BR112019013375A2 - Anticorpos humanos para toxina da hemosilina a de s. aureus - Google Patents
Anticorpos humanos para toxina da hemosilina a de s. aureus Download PDFInfo
- Publication number
- BR112019013375A2 BR112019013375A2 BR112019013375-5A BR112019013375A BR112019013375A2 BR 112019013375 A2 BR112019013375 A2 BR 112019013375A2 BR 112019013375 A BR112019013375 A BR 112019013375A BR 112019013375 A2 BR112019013375 A2 BR 112019013375A2
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- amino acid
- hemolysin
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 239000003053 toxin Substances 0.000 title description 50
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 title description 50
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 89
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 52
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims abstract description 19
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 claims abstract description 15
- 108010006464 Hemolysin Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 101710147195 Hemolysin A Proteins 0.000 claims description 206
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 195
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 149
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 141
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 141
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 141
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 136
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 76
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 76
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 51
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 33
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 26
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 claims description 25
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 18
- 206010017553 Furuncle Diseases 0.000 claims description 14
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 14
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 14
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 12
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 claims description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 11
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 claims description 10
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 claims description 10
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 10
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 claims description 10
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 claims description 10
- 208000003512 furunculosis Diseases 0.000 claims description 10
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 claims description 10
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 claims description 10
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 9
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 claims description 9
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 claims description 9
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 6
- 108091007504 ADAM10 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000036664 ADAM10 Human genes 0.000 claims description 5
- 206010060968 Arthritis infective Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 5
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 4
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 3
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 claims description 3
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 claims description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract description 7
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 abstract 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000753 anti-hemolysin Effects 0.000 description 100
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 78
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 49
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 49
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 45
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 41
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 41
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 29
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 26
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 25
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 24
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 23
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 22
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 22
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 21
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 20
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 19
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 19
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 16
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 13
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 11
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 10
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 206010062255 Soft tissue infection Diseases 0.000 description 9
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 8
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 8
- 208000015339 staphylococcus aureus infection Diseases 0.000 description 8
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 7
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 7
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical group [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 6
- 208000031650 Surgical Wound Infection Diseases 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 102220117530 rs112626848 Human genes 0.000 description 6
- 102220238658 rs1468529365 Human genes 0.000 description 6
- 102220268018 rs201210997 Human genes 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 5
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100454808 Caenorhabditis elegans lgg-2 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 4
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000002733 dermonecrotic effect Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 4
- 102200148758 rs116840795 Human genes 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101710121036 Delta-hemolysin Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- -1 IL - 6 Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010014603 Leukocidins Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 description 3
- 102220349284 c.287A>T Human genes 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M phenethicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)C(C)OC1=CC=CC=C1 ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102220142694 rs192332456 Human genes 0.000 description 3
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 3
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 3
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- AIRYAONNMGRCGJ-FHFVDXKLSA-N CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]cn3)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc3ccccc3)C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc3c[nH]cn3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc3ccc(O)cc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)NC1=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]cn3)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc3ccccc3)C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc3c[nH]cn3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc3ccc(O)cc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)NC1=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC AIRYAONNMGRCGJ-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 102220210869 rs1057524586 Human genes 0.000 description 2
- 102220220520 rs1060503090 Human genes 0.000 description 2
- 102220206698 rs142514490 Human genes 0.000 description 2
- 102220325921 rs1555376589 Human genes 0.000 description 2
- 102200164344 rs63751661 Human genes 0.000 description 2
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 2
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 2
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N 0.000 description 1
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100454807 Caenorhabditis elegans lgg-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035484 Cellulite Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N Clavulanic acid Natural products OC(=O)C1C(=CCO)OC2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000579120 Coliiformes Species 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 101100284769 Drosophila melanogaster hemo gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010049752 Peau d'orange Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101000606032 Pomacea maculata Perivitellin-2 31 kDa subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000606027 Pomacea maculata Perivitellin-2 67 kDa subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 101800000874 Small capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101800000996 Small capsid protein precursor Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 229940098164 augmentin Drugs 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036232 cellulite Effects 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 229940015979 epipen Drugs 0.000 description 1
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 229940038661 humalog Drugs 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940048921 humira Drugs 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000005257 nucleotidylation Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 229940090048 pen injector Drugs 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003906 pulsed field gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- QHGVXILFMXYDRS-UHFFFAOYSA-N pyraclofos Chemical compound C1=C(OP(=O)(OCC)SCCC)C=NN1C1=CC=C(Cl)C=C1 QHGVXILFMXYDRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043131 pyroglutamate Drugs 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000011524 similarity measure Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006104 solid solution Substances 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000004441 surface measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000024033 toxin binding Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
- A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/305—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F)
- C07K14/31—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
- C07K16/1271—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Micrococcaceae (F), e.g. Staphylococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
a presente invenção fornece anticorpos que se ligam à toxina hemolisina a de staphylococcus aureus e métodos de uso. de acordo com certas modalidades da invenção, os anticorpos são anticorpos completamente humanos que se ligam à hemolisina a. os anticorpos da invenção são úteis para inibir ou neutralizar a atividade da hemolisina a, provendo assim um meio de prevenir ou tratar uma doença ou distúrbio relacionado à hemolisina a, tal como infecção por s. aureus. em algumas modalidades, os anticorpos da presente invenção são utilizados no tratamento de pelo menos um sintoma ou complicação de uma infecção por s. aureus.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “ANTICORPOS HUMANOS PARA TOXINA DA HEMOSILINA A DE S. AUREUS”.
CAMPO DA INVENÇÃO [001] A presente invenção refere-se a anticorpos humanos e seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à toxina da Hemolisina A de Staphylococcus aureus e a modos terapêuticos e de diagnóstico da utilização desses anticorpos e fragmentos.
FUNDAMENTOS [002] O Staphylococcus aureus é uma bactéria aeróbia facultativa,
Gram-positiva, que coloniza frequentemente a pele e o nariz de indivíduos saudáveis. A bactéria é considerada um patógeno oportunista e pode causar uma variedade de doenças/condições em vários locais do corpo. É uma das principais causas de infecções na corrente sanguínea, pele e tecidos moles e respiratórias em todo o mundo. A frequência de infecções associadas à saúde e à comunidade causadas por S. aureus tem aumentado e os esforços para combater essas infecções têm sido dificultados pelo surgimento de cepas resistentes aos fármacos, particularmente as cepas resistentes à meticilina ou MRSA.
[003] S. aureus expressa inúmeros fatores de virulência (tanto expressos na superfície celular quanto secretados) que auxiliam na invasão e disseminação bacteriana no hospedeiro. Entre os fatores de virulência secretados estão várias toxinas, cuja mais proeminente delas é a toxina formadora de poros de Hemolisina A. A hemolisina A de S. aureus é um monômero secretado de 33 kDa que se oligomeriza em uma estrutura heptamérica na membrana das células hospedeiras para formar um poro que leva à lise celular, rompimento da barreira epitelial, inflamação e dano tecidual (Berube et a/., (2013), Toxins 5:1140-1166).
[004] Múltiplos tipos de células de mamíferos, incluindo plaquetas, monócitos, células endoteliais e epiteliais, são lisadas pela Hemolisina
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 142/274
2/94
A. Foi proposto que um ou mais desses tipos de células são os alvos fisiologicamente relevantes da Hemolisina A. em vez de células vermelhas do sangue (RBCs), uma vez que as EBCs humanos são susceptíveis à lise apenas quando expostas a altas concentrações de Hemolisina A (Hildebrand e/a/., (1991), J. Biol. Chem. 266:17195-17200; Wilke et al., (2010), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107: 13473-13478; Berube et al., (2013), Toxins 5: 1140-1166).
[005] Demonstrou-se que a hemolisina A desempenha um papel na pneumonia, dermonecrose, endocardite e sepse em modelos animais de infecção por S. aureus (Tkaczyk et al., 2012), Clin. Vacina Immunol. 19: 377-385 e Kennedy etal., (2010), J. Infect. Dis. 202:10501058). S. aureus é uma das principais causas de infecções da pele e tecidos moles (Moran, et al. (2006), N. Engl. J. Med. 355: 666-674)), muitas vezes causando celulite e abscesses na pele. Em modelos de camundongo, a imunização ativa com uma forma não toxigênica de Hemolisina A ou imunização passiva com antissoros específicos para Hemolisina A ou anticorpos monoclonais (mAbs) reduz significativamente o tamanho das lesões da pele e previne dermonecrose causada por cepas de S. aureus produtoras de Hemolisina A. (Kennedy et al., (2010), J. Infect. Dis. 202:1050-1058; Tkaczyk etal., (2012), Clin. Vacina Immunol. 19: 377-385). S. aureus também é uma das principais causas de pneumonia em pacientes hospitalizados (Kollef etal., (2005), Chest 128: 3854-3862 (Erratum in Chest 129: 831), Shorr et al., (2006), Crit. Care 10: R97) e foi demonstrado que desempenha um papel em modelos de camundongos com infecção pulmonar (Bubeck Wardenberg et al., (2007), Infect. Immun. 75: 1040-1044). Aimunização ativa com uma forma não toxigênica de Hemolisina A ou imunização passiva com antissoros ou mAbs específicos para Hemolisina A reduz significativamente a morbilidade e mortalidade em modelos de pneumonia em camundongo (Bubeck Wardenburg e Schneewind, (2008), J. Exp. Med.
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 143/274
3/94
205: 287-294; Hua et al., (2014), Antimicrob. Agents Chemother. 58: 1108-1117).
[006] OStaphylococcus aureus é uma das principais causas de infecção em hospitais e na comunidade. O surgimento de cepas de S. aureus resistentes a antibióticos, como Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA), que são mais difíceis de tratar com tipos padrão de antibióticos, é um problema atual na medicina clínica e requer o desenvolvimento de novas abordagens antibacterianas. profilaxia e terapia (Kennedy et al., (2010), J. Infect. Dis. 202: 1050-1058).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO [007] A invenção provê anticorpos monoclonais (mAbs) totalmente humanos e seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a Hemolisina A de Staphylococcus aureus. Tais anticorpos podem ser úteis para neutralizar a atividade da Hemolisina A. Os anticorpos podem agir para prevenir, interromper a progressão, ou para diminuir a gravidade de uma infecção por S. aureus ou reduzir o número, a duração ou a gravidade da recorrência da infecção ou melhorar pelo menos um sintoma associado a infecções. Em alguns casos, os anticorpos podem ser usados para prevenir ou tratar uma condição ou indicação associada à infecção por S. aureus, como dermonecrose, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abscessos), infecções do local cirúrgico, infecções da prótese articular, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite e furunculose e carbunculose (furúnculos). Tais anticorpos podem ser utilizados sozinhos ou em conjunto com um segundo agente útil para o tratamento de infecções por S. aureus. Em certas modalidades, os anticorpos específicos para Hemolisina A podem ser dados terapeuticamente em conjunto com um segundo agente para diminuir a gravidade da infecção por S. aureus ou para reduzir o número, a duração ou a gravidade da recorrência da infecção ou melhorar
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 144/274
4/94 pelo menos um sintoma associado à infecção por S. aureus. Em alguns casos, a terapia de combinação pode ser usada para tratar uma condição ou indicação associada à infecção por S. aureus, tais como dermonecrose, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abscessos), infecções do local cirúrgico, infecções da prótese articular, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite e furunculose e carbunculose (furúnculos). Em certas modalidades, os anticorpos podem ser utilizados profilaticamente como terapia autônoma para proteger os pacientes que estão em risco de desenvolver uma infecção porS. aureus. Por exemplo, algumas populações de pacientes podem estar em risco de desenvolver uma infecção por S. aureus, incluindo pacientes idosos, pacientes com sistema imunológico enfraquecido ou pacientes com maior risco de infecção nosocomial, como pacientes pós-operatórios. Qualquer uma destas populações de pacientes pode se beneficiar do tratamento com os anticorpos da invenção, quando administrados isoladamente ou em conjunto com um segundo agente.
[008] Os anticorpos da presente invenção podem ser utilizados para tratar infecção por Staphylococcus aureus em um paciente. Os anticorpos podem ser de comprimento total (por exemplo, um anticorpo IgG 1 ou lgG4) ou podem compreender apenas uma porção de ligação ao antígeno (por exemplo, um fragmento a Fab, F(ab’)2 ou scFv) e pode ser modificado para afetar a funcionalidade, por exemplo, para eliminar funções efetoras residuais (Reddy etal., (2000), J. Immunol. 164:19251933) ou aumentar a meia-vida do mAb (Zalevsky etal., (2010), Nature Biotechnology 28:157-159). A presente invenção inclui qualquer anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende qualquer uma das regiões Vh aqui especificadas ligadas a uma região constante da cadeia pesada (por exemplo, região constante humana) tal como gama (por exemplo, gama-1, gama-2, gama -3 ou gama-4),
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 145/274
5/94 delta, alfa, mu ou épsilon e/ou qualquer região Vl aqui especificada ligada a uma região constante da cadeia leve (por exemplo, região constante humana), tal como lambda ou capa.
[009] Assim, em um primeiro aspecto, a invenção provê um anticorpo monoclonal totalmente humano isolado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à Hemolisina A. [010] Em alguns casos, o anticorpo monoclonal humano liga-se à Hemolisina A de tipo selvagem (SEQ ID NO: 291) ou a Hemolisina A modificada (SEQ ID NO: 295).
[011] Em uma modalidade, o anticorpo humano isolado ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga à Hemolisina A com um Kd igual ou inferior a 10-7 M, medido por ressonância de plásmon de superfície.
[012] Em algumas modalidades, o anticorpo isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo apresenta uma ou mais propriedades selecionadas do grupo que consiste em: (a) se liga à hemolisina A tipo selvagem a 37°C com uma constante de equilíbrio de dissociação (Kd) menor que cerca 80 nM como medido por ressonância de plásmon de superfície; (b) se liga à hemolisina A tipo selvagem a 37°C com uma meia-vida dissociativa (t 1/s) de mais de cerca de 0,5 minutos, como medido por ressonância de plásmon de superfície; (c) se liga à hemolisina A tipo selvagem a 25°C com um Kd menor que cerca de 30 nM, medido por ressonância de plásmon de superfície; (d) se liga à hemolisina A tipo selvagem a 25°Ccom um t Vz maior que cerca de 1,5 minuto como medido por ressonância de plásmon de superfície; (e) se liga a uma hemolisina A modificada a 37°C,com uma constante de equilíbrio de dissociação de ligação (Kd) menor que cerca de 20 nM como medido por ressonância de plásmon de superfície; (f) se liga a uma hemolisina A modificada a 37°C,com uma meia-vida dissociativa (t Vá) maior que cerca de 0,5 minuto, como medido por ressonância de plásmon de superfície;
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 146/274
6/94 (g) se liga a uma hemolisina A modificada a 25°C com umKo menor que cerca de 10 nM, medido por ressonância de plásmon de superfície; e (h) se liga a uma hemolisina A modificada a 25°C com um 11/2 maior que cerca de 1,5 minuto como medido por ressonância de plásmon de superfície.
[013] Em alguns casos, o anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à Hemolisina A compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeias pesadas (CDRs) (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) contidas em qualquer uma das sequências da região variável da cadeia pesada (HCVR) selecionadas do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e/ou três CDRs de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) contidas em qualquer uma das sequências da região variável de cadeia leve (LCVR) selecionadas do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270. Os métodos e técnicas para identificar CDRs nas sequências de aminoácidos de HCVR e LCVR são bem conhecidos na técnica e podem ser utilizados para identificar CDRs dentro das sequências de aminoácidos especificadas de região(s) variável(s) da cadeia pesada e/ou região(s) variável(s) da cadeia leve (LCVR) aqui descritas. Convenções exemplares que podem ser usadas para identificar os limites das CDRs incluem, por exemplo, a definição de Kabat, a definição de Chothia e a definição de AbM. Em termos gerais, a definição de Kabat é baseada na variabilidade de sequência, a definição de Chothia é baseada na localização das regiões de laço estrutural, e a definição de AbM é um compromisso entre as abordagens de Kabat e Chothia. Veja, por exemplo, Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273: 927-948; e Martin et a/.(1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 9268-9272. Bancos de dados públicos também estão disponíveis
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 147/274
7/94 para identificar sequências de CDR dentro de um anticorpo.
[014] Em algumas modalidades, o anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga à hemolisina A, compreende um HCVR que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82,102 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282.
[015] Em algumas modalidades, o anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga à hemolisina A, compreende uma LCVR que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.
[016] Em alguns casos, o anticorpo humano isolado ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga à hemolisina A, compreende (a) uma HCVR com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e (b) uma LCVR com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270. [017] Em uma modalidade, o anticorpo humano isolado ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga à hemolisina A, compreende:
(a) um domínio HCDR1 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 4, 24, 44, 64, 84, 104, 124, 144, 164, 184, 204, 224, 244, 264 e 284;
(b) um domínio HCDR2 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 26, 46, 66, 86, 106, 126, 146, 166, 186, 206, 226, 246, 266 e 286;
(c) um domínio HCDR3 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 8, 28, 48, 68, 88, 108, 128, 148, 168, 188, 208, 228, 248, 268 e 288;
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 148/274
8/94 (d) um domínio LCDR1 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 12, 32, 52, 72, 92, 112, 132, 152, 172, 192, 212, 232, 252 e 272;
(e) um domínio LCDR2 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 14, 34, 54, 74, 94, 114, 134, 154, 174, 194, 214, 234, 254 e 274; e (f) um domínio LCDR3 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 16, 36, 56, 76, 96, 116, 136, 156, 176, 196, 216, 236, 256 e 276.
[018] Em várias modalidades, a invenção provê um anticorpo monoclonal totalmente humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à Hemolisina A, em que o anticorpo ou seu fragmento exibe uma ou mais das seguintes características: (i) compreende uma HCVR tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282 ou uma sequência substancialmente semelhante deste que tem pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; (ii) compreende um LCVR que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270 ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; (iii) compreende um domínio HCDR3 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 8, 28, 48, 68, 88, 108, 128, 148, 168, 188, 208, 228, 248, 268, e 288, 536, 552, 568 e 584, ou uma sua sequência substancialmente semelhante, tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências; e um domínio LCDR3 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 16, 36,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 149/274
9/94
56, 76, 96, 116, 136, 156, 176, 196, 216, 236, 256 e 276, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; (iv) compreende um domínio HCDR1 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, 24, 44, 64, 84, 104, 124, 144, 164, 184, 204, 224, 244, 264, e 284, ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma, tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; um domínio HCDR2 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 6, 26, 46, 66, 86, 106, 126, 146, 166, 186, 206, 226, 246, 266 e 286, ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; um domínio LCDR1 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 12, 32, 52, 72, 92, 112, 132, 152, 172, 192, 212, 232, 252 e 272, ou substancialmente uma sequência semelhante da mesma com pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; e um domínio LCDR2 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 14, 34, 54, 74, 94, 114, 134, 154, 174, 194, 214, 234, 254 e 274, ou um uma sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; e/ou (v) se liga à Hemolisina A com um Kd igual ou inferior a 10-7 M, medido por ressonância de plásmon de superfície.
[019] Em outro aspecto, a invenção provê um anticorpo isolado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compete pela ligação à Hemolisina A com um anticorpo de referência ou fragmento de
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 150/274
10/94 ligação ao antígeno compreendendo as regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de uma região variável da cadeia pesada (HCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e as CDR de uma região variável de cadeia leve (LCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.
[020] Em outro aspecto, a invenção provê um anticorpo isolado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que liga o mesmo epitopo na Hemolisina A como um anticorpo de referência ou fragmento de ligação ao antígeno compreendendo as CDRs de uma região variável da cadeia pesada (HCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e as CDR de uma região variável de cadeia leve (LCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.
[021] Em algumas modalidades, a invenção provê um anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à Hemolisina A, em que o anticorpo ou seu fragmento compreende um par de sequências de aminoácidos HCVR/LCVR selecionado do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 2/10, 22/30, 42/50, 62/70, 82/90, 102/110, 122/130, 142/150, 162/170, 182/190, 202/210, 222/230, 242/250, 262/270 e 282/270.
[022] Em outro aspecto, a invenção provê moléculas de ácido nucleico que codificam anticorpos anti-Hemolisina A ou seus fragmentos. Os vetores de expressão recombinantes que transportam os ácidos nucleicos da invenção e as células hospedeiras nas quais esses vetores foram introduzidos também são abrangidos pela invenção, assim como
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 151/274
11/94 os métodos de produção dos anticorpos por cultura das células hospedeiras sob condições que permitem a produção dos anticorpos e recuperação dos anticorpos produzidos.
[023] Em algumas modalidades, a invenção provê um anticorpo ou um seu fragmento compreendendo um HCVR codificado por uma sequência de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1,21,41,61,81, 101, 121, 141, 161, 181,201,221,241,261 e 281 ou uma sequência substancialmente idêntica que tem pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% de homologia da mesma.
[024] Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento compreende ainda uma LCVR codificada por uma sequência de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 9, 29, 49, 69, 89, 109, 129, 149, 169, 189, 209., 229, 249 e 269 ou uma sequência substancialmente idêntica que tem pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% de homologia da mesma.
[025] Em alguns casos, a invenção provê um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo compreendendo um domínio HCDR3 codificado por uma sequência nucleotídica selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 7, 27, 47, 67, 87, 107, 127, 147, 167, 187, 207, 227, 247, 267 e 287 ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma, tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; e um domínio LCDR3 codificado por uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 15, 35, 55, 75, 95, 115, 135, 155, 175, 195, 215, 235, 255 e 275 ou um sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência.
[026] Em algumas modalidades, a invenção provê um anticorpo ou seu fragmento compreendendo ainda um domínio HCDR1 codificado
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 152/274
12/94 por uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 3, 23, 43, 63, 83, 103, 123, 143, 163, 183, 203, 223, 243, 263, e 283, 563 e 579 ou uma sua sequência substancialmente semelhante, tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; um domínio HCDR2 codificado por uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 5, 25, 45, 65, 85, 105, 125, 145, 165, 185, 205, 225, 245, 265 e 285 ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; um domínio LCDR1 codificado por uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11, 31, 51, 71, 91, 111, 131, 151, 171, 191,211,231,251 e 271 ou substancialmente uma sequência semelhante da mesma com pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; e um domínio LCDR2 codificado por uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 13, 33, 53, 73, 93, 113, 133, 153, 173, 193, 213, 233, 253 e 273, ou um sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência.
[027] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à Hemolisina A, como aqui descrito, pode ser ligado a um marcador detectável, tal como um marcador de radionuclídeo ou um marcador detectável por MRI.
[028] Em outro aspecto, a invenção provê uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo monoclonal totalmente humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à hemolisina A, como descrito anteriormente ou neste documento, e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 153/274
13/94 [029] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um anticorpo monoclonal totalmente humano que se liga à hemolisina A tendo qualquer uma ou mais das características descritas anteriormente ou aqui. Em uma modalidade, o anticorpo se liga à Hemolisina A com um Kd igual ou inferior a 10_7M. Em várias modalidades, a composição compreende um anticorpo que se liga à hemolisina A e tem um par de sequência de aminoácidos de HCVR/LCVR selecionado do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 2/10, 22/30, 42/50, 62/70, 82/90, 102/110, 122/130, 142/150, 162/170, 182/190,202/210,222/230, 242/250, 262/270 e 282/270. A presente invenção também fornece um anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é composto por (i) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos na SEQ ID NO: 20 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18; (ii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 40 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 38; (iii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 60 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 58; (iv) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 80 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 78; (v) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 98; (vi) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 154/274
14/94
NO: 120 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 118; (vii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 140 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 138; (viii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 160 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 158; (ix) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 180 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 178; (x) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 200 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 198; (xi) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 220 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 218; (xii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 240 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 238; (xiii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 260 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 258; (xiv) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 280 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 155/274
15/94
SEQ ID NO: 278; ou (xv) imunoglobulina de cadeia que inclui uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 280 e uma cadeia pesada de imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 290.
[030] Em alguns casos, a invenção apresenta uma composição, que é uma combinação de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno de um anticorpo da invenção e um segundo agente terapêutico. O segundo agente terapêutico pode ser um fármaco de molécula pequena, uma proteína/polipeptídeo, um anticorpo, uma molécula de ácido nucleico, tal como um oligonucleotídeo anti-sentido ou um siRNA. O segundo agente terapêutico pode ser sintético ou derivado naturalmente. O segundo agente terapêutico pode ser qualquer agente que seja vantajosamente combinado com o anticorpo ou seu fragmento da invenção. [031] Em certas modalidades, o segundo agente terapêutico pode ser um agente que ajude a neutralizar ou reduzir quaisquer efeitos secundários possíveis associados ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da invenção, se tal efeito colateral ocorrer. [032] Também será reconhecido que os anticorpos e composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser empregados em terapias de combinação, isto é, os anticorpos e composições farmaceuticamente aceitáveis podem ser administrados concorrentemente com, antes ou subsequentemente a um ou mais outros procedimentos terapêuticos ou médicos. A combinação particular de terapias (terapêuticas ou procedimentos) para empregar em um regime de combinação levará em consideração a compatibilidade das terapêuticas e/ou procedimentos desejados e o efeito terapêutico desejado a ser alcançado. Também reconhecido que as terapias empregadas podem alcançar um efeito desejado para o mesmo distúrbio (por exemplo, um anticorpo pode ser administrado concorrentemente com outro agente
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 156/274
16/94 utilizado para tratar o mesmo distúrbio) ou podem conseguir efeitos diferentes (por exemplo, controle de quaisquer efeitos adversos). Como aqui utilizado, agentes terapêuticos adicionais que são normalmente administrados para tratar ou prevenir uma doença ou condição particular, são apropriados para a doença ou condição a ser tratada. Quando múltiplas terapias são coadministradas, as dosagens podem ser ajustadas em conformidade, como reconhecido na técnica pertinente.
[033] Em outro aspecto, a invenção provê um método para prevenir, tratar ou gerenciar infecções primárias causadas por Staphylococcus aureuse e reduzir, eliminar ou prevenir a recaída de infecções por S. aureus. Em alguns casos, a invenção inclui um método para prevenir e/ou tratar uma doença ou distúrbio associado à infecção por S. aureus, tal como dermonecrose, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abcessos), infecções do local cirúrgico, infecções das articulações protéticas, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite e furunculose e carbunculose (furúnculos). Em certas modalidades, a invenção provê um método para tratar um paciente que sofre de infecção por S. aureus ou para tratar pelo menos um sintoma ou complicação associada a infecção por S. aureus ou parar a progressão da infecção por S. aureus, o método compreendendo a administração ao paciente de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à hemolisina A; ou uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à hemolisina A, de tal modo que a condição ou doença associada à infecção por Staphylococcus aureus seja prevenida ou diminuída na gravidade e/ou duração ou pelo menos um sintoma ou complicação associada com a condição ou doença evitada ou melhorada ou que a frequência e/ou duração ou a gravidade da infecção por S. aureus seja reduzida. Em várias
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 157/274
17/94 modalidades dos métodos discutidos anteriormente, as bactérias S. aureus podem ser resistentes a um ou mais tipos de tratamentos antibióticos. Em uma modalidade, as bactérias são S. aureus resistentes à meticilina (MRSA).
[034] Em algumas modalidades do método, a composição farmacêutica compreendendo os anticorpos da invenção é administrada ao paciente em combinação com um segundo agente terapêutico.
[035] Em modalidades da invenção, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou a composição farmacêutica compreendendo o anticorpo administrada subcutânea, intravenosa, intradérmica, oral ou intramuscularmente.
[036] Em modalidades relacionadas, a invenção inclui a utilização de um anticorpo anti-Hemolisina A isolado ou porção de ligação ao antígeno de um anticorpo da invenção na fabricação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de uma doença ou distúrbio relacionado com ou causado por infecção por S. aureus ou a presença de toxina Hemolisina A. A invenção também inclui a utilização de um anticorpo anti-Hemolisina A isolado ou sua porção de ligação ao antígeno para prevenir ou tratar uma doença ou distúrbio relacionado ou causado por infecção por S. aureus ou a presença de toxina Hemolisina A. Em várias modalidades, estas doenças ou distúrbios incluem dermonecrose, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abcessos), infecções do local cirúrgico, infecções da articulação protética, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite e furunculose e carbunculose (furúnculos). Em uma modalidade, a invenção inclui a utilização de um anticorpo anti-Hemolisina A isolado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma infecção por S. aureus . Em alguns casos, a invenção inclui a
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 158/274
18/94 utilização de um anticorpo anti-Hemolisina A ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, como discutido anteriormente ou aqui para tratar um paciente que sofre ou está em risco de desenvolver uma infecção por Staphylococcus aureus . Em algumas modalidades, a invenção inclui a utilização de um anticorpo anti-Hemolisina A ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como discutido anteriormente ou aqui para tratar um paciente que sofre de dermonecrose, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abcessos), infecções no local cirúrgico, infecções de prótese articular, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite e furunculose e carbunculose (furúnculos).
[037] Outras modalidades ficarão evidentes a partir de uma revisão da descrição detalhada que se segue.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [038] A Figura 1 mostra a ligação de anticorpos anti-Hemolisina A à hemolisina A de S. aureus.
[039] As Figuras 2a, 2b e 2c mostram a ligação de anticorpos antiHemolisina A a subunidades F de toxinas bicomponentes de S. aureus : a Fig. 2a mostra a ligação a LukF; Fig. 2b mostra ligação a LukD; e a Fig. 2c mostra ligação a HlgB.
[040] As Figuras 3a, 3b e 3c mostram a ligação do anticorpo H1H15381P anti-Hemolisina A a componentes de toxinas bicomponentes de S. aureus : A Fig. 3a mostra a ligação a LukF, LukS e LukE; A Fig. 3b mostra a ligação a HlgA e HlgC; e a Fig. 3c mostra ligação à toxina delta.
[041] As Figuras 4a e 4b: A Figura 4a mostra o bloqueio da atividade de ADAM10 induzida por toxina pelo anticorpo anti-Hemolisina A H1H15377P, H1H15381P ou H1H15399P e a Figura 4b mostra a prevenção da ligação da Hemolisina A a membranas de glóbulos vermelhos de coelho pelo anticorpo anti-Hemolisina A H1H15377 ou H1H15399 .
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 159/274
19/94 [042] As Figuras 5a, 5b e 5c mostram o tamanho de lesões dermonecróticas em camundongos infectados por S.aureus CA-127 e tratadas com vários anticorpos (H1H15377P, H1H15381P, H1H15399P, LTM14, LC10 ou anticorpo controle) a 5, 0,5 ou 0,125 mg/kg.
[043] As Figuras 6a, 6b e 6c mostram o tamanho de lesões dermonecróticas em camundongos infectados com S.aureus Newman e tratados com vários anticorpos (H1H15377P, H1H15381P, H1H15399P, LTM14, LC10 ou anticorpo de controle) a 5, 0,5 ou 0,125 mg/kg.
[044] As Figuras 7a e 7b mostram contagens de bactérias S.aureusCk-VZl (MRSA) ou S.aureus Newman (MSSA) na pele de camundongos administrados vários mAb anti-HemolisinaA (H1H15377P, H1H15381P, H1H15399P, LTM14, LC10ou anticorpo de controle).
[045] As Figuras 8a e 8b mostram a carga bacteriana nos pulmões de camundongos infectados com S.aureus CA-127 tratados com vários anticorpos (H1H15377P, H1H15381P, H1H15399P, LTM14, LC10 ou anticorpo controle) a 1,25 ou 0,325 mg/kg.
DESCRIÇÃO DETALHADA [046] Antes dos presentes métodos serem descritos, deve-se entender que esta invenção não está limitada a métodos particulares e condições experimentais descritas, uma vez que tais métodos e condições podem variar. Também deve-se entender que a terminologia usada neste documento tem a finalidade de descrever modalidades específicas apenas e não pretende limitar o escopo da presente invenção, o qual será limitado somente pelas reivindicações anexas.
[047] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos utilizados aqui têm o mesmo significado conforme comumente entendido por um versado na técnica à qual esta invenção pertence. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais preferidos são
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 160/274
20/94 agora descritos. Todas as publicações aqui mencionadas são aqui incorporadas por referência na sua totalidade.
Definições [048] Os termos “Hemolisina A” e “Toxina Hemolisina A” referesem, indistintamente, a uma proteína monomérica de 33 kDa secretada por S. aureus que se oligomeriza em uma estrutura heptamérica na membrana das células hospedeiras para formar um poro que leva à lise celular, inflamação e danos nos tecidos. A sequência de aminoácidos da Hemolisina A de tipo selvagem é mostrada na SEQ ID NO: 291. A sequência de aminoácidos de uma Hemolisina A modificada (mutante H35L) é mostrada na SEQ ID NO: 295. Salvo indicação em contrário, a referência à Hemolisina A refere-se à forma do tipo selvagem. Hla-H35L é Hemolisina A em que a histidina na posição 35 foi alterada para uma leucina. Isto permite que a toxina se instale na membrana da célula hospedeira até a etapa de formação do pré-poro, mas não se forma um poro totalmente funcional. Isto torna a Hemolisina A não toxigênica.
[049] O termo anticorpo, como aqui utilizado, pretende se referir a moléculas de imunoglobulina constituídas por quatro cadeias polipeptídicas, duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interligadas por ligações dissulfureto (isto é, moléculas completas de anticorpo), bem como os seus multímeros (por exemplo IgM) ou os seus fragmentos de ligação ao antígeno. Cada cadeia pesada é constituída por uma região variável da cadeia pesada (“HCVR” ou “Vh”) e uma região constante da cadeia pesada (compreendida pelos domínios Ch1 , Ch2 and Ch3). Cada cadeia leve é composta por uma região variável da cadeia leve (“LCVR ou “Vl”) e uma região constante da cadeia leve (Cl). As regiões Vh e Vl podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, designadas regiões que determinam complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR). Cada Vh e Vl é composta por três CDR e
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 161/274
21/94 quatro FR, dispostas a partir do terminal amino para o terminal carboxila na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Em certas modalidades da invenção, as FR do anticorpo (ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) podem ser idênticas às sequências da linha germinativa humana ou podem ser modificadas natural ou artificialmente. Uma sequência de consenso de aminoácidos pode ser definida com base em uma análise lado a lado de duas ou mais CDRs.
[050] A substituição de um ou mais resíduos de CDR ou a omissão de uma ou mais CDRs também é possível. Anticorpos foram descritos na literatura científica em que uma ou duas CDRs podem ser dispensadas para ligação. Padlan etal. (FASEB J. 1995, 9: 133-139) analisaram as regiões de contato entre anticorpos e os seus antígenos, com base em estruturas cristalinas publicadas e concluíram que apenas cerca de um quinto a um terço dos resíduos de CDR realmente entram em contato com o antígeno. Padlan também encontrou muitos anticorpos nos quais uma ou duas CDRs não tinham aminoácidos em contato com um antígeno (ver também, Vajdos etal. 2002 J Mol Biol 320: 415-428).
[051] Os resíduos de CDR que não entram em contato com o antígeno podem ser identificados com base em estudos anteriores (por exemplo, os resíduos H60-H65 em CDRH2 não são frequentemente necessários), de regiões de CDRs de Kabat fora das CDRs de Chothia, por modelagem molecular e/ou empiricamente. Se uma CDR ou resíduo(s) da mesma forem omitidas, ela é normalmente substituída com um aminoácido que ocupa a posição correspondente em outra sequência de anticorpos humanos ou um consenso dessas sequências. Posições para substituição dentro das CDRs e aminoácidos para substituir também podem ser selecionadas empiricamente. As substituições empíricas podem ser substituições conservatives ou não conservativas.
[052] Os anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A totalmente humanos aqui divulgados podem compreender uma ou mais substituições,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 162/274
22/94 inseresções e/ou deleções de aminoácidos nas regiões estruturais e/ou CDR dos domínios cariáveis da cadeia pesada e leve em comparação com as sequências da linha germinativa correspondentes. Tais mutações podem ser prontamente determinadas comparando as sequências de aminoácidos aqui divulgadas com as sequências da linha germinal disponíveis, por exemplo, nas bases de dados de sequências de anticorpos públicas. A presente invenção inclui anticorpos e os seus fragmentos de ligação ao antígeno, que são derivados de qualquer uma das sequências de aminoácidos aqui divulgadas, em que um ou mais aminoácidos dentro de uma ou mais regiões estruturais e/ou CDR são mutados para os resíduos correspondentes da sequência da linha germinativa da qual o anticorpo foi derivado ou do(s) resíduo(s) correspondente^) de outra sequência da linha germinativa humana ou a uma substituição conservative de aminoácido do(s) resíduo(s) germinativo(s) correspondente(s) (tais mudanças na sequência são aqui referidas coletivamente como mutações germinativas). Um versado na técnica, começando com as sequências da região variável da cadeia pesada e leve aqui descritas, pode facilmente produzir inúmeros anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem uma ou mais mutações da linha germinativa individuais ou suas combinações. Em certas modalidades, todos os resíduos da estrutura e/ou CDR dentro dos domínios Vh e/ou Vl são mutados de volta para os resíduos encontrados na sequência da linha germinativa original da qual o anticorpo foi derivado. Em outras modalidades, apenas certos resíduos são mutados de volta para a sequência da linha germinativa original, por exemplo, apenas os resíduos mutados encontrados nos primeiros 8 aminoácidos do FR1 ou nos últimos 8 aminoácidos do FR4, ou apenas os resíduos mutados encontrados no CDR1, CDR2 ou CDR3. Em outras modalidades, um ou mais dos resíduos da estrutura e/ou CDR são mutados para o (s)resíduo (s)correspondente(s) de uma sequência de linha germinativa diferente
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 163/274
23/94 (isto é, uma sequência de linha germinativa que é diferente da sequência da linha germinativa da qual o anticorpo foi originalmente derivado). Além disso, os anticorpos da presente invenção podem conter qualquer combinação de duas ou mais mutações da linha germinal dentro da estrutura e/ou regiões CDR, por exemplo, em que certos resíduos individuais são mutados para o resíduo correspondente de uma determinada sequência da linha germinativa, enquanto certos outros resíduos que diferem da sequência da linha germinativa original são mantidos ou são mutados para o resíduo correspondente de uma sequência diferente da linha germinativa. Uma vez obtidos, os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno que contêm uma ou mais mutações germinativas podem ser facilmente testados para uma ou mais propriedades desejadas, tais como melhor especificidade de ligação, maior afinidade de ligação, propriedades biológicas antagonísticas ou agonísticas melhoradas ou aumentadas (conforme o caso pode ser), imunogenicidade reduzida, etc. Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno obtidos desta maneira geral são abrangidos na presente invenção.
[053] A presente invenção também inclui anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A completamente humanos compreendendo variantes de qualquer uma das sequências de aminoácidos de HCVR, LCVR e/ou CDR aqui descritas que têm uma ou mais substituições conservativas. Por exemplo, a presente invenção inclui anticorpos anti-Hemolisina A tendo sequências de aminoácidos HCVR, LCVR e/ou CDR com, por exemplo, 10 ou menos, 8 ou menos, 6 ou menos, 4 ou menos, etc. substituições de aminoácidos conservativas em relação a qualquer das sequências de aminoácidos de HCVR, LCVR e/ou CDR aqui descritas.
[054] O termo anticorpo humano, como aqui utilizado, pretende incluir anticorpos que têm regiões variáveis e constantes derivadas de sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana. Os mAbs
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 164/274
24/94 humanos da invenção podem incluir resíduos de aminoácido não codificados por sequências de imunoglobulina de linhagem germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou específica de local in vitro ou por mutação somática in vivo), por exemplo, nas CDRs e, em particular, em CDR3. No entanto, o termo anticorpo humano, como aqui utilizado, não pretende incluir mAbs nos quais as sequências de CDR derivadas da linha germinal de outra espécie de mamífero (por exemplo, camundongo) foram enxertadas em sequências FR humanas.
[055] O termo se liga especificamente ou se liga especificamente a ou semelhantes significa que um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo forma um complexo com um antígeno que é relativamente estável sob condições fisiológicas. A ligação específica pode ser caracterizada por uma constante de dissociação de equilíbrio de pelo menos cerca de1x10-6 M ou menos (por exemplo, um Kd menor indica uma ligação mais estreita). Os métodos para determinar se duas moléculas se ligam especificamente são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, diálise de equilíbrio, ressonância de plásmon de superfície e semelhantes. Como aqui descrito, os anticorpos que se ligam especificamente à Hemolisina A foram identificados por ressonância de plásmon de superfície, por exemplo, BIACORE™. Além disso, anticorpos multiespecíficos que se ligam a um domínio na Hemolisina A e um ou mais antígenos adicionais ou um biespecífico que se liga a duas regiões diferentes da Hemolisina A são considerados anticorpos que “ligam especificamente”, como usado aqui.
[056] O termo anticorpo de “alta afinidade” refere-se aos mAbs com uma afinidade de ligação à Hemolisina A, expressa como Kd, de pelo menoslO-7 M; preferivelmentelO-8 M; mais preferivelmente 10-9 M, ainda mais preferivelmentelO-10 M, ainda mais preferivelmente 10-11 M, como medido por ressonância de plásmon de superfície, por exemplo,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 165/274
25/94
BIACORE™ ou ELISA por afinidade de solução.
[057] Pelo termo “taxa de dissociação lenta”, “Koff” ou “kd” pretende descrever um anticorpo que se dissocia da Hemolisina A com uma constante de velocidade de 1 x 10-3 s_1 ou menos, preferivelmente 1 x 10_4s_1 ou menos, conforme determinado pela ressonância de plásmon de superfície, por exemplo, BIACORE™.
[058] Os termos porção de ligação ao antígeno de um anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo e semelhantes, tal como aqui utilizados, incluem qualquer polipeptídeo ou glicoproteína de ocorrência natural, enzimaticamente obtida, sintética ou geneticamente modificada que se ligue especificamente a uma antígeno para formar um complexo. Os termos fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo, ou fragmento de anticorpo, como aqui utilizados, refere-sem a um ou mais fragmentos de um anticorpo que retêm a capacidade de se ligar a Hemolisina A.
[059] Em modalidades específicas, o anticorpo ou fragmentos de anticorpo da invenção podem ser conjugados a uma porção terapêutica (imunoconjugado), tal como um antibiótico, um segundo anticorpo antiHemolisina A ou um anticorpo para uma citocina tal como IL-1, IL -6, ou TGF-β, ou qualquer outra porção terapêutica útil para o tratamento de uma doença ou condição incluindo infecção por Staphylococcus aureus, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abcessos), infecções do local cirúrgico, infecções articulares prostéticas, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite e furunculose e carbunculose (furúnculos).
[060] Um anticorpo isolado, como aqui utilizado, pretende se referir a um anticorpo que está substancialmente isento de outros anticorpos (Abs) que tem especificidades antigênicas diferentes (por exemplo, um anticorpo isolado que se liga especificamente a Hemolisina A, ou um
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 166/274
26/94 seu fragmento, é substancialmente isentos de Abs que ligam especificamente antígenos que não sejam Hemolisina A).
[061] O termo ressonância de plásmon de superfície, como usado aqui, refere-se a um fenômeno óptico que permite a análise de interações biomoleculares em tempo real por detecção de alterações em concentrações de proteína dentro de uma matriz biossensora, por exemplo usando o sistema BIACORE™ (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suécia e Piscataway, N.J.).
[062] O termo Kd, como aqui utilizado, pretende se referir à constante de dissociação de equilíbrio de uma interação anticorpo-antígeno particular.
[063] O termo epitopo refere-se a um determinante antigênico que interage com um local de ligação ao antígeno específico na região variável de uma molécula de anticorpo conhecida como parátopo. Um único antígeno pode ter mais de um epitopo. Assim, diferentes anticorpos podem se ligar a diferentes áreas de um antígeno e podem ter diferentes efeitos biológicos. O termo epitopo também refere-se a um local em um antígeno ao qual as células B e/ou T respondem. Também refere-se a uma região de um antígeno que é ligado por um anticorpo. Os epitopos podem ser definidos como estruturais ou funcionais. Os epitopos funcionais são geralmente um subconjunto dos epitopos estruturais e possuem os resíduos que contribuem diretamente para a afinidade da interação. Os epitopos também podem ser conformacionais, isto é, compostos de aminoácidos não lineares. Em certas modalidades, os epitopos podem incluir determinantes que são agrupamentos de superfície quimicamente ativos de moléculas, tais como aminoácidos, cadeias laterais de açúcar, grupos fosforila ou grupos sulfonila e, em certas modalidades, podem ter características estruturais tridimensionais específicas e/ou características de carga específicas.
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 167/274
27/94 [064] O termo identidade substancial ou substancialmente idêntico, quando refere-se a um ácido nucleico ou fragmento deste indica que, quando idealmente alinhado com inserções ou deleções de nucleotídeos apropriados com outro ácido nucleico (ou a sua cadeia complementar), existe uma identidade de sequência nucleotídica em pelo menos cerca de 90% e mais preferivelmente pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% das bases de nucleotídeos, conforme medido por qualquer algoritmo bem conhecido de identidade de sequência, tal como FASTA, BLAST ou GAP, como discutido a seguir. Uma molécula de ácido nucleico com identidade substancial para uma molécula de ácido nucleico de referência pode, em certos casos, codificar um polipeptídeo que tem a mesma ou substancialmente semelhante sequência de aminoácidos que o polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico de referência.
[065] Quando aplicado a polipeptídeos, o termo semelhança substancial ou substancialmente semelhante significa que duas sequências peptídicas, quando alinhadas de forma ideal, tal como pelos programas GAP ou BESTFIT utilizando pesos de intervalo por defeito, compartilham pelo menos 90% de identidade de sequência, ainda mais preferivelmente pelo menos 95%, 98% ou 99% de identidade de sequência. Preferivelmente, as posições de resíduos que não são idênticos diferem por substituições de aminoácidos conservativas. Uma substituição conservative de aminoácidos é a em que um resíduo de aminoácido é substituído por outro resíduo de aminoácido com uma cadeia lateral (grupo R) com propriedades químicas semelhantes (por exemplo, carga ou hidrofobicidade). Em geral, uma substituição conservative de aminoácidos não altera substancialmente as propriedades funcionais de uma proteína. Nos casos em que duas ou mais sequências de aminoácidos diferem umas das outras por substituições conservativas, a percentagem ou grau de semelhança pode ser ajustada para
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 168/274
28/94 cima para corrigir a natureza conservativa da substituição. Meios para realizar este ajuste são bem conhecidos pelos versados na técnica. Ver, por exemplo, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331, que está aqui incorporado por referência. Exemplos de grupos de aminoácidos que possuem cadeias laterais com propriedades químicas semelhantes incluem 1) cadeias laterais alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; 2) cadeias laterais de hidroxila alifática: serina e treonina; 3) cadeias laterais contendo amida: asparagina e glutamina; 4) cadeias laterais aromáticas: fenilalanina, tirosina e triptofano; 5) cadeias laterais básicas: lisina, arginina e histidina; 6) cadeias laterais ácidas: aspartato e glutamato e (7 cadeias laterais contendo enxofre: cisteína e metionina. Os grupos de substituição conservativa de aminoácidos preferidos são: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alaninavalina, glutamato-aspartato e asparagina-glutamina. Alternativamente, uma substituição conservativa é qualquer alteração que tenha um valor positivo na matriz de verossimilhança logarítmica de PAM250 divulgada em Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443 45, aqui incorporado por referência. Uma substituição moderadamente conservativa é qualquer alteração que tenha um valor não negativo na matriz de verossimilhança logarítmica de PAM250.
[066] A semelhança de sequências para polipeptídeos é tipicamente medida usando software de análise de sequências. O software de análise de proteínas combina sequências semelhantes usando medidas de semelhanças atribuídas a várias substituições, deleções e outras modificações, incluindo substituições conservativas de aminoácidos. Por exemplo, o software GCG contém programas, tais como GAP e BESTFIT que podem ser utilizados com parâmetros de defeito para determinar homologia de sequência ou identidade de sequência entre polipeptídeos intimamente relacionados, tais como polipeptídeos homólogos de diferentes espécies de organismos ou entre uma proteína de
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 169/274
29/94 tipo selvagem e uma muteínados mesmos. Ver, por exemplo, GCG Versão 6.1. As sequências de polipeptídeo também podem ser comparadas usando FASTA com parâmetros padrão ou recomendados, um programa no GCG Versão 6.1. O FASTA (por exemplo, FASTA2 e FASTA3) fornece alinhamentos e percentagem de identidade de sequência das regiões da melhor sobreposição entre as sequências de consulta e pesquisa (Pearson (2000) supra). Outro algoritmo preferido quando se compara uma sequência da invenção com uma base de dados contendo um grande número de sequências de organismos diferentes é o programa de computador BLAST, especialmente BLASTP ou TBLASTN, utilizando parâmetros por defeito. Ver, por exemplo, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 e (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, cada um dos quais é aqui incorporado por referência.
[067] Em modalidades específicas, o anticorpo ou fragmento de anticorpo para utilização no método da invenção pode ser monoespecífico, biespecífico ou multiespecífico. Anticorpos multiespecíficos podem ser específicos para diferentes epitopos de um polipeptídeo alvo ou podem conter domínios de ligação ao antígeno específicos para epitopos de mais de um polipeptídeo alvo. Um formato de anticorpo biespecífico exemplar que pode ser utilizado no contexto da presente invenção envolve a utilização de um primeiro domínio de Ch3 de imunoglobulina (Ig) e um segundo domínio ICh3 de Ig, em que o primeiro e segundo domínios Ch3 de Ig diferem um do outro por pelo menos um aminoácido e em que pelo menos uma diferença de aminoácido reduz a ligação do anticorpo biespecífico à Proteína A em comparação com um anticorpo biespecífico sem a diferença de aminoácido. Em uma modalidade, o primeiro domínio CH3 de Ig se liga à Proteína A e 0 segundo domínio Ch3 de Ig contém uma mutação que reduz ou elimina a ligação da Proteína A, tal como uma modificação de H95R (pela numeração de éxon IMGT; H435R por numeração EU). O segundo C3H pode ainda compreender
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 170/274
30/94 uma modificação Y96F (por IMGT; Y436F por EU). Modificações adicionais que podem ser encontradas no segundo C3H incluem: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M e V82I (por IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M e V422I por EU) no caso de mAbs de IgG 1; N44S, K52N e V82I (IMGT; N384S, K392N e V422I por EU) no caso de mAbs de lgG2; e Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q e V82I (por IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q e V422I por EU) no caso de mAbs lgG4. Variações no formato de anticorpo biespecífico descritas anteriormente são contempladas dentro do âmbito da presente invenção.
[068] A expressão “quantidade terapeuticamente eficaz” significa uma quantidade que produz 0 efeito desejado para 0 qual é administrada. A quantidade exata dependerá do objetivo do tratamento e será determinável por um versado na técnica utilizando técnicas conhecidas (ver, por exemplo, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).
Descrição Geral [069] A toxina Hemolisina A de Staphylococcus aureus é uma proteína monomérica secretada de 33 kDa que se oligomeriza em uma estrutura heptamérica na membrana das células do hospedeiro para formar um poro que leva à lise celular, inflamação e dano tecidual. Demonstrou-se que a hemolisina A desempenha um papel na pneumonia, dermonecrose, endocardite e sepse.
[070] Os anticorpos aqui descritos demonstram ligação específica à Hemolisina A e, em algumas modalidades, podem ser úteis para 0 tratamento de pacientes que sofrem de infecções por S. aureus, ou para impedir tais infecções. A utilização de tais anticorpos pode ser um meio eficaz de tratar pacientes que sofrem de infecção por S. aureus ou pode ser utilizada para diminuir a gravidade dos sintomas de uma infecção
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 171/274
31/94 por S. aureus. Eles podem ser utilizados sozinhos ou como terapia adjunta com outras porções ou modalidades terapêuticas conhecidas na especialidade para o tratamento da infecção por Staphylococcus aureus, tais como, mas não limitadas a, um antibiótico, um fármaco antiinflamatório não esteroidal (NSIAD) (ou outro terapia paliativa) ou um corticosteroide como a prednisona. Eles podem ser usados em conjunto com anticorpos adicionais específicos para antígenos diferentes da Hemolisina A ou podem ser combinados com outros tipos de tratamentos. [071] Em algumas modalidades, os anticorpos aqui descritos podem ser úteis na prevenção, tratamento ou gestão de uma doença ou condição de infecção por Staphylococcus aureus incluindo, mas não limitados a, dermonecrose, infecções da infecções nas articulações, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite e furunculose e carbunculose (furúnculos).
[072] Em certas modalidades, os anticorpos da invenção são obtidos a partir de camundongos imunizados com um imunógeno primário, tal como uma Hemolisina A de comprimento total, nativa (SEQ ID NO: 291) ou com uma forma modificada de Hemolisina A (SEQ ID NO: 295) ou fragmentos de Hemolisina A, seguidos de imunização com um imunógeno secundário ou com um fragmento imunogenicamente ativo de Hemolisina A.
[073] O imunógeno pode ser um fragmento imunogênico da Hemolisina A ou DNA que codifica o seu fragmento. O imunógeno pode ser Hemolisina A acoplada a um marcador de histidina e/ou a um fragmento da região Fc de um anticorpo.
[074] A sequência de aminoácidos da hemolisina A de comprimento total é mostrada como SEQ ID NO: 291. A sequência de aminoácidos completa da Hemolisina A modificada é apresentada como SEQ ID NO: 295.
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 172/274
32/94 [075] Em certas modalidades, os anticorpos que se ligam especificamente a Hemolisina A podem ser preparados utilizando fragmentos das regiões mencionadas anteriormente ou peptídeos que se estendem além das regiões designadas de cerca de 5 a cerca de 20 resíduos de aminoácidos de ambos, ou ambos, o extremidades terminais N ou C das regiões aqui descritas. Em certas modalidades, qualquer combinação das regiões mencionadas anteriormente ou seus fragmentos pode ser utilizada na preparação de anticorpos específicos para Hemolisina A. Em certas modalidades, qualquer uma ou mais das regiões mencionadas anteriormente de Hemolisina A, ou seus fragmentos, podem ser utilizadas para preparar anticorpos monoespecíficos, biespecíficos ou multiespecíficos.
Fragmentos de Ligação ao Antígenos de Anticorpos [076] A menos que especificamente indicado de outro modo, o termo anticorpo, como usado aqui, deve compreender moléculas de anticorpo compreendendo duas cadeias pesadas de imunoglobulina e duas cadeias leves de imunoglobulina (isto é, moléculas de anticorpo completas) assim como seus fragmentos de ligação ao antígeno. Os termos porção de ligação ao antígeno de um anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo e semelhantes, tal como aqui utilizados, incluem qualquer polipeptídeo ou glicoproteína de ocorrência natural, enzimaticamente obtida, sintética ou geneticamente modificada que se ligue especificamente a uma antígeno para formar um complexo. Os termos fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo, ou fragmento de anticorpo, como aqui utilizados, refere-sem a um ou mais fragmentos de um anticorpo que retêm a capacidade de se ligar especificamente à Hemolisina A. Um fragmento de anticorpo pode incluir um fragmento Fab, um fragmento F(ab')2, um fragmento Fv, um fragmento dAb, um fragmento contendo uma CDR ou uma CDR isolada. Os fragmentos de ligação ao antígeno de um anticorpo podem ser derivados,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 173/274
33/94 por exemplo., de moléculas de anticorpo completas utilizando quaisquer técnicas padrão adequadas, tais como digestão proteolítica ou técnicas de engenharia genética recombinante envolvendo a manipulação e expressão de DNA que codifica anticorpo variável e domínios opcionalmente constantes. Tal DNA é conhecido e/ou está prontamente disponível de, por exemplo, fontes comerciais, bibliotecas de DNA (incluindo, por exemplo, bibliotecas de fago-anticorpo) ou pode ser sintetizado. O DNA pode ser sequenciado e manipulado quimicamente ou utilizando técnicas de biologia molecular, por exemplo, para organizar um ou mais domínios variáveis e/ou constantes em uma configuração adequada ou para introduzir códons, criar resíduos de cisteína, modificar, adicionar ou eliminar aminoácidos etc.
[077] Exemplos não limitantes de fragmentos de ligação ao antígeno incluem: (i) fragmentos Fab; (ii) fragmentos F (ab') 2; (iii) fragmentos Fd; (iv) fragmentos Fv; (v) moléculas Fv de cadeia simples (scFv); (vi) fragmentos de dAb; e (vii) unidades de reconhecimento mínimo que consistem nos resíduos de aminoácidos que mimetizam a região hipervariável de um anticorpo (por exemplo, uma região que determina complementaridade isolada (CDR), tal como um peptídeo CDR3) ou um peptídeo FR3-CDR3-FR4 restringido. Outras moléculas manipuladas, como anticorpos específicos de domínio, anticorpos de domínio único, anticorpos com domínio excluído, anticorpos quiméricos, anticorpos enxertados com CDR, diacorpos, triacorpos, tetracorpos, minicorpos, nanocorpos (por exemplo, nanocorpos monovalentes, nanocorpos bivalentes, etc.), imunofarmacêuticos modulares pequenos (SMIPs) e domínios IgNAR variáveis de tubarão, estão também englobados na expressão fragmento de ligação ao antígeno, como usado aqui.
[078] Um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo compreenderá tipicamente pelo menos um domínio variável. O domínio variável pode ser de qualquer tamanho ou composição de aminoácidos e
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 174/274
34/94 compreender geralmente pelo menos uma CDR, que é adjacente ou enquadrada com uma ou mais sequências estruturais. Nos fragmentos de ligação ao antígeno que têm um domínio Vh associado a um domínio Vl, os domínios Vh e Vl podem estar situados um em relação ao outro em qualquer disposição adequada. Por exemplo, a região variável pode ser dimérica e conter dímeros Vh-Vh, Vh-Vl ou Vl-Vl. Alternativamente, o fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo pode conter um domínio Vh or Vl.
[079] Em certas modalidades, um fragmento de ligação a um antígeno de um anticorpo pode conter pelo menos um domínio variável ligado covalentemente a pelo menos um domínio constante. Configurações não limitantes, exemplares dos domínios variáveis e constantes que podem ser encontradas em um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da presente invenção incluem: (i) Vh-Ch1 ; (ii) Vh -Ch2; (iii) Vh-Ch3; (iv) Vh-Ch1-Ch2; (v) Vh-Ch1-Ch2-Ch3; (vi) VH -Ch2-Ch3; (vii) Vh-Cl; (viii) Vl-Ch1 ; (ix) Vl-Ch2; (x) Vl-Ch3; (xi) Vl-Ch1-Ch2; (xii) VL-CH1Ch2-Ch3; (xiii) Vl-Ch2-Ch3; e (xiv) Vl-Cl. Em qualquer configuração de domínios variáveis e constantes, incluindo qualquer das configurações exemplares listadas anteriormente, os domínios variável e constante podem estar diretamente ligados uns aos outros ou podem estar ligados por uma região de dobradiça ou de ligação completa ou parcial. Uma região de dobradiça pode consistir em pelo menos 2 (por exemplo, 5, 10, 15, 20, 40, 60 ou mais) aminoácidos que resultam em uma ligação flexível ou semi-flexível entre domínios variáveis e/ou constantes adjacentes em uma molécula de polipeptídeo. Além disso, um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da presente invenção pode compreender um homodímero ou heterodímero (ou outro multímero) de qualquer das configurações de domínio variável e constante listadas anteriormente em associação não covalente entre si e/ou com um ou mais
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 175/274
35/94 domínios monoméricos Vh ou Vl (por exemplo, por ligação(s) dissulfureto(s)).
[080] Tal como com as moléculas de anticorpo completas, os fragmentos de ligação ao antígeno podem ser monoespecíficos ou multiespecíficos (por exemplo, biespecíficos). Um fragmento multiespecífico de ligação ao antígeno de um anticorpo compreende tipicamente pelo menos dois domínios variáveis diferentes, em que cada domínio variável é capaz de se ligar especificamente a um antígeno separado ou a um epitopo diferente no mesmo antígeno. Qualquer formato de anticorpo multiespecífico, incluindo os formatos de anticorpos biespecíficos exemplares aqui divulgados pode ser adaptado para utilização no contexto de um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da presente invenção utilizando técnicas rotineiras disponíveis na técnica.
[081 ] A presente invenção inclui anticorpos anti-hemolisina A e fragmentos de ligação ao antígeno que tem cadeias de imunoglobulinaque incluem as sequências de aminoácidos aqui indicadas, bem como variantes que tem modificações pós-translacionais celulares e/ou in vitro. Por exemplo, a presente invenção inclui anticorpos e seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a hemolisina A compreendendo sequências de aminoácidos de cadeia pesada e/ou leve aqui estabelecidas (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3), bem como anticorpos e fragmentos em que um ou mais resíduos de aminoácidos são glicosilados, um ou mais resíduos de Asn são desamidados, um ou mais resíduos (por exemplo, Met, Trp e/ou His) são oxidados, o Gin do terminal N é piroglutamato (pyroE) e/ou a Lisina do terminal C está ausente.
[082] A presente invenção inclui métodos recombinantes para produzir anticorpos anti-hemolisina A ou seus fragmentos de ligação ao antígeno da presente invenção ou uma cadeia de imunoglobulina da mesma compreendendo (i) a introdução de um ou mais polinucleotídeos
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 176/274
36/94 codificadores de uma cadeia leve e/ou pesada de imunoglobulina, o dito anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (por exemplo, uma cadeia pesada ou Vh deste ou imunoglobulina compreendendo o HCDR1, HCDR2 e HCDR3 deste e/ou uma cadeia leve ou Vl deste ou imunoglobulina compreendendo o LCDR1, LCDR2 e LCDR3), por exemplo, em que o polinucleitídeo está em um vetor e/ou está operativamente ligado a um promotor; (ii) cultura da célula hospedeira (por exemplo, célula de ovário de hamster chinês (CHO) ou célula Pichiaou célula de Pichia pastoris) sob condição favorável à expressão do(s) polinucleotídeo(s) e, (iii) opcionalmente isolando o anticorpo ou fragmento ou cadeia da célula hospedeira e/ou meio em que a célula hospedeira é cultivada. Ao fazer um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreendendo mais de uma cadeia de imunoglobulina, por exemplo, um anticorpo que compreende duas cadeias pesadas de imunoglobulina e duas cadeias leves de imunoglobulina, a coexpressão das cadeias em uma única célula hospedeira leva à associação das cadeias, por exemplo, na célula ou na superfície celular ou fora da célula se tais cadeias forem segregadas, de modo a formar o anticorpo ou molécula de fragmento de ligação ao antígeno. Os métodos incluem os em que apenas uma cadeia de imunoglobulina pesada ou apenas uma cadeia de imunoglobulina leve (por exemplo, qualquer uma das aqui discutidas incluindo fragmentos maduros e/ou seus domínios variáveis) é expressa. Tais cadeias são úteis, por exemplo, como intermediários na expressão de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que inclui tal cadeia. A presente invenção inclui os produtos de tais métodos de expressão (por exemplo, anticorpos, fragmentos de ligação ao antígeno Vhs ou Vls).
Preparação de Anticorpos Humanos [083] Os métodos para gerar anticorpos humanos em camundongos transgênicos são conhecidos na técnica. Quaisquer desses métodos conhecidos podem ser utilizados no contexto da presente invenção
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 177/274
37/94 para produzir anticorpos humanos que se ligam especificamente à Hemolisina A.
[084] Utilizando a tecnologia VELOCIMMUNE™ (ver, por exemplo, US 6.596.541, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE) ou qualquer outro método conhecido para gerar anticorpos monoclonais, anticorpos quiméricos de alta afinidade para Hemolisina A são inicialmente isolados que tem uma região variável humana e uma região constante de camundongo. A tecnologia VELOCIMMUNE envolve a geração de um camundongo transgênico com um genoma compreendendo regiões variáveis de cadeia pesada e leve humanas operacionalmente ligadas aos locais de região constante de camundongos, de modo a produzir um anticorpo compreendendo uma região variável humana e uma região constante de camundongo em resposta a à estimulação antigênica O DNA que codifica as regiões variáveis das cadeias pesadas e leves do anticorpo é isolado e operacionalmente ligado ao DNA que codifica as regiões constantes da cadeia pesada e leve humanas. O DNA é então expresso em uma célula capaz de expressar o anticorpo totalmente humano.
[085] Geralmente, um camundongo VELOCIMMUNE® é desafiado com o antígeno de interesse e as células linfáticas (como as células B) são recuperadas dos camundongos que expressam anticorpos. As células linfáticas podem ser fundidas com uma linha celular de mieloma para preparar linhas celulares de hibridoma imortal e essas linhas celulares de hibridoma são rastreadas e selecionadas para identificar linhas celulares de hibridoma que produzem anticorpos específicos para o antígeno de interesse. O DNA que codifica as regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve pode ser isolado e ligado a regiões constantes isotípicas desejáveis da cadeia pesada e da cadeia leve. Uma proteína de anticorpo como esta pode ser produzida em uma célula, tal como uma célula CHO. Alternativamente, o DNA que codifica os anticorpos
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 178/274
38/94 quiméricos específicos do antígeno ou os domínios variáveis das cadeias leves e pesadas podem ser isolados diretamente de linfócitos específicos do antígeno.
[086] Inicialmente, anticorpos quiméricos de alta afinidade são isolados tendo uma região variável humana e uma região constante de camundongo. Como na seção experimental a seguir, os anticorpos são caracterizados e selecionados para características desejáveis, incluindo afinidade, seletividade, epitopo, etc. As regiões constantes de camundongo são substituídas por uma região constante humana desejada para gerar o anticorpo totalmente humano da invenção, por exemplo, IgG 1 ou lgG4 tipo selvagem ou modificada. Embora a região constante selecionada possa variar de acordo com o uso específico, as características de ligação de antígeno de alta afinidade e especificidade de alvo residem na região variável.
[087] Em geral, os anticorpos da presente invenção possuem afinidades muito elevadas, tipicamente que tem Kd de cerca de 1012 a cerca de 10-7 M, quando medidos por ligação ao antígeno imobilizado em fase sólida ou em fase de solução. As regiões constantes de camundongo são substituídas por regiões constantes humanas desejadas para gerar os anticorpos totalmente humanos da invenção. Embora a região constante selecionada possa variar de acordo com o uso específico, as características de ligação de antígeno de alta afinidade e especificidade de alvo residem na região variável.
Bioequivalentes [088] Os anticorpos anti-Hemolisina A e fragmentos de anticorpo da presente invenção abrangem proteínas com sequências de aminoácidos que variam das dos anticorpos descritos, mas que retêm a capacidade de se ligar a Hemolisina A. Estes anticorpos variantes e fragmentos de anticorpos compreendem uma ou mais adições, deleções ou
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 179/274
39/94 substituições de aminoácidos quando comparado com a sequência original, mas exibem atividade biológica que é essencialmente equivalente a dos anticorpos descritos. Do mesmo modo, as sequências de DNA que codificam anticorpos da presente invenção abrangem sequências que compreendem uma ou mais adições, deleções ou substituções de nucleotídeos quando comparadas com a sequência divulgada, mas que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo que é essencialmente bioequivalente a um anticorpo ou fragmento de anticorpo da invenção. [089] Duas proteínas de ligação ao antígeno, ou anticorpos, são consideradas bioequivalentes se, por exemplo, forem equivalentes farmacêuticos ou alternativas farmacêuticas cuja taxa e extensão de absorção não mostram uma diferença significativa quando administradas na mesma dose molar sob condições experimentais semelhantes, seja dose única ou doses múltiplas. Alguns anticorpos serão considerados equivalentes ou alternativas farmacêuticas se forem equivalentes na extensão da sua absorção, mas não na sua taxa de absorção e ainda assim puderem ser considerados bioequivalentes porque tais diferenças na taxa de absorção são intencionais e são refletidas na rotulagem, são não é essenciais para a obtenção de concentrações efetivas de fármaco no corpo, por exemplo, no uso crônico e são consideradas clinicamente insignificantes para o fármaco em questão.
[090] Em uma modalidade, duas proteínas de ligação ao antígeno são bioequivalentes se não existirem diferenças clinicamente significativas na sua segurança, pureza e potência.
[091] Em uma modalidade, duas proteínas de ligação ao antígeno são bioequivalentes se um paciente puder ser comutado uma ou mais vezes entre o produto de referência e o produto biológico sem um aumento esperado no risco de efeitos adversos, incluindo uma alteração clinicamente significativa na imunogenicidade ou eficácia diminuída, em comparação com a continuação da terapêutica sem essa mudança.
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 180/274
40/94 [092] Em uma modalidade, duas proteínas de ligação ao antígeno são bioequivalentes se ambas atuarem através de um mecanismo ou mecanismos de ação comuns para a condição ou condições de utilização, na medida em que tais mecanismos são conhecidos.
[093] A bioequivalência pode ser demonstrada pelos métodos in vivo e/ou in vitro. As medidas de bioequivalência incluem, por exemplo, (a) um teste in vivo em seres humanos ou outros mamíferos, em que a concentração do anticorpo ou dos seus metabolites é medida no sangue, plasma, soro ou outro fluido biológico em função do tempo; (b) um teste in vitro que foi correlacionado com e é razoavelmente previsível de dados de biodisponibilidade in vivo em seres humanos; c) Um teste in vivo em seres humanos ou outros mamíferos em que o efeito farmacológico agudo apropriado do anticorpo (ou do seu alvo) é medido em função do tempo; e (d) em um ensaio clínico bem controlado que estabeleça segurança, eficácia ou biodisponibilidade ou bioequivalência de um anticorpo.
[094] Variantes bioequivalentes dos anticorpos da invenção podem ser construídas, por exemplo, fazendo várias substituições de resíduos ou sequências ou eliminando resíduos ou sequências terminais ou internas não necessárias para a atividade biológica. Por exemplo, resíduos de cisteína não essenciais para a atividade biológica podem ser eliminados ou substituídos por outros aminoácidos para prevenir a formação de pontes dissulfureto intramoleculares desnecessárias ou incorretas mediante restauração. Em outros contextos, os anticorpos bioequivalentes podem incluir variantes de anticorpos compreendendo alterações de aminoácidos, que modificam as características de glicosilação dos anticorpos, por exemplo, mutações que eliminam ou removem a glicosilação.
Anticorpos Anti-Hemolisina A Compreendendo Variantes Fc [095] De acordo com certas modalidades da presente invenção,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 181/274
41/94 são providos anticorpos anti-Hemolisina A compreendendo um domínio Fc compreendendo uma ou mais mutações que aumentam ou diminuem a ligação do anticorpo ao receptor FcRn, por exemplo, em pH ácido em comparação com pH neutro. Por exemplo, a presente invenção inclui anticorpos anti-Hemolisina A compreendendo uma mutação na região Ch2 ou a Ch3 do domínio Fc, em que a(s) mutação(ões) aumenta(m) a afinidade do domínio Fc para FcRn em um ambiente ácido (por exemplo, em um endossoma onde o pH varia de cerca de 5,5 a cerca de 6,0). Tais mutações podem resultar em um aumento da meia-vida no soro do anticorpo quando administrado a um animal. Exemplos não limitantes de tais modificações de Fc incluem, por exemplo, uma modificação na posição 250 (por exemplo, E ou Q); 250 e 428 (por exemplo, L ou F); 252 (por exemplo, L/Y/F/W ou T), 254 (por exemplo, S ou T) e 256 (por exemplo, S/R/Q/E/D ou T); ou uma modificação na posição 428 e/ou 433 (por exemplo, H/L/R/S/P/Q ou K) e/ou 434 (por exemplo, A, W, H, F ou Y [N434A, N434W, N434H, N434F ou N434Y]); ou uma modificação na posição 250 e/ou 428; ou uma modificação na posição 307 ou 308 (por exemplo, 308F, V308F) e 434. Em uma modalidade, a modificação compreende uma modificação 428L (por exemplo, M428L) e 434S (por exemplo, N434S); uma modificação de 428L, 2591 (por exemplo, V259I) e 308F (por exemplo, V308F); um 433K (por exemplo, H433K) e uma modificação 434 (por exemplo, 434Y); uma modificação 252, 254 e 256 (por exemplo, 252Y, 254T e 256E); uma modificação 250Q e 428L (por exemplo, T250Q e M428L); e uma modificação 307 e/ou 308 (s) (por exemplo, 308F e/ou 308P). Ainda em outra modalidade, a modificação compreende uma modificação 265A (por exemplo, D265A) e/ou 297A (por exemplo, N297A).
[096] Por exemplo, a presente invenção inclui anticorpos anti-Hemolisina A compreendendo um domínio Fc compreendendo uma ou mais pares ou grupos de mutações selecionadas do grupo que consiste
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 182/274
42/94 de: 250Q e 248L (por exemplo, T250Q e M248L); 252Y, 254T e 256E (por exemplo, M252Y, S254T e T256E); 428L e 434S (por exemplo, M428L e N434S); 2571 e 3111 (por exemplo, P257I e Q311I); 257I e 434H (por exemplo, P257I e N434H); 376V e 434H (por exemplo, D376V e N434H); 307A, 380A e 434A (por exemplo, T307A, E380A e N434A); e 433K e 434F (por exemplo, H433K e N434F). Todas as combinações possíveis das mutações do domínio Fc anteriores e outras mutações dentro dos domínios variáveis do anticorpo aqui divulgados estão contempladas no âmbito da presente invenção.
[097] A presente invenção também inclui anticorpos anti-Hemolisina A compreendendo uma região constante (Ch) da cadeia pesada quimérica, em que a região Ch quimérica compreende segmentos derivados das regiõesCn de mais que um isotipo de imunoglobulina. Por exemplo, os anticorpos da invenção podem compreender uma regição Ch quimérica compreendendo parte ou todo um domínio Ch2 derivado de uma lgG1 humana, lgG2 humana ou molécula de lgG4 humana, combinada com parte ou todo o domínio Ch3 derivado de uma IgG 1 humana, lgG2 humana ou molécula de lgG4 humana. De acordo com certas modalidades, os anticorpos da invenção compreendem uma região Ch quimérica que tem uma região de dobradiça quimérica. Por exemplo, uma dobradiça quimérica pode compreender uma sequência de aminoácidos de dobradiça superior (resíduos de aminoácido das posições 216 a 227 de acordo com a numeração EU) derivada de uma região de dobradiça de IgG 1 humana, lgG2 humana ou lgG4 humana, combinada coma sequência de dobradiça inferior (resíduos de aminoácidos das posições 228 a 236 de acordo com a numeração da UE) derivada de uma região de dobradiça de IgG 1 humana, lgG2 humana ou uma lgG4 humana. De acordo com certas modalidades, a região de dobradiça quimérica compreende resíduos de aminoácidos derivados de uma dobradiça superior de lgG1 humana ou de uma dobradiça superior de lgG4
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 183/274
43/94 humano e resíduos de aminoácido derivados de uma dobradiça inferior de lgG2 humana. Um anticorpo compreendendo uma região Ch quimérica como aqui descrito pode, em certas modalidades, exibir funções efetoras de Fc modificadas sem afetar adversamente as propriedades terapêuticas ou farmacocinéticas do anticorpo. (Veja, por exemplo, Pedido de patente provisório US 61/759.578, depositado em 1 de fevereiro de 2013, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade).
[098] A presente invenção também inclui anticorpos anti-Hemolisina A compreendendo regiões constantes de cadeia pesada modificada (Ch) nas quais uma ou mais substituições (por exemplo, mutações) que interferem com a ligação da Proteína A foram introduzidas. Por exemplo, em algumas modalidades, os anticorpos anti-Hemolisina A da invenção possuem regiões constantes de IgG 1 nas quais His435 foi mutado para Arg. Com esta mutação pontual nas regiõs constantes da cadeia pesada, um anticorpo anti-Hemolisina A da invenção não se ligaria à Proteína A. Em outras modalidades da invenção, os anticorpos antiHemolisina A contêm uma mutação dipeptídica, H435R/Y436F (numeração EU; H95R/Y96F por IMGT) nas regiões constantes da cadeia pesada para anular a ligação da Proteína A. (Ver, por exemplo, Patente US 8.586.713, depositada em 25 de Junho de 2010, cuja divulgação é aqui incorporada por referência na sua totalidade.)
Características Biológicas dos Anticorpos [099] Em geral, os anticorpos da presente invenção podem funcionar por ligação à Hemolisina A. Em algumas modalidades, os anticorpos da presente invenção podem se ligar a outro antígeno (anticorpos de reação cruzada).
[0100] Em certas modalidades, os anticorpos da presente invenção podem se ligar a outras toxinas bacterianas ou subunidades de toxinas, além da Hemolisina A. As toxinas ou subunidades de toxinas adicionais
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 184/274
44/94 de S. aureus às quais os anticorpos da presente invenção podem ligar incluem leucotoxinas de formação de poros bicomponentes (por exemplo, leucocidinas ou hemolisina gama) e/ou subunidades S ou F dessas toxinas (por exemplo, LukF, LukD e/ou HlgB). Em certas modalidades, os anticorpos da presente invenção mostram apenas ligação significativa à Hemolisina A. Em certas modalidades, os anticorpos da presente invenção se ligam apenas de forma detectável à Hemolisina A.
[0101] Em certas modalidades, os anticorpos da presente invenção podem ser anticorpos biespecíficos. Os anticorpos biespecíficos da invenção podem se ligar a um epitopo em um domínio e também podem se ligar a um epitopo em um segundo domínio da Hemolisina A. Em certas modalidades, os anticorpos biespecíficos da invenção podem se ligar a dois epitopos diferentes no mesmo domínio.
[0102] Em uma modalidade, a invenção provê um anticorpo monoclonal totalmente humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à Hemolisina A, em que o anticorpo ou seu fragmento exibe uma ou mais das seguintes características: (i) compreende uma HCVR tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282 ou uma sequência substancialmente semelhante deste que tem pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; (ii) compreende um LCVR que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270 ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; (iii) compreende um domínio HCDR3 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 8, 28, 48, 68, 88, 108, 128, 148, 168, 188, 208, 228, 248, 268, e 288, ou uma sua sequência
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 185/274
45/94 substancialmente semelhante, tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências; e um domínio LCDR3 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 16, 36, 56, 76, 96,116, 136, 156, 176, 196, 216, 236, 256 e 276, ou uma sequência de aminoácidos substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; (iv) compreende um domínio HCDR1 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, 24, 44, 64, 84, 104, 124, 144, 164, 184, 204, 224, 244, 264, e 284 ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma, tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; um domínio HCDR2 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 6, 26, 46, 66, 86, 106, 126, 146, 166, 186, 206, 226, 246, 266 e 286, ou uma sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; um domínio LCDR1 tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 12, 32, 52, 72, 92, 112, 132, 152, 172, 192, 212, 232, 252 e 272, ou substancialmente uma sequência semelhante da mesma com pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; e um domínio LCDR2 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 14, 34, 54, 74, 94, 114, 134, 154, 174, 194, 214, 234, 254 e 274, ou um uma sequência substancialmente semelhante da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência; e (v) se liga à Hemolisina A com um Kd igual ou inferior a 10-7 M.
[0103] Certos anticorpos anti-Hemolisina A da presente invenção
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 186/274
46/94 são capazes de se ligar e neutralizar a atividade da Hemolisina A, conforme determinado por ensaios in vitro ou in vivo . A capacidade dos anticorpos da invenção para se ligare e neutralizar a atividade da Hemolisina A pode ser medida utilizando qualquer modo convencional conhecido pelos versados na técnica, incluindo ensaios de ligação, ou ensaios de atividade, como aqui descrito.
[0104] Ensaios in vitro não limitantes e exemplares para medir a atividade de ligação estão ilustrados no Exemplo 3 e 4, aqui. No Exemplo 6, as afinidades de ligação e constantes cinéticas de anticorpos humanos anti-Hemolisina A foram determinadas por ressonância de plásmon de superfície e as medições foram conduzidas em um instrumento T200 Biacore. O Exemplo 5 descreve a neutralização da Hemolisina A de S. aureus utilizando anticorpos específicos da Hemolisina A.
[0105] A presente invenção também inclui anticorpos anti-Hemolisina A e seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam a pelo menos um fragmento biologicamente ativo de qualquer uma das seguintes proteínas ou peptídeos: SEQ ID NO: 291 (Hemolisina A de tipo selvagem completa) ou SEQ ID NO: 295 (forma modificada de Hemolisina A). Qualquer um dos peptídeos da Hemolisina A aqui descrito, ou seus fragmentos, pode ser utilizado para gerar anticorpos anti-Hemolisina A. [0106] Os peptídeos podem ser modificados para incluir a adição ou substituição de certos resíduos para marcação ou para fins de conjugação com moléculas transportadoras, tais como, KLH. Por exemplo, pode ser adicionada uma cisteína na extremidade N-terminal ou C-terminal de um peptídeo ou pode ser adicionada uma sequência ligante para preparar o peptídeo para conjugação com, por exemplo, KLH para imunização.
[0107] Os anticorpos específicos para Hemolisina A podem não conter marcadores ou frações adicionais ou podem conter um marcador ou fração N-terminal ou C-terminal. Em uma modalidade, o marcador ou
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 187/274
47/94 porção é biotina. Em um ensaio de ligação, a localização de um marcador (se houver) pode determinar a orientação do peptídeo com relação à superfície sobre a qual o peptídeo está ligado. Por exemplo, se uma superfície for revestida com avidina, um peptídeo contendo uma biotina N-terminal será orientado de tal modo que a porção C-terminal do peptídeo seja distai à superfície. Em uma modalidade, o marcador pode ser um radionuclídeo, um corante fluorescente ou um marcador detectável por MRI. Em certas modalidades, tais anticorpos marcados podem ser utilizados em ensaios de diagnóstico, incluindo ensaios de imagem. Mapeamento de Epitopo e Tecnologias Relacionadas [0108] A presente invenção inclui anticorpos anti-Hemolisina A que interagem com um ou mais aminoácidos encontrados dentro de uma ou mais regiões de Hemolisina A. O epitopo ao qual os anticorpos se ligam pode consistir de uma única sequência contígua de 3 ou mais (por exemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais) aminoácidos localizados em qualquer uma das regiões da molécula Hemolisina A mencionadas anteriormente (por exemplo, um epitopo linear em um domínio). Alternativamente, o epitopo pode consistir em uma pluralidade de aminoácidos não contíguos (ou sequências de aminoácidos) localizados dentro de uma ou ambas as regiões mencionadas anteriormente da molécula de Hemolisina A (por exemplo, um epitopo conformacional).
[0109] Podem ser utilizadas várias técnicas conhecidas pelos versados na técnica para determinar se um anticorpo interage com um ou mais aminoácidos dentro de um polipeptídeo ou proteína. Técnicas exemplares incluem, por exemplo, ensaios de bloqueio cruzado de rotina, tais como os descritos em Antibodies, Harlow e Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY). Outros métodos incluem análise mutacional de varrimento de alanina, análise de transferência de peptí
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 188/274
48/94 deos (Reineke (2004) Methods Mol Biol 248: 443-63), análise de divagem de peptídeo, estudos cristalográficos e análise de NMR. Adicionalmente, podem ser empregados métodos, tais como excisão de epitopos, extração de epitopos e modificação química de antígenos (Tomer (2000) Protein Science 9: 487-496). Outro método que pode ser usado para identificar os aminoácidos dentro de um polipeptídeo com o qual um anticorpo interage é a troca de hidrogênio/deutério detectada por espectrometria de massa. Em termos gerais, o método de troca hidrogênio/deutério envolve a rotulagem da proteína de interesse pelo deutério, seguida da ligação do anticorpo à proteína marcada com deutério. Em seguida, o complexo proteína/anticorpo é transferido para água e os prótons trocáveis dentro dos aminoácidos que são protegidos pelo complexo de anticorpos sofrem troca reversa de hidrogênio-para-hidrogênio a uma taxa mais lenta que prótons trocáveis dentro de aminoácidos que não fazem parte da interface. Como resultado, os aminoácidos que fazem parte da interface proteína/anticorpo podem reter deutério e, portanto, exibir uma massa relativamente maior em comparação com os aminoácidos não incluídos na interface. Após dissociação do anticorpo, a proteína alvo é submetida a análise de divagem por protease e espectrometria de massa, revelando assim os peptídeos contendo os resíduos marcados com deutério que contêm aminoácidos específicos com os quais o anticorpo interage. Ver, por exemplo, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267 (2): 252-259; Engen e Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A.
[0110] O termo epitopo refere-se a urn local em um antígeno ao qual as células B e/ou T respondem. Os epitopos de células B podem ser formados tanto a partir de aminoácidos contíguos como de aminoácidos não contíguos justapostos por dobramento terciário de uma proteína. Epitopos formados de aminoácidos contíguos são tipicamente retidos na exposição a solventes de desnaturação, enquanto os epitopos
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 189/274
49/94 formados por dobramento terciário são tipicamente perdidos no tratamento com solventes de desnaturação. Um epitopo tipicamente inclui pelo menos 3, e mais geralmente, pelo menos 5 ou 8 a 10 aminoácidos em uma conformação espacial única.
[0111] A Caracterização Assistida por Modificação (MAP), também conhecida como Caracterização de Anticorpo com base na Estrutura do Antígeno (ASAP) é um método que categoriza um grande número de anticorpos monoclonais (mAbs) dirigidos contra o mesmo antígeno de acordo com as semelhanças do perfil de ligação de cada anticorpo superfícies de antígeno modificadas química ou enzimaticamente (ver US 2004/0101920, aqui incorporadas especificamente por referência na sua totalidade). Cada categoria pode refletir um único epitopo distintamente diferente ou parcialmente sobreposto ao epitopo representado por outra categoria. Essa tecnologia permite a filtragem rápida de anticorpos geneticamente idênticos, de modo que a caracterização pode ser focada em anticorpos geneticamente distintos. Quando aplicada ao rastreio de hibridoma, a MAP pode facilitar a identificação de raros clones de hibridoma que produzem mAbs com as características desejadas. MAP pode ser utilizada para classificar os anticorpos da invenção em grupos de anticorpos que se ligam a diferentes epitopos.
[0112] Em certas modalidades, os anticorpos anti-Hemolisina A ou os seus fragmentos de ligação ao antígeno se ligam a um epitopo em qualquer uma ou mais das regiões exemplares na Hemolisina A de tipo selvagem, como exemplificado na SEQ ID NO: 291, ou Hemolisina A modificada, como exemplificado na SEQ ID NO: 295 ou em um seu fragmento.
[0113] A presente invenção inclui anticorpos humanos anti-Hemolisina A que se ligam ao mesmo epitopo, ou uma poro do epitopo, como qualquer um dos anticorpos exemplares aqui descritos ou um anticorpo com as sequências CDR de qualquer um dos anticorpos exemplares
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 190/274
50/94 aqui descritos. Do mesmo modo, a presente invenção também inclui anticorpos anti-Hemolisina A que competem pela ligação à Hemolisina A ou a um fragmento Hemolisina A com qualquer um dos anticorpos exemplares específicos aqui descritos ou um anticorpo que tem as sequências CDR de qualquer um dos anticorpos exemplares aqui descritos.
[0114] Pode-se determinar facilmente se um anticorpo se liga ao mesmo epitopo ou compete pela ligação com um anticorpo anti-Hemolisina A de referência, utilizando métodos de rotina conhecidos na técnica. Por exemplo, para determinar se um anticorpo de teste se liga ao mesmo epitopo que um anticorpo de referência anti-Hemolisina A da invenção, é permitido que o anticorpo de referência se ligue a uma proteína ou peptídeo da Hemolisina A sob condições de saturação. Em seguida, avalia-se a capacidade de um anticorpo de teste de se ligar à molécula de Hemolisina A. Se o anticorpo de teste for capaz de se ligar a Hemolisina A após a ligação por saturação com o anticorpo anti-Hemolisina A de referência, pode-se concluir que o anticorpo de teste se liga a um epitopo diferente do anticorpo de referência anti-hemolisina A. Por outro lado, se o anticorpo de teste não for capaz de se ligar à proteína Hemolisina A após a ligação de saturação com o anticorpo antiHemolisina A de referência, então o anticorpo de teste pode se ligar ao mesmo epitopo que o epitopo ligado pelo anticorpo anti-Hemolisina A da invenção.
[0115] Para determinar se um anticorpo compete pela ligação com um anticorpo anti-Hemolisina A de referência, a metodologia de ligação anteriormente descrita é realizada em duas orientações: em uma primeira orientação, é permitido que o anticorpo de referência se ligue a uma proteína Hemolisina A sob condições de saturação seguidas por avaliação da ligação do anticorpo de teste à molécula de Hemolisina A. Em uma segunda orientação, é permitido que o anticorpo de teste se
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 191/274
51/94 ligue a uma molécula de Hemolisina A sob condições de saturação, seguido de avaliação da ligação do anticorpo de referência à molécula de Hemolisina A. Se, em ambas as orientações, apenas o primeiro anticorpo (saturante) for capaz de se ligar à molécula de Hemolisina A, então conclui-se que o anticorpo de teste e o anticorpo de referência competem pela ligação à Hemolisina A. Como será percebido por uma versado na técnica, um anticorpo que compete pela ligação com um anticorpo de referência pode não se ligar necessariamente ao epitopo idêntico do anticorpo de referência, mas pode bloquear estereoquimicamente a ligação do anticorpo de referência ligando um epitopo de sobreposição ou adjacente.
[0116] Dois anticorpos se ligam ao mesmo epitopo ou se sobrepõe se cada um deles inibir competitivamente (bloquear) a ligação do outro ao antígeno. Ou seja, um excesso de 1,5, 10, 20 ou 100 vezes de um anticorpo inibe a ligação do outro em pelo menos 50%, mas preferivelmente 75%, 90% ou mesmo 99%, conforme medido em um ensaio de ligação competitiva (ver, por exemplo, Junghans et al., Cancer Res. 1990 50: 1495-1502). Alternativamente, dois anticorpos têm o mesmo epitopo se essencialmente todas as mutações de aminoácidos no antígeno que reduzem ou eliminam a ligação de um anticorpo reduzirem ou eliminarem a ligação do outro. Dois anticorpos possuem epitopos sobrepostos se algumas mutações de aminoácidos que reduzem ou eliminam a ligação de um anticorpo reduzirem ou eliminarem a ligação do outro.
[0117] A experimentação de rotina adicional (por exemplo, mutação de peptídeo e análises de ligação) pode ser realizada para confirmar se a ausência observada de ligação do anticorpo de teste é, de fato, devido à ligação ao mesmo epitopo que o anticorpo de referência ou se bloqueio estérico (ou outro fenômeno) é responsável pela falta de vinculação observada. Experiências deste tipo podem ser realizadas utilizando ELISA, RIA, ressonância de plásmon de superfície, citometria de fluxo
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 192/274
52/94 ou qualquer outro ensaio quantitativo ou qualitativo de ligação de anticorpos disponível na técnica.
Imunoconjugados [0118] A invenção abrange um anticorpo monoclonal humano antiHemolisina A conjugado a uma porção terapêutica (“imunoconjugado”), tal como um agente que é capaz de reduzir a gravidade da infecção por Staphylococcus aureus ou melhorar pelo menos um sintoma associado à infecção por S. aureus ou a gravidade da mesma. Como aqui utilizado, o termo imunoconjugado refere-se a um anticorpo que está química ou biologicamente ligado a um agente radioativo, uma citocina, um interferon, uma porção alvo ou reportadora, uma enzima, uma toxina ou um agente terapêutico. O anticorpo pode ser ligado ao agente radioativo, citocina, interferon, porção alvo ou reportadora, enzima, toxina ou agente terapêutico em qualquer localização ao longo da molécula, desde que seja capaz de se ligar ao seu alvo. Um exemplo de imunoconjugado é um conjugado de anticorpo e fármaco. Em algumas modalidades, o agente pode ser um segundo anticorpo diferente para Hemolisina A ou para uma citocina, tal como IL-1, IL-6 ou uma quimiocina, tal como TGF-β. O tipo de porção terapêutica que pode ser conjugada com o anticorpo anti-Hemolisina A levará em consideração a condição a ser tratada e o efeito terapêutico desejado a ser alcançado. Exemplos de agentes adequados para formar imunoconjugados são conhecidos na técnica; veja, por exemplo, o documento WO 05/103081. A preparação de imunoconjugados e imunotoxinas é geralmente bem conhecida na técnica (ver, por exemplo, Pat. No. 4340535). Os imunoconjugados são descritos em detalhes, por exemplo, nos documentos US 7250492, US 7420040 e US 7411046, cada um dos quais é aqui incorporado na sua totalidade.
Anticorpos Multiespecíficos
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 193/274
53/94 [0119] Os anticorpos da presente invenção podem ser monoespecíficos, biespecíficos ou multiespecíficos. Anticorpos multiespecíficos podem ser específicos para diferentes epitopos de um polipeptídeo alvo ou podem conter domínios de ligação ao antígeno específicos de mais de um polipeptídeo alvo. Ver, por exemplo, ΎΜ et al., 1991, J. Immunol. 147: 60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22: 238-244.Os anticorpos da presente invenção podem ser ligados ou co-expressos com outra molécula funcional, por exemplo, outro peptídeo ou proteína. Por exemplo, um anticorpo ou seu fragmento pode ser funcionalmente ligado (por exemplo, por acoplamento químico, fusão genética, associação não covalente ou outra) a uma ou mais outras entidades moleculares, como outro anticorpo ou fragmento de anticorpo para produzir um anticorpo biespecífico ou um multiespecífico com uma segunda especificidade de ligação. Por exemplo, a presente invenção inclui anticorpos biespecíficos em que um braço de uma imunoglobulina específica para a região N-terminal de Hemolisina A, ou um seu fragmento, e o outro braço da imunoglobulina específico para a região C-terminal de Hemolisina A, ou um segundo alvo terapêutico, ou conjugado com uma porção terapêutica. Um formato de anticorpo biespecífico exemplar que pode ser utilizado no contexto da presente invenção envolve a utilização de um primeiro domínio de Chs de imunoglobulina (Ig) e um segundo domínio Ch3 de Ig, em que o primeiro e segundo domínios Chs de Ig diferem um do outro por pelo menos um aminoácido e em que pelo menos uma diferença de aminoácido reduz a ligação do anticorpo biespecífico à Proteína A em comparação com um anticorpo biespecífico sem a diferença de aminoácido. Em uma modalidade, o primeiro domínio Chs de Ig se liga à Proteína A e o segundo domínio Chs de Ig contém uma mutação que reduz ou elimina a ligação da Proteína A, tal como uma modificação de H95R (pela numeração de éxon IMGT; H435R por numeração EU). O segundo Chs pode ainda compreender uma modificação Y96F (por
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 194/274
54/94
IMGT; Y436F por EU). Modificações adicionais que podem ser encontradas no segundo Chs incluem: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M e V82I (por IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M e V422I por EU) no caso de mAbs de lgG1; N44S, K52N e V82I (IMGT; N384S, K392N e V422I por EU) no caso de mAbs de lgG2; e Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q e V82I (por IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q e V422I por EU) no caso de mAbs lgG4. Variações no formato de anticorpo biespecífico descritas anteriormente são contempladas dentro do âmbito da presente invenção.
[0120] Outros formatos biespecíficos exemplares que podem ser utilizados no contexto da presente invenção incluem, sem limitação, por exemplo, formatos biespecíficos baseados em scFv ou em diacorpos, fusões de IgG-scFv, (DVD)-lg de domínio variável duplo, Quadroma, manípulos nos orifícios, cadeia leve comum (por exemplo, cadeia leve comum com protuberâncias-em-buracos, etc.), corpo CrossMab, CrossFab (SEED), zíper de leucina, Duobody, IgG 1 /lgG2, Fab de ação dupla (DAF) -IgG e Mab2 formatos biespecíficos (ver, por exemplo, Klein et at. 2012, mAbs 4: 6, 1-11 e referências citadas nele, para uma revisão dos formatos anteriores). Anticorpos biespecíficos também podem ser construídos utilizando conjugação peptídeo/ácido nucleico, por exemplo, em que aminoácidos não naturais com reatividade química ortogonal são utilizados para gerar conjugados anticorpo-oligonucleotídeo específico do local que depois se automontam em complexos multiméricos com composição, valência e geometria definidas. (Ver, por exemplo, Kazane et al., J. Am. Chem. Soc. [Epub\ 4 de dezembro de 2012\).
Administração Terapêutica e Formulações [0121] A invenção provê composições terapêuticas compreendendo os anticorpos anti-Hemolisina A ou seus fragmentos de ligação ao antígeno, como aqui discutido. As composições terapêuticas de
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 195/274
55/94 acordo com a invenção podem ser administradas com veículos, excipientes e outros agentes adequados que são incorporados em formulações para prover transferência, distribuição, tolerância e semelhantes melhorados. Inúmeras formulações apropriadas podem ser encontradas no formulário conhecido por todos os químicos farmacêuticos: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Estas formulações incluem, por exemplo, pós, pastas, unguentos, geleias, ceras, óleos, lipídeos, vesículas contendo lipídeos (catiônicos ou aniônicos) (tal como LIPOFECTIN™), conjugados de DNA, pastas de absorção anidras, emulsões óleo-em-água e água-em-óleo, emulsões de carbowax (polietilenoglicóis de vários pesos moleculares), géis semissólidos e misturas semissólidas contendo carbowax. Ver também Powell et al. Compendium of excipients for parenteral formulations PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52: 238-311.
[0122] A dose de anticorpo pode variar dependendo da idade e do tamanho de um indivíduo a ser administrado, doença alvo, condições, via de administração e semelhantes. Quando o anticorpo da presente invenção utilizado para prevenir ou tratar dermonecroses, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abcessos), infecções no local cirúrgico, infecções de articulações prostéticas, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, toxicidade síndrome de choque, mastite ou furunculose e carbunculose (furos) em um paciente adulto ou para prevenir ou tratar uma infecção por S. aureus é vantajoso administrar intravenosamente o anticorpo da presente invenção normalmente a uma única dose de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal, mais preferivelmente cerca de 5 a cerca de 100, cerca de 10 a cerca de 90, ou cerca de 20 a cerca de 70 mg/kg de peso corporal. Dependendo da gravidade da condição, a frequência e a duração do tratamento podem ser ajustadas. Em certas modalida
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 196/274
56/94 des, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção pode ser administrado como uma dose inicial de pelo menos cerca de 0,1 mg a cerca de 800 mg, cerca de 1 a cerca de 500 mg, cerca de 5 a cerca de 300 mg, ou cerca de 10 a cerca de 200 mg, a cerca de 100 mg ou a cerca de 50 mg. Em certas modalidades, a dose inicial pode ser seguida por administração de uma segunda ou uma pluralidade de doses subsequentes do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em uma quantidade que pode ser aproximadamente a mesma ou menor que a dose inicial, em que as doses subsequentes são separadas por pelo menos 1 dia a 3 dias; pelo menos uma semana, pelo menos 2 semanas; pelo menos 3 semanas; pelo menos 4 semanas; pelo menos 5 semanas; pelo menos 6 semanas; pelo menos 7 semanas; pelo menos 8 semanas; pelo menos 9 semanas; pelo menos 10 semanas; pelo menos 12 semanas; ou pelo menos 14 semanas. [0123] São conhecidos vários sistemas de administração e podem ser utilizados para administrar a composição farmacêutica da invenção, por exemplo, encapsulação em lipossomas, micropartículas, microcápsulas, células recombinantes capazes de expressar os vírus mutantes, endocitose mediada por receptores (ver, por exemplo, Wu et al. 3, J. Biol. (1987) J. Biol. Chem. 262: 4429-4432). Os métodos de introdução incluem, mas não se limitam a, vias transdérmica, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, intranasal, epidural e oral. A composição também podem ser administrada por qualquer via conveniente, por exemplo, por infusão ou injeção de bolus, por absorção através de revestimentos epiteliais ou mucocutâneos (por exemplo, mucosa oral, mucosa retal e intestinal, etc.), e podem ser administrados em conjunto com outros agentes biologicamente ativos. A administração pode ser sistêmica ou local. A composição farmacêutica também pode ser administrada em uma vesícula, em particular em um lipossoma (ver, por exemplo, Langer (1990) Science 249: 1527-1533).
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 197/274
57/94 [0124] A utilização de nanopartículas para distribuir os anticorpos da presente invenção também é contemplada aqui. As nanopartículas conjugadas com anticorpos podem ser usadas para aplicações terapêuticas e de diagnóstico. As nanopartículas conjugadas com os anticorpos e os métodos de preparação e utilização são descritos em detalhes por Arruebo, M., et al. 2009 (“Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications” in J. Nanomat. Volume 2009, artigo ID 439389, 24 páginas, doi: 10.1155/2009/439389), aqui incorporado por referência. As nanopartículas para administração de fármaco também foram descritas, por exemplo, nos documentos US 8277812, US 8258256, US 8257740, US 8246995, US 8236330, cada um aqui incorporado na sua totalidade.
[0125] Em certas situações, a composição farmacêutica pode ser distribuída em um sistema de liberação controlada. Em uma modalidade, uma bomba pode ser usada. Em outra modalidade, materiais poliméricos podem ser usados. Ainda em outra modalidade, um sistema de liberação controlada pode ser colocado na proximidade do alvo da composição, necessitando assim apenas uma fração da dose sistêmica. [0126] As preparações injetáveis podem incluir formas de dosagem para injeções intravenosas, subcutâneas, intracutâneas e intramusculares, infusões por gotejamento, etc. Estas preparações injetáveis podem ser preparadas por métodos conhecidos publicamente. Por exemplo, as preparações injetáveis podem ser preparadas, por exemplo, dissolvendo, suspendendo ou emulsionando o anticorpo ou o seu sal descrito anteriormente em um meio aquoso esterilizado ou em um meio oleoso convencionalmente utilizado para injeções. Como o meio aquoso para injeções, existem, por exemplo, soro fisiológico, uma solução isotônica contendo glicose e outros agentes auxiliares, etc., que podem ser utilizados em combinação com um agente de solubilização apropriado, tal
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 198/274
58/94 como um álcool (por exemplo, etanol), um poliálcool (por exemplo, propilenoglicol, polietilenoglicol), um tensoativo não iônico [por exemplo, polissorbato 80, HCO-50 (polioxietileno (50 mol) aduto de óleo de rícino hidrogenado]], etc. Como o meio oleoso, são empregados, por exemplo, óleo de gergelim, óleo de soja, etc., que podem ser utilizados em combinação com um agente solubilizante, tais como benzoato de benzila, álcool benzílico, etc. A injeção assim preparada é preferivelmente preenchida em uma ampola apropriada.
[0127] Uma composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada subcutânea ou intravenosamente com uma agulha e seringa convencionais. Além disso, no que diz respeito à entrega subcutânea, um dispositivo de administração de caneta tem prontamente aplicações na entrega de uma composição farmacêutica da presente invenção. Tal dispositivo de entrega de caneta pode ser reutilizável ou descartável. Um dispositivo de entrega de caneta reutilizável geralmente utiliza um cartucho substituível que contém uma composição farmacêutica. Uma vez que toda a composição farmacêutica dentro do cartucho foi administrada e o cartucho está vazio, o cartucho vazio pode ser prontamente descartado e substituído por um novo cartucho que contém a composição farmacêutica. O dispositivo de entrega de caneta pode então ser reutilizado. Em um dispositivo de entrega de caneta descartável, não há cartucho substituível. Pelo contrário, o dispositivo de entrega de caneta descartável vem pré-carregado com a composição farmacêutica mantida em um reservatório dentro do dispositivo. Uma vez que o reservatório é esvaziado da composição farmacêutica, todo o dispositivo é descartado.
[0128] Inúmeros dispositivos de distribuição de caneta e autoinjetor reutilizáveis têm aplicações na distribuição subcutânea de uma composição farmacêutica da presente invenção. Exemplos incluem, mas cer
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 199/274
59/94 tamente não estão limitados a, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, Reino Unido), caneta DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Suíça), caneta HUMALOG MIX 75/25™, caneta HUMALOG™, caneta HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly e Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II e III (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Dinamarca), caneta BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ e OPTICLIK™ (Sanofi-aventis, Frankfurt, Alemanha), para citar apenas alguns. Exemplos de dispositivos de distribuição de caneta descartáveis com aplicações na distribuição subcutânea de uma composição farmacêutica da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, caneta SOLOSTAR™ (Sanofi-aventis), a FLEXPEN™ (Novo Nordisk) e a KWIKPEN™ (Eli Lilly), o Autoinjetor SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), o PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Alemanha), o EPIPEN (Dey, LP) e o HUMIRA™ Pen (Abbott Labs, Abbott Park IL), para citar apenas alguns.
[0129] Vantajosamente, as composições farmacêuticas para utilização oral ou parenteral descritas anteriormente são preparadas em formas de dosagem em uma dose unitária adequada para se ajustar a uma dose dos ingredientes ativos. Tais formas de dosagem em uma dose unitária incluem, por exemplo, comprimidos, pílulas, cápsulas, injeções (ampolas), supositórios, etc. A quantidade dos anticorpos mencionados anteriormente é geralmente de cerca de 5 a cerca de 500 mg por forma de dosagem em uma dose unitária; especialmente na forma de injeção, é preferido que o anticorpo supramencionado esteja contidos em cerca de 5 a cerca de 100 mg e em cerca de 10 a cerca de 250 mg para as outras formas de dosagem. A presente invenção inclui um dispositivo de injeção (por exemplo, uma seringa pré-cheia ou autoinjetor précheio) ou um frasco (por exemplo, um frasco de vidro ou plástico) com
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 200/274
60/94 preendendo um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da presente invenção ou composição farmacêutica dos mesmos, inclui um veículo farmaceuticamente aceitável.
Usos Terapêuticos dos Anticorpos [0130] Em certas modalidades da invenção, os presentes anticorpos são úteis para tratar uma infecção por Staphylococcus aureus, ou pelo menos um sintoma associado à infecção por S. aureus. Em algumas modalidades, os anticorpos podem ser úteis para tratar uma condição ou sintoma de dermonecrose, infecções da pele e dos tecidos moles (incluindo abcessos), infecções do local cirúrgico, infecções da articulação protética, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite ou furunculose e carbunculose (furúnculos). Os anticorpos da invenção também são contemplados para uso profilático em pacientes com risco de desenvolver uma infecção por S. aureus. Esses pacientes incluem os idosos ou pacientes imunocomprometidos devido a doença ou tratamento com terapêutica imunossupressora ou pacientes que estão em maior risco de infecção nosocomial, como pacientes pós-operatórios. Em várias modalidades dos usos terapêuticos discutidos anteriormente, as bactérias S. aureus podem ser resistentes a um ou mais tipos de tratamentos antibióticos. Em uma modalidade, as bactérias são S. aureus resistentes à meticilina (MRSA). Está contemplado que os anticorpos da invenção podem ser utilizados sozinhos ou em conjunto com um segundo agente ou terceiro agente para o tratamento da infecção por S. aureus ou para aliviar pelo menos um sintoma ou complicação associada à infecção por S. aureus. O segundo ou terceiro agente pode ser administrado concorrentemente com os anticorpos da invenção ou pode ser administrado separadamente, antes ou depois dos anticorpos da invenção. Um paciente que pode receber um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção ou uma composição farmacêutica do
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 201/274
61/94 mesmo inclui, por exemplo, um animal, tal como um mamífero, tal como um humano (por exemplo, um ser humano idoso, por exemplo, 65 anos de idade ou mais velho), coelho, rato, rato, vaca, porco, cão, primata, cavalo ou ovelha.
[0131] Em certas modalidades, os presentes anticorpos são úteis para reduzir o número de bactérias Staphylococcus aureus em um indivíduo ou em um tecido ou órgão particular do indivíduo. Em algumas modalidades, as bactérias S. aureus podem ser resistentes a um ou mais tipos de tratamentos antibióticos. Em uma modalidade, as bactérias são S. aureus resistentes à meticilina (MRSA). Em certas modalidades, os presentes anticorpos são úteis para reduzir as atividades tóxicas da Hemolisina A produzida pela bactéria Staphylococcus aureus em um indivíduo, reduzindo os sintomas produzidos pela infecção e permitindo que outros agentes farmacêuticos e/ou o sistema imunológico do paciente controlem a infecção.
[0132] Em uma outra modalidade da invenção, os presentes anticorpos são utilizados para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de pacientes que sofrem de Staphylococcus aureus, ou um sintoma associado a infecção por S. aureus.
Terapias de Combinação [0133] As terapias de combinação podem incluir um anticorpo antiHemolisina A da invenção e qualquer agente(s) terapêutico(s) adicionavais) que pode(m) ser, de um modo vantajoso, combinado(s) com um anticorpo da invenção ou com um fragmento biologicamente ativo de um anticorpo da invenção.
[0134] Os anticorpos podem ser utilizados em conjunto com outras terapias, tais como antibióticos NSAID, anticorpo LTM14, anticorpo LC10, corticosteroide ou prednisona.
[0135] O(s) componente(s) terapeuticamente ativo(s) adicional(ais) pode(m) ser administrado(s) antes, durante ou após a administração do
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 202/274
62/94 anticorpo anti-Hemolisina A da presente invenção. Para fins da presente divulgação, tais regimes de administração são considerados a administração de um anticorpo anti-Hemolisina A “em combinação com” um ou mais componentes adicionais terapeuticamente ativos.
Usos Diagnósticos dos Anticorpos [0136] Os anticorpos anti-Hemolisina A da presente invenção também podem ser utilizados para detectar e/ou medir Hemolisina A em uma amostra, por exemplo, para fins de diagnóstico. Está previsto que qualquer um ou mais dos anticorpos da invenção podem ser utilizados para detectar a presença e gravidade da infecção por Staphylococcus aureus. Ensaios de diagnóstico exemplares para Hemolisina A podem compreender, por exemplo, o contato de uma amostra, obtida de um paciente, com um anticorpo anti-Hemolisina A da invenção, em que o anticorpo anti-Hemolisina A é marcado com um marcador detectável ou molécula reportadora ou usado como um ligante de captura para isolar seletivamente Hemolisina A de amostras de pacientes. Alternativamente, um anticorpo anti-Hemolisina A não marcado pode ser utilizado em aplicações de diagnóstico em combinação com um anticorpo secundário que é ele próprio marcado de forma detectável. O marcador detectável ou molécula reportadora pode ser um radioisótopo, tal como 3H, 14C, 32P, 35S, ou 125l; uma unidade fluorescente ou quimioluminescente, tal como isotiocianato de fluoresceína ou rodamina; ou uma enzima, tal como fosfatase alcalina, β-galactosidase, peroxidase de rábano ou luciferase. Ensaios exemplares específicos que podem ser utilizados para detectar ou medir Hemolisina A em uma amostra incluem ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA), radioimunoensaio (RIA) e separação celular ativada por fluorescência (FACS).
[0137] As amostras que podem ser utilizadas nos ensaios de diagnóstico da Hemolisina A de acordo com a presente invenção incluem
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 203/274
63/94 qualquer amostra de tecido ou fluido que possa ser obtida de um paciente, que contenha quantidades detectáveis de Hemolisina A, ou seus fragmentos, sob condições normais ou patológicas. Geralmente, os níveis de Hemolisina A em uma amostra particular obtida de um paciente saudável (por exemplo, um paciente não afligido por infecção por Staphylococcus aureus) serão medidos para estabelecer inicialmente um nível basal ou padrão de Hemolisina A. Esse nível basal de Hemolisina A pode então ser comparado com os níveis de Hemolisina A medidos em amostras obtidas de indivíduos suspeitos de terem uma condição relacionada à infecção por S. aureus ou sintomas associados a essa condição.
[0138] Os anticorpos específicos para Hemolisina A podem não conter marcadores ou frações adicionais ou podem conter um marcador ou fração N-terminal ou C-terminal. Em uma modalidade, o marcador ou porção é biotina. Em um ensaio de ligação, a localização de um marcador (se houver) pode determinar a orientação do peptídeo com relação à superfície sobre a qual o peptídeo está ligado. Por exemplo, se uma superfície for revestida com avidina, um peptídeo contendo uma biotina N-terminal será orientado de tal modo que a porção C-terminal do peptídeo seja distai à superfície. Em algumas modalidades, o marcador pode ser marcador detectável, tal como um radionuclídeo, um corante fluorescente ou uma etiqueta detectável por MRI. Os marcadores detectáveis podem estar ligados aos anticorpos, em que tais anticorpos podem ser utilizados em ensaios de imagem.
EXEMPLOS [0139] Os seguintes exemplos são apresentados de modo a prover aos versados na técnica uma divulgação e descrição completas de como preparar e utilizar os métodos e composições da invenção e não se destinam a limitar o âmbito do que os inventores consideram como
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 204/274
64/94 sua invenção. A menos que indicado de outra forma, as partes são partes em peso, peso molecular é o peso molecular médio, temperatura é em graus centígrados e pressão é atmosférica ou próxima à atmosférica.
Exemplo 1. Geração de Anticorpos Humanos para Hemolisina A [0140] Utilizaram-se dois imunógenos para imunizar camundongos: Hemolisina A (Hla) do tipo selvagem de comprimento total sem a sequência de sinal (aminoácidos 27-391) e Hemolisina A não tóxica de comprimento total (Hla-H35L); ambas foram proteínas recombinantes marcadas com His expressas em E. colie purificadas.
[0141] Em certas modalidades, os anticorpos que se ligam especificamente a Hemolisina A podem ser preparados utilizando fragmentos das regiões mencionadas anteriormente ou peptídeos que se estendem além das regiões designadas de cerca de 5 a cerca de 20 resíduos de aminoácidos de ambos, ou ambos, as extremidades terminais N ou C das regiões aqui descritas. Em certas modalidades, qualquer combinação das regiões mencionadas anteriormente ou seus fragmentos pode ser utilizada na preparação de anticorpos específicos para Hemolisina A. Em certas modalidades, qualquer um ou mais dos domínios mencionados anteriormente de Hemolisina A, ou seus fragmentos, podem ser utilizados para preparar anticorpos monoespecíficos, biespecíficos ou multiespecíficos. H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P e H1H15418P2 foram produzidos por imunizao com a Hemolisina A n tica; e H1H15381P, H1H15399P, H1H15404P, H1H15405P, H1H15408P, H1H15410P, H1H15414P e H1H15420P2 foram produzidos por imunização com Hemolisina A de tipo selvagem.
[0142] As proteínas completas, ou seus fragmentos, que foram utilizadas como imunógenos, como notado anteriormente, foram administradas diretamente, com um adjuvante para estimular a resposta imune,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 205/274
65/94 a um camundongo VELOCIMMUNE® compreendendo DNA que codifica a região variável de cadeia pesada e capa leve de imunoglobulina humana. A resposta imune do anticorpo foi monitorada por um imunoensaio específico para Hemolisina A. Quando se conseguiu obter uma resposta imune desejada, os anticorpos anti-Hemolisina A foram isolados diretamente a partir de células B positivas para o antígeno sem fusão com células de mieloma, como descrito na US 2007/0280945A1, aqui incorporadas por referência na sua totalidade. Utilizando este método, foram obtidos vários anticorpos anti-Hemolisina A totalmente humanos (isto é, anticorpos que tem domínios variáveis humanos e domínios constantes humanos); anticorpos exemplares gerados deste modo fo ram designados como se segue: H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15404P, H1H15405P, H1H15408P, H1H15410P, H1H15414P, H1H15418P2 e H1H15420P2.
[0143] As propriedades biológicas dos anticorpos exemplares gerados de acordo com os métodos deste Exemplo são descritas em detalhes nos Exemplos apresentados a seguir.
Exemplo 2. Sequências de Aminoácidos de Região Variável de Cadeia Pesada e Leve [0144] A Tabela 1 apresenta os pares de sequências de aminoácidos da região variável da cadeia pesada e leve de anticorpos selecionados específicos para Hemolisina A e os seus identificadores de anticorpos correspondentes. Anticorpos são tipicamente referidos aqui de acordo com a seguinte nomenclatura: Prefixo Fc (por exemplo, Ή4Η”, Ή1Μ,“ H2M ”), seguido por um identificador numérico (por exemplo, “5375”como mostrado na Tabela 1), seguido por um“ Sufixo P ou N. Assim, de acordo com esta nomenclatura, um anticorpo pode ser referido como, por exemplo, H1H5375. Os prefixos H4H, H1M e H2M nas designações de anticorpos aqui utilizados indicam a região Fc particular
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 206/274
66/94 do anticorpo. Por exemplo, um anticorpo Ή2Μ” possui um Fc de lgG2 camundongo, enquanto um anticorpo Ή4Η” possui um Fc de lgG4 humana. Como será percebido por um versado na técnica, um anticorpo H1M ou H2M pode ser convertido em um anticorpo H4H, e vice-versa, mas em qualquer caso, os domínios variáveis (incluindo as CDRs), que são indicados pelo identificadores numéricos mostrados na Tabela 1, permanecerão os mesmos. Anticorpos com a mesma designação de anticorpos numéricos, mas que diferem pelo sufixo de letra N, B ou P, refere-sem a anticorpos com cadeias pesadas e leves com sequências CDR idênticas, mas com variações de sequência em regiões fora das sequências CDR (isto é, na regiões de quadro). Assim, as variantes N, B e P de um anticorpo particular têm sequências CDR idênticas nas suas regiões variáveis da cadeia pesada e leve, mas diferem uma da outra dentro das suas regiões estruturais.
Tabela 1
| SEQ ID NOs: | ||||||||
| Designação de anticorpo | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
| H1H15375P | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | 16 |
| H1H15376P | 22 | 24 | 26 | 28 | 30 | 32 | 34 | 36 |
| H1H15377P | 42 | 44 | 46 | 48 | 50 | 52 | 54 | 56 |
| H1H15378P | 62 | 64 | 66 | 68 | 70 | 72 | 74 | 76 |
| H1H15379P | 82 | 84 | 86 | 88 | 90 | 92 | 94 | 96 |
| H1H15380P | 102 | 104 | 106 | 108 | 110 | 112 | 114 | 116 |
| H1H15381P | 122 | 124 | 126 | 128 | 130 | 132 | 134 | 136 |
| H1H15399P | 142 | 144 | 146 | 148 | 150 | 152 | 154 | 156 |
| H1H15404P | 162 | 164 | 166 | 168 | 170 | 172 | 174 | 176 |
| H1H15405P | 182 | 184 | 186 | 188 | 190 | 192 | 194 | 196 |
| H1H15408P | 202 | 204 | 206 | 208 | 210 | 212 | 214 | 216 |
| H1H15410P | 222 | 224 | 226 | 228 | 230 | 232 | 234 | 236 |
| H1H15414P | 242 | 244 | 246 | 248 | 250 | 252 | 254 | 256 |
| H1H15418P2 | 262 | 264 | 266 | 268 | 270 | 272 | 274 | 276 |
| H1H15420P2 | 282 | 284 | 286 | 288 | 270 | 272 | 274 | 276 |
Exemplo 3. Ligação de anticorpos monoclonais humanos à Toxina da Hemolisina A de S. aureus [0145] De modo a determinar se os anticorpos da invenção foram
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 207/274
67/94 capazes de se ligar ao monômero de Hemolisina A, os anticorpos purificados (H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15404P, H1H15405P, H1H15408P, H1H15410P, H1H15414P, H1H15418P2 e H1H15420P2) foram testados por ELISA. Placas de microtitulação MaxiSorp foram revestidas durante a noite com 10 pg/mL de Hemolisina A de S. aureus purificada por poço. Titulações de anticorpos da invenção e anticorpo de controle com o mesmo isotipo (variando entre 50 μΜ a 1 pM com diluições em série 1: 3) foram adicionados aos poços contendo toxina e incubados durante uma hora a 25°C. Os poços foram lavados três vezes e depois incubados com 100 ng/mL de anticorpo secundário HRP anti-humano por poço durante uma hora a 25QC. 100 pL de substrato quimioluminescente SuperSignal ELISA Pico, (ThermoFisher Scientific) foram então adicionados a cada poço e foi detectado sinal (leitor de placas Victor X3, Perkin Elmer). Os valores de luminescência foram analisados por uma equação logística de três parâmetros ao longo de uma curva de resposta de 12 pontos (GraphPad Prism).
[0146] Ligação subnanomolar EC50 dos anticorpos anti-Hemolisina A foi observada para ligação à toxina Hemolisina A de S. aureus. (Tabela 2 e Figura 1).
Tabela 2: Ligação de mAbs anti-Hemolisina A a Hemo/isinaA de
S. aureus
| AbPID | EC50 [M] para ligação da Hemolisina A |
| H1H15375P | 3,94E-10 |
| H1H15376P | 3J3E-10 |
| H1H15377P | 2,92E-10 |
| H1H15378P | 2,48E-10 |
| H1H15379P | 3,24E-10 |
| H1H15380P | 3,45E-10 |
| H1H15381P | 2,85E-10 |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 208/274
68/94
| H1H15399P | 3,12E-10 |
| H1H15404P | 3,02E-10 |
| H1H15405P | 5,25E-10 |
| H1H15408P | 3,56E-10 |
| H1H15410P | 3,21 E-10 |
| H1H15414P | 5,40E-10 |
| H1H15418P2 | 3,58E-10 |
| H1H15420P2 | 3,11 E-10 |
| Controle de isotipo | NB |
NB, sem ligação
Exemplo 4. Ligação de mAbs humanos a Hemolisina A de S. aureus a toxinas bicomponentes [0147] Cepas de S. aureus podem produzir toxinas adicionais de formação de poros, leucocidinas e hemolisina gama (Hlg), que também requerem oligomerização para formar poros funcionais. Ao contrário da Hemolisina A, as leucocidinas e Hlg são toxinas bicomponentes compostas de 2 subunidades, a subunidade-S e a subunidade-F. Atualmente, cinco subunidades S (LukA, LukE, LukS-PV, HlgA e HlgC) e quatro subunidades F (LukB, LukD, LukF-PV e HlgB) foram identificadas resultando em cinco toxinas funcionais (LukAB, LukED, PVL, HlgAB e HlgCB). Enquanto baixa identidade de sequência é observada entre as subunidades S e F e Hemolisina A (Aman MJ and Adhikaari RP, (2014) Toxins. 6: 950-972), todos os componentes apresentam homologia estrutural com Hemolisina A.
[0148] De modo a determinar se os anticorpos anti-Hemolisina A da invenção se ligam a outras toxinas, anticorpos purificados (H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15404P, H1H15405P, H1H15408P, H1H15410P, H1H15414P, H1H15418P2 e H1H15420P2) foram testados para reatividade cruzada com toxinas bicomponentes de S. aureus
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 209/274
69/94 por ELISA. As placas de microtitulação MaxiSorp foram revestidas durante a noite com 10 pg/mL de componentes F individuais de toxinas bicomponentes de S. aureus por poço. Os componentes da toxina recombinante foram obtidos da IBT BioServices (Gaithersburg, MD) ou gerados por GenScript (Piscataway Township, NJ). Titulações de anticorpos da invenção e anticorpo de controle com o mesmo isotipo (variando entre 50 μΜ a 100 pM com diluições 1: 3) foram adicionados aos poços contendo toxina e incubados durante 1 hora a 25°C. Os poços foram lavados 3 vezes e depois incubados com 100 ng/mL de anticorpo secundário HRP anti-humano por poço durante 1 hora a 25°C. 100 pL de substrato quimioluminescente SuperSignal ELISA Pico, (ThermoFisher Scientific) foram adicionados aos poços e foi detectado sinal (leitor de placas Victor X3, Perkin Elmer). Os valores de luminescência foram analisados por uma equação logística de três parâmetros ao longo de uma curva de resposta de 11 pontos (GraphPad Prism). Anticorpo de controle irrelevante combinado com isotipo e toxina delta de S. aureus foram incluídos como controles.
[0149] O teste dos 15 anticorpos na invenção para reatividade cruzada com toxinas bicomponentes revelou um mAb, H1H15381P, que exibia ligação aos componentes F de LukF, LukD e HlgB, embora com 2-log ou 3-log menos afinidade que a vista com Hemolisina A (Tabela 3 e Figuras 2a-c). Quando o H1H15381P foi testado para reatividade cruzada com os componentes S de LukS, LukE, HlgA e HlgC, as afinidades de ligação foram significativamente menores em comparação com a ligação aos componentes F (Figuras 3a-c). A ligação a H1H15381P é específica para Hemolisina A e toxinas bicomponentes, uma vez que esta não apresentou ligação à toxina delta de S. aureus. O anticorpo de controle com correspondência de isotipo não demonstrou nenhuma ligação aos componentes da toxina bicomponente.
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 210/274
70/94
Tabela 3: Ligação de mAbs anti-Hemolisina A a toxinas de bicomponente d S. aureus (componente F apenas)
| EC50 [M] para ligação de toxina bicomponente | |||||
| AbPID | LukF (GS) | LukF (IBT) | LukD (GS) | HlgB (GS) | Toxina delta de S. aureus |
| H1H15375P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15376P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15377P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15378P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15379P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15380P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15381P | 6,67E-08 | 1,65E-07 | 5.96E-08 | 1,021E-07 | NB |
| H1H15399P | NB | NB | NB | NB | |
| H1H15404P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15405P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15408P | NB | NB | NB | NB | |
| H1H15410P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15414P | NB | - | NB | NB | NB |
| H1H15418P2 | NB | NB | NB | NB | |
| H1H15420P2 | NB | - | NB | NB | NB |
| Controle de isotipo | NB | - | NB | NB | NB |
GS, GenScript; IBT, IBT BioServices; NB, sem ligação; não testado
Exemplo 5. Neutralização da Hemolisina A de S. aureus em um Ensaio de Citotoxicidade de THP-1 [0150] A capacidade de mAbs purificados de prevenir a lise mediada por Hemolisina A foi testada utilizando a linha celular de monócitos humanos, THP-1. Um total de 2,5x105 células THP-1 em RPMI (suplementado com 1% de FBS inativado pelo calor, L-glutamina e aminoácidos não essenciais) foram semeadas em placas de 96 poços de cultura de tecido de fundo preto claro e incubadas durante 1 hora a 37 com 5% de CO2. As titulações de anticorpos purificados (H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15399P, H1H153O4P, H1H15380P, H1H15408P, H1H15410P, H1H15414P, H1H15418P2 e H1H15420P2) ou anticorpo de controle de isotipo correspondente (variando entre 10 a 0 mM com Diluições em série de 1: 3 em meio) foram incubadas com
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 211/274
71/94 nM de Hemolisina A purificada em uma placa de 96 poços durante 30 minutos a 25QC em um agitador antes da adição às células revestidas. Uma titulação de Hemolisina A purificada (1,5 a 0 μΜ com diluições 1: 3) sem anticorpo também foi incubada apenas com células.
[0151] As células com toxina: anticorpo ou toxina sozinha foram então incubadas durante três horas (37, 5% de CO2) e a morte celular foi medida utilizando 0 kit CytoTox-Glo Assay (Promega). A luminescência foi detectada usando um leitor de placas (Victor X3, Perkin Elmer). Todos os anticorpos da invenção apresentaram atividades de neutralização semelhantes contra a Hemolisina A, enquanto 0 anticorpo com 0 mesmo isotipo não apresentou nenhuma atividade de neutralização contra a Hemolisina A. Ver Tabela 4.
Tabela 4: Neutralização de Hemolisina A de S. aureus em Ensaio de citotoxicidade de THP-1
| AbPID | IC50 [M] para neutralização da Hemolisina A |
| H1H15375P | 3,96E-09 |
| H1H15376P | 7,45E-09 |
| H1H15377P | 1,76E-09 |
| H1H15378P | 10,7E-09 |
| H1H15379P | 6,95E-09 |
| H1H15380P | 7,84E-09 |
| H1H15381P | 4,21 E-09 |
| H1H15399P | 1,31E-09 |
| H1H15404P | 6,31 E-09 |
| H1H15405P | 5,37E-09 |
| H1H15408P | 6,41 E-09 |
| H1H15410P | 5,89E-09 |
| H1H15414P | 1,72E-09 |
| H1H15418P2 | 2,47E-09 |
| H1H15420P2 | 4J4E-09 |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 212/274
72/94
Exemplo 6. Neutralização de Hemolisina A de S. aureus em sobrenadantes de cultura utilizando um ensaio de hemólise de RBC de coelho [0152] A potência de neutralização da Hemolisina A de mAb purificados utilizando sobrenadantes de culturas de S. aureus foi avaliada utilizando glóbulos vermelhos de coelho (rRBCs). Os sobrenadantes da cultura foram obtidos por incubação de cepas de S. aureus (American Type Culture Collection, Manassas, VA) em TSB durante 16 h a 37°C (com agitação), removendo as bactérias por centrifugação e filtrando o meio contendo toxina. Titulações do anticorpo purificado H1H15399P ou anticorpo de controle de isotipo correspondente (variando de 10 a 0 μΜ com 1: 2 diluições em série em 1X PBS) foram incubadas com sobrenadantes de cultura de S. aureus filtrados estéreis (que resultariam em >80% de lise celular) em uma placa de 96 poços durante 30 minutos a 25QC em um agitador. Após a incubação de 30 minutos, 100 μΙ_ das misturas de sobrenadante de cultura:mAb foram adicionadas a placas de fundo redondo de 96 poços contendo 100 μΙ de 4% de rRBCs (Colorado Serum Company, Denver, CO) em 1x PBS. Após uma incubação de 1 h a 37, as placas foram centrifugadas durante 5 min, 100 μΙ do e luminescência foi lida utilizando um leitor de placas (SpectraMax i3x, Molecular Devices). Todos os anticorpos da invenção apresentaram atividades de neutralização semelhantes contra a Hemolisina A, enquanto o anticorpo com o mesmo isotipo não apresentou nenhuma atividade de neutralização contra a Hemolisina A. Ver Tabela 5.
Tabela 5: Inibição de Hemolisina A de S, aureus nativa com mAb anti-Hemolisina A H1H15399
| Designação da cepa de S. aureus | Tipo PFGE | IC50 [M] para ligação da Hemolisina A |
| GA201 | USA100 | 6,697e-10 |
| MRSA252 | USA200 | Sem inibição* |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 213/274
73/94
| CA-127 | USA300 | 2,339e-09 |
| TCH1516 | USA300 | 4,047e-09 |
| MW2 | USA400 | Sem inibição |
| GA229 | USA500 | 6,725e-10 |
| 00:50 | USA600 | Sem inibição |
| 8,03 | USA700 | 7,091e-10 |
| 27-05 | USA800 | 1,274e-09 |
| 94:1013 | USA1000 | 5,434e-09 |
| 7031 | USA1100 | 8,279e-10 |
* MRSA252 contém um códon de parada em sua sequência de Hemolisina A, resultando em nenhuma proteína Hemolisina A secretada.
Exemplo 7. Afinidades de ligação biacore e constantes cinéticas de anticorpos monoclonais humanos anti-Hemolisina A [0153] Constantes da associação de ligação e da taxa de dissociação (ka e kd, respectivamente), constantes de dissociação de equilíbrio e meias vidas de dissociação (Kd e ty2, respectivamente) para Hemolisina A de tipo selvagem e mutante (Hla-H35L), ligação a anticorpos antiHemolisina A purificados foram determinados utilizando um ensaio biossensor de ressonância de plásmon de superfície em tempo real em um instrumento Biacore T200. A superfície do sensor Biacore foi derivatizada com um anticorpo monoclonal Fc de camundongo anti-humano (BR-1008-39, GE Healthcare) para capturar aproximadamente 150-360 UR de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A, expressos com um Fc humano. Diferentes concentrações de toxinas de Hemolisina A variando de 100 nM a 1,56 nM foram injetadas sobre a superfície capturada com anticorpo monoclonal anti-Hemolisina A a uma vazão de 50 pL/min em Biacore T200. A ligação das toxinas da Hemolisina A aos anticorpos monoclonais capturados, a 252C e 37QC foi monitorada durante 4 minutos e a dissociação dos anticorpos foi monitorada durante 10 minutos com HBS-ET (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCI 0,15 M, 3 mM EDTA, 0,05%
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 214/274
74/94 v/v Tensoativo P20) como tampão de corrida.
[0154] As constantes de taxa de associação cinética (ka) e de dissociação (Âd) foram determinadas processando e ajustando os dados a um modelo de ligação 1: 1 usando o software de ajuste de curva Scrubber 2.0c. As constantes de equilíbrio de dissociação de ligação (Kd) e as meias vidas dissociativas (tvs) foram então calculadas a partir das constantes da velocidade cinética como: Kd (M) = kd/ka e U (min) = [ln2/(60*kd)].
[0155] Parâmetros da cinética de ligação para ligação de Hemolisina A de tipo selvagem e Hemolisina A mutante a diferentes anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A a 252C e 372C são tabulados nas Tabelas 6 a 9. Como mostrado na Tabela 6, a 252C, todos os anticorpos antiHemolisina A da invenção se ligaram à Hemolisina A de tipo selvagem com valores de Ko variando de 171 pM a 26,2 nM. Como mostrado na Tabela 7, a 372C, todos os anticorpos anti-Hemolisina A da invenção se ligaram à Hemolisina A com valores de Kd variando de 260 pM a 76,3 nM. Como mostrado na Tabela 8, a 252C, todos os anticorpos anti-Hemolisina A da invenção se ligaram à Hemolisina A mutante com valores de Ko variando de 52,3 pM a 8,89 nM. Como mostrado na Tabela 9, a 372C, todos os anticorpos anti-Hemolisina A da invenção se ligaram à Hemolisina A mutante com valores de Ko variando entre 74,7 pM e 18,7 nM.
Tabela 6: Parâmetros cinéticos de ligação de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A que se ligam a Hemolisina A de tipo selvagem a 252C
| 25°C | ||||
| Ka | Kd | Kd | ti/2 | |
| Ab PID | (l/mol * s) | (1/s) | [M] | (min) |
| H1H15420P2 | 7,67E +05 | 1,31E-04 | 1,71E-10 | 88 |
| H1H15414P | 3,62E +05 | 1.15E-04 | 3J8E-10 | 100 |
| H1H15399P | 3.59E +05 | 1.15E-04 | 3.22E-10 | 100 |
| H1H15405P | 7,76E +04 | 6.69E-05 | 8,62E-10 | 173 |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 215/274
75/94
| H1H15418P2 | 1,20E +05 | 1,02E-04 | 8,49E-10 | 113 |
| H1H15377P | 3,09E +05 | 3,15E-04 | 1.02E-09 | 37 |
| H1H15380P | 4.99E +05 | 4.43E-04 | 8.88E-10 | 26 |
| H1H15375P | 6,00E +04 | 1,27E-04 | 2,12E-09 | 91 |
| H1H15381P | 7,81 E +05 | 1.50E-03 | 1.92E-09 | 8 |
| H1H15404P | 8.36E +04 | 3.37E-04 | 4,02E-09 | 34 |
| H1H15408P | 1,09E +05 | 8,32E-04 | 7,62E-09 | 14 |
| H1H15410P | 5,62E +04 | 4,62E-04 | 8,22E-09 | 25 |
| H1H15376P | 1,33E +05 | 2.18ΕΌ3 | 1.64E-08 | 5 |
| H1H15378P | 3,01 E +05 | 7,88E-03 | 2,62E-08 | 1,5 |
| H1H15379P | 2,43E +05 | 6,34E-03 | 2,61 E-08 | 1,8 |
Tabela 7: Parâmetros cinéticos de ligação de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A que se ligam à Hemolisina A de tipo selvagem a 372C
| 37 °C | ||||
| Ka | Kd | Kd | tl/2 | |
| Ab PID | (l/mol * s) | (1/s) | [M] | (min) |
| H1H15420P2 | 1,18E +06 | 3,07E-04 | 2,60E-10 | 38 |
| H1H15414P | 5,57E +05 | 3,13E-04 | 5,62E-10 | 37 |
| H1H15399P | 4,90E +05 | 3.22ΕΌ4 | 6.57E-10 | 36 |
| H1H15405P | 1,17E +05 | 1,76E-04 | 1,51E-09 | 65 |
| H1H15418P2 | 1,78E +05 | 3,50E-04 | 1,96E-09 | 33 |
| H1H15377P | 4,81 E +05 | 1,08E-03 | 2,25E-09 | 11 |
| H1H15380P | 6,49E +05 | 1,48E-03 | 2,28E-09 | 8 |
| H1H15375P | 9,40E +04 | 4,28E-04 | 4,56E-09 | 27 |
| H1H15381P | 9,32E +05 | 6,50E-03 | 6,97E-09 | 1,8 |
| H1H15404P | 1,18E +05 | 2,07E-03 | 1.75E-08 | 6 |
| H1H15408P | 1,48E +05 | 4,05E-03 | 2,73E-08 | 2,9 |
| H1H15410P | 8,68E +04 | 2,51 E-03 | 2,89E-08 | 5 |
| H1H15376P | 1,70E +05 | 8,42E-03 | 4,96E-08 | 1,4 |
| H1H15378P | 4,21 E +05 | 2.29E-02 | 5,45E-08 | 0,5 |
| H1H15379P | 3,04E +05 | 2,32E-02 | 7,63E-08 | 0,5 |
Tabela 8: Parâmetros cinéticos de ligação de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A que se ligam à Hemolisina A mutante a 252C
| 25°C | ||||
| Ka | Kd | Kd | Í1/2 | |
| Ab PID | (l/mol * s) | (1/s) | [M] | (min) |
| H1H15420P2 | 2,28E +06 | 1.19E-04 | 5,23E-11 | 97 |
| H1H15414P | NB | NB | NB | NB |
| H1H15399P | 9,98E +05 | 1,00E-04 | 1,00E-10 | 116 |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 216/274
76/94
| H1H15405P | 2,46E +05 | 5.82E-05 | 2,37E-10 | 199 |
| H1H15418P2 | 3.96E +05 | 7.43E-05 | 1,88E-10 | 155 |
| H1H15377P | 1,12E +06 | 4J1E-04 | 3,67E-10 | 28 |
| H1H15380P | 1.39E+06 | 3.87E-04 | 2,79E-10 | 30 |
| H1H15375P | 1,76E +05 | 1J7E-04 | 6,65E-10 | 99 |
| H1H15381P | 2,26E +06 | 1,22E-03 | 5,40E-10 | 9 |
| H1H15404P | 2,68E +05 | 2.94E-04 | 1,10E-09 | 39 |
| H1H15408P | 3,47E +05 | 7.05E-04 | 2,03E-09 | 16 |
| H1H15410P | 1,52E +05 | 3,99E-04 | 2,63E-09 | 29 |
| H1H15376P | 4.22E+05 | 1,45E-03 | 3,43E-09 | 8 |
| H1H15378P | 7.66E+05 | 6,81 E-03 | 8,89E-09 | 1,7 |
| H1H15379P | 6,81 E +05 | 4,43E-03 | 6,51 E-09 | 2,6 |
* NB indica que sob as condições experimentais, a toxina Hemolisina A não se ligou ao anticorpo monoclonal anti-Hemolisina A capturado.
Tabela 9: Parâmetros cinéticos de ligação de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A que se ligam a Hemolisina A mutante a 372C
| 37°C | ||||
| Ka | Kd | Kd | tl/2 | |
| Ab PID | (l/mol s) | (1/s) | [M] | (min) |
| H1H15420P2 | 3,56E+06 | 2.66E-04 | 7.47E-11 | 43 |
| H1H15414P | NB | NB | NB | NB |
| H1H15399P | 1,42E +06 | 2,78E-04 | 1,96E-10 | 42 |
| H1H15405P | 4,30E +05 | 1,52E-04 | 3,54E-10 | 76 |
| H1H15418P2 | 5,68E +05 | 2,29E-04 | 4.03E-10 | 51 |
| H1H15377P | 1,59E+06 | 1.37E-03 | 8,64E-10 | 8 |
| H1H15380P | 1,88E+06 | 1,31 E-03 | 6,95E-10 | 9 |
| H1H15375P | 3Ί1Ε+05 | 3,70E-04 | 1.19E-09 | 31 |
| H1H15381P | 2,45E +06 | 4,66E-03 | 1,90E-09 | 2,5 |
| H1H15404P | 3,35E +05 | 1,81 E-03 | 5,41 E-09 | 6 |
| H1H15408P | 4,38E +05 | 2,93E-03 | 6,68E-09 | 4 |
| H1H15410P | 2,26E +05 | 2,19E-03 | 9,72E-09 | 5 |
| H1H15376P | 4,73E +05 | 4,41 E-03 | 9,32E-09 | 2,6 |
| H1H15378P | 9,43E +05 | 1,68E-02 | 1,78E-08 | 0,7 |
| H1H15379P | 6,41 E +05 | 1,20E-02 | 1,87E-08 | 1 |
* NB indica que sob as condições experimentais, a toxina Hemolisina A não se ligou ao anticorpo monoclonal anti-Hemolisina A capturado.
Exemplo 8. Mecanismo da atividade de bloqueio do mAb anti-hemolisina [0156] Para determinar se os mAbs de Hemolisina A exercem a sua
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 217/274
77/94 função bloqueando a interação da toxina com o seu receptor específico, ADAM10, a atividade metaloprotease associada a células hospedeiras foi medida utilizando um ensaio de substrato de peptídeo fluorogênico utilizando células A549 incubadas com Hemolisina A. Titulações de mAbs de Hemolisina A (H1H15377P, H1H15381P e H1H15399P) foram pré-incubadas com 3 nM de Hemolisina A purificada durante 15 min a 37°C antes da adição a placas de 96 poços contendo 2,5x104 células A549 em Ham-F-12K (suplementado com 10% de FBS inativado pelo calor e L-glutamina). Após incubação por 60 min a 37°C, substrato de peptídeo fluorogênico de 5 μΜ (Mca-PLAVQ-Dpa-RSSSR-NH2, R & D Systems, Minneapolis, MN) foi incubado por 15 min a 37 °C e a intensidade de fluorescência foi lida usando um leitor de placa (filtro de excitação de 320 nm e um filtro de emissão de 405 nm, SpectraMax i3x, Molecular Devices) e expressa como unidades de fluorescência relativa. Os anticorpos da invenção bloquearam o aumento induzido pela toxina na atividade de ADAM10, enquanto o anticorpo que corresponde com isotipo não apresentou nenhum efeito sobre a atividade aumentada de ADAM10 induzida por toxina (Figura 4a). Isto sugeriu que os anticorpos da invenção bloquearam a interação da Hemolisina A no seu receptor. [0157] Para demonstrar ainda que os mAbs de Hemolisina A impediram a ligação da toxina à membrana da célula hospedeira, foram realizados experimentos de ligação à membrana na presença dos mAbs de Hemolisina A utilizando RBCs de coelho (rBCr) e a associação da toxina com a membrana de rRBC foi detectada pela análise de Western blot. Para evitar a lise dos rRBCs, os experimentos de ligação foram realizados a 4°C. As titulaçõees de mAbs de Hemolisina A (H1H15377P e H1H15399P) foram pré-incubadas com Hemolisina A 10 nM durante 15 min a 37°C antes de serem adicionadas a RBCs lavados (10% em 250 μΙ PBS) e incubadas durante 60 min a 4°C. As RBCs foram sedimentadas, o sobrenadante foi removido e as células foram lisadas por três
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 218/274
78/94 ciclos de ressuspensão em 1 ml_ de ddhh, incubação durante 10 min a 25°C e centrifugação a 16,100xg, As membranas foram solubilizadas em Tris-HCI 10 mM, pH 7,4, NaCI 150 mM, Triton X-100 a 1 % e desoxicolato de sódio a 1%. As amostras solubilizadas foram reduzidas, fervidas e separadas em um gel de SDS-PAGE 4-12% (Invitrogen, Carlsbad, CA) transferidas para a membrana PVDF (Invitrogen, Carlsbad, CA) e o monômero Hemolisina A foi detectado com um pAb (IBT BioServices, Rockville, MD). Anticorpos da invenção impediram a ligação de Hemolisina A à membrana de rRBC enquanto o anticorpo de isotipo combinado não apresentou nenhum efeito (Figura 4b).
Exemplo 9. Eficácia in vivo de mAbs anti-Hemolisina A humanos administrados profilaticamente em um modelo de camundongo de dermonecrose [0158] De modo a determinar se os mAbs anti-Hemolisina A da invenção eram capazes de diminuir ou prevenir as lesões de pele induzidas por S. aureus, os anticorpos purificados foram testados profilaticamente em um modelo de dermonecrose in vivo utilizando camundongos BALB/c fêmeas (n = 3-5) (Bubeck Wardenburg et al., (2008) J. Infect. Dis. 198: 1166-1170). Dois dias antes da infecção, a pele foi removida da região abdominal por raspagem e aplicação de loção para remoção de pelos. Um dia antes da infecção, os camundongos foram injetados ip no lado esquerdo do abdômenn com uma dose única de 5 mg/kg ou 0,5 mg/kg de cada anticorpo individual: H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15404P, H1H15405P, H1H15408P, H1H15410P, H1H15414P, H1H15418P2, H1H15420P2 ou um anticorpo de controle do mesmo isotipo. No dia da infecção, os camundongos foram desafiados por via subcutânea, no lado direito do abdômenn, com 50 μΙ_ de S. aureus CA-127 (~1 - 2 x 108 CFU/camundongo) que cresceram até à fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37°C, foram lavados e suspensos em
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 219/274
79/94
PBS. As lesões dos camundongos foram medidas com urn paquimetro digital no dia 2 pós-infecção.
[0159] Todos os anticorpos da invenção foram eficazes em ambas as doses testadas. Quando administrados a 5 mg/kg, todos os anticorpos apresentaram eficácia semelhante, reduzindo as lesões dermonecróticas 80 a 90% quando comparados com o anticorpo de controle do mesmo isotipo (Tabela 10). Da mesma forma, quando administrados a animais a 0,5 mg/kg, todos os anticorpos da invenção (com a exceção de H1H15410P) mostraram reduções no tamanho da lesão quando comparados com os tratados com o anticorpo com o mesmo isotipo (Tabela 10). A redução no tamanho da lesão, no entanto, variou de 40 a 80%, com ο H1H15410P não mostrando nenhum efeito nessa dose. Os anticorpos H1H15380P, H1H15381P, H1 H15405P e H1 H15414P foram os mais eficazes quando administrados a 0,5 mg/kg, com redução 80% no tamanho das lesões. A comparação dos grupos de 5 mg/kg e 0,5 mg/kg mostrou um efeito dependente da dose: os camundongos que receberam anticorpos na dose de 5 mg/kg apresentaram lesões menores em comparação aos camundongos que receberam o mesmo anticorpo na dose de 0,5 mg/kg.
Tabela 10: Comparação do tamanho da lesão para anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A em um modelo de dermonecrose murina profilática, Dia 2 pós-infecção
| Camundongos que receberam 5 mg/kg de mAb e foram infectados com 1,3x108 CPU de S. aureus CA-127 | Camundongos que receberam 0,5 mg/kg de mAb e foram infectados com 1,5x108 CFU de S. aureus CA-127 | |||||||
| AbPID | Camundongos (n) | Diminuição em relação ao isotipo (%) | Tamanho médio da lesão (mm) | SD | Camundongos (n) | Diminuição em relação ao isotipo (%) | Tamanho médio da lesão (mm) | SD |
| H1H15375P | 5 | 90,7 | 31,6 | 6,3 | 5 | 68,0 | 63,2 | 29,2 |
| H1H15376P | 5 | 89,2 | 37,0 | 7,2 | 5 | 79,9 | 39,8 | 9,4 |
| H1H15377P | 5 | 85,7 | 48,8 | 7,0 | 5 | 57,5 | 84,1 | 70,1 |
| H1H15378P | 5 | 88,4 | 39,5 | 9,9 | 5 | 67,1 | 65,0 | 30,4 |
| H1H15379P | 5 | 88,5 | 39,1 | 13,3 | 5 | 76,9 | 45,6 | 39,9 |
| H1H15380P | 5 | 87,1 | 44,2 | 8,0 | 5 | 82,1 | 35,4 | 23,5 |
| H1H15381P | 5 | 83,9 | 55,1 | 22,2 | 5 | 85,1 | 29,5 | 26,0 |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 220/274
80/94
| H1H15399P | 5 | 89,0 | 37,7 | 13,4 | 5 | 69,9 | 59,6 | 18,3 |
| H1H15404P | 5 | 86,7 | 45,5 | 12,5 | 5 | 46,6 | 105,7 | 40,5 |
| H1H15405P | 5 | 92,1 | 27,0 | 7,1 | 5 | 86,4 | 26,9 | 11,1 |
| H1H15408P | 5 | 90,1 | 33,9 | 10,4 | 5 | 73,1 | 53,3 | 17,2 |
| H1H15410P | 5 | 86,5 | 46,2 | 9,8 | 4 | 0,0 | 216,8 | 98,1 |
| H1H15414P | 5 | 90,2 | 33,5 | 17,5 | 5 | 82,1 | 35,5 | 12,5 |
| H1H15418P2 | 5 | 86,6 | 45,8 | 6,7 | 5 | 48,9 | 101,1 | 63,1 |
| H1H15420P2 | 5 | 85,8 | 48,5 | 7,9 | 5 | 62,2 | 74,7 | 37,5 |
| Controle de isotipo | 3 | 0,0 | 341,6 | 38,6 | 5 | 0,0 | 197,8 | 56,8 |
[0160] Para interrogar adicionalmente a capacidade dos mAbs de anti-Hemolisina A para diminuir o tamanho da lesão, os mAbs foram administrados profilaticamente em três doses diferentes e comparados com dois outros mAbs anti-Hemolisina A, LTM14 (ver, por exemplo, patente US n.Q 8715673-SEQ ID NOs: 1 e 2, ou Foletti et al., Mechanism of Action and In Vivo Efficacy of a Human-Derived Antibody against Staphylococcus □ -Hemolysin, J. Mol. Biol. 425: 1641-1654 (2013)) e LC10 (ver, por exemplo, WO2012/ 109285-SEQ ID NOs: 57 e 58). A pele foi removida de camundongos BALB/c fêmeas como descrito anteriormente dois dias antes da infecção. Um dia antes da infecção, camundongos (n = 5 por grupo) foram injetados ip no lado esquerdo do abdômen com uma dose única de 5 mg/kg, 0,5 mg/kg ou 0,125 mg/kg de cada anticorpo individual: H1H15377P, H1H15381P, H1H15399P, LTM14, LC10 ou um anticorpo de controle do mesmo isotipo. No dia da infecção, os ratos foram desafiados por via subcutânea, no lado direito do abdômen, com 50 μΙ_ de S. aureus CA-127 (cepa MRSA; 2,5 x108CFU/camundongo) ou S. aureus Newman (cepa MSSA; 2,5 x108 CFU/camundongo) que cresceu até à fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37°C, lavado e suspenso em PBS. As lesões dos camundongos foram medidas com um paquímetro digital no dia 2 pós-infecção.
[0161] Todos os anticorpos da invenção foram eficazes em todas as três doses testadas, utilizando tanto a cepa MRSA quanto MSSA de S. aureus . Quando administrados a 5 mg/kg, todos os anticorpos, incluindo LC10 e LTM14, mostraram eficácia semelhante contra o S. aureus
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 221/274
81/94 tanto CA-127 (Figura 5a) quanto com Newman (Figura 6a), reduzindo as lesões em >85% quando comparados com o anticorpo controle correspondente ao isotipo. Da mesma forma, quando administrados a camundongos a 0,5 mg/kg, todos os anticorpos apresentaram reduções semelhantes de 50 a 60% no tamanho da lesão quando comparados aos tratados com o anticorpo correspondente do isotipo (Figura 5b e 6b). As reduções no tamanho da lesão, no entanto, foram maiores com H1H15377P e H1H15399P em comparação com H1H15381P, LC10 e LTM14 quando administradas a 0,125 mg/kg usando S. aureus tanto CA-127 (Figura 5c) quanto Newman (Figura 6c) variando entre 30 e 40 %, em comparação com os tratados com o anticorpo correspondente ao isotipo. Para todos os anticorpos, a comparação dos grupos 5 mg/kg, 0,5 mg/kg e 0,125 mg/kg mostrou um efeito dependente da dose: camundongos que receberam anticorpos nas concentrações mais altas apresentaram lesões menores (5 mg/kg dose lesões <0,5 mg/dose dose kg <0,125 mg/kg dose lesões).
Exemplo 10. Contagens de bactérias na pele de camundongos administrados com mAbs anti-Hemolisina A profilaticamente.
[0162] Três anticorpos purificados da invenção, H1H15377P, H1H15381P e H1H15399P foram testados em um modelo de dermonecrose para determinar se houve alguma alteração observada na carga bacteriana na pele de camundongos tratados profilaticamente com os anticorpos. Os anticorpos da invenção também foram comparados com outros dois mAbs anti-Hemolisina A, LC10 e LTM14. Dois dias antes da infecção, a pele foi removida da região abdominal dos camundongos BALB/c fêmeas por raspagem e aplicação de loção para remoção de pelos. Um dia antes da infecção, os camundongos foram injetados ip no lado esquerdo do abdômen com uma dose única de 5 mg/kg de cada anticorpo individual: H1H15377P, H1H15381P e H1H15399P, LTM14, LC10 ou um anticorpo de controle do mesmo isotipo. No dia da infecção,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 222/274
82/94 camundongos (η = 5 por grupo) foram desafiados, por via subcutânea, no lado direito do abdômen, com 50 μΙ_ de S. aureus CA-127 (cepa MRSA; 2,5 x 108 CFU/camundongo) ou Newman (Estirpe MSSA; 2,9 x 108 CFU/murganho) que cresceu até atingir a fase log (ODeoo ^1)) em TSB a 37°C, lavada e suspensa em PBS. Os camundongos foram sacrificados por anestesia 2 dias após a infecção, a área da lesão (e a pele circundante) foi excisada utilizando um perfurador de biopsia dérmica de 8 mm e homogeneizada. Diluições em série dos lisados da pele foram plaqueadas em placas de TSA. As placas foram incubadas durante a noite (16 a 18 horas) a 37QC e as colônias bacterianas foram contadas no dia seguinte para determinação da carga bacteriana.
[0163] Os anticorpos H1H15377P e H1H15399P reduziram a carga bacteriana na pele de camundongos infectados com S. aureus CA-127 (Figura 7a) e Newman (Figura 7b); especificamente, 5 mg/kg de qualquer anticorpo resultaram em uma redução de 1 -1,5 log na carga bacteriana da pele, em comparação com os níveis de carga bacteriana determinados para os animais tratados com o anticorpo de controle de isotipo correspondente. A mesma dose de H1H15381P, LTM14 ou LC10 resultou em redução de 0 a 0,5 log na carga bacteriana da pele. Os resultados indicam que H1H15377P e H1H15399P foram mais eficazes na redução da carga bacteriana na pele de camundongos infectados.
Exemplo 11. Eficácia in vivo de mAbs anti-Hemolisina A administrados terapeuticamente [0164] De modo a determinar se os mAbs na invenção também podem diminuir o tamanho da lessão se administrados após a infecção, os anticorpos purificados foram testados terapeuticamente em um modelo de dermonecrose in vivo utilizando camundongos BALB/c fêmeas (n = 5). Dois dias antes da infecção, a pele foi removida da região abdominal por raspagem e aplicação de loção para remoção de pelos. No dia da infecção, os camundongos foram desafiados por via subcutânea, no
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 223/274
83/94 lado direito do abdômen, com 50 μΙ_ de S. aureus CA-127 (~1 - 2 x 108 CFU/camundongo) que cresceram até à fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37°C, foram lavados e suspensos em PBS. Duas horas após a infecção, os camundongos foram injetados ip no lado esquerdo do abdômen com uma dose única de 0,5 mg/kg de cada anticorpo individual: H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15404P, H1H15405P, H1H15408P, H1H15410P, H1H15414P, H1H15418P2, H1H15420P2ou um anticorpo de controle do mesmo isotipo. As lesões dos camundongos foram medidas com um paquímetro digital no dia 2 pós-infecção.
[0165] Todos os anticorpos da invenção foram eficazes na redução do tamanho da lesão quando administrados aos animais a 0,5 mg/kg duas horas após a infecção (Tabela 11). Reduções no tamanho das lesões dermonecróticas variaram de 50 a 83%. Oito dos anticorpos (H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15399P, H1H15418P2 e H1H15420P2) apresentaram uma redução 70% nos tamanhos das lesões.
Tabela 11: Comparação do tamanho da lesão para anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A em um modelo de dermonecrose murina terapêutica, Dia 2 pós-infecção
| Camundongos que receberam 0,5 mg/kg de mAb e foram infectados com 1,1 x108 CFU de S. aureus CA-127 | ||||
| AbPID | Camundongos (n) | Diminuição em relação ao isotipo (%) | Tamanho médio da iesão (mm) | SD |
| H1H15375P | 5 | 69,2 | 52,8 | 44,9 |
| H1H15376P | 5 | 79,4 | 35,4 | 11,4 |
| H1H15377P | 5 | 73,1 | 46,2 | 35,0 |
| H1H15378P | 5 | 82,8 | 29,6 | 8,3 |
| H1H15379P | 5 | 74,5 | 43,8 | 19,4 |
| H1H15380P | 5 | 79,5 | 35,2 | 15,8 |
| H1H15381P | 5 | 59,0 | 70,5 | 53,2 |
| H1H15399P | 4 | 73,2 | 46,1 | 15,4 |
| H1H15404P | 5 | 56,2 | 75,3 | 24,4 |
| H1H15405P | 5 | 69,8 | 51,9 | 19,1 |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 224/274
84/94
| H1H15408P | 5 | 63,9 | 62,1 | 21,3 |
| H1H15410P | 5 | 50,2 | 85,5 | 38,1 |
| H1H15414P | 5 | 80,9 | 32,8 | 12,9 |
| H1H15418P2 | 5 | 70,6 | 50,4 | 11,2 |
| H1H15420P2 | 5 | 73,7 | 45,2 | 30,1 |
| Controle de isotipo | 5 | 0,0 | 171,8 | 97,9 |
| Exemplo 12. Et | ficácia in vivo dos mAbs anti-Hemolisina A em um |
modelo de pneumonia aguda usando uma cepa de Staphylococcus aureus sensível à meticilina (MSSA) [0166] A sobrevivência de camundongos administrados com anticorpos a 5 mg/kg profilaticamente. De modo a determinar a eficácia dos mAbs contra uma cepa MSSA quando administrados profilaticamente, os seguintes anticorpos H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P e H1H15414P foram selecionados para estudo em um modelo de pneumonia aguda utilizando S. aureus Newman (modificado de Bubeck Wardenburg etal., (2007) Infect. Immun. 75: 1040-1044). camundongos C57BL/6 fêmeas (n = 5) foram injetados ip com uma dose única de 5 mg/kg de H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15414P ou um anticorpo de controle do mesmo isotipo. Um dia após a injeção de mAbs, os camundongos foram desafiados intratecalmente com 50 μΙ_ de S. aureus Newman (1,7 x108CFU /camundongo) que cresceu até a fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37° C, foram lavados e ressuspensos em PBS. Os camundongos foram monitorados quanto à sobrevivência durante um total de seis dias após a infecção.
[0167] Tal como observado na Tabela 12, a administração do anticorpo H1H15375P, H1H15376P, H1H15378P, H1H15379P,
H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P ou H1H15414P resultou em 100% de sobrevivência. A administração de H1H15377P resultou em 80% de sobrevivência até o dia 6. Todos os anticorpos da invenção aumentaram a sobrevivência de camundongos infectados com uma ceppa
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 225/274
85/94
MSSA de S. aureus quando administrados profilaticamente a 5 mg/kg em um modelo de infecção aguda por pneumonia.
Tabela 12: Sobrevivência de camundongos administrados profilaticamente com 5 mg/kg de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A em um modelo de pneumonia aguda usando uma cepa MSSA
| S. aureus Newman (MSSA) dose de mAb: 5 mg/kg | ||
| AbPID | Camundongos (n) | Sobrevivência no D6 pós-infecção (%) |
| H1H15375P | 5 | 100 |
| H1H15376P | 5 | 100 |
| H1H15377P | 5 | 80 |
| H1H15378P | 5 | 100 |
| H1H15379P | 5 | 100 |
| H1H15380P | 5 | 100 |
| H1H15381P | 5 | 100 |
| H1H15399P | 5 | 100 |
| H1H15414P | 5 | 100 |
| Controle de isotipo | 5 | 20 |
[0168] A sobrevivência de camundongos administrados com anticorpos a 2,5 mg/kg profilaticamente. Para determinar se os anticorpos também seriam eficazes em uma dose menor no modelo de pneumonia aguda contra uma cepa MSSA, camundongos C57BL/6 fêmeas (n = 5) foram injetados ip com uma dose única de 2,5 mg/kg de H1H15375P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1 H15399P, H1H15414P ou um anticorpo do mesmo isotipo. Um dia após a injeção de mAbs, os camundongos foram desafiados intratecalmente com 50 μΙ_ de S. aureus Newman (7,5 x107CFU /camundongo) que cresceu até a fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37°C, foram lavados e ressuspensos em PBS. Os camundongos foram monitorados quanto à sobrevivência durante um total de seis dias após a infecção.
[0169] Tal como observado na Tabela 12, a administração do anticorpo H1H15376P, H1H15377P, H1H15379P, H1H15381P,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 226/274
86/94
H1H15399P ou H1H15414P resultou em 100% de sobrevivência até o dia 6, enquanto que a administração do anticorpo H1H15378P ou H1H15380P resultou em 80% de sobrevivência. O anticorpo H1H15375P foi menos eficaz quando comparado com os outros anticorpos, fornecendo apenas 60% de proteção (Tabela 13).
[0170] Os resultados indicam que os anticorpos H1H15375P, H1H15376P, H1H15378P, H1H15314P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15414P e H1H15377P são eficazes na redução dos efeitos citotóxicos da Hemolisina A e aumento da sobrevivência em um modelo de pneumonia aguda murina usando cepa MSSA de S. aureus mesmo quando os mAbs são administrados em uma dose menor.
Tabela 13: Sobrevivência de camundongos administrados profilaticamente com 2,5 mg/kg de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A em um modelo de pneumonia aguda usando uma cepa MSSA
| S. aureus Newman (MSSA) dose de mAb: 2,5 mg/kg | ||
| AbPID | Camundongos (n) | Sobrevivência no D6 pós-infecção (%) |
| H1H15375P | 5 | 60 |
| H1H15376P | 5 | 100 |
| H1H15377P | 5 | 100 |
| H1H15378P | 5 | 80 |
| H1H15379P | 5 | 100 |
| H1H15380P | 5 | 80 |
| H1H15381P | 5 | 100 |
| H1H15399P | 5 | 100 |
| H1H15414P | 5 | 100 |
| Controle de isotipo | 5 | 0 |
Exemplo 13. Eficácia in vivo dos mAbs anti-Hemolisina A em um modelo de pneumonia aguda usando uma cepa de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) [0171] A sobrevivência de camundongos administrados com anticorpos a 5 mg/kg profilaticamente. De modo a testar a eficácia dos mAb contra uma cepa de MRSA, os seguintes anticorpos
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 227/274
87/94
H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P e H1H15414P foram selecionados para estudo em um modelo profilático de pneumonia aguda utilizando S. aureus CA- 127 camundongos C57BL/6 fêmeas (n = 5) foram injetados ip com uma dose única de 5 mg/kg de H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15414P ou um anticorpo de controle do mesmo isotipo. Um dia após a injeção dos mAbs, os camundongos foram desafiados intratraquealmente com 50 μΙ_ contendo tanto 2,2 x 108 CFU (inóculo baixo) quanto 4,8 x 108CFU (inóculo elevado) deS. aureus CA-127 que cresceram até a fase log (Οϋθοο ^1) em TSB a 37°C, lavado e ressuspenso em PBS. Os camundongos foram monitorados quanto à sobrevivência durante um total de seis dias após a infecção.
[0172] Oito dos nove anticorpos da invenção mostraram eficácia quando os camundongos foram desafiados com o inóculo baixo. Especificamente, os anticorpos H1H15375P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P e H1H15399P foram igualmente eficazes, resultando em 100% de sobrevivência até ao dia 6 (Tabela 14). A administração do anticorpo H1H15414P resultou em 80% de sobrevivência. Ο H1H15376P não demonstrou proteção, pois os camundongos que receberam esse anticorpo não sobreviveram até o dia 6. Nenhum dos animais tratados com o anticorpo correspondente do isotipo sobreviveu até o dia 6 (Tabela 13) [0173] Em um inóculo maior foi observada uma maior diferenciação na eficácia entre os anticorpos da invenção. Como visto na Tabela 13, os anticorpos H1H15377P e H1H15399P foram os mais eficazes dos anticorpos testados, resultando em 100% de sobrevivência até o dia 6. A administração dos anticorpos H1 H15414P, H1H15378P, H1H15379P e H1H15381P resultou em 60% de sobrevivência até o dia 6, enquanto
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 228/274
88/94 que que nenhum dos animais no grupo tratado com o anticorpo de controle correspondente com o isotipo sobreviveu até o dia 6. Os anticorpos H1H15375P, H1H15376P e H1H15380P tiveram menor eficácia que os outros anticorpos da invenção testados, resultando em 20%, 0% ou 40% de sobrevivência até ao dia 6, respectivamente (Tabela 13).
[0174] Os resultados indicam que H1H15375P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P e H1H15414P são eficazes na redução dos efeitos citotóxicos da hemolisina A e aumento da sobrevivência quando administrados profilaticamente a 5 mg/kg em um modelo de pneumonia aguda de infecção com um menor inóculo de uma cepa MRSA de S. aureus . Dois anticorpos, H1H15377P e H1H15399P, também foram 100% eficazes quando um inóculo maior de uma cepa MRSA de S. aureus foi usada neste modelo.
Tabela 14: Sobrevivência de camundongos administrados profilaticamente com 5 mg/kg de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A em um modelo de pneumonia aguda usando uma cepa MRSA
| S. aureus CA-127 (MRSA) dose de mAb: 5 mg/kg | Inóculo Baixo (2,2 x 10s CFU) | Inóculo Alto (4,8x108 CFU) | |
| AbPID | Camundongos (n) | Sobrevivência (%) | Sobrevivência (%) |
| H1H15375P | 5 | 100 | 20 |
| H1H15376P | 5 | 0 | 0 |
| H1H15377P | 5 | 100 | 100 |
| H1H15378P | 5 | 100 | 60 |
| H1H15379P | 5 | 100 | 60 |
| H1H15380P | 5 | 100 | 40 |
| H1H15381P | 5 | 100 | 60 |
| H1H15399P | 5 | 100 | 100 |
| H1H15414P | 5 | 80 | 60 |
| Controle de isotipo | 5 | 0 | 0 |
[0175] A sobrevivência de camundongos administrados com anticorpos a 2,5 mg/kg profilaticamente. Para determinar se os anticorpos também seriam eficazes em uma dose menor no modelo de
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 229/274
89/94 pneumonia aguda contra uma cepa MRSA, camundongos C57BL/6 fêmeas (n = 5) foram injetados ip com uma dose única de 2,5 mg/kg de H1H15375P, H1H15376P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15414P ou um anticorpo de controle correspondente com o isotipo. Um dia após a injeção de mAbs, os camundongos foram desafiados intratecalmente com 50 μΙ_ de S. aureus CA-127 (7,5 x108 CFU /camundongo) que cresceram até a fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37°C, foram lavados e ressuspensos em PBS. Os camundongos foram monitorados quanto à sobrevivência durante um total de seis dias após a infecção.
[0176] Todos os anticorpos da invenção testados (H1H15375P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P ou H1H15414P) foram igualmente eficazes, resultando em 100% de sobrevivência até o dia 6, enquanto nenhum dos animais no grupo tratado com o anticorpo de controle correspondente com o isotipo sobreviveu até ao dia 6 (Tabela 15). Os resultados indicam que H1H15375P, H1H15377P, H1H15378P, H1H15379P, H1H15380P, H1H15381P, H1H15399P e H1H15414P são eficazes na redução dos efeitos citotóxicos da hemolisina A e aumento da sobrevivência quando administrados profilaticamente a 5 mg/kg em um modelo de pneumonia aguda de infecção com uma cepa MRSA de S. aureus.
Tabela 15: Sobrevivência de camundongos administrados profilaticamente com 2,5 mg/kg de anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A em um modelo de pneumonia aguda usando cepa MRSA
| S. aureus CA-127 (MRSA) dose de mAb: 2,5 mg/kg | ||
| AbPID | Camundongos (n) | Sobrevivência no D6 pós-infecção (%) |
| H1H15375P | 5 | 100 |
| H1H15377P | 5 | 100 |
| H1H15378P | 5 | 100 |
| H1H15379P | 5 | 100 |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 230/274
90/94
| H1H15380P | 5 | 100 |
| H1H15381P | 5 | 100 |
| H1H15399P | 5 | 100 |
| H1H15414P | 5 | 100 |
| Controle de isotipo | 5 | 0 |
[0177] Contagem de bactérias nos pulmões de camundongos administrados com H1H15399P e H1H15376P profilaticamente. Dois anticorpos purificados da invenção, H1H15399P e H1H15376P, foram testados em um estudo de pneumonia aguda para determinar se havia alguma alteração observada na carga bacteriana nos pulmões de camundongos tratados profilaticamente com os anticorpos. Grupos de camundongo C57BL/6 fêmeas (n = 5) foram injetados ip com uma de três doses de H1H15399P, uma dose única de H1H15376P ou um anticorpo de controle correspondente com o isotipo (5 mg/kg). Um dia após a injeção, os camundongos foram desafiados intratecalmente com 50 μΙ_ de S. aureus CA-127 (1,6x 108 CFU/camundongo) que cresceram até a fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37°C, foram lavados e ressuspensos em PBS. Os camundongos foram eutanasiados por anestesia 18 horas após a infecção e os pulmões foram extraídos e homogeneizados. Diluições em série dos lisados do pulmão foram plaqueadas em placas de TSA. As placas foram incubadas durante a noite (16 a 18 horas) a 372C e as colônias bacterianas foram contadas no dia seguinte para determinação da carga bacteriana.
[0178] O anticorpo H1H15399P reduziu a carga bacteriana nos pulmões de camundongos infectados (Tabela 16); especificamente, todas as três doses de H1H15399P testadas resultaram em uma redução de 1 a 1,5 log na carga bacteriana no pulmão, em comparação com os níveis de carga bacteriana determinados para os animais tratados com o anticorpo de controle correspondente com o isotipo. Além disso, essa diminuição na carga bacteriana pulmonar foi dependente da dose. O anticorpo H1H15376P não apresentou nenhuma eficácia neste modelo,
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 231/274
91/94 apresentando carga pulmonar bacteriana do pulmão semelhante ao anticorpo correspondente com o isotipo. Os resultados indicam que o H1H15399P foi capaz de reduzir a carga bacteriana nos pulmões de camundongos infectados.
Tabela 16: Contagens bacterianas em pulmões de camundongos administrados profilaticamente com anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A H1H15399P e H1H15376P em um modelo de pneumonia aguda usando uma cepa de MRSA
| Carga do Órgão | ||||
| AbPID | Camundongos (n) | Dose (mg/kg) | CFU/pulmão média | SD |
| H1H15399P | 5 | 5 | 5,50 E +06 | 2,30E +06 |
| 5 | 2,5 | 1.11E+07 | 1,10E+07 | |
| 5 | 1,25 | 1,04E+07 | 7,06E +06 | |
| H1H15376P | 5 | 5 | 1,47E +08 | 2,33E +08 |
| Controle de isotipo | 4 | 5 | 2,45E +08 | 1,72E +08 |
[0179] Para interrogar ainda mais a capacidade dos mAbs anti-Hemolisina A de reduzir a carga bacteriana nos pulmões, três mAbs (H1H15377P, H1H15381P, H1H15399P) que demonstraram aumento da sobrevivência foram administrados profilaticamente em duas doses diferentes e comparados com outros dois mAbs anti-hemolisina A, LC10 e LTM14. Grupos de camundongos fêmeas C57BL/6 (n = 5) foram injetados ip com uma dose única de 1,25 mg/kg ou 0,325 mg/kg de cada anticorpo individual: H1H15377P, H1H15381P, H1H15399P, LTM14, LC10 ou um anticorpo de controle corespondente com o isotipo. Um dia após a injeção, os camundongos foram desafiados intratecalmente com 50 pL de S. aureus CA-127 (1,3 x 108 CFU/camundongo) que cresceram até a fase log (ODeoo ^1) em TSB a 37°C, foram lavados e ressuspensos em PBS. Os camundongos foram eutanasiados por anestesia 18 horas após a infecção e os pulmões foram extraídos e homogeneizados. Diluições em série dos lisados do pulmão foram plaqueadas em placas de TSA. As placas foram incubadas durante a noite (16 a 18 horas) a 37QC
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 232/274
92/94 e as colônias bacterianas foram contadas no dia seguinte para determinação da carga bacteriana.
[0180] Todos os três anticorpos da invenção testados foram eficazes quando administrados a 1,25 mg/kg em comparação com LTM14, LC10 e anticorpo de controle correspondente com o isotipo, diminuindo a carga bacteriana nos pulmões em 1 log (Figura 8a). Ο H1H15399P também foi eficaz na diminuição da carga bacteriana quando administrado a 0,325 mg/kg (Figura 8b). Todos os outros mAbs de Hemolisina A testados não reduziram significativamente as bactérias nos pulmões dos camundongos com esta dose mais baixa (Figura 8b).
Exemplo 14. Competição cruzada Octeto entre diferentes anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A usando método pré-complexo [0181] Para avaliar se dois anticorpos competem uns com os outros por epitopos de ligação em Hemolisina A (purificada de Staphylococcus aureus), a competição de ligação entre anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A foi determinada usando um ensaio de interferometría de biocamada livre de rótulo em um biossensor RED384 Octet (Pall ForteBio Corp.). Todo o experimento foi realizado a 25QC em HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCI 0,15 M, EDTA 3 mM, 0,05% v/v Tween-20, 1,0 mg/mL BSA (tampão Octet HBS-ET) com a placa de agitação na velocidade de 1.000 rpm. Cerca de 1,5 a 2,5 nm de anticorpo monoclonal anti-Hemolisina A foram primeiro capturados em pontas biossensoras Octet revestidas com anticorpo anti-hFc (Pali ForteBio Corp., # 18-5060) submergindo as pontas durante dois minutos em cavidades contendo 50 pg/mL de solução de anticorpo monoclonal anti-Hemolisina A (mAb-1). As pontas do biossensor capturadas com anticorpo foram então saturadas com um anticorpo monoclonal de controle do isotipo H4H de bloqueio (mAb de bloqueio) por imersão em poços contendo 100 pg/mL de solução de mAb de bloqueio durante três minutos. As pontas do biossensor foram
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 233/274
93/94 então subsequentemente mergulhadas durante quatro minutos em poços contendo 100 nM de Hemolisina A previamente incubada por 2 horas com 1 μΜ de um segundo anticorpo monoclonal anti-Hemolisina A (mAb-2). As pontas do biossensor foram lavadas em tampão Octet HBSET entre cada etapa do experimento. A resposta de ligação em tempo real foi monitorada durante o curso do experimento e a resposta de ligação no final de cada etapa foi registada. A resposta da ligação do mAb-2 pré-complexado à Hemolisina A ao mAb-1 foi corrigida quanto à ligação de base, comparação e o comportamento competitivo/não competitivo de diferentes anticorpos monoclonais anti-Hemolisina A foi determinado. A Tabela 17 define explicitamente as relações de anticorpos que competem em ambas as direções, independentemente da ordem de ligação.
Tabela 17: Competição cruzada de anticorpos anti-Hemolisina A para ligação à Hemolisina A
| Primeiro mAb (mAb-1) capturado usando Biossensores AHC Octeto | Anticorpos mAb-2 Apresentados para Competir com o mAb-1 |
| H1H15404P | H1H15410P, H1H15376P, H1H15418P2 |
| H1H15410P | H1H15404P, H1H15376P, H1H15418P2 |
| H1H15376P | H1H15404P, H1H15410P, H1H15418P2, H1H15375P, H1H15377P, H1H15405P |
| H1H15418P2 | H1H15404P, H1H15410P, H1H15376P, H1H15375P, H1H15377P, H1H15405P |
| H1H15375P | H1H15376P, H1H15418P2, H1H15377P, H1H15405P, H1H15379P, H1H15408P, H1H15381P, H1H15378P, H1H15399P |
| H1H15377P | H1H15376P, H1H15418P2, H1H15375P, H1H15405P, H1H15379P, H1H15408P, H1H15381P, H1H15378P, H1H15399P |
| H1H15405P | H1H15376P, H1H15418P2, H1H15375P, H1H15377P, H1H15379P, H1H15408P, H1H15381P, H1H15378P, H1H15399P |
| H1H15379P | H1H15375P, H1H15377P, H1H15405P, H1H15408P, H1H15381P, H1H15378P, H1H15399P, H1H15420P2, H1H15380P, H1H15414P |
| H1H15408P | H1H15375P, H1H15377P, H1H15405P, H1H15379P, H1H15381P, H1H15378P, H1H15399P, H1H15420P2, H1H15380P, H1H15414P |
Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 234/274
94/94
| H1H15375P, | H1H15377P, | H1H15405P, | H1H15379P, | |
| H1H15381P | H1H15408P, | H1H15378P, | H1H15399P, | H1H15420P2, |
| H1H15380P, H1H15414P | ||||
| H1H15375P, | H1H15377P, | H1H15405P, | H1H15379P, | |
| H1H15378P | H1H15408P, | H1H15381P, | H1H15399P, | H1H15420P2, |
| H1H15380P, H1H15414P | ||||
| H1H15375P, | H1H15377P, | H1H15405P, | H1H15379P, | |
| H1H15399P | H1H15408P, | H1H15381P, | H1H15378P, | H1H15420P2, |
| H1H15380P, H1H15414P | ||||
| H1H15420P2 | H1H15379P, H1H15408P, H1H15381P, H1H15399P, H1H15380P, H1H15414P | H1H15378P, | ||
| H1H15380P | H1H15379P, H1H15408P, H1H15399P, H1H15420P2 | H1H15381P, | H1H15378P, | |
| H1H15414P | H1H15379P, H1H15408P, H1H15399P, H1H15420P2 | H1H15381P, | H1H15378P, |
[0182] A presente invenção não deve ser limitada no seu âmbito pelas modalidades específicas aqui descritas. De fato, várias modificações da invenção, além das descritas aqui, ficarão evidentes para os versados na técnica a partir da descrição anterior e das figuras anexas. Tais modificações pretendem ser abrangidas pelo escopo das reivindicações anexas.
Claims (22)
- REIVINDICAÇÕES1. Anticorpo monoclonal humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à Hemolisina A, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno apresenta uma ou mais propriedades selecionadas do grupo que consiste em:(a) ligar-se à Hemolisina A do tipo selvagem a 37°C com uma constante de equilíbrio de dissociação de ligação (Kd) inferior a cerca de 80 nM como medida por ressonância de plásmon de superfície;(b) ligar-se à Hemolisina A do tipo selvagem a 37°C com uma meia-vida dissociativa (t1 /2) superior a cerca de 0,5 minuto medida por ressonância de plásmon de superfície;(c) ligar-se à Hemolisina A do tipo selvagem a 25°C com um Kd inferior a cerca de 30 nM, como medido pela ressonância de plásmon de superfície;(d) ligar-se à Hemolisina A do tipo selvagem a 25°C com um t1/2 maior que cerca de 1,5 minuto, como medido por ressonância de plásmon de superfície;(e) ligar-se à Hemolisina A modificada a 37°C com uma constante de equilíbrio de dissociação de ligação (Kd) inferior a cerca de 20 nM medida por ressonância de plásmon de superfície;(f) ligar-se à Hemolisina A modificada a 37°C com uma meiavida dissociativa (t1 /2) superior a cerca de 0,5 minuto medida por ressonância de plásmon de superfície;(g) ligar-se à Hemolisina A modificada a 25°C com um Kd inferior a cerca de 10 nM, como medido pela ressonância de plásmon de superfície;(h) ligar-se à Hemolisina A modificada a 25°C com um t1/2 maior que cerca de 1,5 minuto, como medido por ressonância de plásmon de superfície;Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 236/274
- 2/9 (i) inibir a hemólise dos glóbulos vermelhos de coelho mediada por hemolisina A por uma cepa de S.aureus selecionada do grupo que consiste em GA201; CA-127; TCH1516; GA229; 8:03; 27-05; 94: 1013;e7031;e (j) bloquear a interação entre hemolisina A e ADAM10.2. Anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à Hemolisina A, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeias pesadas (CDRs) (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) contidas em qualquer uma das sequências da região variável da cadeia pesada (HCVR) selecionadas do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e três CDRs de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) contidas em qualquer uma das sequências da região variável de cadeia leve (LCVR) selecionadas do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.
- 3. Anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma HCVR compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 2, 22 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282.
- 4. Anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a3, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma LCVR compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 10, 30 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 237/2743/9
- 5. Anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende: (a) um HCVR compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs : 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e (b) uma LCVR compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.
- 6. Anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende:(a) um domínio HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 4, 24, 44, 64, 84, 104, 124, 144, 164, 184, 204, 224, 244, 264 e 284;(b) um domínio HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 26, 46, 66, 86, 106, 126, 146, 166, 186, 206, 226, 246, 266 e 286;(c) um domínio HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 8, 28, 48, 68, 88, 108, 128, 148, 168, 188, 208, 228, 248, 268 e 288;(d) um domínio LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 12, 32, 52, 72, 92, 112, 132, 152, 172, 192, 212, 232, 252 e 272;(e) um domínio LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 14, 34, 54, 74, 94, 114, 134, 154, 174, 194, 214, 234, 254 e 274; e/ou (f) um domínio LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 16,Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 238/27436, 56, 76, 96, 116, 136, 156, 176, 196, 216, 236, 256 e 276.
- 7. Anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende um par de sequências de aminoácidos HCVR/LCVR selecionado do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 2/10, 22/30, 42/50, 62/70, 82/90, 102/110, 122/130, 142/150, 162/170, 182/190,202/210,222/230, 242/250, 262/270 e 282/270.
- 8. Anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende:(i) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 20 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 18;(ii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 40, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 38;(iii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 60 e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 58;(iv) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 80, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 78;(v) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 100 ePetição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 239/2745/9 uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 98;(vi) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 120, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 118;(vii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 140, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 138;(viii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 160, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 158;(ix) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 180, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 178;(x) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 200, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 198;(xi) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 220, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 218;(xii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 240, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 238;Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 240/2746/9 (xiii) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 260, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 258;(xiv) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 280, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 278; e/ou (xv) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 280, e uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 290.
- 9. Fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ligação ao antígeno é um fragmento Fab, um fragmento F(ab’)2, um fragmento Fd, um fragmento Fv, uma molécula de Fv de cadeia única (scFv) ou um fragmento dAb.
- 10. Anticorpo isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que liga o mesmo epitopo na Hemolisina A como um anticorpo de referência, caracterizado pelo fato de que compreende as regiões que determinam complementariedade (CDRs) de uma região variável da cadeia pesada (HCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e as CDR de uma região variável de cadeia leve (LCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.
- 11. Anticorpo isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compete pela ligação à Hemolisina A com um anticorpo de referência, caracterizado pelo fato de que compreende as regiõesPetição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 241/2747/9 determinantes de complementaridade (CDRs) de uma região variável da cadeia pesada (HCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 22, 42, 62, 82, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262 e 282; e uma região variável de cadeia leve (LCVR) compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 10, 30, 50, 70, 90, 110, 130, 150, 170, 190, 210, 230, 250 e 270.
- 12. Método para preparar um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende:(i) introduzir um ou mais polinucleotídeos que codificam uma cadeia leve de imunoglobulina do dito anticorpo ou fragmento e uma cadeia pesada de imunoglobulina do dito anticorpo ou fragmento em uma célula hospedeira;(ii) cultivar a célula hospedeira em um meio de crescimento em condição favorável à expressão do(s) polinucleotídeo(s); e (iii) opcionalmente isolar o anticorpo ou fragmento da célula hospedeira e/ou meio em que a célula hospedeira é cultivada.
- 13. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, caracterizado pelo fato de que é o produto do método como definido na reivindicação 12.
- 14. Dispositivo ou recipiente de injeção, caracterizado pelo fato de que compreende um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13.
- 15. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo humano isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à Hemolisina A como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13, e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, um ou mais agentes terapêuticos adicionais.Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 242/2748/9
- 16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que compreende o dito agente terapêutico adicional que é um antibiótico, um NSAID, um corticosteroide, LC10, LTM14 e/ou prednisona.
- 17. Método para prevenir ou tratar uma infecção por Staphylococcus aureus em um paciente em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13; ou uma composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 15 e 16, ao paciente.
- 18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é administrado por via subcutânea, intravenosa, intradérmica, oral ou intramuscular.
- 19. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 e 18, caracterizado pelo fato de que a infecção por Staphylococcus aureus produz uma condição selecionada do grupo que consiste em: dermonecrose, infecções da pele e tecidos moles, um abscesso, infecção do local cirúrgico, infecção da articulação protética, bacteremia, septicemia, artrite séptica, meningite, osteomielite, endocardite, pneumonia, síndrome do choque tóxico, mastite, furunculose, carbunculose, um furúnculo;e a administração do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno trata a condição ou reduz a gravidade de um ou mais sintomas da condição.
- 20. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de um paciente com uma infecção por Staphylococcus aureus.Petição 870190059795, de 27/06/2019, pág. 243/2749/9
- 21. Composição compreendendo um ou mais anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de uma infecção por Staphylococcus aureus.
- 22. Uso do anticorpo isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com o definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para tratar um paciente com uma infecção por Staphylococcus aureus.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762441786P | 2017-01-03 | 2017-01-03 | |
| US62/441,786 | 2017-01-03 | ||
| PCT/US2018/012044 WO2018128973A1 (en) | 2017-01-03 | 2018-01-02 | Human antibodies to s. aureus hemolysin a toxin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BR112019013375A2 true BR112019013375A2 (pt) | 2020-02-11 |
Family
ID=61054509
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR112019013375-5A BR112019013375A2 (pt) | 2017-01-03 | 2018-01-02 | Anticorpos humanos para toxina da hemosilina a de s. aureus |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10463748B2 (pt) |
| EP (1) | EP3565835A1 (pt) |
| JP (2) | JP2020504759A (pt) |
| KR (1) | KR20190101435A (pt) |
| CN (1) | CN110167960B (pt) |
| AR (1) | AR110719A1 (pt) |
| AU (1) | AU2018206531A1 (pt) |
| BR (1) | BR112019013375A2 (pt) |
| CA (1) | CA3048989A1 (pt) |
| CL (1) | CL2019001836A1 (pt) |
| CO (1) | CO2019006902A2 (pt) |
| EA (1) | EA201991643A1 (pt) |
| IL (1) | IL267600A (pt) |
| MA (1) | MA47202A (pt) |
| MX (1) | MX2019007784A (pt) |
| PH (1) | PH12019501425A1 (pt) |
| TW (2) | TWI781130B (pt) |
| WO (1) | WO2018128973A1 (pt) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI781130B (zh) | 2017-01-03 | 2022-10-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗金黃色葡萄球菌溶血素ａ毒素之人類抗體 |
| WO2020106461A2 (en) * | 2018-11-08 | 2020-05-28 | Celldex Therapeutics, Inc. | Anti-mertk antibodies and methods of use thereof |
| CN109400704B (zh) * | 2018-11-14 | 2020-07-21 | 珠海泰诺麦博生物技术有限公司 | 一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用 |
| CA3110377A1 (en) * | 2018-11-21 | 2020-05-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-staphylococcus antibodies and uses thereof |
| KR20220019755A (ko) | 2019-06-11 | 2022-02-17 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | PcrV에 결합하는 항-PcrV 항체, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물, 및 이의 사용 방법 |
| CN112538112B (zh) * | 2019-09-20 | 2023-10-27 | 迈威(上海)生物科技股份有限公司 | 抗α-溶血素的抗体及其应用 |
| KR20210095781A (ko) | 2020-01-24 | 2021-08-03 | 주식회사 에이프릴바이오 | 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물 |
| CN113444172A (zh) * | 2020-03-25 | 2021-09-28 | 兴盟生物医药(苏州)有限公司 | 金黄色葡萄球菌α-毒素特异性抗体及其应用 |
| BR112023013790A2 (pt) * | 2021-01-11 | 2023-10-03 | Starmab Biologics Suzhou Co Ltd | Proteína de ligação a antígeno dirigida à alfa-toxina de staphylococcus aureus e aplicação da mesma |
| KR20230162797A (ko) * | 2021-03-22 | 2023-11-28 | 스타맵 바이오로직스 (쑤저우) 씨오., 엘티디 | 뉴몰리신을 표적으로 하는 항원 결합 단백질 및 이의 용도 |
| WO2023208123A1 (zh) * | 2022-04-28 | 2023-11-02 | 珠海泰诺麦博制药股份有限公司 | 特异性结合金黄色葡萄球菌Hla毒素的全人源单克隆抗体 |
| CN115894674B (zh) * | 2022-12-20 | 2023-07-25 | 厦门润康源生物科技有限公司 | 一种用于检测冠状病毒的抗体及制备方法和应用 |
| CN116789814B (zh) * | 2023-06-27 | 2024-03-29 | 重庆原伦生物科技有限公司 | 一种特异性结合金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用 |
Family Cites Families (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2437213A1 (fr) | 1978-09-28 | 1980-04-25 | Cm Ind | Produits cytotoxiques formes par liaison covalente de la chaine a de la ricine avec un anticorps et leur procede de preparation |
| GB8426463D0 (en) | 1984-10-19 | 1984-11-28 | Technology Licence Co Ltd | Monoclonal antibodies |
| WO2000071585A1 (en) | 1999-05-03 | 2000-11-30 | Medarex, Inc. | Human antibodies to staphylococcus aureus |
| US6573096B1 (en) | 2000-04-01 | 2003-06-03 | The Research Foundation At State University Of New York | Compositions and methods for inhibition of cancer invasion and angiogenesis |
| US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
| US20040101920A1 (en) | 2002-11-01 | 2004-05-27 | Czeslaw Radziejewski | Modification assisted profiling (MAP) methodology |
| US7850962B2 (en) | 2004-04-20 | 2010-12-14 | Genmab A/S | Human monoclonal antibodies against CD20 |
| US8257740B1 (en) | 2011-08-15 | 2012-09-04 | Gp Medical, Inc. | Pharmaceutical composition of nanoparticles |
| US8246995B2 (en) | 2005-05-10 | 2012-08-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Hydrophobic nanotubes and nanoparticles as transporters for the delivery of drugs into cells |
| US7411046B2 (en) | 2005-08-02 | 2008-08-12 | Arius Research Inc | Cancerous disease modifying antibodies |
| US8258256B2 (en) | 2006-01-05 | 2012-09-04 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for the treatment of cancer |
| US7420040B2 (en) | 2006-02-24 | 2008-09-02 | Arius Research Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of TROP-2 |
| US7582298B2 (en) | 2006-06-02 | 2009-09-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity antibodies to human IL-6 receptor |
| WO2007145689A1 (en) | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Nabi Biopharmaceuticals | Use of alpha-toxin for treating and preventing staphylococcus infections |
| US20180221466A9 (en) | 2006-06-12 | 2018-08-09 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Use of alpha-toxin for treating and preventing staphylococcus infections |
| US9181329B2 (en) | 2007-08-31 | 2015-11-10 | The University Of Chicago | Methods and compositions related to immunizing against Staphylococcal lung diseases and conditions |
| EP2666784B1 (en) | 2007-08-31 | 2017-04-05 | University Of Chicago | Methods and compositions related to immunizing against staphylococcal lung diseases and conditions |
| ES2376175T3 (es) | 2007-09-28 | 2012-03-09 | Bind Biosciences, Inc. | Direccionamiento a células de c�?ncer usando nanopart�?culas. |
| EP2291196A4 (en) | 2008-05-12 | 2012-05-30 | Strox Biopharmaceuticals Llc | FOR STAPHYLOCOCCUS AUREUS SPECIFIC ANTIBODY PREPARATIONS |
| US8277812B2 (en) | 2008-10-12 | 2012-10-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen |
| RU2522002C2 (ru) | 2009-06-26 | 2014-07-10 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом |
| EP2284193A1 (en) * | 2009-08-10 | 2011-02-16 | Kenta Biotech AG | Human monoclonal antibody against S. aureus derived apha-toxin and its use in treating or preventing abscess formation |
| AU2011295702A1 (en) | 2010-09-02 | 2013-04-04 | Excelimmune, Inc. | Staphylococcus aureus specific human recombinant polyclonal antibodies and uses thereof |
| ES2709065T7 (es) * | 2011-02-08 | 2021-12-09 | Medimmune Llc | Anticuerpos que se unen específicamente a la toxina alfa de Staphylococcus aureus y métodos de uso |
| US20140286960A1 (en) | 2011-07-28 | 2014-09-25 | Cangene Corporation | Staphlococcus aureus alpha-hemolysin antibodies |
| WO2013093693A1 (en) * | 2011-12-22 | 2013-06-27 | Rinat Neuroscience Corp. | Staphylococcus aureus specific antibodies and uses thereof |
| PT2668208E (pt) | 2012-04-17 | 2015-10-12 | Arsanis Biosciences Gmbh | Anticorpo de staphylococcus aureus de reação cruzada |
| MX367082B (es) | 2012-11-06 | 2019-08-05 | Medimmune Llc | Anticuerpos anti toxina alfa de s. aureus (anti-ta) y sus usos. |
| AU2014336111A1 (en) * | 2013-10-17 | 2016-04-14 | Arsanis Biosciences Gmbh | Cross-reactive Staphylococcus aureus antibody sequences |
| TWI719938B (zh) | 2014-06-19 | 2021-03-01 | 美商麥迪紐有限責任公司 | 多重細菌感染之治療 |
| TWI702229B (zh) * | 2014-12-19 | 2020-08-21 | 美商再生元醫藥公司 | 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體 |
| JP2018513168A (ja) | 2015-04-17 | 2018-05-24 | アルサニス・バイオサイエンスズ・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 抗スタフィロコッカス・アウレウス抗体組み合わせ製剤 |
| TWI781130B (zh) | 2017-01-03 | 2022-10-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗金黃色葡萄球菌溶血素ａ毒素之人類抗體 |
-
2017
- 2017-12-29 TW TW106146395A patent/TWI781130B/zh active
- 2017-12-29 TW TW111136305A patent/TW202311284A/zh unknown
-
2018
- 2018-01-02 CA CA3048989A patent/CA3048989A1/en active Pending
- 2018-01-02 JP JP2019536141A patent/JP2020504759A/ja active Pending
- 2018-01-02 MA MA047202A patent/MA47202A/fr unknown
- 2018-01-02 KR KR1020197022441A patent/KR20190101435A/ko active Search and Examination
- 2018-01-02 EA EA201991643A patent/EA201991643A1/ru unknown
- 2018-01-02 BR BR112019013375-5A patent/BR112019013375A2/pt unknown
- 2018-01-02 CN CN201880005378.7A patent/CN110167960B/zh active Active
- 2018-01-02 EP EP18701825.4A patent/EP3565835A1/en active Pending
- 2018-01-02 WO PCT/US2018/012044 patent/WO2018128973A1/en unknown
- 2018-01-02 MX MX2019007784A patent/MX2019007784A/es unknown
- 2018-01-02 US US15/860,174 patent/US10463748B2/en active Active
- 2018-01-02 AU AU2018206531A patent/AU2018206531A1/en active Pending
- 2018-01-03 AR ARP180100006A patent/AR110719A1/es unknown
-
2019
- 2019-06-20 PH PH12019501425A patent/PH12019501425A1/en unknown
- 2019-06-24 IL IL267600A patent/IL267600A/en unknown
- 2019-06-27 CO CONC2019/0006902A patent/CO2019006902A2/es unknown
- 2019-07-02 CL CL2019001836A patent/CL2019001836A1/es unknown
- 2019-09-19 US US16/575,755 patent/US10940211B2/en active Active
-
2021
- 2021-01-27 US US17/159,920 patent/US11571482B2/en active Active
-
2022
- 2022-10-25 JP JP2022170270A patent/JP2023011710A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PH12019501425A1 (en) | 2020-06-15 |
| JP2020504759A (ja) | 2020-02-13 |
| US20210162059A1 (en) | 2021-06-03 |
| CN110167960A (zh) | 2019-08-23 |
| TW201837054A (zh) | 2018-10-16 |
| WO2018128973A1 (en) | 2018-07-12 |
| TW202311284A (zh) | 2023-03-16 |
| AU2018206531A1 (en) | 2019-07-25 |
| US20200016275A1 (en) | 2020-01-16 |
| MX2019007784A (es) | 2019-09-06 |
| CO2019006902A2 (es) | 2019-07-31 |
| IL267600A (en) | 2019-08-29 |
| US10940211B2 (en) | 2021-03-09 |
| US11571482B2 (en) | 2023-02-07 |
| MA47202A (fr) | 2019-11-13 |
| US10463748B2 (en) | 2019-11-05 |
| EA201991643A1 (ru) | 2020-01-20 |
| CL2019001836A1 (es) | 2019-10-04 |
| EP3565835A1 (en) | 2019-11-13 |
| TWI781130B (zh) | 2022-10-21 |
| CA3048989A1 (en) | 2018-07-12 |
| US20180214569A1 (en) | 2018-08-02 |
| CN110167960B (zh) | 2023-01-13 |
| AR110719A1 (es) | 2019-04-24 |
| JP2023011710A (ja) | 2023-01-24 |
| KR20190101435A (ko) | 2019-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11571482B2 (en) | Human antibodies to S. aureus Hemolysin A toxin | |
| JP7500812B2 (ja) | 中東呼吸器症候群－コロナウイルススパイクタンパク質に対するヒト抗体 | |
| KR102146692B1 (ko) | 항-ｐｄｇｆｒ-베타 항체 및 이의 용도 | |
| ES2898620T3 (es) | Anticuerpos humanos contra GREM 1 | |
| ES2647389T3 (es) | Anticuerpos para GDF8 humano | |
| DK2888280T3 (en) | Human antibodies to GFR3 and methods for its use | |
| CN113966343A (zh) | 结合PcrV的抗PcrV抗体、包含抗PcrV抗体的组合物及其使用方法 | |
| CN111148758B (zh) | 结合葡萄球菌属靶抗原和补体成分的双特异性抗原结合分子及其用途 | |
| BR112021005522A2 (pt) | anticorpo isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, composição farmacêutica, molécula polinucleotídica isolada, vetor, célula, e, métodos de prevenção, tratamento ou melhoria de infecção por s. aureus, uma condição causada por infecção por s. aureus, ou pelo menos um sintoma de infecção por s. aureus, ou de diminuir a frequência ou gravidade de infecção por s. aureus, uma condição causada por infecção por s. aureus, de pelo menos um sintoma de infecção por s. aureus, para prevenir uma infecção por s. aureus, de prevenção, tratamento ou melhoria de infecção por s. aureus, ou de diminuir a frequência ou gravidade de infecção por s. aureus, em um indivíduo com um cateter, uma articulação protética ou qualquer outro objeto estranho, para prevenir, tratar ou melhorar a infecção estafilocócica, ou para diminuir a frequência ou gravidade da infecção estafilócica | |
| EA041355B1 (ru) | ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К ТОКСИНУ ГЕМОЛИЗИНУ А S.aureus | |
| NZ795857A (en) | Human antibodies to S. aureus Hemolysin A toxin | |
| ES2847124T3 (es) | Anticuerpos humanos contra la proteína asociada a la resistencia sérica de Trypanosoma brucei rhodesiense |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B350 | Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette] |