KR20230162797A - 뉴몰리신을 표적으로 하는 항원 결합 단백질 및 이의 용도 - Google Patents

뉴몰리신을 표적으로 하는 항원 결합 단백질 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230162797A
KR20230162797A KR1020237036175A KR20237036175A KR20230162797A KR 20230162797 A KR20230162797 A KR 20230162797A KR 1020237036175 A KR1020237036175 A KR 1020237036175A KR 20237036175 A KR20237036175 A KR 20237036175A KR 20230162797 A KR20230162797 A KR 20230162797A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
binding protein
isolated antigen
Prior art date
Application number
KR1020237036175A
Other languages
English (en)
Inventor
마오마오 안
쉬유 구오
시민 천
씨란 치우
보화 리
Original Assignee
스타맵 바이오로직스 (쑤저우) 씨오., 엘티디
스타맵 바이오로직스 (상하이) 씨오., 엘티디
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 스타맵 바이오로직스 (쑤저우) 씨오., 엘티디, 스타맵 바이오로직스 (상하이) 씨오., 엘티디 filed Critical 스타맵 바이오로직스 (쑤저우) 씨오., 엘티디
Publication of KR20230162797A publication Critical patent/KR20230162797A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
    • C07K16/1275—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Streptococcus (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56944—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/315—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • G01N2333/3156—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci from Streptococcus pneumoniae (Pneumococcus)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

분리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 항체 중쇄 가변 영역 VH 중 적어도 하나의 CDR을 포함하고, VH는 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 분리된 항원 결합 단백질은 뉴몰리신 단백질 및 이의 변이체에 특이적으로 결합할 수 있으며, 폐렴연쇄상구균 감염으로 인한 질병 및/또는 병증의 예방 및/또는 치료에서 분리된 항원 결합 단백질의 용도를 더 제공한다.

Description

뉴몰리신을 표적으로 하는 항원 결합 단백질 및 이의 용도
본 출원은 바이오 의약 분야에 관한 것으로, 보다 상세하게는 뉴몰리신 단백질(PLY)을 표적으로 할 수 있는 항원 결합 단백질, 및 폐렴연쇄상구균 감염의 치료 및 예방 분야에서 이의 응용에 관한 것이다.
폐렴연쇄상구균은 폐렴구균으로도 불리며, 사람의 비인두에 광범위하게 서식하는데, 유기체의 저항력이 저하되면 폐나 중추신경계 감염을 유발할 수 있고, 심하면 균혈증이나 패혈증을 일으킬 수 있다.
뉴몰리신(PLY)은 폐렴연쇄상구균의 중요한 독성 인자이며, 폐렴연쇄상구균에 의한 감염 형성 과정에 중요한 역할을 한다. PLY는 폐 조직의 상피, 내피 및 면역 세포를 파괴하고, 혈관 투과성 및 폐렴연쇄상구균 서식, 전파 및 침입을 증가시키며, 환자 폐 기능에 영향을 미쳐, 급성 폐 손상, 심지어 급성 호흡곤란 증후군을 유발할 수 있다. 따라서 폐렴연쇄상구균 감염에 대항할 효과적인 약물의 개발이 시급하다.
본 출원은 분리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 이는 1) 뉴몰리신 단백질 및 이의 변이체에 특이적으로 결합할 수 있고, 2) 뉴몰리신 단백질에 대해 높은 친화력 및 중화 활성을 가지고, 3) 폐렴연쇄상구균에 의한 감염을 효과적으로 차단할 수 있고, 4) 폐렴연쇄상구균에 의한 질병 및/또는 병증을 효과적으로 예방 및/또는 치료할 수 있는 성질 중 하나 이상을 갖는다.
일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 여기에는 항체 중쇄 가변 영역 VH 중 적어도 하나의 CDR이 포함되고, VH는 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR3를 포함하고, HCDR3는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR2를 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR1을 포함하고, HCDR1은 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3를 포함하고, HCDR1은 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR1을 포함하고, H-FR1의 C-말단은 HCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, H-FR1은 SEQ ID NO: 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, H-FR1은 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR2를 포함하고, H-FR2는 HCDR1과 HCDR2 사이에 위치하고, H-FR2는 SEQ ID NO: 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, H-FR2는 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR3를 포함하고, H-FR3은 HCDR2와 HCDR3 사이에 위치하고, H-FR3은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, H-FR3은 SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR4를 포함하고, H-FR4의 N-말단은 HCDR3의 C-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, H-FR4는 SEQ ID NO: 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, H-FR4는 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함하고, H-FR1은 SEQ ID NO: 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR2는 SEQ ID NO: 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR3은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR4는 SEQ ID NO: 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함하고, H-FR1은 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR2는 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR3은 SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR4는 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은,
1) H-FR1은 SEQ ID NO: 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR2는 SEQ ID NO: 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR3은 SEQ ID NO: 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR4는 SEQ ID NO: 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
2) H-FR1은 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR2는 SEQ ID NO: 16로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR3은 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR4는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것으로 이루어진 어느 하나의 군으로부터 선택되는 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 VH를 포함하고, VH는 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 VH는 SEQ ID NO: 22 또는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 불변 영역으로부터 유래된다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역으로부터 유래된다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 중쇄를 포함하고, 중쇄는 SEQ ID NO: 28 또는 SEQ ID NO: 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 가변 영역 VL 중 적어도 하나의 CDR을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR3를 포함하고, LCDR3는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR2를 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR1을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3를 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 SEQ ID NO: 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR1을 포함하고, L-FR1의 C-말단은 LCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, L-FR1은 SEQ ID NO: 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 L-FR1은 SEQ ID NO: 11 또는 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR2를 포함하고, L-FR2는 LCDR1과 LCDR2 사이에 위치하고, L-FR2는 SEQ ID NO: 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 L-FR2는 SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR3를 포함하고, L-FR3은 LCDR2와 LCDR3 사이에 위치하고, L-FR3은 SEQ ID NO: 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 L-FR3은 SEQ ID NO: 13 또는 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR4를 포함하고, L-FR4의 N-말단은 LCDR3의 C-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함하고, L-FR1은 SEQ ID NO: 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR2는 SEQ ID NO: 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR3은 SEQ ID NO: 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함하고, L-FR1은 SEQ ID NO: 11 또는 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR2는 SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR3은 SEQ ID NO: 13 또는 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은,
1) L-FR1은 SEQ ID NO: 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR2는 SEQ ID NO: 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR3은 SEQ ID NO: 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
2) L-FR1은 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR2는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR3은 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것으로 이루어진 어느 하나의 군으로부터 선택되는 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 VL을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 VL은 SEQ ID NO: 23 또는 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 경쇄 불변 영역은 인간 Igκ 불변 영역으로부터 유래된다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질의 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 경쇄를 포함하고, 경쇄는 SEQ ID NO: 29 또는 SEQ ID NO: 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은,
1) VH는 SEQ ID NO: 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
2) VH는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것으로 이루어진 어느 하나의 군으로부터 선택되는 VH 및 VL을 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 실시방식에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fv 단편, F(ab')2, F(ab)2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb를 포함한다.
일부 실시방식에서, 항체는 단클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 완전 인간화 항체로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택된다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 뉴몰리신 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다.
일부 실시방식에서, 뉴몰리신은 야생형 뉴몰리신 및 이의 변이체를 포함한다.
일부 실시방식에서, 뉴몰리신 단백질은 야생형 뉴몰리신 단백질에 비해, 146번째 아미노산이 결실된 뉴몰리신 단백질 변이체를 포함한다.
일부 실시방식에서, 분리된 항원 결합 단백질은 폐렴연쇄상구균에 의한 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료할 수 있다.
일부 실시방식에서, 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발되는 질병 및/또는 병증의 합병증을 포함한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질을 포함하는 폴리펩티드 분자를 더 제공한다.
일부 실시방식에서, 폴리펩티드 분자는 융합 단백질을 포함한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질을 포함하는 면역 접합체를 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질 또는 폴리펩티드 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 핵산 분자를 포함하는 벡터를 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 핵산 분자 또는 벡터를 포함하는, 세포를 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 면역 접합체, 핵산 분자, 벡터 및/또는 세포, 및 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약학 조성물을 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 항원 결합 단백질을 발현시키는 조건 하에서 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질의 제조 방법을 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 면역 접합체, 핵산 분자, 벡터, 세포 및/또는 약학 조성물은 단독 사용하거나 다른 약물과 병용한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 약물 제조에서 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 면역 접합체, 핵산 분자, 벡터, 세포 및/또는 약학 조성물의 용도를 더 제공하며, 약물은 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료하는 데 사용된다.
일부 실시방식에서, 질병 및/또는 병증 및 이의 합병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발 또는 매개된다.
일부 실시방식에서, 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발되거나 매개되는 질병 및/또는 병증의 합병증을 포함한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 면역 접합체, 핵산 분자, 벡터, 세포 및/또는 약학 조성물을 사용하는 단계를 포함하는, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 방법을 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 면역 접합체, 핵산 분자, 벡터, 세포 및/또는 약학 조성물을 포함하는, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 키트를 더 제공한다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 면역 접합체, 핵산 분자, 벡터, 세포 및/또는 약학 조성물의 키트 제조에서의 용도를 더 제공하며, 키트는 시료에서 뉴몰리신의 존재 및/또는 함량을 검출하는 데 사용된다.
당업자는 이하의 상세한 설명을 통해 본 출원의 기타 양상과 장점을 용이하게 이해할 수 있다. 이하의 상세한 설명은 본 출원의 예시적 실시방식을 나타내고 설명한 것이다. 당업자는, 본 출원의 내용을 통해 당업자가 본 출원에 언급된 발명의 사상과 범위를 벗어나지 않고, 개시된 구체적인 실시방식을 변경할 수 있음을 알 수 있다. 따라서, 본 출원의 첨부 도면과 명세서의 설명은 예시적인 것일 뿐이며, 제한적인 것이 아니다.
본 출원에 언급된 발명의 구체적인 특징은 첨부된 특허청구범위와 같다. 이하에서 상세하게 설명된 예시적 실시방식과 첨부 도면을 참조하여 본 출원에 언급된 발명의 특징과 장점을 잘 이해할 수 있다. 첨부 도면에 대한 간략한 설명은 다음과 같다:
도 1은 본 출원에 따른 항원 결합 단백질과 PLY 단백질의 결합 활성을 측정한 것이다.
도 2는 본 출원에 따른 항원 결합 단백질과 PLY mut 단백질의 결합 활성을 측정한 것이다.
도 3은 본 출원에 따른 항원 결합 단백질의 생체외 뉴몰리신의 토끼 적혈구 용혈 활성에 대한 중화 활성을 도시한 것이다.
도 4는 본 출원에 따른 항원 결합 단백질의 PLY 독소 모델 마우스에 대한 보호 작용을 도시한 것이다.
도 5는 본 출원에 따른 항원 결합 단백질의 폐렴연쇄상구균 감염 마우스에 대한 보호 작용을 도시한 것이다.
이하에서는 특정한 구체적 실시예를 참조하여 본 출원 발명의 실시방식을 설명하며, 당업자는 본 명세서에 개시된 내용으로부터 본 출원 발명의 다른 장점 및 효과를 용이하게 이해할 수 있을 것이다.
용어 정의
본원에 사용된 용어 "뉴몰리신"은 "Pneumolysin", "PLY" 및 "뉴몰리신 단백질"과 호환될 수 있으며, 통상적으로 폐렴연쇄상구균에 함유된 다기능 독성 인자를 지칭한다. 본 출원에서, 이 용어는 야생형 뉴몰리신 단백질 및 이의 변이체, 유사체, 상동체 및 기능적 활성 단편을 포함할 수 있다. 예를 들어, 뉴몰리신 단백질의 변이체는 야생형 뉴몰리신에 비해, 146번째 아미노산이 결실된 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 기능적 활성 단편은 숙주에서 체액 및/또는 세포 면역 응답이 일어날 수 있는 부분일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "분리된"은 통상적으로 자연 상태에서 인위적 수단으로 획득한 것을 의미한다. 자연계에서 특정 물질이나 성분이 "분리"되는 경우, 그 물질이 있던 자연 환경이 바뀌었거나, 그 물질이 자연 환경으로부터 분리되었거나, 또는 두 가지 상황이 모두 발생한 것일 수 있다. 예를 들어, 특정 생물체 동물 체내에는 분리되지 않은 특정 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드가 자연적으로 존재하는데, 이러한 자연 상태에서 분리된 고순도의 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 분리된 것이라고 부른다. "분리된"이라는 용어는 인위적이거나 합성된 물질이 혼입된 것을 배제하지 않으며, 물질의 활성에 영향을 미치지 않는 기타 불순물의 존재도 배제하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "분리된 항원 결합 단백질"은 통상적으로 자연적으로 존재하는 상태를 벗어난 항원 결합 능력을 가진 단백질을 의미한다. "분리된 항원 결합 단백질"은 항원을 결합하는 부분 및 선택적으로, 항원 결합 부분이 항원 결합 부분의 항원 결합을 촉진하는 형태를 채택하도록 허용하는 프레임워크 또는 프레임워크 부분을 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질은 예를 들어 항체 유래의 단백질 프레임워크 영역(FR) 또는 이식된 CDR 또는 CDR 유도체를 갖는 후보 단백질 프레임워크 영역 또는 인공 프레임워크 영역을 포함할 수 있다. 이러한 프레임워크는, 예를 들어 항원 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화하기 위해 도입되는 돌연변이의 항체 유래 프레임워크 영역 및 예를 들어 생체 적합성 폴리머를 포함하는 완전 합성 프레임워크 영역을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 예를 들어 Korndorfer 등, 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 53(1): 121-129(2003); Roque 등, Biotechnol. Prog. 20: 639-654(2004)를 참조한다. 항원 결합 단백질의 예시에는 인간 항체; 인간화 항체; 키메라 항체; 재조합 항체; 단쇄 항체; 이중 기능성 항체; 삼중 기능성 항체; 사중 기능성 항체; Fab, Fab', Fv 단편, Bs-Fv, F(ab')2, F(ab)2, scFv, di-scFv, dAb, IgD 항체; IgE 항체; IgM 항체; IgG1 항체; IgG2 항체; IgG3 항체; 또는 IgG4 항체 및 이의 단편이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 용어, "CDR"은 "상보성 결정 영역"으로도 불리며, 통상적으로 항체 가변 도메인에서의 영역을 의미하고, 이의 서열은 고도로 가변적이고/이거나 구조적으로 한정된 루프를 형성한다. 통상적으로, 항체에는 6개의 CDR이 포함되며, VH에 3개(HCDR1, HCDR2, HCDR3), VL에 3개(LCDR1, LCDR2, LCDR3)가 있다. 특정 실시방식에서, 중쇄로만 구성된 자연 발생 낙타 항체는 경쇄가 결핍되어도, 그 기능이 정상적이고 안정적일 수 있다. 예를 들어, Hamers-Casterman et al., Nature 363: 446-448(1993); Sheriff et al, Nature Struct. Biol. 3: 733-736(1996)을 참조한다. 항체 CDR은 CCG, Kabat, AbM, Chothia, IMGT, Kabat/Chothia 종합 고려 등과 같이 다양한 암호화 시스템을 통해 결정할 수 있다. 이러한 암호화 시스템은 당업계에서 공지된 것이며, 구체적으로, 예를 들어 http://www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum을 참조할 수 있다. 예를 들어, 항원 결합 단백질의 아미노산 서열 넘버링은 IMGT 넘버링 방식을 따를 수 있다(IMGT, the international ImMunoGeneTics information system@imgt.cines.fr; http://imgt.cines.fr; Lefranc 등, 1999, Nucleic Acids Res. 27: 209-212; Ruiz 등, 2000 Nucleic Acids Res. 28: 219-221; Lefranc 등, 2001, Nucleic Acids Res. 29: 207-209; Lefranc 등, 2003, Nucleic Acids Res. 31: 307-310; Lefranc 등, 2005, DevComp Immunol 29: 185-203). 예를 들어, 항원 결합 단백질의 CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라 결정할 수 있다(예를 들어, Kabat EA &Wu TT(1971) Ann NY AcadSci 190: 382-391 및 Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, FifthEdition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242).
본원에 사용된 용어 "FR"은 통상적으로 항체 가변 도메인의 더 고도의 보존 부분을 의미하며, 프레임워크 영역으로 불린다. 통상적으로, 천연 중쇄와 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR 영역, 즉 VH에 4개(H-FR1, H-FR2, H-FR3, H-FR4), 및 VL에 4개(L-FR1, L-FR2, L-FR3, L-FR4)를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "가변 도메인"과 "가변 영역"은 호환될 수 있으며, 통상적으로 항체 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분을 의미한다. 중쇄와 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"이라고 부를 수 있다(또는 각각 "VH" 및 "VL"이라고 칭함). 이러한 도메인은 통상적으로 항체의 변화가 가장 큰 부분이며(동일한 유형의 다른 항체에 비해), 항원 결합 부위를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "가변"은 통상적으로 항체 사이 가변 도메인의 특정 구간이 서열 상에서 비교적 큰 차이가 존재할 수 있음을 의미한다. 가변 도메인은 항원 결합을 매개하고 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 결정한다. 그러나, 가변성이 전체 가변 도메인 범위 내에 균일하게 분포되는 것은 아니다. 이는 통상적으로 경쇄 및 중쇄 가변 도메인에서 고가변 영역(CDR 또는 HVR)으로 불리는 3개 구간에 집중된다. 가변 도메인의 더 고도로 보존되는 부분은 프레임워크 영역(FR)이라고 부른다. 천연 중쇄와 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR 영역을 포함하며, 대부분은 β-시트 형태를 채택하고, 3개의 CDR에 의해 연결되어, 고리형 연결을 형성하며, 경우에 따라 β-시트 구조의 일부를 형성한다. 각각의 사슬의 CDR은 FR 영역을 통해 근접하게 유지되고, 다른 사슬의 CDR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성을 촉진한다(Kabat et al, Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)).
본원에 사용된 용어 "항체"는 통상적으로 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 이의 유도체를 의미하며, 생체외 또는 생체내에서 생산되는지를 불문하고, 항원 결합 부위를 포함하는 모든 폴리펩티드를 포함한다. 이 용어에는 다클론의, 단클론의, 단일 특이적, 다중 특이적, 비특이적, 인간화된, 단쇄의, 키메라의, 합성된, 재조합된, 하이브리드화된, 돌연변이된 및 이식된 항체가 포함되나 이에 한정되지 않는다. "완전한 항체"에서와 같이, "완전한"이라는 용어로 달리 수식되지 않는 한, 본 발명의 목적상 "항체"라는 용어는 Fab, F(ab')2, Fv, scFv, Fd, dAb 및 항원 결합 기능(예를 들어, 뉴몰리신 단백질에 특이적으로 결합)을 유지하는 다른 항체 단편과 같은 항체 단편도 포함한다. 통상적으로, 이러한 단편은 항원 결합 도메인을 포함해야 한다. 기본적인 4쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경(L)쇄와 2개의 동일한 중(H)쇄로 구성된 헤테로테트라머 당단백질이다. IgM 항체는 5개의 기본적인 헤테로테트라머 단위와 다른 하나의 J쇄로 불리는 폴리펩티드로 구성되며, 10개의 항원 결합 부위를 포함하는 반면, IgA 항체는 J쇄와 결합 및 중합되어 다가 조합을 형성할 수 있는 2 내지 5개의 기본 4쇄 단위를 포함한다. IgG의 경우, 4쇄 단위는 일반적으로 약 150,000달톤이다. 각각의 L쇄는 하나의 공유 이황화 결합을 통해 H쇄와 연결되고, 2개의 H쇄는 H쇄 동종형에 따른 하나 이상의 이황화 결합을 통해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L쇄는 규칙적으로 이격된 사슬 내 이황화물 가교 결합을 더 갖는다. 각각의 H쇄는 N-말단에 가변 도메인(VH)을 가지며, α 및 γ쇄에 대해 각각 3개의 불변 도메인(CH)이 따르고, μ 및 ε 동종형에 대해 4개의 CH 도메인이 따른다. 각각의 L쇄는 N-말단에 가변 도메인(VL)을 가지며, 타단에는 불변 도메인을 갖는다. VL은 VH에 대응하고, CL은 중쇄의 첫 번째 불변 도메인(CH1)에 대응한다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 간주된다. VH와 VL은 쌍을 이루며 단일 항원 결합 부위를 형성한다. 상이한 유형의 항체의 구조와 성질에 대해서는, 예를 들어 Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw(eds), Appleton & Lange, Norwalk, Conn., 1994, 제71페이지 및 제6장을 참조한다. 모든 척추 동물 종류로부터의 L쇄는 그 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 두 가지의 명확하게 다른 유형 중 하나로 나뉘며, 이는 κ와 λ로 불린다. 중쇄(CH) 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린을 상이한 유형 또는 동종형으로 나눌 수 있다. 면역글로불린에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 다섯 가지 유형이 있으며, 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불리는 중쇄를 갖는다.
본원에 사용된 용어 "항원 결합 단편"은 통상적으로 항원(예를 들어, 뉴몰리신)에 특이적으로 결합하는 능력을 가진 하나 이상의 단편을 의미한다. 본 출원에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab)2, Fv 단편, F(ab')2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fab"은 통상적으로 항체의 항원 결합 단편을 의미한다. 전술한 바와 같이, 파파인을 사용하여 완전한 항체를 소화시킬 수 있다. 항체는 파파인 소화를 거쳐 2개의 동일한 항원 결합 단편, 즉 "Fab" 단편과 잔류 "Fc" 단편(즉, Fc 영역, 상동)을 생성한다. Fab 단편은 하나의 완전한 L쇄와 하나의 중쇄의 가변 영역 및 해당 H쇄(VH)의 첫 번째 불변 영역(CH1)으로 구성될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fab' 단편"은 통상적으로 인간 단클론 항체의 1가 항원 결합 단편을 의미하며, 이 단편은 Fab 단편보다 약간 크다. 예를 들어, Fab' 단편은 모든 경쇄, 모든 중쇄 가변 영역 및 중쇄의 모든 또는 일부 첫 번째 및 두 번째 불변 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, Fab' 단편은 중쇄의 중쇄의 일부 또는 모든 220 내지 330개 아미노산 잔기를 더 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "F(ab')2"는 통상적으로 펩신이 완전한 항체를 소화시킴으로써 생성된 항체 단편을 의미한다. F(ab')2 단편은 이황화 결합에 의해 함께 유지되는 2개의 Fab 단편 및 일부 힌지 영역을 포함한다. F(ab')2 단편은 2가 항원 결합 활성을 가지며 항원을 가교 결합할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fv 단편"은 통상적으로 인간 단클론 항체의 1가 항원 결합 단편을 의미하며, 여기에는 모든 또는 일부 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 포함되고, 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역이 결핍된다. 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역에는 예를 들어 CDR이 포함된다. 예를 들어, Fv 단편은 중쇄 및 경쇄의 약 110개 아미노산의 모든 또는 일부 아미노 말단 가변 영역을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "scFv"는 통상적으로 경쇄 가변 영역을 포함하는 적어도 하나의 항체 단편 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 하나 이상의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 의미하며, 여기에서 경쇄와 중쇄 가변 영역은 인접하며(예를 들어 짧고 유연한 폴리펩티드 링커와 같은 합성 링커를 거쳐), 단쇄 폴리펩티드 형태로 발현될 수 있고, scFv는 그것이 유래된 완전한 항체의 특이성을 유지한다. 특별히 설명되지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같으며, scFv는 임의의 순서로(예를 들어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단에 상대적으로) VL 및 VH 가변 영역을 가질 수 있고, scFv는 VL-링커-VH를 포함하거나 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "dAb"는 통상적으로 VH 영역, VL 영역을 갖거나 VH 또는 VL 영역을 갖는 항원 결합 단편을 갖는 것을 의미하며, 예를 들어 Ward 등(Nature, 1989Oct 12; 341(6242): 544-6), Holt 등, Trends Biotechnol., 2003,21(11): 484-490; 및 WO 06/030220, WO 06/003388 및 DomantisLtd의 기타 발표된 특허 출원을 참조한다. 용어 "dAb"는 통상적으로 sdAb를 포함한다. 용어 "sdAb"는 통상적으로 단일 도메인 항체를 의미한다. 단일 도메인 항체는 통상적으로 항체 중쇄 가변 영역(VH 도메인) 또는 항체 경쇄 가변 영역(VL)으로만 구성되는 항체 단편을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "단클론 항체"는 통상적으로 단일 분자로 구성된 항체 분자 제조물을 의미한다. 단클론 항체는 통상적으로 단일 항원 부위에 대해 고도의 특이성을 갖는다. 또한, 일반적인 다클론 항체 제제(통상적으로 상이한 에피토프에 대한 상이한 항체를 가짐)와 달리, 각각의 단클론 항체는 항원의 단일 에피토프에 대한 것이다. 이들의 특이성 이외에, 단클론 항체는 이들이 하이브리도마 배양을 통해 합성될 수 있으며, 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는다는 장점이 있다. 수식어 "단클론"은 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 수득된 항체의 특성을 나타내며, 항체가 임의의 특정 방법에 의해 생산되어야 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 단클론 항체는 하이브리도마 세포에서 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "키메라 항체"는 통상적으로 가변 영역이 하나의 종류로부터 유래하고, 불변 영역이 다른 종류로부터 유래하는 항체를 의미한다. 통상적으로, 가변 영역은 설치류 동물과 같은 실험 동물의 항체("모 항체")에서 유래하고, 불변 영역은 인간 항체에서 유래하여, 수득된 키메라 항체가 모 항체에 비해, 인간 개체에서 불리한 면역 반응을 유발할 가능성이 적도록 한다.
본원에 사용된 용어 "인간화 항체"는 통상적으로 비인간 항체의 CDR 영역 이외의 일부 또는 모든 아미노산이 인간 면역글로불린에서 유래한 상응하는 아미노산으로 대체되는 항체를 의미한다. CDR 영역에서, 아미노산의 작은 추가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형도, 항체가 특정 항원과 결합하는 능력을 유지하는 한 허용될 수 있다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. "인간화 항체"는 원래 항체와 유사한 항원 특이성을 유지한다. 비인간 항체의 "인간화" 형태는 비인간 면역글로불린 서열에서 유래한 키메라 항체를 최소한으로 포함할 수 있다. 경우에 따라, 인간 면역글로불린(수용체 항체)의 CDR 영역 잔기를 원하는 성질, 친화력 및/또는 능력을 갖는 비인간 종류(공여체 항체)(예를 들어, 알파카, 마우스, 래트, 집토끼 또는 비인간 영장류 동물)의 CDR 영역 잔기로 치환할 수 있다. 경우에 따라, 인간 면역글로불린의 FR 영역 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 치환할 수 있다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여체 항체에 없는 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 이러한 변형을 수행하는 것은 결합 친화력과 같은 항체의 성질을 더욱 개선하기 위해서일 수 있다.
용어 '완전 인간 항체'는 통상적으로 인간 면역글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 의미한다. 이것이 마우스, 마우스 세포 또는 마우스 세포에서 유래한 하이브리도마에서 생산되면, 완전 인간 항체에 뮤린 당쇄가 함유될 수 있다. 유사하게, "마우스 항체" 또는 "래트 항체"는 각각 마우스 또는 래트 면역글로불린 서열만 포함하는 항체를 의미한다. 파지 디스플레이 또는 기타 분자생물학적 방법을 통해, 인체내 및 인간 면역글로불린 생식세포 서열을 가진 전이 유전자 동물체내에서 완전 인간 항체를 생성할 수 있다. 항체 제조에 사용할 수 있는 예시적인 기술은 미국 특허 6,150,584, 6,458,592, 6,420,140에 설명되어 있다. 라이브러리 사용과 같은 다른 기술은 당업계에 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "폴리펩티드 분자"와 "폴리펩티드", "펩티드"는 호환될 수 있으며, 통상적으로 아미노산 잔기의 폴리머를 의미한다. 용어 "융합 단백질"은 통상적으로 적어도 2개의 공유 결합 부분을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 여기에서 각각의 부분은 상이한 특성을 갖는 폴리펩티드일 수 있다. 이 특성은 생체외 또는 생체내 활성과 같은 생물학적 성질일 수 있다. 이 성질은 표적 분자와의 결합, 반응의 촉매 등과 같은 단순한 화학적 또는 물리적 성질일 수도 있다. 이 2개 부분은 단일 펩티드 결합을 통해 또는 펩티드 링커를 통해 연결할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "핵산 분자"는 통상적으로 임의 길이의 분리 형태의 뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드, 또는 그 천연 환경으로부터 분리되거나 인공 합성된 유사체를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 통상적으로 특정 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 삽입하고 단백질을 발현시킬 수 있는 핵산 운반체를 의미한다. 벡터는 숙주 세포를 형질전환, 형질도입 또는 형질감염시켜, 그 휴대한 유전 물질 요소가 숙주 세포 내에서 발현되도록 할 수 있다. 예를 들어, 벡터에는 플라스미드; 파지미드; 코스미드; 효모 인공 염색체(YAC), 박테리아 인공 염색체(BAC) 또는 P1 유래 인공 염색체(PAC)와 같은 인공 염색체; λ 파지 또는 M13 파지와 같은 파지 및 동물 바이러스 등이 포함될 수 있다. 벡터로 사용되는 동물 바이러스의 유형에는 레트로바이러스(렌티바이러스 포함), 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스(예를 들어 단순 헤르페스바이러스), 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 유두종바이러스 및 파포바바이러스(예를 들어 SV40)가 포함될 수 있다. 벡터는 발현을 제어하는 다양한 요소를 함유할 수 있으며, 여기에는 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선택 요소 및 리포터 유전자가 포함된다. 또한, 벡터는 복제 개시 부위를 더 포함할 수 있다. 벡터는 바이러스 입자, 리포솜, 단백질 외피와 같은 세포 내 유입을 돕는 성분을 더 포함할 수 있으나 이러한 물질에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "세포"는 통상적으로 피험자 플라스미드 또는 벡터의 수용자일 수 있거나 이었던 단일 세포, 세포주 또는 세포 배양물을 의미하며, 여기에는 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 본 발명에 따른 벡터가 포함된다. 세포에는 단일 세포의 자손이 포함될 수 있다. 자연적, 우발적 또는 의도적 돌연변이로 인해, 자손이 반드시 원래 모세포와 완전히 동일하지 않을 수 있다(전체 DNA 보체의 형태 또는 게놈 측면에서). 세포에는 본 출원에 따른 벡터를 사용하여 생체외에서 형질감염된 세포가 포함될 수 있다. 세포는 박테리아 세포(예를 들어, 대장균), 효모 세포 또는 기타 진핵 세포일 수 있으며, 예를 들어 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, CHO-K1 세포, LNCAP 세포, HeLa 세포, HEK293 세포, COS-1 세포, NS0 세포가 있다.
본원에 사용된 용어 "면역 접합체"는 통상적으로 다른 시약(예를 들어, 화학요법제, 방사성 원소, 세포 성장 억제제 및 세포 독성제)과 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 접합되어(예를 들어, 링커 분자에 의한 공유 결합) 형성된 접합체를 의미하며, 이 접합체는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 표적 세포의 항원에 특이적으로 결합함으로써, 다른 시약을 표적 세포에 전달할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "약학 조성물"은 통상적으로 질병 또는 병증을 예방/치료하는 데 사용되는 조성물을 의미한다. 약학 조성물은 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 본 출원에 따른 핵산 분자, 본 출원에 따른 백터 및/또는 본 출원에 따른 세포, 및 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 보조제를 포함할 수 있다. 또한, 약학 조성물은 하나 이상의 (약학적으로 유효한) 담체, 안정제, 부형제, 희석제, 용해화제, 계면활성제, 유화제 및/또는 방부제의 적합한 제제를 더 포함할 수 있다. 조성물의 허용 가능한 성분은 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성인 것이 바람직하다. 본 발명의 약학 조성물은 액체, 냉동 및 동결 건조 조성물이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 통상적으로 약학적으로 허용 가능한 운반체, 부형제 또는 안정제를 포함하며, 이들은 사용된 용량 및 농도에서 노출되는 세포 또는 포유류에 독성이 없다. 생리학적으로 허용 가능한 운반체에는 예를 들어 완충제, 항산화제, 저분자량(잔기가 약 10개 미만) 폴리펩티드, 단백질, 친수성 폴리머, 아미노산, 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물, 킬레이트제, 당 알코올, 나트륨과 같은 염 형성 반대 이온, 및/또는 비이온 계면활성제가 포함될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "특이적으로 결합" 또는 "특이적"은 통상적으로 측정 가능하고 재현 가능한 상호작용을 의미하며, 예를 들어 표적과 항체 간의 결합으로, 분자(생체 분자 포함)의 이질적 집단이 존재하는 경우 표적의 존재를 결정할 수 있다. 예를 들어, 표적(에피토프일 수 있음)에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 표적에 결합하는 것보다 더 큰 친화성, 결합력, 용이성 및/또는 더 긴 지속 시간으로 해당 표적에 결합하는 항체일 수 있다. 특정 실시방식에서, 항체는 단백질 상의 에피토프에 특이적으로 결합하며, 에피토프는 상이한 종의 단백질에서 보존되는 것이다. 특정 실시방식에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함하나 이를 요구하지 않을 수 있다. 이 용어는, 예를 들어 복수의 항원과 교차 반응하는 특정 에피토프에 특이적인 항원 결합 단백질에도 적용되며, 여기에서 특이적 항체는 교차 반응 에피토프를 운반하는 복수의 항원과 결합할 수 있다. 이러한 항원 결합 단백질의 결합 부위 및/또는 특이적 결합 교차 반응 에피토프를 갖는 항원 결합 단백질도, 각각 다중 특이적 또는 교차 특이적 결합 부위의 항원 결합 단백질로 지칭된다. 예를 들어, 항원 결합 단백질은 복수의 상이한 항원과 교차 반응하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 다중 특이적 결합 부위를 가질 수 있다.
본원에 사용된 용어 "피험자"는 통상적으로 인간, 또는 고양이, 개, 말, 돼지, 소, 양, 토끼, 마우스, 래트 또는 원숭이를 포함하나 이에 한정되지 않는 비인간 동물을 의미한다.
본 출원에서, 언급된 단백질, 폴리펩티드 및/또는 아미노산 서열은, 해당 단백질 또는 폴리펩티드와 동일하거나 유사한 기능을 갖는 변이체 또는 상동체의 범위를 적어도 포함하는 것으로 더 이해되어야 한다.
본 출원에서, 변이체는, 예를 들어 단백질 및/또는 폴리펩티드(예를 들어, 뉴몰리신 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편)의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산을 치환, 결실 또는 추가한 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 예를 들어, 기능적 변이체는 적어도 1개, 예를 들어 1 내지 30개, 1 내지 20개 또는 1 내지 10개, 다시 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 거쳐 아미노산이 변경된 단백질 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 기능적 변이체는 변경(예를 들어 치환, 결실 또는 추가) 이전의 단백질 또는 폴리펩티드의 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 수 있다. 예를 들어, 기능적 변이체는 변경 이전의 단백질 또는 폴리펩티드의 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%의 생물학적 활성(예를 들어 항원 결합 능력)을 유지할 수 있다. 예를 들어, 치환은 보존적 치환일 수 있다.
본 출원에서, 상동체는 단백질 및/또는 폴리펩티드(예를 들어, 뉴몰리신 단백질과 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편)의 아미노산 서열과 적어도 약 85%(예를 들어, 적어도 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 이상) 서열 상동성을 갖는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다.
본 출원에서, 상동성은 통상적으로 2개 이상의 서열 간의 유사성, 유사도 또는 연관성을 의미한다. 다음 방식을 통해 "서열 상동성 백분율"을 계산할 수 있다: 2개의 비교할 서열을 비교창에서 비교하여, 2개 서열 중 동일한 핵산 염기(예를 들어 A, T, C, G, I) 또는 동일한 아미노산 잔기(예를 들어 Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met)가 존재하는 위치의 수를 결정하여 매칭되는 위치의 수를 얻고, 매칭되는 위치의 수를 비교창의 총 위치 수(즉, 창 크기)로 나누며, 결과에 100을 곱하여, 서열 상동성의 백분율을 산출한다. 서열 상동성 백분율을 결정하기 위해 수행하는 비교는, 당업계에 공지된 다양한 방식에 따라 구현할 수 있는데, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같이 공개적으로 획득 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용할 수 있다. 당업자는 서열 비교에 사용되는 적절한 매개변수를 결정할 수 있으며, 여기에는 비교하고 있는 전장 서열 범위 내 또는 표적 서열 영역 내 최대 비교를 구현하기 위해 필요한 모든 알고리즘이 포함된다. 상동성은 FASTA 및 BLAST의 방법을 통해 측정할 수도 있다. FASTA 알고리즘에 대한 설명은 W. R. Pearson과 D. J. Lipman의 "생물학적 서열 비교를 위한 개선된 도구", 미국 국가과학원 간행물(Proc. Natl. Acad. Sci.), 85:2444-2448, 1988; 및 D. J. Lipman과 W. R. Pearson의 "빠르고 민감한 단백질 유사성 검색", Science, 227:1435-1441, 1989를 참조할 수 있다. BLAST 알고리즘에 대한 설명은 S. Altschul, W. Gish, W. Miller, E. W. Myers 및 D. Lipman의 "기본적인 국소 비교(alignment) 검색 도구", 분자생물학잡지, 215: 403-410, 1990을 참조할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "포함하다"는 통상적으로 포괄, 총괄, 함유 또는 내포의 의미이다. 경우에 따라, "~이다", "~로 구성되다" 나타내기도 한다.
본 출원에서, 용어 "약"은 통상적으로 지정 값 이상 또는 이하 0.5% 내지 10% 범위 내의 변동을 지칭하며, 예를 들어 지정 값 이상 또는 이하 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 3.5%, 4%, 4.5%, 5%, 5.5%, 6%, 6.5%, 7%, 7.5%, 8%, 8.5%, 9%, 9.5% 또는 10%의 범위 내 변동이다.
발명의 상세한 내용
분리된 항원 결합 단백질
항체의 CDR은 상보성 결정 영역으로도 불리며, 가변 영역의 일부분이다.이 영역의 아미노산 잔기는 항원 또는 항원 에피토프와 접촉할 수 있다. 항체 CDR은 CCG, Kabat, Chothia, IMGT, AbM, Kabat/Chothia 종합 고려 등과 같이 다양한 암호화 시스템을 통해 결정할 수 있다. 이러한 암호화 시스템은 당업계에서 공지된 것이며, 구체적으로, 예를 들어 http://www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum을 참조할 수 있다. 당업자는 항체의 서열 및 구조에 따라, 상이한 암호화 시스템을 사용하여 CDR 영역을 결정할 수 있다. 상이한 암호화 시스템을 사용하면, CDR 영역에 차이가 있을 수 있다. 본 출원에서, CDR은 임의의 CDR 분할 방법에 따라 획득된 CDR 서열을 포함하며; 이의 변이체도 포함하며, 변이체는 CDR의 아미노산 서열이 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 추가를 거친 것을 포함한다. 예를 들어, 1 내지 30개, 1 내지 20개, 다시 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입이고; 이의 상동체도 포함하며, 상동체는 CDR의 아미노산 서열과 적어도 85%(예를 들어, 적어도 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 이상) 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다. 본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 IMGT에 의해 정의될 수 있다.
일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 여기에는 항체 중쇄 가변 영역 VH 중 적어도 하나의 CDR이 포함될 수 있고, VH는 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO: 22 또는 SEQ ID NO: 24로 표시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질의 HCDR은 임의 형태로 분할될 수 있으며, VH가 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열과 동일하다면, 임의의 형태로 분할 획득된 HCDR은 모두 본 출원의 보호 범위에 속할 수 있다.
예를 들어, 표 1의 방법을 통해 SEQ ID NO: 22 또는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 분할하며, 본 출원에서 분리된 항원 결합 단백질은 하기 표에 따른 CDR을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR3를 포함할 수 있고, HCDR3는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR2를 포함할 수 있고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR1을 포함할 수 있고, HCDR1은 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3를 포함할 수 있고, HCDR1은 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR1을 포함할 수 있고, H-FR1의 C-말단은 HCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, H-FR1은 SEQ ID NO: 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR2를 포함할 수 있고, H-FR2는 HCDR1과 HCDR2 사이에 위치하고, H-FR2는 SEQ ID NO: 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질의 H-FR2는 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR3를 포함할 수 있고, H-FR3은 HCDR2와 HCDR3 사이에 위치하고, H-FR3은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질의 H-FR3은 SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR4를 포함할 수 있고, H-FR4의 N-말단은 HCDR3의 C-말단과 연결되고, H-FR4는 SEQ ID NO: 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질의 H-FR4는 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함할 수 있고, H-FR1은 SEQ ID NO: 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 SEQ ID NO: 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 SEQ ID NO: 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, H-FR1은 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, H-FR1은 SEQ ID NO: 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 SEQ ID NO: 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 SEQ ID NO: 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 SEQ ID NO: 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, H-FR1은 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함할 수 있다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4는 각각 순차적으로 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4는 각각 순차적으로 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 및 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 VH를 포함할 수 있고, VH는 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO: 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 중쇄 불변 영역은 어느 하나의 면역글로불린의 중쇄 불변 영역으로부터 유래될 수 있으며, 여기에는 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE가 포함된다. 예를 들어, 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역으로부터 유래될 수 있다. 본 출원에서, 상기 면역글로불린의 중쇄 불변 영역은 이의 돌연변이를 포함할 수 있다. 본 출원에서, 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1-4 중 어느 하나의 중쇄 불변 영역으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 중쇄를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄는 SEQ ID NO: 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄는 SEQ ID NO: 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 가변 영역 VL 중 적어도 하나의 CDR이 포함될 수 있고, VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, VL은 SEQ ID NO: 23 또는 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질의 LCDR은 임의 형태로 분할될 수 있으며, VL이 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열과 동일하다면, 임의의 형태로 분할 획득된 LCDR은 모두 본 출원의 보호 범위에 속할 수 있다.
예를 들어, 표 2의 방법을 통해 SEQ ID NO: 23 또는 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 분할하며, 본 출원에서 분리된 항원 결합 단백질은 하기 표에 따른 CDR을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR3를 포함할 수 있고, LCDR3는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 융합 단백질은 LCDR2를 포함할 수 있고, LCDR2는 SEQ ID NO: 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR1을 포함할 수 있고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3를 포함할 수 있고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 SEQ ID NO: 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR1을 포함할 수 있고, L-FR1의 C-말단은 LCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, L-FR1은 SEQ ID NO: 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR1은 SEQ ID NO: 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR1은 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR2를 포함할 수 있고, L-FR2는 LCDR1과 LCDR2 사이에 위치하고, L-FR2는 SEQ ID NO: 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR2는 SEQ ID NO: 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR2는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR3를 포함할 수 있고, L-FR3은 LCDR2와 LCDR3 사이에 위치하고, L-FR3은 SEQ ID NO: 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR3은 SEQ ID NO: 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR3은 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR4를 포함할 수 있고, L-FR4의 N-말단은 LCDR3의 C-말단과 연결되고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함할 수 있고, L-FR1은 SEQ ID NO: 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 SEQ ID NO: 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 SEQ ID NO: 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR1은 SEQ ID NO: 11 또는 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 SEQ ID NO: 13 또는 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR1은 SEQ ID NO: 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 SEQ ID NO: 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 SEQ ID NO: 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, L-FR1은 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 SEQ ID NO: 21으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 LCDR1, LCDR2, LCDR3, L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함할 수 있다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질의 LCDR1, LCDR2, LCDR3, L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4는 각각 순차적으로 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 및 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질의 LCDR1, LCDR2, LCDR3, L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4는 각각 순차적으로 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 및 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 VL을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, VL은 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, VL은 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, 경쇄 불변 영역은 인간 항체 경쇄 불변 영역으로부터 유래할 수 있다. 예를 들어, 경쇄 불변 영역은 인간 Igκ 불변 영역으로부터 유래할 수 있다. 예를 들어, 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 경쇄를 포함할 수 있다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질의 경쇄는 SEQ ID NO: 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질의 경쇄는 SEQ ID NO: 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3를 포함할 수 있다. 예를 들어, 분리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 SEQ ID NO: 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 SEQ ID NO: 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 VH 및 VL을 포함할 수 있다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO: 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 본 출원에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fv 단편, F(ab')2, F(ab)2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb를 포함할 수 있다. 본 출원에서, 항체는 단클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및/또는 완전 인간 유래 항체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 인간화 항원 결합 단백질의 VH는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인간화 항원 결합 단백질의 VL은 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또한, 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질은 하나 이상의 보존적 서열 변형이 존재하는 중쇄 및/또는 경쇄 서열을 포함할 수 있음에 유의한다. 소위 "보존적 서열 변형"은 항체 결합 특성에 유의한 영향을 미치거나 변경하지 않는 아미노산 변형을 의미한다. 이러한 보존적 변형에는 아미노산 치환, 추가 및 삭제가 포함된다. 점 돌연변이와 PCR 매개의 돌연변이와 같이 당업계에 공지된 표준 기술을 통해, 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질에 변형을 도입할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기를 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기로 치환하는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기 그룹은 당업계에 공지된 것이다. 이러한 아미노산 잔기 그룹에는 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), β-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산이 포함된다. 일부 실시방식에서, 본 출원에 따른 항원 결합 단백질의 CDR 영역 중 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 그룹의 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있다. 당업자는 일부 보존적 서열 변형이 항원 결합성을 소실시키지 않음을 알고 있으며, 구체적으로, 예를 들어, Brummell et al., (1993) Biochem 32:1180-8; de Wildt et al., (1997) Prot. Eng. 10:835-41; Komissarov et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:26864-26870; Hall et al., (1992) J. Immunol. 149:1605-12; Kelley and O'Connell (1993) Biochem.32:6862-35; Adib-Conquy et al., (1998) Int. Immunol.10:341-6 and Beers et al., (2000) Clin. Can. Res. 6:2835-43을 참조할 수 있다.
본 출원에서, 뉴몰리신 돌연변이체를 사용하여 마우스를 면역화하고, 마우스 비장 세포를 획득하여 골수종 세포와 융합하여 뉴몰리신 단백질 항원 친화력을 갖는 항원 결합 단백질을 스크리닝할 수 있다. 본 출원에서, 스크리닝하여 수득된 항원 결합 단백질을 번역한 후 변형 부위를 최적화하여, 인간화 서열을 획득할 수도 있다.
당업계에 공지된 각종 측정 방법을 통해 본 출원에 따른 뉴몰리신 항원 결합 단백질을 감별, 선별 또는 특성화할 수 있다.
예를 들어, 효소 결합 면역 흡착 분석법(ELISA), 면역 블롯팅(예를 들어, 단백질 블롯팅), 유세포 분석법(예를 들어, FACS), 면역조직화학법, 면역형광법 등의 공지된 방법을 통해 본 출원의 항원 결합 단백질의 항원 결합 활성을 시험할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 뉴몰리신에 특이적으로 결합할 수 있다. 본 출원에서, 뉴몰리신은 야생형 뉴몰리신 및 이의 변이체를 포함할 수 있다. 본 출원에서, 뉴몰리신의 변이체는 야생형 뉴몰리신에 비해, 146번째 아미노산이 결실될 수 있다. 본 출원에서, 야생형 뉴몰리신의 아미노산 서열은 Uniprot 데이터베이스(Entry ID: Q04IN8)를 통해 결정할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질과 뉴몰리신의 결합은 ELISA 방법을 통해 검출할 수 있다. 예를 들어, 본 출원에 따른 항원 결합 단백질은 약 0.03㎍/ml 이하, 약 0.028㎍/ml 이하, 약 0.026㎍/ml 이하, 약 0.024㎍/ml 이하, 약 0.022㎍/ml 이하, 약 0.02034㎍/ml 이하, 약 0.020㎍/ml 이하, 약 0.018㎍/ml 이하, 약 0.01706㎍/ml 이하, 약 0.016㎍/ml 이하, 약 0.014㎍/ml 이하, 약 0.012㎍/ml 이하, 약 0.010㎍/ml 이하의 EC50 값으로 뉴몰리신 단백질과 결합할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 뉴몰리신 단백질의 생물학적 활성을 중화시킬 수 있다. 예를 들어, 재조합 뉴몰리신과 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질을 혼합하고, 토끼 적혈구를 추가하여, 상기 항원 결합 단백질의 항용혈 활성을 검출할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질은 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료할 수 있다. 본 출원에서, 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발 또는 매개될 수 있다. 본 출원에서, 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발 또는 매개되는 질병 및/또는 병증의 합병증을 포함할 수 있다. 예를 들어, 질병 및/또는 병증은 패혈증 및/또는 균혈증을 포함할 수 있다.
폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및 약학 조성물
다른 일 양상에서, 본 출원은 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질을 포함할 수 있는 폴리펩티드 분자를 제공한다.
본 출원에서, 폴리펩티드 분자는 융합 단백질을 포함할 수 있다. 본 출원에서, 폴리펩티드 분자는 융합 단백질일 수 있다. 본 출원에서, 융합 단백질은 다중 특이성 항체를 포함할 수 있다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질을 암호화할 수 있는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 예를 들어, 이는 다음과 같은 방법을 통해 생산 또는 합성할 수 있다: (i) 중합 효소 연쇄 반응(PCR) 증폭과 같은 생체외 증폭으로 생산; (ii) 클론 재조합으로 생산; (iii) 효소 절단 및 겔 전기영동에 의한 분급 분리와 같은 정제; 또는 (iv) 화학적 합성과 같은 합성이 있다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 본 출원에 따른 핵산 분자를 포함할 수 있는 벡터를 제공한다. 또한, 벡터에는 다른 유전자가 더 포함될 수 있으며, 예를 들어 적절한 숙주 세포에서 적절한 조건 하에서 해당 벡터의 마커 유전자를 선택하는 것이 허용된다. 또한, 벡터는 암호화 영역이 적절한 숙주에서 정확하게 발현되도록 허용하는 발현 제어 요소를 더 포함할 수 있다. 이러한 제어 요소는 당업자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 부위, 인핸서 및 유전자 전사 또는 mRNA 번역을 조절하는 기타 제어 요소를 포함할 수 있다. 벡터는 숙주 세포를 형질전환, 형질도입 또는 형질감염시켜, 그 휴대한 유전 물질 요소가 숙주 세포 내에서 발현되도록 할 수 있다. 벡터는 예를 들어 플라스미드, 코스미드, 바이러스, 파지 또는 예를 들어 유전 공학에서 통상적으로 사용되는 기타 벡터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 벡터는 발현 벡터이다. 또한, 벡터는 이러한 물질뿐만 아니라, 바이러스 입자, 리포솜, 단백질 외피와 같은 세포 내 유입을 돕는 성분을 더 포함할 수 있다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 본 출원에 따른 핵산 분자 또는 본 출원에 따른 벡터를 포함할 수 있는 세포를 제공한다. 일부 실시방식에서, 각각의 유형 또는 각각의 숙주 세포는 본 출원에 따라 하나 또는 한 유형의 핵산 분자 또는 벡터를 포함할 수 있다. 일부 실시방식에서, 각각의 유형 또는 각각의 숙주 세포는 본 출원에 따른 복수개의(예를 들어, 2개 이상) 또는 복수 유형의(예를 들어, 2가지 이상) 핵산 분자 또는 벡터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 출원에 따른 벡터는 숙주 세포, 예를 들어 식물 유래 세포, 진균 또는 효모 세포 등과 같은 진핵 세포에 도입될 수 있다. 일부 실시방식에서, 세포는 박테리아 세포(예를 들어, 대장균), 효모 세포 또는 기타 진핵 세포일 수 있으며, 예를 들어 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, CHO-K1 세포, LNCAP 세포, HeLa 세포, 293T 세포, COS-1 세포, SP2/0 세포, NSO 세포 또는 골수종 세포가 있다. 전기 천공, lipofectine 형질감염, lipofectamin 형질감염 등과 같은 당업계에 공지된 방법을 통해 본 출원에 따른 벡터를 숙주 세포에 도입할 수 있다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질을 포함할 수 있는 면역 접합체를 더 제공한다.
일부 실시방식에서, 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질 또는 이의 단편을 화학요법제, 독소, 면역요법제, 이미징 프로브, 분광 프로브 등과 같은 다른 시약과 연결할 수 있다. 연결은 하나 이상의 공유 결합, 또는 비공유 상호작용을 통해 이루어질 수 있으며, 킬레이트 작용을 포함할 수 있다. 다양한 링커(링커는 당업자에게 공지된 것일 수 있음)를 사용하여 면역 접합체를 형성할 수 있다. 또한, 융합 단백질의 형태로 면역 접합체를 제공할 수 있으며, 이는 면역 접합체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 발현될 수 있다. 면역 접합체는 예를 들어 항체-약물 접합체(ADC)를 더 포함할 수 있다. ADC에서, 항체와 치료제는 링커에 의해 가교될 수 있으며, 링커는 절단 가능하고, 예를 들어 펩티드류 링커, 디설파이드류 링커 또는 히드라존류 링커가 있다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 본 출원에 따른 폴리펩티드 분자, 본 출원에 따른 면역 접합체, 본 출원에 따른 핵산 분자, 본 출원에 따른 벡터 및/또는 세포, 및 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있는, 약학 조성물을 더 제공한다.
특정 실시방식에서, 약학 조성물은 하나 이상의 (약학적으로 유효한) 보조제, 안정제, 부형제, 희석제, 용해화제, 계면활성제, 유화제 및/또는 방부제의 적합한 제제를 더 포함할 수 있다. 조성물의 허용 가능한 성분은 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성인 것이 바람직하다. 본 발명의 약학 조성물은 액체, 냉동 및 동결 건조 조성물이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
특정 실시방식에서, 약학 조성물은 하나보다 많은 활성 화합물을 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 이러한 활성 화합물은 서로에 부정적인 영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는다. 이러한 약물의 유형과 유효량은 예를 들어 제제에 존재하는 길항제의 양과 유형, 및 피험자의 임상 매개변수에 따라 달라질 수 있다.
특정 실시방식에서, 약학적으로 허용 가능한 담체는 약물 투여와 상용성이 있는 임의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 등장제 및 흡수 지연제를 포함할 수 있으며, 통상적으로 안전하고 독성이 없다.
특정 실시방식에서, 약학 조성물은 비경구, 경피, 강내, 동맥내, 척수강내 및/또는 비강내 투여 또는 조직으로의 직접 주사를 포함할 수 있다. 예를 들어, 약학 조성물은 주입 또는 주사를 통해 환자 또는 피험자에게 투여될 수 있다. 특정 실시방식에서, 약학 조성물의 투여는 정맥내, 복막내, 피하, 근육내, 국소 또는 진피내 투여와 같은 상이한 방식으로 수행될 수 있다. 특정 실시방식에서, 약학 조성물은 중단 없이 투여될 수 있다. 중단 없는(또는 연속적인) 투여는 WO2015/036583에서 서술하는 바와 같이 환자가 착용하는 소형 펌프 시스템을 통해 구현되어, 환자 체내에 유입되는 치료제를 측정할 수 있다.
제조 방법
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은, 항원 결합 단백질을 발현시키는 조건 하에서, 본 출원에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 적절한 배지, 적절한 온도 및 배양 시간 등을 사용할 수 있으며, 이러한 방법은 당업자가 알고 있는 것이다.
단클론 항체를 생성하는 데 적합한 임의의 방법은 모두 본 출원의 항원 결합 단백질을 생성하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 뉴몰리신 약독화 균주 또는 이의 단편으로 동물을 면역화할 수 있다. 예를 들어, 폐렴연쇄상구균 약독화 균주는 야생형에 비해 146번째가 결실된 돌연변이를 포함할 수 있다. 보조제, 면역 자극제, 면역 반복 강화 접종를 포함하는 적합한 면역 접종 방법이 사용될 수 있고, 하나 이상의 경로가 사용될 수 있다.
임의 적합한 형태의 뉴몰리신은 모두 면역원(항원)으로 사용될 수 있으며, 이는 뉴몰리신에 특이적인 비인간 항체를 생성하고, 항체의 생물학적 활성을 스크리닝하는 데 사용된다. 예를 들어, 자극 면역원은 전장 뉴몰리신일 수 있으며, 여기에는 천연 동종이량체, 또는 단일/다중 에피토프를 함유한 펩티드가 포함된다. 면역원은 단독 사용하거나, 당업자에게 공지된 하나 이상의 면역원성 강화제와 병용할 수 있다.
방법 및 용도
다른 일 양상에서, 본 출원은 약물 제조에서 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및/또는 약학 조성물의 용도를 제공하며, 약물은 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료하는 데 사용된다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료하는 방법을 더 제공하며, 방법에는 필요로 하는 피험자에게 본 출원에 따른 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및/또는 약학 조성물을 투여하는 단계가 포함될 수 있다.
본 출원에서, 투여는 정맥내, 종양내, 복막내, 피하, 근육내, 국소 또는 진피내 투여와 같은 다양한 방식으로 수행될 수 있다.
다른 일 양상에서, 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및/또는 약학 조성물은, 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료하는 데 사용될 수 있다.
본 출원에서, 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발 또는 매개될 수 있다.
본 출원에서, 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발 또는 매개되는 질병 및/또는 병증의 합병증일 수 있다.
본 출원에서, 질병 및/또는 병증은 박테리아 감염을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 질병 및/또는 병증은 균혈증 및/또는 농독증을 포함할 수 있다.
본 출원에서, 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및/또는 약학 조성물은 단독 사용하거나, 기타 약물과 병용하여 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료할 수 있다. 일부 실시방식에서, 기타 약물은 현재 항균 효과가 있는 것으로 알려진 임의의 약물일 수 있다. 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균 감염에 인한 것이거나, 기타 감염에 의한 관련 질병일 수 있다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및/또는 약학 조성물을 사용하는 단계를 포함하는, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 방법을 더 제공한다.
본 출원에서, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 방법은 생체외 방법일 수 있다. 예를 들어, 본 출원에 따른 분리된 항원 결합 단백질을 생체외 시료에 접촉시켜, 시료에서 뉴몰리신의 존재 및/또는 함량을 검출한다. 경우에 따라, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 방법은 비치료 목적이다. 경우에 따라, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 방법은 진단 방법이 아니다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 시약 또는 키트를 더 제공하며, 여기에는 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및/또는 약학 조성물이 포함된다.
다른 일 양상에서, 본 출원은 분리된 항원 결합 단백질, 폴리펩티드 분자, 핵산 분자, 벡터, 세포, 면역 접합체 및/또는 약학 조성물의 키트 제조에서의 용도를 더 제공하며, 키트는 시료에서 뉴몰리신의 존재 및/또는 함량을 검출하는 데 사용된다.
하기의 실시예는 어떠한 이론에 의해서도 제한되지 않으며, 이는 본 출원의 항원 결합 단백질, 제조 방법 및 용도 등을 설명하기 위한 것일 뿐이므로, 본 출원 발명의 범위를 한정하지 않는다.
실시예
실시예 1 뉴몰리신(PLY)의 재조합 단백질의 발현
Uniprot 데이터베이스를 이용하여 뉴몰리신(PLY, Entry ID: Q04IN8)의 아미노산 서열을 결정하고, 뉴몰리신 전장 아미노산 서열에 따라 146번째가 결실된 알라닌을 약독화된 PLY mut의 아미노산으로 사용하고, 아미노산 서열을 템플릿으로 삼아, 효소 절단 부위를 NdeI/XhoI로 한정하고, c-말단에 His-태그를 도입하였으며, Beijing Tsingke Biotechnology사에 의뢰하여 코돈 최적화 및 유전자 합성을 수행하여, PLY 및 PLY mut단백질의 플라스미드를 획득하였다. 재조합 플라스미드를 대장균 E.coli BL21(DE3)plysS로 형질전환하고, 대장균 발현 시스템을 사용하여, PLY 및 PLY mut 재조합 단백질을 재조합 발현하였다.
실시예 2 PLY mut 항원 면역 Balb/C 마우스
제조된 PLY mut 단백질을 사용하여, 피하 다점 면역화 방법으로 5마리의 Balb/C 마우스를 면역화하였으며, 피하 다점 면역화 프로세스는 하기와 같다.
실시예 3 면역화된 마우스 비장 세포와 골수종 세포의 융합 및 PLY mut 항원 친화력을 가진 항원 결합 단백질의 스크리닝
PEG법으로 골수종 세포 P3X63Ag8.653을 면역화된 PLY mut 항원의 마우스 비장 세포와 융합시켰다. 융합된 하이브리도마 세포를 96-웰 플레이트에 접종하여 배양하였다. 후속적으로 HAT 배지와 HT 배지를 사용하여 하이브리도마 세포 배양을 수행하였다. 96-웰 플레이트 세포 상청액이 약간 노랗게 될 때가지 배양하고, 100μl의 세포 배양 상청액를 취하였으며, ELISA 방법으로 PLY mut 항원과 결합하는 하이브리도마 클론 세포를 스크리닝하였다. 친화력이 비교적 강한 하이브리도마 모 클론 세포를 계속 배양한 후, 한계 희석법을 통해 서브클로닝을 수행하였으며, 단클론 세포를 선택하였다. 단클론 상청액을 ELISA 방법으로 스크리닝하여 PLY mut 단백질과 강한 친화력을 가진 분비 항체의 2E5 단클론 세포를 스크리닝하였고, 분비된 단클론 항체를 m2E5로 명명하였다.
실시예 4 특이적 마우스 유래 항원 결합 단백질 서열의 획득
RNAfast200 키트(Shanghai Feijie Bio-Technology사)를 이용하여 1Х106의 항-PLY mut 항체를 분비하는 2E5 단클론 세포 총 RNA를 추출하였다. 또한 역전사 키트(Takara)를 이용하여, 총 RNA를 cDNA로 역전사하였다. 프라이머를 이용하여 cDNA 단편을 증폭시키고(Anke Krebber. 1997), DNA 생성물 정제 키트(Beijing Tiangen Biotechnology사)를 이용하여 PCR 생성물을 정제하고, 연결 키트(Beijing Tsingke Biotechnology사)를 사용하여 T 벡터에 연결하여, 수용성 세포로 형질전환하였으며, Shanghai Tsingke Biotechnology사에 의뢰하여 서열 측정을 수행하였고, 마우스 유래 단클론 항체 m2E5의 중쇄 가변 영역(m2E5VH)과 경쇄 가변 영역(m2E5VL)의 시퀀싱 결과는 다음과 같다.
m2E5 중쇄 가변 영역(m2E5VH) SEQ ID NO: 22
EVKVEESGGGSVQPGGSMKLSCVASGYTFGDNWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNNYATRYAESVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLRTEDTGIYYCTRTQFITSVVAPFDFWGQGTTLTVSS
m2E5 경쇄 가변 영역(m2E5VL) SEQ ID NO: 23
DIVMSQSPSSLGVSVGEKITMSCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYRYPLTFGGGTKVEIK
여기에서 밑줄이 그어진 부분은 IMGT 넘버링 방식을 사용하여 분할 획득한 CDR 서열을 나타낸다.
실시예 5 항-PLY 마우스 유래 항원 결합 단백질의 인간화
NCBI 데이터베이스 비교(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)를 통해, 마우스 유래 항체 2E5(m2E5)와 가장 근접한 germline 서열을 템플릿으로 선택하고, m2E5를 인간화하였으며, 항원 결합 단백질을 번역한 후 변형 부위를 최적화하여, 인간화 항체(2E5H3L0)의 중쇄 가변 영역(hu2E5VH3)과 경쇄 가변 영역(hu2E5VL0) 서열은 다음과 같다.
인간화 항원 결합 단백질 2E5 중쇄 가변 영역(hu2E5VH3) SEQ ID NO: 24
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGYTFGDNWMNWVRQASGKGLEWVGEIRLKSNNYATRYAESVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCTRTQFITSVVAPFDFWGQGTTVTVSS
인간화 항원 결합 단백질 2E5 경쇄 가변 영역(hu2E5VL0) SEQ ID NO: 25
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYRYPLTFGGGTKVEIK
여기에서 밑줄이 그어진 부분은 IMGT 넘버링 방식을 사용하여 분할 획득한 CDR 서열을 나타낸다.
실시예 6 항-PLY 항원 결합 단백질의 발현과 항원 결합 활성 검출
m2E5 중쇄 가변 영역의 C-말단을 인간 면역글로불린 γ1(IgG1)의 불변 영역의 N-말단과 연결하고 pcDNA3.4 벡터로 구성하여, 2E5 마우스/인간 키메라 항체(2E5HL)의 중쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-c2E5VHCH를 획득하였다. 2E5 경쇄 가변 영역의 C-말단을 경쇄 kappa 불변 영역의 N-말단과 연결하고 pcDNA3.4 벡터로 구성하여, 2E5 키메라 항체 경쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-c2E5VLCL을 획득하였다.
여기에서 키메라 항체 2E5HL의 중쇄(c2E5VHCH) 아미노산 서열 및 경쇄(c2E5VLCL) 아미노산 서열은 다음과 같다:
c2E5VHCH SEQ ID NO: 28:
EVKVEESGGGSVQPGGSMKLSCVASGYTFGDNWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNNYATRYAESVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLRTEDTGIYYCTRTQFITSVVAPFDFWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
c2E5VLCL SEQ ID NO: 29:
DIVMSQSPSSLGVSVGEKITMSCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYRYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
2E5 인간화 중쇄 가변 영역의 C-말단을 인간 면역글로불린 γ1(IgG1)의 불변 영역의 N-말단과 연결하고 pcDNA3.4 벡터로 구성하여, 인간화 중쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-hu2E5VH3CH를 획득하였다. 2E5 인간화 경쇄 가변 영역의 C-말단을 경쇄 kappa 불변 영역의 N-말단과 연결하고 pcDNA3.4 벡터로 구성하여, 인간화 경쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-hu2E5VL0CL을 획득하였다.
2E5H3L0 인간화 항체의 중쇄(hu2E5VH3CH) 아미노산 서열 및 경쇄(hu2E5VL0CL) 아미노산 서열은 다음과 같다:
hu2E5VH3CH SEQ ID NO: 30:
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGYTFGDNWMNWVRQASGKGLEWVGEIRLKSNNYATRYAESVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCTRTQFITSVVAPFDFWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
hu2E5VL0CL SEQ ID NO: 31:
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYRYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
2E5HL 키메라 항체의 중쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-m2E5VHCH를 경쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-m2E5VLCL과 함께 Expi293F 세포로 공동 형질감염시키고, Expi293F 발현 시스템을 이용하여 2E5HL을 일시적으로 발현시킨 후, 마지막으로 Protein A로 키메라 항체 단백질을 정제하였다. 2E5H3L0 인간화 항체의 중쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-hu2E5VH3CH를 경쇄 발현 벡터 pcDNA3.4-hu2E5VL0CL과 함께 Expi293F 세포로 공동 형질감염시키고, Expi293F 발현 시스템을 이용하여 2E5H3L0을 일시적으로 발현시킨 후, 마지막으로 Protein A를 사용하여 인간화 항체 단백질을 정제하였다. 정제하여 획득한 2E5HL 키메라 항체와 2E5H3L0 인간화 항체는 ELISA 방법으로 항원 결합 활성을 확인하였다: 96-웰 마이크로플레이트(Thermo)에 웰당 0.1μg로 PLY 및 PLY mut 단백질을 코팅하고, 4℃에서 밤새 배양하고, PBST 완충액으로 플레이트를 세척하며, 각각의 웰에 5% BSA 200μl를 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였고; 차단 후 PBST 완충액으로 플레이트를 세척하고, 마이크로플레이트에 첫 웰에 0.1μg 배율로 희석한 2E5HL 인간-마우스 키메라 항체 또는 2E5H3L0 인간화 항체를 첨가하고, 4℃에서 밤새도록 배양하였고; 1차 항체는 하룻밤 후 플레이트를 세척하고, 마이크로플레이트에 1:10000로 희석한 HRP 표지 염소 항-인간 IgG 2차 항체를 각각의 웰에 100μl 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 배양한 후 플레이트를 세척하였고; 각각의 웰에 100μl의 TMB를 첨가하고 37℃에서 배양하여 발색시키고, 10분 후 종료액으로 발색을 종료시키고, 마이크로플레이트 리더(Multiskcin FC, Thermo)로 결과값을 판독하고 Graphpad 소프트웨어를 사용하여 도식화하였다. 항체와 PLY 단백질 결합 상태의 결과는 도 1에 도시된 바와 같이, 2E5HL의 EC50 값은 0.01706μg/ml이고, 2E5H3L0의 EC50 값은 0.02034μg/ml이었으며, 항체와 PLY mut 단백질 결합 상태의 결과는 도 2에 도시된 바와 같이, 2E5HL의 EC50 값은 0. 01582μg/ml이고, 2E5H3L0의 EC50 값은 0. 01617μg/ml이었다. 그 결과, 인간화 항체 2E5H3L0과 키메라 항체 2E5HL은 모두 뉴몰리신 PLY와 PLY mut 단백질과 모두 강한 친화력을 가지고 있음이 입증되었다.
실시예 7 폐렴연쇄상구균 독소 활성의 생체외 중화 측정
6.25ng의 재조합 뉴몰리신 PLY 단백질을 키메라 항체 2E5HL 또는 인간화 항체 2E5H3L0과 일정 비율로 96-웰 플레이트(Thermo)에 혼합하고, 37℃에서 10분 동안 배양하고, 5% 토키 적혈구를 첨가하여, 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 시료를 3000rpm에서 5분간 원심분리하고, 마이크로플레이트 리더(Multiskcin FC, Thermo)를 사용하여 405nm 파장에서 흡광도를 측정하여, 이의 항용혈 활성을 측정하였다.
그 결과, 도 3에 도시된 바와 같이 폐렴연쇄상구균 독소는 토끼 적혈구 용혈 활성이 있는 반면, 키메라 항체 2E5HL과 인간화 항체 2E5H3L0은 모두 폐렴연쇄상구균 독소의 토끼 적혈구 용혈 활성을 효과적으로 중화시킬 수 있으며, 용량 의존적임이 입증되었다.
실시예 8 본 출원의 항원 결합 단백질의 PLY 독소 모델 마우스에 대한 보호 작용
C57BL/6 마우스에 용량이 1.25mg/kg인 키메라 항체 2E5HL, 인간화 항체 2E5H3L0 및 인간 IgG 항체(대조군으로 사용)를 미리 각각 주사하고, 1시간 후 0.75㎍의 뉴몰리신 PLY 단백질을 꼬리 정맥 주사하고, 마우스의 생존 시간을 관찰하였다.
그 결과 도 4에 도시된 바와 같이, 대조군 마우스는 모두 사망한 반면, 키메라 항체 2E5HL과 인간화 항체 2E5H3L0을 주사한 마우스는 완전한 보호 효과를 얻었다.
실시예 9 본 출원의 항원 결합 단백질의 폐렴연쇄상구균 감염 마우스에 대한 보호 작용
종자 은행에서 폐렴연쇄상구균을 취하여, 해동한 후, 균액 200μl를 취하여 스프레더로 컬럼비아 블러드 플레이트에 골고루 도말하고, 10 내지 12시간 동안 배양하며, 컬럼비아 블러드 플레이트에서 혈액 한천(3㎝Х3㎝) 조각을 꺼낸 후, 15ml의 멸균된 THY 배지에서, 37℃ 항온 배양상자에 정치하여 OD600이 0.4 내지 0.6이 되도록 배양하였으며, 약 2 내지 3시간이 소요되었다. 원심분리하여 균체를 수집하고, PBS로 재현탁하여 준비하였다. 체중에 따라 C57BL/6J 마우스를 무작위로 모델군 및 단클론 항체 약물 치료군으로 그룹화하였다. 마우스는 2시간 전에 2Х108 CFU의 폐렴연쇄상구균을 꼬리 정맥 주사하고, 2시간 후, 30mg/kg의 2E5HL, 2E5H3L0 또는 인간 IgG(대조군)를 각각 꼬리 정맥 주사하여, 각각의 군에서 마우스의 생존 상태를 관찰 및 기록하였다.
그 결과 도 5와 같이, 대조군 인간 IgG에 비해, 키메라 항체 2E5HL과 인간화 항체 2E5H3L0은 폐렴연쇄상구균(SP) 감염 마우스에 대해 우수한 보호 효과가 있는 것으로 나타났다.
SEQUENCE LISTING <110> STARMAB BIOLOGICS (SUZHOU) CO., LTD STARSHINING BIOLOGICS (SHANGHAI) CO., LTD <120> ANTIGEN-BINDING PROTEIN TARGETING STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE HEMOLYSIN AND USE THEREOF <130> 0193-PA-009 <160> 46 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 1 Thr Arg Thr Gln Phe Ile Thr Ser Val Val Ala Pro Phe Asp Phe 1 5 10 15 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 2 Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr 1 5 10 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 3 Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Asn Trp 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 4 Gln Gln Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 5 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 5 Trp Ala 1 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 6 Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 7 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR1 <400> 7 Glu Val Lys Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser 20 25 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR2 <400> 8 Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 15 Glu <210> 9 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR3 <400> 9 Arg Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp 1 5 10 15 Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp 20 25 30 Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys 35 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR4 <400> 10 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 L-FR1 <400> 11 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Gly Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Ile Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser 20 25 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 L-FR2 <400> 12 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 13 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 L-FR3 <400> 13 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 1 5 10 15 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu 20 25 30 Ala Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 L-FR4hu2E5 L-FR4 <400> 14 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 15 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 H-FR1 <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 H-FR2 <400> 16 Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 15 Glu <210> 17 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 H-FR3 <400> 17 Arg Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp 1 5 10 15 Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp 20 25 30 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 H-FR4 <400> 18 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 19 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 L-FR1 <400> 19 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser 20 25 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 L-FR2 <400> 20 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 21 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 L-FR3 <400> 21 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 1 5 10 15 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val 20 25 30 Ala Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 22 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 VH <400> 22 Glu Val Lys Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Asn 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Arg Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Ile Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Thr Gln Phe Ile Thr Ser Val Val Ala Pro Phe Asp 100 105 110 Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 23 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 VL <400> 23 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Gly Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Ile Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 24 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 VH3 <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Asn 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Arg Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Thr Gln Phe Ile Thr Ser Val Val Ala Pro Phe Asp 100 105 110 Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 25 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5VL0 <400> 25 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 26 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG1 <400> 26 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 27 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ig <400> 27 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 28 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> c2E5VHCH <400> 28 Glu Val Lys Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Asn 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Arg Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Ile Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Thr Gln Phe Ile Thr Ser Val Val Ala Pro Phe Asp 100 105 110 Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 325 330 335 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 29 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> c2E5VLCL <400> 29 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Gly Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Ile Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 30 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5VH3CH <400> 30 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Asn 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Arg Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Thr Gln Phe Ile Thr Ser Val Val Ala Pro Phe Asp 100 105 110 Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 325 330 335 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 31 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5VL0CL <400> 31 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 32 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR1; hu2E5 H-FR1 <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa = Lys or Gln <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa = Leu or Val <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa = Glu or Val <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa = Leu or Ser <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa = Leu or Met <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> Xaa = Ala or Val <400> 32 Glu Val Xaa Xaa Xaa Glu Ser Gly Gly Gly Xaa Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Xaa Lys Leu Ser Cys Xaa Ala Ser 20 25 <210> 33 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR2; hu2E5 H-FR2 <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa = Ala or Ser <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa = Pro or Ser <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa = Glu or Gly <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> Xaa = Ala or Gly <400> 33 Met Asn Trp Val Arg Gln Xaa Xaa Xaa Lys Gly Leu Glu Trp Val Xaa 1 5 10 15 Glu <210> 34 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR3; hu2E5 H-FR3 <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa = Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa = Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> Xaa = Lys or Arg <220> <221> misc_feature <222> (34)..(34) <223> Xaa = Ala or Gly <220> <221> misc_feature <222> (35)..(35) <223> Xaa = Ile or Val <400> 34 Arg Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp 1 5 10 15 Ser Lys Xaa Xaa Val Tyr Leu Gln Met Asn Xaa Leu Xaa Thr Glu Asp 20 25 30 Thr Xaa Xaa Tyr Tyr Cys 35 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 H-FR4; hu2E5 H-FR4 <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa = Leu or Val <400> 35 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Xaa Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 36 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 L-FR1; hu2E5 L-FR1 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa = Asp or Ser <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa = Ala or Gly <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa = Leu or Val <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa = Lys or Arg <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa = Ala or Ile <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> Xaa = Ile or Met <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> Xaa = Asn or Ser <400> 36 Asp Ile Val Met Xaa Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Xaa Val Ser Xaa Gly 1 5 10 15 Glu Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Cys Lys Ser Ser 20 25 <210> 37 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 L-FR2; hu2E5 L-FR2 <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa = Pro or Ser <400> 37 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Xaa Pro Lys Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 38 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu2E5 L-FR3; m2E5 L-FR3 <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa = Leu or Val <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> Xaa = Lys or Gln <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> Xaa = Leu or Val <400> 38 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Xaa Gly Ser Gly Ser 1 5 10 15 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Xaa Xaa Ala Glu Asp Xaa 20 25 30 Ala Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 39 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 VH; hu2E5 VH3 <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa = Lys or Gln <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa = Leu or Val <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa = Glu or Val <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa = Leu or Ser <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa = Leu or Met <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> Xaa = Ala or Val <220> <221> misc_feature <222> (40)..(40) <223> Xaa = Ala or Ser <220> <221> misc_feature <222> (41)..(41) <223> Xaa = Pro or Ser <220> <221> misc_feature <222> (42)..(42) <223> Xaa = Glu or Gly <220> <221> misc_feature <222> (49)..(49) <223> Xaa = Ala or Gly <220> <221> misc_feature <222> (79)..(79) <223> Xaa = Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (80)..(80) <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> misc_feature <222> (87)..(87) <223> Xaa = Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (89)..(89) <223> Xaa = Lys or Arg <220> <221> misc_feature <222> (94)..(94) <223> Xaa = Ala or Gly <220> <221> misc_feature <222> (95)..(95) <223> Xaa = Ile or Val <220> <221> misc_feature <222> (120)..(120) <223> Xaa = Leu or Val <400> 39 Glu Val Xaa Xaa Xaa Glu Ser Gly Gly Gly Xaa Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Xaa Lys Leu Ser Cys Xaa Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Asn 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Xaa Xaa Xaa Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Xaa Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Arg Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Xaa Xaa 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Xaa Leu Xaa Thr Glu Asp Thr Xaa Xaa Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Thr Gln Phe Ile Thr Ser Val Val Ala Pro Phe Asp 100 105 110 Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Xaa Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2E5 VL; hu2E5VL0 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa = Asp or Ser <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa = Ala or Gly <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa = Leu or Val <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa = Lys or Arg <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa = Ala or Ile <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> Xaa = Ile or Met <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> Xaa = Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (49)..(49) <223> Xaa = Pro or Ser <220> <221> misc_feature <222> (69)..(69) <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> misc_feature <222> (84)..(84) <223> Xaa = Leu or Val <220> <221> misc_feature <222> (85)..(85) <223> Xaa = Lys or Gln <220> <221> misc_feature <222> (89)..(89) <223> Xaa = Leu or Val <400> 40 Asp Ile Val Met Xaa Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Xaa Val Ser Xaa Gly 1 5 10 15 Glu Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Xaa Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Xaa Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Xaa Xaa Ala Glu Asp Xaa Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 41 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 (Kabat) <400> 41 Asp Asn Trp Met Asn 1 5 <210> 42 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 (Kabat) <400> 42 Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Arg Tyr Ala Glu Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 43 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 (Kabat) <400> 43 Thr Gln Phe Ile Thr Ser 1 5 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 (Kabat) <400> 44 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 (Kabat) <400> 45 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 (combined) <400> 46 Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Asn Trp Met Asn 1 5 10

Claims (68)

  1. 분리된 항원 결합 단백질로서,
    항체 중쇄 가변 영역 VH 중 적어도 하나의 CDR을 포함하고, 상기 VH는 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  2. 제1항에 있어서,
    HCDR3를 포함하고, 상기 HCDR3는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    HCDR2를 포함하고, 상기 HCDR2는 SEQ ID NO: 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    HCDR1을 포함하고, 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    HCDR1, HCDR2 및 HCDR3를 포함하고, 상기 HCDR1은 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 SEQ ID NO: 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR3는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서,
    H-FR1을 포함하고, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR1은 SEQ ID NO: 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 H-FR1은 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    H-FR2를 포함하고, 상기 H-FR2는 상기 HCDR1과 상기 HCDR2 사이에 위치하고, 상기 H-FR2는 SEQ ID NO: 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 H-FR2는 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  10. 제3항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    H-FR3를 포함하고, 상기 H-FR3은 상기 HCDR2와 상기 HCDR3 사이에 위치하고, 상기 H-FR3은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 H-FR3은 SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  12. 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    H-FR4를 포함하고, 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR4는 SEQ ID NO: 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 H-FR4는 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함하고, 상기 H-FR1은 SEQ ID NO: 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR2는 SEQ ID NO: 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR3은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR4는 SEQ ID NO: 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함하고, 상기 H-FR1은 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR2는 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR3은 SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR4는 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    1) H-FR1은 SEQ ID NO: 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR2는 SEQ ID NO: 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR3은 SEQ ID NO: 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, H-FR4는 SEQ ID NO: 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
    2) 상기 H-FR1은 SEQ ID NO: 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR2는 SEQ ID NO: 16로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR3은 SEQ ID NO: 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 H-FR4는 SEQ ID NO: 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것으로 이루어진 어느 하나의 군으로부터 선택되는 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하고, 상기 VH는 SEQ ID NO: 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 VH는 SEQ ID NO: 22 또는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 중쇄 불변 영역을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 불변 영역으로부터 유래되는, 분리된 항원 결합 단백질.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서,
    상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역으로부터 유래되는, 분리된 항원 결합 단백질.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    중쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 28 또는 SEQ ID NO: 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 경쇄 가변 영역 VL 중 적어도 하나의 CDR을 포함하고, 상기 VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    LCDR3를 포함하고, 상기 LCDR3는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    LCDR2를 포함하고, 상기 LCDR2는 SEQ ID NO: 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    LCDR1을 포함하고, 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    LCDR1, LCDR2 및 LCDR3를 포함하고, 상기 LCDR1은 SEQ ID NO: 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 SEQ ID NO: 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR3는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서,
    L-FR1을 포함하고, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR1은 SEQ ID NO: 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  30. 제29항에 있어서,
    상기 L-FR1은 SEQ ID NO: 11 또는 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  31. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    L-FR2를 포함하고, 상기 L-FR2는 상기 LCDR1과 LCDR2 사이에 위치하고, 상기 L-FR2는 SEQ ID NO: 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 L-FR2는 SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  33. 제26항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    L-FR3를 포함하고, 상기 L-FR3은 상기 LCDR2와 상기 LCDR3 사이에 위치하고, 상기 L-FR3은 SEQ ID NO: 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  34. 제33항에 있어서,
    상기 L-FR3은 SEQ ID NO: 13 또는 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  35. 제25항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    L-FR4를 포함하고, 상기 L-FR4의 N-말단은 상기 LCDR3의 C-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결되고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함하고, 상기 L-FR1은 SEQ ID NO: 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR2는 SEQ ID NO: 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR3은 SEQ ID NO: 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
    L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함하고, 상기 L-FR1은 SEQ ID NO: 11 또는 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR2는 SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR3은 SEQ ID NO: 13 또는 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    1) L-FR1은 SEQ ID NO: 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR2는 SEQ ID NO: 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR3은 SEQ ID NO: 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
    2) 상기 L-FR1은 SEQ ID NO: 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR2는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR3은 SEQ ID NO: 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 L-FR4는 SEQ ID NO: 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것으로 이루어진 어느 하나의 군으로부터 선택되는 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하고, 상기 VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  40. 제39항에 있어서,
    상기 VL은 SEQ ID NO: 23 또는 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 경쇄 불변 영역을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  42. 제41항에 있어서,
    상기 경쇄 불변 영역은 인간 Igκ 불변 영역으로부터 유래되는, 분리된 항원 결합 단백질.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서,
    상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    경쇄를 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 29 또는 SEQ ID NO: 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    1) VH는 SEQ ID NO: 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
    2) 상기 VH는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 SEQ ID NO: 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것으로 이루어진 어느 하나의 군으로부터 선택되는 VH 및 VL을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fv 단편, F(ab')2, F(ab)2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb를 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 단클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 완전 인간화 항체로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택되는, 분리된 항원 결합 단백질.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서,
    뉴몰리신 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는, 분리된 항원 결합 단백질.
  50. 제49항에 있어서,
    상기 뉴몰리신은 야생형 뉴몰리신 단백질 및 이의 변이체를 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서,
    상기 뉴몰리신 단백질은 야생형 뉴몰리신 단백질에 비해, 146번째 아미노산이 결실된 뉴몰리신 단백질 변이체를 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    폐렴연쇄상구균으로 인한 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료할 수 있는, 분리된 항원 결합 단백질.
  53. 제52항에 있어서,
    상기 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균으로 인한 질병 및/또는 병증의 합병증을 포함하는, 분리된 항원 결합 단백질.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 단백질을 포함하는, 폴리펩티드 분자.
  55. 제54항에 있어서, 융합 단백질을 포함하는, 폴리펩티드 분자.
  56. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질을 포함하는, 면역 접합체.
  57. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질 또는 제54항 또는 제55항에 따른 폴리펩티드 분자를 암호화하는, 핵산 분자.
  58. 제57항에 따른 핵산 분자를 포함하는, 벡터.
  59. 제57항에 따른 핵산 분자 또는 제58항에 따른 벡터를 포함하는, 세포.
  60. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 제54항 또는 제55항에 따른 폴리펩티드 분자, 제56항에 따른 면역 접합체, 제57항에 따른 핵산 분자, 제58항에 따른 벡터 및/또는 제59항에 따른 세포, 및 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약학 조성물.
  61. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질의 제조 방법으로서,
    상기 방법은 항원 결합 단백질을 발현시키는 조건 하에서, 제59항에 따른 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
  62. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 제54항 또는 제55항에 따른 폴리펩티드 분자, 제56항에 따른 면역 접합체, 제57항에 따른 핵산 분자, 제58항에 따른 벡터, 제59항에 따른 세포 및/또는 제60항에 따른 약학 조성물의 단독 사용 또는 다른 약물과의 병용.
  63. 약물 제조에서 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 제54항 또는 제55항에 따른 폴리펩티드 분자, 제56항에 따른 면역 접합체, 제57항에 따른 핵산 분자, 제58항에 따른 벡터, 제59항에 따른 세포 및/또는 제60항에 따른 약학 조성물의 약물 제조에서의 용도로서, 상기 약물은 질병 및/또는 병증을 예방 및/또는 치료하는 데 사용되는, 용도.
  64. 제63항에 있어서,
    상기 질병 및/또는 병증 및 이의 합병증이 폐렴연쇄상구균에 의해 유발되거나 매개되는, 용도.
  65. 제63항 또는 제64항에 있어서,
    상기 질병 및/또는 병증은 폐렴연쇄상구균에 의해 유발되거나 매개되는 질병 및/또는 병증의 합병증을 포함하는, 용도.
  66. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 제54항 또는 제55항에 따른 폴리펩티드 분자, 제56항에 따른 면역 접합체, 제57항에 따른 핵산 분자, 제58항에 따른 벡터, 제59항에 따른 세포 및/또는 제60항에 따른 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 방법.
  67. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 제54항 또는 제55항에 따른 폴리펩티드 분자, 제56항에 따른 면역 접합체, 제57항에 따른 핵산 분자, 제58항에 따른 벡터, 제59항에 따른 세포 및/또는 제60항에 따른 약학 조성물을 포함하는, 시료에서 뉴몰리신 단백질을 검출하는 키트.
  68. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항원 결합 단백질, 제54항 내지 제55항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드 분자, 제56항에 따른 면역 접합체, 제57항에 따른 핵산 분자, 제58항에 따른 벡터, 제59항에 따른 세포 및/또는 제60항에 따른 약학 조성물의 키트 제조에서의 용도로서,
    상기 키트는 시료에서 뉴몰리신 단백질의 존재 및/또는 함량을 검출하는 데 사용되는, 용도.
KR1020237036175A 2021-03-22 2022-03-21 뉴몰리신을 표적으로 하는 항원 결합 단백질 및 이의 용도 KR20230162797A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110301731 2021-03-22
CN202110301731.X 2021-03-22
PCT/CN2022/082011 WO2022199527A1 (zh) 2021-03-22 2022-03-21 靶向肺炎链球菌溶血素的抗原结合蛋白及其用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230162797A true KR20230162797A (ko) 2023-11-28

Family

ID=83395176

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237036175A KR20230162797A (ko) 2021-03-22 2022-03-21 뉴몰리신을 표적으로 하는 항원 결합 단백질 및 이의 용도

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP4317182A1 (ko)
JP (1) JP2024513746A (ko)
KR (1) KR20230162797A (ko)
CN (1) CN117062833A (ko)
BR (1) BR112023019358A2 (ko)
WO (1) WO2022199527A1 (ko)

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
ES2075803B1 (es) * 1993-12-17 1996-05-16 Univ Oviedo Procedimiento de la deteccion de neumolisina
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6420140B1 (en) 1996-10-11 2002-07-16 Abgenix, Inc. Production of multimeric protein by cell fusion method
US20060073141A1 (en) 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
GB0410220D0 (en) * 2004-05-07 2004-06-09 Kirkham Lea Ann Mutant pneumolysin proteins
CN101061139A (zh) * 2004-08-23 2007-10-24 吉奈斯拓公司 肺炎球菌溶血素的结合部分
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
WO2012064865A1 (en) * 2010-11-09 2012-05-18 The University Of Chicago Role of adam10 and its relevance to disease and therapeutics
AR097648A1 (es) 2013-09-13 2016-04-06 Amgen Inc Combinación de factores epigenéticos y compuestos biespecíficos que tienen como diana cd33 y cd3 en el tratamiento de leucemia mieloide
TWI781130B (zh) * 2017-01-03 2022-10-21 美商再生元醫藥公司 抗金黃色葡萄球菌溶血素ａ毒素之人類抗體

Also Published As

Publication number Publication date
BR112023019358A2 (pt) 2023-12-26
CN117062833A (zh) 2023-11-14
EP4317182A1 (en) 2024-02-07
JP2024513746A (ja) 2024-03-27
WO2022199527A1 (zh) 2022-09-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102587442B1 (ko) 항-cd47 항체 또는 그 적용
KR20230009441A (ko) 항-tigit 항체, 이의 제조 방법 및 용도
KR102531577B1 (ko) Pcsk9 항체, 및 약제학적 조성물 및 이의 용도
US20200071424A1 (en) Humanized monoclonal antibody, inhibiting the enzymatic activity of vascular endothelial lipase
US20240067747A1 (en) Cd73-binding protein and use thereof
TW202132351A (zh) 抗cd47/抗pd-l1抗體及其應用
US20240026024A1 (en) Cd73 antigen-binding protein and application thereof
US20230227572A1 (en) Anti-pvrig protein antibody or antibody fragment and use thereof
KR20230162797A (ko) 뉴몰리신을 표적으로 하는 항원 결합 단백질 및 이의 용도
US20240174736A1 (en) Antigen-binding protein targeting pneumolysin and use thereof
CN113264999B (zh) 中和肺炎链球菌溶血素蛋白的抗原结合蛋白及其用途
CN114075283A (zh) 结合人cd38的抗体、其制备方法和用途
KR20230147616A (ko) 황색포도상구균 α-독소를 표적으로 하는 항원 결합단백질 및 이의 응용
CN114957460A (zh) 交叉中和金黄色葡萄球菌毒素的抗原结合蛋白及其用途
EP4219553A1 (en) Anti-tigit antibody and double antibody and their application
CN115521378B (zh) Pd-l1抗体及其用途
CN114539418A (zh) 双特异性抗体及其用途
CN115724969A (zh) Lag-3结合分子及其应用