KR20230009441A - 항-tigit 항체, 이의 제조 방법 및 용도 - Google Patents

항-tigit 항체, 이의 제조 방법 및 용도 Download PDF

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하이지아 유
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시아오웨 웨이
쉬 첸
지안메이 시에
시앙양 주
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상하이 후아오타 바이오파마슈티컬 컴퍼니 리미티드
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Abstract

단리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 그 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함하고, 그 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 항-TIGIT 항체, 이의 제조 방법 및 용도를 더 제공한다. 그 항원 결합 단백질은 TIGIT 항원에 특이적으로 결합하여 TIGIT와 이의 리간드의 결합을 차단할 수 있고, TIGIT 관련 질병을 예방 또는 치료하는 약제의 제조에 사용될 수 있다.

Description

항-TIGIT 항체, 이의 제조 방법 및 용도
본 발명은 생물의학 분야에 관한 것이며, 구체적으로 TIGIT를 표적화하는 항원 결합 단백질, 이의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.
정상적인 상황에서, T 세포는 항원 제시 세포(Antigen-presenting cells，APCs)가 제시하는 외인성 또는 내인성 항원-MHC-I/II 복합체에 의존해 T 세포(CD4+, CD8+) 표면 수용체(T Cell Receptor, TCR)와 결합하고 추가적인 공동 자극(Costimulatory) 신호에 의해 충분히 활성화된 후, 다른 효과기 세포를 통해 관련 항원을 발현하는 세포를 사멸시킨다. 반대로, T 세포는 T 세포의 활성, 증식, 생존 등에 부정적인 조절 작용을 갖는 공동 억제(Coinhibitory) 신호에 의해서도 조절되며, 또 자가 내성을 유지하여 과도한 자가 면역 반응을 방지하고, 면역 응답으로 인한 조직 손상을 줄일 수 있다. 종양 세포의 미세 환경에서, T 세포의 활성과 억제는 비정상 모드에 있으며, 현재 그 정상화는 종양 치료를 위한 중요한 수단으로 널리 인식되고 있다.
TIGIT(T cell Ig and ITIM domain, WUCAM, Vstm3 또는 VSIG9라고도 함)는 폴리오바이러스 수용체(PVR)/Nectin 계열의 구성원이다. 이는 세포외 면역글로불린 가변 영역(IgV) 도메인, 1유형 막횡단 도메인 및 고전적 티로신 기반 면역 수용체 억제화 모티프(ITIM) 및 면역글로불린 티로신 꼬리(ITT) 모티프를 갖는 세포내 도메인으로 구성된다. TIGIT은 림프구에서 발현되며, 특히 효과기 및 조절 CD4+T 세포, 여포 보조 CD4+T 세포, 효과기 CD8+T 세포 및 자연 살해(NK) 세포에서 고발현된다. TIGIT 유전자는 인간의 16번 염색체에 위치하고, 244 개의 아미노산으로 이루어진 I형 막관통 단백질을 코딩한다. 인간 TIGIT 분자 세포막외 영역은 길이가 141개의 아미노산이고, 1개의 면역글로불린 V 유사 도메인이 있다. 막관통 영역은 23개의 아미노산이 있다. 세포질 영역은 더 짧고, 80개의 아미노산이 있으며, 1개의 PDZ 결합 도메인 및 1개의 ITIM 모티프가 있다.
CD155(PVR, Necl5 또는 Tage4라고도 함)는 TIGIT의 고친화성 리간드이다. 종양 표면에 발현되는 CD155가 일단 NK 및 T 세포 표면의 TIGIT와 결합하면, 종양 세포에 대한 사멸 작용이 억제된다. TIGIT는 종양 세포의 초기 사멸 및 종양 항원 방출을 통해 NK세포의 효과를 억제할 수 있다. 수지상 세포 공동 자극 능력을 억제하여 암 항원 제시를 감소시키고 IL-10과 같은 항염성 사이토카인을 증가시키며, TIGIT는 또 종양 세포와 같은 다른 세포의 PVR 신호 전달을 유도할 수 있다. TIGIT는 CD8+T 세포 효과를 직접적으로 억제하거나, 또는 TIGIT+Treg가 CD8+T 세포를 억제하여 암세포의 제거를 방지할 수 있다(Manieri et al., Inhibition of the Cancer Immunity Cycle by TIGIT.2016).
다수의 전임상 연구 결과에서 TIGIT가 암은 물론 다른 질병 환자에게도 적합한 표적이 될 수 있는 것으로 밝혀졌기 때문에, 다양한 관련 질병에서 TIGIT의 효과와 기능을 고려해, 당업계에서는 여전히 환자 치료에 적합한 개선된 항-TIGIT 특이성 항체의 개발이 필요하다.
본 발명은 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR를 포함할 수 있는 단리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 상기 단리된 항원 결합 단백질도 경쇄 가변 영역 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명은 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR를 포함할 수 있는 단리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 상기 단리된 항원 결합 단백질도 경쇄 가변 영역 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 상기 단리된 항원 결합 단백질은 하기 중 하나 이상의 특성을 갖는다.
1) 1×10-10M 이하(예를 들어, 8×10-11M, 5×10-11M, 2×10-11M, 1×10-11M 이하)의 KD값으로 TIGIT 단백질에 결합할 수 있는 특성, 여기서 상기 KD값은 표면 플라즈몬 공명을 통해 측정된다.
2) FACS 측정에서, CD155와 TIGIT의 결합을 차단할 수 있는 특성, 및
3) 종양의 성장 및/또는 종양 세포의 증식을 억제할 수 있는 특성.
한 측면에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함하며, 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 하기 중 하나 이상의 특성을 갖는다.
1) 1×10-10M 이하의 KD값으로 TIGIT 단백질에 결합할 수 있는 특성, 여기서 상기 KD값은 표면 플라즈몬 공명을 통해 측정된다.
2) FACS 측정에서, CD155와 TIGIT의 결합을 차단할 수 있는 특성, 및
3) 종양의 성장 및/또는 종양 세포의 증식을 억제할 수 있는 특성.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 참조 항체와 경쟁적으로 상기 TIGIT 단백질에 결합하며, 여기서 상기 참조 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 참조 항체의 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 참조 항체의 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 상기 LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab)2, Fv 단편, F(ab')2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항체는 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 완전 인간 항체로 구성된 군에서 선택된다.
특정 실시 양태에서, 상기 VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 여기서 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 HCDR2는 서열번호 4 및 42 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 HCDR3은 서열번호 5 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 (1) HCDR1:서열번호 3, HCDR2:서열번호 4, 및 HCDR3:서열번호 5, 및 (2) HCDR1:서열번호 3, HCDR2:서열번호 42, 및 HCDR3:서열번호 43으로 구성된 어느 하나의 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VL은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 LCDR1은 서열번호 6 및 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 LCDR3은 서열번호 8 및 53 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 (1) LCDR1:서열번호 6, LCDR2:서열번호 7, 및 LCDR3:서열번호 8, 및 (2) LCDR1:서열번호 52, LCDR2:서열번호 7, 및 LCDR3:서열번호 53으로 구성된 어느 하나의 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR1, L-FR2, L-FR3, 및 L-FR4를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR1은 서열번호 68로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR1은 서열번호 15, 16, 44 및 45 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR2는 상기 LCDR1과 상기 LCDR2 사이에 위치하고, 상기 L-FR2는 서열번호 70으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR2는 서열번호 17, 18, 46 및 47 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR3은 상기 LCDR2와 상기 LCDR3 사이에 위치하고, 상기 L-FR3은 서열번호 72로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR3은 서열번호 19, 20, 21, 48, 49 및 50 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR4의 N-말단은 상기 LCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 L-FR4는 서열번호 73으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR4는 서열번호 22 및 51 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VL은 서열번호 2, 10, 11, 13, 33 및 34 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 불변 영역을 포함하며, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역에서 유래하고, 상기 인간 κ 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR1, H-FR2, H-FR3, 및 H-FR4를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR1은 서열번호 58로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR1은 서열번호 23 및 35 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR2는 상기 HCDR1과 상기 HCDR2 사이에 위치하고, 상기 H-FR2는 서열번호 60으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR2는 상기 HCDR1과 상기 HCDR2 사이에 위치하고, 상기 H-FR2는 서열번호 24, 25, 26, 36 및 37 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR3은 상기 HCDR2와 상기 HCDR3 사이에 위치하고, 상기 H-FR3은 서열번호 61로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR3은 상기 HCDR2와 상기 HCDR3 사이에 위치하고, 상기 H-FR3은 서열번호 27, 38 및 39 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 H-FR4는 서열번호 62로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 H-FR4는 서열번호 28, 40 및 41 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VH는 서열번호 1, 9, 12, 14 및 32 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 불변 영역을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 불변 영역을 포함하고, 인간 IgG1 불변 영역은 서열번호 29 내지 30 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함하고, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 (1) VH:서열번호 9, VL:서열번호 10, (2) VH:서열번호 9, VL:서열번호 11, (3) VH:서열번호 12, VL:서열번호 13, (4) VH:서열번호 14, VL:서열번호 11, (5) VH:서열번호 1, VL:서열번호 2, (6) VH:서열번호 32, VL:서열번호 34, 및 (7) VH:서열번호 32, VL:서열번호 33으로 구성된 어느 하나의 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질을 코딩하는 단리된 하나 이상의 핵산 분자를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 벡터를 제공하며, 상기 벡터는 상기 핵산 분자를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포를 제공하며, 상기 세포는 상기 핵산 분자 또는 상기 벡터를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 폴리펩티드를 제공하며, 상기 폴리펩티드는 상기 단리된 항원 결합 단백질을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 면역접합체를 제공하며, 상기 면역접합체는 상기 단리된 항원 결합 단백질 또는 상기 폴리펩티드를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 단리된 항원 결합 단백질이 발현되는 조건 하에 상기 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 폴리펩티드, 상기 면역접합체 및/또는 상기 세포, 및 임의로 제약상 허용되는 보조제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포, 상기 폴리펩티드, 상기 면역접합체 및/또는 상기 약학적 조성물의 약제 제조 중의 용도를 제공하며, 상기 약제는 TIGIT 관련 질병의 예방, 경감 및/또는 치료에 사용된다.
특정 실시 양태에서, 상기 TIGIT 관련 질병은 T 세포 기능장애성 질환이다.
특정 실시 양태에서, 상기 TIGIT 관련 질병은 종양이다. 특정 실시 양태에서, 상기 종양은 고형 종양 및/또는 비고형 종양을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 유방암, 결장암, 간암, 림프종, 연골육종, 다발성 골수종, 폐암, 신장암, 흑색종, T 림프종 및 췌장암으로 구성된 군에서 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD155와 TIGIT의 결합을 억제하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포, 상기 폴리펩티드, 상기 면역접합체 및/또는 상기 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 TIGIT 관련 질병의 예방, 경감 또는 치료에 사용되는 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포, 상기 폴리펩티드, 상기 면역접합체 및/또는 상기 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 TIGIT 관련 질병의 예방, 경감 또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 필요한 대상체에게 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포, 상기 폴리펩티드, 상기 면역접합체 및/또는 상기 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 TIGIT 관련 질병은 T 세포 기능장애성 질병이다.
특정 실시 양태에서, 상기 TIGIT 관련 질병은 종양이다. 특정 실시 양태에서, 상기 종양은 고형 종양 및/또는 비고형 종양을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 유방암, 결장암, 간암, 림프종, 연골육종, 다발성 골수종, 폐암, 신장암, 흑색종, T 림프종 및 췌장암으로 구성된 군에서 선택된다.
당업자는 하기 상세한 설명을 통해 본 발명의 기타 측면 및 이점을 용이하게 통찰할 수 있다. 하기의 상세한 설명에는 본 발명의 예시적 실시 양태만 도시 및 설명된다. 당업자가 인식하는 바와 같이, 본 발명의 내용은 본 발명과 관련된 발명의 정신 및 범위를 벗어나 당업자가 개시된 구체적 실시 양태를 변경할 수 없게 한다. 따라서, 본 발명의 도면 및 명세서의 설명은 예시적일 뿐 제한적인 것이 아니다.
본 발명과 관련된 구체적 특징은 청구 범위에 설명된 바와 같다. 하기의 상세한 예시적 실시 양태 및 도면을 통해 본 발명과 관련된 특징 및 이점을 보다 잘 이해할 수 있다. 도면에 대한 간략한 설명은 하기와 같다.
도 1은 인간 TIGIT를 발현하는 세포에 대한 TIGIT 키메라 항체의 결합 활성,
도 2는 인간 TIGIT를 발현하는 세포에 대한 TIGIT 인간화 항체의 결합 활성,
도 3은 인간 TIGIT와 이의 리간드 CD155의 결합에 대한 TIGIT 키메라 항체의 차단 활성,
도 4는 TIGIT와 이의 리간드 CD155의 결합에 대한 TIGIT 인간화 항체의 차단 활성,
도 5는 동물 생체 내에서 TIGIT 항체의 효능 측정,
도 6은 동물 생체 내에서의 TIGIT 항체와 대조 그룹 항체 Tiragolumab의 효능 측정 비교,
도 7은 동물 생체 내에서 TIGIT 항체의 약력학적 실험 결과이다.
본 발명의 실시 양태는 특정한 구체적 실시 예를 통해 하기에서 설명되며, 통상의 지식을 가진 자라면 본 명세서에 개시된 내용을 통해 본 발명의 기타 이점 및 효과를 쉽게 이해할 수 있다.
용어 정의
본 발명에서, 용어 "TIGIT"는 "Ig 및 ITIM 도메인을 함유하는 T 세포 면역 수용체"를 말하며, 통상적으로 PVR/CD155 및 Nectin-2/CD112에 결합할 수 있는 면역글로불린의 PVR(폴리오바이러스 수용체) 계열의 구성원이다. 본 발명의 TIGIT는 영장류(예를 들어, 인간, 히말라야 원숭이 및 필리핀 원숭이)와 같은 포유동물 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하는 어느 하나의 척추동물에서 유래하는 TIGIT 단백질을 지칭할 수 있다. 그 용어는 전장 TIGIT 또는 이의 단편(예를 들어, 신호 펩티드가 결핍된 이의 성숙한 단편), 가공되지 않은 TIGIT，세포에서 가공으로 인한 임의의 형식의 TIGIT, 및 인공적으로 합성된 TIGIT를 포괄한다. 그 용어는 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체와 같은 TIGIT의 변이체를 더 포함한다. 특정 경우에서, TIGIT는 인간 TIGIT이며, 인간 TIGIT의 아미노산 서열은 UniProt 수탁번호 Q495A1로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 경우에서, TIGIT는 필리핀 원숭이 TIGIT이며, 필리핀 원숭이 TIGIT의 아미노산 서열은 UniProt 수탁번호 G7NXM4로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 경우에서, TIGIT는 마우스 TIGIT이며, 마우스 TIGIT의 아미노산 서열은 UniProt 수탁번호 P86176으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에서, 용어 "항원 결합 단백질"은 통상적으로 항원에 결합되는 부분의 단백질, 및 항원 결합 부분이 항원 결합 단백질과 항원의 결합을 촉진하는 배열을 채택하도록 임의로 허용하는 스캐폴드 또는 프레임워크 부분을 포함하는 단백질을 말한다. 항원 결합 단백질의 예는 필요한 항원 결합 활성을 나타내기만 하면 항원 결합 단편(Fab, Fab', F(ab)2, Fv 단편, F(ab')2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb), 면역접합체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 항체 단편、항체 유도체, 항체 유사체 또는 융합 단백질 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
본 발명에서, 용어 "Fab"는 통상적으로 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 단편을 말하며, 경쇄 불변 도메인 및 중쇄 제1 불변 도메인(CH1)을 더 포함한다. 용어 "Fab"는 통상적으로 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에 소수의 잔기(항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인 포함)를 첨가함에 따라 Fab와 상이한 단편을 말한다. 용어 "F(ab')2"는 통상적으로 힌지 영역에서 이황화 가교를 통해 연결된 두 개의 Fab 단편을 포함하는 Fab'의 이량체 항체 단편을 말한다. 용어 "Fv"는 통상적으로 완전한 항원 인식과 결합 부위를 포함하는 가장 작은 항체 단편을 말한다. 특정 경우에서, 그 단편은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역이 밀접하게 비공유 결합되는 이량체로 구성될 수 있다. 용어 "dsFv"는 통상적으로 이황화 결합이 안정적인 Fv 단편을 말하며, 이의 단일 경쇄 가변 영역과 단일 중쇄 가변 영역 사이의 결합은 이황화 결합이다. 용어 "dAb 단편"은 통상적으로 VH 도메인으로 구성되는 항체 단편을 말한다. 본 발명에서, 용어 "scFv"는 통상적으로 항체의 중쇄 가변 도메인과 경쇄 가변 도메인이 유연한 펩티드 링커를 통해 공유결합 짝짓기하여 형성되는 1가 분자를 말한다. 이러한 scFv 분자는 NH2-VL-링커-VH-COOH 또는 NH2-VH-링커-VL-COOH의 일반 구조를 가질 수 있다.
본 발명에서, 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 단일클론 항체(두 개의 경쇄 및 두 개의 중쇄를 포함하는 전장 단일클론 항체 포함), 다중클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 인간화 항체, 완전 인간 항체, 키메라 항체 및 낙타화된 단일 도메인 항체를 포함하나 이에 국한되지 않는 항체를 포괄한다. "항체"는 통상적으로 이황화 결합을 통해 상호 연결되는 적어도 두 개의 중쇄(HC) 및 두 개의 경쇄(LC)의 단백질, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 자연 발생 IgG, IgD 및 IgA 항체에서, 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3의 3가지 도메인을 포함한다. 특정 자연 발생 항체에서, 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(CDR)으로도 불리는 초가변 영역으로 더 세분화될 수 있으며, 이 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 불리는 비교적 보존된 영역과 번갈아 나타난다. 각 VH 및 VL은 아미노 말단에서 카르복시 말단까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4의 순서로 배열되는 3개의 CDR 및 4개의 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR 영역(H-FR1, H-FR2, H-FR3, H-FR4, L-FR1, L-FR2, L-FR3, L-FR4)을 포함하며, 대부분은 β-병풍 구조를 사용하고, 3개의 CDR을 통해 연결되어 환형의 연결을 형성하며, 일부 경우에는 β-병풍 구조의 일부를 형성한다. 각 사슬 중의 CDRs는 FR 영역을 통해 밀착되게 연결되고, 다른 사슬로부터의 CDR과 함께 항체의 항원 결합 부위를 형성한다. 항체의 불변 영역은 면역글로불린과 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1성분(Clq)을 포함하는 숙주 조직의 결합을 매개할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "가변"은 통상적으로 항체의 가변 도메인의 서열의 특정 부위가 강하게 변화하여, 이의 특졍 항원에 대한 각 특정 항체의 결합 및 특이성을 형성하는 사실을 말한다. 그러나, 가변성은 항체의 전체 가변 영역에 고르게 분포되지 않고, 상보성 결정 영역(CRD) 또는 초가변 영역(HVR)으로 불리는 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 3개 분절에 집중된다. 가변 영역에서 더욱 고도로 보존적인 부위를 프레임워크(FR)라 한다. 당업계에서, 항체의 CDR은 서열 가변성에 기반한 Kabat 정의 규칙(Kabat 등, 면역학의 단백질 서열, 제5판, 미국 국립보건원, 베세스타, 매릴랜드(1991) 참조), 구조적 루프 영역의 위치에 기반한 Chothia 정의 규칙(A1- Lazikani 등, JMol Biol 273:927-48,1997 참조) 및 IMGT 온톨로지(IMGT-ONTOLOGY)의 개념 및 IMGT Scientific 차트 규칙에 기반한 IMGT 정의 규칙과 같은 다양한 방법을 통해 정의될 수 있다.
IMGT는 면역유전학 및 면역정보학에 대한 글로벌 참조 데이터베이스()인 국제 ImMunoGeneTics 정보 시스템을 말한다. IMGT는 인간 및 기타 척추동물의 면역글로불린(IG) 또는 항체, T 세포 수용체(TR), 주요 조직적합성(MH), 및 척추동물 및 비척추동물의 면역글로불린(IgSF), MH 슈퍼패밀리(MhSF) 및 면역계 관련 단백질(RPI)을 전문적으로 연구한다.
본 발명에서, 용어 "단리된" 항원 결합 단백질은 통상적으로 이의 생산 환경(예를 들어, 자연 발생 또는 재조합)의 성분으로부터 인식, 단리 및/또는 회수된 항원 결합 단백질을 말한다. 이의 생산 환경의 오염 성분은 일반적으로 그 연구, 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 기타 단백질 또는 비단백질 용질을 포함할 수 있다. 단리된 항원 결합 단백질 또는 항체는 일반적으로 적어도 하나의 정제 단계를 통해 제조된다.
본 발명에서, 용어 "단일클론 항체"는 통상적으로 기본적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 즉, 존재할 수 있는 소수의 자연 돌연변이를 제외하고, 집단 내의 개별 항체가 동일한 것을 말한다. 단일클론 항체는 일반적으로 단일 항원 부위에 대해 고도의 특이성을 갖는다. 또한, 일반적인 다중클론 항체 제제(일반적으로 다른 결정인자에 대해 다른 항체가 있음)와 달리, 각 단일클론 항체는 항원의 단일 결정인자에 대해 지시된다. 단일클론 항체는 특이성 이외에도, 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 배양을 통해 합성될 수 있는 이점이 있다. 수식어 "단일클론"은 기본적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체의 특성을 의미하며, 특정 방법을 통해 항체를 생산해야 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에서 사용되는 단일클론 항체는 하이브리도마 세포에서 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법을 통해서도 제조될 수 있다.
본 발명에서, 용어 "키메라 항체:는 통상적으로 가변 영역이 한 종에서 유래되고, 불변 영역이 다른 종에서 유래된 항체를 말한다. 일반적으로, 가변 영역은 설치류와 같은 실험동물의 항체("모 항체")에서 유래하고, 불변 영역은 인간 항체에서 유래되므로, 수득된 키메라 항체는 어미(예를 들어, 마우스 유래) 항체에 비해 인간 개체에서 불량 면역반응을 일으킬 가능성이 낮다.
본 발명에서, 용어 "인간화 항체"는 통상적으로 비인간 항체(예를 들어, 마우스 항체)의 CDR 영역 이외의 아미노산 일부 또는 전부가 인간 면역글로불린에서 유래한 상응하는 아미노산에 의해 치환된 항체를 말한다. CDR 영역에서, 아미노산의 작은 추가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형은 항체가 특정 항원에 결합하는 특성을 여전히 유지하는 한 역시 허용될 수 있다. 인간화 항체는 임의로 인간 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. "인간화 항체"는 원래 항체와 유사한 항원 특이성을 유지한다. 비인간(예를 들어, 마우스) 항체의 "인간화" 형태는 최소한으로 비인간 면역글로불린 서열에서 유래한 키메라 항체를 포함할 수 있다. 특정 경우에서, 인간 면역글로불린(수용체 항체)의 CDR 영역 잔기는 원하는 특성, 친화성 및/또는 능력을 가진 비인간 종(공여체 항체)(예를 들어, 마우스, 래트, 집토끼 또는 비인간 영장류)의 CDR 영역 잔기로 대체될 수 있다. 특정 경우에서, 인간 면역글로불린의 FR 영역 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체될 수 있다. 또한, 인간화 항체는 수용체 항체 또는 공여체 항체에 없는 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 이들 변형은 결합 친화성과 같은 항체의 특성을 추가적으로 개선하기 위해 이루어질 수 있다.
본 발명에서, 용어 "완전 인간 항체"는 통상적으로 인간을 코딩하는 항체의 유전자를 유전자 공학으로 조작되어 항체 유전자가 결핍된 동물에 전이시켜 동물에 발현시키는 항체를 말한다. 항체의 모든 부분(항체의 가변 영역 및 불변 영역 포함)은 모두 인간 유래의 유전자에 의해 코딩된다. 완전 인간 항체는 이종 항체가 인간에 일으키는 면역 부작용을 크게 줄일 수 있다. 당업계에서 완전 인간 항체를 얻는 방법은 파지 디스플레이 기술, 형질 전환 마우스 기술, 리보솜 디스플레이 기술 및 RNA-폴리펩티드 기술 등이 있을 수 있다.
본 발명에서, 용어 "결합", "특이적 결합" 또는 "…에 대한 특이성"은 통상적으로 분자(생체 분자 포함)의 이질적 집단이 존재하는 상황에서 표적의 존재를 확정할 수 있는 항원과 항체 간의 결합과 같은 측정 가능하고 재현 가능한 상호작용을 말한다. 예를 들어, 항체는 그 항원 결합 도메인을 통해 에피토프와 결합하고, 그 결합에는 항원 결합 도메인과 에피토프 사이의 약간의 상보성이 필요하다. 예를 들어, 표적(에피토프일 수 있음)에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 표적에 결합하는 것 보다 더 큰 친화성, 친화도, 더 쉽고 및/또는 더 큰 지속 시간으로 그 표적에 결합하는 항체이다. 항체가 무작위로 관련 없는 에피토프에 결합하는 것보다 더 쉽게 그 항원 결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하면, 항체가 그 항원에 "특이적으로 결합"한다고 지칭한다. "에피토프"는 항원의 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)에 결합하는 특정 원자 그룹(예를 들어, 당 측쇄, 포스포릴, 설포닐) 또는 아미노산을 말한다.
본 발명에서, 상호 교환 가능하게 사용되는 용어 "KD", "K D "는 통상적으로 평형 해리 상수를 말하며, "KD"는 해리 속도 상수(kdis, "오프율(off-rate)(koff)" 또는 "kd"라고도 함)와 결합 속도 상수(kon, "결합율(kon)" 또는 "ka"라고도 함)의 비율이다. 결합 속도 상수(kon), 해리 속도 상수(kdis) 및 평형 해리 상수(KD)는 항원에 대한 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)의 결합 친화도를 나타내는 데 사용될 수 있다. 결합 및 해리 속도 상수를 결정하는 방법은 당업계에 널리 알려져 있는 바이오레이어 간섭계 기술(BLI), 방사면역 측정(RIA), 평형 투석법, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 형광 공명 에너지 전달(FRET), 공동 면역 침전(Co-IP) 및 단백질 칩 기술을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 상이한 조건(예를 들어, 염 농도, Ph)에서 측정하면 측정된 특정 단백질-단백질 상호작용의 친화도는 다를 수 있다.
본 발명에서, 용어 "참조 항체"는 통상적으로 본 발명에 개시된 항원 결합 단백질이 항원 TIGIT에 결합하기 위해 경쟁하는 항체를 말한다.
본 발명에서, 용어 "ADCC" 또는 "항체 의존적 세포 매개 세포 독성"은 통상적으로 일부 분비된 면역글로불린이 특정 세포 독성 효과기 세포(예를 들어, NK 세포, 호중구 및 대식세포)의 Fc 수용체(FcR) 상에 결합하는 세포 독성의 형태를 말한다. 이러한 세포 독성 효과기 세포는 항원을 보유한 표적 세포에 특이적으로 결합한 후, 세포 독성으로 표적 세포를 죽일 수 있다. ADCC를 매개하는 주요 세포(예를 들어, NK세포)는 FcγRIII만 발현하지만, 단핵 세포는 FcγRI, FcγRII 및 FeγRIII를 발현한다 (Ravetch and Kinet, Annu.Rev.Immunol.9:457-92 (1991) 제464페이지 표 3 참조). 시험관 내 및/또는 생체 내 세포 독성 측정법을 수행하여 표적 분자의 ADCC 활성을 평가할 수 있는데, 예를 들어, 시험관 내 ADCC 측정법은 미국 특허번호 No.5,500,362 또는 No.5,821,337 또는 미국 특허 No.6,737,056(Presta)에 개시된 내용을 참조할 수 있다. 이러한 측정법에 사용할 수 있는 효과기 세포는 PBMC 및 NK 세포를 포함한다. 대안적으로/추가적으로, 생체 내 표적 분자의 ADCC 활성은 예를 들어, Clynes et al., PNAS (USA) 95:652-656 (1998)에 개시된 바와 같이 동물 모델에서 평가될 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 측정법은 항체에 FcγR 결합이 결핍되어 있지만(따라서 ADCC 활성이 결여될 수 있음) FcRn 결합 능력이 유지되는지 확인하기 위해 수행할 수 있다.
ADCC 활성은 Fc 영역 변형을 통해 감소될 수 있다. 특정 경우에서, Fc 수용체와의 결합에 영향을 미치는 부위는 제거될 수 있는데, 예를 들어, 새비지 수용체 결합 부위가 아닌 부위는 제거된다. 특정 경우에서, Fc 영역이 변형되어 ADCC 부위를 제거할 수 있다. ADCC 부위는 당업계에 이미 공지되어 있으며, IgG1의 ADCC 부위에 관해서는 예를 들어, Sarmay et al.(1992) Molec.Immunol.29 (5):633-9를 참조한다.
본 발명에서, 용어 "사이에"는 통상적으로 특정 아미노산 단편의 C-말단이 첫 번째 아미노산 단편의 N-말단에 직접 또는 간접적으로 연결되고, N-말단이 두 번째 아미노산 단편의 C-말단에 직접 또는 간접적으로 연결되는 것을 말한다. 경쇄에서, 예를 들어, 상기 L-FR2의 N-말단은 상기 LCDR1의 C-말단에 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR2의 C-말단은 상기 LCDR2의 N-말단에 직접 또는 간접적으로 연결된다. 또 다른 예에서, 상기 L-FR3의 N-말단은 상기 LCDR2의 C-말단에 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR3의 C-말단은 상기 LCDR3의 N-말단에 직접 또는 간접적으로 연결된다. 중쇄에서, 예를 들어, 상기 H-FR2의 N-말단은 상기 HCDR1의 C-말단에 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR2의 C-말단은 상기 HCDR2의 N-말단에 직접 또는 간접적으로 연결된다. 또 다른 예에서, 상기 H-FR3의 N-말단은 상기 HCDR2의 C-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR3의 C-말단은 상기 HCDR3의 N-말단에 직접 또는 간접적으로 연결된다. 본 발명에서, "제1 아미노산 단편" 및 "제2 아미노산 단편"은 상동하거나 상이한 임의의 아미노산 단편일 수 있다.
본 발명에서, 용어 "단리된" 항원 결합 단백질은 통상적으로 이의 생산 환경(예를 들어, 자연 발생 또는 재조합)의 성분으로부터 인식, 단리 및/또는 회수된 항원 결합 단백질을 말한다. 이의 생산 환경의 오염 성분은 일반적으로 그 연구, 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 기타 단백질 또는 비단백질 용질을 포함할 수 있다. 단리된 항원 결합 단백질 또는 항체는 일반적으로 적어도 하나의 정제 단계를 통해 제조된다. 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 일반적으로 TIGIT 항원 이외의 항원에는 결합하지 않는다.
본 발명에서, 용어 "단리된 핵산 분자" 또는 "단리된 폴리뉴클레오티드"는 통상적으로 자연계에서 발견되는 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 일부와 회합하지 않거나, 또는 자연계에서 연결되지 않은 폴리뉴클레오티드에 연결되는 게놈, mRNA, cDNA 또는 합성 유래의 DNA 또는 RNA 또는 이의 특정 조합을 말한다.
본 발명에서, 용어 "벡터"는 통상적으로 적절한 숙주에서 자가 복제할 수 있고, 삽입된 핵산 분자를 숙주 세포 내로 및/또는 숙주 세포 사이로 전달하는 핵산 분자를 말한다. 상기 벡터는 주로 DNA 또는 RNA를 세포에 삽입하는 데 사용되는 벡터, 주로 DNA 또는 RNA를 복제하는 데 사용되는 벡터, 및 주로 DNA 또는 RNA를 전사 및/또는 번역의 발현에 주로 사용하는 벡터를 포함할 수 있다. 상기 벡터는 상기 기능을 갖는 다양한 벡터를 더 포함한다. 상기 벡터는 적합한 숙주 세포에 도입될 때 폴리펩티드로 전사 및 번역될 수 있는 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 통상적으로, 상기 벡터를 포함한 적합한 숙주 세포를 배양함으로써, 상기 벡터는 원하는 발현 산물을 생성할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "세포"는 통상적으로 본 발명의 상기 핵산 분자를 포함하는 폴리스미드 또는 벡터를 함유하고 있거나, 또는 본 발명의 상기 항체 또는 이의 항체 결합 단편을 발현할 수 있는 단일 세포, 세포계 또는 세포 배양물을 말한다. 상기 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함할 수 있다. 자연적, 우발적 또는 의도적인 돌연변이로 인해, 자손 세포는 원래의 모세포와 형태 또는 게놈 상에서 반드시 완전하게 동일하지 않을 수 있지만, 본 발명의 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현할 수 있으면 된다. 상기 세포는 본 발명의 상기 벡터를 사용해 시험관 내에서 세포의 형질 감염을 통해 얻을 수 있다. 상기 세포는 원핵 세포(예를 들어, 대장균)일 수 있고, 진핵 세포(예를 들어, 효모 세포, 예를 들어, COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, HeLa 세포, HEK293 세포, COS-1 세포, NS0 세포 또는 골수종 세포)일 수도 있다. 특정 경우에서, 상기 세포는 포유동물 세포일 수 있다. 예를 들어, 상기 포유동물 세포는 CHO-K1 세포일 수 있다. 본 발명에서, 용어 "재조합 세포"는 통상적으로 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 말한다. 상기 재조합 숙주 세포는 특정 세포 뿐 아니라 이들 세포의 자손을 더 포함한다.
본 발명에서, 용어 "제약상 허용되는 보조제"는 통상적으로 제약상 허용되는 벡터. 부형제 또는 안정화제를 포함하며, 이는 사용되는 용량 및 농도에서 이에 노출된 세포 또는 포유동물에게 무독성이다. 일반적으로 생리학적으로 허용되는 벡터는 PH 완충 수용액이다. 생리학적으로 허용되는 벡터의 예로는 인산염, 시트르산 및 기타 유기산과 같은 완충제, 아스코르브산을 포함하는 항산화제, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 저분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드, 단백질, 폴리비닐피리돈과 같은 친수성 중합체, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산, 포도당, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 이당류 및 기타 탄수화물과 같은 단당류, EDTA와 같은 킬레이트제, 만니톨 또는 소르비톨과 같은 당 알코올, 나트륨과 같은 조염 반대 이온, 및/또는 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 PLURONICS™과 같은 비이온성 계면활성제를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "투여" 및 "처리"는 외인성 약물, 치료제, 진단제 또는 조성물을 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 적용하는 것을 말한다. "투여" 및 "처리"는 치료, 약물동태학, 진단, 연구 및 실험 방법을 의미할 수 있다. 세포의 처리는 제제와 세포의 접촉, 및 제제와 유체의 접촉, 유체와 세포의 접촉을 포함한다. "투여" 및 "처리"는 또 제제, 진단, 결합 조성물을 통하거나 또는 시험관 내 및 생체 외 또 다른 세포를 통한 처리를 의미한다. "처리"가 인간, 동물 또는 연구 대상체에 적용될 때, TIGIT 결합체와 인간 또는 동물, 대상체, 세포, 조직, 생리적 구획실 또는 생리적 유체의 접촉을 포함하는 치료 처리, 예방 또는 예방적 조치, 연구 및 진단을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "치료"는 본 발명 임의의 하나의 TIGIT 항원 결합 단백질 및 이의 조성물을 포함하는 내부 또는 외부 치료제를 환자에게 투여하는 것을 말하며, 상기 환자는 하나 이상의 질병 증상을 갖고 있고, 상기 치료제는 이러한 증상에 치료 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 일반적으로, 하나 이상의 증상을 경감시키는 데 효과적인 치료제의 양(치료학적 유효량)을 투여한다. 치료의 기대 효과는 질병의 진행 속도 감소, 질병 상태의 개선 또는 경감, 및 감퇴 또는 개선된 예후를 포함한다. 예를 들어, 암세포의 증식 감소(또는 파괴), 질병에서 파생되는 증상 감소, 그러한 질병에 걸린 개인의 삶의 질 개선, 질병 치료에 필요한 다른 약제의 용량 감소, 질병의 진행 지연, 및/또는 개인의 생존 연장을 포함하나 이에 국한되지 않는 암과 관련된 하나 이상의 증상이 경감되거나 제거되는 경우, 개인에 대한 "치료"는 성공적이다.
본 발명에서, 용어 "종양"은 악성이든 양성이든 모든 신생물(neoplastic) 세포 성장 및 증식, 및 모든 전암성(pre-cancerous) 및 암성 세포와 조직을 말한다.
본 명세서 사용된 바와 같이. 용어 "임의로" 또는 "선택적으로"는 후술하는 사건이나 상황이 발생할 수 있지만 반드시 발생할 필요는 없음을 의미한다.
본 발명에서, 용어 "포함"은 통상적으로 포함, 포괄, 함유 또는 내포의 의미를 말한다. 특정 경우에서, "~이다", "~로 구성되는" 의미를 나타내기도 한다.
본 발명에서, 용어 "약"은 통상적으로 명시된 수치에서 0.5~10% 이상 또는 미만의 범위 내로 변동하는 것을 말한다. 예를 들어, 명시된 수치에서 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 3.5%, 4%, 4.5%, 5%, 5.5%, 6%, 6.5%, 7%, 7.5%, 8%, 8.5%, 9%, 9.5%, 또는 10% 이상 또는 미만 범위 내로 변동한다.
발명의 상세한 설명
항원 결합 단백질
한 측면에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있는 단리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산을 포함할 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있는 단리된 항원 결합 단백질을 제공하며, 상기 VH는 서열번호 54로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 1, 9, 12, 14 및 32 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 항원 결합 단백질의 VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 HCDR1을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열 GYSITSDYA를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 HCDR2를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열 IX2X3SGX6X7을 포함할 수 있으며, 여기서, X2는 S또는 T이고, X3은 S 또는 Y이고, X6은 A 또는 S이며, X7은 P 또는 T이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 HCDR2는 서열번호 4 및 42 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 HCDR2를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 HCDR2는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열 ITSSGST를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 HCDR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열 AX2LX4X5X6X7YX9X10AMDY를 포함할 수 있으며, 여기서, X2는 R 또는 S이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 F 또는 T이고, X6은 D 또는 G이고, X7은 N 또는 Y이고, X9는 G 또는 부재이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 HCDR3은 서열번호 5 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 HCDR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 HCDR3은 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열 ARLDFGNYGGAMDY를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR1을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR1은 서열번호 58로 표시되는 아미노산 서열 X1VQLQESGPGLVKPSX16X17LSLTCTVX25를 포함할 수 있으며, 여기서 X1은 D 또는 Q이고, X16은 E 또는 Q이고, X17은 S 또는 T이며, X25는 S 또는 T이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 H-FR1은 서열번호 23 및 35 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR1을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR1은 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR2를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR2는 서열번호 60으로 표시되는 아미노산 서열 WX2WIRQX7PGX10X11X12EWX15GY를 포함할 수 있다. 여기서, X2는 I 또는 N이고, X7은 F 또는 P이고, X10은 K 또는 N이고, X11은 G, R 또는 K이고, X12는 L 또는 V이며, X15는 I 또는 M이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 H-FR2는 서열번호 24 내지 26 및 36 내지 37 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR2를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR2는 서열번호 59로 표시되는 아미노산 서열 WIWIRQPPGX10X11LEWIGY를 포함할 수 있다. 여기서, X10은 K 또는 N이고, X11은 G 또는 K이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 H-FR2는 서열번호 24 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR3은 서열번호 61로 표시되는 아미노산 서열 X1YNPSLKSRX10X11X12X13X14DTSKNQFX22LX24LX26X27VTX30X31DTATYYC를 포함할 수 있으며, 여기서, X1은 R, S 또는 Y이고, X10은 I 또는 V이고, X11은 S 또는 T이고, X12는 F 또는 I이고, X13은 S 또는 T이고, X14는 R 또는 V이고, X22는 F 또는 S이고, X24는 K 또는 Q이고, X26은 S 또는 T이고, X27은 F 또는 S이고, X30은 A 또는 T이며, X31은 A 또는 E이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 H-FR3은 서열번호 27, 38 및 39 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열 YYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYC를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR4를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR4는 서열번호 62로 표시되는 아미노산 서열 WGQGTX6VX8VSS를 포함할 수 있으며, 여기서, X6은 L 또는 S이고, X8은 I 또는 T이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 H-FR4는 서열번호 28, 40 및 41 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 H-FR4를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 H-FR4는 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열 WGQGTLVTVSS를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VH를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열 X1VQLQESGPGLVKPSX16X17LSLTCTVX25GYSITSDYAWX36WIRQX41PGX44X45X46EWX49GYIX53X54SGX57X58X59YNPSLKSRX68X69X70X71X72DTSKNQFX80LX82LX84X85VTX88X89DTATYYCAX98LX100X101X102X103YX105X106AMDYWGQGTX116VX118VSS를 포함할 수 있으며, 여기서 X1은 D 또는 Q이고, X16은 E 또는 Q이고, X17은 S 또는 T이고, X25는 S 또는 T이고, X36은 I 또는 N이고, X41은 F 또는 P이고, X44는 N 또는 K이고, X45는 G, K 또는 R이고, X46은 L 또는 V이고, X49는 I 또는 M이고, X53은 S 또는 T이고, X54는 S 또는 Y이고, X57은 A 또는 S이고, X58은 P 또는 T이고, X59는 R, S 또는 Y이고, X68은 I 또는 V이고, X69는 S 또는 T이고, X70은 F 또는 I이고, X71은 S 또는 T이고, X72는 R 또는 V이고, X80은 F 또는 S이고, X82는 K 또는 Q이고, X84는 S 또는 T이고, X85는 F 또는 S이고, X88은 A 또는 T이고, X89는 A 또는 E이고, X98은 R 또는 S이고, X100은 D 또는 G이고, X101은 F 또는 T이고, X102는 D 또는 G이고, X103은 N 또는 Y이고, X105는 G 또는 부재이고, X106은 G 또는 부재이고, X116은 L 또는 S이며, X118은 I 또는 T이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VH는 서열번호 1, 9, 12, 14 및 32 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VH를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VH는 서열번호 54로 표시되는 아미노산 서열 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSDYAWIWIRQPPGX44X45LEWIGYITSSGSTYYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCARLDFGNYGGAMDYWGQGTLVTVSS를 포함할 수 있으며, 여기서 X44는 K 또는 N이며, X45는 G 또는K이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VH는 서열번호 9, 12 및 14 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG, 예를 들어, 인간 IgG1에서 유래될 수 있다. 특정 경우에서, 인간 IgG1의 Fc 영역은 원하는 특성(예를 들어, ADCC KO)을 달성하기 위해 변형될 수 있다. 상기 변형은 아미노산 돌연변이일 수 있다. 특정 경우에서, IgG1의 변형은 L234A/L235A일 수 있다. 즉, EU 넘버링에 따라 234번째 및 235번째 위치의 아미노산은 각각 류신(L)에서 알라닌(A)로 돌연변이된다. 특정 경우에서, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질의 중쇄 불변 영역은 야생형 인간 IgG1에서 유래될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 서열번호 35 내지 36 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있으며, 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있으며, 상기 VL은 서열번호 63으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있으며, 상기 VL은 서열번호 2, 10, 11, 13, 33 및 34 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 항원 결합 단백질의 VL은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 LCDR1을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열 QHVSX5A를 포함할 수 있으며, 여기서, X5는 N 또는 T이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 LCDR1은 서열번호 6 및 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 LCDR1을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 LCDR1은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열 QHVSTA를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 LCDR2를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열 SAS를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 LCDR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열 QQX3YX5X6PX8T를 포함할 수 있으며, 여기서, X3은 H 또는 Y이고, X5는 I 또는 S이고, X6은 L 또는 T이며, X8은 W 또는 Y이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 성기 LCDR3은 서열번호 8 및 53 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 LCDR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 LCDR3은 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열 QQHYITPYT를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR1을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 L-FR1은 서열번호 68로 표시되는 아미노산 서열 DIX3MTQSX8X9X10X11X12X13SX15GDRVX20ITCX24AS를 포함할 수 있다. 여기서, X3은 Q 또는 V이고, X8은 H 또는 P이고, X9는 K 또는 S이고, X10은 F 또는 S이고, X11은 L 또는 M이고, X12는 F 또는 S이고, X13은 A 또는 T이고, X15는 I 또는 V이고, X20은 S 또는 T이고, X24는 K 또는 R이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 L-FR1은 서열번호 15, 16, 44 및 45 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR1을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 L-FR1은 서열번호 67로 표시되는 아미노산 서열 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCX24AS를 포함할 수 있다. 여기서, X24는 K 또는 R이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 L-FR1은 서열번호 15 및 16 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR2를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 L-FR2는 서열번호 70으로 표시되는 아미노산 서열 X1X2WYQQKPGX10X11PKLLIX17을 포함할 수 있다. 여기서, X1은 L 또는 V이고, X2는 A 또는 N이고, X10은 K 또는 Q이고, X11은 A 또는 S이며, X17은 H 또는 Y이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 L-FR2는 서열번호 17, 18, 46 및 47 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR2를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 L-FR2는 서열번호 69로 표시되는 아미노산 서열 X1X2WYQQKPGKAPKLLIY를 포함할 수 있다. 여기서, X1은 L 또는 V이며, X2는 A 또는 N이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 L-FR2는 서열번호 17 및 18 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 L-FR3은 서열번호 72로 표시되는 아미노산 서열 YX2X3X4GVPX8RFX11GX13X14 SGTDFTX21TIX24SX26QX28EDX31AX33YYC를 포함할 수 있다. 여기서, X2는 L 또는 R이고, X3은 Q 또는 Y이고, X4는 S 또는 T이고, X8은 D 또는 S이고, X11은 I, S 또는 T이고, X13은 R 또는 S이고, X14는 G 또는 R이고, X21은 F 또는 L이고, X24는 N 또는 S이고, X26은 L 또는 V이고, X28은 A 또는 P이고, X33은 F 또는 L이며, X14는 T 또는 V이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 L-FR3은 서열번호 19 내지 21 및 48 내지 50 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR3을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 L-FR3은 서열번호 71로 표시되는 아미노산 서열 YX2X3SGVPSRFSGSX14SGTDFTLTISSLQPEDFATYYC를 포함할 수 있다. 여기서, X2는 L 또는 R이고, X3은 Q 또는 Y이며, X14는 G 또는 R이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 L-FR3은 서열번호 19 내지 21 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR4를 포함할 수 있으며, 상기 L-FR4는 서열번호 73으로 표시되는 아미노산 서열 FGX3GTKLEIK를 포함할 수 있으며, 여기서, X3은 G 또는 Q이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 L-FR4는 서열번호 22 및 51 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 프레임워크 영역 L-FR4를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 L-FR4는 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열 FGQGTKLEIK를 포함할 수 있다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열 DIX3MTQSX8X9X10X11X12X13SX15GDRVX20ITCX24ASQHVSX31AX33X34WYQQKPGX42X43PKLLIX49SASYX54X55X56GVPX60RFX63GX65X66SGTDFTX73TIX76SX78QX80EDX83AX85YYCQQX91YX93X94PX96TFGX100GTKLEIK를 포함할 수 있으며, 여기서, X3은 Q 또는 V이고, X8은 H 또는 P이고, X9는 K 또는 S이고, X10은 F 또는 S이며, X11은 L 또는 M이고, X12는 F 또는 S이고, X13은 A 또는 T이고, X15는 I 또는 V이고, X20은 S 또는 T이고, X24는 K 또는 R이고, X31은 N 또는 T이고, X33은 L 또는 V이고, X34는 A 또는 N이고, X42는 K 또는 Q이고, X43은 A 또는 S이고, X49는 H 또는 Y이고, X54는 L 또는 R이고, X55는 Q 또는 Y이고, X56은 S 또는 T이고, X60은 D 또는 S이고, X63은 I, S 또는 T이고, X65는 S 또는 R이고, X66은 G 또는 R이고, X73은 L 또는 F이고, X76은 S 또는 N이고, X78은 L 또는 V이고, X80은 A 또는 P이고, X83은 F 또는 L이고, X85는 T 또는 V이고, X91은 H 또는 Y이고, X93은 I 또는 S이고, X94는 L 또는 T이고, X96은 W 또는 Y이며, X100은 Q 또는 G이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VL은 서열번호 2, 10, 11, 13, 33 및 34 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VL은 서열번호 63으로 표시되는 아미노산 서열 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCX24ASQHVSTAX33X34WYQQKPGKAPKLLIYSASYX54X55SGVPSRFSGSX66SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYITPYTFGQGTKLEIK를 포함할 수 있으며, 여기서, X24는 K 또는 R이고, X33은 L 또는 V이고, X34는A 또는 N이고, X54는 L 또는R이고, X55는 Q 또는 Y이며, X66은 G 또는 R이다. 예를 들어, 그 서열은 IMGT 정의 규칙에 따라 결정된 서열일 수 있다.
예를 들어, 상기 항원 결합 단백질은 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VL은 서열번호 10, 11 및 13 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 예를 들어, 인간 κ 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있는 인간 경쇄 불변 영역 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 가변 영역 CDR의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 가변 영역 CDR의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR2는 서열번호 4 및 42 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR3은 서열번호 5 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 가변 영역 CDR의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1, 상기 HCDR2 및 상기 HCDR3은 각각 순차적으로 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 가변 영역 CDR의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1, 상기 HCDR2 및 상기 HCDR3은 각각 순차적으로 서열번호 3, 서열번호 42 및 서열번호 43으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 가변 영역 CDR의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 가변 영역 CDR의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 LCDR1은 서열번호 6 및 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 LCDR3은 서열번호 8 및 53 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 가변 영역 CDR의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 LCDR1, 상기 LCDR2 및 상기 LCDR3은 각각 순차적으로 서열번호 6, 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 가변 영역 CDR의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 LCDR1, 상기 LCDR2 및 상기 LCDR3은 각각 순차적으로 서열번호 52, 서열번호 7 및 서열번호 53으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR2는 서열번호 4 및 42 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 HCDR3은 서열번호 5 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 상기 LCDR1은 서열번호 6 및 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 8 및 53 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1, 상기 HCDR2, 상기 HCDR3, 상기 LCDR1, 상기 LCDR2 및 상기 LCDR3은 각각 순차적으로 서열번호3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
특정 경우에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1, 상기 HCDR2, 상기 HCDR3, 상기 LCDR1, 상기 LCDR2 및 상기 LCDR3은 각각 순차적으로 서열번호3, 서열번호 42, 서열번호 43, 서열번호 52, 서열번호 7 및 서열번호 53으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
특정 경우에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 1, 서열번호 9, 서열번호 12, 서열번호 32 및 서열번호 14 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 2, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 33, 서열번호 34 및 서열번호 13 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 54로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 63으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
특정 경우에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 9, 서열번호 12 및 서열번호 14 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 13 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 더 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1의 불변 영역에서 유래될 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역에서 유래될 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 그 단리된 항원 결합 단백질은 HB0030으로 지칭될 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 그 단리된 항원 결합 단백질은 HB0031로 지칭될 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 그 단리된 항원 결합 단백질은 HB0032로 지칭될 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 그 단리된 항원 결합 단백질은 HB0033으로 지칭될 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 그 단리된 항원 결합 단백질은 900424로 지칭될 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 그 단리된 항원 결합 단백질은 900423으로 지칭될 수 있다.
예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있으며, 상기 VH는 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 33으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 그 단리된 항원 결합 단백질은 900428로 지칭될 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 참조 항체와 경쟁적으로 상기 TIGIT 단백질에 결합할 수 있으며, 여기서 상기 참조 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 참조 항체의 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 상기 참조 항체의 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있고, 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 참조 항체와 경쟁적으로 상기 TIGIT 단백질에 결합할 수 있으며, 여기서 상기 참조 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 참조 항체의 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있으며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 HCDR2는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 HCDR3은 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 상기 참조 항체의 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함할 수 있고, 상기 LCDR1은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 LCDR3은 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에 관련된 단백질, 폴리펩티드 및/또는 아미노산 서열은 적어도 그 상기 단백질 또는 폴리펩티드와 상동하거나 유사한 특성을 갖는 변이체 또는 상동체의 범위를 포함하는 것으로 더 이해되어야 한다.
본 발명에서, 상기 변이체는 상기 단백질 및/또는 상기 폴리펩티드(예를 들어, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질)의 아미노산 서열 중 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 예를 들어, 상기 기능성 변이체는 적어도 1개, 예를 들어 1-30개, 1-20개 또는 1-10개, 또 다른 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 아미노산의 치환, 결실 및/또는 삽입을 통해 아미노산 변형을 갖는 단백질 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 상기 기능성 변이체는 기본적으로 변경(예를 들어, 치환, 결실 또는 추가) 전의 상기 단백질 또는 상기 폴리펩티드의 생물학적 특성을 유지할 수 있다. 예를 들어, 상기 기능성 변이체는 변경 전의 상기 단백질 또는 상기 폴리펩티드의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%의 생물학적 활성(예를 들어, 항원 결합 능력)을 유지할 수 있다. 예를 들어, 상기 치환은 보존적 치환일 수 있다.
본 발명에서, 상기 항원 결합 단백질의 아미노산 서열의 일부는 특정 종에서 유래한 항체 내의 상응하는 아미노산 서열과 상동성일 수 있거나, 또는 특정 유형에 속할 수 있다. 예를 들어, 항체의 가변 영역 및 불변 영역이 모두 동물 종(예를 들어, 인간) 항체의 가변 영역 및 불변 영역에서 유래될 수 있다. 본 발명에서, 상기 상동체는 상기 단백질 및/또는 상기 폴리펩티드(예를 들어, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질)의 아미노산 서열과 적어도 약 85%(예를 들어, 적어도 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상)의 서열 상동성을 갖는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다.
본 발명에서, 상기 상동성은 통상적으로 두 개 이상 서열 사이의 상사성, 유사성 또는 관련성을 말한다. 하기의 방식을 통해 "서열 상동성 백분율"을 계산할 수 있다. 정렬할 두 개의 서열을 정렬창에 정렬하여, 두 서열 중에 동일한 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G） 또는 동일한 아미노산 잔기(예를 들어, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr , Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys, Met)가 존재하는 위치의 수를 확정해서 일치하는 위치의 수를 얻고, 일치하는 위치의 수를 정렬창의 총 위치 수(즉, 창 크기)로 나눈 후, 결과를 100으로 곱하여 서열 상동성 백분율을 얻는다. 서열 상동성 백분율을 확정하기 위한 정렬은 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign（DNASTAR） 소프트웨어와 같이 당업계에 공지된 다양한 방식으로 구현될 수 있다. 당업자는 정렬 중인 전장 서열 범위 내 또는 표적 서열 영역 내에서 최대 정렬 구현을 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열 정렬에 사용되는 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 상기 상동성은 하기의 FASTA 및 BLAST 방법을 통해서도 측정될 수 있다. FASTA 알고리즘에 대한 설명은 R．Pearson 및 D．J．Lipman의 "생물학적 서열 정렬에 사용되는 개선된 도구", 미국 국립과학원 회보(Proc．Natl．Acad．Sci.), 85：2444-2448, 1988, 및 D．J．Lipman과 W．R．Pearson의 "빠르고 민감한 단백질의 유사성 검색", Science, 227, 1435-1441, 1989을 참조한다. BLAST 알고리즘에 대한 설명은 S.Altschul, W．Gish, W．Miller, E． W．Myers 및 D．Lipman의 "기본적 국부 정렬(alignment) 검색 도구", 분자 생물학 저널, 215：403-410, 1990을 참조한다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질(예를 들어, TIGIT 항체)은 TIGIT 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. TIGIT 항원에 "특이적으로 결합하는" 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)는 일반적으로 약 1nM의 KD값 또는 더 높은 친화도(예를 들어, 1nM, 100pM, 10pM, 2pM 또는 1pM)로 TIGIT에 결합할 수 있지만, TIGIT 서열에 결핍된 다른 단백질에는 결합되지 않는다. 예를 들어, TIGIT에 "특이적으로 결합하는" 항체는 인간 CD226, 인간 CD155 및 인간 CD112에 결합되지 않는다. 본 발명의 상기 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)은 TIGIT 항체 또는 이의 표지된 형태(예를 들어, 형광 표지된 TIGIT 항원)에 특이적으로 결합할 수 있지만, TIGIT 에피토프가 결핍된 다른 단백질에는 결합되지 않는다. 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)이 TIGIT 항원에 결합하는지 여부는 당업계에 공지된 임의의 측정법을 사용해 결정할 수 있다. 당업계에 공지된 결합 친화도를 측정하는 분석의 예로는 표면 플라즈몬 공명(예를 들어, BIACORE) 또는 유사한 기술(예를 들어, KinExa 또는 OCTET)이 포함된다. 특정 경우에서, 본 발명의 상기 TIGIT 항체는 또한 원숭이 및/또는 마우스의 TIGIT와 교차 반응할 수 있다. 예를 들어, 유세포 분석 기술 및 효소 결합 면역 반응 분석을 통해서 측정된다. 본 명세서에 사용된 "교차 반응성"은 다른 종의 상동 단백질과 반응하는 항체의 특성을 말한다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질(예를 들어, TIGIT 항체)은 CD155 리간드에 대한 TIGIT의 결합을 억제할 수 있다. 차단 실험은 경쟁법을 사용해 측정할 수 있으며, 예를 들어, 상기 항원 결합 단백질(예를 들어, TIGIT 항체)을 항원(또는, 항원을 발현할 수 있는 세포) 및 항원의 리간드(또는, 리간드를 발현하는 세포)와 혼합시키면. 검출 가능한 표지의 강도(예를 들어, 형광 강도 또는 농도)에 따라 항원 결합 단백질과 항원의 리간드의 항원에 경쟁적으로 결합하는 능력이 반응된다. 예를 들어, 유세포 분석기를 사용해 측정한 바에 따르면, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질(예를 들어, TIGIT 항원)의 CD155 리간드에 대한 TIGIT의 결합을 차단하는 IC50은 약 0.1μg/ml-0.05μg/ml이다.
핵산, 벡터 및 세포
또 다른 측면에서, 본 발명은 단리된 하나 이상의 핵산 분자를 더 제공한다. 상기 하나 이상의 핵산 분자는 본 발명의 상기 항원 결합 단백질을 코딩할 수 있다. 예를 들어, 상기 하나 이상의 핵산 분자 내의 각 핵산 분자는 전체 상기 항원 결합 단백질을 코딩할 수 있고, 또 이의 일부(예를 들어, HCDR1-3, LCDR1-3, VL, VH, 경쇄 또는 하나 이상의 중쇄)를 코딩할 수도 있다.
본 발명의 상기 핵산 분자는 단리될 수 있다. 예를 들어, (i) 중합효소 연쇄반응(PCR) 증폭과 같은 시험관 내 증폭에 의한 생성, (ii) 클론 재조합에 의한 생성, (iii) 제한 효소 및 겔 전기영동에 의한 분별과 같은 정제, 또는 (iv) 화학적 합성과 같은 합성을 통한 방법을 통해 생성 또는 합성될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 단리된 핵산은 재조합 DNA 기술에 의해 제조된 핵산 분자이다.
본 발명에서, 상기 항체, 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 제조될 수 있고, 이러한 방법은 제한성 단편 조작을 사용하거나 합성 올리고뉴클레오티드를 사용하는 중첩 확장 PCR을 포함하나 이에 국한되지 않으며, 구체적 조작은 Sambrook 등, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.，1989, 및 Ausube 등 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York N.Y.，1993을 참조한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 하나 이상의 핵산 분자를 포함하는 하나 이상의 벡터를 제공한다. 각 벡터는 하나 이상의 상기 핵산 분자를 포함할 수 있다. 또한, 상기 벡터는 적절한 숙주 세포 내 및 적절한 조건 하에서 그 벡터를 선택하도록 허용하는 마커 유전자와 같은 다른 유전자를 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 벡터는 코딩 영역이 적절한 숙주 내에서 정확하게 발현되도록 허용하는 발현 조절인자를 더 포함할 수 있다. 이러한 조절인자는 당업계에 잘 알려지는 것이며, 예를 들어, 프로모터, 리보솜 결합 부위, 인핸서 및 유전자 전사 또는 Mrna 번역을 조절하는 다른 조절인자 등을 포함할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 발현 조절 서열은 가변 인자이다. 상기 발현 조절 서열의 구체적 구조는 종 또는 세포 유형의 기능에 따라 변화할 수 있지만, 일반적으로 각각 TATA 박스, 캡핑 서열, CAAT 서열 등과 같이 전사 및 번역 개시에 관여하는 5' 비전사 서열과 5' 및 3' 비번역 서열을 포함한다. 예를 들어, 5' 비전사 발현 조절 서열은 프로모터 영역을 포함할 수 있으며, 프로모터 영역은 기능적으로 연결된 핵산의 전사 조절을 위한 프로모터 서열을 포함할 수 있다. 상기 발현 조절 서열은 인핸서 서열 또는 상부 활성인자 서열을 더 포함할 수 있다. 본 발명에서, 적합한 프로모터는 SP6, T3 및 T7 폴리머라제에 사용되는 프로모터, 인간 U6RNA 프로모터, CMV 프로모터 및 이의 인공 하이브리드 프로모터(예를 들어, CMV)를 포함할 수 있으며, 여기서 프로모터의 특정 부분은 추가 인트론을 포함하거나 포함하지 않을 수 있는 다른 세포 단백질(예를 들어, 인간 GAPDH, 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소 효소)의 유전자 프로모터의 특정 부분과 융합될 수 있다. 본 발명의 상기 하나 이상의 핵산 분자는 상기 발현 조절인자와 작동 가능하게 연결될 수 있다. 상기 벡터는 폴리스미드, 코스미드, 바이러스, 파지 또는 예를 들어 유전 공학에서 일반적으로 사용되는 기타 벡터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 벡터는 발현 벡터이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 숙주 세포를 제공하며, 상기 숙주 세포는 본 발명의 상기 하나 이상의 핵산 분자 및/또는 본 발명의 상기 하나 이상의 벡터를 포함할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 각 종의 또는 각 숙주 세포는 하나 이상의 본 발명의 상기 핵산 분자 또는 벡터를 포함할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 각 종의 또는 각 숙주 세포는 복수(예를 들어, 2개 이상) 또는 복수 종(예를 들어, 2종 이상)의 본 발명의 상기 핵산 분자 또는 벡터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 상기 벡터를 식물에서 유래된 세포, 진균 또는 효모 세포 등의 진핵 세포와 같은 상기 숙주 세포 내로 도입할 수 있다. 본 발명의 상기 벡터를 전기천공, lipofectine 형질 감염, lipofectamine 형질 감염 등과 같이 당업계에 공지된 방법을 통해 상기 숙주 세포 내로 도입할 수 있다.
제조 방법
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 항원 결합 단백질의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 상기 항원 결합 단백질을 발현시키는 조건 하에서, 상기 본 발명의 상기 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 적절한 배지, 적절한 온도 및 배양 시간 등을 사용할 수 있으며, 이러한 방법은 당업자라면 알 수 있는 것이다.
단일클론 항체의 제조에 적합한 임의의 방법은 본 발명의 항원 결합 단백질(예를 들어, 항-TIGIT 항체)의 제조에 사용될 수 있다. 예를 들어, 연결되거나 자연적으로 존재하는 TIGIT 동종이량체 또는 이의 단편으로 동물을 면역화할 수 있다. 보조제, 면역 자극제, 반복적 추가 면역 접종을 포함하는 적절한 면역 접종 방법을 사용할 수 있고, 하나 이상의 접근 방법을 사용할 수 있다.
임의의 적합한 형태의 TIGIT는 모두 TIGIT에 대해 특이적인 비인간 항체를 생성하고, 상기 항체의 생물학적 활성을 스크리닝하는 데 사용되는 면역원(항원)으로 사용될 수 있다. 유도 면역원은 천연 동종이량체, 또는 단일/다중 에피토프를 함유한 펩티드를 포함하는 전장의 성숙한 인간 TIGIT일 수 있다. 면역원은 단독으로 사용되거나, 또는 당업계에 공지된 하나 이상의 면역원성 증강제와 조합하여 사용할 수 있다. 면역원은 천연 공급원으로부터 정제되거나, 또는 유전자 변형된 세포에서 생성될 수 있다. 면역원을 코딩하는 DNA는 게놈 또는 비-게놈(예를 들어, Cdna)일 수 있다. 적합한 유전 벡터를 사용해 면역원을 코딩하는 DNA를 발현할 수 있으며, 상기 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터, 배큘로바이러스 벡터, 플라스미드 및 비-바이러스 벡터를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
본 발명의 항-인간 TIGIT 항체를 생산하는 예시적인 방법은 실시 예 1에 기재된다.
인간화 항체는 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE를 포함하는 임의의 종류에서 선택될 수 있다. 본 발명에서, 항체는 IgG 항체이고, IgG1 서브타입이 사용된다. 하기 실시 예에 기재된 생물학적 검정을 사용해 항체를 스크리닝함으로써 필요한 불변 도메인 서열의 최적화를 구현하여 생성에 필요한 생물학적 활성을 생성할 수 있다. 마찬가지로, 임의의 유형의 경쇄는 모두 본 명세서의 화합물 및 방법에 사용될 수 있다. 구체적으로, κ, λ 사슬 또는 이의 변이체는 본 발명의 화합물 및 방법에서 사용될 수 있다.
본 발명의 항-인간 TIGIT 항체를 인간화하는 예시적인 방법은 실시 예 2에 기재된다.
본 발명의 항원 결합 단백질 또는 이의 단편 DNA 분자의 서열은 PCR 증폭 또는 게놈 라이브러리 스크리닝 등과 같은 일반적인 기술을 사용해 수득될 수 있다. 또한, 경쇄 및 중쇄의 코딩 서열은 하나로 융합되어 단일 사슬 항체를 형성할 수 있다.
관련 서열이 수득되면, 재조합 방법을 사용해 관련 서열을 대량으로 얻을 수 있다. 일반적으로 이를 벡터에 클로닝하고 세포에 이식한 후, 종래의 방법을 통해 증식된 숙주 세포로부터 분리해 관련 서열을 얻는다.
또한, 특히 단편 길이가 짧을 때, 인공 합성 방법을 사용해 관련 서열을 합성할 수도 있다. 일반적으로, 먼저 복수의 작은 단편을 합성한 후, 연결하면 매우 긴 서열의 단편을 얻을 수 있다. 그 다음 그 핵산 분자를 당업계에 공지된 다양한 종래의 DNA 분자(또는 예를 들어, 벡터) 및 세포에 도입할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 적합한 핵산 분자 및 적합한 프로모터 또는 조절 서열을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 이러한 벡터는 적합한 숙주 세포가 단백질을 발현할 수 있도록 형질 전환하는 데 사용될 수 있다. 숙주 세포는 박테리아 세포와 같은 원핵 세포, 또는 효모 세포와 같은 하등 진핵 세포, 또는 포유동물 세포와 같은 고등 진핵 세포일 수 있다. 동물 세포는 CHO-S, CHO-K1, HEK-293 세포를 포함할 수 있다(단 이에 국한되지 않음).
본 발명의 상기 재조합 DNA로 숙주 세포를 형질 전환시키는 단계는 당업계에 공지된 기술을 사용할 수 있다. 수득된 형질 전환체는 통상적인 방법에 의해 배양될 수 있고, 형질 전환체는 본 발명의 핵산 분자에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 발현한다. 사용하는 숙주 세포에 따라 일반적인 배지를 사용해 적절한 조건에서 배양한다. 일반적으로, 본 발명의 항원 결합 단백질의 발현에 적합한 조건 하에서, 형질 전환된 숙주 세포를 배양한다. 그후 단백질 A-Sepharose, 수산화인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 분자체 크로마토그래피 또는 친화성 크로마토그래피 등 당업자에 익숙한 분리 및 정제 방법과 같은 일반적인 면역글로불린 정제 단계를 사용해 본 발명의 항원 결합 단백질을 얻는다.
수득된 단일클론 항체는 통상적인 방법으로 확인될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체의 결합 특이성은 면역 침전 또는 체외 결합 분석(예를 들어, 유세포 분석 기술(FACS), 방사선 면역 측정 분석(RIA) 또는 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA)에 의해 측정될 수 있다.
약학적 조성물
또 다른 측면에서, 본 발명은 조성물을 더 제공한다. 특정 경우에서, 상기 조성물은 본 발명의 항원 결합 단백질 또는 이의 융합 단백질 또는 이의 ADC 또는 상응하는 CAR-T 세포, 및 제약상 허용되는 벡터를 포함하는 약학적 조성물일 수 있다. 일반적으로, 이들 물질은 무독성, 불활성 및 약학적으로 허용되는 수성 벡터 매질에서 제형화될 수 있으며, 여기서 pH는 일반적으로 약 5-8일 수 있고, 예를 들어, pH는 약 6-8일 수 있으며, pH값은 제형 물질의 특성 및 치료할 질환에 따라 달라질 수 있다. 제형화된 약학적 조성물은 종양내, 복강내, 정맥내, 또는 국소 투여를 포함하는(단 이에 국한되지 않음) 일반적인 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.
본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 또한 뉴클레오티드 서열에 의해 세포 내에서 발현되어 세포 요법에 사용할 수 있으며, 예를 들어, 상기 항체는 키메라 항원 수용체 T 세포 면역 요법(CAR-T) 등에 사용된다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은 TIGIT 단백질 분자에 직접 결합함에 따라, TIGIT 관련 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있다. 또한, 다른 치료제를 동시에 사용할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 안전하고 유효한 양(예를 들어, 0.001-99wt%, 0.01-90wt%, 또는 0.1-80wt%)의 본 발명의 상기 항원 결합 단백질 및 제약상 허용되는 보조제(벡터 또는 부형제 포함 가능)를 포함할 수 있다. 이러한 벡터는 식염수, 완충액, 포도당, 물, 글리세롤, 에탄올, 및 이의 조합을 포함할 수 있다(단 이에 국한되지 않음). 약학적 제제는 투여 방식과 일치해야 한다. 본 발명의 상기 약학적 조성물은 주사제 형태로 제조될 수 있으며, 예를 들어 생리식염수 또는 포도당 및 기타 보조제를 함유하는 수용액을 사용하여 일반적인 방법으로 제조될 수 있다. 주사제, 용액제와 같은 약학적 조성물은 무균 조건에서 제조되는 것이 바람직하다. 활성 성분의 투여량은 치료학적 유효량이며, 예를 들어 1일 약 1㎍/kg 체중 내지 약 5mg/kg이다. 또한, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 다른 치료제와 병용할 수 있다.
본 명세서의 상기 항원 결합 단백질 또는 약학적 조성물은 우수한 의료 관행을 충족하는 방식으로 제형화, 투여 및 주입될 수 있다. 이 상황에서 고려해야 할 사항에는 치료 중인 특정 질환, 치료 중인 특정 포유동물, 단일 환자의 임상 상태, 질환의 병인, 약제 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정 및 의학 종사자에게 알려진 기타 요인을 포함한다. 치료제(예를 들어, 항-TIGIT 항체)는 임의로 현재 고려되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 하나 이상의 제제와 제형화 및/또는 동시 투여될 필요는 없다. 이러한 다른 제제의 유효량은 제제에 존재하는 치료제(예를 들어, 항-TIGIT 항체)의 양, 질환 또는 치료 유형 및 상기 논의된 기타 요인에 따라 다르다. 이러한 제제는 일반적으로 경험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 용량 및 경험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 경로로 사용될 수 있다. 단일 치료에 비해 병용 치료에 투여되는 항체의 용량은 감소될 수 있다. 종래의 기술을 통해 이 요법의 진행 상황은 쉽게 모니터링된다.
방법 및 용도
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 항원 결합 단백질, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포 및/또는 상기 약학적 조성물의 약제 제조 중의 용도를 제공한다. 상기 약제는 TIGIT 관련 질병의 예방, 경감 및/또는 치료에 사용된다. 특정 경우에서, 상기 TIGIT 관련 질병은 T 세포 기능장애성 질환이다. T세포 기능 장애는 NK 세포 강화 및 T 세포 활성화를 통해 신체의 면역 활성을 강화하여 질병의 치료 또는 지연 또는 경감이 구현되는 T 세포의 고갈에서 나타난다. 예를 들어, 상기 TIGIT 관련 질병은 종양, 암 또는 감염성 질환일 수 있다. 예를 들어, 상기 TIGIT 관련 질병은 CD155-양성 또는 PVR-양성 종양, 암, 면역성 질환 또는 종양, 암, 면역성 질환 또는 감염성 질환 등을 포함하는 감염성 질환 등일 수 있다. 특정 경우에서, 상기 종양은 유방암, 결장암, 간암, 림프종, 연골육종, 다발성 골수종, 폐암, 신장암, 흑색종, T 림프종, 췌장암으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 종양은 결장암이다. 예를 들어, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 유방암, 결장암, 간암, 림프종, 연골육종, 다발성 골수종, 폐암, 신장암, 흑색종, T 림프종 및 췌장암으로 이루어진 군에서 선택된 종양 동물 모델의 종양 성장을 억제할 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 종양 성장의 억제 및/또는 종양 세포의 증식 억제가 가능하다. 특정 실시 양태에서, 상기 종양은 결장암을 포함한다. 특정 실시 양태에서, 상기 종양 또는 암은 TIGIT 발현이 비정상적인 종양 또는 암이다. 본 발명은 하기에 기재된 생물학적 샘플에서 TIGIT 발현을 검출하는 방법을 더 제공한다. 특정 경우에서, 상기 방법은 상기 항원 결합 단백질이 TIGIT에 결합하도록 허용하는 조건 하에서 생물학적 샘플을 본 발명의 상기 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계, 및 상기 항원 결합 단백질과 TIGIT 간에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 종양 또는 암은 비-종양 또는 암 샘플에 비해 TIGIT 발현이 증가된 종양 또는 암이다. 이러한 방법은 시험관 내 또는 생체 내 방법일 수 있다. 본 발명의 상기 항원 결합 단백질은 예를 들어 면역 검정에 사용될 수 있으며, 상기 면역 검정은 면역 조직화학(IHC), 면역 형광(IF), 면역 블롯팅(예를 들어, 웨스턴 블롯), 유세포 분석(예를 들어, FAGS) 및 면역흡착 분석(ELISA)을 포함한다. 특정 경우에서, 예를 들어 TIGIT가 환자를 선택하는 데 사용되는 바이오마커인 경우, 상기 항원 결합 단백질은 본 발명의 상기 항원 결합 단백질 및/또는 융합 단백질을 사용한 치료에 적합한 대상체를 선택하는 데 사용된다. 본 발명은 질환(예를 들어, 암 또는 면역 기능 장애)을 앓고 있는 대상체를 진단하기 위한 방법에서 상기 항원 결합 단백질의 용도를 더 제공하며, 상기 방법은 샘플을 본 발명의 상기 항원 결합 단백질과 접촉시키고 결합된 상기 항원 결합 단백질 및/또는 융합 단백질의 존재를 검출하여 대상체로부터 수득된 샘플 내 TIGIT의 존재 또는 발현 수준을 결정하는 단계를 포함한다.
예를 들어, 결장암 마우스 모델에서, 본 발명의 상기 항원 결합 단백질(예를 들어, TIGIT 항체)은 종양의 성장을 늦출 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 검출 용도에 사용될 수 있으며, 예를 들어 시료의 검출에 사용됨에 따라, 진단 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에서, 사용되는 시료(샘플)는 세포, 조직 시료 및 생검 검체를 포함한다. 본 발명에 사용되는 용어 "생검"은 당업자에게 공지된 모든 종류의 생검이 포함되어야 한다. 따라서 본 발명에 사용되는 생검은 내시경 방법 또는 장기 천자 또는 바늘 생검을 통해 준비된 조직 시료가 포함될 수 있다.
본 발명에 사용되는 시료는 고정적 또는 보존된 세포 또는 조직 시료를 포함한다.
본 발명은 본 발명의 항원 결합 단백질을 함유한 키트를 더 제공한다. 특정 경우에서, 상기 키트는 용기, 사용설명서, 완충제 등을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항원 결합 단백질은 검출 플레이트에 고정될 수 있다.
어떤 이론에도 제한되지 않는 하기의 실시 예는 본 발명의 항원 결합 단백질, 제조 방법 및 용도 등의 설명을 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 하기의 실시 예에는 특정 조건의 실험 방법이 명시되지 않으며, 통상적으로 Sambrook 등, 분자 클로닝, 실험실 매뉴얼(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)에 기재된 조건, 또는 제조업체가 권장하는 조건과 같은 일반적인 조건이다. 별도로 명시하지 않는 한, 백분율 및 부수는 중량 백분율 및 중량부이다.
실시 예
실시 예 1. 항-인간 TIGIT 마우스 단일클론 항체-원항체의 제조 방법
1.1. 뮤린 단일클론 항체의 하이브리도마 세포의 제조
뮤린 단일클론 항체를 제조하는 방법은 Kohler 및 Milstein이 1975년 발명한 하이브리도마 제조 기술을 사용한다(Nature, 1975，256：495-497). 먼저 인간 TIGIT 마우스 Fc 태그 단백질(ACRO， #TIT-H5253)을 프로인드 보조제로 유화시킨 후, BALB/c, CD1, C57BL/6 각 스트레인의 5마리를 다중 지점에서 피하 면역시킨다. 3차 면역 후 혈청을 채취하여 ELISA 방법으로 역가를 검출하고, FACS로 결합 활성 및 기능 활성을 검출한 후, 가장 우수한 마우스를 선별해 비장 세포와 SP2/0 골수종 세포를 융합시킨다. 하이브리도마 다중클론 세포를 HAT 스크리닝 후, ELISA, FACS 방법을 사용해 인간 TIGIT에 특이적으로 결합시키고 TIGIT-CD155의 결합을 차단할 수 있는 다중클론 세포주를 스크리닝한 다음 단클론화한다. 다시 ELISA, FACS 방법을 사용해 특이적으로 결합하는 단일클론 세포주를 스크리닝하고, 원숭이, 마우스 TIGIT와의 결합력을 검출하며, FACS를 통해 TIGIT-CD155와 TIGIT-CD122의 결합을 차단하는 단일클론 항체를 스크리닝한 후, 계속해서 세포의 기능적 활성을 검출하고, 선별된 단일클론 세포주에 대한 친화도(Biacore)를 스크리닝한 후, 최종적으로 인간 TIGIT 항체를 발현하는 단일클론 하이브리도마 세포주를 획득해 서열 분석을 수행하며, 스크리닝 데이터는 표 1과 같다.
표 1. 하이브리도마 스크리닝 데이터
Figure pct00001
Figure pct00002
고처리량 스크리닝을 거쳐 최종적으로 수득된 단일클론 하이브리도마 세포주는 높은 친화성을 갖고, 인간 및 원숭이와 모두 결합 활성을 가질 수 있으며, TIGIT의 두 리간드 CD155 및 CD122에 대해 동시에 차단 기능을 갖고, 생물학적 활성을 갖는다. 상기 표 1의 하이브리도마 세포주는 인간화 변이된다.
실시 예 2. 항-TIGIT 항체 가변 영역 유전자 서열 클로닝 및 인간화
2.1. 하이브리도마 세포에서 항체의 가변 영역 유전자 클로닝
TAKARA의 5'RACE 기술 원리를 기반으로 하이브리도마 세포주에 의해 발현되는 마우스 항체 가변 영역의 Cdna 서열을 클로닝한다. 간단하게 말하면, SMARTer 5'RACE 합성 키트(TAKARA，#634859)를 이용해 설명서에 따라 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자 특이성 cDNA를 합성한다. PCR 프라이머를 이용하여 cDNA 서열의 5' 및 3' 말단을 변형하며, 상기 프라이머는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 cDNA에 각각 적절한 리더 서열을 추가하도록 설계됨에 따라, 얻어진 PCR 산물이 심리스 클로닝 방법을 통해 종래의 재조합 항체 발현의 중쇄 벡터 pHB-Fc 및 경쇄 벡터 pHB-Cκ에 클로닝될 수 있다. pHB-Fc 발현 벡터는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 유전자 서열을 포함하며, 여기서 CH2는 항체 ADCC knock out(KO) 효과가 있는 L234A 및 L235A(Eu 코드) 돌연변이를 포함하고, pHB-Cκ 벡터는 인간 κ 경쇄 불변 영역 유전자 서열을 포함한다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 PCR 증폭 산물은 In-fusion 클로닝 제제(TAKARA, #639650)를 사용하여 발현 벡터에 클로닝하고, E.coli DH5α 대장균 수용성 세포(YEASTERN 바이오테크, # FYE607-80VL)로 형질 전환한다. Sanger 시퀀싱을 위한 단일 콜로니를 선별해 분석하여 항체 가변 영역 서열을 획득한다. 여기서 B3/29F6으로 발현되는 항-TIGIT 항체 가변 영역 서열은 하기와 같다.
Figure pct00003
여기서, 밑줄 친 부분은 CDRs이다(IMGT 정의에 따른 서열은 각각 하기와 같다).
표 2. 뮤린 항-TIGIT 항체 CDR 서열
Figure pct00004
2.2. IgG1야생형 키메라 발현 벡터의 구축
키메라 항체인 IgG1 야생형과 ADCC KO유형 키메라 항체는 동일한 경쇄 벡터를 공유하지만, 인간 중쇄 불변 영역 서열을 함유한 벡터의 중쇄 CH2의 234 및 235개 아미노산이 사용된다는 점이 다르며, ADCC KO 유형은 A234/A235이고, 야생형은 L234/L235이다. IgG1 야생형 키메라 중쇄 발현 벡터의 방법은 2.1에서 설명된 발현 벡터의 구축 방법과 원리가 동일하다. 즉 리더 서열을 포함하는 프라이머로 중쇄 가변 영역 유전자를 PCR 증폭한 후, 심리스 접합 방법을 사용해 인간 중쇄 불변 영역 서열(CH2는 L234/L235임)의 벡터에 클로닝하여, IgG1 야생형 키메라 발현 벡터의 구축을 완료한다.
2.3. 키메라 항체의 발현
2.1 및 2.2에서 얻은 발현 벡터를 대장균에 의해 증폭시키고, 내독소 제거 플라스미드 추출 키트(텐건 바이오테크(베이징) 유한회사, # DP117)를 이용해 충분한 양의 플라스미드를 제조하여 키메라 항체의 일시적 형질 감염 발현에 사용한다. 발현에 사용된 숙주 세포는 CHO-S 세포(써모 피셔 사이언티픽, #R80007)이다. 제조된 두 개의 중쇄 벡터를 각각 경쇄 벡터와 함께 폴리에테르이미드(PEI, Polysciences，# 24765-1)와 혼합하여 리포솜 복합체를 형성한 후, CHO-S 세포를 형질 감염시키고 인큐베이터에 넣어 5-7일 동안 배양한다. 세포 배양 상청액을 원심분리 수집하고, Protein A 친화성 크로마토그래피 컬럼으로 정제하여 ADCC KO 유형 인간-마우스 키메라 항체(단백질 번호 900424) 및 IgG1 야생형 인간-마우스 키메라 항체(단백질 번호 900445)를 얻는다.
상기 방법에 따라 얻은 키메라 항체의 VH 및 VH 서열은 각각 하기와 같다.
Figure pct00005
여기서, 900424의 중쇄 불변 영역 아미노산 서열은 서열번호 30으로 표시되고, 900423의 중쇄 불변 영역 아미노산 서열은 서열번호 30으로 표시되고, 900428의 중쇄 불변 영역 아미노산 서열은 서열번호 30으로 표시된다. 경쇄 불변 영역은 모두 인간 κ 경쇄 불변 영역이다(서열번호 31).
2.4. 뮤린 항-인간 TIGIT 항체의 인간화-인간화 항체의 제조 방법
항체의 인간화는 하기의 방법을 사용한다. 항체의 가변 영역 서열을 NCBI IgBlast 데이터베이스의 가용 서열과 비교하고, 동정 및 분석을 통해 최종적으로 CDR 이식 중쇄 및 경쇄의 구축에 적합한 인간 유래 프레임워크(FR 영역)을 결정한다.
변형 시, 인간 항체 FR 영역의 보존된 아미노산 잔기 및 항체 FR 영역의 중요한 아미노산 잔기에 따라 변형 부위가 설계되고, 키메라 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에 대해 각각 인간화 돌연변이를 설계하며, PCR 기술을 이용해 인간화 점 돌연변이 항체 발현 플라스미드를 증폭 및 구축한다. 인간화 점 돌연변이 항체 발현 플라스미드는 각각 CHO-S 세포를 통해 발현되고, 정제된 후 인간화 항체 단백질이 수득된다. ELISA, Biacore 및 유세포 분석 기술 등의 검출 방법을 사용해 인간화 항체의 수용체 결합 능력, 기능 억제 활성 및 ADCC 효과 등의 지표를 스크리닝하여 성능이 우수한 4개의 인간화 항-TIGIT 항체를 얻는다. 수득된 인간화 항-TIGIT 항체의 VH 및 VL 서열은 하기와 같다.
Figure pct00006
여기서, 밑줄 친 부분은CDRs이고(IMGT에 따라 정의됨), 900461, 900464, 900466 및 900476은 각각 4개의 인간화 항체 단백질 번호이며, 해당 항목 번호는 HB0030, HB0031, HB0032, HB0033이다.
여기서, HB0030의 중쇄 불변 영역 아미노산 서열은 서열번호 29로 표시되고, HB0031의 중쇄 불변 영역 아미노산 서열은 서열번호 29로 표시되고, HB0032의 중쇄 불변 영역 아미노산 서열은 서열번호 29로 표시되고, HB0033의 중쇄 불변 영역 아미노산 서열은 서열번호 29로 표시된다. 경쇄 불변 영역은 모두 인간 κ 경쇄 불변 영역이다(서열번호 31).
실시 예 3. 키메라 항체 및 인간화 항체의 검출
3.1. 인간 TIGIT를 발현하는 세포에 대한 TIGIT 항체의 결합 활성 시험
인간 TIGIT를 발현하는 세포(CHOK1-huTIGIT-2A3, 화보 바이오팜)에 대한 키메라 항체 900324, 900423, 900424, 900428, 인간화 항체 HB0030, HB0031, HB0032, HB0033의 결합 활성을 검출한다.
모든 키메라 항체, 인간화 항체를 모두 1%BSA의 PBS 용액(1%BSA/PBS)으로 20μg/ml로 희석한 후, 96웰 U자형 플레이트에 웰당 20μL을 첨가하고, 동시에 음성 대조 그룹을 설정한다(1%BSA/PBS만 첨가). 대수 성장기 동안 인간 TIGIT 발현 세포(CHOK1-huTIGIT-2A3, 화보 바이오팜) 현탁액을 취하여 원심분리해(1000rpm×5min) 배양액을 버리고, 생존 세포 밀도 1×106/mL까지 1%BSA/PBS로 재현탁한다. 각 웰의 20μL(2×104개 세포)를 항-TIGIT 항체가 있는 96웰 U자형 플레이트에 첨가하여 상온에서 30min 동안 반응시킨다. 반응 후 96웰 U자형 플레이트를 1%BSA/PBS로 재현탁하고 원심분리하여(300g×3min) 상층액을 버리며, 이렇게 1회 세척하고, 1:200 희석된 PE-염소 항-인간-Fc(Jackson ImmunoResearch, #109-115-098)를 첨가하여 빛을 차단한 상온에서 15min 동안 반응시킨다. 반응된 96웰 U자형 플레이트를 1%BSA/PBS로 재현탁하고 원심분리하여(300g×3min) 상층액을 버리며, 이렇게 3회 세척한다. 최종적으로 웰당 100μL의 1%BSA/PBS로 재현탁하고, 유세포 분석기(BD，#CantoⅡ)를 사용해 PE 채널의 형광 강도를 검출한다.
키메라 항체의 결합 활성 결과는 도 1 및 표 3을 참조하며, 인간화 항체 결합 활성 결과는 도 2 및 표 4를 참조한다. 여기서 900324는 CHO 세포에서 일시적으로 발현되는 제네테크사의 항-인간 TIGIT 항체 Tiragolumab이며, 이의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 서열은 특허 출원 WO2015009856A2의 항체 10A7의 서열과 동일하다. 결과에 따르면, 키메라 항체와 인간화 항체는 모두 인간 TIGIT를 발현하는 세포(CHOK1-huTIGIT-2A3, 화보 바이오팜)와 친화성이 우수하고, 친화성이 비슷한 것으로 나타났다.
표 3. 인간 TIGIT에 대한 항-TIGIT 키메라 항체의 결합 활성
Figure pct00007
표 4. 인간 TIGIT에 대한 항-TIGIT 인간화 항체의 결합 활성
Figure pct00008
3.2. TIGIT 항원과 TIGIT 분자의 결합을 차단하는 TIGIT 항체를 시험하는 실험(경쟁법)
항원 huCD155-moFc(ACROBiosystems, #CD5-H5254)를 1%BSA의 PBS 용액(1%BSA/PBS)으로 40μg/ml로 희석하고, 웰당 10μL를 96웰 U자형 플레이트에 첨가하여 연속 희석한 항-TIGIT 항체와 1:1의 부피비로 균일하게 혼합하며, 동시에 양성 대조 그룹을 설정한다(CD155-moFc만 첨가). 대수 성장기 동안 인간 TIGIT 발현 세포(CHOK1-huTIGIT-2A3, 화보 바이오팜) 현탁액을 취하여 원심분리해(1000rpm×5min) 배양액을 버리고, 생존 세포 밀도 1×106/Ml까지 1%BSA/PBS로 재현탁한다. 각 웰의 20μL(2×104개 세포)를 CD155-moFc 및 항-TIGIT 항체가 균일하게 혼합된 96웰 U자형 플레이트에 첨가하여 상온에서 30min 동안 반응시킨다. 반응 후 96웰 U자형 플레이트를 1%BSA/PBS로 재현탁하고 원심분리하여(300g×3min) 상층액을 버리며, 이렇게 1회 세척하고, 1:300 희석된 Alexa488-염소 항-마우스-Fc(Jackson ImmunoResearch, #115-545-071)를 첨가하여 빛을 차단한 상온에서 15min 동안 반응시킨다. 반응된 96웰 U자형 플레이트를 1%BSA/PBS로 재현탁하고 원심분리하여(300g×3min) 상층액을 버리며, 이렇게 3회 세척한다. 최종적으로 웰당 100μL의 1%BSA/PBS로 재현탁하고, 유세포 분석기(BD，#CantoⅡ)를 사용해 FITC 채널의 형광 강도를 검출한다.
키메라 항체의 결합 활성 결과는 도 3 및 표 5를 참조하며, 인간화 항체 결합 활성 결과는 도 4 및 표 6을 참조한다. 결과에 따르면, 키메라 항체와 인간화 항체는 인간의 CD155에 대해 뚜렷한 차단 효과가 있고, 차단 효과가 비슷한 것으로 나타났다.
표. 5 인간 TIGIT와 이의 리간드 CD155 결합에 대한 항-TIGIT 키메라 항체의 차단 활성
Figure pct00009
표 6. 인간 TIGIT와 이의 리간드 CD155 결합에 대한 항-TIGIT 인간화 항체의 차단 활성
Figure pct00010
3.3. 인간화 단일클론 항체의 친화성 검출
본 실험은 SPR 방법을 사용해 항원-항체 결합 역합 및 친화도를 측정한다. BIOCORE(GE, #Biacore 8K)를 사용한다. Sereis S Sensor Chip ProteinA 칩(GE, #29-1275-56)을 상온에서 20~30min 동안 평형화시킨 후, 칩을 기기에 장착한다. 평형 완충액으로 항체 샘플을 실험 작업 농도로 희석하고, 2~8℃에서 밀봉한다. 평형 완충액 HBS-EP(10x)(GE, #BR-1006-69)으로 항원, 히스태그(His-Tag) 인간 TIGIT 단백질(huTIGIT, ACRO Biosystems, #TIT-H52H3)을 희석하고, 항원 20nM 초기 2.5배 희석도에서 5개 농도 구배로 희석하며, 2개의 0 농도(즉, 평형 완충액) 및 최저 농도 반복을 설정한다. pH1.5 글리신 용액(GE, #BR100354)으로 칩을 재생한다. 트래핑 방법의 다순환 동역학 프로그램을 사용해 샘플을 분석하고, 해당 분석 프로그램을 선택해 데이터를 분석하여 reference binding이 분명하게 없음을 확인하고, Kinetics, 1:1binding modle을 선택해 피팅 분석하여 샘플의 동역학적 매개변수를 획득한다.
실험 결과는 표 7을 참조한다. HuTIGIT에 대한 친화도 상수(KD(M) 결과에 의하면, 본 발명의 인간화 단일클론 항체 HB0030의 친화도는 10-11에 근접하는 매우 강한 친화도를 갖는 것으로 나타났다.
표 7. 인간화 Mab-TIGIT 항체와 hu TIGIT의 친화도 실험 결과
Figure pct00011
실시 예 4. 동물의 생체내 약력학적 시험
본 실험은 CT26.WT 결장암 종양을 피하 접종한 면역관문 인간화 마우스 BALB/c-hPD1/hTIGIT 모델에서 항-인간 TIGIT 항체 HB0030, HB0031, HB0032, HB0033에 대한 약력학적 연구이다.
본 실험은 마우스 결장암 세포 CT26.WT 세포를 사용하며, 대수 성장기의 CT26.WT 세포를 채취해 배양액을 제거하고 PBS로 2회 세척한 후 접종하며(종양 이식 전, 종양 이식 후 CT26.WT 세포의 생존율은 각각 98.57% 및 98.28%임), 접종량은 5×105/100μL/마리이다. 접종 후 11일째 평균 종양 부피가 94.02mm3에 도달할 때, 마우스를 종양 부피에 따라 그룹당 8마리씩 무작위로 나눈다. 그룹화한 당일을 D0일로 정의하고, D0, D3, D7, D10, D14, D17에 약제를 투여하고, 약제를 투여하기 시작한 후 D0, D2, D4, D6, D8, D10, D13, D15, D17, D20, D23에 종양 크기를 관찰하고 마우스의 체중을 측정한다. 종양 부피 계산 방식은 종양 부피(mm3)=0.5×(종양 장경×종양 단경2)이다. 결과는 도 5에 도시된 바와 같다.
도 5의 실험 결과를 참조하면, 본 발명의 항-TIGIT 인간화 단일클론 항체 HB0030, HB0031, HB0032, HB0033는 10mg/kg 단독 투여시 뚜렷한 종양 억제 효과가 있음을 알 수 있다.
추가적으로 CT26.WT 결장암 종양을 피하 접종한 면역관문 인간화 마우스 BALB/c-hPD1/Htigit 모델에 대한 10mg/kg의 용량에서 HB0030 및 대조 항체 Tiragolumab를 연구한다.
본 실험은 마우스 결장암 세포 CT26 세포를 사용하며, 대수 성장기의 CT26 세포를 채취해 배양액을 제거하고 PBS로 2회 세척한 후 접종하며(종양 이식 전, 종양 이식 후 CT26 세포의 생존율은 각각 98.51% 및 97.250%임), 접종량은 5×105/100μL/마리이다. 접종 후 12일째 평균 종양 부피가 80.33mm3에 도달할 때, 마우스를 종양 부피에 따라 그룹당 6마리씩 무작위로 나눈다. 그룹화한 당일을 D0일로 정의하고, D0, D3, D7, D10, D14, D17에 약제를 투여하고, 약제를 투여하기 시작한 후 D0, D2, D4, D6, D8, D10, D13, D15, D17, D20, D23에 종양 크기를 관찰하고 마우스의 체중을 측정한다. 종양 부피 계산 방식은 종양 부피(mm3)=0.5×(종양 장경×종양 단경2)이다. 결과는 도 6에 도시된 바와 같다.
도 6의 실험 결과를 참조하면, 본 발명의 항-TIGIT 항체 HB0030은 대조 항체 Tiragolumab에 비해 종양 억제 효과가 더 우수함을 알 수 있다.
본 연구에서 모든 그룹의 마우스는 접종 24일 후에 치료되었고, 마우스의 체중에는 모두 유의미한 변화가 없었다.
실시 예 5.동물 생체 내에서 항-TIGIT 항체 HB0030의 약력학적 실험
생체 내에서 HB0030 분자의 ADCC 약력학적 효과를 평가하며, 여기서 900541은 Fc 영역의 L234A/L235A돌연변이된 ADCC 효과가 없는 HB0030이고, 다른 두 개는 HB0030의 상이한 배치의 샘플이다. 본 실험은 생리식염수를 음성 대조로 마우스 결장암 세포 CT26.WT 이식 인간화 마우스 BALB/c-hPD1/hTIGIT에서 상기 3가지 약제의 항종양 효과를 평가한다.
BALB/c-hPD1/Htigit 마우스(CT26.WT 세포 접종)에 각각 테스트 약제 3mg/kg을 매주 2회, 총 6회 복강내 주사한다. 대조 그룹 G1(생리식염수)과 비교한다. 종양 부피 결과(TIGtv) 및 체중 결과(TIGtw) 분석에 따르면, 900541(G2:anti-TIGIT-1，3 mpk)의 종양 억제율은 각각 TGItv 40.26%, TGItw 32.60%이다. 항-TIGIT 항체 HB0030(G3:anti-TIGIT-2，3 mpk)의 억제율은 각각 TGItv 90.68%, TGItw 86.85%로, 종양 성장에 뚜렷한 억제 효과를 갖는다(G3 VS G1，***Ptv<0.001,***Ptw<0.001). 항-TIGIT 항체 HB0030(G4:anti-TIGIT-3，3 mpk)의 억제율은 각각 TGItv 82.38%, TGItw 77.85%로 종양 성장에 뚜렷한 억제 효과를 갖는다(G4 VS G1，***Ptv<0.001,***Ptw<0.001). 또한, (G3:anti-TIGIT-2，3 mpk) 및 HB0030(G4:anti-TIGIT-3，3 mpk) 간의 종양 억제 효과는 뚜렷한 차이가 없다(G4 VS G2，Ptv>0.263，Ptv>0.346).
요약하면, 현재의 테스트 시스템 하에서, BALB/c-hPD1/hTIGIT 마우스(CT26.WT세포 접종)에 각각 테스트 약제 3mg/kg를 주 2회, 총 6회 복강내 주사한 후 생리식염수 대조 그룹과 비교하면, G2의 900541, G3 및 G4의 HB0030(3 mpk) 모두 유의미한 종양 억제 효과를 갖는 것으로 나타났다.

Claims (67)

  1. 중쇄 가변 영역 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함하며, 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  2. 제1항에 있어서,
    경쇄 가변 영역 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함하며, 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  3. 제1항 내지 제2항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 특성 중 하나 이상의 특성을 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
    1) 1×10-10M 이하의 KD값으로 TIGIT 단백질에 결합할 수 있는 특성, 여기서 상기 KD값은 표면 플라즈몬 공명을 통해 측정된다.
    2) FACS 측정에서, CD155와 TIGIT의 결합을 차단할 수 있는 특성, 및
    3) 종양의 성장 및/또는 종양 세포의 증식을 억제할 수 있는 특성.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    참조 항체와 경쟁적으로 상기 TIGIT 단백질에 결합하며, 여기서 상기 참조 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 참조 항체의 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하며,
    상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하며,
    상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 참조 항체의 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하며,
    상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하며,
    상기 LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab)2, Fv 단편, F(ab')2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  7. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 완전 인간 항체로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 HCDR1을 포함하고, 상기 HCDR1은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 HCDR2를 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 HCDR2는 서열번호 4 및 42 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 HCDR3을 포함하고, 상기 HCDR3은 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 HCDR3은 서열번호 5 및 43 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  13. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 상기 단리된 항원 결합 단백질은,
    (1) HCDR1:서열번호 3, HCDR2:서열번호 4, 및 HCDR3:서열번호 5, 및
    (2) HCDR1:서열번호 3, HCDR2:서열번호 42, 및 HCDR3:서열번호 43으로 구성된 어느 하나의 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 여기서 상기 VL은 LCDR1을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열번호 65로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 LCDR1은 서열번호 6 및 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 여기서 상기 VL은 LCDR2를 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 여기서 상기 VL은 LCDR3을 포함하고, 상기 LCDR3은 서열번호 66으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 LCDR3은 서열번호 8 및 53 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 상기 단리된 항원 결합 단백질은,
    (1) LCDR1:서열번호 6, LCDR2:서열번호 7, 및 LCDR3:서열번호 8, 및
    (2) LCDR1:서열번호 52, LCDR2:서열번호 7, 및 LCDR3:서열번호 53으로 구성된 어느 하나의 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR1을 포함하고, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR1은 서열번호 68로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  21. 제20항에 있어서,
    상기 LCDR1은 서열번호 15, 16, 44 및 45 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR2를 포함하고, 여기서 상기 L-FR2는 상기 LCDR1과 상기 LCDR2 사이에 위치하고, 상기 L-FR2는 서열번호 70으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 LCDR2는 서열번호 17, 18, 46 및 47 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR3을 포함하고, 상기 L-FR3은 상기 LCDR2와 상기 LCDR3 사이에 위치하고, 상기 L-FR3은 서열번호 72로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  25. 제24항에 있어서,
    상기 LCDR3은 서열번호 19, 20, 21, 48, 49 및 50 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR4를 포함하고, 여기서 상기 L-FR4의 N-말단은 상기 LCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 L-FR4는 서열번호 73으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  27. 제26항에 있어서,
    상기 L-FR4는 서열번호 22 및 51 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    VL을 포함하며, 여기서 상기 VL은 서열번호 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  29. 제 28항에 있어서,
    상기 VL은 서열번호 2, 10, 11, 13, 33 및 34 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 경쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역에서 유래하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  31. 제 30항에 있어서,
    상기 인간 κ 경쇄 불변 영역은 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR1을 포함하고, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR1은 서열번호 58로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  33. 제32항에 있어서,
    상기 H-FR1은 서열번호 23 및 35 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR2를 포함하고, 여기서 상기 H-FR2는 상기 HCDR1과 상기 HCDR2 사이에 위치하고, 상기 H-FR2는 서열번호 60으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  35. 제34항에 있어서,
    상기 H-FR2는 서열번호 24 내지 26, 36 및 37 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR3을 포함하고, 여기서 상기 H-FR3은 상기 HCDR2와 상기 HCDR3 사이에 위치하고, 상기 H-FR3은 서열번호 61로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  37. 제36항에 있어서,
    상기 H-FR3은 서열번호 27, 38 및 39 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR4를 포함하고, 여기서 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 H-FR4는 서열번호 62로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  39. 제38항에 있어서,
    상기 H-FR4는 서열번호 28, 40 및 41 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    VH를 포함하며, 여기서 상기 VH는 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  41. 제40항에 있어서,
    상기 VH는 서열번호 1, 9, 12, 14 및 32 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 중쇄 불변 영역을 포함하며, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 불변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 불변 영역을 포함하며, 인간 IgG1 불변 영역은 서열번호 29 내지 30 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함하며, 상기 단리된 항원 결합 단백질은,
    (1) VH:서열번호 9, 및 VL:서열번호 10,
    (2) VH:서열번호 9, 및 VL:서열번호 11,
    (3) VH:서열번호 12, 및 VL:서열번호 13,
    (4) VH:서열번호 14, 및 VL:서열번호 11,
    (5) VH:서열번호 1, 및 VL:서열번호 2,
    (6) VH:서열번호 32, 및 VL:서열번호 34, 및
    (7) VH:서열번호 32, 및 VL:서열번호 33으로 구성된 어느 하나의 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 코딩하는 단리된 하나 이상의 핵산 분자.
  46. 제45항의 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  47. 제45항의 상기 핵산 분자 또는 제46항의 상기 벡터를 포함하는 세포.
  48. 제 1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 포함하는 폴리펩티드.
  49. 제 1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질 또는 제48항의 상기 폴리펩티드를 포함하는 면역접합체.
  50. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 제조 방법으로,
    상기 방법은 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질이 발현되는 조건 하에 제47항의 상기 세포를 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 제45항의 상기 핵산 분자, 제46항의 상기 벡터, 제47항의 상기 세포, 제48항의 상기 폴리펩티드 및/또는 제49항의 면역접합체, 및 임의로 제약상 허용되는 보조제(adjuvant)를 포함하는 약학적 조성물.
  52. TIGIT 관련 질병의 예방, 경감 및/또는 치료용 약제 제조에 있어서 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 제45항의 상기 핵산 분자, 제46항의 상기 벡터, 제47항의 상기 세포, 제48항의 상기 폴리펩티드, 제49항의 상기 면역접합체 및/또는 제51항의 상기 약학적 조성물의 용도.
  53. 제52항에 있어서,
    상기 TIGIT 관련 질병은 T 세포 기능장애성 질병인 것을 특징으로 하는 용도.
  54. 제52항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 TIGIT 관련 질병은 종양인 것을 특징으로 하는 용도.
  55. 제54항에 있어서,
    상기 종양은 고형 종양인 것을 특징으로 하는 용도.
  56. 제54항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 종양은 결장암인 것을 특징으로 하는 용도.
  57. CD155과 TIGIT의 결합을 억제하는 방법으로,
    상기 방법은 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. TIGIT 관련 질병의 예방, 경감 또는 치료 방법으로,
    상기 방법은 필요한 대상체에게 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 제45항의 상기 핵산 분자, 제46항의 상기 벡터, 제47항의 상기 세포, 제48항의 상기 폴리펩티드, 제49항의 상기 면역접합체 및/또는 제51항의 상기 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제58항에 있어서,
    상기 TIGIT 관련 질병은 T 세포 기능장애성 질병인 것을 특징으로 하는 방법.
  60. 제58항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 TIGIT 관련 질병은 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 제60항에 있어서,
    상기 종양은 고형 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 제60항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 종양은 결장암인 것을 특징으로 하는 방법.
  63. TIGIT 관련 질병의 예방, 경감 또는 치료에 사용되는 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 제45항의 상기 핵산 분자, 제46항의 상기 벡터, 제47항의 상기 세포, 제48항의 상기 폴리펩티드, 제49항의 상기 면역접합체 및/또는 제51항의 상기 약학적 조성물.
  64. 제63항에 있어서,
    상기 TIGIT 관련 질병은 T 세포 기능장애성 질병인 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 세포, 폴리펩티드, 면역접합체 및/또는 약학적 조성물.
  65. 제64항에 있어서,
    상기 TIGIT 관련 질병은 종양인 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 세포, 폴리펩티드, 면역접합체 및/또는 약학적 조성물.
  66. 제64항 내지 제65항에 있어서,
    상기 종양은 고형 종양인 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 세포, 폴리펩티드, 면역접합체 및/또는 약학적 조성물.
  67. 제66항에 있어서,
    상기 종양은 결장암인 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 세포, 폴리펩티드, 면역접합체 및/또는 약학적 조성물.
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