるＡＢＰを産生してもよい。
好適な宿主細胞には、任意の原核（例えば細菌）細胞、下等真核（例えば酵母）細胞又は高等真核（例えば哺乳動物）細胞が挙げられる。好適な原核生物には、真正細菌、例えば、グラム陰性生物又はグラム陽性生物、例えば、腸内細菌科、例えば、エシェリキア属（大腸菌）、エンテロバクター属、エルウィニア属、クレブシエラ属、プロテウス属、サルモネラ属（Ｓ．チフィリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ））、セラチア属（Ｓ．マルセッセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ））、シゲラ属、バチルス属（Ｂ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ））、シュードモナス属（Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））及びストレプトミセス属が挙げられる。１つの有用な大腸菌クローニング宿主は大腸菌２９４であるが、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６及び大腸菌Ｗ３１１０などの他の株も適している。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物も、ＴＩＧＩＴ ＡＢＰをコードするベクターの好適なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレビシア、すなわち一般的なパン酵母は、一般的に使用される下等真核宿主微生物である。ただし、シゾサッカロミセス・ポンベ、クリベロミセス属（Ｋ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ．フラギリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）、Ｋ．ブルガリカス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、Ｋ．ウィッケラミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）、Ｋ．ワルチイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）、Ｋ．ドロソフィラム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）、Ｋ．サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）及びＫ．マルキシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ））、ヤロウイア属、ピキア・パストリス、カンジダ属（Ｃ．アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ））、トリコデルマ・レーシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）、アカパンビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）、シュワニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）（Ｓ．オクシデンタリス（Ｓ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ））、並びに糸状菌、例えば、ペニシリウム属、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）及びアスペルギルス属（Ａ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びＡ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ））など、多くのその他の属、種及び株が利用可能かつ有用である。
有用な哺乳動物宿主細胞には、ＣＯＳ−７細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、マウスセルトーリ細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）などが挙げられる。
本発明のＴＩＧＩＴ ＡＢＰを産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地で培養されてもよい。例えば、ハムのＦ１０、最小必須培地（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０及びダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）などの市販の培地が、宿主細胞の培養に適している。さらに、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．， １９７９， ５８：４４；Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １９８０， １０２：２５５；並びに米国特許第４，７６７，７０４号明細書、米国特許第４，６５７，８６６号明細書、米国特許第４，９２７，７６２号明細書、米国特許第４，５６０，６５５号明細書及び米国特許第５，１２２，４６９号明細書；又は国際公開第９０／０３４３０号パンフレット及び国際公開第８７／００１９５号パンフレットに記載されている培地のいずれかを使用してもよい。上記の各参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。
これらの培地のいずれかには、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の成長因子（インスリン、トランスフェリン又は上皮細胞成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びホスファートなど）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質、微量元素（通常、マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）並びにグルコース又は同等のエネルギー源が補充されてもよい。また、当業者に知られている適切な濃度で、任意の他の必要な補助剤を含めてもよい。
温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞とともにこれまでに使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
組換え技術を使用する場合、ＡＢＰは、細胞内で産生させることも、細胞膜周辺腔内で産生させることも、培地に直接分泌させることもできる。ＡＢＰが細胞内で産生される場合、第１の工程として、例えば遠心分離又は限外濾過により、宿主細胞又は溶解断片のいずれかの粒子状の破片が除去される。例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９２， １０：１６３−１６７、参照によりその全体が組み込まれる）は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌されるＡＢＰを単離する手順を記載している。要約すると、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分かけて細胞ペーストを解凍する。細胞破片は遠心分離によって除去することができる。
いくつかの実施形態では、ＡＢＰは無細胞系で産生される。いくつかの態様では、無細胞系は、参照によりその全体が組み込まれるＹｉｎ ｅｔ ａｌ．， ｍＡｂｓ， ２０１２， ４：２１７−２２５に記載されているように、インビトロ転写及び翻訳系である。いくつかの態様では、無細胞系は、真核細胞又は原核細胞から得られた無細胞抽出物を利用する。いくつかの態様では、原核細胞は大腸菌である。例えば、ＡＢＰが不溶性凝集体として細胞に蓄積する場合、又は周辺質発現からの収率が低い場合に、ＡＢＰの無細胞発現が有用であり得る。
ＡＢＰが培地に分泌される場合、このような発現系から得られた上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ（登録商標）又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）Ｐｅｌｌｃｏｎ（登録商標）限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮される。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を上記の工程のいずれかに含めてタンパク質分解を阻害してもよく、抗生物質を含めて外来性の汚染菌の増殖を防いでもよい。
細胞から調製されたＡＢＰ組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及びアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが特に有用な精製技術である。アフィニティーリガンドとしてのプロテインＡの適合性は、ＡＢＰに存在する免疫グロブリンＦｃドメインの種とアイソタイプとに応じて決まる。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２又はγ４重鎖を含むＡＢＰを精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．， １９８３， ６２：１−１３、参照によりその全体が組み込まれる）。プロテインＧは、あらゆるマウスアイソタイプ及びヒトγ３に有用である（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ．， １９８６， ５：１５６７−１５７５、参照によりその全体が組み込まれる）。
アフィニティーリガンドが結合するマトリックスは、ほとんどの場合アガロースであるが、他のマトリックスも利用することができる。制御細孔ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定したマトリックスにより、アガロースを用いて達成することができるものよりも速い流速及び短い処理時間が可能になる。ＡＢＰがＣＨ３ドメインを含む場合、ＢａｋｅｒＢｏｎｄ ＡＢＸ（登録商標）樹脂が精製に有用である。
タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカクロマトグラフィー、ヘパリンＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び硫酸アンモニウム沈殿法も利用することができ、当業者であればこれらの技術を適用することができる。
任意の予備精製工程の後、約２．５〜約４．５のｐＨの溶出緩衝液を使用して、一般に低塩濃度（例えば、約０Ｍ〜約０．２５Ｍの塩）で行われる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに、目的のＡＢＰと夾雑物とを含む混合物を供してもよい。
４．アッセイ
当技術分野で既知の様々なアッセイを使用して、本明細書に提供されるＴＩＧＩＴ ＡＢＰを同定及び特性評価してもよい。
４．１．結合、競合及びエピトープマッピングアッセイ
本明細書に提供されるＡＢＰの特異的抗原結合活性は、本開示の他の箇所に記載されるように、ＳＰＲ、ＢＬＩ、ＲＩＡ及びＭＳＤ−ＳＥＴの使用を含む任意の好適な方法により評価され得る。さらに、抗原結合活性は、ＥＬＩＳＡアッセイ及びウエスタンブロットアッセイによって評価され得る。
２つのＡＢＰ、又はＡＢＰと別の分子（例えば、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンド）との間の競合を測定するためのアッセイは、本開示の他の箇所と、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４， １９８８， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙとに記載されている。
本明細書に提供されるＡＢＰが結合するエピトープをマッピングするためのアッセイは、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＭｏｒｒｉｓ “Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，” ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ． ６６， １９９６， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．に記載されている。いくつかの実施形態では、エピトープはペプチド競合により決定される。いくつかの実施形態では、エピトープは質量分析により決定される。いくつかの実施形態では、エピトープは結晶解析法により決定される。
いくつかの実施形態では、「アラニンスキャニング」又は「アラニンマッピング」を使用して、標的タンパク質のエピトープ及び／又は抗体のパラトープをマッピングする。アラニンスキャニングは、特定のタンパク質の安定性又は機能に対する特定の残基の寄与を決定するために使用される。例えば、Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ２０００ Ａｕｇ １； ９７（１６）：８９５０−８９５４を参照されたい。
４．２．ＴＩＧＩＴ拮抗作用アッセイ
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰをスクリーニングして、ＴＩＧＩＴに対する拮抗活性を有するＡＢＰを同定又は特性評価する。任意の好適なアッセイを使用して、そのようなＡＢＰを同定又は特性評価してもよい。いくつかの態様では、アッセイは、エフェクターＴ細胞と本明細書に提供されるＡＢＰとを接触させた後、エフェクターＴ細胞によって分泌されるサイトカインの量を測定する。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＬＴ−α、ＴＮＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ及びそれらの組合せから選択される。いくつかの態様では、サイトカインは、ｓＣＤ４０Ｌ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＡＢ／ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１α、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１０、ＩＬ−９、ＩＬ−８、ＩＬ−７、ＩＬ−５、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＩＦＮγ、ＩＦＮα２、ＧＲＯ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、フラクタルカイン、Ｆｌｔ−３リガンド、ＦＧＦ−２、エオタキシン、ＥＧＦ及びそれらの組合せから選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３のアゴニストとともにエフェクター細胞を共刺激して、エフェクター細胞によるサイトカインの分泌を促進する。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは準最大レベルで供給される。
いくつかの態様では、そのようなアッセイは、エフェクターＴ細胞と本明細書に提供されるＡＢＰとを接触させた後、エフェクターＴ細胞の増殖を測定してもよい。いくつかの態様では、エフェクターＴ細胞の増殖は、色素（例えば、カルボキシフルオレセインジアセタートスクシンイミジルエステル；ＣＦＳＥ）の希釈によって、トリチウム化チミジンの取り込みによって、発光細胞生存能アッセイによって、又は当技術分野で既知の他のアッセイによって測定される。
いくつかの態様では、そのようなアッセイは、制御性Ｔ細胞と本明細書に提供されるＡＢＰとを接触させた後、制御性Ｔ細胞の分化、サイトカイン産生、生存能（例えば生存率）、増殖又は抑制活性を測定してもよい。
いくつかの態様では、そのようなアッセイは、ＮＫ細胞と本明細書に提供されるＡＢＰとを接触させた後、ＮＫ細胞の細胞傷害活性を測定してもよい。いくつかの態様では、ＮＫ細胞の細胞傷害活性は、ＮＫの媒介による標的細胞（例えば、Ｋ５６２細胞株）の死滅を定量する細胞傷害性アッセイを使用して測定される。参照によりその全体が組み込まれるＪａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．， ２０１２， ４２：４２−４９を参照されたい。
いくつかの態様では、そのようなアッセイはグランザイムＢの量を測定してもよい。いくつかの態様では、そのようなアッセイはパーフォリンの量を測定してもよい。
４．３．エフェクター機能に関するアッセイ
各々参照によりその全体が組み込まれるＲａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ， Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９１， ９：４５７−４９２；米国特許第５，５００，３６２号明細書、米国特許第５，８２１，３３７；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ， １９８６， ８３：７０５９−７０６３；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ， １９８５， ８２：１４９９−１５０２；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．， １９８７， １６６：１３５１−１３６１；Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ， １９９８， ９５：６５２−６５６；国際公開第２００６／０２９８７９号パンフレット；国際公開第２００５／１００４０２号パンフレット；Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ， １９９６， ２０２：１６３−１７１；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ， ２００３， １０１：１０４５−１０５２；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ， ２００４， １０３：２７３８−２７４３；及びＰｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００６， １８：１７５９−１７６９に記載されているものを含め、当技術分野で既知の様々なインビトロ及びインビボアッセイを使用して、本明細書に提供されるＡＢＰによる処理後のエフェクター機能を評価してもよい。
５．医薬組成物
本明細書に提供されるＡＢＰは、任意の適切な医薬組成物に製剤化し、任意の好適な投与経路により投与することができる。好適な投与経路には、限定するものではないが、動脈内経路、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、経鼻経路、非経口経路、経肺経路及び皮下経路が挙げられる。
医薬組成物は、１つ以上の医薬賦形剤を含んでもよい。任意の好適な医薬賦形剤が使用されてもよく、当業者であれば好適な医薬賦形剤を選択することができる。したがって、以下に示される医薬賦形剤は、例示的であり、限定的ではないことが意図される。追加の医薬賦形剤には、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ Ｅｄ．（２００９）に記載されているものが挙げられる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は消泡剤を含む。任意の好適な消泡剤を使用してもよい。いくつかの態様では、消泡剤は、アルコール、エーテル、油、ワックス、シリコーン、界面活性剤及びそれらの組合せから選択される。いくつかの態様では、消泡剤は、鉱油、植物油、エチレンビスステアルアミド、パラフィンワックス、エステルワックス、脂肪アルコールワックス、長鎖脂肪アルコール、脂肪酸石鹸、脂肪酸エステル、シリコングリコール、フルオロシリコーン、ポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコールコポリマー、ポリジメチルシロキサン−二酸化ケイ素、エーテル、オクチルアルコール、カプリルアルコール、ソルビタントリオレアート、エチルアルコール、２−エチルヘキサノール、ジメチコン、オレイルアルコール、シメチコン及びそれらの組合せから選択される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は共溶媒を含む。共溶媒の例示的な例には、エタノール、ポリ（エチレン）グリコール、ブチレングリコール、ジメチルアセトアミド、グリセリン、プロピレングリコール及びそれらの組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は緩衝液を含む。緩衝液の例示的な例には、アセタート、ボラート、カーボナート、ラクタート、マラート、ホスファート、シトラート、水酸化物、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、グリシン、メチオニン、グアーガム、グルタミン酸ナトリウム及びそれらの組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は担体又は充填剤を含む。担体又は充填剤の例示的な例には、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、ソルビトール、キトサン、ステアリン酸、キサンタンガム、グアーガム及びそれらの組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は界面活性剤を含む。界面活性剤の例示的な例には、ｄ−αトコフェロール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、ドキュセートナトリウム、ベヘン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、ラウリン酸、マクロゴール１５ヒドロキシステアラート、ミリスチルアルコール、リン脂質、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアラート、ポリオキシルグリセリド、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、ビタミンＥポリエチレン（グリコール）スクシナート及びそれらの組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は固結防止剤を含む。固結防止剤の例示的な例には、リン酸カルシウム（第三）、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、酸化マグネシウム及びそれらの組合せが挙げられる。
医薬組成物とともに使用され得る他の賦形剤には、例えば、アルブミン、抗酸化剤、抗細菌剤、抗真菌剤、生体吸収性ポリマー、キレート剤、制御放出剤、希釈剤、分散剤、溶解促進剤、乳化剤、ゲル化剤、軟膏基剤、透過促進剤、保存剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、糖及びそれらの組合せが挙げられる。これらの薬剤のそれぞれの具体例は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ Ｅｄ．（２００９）， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓに記載されている。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は溶媒を含む。いくつかの態様では、溶媒は、滅菌等張食塩液又はデキストロース溶液などの塩類溶液である。いくつかの態様では、溶媒は注射用水である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、微粒子又はナノ粒子などの粒子形態である。微粒子及びナノ粒子は、ポリマー又は脂質などの任意の好適な材料から形成されてもよい。いくつかの態様では、微粒子又はナノ粒子は、ミセル、リポソーム又はポリマーソームである。
本明細書では、水が一部のＡＢＰの分解を促進する可能性があるため、ＡＢＰを含む無水の医薬組成物及び剤形がさらに提供される。
本明細書に提供される無水の医薬組成物及び剤形は、無水又は低水分含有成分と、低水分又は低湿条件とを使用して調製することができる。製造、包装及び／又は保存中に水分及び／又は湿気と実質的に接触することが予測される場合、ラクトースと、一級又は二級アミンを含む少なくとも１つの有効成分とを含む医薬組成物及び剤形は無水とすることができる。
無水医薬組成物は、その無水の性質が維持されるように調製及び保存されるべきである。したがって、無水組成物は、好適な処方キットに含めることができるように、水への曝露を防ぐことが知られている材料を使用して包装することができる。好適な包装の例には、限定するものではないが、密閉ホイル、プラスチック、単位用量容器（例えばバイアル）、ブリスターパック及びストリップパックが挙げられる。
５．１．非経口用剤形
特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、非経口用剤形として製剤化される。非経口用剤形は、限定するものではないが、皮下経路、静脈内経路（注入及びボーラス注射を含む）、筋肉内経路及び動脈内経路を含む様々な経路によって対象に投与することができる。これらの投与は典型的には、汚染物質に対する対象の自然防御を回避するため、非経口用剤形は典型的には、滅菌されているか、対象に投与する前に滅菌することができる。非経口用剤形の例には、限定するものではないが、注射の準備ができた溶液、注射用の薬学的に許容されるビヒクルに溶解又は懸濁する準備ができた乾燥（例えば凍結乾燥）製品、注射の準備ができた懸濁液、及びエマルジョンが挙げられる。
非経口用剤形を提供するために使用することができる好適なビヒクルは、当業者に周知である。例には、限定するものではないが、注射用水ＵＳＰ；水性ビヒクル、例えば、限定するものではないが、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、及び乳酸加リンゲル注射液；水混和性ビヒクル、例えば、限定するものではないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコール；並びに非水性ビヒクル、例えば、限定するものではないが、コーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル及び安息香酸ベンジルが挙げられる。
本明細書に開示されるＡＢＰのうちの１つ以上の溶解度を増大させる賦形剤も、非経口用剤形に組み込むことができる。
いくつかの実施形態では、非経口用剤形は凍結乾燥される。例示的な凍結乾燥製剤は、例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第６，２６７，９５８号明細書及び米国特許第６，１７１，５８６号明細書並びに国際公開第２００６／０４４９０８号パンフレットに記載されている。
６．投与量及び単位剤形
ヒトの治療薬では、医師は、予防的又は治療的処置に応じるとともに、治療対象に特有の年齢、体重、状態及びその他の要因に応じて、最も適切と考える薬量を決定する。
特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、医薬組成物又は単一単位剤形である。本明細書に提供される医薬組成物及び単一単位剤形は、予防又は治療有効量の１つ以上の予防的又は治療的ＡＢＰを含む。
障害又はその１つ以上の症状の予防又は治療に有効なＡＢＰ又は組成物の量は、疾患又は症状の性質及び重症度と、ＡＢＰが投与される経路とによって変化する。頻度及び投与量は、投与される具体的な治療法（例えば、治療剤又は予防剤）、障害、疾患又は症状の重症度、投与経路、並びに対象の年齢、体重、応答及び過去の病歴に応じて、各対象に固有の要因に従っても変化する。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から得られた用量反応曲線から推定してもよい。
特定の実施形態では、組成物の例示的な用量には、対象又は試料重量１キログラム当たりミリグラム又はマイクログラム単位の量のＡＢＰ（例えば、１キログラム当たり約１０マイクログラム〜１キログラム当たり約５０ミリグラム、１キログラム当たり約１００マイクログラム〜１キログラム当たり約２５ミリグラム、又は１キログラム当たり約１００マイクログラム〜１キログラム当たり約１０ミリグラム）が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰの投与量は、対象の障害又はその１つ以上の症状を予防、治療、管理又は改善するために投与されるＡＢＰの重量に基づいて、対象の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり１ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり２ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり３ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり４ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり５ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり６ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ又は対象の体重１ｋｇ当たり１５ｍｇ以上である。当業者には明らかであるように、場合によっては、本明細書に開示された範囲外のＡＢＰの投与量を使用する必要がある場合がある。さらに、臨床医又は治療医であれば、対象の応答に関連して治療を中断、調整又は終了する方法及び時期が分かることに留意されたい。
当業者であれば容易に分かるように、様々な疾患及び症状に対して様々な治療有効量が適用可能であり得る。同様に、そのような障害を予防、管理、治療又は改善するのに十分であるが、本明細書に提供されるＡＢＰに関連する有害作用を引き起こすのに不十分であるか、本明細書に提供されるＡＢＰに関連する有害作用を軽減するのに十分な量も、本明細書に提供される投与量及び投与頻度スケジュールに含まれる。さらに、本明細書に提供される組成物の複数の投与量を対象に投与する場合、投与量がいずれも同じである必要はない。例えば、対象に投与される投与量を増加させて組成物の予防又は治療効果を改善してもよく、又は対象に投与される投与量を減少させて特定の対象が経験している１つ以上の副作用を軽減してもよい。
特定の実施形態では、治療又は予防は、本明細書に提供されるＡＢＰ又は組成物の１つ以上の負荷用量から開始し、それに続いて１つ以上の維持用量とすることができる。
特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰ又は組成物のある用量を投与して、対象の血液又は血清中のＡＢＰの定常状態濃度を達成することができる。定常状態濃度は、当業者が利用可能な技術による測定によって決定することも、身長、体重及び年齢などの対象の身体的特徴に基づいて決定することもできる。
特定の実施形態では、同じ組成物の投与が繰り返されてもよく、投与は少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２カ月、７５日、３カ月又は６カ月おきであってよい。
本開示の他の箇所でさらに詳細に考察されるように、本明細書に提供されるＡＢＰは、疾患又は障害を予防又は治療するのに有用な１つ以上の追加の薬剤とともに任意に投与されてもよい。そのような追加の薬剤の有効量は、製剤中に存在するＡＢＰの量、障害又は治療の種類、及び当技術分野で知られているか本明細書に記載されている他の要因に応じて決まり得る。
７．治療用途
本発明のＡＢＰは、治療用途のために、当技術分野で既知のもの及び上述したものなどの薬学的に許容される剤形で、哺乳動物、一般にヒトに投与される。例えば、本発明のＡＢＰは、ヒトに、ボーラスとして、もしくは一定期間にわたる連続注入によって静脈内投与されるか、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、関節内経路、滑液嚢内経路、髄腔内経路又は腫瘍内経路によって投与されてもよい。ＡＢＰはまた、局所的及び全身的治療効果を発揮するために、腫瘍周囲経路、病巣内経路又は病巣周辺経路によって好適に投与される。腹腔内経路は、例えば、卵巣腫瘍の治療に特に有用であり得る。
本明細書に提供されるＡＢＰは、ＴＩＧＩＴが関与するあらゆる疾患又は症状の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、疾患又は症状は、抗ＴＩＧＩＴ ＡＢＰによる治療から効果を得ることができる疾患又は症状である。いくつかの実施形態では、疾患又は症状は腫瘍である。いくつかの実施形態では、疾患又は症状は細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態では、疾患又は症状は癌である。いくつかの実施形態では、疾患又は症状はウイルス感染症である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、医薬品として使用するために提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、医薬品の製造又は調製に使用するために提供される。いくつかの実施形態では、医薬品は、抗ＴＩＧＩＴ ＡＢＰから効果を得ることができる疾患又は症状を治療するためのものである。いくつかの実施形態では、疾患又は症状は腫瘍である。いくつかの実施形態では、疾患又は症状は細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態では、疾患又は症状は癌である。いくつかの実施形態では、疾患又は症状はウイルス感染症である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の疾患又は症状を治療する方法である。いくつかの態様では、疾患又は症状は癌である。いくつかの態様では、疾患又は症状はウイルス感染症である。
本明細書に提供されるＡＢＰによって、任意の好適な癌が治療され得る。例示的な好適な癌には、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、脳腫瘍、胆管癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、気管支腫瘍、原発部位不明癌、心臓腫瘍、子宮頸癌、脊索腫、結大腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、腺管癌、胚芽腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、線維性組織球腫、ユーイング肉腫、眼癌、胚細胞腫瘍、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、頭頸部癌、肝細胞癌、組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内黒色腫、膵島細胞腫、カポジ肉腫、腎臓癌、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭癌、口唇癌及び口腔癌、肝癌、非浸潤性小葉癌、肺癌、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、メラノーマ、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、ＮＵＴ遺伝子関与正中線癌、口腔癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、非小細胞肺癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、乳頭腫、傍神経節腫、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂及び尿管癌、網膜芽細胞腫、ラブドイド腫瘍、唾液腺癌、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、脊髄腫瘍、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、奇形腫、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、膣癌、外陰癌並びにウィルムス腫瘍が挙げられる。
本明細書に提供されるＡＢＰによって、任意の好適なウイルスが治療され得る。例示的な好適なウイルスには、例えば、アデノ随伴ウイルス、アイチウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バンナウイルス、バーマ森林ウイルス、ブニヤンベラウイルス、ラクロスブニヤウイルス、カンジキウサギブニヤウイルス、オナガザルヘルペスウイルス、チャンディプラウイルス、チクングンヤウイルス、コサウイルスＡ、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、デングウイルス、ドーリウイルス、ジュグベウイルス、デュベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス、脳心筋炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス、ＧＢウイルスＣ／Ｇ型肝炎ウイルス、ハンターンウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトアストロウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトエンテロウイルス、ヒトヘルペスウイルス１、ヒトヘルペスウイルス２、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス１、ヒトパピローマウイルス２、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザ、ヒトパルボウイルスＢ１９、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ヒトライノウイルス、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス、ヒトスプーマレトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス、ヒトトロウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、インフルエンザＣウイルス、イスファハンウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンアレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、クンジンウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ランガトウイルス、ラッサウイルス、ローズデールウイルス、跳躍病ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マヤロウイルス、ＭＥＲＳコロナウイルス、麻疹ウイルス、メンゴ脳心筋炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サルポックスウイルス、ムンプスウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、ニューヨークウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、オニョンニョンウイルス、オーフウイルス、オロプーシェウイルス、ピチンデウイルス、ポリオウイルス、プンタトロフレボウイルス、プーマラウイルス、狂犬病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ローザウイルスＡ、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、風疹ウイルス、サギヤマウイルス、サリウイルスＡ、サシチョウバエ熱シシリー型ウイルス、サッポロウイルス、セムリキ森林ウイルス、ソウルウイルス、サルフォーミーウイルス、サルウイルス５、シンドビスウイルス、サウサンプトンウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ダニ媒介ポワサンウイルス、トルクテノウイルス、トスカーナウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、痘瘡ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＷＵポリオーマウイルス、ウエストナイルウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバ様病ウイルス、黄熱ウイルス及びジカウイルスが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の標的細胞内のＴＩＧＩＴに拮抗する方法である。いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰによるＴＩＧＩＴの拮抗作用は、標的細胞によるＩＬ−２、ＬＴ−α、ＩＬ−６、ＴＮＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ又はそれらの組合せの分泌の増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象のエフェクターＴ細胞の増殖、生存及び／又は機能を増大させる方法である。いくつかの態様では、エフェクターＴ細胞はＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。いくつかの態様では、エフェクターＴ細胞はＣＤ８＋エフェクターＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を抑止する方法である。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞はＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞又はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性を増大させる方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の免疫応答を増強する方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の腫瘍の発症を遅延させる方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の腫瘍の発症を予防する方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の癌の発症を遅延させる方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の癌の発症を予防する方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の腫瘍のサイズを縮小する方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の転移の数を減少させる方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象のウイルス感染症の発症を遅延させる方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象のウイルス感染症の発症を予防する方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象のウイルス価を低下させる方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象からウイルスを除去する方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の全生存期間、生存期間中央値又は無増悪生存期間を延長する方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるＡＢＰの有効量を対象に投与することにより、標準治療薬に対して抵抗性を有するようになった対象を治療する方法である。いくつかの実施形態では、対象が抵抗性を有するようになった標準治療薬はＰＤ−１阻害剤である。他の実施形態では、対象が抵抗性を有するようになった標準治療薬はＰＤ−Ｌ１阻害剤である。他の実施形態では、対象が抵抗性を有するようになった標準治療薬はＣＴＬＡ−４阻害剤である。
８．併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、少なくとも１つの追加の治療剤とともに投与される。本明細書に提供されるＡＢＰとともに、任意の好適な追加の治療剤が投与されてもよい。いくつかの態様では、追加の治療剤は、放射線、細胞傷害剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤及びそれらの組合せから選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰは、腫瘍の外科的切除後に投与される。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤はエピジェネティック修飾因子を含む。エピジェネティック修飾因子の例には、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）では承認されている５−アザ−２’−デオキシシチジン又は５−アザシチジンなどのＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ）阻害剤と、皮膚及び末梢性Ｔ細胞リンパ腫に対して活性であることが示されているボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、ベリノスタット及びエンチノスタットを含むヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＩ）とが挙げられる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の治療剤は、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１の阻害剤と組み合わせたエピジェネティック修飾因子である。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は免疫刺激剤を含む。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、免疫細胞の阻害性受容体又はそのリガンドのシグナル伝達を遮断する薬剤である。いくつかの態様では、阻害性受容体又はリガンドは、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２としても知られる）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１又はＣＤ２７９）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１又はＣＤ２７４）、トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３、またＣＤ２２３）、Ｔｉｍ−３（Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２又はＨＡＶＣＲ２もしくはＣＤ３６６）、ニューリチン、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ又はＣＤ２７２）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）並びにそれらの組合せから選択される。いくつかの態様では、薬剤は、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ又はニボルマブ）、及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ）、抗ＴＩＭ３抗体、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＣＡＭ−１、またＣＤ６６ａ）及び５（ＣＥＡＣＡＭ−５、またＣＤ６６ｅ）、ｖｓｅｔ免疫調節受容体（ＶＩＳＲ又はＶＩＳＴＡ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１又はＣＤ３０５）、ＣＤ１６０、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４又はＳＬＡＭＦ４）並びにそれらの組合せから選択される。いくつかの態様では、薬剤はペンブロリズマブである。いくつかの態様では、薬剤はニボルマブである。いくつかの態様では、薬剤はアテゾリズマブである。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する薬剤である。いくつかの態様では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する追加の治療剤は、抗体、ペプチド模倣体及び小分子から選択される。いくつかの態様では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する追加の治療剤は、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）、アテゾリズマブ、アベルマブ、ピディリズマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、スルファモノメトキシン１及びスルファメチゾール２から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する追加の治療剤は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＷｅｉｎｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ， ２０１６， １４：１５７６（ＤＯＩ：１０．１００２／ｃｍｄｃ．２０１５００５６６）に記載されているように、そのような活性を有することが当技術分野で知られている任意の治療薬である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する薬剤は、本明細書に提供されるＡＢＰと同じ医薬組成物に製剤化される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する薬剤は、本明細書に提供されるＡＢＰとは異なる医薬組成物に製剤化される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する薬剤は、本明細書に提供されるＡＢＰを投与する前に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する薬剤は、本明細書に提供されるＡＢＰを投与した後に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する薬剤は、本明細書に提供されるＡＢＰと同時に投与されるが、薬剤とＡＢＰとは別個の医薬組成物で投与される。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、免疫細胞の共刺激受容体のアゴニストである。いくつかの態様では、共刺激受容体は、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ−２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、ＳＴＩＮＧ、ｔｏｌｌ様受容体、ＲＩＧ−１及びＮＯＤ様受容体から選択される。いくつかの実施形態では、アゴニストは抗体である。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、アルギナーゼ、インドールアミン−２ ３−ジオキシゲナーゼ又はアデノシンＡ２Ａ受容体の活性を調節する。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤はサイトカインである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組合せから選択される。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス及びマラバウイルスから選択される。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、キメラ抗原受容体を有するＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、Ｔ細胞に対する二重特異性又は多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は抗ＴＧＦ−β抗体である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤はＴＧＦ−βトラップである。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は腫瘍抗原に対するワクチンである。本明細書に提供される方法によって治療される腫瘍に存在するならば、任意の好適な抗原がワクチンの標的となり得る。いくつかの態様では、腫瘍抗原は、正常組織でのその発現レベルと比較して過剰発現される腫瘍抗原である。いくつかの態様では、腫瘍抗原は、癌精巣抗原、分化抗原、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＲＴ及びそれらの組合せから選択される。
追加の治療剤のさらなる例には、タキサン（例えば、パクリタキセル又はドセタキセル）、プラチナ製剤（例えば、カルボプラチン、オキサリプラチン及び／又はシスプラチン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、エトポシド及び／又はミトキサントロン）、フォリン酸（例えば、ロイコボリン）又はヌクレオシド代謝阻害剤（例えば、フルオロウラシル、カペシタビン及び／又はゲムシタビン）が挙げられる。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、フォリン酸、５−フルオロウラシル及び／又はオキサリプラチンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、５−フルオロウラシル及びイリノテカンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、タキサン及びプラチナ製剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、パクリタキセル及びカルボプラチンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はペメトレキサート（ｐｅｍｅｔｒｅｘａｔｅ）である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＥＧＦＲ標的剤、ＲＡＦ標的剤又はＭＥＫ標的剤などの標的治療薬である。
追加の治療剤は、任意の好適な手段によって投与されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤は、同じ医薬組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤は、異なる医薬組成物に含まれる。
本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤が異なる医薬組成物に含まれる実施形態では、追加の治療剤の投与の前、追加の治療剤の投与と同時及び／又は追加の治療剤の投与の後にＡＢＰの投与を行うことができる。いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤の投与は、互いに約１カ月以内に行われる。いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤の投与は、互いに約１週間以内に行われる。いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤の投与は、互いに約１日以内に行われる。いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤の投与は、互いに約１２時間以内に行われる。いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡＢＰ及び追加の治療剤の投与は、互いに約１時間以内に行われる。
一態様では、本発明は、対象の癌を治療又は予防するための有効量の抗ｈＴＩＧＩＴ抗体を含む医薬組成物を提供し、組成物は、Ｔｉｍ−３、４−１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１又はＯＸ４０Ｌに対する抗体と組み合わせて投与され、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２及び配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。一態様では、本発明は、対象の癌を治療又は予防するための有効量の抗ｈＴＩＧＩＴ抗体を含む医薬組成物を提供し、組成物は、Ｔｉｍ−３、４１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１又はＯＸ４０Ｌに対する抗体と組み合わせて投与され、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１３のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。一態様では、本発明は、対象の癌を治療又は予防するための有効量の抗ｈＴＩＧＩＴ抗体を含む医薬組成物を提供し、組成物は、Ｔｉｍ−３、４１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１又はＯＸ４０Ｌに対する抗体と組み合わせて投与され、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号９９の重鎖及び配列番号９２の軽鎖を含む。
一態様では、本発明は、対象の癌の治療又は予防に使用するための抗ｈＴＩＧＩＴ抗体を提供し、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、Ｔｉｍ−３、４１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１又はＯＸ４０Ｌに対する抗体と組み合わせて投与され、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号３２のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２及び配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。一態様では、本発明は、対象の癌の治療又は予防に使用するための抗ｈＴＩＧＩＴ抗体を提供し、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、Ｔｉｍ−３、４１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１又はＯＸ４０Ｌに対する抗体と組み合わせて投与され、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１３のＶＨ配列及び配列番号２６のＶＬ配列を含む。一態様では、本発明は、対象の癌の治療又は予防に使用するための抗ｈＴＩＧＩＴ抗体を提供し、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、Ｔｉｍ−３、４１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１又はＯＸ４０Ｌに対する抗体と組み合わせて投与され、抗ｈＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号９９の重鎖及び配列番号９２の軽鎖を含む。
９．診断方法
対象から得られた細胞上のＴＩＧＩＴの存在を検出する方法も提供される。そのような方法を使用して、例えば、本明細書に提供されるＡＢＰによる治療に対する応答性を予測及び評価してもよい。
いくつかの実施形態では、対象から血液試料が得られ、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の画分が決定される。いくつかの態様では、そのような細胞により発現されるＴＩＧＩＴの相対量が決定される。ＴＩＧＩＴを発現する細胞の画分と、そのような細胞により発現されるＴＩＧＩＴの相対量とは、任意の好適な方法によって決定することができる。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用してそのような測定を行う。いくつかの実施形態では、そのような測定を行うために蛍光支援細胞選別（ＦＡＣＳ）が使用される。末梢血中のＴＩＧＩＴの発現を評価する方法については、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２００３， ２１：８３−９２を参照されたい。
１０．キット
本明細書に提供されるＡＢＰを含むキットも提供される。キットは、本明細書に記載されるように、疾患又は障害の治療、予防及び／又は診断に使用されてもよい。
いくつかの実施形態では、キットは、容器と、容器上にあるか容器に付随するラベル又は添付文書とを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、注射器及びＩＶ溶液バッグが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、単独で、又は別の組成物と組み合わせた際に疾患又は障害の治療、予防及び／又は診断に有効な組成物を保持する。容器は、滅菌アクセスポートを有してもよい。例えば、容器が静注バッグ又はバイアルである場合、針によって孔を開けることができるポートを有してもよい。組成物中の少なくとも１つの活性剤が、本明細書に提供されるＡＢＰである。ラベル又は添付文書には、選択された症状を治療するために組成物を使用することが示される。
いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）その中に第１の組成物を含む第１の容器であって、第１の組成物が本明細書に提供されるＡＢＰを含む第１の容器と、（ｂ）その中に第２の組成物を含む第２の容器であって、第２の組成物が追加の治療剤を含む第２の容器とを含む。本発明のこの実施形態のキットは、組成物を使用して特定の症状を治療することができることを示す添付文書をさらに含んでもよい。
あるいは、又はさらに、キットは、薬学的に許容される賦形剤を含む第２の（又は第３の）容器をさらに含んでもよい。いくつかの態様では、賦形剤は緩衝液である。キットはさらに、フィルター、針及び注射器を含め、商業的及びユーザーの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。
例
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。本明細書に提供される一般的な説明を考慮して、様々な他の実施形態を実施してもよいことが理解される。
例１：エピトープ決定のための変異分析
アラニンスキャニング
ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１０のエピトープを同定するために、１８個のアラニン一点変異を作成した。ＨＥＫ−２９３細胞にタンパク質を発現させ、可溶性タンパク質として分泌させ、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂上で精製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより特徴付けた。Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって結合を評価した。ＭＡＢ１０を抗ヒトＦｃセンサー上に捕捉し、洗浄し、単量体野生型ヒトＴＩＧＩＴ、又は選択された点変異体の１つのいずれかに曝露した。結合エピトープの一部と考えられる残基は、結合の低下を示した（例えば、野生型ヒトＴＩＧＩＴに対する結合のＫＤの５分の１を超えて低いＫＤ）。残基Ｑ５６、Ｎ５８、Ｌ６５、Ｉ６８、Ｎ７０、Ｌ７３、Ｈ７６、Ｉ７７及びＰ７９でのアラニン置換により、結合が低下した。残基Ｍ２３、Ｔ２４、Ｔ５５、Ｑ６２、Ｓ７８、Ｓ８０、Ｋ８２、Ｙ１１３及びＰ１１４でのアラニン置換は、結合の低下をもたらさなかった。
ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ２、ＭＡＢ１５及びＭＡＢ２１のエピトープを同定するために、先の段落で説明したように、ＢＬＩを使用して７個のアラニン一点変異に対する結合を評価した。
ＭＡＢ２では、残基Ｑ５６及びＩ７７でのアラニン置換は結合を低下させ、残基Ｉ６８、Ｌ７３、Ｈ７６、Ｓ７８及びＰ７９でのアラニン置換は結合の低下をもたらさなかった。
ＭＡＢ１５では、残基Ｑ５６、Ｉ６８、Ｌ７３、Ｈ７６及びＩ７７でのアラニン置換は結合を低下させ、残基Ｓ７８及びＰ７９でのアラニン置換は結合の低下をもたらさなかった。
ＭＡＢ２１では、残基Ｑ５６、Ｉ６８、Ｌ７３及びＩ７７でのアラニン置換は結合を低下させ、残基Ｈ７６、Ｓ７８及びＰ７９でのアラニン置換は結合の低下をもたらさなかった。
質量分析
ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１０のエピトープを同定するために、非共有結合相互作用の検出を可能にする架橋アプローチを用いた質量分析のために、ＣｏｖａｌＸ（米国マサチューセッツ州ソーガス）に精製ＭＡＢ１０及びヒトＴＩＧＩＴ ＨＩＳ試料を提出した。重水素化された架橋剤とともにＭＡＢ１０及びヒトＴＩＧＩＴ ＨＩＳをインキュベートし、多酵素切断に供した。架橋ペプチドの富化後、高分解能質量分析によって試料を分析した。トリプシン及びエラスターゼによるタンパク質分解は架橋ペプチドを生成しなかったが、キモトリプシン、ＡＳＰ‐Ｎ及びサーモリシンによるタンパク質分解は、少なくとも１つの架橋ペプチドを検出し、合計１１の架橋ペプチドを検出した。結果は、結合エピトープが、架橋された残基を含むことを示している。これらは、一方が残基Ｓ７８及びＲ８４を含み、もう一方が残基Ｔ１１７、Ｓ１２９及びＳ１３０を含む２つの領域に残基を含む。
エピトープ決定のための結晶学的手法
結晶学的試験によってもＭＡＢ１０の結合エピトープを同定した。ＭＡＢ１０ ＦａｂをヒトＴＩＧＩＴと複合体化させ、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製し、１０ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。結晶は、１４％ ＰＥＧ４０００、０．１ Ｍ ＭＥＳ ｐＨ６、１０ｍＭ β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド水和物、０．５％ ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシドから成長させた。Ｘ線データは、アルゴンヌ国立研究所（ＧＭ／ＣＡ ＣＡＴ ２３ＩＤ−Ｄ）で収集し、ＣＣＰ４（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｎｏ．４、高分子Ｘ線結晶解析用ソフトウェア）及びＰｈｅｎｉｘ（Ｐｙｔｈｏｎ−ｂａｓｅｄ Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ＥＮｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｘｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ）を用いて処理した。重鎖及び軽鎖から３．８Ａの接触距離内のＴＩＧＩＴ残基は結合エピトープの一部と考えられ、そのような残基にはＴ５５、Ｑ５６、Ｌ６５、Ｄ７２、Ｌ７３、Ｈ７６、Ｉ７７、Ｓ７８、Ｐ７９及びＨ１１１が挙げられる。
例２：抗ＴＩＧＩＴ ＡＢＰ及び免疫療法薬を含む併用療法
サイトメガロウイルス特異的（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞のＴ細胞応答を試験するために、リンパ球増殖アッセイを使用した。Ａｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（ワシントン州ボセル）から、ＣＭＶ抗原反応性についてスクリーニングされた個々のドナー由来のＰＢＭＣを購入した。ＣＭＶ感染細胞由来の細胞溶解物もＡｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓから購入した。ＰＢＭＣを５×１０５細胞／ウェルで播種し、細胞溶解物を加えることによって、試料中のＣＭＶ＋Ｔ細胞を１ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ又は０．０１ｍｇ／ｍｌで刺激する抗原特異的刺激を行った。使用した対照は、刺激されていない細胞、免疫療法処理を行っていない刺激された細胞、及び併用処理群の両対照抗体によって刺激された細胞であった。追加の免疫療法剤のための対照抗体、ＩｇＧ４対照抗体（ＭＡＢ１０の対照として）を含む追加の免疫療法剤（表６参照）、又はＭＡＢ１０と追加の治療剤との併用とともに、ＭＡＢ１０（２０μｇ／ｍＬ）を用いて実験群を処理した。３つの溶解物濃度のいずれによっても刺激された細胞に対して各処理を行った。報告された機能的用量と、ＥＤ５０値と、経験的データとの混合に基づいて、免疫療法薬の用量を決定した。細胞を４日間培養し、上清を収集し、活性化の定量としてエフェクターサイトカインＴＮＦの産生について分析した。
結果
以下のように、図１に結果を示す：細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及びペンブロリズマブをそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（それぞれ図１Ａ〜図１Ｃ）；細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及び抗ＴＩＭ−３抗体をそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（図１Ｄ〜図１Ｆ）；細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及び抗４１ＢＢ抗体をそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（図１Ｇ〜図１Ｉ）；細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ又は０．０１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解物により刺激し、ＭＡＢ１０及びｒｈＯＸ４０Ｌをそれぞれ個別に又は組み合わせて用いて処理した（図１Ｊ〜図１Ｌ）。ペンブロリズマブ、抗ＴＩＭ−３抗体、抗４１ＢＢ抗体又はＯＸ４０リガンドを含む各併用処理は、個々の処理単独と比較して、免疫活性化に対する相加効果を示した（ＴＮＦα産生によって測定した場合）。
抗ＬＡＧ−３及び抗ＴＧＦβによる処理の場合、個々の処理が結果に影響を及ぼし、このアッセイに相加効果又は相乗効果があったかどうかを決定することはできなかった。抗ＣＴＬＡ−４単独での処理は免疫応答を増大させなかったため、異なるアッセイを使用して、任意の潜在的な組合せ効果を決定すべきである。
未治療の癌患者由来の解離腫瘍細胞（ＤＴＣ、Ｃｏｎｖｅｒｓａｎｔ Ｂｉｏ）を用いて、ＭＡＢ１０併用による細胞活性化能をさらに決定した。ＤＴＣは、免疫細胞、腫瘍細胞及び支持細胞を含む腫瘍標本由来のあらゆる細胞を含有する単一細胞懸濁液である。
ステージＩＶのメラノーマを有する５０歳男性から得られたＤＴＣを培養し、対照ＯＶＡペプチド（３μｇ／ｍｌ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０−０９９−７７１）、又は１μｇ／ｍＬのＮＹ−ＥＳＯ−１＋１μｇ／ｍＬのＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ−１＋１μｇ／ｍＬのｇｐ１００（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、それぞれカタログ番号１３０−０９５−３８１、１３０−０９４−４７７及び１３０−０９４−４５０）からなるメラノーマペプチド混合物により刺激した。ペプチド刺激試料に、抗ＧＩＴＲ抗体ＭＡＢ２２（例えば、同時係属中の国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６２４４３号明細書を参照されたい）、ペンブロリズマブ及びＭＡＢ１０を単独又はペアワイズ組合せで加えた。対照として、等量のアイソタイプ対照抗体を使用した。単一抗体刺激では、アイソタイプ対照抗体を補充することにより、抗体の総量を一定に保った。ＭＡＢ１０及びペンブロリズマブは１０μｇ／ｍｌの最終濃度で使用し、ＭＡＢ２２は１μｇ／ｍｌの最終濃度で使用した。活性化を評価するために、細胞を７日間培養し、上清を収集し、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、産生されたＩＦＮγの量を定量した。統計的有意性は、多重比較とともに一元配置分散分析を使用して計算した。
結果
図２Ａに見られるように、各併用療法処理では、単剤単独処理よりもＩＦＮγ産生の大きな刺激がもたらされ、相加効果が示唆された。
次に、ステージＩＩａの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する８０歳女性から得られたＤＴＣを培養し、刺激せずに放置したか、可溶性抗ＣＤ３抗体＋抗ＣＤ２８抗体（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ、それぞれカタログ番号５５５３３６及び５５５７２６）により２日間刺激した。対照として、等量のアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）を使用した。単一抗体刺激では、試料にアイソタイプ対照抗体を補充することにより、抗体の総量を一定に保った。ＭＡＢ１０及びペンブロリズマブは、１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度で使用した。活性化を評価するために、培養の最後の５時間にわたりブレフェルジンＡ（ＥＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号００−４５０６−５１）を細胞に加え、細胞内サイトカイン染色を使用して、ＩＦＮγ産生ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析及び定量を行った。統計的有意性は、多重比較とともに一元配置分散分析を使用して計算した。
結果
図２Ｂに見られるように、ＭＡＢ１０とペンブロリズマブとの併用による細胞の処理は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＦＮγ産生によって測定されるように、いずれかの単剤を単独で用いた処理を上回る相加効果をもたらした。
例３：インビボでの抗ＴＩＧＩＴ ＡＢＰ及び免疫療法薬を含む併用療法
抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ニューロピリン−１抗体との併用が、インビボで単剤単独よりも改善された抗腫瘍活性をもたらすかどうかを決定するために、ＥＭＴ６乳癌マウスモデル（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ）に対してこの併用を試験した。
抗ＮＲＰ−１抗体は、例えば、２０１７年１２月２１日に出願された同時係属中の国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６７７８２号明細書に記載されており、上記文献では、ＡＤＣＣ及びＣＤＣエフェクター機能を無効にするＮ２９７Ａ変異を含有するキメラマウスＩｇＧ２ａ抗体として試験された抗ＮＲＰ−１抗体のマウスバージョンの一群も開示されている。
マウスに対して抗ＮＲＰ抗体と抗ＴＩＧＩＴ抗体との併用を試験するために、マウスＴＩＧＩＴ、１Ｂ４に対する抗体（マウスＩｇＧ１、Ｃｅｌｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ）と組み合わせて、マウスバージョンの抗ヒトＮＲＰ−１抗体ＭＡＢ２３（マウスバージョン「ｍＭＡＢ２３」、配列番号１４３〜１４４、付録Ａ）を使用した。使用した対照抗体は、マウスＩｇＧ２ｂ ＭＰＣ−１１（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、カタログ番号ＢＥ００８６）であった。
ＥＭＴ６腫瘍モデル
雌のＢａｌｂ／ｃマウスに１ｘ１０５個のＥＭＴ６細胞を接種した。腫瘍が８０〜１２０ｍｍ３の平均サイズに達した後、腫瘍体積に基づいてマウスを１２群に無作為に分けた。無作為化と同日に治療を開始した（治療的処置）。腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって抗体を投与した。腫瘍及び体重を週３回測定した。試験のエンドポイントは、治療群に応じて４０日目又は平均腫瘍体積２，０００ｍｍ３として規定した。
結果
マウスＥＭＴ６腫瘍試験では、ｍＭＡＢ２３と１Ｂ４との併用治療は、それらの単剤対照よりも腫瘍増殖を大幅に阻害した（図３Ａ〜図３Ｂ）。対照抗体治療と比較して、２５０μｇのマウスｍＭＡＢ２３＋２５０μｇの１Ｂ４を含む併用治療は５７．４％のＴＧＩ（腫瘍増殖阻害）をもたらし、５００μｇのｍＭＡＢ２３＋５００μｇの１Ｂ４を含む併用治療は６９．４％のＴＧＩをもたらした。両濃度でのｍＭＡＢ２３＋１Ｂ４の併用治療は、治療の１４日後に統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）。抗ＰＤ−１による治療は、１４日目に６０．２％のＴＧＩをもたらした。混合モデル分析（ＲＭ ＡＮＯＶＡと同様）を使用した経時的な対照、ラット抗マウスαＰＤ−１（クローンＲＭＰ１−１４）、単剤（２５０μｇ）及び併用（各２５０μｇ）の曲線の評価では、αＰＤ−１及びｍＭＡＢ２３９＋１Ｂ４の併用治療がともに、対照群及び両単剤群とは有意に異なっていたことが示された（ｐ＜０．０３）。
全治療マウスの個々の腫瘍の増殖曲線のスパイダープロット分析では、ｍＭＡＢ２３と１Ｂ４とを併用して治療したマウスの腫瘍増殖の著しい遅延が示された（図３Ｃ〜図３Ｄ）。全治療群（各グラフの上部に表示）について、１群当たり８匹のマウス各々の個々のＥＭＴ６腫瘍体積を示した。ＥＭＴ６マウス腫瘍細胞を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに注射し、平均サイズ８０〜１２０ｍｍ３で無作為化した。無作為化の時点で治療を開始し、示された抗体を１０００μｇ／動物（対照ＩｇＧ２ｂ及び１Ｂ４）、５００μｇ／動物（ｍＭＡＢ２３及び１Ｂ４）、２５０μｇ／動物（ｍＭＡＢ２３及び１Ｂ４）又は２００μｇ／動物（αＰＤ−１）の用量で腹腔内投与した。黒い矢印は治療日を示す。試験のエンドポイントは、治療群に応じて４０日目又は平均腫瘍体積２，０００ｍｍ３として規定した。
これらのデータは、ｍＭＡＢ２３と１Ｂ４との併用が、単剤よりも改善された抗腫瘍増殖阻害をもたらすことを示している。この併用により治療したマウスでは、抗ＰＤ−１治療（６０．２％のＴＧＩ）と同等の腫瘍増殖の顕著な阻害（各抗体２５０μｇ及び５００μｇについてそれぞれ５７．４％のＴＧＩ及び６９．４％のＴＧＩ）が示された。
参照による組込み
本明細書に引用されたすべての特許文献及び非特許文献の開示全体は、あらゆる目的のために参照によりその全体がそれぞれ組み込まれている。
その他の実施形態
上記の開示は、独立した有用性を有する複数の別個の発明を包含し得る。これらの発明はそれぞれその好ましい形態で開示されているが、本明細書に開示及び図示されているその特定の実施形態は、多数の変形例が可能であることから、限定的な意味で考慮されない。本発明の主題は、本明細書に開示される様々な要素、特徴、機能及び／又は特性のあらゆる新規かつ非自明な組合せ及び部分的組合せを含む。以下の特許請求の範囲には、新規かつ非自明とみなされる特定の組合せ及び部分的組合せが具体的に示されている。特徴、機能、要素及び／又は特性の他の組合せ及び部分的組合せで具現化された発明は、本出願、本出願に基づく優先権を主張する出願、又は関連出願において請求され得る。このような請求はまた、異なる発明又は同じ発明に対するかどうか、また元の請求項と比べて範囲が広いか、狭いか、等しいか、又は異なるかどうかを問わず、本開示の発明の主題に含まれるものとみなされる。
配列表４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ３−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ４−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ５−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ７−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ８−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ９−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表１９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表２０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表２１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表２２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表２３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表２４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；ＶＨ
配列表２５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２−ＩｇＧ４、ＭＡＢ３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ５−ＩｇＧ４；ＶＬ
配列表２６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ８−ＩｇＧ４、ＭＡＢ９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；ＶＬ
配列表２７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４；ＶＬ
配列表２８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；ＶＬ
配列表２９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２−ＩｇＧ４、ＭＡＢ３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ５−ＩｇＧ４；Ｈ３−ＩＭＧＴ
配列表３０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ４−ＩｇＧ４；Ｈ３−ＩＭＧＴ
配列表３１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ８−ＩｇＧ４、ＭＡＢ９−ＩｇＧ４；Ｈ３−ＩＭＧＴ
配列表３２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；Ｈ３−ＩＭＧＴ
配列表３３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４；Ｈ３−ＩＭＧＴ
配列表３４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４；Ｈ３−ＩＭＧＴ
配列表３５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；Ｈ３−ＩＭＧＴ
配列表３６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表３７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２−ＩｇＧ４、ＭＡＢ３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ４−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表３８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ５−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表３９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ８−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；Ｈ２−Ｋａｂａｔ
配列表４８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表４９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表５０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ５−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表５１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表５２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ７−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表５３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ８−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表５４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表５５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＩｇＧ４；定常、Ｓ２２８Ｐヒンジ安定化
配列表５６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＩｇＧ４；定常 Ｓ２２８Ｐ、Ｎ２９７Ａ、Ｃ末端Ｌｙｓ欠失
配列表５７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＩｇＧ１；定常（Ｇ１ｍ（３）アロタイプ）
配列表５８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表５９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表６０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表６１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表６２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；Ｈ１−Ｃｈｏｔｈｉａ＋Ｋａｂａｔ
配列表６３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２−ＩｇＧ４、ＭＡＢ３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ５−ＩｇＧ４；Ｌ３−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ／ＩＭＧＴ
配列表６４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ８−ＩｇＧ４、ＭＡＢ９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；Ｌ３−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ／ＩＭＧＴ
配列表６５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４；Ｌ３−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ／ＩＭＧＴ
配列表６６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；Ｌ３−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ／ＩＭＧＴ
配列表６７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２−ＩｇＧ４、ＭＡＢ３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ５−ＩｇＧ４；Ｌ２−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ
配列表６８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ８−ＩｇＧ４、ＭＡＢ９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；Ｌ２−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ
配列表６９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；Ｌ２−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ
配列表７０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２−ＩｇＧ４、ＭＡＢ３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ４−ＩｇＧ４；Ｌ２−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ
配列表７１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ８−ＩｇＧ４、ＭＡＢ９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１１−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１２−ＩｇＧ４；Ｌ２−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ
配列表７２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１４−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１５−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１６−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１７−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１８−ＩｇＧ４、ＭＡＢ１９−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２０−ＩｇＧ４、ＭＡＢ２１−ＩｇＧ４；Ｌ２−Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ
配列表７３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＳＥＣ１；ヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ重鎖
配列表７４ ＜２２３＞ＳＥＣ１；重鎖可変領域
配列表７５ ＜２２３＞ＳＥＣ１ヒトκ鎖
配列表７６ ＜２２３＞ＳＥＣ１；軽鎖可変領域
配列表７７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＳＥＣ１；マウスＩｇＧ２ａ Ｎ２９７Ａ重鎖
配列表７８ ＜２２３＞ＳＥＣ１；マウスκ鎖
配列表７９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表８０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１；完全長ＩｇＧ１
配列表８１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５；完全長κ
配列表８２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表８３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２；完全長ＩｇＧ１
配列表８４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ３；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表８５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ３；完全長ＩｇＧ１
配列表８６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ４；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表８７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ４；完全長ＩｇＧ１
配列表８８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ５；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表８９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ５；完全長ＩｇＧ１
配列表９０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表９１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６；完全長ＩｇＧ１
配列表９２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２；完全長κ
配列表９３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ７；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表９４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ；完全長ＩｇＧ１
配列表９５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ８；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表９６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ８；完全長ＩｇＧ１
配列表９７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ９；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表９８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ９；完全長ＩｇＧ１
配列表９９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１０；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１００ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１０；完全長ＩｇＧ１
配列表１０１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１１；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１０２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１１；完全長ＩｇＧ１
配列表１０３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１２；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１０４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１２；完全長ＩｇＧ１
配列表１０５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１０６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３；完全長ＩｇＧ１
配列表１０７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８；完全長κ
配列表１０８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１４；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１０９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１４；完全長ＩｇＧ１
配列表１１０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１５；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１１１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１５；完全長ＩｇＧ１
配列表１１２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１６；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１１３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１６；完全長ＩｇＧ１
配列表１１４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１７；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１１５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１７；完全長ＩｇＧ１
配列表１１６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１８；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１１７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１８；完全長ＩｇＧ１
配列表１１８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１１９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９；完全長ＩｇＧ１
配列表１２０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０、ＭＡＢ２１；完全長κ
配列表１２１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２０；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１２２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２０；完全長ＩｇＧ１
配列表１２３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２１；完全長ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ
配列表１２４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＭＡＢ２１；完全長ＩｇＧ１
配列表１２５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−ＩｇＧ１；定常（Ｇ１ｍ（１７、１）アロタイプ、Ｎ２９７Ａ
配列表１２６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
＜２２３＞合成−κ；定常
配列表１２７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−リンカー
配列表１２８ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ３
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１２９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ２
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ１
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ３
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ２
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ１
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ３
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３５ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ２
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３６ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ１
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３７ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
＜２２３＞合成−ＣＤＲ−Ｈ２
＜２２３＞配列中に示された変異体残基は、変異体位置に関する注釈中の変異体残基に関して優先性を有しない
配列表１３９ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１４０ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１４１ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１４２ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１４３ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１４４ ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド

Claims (36)

  1. ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ；配列番号１）のエピトープに特異的に結合し、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ７、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１及びＭＡＢ１２を遮断すること、ｂ）ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｃ）ｈＴＩＧＩＴ残基Ｈ７６、Ｉ７７、Ｓ７８及びＰ７９に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能な単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）。
  2. ａ）ＣＤ１１２に対するｈＴＩＧＩＴの結合を阻害すること、ｂ）Ｔエフェクター細胞の機能を増大させること、ｃ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を増大させること、ｄ）組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させること、ｅ）制御性Ｔ細胞又は制御性Ｔ細胞活性を抑制すること、ｆ）ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６との会合を阻害すること、及びｇ）ネクチン−４（ポリオウイルス受容体様４、ＰＶＲＬ４としても知られる）に特異的に結合しないことのうちの少なくとも１つが可能な、請求項１に記載のＡＢＰ。
  3. ＡＢＰが、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｎ５８、Ｌ６５、Ｉ６８、Ｎ７０、Ｄ７２、Ｌ７３、Ｈ１１１、Ｔ１１７、Ｓ１２９及びＳ１３０からなる群からの１つ以上の追加のｈＴＩＧＩＴ残基に特異的に結合する、請求項１に記載のＡＢＰ。
  4. ＡＢＰが、Ｔ５５、Ｑ５６、Ｌ６５、Ｄ７２、Ｌ７３、Ｈ７６、Ｉ７７、Ｓ７８、Ｐ７９及びＨ１１１に特異的に結合する、請求項１に記載のＡＢＰ。
  5. ＡＢＰが、ｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ６１、Ｑ６２、Ｄ６３、Ｑ６４、Ｙ１１３又はＰ１１４に特異的に結合しない、請求項１に記載のＡＢＰ。
  6. ＡＢＰが、ＭＡＢ７、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１又はＭＡＢ１２である、請求項１に記載のＡＢＰ。
  7. ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ；配列番号１）のエピトープに特異的に結合し、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４及びＭＡＢ５を遮断すること、ｂ）ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｃ）ｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ５６及びＩ７７に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能な単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）。
  8. ａ）ＣＤ１１２に対するｈＴＩＧＩＴの結合を阻害すること、ｂ）Ｔエフェクター細胞の機能を増大させること、ｃ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を増大させること、ｄ）組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させること、ｅ）制御性Ｔ細胞又は制御性Ｔ細胞活性を抑制すること、ｆ）ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６との会合を阻害すること、及びｇ）ネクチン−４（ポリオウイルス受容体様４、ＰＶＲＬ４としても知られる）に特異的に結合しないことのうちの少なくとも１つが可能な、請求項７に記載のＡＢＰ。
  9. ＡＢＰが、ｈＴＩＧＩＴ残基Ｉ６８、Ｌ７３、Ｈ７６、Ｓ７８及びＰ７９に特異的に結合しない、請求項７又は請求項８に記載のＡＢＰ。
  10. ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ；配列番号１）のエピトープに特異的に結合し、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７及びＭＡＢ１８を遮断すること、ｂ）ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｃ）ｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ５６、Ｉ６８、Ｌ７３、Ｈ７６及びＩ７７に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能な単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）。
  11. ａ）ＣＤ１１２に対するｈＴＩＧＩＴの結合を阻害すること、ｂ）Ｔエフェクター細胞の機能を増大させること、ｃ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を増大させること、ｄ）組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させること、ｅ）制御性Ｔ細胞又は制御性Ｔ細胞活性を抑制すること、ｆ）ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６との会合を阻害すること、及びｇ）ネクチン−４（ポリオウイルス受容体様４、ＰＶＲＬ４としても知られる）に特異的に結合しないことのうちの少なくとも１つが可能な、請求項１０に記載のＡＢＰ。
  12. ＡＢＰが、ｈＴＩＧＩＴ残基Ｓ７８に特異的に結合しない、請求項１０又は請求項１１に記載のＡＢＰ。
  13. ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ；配列番号１）のエピトープに特異的に結合し、ａ）ヒトＴＩＧＩＴに結合するＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０及びＭＡＢ２１を遮断すること、ｂ）ＣＤ１５５に対するヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断すること、並びにｃ）ｈＴＩＧＩＴ残基Ｑ５６、Ｉ６８、Ｌ７３及びＩ７７に特異的に結合することのうちの少なくとも１つが可能な単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）。
  14. ａ）ＣＤ１１２に対するｈＴＩＧＩＴの結合を阻害すること、ｂ）Ｔエフェクター細胞の機能を増大させること、ｃ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を増大させること、ｄ）組織内又は循環中の制御性Ｔ細胞の数を減少させること、ｅ）制御性Ｔ細胞又は制御性Ｔ細胞活性を抑制すること、ｆ）ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６との会合を阻害すること、及びｇ）ネクチン−４（ポリオウイルス受容体様４、ＰＶＲＬ４としても知られる）に特異的に結合しないことのうちの少なくとも１つが可能な、請求項１３に記載のＡＢＰ。
  15. ＡＢＰが、ｈＴＩＧＩＴ残基Ｈ７６、Ｓ７８及びＰ７９に特異的に結合しない、請求項１３又は請求項１４に記載のＡＢＰ。
  16. それを必要とする対象の疾患又は症状を治療又は予防する方法であって、有効量の（ｉ）ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０及びＭＡＢ２１からなる群からのＡＢＰ、並びに（ｉｉ）免疫細胞の阻害性受容体もしくはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する追加の免疫療法剤及び（ｉｉｉ）共刺激受容体のシグナル伝達を調節する追加の免疫療法剤のうちの１つ以上、又はそのような薬剤をコードする核酸を対象に投与することを含む、上記方法。
  17. 阻害性受容体又はそのリガンドが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｔｉｍ−３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＫＩＲ及びそれらの組合せから選択される、請求項１６に記載の方法。
  18. 共刺激受容体が、ＣＤ３、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ−２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０又は４−１ＢＢである、請求項１６に記載の方法。
  19. 疾患又は症状が癌であり、癌が固形腫瘍及び血液腫瘍から選択される、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 癌が固形腫瘍である、請求項１９に記載の方法。
  21. 追加の免疫療法剤が、Ｔｉｍ−３、４１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１に対する抗体であるか、ＯＸ４０である、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 追加の免疫療法薬がＭＡＢ２２である、請求項１６に記載の方法。
  23. 追加の免疫療法薬がＭＡＢ２３である、請求項１６に記載の方法。
  24. ＡＢＰがＭＡＢ１０である、請求項２２又は２３に記載の方法。
  25. ＡＢＰがＭＡＢ２である、請求項２２又は２３に記載の方法。
  26. ＡＢＰがＭＡＢ１５である、請求項２２又は２３に記載の方法。
  27. ＡＢＰがＭＡＢ２１である、請求項２２又は２３に記載の方法。
  28. 併用療法が免疫活性化に対して相加効果を有する、請求項１６〜２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 併用療法が免疫活性化に対して相乗効果を有する、請求項１６〜２７のいずれか一項に記載の方法。
  30. 免疫活性化に対する相加効果又は相乗効果の決定が、ＣＭＶリコールアッセイを使用して決定される、請求項２８又は請求項２９に記載の方法。
  31. 免疫活性化に対する相加効果又は相乗効果の決定が、解離腫瘍細胞アッセイを使用して決定される、請求項２８又は請求項２９に記載の方法。
  32. 追加の治療剤が、ＡＢＰと同じ医薬組成物に製剤化される、請求項１６〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 追加の治療剤が、ＡＢＰとは異なる医薬組成物に製剤化される、請求項１６〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  34. 追加の治療剤が、ＡＢＰを投与する前に投与される、請求項１６〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  35. 追加の治療剤が、ＡＢＰを投与した後に投与される、請求項１６〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  36. 追加の治療剤が、ＡＢＰと同時に投与される、請求項１６〜３１のいずれか一項に記載の方法。
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