BR112019010606A2

BR112019010606A2 - dinucleotídeos cíclicos como agonistas de sting

Info

Publication number: BR112019010606A2
Application number: BR112019010606A
Authority: BR
Inventors: C Bignan Gilles; Wang Guangyi; patrick edwards James; Beigelman Leonid; Tianbao Lu; Richter Mark; Zhong Minghong; Connolly Peter; Kumar Thatikonda Santhosh; Emanuel Stuart; Laquerre Sylvie
Original assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 2016-11-25
Filing date: 2017-11-21
Publication date: 2019-09-17
Also published as: JP2020500862A; JOP20170188A1; UY37495A; JP7316936B2; TW201831192A; AU2017365158B2; US20180162899A1; MX2019006082A; KR20190085107A; CN110291096A; CA3044693A1; US20230144627A1; WO2018098203A1; AU2017365158A1; EP3544989A1; JP2022110131A; US11472830B2

Abstract

a presente invenção refere-se a compostos, composições e métodos para o tratamento de infecções virais, doenças, síndromes ou distúrbios que são afetados pela modulação de sting. esses compostos são representados pela fórmula i a seguir: fórmula (i) em que r1a, r1b, r1c, b1, r2a, e r2b são como definidos aqui.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para DINUCLEOTÍDEOS CÍCLICOS COMO AGONIST AS DE STING.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS DE RELACIONADOS [0001] Este pedido reivindica a prioridade ao Pedido de Patente Provisório US N° 62/426.350, depositado em 25 de novembro de 2016; Pedido de Patente Provisório US N° 62/502.983, depositado em 8 de maio de 2017; Pedido de Patente Provisório US N°. 62/555.232, depositado em 7 Setembro, 2017; que estão aqui incorporados, por referência em suas totalidades.

CAMPO DA INVENÇÃO [0002] A presente invenção se refere a novos compostos que são agonistas de STING (Estimulador de Genes de Interferon) e são úteis para o tratamento de distúrbios que são afetados pela modulação da proteína STING. A invenção também se refere a composições farmacêuticas que compreendem um ou mais de tais compostos, processos para preparar tais compostos e composições, e uso de tais compostos ou composições farmacêuticas para o tratamento de várias doenças, síndromes e distúrbios. A invenção pode estar envolvida na ativação da via de sinalização a jusante, resultando adicionalmente na ativação de segundos mensageiros e fatores de crescimento, e na produção de interferon envolvido na imunidade inata e adaptativa. Mais particularmente, a presente invenção se refere ao uso de tais compostos ou composições farmacêuticas para o tratamento de várias infecções, doenças, síndromes e distúrbios incluindo, mas não se limitando a, melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e terapia antiviral.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0003] STING (estimulador de genes de interferon), também conhecido como TMEM173, MITA, MPYS, e ERIS, é um receptor transmembranar localizado dentro da célula e um sensor de chave de

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2/122 ácidos nucleicos citossólicos (Zhong B, et al. The Adaptor Protein MITA Links Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activation. Immunity. 2008. vol. 29: 538(-550); Estudos recentes revelaram a biologia de STING e seu papel na mobilização de uma resposta imune inata resultando em robusta atividade de antitumor em modelos de camundongo. A ativação da via de STING resulta na produção de interferons do Tipo I (principalmente IFN-α e IFN-β) induzida através da via de IRF3 (fator 3 regulador de interferon). Acredita-se que a ativação de IRF3 é mediada por TBK1 que recruta e fosforila IRF3 formando, assim, um homodímero de IRF3 capaz de entrar no núcleo para transcrever interferon de tipo I e outros genes (Liu S, et al. Phosphorylation of innate immune adaptor proteins MAVS, STING, e TRIF induces IRF3 activation Science. 2015: 26302637). TBK1 também ativa o intensificador da cadeia leve kappa do fator nuclear da via de células B ativadas, que leva à produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-1a, IL-Ιβ, IL-2, IL-6, TNF-a, etc.), através do fator de transcrição oncogênico NF-κΒ. Além disso, STING ativa STAT6 (transdutor de sinal e ativador de transcrição 6) para induzir (tipo Th2), aumentar (IL-12) ou diminuir (IL-10) a produção de várias citocinas, incluindo as quimiocinas CCL2, CCL20, e CCL26 (Chen H, et al. Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity Cell. 2011, vol.14:433-446). Também foi relatado que a fosforilação direta de STING em Ser366 após a ativação ocorre através de TBK1 (Corrales, L. et al Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent and systemic tumor regression and immunity Cell Reports, 2015, vol.11: 1-13; Konno, H. et al. Cyclic dinucleotides trigger ULK1 (ATG1) phosphorylation of STING to prevent sustained innate immune signaling Cell, 2013, vol. 155: 688698).

[0004] O ligante natural que se liga e ativa STING (2',3')ciclico

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3/122 guanosina monofosfato-adenosina monofosfato (2',3'-cGAMP) e a enzima responsável por sua síntese (cGAs, também conhecida como C6orf150 ou MB21D1) foram elucidados, fornecendo uma oportunidade para modular essa via. cGAMP é um ligante de alta afinidade para STING produzido em células de mamíferos, que serve como um segundo mensageiro endógeno para ativar a via de STING. Ele é um dinucleotídeo cíclico com uma ligação 2',3' única produzida por cGAS na presença de DNA de dupla fita exógeno (por exemplo, aquele liberado por bactérias, vírus ou protozoários invasores) ou de auto-DNA em mamíferos (Wu et al., 2013; Sun, L. et al. Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type I Interferon Pathway Science, 2013, vol. 339: 786-791; Bhat N e Fitzgerald KA. Recognition of Cytosolic DNA by cGAS and other STING-dependent sensors. Eur J Immunol, março de 2014; 44(3):634-40). A ativação de STING pode também ocorrer através da ligação de dinucleotídeos (3',3) cíclicos exógenos (c-di-GMP, c-diAMP e 3'3'-cGAMP) que são liberados por bactérias invasoras (Zhang X, et al. Cyclic GMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endogenous High-Affinity Ligand for STING Molecular Cell, 2013, vol. 51: 226-235; Danilchanka, O and Mekalanos, JJ. Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response Cell. 2013. vol. 154: 962-970).

[0005] A ativação da via de STING desencadeia uma resposta imune que resulta na geração de células T assassinas específicas que pode encolher os tumores e fornecer imunidade de longa duração de modo que eles não reapareçam. A impressionante atividade antitumoral obtida com agonistas de STING em modelos pré-clínicos gerou um alto nível de excitação para este alvo e compostos de molécula pequena que podem modular a via de STING têm potencial para tratar tanto o câncer quanto reduzir doenças autoimunes.

[0006] A ativação da via de STING também contribui para uma resposta antiviral. A resposta de perda de função, seja no nível celular

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4/122 ou de organismo, demonstra uma incapacidade de controlar a carga viral na ausência de STING. A ativação da via de STING desencadeia uma resposta imune que resulta em citocinas antivirals e próinflamatórias que combatem os vírus e mobilizam os braços inatos e adaptativos do sistema imune. Por fim, a imunidade de longa duração é desenvolvida contra o vírus patogênico. A atividade antiviral surpreendente obtida com agonistas de STING em modelos pré-clínicos gerou um alto nível de excitação para este alvo e compostos de molécula pequena que podem modular a via de STING têm potencial para tratar infecções virais crônicas, como hepatite B.

[0007] A infecção pelo vírus da hepatite B (HBV) é um importante problema de saúde global, que afeta mais de 5% da população mundial (mais de 350 milhões de pessoas em todo o mundo e 1,25 milhão de indivíduos nos EUA). Apesar da disponibilidade de certas vacinas e terapias contra o HBV, a carga da infecção crônica por HBV continua a ser um problema médico mundial não atendido significativo devido a opções de tratamento subótimas e taxas sustentadas de novas infecções na maioria das partes do mundo em desenvolvimento. Os tratamentos atuais são limitados a apenas duas classes de agentes: interferon alfa e análogos nucleosídeos que atuam como inibidores da polimerase viral. No entanto, nenhuma dessas terapias oferece uma cura para a doença, e os problemas de resistência a fármacos, baixa eficácia e tolerabilidade limitam seu impacto. As baixas taxas de cura do HBV são atribuídas, pelo menos em parte, ao fato de que a supressão completa da produção viral é difícil de ser obtida com um único agente antiviral. No entanto, a supressão persistente do DNA de HBV desacelera a progressão da doença hepática e ajuda a evitar o carcinoma hepatocelular. As metas de terapia atual para pacientes infectados pelo HBV são direcionadas à redução dos níveis séricos de DNA de HBV para níveis baixos ou indetectáveis, e para finalmente reduzir ou impedir o desenvolvimento de

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5/122 cirrose e carcinoma hepatocelular. Existe, portanto, uma necessidade na técnica por agentes terapêuticos que possam aumentar a supressão da produção viral e que possam tratar, melhorar ou evitar a infecção por HBV. A administração de tais agentes terapêuticos a um paciente infectado por HBV, quer como monoterapia ou em combinação com outros tratamentos para o HBV ou tratamentos auxiliares, pode levar a uma redução significativa da carga viral, melhor prognóstico, diminuição da progressão da doença e intensificação das taxas de soroconversão.

[0008] Os benefícios terapêuticos potenciais da intensificação da imunidade inata e adaptativa tornam o STING um alvo terapêutico atrativo que demonstra atividade impressionante por si só e também podem ser combinados com outras imunoterapias.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0009] A presente invenção refere-se a compostos de Fórmula (I)

Fórmula (I) em que:

Ria é hidróxi ou flúor e Ric é hidrogênio; ou, Ria é -O- e Ric é CH₂ de modo que Ria e Ric são tomados juntos com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um anel de 5 membros;

Rib é selecionado do grupo que consiste em hidróxi, tiol e BH₃-;

Bi é selecionado do grupo que consiste em anéis b1 e b2

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6/122 ο νη₂

ΟΤ lb¹

Ν^Ν^ΝΗ;, n n > b1 e b2;

R2A é selecionado do grupo que consiste em hidróxi e metóxi;

R2B é selecionado do grupo que consiste em hidróxi, tiol e BH₃-;

desde que 0 composto da Fórmula (I) seja diferente de sal de (1 fí,6fí,8fí,9fí,10fí,15fí,17fí,18fí)-17-(2-Amino-6-oxo-6,9-di-hidro1 /7-pu ri n-9-il)-8-(6-am i no-9 /7-pu ri n-9-i l)-9-f lúo r-3,12,18-tri-hid róxi2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3Ã⁵, 12Ã⁵-difosfatriciclo[13,2,1,0⁶,¹⁰]octadecano3,12-diona, bis-amônio;

ou um enantiômero, diastereômero ou forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0010] A presente invenção também fornece uma composição farmacêutica que compreende, que consiste em e/ou que consiste essencialmente em um veículo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente farmaceuticamente aceitável e um composto da fórmula (I) ou uma forma do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0011] Também são fornecidos processos destinados à fabricação de uma composição farmacêutica que compreende, que consiste em e/ou que consiste essencialmente em misturar um composto da Fórmula (I) e um veículo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente farmaceuticamente aceitável.

[0012] A presente invenção fornece, ainda, métodos para 0 tratamento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano no qual a infecção viral, doença, síndrome ou condição é afetada pelo

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7/122 agonismo de STING, com o uso de um composto da Fórmula (I). [0013] A presente invenção fornece, ainda, métodos para tratamento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano com o uso de um composto da Fórmula (I).

[0014] A presente invenção fornece, ainda, métodos para tratamento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano no qual a infecção viral, doença, síndrome ou condição é afetada pelo agonismo de STING, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B, com o uso de um composto da Fórmula (I).

[0015] A presente invenção fornece, ainda, métodos para tratamento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B, com o uso de um composto da Fórmula (I).

[0016] A presente invenção também é direcionada ao uso de qualquer um dos compostos descritos na presente invenção na preparação de um medicamento, sendo que o medicamento é preparado para tratar uma infecção viral, doença, síndrome, ou condição que é afetada pelo agonismo de STING, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B, em um indivíduo que precisa do mesmo.

[0017] A presente invenção é também direcionada ao uso de qualquer um dos compostos descritos na presente invenção na preparação de um medicamento sendo que o medicamento é

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8/122 preparado para tratar uma infecção viral, doença, síndrome, ou condição, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B, em um indivíduo que precisa do mesmo. [0018] A presente invenção também se refere à preparação de derivados de dinucleotídeos cíclicos substituídos que atuam como agonistas seletivos de STING.

[0019] Para exemplificar a invenção são fornecidos métodos de tratamento de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição modulada por STING selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B, compreendendo administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos compostos ou composições farmacêuticas descritas acima.

[0020] Para exemplificar a invenção são fornecidos métodos de tratamento de uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B, compreendendo administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos compostos ou composições farmacêuticas descritas acima.

[0021] Em outra modalidade, a presente invenção é direcionada a um composto da Fórmula (I) para uso no tratamento de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição afetada pelo agonismo de STING selecionado do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0022] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a uma composição que compreende um composto da Fórmula (I) para o

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9/122 tratamento de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0023] Com referência aos substituintes, o termo independentemente refere-se à situação na qual mais que um substituinte é possível, os substituintes podendo ser iguais ou diferentes entre si.

[0024] O termo alquila, quer usado sozinho quer como parte de um grupo substituinte, refere-se às cadeias carbônicas lineares e ramificadas tendo 1 a 8 átomos de carbono. Portanto, os números designados de átomos de carbono (por exemplo Ci-s) referem-se independentemente ao número de átomos de carbono em uma porção alquila ou à porção alquila de um substituinte maior contendo alquila. Em grupos substituintes com múltiplos grupos alquila como (alquil Ci^amino-, os grupos alquila C1-6 do dialquilamino podem ser iguais ou diferentes.

[0025] O termo alcoxi refere-se a um grupo -O-alquila, em que o termo alquila é conforme definido acima.

[0026] Os termos alquenila e alquinila se referem a cadeias carbônicas retas e ramificadas que têm 2 a 8 átomos de carbono, em que uma cadeia alquenila contém ao menos uma dupla ligação e uma cadeia de alquinila contém ao menos uma ligação tripla.

[0027] O termo cicloalquila refere-se aos anéis hidrocarbônicos saturados ou parcialmente saturados, monocíclicos ou policíclicos de 3 a 14 átomos de carbono. Exemplos de tais anéis incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila e adamantila.

[0028] O termo heterociclila refere-se a um sistema de anel monocíclico ou bicíclico não aromático que tem 3 a 10 membros de anel que incluem ao menos 1 átomo de carbono e de 1 a 4

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10/122 heteroátomos selecionados independentemente dentre N, O e S. Estão incluídos no termo heterociclila um anel cíclico não aromático de 5 a 7 membros no qual 1 a 2 membros são N, ou um anel cíclico não aromático de 5 a 7 membros nos qual 0, 1 ou 2 membros são N e até 2 membros são O ou S, e pelo menos um membro deve ser N, O ou S; em que, opcionalmente, o anel contém 0 a 1 ligação insaturada e, opcionalmente, quando o anel é de 6 ou 7 membros, contém até duas ligações insaturadas. Os membros de anel de átomos de carbono que formam um anel heterociclo podem ser completamente saturados ou parcialmente saturados.

[0029] O termo heterociclila inclui, também, dois grupos heterocicloalquila monocíclicos de 5 membros ligados em ponte de modo a formar um anel bicíclico. Esses grupos não são considerados como sendo completamente aromáticos e não são denominados como grupos heteroarila. Quando um heterociclo for bicíclico, ambos os anéis do heterociclo são não aromáticos e ao menos um dos anéis contém um membro de anel de heteroátomo. Exemplos de grupos heterociclo incluem, e não se limitam, a pirrolinila (incluindo 2/7-pirrol, 2-pirrolinila ou 3-pirrolinila), pirrolidinila, imidazolinila, imidazolidinila, pirazolinila, pirazolidinila, piperidinila, morfolinila, tiomorfolinila e piperazinila. Exceto onde especificado em contrário, o heterociclo é ligado a seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulte em uma estrutura estável.

[0030] O termo arila se refere a um anel carbocíclico insaturado, aromático, monocíclico ou bicíclico de 6 a 10 membros de carbono. Exemplos de anéis de arila incluem fenila e naftalenila.

[0031] O termo heteroarila se refere a um sistema de anel aromático bicíclico ou monocíclico que tem de 5 a 10 membros de anel, que contém átomos de carbono e de 1 a 4 heteroátomos selecionados independentemente do grupo que consiste em N, O e S. Incluído

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11/122 dentro do termo heteroarila estão os anéis aromáticos de 5 ou 6 membros, em que o anel consiste em átomos de carbono e tem pelo menos um membro heteroátomo. Os heteroátomos adequados incluem nitrogênio, oxigênio e enxofre. No caso de anéis de 5 membros, o anel heteroarila contém, de preferência, um membro de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e, além disso, até três átomos de nitrogênio adicionais. No caso de anéis de 6 membros, o anel contém, de preferência, de um a três átomos de nitrogênio. Para o caso no qual o anel de 6 membros tem três átomos de nitrogênio, no máximo dois átomos de nitrogênio são adjacentes. Exemplos de grupos heteroarila incluem furila, tienila, pirrolila, oxazolila, tiazolila, imidazolila, pirazolila, isoxazolila, isotiazolila, oxadiazolila, triazolila, tiadiazolila, piridinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, indolila, isoindolila, benzofurila, benzotienila, indazolila, benzimidazolila, benzotiazolila, benzoxazolila, benzisoxazolila, benzotiadiazolila, benzotriazolila, quinolinila, isoquinolinila e quinazolinila. Exceto onde especificado em contrário, a heteroarila é ligada a seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulte em uma estrutura estável.

[0032] O termo halogênio ou halo se refere a átomos de flúor, cloro, bromo e iodo.

[0033] Sempre que o termo alquila ou arila ou qualquer uma de suas raízes prefixadas aparecem em um nome de um substituinte (por exemplo, arilalquila, alquilamino) o nome é para ser interpretado como incluindo aquelas limitações apresentadas acima para alquila e arila. Os números designados de átomos de carbono (por exemplo, Ci-Ce) referem-se, independentemente, ao número de átomos de carbono em uma porção alquila, uma porção arila ou em uma porção alquila de um substituinte maior no qual a alquila aparece como sua raiz prefixada. Para substituintes alquila e alcoxila, o número designado de átomos de carbono inclui todos os membros independentes incluídos em uma

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12/122 determinada faixa especificada. Por exemplo, alquila C1-6 incluiría metila, etila, propila, butila, pentila e hexila individualmente bem como as subcombinações das mesmas (por exemplo, C1-2, C1-3, C1-4, C1-5, C2-6, C3-6, C4-6, C5-6, C2-5, etc.).

[0034] Em geral, sob as regras de nomenclatura padrão usadas em toda a presente revelação, descreve-se, primeiramente, a porção terminal da cadeia lateral designada seguida pela funcionalidade adjacente relacionada ao ponto de fixação. Portanto, por exemplo, um substituinte alquilCi-Ce carbonila refere-se a um grupo de Fórmula:

O í ¹¹

-£-C—— Cí-Cs aíqtiila [0035] O termo R em um estereocentro designa que 0 estereocentro é puramente da configuração -R como definido na técnica; de modo semelhante, 0 termo S significa que 0 estereocentro é puramente da configuração -S. Como aqui usado, os termos *R ou *S em um estereocentro são usados para designar que 0 estereocentro apresenta uma configuração clara, porém, desconhecida. Como aqui usado, 0 termo RS se refere a um estereocentro que está presente como uma mistura das configurações -R e -S. De modo semelhante, os termos *RS ou *SR referem-se a um estereocentro que está presente como uma mistura das configurações -Re -Se é de configuração desconhecida em relação a outro estereocentro na molécula.

[0036] Os compostos que contêm um estereocentro extraído sem uma designação de ligação estéreo consistem em uma mistura de dois enantiômeros. Os compostos que contêm dois estereocentros ambos extraídos sem designações de ligação estéreo consistem em uma mistura de quatro diastereômeros. Os compostos com dois estereocentros ambos identificados como RS e extraídos com designações de ligação estéreo consistem em uma mistura de dois componentes com estereoquímica

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13/122 relativa conforme extraído. Os compostos com dois estereocentros ambos identificados como *RS e extraídos com designações de ligação estéreo consistem em uma mistura de dois componentes com estereoquímica relativa desconhecida. Os estereocentros não identificados representados sem designações de ligação estéreo consistem em uma mistura das configurações -R e -S. Para estereocentros não identificados representados com designações de ligação estéreo, a estereoquímica absoluta é como representada.

[0037] Exceto onde especificado em contrário, pretende-se que a definição de qualquer substituinte ou variável em um local específico em uma molécula seja independente de suas definições em qualquer lugar nesta molécula. Compreende-se que os substituintes e os padrões de substituição nos compostos desta invenção podem ser selecionados por um versado na técnica de modo a proporcionar compostos que são quimicamente estáveis e que podem ser prontamente sintetizados por técnicas conhecidas na técnica, assim como os métodos aqui descritos.

[0038] O termo indivíduo, como aqui usado, refere-se a um animal, de preferência um mamífero, com a máxima preferência um ser humano, que tenha sido o objeto de tratamento, observação ou experimento.

[0039] O termo quantidade terapeuticamente eficaz refere-se a uma quantidade de um composto ativo ou agente farmacêutico, incluindo um composto da presente invenção, que produza uma resposta biológica ou médica em um sistema tecidual, animal ou humano que esteja sendo procurado por um pesquisador, veterinário, doutor médico ou outro médico, que inclua um alívio ou um alívio parcial dos sintomas da doença, síndrome, condição, ou distúrbio sendo tratado.

[0040] O termo composição se refere a um produto que inclui os

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14/122 ingredientes específicos em quantidades terapeuticamente eficazes, assim como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, das combinações dos ingredientes específicos nas quantidades especificadas.

[0041] O termo agonista de STING pretende incluir um composto que interage com STING por ligação a ele e que induz a transdução de sinal caracterizada pela ativação das moléculas associadas à função de STING. Isso inclui direcionar a fosforilação de STING, IRF3 e/ou NF-kB e poderia também incluir STAT6. A ativação da via de STING resulta no aumento da produção de interferons do tipo I (principalmente IFN-α e IFN-β) e na expressão de genes estimulados por interferon (Chen H, et al. Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity. Cell. 2011, vol. 14: 433-446; e Liu S-Y, et al. Systematic identification of type I and type II interferon-induced antiviral factors. Proc. Natl. Acad. Sci. 2012:vol.109 4239-4244).

[0042] O termo modulado por STING é usado para se referir a uma condição afetada por STING diretamente ou através da via de STING, incluindo, mas não se limitando a, infecções virais, doenças ou condições como melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0043] Como usado aqui, exceto onde especificado em contrário, o termo distúrbio modulado por STING significa qualquer infecção viral, doença, distúrbio ou condição caracterizada pelo fato de que pelo menos um de seus sintomas característicos é aliviado ou eliminado mediante o tratamento com um agonista de STING. Exemplos adequados incluem, mas não se limitam a melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0044] Como usado aqui, exceto onde especificado em contrário, o termo afetar ou afetado (quando se refere a uma infecção viral, doença, síndrome, condição ou distúrbio que é afetado pelo agonismo

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15/122 de STING) inclui uma redução na frequência e/ou gravidade de um ou mais sintomas ou manifestações da dita infecção viral, doença, síndrome, condição ou distúrbio; e/ou inclui a prevenção do desenvolvimento de um ou mais sintomas ou manifestações da dita infecção viral, doença, síndrome, condição ou distúrbio ou o desenvolvimento da infecção viral, doença, condição, síndrome ou distúrbio.

[0045] Os compostos da presente invenção são úteis nos métodos para o tratamento ou melhoria de uma infecção viral, doença, uma síndrome, uma condição ou um distúrbio que é afetado pelo agonismo de STING. Estes métodos compreendem, consistem de e/ou consistem essencialmente da administração a um indivíduo, incluindo um animal, um mamífero, e um ser humano precisando de tal tratamento, alívio e/ou prevenção, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I) conforme definido aqui, ou um enantiômero, diastereômero, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0046] Em particular, os compostos da Fórmula (I), ou um enantiômero, um diastereômero, um solvato ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, são úteis para tratar ou aliviar doenças, síndromes, condições ou distúrbios como melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0047] Mais particularmente, os compostos da Fórmula (I), ou um enantiômero, diastereômero, solvato ou forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo são úteis para tratar ou melhorar melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B, que compreende administrar a um indivíduo que necessita disso uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I), ou um enantiômero, diastereômero, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido aqui.

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16/122 [0048] Algumas modalidades apresentadas na presente invenção se referem a métodos para melhorar e/ou tratar uma infecção viral, incluindo infecções causadas por Hepadmarinhas, como vírus da hepatite B ou HBV. Os métodos podem incluir a administração a um indivíduo identificado como estando sofrendo de uma infecção viral de uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0049] Outras modalidades aqui reveladas se referem a um método para melhorar e/ou tratar uma infecção viral, o qual podem incluir colocar uma célula infectada com o vírus em contato com uma quantidade eficaz de um ou mais compostos aqui descritos (por exemplo, um composto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo), ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos aqui descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Ainda outras modalidades aqui descritas referem-se ao uso de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para melhorar e/ou tratar a infecção viral.

[0050] Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para melhorar e/ou tratar uma infecção viral. Algumas modalidades aqui reveladas se referem a um método para inibir a replicação de um vírus, que pode incluir colocar uma célula infectada com o vírus em contato com uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente

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17/122 aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos descritos aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0051] Outras modalidades aqui descritas se referem ao uso de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para inibir a replicação de um vírus. Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos aqui descritos, (por exemplo, um composto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos), ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos aqui descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para inibir a replicação de um vírus.

[0052] Em algumas modalidades, a infecção viral pode ser uma infecção viral por hepatite B. Os métodos podem incluir a administração a um indivíduo identificado como estando sofrendo de HBV de uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0053] Outras modalidades aqui reveladas se referem a um método para melhorar e/ou tratar a infecção viral que pode incluir colocar uma célula infectada com HBV em contato uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Ainda outras modalidades aqui descritas referem-se ao uso de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para melhorar e/ou tratar HBV.

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18/122 [0054] Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para melhorar e/ou tratar HBV. Algumas modalidades aqui reveladas se referem a um método para inibir a replicação de HBV que pode incluir colocar uma célula infectada com o vírus em contato uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0055] Outras modalidades aqui descritas se referem ao uso de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para inibir a replicação de HBV. Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para inibir a replicação de HBV.

[0056] As modalidades da presente invenção incluem um composto da Fórmula (I) conforme aqui definido, ou um enantiômero, diastereômero, solvato, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que os substituintes selecionados a partir de um ou mais das variáveis aqui definidas (por exemplo, Ria, Rib, Ric, Bi, R₂a, R2b) são independentemente selecionadas para ser qualquer substituinte individual ou qualquer subconjunto de substituintes daqueles exemplificados na listagem na Tabela 1, abaixo.

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Tabela 1.

O O=p-O—1 N^íA_NH₂ ^rl±j V^o 7 / VRic ]---/ R2A 0 Bi --0— II R_2B o Fórmula (1)
Composto n°	Ria	Rib	Rtc	Bi	R2A	R2B
1	OCH₃	OH	H	b2	OH	OH
2	OH	OH	H	b2	OCH3	OH
3	OCH3	OH	H	b2	OCH3	OH
4	F	(*R)-SH	H	b2	OH	(*R)-SH
5	F	(*S)-SH	H	b2	OH	(*S)-SH
6	O-	OH	CHa para formar um anel com Ria	b2	OH	OH
7	OH	(*R)-BH₃-	H	b2	OH	(*R)-BH₃-
8	OH	(*S)-BH₃-	H	b2	OH	(*S)-BH₃-
9	F	(*R)-BH₃-	H	b2	OCH3	(*R)-SH
10	F	(*S)-BH₃-	H	b2	OCH3	(*R)-SH
11	F	(*R)-BH₃-	H	b2	OCH3	(*R)-BH₃-
12	F	(*S)-BH₃-	H	b2	OCH3	(*S)-BH₃-
13	F	(*R)-SH	H	b2	OCH3	(*R)-BH₃-
14	F	(*S)-SH	H	b2	OCH3	(*S)-BH₃-
15	F	(*R)-BH₃	H	b2	OCH3	OH
16	F	(*S)-BH₃	H	b2	OCH3	OH
17	F	OH	H	b2	OCH3	(*R)-BH₃
18	F	OH	H	b2	OCH3	(*S)-BH₃
19	O-	OH	CHa para formar um anel com Ria	b2	OCH3	(*R)-BH₃

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O ^rib <ΓΎ1^Η O=p—O— N _N ^x _Nh₂ ^ria ó Ud Z A^R,C πη \| o ^R2A o Bj --O— II R₂B 0 Fórmula (1)
Composto n°	Ria	Rib	Rtc	Bi	R2A	R2B
20	O-	(*R)-SH	CHs para formar um anel com Ria	b2	och₃	(*R)-BH₃
21	O-	(*R)-BH₃	CHs para formar um anel com Ria	b2	och₃	(*R)-BH₃
22	o-	(*R)-BH₃	CHs para formar um anel com Ria	b2	och₃	OH
23	o-	(*R)-BH₃	CHs para formar um anel com Ria	b2	och₃	(*R)-SH

[0057]

Uma modalidade da presente invenção se refere a um composto da Fórmula (I)

Fórmula (I) em que:

Ria é hidróxi ou flúor e Ric é hidrogênio; ou, Ria é -O- e

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Ric é CH₂ de modo que Ria e Ric são tomados juntos com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um anel de 5 membros;

Rib é selecionado do grupo que consiste em hidróxi, tiol e BH₃-;

Bi éb2

R₂a é selecionado do grupo que consiste em hidróxi e metóxi;

R₂b é selecionado do grupo que consiste em hidróxi, tiol e BH₃-;

desde que o composto da Fórmula (I) seja diferente de sal de (1 fí,6fí,8fí,9fí,10fí,15fí,17fí,18fí)-17-(2-Amino-6-oxo-6,9-di-hidro1 /-7-pu ri n-9-i l)-8-(6-am i no-9 /-7-pu ri n-9-i I)-9-f I ú or-3,12,18-tri-hid róxi2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3À⁵, 12λ⁵difosfatriciclo[13,2,1,0⁶,¹⁰]octadecano-3,12-diona, bis-amônio;

[0058] Em uma outra modalidade, a presente invenção é direcionada a compostos da Fórmula (I) selecionados dos compostos 1 a 23, o

nh₂ 1

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ΝΗ₂ 6

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νη_{2 15}

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ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0059] Para uso em medicamentos, os sais dos compostos da Fórmula (I) referem-se aos sais farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos. No entanto, outros sais podem ser úteis na preparação de compostos de Fórmula (I) ou de suas formas de sal farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados de compostos de Fórmula (I) incluem sais de adição ácida que podem, por exemplo, ser formados misturando-se uma solução do composto com uma solução de um ácido farmaceuticamente aceitável, como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbônico ou ácido fosfórico. Além disso, quando os compostos de

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Fórmula (I) transportam uma porção ácida, seus sais farmaceuticamente aceitáveis adequados podem incluir sais de metais alcalinos, como sais de sódio ou de potássio; sais de metais alcalino-terrosos como, sais de cálcio ou magnésio; e sais formados com ligantes orgânicos adequados como, sais de amônio quaternário. Dessa forma, sais farmaceuticamente aceitáveis representativos incluem acetato, benzenossulfonato, benzoate, bicarbonate, bissulfato, bitartrato, borato, brometo, edetato de cálcio, camsilato, carbonato, cloreto, clavulanato, citrato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolate, esilato, fumarate, gluceptate, gluconate, glutamate, glicollilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobrometo, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isetionato, lactate, lactobionato, laurate, malate, maleate, mandelate, mesilate, metilbrometo, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrate, sal de amônio N-metilglucamina, oleato, pamoate (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, silicilato, estearato, sulfate, subacetato, succinate, tanato, tartarato, teoclato, tosilato, trietiodeto e valerate.

[0060] Ácidos e bases representativos que podem ser usados na preparação de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos incluindo ácido acético, ácido 2,2-dicloroacético, aminoácidos acilados, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido L-aspártico, ácido benzenossulfônico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido (+)canfórico, ácido canforossulfônico, ácido (+)-(1 S)-canforo-10-sulfônico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cinâmico, ácido ciclâmico, ácido dodecilsulfúrico, ácido etano-1,2-dissulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 2-hidroxietanossulfônico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glico-heptônico, ácido D-glicônico, ácido D-glicorônico, ácido L-glutâmico, ácido a-oxo-glutárico, ácido glicólico, ácido hipúrico, ácido bromídrico, ácido clorídrico, ácido (+)L-láctico, ácido (±)-DL-láctico, ácido lactobiônico, ácido maleico, ácido (-)

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L-málico, ácido malônico, ácido (±)-DL-mandélico, ácido metanossulfônico, ácido naftaleno-2-sulfônico, ácido naftaleno-1,5dissulfônico, ácido 1-hidroxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido L-piroglutâmico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácido sebaico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tânico, ácido (+)-L-tartárico, ácido tiociânico, ácido ptoluenossulfônico e ácido undecilênico; e bases incluindo amônia, Larginina, benetamina, benzatina, hidróxido de cálcio, colina, deanol, dietanolamina, dietilamina, 2-(dietilamino)-etanol, etanolamina, etilenodiamina, N-metil-glucamina, hidrabamino, 1H-imidazol, L-lisina, hidróxido de magnésio, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidróxido de potássio, 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina, hidróxido de sódio, trietanolamina, trometamina e hidróxido de zinco.

[0061] As modalidades da presente invenção incluem pró-fármacos dos compostos de Fórmula (I). Em geral, estes pró-fármacos serão derivados funcionais dos compostos que são prontamente conversíveis in vivo em compostos necessários. Portanto, nas modalidades dos métodos de tratamento ou prevenção da presente invenção, o termo administrar abrange o tratamento ou a prevenção de várias doenças, condições, síndromes e distúrbios descritos com o composto especificamente revelado ou com um composto que pode não ser especificamente revelado, mas que se converte nos compostos especificados in vivo após a administração a um paciente. Procedimentos convencionais para a seleção e preparação de derivados de prófármacos adequados são descritos, por exemplo, em Design of Prodrugs, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.

[0062] Quando os compostos de acordo com as modalidades desta invenção têm ao menos um centro quiral, eles também podem existir, consequentemente, como enantiômeros. Quando os compostos

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31/122 possuem dois ou mais centros quirais, os mesmos devem existir adicionalmente como diastereômeros. Deve ser entendido que todos esses isômeros e misturas dos mesmos são abrangidos dentro do escopo da presente invenção. Além disso, algumas das formas cristalinas dos compostos podem existir como polimorfos e como tais estão inclusos na presente invenção. Além disso, alguns dos compostos podem formar solvatos com água (isto é, hidratos) ou solventes orgânicos comuns e tais solvatos estão também no escopo desta invenção. Os versados na técnica compreenderão que o termo composto para uso na presente invenção deve incluir os compostos solvatados da Fórmula (I).

[0063] Quando os processos para a preparação dos compostos de acordo com determinadas modalidades da invenção dão origem à mistura de estereoisômeros, esses isômeros podem ser separados por técnicas convencionais como por cromatografia preparativa. Os compostos podem ser preparados de forma racêmica, ou os enantiômeros individuais podem ser preparados por meio de uma síntese enantioespecífica ou por resolução. Os compostos podem, por exemplo, ser separados em seus enantiômeros componentes por técnicas-padrão como, a formação de pares diastereoméricos pela formação de sal com um ácido opticamente ativo como ácido (-)-di-ptoluoil-d-tartárico e/ou ácido (+)-di-p-toluoil-l-tartárico seguido de cristalização fracional e regeneração da base livre. Os compostos podem, também, ser resolvidos através da formação de ésteres ou amidas diastereoméricos, seguido de separação cromatográfica e remoção do auxiliar quiral. Alternativamente, os compostos podem ser separados com o uso de uma coluna quiral de HPLC.

[0064] Uma modalidade da presente invenção se refere a uma composição, incluindo uma composição farmacêutica, que compreende, que consiste em, e/ou que consiste essencialmente em

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32/122 um (+)-enantiômero de um composto de Fórmula (I), em que a dita composição é substancialmente isenta do (-)-isômero do dito composto. No presente contexto, substancialmente isento significa menos que cerca de 25%, de preferência, menos que cerca de 10%, com mais preferência, menos que cerca de 5%, com mais preferência ainda, menos que cerca de 2% e, com mais preferência ainda, menos que cerca de 1% do (-)-isômero calculado da seguinte forma %(+) enantiômero =------------^(ί™ (+) - enantiômero)------------_χ , θθ (massa (+) - enantiômero) + (massa (-) - enantiômero) [0065] Uma outra modalidade da presente invenção é uma composição, incluindo uma composição farmacêutica, que compreende, que consiste em, e/ou que consiste essencialmente no (-)-enantiômero de um composto de Fórmula (I), sendo que a dita composição é substancialmente isenta do (+)-isômero do dito composto. No presente contexto, substancialmente isento de significa menos que cerca de 25 %, de preferência, menos que cerca de 10 %, com mais preferência, menos que cerca de 5 %, com mais preferência ainda, menos que cerca de 2 % e, com mais preferência ainda, menos que cerca de 1 % do (+)isômero calculado da seguinte forma (míW.Víí ()' esíknôôwroí i« ejsssitoia&íO ............................................;................................................................;.................\ ( \) - eTianaòíTiero) i ) * enaíitiômero) [0066] Durante qualquer um dos processos de preparação dos compostos das várias modalidades da presente invenção, pode ser necessário e/ou desejável proteger os grupos sensíveis ou reativos em qualquer uma das moléculas relacionadas. Isto pode ser realizado por meio de grupos protetores convencionais, como aqueles descritos em Protective Groups in Organic Chemistry, Segunda Edição, J.F.W.

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McOmie, Plenum Press, 1973; T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1991; e TW Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Terceira Edição, John Wiley & Sons, 1999. Os grupos protetores podem ser removidos em um estágio subsequente conveniente com o uso de métodos conhecidos na técnica.

[0067] Muito embora os compostos das modalidades da presente invenção (incluindo seus sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos farmaceuticamente aceitáveis) possam ser administrados sozinhos, os mesmos serão, em geral, administrados em uma mistura com um veículo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente farmaceuticamente aceitável selecionados de acordo com a via de administração pretendida e práticas padrão farmacêuticas ou veterinárias. Portanto, as modalidades específicas da presente invenção se referem a composições farmacêuticas e veterinárias que compreendem compostos de Fórmula (I) e ao menos um veículo farmaceuticamente aceitável, excipiente farmaceuticamente aceitável, e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[0068] A título de exemplo, nas composições farmacêuticas das modalidades da presente invenção, os compostos de Fórmula (I) podem ser misturados com qualquer(quaisquer) aglutinante(s), lubrificante(s), agente(s) de suspensão, agente(s) de revestimento, agente(s) solubilizante(s) adequado(s) e combinações dos mesmos.

[0069] As formas sólidas de dosagem oral, como comprimidos ou cápsulas, que contêm os compostos da presente invenção podem ser administradas em pelo menos uma forma de dosagem de cada vez, conforme for adequado. Também é possível administrar os compostos em formulações de liberação prolongada.

[0070] Formas orais adicionais nas quais os presentes compostos da

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34/122 invenção podem ser administrados incluem elixires, soluções, xaropes e suspensões; cada um contendo opcionalmente agentes flavorizantes e agentes corantes.

[0071] Alternativamente, os compostos de Fórmula (I) podem ser administrados pela inalação (intratraqueal ou intranasal) ou sob a forma de um supositório ou pessário, ou os mesmos podem ser aplicados topicamente sob a forma de uma loção, solução, creme, pomada ou talco. Por exemplo, eles podem ser incorporados em um creme que compreende, que consiste em e/ou que consiste essencialmente em uma emulsão aquosa de poli(glicóis etilênicos) ou parafina líquida. Também podem ser incorporados, a uma concentração de entre cerca de 1% e cerca de 10%, em peso, do creme, em uma pomada que compreende, que consiste em, e/ou consistindo essencial mente em uma cera ou base de parafina macia juntamente com quaisquer estabilizantes e conservantes como pode ser necessário. Um meio alternativo de administração inclui administração transdérmica utilizando-se um emplastro dérmico ou transdérmico.

[0072] As composições farmacêuticas da presente invenção (bem como os compostos da presente invenção sozinhos) também podem ser injetados parenteral mente, por exemplo, intracavernosamente, intravenosamente, intramuscularmente, subcutaneamente, intradermicamente ou intratecamente. Nesse caso, as composições incluirão, também, ao menos um entre um veículo adequado, um excipiente adequado e um diluente adequado.

[0073] Para administração parenteral, as composições farmacêuticas da presente invenção são mais bem usadas sob a forma de uma solução estéril aquosa que possa conter outras substâncias, por exemplo, sais e monossacarídeos suficientes para constituir a solução isotônica com o sangue.

[0074] Em adição às vias de administração acima descritas para o

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35/122 tratamento de câncer, as composições farmacêuticas podem ser adaptadas para administração por injeção intratumoral ou peritumoral. A ativação do sistema imune dessa maneira para matar os tumores em um local remoto é comumente conhecida como o efeito abscopal e foi demonstrada em animais com múltiplas modalidades terapêuticas, (van der Jeught, et al., Oncotarget, 2015, 6(3), 1359-1381). Uma outra vantagem da administração local ou intratumoral ou peritumoral é a capacidade de alcançar eficácia equivalente em doses muito menores, minimizando ou eliminando, dessa forma, os eventos adversos que podem ser observados em doses muito mais altas (Marabelle, A., et al., Clinical Cancer Research, 2014, 20(7), 1747-1756).

[0075] Para administração bucal ou sublingual as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas sob a forma de comprimidos ou pastilhas, que podem ser formuladas de maneira convencional.

[0076] Por meio de exemplos adicionais, as composições farmacêuticas, que contêm ao menos um dos compostos da Fórmula (I) como o ingrediente ativo, podem ser preparadas misturando-se o(s) composto(s) com um veículo farmaceuticamente aceitável, um diluente farmaceuticamente aceitável, e/ou um excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com as técnicas de composição farmacêutica convencional. O veículo, o excipiente e o diluente podem assumir uma ampla variedade de formas dependendo da via de administração desejada (por exemplo, oral, parenteral, etc.). Dessa forma, para preparações orais líquidas como, suspensões, xaropes, elixires e soluções, veículos adequados, excipientes e diluentes incluem água, glicóis, óleos, álcoois, agentes flavorizantes, conservantes, estabilizantes, agentes corantes e similares; para preparações orais sólidas como, pós, cápsulas e tabletes, os transportadores, excipientes e diluentes adequados incluem amidos, açúcares, diluentes, agentes de

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36/122 granulação, lubrificantes, aglutinantes, agentes de desintegração e similares. As preparações orais sólidas podem, também, ser opcionalmente revestidas com substâncias como, açúcares ou ser entericamente revestidas de forma a modular o sítio de absorção principal e a desintegração. Para administração parenteral, o veículo, o excipiente e o diluente incluirão, em geral, água estéril, e outros ingredientes podem ser adicionados com a finalidade de aumentar a solubilidade e a preservação da composição. As suspensões ou soluções injetáveis podem também ser preparadas utilizando os veículos aquosos juntamente com aditivos adequados como solubilizadores e conservantes.

[0077] Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I) ou uma composição farmacêutica do mesmo inclui uma faixa de dose de cerca de 0,01 mg a cerca de 3000 mg, ou qualquer quantidade ou faixa específica dele, em particular de cerca de 0,05 mg a cerca de 1000 mg, ou qualquer quantidade ou faixa específica dele, ou, mais particularmente, de cerca de 0,05 mg a cerca de 250 mg ou qualquer quantidade ou faixa específica dele, do ingrediente ativo em um regime de cerca de 1 a cerca de 4 vezes por dia para um ser humano médio (70 kg); embora seja aparente para o versado na técnica que a quantidade terapeuticamente eficaz para um composto da Fórmula (I) variará, assim como as doenças, síndromes, condições e distúrbios sendo tratadas.

[0078] Para administração oral, uma composição farmacêutica é, de preferência, fornecida sob a forma de comprimidos contendo cerca de 1,0, cerca de 10, cerca de 50, cerca de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250 e cerca de 500 miligramas de um composto da Fórmula (I).

[0079] Vantajosamente, um composto da Fórmula (I) pode ser administrado em uma única dose diária, ou a dosagem total diária pode ser administrada em doses divididas em duas, três e quatro vezes ao dia.

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37/122 [0080] As dosagens ideais de um composto da Fórmula (I) a serem administradas podem ser prontamente determinadas e variarão de acordo com o composto particular usado, o modo de administração, a força da preparação e o avanço da infecção viral, doença, síndrome, condição ou distúrbio. Além disso, os fatores associados ao indivíduo particular sendo tratado, incluindo o sexo, idade, peso, dieta e horário de administração do indivíduo, resultarão na necessidade de ajustar a dosagem de modo a alcançar um nível terapêutico adequado e o efeito terapêutico desejado. As dosagens acima mencionadas são, portanto, exemplificadoras do caso médio. Naturalmente, podem existir casos individuais onde faixas maiores ou menores de dosagem são merecidas e estas encontram-se no escopo da presente invenção.

[0081] Os compostos de Fórmula (I) podem ser administrados em qualquer uma das composições anteriores e regimes de dosagem ou por meio dessas composições e regimes de dosagem estabelecidos na técnica quando o uso de um composto de Fórmula (I) for exigido para um indivíduo que precise do mesmo.

[0082] Como agonistas da proteína STING, os compostos da Fórmula (I) são úteis nos métodos para tratamento ou prevenção de uma infecção viral, doença, uma síndrome, uma condição ou um distúrbio em um indivíduo, incluindo um animal, um mamífero e um ser humano no qual a infecção viral, doença, a síndrome, a condição ou o distúrbio é afetado pela modulação, incluindo o agonismo, da proteína STING. Esses métodos compreendem, consistem e/ou consistem essencialmente em administrar a um indivíduo, incluindo um animal, um mamífero e um ser humano precisando de tal tratamento ou prevenção, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, sal, ou solvato da Fórmula (I).

[0083] Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada a um composto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente

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38/122 aceitável dos mesmos, para o uso no tratamento de câncer, doenças e condições de câncer, ou uma infecção viral.

[0084] Exemplos de doenças e condições de câncer para as quais os compostos da Fórmula (I), ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem ter efeitos antitumorais potencialmente benéficos incluem, mas não se limitam a, cânceres do pulmão, ossos, pâncreas, pele, cabeça, pescoço, útero, ovário, estômago, cólon, mama, esôfago, intestino delgado, intestino, sistema endócrino, glândula tireoide, glândula paratireoide, glândula adrenal, uretra, próstata, pênis, testículos, ureter, bexiga, rim ou fígado; câncer retal; câncer da região anal; carcinomas dos tubos de falópio, endométrio, colo do útero, vagina, vulva, pélvis renal, célula renal; sarcoma de tecido mole; mixoma; rabdomioma; fibroma; lipoma; teratoma; colangiocarcinoma; hepatoblastoma; angiossarcoma; hemangioma; hepatoma; fibrossarcoma; condrossarcoma; mieloma leucemia crônica ou aguda; linfomas linfociticos; linfoma do SNC primário; neoplasias do SNC; tumores do eixo vertebral; carcinomas de células escamosas; sarcoma sinovial; mesotelioma pleural maligno; glioma do tronco cerebral; adenoma da pituitária; adenoma brônquico; hanlartoma condromatoso; inesotelioma; doença de Hodgkin e uma combinação de um ou mais dos cânceres anteriormente mencionados. Adequadamente, a presente invenção se refere a um método para tratar ou reduzir a gravidade de cânceres selecionados do grupo que consiste em câncer do cérebro (gliomas), glioblastomas, astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Bannayan-Zonana, doença de Cowden, doença de Lhermitte-Duclos, tumor de Wilm's, sarcoma de Ewing's, Rabdomiossarcoma, ependimomas, meduloblastoma, cabeça e pescoço, rim, fígado, melanoma, ovário, pancreático, adenocarcinoma, madenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células acinares, glucagonoma, insulinoma, próstata, sarcoma, osteossarcoma, tumor de

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39/122 células gigantes do osso, tireoide, leucemia de células T linfoblásticas, leucemia mieloide crônica, leucemia linfocítica crônica, leucemia de células capilares, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia neutrofílica crônica, leucemia de células T linfoblásticas aguda, plasmocitoma, leucemia de células grandes imunoblásticas, leucemia de células do manto, mieloma múltiplo, leucemia magacarioblástica, mieloma múltiplo, leucemia megacariocítica aguda, leucemia pró-mielocítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma hodgkins, linfoma não hodgkins, linfoma de células T linfoblásticas, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, neuroblastoma, câncer de bexiga, câncer urotelial, câncer vulvar, câncer cervical, câncer endometrial, câncer renal, mesotelioma, câncer de esôfago, câncer de glândula salivar, câncer hepatocelular, câncer gástrico, câncer nasofaringeal, câncer bucal, câncer da boca, GIST (tumores estremais gastrointestinais) e câncer do testículo.

[0085] Em uma outra modalidade, a presente invenção é direcionada a um composto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de um distúrbio afetado pelo agonismo de STING selecionado do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0086] Os compostos apresentados da Fórmula (I) podem ser úteis em combinação com um ou mais compostos adicionais úteis para tratar infecção por HBV. Esses compostos adicionais podem compreender outros compostos revelados e/ou compostos conhecidos para tratar, evitar ou reduzir os sintomas ou efeitos da infecção pelo HBV. Tais compostos incluem, mas não se limitam a, inibidores da polimerase de HBV, interferons, inibidores de entrada viral, inibidores de maturação viral, moduladores de montagem de capsídeo descritos na literatura, inibidores de transcriptase reversa, agentes imunomoduladores, agonistas de TLR e outros agentes com mecanismos distintos ou desconhecidos que afetam

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40/122 o ciclo de vida de HBV ou que afetam as consequências da infecção por HBV.

[0087] Em exemplos não limitadores, os compostos revelados podem ser usados em combinação com um ou mais fármacos (ou um sal dos mesmos) selecionado a partir do grupo que compreende:

inibidores da transcriptase reversa de HBV, e inibidores de DNA e RNA polimerase incluindo, mas não se limitando a, lamivudina (3TC, Zeffix, Heptovir, Epivir, e Epivir-HBV), entecavir (Baraclude, Entavir), adefovir dipivoxil (Hepsara, Preveon, bis-POM PMEA), de tenofovir disoproxil (Viread, TDF ou PMPA);

interferons incluindo, mas não se limitando a, interferon alfa (IFN-α), interferon beta (IFN-β), interferon lambda (IFN-λ), e interferon gama (IFN-γ);

inibidores de entrada viral;

inibidores de maturação viral;

moduladores de montagem de capsídeo, como, mas não se limitando a, BAY 41-4109;

inibidores da transcriptase reversa;

agentes imunomoduladores como agonistas de TLR; e agentes de mecanismos distintos ou desconhecidos, como, mas não se limitando a, AT-61 ((E)-N-(1-cloro-3-oxo-1-fenil-3-(piperidin-1il)prop-1 -en-2-il)benzamida), AT-130 ((E)-N-(1 -bromo-1 -(2-metóxi-fenil)-3oxo-3-(piperidin-1-il)prop-1-en-2-il)-4-nitrobenzamida), e análogos dos mesmos.

[0088] Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um interferon. O termo interferon ou IFN se refere a qualquer membro da família de espécies altamente homólogas específicas da espécie que inibem a replicação viral e a proliferação celular e modulam a resposta imune. Por exemplo, os interferons humanos são agrupados em três classes: Tipo I, que inclui interferon-alfa (IFN-α), interferon

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41/122 beta (IFN-β), e interferon-ômega (IFN-ω), Tipo II, que inclui interferongama (IFN-γ), e Tipo III, que inclui interferon-lambda (IFN-λ). Formas recombinantes de interferons que foram desenvolvidos e estão comercialmente disponíveis são abrangidas pelo termo interferon, como usado aqui. Os subtipos de interferons, como os interferons quimicamente modificados ou mutados, são também abrangidos pelo termo interferon, como usado aqui. Os interferons quimicamente modificados podem incluir interferons peguilados e interferons glicosilados. Exemplos de interferons incluem, também, mas não se limitam a, interferon-alfa-2a, interferon-alfa-2b, interferon-alfa-n1, interferon-beta-1a, interferon-beta-1b, interferon-lambda-1, interferonlambda-2, e interferon-lambda-3. Exemplos de interferons peguilados incluem interferon alfa-2a peguilado e interferon alfa-2b peguilado.

[0089] Consequentemente, em uma modalidade, os compostos da Fórmula (I) podem ser administrados em combinação com um interferon selecionado do grupo que consiste em interferon alfa (IFN-α), interferon beta (IFN-β), interferon lambda (IFN-λ), e interferon gama (IFN-γ). Em uma modalidade específica, o interferon é interferon-alfa-2a, interferonalfa-2b, ou interferon-alfa-n1. Em uma outra modalidade específica, o interferon-alfa-2a ou interferon-alfa-2b é peguilado. Em uma modalidade preferencial, o interferon-alfa-2a é interferon-alfa-2a peguilado (PEGASYS). Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é selecionado dentre modulador imune ou terapias estimuladoras imunes, que incluem agentes biológicos pertencentes à classe dos interferons.

[0090] Além disso, o agente terapêutico adicional pode ser um agente que interrompe a função de outras proteínas virais essenciais ou proteínas hospedeiras necessárias para replicação ou persistência de HBV.

[0091] Em outra modalidade, o agente terapêutico adicional é um

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42/122 agente antiviral que bloqueia a entrada ou maturação viral ou direciona a polimerase de HBV como inibidores da polimerase de nucleotídeo ou nucleosídeo ou não nucleotídeo ou não nucleosídeo. Em uma modalidade adicional da terapia de combinação, o inibidor de transcriptase reversa ou inibidor de DNA ou RNA polimerase é Zidovudina, Didanosina, Zalcitabina, ddA, Estavudina, Lamivudina, Abacavir, Entricitabina, Entecavir, Apricitabina, Atevirapina, ribavirina, aciclovir, fanciclovir, valaciclovir, ganciclovir, valganciclovir, Tenofovir, Adefovir, PM PA, cidofovir, Efavirenz, Nevirapina, Delavirdina ou Etravirina.

[0092] Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um agente imunomodulador que induz uma resposta imune natural limitada levando à indução de respostas imunes contra vírus não relacionados. Em outras palavras, o agente imunomodulador pode afetar a maturação de células apresentadoras de antígeno, a proliferação de células Tea liberação de citocinas (por exemplo, IL-12, IL-18, IFN-alfa, -beta, e gama e TNF-alfa entre outros), [0093] Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é um modulador de TLR ou um agonista de TLR, como um agonista de TLR-7 ou agonista de TLR-9. Em uma modalidade adicional da terapia de combinação, o agonista de TLR-7 é selecionado do grupo que consiste em SM360320 (9-benzil-8-hidróxi-2-(2-metóxi-etóxi)adenina) e AZD 8848 (metil [3-({[3-(6-amino-2-butóxi-8-oxo-7,8-di-hidro-9H-purin-9-il)propil][3(4-morfolinil)propil]amino}metil)fenil]acetato).

[0094] Em qualquer um dos métodos aqui fornecidos, o método pode compreender adicionalmente administrar ao indivíduo ao menos uma vacina contra HBV, um inibidor nucleosídico de HBV, um interferon ou qualquer combinação dos mesmos. Em uma modalidade, a vacina contra HBV é ao menos uma dentre RECOMBIVAX HB, ENGERIX-B, ELOVAC B, GENEVAC-B, ou SHANVAC B.

[0095] Em uma modalidade, os métodos aqui descritos

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43/122 compreendem, ainda, a administração de ao menos um agente terapêutico adicional selecionado do grupo que consiste em análogos de nucleotídeo/nucleosídeo, inibidores de entrada, inibidores de fusão e qualquer combinação desses ou outros mecanismos antivirals.

[0096] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de tratamento de uma infecção por HBV em um indivíduo que precisa do mesmo, que compreende reduzir a carga viral de HBV pela administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto revelado sozinho ou em combinação com um inibidor de transcriptase reversa; e adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de vacina contra HBV. O inibidor de transcriptase reversa pode ser pelo menos um dentre Zidovudina, Didanosina, Zalcitabina, ddA, Estavudina, Lamivudina, Abacavir, Entricitabina, Entecavir, Apricitabina, Atevirapina, ribavirina, aciclovir, fanciclovir, valaciclovir, ganciclovir, valganciclovir, Tenofovir, Adefovir, PMPA, cidofovir, Efavirenz, Nevirapina, Delavirdina ou Etravirina.

[0097] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de tratamento de uma infecção por HBV em um indivíduo que precisa do mesmo, que compreende a redução da carga viral de HBV pela administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto revelado sozinho ou em combinação com um oligonucleotídeo antissenso ou agente de interferência de RNA que tem como alvo os ácidos nucleicos de HBV; e adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de vacina contra HBV. O oligonucleotídeo antissenso ou agente de interferência de RNA possui complementaridade suficiente com a ácidos nucleicos do HBV alvo para inibir a replicação do genoma viral, a transcrição de RNAs virais, ou a tradução de proteínas virais.

[0098] Em uma outra modalidade, o composto revelado e o pelo

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44/122 menos um agente terapêutico adicional são coformulados. Em ainda uma outra modalidade, o composto revelado e o pelo menos um agente terapêutico adicional são coadministrados. Para qualquer terapia de combinação descrita aqui, um efeito sinérgico pode ser calculado, por exemplo, com o uso de métodos adequados como a equação de Sigmoid-Emáx (Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429453), a equação de aditividade de Loewe (Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326) e a equação do efeito mediano (Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55). Cada equação mencionada acima pode ser aplicada a dados experimentais para gerar um gráfico correspondente que auxilia na avaliação dos efeitos da combinação de fármacos. Os gráficos correspondentes associados às equações mencionadas acima são a curva de concentração-efeito, a curva de isobolograma e a curva de índice de combinação, respectivamente.

[0099] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos de administração de terapias de combinação fornecidos na presente invenção, o método pode compreender adicionalmente monitorar ou detectar a carga viral de HBV do indivíduo, sendo que o método é executado durante um período de tempo incluindo até o momento em que o vírus de HBV é indetectável.

[0100] As abreviações usadas no relatório descritivo da presente invenção, particularmente, nos esquemas e exemplos, são as seguintes:

ACN	acetonitrila
AcOH	ácido acético glacial
ADDP	dipiperidida azodicarboxílica
aq.	aquoso
Bn ou Bzl	benzila
BINAP	2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1 '-binaftila
Boc	ter-butil oxicarbonila

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cone.	concentrado
dba	dibenzilideneacetona
DBU	1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno
DCC	Λ/,Λ/'-dicicloexil-carbodiimida
DCE	1,2-dicloroetano
DCM	diclorometano
DEAD	azodicarboxilato de dietila
DIBAL	hidreto de di-isobutilalumínio
DIPEA ou DIEA	di-isopropil-etilamina
DMA	dimetilanilina
DMAP	4-dimetilaminopiridina
DME	dimetoxietano
DMF	A/,A/-dimetilformamida
DMSO	sulfóxido de dimetila
DMT	4,4'-dimetoxitritila
DPPA	difenilfosforil azida
dppf	1,1 '-bis(difenilfosfino) ferroceno
EA	acetato de etila
EDCI	1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida
ESI	ionização por eletrospray
EtOAc	ou EA acetato de etila
EtOH	etanol
GCMS	cromatografia gasosa-espectrometria de massa
h ou hr(s)	hora ou horas
HEK	rins embrionários humanos
HPLC	cromatografia líquida de alta eficiência
LAH	hidreto de lítio e alumínio
LDA	di-isopropilamida de lítio
LHMDS	bis(trimetilsilil)amida de lítio
MEK	metil etil cetona

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MeOH	metanol
MHz	megahertz
min	minuto ou minutos
MS	espectrometria de massa
Ms	metanossulfonila
NBS	A/-bromossuccinimida
NIS	A/-iodossuccinimida
NMM	N-metilmorfolina
NMP	A/-metil pirrolidona
RMN	ressonância magnética nuclear
PCC	clorocromato de piridinio
PE	éter de petróleo
RP	fase reversa
ta ou TA	temperatura ambiente
Tr	tempo de retenção
Sec	segundo ou segundos
SEM-CI	cloreto de 2-(trimetilsilil)etoximetila
TBAF	fluoreto de tetrabutil amônio
TBDMS	t-butildimetilsilila
TBP	fosfato de tributila
TEA ou Et₃N	Trietilamina
TFA	ácido trifluoracético
THF	tetra-hidrofurano
TIPS	tri-isopropilsilila
TLC	cromatografia de camada fina
TMS	tetrametil silano
Ts	4-toluenossulfonila

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Exemplos específicos

Exemplo 1

NHBz

N(i-Pr)₂

1d

1)TFA*Py água, MeCN RT, 2 min

2)t-BuNH₂

RT, 1D min

TMSCI, Py

1-metil imidazol P(NiPr₂)(OCE)CI

DIPEA.THF

RT = TA MS = EM

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Composto 2 sal de amônio

Composto 2 sal de sódio

Etapa 1: preparação do composto 1e [0101] A uma solução de 3'-0-metil-guanosina 1d (CAS 10300-27-

3, 1,0 g, 3,36 mmols) em piridina (20 ml_) adicionou-se por gotejamento terc-butilclorodimetil silano (3,2 ml_, 25,2 mmols) à temperatura ambiente. Após uma hora, cloreto de isobutirila (1,08 g, 10,1 mmols) foi adicionado por gotejamento à temperatura ambiente. A mistura final foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura foi bruscamente arrefecida com água (30 ml_) a 0°C e NH4OH (6 ml_) foi adicionado por gotejamento a 0°C. Após 10 minutos, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 h. A mistura foi concentrada. O produto bruto foi purificado por FCC (DCM: MeOH =

10:1) para produzir 1e (790 mg, 63,9%) como um sólido branco. RMN

H¹ (400 MHz, DMSO-de) 12,08 (s, 1H), 11,67 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 5,81 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,10 (t, J = 5,2 Hz, 1H),

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4,59-4,57 (m, 1H), 4,01-3,99 (m, 1H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,65 - 3,57 (m, 2H), 3,41 (s, 3H), 3,17 (d, J= 5,2 Hz, 1H), 2,79-2,76 (m, 1H), 1,14 (s, 3H), 1,12 (s, 3H). ESI-MS: m/z 368,0 [M+1]⁺.

Etapa 2: preparação do composto 1f [0102] Uma solução do composto 1e (790 mg, 2,15 mmols) e DMTrCI (0,765 g, 2,26 mmols) em piridina (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. DMTCI (0,765 g, 2,26 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura foi bruscamente arrefecida com água (10 mL) e extraída com DCM (10 mL x 4). A camada orgânica combinada foi seca com Na2SC>4, filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM: MeOH = 15: 1, fít = 0,5) para produzir o composto 1f (1,28 g, 88,9%) como um sólido amarelo claro. RMN H¹ (400 MHz, CDCh) 11,87 (s, 1H), 7,68 - 7,66 (m, 2H), 7,57 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,44 (t, J = 9,2 Hz, 4H), 7,31 - 7,29 (m, 2H), 7,22 - 7,19 (m, 1H), 6,87 -6,81 (m, 4H), 5,70 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 5,30 -5,27 (m, 1H), 5,05 - 5,03 (m, 1H), 4,19 - 4,18 (m, 1H), 4,09 - 4,07 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,58 - 3,55 (m, 1H), 3,47 (s, 3H), 3,05 - 3,03 (m, 1H), 1,47 -1,40 (m, 1H), 0,85 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,55 (d, J=6,8 Hz, 3H); ESI-MS: m/z= 670,2 [M+1 ]⁺.

Etapa 3: preparação do composto 1q [0103] A uma solução do composto 1f (1,28 g, 1,91 mmol) e DIPEA (741,0 mg, 5,73 mmols) em THF (5 mL) adicionou-se 3-((cloro(diisopropilamino)fosfino)óxi) propanonitrila (1,36 g, 5,73 mmols) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reação foi bruscamente arrefecida com MeOH. A mistura foi extraída com EtOAc e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura duas vezes. A camada orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (DCM: MeOH =

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10:1, Η = 0,6) para produzir o composto 1g (1 g, 60,1%). RMN H¹ (400 MHz, CD3CN) 7,88 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 7,48 - 7,41 (m, 2H), 7,35 - 7,24 (m, 7H), 6,88 - 6,79 (m, 4H), 6,02 - 5,89 (m, 1H), 5,19 - 4,95 (m, 1H), 4,28 4,20 (m, 1H), 4,07 - 4,04 (m, 1H), 3,78 (d, J = 1,6 Hz, 7H), 3,67 - 3,48 (m, 4H), 3,44 (d, J= 15,6 Hz, 3H), 3,33 (td, J=2,8, 10,8 Hz, 1H), 2,72 - 2,65 (m, 1H), 2,61 -2,53 (m, 1H), 2,51 (t, J=6,0 Hz, 1H), 1,26- 1,24 (m, 4H), 1,18 - 1,12 (m, 12H), 0,91 (d, J= 6,8 Hz, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, CD3CN) 150,90 (s, 1P), 150,81 (s, 1P), 13,80 (s, 1P); ESI-MS: m/z787,2 [M+1]⁺.

Etapa 4: preparação do composto 1b [0104] A uma solução do composto 1a (4,3 g, 4,51 mmols) e água (156,8 mg, 8,7 mmols) em CH₃CN seco (16 mL) adicionou-se trifluoroacetato de piridínio (1,0 g, 5,2 mmols) à temperatura ambiente. Após 1 minuto, t-butilamina (4 mL) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada a 15°C durante 20 minutos. A mistura foi concentrada durante duas horas para produzir o produto bruto 1 b como um sólido branco (4,0 g). O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte.

Etapa 5: preparação do composto 1c [0105] A uma solução do composto 1 b (4,05 g, 4,35 mmols) e água (832,0 mg, 46,2 mmols) em DCM (40 mL) adicionou-se ácido dicloroacético (2,1 g, 16,3 mmols) à temperatura ambiente durante 50 minutos. Após 10 minutos, piridina (730,6 mg, 9,24 mmols) foi adicionada. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (CH2CI2: MeOH = 5: 1, R = 0,4) para produzir 0 composto 1c (2,45 g, 89,5%) como um sólido branco.

[0106] ESI-MS: m/z=449,9 [M+1 ]⁺.

Etapa 6: preparação do composto 1i [0107] Uma solução do composto 1c (300 mg, 0,48 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á em CH₃CN seco (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente sob N₂ durante 10 minutos. Perclorato de 1 Himidazol (1,5 g, 8,8 mmols) foi adicionado. Após 10 minutos, 0

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51/122 composto 1 g (0,54 g, 0,62 mmol) em CH₃CN (5 mL) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 50 minutos. Hidroperóxido de terc-butila (0,43 mL, 2,39 mmols) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e concentrada. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (10 mM NH4HCO₃)-CH₃CN) para produzir o composto 1i (168 mg, 34,1%) como um sólido branco. RMN H¹ (400 MHz, CD3OD) 8,89 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,16 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,73 - 7,67 (m, 1H), 7,62 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 6,27 - 6,18 (m, 2H), 5,38 - 5,30 (m, 1H), 4,81 (m, 2H), 4,44 (s, 1H), 4,29 (s, 1H), 4,26 - 4,15 (m, 3H), 3,92 - 3,85 (m, 1H), 3,75 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,61 3,57 (m, 3H), 2,74 (td, J=6,6, 13,1 Hz, 1H), 1,21 (dd, J = 6,8, 15,2 Hz, 6H), 0,85 (s, 9H), 0,12 (s, 3H), -0,04 (s, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, CD3OD) δ 3,61 (s, 1P), -1,68 (s, 1P); ESI-MS: m/z=1033,2 [M+1]⁺. Etapa 7: preparação do composto 1k [0108] A uma solução do composto 1i (160 mg, 0,16 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á em piridina (40 mL) adicionou-se DMOCP (87,0 mg, 0,47 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante uma horah. lodo (199,4 mg, 0,79 mmol) e água (28,3 mg, 1,57 mmol) foram adicionados. Após uma hora, a mistura foi filtrada e então uma solução saturada de Na₂SO₃ foi adicionada por gotejamento até a cor do filtrado mudar para amarelo pálido. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4HCO₃ 10 mM)-CH₃CN de 23% a 53%) para produzir o produto alvo 1k (48 mg, 31,3%) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 977,5 [M+1 ]⁺.

Etapa 8: preparação do composto 11 [0109] O composto 1k (40,0 mg, 0,041 mmol) foi tratado com uma solução de metilamina em EtOH (33%, 10 mL), foi agitado à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reação foi concentrada para

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52/122 produzir o composto bruto 1 I (32,9 mg, 100%) que foi usado diretamente na etapa seguinte. ESI-MS: m/z803,4 [M+1 ]⁺.

Etapa 9: preparação do composto 2 [0110] Uma solução do composto 1 I (32,86 mg, 0,041 mmol), Et₃N (248,5 mg, 2,46 mmols) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (198,0 mg, 1,2 mmol) em piridina (5 mL) foi agitada a 50°C durante 5 h. A mistura foi diluída com THF (10 mL) e isopropoxitrietil silano (541,5 mg, 4,1 mmols) foi adicionado à temperatura ambiente durante 1,5 h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (0,05% de NH4OH v/v)-CH₃CN de 0% a 15%) para produzir 0 produtoalvo 2 como seu sal de amônio (6,7 mg) como um sólido branco. ¹RMN de H¹ (400 MHz, D2O) δ = 8,18-8,16 (d, J=10 Hz, 2H), 7,74 (s, 1H), 6,06 (s, 1H), 5,79-5,77 (d, J=8,8 Hz, 1H), 5,62-5,56 (m, 1H), 4,99-4,94 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,39-4,34 (m, 2H), 4,15 - 4,03 (m, 4H), 3,46 (s, 3H); RMNP³¹ (162 MHz, D2O)-1,28 (s, 1P), -2,65 (s, 1 P); ESI-MS: m/z689,5 [M+1]⁺.

Etapa 9: preparação de (Composto 2, sal de Na) [0111] Um volume de 3 mL de Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H) foi adicionado a um béquer (para 6,7 mg do composto 5 de sal de amônio) e lavado com água desionizada (2x). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada (50 mL), a mistura foi agitada durante 15 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até que ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e NaOH a 15% em solução aquosa (50 mL) foi adicionado, e a mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 CV). O composto 5 (6,7 mg) foi dissolvido em água desionizada (6,7 mg em 1 mL) e adicionado ao topo da coluna, e

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53/122 eluído com água desionizada. O composto foi eluído em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir o de sal de Na do composto alvo (6,4 mg, 94,2%) como uma espuma branca. RMN H¹ (400 MHz, D2O) 8,16 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,61 - 5,56 (m, 1H), 4,98 - 4,93 (m, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,44 - 4,35 (m, 3H), 4,15 -4,05 (m, 4H), 3,46 (s, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) -1,26, -2,64; ESI-MS: m/z689,0 [M+1]⁺.

Exemplo 2 o

MS = EM

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54/122

Composto 1, sal de amônio

Dowex-Na

Ο

NH₂

Composto 1, sal de sódio

Etapa 1: preparação do composto 2b [0112] A uma solução de DMT-2'-OMe-Bz-adenosina-CE fosforamidita 2a (1,0 g, 1,13 mmol) e água (40,6 mg, 2,25 mmols) em CH₃CN seco (4 ml_) adicionou-se trifluoroacetato de piridínio (261,0 mg, 1,35 mmol) a 15°C. À mistura de reação adicionou-se t-butilamina (4 ml_). A mistura foi concentrada para produzir 1 g do composto bruto 2b como um sólido branco, que foi coevaporado com DCM (3x) e usado diretamente para a próxima etapa. ESI-MS: m/z=450,0 [M+1 ]⁺. (DMT = 4,4'-dimetóxi tritila).

Etapa 2: preparação do composto 2c [0113] A uma solução do composto 2b (930,0 mg, 1,12 mmol) e água (0,2 g, 11,2 mmols) em CH2CI2 (10 ml_) adicionou-se ácido dicloroacético (0,51 g, 4,0 mmols) a 15°C durante 0,5 h. Após 10

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55/122 minutos, piridina foi adicionada. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (CH2CI2: MeOH =5: 1, fít = 0,5) para produzir 0 composto 2c (400 mg, 0,76 mmol, 67,6% de rendimento) como um sólido branco. RMN P³¹ (400 MHz, DMSO-de) δ 0,05; ESI-MS: m/z= 450,0 (M+1).

Etapa 3: preparação do composto 2f [0114] Uma solução do composto 2c (860,0 mg, 1,63 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á (1 g) em CH3CN seco (16 mL) foi agitada a 15°C sob N₂ durante 10 minutos. Perclorato de 1 /7-imidazol (5,16 g, 30,26 mmols) foi adicionado. Após 10 minutos, DMT-3'-O-TBDMSG(iBu)-CE fosforamidita 2d (2,05 g, 8,11 mmols) em CH3CN anidro (4 mL) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 50 minutos. Uma solução de hidroperóxido de terc-butila (TBHP, 1,48 mL, 8,14 mmols, 5,5% M em hexano) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada a 15°C durante uma hora. A mistura foi concentrada e 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4HCO3 a 10 mM)-CH₃CN) para produzir 0 composto 2f (600 mg, 0,58 mmol, 35,7% de rendimento) como um sólido branco. RMN H¹(400 MHz, CD3OD) δ 8,61 (d, J=5,2 Hz, 1H), 8,41 - 8,30 (m, 1H), 8,24

- 8,17 (m, 1H), 8,04 - 7,90 (m, 2H), 7,61 - 7,49 (m, 2H), 7,48 - 7,40 (m, 2H), 6,11 - 6,03 (m, 1H), 6,02 - 5,98 (m, 1H), 5,36 - 5,12 (m, 1H), 4,55

- 4,43 (m, 2H), 4,41 - 4,32 (m, 1H), 4,30 - 4,19 (m, 2H), 4,13 - 4,02 (m, 1H), 3,99 - 3,85 (m, 2H), 3,75 - 3,65 (m, 1H), 3,63 - 3,53 (m, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,70 - 2,69 (m, 1H), 2,60 - 2,52 (m, 2H), 1,10 - 1,03 (m, 6H), 0,82-0,77 (m, 9H), 0,04 - 0,00 (m, 6H); RMN P³¹ (162 MHz, CD3OD) δ 3,17, 3,13, -2,58, -2,69; ESI-MS: m/z=517,1 [M/2+1]⁺ e 1032,3 [M+1]⁺.

Etapa 4: preparação do composto 2i + composto 2i [0115] A uma solução do composto 2g (280,0 mg, 0,27 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á (1 g) em piridina (60 mL) adicionou-se 5,5

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56/122 dimetil-2-oxo-2-cloro-1,3,2-dioxa- fosfinana (DMOCP, 150,2 mg, 0,81 mmol) a 16°C. A mistura foi agitada a 16°C durante uma hora. Iodo (344,3 mg, 1,36 mmol) e água (48,9 mg, 2,71 mmols) foram adicionados. Após uma hora, a reação foi bruscamente arrefecida com uma solução de Na₂SO₃. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4HCO3 a 10 mM)-CH₃CN) para produzir uma mistura do composto 2i e do composto 2j (170 mg, 0,17 mmol, 60,8% de rendimento) como um sólido branco. ESI-MS: m/z=1030,4 [M+H]⁺.

Etapa 5: preparação do composto 2i [0116] Uma misturado composto 2i e do composto 2j (170 mg, 0,17 mmol) foi tratada com uma solução de metilamina em EtOH (15 mL, 33%) e a solução resultante foi agitada a 15°C durante uma hora. O produto bruto 2j (134,3 mg) foi usado diretamente na Etapa seguinte. Etapa 6: preparação do composto 1 [0117] Uma solução do composto 2j (134,3 mg, cru), Et₃N (1,0 g, 10,0 mmols) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (Et₃N-3HF, 807,4 mg, 5,00 mmols) em piridina (10 mL) foi agitada a 50°C durante 5 h. A mistura foi diluída com THF (10 mL) e isopropóxi trimetil silano (2,2 g, 16,7 mmols) foi adicionado. Após agitação a 15°C durante uma hora, a mistura foi concentrada a 15°C e 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4OH a 0,05% v/v)-CH₃CN) para produzir 0 composto 1 como seu sal de amônio (19,5 mg, 0,028 mmol) como um sólido branco após liofilização. RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,26 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 6,116 (s, 1H),5,87 (d, J=8,4Hz, 1H),5,66 (s, 1H),4,95 (s, 1H),4,48 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,24 (m, 5H), 3,97 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,83 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,69 (s, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) δ -1,57, -3,38; ESIMS: m/z = 688,9 [M+H]⁺.

Preparação do composto 1, sal de sódio [0118] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (25 mL, forma H) foi adicionado a

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57/122 um béquer e lavado com água desionizada (60 mL). Então, à resina, adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, e a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos e decantada (50 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até que ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em H₂O (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto 1, sal de amônio (16 mg) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada, adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas de CDN à base de UV foram agrupadas em conjunto e liofilizadas para produzir a forma de sal de sódio do composto 1 (13,5 mg). RMN H¹ (400 MHz, D2O) <5 8,17 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,83 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 5,58-5,52 (m, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,98-4,90 (m, 1H), 4,04-4,51 (m, 5H), 4,04 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,78 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,69 (s, 3H); RMN P³¹(162 MHz, D₂O) δ -1,63, -2,29; ESI-MS: m/z = 689 [M+H]+.

Exemplo 3

Composto 6

RT = TA MS = EM

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58/122

N(iPr)₂

1) TFA-Py, água, MeCN RT, 2 min

2) f-BuNHp, RT, Orrin

Py

DCA (6% in CH₂CI₂). CH₂CI₂

RT, 25 min

Composto 6, sal de amônio

Composto 6 sal de amônio Composto 6 sal de sódio

Etapa 1: preparação do composto 3a [0119] A uma solução do composto 2d fosforamidito de DMT-3'-OTBDMS-G(iBu)-CE (1 g, 1,03 mmol) e água (37,1 mg, 2,06 mmols) em CH₃CN seco (4 ml_) adicionou-se trifluoroacetato de piridinio (238,9 mg,

1,2 mmol) à temperatura ambiente. À mistura de reação adicionou-se terc

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59/122 butilamina (4 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi concentrada para produzir o composto 3a (941,1 mg) como um sólido branco, que foi coevaporada com DCM (3x) e usada diretamente na Etapa seguinte.

Etapa 2: preparação do composto 3b [0120] A uma solução do composto 3a (941,1 mg, 1,03 mmol) e água (0,19 g, 10,0 mmols) em CH2CI2 (30 mL) adicionou-se uma solução de ácido dicloroacético (0,47 g, 3,62 mmols, 6% em DCM) à temperatura ambiente durante 0,5 h. Piridina (0,163 g, 2,06 mmols) foi adicionada. Após 10 minutos, a mistura foi concentrada e 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (DCM: MeOH = 5:1, fít = 0,5) para produzir 3c (515 mg, 0,84 mmol) como um sólido branco. ESI-MS m/z532,1 [M+1]⁺.

Etapa 3: preparação do composto 3ea + composto 3eb [0121] Uma solução do composto 3b (500 mg, 0,82 mmol) e MS (peneiras moleculares) de 4 Á (0,5 g) em CH3CN seco (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente sob N₂ durante 3 minutos. Perclorato de 1/-/-imidazol (IMP, 2,54 g, 15,1 mmols) foi adicionado. Após 10 minutos, LNA-dA(Bz)-CE fosforamidita, composto 3c (943 mg, 1,06 mmol) em CH3CN (5 mL) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 50 minutos. Uma solução de hidroperóxido de terc-butila (TBHP, 5,5 M em hexano, 0,74 mL, 4,09 mmols) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi concentrada e 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4HCO3 10 mM)-ACN) para produzir uma mistura do composto 3ea e do composto 3eb (135,7 mg, 0,132 mmol) como um sólido branco. A mistura do produto foi usada Etapa 4: preparação do composto 3q [0122] A uma solução do composto 3ea e do composto 3eb (135,7 mg, 0,132 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á (0,5 g) em piridina (30

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60/122 mL) adicionou-se DMOCP (72,6 mg, 0,39 mmol) a 29°C. A mistura foi agitada a 29°C durante uma hora. Iodo (166,3 mg, 0,66 mmol) e água (23,6 mg, 1,31 mmol) foram adicionados. Após uma hora, a reação foi bruscamente arrefecida com uma solução de Na2SO₃. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4HCO3 10 mM)-CH₃CN de 35% a 65%) para produzir 0 composto 3g (22 mg, 0,021 mmol) como um sólido branco. ESI-MS m/z 514,5 [M/2+1]⁺ e 1029,3 [M+1]⁺.

Etapa 5: preparação do composto 3h [0123] O composto 3g (22 mg, 0,021 mmol) foi tratado com uma solução de metilamina em EtOH (33%, 10 mL) foi agitado à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reação foi concentrada para produzir 0 composto bruto 3h, que foi evaporado com piridina (3x) e usado diretamente na Etapa seguinte.

Etapa 6: preparação do composto 6, sal de amônio [0124] Uma solução do composto 3h, Et₃N (176,7 mg, 1,75 mmol) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (Et₃N-3HF, 140,7 mg, 0,87 mmol) em piridina (10 mL) foi agitada a 50°C durante 5 h. A mistura foi diluída com THF (10 mL) e isopropóxi trimetil silano (384,9 mg, 2,91 mmols) foi adicionado a 15°C durante uma hora. A mistura foi concentrada à temperatura ambiente e 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (NH4OH 0,05% v/v)-CH₃CN de 0% a 15%) para produzir 0 composto 6 como seu sal de amônio (6,1 mg, 0,009 mmol) como um sólido branco após liofilização. RMN H¹ (400 MHz, D2O) 8,30 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,83 (brs, 1H), 6,19 (s, 1H), 5,96 (d, J=6,8 Hz, 1H), 4,98 (s, 1H), 4,57 (s, 1H), 4,36 - 4,30 (m, 3H), 4,16 (d, J= 6,0 Hz, 3H), 4,04 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 11,6 Hz, 2H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) -1,73, -3,40; ESI-MS m/z687,0 [M+1]⁺. Preparação do composto 6, sal de sódio [0125] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (2 mL, forma H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (15 mL). Então, à resina

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61/122 adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos e decantada (10 ml_). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até que ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto 6, sal de amônio (3,5 mg) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada, adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas de CDN à base de UV foram agrupadas em conjunto e liofilizadas para produzir 0 sal de sódio do composto 6 (3,02 mg). RMN H¹ (400 MHz, D2O): δ 8,11 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,02 (s, 1H), 5,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,65-5,58 (s, 1H), 4,91 (d, J= 3,2 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,50 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 4,35-4,28 (m, 1H), 4,26-4,19 (m,2H), 4,13-4,01 (m, 3H), 3,90 (d, J=8Hz, 1H), 3,76 (d, J= 12,4 Hz, 2H); RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) δ-1,64, -1,91.

Exemplo 4

Composto 3

RT = TA MS = EM

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62/122

NHBz

2) í-BuNH₂, RT, 10 min

1)TFA«Py, água, MeCN RT, 2 min

N(i-Pr)₂

O o_ss _yci

(DMOCP) piridina, 4A MS

4da, R=CH₂CH₂CN

4db, R = H

Composto 3

Dowex - Na

Composto 3 sal de amônio

Composto 3 sal de sódio

Etapa 1: preparação do composto 4ba e do composto 4bb [0126] Uma solução do composto 1c (300 mg, 0,57 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á (0,5 g) em CH₃CN seco (10 mL) foi agitada a 29°C sob N2 durante 3 minutes. Perclorato de 1 /-/-imidazol (1,76 g, 10,5 mmols) foi

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63/122 adicionado. Após 10 minutos, uma solução do composto 1g (500 mg, 0,58 mmol) em CH₃CN (10 ml_) foi adicionada. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 50 minutos e hidroperóxido de terc-butila (TBHP, 0,52 ml_, 2,84 mmols) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada a 29°C durante uma hora. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4HCO₃ 10 mM)-CH₃CN) para produzir uma mistura dos compostos 4ba e 4bb (100 mg, 0,114 mmol) como um sólido branco. RMN P³¹ (162 MHz, DMSO) -0,66, -2,44; ESI-MS: m/z932,3 (M+1).

Etapa 2: preparação do composto 4da e do composto 4db [0127] A uma suspensão do composto 4ba e do composto 4bb (100,0 mg, 0,11 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á (0,5 g) em piridina (30 ml_) adicionou-se DMOCP (59,4 mg, 0,32 mmol) a 28°C. A mistura foi agitada a 28°C durante uma hora, lodo (136,2 mg, 0,54 mmol) e água (19,3 mg, 1,1 mmol) foram adicionados. Após uma hora, a reação foi bruscamente arrefecida com uma solução de Na2SO₃. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4HCO₃ 10 mM)-ACN de 1% a 28%) para produzir uma mistura do composto 4da e 4bd (50 mg, 0,057 mmol) como um sólido branco. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte.

Etapa 3: preparação do composto 3, sal de amônio [0128] Uma mistura dos compostos 4da e 4db (50 mg, 0,057 mmol) foi tratada com uma solução de metilamina em EtOH (33%, 20 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura de reação foi concentrada para produzir o composto bruto 3, que foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4OH 0,05% v/v)-CH₃CN de 0% a 10%) para produzir 0 composto 3, sal de amônio, como um sólido branco (16 mg, 0,023 mmol). RMN P³¹ (162 MHz, D2O) -1,53, -3,41.

[0129] O produto foi purificado adicionalmente por HPLC

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64/122 preparativa (água (NH4OH 0,05% v/v)-CH₃CN de 0% a 10%) para produzir 0 composto 3 como seu sal de amônio, como um sólido branco.

Etapa 4: preparação do composto 3, sal de sódio [0130] O sal de amônio do composto 3 foi seco sob alto vácuo para produzir um sólido branco (12 mg). Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 3 mL) foi adicionado a um béquer (para 12 mg do composto 6) e lavado com água desionizada (2x). Então à resina, adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada (50 mL), e a mistura foi agitada durante 15 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até que ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e NaOH a 15% em solução de água desionizada (50 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água desionizada (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra (ao menos 4 CV). O composto 3 foi dissolvido em água desionizada (12 mg em 1 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O sal de sódio convertido foi eluído em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir 0 composto 3, sal de sódio (7,4 mg, 0,010 mmol). ¹RMN de H¹ (400 MHz, D2O) óóppm 8,17 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,79 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,65 - 5,59 (m, 1H), 5,02-5,00 (m, 1H), 4,44 (s, 1H), 4,36 - 4,29 (m, 3H), 4,15 - 4,11 (m, 3H), 4,04 - 4,01 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,46 (s, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) -1,53, -2,62; ESI-MS m/z702,5 (M+1).

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Exemplo 5

Composto 4

RT = TA MS = EM

Composto 5

1) TFA-Py, água, MeCN

RT, 2 min

2) /-BuNH₂. RT, 10 min

CAS# 136834-22-5

5a 5b 5c

IMP = Perclorato de imidazol

4A MS, MeCN

I DDTT

4A MS, MeCN

5ha + 5hb

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Composto 4

Composto 5

O

nh₂

Dowex - Na

Composto 4 sal de amônio

Composto 4 sal de sódio

O

nh₂

Dowex - Na

O

nh₂

Composto 5 sal de amônio

Etapa 1: preparação do composto 5b

Composto 5 sal de sódio [0131] A uma solução de fosforamidita de DMT-2'-F-dA(Bz)-CE 5a (2,20 g, 2,51 mmols) em CH₃CN (12,0 ml_) adicionou-se água (90,5 mg, 5,02 mmols, 2,0 eq) e trifluoroacetato de piridínio (582,1 mg, 3,01 mmols,

1,2 eq). A mistura foi agitada a 25°C durante 5 min. Então, terc-butilamina (12,0 ml_) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada a 25°C durante 15 min. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para produzir uma espuma, que foi dissolvida em de CH₃CN (10,0 ml_) e concentrada novamente para produzir o composto 5b (1,69 g, 2,29 mmols, 91,0% de rendimento) como uma espuma branca. ESI-MS: m/z 740,2 [M + H]⁺.

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Etapa 2: preparação do composto 5c [0132] A uma solução do composto 5b (1,69 g, 2,29 mmols) em CH2CI2 (24,0 mL) adicionou-se água (411,8 mg, 21,9 mmols, 10,0 eq) e uma solução de ácido 2,2-dicloroacético (6% em DCM, 24 mL) lentamente. A mistura foi agitada a 25°C durante 0,5 h. A reação foi bruscamente arrefecida com piridina (2 mL) e a mistura de reação foi concentrada para produzir um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (DCM/MeOH = 10/1 a 5/1) para produzir 0 composto 5c (856 mg, 1,62 mmol, 70,9% de rendimento) como uma espuma branca.

Etapa 3: preparação do composto 5e [0133] Uma solução do composto 5c (380 mg, 0,70 mmol) em CH3CN (12,0 mL) foi adicionada a peneiras moleculares de 4 Á (0,5 g), a mistura resultante foi agitada a 25°C durante 10 min. Perclorato de 1 /-/-Imidazol (IMP, 356,7 mg, 2,1 mmols, 3,0 eq) foi adicionado e a mistura foi agitada durante um período adicional de 10 minutos antes de fosforamidita de DMT-3'-O-TBDMS-G(iBu)-CE 2d ((J. Am. Chem. Soc. 2001,123, 81658176), 811,6 mg, 0,84 mmol, 1,2 eq) ser adicionada. A mistura foi agitada a 25°C durante uma hora para produzir uma solução do composto 5d (uma solução em CH3CN), então N,N-dimetil-N'-(5-sulfanilideno-1,2,4-ditiazol-3il)metanimidamida (DDTT, 715,7 mg, 3,49 mmols, 5 eq.) foi adicionado à mistura de reação acima a 25°C e agitada durante uma hora à mesma temperatura. A mistura de reação foi filtrada, e 0 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um resíduo, que foi purificado por HPLC preparativa (H2O-CH3CN) para produzir 0 composto 5e (130,0 mg, 0,125 mmol, 18,0% de rendimento em duas etapas) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 1036,1 [M + H]⁺.

Etapa 4: preparação do composto 5f [0134] A uma solução do composto 5e (130,0 mg, 0,125 mmol) em piridina (24 mL) adicionou-se 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2

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68/122 dioxafosfinano (DMOCP, 69,5 mg, 0,38 mmol, 3,0 eq) a 25°C, a mistura foi agitada a 25°C durante uma hora para produzir uma solução do composto 5f (127,7 mg, 0,125 mmol, 100% de rendimento, uma solução em piridina) que foi usada na etapa seguinte sem purificação adicional.

Etapa 5: preparação do composto 5qa + composto 5qb [0135] A uma solução do composto 5f (127,7 mg, 0,125 mmol) em piridina adicionou-se 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona (211,1 mg, 1,26 mmol, 10 eq) a 25°C, e a mistura resultante foi agitada a 25°C durante uma hora. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um resíduo, que foi purificado por HPLC preparativa (água (ácido fórmico 0,225%)-CH₃CN) para produzir o composto 5ga (22,0 mg, 0,021 mmol, 18,1% de rendimento em duas etapas) como um sólido branco e o composto 5gb (55,0 mg, 0,052 mmol, 45,2% de rendimento em duas etapas) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 1050,2 [M + H]⁺, 525,8 [M/2 + H]⁺ (composto 5ga). ESIMS: m/z 1050,2 [M + H]⁺, 525,6 [M/2 + H]⁺ (composto 5gb).

Etapa 6: preparação do composto 5hb [0136] O composto 5gb (55,0 mg, 0,052 mmol, 1,00 eq) foi tratado com uma solução de metilamina (3,00 ml_, 35% em EtOH) e a mistura resultante foi agitada a 25°C durante 12 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir o composto 5hb (39,0 mg, 0,047 mmol, 90,5% de rendimento) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. ESI-MS: m/z823,1 [M + H]⁺.

Etapa 7: preparação do composto 4, sal de amônio [0137] A uma solução do composto 5hb (44,0 mg, 0,053 mmol) em piridina (13,0 ml_) adicionou-se Et₃N (324,7 mg, 3,2 mmols, 60 eq) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (258,6 mg, 1,6 mmol, 30 eq) a 25°C, e a mistura foi agitada a 50°C por 5 horas, então isopropóxi trimetil silano (707,4 mg, 5,3 mmols, 100 eq) foi adicionado a 15°C e agitou-se

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69/122 durante uma hora. A mistura foi concentrada a 15°C e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4OH 0,05% v/v)-CH₃CN) para produzir 0 composto 4 como seu sal de amônio (6,0 mg, 0,008 mmol, 15,8% de rendimento) como um sólido branco. RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,33 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 6,45 (d, J= 14,3 Hz, 1H), 5,92 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 5,77 (s, 1H), 5,51 (s, 0,5H), 5,38 (s, 0,5H), 5,23 (d, J = 21,5 Hz, 1H), 4,53-4,42 (m, 5H), 4,10 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 12,8 Hz, 1H); RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ -122,94 (br, s, 1F); RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) δ 55,99 (brs, 1 P), 51,19 (brs, 1P); ESI-MS: m/z 708,9 [M + H]⁺.

Etapa 6a: preparação do composto 5ha [0138] O composto 5ga (13,0 mg, 0,012 mmol, 1,00 eq) foi tratado com uma solução de metilamina (1,00 mL, 35% em EtOH) e a solução foi agitada a 25°C durante 12 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir 0 composto 5ha (9,0 mg, 0,011 mmol, 88,4% de rendimento) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. ESI-MS: m/z 823,3 [M + H]⁺.

Etapa 7a: preparação do composto 5, sal de amônio [0139] A uma solução do composto 5ha (39,0 mg, 0,047 mmol) em piridina (7,0 mL) adicionou-se Et₃N (287,8 mg, 2,84 mmol, 60 eq) e trihidrofluoreto de trietilamina (229,2 mg, 1,42 mmol, 30 eq) a 25°C, a mistura foi agitada a 50°C por 5 horas, então isopropóxi trimetil silano (627,0 mg, 4,74 mmols, 100 eq) foi adicionado a 15°C e agitou-se durante 1 hora. A mistura foi concentrada a 15°C e 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água (NH4OH 0,05% v/v)-CH₃CN) para produzir 0 composto 5 como seu sal de amônio (6,60 mg, 0,009 mmol, 19,6% de rendimento) como um sólido branco. RMN H¹ (400 MHz, D₂O) δ 8,54 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 6,46 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 5,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,81-5,75 (m, 1H), 5,54 (d, J = 2,8 Hz, 0,5H), 5,41 (d, J= 3,0 Hz, 0,5H), 5,30-5,23 (m, 1H), 4,54-4,40 (m,

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5H), 4,09-4,04 (m, 2H); RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δδ -201,92 (brs, 1F); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) δδ55,97 (s, 1 P), 53,90 (brs, 1P); MS: m/z 708,9 [M + H]⁺

Etapa 8: preparação do composto 4, sal de sódio [0140] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (3 ml_, forma H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (15 ml_). Então, à resina adicionou-se H₂SC>4 a 15% em água desionizada, a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos e decantada (10 ml_). A resina foi transferida para uma coluna com H₂SC>4 a 15% em água desionizada e lavada com H₂SC>4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até que ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto 4, sal de amônio (6,9 mg) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada, adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas de CDN à base de UV foram agrupadas em conjunto e liofilizadas para produzir a forma de sal de sódio do composto 4 (6,45 mg). RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,41 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 6,35 (d, J= 13,6 Hz, 1H), 5,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,72-5,68 (m, 1H), 5,43 (d, J= 2,8 Hz, 0,5 H), 5,30 (d, J= 2,8 Hz, 0,5 H), 5,18-5,10 (m, 1H), 4,65-4,29 (m, 5H), 4,05-3,93 (m, 2H); RMN F¹⁹(376 MHz, D2O) δ -201,76; RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) δ 55,88, 53,91.

Etapa 9: preparação do composto 5, sal de sódio [0141] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (3 ml_, forma H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (15 ml_). Então, à resina adicionou-se H₂SC>4 a 15% em água desionizada, a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos e decantada (10 ml_). A resina foi

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71/122 transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até que ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto 5, sal de amônio (6,0 mg) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada, adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas de CDN à base de UV foram agrupadas em conjunto e liofilizadas para produzir a forma de sal de sódio do composto 5 (5,12 mg). RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,15 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,34 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 5,81 (d, J= 8 Hz, 1H), 5,655,58 (m, 1H), 5,45 (d, J= 3,2 Hz, 0,5H), 5,32 (d, J = 3,6 Hz, 0,5H), 5,205,05 (m, 1H), 4,65-4,29 (m, 5H), 3,90-4,04 (m, 2H); RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ-201,92; RMN P³¹ (162 MHz, D2O) δδ55,74, 53,23; MS: m/z709,00 [M + H]+.

Exemplo 6

Composto 8

Composto 7

RT = TA MS = EM

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6a 6c 6d

RT = TA

6g 5h

3HF:TEA, TEA (1.0eq), DMSO, 50 C,4 hr.

6i - Isomer 1

Isomer - Isômero

6j- Isomer 2

Dowex - Na

6i - Isomer 1

Compound 7

Isomer - Isômero

Compound = Composto

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Dowex - Na

nh₂

6j- Isomer 2

Compound 8

Isomer - Isômero

Compound = Composto

Etapa 1: preparação do composto 6d [0142] O composto de nucleosídeo 6a (1,63 g, 2,12 mmols) foi coevaporado com uma mistura de tolueno anidro: acetonitrila anidra (1:1, v/v, 3 x 20 ml_), e, então, dissolvido em acetonitrila anidra (50 ml_) e fosforamidita 6b (2,1 g, 2,12 mmols). Pó de peneiras moleculares de 4 Á (4,0 g) foram adicionados a essa mistura. A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com gás argônio por 4 minutos. Após agitar esta mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos, tetrazol em acetonitrila 0,45 M (30 ml_, 12,72 mmols) foi adicionado à temperatura ambiente. Após agitação da reação durante 45 minutos, a mistura de reação foi filtrada e, então, lavada com NaHCOs aquoso saturado (1 x 20 ml_) e NaCI aquoso saturado (1 x 20 ml_), seca com MgSCU, e o filtrado foi evaporado até secura para produzir o composto 6c, fosfito, que foi usado diretamente sem purificação adicional na etapa seguinte. [0143] O composto 6c, fosfito bruto, foi dissolvido em CH2CI2 anidro (40 ml_), então pó de peneiras moleculares de 4 Á (4,0 g) foi adicionado a essa mistura. A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com gás argônio por 4 minutos. Após agitar essa mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos, solução de complexo de borano - sulfeto de dimetila (2,0 M em THF, BH3-DMS, 3,49 ml_, 6,99 mmols) foi adicionada muito lentamente durante 5 minutos a 0°C. Após agitar a reação durante 20 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação é rapidamente

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74/122 filtrada, então diluída com EtOAc (120 mL), bruscamente arrefecida com água (20 mL). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (1 x 20 mL), NaCI aquoso saturado (1 x 20 mL) e, então, a fase aquosa foi extraída de volta com EtOAc (1 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram evaporadas até secar, e o material bruto resultante foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (0 a 85% de EtOAc em Hexano, v/v) para produzir dímero de boranofosfato 6d (980 mg). ESI-MS: m/z 1670,30 [M + H]⁺.

Etapa 2: preparação do composto 6e [0144] Dímero de Di-DMTr-boranofosfato 6d (2,3 g, 1,37 mmol) foi dissolvido em 80% de AcOH:CH₃CN aquoso (3:1, v/v, 13 mL). Após agitar a mistura de reação durante 16 h a 37°C, a mistura foi diluída com EtOAc (70 mL) e, então, lavada sequencialmente com NaHCO₃ aquoso saturado (3 x 20 mL) e NaCI saturado aquoso (1x15 mL). A fase orgânica foi evaporada até secura, resultando em um resíduo bruto que foi purificado por cromatografia em coluna flash sobre sílica-gel (20 a 100% de acetona em hexano, v/v) para produzir o dímero de diolboranofosfato 6e (0,9 g). ESI-MS: m/z 1066,45 [M + H]⁺.

Etapa 3: preparação do composto 6f [0145] O composto de diol nucleosídeo 6e (0,55 g, 0,516 mmol) foi coevaporado com uma mistura de toluene anidro: acetonitrila anidra (1:1, v/v, 3 x 20 mL) e então dissolvido em acetonitrila anidra (20 mL) e peneiras moleculares de 4 Á em pó (1,0 g) foram adicionadas a essa mistura. A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com gás Argônio por 4 minutos. Após agitar esta mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos, tetrazol em acetonitrila 0,45 M (7 mL, 3,09 mmols) foi adicionado à temperatura ambiente e, então, após agitar a reação durante 75 minutos, a mistura foi filtrada, e o filtrado foi lavado sequencialmente com NaHCO₃ aquoso saturado (1 x 20 mL) e NaCI aquoso saturado (1 x 20 mL), seca com MgSCU (agitada por 5 min e

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75/122 então filtrada) e evaporada até secura para produzir o composto 6f. A mistura resultante foi usada diretamente sem purificação adicional na etapa seguinte. O fosfito bruto 6f foi dissolvido em CH2CI2 anidro (20 mL), então pó de peneiras moleculares de 4 Á (1,0 g) foi adicionado a essa mistura. A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com gás argônio por 4 minutos. Após agitar essa mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos, solução de complexo de borano - sulfeto de dimetila (2,0 M em THF, BH3-DMS, 0,93 mL, 1,84 mmol) foi adicionada muito lentamente durante 5 minutos a 0°C. Após agitar a reação à temperatura ambiente, a mistura de reação é rapidamente filtrada, então diluída com EtOAc (80 mL), e bruscamente arrefecida com água (20 mL). As fases foram particionadas e a fase orgânica foi lavada com NaCI aquoso saturado (1 x 20 mL) então, a fase aquosa foi extraída de volta com EtOAc (1 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram evaporadas até secar, 0 material bruto resultante foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (0 a 10% de MeOH em diclorometano, v/v) para produzir boranofosfato cíclico total mente protegido 6f (480 mg, 75% puro). ESI-MS: m/z 1179,73 [M + H]⁺.

Etapa 4: preparação do composto 6q [0146] Dinucleotídeo-boranofosfato de 3'-Silil-G(iBu)-2'-silil-A(Bz)2',3'-ciclico 6f (437 mg, aproximadamente 75% puro) foi dissolvido na mistura aquosa de amônia: EtOH (7 mL, 3:1, v/v). Após agitar a mistura de reação durante 16 h a 50°C, a mistura de reação foi concentrada até secura e coevaporada com EtOH (2x10 mL) e tolueno (2 x 20 mL). O sólido bruto resultante foi lavado com diclorometano (40 mL) e 0 precipitado foi coletado por filtração para produzir 0 dímero cíclico protegido de di-TBS 6g (ESI-MS: m/z896,20 [M-H] ), que foi usado para a reação seguinte sem qualquer purificação adicional.

[0147] Para remover os grupos TBS, 0 composto do dímero cíclico 6g (350 mg, cru) foi dissolvido em DMSO anidro (5,5 mL) e, para isso, foi

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76/122 adicionado tri-hidrofluoreto de trietilamina (HF.3TEA, 2,8 mL e trimetilamina 0,6 mL). Após agitar a mistura de reação durante 3,5 h a 50°C, ela foi neutralizada com trietilamina e purificada por HPLC preparativa (Tampão A: acetato de trietil amônio 50 mM em H₂O; Tampão B: acetato de trietil amônio 50 mM em CH₃CN, gradiente: 0 a 30% de B durante 30 minutos, vazão 24 mL/minuto) para produzir dois isômeros de boranofosfato 6i (9 mg) e 6j (4 mg) como um sal de trietil amônio como um sólido branco. ESI-MS: m/z 668,6 [M-H]’.

Etapa 5: preparação do composto 7 e do composto 8 como sal de sódio. [0148] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (3 mL, forma H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (20 mL). Então, à resina adicionou-se H₂SC>4 a 15% em água desionizada, a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos e decantada (10 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H₂SC>4 a 15% em água desionizada e lavada com H₂SC>4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até que ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. A forma de trietilamônio de ambos os isômeros de boranofosfatos cíclicos 6i (9 mg) e 6j (4 mg) foi dissolvida em uma quantidade mínima de água desionizada, adicionada ao topo da coluna, e eluída com água desionizada. As frações adequadas de CDN à base de UV foram agrupadas em conjunto e liofilizadas para produzir a forma de sal de sódio do composto 7 (8,2 mg) e do composto 8 (3,3 mg), respectivamente.

[0149] Composto 7: RMN H¹ (400 MHz, D₂O): δ 8,15 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 6,01 (s, 1H), 5,93 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,98-4,93 (m, 1H), 4,87-4,80 (m, 1H), 4,74-4,60 (m, 1H), 4,42-4,37 (m, 2H), 4,31 (s, 1H), 4,24 -4,15 (m, 2H), 3,92-3,82 (m, 2H), 0,5 to -0,5 (pico muito

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77/122 amplo, 6H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) 94,70 (pico muito amplo); ESIMS: m/z 668,6 [M-1]’.

[0150] Composto 8: RMN H¹ (400 MHz, D₂O): δ 8,12 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 5,99 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 5,92 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,22-5,15 (m, 1H), 4,83-4,76 (m, 1H), 4,75-4,71 (m, 1H), 4,50 (d, J= 4 Hz, 1H), 4,40-4,30 (m, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,25-4,18 (m, 1H), 4,15-4,10 (m, 1H), 4,02-3,96 (m, 1H), 3,90-3,84 (m, 1H), -0,2 to 0,9 (pico muito amplo, 6H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) δ 93,75 (pico muito amplo); ESIMS: m/z: 668,7 [M-1]’.

Exemplo 7

Composto 9

Composto 10 o

H₃CO OH

1) TMSCI

2) i-PrCOCI

3) NH4OH

1d

1f

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7b

Ο

DMTrO·

E ODMTr

NH O

NHBz |O\-CN s

Sol. aq. a 80% AcOH,

C, ON

NHBz

7d

I'tTX-CN s

7e

OCE

Tetrazol a 0,45 M em ACN, ACN, pó de peneira de 4Â

Sol. aq. de

CH₂CI₂, bh₃-dms

C, então RT, 20 min

7f

RT = TA

nh₂

7g (menor) nh₂

7h (maior)

ΝΉNJ-l·

Composto 10 (menor)

Composto 9 (maior)

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Etapa 1: preparação do composto 7c [0151] O composto de nucleosídeo 1f (2,3 g, 3,43 mmols) foi coevaporado com uma mistura de tolueno anidro/acetonitrila anidra (1:1, v/v, 3 x 50 mL), e, então, dissolvido em acetonitrila anidra (80 mL). Peneiras moleculares de 4 Á em pó (4,0 g) e tetrazol em acetonitrila (61 mL, 0,45 M, 27,44 mmols) foram adicionados para a mistura de reação. A mistura heterogênea resultante foi purgada com Ar(g) borbulhante durante 4 minutos. Após agitação à temperatura ambiente durante 10 minutos, uma solução de amidita 7a (3,0 g, 3,43 mmols, ChemGenes Corp.) em acetonitrila anidra (15 mL) foi adicionada à temperatura ambiente. Após agitação por uma hora e 45 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 mL), filtrada, e o filtrado foi lavado com NaHCOs aquoso saturado e salmoura (1 x 40 mL) (1 x 40 mL). O filtrado foi, então, seco (MgSCU), agitado durante 5 minutos, filtrado, e o filtrado foi concentrado até secar para produzir fosfito 7b (ESI-MS: m/z 1444,45 [M+1 ]⁺.).

[0152] O composto de fosfito bruto 7b foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. O composto bruto 7b foi dissolvido em piridina anidra (100 mL) e (E)-A/,A/-dimetil-/V-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5il)formimidamida (DDTT, 2,12 g, 10,29 mmols) foi adicionado à temperatura ambiente. Após agitação por uma hora à temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 mL), lavada com NaHCOs aquoso saturado sequencial mente (1 x 40 mL) e salmoura (1 x 40 mL de), e concentrada até secar. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (1 x 20 ml). As fases orgânicas combinadas foram concentradas até secar sob pressão reduzida para produzir um material bruto que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (0 a 8% MeOH em CH2CI2, v/v) para produzir dímero de di-DMTr-fosforotioato 7c (4,6 g, ~92%, aproximadamente 90% de pureza). ESI-MS: m/z 1476,90 [M+H]⁺.

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Etapa 2: preparação do composto 7d [0153] O dímero 7c (4,5 g, 3,05 mmols) foi dissolvido em 80% de AcOH:acetonitrila aquosa (90 mL, 8:2, v/v). Após a agitação da mistura de reação por 20 h a 45°C, a mistura foi diluída com acetato de etila (400 mL) e lavada sequencialmente com NaHCOs aquoso saturado (3 x 80 mL) e salmoura (1 x 50 mL). A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etila (1 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram concentradas até secar sob pressão reduzida e o resíduo bruto resultante foi purificado por cromatografia flash sobre sílica-gel (0 a 15% MeOH em CH2CI2, v/v) para produzir 0 dímero 7d (1,65 g, 63%). ESI-MS: m/z872,10 [M+H]⁺.

Etapa 3: preparação do composto 7f [0154] O composto dimérico 7d (275 mg, 0,315 mmol) foi coevaporado com uma mistura de toluene anidro/acetonitrila anidra (1:1, v/v, 3 x 10 mL), e, então, dissolvido em acetonitrila anidra (20 mL, sonicado durante 5 minutos para solubilidade completa do composto 7d). Peneiras moleculares de 4 Á em pó (0,6 g) e tetrazol em acetonitrila (5,6 mL, 0,45 M, 2,52 mmols) foram, então, adicionados. A mistura heterogênea resultante foi purgada com Ar(_g) borbulhante durante 4 minutos. Após agitar a mistura à temperatura ambiente durante 10 minutos, Λ/,ΛΖ-di-isopropil clorofosforamidita de 2-cianoetila (142 mg, 0,473 mmol, 1,5 eq) foi adicionado à temperatura ambiente em cinco porções ao longo de 20 minutos. Após agitação durante 90 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (60 mL), filtrada, e 0 filtrado foi lavado sequencialmente com de NaHCOs aquoso saturado (1 x 20 mL) e salmoura (1 x 20 mL). O filtrado foi, então, seco (MgSO4) sob agitação durante 5 minutos, filtrado, e 0 filtrado foi concentrado até secar sob pressão reduzida para produzir 0 composto 7e (ESI MS: m/z971,10 [M+1 ]⁺.). O resíduo resultante foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

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81/122 [0155] O composto bruto 7e foi dissolvido em diclorometano anidro (25 mL), ao qual foram adicionadas peneiras moleculares de 4 Á em pó (0,5 g). A mistura heterogênea resultante foi purgada com Ar(g) borbulhante durante 4 minutos. Mediante agitação da mistura à temperatura ambiente durante 10 minutos, a mistura foi resfriada até 0°C. Uma solução de complexo de borano - sulfeto de dimetila (2,0 M em THF, BH₃-DMS, 550 pL, 3,5 eq) foi adicionada muito lentamente durante 5 minutos a 0°C, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 12 minutos. A mistura foi então rapidamente filtrada, diluída com acetato de etila (80 mL), e bruscamente arrefecida com água (20 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (1 x 20 mL), e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (1x20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até secar sob pressão reduzida para produzir um resíduo bruto, que foi purificado por cromatografia flash sobre sílica-gel (0 a 10% de MeOH em diclorometano, v/v) para produzir uma mistura de diastereoisômeros 7f (130 mg, ~42% para duas etapas). ESI-MS: m/z 984,95 [M+H]⁺

Etapa 4: preparação do composto 7q e do composto 7h [0156] A mistura de diastereoisômeros 7f (130 mg) foi dissolvida em uma mistura aquosa de amônia/etanol (7 mL, 3:1, v/v). Após agitar a mistura de reação durante 18 h a 50°C, a mistura de reação foi concentrada até secar e coevaporada com etanol (2 x 10 mL) e tolueno (2 x 20 mL). O sólido bruto resultante foi lavado com diclorometano (15 mL), coletado por filtração e purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Synergi 4 μ, Hydro RP, 250 mm x 30 mm, Fase Móvel: Tampão A: acetato de trietil amônio 50 mM em H₂O; Tampão B: acetato de trietil amônio 50 mM em CH₃CN, gradiente: 0 a 30% de B durante 30 minutos, vazão de 24 mL/min) para produzir um primeiro isômero de boranofosfotioato menor 7g (8,7 mg) e um segundo isômero de

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82/122 boranofosfotioato maior 7 h (13,1 mg) como sais de acetato de trietil amônio (TEAA). ESI-MS: m/z\ 703,1 [M-1 ]’.

Etaoa 5: preparação do composto 9 e do composto 10 [0157] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (5 mL, forma H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos, então decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até pH 7 neutro ser atingido. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, a mistura foi suavemente agitada durante 5 minutos, então decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV), então, com água desionizada até pH 7 neutro ser atingido. Cada isômero de boranofosfotioato 7 g (8,7 mg) e 7 h (13,1 mg) de sais de TEAA foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada, adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas dos compostos 9 e 10 foram agrupadas em conjunto e liofilizadas para produzir respectivamente 0 composto 10 (7,8 mg) e 0 composto 9 (12,4 mg) como um sal de sódio.

[0158] Composto 9 (isômero maior): RMN H¹ (400 MHz, D2O): δ 8,07 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 6,25 (d, J= 16,4 Hz, 1H), 5,86 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,52 (d, J= 3,6 Hz, 0,5H), 5,40 (d, J= 3,6 Hz, 0,5H) 5,16-5,19 (m,1H), 4,83-4,89 (m, 1H), 4,41-4,45 (m, 2H), 4,25-4,32 (m, 2H), 4,06-4,17 (m, 2H), 3,88-3,94 (m, 1H), 3,46 (s, 3H), -0,1 to 0,65 (pico muito amplo, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O): δ 94-95 (pico muito amplo, boranofosfato), 52,59 (fosforotiato); RMN F¹⁹ (379 MHz, D₂O): δ -201,7 (multipleto); ESI-MS: m/z: 703,1 [M-1 ]’.

[0159] Composto 10 (isômero menor): RMN H¹ (400 MHz, D2O): δ 8,18 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 6,31 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 5,91

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83/122 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,65 (d, J= 2,8 Hz, 0,5H), 5,50 (d, J= 2,8 Hz, 0,5H) 5,07-5,30 (m, 2H), 4,40-4,48 (m, 2H), 4,20-4,35 (m, 2H), 4,10-4,14 (m, 1H), 3,96-4,00 (m, 1H), 3,83-3,88 (m, 1H), 3,48 (s, 3H), 0,2 a 0,8 (pico muito amplo, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, D2O): δ 94-95 (pico muito amplo, boranofosfato), 57,79 (fosforotiato); RMN F¹⁹ (379 MHz, D2O): δ -202,4 (multipleto); ESI-MS: m/z: 703,1 [M-1 ]’.

Exemplo 8

Composto 11

Composto 12

7b 8a

RT = TA

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84/122

Composto 11 sal de amônio Composto 12 sal de sódio

Etapa 1: preparação do composto 8a [0160] A uma solução do composto 7b (8 g, 5,538 mmols) em CH2CI2 (80 ml_) adicionou-se peneiras moleculares de 4 Á em pó (8 g) e a mistura heterogênea resultante foi borbulhada com argônio durante 4 minutos. Após agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos, uma solução de complexo de borano - sulfeto de dimetila (2,0 M em

THF, BH3-DMS, 9,138 ml_, 18,277 mmols) foi adicionada muito lentamente durante 5 minutos a 0°C. Após agitar a reação durante duas horas à temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada rapidamente, diluída com CH2CI2 (40 ml_) e bruscamente arrefecida com água (50 ml_). As fases foram separadas e a camada orgânica foi sucessivamente lavada com água (1 x 50 ml_), salmoura (1 χ 50 ml_) e as camadas aquosas foram extraídas novamente com CH2CI2 (1 χ 50 ml_). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida até secar e 0 material bruto resultante foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (éter de petróleo/EtOAc = 1/0 ~ 0/1) para produzir 0 composto 8a (7,5 g, 5,143 mmols) como um óleo amarelo pálido.

Etapa 2: preparação do composto 8b [0161] O composto 8a (7,5 g, 5,143 mmols) foi adicionado a uma

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85/122 solução de CH₃CN (20 ml_) em solução aquosa de ácido acético a 80% (60 ml_) (CH₃CN/solução aquosa de ácido acético = 1/3, 48 ml_ de ácido acético, 12 mL de H₂O, 20 ml_ de CH₃CN). Após agitar a mistura de reação de um dia para o outro a 25°C, trietil silano foi adicionado e a reação foi agitada a 25°C durante mais uma hora. A mistura de reação foi filtrada rapidamente, diluída com EtOAc (50 mL) e bruscamente arrefecida com água (20 mL). O pH foi ajustado para 7 a 8 com solução aquosa saturada de NaHCO₃ As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada sucessivamente com água (1 x 100 mL), salmoura (1 x 100 mL) e concentradas sob pressão reduzida até secar. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (petróleo/EtOAc = 0/1 então ChhCb/MeOH = 1/0 a 20/1) para produzir o composto 8b (6,5 g, 7,126 mmols) como um sólido branco. ESI-MS: m/z

854.1 [M+1]⁺. RMN H¹ (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12,07 (br d, J= 13,5 Hz, 1H), 11,56 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 11,22 (br d, J = 7,1 Hz, 1H), 8,72 (d, J =

3.1 Hz, 1H), 8,56 - 8,41 (m, 1H), 8,27 - 8,18 (m, 1H), 8,02 (br d, J= 6,2 Hz, 2H), 7,65 - 7,60 (m, 1H), 7,56 - 7,50 (m, 2H), 6,35 (br t, J= 19,0 Hz, 1H), 6,00 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,95 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 5,65 - 5,43 (m, 1H), 5,34 - 5,20 (m, 2H), 4,75 - 4,55 (m, 1H), 4,16 - 3,97 (m, 6H), 3,92 - 3,82 (m, 1H), 3,67-3,49 (m, 2H), 3,14 (d, J= 5,1 Hz, 3H), 2,81 -2,66 (m, 3H), 1,08 (br d, J = 6,8 Hz, 6H), 0,59 - -0,18 (m, 3H); RMN P³¹ (162 MHz, DMSO-de) 115,80 (br s, 1P).

Etapa 3: preparação do composto 8c [0162] O composto 8b (1 g, 1,096 mmol) foi coevaporado com CH₃CN (3 x 20 mL) e dissolvido em CH₃CN anidro (44 mL). O mesmo foi, então, adicionado a peneiras moleculares de 4 Á em pó (1000 mg) e após agitar a mistura durante 30 minutos, uma solução de tetrazol em CH₃CN (0,45 M, 14,6 mL, 6 eq) foi adicionada à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos à temperatura ambiente. Foi então adicionada por gotejamento uma solução de 3

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86/122 ((bis(di-isopropilamino)fosfanil)óxi)propanenitrila (495,647 mg, 1,644 mmol) em CH₃CN (5,0 mL) durante 20 minutos. Após agitar a mistura de reação durante uma hora, uma solução adicional de tetrazol em CH₃CN (0,45 M, 9,7 mL, 4 eq) foi adicionada a essa mistura à temperatura ambiente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado extraído com EtOAc (3 x 400 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com NaHCO₃ aquoso (3 x 200 mL), salmoura (3 x 200 mL), secas com Na₃SO4 anidro, filtradas e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (CH2CI2: MeOH 100: 0 a CH2CI2: MeOH 90: 10) para produzir 0 composto 8c (600 mg, 0,63 mmol) como um sólido branco.

Etapa 4: preparação do composto 8d [0163] A uma solução do composto 8c (600 mg 0,63 mmol) em CH2CI2 (15 mL) adicionou-se uma solução de complexo de borano sulfeto de dimetila 2 M em THF (1039,276 pL, 2,079 mmols) muito lentamente ao longo de 5 minutos a 0°C. Após agitação da mistura de reação a 0°C durante 15 minutos, a reação foi bruscamente arrefecida com MeOH (20 mL) a 0°C, então concentrada sob pressão reduzida. A reação foi repetida uma segunda vez usando a mesma escala. Os dois lotes brutos foram combinados e purificados por cromatografia em coluna flash sobre sílica-gel (eluente de gradiente: CH2CI2: MeOH 100: 0 a CH2CI2: MeOH 90: 10) para produzir 0 composto 8d (1 g, 1,035 mmol, lotes combinados) como um sólido branco. ESI-MS: m/z= 966,4 [M+1]⁺.

Etapa 5: preparação dos compostos 11 e 12 [0164] O composto 8d (1,0 g, 1,035 mmol) foi tratado com uma solução de MeNH₂ em EtOH (33%, 10 mL). Após agitação à temperatura ambiente durante 3 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e 0 resíduo foi purificado por

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87/122 cromatografia líquida preparatória de alto desempenho (condição de HPLC Prep: Coluna: Phenomenex Kinetex XB-C18 150 mm x 30 mm, 5 pm; Condições: H2O (A)-CHsCN (B); Começo B: 0; Fim B: 20; Fluxo: 25 mL/min). As frações puras foram coletadas e liofilizadas até secar para produzir 0 composto bruto 11 (0,11 g, 0,160 mmol) e 0 composto bruto 12 (0,14 g, 0,204 mmol) como sólidos brancos.

[0165] Os compostos brutos 11 e 12 foram adicionalmente purificados por cromatografia líquida preparativa de alto desempenho (condições de HPLC Prep: Coluna: DuraShell 150 x 25 mm χ 5um; Condição: água (NH4HCO3 10 mM) (A)-CHsCN (B); Começo B: 0; Fim B: 15; Fluxo: 35 mL/min). As frações puras foram coletadas e liofilizadas até secar para produzir 0 composto 11 (0,08 g, 0,117 mmol) e 0 composto 12 (0,04 g, 0,058 mmol), cada um como um sólido branco.

[0166] Composto 11: RMN H¹ (400 MHz, D₂O) δ 8,21 (d, J= 13,2 Hz, 2H), 8,05 (s, 1H), 6,36 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 5,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,73 - 5,55 (m, 1H), 5,19 - 5,02 (m, 2H), 4,55 - 4,48 (m, 2H), 4,34

- 4,24 (m, 2H), 4,16 (d, J= 4,4 Hz, 1H), 4,05 - 3,94 (m, 2H), 3,57 (s, 3H), 0,76 - 0,13 (m, 3H), -0,32 (br s, 3H); ESI-MS: m/z= 686,9 [M+1 ]⁺. RMN F¹⁹ (376 MHz, D₂O) -202,02 (td, J= 20,0, 50,3 Hz, 1F); RMN P³¹(162 MHz, D2O) óóppm - 94,42 (br s, 1 P).

[0167] Composto 12: RMN dH¹ (400 MHz, D₂O)ó8,31 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (brs, 1H), 6,40 (br d, J = 15,4 Hz, 1H), 5,89 (br d, J= 8,6 Hz, 1H), 5,64 - 5,47 (m, 1H), 5,35 (br s, 1H), 5,00 - 4,86 (m, 1H), 4,54

- 4,45 (m, 2H), 4,38 (br d, J= 11,7 Hz, 1H), 4,20 (br d, J = 17,0 Hz, 2H), 4,07 (br d, J= 8,2 Hz, 1H), 3,96 (br d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,53 (s, 3H), 0,24 (br s, 6H); ESI-MS: m/z= 686,9 [M+1 ]⁺. RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) -200,77 - -202,57 (m, 1F); RMN P³¹ (162 MHz, D2O) 99,68 - 84,67 (m, 1P).

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Etapa 6: preparação do sal de sódio do composto 11 e do sal de sódio do composto 12 [0168] Composto 11, sal de sódio. Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 50 g) foi adicionado a um béquer (para 45 mg do composto

11) e lavado com água desionizada (2x), então adicionado à resina (H2SO4 a 15% em água desionizada, 50 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e uma solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 11 foi dissolvido em água desionizada (50 mg em 40 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O composto 11 foi eluído da coluna em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). A mistura foi liofilizada para produzir 0 sal de sódio do composto 11 (24,3 mg, 0,033 mmol) como um sólido branco. ESI-MS: m/z= 686,9 [M+1 ]⁺. RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 7,81 (2 H, d, J= 3,6 Hz), 7,71 (1 H, s), 5,99 (1 H, d, J= 15,6 Hz), 5,61 (1 H, d, J= 8,2 Hz), 5,16 5,32 (1 H, m), 4,65 - 4,84 (2 H, m), 4,19 - 4,28 (2 H, m), 3,96 - 4,11 (2 H, m), 3,88 (1 H, d, J= 4,2 Hz), 3,69 - 3,80 (2 H, m), 3,31 (3 H, s), -1,07 - 0,45 (6 H, m); RMN F¹⁹ (377 MHz, D2O) -202,06 (1 F, s); RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) 94,39 (1 P, brs).

[0169] Composto 12, sal de sódio. Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 50 g) foi adicionado a um béquer (para 50 mg do composto

12) e lavado com água desionizada (2x), então adicionado à resina (H2SO4 a 15% em água desionizada, 50 mL). A mistura foi agitada

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89/122 durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e uma solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 12 foi dissolvido em água desionizada (50 mg em 40 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O composto 12 foi eluído da coluna em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). A mistura foi liofilizada para produzir 0 sal de sódio do composto 12 (43,3 mg, 0,059 mmol) como um sólido branco. ESI-MS: m/z= 686,9 [M+1]⁺. RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,11 (s, 1 H), 8,06 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 6,28 (d, J = 16,06 Hz, 1H), 5,89 (d, J= 8,53 Hz, 1H), 5,44-5,60 (m, 1H), 5,27 (td, J= 8,97, 4,39 Hz, 1H), 4,86 - 5,00 (m, 1H), 4,46 - 4,55 (m, 2H), 4,37 (br d, J= 11,80 Hz, 1H), 4,19 - 4,28 (m, 1H), 4,19 - 4,28 (m, 1H), 4,15 (br dd, J= 11,67, 2,13 Hz, 1H), 4,02 (br d, J = 12,30 Hz, 1H), 3,54 (s, 3H), -0,01 - 0,75 (m, 6H); RMN F¹⁹ (377 MHz, D2O) -201,59 (s, 1 F); RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) 94,01 (br s, 1 P). Exemplo 9

O o

14

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RT = ΤΑ

BzHN BzHN

8b 8c

O

BzHN

9b

9a Composto 13

nh₂ nh₂

Composto 13, sal de amônio Composto 13, sal de sódio

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9b 9c

Composto 14, sal de amônio Composto 14, sal de sódio

Etapa 1: preparação do composto 8a [0170] O composto 7b (10,46 g, 7,241 mmols) foi dissolvido em CH2CI2 anidro (100 mL) e peneiras moleculares de 4 Á em pó (4,0 g) foram adicionadas a essa solução. A mistura heterogênea resultante foi desgaseificada sob pressão reduzida e purgada com Argônio várias vezes. Após agitar essa mistura a 25°C durante 30 minutos, solução de complexo de borane - sulfeto de dimetila (2,0 M em THF, BH3-DMS, 11,948 mL, 23,897 mmols) foi adicionada muito lentamente durante 5 minutos a 0°C. Após agitar a reação durante 20 minutos a 25°C, a mistura de reação foi filtrada rapidamente, diluída com CH2CI2 (120 mL) e bruscamente arrefecida com água (20 mL). A camada orgânica foi lavada sucessivamente com água (50 mL) e salmoura (50 mL). As camadas aquosas foram extraídas novamente com EtOAc (50 mL). As

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92/122 camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida até secar e o material bruto resultante foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (CH₂Cl2/MeOH=100/1 a 10/1) para produzir o composto 8a (11,1 g, 7,612 mmols) como um sólido amarelo.

Etapa 2: preparação do composto 8b [0171] O composto 8a (11,1 g, 7,612 mmols) foi dissolvido em AcOH/CH₃CN/Et₃SiH aquoso a 80% (3/1/1, v/v, 200 mL). Após agitar a mistura durante 16 h a 37°C, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (500 mL) e, então, neutralizada com NaHCO₃ aquoso saturado. A camada orgânica foi lavada sucessivamente com água (500 mL) e salmoura (2 x 250 mL), então foi seca com Na₂SO4, filtrada, e o filtrado foi evaporado até secar para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (CHECk/MeOH = 100/1 a 10/1) para produzir o composto 8b (3,6 g, 4,218 mmol) como um sólido branco. ESI-MS: m/z854,2 [M + H]^+; RMN F¹⁹ (376 MHz, CD3CN) δ -203,09 (s, 1F), -203,36 (s, 1F); RMN P³¹ (162 MHz, CD3CN) δ 116,95-116,34 (m, 1P).

Etapa 3: preparação do composto 8c [0172] O composto 8b (1,5 g, 1,757 mmol) foi coevaporado com uma mistura de tolueno anidro/CH₃CN (1/1, v/v, 3 x 20 mL) para produzir um sólido branco. O sólido foi, então, dissolvido em CH₃CN (80 mL) e peneiras moleculares de 4 Á em pó (2,0 g) foram adicionadas a essa solução. Após agitar esta mistura a 25°C durante 30 minutos, uma solução de tetrazol em CH₃CN (0,45 M, 31,242 mL, 14,059 mmols) foi adicionada à solução a 25°C. A mistura de reação foi agitada durante 20 minutos a 25°C. 2-Cianoetoxibis-(N,N-diisopropilamino) fosfina (794,519 mg, 2,636 mmols) foi adicionada à solução durante 20 minutos (em cinco porções). Após agitação durante 60 minutos, uma outra porção da solução de tetrazol em CH₃CN (0,45

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Μ, 10 mL) foi adicionada a essa solução. Após agitação durante mais uma hora, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (100 mL) e filtrada. A camada orgânica foi lavada com NaHCOs aquoso saturado (50 mL), salmoura (50 mL), seca com MgSCU (após agitação por 5 minutos seguida por filtração), e o filtrado foi evaporado até secar para produzir o composto 8c (1,76 g, cru) como um sólido branco. O sólido resultante foi usado diretamente sem purificação adicional na etapa seguinte. A etapa 3 foi repetida uma segunda vez usando a mesma escala.

Etapa 4: preparação dos compostos 9a e 9b [0173] A uma solução do composto 8c (1,76 g, 1,848 mmol) em MeCN (30 mL) adicionou-se 1,1-dióxido de 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona 1,85 g, 9,238 mmols) a 25°C. Após agitação a 25°C por uma hora, a mistura de reação foi filtrada, e o bolo resultante foi lavado com CHLCk/MeOH (10/1, 20 mL x 3). Os filtrados combinados foram concentrados sob pressão para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (CHLCk/MeOH = 100/1 a 10/1) para produzir o composto 9a (652 mg) como uma espuma amarela e o composto 9b (660 mg) como uma espuma amarela.

[0174] O composto 9a foi purificado novamente por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Phenomenex Gemini C18 250x50 10 pm; fase móvel: água (NH4HCO310 mM)-ACN, Começo B:30; Fim B: 60; Fluxo: 25 mL/min de tempo de gradiente: 15 min) para produzir 0 composto 9a (225 mg, 0,229 mmol) como um sólido branco. O composto 9b foi purificado novamente por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Waters Xbridge 150x25 5 pm; fase móvel: água (NH4HCO3 10 mM)-ACN, Começo B:37; Fim B: 67; Fluxo: 25 mL/min de tempo de gradiente: 8 min) para produzir 9b (351 mg, 0,356 mmol, 19,294% de rendimento) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 985,5 [M + H]⁺

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Etapa 5: Preparação do composto 13, sal de amônio [0175] O composto 9a (100 mg, 0,102 mmol) foi tratado com MeNH₂ (33% em EtOH, 5 mL) e agitado a 25°C durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Agela Durashell C18 150x25 5 pm; fase móvel: água (NH4HCO310 mM)-ACN, Começo B: 0, Fim B: 15%, vazão: 35 ml/min, Tempo de Gradiente: 10 min) para produzir 0 composto 13, sal de amônio (56 mg, 0,08 mmol) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 704,8 [M + H]⁺ RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,30 (br, s, 1H), 7,93 (br s, 2H), 6,41 (br, d, J=15,8 Hz, 1H), 5,98 - 5,68 (m, 2H), 5,57 (br, s, 1H), 5,24 - 4,95 (m, 1H), 4,62- 4,35 (m, 3H), 4,29 - 4,12 (m, 3H), 4,02 (br d, J=9,3 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), -0,48 (br, s, 3H); RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) -199,64-201,37 (m, 1F); RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) 91,37 (s, 1P), 91,31 (s, 1 P), 90,52 (s, 1 P), 89,94 (s, 1P), 52,36 (s, 1P), 52,26 (s, 1 P).

Etapa 6: preparação do composto 13, sal de sódio [0176] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 50 g) foi adicionado a um béquer (para 56 mg do composto 13) e lavado com água desionizada (2x), então adicionado à resina (H2SO4 a 15% em água desionizada, 50 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e uma solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 12 foi dissolvido em água desionizada (50 mg em 40 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água

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95/122 desionizada. O composto 12 foi eluído da coluna em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O composto 13 foi dissolvido em água desionizada (56 mg em 30 ml_), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O produto foi eluído da coluna nas frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir o composto 13, sal de sódio (45,4 mg, 0,064 mmol) como um sólido branco. RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,25 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 6,42 (d, J =14,8 Hz, 1H), 5,91 - 5,84 (m, 1,5H), 5,76 (d, J =3,8 Hz, 0,5H), 5,60 - 5,51 (m, 1H), 5,19 - 5,04 (m, 1H), 4,61 - 4,53 (m, 2H), 4,52 - 4,44 (m, 1H), 4,27 - 4,18 (m, 3H), 4,07 (dd, J=4,0, 12,0 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), 0,47 - -0,89 (m, 3H); RMN F¹⁹ (377 MHz, D2O) -201,93 (s, 1F); RMN P³¹(162 MHz, D₂O) δ 92,47 (br dd, J=26,4, 73,4 Hz, 1P), 91,98 (s, 1P), 91,71 (s, 1P), 91,24 (s, 1P), 91,19 (s, 1P), 91,10 (s, 1P), 90,97 (s, 1P), 52,78 (s, 1P), 52,64 (s, 1P); ESI-MS: m/z704,8 [M + H]⁺

Etapa 7: preparação do composto 9c [0177] A uma solução do composto 9b (311 mg, 0,316 mmol) em MeCN/EtOH (1/1,5 mL) adicionou-se terc-butilamina (5 mL). Após agitação durante duas horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Waters Xbridge 150x25 5 pm; fase móvel: água (NH4HCO310 mM)-ACN, Começo B: 8; Fim B: 38; Fluxo: 25 mL/min de tempo de gradiente: 8 min) para produzir 0 composto 9c (243 mg, 0,277 mmol) como um sólido branco.

Etapa 8: preparação do composto 14, sal de amônio [0178] O composto 9c (243 mg, 0,277 mmol) foi tratado com MeNH₂ (33% em EtOH, 10 mL) e agitado a 25°C durante 12 horas. A mistura de reação foi então concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Agela Durashell C18 150x25 5 pm; fase móvel: água (NH4HCO3 10 mM)-ACN, Começo B: 0, Fim B: 15 %, vazão: 35

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96/122 ml/min, Tempo de Gradiente: 10 min) para produzir o composto 14, sal de amônio (125 mg, 0,177 mmol) como um sólido branco. RMN ¹H (400 MHz, D2O) δ 8,23 (d, J = 2,5 Hz, 2H), 8,01 (s, 1H), 6,43 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 5,95 - 5,76 (m, 2H), 5,56 (dt, J= 4,3, 8,9 Hz, 1H), 5,21 5,05 (m, 1H), 4,64 - 4,46 (m, 3H), 4,33 - 4,15 (m, 4H), 3,56 (s, 3H), 0,96 - -0,39 (m, 3H); RMN F¹⁹ (377 MHz, D2O) δ -201,77 (s, 1F); RMN P³¹(162 MHz, D₂O) δ 93,50 (s, 1P), 92,44 (s, 1P), 52,51 (s, 1P); ESI-MS: m/z 704,8 [M + H]⁺

Etaoa 9: preparação do composto 14, sal de sódio [0179] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 50 g) foi adicionado a um béquer (para 125 mg do composto 14) e lavado com água desionizada (2x), então adicionado à resina (H₂SO4 a 15% em água desionizada, 50 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H₂SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H₂SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, e uma solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 14 foi dissolvido em água desionizada (125 mg em 40 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O produto foi eluído em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir o composto 14, sal de sódio (105,4 mg, 0,141 mmol) como um sólido branco. RMN ¹H (400 MHz, D2O) δ 8,21 (br, d, J= 9,0 Hz, 2H), 7,89 (s, 1H), 6,38 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 5,89 - 5,72 (m, 2H), 5,67 (br, s, 1H), 5,19 5,02 (m, 1H), 4,62 - 4,42 (m, 3H), 4,27 - 4,17 (m, 3H), 4,07 (br d, J= 9,8 Hz, 1H), 3,57 (s, 3H), 0,36 (br, s, 3H); RMN F¹⁹ (377 MHz, D2O) δ -201,25

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97/122 (s, 1F); RMN P³¹ (162 MHz, D₂0) δ 92,42 - 90,93 (m, 1P), 52,35 (s, 1P)

ESI-MS: m/z 704,8 [M + H]⁺

Exemplo 10

O O

Composto 15 Composto 16

10c ^10d 10e,R=OH e/ou OCH₂CH₂CN

RT = TA

NH₄OH/EtOH= 3/1

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98/122

Dowex- Na

Composto 15, sal de sódio

Etapa 1: Preparação do composto 7b [0180] A uma solução do composto 1f (5,0 g; 7,47 mmols) em acetonitrila (180 mL) adicionou-se 1 H-tetrazol (0,45 M, 132,7 mL) a 25°C. Após agitar a solução durante 10 minutos a 25°C, uma solução do composto 7a (6,87 g, 7,84 mmols) em acetonitrila (7,84 20 mL) foi adicionada por gotejamento. Após agitação durante duas horas a 25°C, a solução foi usada na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional.

Etapa 2: Preparação do composto 10a [0181] À solução anterior do composto 7b (332,7 mL, 7,44 mmols) em acetonitrila adicionou-se hidroperóxido de terc-butila (3,35 g, 37,22 mmols) a 25°C. Após agitação a 25°C durante 1,5 hora, a solução foi diluída com EA (100 mL) e lavada com NaHCOs aquoso saturado (2 x 100 mL) e salmoura (2 x 100 mL). A camada orgânica foi seca sucessivamente com NasSO4 anidro, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para produzir o composto 10a (10 g) como um sólido branco.

Etapa 3: Preparação do composto 10b [0182] A uma solução do composto 10a (10 g, cru) em acetonitrila (50 mL) adicionou-se trietil silano (40 mL) e ácido acético a 80% em acetonitrila (200 mL) a 25°C. Após agitar a solução a 50°C durante 12 horas, a mistura foi neutralizada com NaHCOs saturado aquoso até pH 8. A mistura foi diluída com EtOAc (500 mL) e a camada orgânica foi lavada sucessivamente com solução aquosa saturada de NaHCOs

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99/122 (100 mL), salmoura (100 mL) e evaporada sob pressão reduzida até secar. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 200 mL) de EtOAc, e evaporada sob pressão reduzida até secar. O material bruto combinado foi purificado por cromatografia em coluna flash em sílicagel (0 a 9% de MeOH em CH2CI2, v/v) para produzir 0 composto 10b (5 g) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 856,2 [M + H]⁺.

Etapa 4: Preparação do composto 10c [0183] A uma solução do composto 10b (1,5 g, 1,4 mmol) em tetrahidrofurano (2 mL) e acetonitrila (75 mL) adicionou-se 1H-tetrazol (0,45 M, 15,58 mL, 7,01 mmols) a 25°C. Foi então adicionada uma solução de 3-((bis(di-isopropilamino)fosfino)óxi)propanonitrila (845,34 mg, 2,8 mmols) em acetonitrila (5 mL) a 25°C. Após agitação por 1,5 hora a 25°C, a solução foi lavada com NaHCOs aquoso saturado (50 mL), salmoura (50 mL) e evaporada sob pressão reduzida até secar para produzir 0 composto 10c (1,8 g) como um sólido amarelo que foi usado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. ESI-MS: m/z

955,5 [M + H]⁺.

Preparação do composto 15

Etapa 5: Preparação dos compostos 10d + 10e [0184] A uma solução do composto 10c (1,5 g, 1,57 mmol) (100 mL) em DCM adicionou-se dimetil sulfeto de borano (2,36 mL, 4,71 mmols) 0°C por 2 minutos. Após agitar a mistura a 25°C durante 15 minutos, água (30 mL) foi adicionada. A solução resultante foi filtrada e 0 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um sólido amarelo. O sólido foi diluído com DCM (100 mL) e a camada orgânica foi sucessivamente lavada com água (2 x 100 mL), salmoura (3 x 100 mL) e concentrada sob pressão para produzir um resíduo. O sólido bruto foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica-gel (0 a 9% de MeOH em CH2CI2, v/v) para produzir uma mistura dos compostos 10d e 10e (500 mg, cru) como um sólido amarelo. ESI-MS: m/z 969,3 [M + H]⁺

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100/122

Etapa 6: Preparação do composto 15 [0185] Uma solução dos compostos 10d e 10e (500 mg, cru) em uma mistura de etanol (14 mL) e NH4OH (42 mL) foi agitada a 50°C durante 12 horas. A solução foi concentrada sob pressão para produzir um sólido amarelo. O sólido amarelo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Coluna: Synergi Polar-RP 100 x 30 5 μΜ; Condição: água (NH4HCO3 10 mM)-ACN; Começo B: 0, Fim B: 20; Tempo de Gradiente (min): 12; Vazão (ml/min): 25) para produzir 0 composto 15 (110 mg) como um sólido branco. O composto 15 foi purificado pela segunda vez por HPLC preparativa de fase reversa (Coluna: Phenomenex Kinetex XB-C18 150 mm x 30 mm, 5 μΜ; Condição: água (NH4HCO3 10 mM)-ACN; Começo B: 0, Fim B: 5; Tempo de Gradiente (min): 7; Vazão (ml/min): 30) para produzir 0 composto 15, sal de amônio (45 mg) como um sólido branco. RMN ¹H (400 MHz, D2O) δ 8,31 (br, s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,94 (br, s, 1H), 6,43 (br, d, J=16,3 Hz, 1H), 5,98 (br, d, J=7,7 Hz, 1H), 5,67 - 5,47 (m, 1H), 5,28 (br, s, 1H), 4,93 (br, s, 1H), 4,61 - 4,49 (m, 2H), 4,43 (br, d, J=9,7 Hz, 1H), 4,26 (br, s, 2H), 4,18 (br, s, 1H), 4,05 (br s, 1H), 3,60 (s, 3H), 0,33 (br s, 3H). RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ -201,82 (s, 1F). RMN P³¹(162 MHz, D₂O) δ 96,09 (br, s, 1P), -2,40 (s, 1P). ESI-MS: m/z 688,9 [M + H]⁺.

Etapa 7: Preparação do composto 15, sal de sódio [0186] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 5 mL) foi adicionado a um béquer (para 45 mg do composto 15, sal de amônio) e lavado com água desionizada (2x), então adicionado à resina (H2SO4 a 15% em água desionizada, 50 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e uma

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101/122 solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 15, sal de amônio, foi dissolvido em água desionizada (45 mg em 5 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O produto foi eluído em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir o composto 15, sal de sódio P1 (42,6 mg) como um sólido branco. RMN ¹H (400 MHz, D2O) δ 8,21 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 6,39 (br, d, J=16,1 Hz, 1H), 6,00 (br, d, J=8,3 Hz, 1H), 5,70 - 5,52 (m, 1H), 5,23 (dt, J=4,5, 8,3 Hz, 1H), 5,044,88 (m, 1H), 4,63-4,51 (m, 3H), 4,44 (br, d, J=11,8 Hz, 1H), 4,31-4,19 (m, 3H), 4,06 (br, d, J=10,8 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 0,67-0,12 (m, 3H). RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ -201,80 (s, 1F). RMN P³¹ (162 MHz, D2O) δ 95,45 (s, 1P), -2,26 (s, 1P). ESI-MS: m/z688,8 [M + H]⁺

Preparação do composto 15 e do composto 16

Etapa 5: Preparação dos compostos 10d + 10e [0187] A uma solução do composto 10c (2,3 g, 2,41 mmols) (100 mL) em DCM adicionou-se sulfeto de dimetil borano (3,61 mL, 7,23 mmols) 0°C por 2 minutos. Após agitar a mistura a 25°C durante 15 minutos, água (20 mL) foi adicionada. A solução resultante foi filtrada e 0 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um sólido amarelo. O sólido foi diluído com DCM (100 mL) e a camada orgânica foi sucessivamente lavada com água (2 x 100 mL), salmoura (3 x 100 mL) e concentrada sob pressão para produzir um resíduo amarelo. O sólido bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Coluna: Agela Durashell C18 150 x 25 5 μΜ; Condição: água (NH4HCOs 10 mM)-ACN; Começo B: 25, Fim B: 55; Tempo de Gradiente (min): 12; Fluxo (ml/min): 25) para produzir uma mistura dos compostos 10d e 10e

Petição 870190060374, de 28/06/2019, pág. 105/142

102/122 (65 mg,) como um sólido branco. RMN ¹H (400 MHz, CD3OD) δ 8,81 8,71 (m, 1H), 8,50 (d, J=6,2 Hz, 1H), 8,08 (br, d, J=8,4 Hz, 2H), 7,69 7,54 (m, 3H), 6,59 - 6,50 (m, 1H), 6,37 - 6,26 (m, 2H), 6,02 - 5,86 (m, 1H), 5,26 - 5,04 (m, 2H), 4,77 - 4,68 (m, 1H), 4,63 - 4,54 (m, 3H), 4,43 (br, d, J=6,2 Hz, 2H), 4,34 - 4,27 (m, 2H), 3,86 - 3,69 (m, 2H), 2,98 - 2,90 (m, 3H), 2,71 (br, dd, J=5,8, 13,1 Hz, 1H), 2,61 - 2,49 (m, 1H), 1,22 (td, J=3,3, 6,7 Hz, 7H). ESI-MS: m/z969,3 [M + H]⁺

Etapa 6: Preparação do composto 15 e do composto 16 [0188] Uma solução dos compostos 10d e 10e (65 mg, cru) em uma mistura de etanol (4 mL) e NH4OH (12 mL) foi agitada a 50°C durante 12 horas. A solução foi concentrada sob pressão para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Synergi Polar-RP 100 x 30 5 μΜ; Condição: água (NH4HCO310 mM)-ACN; Começo B: 0, Fim B: 20; Tempo de Gradiente (min): 12; Vazão (ml/min): 25) para produzir 0 composto 15 (37 mg) e 0 composto 16 (17 mg) como sólidos brancos.

[0189] Composto 15, sal de amônio: RMN H¹ (400 MHz, D2O) δ 8,41 (br, s, 1H), 8,23 (br, s, 1H), 7,98 (br, s, 1H), 6,46 (br, d, J=16,3 Hz, 1H), 5,99 (br, s, 1H), 5,74 - 5,46 (m, 1H), 5,27 (br, s, 1H), 5,07-4,91 (m, 1H), 4,61 - 4,50 (m, 2H), 4,42 (br, s, 1H), 4,26 (br, s, 2H), 4,16 (br, s, 1H), 4,05 (br, s, 1H), 3,61 (s, 3H), 0,71 - 0,07 (m, 2H). RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ -75,63 (s, 1F). RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) δ 94,56 (s, 1 P), -3,69 (s, 1 P). ESI-MS: m/z 688,9 [M + H]⁺ [0190] Composto 16, sal de amônio: RMN ¹H (400 MHz, D2O) δ 8,37 (br s, 1H), 8,24 (br s, 1H), 7,85 (s, 1H), 6,42 (d, J=14,1 Hz, 1H), 5,91 - 5,88 (m, 1H), 5,8 (br s, 1H), 5,51 (br s, 1H), 5,38 (br s, 1H), 5,32 5,20 (m, 1H), 4,56 - 4,48 (m, 2H), 4,45 - 4,36 (m, 1H), 4,28 - 4,17 (m, 3H), 4,09 (br d, J=11,0 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 0,61 - 0,10 (m, 3H). RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ -202,9 (s, 1F). RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) δ 96,67 (m, 1P), -3,02 (s, 1P). ESI-MS: m/z689,2 [M + H]⁺

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Etapa 7: Preparação do composto 15, sal de sódio [0191] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 5 mL) foi adicionado a um béquer (para 37 mg do composto 15, sal de amônio) e lavado com água desionizada (2x), então adicionado à resina (H2SO4 a 15% em água desionizada, 50 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e uma solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 15, sal de amônio, foi dissolvido em água desionizada (37 mg em 5 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O produto foi eluído em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir 0 composto 15, sal de sódio P1 (28,4 mg) como um sólido branco. RMN ¹H (400 MHz, D2O) δ 8,25 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 6,42 (br, d, J=15,8 Hz, 1H), 6,02 (br, d, J=8,3 Hz, 1H), 5,70 - 5,52 (m, 1H), 5,30 - 5,21 (m, 1H), 5,06 4,91 (m, 1H), 4,62 - 4,54 (m, 2H), 4,44 (br, d, J=12,8 Hz, 1H), 4,30 (br, d, J=4,3 Hz, 2H), 4,21 (br, d, J=12,0 Hz, 1H), 4,06 (br, d, J=11,8 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), 0,71 - 0,09 (m, 3H). RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ -75,62 (s, 1F), 201,89 (s, 1F). RMN P³¹ (162 MHz, D₂O) δ 96,08 (s, 1P), -2,24 (s, 1P). ESIMS: m/z 688,8 [M + H]⁺

Petição 870190060374, de 28/06/2019, pág. 107/142

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Exemplo 11

^nh2 17 18

8b 11a

NH₄OH, EtOH, 50°C

H₂N h₂n

Composto 17, sal de sódio

Petição 870190060374, de 28/06/2019, pág. 108/142

105/122

Ο

η₂ν

Dowêx- Na

Composto 18, sal de sódio

Etapa 1: preparação de (11 a) [0192] A uma solução de 8b (100 mg, 0,11 mmol) em CH₃CN/THF (1:1, v/v, 4,4 ml_) adicionou-se peneiras moleculares de 4 Á (1 g) e 1Htetrazol em CH₃CN (1,94 ml_, 0,9 mmol). Após agitar a mistura a 25°C durante 0,5 hora, Ν,Ν,Ν',Ν'-tetraisopropilfosforodiamidito de 2-cianoetila (49,56 mg,0,16 mmol) em CH₃CN foi adicionado para a mistura. A mistura foi agitada a 25°C durante duas horas e 1 H-tetrazol em CH₃CN (0,49 ml_, 0,22 mmol, 0,45M) foi adicionado para a mistura. Após agitar a mistura a 25°C durante 0,5 hora, uma solução de 0,5 M de l₂ em THF: Py: H₂O (8: 1:1; V/V/V) (0,66 ml_, 0,33 mmol) foram adicionados à reação. Após agitar a mistura a 25°C durante 2 h, uma solução aquosa saturada de tiossulfato de sódio (2 ml_) foi adicionada; A mistura resultante foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida até secar. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Agela Durashell C18 150 x 25 5 μΜ; Condição: água (NH4HCO₃ 10 mM)-CAN A: água (NH4HCO₃ 10 mM) B: MeCN; Começo B: 25% para B: 55%, Tempo de Gradiente (min) 12; 100% de B, Tempo de Retenção (min) 2,2; Fluxo (ml/min) 25). As frações puras foram coletadas, o solvente foi concentrado sob pressão reduzida e a camada aquosa foi liofilizada até secar para produzir 11a como um sólido branco (20 mg). ESI-MS: m/z 969,3 [M+1]+.

Etapa 2: preparação de 17 e 18 [0193] A uma solução de 11a (20 mg 0,017 mmol) em EtOH (1,5 mL) adicionou-se NH₃.H₂O (1,5 mL, 25%). Após agitação da solução a 50°C durante 3 dias, a mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado

Petição 870190060374, de 28/06/2019, pág. 109/142

106/122 sob pressão reduzida até secar. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Syneri Polar-RP 100 x 30 5 μΜ Condição: água (NH4HCO310 mM)-MeCN A: água (NH4HCO310 mM) B: MeCN; Começo B: 0% para B: 20%, Tempo de Gradiente (min) 12; 100% de B, Tempo de Retenção (min) 2,2; Fluxo (ml/min) 25). As frações puras foram coletadas e 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida para produzir 17 (25 mg) e 18 (20 mg) como um sólido branco.

[0194] Análogo 17, sal de amônio: ESI-MS: m/z 688,8 [M+1]+. RMN ¹H (400 MHz, D₂O) δδ8,26 (br s, 1 H) 8,18 (s, 1 H) 7,77 (br s, 1 H) 6,38 (br d, J=14,31 Hz, 1 H) 5,77 (br d, J=8,03 Hz, 1 H)5,64(br s, 1 H) 5,30 - 5,52 (m, 1 H) 4,95 - 5,13 (m, 1 H) 4,50 (br d, J=9,03 Hz, 1 H)

4.34 - 4,44 (m, 2 H) 4,07 - 4,25 (m, 3 H) 3,99 (br d, J=11,04 Hz,1 H) 3,52 (s,3 H) -0,92 - 0,05 (m, 3 H).

[0195] Análogo 18, sal de amônio: ESI-MS: m/z 688,8 [M+1 ]+. RMN ¹H(400 MHz, D₂O) δ 8,29 (s, 1 H) 8,18 (s, 1 H) 7,75 (s, 1 H) 6,35 (d, J=14,05 Hz, 1 H) 5,76 (s, 2 H) 5,30 - 5,52 (m, 1 H) 4,99 -5,20 (m, 1 H)

4.35 - 4,50 (m, 3 H) 4,09 - 4,22 (m, 3 H) 3,94 - 4,03 (m, 1 H) 3,47 (s, 3 H) 0,05 (s, 3 H).

Etapa 3: preparação de 17, sal de sódio [0196] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 25 g) foi adicionado a um béquer (para 33 mg do composto 17) e lavado com água desionizada (2 x 10 mL), então adicionado à resina H2SO4 a 15% em água desionizada (80 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x10 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e uma solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1 x 10 mL). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos

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107/122 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 17, sal de amônio, foi dissolvido em água desionizada (33 mg em 5 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O produto foi eluído em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir o composto 17, sal de sódio (12,4 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z= 688,8 [M+1 ]⁺. RMN H¹ (400 MHz, D₂O) δ 8,08 - 8,05 (m, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,37 -

7,36 (m, 1H), 6,41 - 6,33 (m, 1H), 5,88 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,64 (d, J=4,4 Hz, 1H), 5,44 - 5,27 (m, 2H), 4,48 (d, J=2,4 Hz, 1H), 4,38 - 4,30 (m, 2H), 4,20 4,11 (m, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,46 (d, J=13,6 Hz, 1H), 3,22 - 3,18 (m, 1H); RMN F¹⁹ (376 MHz, D2O) δ -196,87 (s, 1F). RMN P³¹ (162 MHz, D2O) δ 7,80 (s, 1P), -1,22 (s, 1P).

Etapa 4: preparação de 18, sal de sódio [0197] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (forma H, 15 g) foi adicionado a um béquer (para 30 mg do composto 18) e lavado com água desionizada (2x10 mL), então adicionado à resina H2SO4 a 15% em água desionizada (80 mL). A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1x10 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até que a resina ficasse neutra. A resina foi transferida de volta para 0 béquer, e uma solução de NaOH (NaOH a 15% em solução aquosa, 50 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (1 x 10 mL). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 volumes de coluna) e, então, com água até que ficasse neutra (ao menos 4 volumes de coluna). O composto 18, sal de amônio, foi dissolvido em água desionizada (30 mg em 5 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. O produto foi eluído em frações iniciais conforme detectado por TLC (UV). O produto foi liofilizado para produzir 0 composto 18, sal de sódio

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108/122 (13,2 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z= 688,8 [M+1 ]⁺. RMN H¹(400 MHz, D2O) δ 8,22 (s, 1 H) 8,14 (s, 1 H) 7,76 (s, 1 H) 6,34 (d, J=14,05 Hz, 1 H) 5,77 (d, J=8,28 Hz, 1 H) 5,60 - 5,69 (m, 1 H) 5,30 - 5,48 (m, 1 H) 4,94 - 5,11 (m, 1 H) 4,49 (br d, J=9,29 Hz, 1 H) 4,35 - 4,45 (m, 2 H) 4,17-4,23 (m, 1 H) 4,12 - 4,17 (m, 1 H) 4,09 (br d, J=4,52 Hz, 1 H) 3,99 (br dd, J=12,05, 4,52 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3 H) -0,87 - 0,01 (m, 3 H). RMN P³¹ (162 MHz, D2O) δ 92,38 (br s, 1 P) -1,31 (s, 1 P). RMN F¹⁹ (376 MHz, D₂O) δ -75,64 (s, 1 F) -202,91 (br s, 1 F).

[0198] Pelo método do Exemplo 3, substituindo-se os reagentes adequados, os seguintes compostos podem ser preparados por uma pessoa versada na técnica:

Composto N°	Estrutura
19	0 OH /!1NH i < J O=P—O—I N _N nh₂ 0^0 pJ AoA OH À .N. n / rí V \ ¹—⁰—pC Νγλ/ g ^BH3 nh₂
20	O j™ O=p—O—1 N^N^NHj 0^0 ΓΌ/ OH Á rí Ίτ \ ¹—⁰—pC *^bh3 nh₂
21	o ^bh3 O=p—O—1 N n _Nh₂ O^O PoA oh À rí Ίι \ ¹—o—-pC W ii ^bh3 nh₂

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Exemplos biológicos

Testes in vitro

Exemplo biológico 1

Ensaio de ligação a SPA STING [0199] O ensaio de ligação a SPA STING humana mede o deslocamento de trítio marcado com 2',3'cGAMP (guanosina-(2' -> 5')monofosfato-adenosina-(3' -> 5')-monofosfato cíclico) à proteína STING biotinilada. Um versão solúvel de STING recombinante foi expressa em E.coli que não apresenta os quatro domínios transmembranares e contém os resíduos 139 a 379 de Q86WV6 com R na posição 232 (H232R). Com base na frequência de alelo de 58% da população, H232R é considerado ser do tipo selvagem (Yi, et. al., Single Nucleotide Polymorphisms of Human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides PLOS ONE. 2013, 8(10), e77846). O construto de STING tern urn terminal de N de etiqueta HIS, seguido por um sítio de

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110/122 divagem de TEV protease e uma etiqueta AVI para permitir a biotinilação diredonada por biotina ligase BirA (Beckett et al., A minimal peptide substrate in biotin holoenzyme synthetase-catalyzed biotinylation. (1999) Protein Science 8, 921-929). A etiqueta HIS é clivada após a purificação e antes da biotinilação.

[0200] O ensaio foi executado em placas de 1536 poços em um volume total de 8 μΙ_ por poço pela adição de 8 nM de [³H]-2'3'-cGAMP e 40 nM de proteína biotina-STING em tampão de ensaio [HEPES 25 mM (Corning 25-060-C1) pH 7,5, NaC1150 mM (Sigma S5150), 0,5 mg/mLde BSA (Gibco 15260-037), 0,001% de Tween-20 (Sigma P7949), água de grau molecular (Corning 46-000-CM)]. Os compostos de teste (80 nl_) foram adicionados com um dispensador acústico (EDC Biosystems) em 100% de DMSO para uma concentração de ensaio final de DMSO a 1%. As placas foram centrifugadas durante 1 minuto e incubadas durante 60 minutos à temperatura ambiente. Finalmente, cápsulas de poliestireno estreptavidina SPA (2 μΙ_) (PerkinElmer RPNQ0306) foram adicionadas e as placas foram seladas e centrifugadas durante 1 minuto à temperatura ambiente. As placas foram adaptadas ao escuro durante duas horas e lidas em um ViewLux (Perkin Elmer) durante 12 minutos por placa. Uma curva de ligação por saturação para [³H]-2'3'cGAMP mostrou um K d de 3,6 ± 0,3 nM para ligação a STING, comparável aos valores relatados para o ligante natural (Zhang et al., Cyclic GMP-AMP containing mixed phosphodiester linkages is an endogenous high-affinity ligand for STING.) [0201] Outros ligantes naturais incluindo di-GMP cíclico também voltaram aos valores neste ensaio dentro da faixa esperada. O composto de referência é cGAMP e os resultados são relatados como porcentagem de inibição e valores de IC50. A ligação à STING de camundongo usou um construto similar ao descrito acima contendo os resíduos 138 a 378 de Q3TBT3.

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Ensaio de ligação de STING humano de comprimento total [0202] O STING humano dos resíduos 1 a 379 de Q86WV6 com urn R na posição 232 (H232R) com uma etiqueta 6HIS N-terminal seguida de uma etiqueta FLAG, um sítio de divagem de protease TEV e uma etiqueta AVI para biotinilação foi recombinantemente expresso em células HEK293-EXPI. As membranas purificadas foram preparadas a partir dessas células e a expressão de STING foi confirmada e quantificada por imunoblot. As membranas contendo STING foram combinadas com o composto de teste em uma placa de ensaio Greiner de 384 poços e incubadas à temperatura ambiente durante uma hora no mesmo tampão de ensaio utilizado para o ensaio de ligação de STING SPA. Em seguida, [³H]-2'3'-cGAMP foi adicionado e as placas foram incubadas durante 30 minutos à temperatura ambiente. As reações foram transferidas para uma placa de filtro Pali 5073 pré-lavada e cada poço foi lavado 3 vezes com 50 pL de tampão de ensaio. As placas de filtro foram secas a 50^QC durante uma hora. Para cada poço, 10 pL de fluido de cintilação Microscint foram adicionados e as placas foram vedadas e lidas em um TopCount (Perkin Elmer) durante 1 minuto por poço.

Ensaio de ligação de STING SPR [0203] Os compostos foram analisados em um instrumento S200 biacore SPR (GE Healthcare). A proteína STING truncada produzida por E.coli foi imobilizada em um chip de série S de estreptavidina através de captura de biotina (GE Healthcare #BR100531). Os compostos foram rastreados em diluições de 1:2 de 100 uM para 0,195 uM em tampão de corrida (HEPES 10 mM, pH 7,4, NaCI 150 mM, P20 a 0,005%, TECEP 1 mM). As avaliações de cinética e afinidade em estado estacionário foram realizadas com o uso do modelo de ligação de 1:1 (STING foi tratado como um dímero). Os parâmetros de teste foram os seguintes: 60 segundos ativo, 300 segundos desativado para os compostos de IFM, di-GMP cíclico (60 s ativo/60 s desativado),

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112/122 isômero de tiol 1 (60 s ativo/300 s desativado) e cGAMP (60 s ativo/1200 s desativado) com uma vazão de 50 pL/min e coleta de dados a 40 Hz a 25°C.

Ensaio de repórter de célula de STING humano [0204] O agonismo da via de STING humano é avaliado em células THP1-ISG (Invivogen, cat #thp-isg) derivadas de linhagem celular de monócitos de THP1 humano por integração estável de um construto de repórter de SEAP induzível por fator regulador de interferon (IRF). As células THP1-Blue ISG expressam um gene repórter de fosfatase alcalina embrionária secretada (SEAP) sob o controle de um promotor mínimo ISG54 em conjunto com cinco elementos de resposta estimulada por interferon (IFN). Como resultado, as células THP1 -Blue ISG permitem o controle de ativação de IRF por determinação da atividade de SEAP. Os níveis de SEAP induzidos por IRF no sobrenadante de cultura celular são prontamente avaliados com meio de detecção de fosfatase alcalina, um reagente de detecção de SEAP. Estas células são resistentes à Zeocina. 2'3'cGAMP foi usado como controle positivo no ensaio. Para executar o ensaio, 60.000 células foram dispensadas em 30 pL/poço de uma placa de 384 poços, branca, de fundo opaco, tratada com cultura de tecido.

[0205] Os compostos de teste foram adicionados em um volume de 10 pL (concentração final de DMSO a 1%). Os compostos são preparados em DMSO a 100% inicialmente, depositados em uma placa de diluição intermediária e então diluídos no meio antes da transferência. O ensaio foi incubado por 24 horas a 37°C, 5% CO2 então as placas foram centrifugadas a 1200 rpm (120x g) durante 5 minutos. Após a incubação final, 90 pL de substrato de meio de detecção de fosfatase alcalina foram adicionados a cada poço de uma nova placa clara de 384 poços e 10 pL do sobrenadante celular foram transferidos da placa de ensaio para a nova placa de meio de detecção

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113/122 de fosfatase alcalina com o uso de um Biomek FX e misturada 4 vezes. As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 20 minutos e então a absorbância a 655 nm foi determinada com Tecan Safire2. Ensaio de repórter de células de STING de camundongo [0206] O agonismo da via de STING de camundongo é avaliado em células RAW Lucia (Invivogen, cat # rawl-isg) derivadas da linhagem celular de macrófago RAW-264.7 de camundongo por integração estável de um construto de repórter de luciferase de Lucia induzivel por interferon. As células RAW Lucia expressam um gene repórter de luciferase secretada sob o controle de um promotor mínimo ISG54 em conjunto com cinco elementos de resposta estimulada por interferon (IFN). Como resultado, as células RAW Lucia permitem o monitoramento da ativação de IRF pela determinação da atividade de luciferase. Os níveis de luciferase induzida por IRF no sobrenadante de cultura celular são prontamente avaliados com QUANTI-Luc™, um reagente de detecção de luciferase. Estas células são resistentes à Zeocina. 2'3'cGAMP é usado como controle positivo neste ensaio. Para executar o ensaio, 100.000 células foram dispensadas em 90 pL/poço de uma placa de 96 poços, clara, de fundo plano, tratada com cultura de tecido. Os compostos de teste foram adicionados em um volume de 10 pL. O ensaio foi incubado durante 24 horas a 37°C e 48 horas, a 5% de CO2. Após a incubação, 20 pL do sobrenadante celular da placa de ensaio foram transferidos para uma nova placa branca de 96 poços e 50 uL de substrato QUANTI-Luc foram adicionados. A placa foi incubada, com agitação, à temperatura ambiente durante 5 minutos então a luminescência foi lida em um equipamento EnVision 2104 com tempo de integração de 0,1 s.

Ensaio de indução de interferon-β humano [0207] As células THP1-Blue ISG são usadas para medir a secreção de IFN-β no sobrenadante da cultura após a ativação da via de STING.

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Para executar o ensaio, os anticorpos de captura de anti-IFN-β foram revestidos em placas MultiArray de 96 poços (Mesoscale Discovery). Após uma incubação de uma hora, as placas foram lavadas e 50 μΙ_ de sobrenadante das placas de ensaio de repórter de células de STING humano ou padrões de IFN-β foram misturados com 20 μΙ_ de anticorpo de detecção conjugado a Sulfotag nas placas revestidas. As placas foram incubadas, agitadas durante duas horas, lavadas e o tampão de leitura foi aplicado. A eletroquimioluminescência foi medida no equipamento Sectorlmager.

Avaliação da via de sinalização celular de STING [0208] O agonismo da via de STING foi medido em células THP1 BLUE ISG como por western blot de fosfo-STING(S366), fosfoTBK1(S172) E fosfo-IRF3(S396). Brevemente, 5 milhões de células em 90 pL de tampão de nucleofecção foram misturados com 10 pL de compostos de teste. Essas misturas foram eletroporadas com o uso de programa V001 em um equipamento Amaxa Nucleofector (Lonza). As células foram transferidas para placas de 12 poços com meio fresco e deixadas recuperar por uma hora a 37°C, 5% de CO2. As células foram então lavadas em HBSS frio e lisadas em tampão de RIPA. As amostras foram normalizadas por proteína total e diluídas em tampão de amostra ProteinSimple ou em tampão de carregamento de LDS. As amostras foram desnaturadas por calor a 95^QC durante 5 minutos, então PeggySue (ProteinSimple) foi usado para medir fosfo-STING e STING total e IRF3 enquanto 0 sistema NuPAGE (Invitrogen) foi usado para medir TBK1. Os dados foram analisados com 0 uso do software Compass ou Licor Odyssey, respectivamente.

Atividade de STING in vivo [0209] Para todos os estudos, camundongos Balb/c fêmeas foram obtidos junto à Charles River Labs (Wilmington, MA, EUA) e usados quando tinham 6 a 8 semanas de idade e pesavam aproximadamente

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g. Todos os animais foram deixados aclimar e se recuperar de qualquer estresse relacionado ao transporte por um mínimo de 5 dias antes do uso experimental. Água clorada por osmose reversa e alimento irradiado (Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010, Lab Diet) foram fornecidos ad libitum (à vontade), e os animais foram mantidos em um ciclo de claro e escuro de 12 horas. As gaiolas e leitos foram autoclavados antes do uso e trocados semanalmente. Todos os experimentos foram realizados de acordo com The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals e forma aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee of Janssen R & D, Spring House, PA, EUA. Cada grupo experimental continha 8 camundongos. A eficácia in vivo em um modelo de tumor CT26 de camundongo foi determinada pela implantação de 500.000 células de tumor de carcinoma de cólon de CT26 subcutaneamente em camundongos Balb/c e deixou-se que os tumores se estabelecessem de 100 a 300 mm³. Os compostos foram injetados por via intratumoral e formulados em solução salina tamponada com fosfato em um volume de 0,1 ml por injeção. Os camundongos foram administrados com 0,05 mg a cada três dias para um total de três doses. A eficácia foi medida como a porcentagem de inibição de crescimento de tumor (TGI) calculada pela redução do tamanho do volume de tumor Tratado (T) em relação ao volume de tumor de Controle (C) de acordo com a seguinte Fórmula: ((C-T)/(C))*100 quando todos os animais de controle ainda estavam em estudo. As curas foram definidas como o número de animais sem tumor mensurável detectados em 10 tempos de duplicação do volume de tumor (TVDT) após a última dose ter sido administrada.

[0210] Os dados resultantes são apresentados na Tabela 2.

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Tabela 2·

Composto N°	hSTING SPA IC50 (μΜ)*	EC50 de repórter de célula humana (μΜ)*	SPR humano STING Κϋ(μΜ)	ThermoFluor KD (μΜ)	IFN-β humano (valor de classificação)	Atividade in vivo (%TGI)	Atividade in vivo (curas)
1	>100	>100	>100	>83,33	ND	ND	ND
2	<0,01	0,064	0,003	0,020	2205	87,1	2/8
3	>88,25	>10	ND	>66,67	ND	ND	ND
4	<0,01	0,09	0,002	0,001	2247	93,7	6/8
5	<0,01	0,16	0,008	0,084	2737	93,3	7/8
6	0,023	0,12	0,017	0,310	27	73,9	1/8
7	0,06	1,12	0,049	1,270	2260	94,3	5/8
8	0,035	0,11	0,042	0,510	2054	95,3	4/8
9	<0,01	0,64	0,000195	ND	2240	89,8	ND
10	0,012	0,54	0,00158	ND	1321
11	<0,01	0,49			3840
12	<0,01	0,22			3860
13	<0,01	0,59			2900
14	<0,01	0,45			4964
15		1,108
17		2,88

ND-não feito, valor de classificação de IFN-β humano determinado pelo valor de classificação determinado pela indução de IFN-β cumulativa sobre a faixa de * IC50 e EC50 são médias de pelo menos três valores.

Exemplo Biológico 2

Ensaio de indução de citocina de CMSP humana primária com STING [0211] O agonismo da via de STING humano é avaliado em células mononucleares de sangue periférico humanas primárias (CMSP) derivadas de sangue total humano. 1 pint (aproximadamente 420 mL) de sangue de doador fresco (AllCells Inc., Alameda, CA) é disposto sobre

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117/122 um Meio de Separação de Linfócitos (1,077 a 1,080 g/ml, Corning, Manassas, VA, EUA), e então centrifugado a 500 g durante 20 minutos à temperatura ambiente sem interrupção. As CMSP coletadas na interface entre o soro e o Meio de Separação de Linfócitos são colhidas, lavadas e depois contadas. As CMSP são compostas de subtipos de linfócitos e monócitos, como células B, células T, etc., e esses subtipos têm sido caracterizados na literatura para expressar diferentes níveis da proteína STING. Em resposta aos agonistas de STING, como 2'3'-cGAMP, essas células se tornam ativadas e são induzidas a se expressar uma variedade de citocinas antivirals e pró-inflamatórias. Além disso, mediante a estimulação com agonistas de STING, essas células fazem a regulação positiva de marcadores de ativação. Os níveis de indução de citocina podem ser medidos por uma variedade de métodos incluindo ELISA, Luminex e MSD. Os níveis de regulação positiva do marcador de ativação podem ser medidos por citometria de fluxo.

[0212] Para executar o ensaio, 1.000.000 de células foram dispensadas em placas de 96 poços de fundo plano, tratadas com cultura de tecido de 225 pL/poço. Os compostos de teste foram adicionados em um volume de 25 pL a uma concentração de 10x. Alguns compostos foram solubilizados em DMSO a 100% e a concentração final de DMSO nas culturas que recebem esses compostos foi 1%. O ensaio foi incubado durante 48 h a 37°C, 5% de CO2. 200 pl de sobrenadantes foram colhidos sem perturbar as células sobre 0 fundo da placa, então foram congelados a -20°C até 0 tempo de medição com Luminex. Os ensaios com Luminex foram realizados com 0 uso de G-CSF, IFNoc2, IFN±, IL-1b, IL-6, IL-10, IL12 (p40), IL-12 (p70), TNFa junto à MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Kit de ensaio e analito de ΙΡΝβ1 junto à MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel IV kit (EMD Millipore, Billerica, MA, EUA), seguindo 0 protocolo dos fabricantes. A indução de citocina foi

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118/122 medida com o uso de um instrumento Luminex FlexMAP 3D®(Luminex Corporation, Radnor, PA, EUA). A análise de dados de Luminex coletados foi realizada com o uso de software Analista MILLIPLEX (EMD Millipore). Supressão de vírus HBV em células PHH com o uso de meios condicionados a partir de CMSP humanas primárias ativadas por STING [0213] Os hepatócitos humanos primários podem ser infectados com vírus da hepatite B e durante uma infecção estabelecida, irão produzir proteínas virais como HBsAg e HBeAg que podem ser detectadas por ELISA. O tratamento terapêutico com compostos como o entecavir pode suprimir a reprodução do HBV, que pode ser medida pela diminuição da produção de proteína viral. (N° de células) 4x10⁵células/poço de hepatócitos humanos primários (BioReclamation, Westbury, NY, EUA) foram dispensadas em 500 pL/poço de placas de 24 poços tratadas com cultura de tecido de fundo plano. 24 h depois, as células foram infectadas com 30 a 75 moi de HBV. No dia seguinte, as células PHH foram lavadas 3x e meio de manutenção fresco foi adicionado às células. Consequentemente, as CMSPs foram isoladas conforme descrito acima. Para estimular CMSP, as células 10.000.000 foram dispensadas em placas de 24 poços de fundo plano, tratadas com cultura de tecido de 400 pL/poço. Os compostos de teste foram adicionados em um volume de 100 pL, então as culturas foram incubadas durante 48 horas a 37°C, 5% de CO2. Os sobrenadantes foram coletados. As células foram medidas quanto a ativação de regulação positiva de marcador com 0 uso de citometria de fluxo. Resumidamente, as células foram coradas com anticorpos marcados fluorescentemente direcionados a CD56, CD19, CD3, CD8a, CD14, CD69, CD54, CD161, CD4 e CD80. As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo Attune NxT (Thermo Fisher, Carlsbad, CA, EUA) [0214] A partir das culturas de CMSP estimuladas, uma porção do sobrenadante foi reservada para detecção de citocinas por Luminex,

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119/122 conforme descrito anteriormente. O resto do sobrenadante foi dividido ao meio, e uma alíquota foi armazenada a 4°C para uso no dia 8 do ensaio. A outra alíquota do sobrenadante foi diluída de 1:1 com meio PHH 2X, então foi adicionada às células infectadas com PHH do dia 4. Após 96 horas, o meio gasto foi mudado e o sobrenadante foi adicionado em uma diluição de 1:1 com meio de PHH 2X. Neste ponto, uma medição interina de HBsAg foi realizada com o uso de um kit ELISA HBsAg (Wantai Bio-pharm, Beijing, China). Após 96 horas, o meio foi coletado e o HBsAg foi medido.

[0215]Tabela 3: Medição (n° de vezes) da indução de citocinas em culturas de CMSP estimuladas com compostos de CDN. A medição (N° de vezes) da indução é calculada mediante a medição das concentrações da citocina induzida após 48 horas em aproximadamente 20 μΜ de composto e, então, dividindo-se pelos níveis da linha de base da produção de citocina de células incubadas com PBS. Os dados são a média de vários doadores sobre três experimentos, nt = não testado. Tabela 3·

Composto N°	IL-6	IL-10	IFN-y	IL-1b	IFN-a	TNFa	IL-12p40	IL-12p70	G-CSF	IFN-β
1	1,1	2,9	401,3	0,6	1,3	26,1	5,2	0,0	0,1	0,0
2	0,3	1,8	133,2	0,1	1,4	5,1	1,4	nt	0,0	nt
2	7,1	42,7	19,1	11,9	6,3	11,5	1,4	25,4	0,8	13,6
3	0,6	2,0	370,4	0,2	2,6	10,9	0,5	nt	0,0	nt
3	4,8	39,8	0,7	3,5	0,2	0,9	4,0	1,5	3,6	0,2
4	0,0	0,4	0,1	0,0	0,1	0,1	0,7	nt	0,0	nt
5	1,4	2,9	605,1	0,9	1,4	50,4	2,1	nt	0,1	nt
7	1,0	6,4	502,1	0,8	38,0	29,5	0,5	420,5	0,0	62,2
8	0,6	1,2	133,7	0,3	6,5	12,8	0,5	nt	0,0	nt
2'3'-cGAMP	2,5	5,9	17,4	1,4	6,8	5,6	1,0	5,5	0,4	16,0
PBS	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
DMSO	0,0	1,2	0,2	0,0	0,1	0,1	0,8	nt	0,0	nt

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120/122 [0216] Tabela 4: Medição (N° de vezes) de indução de citocinas em culturas de CMSP estimuladas com concentrações mais altas de compostos de CDN. A medição (N° de vezes) da indução é calculada mediante a medição das concentrações da citocina induzida após 48 horas na concentração indicada do composto, então, dividindo-se pelos níveis da linha de base da produção de citocina de células incubadas com PBS. Os dados são a média de vários doadores sobre três experimentos, nt = não testado.

Tabela 4.

Composto N°	Concentrado de Topo (pm)	IL-6	IL-10	IFNy	ΙΙ_-1β	IFNa2	TNFa	IL12 p40	IL12 p70	G-CSF	IFNP1
1	111,1	0,7	0,4	2,0	1,7	0,9	3,4	0,7	35,2	1,1	nt
2	40	2523,6	61,0	3225,5	544,8	27,0	643,4	9,6	252,7	227,0	18,2
3	40	491,4	21,2	4,0	102,8	1,4	7,2	3,1	3,7	7,4	0,4
4	111,1	0,1	0,0	1,0	0,1	0,3	0,6	0,0	7,0	0,0	nt
5	111,1	0,2	0,0	3,1	2,2	0,5	4,4	0,1	34,5	0,3	nt
7	111,1	321,9	4,1	2088,8	113,2	1033,1	244,6	0,6	27,7	2,6	14,1
8	111,1	0,4	0,0	2,1	0,7	0,6	1,4	0,0	39,4	0,1	nt
9	40	5084,7	121,4	4776,7	5072,5	106,4	1003,1	26,6	640,0	775,6	22,1
10	40	2791,9	37,7	3104,9	342,6	41,1	555,4	25,5	274,0	58,4	20,7
14	40	2209,3	24,1	4760,1	288,8	44,7	811,7	22,9	574,2	295,5	18,7
13	40	2536,1	50,0	6065,9	445,5	39,5	881,8	32,0	686,4	246,2	16,6
2'3'- cGAMP	40	454,0	12,1	1919,1	251,2	27,8	117,1	1,8	17,1	14,1	13,5
DMSO		0,5	0,3	0,4	0,6	0,5	0,4	0,5	0,6	1,2	nt

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121/122 [0217] Tabela 5. Meio condicionado de CMSPs estimuladas com CDN pode suprimir a carga viral de células PHH infectadas por HBV. As CMSPs foram estimuladas com o CDN indicado em 20, 4, 0,8 μΜ durante 48 horas. Os sobrenadantes foram misturados com meio fresco em uma razão de 1:1, e então adicionados a células PHH infectadas por HBV. A produção de HBsAg foi medida 8 dias depois. Os dados são uma média de dois doadores independentes.

Tabela 5·

Composto N°	EC50 (μΜ)
2	8,24E-04
3	88119,3
7	8,51 E-05

[0218] Tabela 6. CDN ativa CMSP. As CMSPs foram estimuladas com 20 μΜ de CDN durante 48 horas. As células foram avaliadas por citometria de fluxo quanto a regulação positiva de CD54 em monócitos. O aumento da medição (fold) na intensidade média de fluorescência foi calculado em relação aos níveis nas células em repouso. Os dados são uma média de dois doadores independentes.

Tabela 6·

Composto N°	MFI
2	5,0
3	2,0
7	5,1
2'3'-cGAMP	4,5
PBS	1,0

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122/122 [0219] Embora o relatório descritivo anteriormente mencionado ensine os princípios da presente invenção, com os exemplos fornecidos com o propósito de ilustração, ficará compreendido que a prática da invenção abrange todas as variações, adaptações e/ou modificações usuais, de acordo com o escopo das reivindicações a seguir e seus equivalentes.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto caracterizado por ser de fórmula (I) o

o

Fórmula (I) em que:

Ria é hidróxi ou fluoro e Ric é hidrogênio; ou, Ria é -O- e Rio é CH₂ de modo que Ria e Ric são tomados juntos com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um anel de 5 membros;

Rib é selecionado do grupo que consiste em hidróxi, tiol e BH₃-;

Bi é selecionado do grupo que consiste em anéis b1 e b2

b1 e

R₂a é selecionado do grupo que consiste em hidróxi e metóxi;

R₂b é selecionado do grupo que consiste em hidróxi, tiol e BH₃-;

desde que o composto da Fórmula (I) seja diferente de sal de (1 fí,6fí,8fí,9fí,10fí,15fí,17fí,18fí)-17-(2-Amino-6-oxo-6,9-di-hidro1 /-7-pu ri n-9-i l)-8-(6-am i no-9 /-7-pu ri n-9-i I)-9-f I u oro-3,12,18-tri-hidróxiPetição 870190060374, de 28/06/2019, pág. 127/142
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2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3À⁵, 12λ⁵difosfatriciclo[13,2,1,0⁶,¹°]octadecano-3,12-diona, bis-amônio;

ou um enantiômero, diastereômero ou forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Bi é b2
3. Composto caracterizado por ser de fórmula (I)

Fórmula (I) selecionado a partir do grupo consistindo em o

NH₂ 2

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ΝΗ₂ 6

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4/11

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5/11

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6/11

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ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e pelo menos um dentre um veículo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e um diluente farmaceuticamente aceitável.

5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que a composição é uma forma sólida para dosagem oral.

6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que a composição é um xarope, um elixir ou uma suspensão.

7. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender um composto como definido na reivindicação 3, e pelo menos um dentre um veículo farmaceuticamente aceitável, um

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10/11 excipiente farmaceuticamente aceitável, e urn diluente farmaceuticamente aceitável.

8. Método de tratamento de uma doença, síndrome ou condição modulada por STING, caracterizado pelo fato de compreender administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido na reivindicação 1.

9. Método de tratamento de uma doença, síndrome ou condição, em que a dita doença, síndrome ou condição é afetada pelo agonismo de STING, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto como definido na reivindicação 1.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a dita doença, síndrome ou condição é câncer.
11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão e fibrossarcoma.
12. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a dita doença, síndrome, ou condição é infecção viral.
13. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a infecção viral é hepatite B.
14. Método de tratamento de uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo que consiste em infecção viral, melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão e fibrossarcoma, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição como definida na reivindicação 4.
15. Uso de um composto como definido na reivindicação 1,

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11/11 caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para tratar uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo que consiste em infecção viral, melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão e fibrossarcoma, em um indivíduo que precisa do mesmo.
16. Uso de um composto como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é para uso em um método para tratar uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo que consiste em infecção viral, melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão e fibrossarcoma, em um indivíduo que precisa do mesmo.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 15, caracterizado pelo fato de que a infecção viral é hepatite B.
18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de compreender administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido na reivindicação 3.