BR112016017344B1 - Composto de heteroaril amida, sua composição farmacêutica, seu uso, e método de interferir ou de prevenir, retardar, inverter, ou inibir a agregação da proteína ou peptídeo numa célula - Google Patents

Composto de heteroaril amida, sua composição farmacêutica, seu uso, e método de interferir ou de prevenir, retardar, inverter, ou inibir a agregação da proteína ou peptídeo numa célula Download PDF

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Abstract

AMIDAS DE HETEROARIL COMO INIBIDORES DE AGREGAÇÃO DE PROTEÍNAS. A presente invenção refere-se a certos compostos de heteroaril amida, composições farmacêuticas contendo estes, e métodos de utilização deles, incluindo métodos para prevenir, inverter, retardar, ou inibir à agregação da proteína, e métodos de tratamento de doenças que estão associadas à agregação de proteínas, incluindo as doenças neurodegenerativas, tais como a doença de Parkinson, doença de Alzheimer, doença do corpo de Lewy, doença de Parkinson com demência, demência fronto-temporal, doença de Huntington, esclerose lateral amiotrófica, atrofia múltipla dos sistemas, e câncer e melanoma.

Description

Campo Técnico
[001] A presente invenção refere-se a certos derivados de heteroaril amida, composições farmacêuticas contendo estes, e métodos de utilização deles, incluindo métodos para prevenir, inverter, retardar, ou inibir à agregação da proteína, e métodos de tratamento de doenças que estão associadas à agregação de proteínas, incluindo as doenças neurodegenerativas, tais como a doença de Parkinson, doença de Alzheimer, doença do corpo de Lewy, doença de Parkinson com demência, demência fronto-temporal, doença de Huntington, esclerose lateral amiotrófica, atrofia múltipla dos sistemas, e câncer.
Listagem de Sequências
[002] Os requerentes submeteram juntamente com este documento à listagem de sequências (depositada eletronicamente através de EFS-WEB) em conformidade com a norma, de acordo com a Regra PCT 13ter.1(a) a (d) e das instruções administrativas, Seção 208 e Anexo C. A requerente afirma que a informação gravada em suporte informático em formato ASCII.txt e submetidos junto com este documento não inclui matéria que está além da divulgação no pedido internacional, tal como foi depositado. Os requerentes solicitam a consideração e a entrada da listagem de sequências submetida junto com esta via EFS-Web como parte do pedido de acordo com a Regra 5.2 (a). O arquivo .txt é rotulado como 699462000840SeqList. A listagem de sequências formando parte do pedido internacional foi criada em 27 de Janeiro de 2015 e contém 645 bytes.
Fundamentos da Invenção
[003] Distúrbios neurodegenerativos do envelhecimento da população como a doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD), e demência fronto-temporal (FTD), afetam mais de 20 milhões de pessoas nos Estados Unidos e na União Europeia apenas e classificam entre as causas principais de morte para os idosos. Uma característica comum entre esses distúrbios neurológicos é o acúmulo crônico de proteínas em agregados neurotóxicos. Cada doença é caracterizada pelas populações neuronais específicas que são afetadas, a os agregados de proteína particular que estão envolvidos, e as características clínicas que resultam da degeneração neural.
[004] Os estudos sugerem que as fases iniciais da agregação de proteínas envolvem mutação ou modificação pós- translacional (por exemplo, nitrosilação, oxidação) da proteína alvo, que, então, adota uma conformação anormal que facilita as interações com as proteínas dobradas incorretamente semelhantemente. As proteínas anormais, então, agregam para formar dímeros, trímeros, e multímeros de ordem superior, também denominados "oligômeros solúveis", que podem interromper a função sináptica. Além disso, os agregados podem, então, ancorar na membrana da célula e formar oligômeros globulares (que por sua vez, podem formar poros na membrana) e/ou fibras ou protofibras. Estas fibras insolúveis maiores podem funcionar como reservatórios dos oligômeros bioativos.
[005] Várias linhas de evidência apoiam a noção de que o acúmulo progressivo de agregados de proteína é causalmente envolvido na patogênese de doenças neurodegenerativas. Um número de outras proteínas pode acumular-se nos cérebros de pacientes com neurodegeneração, como alfa-sinucleína, proteína Aβ, Tau, e TDP43. A deficiência cognitiva destes pacientes está intimamente associada à perda sináptica no neocórtex e sistemas límbicos e níveis aumentados de agregados de proteínas podem contribuir a esta perda sináptica. Muita das pesquisas está focada em detalhamento dos mecanismos através do acúmulo de proteínas alfa-sinucleína e outros metabólitos de proteínas precursora de amilóide (APP) contribuem para danos sinápticos e neurodegeneração. Muitos estudos suportam a hipótese de que a formação de pequenos agregados, também conhecidos como oligômeros, desempenham um papel importante na neurotoxicidade. Estes oligômeros de peptídeos podem organizar em dímeros, trímeros, tetrâmeros, pentâmeros, e outras matrizes de ordem superior que podem formar estruturas anelares. Altos níveis de tais oligômeros são preditivos de demência e perda sináptica nos pacientes. Porque as evidências indicam os oligômeros, ao invés de menores fibras precursoras, são as espécies tóxicas, compostos que almejam esses processos de agregação precoce de uma maneira específica seriam úteis como potenciais novas terapias para PD, AD e condições relacionadas.
[006] Várias doenças neurodegenerativas envolvem o acúmulo de agregados à base de proteínas neurotóxicas. Na doença de Parkinson idiopática (IPD), demência com corpos de Lewy (LBD), doença de Parkinson com demência (DCP), e atrofia múltipla dos sistemas (MSA), os agregados neurotóxicos são compostos de a-sinucleína (SYN), que é uma proteína sináptica, a qual é intracelular sob condições normais. Em FTD e esclerose lateral amiotrófica (ALS), agregados neurotóxicos são originários de outras proteínas intracelulares como tau, TDP-43, ou SOD1. Para algumas doenças, como AD, SYN agrega com a proteína primária (por exemplo, proteína Aβ). Na doença de Huntington, os agregados formados a partir dos produtos de clivagem de proteínas Htt.
[007] O acúmulo de a-sinucleína tem implicado no câncer, em particular, nas células de câncer de melanoma. Pan et al., PLoS One, 2012, 7(9), e45183. Assim, os compostos que inibem tal acúmulo podem ser úteis no tratamento de vários cânceres, incluindo melanoma.
[008] Dois mecanismos são implicados em processos de agregação de proteínas. No primeiro, o dobramento incorreto e/ou as proteínas agregadas ancoram às várias estruturas de membrana de células. A ligação das moléculas de dobramento incorreto ou moléculas agregadas à membrana plasmática ou as membranas das organelas (por exemplo, mitocôndrias ou lisossomas) podem interferir com a proteína da transcrição, autofagia, função mitocondrial, e a formação de poros. A título de exemplo, SYN neurotóxica agrega e interage com lipídios em membranas celulares por uma porção específica da região C-terminal da proteína sinucleína. Os compostos que se ligam a esta região podem inibir interações proteína-proteína ou proteína-lipídio e podem, portanto, ser utilizados para bloquear a oligomerização neurotóxica de SYN ou outras proteínas e suas interações com membranas. No segundo processo, a proteína agregada é liberada a partir da subunidade ancorada e propaga para as células adjacentes. Esta propagação da célula para célula de agregados de proteínas tóxicas pode, então, subjazer à progressão anatômica da neurodegeneração e agravamento dos sintomas. Os fármacos de pequenas moléculas que interagem com as proteínas alvo podem limitar liberação e/ou propagação, e, portanto, reduzir os efeitos neurotóxicos das proteínas agregadas.
[009] Os compostos que são inibidores de agregação de proteínas estão descritos em Publ. PCT Nos. WO2011/084642, WO2013/148365, WO2013/134371, e Pedido PCT No. PCT/US2013/050719.
[0010] Há ainda uma necessidade de inibidores de agregação de proteínas com propriedades farmacêuticas desejáveis. Certos compostos de heteroaril-amida foram encontrados no contexto da presente invenção possuir atividade de modulação de agregação da proteína.
Sumário da Invenção
[0011] Em um aspecto, a invenção refere-se a uma entidade química com a seguinte Fórmula (I):
Figure img0001
em que R1 é H, halo, alquil C1-4, ou CF3; R2 é H, -CF3, ou alquil C1-4 não substituído ou substituído com halo ou -CF3; A é um anel heteroaril de 5 membros; Y está ausente ou é alquileno C1-4; R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual eles estão ligados, formam um anel heterocicloalquil monociclíco, não substituído ou substituído com alquil C1-4; ou em que Y é alquileno C1-4, R3 e Y tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual R3 está ligado, formam um anel heterocicloalquil monociclíco, e R4 é H ou alquil C1-4; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
[0012] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto selecionado a partir daquelas espécies descritas ou exemplificado na descrição detalhada abaixo.
[0013] Num outro aspecto, a invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ainda compreender um excipiente farmaceuticamente aceitável. A invenção é também um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste para utilização como um medicamento.
[0014] Em outro aspecto, a invenção é direcionada a um método de tratamento de uma doença neurodegenerativa ou uma condição associada com a agregação de proteína ou de peptídeos compreendendo administrar a um sujeito em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável.
[0015] Em outro aspecto, a invenção é direcionada a um método de tratamento de uma doença ou condição médica associada com a agregação de proteína ou peptídeo, compreendendo administrar a um sujeito em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. A invenção é também direcionada a utilização de um composto de Fórmula (I) na preparação de um medicamento para o tratamento de tais doenças e condições médicas, e o uso de tais compostos e sais para o tratamento de tais doenças e condições médicas.
[0016] Em ainda outro aspecto, a invenção refere-se ao método de interferir com o acúmulo de agregados de proteína ou de peptídeos numa célula, ou prevenir, retardar inverter, ou inibir à agregação de proteína ou peptídeo numa célula, compreendendo o contato da célula com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de Fórmula (I) ou um sal deste, e/ou com pelo menos uma composição farmacêutica da invenção, em que o contato é realizado in vitro, ex vivo ou in vivo.
[0017] As modalidades adicionais, características e vantagens da invenção serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada e através da prática da invenção.
[0018] Por razões de brevidade, as descrições das publicações citadas neste relatório, incluindo patentes, são aqui incorporadas por referência.
Breve Descrição das Figuras
[0019] A FIG. 1 mostra os resultados do Exemplo Biológico 3. Na Figura 1A, o eixo Y (I/Io) é a razão entre a intensidade de sinal para espectroscopia coerência quântica única heteronuclear (HSQC) para ASYN (média de 323 resíduos) na presença (I) ou ausência (Io) de membranas lipídicas. Na Figura 1B, a razão média de I/Io de resíduos 3-23 ASYN foi representada graficamente como uma função da concentração do Exemplo 1 adicionado.
[0020] A FIG. 2 mostra a quantificação da imagem de microscópica de elétrons de oligômeros ASYN na presença e ausência do Exemplo 1, como descrito no Exemplo Biológico 4.
[0021] A FIG. 3 mostra o efeito do Exemplo 1 sobre o acúmulo de ASYN em células de neuroblastoma de B103 expressando ASYN humana marcada com GFP, conforme descrito no Exemplo Biológico 5.
[0022] A FIG. 4 mostra os resultados do Exemplo Biológico 6A e os efeitos do Exemplo 1 em 1 mg/kg e 5 mg/kg de dosagem em camundongos transgênicos no modelo de tarefa de feixe circular.
[0023] FIG. 5 mostra os resultados da análise do método dot blot do Exemplo Biológico 6A de cérebro e homogenatos cerebrais do hipocampo utilizando anticorpo A11.
[0024] FIG. 6 mostra os resultados do Exemplo Biológico 6B e os efeitos do Exemplo 1 sobre imunomarcação ASYN em neuropil cortical e corpos celulares neuronais em camundongo transgênico de ASYN na linha 61. Figura 6A reflete o braço de neuropil ASYN, e a Figura 6B reflete o braço do corpo celular neuronal do estudo.
[0025] A FIG. 7 mostra os resultados do Exemplo Biológico 6B e os efeitos do Exemplo 1 sobre a imunomarcação de marcadores relacionados com a neurodegeneração incluindo hidroxilase tirosina (Fig. 7A), NeuN (Fig. 7B) e a proteína ácida fibrilar glial (GFAP. Fig. 7C).
[0026] A FIG. 8 mostra os resultados do Exemplo Biológico 6B e os efeitos do Exemplo 1 sobre a deficiência sensório-motora em camundongos transgênicos ASYN na linha 61 utilizando o ensaio de Desempenho de Motor de Feixe Circular.
[0027] A FIG. 9 mostra os resultados do Exemplo Biológico 7A e os efeitos do Exemplo 1 sobre contagens de boli fecais em camundongos transgênicos ASYN na Linha 61.
[0028] A FIG. 10 mostra os resultados do Exemplo Biológico 7B e os efeitos do Exemplo 1 sobre os níveis cardíacos de ASYN em camundongos transgênicos ASYN na Linha 61.
[0029] A FIG. 11 mostra os resultados do Exemplo Biológico 7C e os efeitos do Exemplo 1 sobre a percentagem de áreas de imagem com ASYN-GFP na retina de camundongos transgênicos PDNG78.
[0030] A FIG. 12 mostra os resultados do Exemplo Biológico 7C e os efeitos do Exemplo 1 em rotulagem GFP terminal do nervo e perivascular em camundongos transgênicos PDNG78.
Descrição Detalhada da Invenção
[0031] Antes da presente invenção é ainda descrito, e é para ser entendido que esta invenção não está limitada às modalidades particulares descritas, como tal pode, é claro, variar. É para ser entendido que a terminologia aqui utilizada é para o propósito de descrever apenas modalidades particulares, e não se destina a ser limitativa, uma vez que o escopo da presente invenção será limitado apenas pelas reivindicações anexas.
[0032] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados tem o mesmo significado que é normalmente entendido por um perito ordinário na técnica, a qual esta invenção pertence. Todas as patentes, pedidos, pedidos publicados e outras publicações aqui referidas são incorporadas por referência na sua totalidade. Se uma definição estabelecida nesta seção é contrária a ou, de outra forma, inconsistente com a definição estabelecida em uma patente, pedido ou outras publicações que são aqui incorporadas por referência, a definição estabelecida nesta seção prevalece sobre a definição aqui incorporada por referência.
[0033] Como aqui utilizado e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um," "uma,", "o" e "a" incluem referentes plurais a menos que o contexto claramente determine de outra forma. É ainda notado que as reivindicações podem ser redigidas para excluir qualquer elemento opcional. Como tal, esta declaração se destina a servir de base antecedente para o uso da terminologia exclusiva como "unicamente", "único" e similares em conexão com a recitação dos elementos de reivindicação, ou uso de uma "limitação negativa".
[0034] Como aqui utilizados, os termos "incluindo", "contendo", e "compreendendo" são usados em seu sentido aberto, não limitante.
[0035] Para fornecer uma descrição mais concisa, algumas das expressões quantitativas fornecidas aqui não são qualificadas com o termo "cerca de". Entende-se que, se o termo "cerca de" é utilizado explicitamente ou não, cada quantidade fornecida aqui é pretendida se referir ao valor real fornecido, e também pretende referir-se à aproximação de tal valor fornecido que iria ser razoavelmente deduzido baseado no perito ordinário na técnica, incluindo equivalentes e aproximações devido às condições experimentais e/ou condições de medida para tal valor proporcionado. Sempre que um rendimento é fornecido como uma percentagem, tal rendimento refere-se a uma massa da entidade, pela qual o rendimento é fornecido em relação à quantidade máxima da mesma entidade que poderia ser obtida nas condições estequiométricas particulares. As concentrações que são fornecidas como percentagens referem- se às razões em massa, salvo indicação diferente.
[0036] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado como vulgarmente entendido por um perito ordinário na técnica que esta invenção pertence. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos aqui descritos podem ser utilizados na prática ou teste da presente invenção, os métodos e materiais preferidos são agora descritos. Todas as publicações aqui mencionadas são incorporadas na presente descrição como referência para revelar e descrever os métodos e/ou materiais em ligação com as que são publicações citadas.
[0037] Salvo indicação em contrário, os métodos e tecnologia das presentes modalidades são, geralmente, realizados de acordo com os métodos convencionais bem conhecidos na técnica e como descrito em várias referências gerais e mais específicas e que são citados e discutidos ao longo do presente relatório. Ver, por exemplo, Loudon, Organic Chemistry, Fourth Edition, New York: Oxford University Press, 2002, pp. 360-361, 1084-1085; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley- Interscience, 2001.
[0038] A nomenclatura aqui utilizada para nomear os compostos em questão aqui é ilustrada nos exemplos aqui apresentados. Esta nomenclatura, geralmente, tem sido derivada usando o software comercialmente disponível AutoNom (MDL, San Leandro, Calif.), Versão 12.0.2.
[0039] Reconhece-se que certas características da invenção, as quais são, para clareza, descritas no contexto das modalidades separadas, podem ser proporcionadas em combinação numa única modalidade. Por outro lado, várias características da invenção, as quais são, por brevidade, descritas no contexto de uma única modalidade, podem ser proporcionadas separadamente ou em qualquer sub-combinação adequada. Todas as combinações das modalidades pertencentes aos grupos químicos representados pelas variáveis são especificamente abrangidos pela presente invenção e são aqui divulgados como se todas e cada combinação fosse individualmente e expressamente divulgada, na medida em que tais combinações abraçam compostos que são compostos estáveis (isto é, compostos que podem ser isolados, caracterizados, e testados para a atividade biológica). Além disso, todas as sub-combinações dos grupos químicos listados nas modalidades descrevem tais variáveis são também especificamente abrangidos pela presente invenção e são descritos aqui como se todas e cada uma dessas sub- combinações dos grupos químicos tenha sido explicitamente e individualmente aqui divulgada.
Modalidades representativas
[0040] Em algumas modalidades de Fórmula (I), R1 é H, flúor, cloro, bromo, metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, sec-butil, ou terc-butil. Em outras modalidades, R1 é H ou flúor. Em outras modalidades, R1 é H. Em outras modalidades, R1 é flúor.
[0041] Em algumas modalidades, R2 é H, -CF3, ou é metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, sec-butil, ou terc-butil, ou cada não substituído ou substituído com flúor, cloro, bromo, ou -CF3. Em outras modalidades, R2 é H. Em outras modalidades, R2 é -CF3 ou é alquil C1-4 opcionalmente substituído com halo ou -CF3. Em outras modalidades, R2 é alquil C3-4, não substituído ou substituído com flúor ou -CF3. Em outras modalidades, R2 é butil. Em outras modalidades, R2 é propil substituído com - CF3.
[0042] Em algumas modalidades, R2 é na configuração estereoquímica "R". Em outras modalidades, R2 está na configuração estereoquímica "S". Em outras modalidades, os compostos de Fórmula (I) são misturas estereoquímicas na posição R2. Em ainda outras modalidades, R2 é substancialmente configuração estereoquímica "R" ou substancialmente configuração estereoquímica "S".
[0043] Em algumas modalidades, A é um anel heteroaril de 5 membros com dois ou três átomos de anel heteroátomo. Em outras modalidades, A é um anel heteroaril de 5 membros com dois átomos de anel heteroátomo não adjacentes. Em ainda outras modalidades, A é tiazol, tiadiazol, oxazol, imidazol, ou triazol. Em ainda outras modalidades, A é tiazol ou tiadiazol. Em ainda outras modalidades, A é tiazol.
[0044] Em algumas modalidades, Y não está presente. Em outras modalidades, Y é -CH2-, -CH2CH2-, -CH(CH3)- , -(CH2)3-, -C(CH3)2-, -(CH2)4-, -CH((CH2)2CH3)-, - CH(CH(CH3)2)-, -CH(CH2CH3)CH2-, -CH(CH3)CH(CH3)-, - CH(CH3)(CH2)2-, ou -CH2CH(CH3)CH2-. Em outras modalidades, Y é -CH2-, -CH2CH2-, ou -CH(CH3)-. Em ainda outras modalidades, Y é -CH2CH2-.
[0045] Em algumas modalidades, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual eles estão ligados, formam um anel heterocicloalquil monocíclico, não substituído ou substituído com alquil C1-4. Em outras modalidades, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual estão ligados, formam azetidina, pirrolidina, piperidina, azepina, piperazina, morfolina, tiomorfolina ou 1,1-dioxo-tiomorfolina, cada um não substituído ou substituído com alquil C1-4. Em outras modalidades, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual estão ligados, formam piperazina, morfolina, ou pirrolidina, cada um não substituído ou substituído com alquil C1-4. Em outras modalidades, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual estão ligados, formam morfolina ou piperazina, cada um não substituído ou substituído com alquil C1-4. Em outras modalidades, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual estão ligados, formam piperazina, não substituído ou substituído com alquil C1-4. Em ainda outras modalidades, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual estão ligados formam piperazina ou 4-metil-piperazina.
[0046] Em outras modalidades, em que Y é alquileno C1-4, R3 e Y tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual R3 está ligado, formam um anel heterocicloalquil monocíclico, e R4 é H ou alquil C1-4. Em outras modalidades, Y e R3 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual R3 está ligado, formam pirrolidina ou piperidina. Em outras modalidades, R4 é H ou metil.
[0047] Em algumas modalidades, R1 é H, R2 é H ou alquil C1-4 (ou é H, ou é alquil C3-4), A é tiazol, Y está ausente ou é etileno (ou está ausente, ou é etileno) e R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio, ao qual eles estão ligados, formam N-metilpiperazina.
[0048] Em modalidades outras, o composto de Fórmula (I) é selecionado a partir do grupo consistindo em:
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[0049] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é selecionado a partir do grupo consistindo em:
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e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[0050] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em Exemplos 1-11, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Em outras modalidades, o composto é uma forma de sal cloridrato. Em outras modalidades, o composto é o Exemplo 27 ou 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, R2 de Fórmula (I) está na configuração estereoquímica (S). Em outras modalidades, R2 de Fórmula (I) está na configuração estereoquímica (R).
Definições químicas
[0051] O termo "alquil" refere-se a um grupo alquil de cadeia linear ou ramificada possuindo de 1 a 12 átomos de carbono na cadeia. Exemplos de grupos alquil incluem metil (Me), etil (Et), n-propil, isopropil, butil, isobutil, sec-butil, terc-butil (tBu), pentil, isopentil, terc-pentil, hexil, iso-hexil, e os grupos que, à luz do perito na técnica e os ensinamentos aqui fornecidos seriam considerados equivalentes a qualquer um dos exemplos precedentes.
[0052] O termo "heteroaril" refere-se a um heterociclo aromático monocíclico, bicíclico fundido, ou policíclico fundido (estrutura de anel possuindo átomos de anel selecionados a partir de átomos de carbono e até quatro heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre) tendo de 3 a 12 por átomos de anel heterociclo. Exemplos ilustrativos de grupos heteroaril incluem as seguintes entidades, na forma de porções ligadas corretamente:
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[0053] O termo "halogênio" representa cloro, flúor, bromo, ou iodo. O termo "halo" representa cloro, flúor, bromo, ou iodo.
[0054] O termo "oxo" representa um oxigênio carbonil. Por exemplo, um ciclopentil substituído por oxo é uma ciclopentanona.
[0055] Os peritos na técnica reconhecerão que as espécies listadas acima ou ilustradas não são exaustivas e que outras espécies dentro do escopo destes termos definidos também podem ser selecionadas.
[0056] O termo "substituído" significa que o grupo ou unidade especificada suporta um ou mais substituintes. O termo "não substituído" significa que o grupo especificado não tem qualquer substituinte. O termo "opcionalmente substituído" significa que o grupo especificado é não substituído ou substituído por um ou mais substituintes. Sempre que o termo "substituído" é utilizado para descrever um sistema estrutural, a substituição destina-se a ocorrer em qualquer posição permitida pela valência no sistema.
[0057] Qualquer fórmula aqui descrita destina-se a representar um composto de fórmula estrutural bem como certas variantes ou formas. Por exemplo, uma fórmula fornecida aqui pretende incluir uma forma racêmica, ou um ou mais isômeros enantioméricos, diastereoméricos, ou isômeros geométricos, ou uma mistura dos mesmos. Além disso, qualquer fórmula aqui apresentada pretende referir- se também a um hidrato, solvato ou polimorfo de tal composto, ou uma mistura dos mesmos.
[0058] Qualquer fórmula aqui apresentada também se destina a representar as formas não marcadas assim como as formas marcadas isotopicamente dos compostos. Os compostos marcados isotopicamente têm estruturas representadas pelas fórmulas aqui indicadas, exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômica ou número de massa selecionado. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor, 2 3 11 13 14 15 18 17 cloro, e iodo, tais como H, H, C, C, C, N, O, O, 31 32 35 18 36 125 P, P, S, F, C , e I, respect vamente. Ta s compostos marcados isotopicamente são úteis em estudos metabólicos (de preferência com 14C), estudos cinéticos de reação (com, por exemplo 2H ou 3H), detecção ou técnicas de imagem [como a tomografia por emissão de pósitron (PET) ou tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT)], incluindo ensaios de distribuição em tecido em substrato ou fármaco, ou no tratamento radioativo de pacientes. Em particular, um composto marcado 18F ou 11C pode ser, particularmente, preferido para estudos PET ou SPECT. Os estudos PET e SPECT podem ser realizados como descritos, por exemplo, por Brooks, D.J., “Positron Emission Tomography and Single-Photon Emission Computed Tomography in Central Nervous System Drug Development,” NeuroRx 2005, 2(2), 226-236, e as referências citadas. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados, tais como o deutério (isto é, 2H) pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, aumentada em meia-vida in vivo ou requisitos de dosagem reduzidos. Os compostos marcados isotopicamente desta invenção e seus pró-fármacos podem ser, geralmente, preparados por realização dos procedimentos revelados nos Esquemas ou nos exemplos e preparações a seguir descritas, substituindo um reagente isotopicamente marcado prontamente disponível por um reagente não isotopicamente marcado.
[0059] A nomenclatura "Ci-j" com j>i, quando aqui aplicada a uma classe de substituintes, destina-se a referir-se às modalidades desta invenção, pelas quais todos ou cada um dos números de membros de carbono, a partir de i a j incluindo i e j, é realizada de forma independente. A título de exemplo, o termo C1-3 refere-se, independentemente, às modalidades que têm um membro de carbono (C1), modalidades que têm dois membros de carbono (C2) e modalidades que têm três membros de carbono (C3).
[0060] Qualquer disubstituído referido aqui pretende abranger as várias possibilidades de fixação, quando mais do que uma de tais possibilidades são permitidas. Por exemplo, a referência para disubstituídos - AB-, onde A ± B, refere-se aqui a tais disubstituídos com A ligado a um primeiro membro substituído e B ligado a um segundo membro substituído, e também se refere a tais disubstituídos com A ligado ao segundo membro substituído e B ligado ao primeiro membro substituído.
[0061] A invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos representados pela Fórmula (I), de preferência, um dos descritos acima e dos compostos específicos aqui exemplificados, e composições farmacêuticas que compreendem tais sais, e métodos de utilização de tais sais.
[0062] Um "sal farmaceuticamente aceitável" pretende significar um sal de um ácido ou base livre de um composto aqui representado, que é não tóxico, biologicamente tolerável, ou de outra forma, biologicamente adequado para administração ao sujeito. Ver, em geral, S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Os sais farmaceuticamente aceitáveis preferidos são aqueles que são farmacologicamente eficazes e adequados para contato com os tecidos de pacientes sem toxicidade, irritação, ou resposta alérgica indevida. Um composto aqui descrito pode possuir um grupo suficientemente ácido, um grupo suficientemente básico, ambos os tipos de grupos funcionais, ou mais do que um de cada tipo, e em conformidade reagir com um número de bases inorgânicas ou bases orgânicas, e ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, para formar um sal farmaceuticamente aceitável deste.
[0063] Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sulfatos, pirossulfatos, bissulfatos, sulfitos, bissulfitos, fosfatos, monohidrogeno-fosfatos, di-hidrogenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloretos, brometos, iodetos, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4- dioatos, hexino-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, metilssulfonatos, propilssulfonatos, besilatos, xilenossulfonatos, naftaleno- 1-sulfonatos, naftaleno-2-sulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, Y- hidroxibutiratos, glicolatos, tartaratos, e mandelatos. Listas de outros sais farmaceuticamente aceitáveis adequados são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985.
[0064] Para um composto de Fórmula (I) que contém um nitrogênio básico, um sal farmaceuticamente aceitável pode ser preparado por qualquer método adequado disponível na técnica, por exemplo, tratamento da base livre com um ácido inorgânico, tal como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfâmico, ácido nítrico, ácido bórico, ácido fosfórico, e semelhantes, ou com um ácido orgânico, como ácido acético, ácido fenilacético, ácido propiônico, ácido esteárico, ácido láctico, ácido ascórbico, maleico, ácido hidroximaleico, ácido isetiônico, ácido succínico, ácido valérico, ácido fumárico, ácido malônico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido oleico, ácido palmítico, ácido láurico, ácido piranosidílico, como ácido glucurônico ou ácido galacturônico, um ácido alfa-hidróxi, tais como ácido mandélico, ácido cítrico, ou ácido tartárico, um aminoácido, como ácido aspártico ou ácido glutâmico, um ácido aromático, como ácido benzóico, ácido 2-acetoxibenzóico, ácido naftóico, ou ácido cinâmico, um ácido sulfônico, tal como ácido laurilssulfônico, ácido p- toluenossulfônico, ácido metanossulfônico ou ácido etanossulfônico, ou qualquer mistura compatível de ácidos, tais como os indicados como exemplos aqui apresentados, e qualquer outro ácido e da mesma mistura que são considerados equivalentes ou substitutos aceitáveis à luz do nível normal de habilidade nesta tecnologia.
[0065] A invenção também se refere aos pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de Fórmula (I) e métodos de tratamento empregando tais pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis. O termo "pró-fármaco" significa um precursor de um composto designado que, seguindo à administração a um sujeito, origina o composto in vivo através de um processo químico ou fisiológico, como a solvólise ou clivagem enzimática, ou sob condições fisiológicas (por exemplo, um pró-fármaco sendo trago ao pH fisiológico é convertido para o composto de Fórmula (I)). Um "pró-fármaco farmaceuticamente aceitável" é um pró- fármaco que é não tóxico, biologicamente tolerável, e de outra forma, biologicamente adequado para administração ao sujeito. Procedimentos ilustrativos para a seleção e preparação de derivados de pró-fármaco adequados são descritos, por exemplo, em “Design of Prodrugs”, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
[0066] A presente invenção também se refere aos metabólitos farmaceuticamente ativos de compostos de Fórmula (I) e usos de tais metabólitos nos métodos da invenção. Um "metabólito farmaceuticamente ativo" significa um produto farmacologicamente ativo do metabolismo no corpo de um composto de Fórmula (I) ou um sal deste. Os pró- fármacos e metabólitos ativos de um composto podem ser determinados utilizando técnicas de rotina conhecidas ou disponíveis na técnica. Ver, por exemplo, Bertolini et al., J. Med. Chem. 1997, 40, 2011-2016; Shan et al., J. Pharm. Sci. 1997, 86 (7), 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res. 1995, 34, 220-230; Bodor, Adv. Drug Res. 1984, 13, 255-331; Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985); e Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991).
Composições farmacêuticas
[0067] Para fins de tratamento, as composições farmacêuticas compreendendo os compostos aqui descritos podem ainda compreender um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Um excipiente farmaceuticamente aceitável é uma substância que é não tóxica e, de outra forma, biologicamente adequada para administração a um sujeito. Tais excipientes facilitam a administração dos compostos aqui descritos e são compatíveis com o ingrediente ativo. Exemplos de excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem estabilizadores, lubrificantes, tensoativos, diluentes, antioxidantes, aglutinantes, agentes corantes, agentes espessantes, emulsionantes, ou agentes de modificação de sabor. Em modalidades preferidas, as composições farmacêuticas de acordo com a invenção são composições estéreis. As composições farmacêuticas podem ser preparadas utilizando técnicas de formulação conhecidas ou que estão disponíveis para os peritos na técnica.
[0068] As composições estéreis são também contempladas pela invenção, incluindo composições que estão de acordo com os regulamentos nacionais e locais que regem tais composições.
[0069] As composições farmacêuticas e os compostos aqui descritos podem ser formulados como soluções, emulsões, suspensões ou dispersões em solventes farmacêuticos adequados ou veículos, ou como pílulas, comprimidos, pastilhas, supositórios, sachês, drágeas, grânulos, pós, pós para reconstituição, ou cápsulas juntamente com veículos sólidos de acordo com métodos convencionais conhecidos na técnica para a preparação de várias formas de dosagem. As composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas por uma via adequada de distribuição, tal como oral, parentérica, retal, nasal, tópica, ou vias oculares, ou por inalação. De preferência, as composições são formuladas para administração intravenosa ou oral.
[0070] Para a administração oral, os compostos da invenção podem ser fornecidos numa forma sólida, tal como um comprimido ou cápsula, ou como uma solução, emulsão, ou suspensão. Para preparar as composições orais, os compostos da invenção podem ser formulados para obter uma dosagem de, por exemplo, de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg por dia, ou de cerca de 0,05 a cerca de 20 mg/kg por dia, ou de cerca de 0,1 a cerca de 10 mg/kg por dia. Dosagens adicionais incluem de cerca de 0,1 mg a 1 g por dia, de cerca de 1 mg a cerca de 10 mg por dia, de cerca de 10 mg a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 50 mg a cerca de 250 mg por dia, ou de cerca de 250 mg a 1 g diariamente. Os comprimidos orais podem incluir o(s) ingrediente(s) ativo(s) misturado(s) com excipientes compatíveis farmaceuticamente aceitáveis, tais como diluentes, agentes desintegrantes, agentes aglutinantes, agentes lubrificantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes. Cargas inertes adequadas incluem carbonato de sódio e de cálcio, fosfato de sódio e cálcio, lactose, amido, açúcar, glicose, metilcelulose, estearato de magnésio, manitol, sorbitol, e semelhantes. Os excipientes orais líquidos ilustrativos incluem etanol, glicerol, água e semelhantes. Amido, polivinil pirrolidona (PVP), glicolato amido de sódio, celulose microcristalina, e ácido algínico são agentes desintegrantes exemplares. Os agentes ligantes podem incluir amido e gelatina. O agente lubrificante, se presente, pode ser o estearato de magnésio, ácido esteárico, ou talco. Se desejado, os comprimidos podem ser revestidos com um material tal como monoestearato de gliceril ou diestearato de gliceril para atrasar a absorção no trato gastrointestinal, ou pode ser revestido com um revestimento entérico.
[0071] As cápsulas para administração oral incluem cápsulas de gelatina duras e macias. Para preparar cápsulas de gelatina dura, o(s) ingrediente(s) ativo(s) pode(m) ser misturado(s) com um diluente sólido, semissólido, ou líquido. As cápsulas de gelatina mole podem ser preparadas por mistura do ingrediente ativo com água, um óleo, tal como óleo de amendoim ou azeite, parafina líquida, uma mistura de mono e di-glicerídeos de ácidos graxos de cadeia curta, polietilenoglicol 400 ou propilenoglicol.
[0072] Os líquidos para administração oral podem estar na forma de suspensões, soluções, emulsões ou xaropes, ou podem ser liofilizados ou apresentados como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes da utilização. Tais composições líquidas podem conter opcionalmente: excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de suspensão (por exemplo, sorbitol, metil celulose, alginato de sódio, gelatina, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio e semelhantes); veículos não aquosos, por exemplo, óleo (por exemplo, óleo de amêndoas ou óleo de coco fracionado), propilenoglicol, álcool etílico, ou água; conservantes (por exemplo, metil ou p-hidroxibenzoato de propil ou ácido sórbico); agentes de umidificação, tais como lecitina; e, se desejado, agentes aromatizantes ou corantes.
[0073] As composições da invenção podem ser formuladas para administração retal como um supositório. Para utilização parentérica, incluindo administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intranasal ou subcutânea, os agentes da invenção podem ser proporcionados em soluções ou suspensões aquosas estéreis, tamponadas a um pH apropriado e isotonicidade ou em óleo parentericamente aceitável. Os veículos aquosos adequados incluem solução de Ringer e cloreto de sódio isotônico. Tais formas podem ser apresentadas em forma de dose unitária, como ampolas ou dispositivos descartáveis de injeção, em formas multidose, tais como frascos dos quais a dose apropriada pode ser retirada, ou numa forma sólida ou pré-concentrado que pode ser utilizado para preparar uma formulação injetável. As doses de infusão ilustrativas variam de cerca de 1 a 1000 μg/kg/minuto de agente misturado com um veículo farmacêutico durante um período que varia desde vários minutos a vários dias.
[0074] Para administração nasal, inalada, ou oral, as composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas utilizando, por exemplo, uma formulação de pulverização contendo também um veículo adequado.
[0075] Para aplicações tópicas, os compostos da presente invenção são preferencialmente formulados como cremes ou pomadas ou veículo similar adequado para administração tópica. Para administração tópica, os compostos da invenção podem ser misturados com um veículo farmacêutico a uma concentração de cerca de 0,1% a cerca de 10% do fármaco ao veículo. Outro modo de administrar os agentes da presente invenção podem utilizar uma formulação adesiva para efetuar a administração transdérmica.
[0076] Como aqui utilizados, os termos "tratar" ou "tratamento" abrangem tanto tratamento "preventivo" quanto "curativo". O tratamento "preventivo" se destina a indicar um adiamento do desenvolvimento de uma doença, um sintoma de uma doença, ou condição médica, suprimir os sintomas que podem aparecer, ou reduzir o risco de desenvolvimento ou recorrência de uma doença ou sintoma. O tratamento "curativo" inclui a redução da gravidade ou supressão do agravamento de uma doença, sintoma, ou condição existente. Assim, o tratamento inclui melhorar ou prevenir o agravamento dos sintomas da doença já existentes, prevenir sintomas adicionais de ocorrer, melhorar ou prevenir as causas sistêmicas inerentes de sintomas, inibir o distúrbio ou doença, por exemplo, arrastar o desenvolvimento do distúrbio ou doença, aliviar o distúrbio ou doença, causar a regressão do distúrbio ou doença, aliviar uma condição causada pela doença ou distúrbio, ou parar os sintomas da doença ou distúrbio.
[0077] O termo "sujeito" refere-se a um paciente mamífero em necessidade de tal tratamento, tal como um humano.
[0078] As doenças neurodegenerativas exemplificativas que são caracterizadas pela agregação de proteínas incluem a Doença de Alzheimer, Doença de Parkinson, Demência fronto-temporal, Demência com Corpos de Lewy (Lewy doença do corpo), Doença de Parkinson com demência, Atrofia Múltipla sistémica, Esclerose Lateral Amiotrófica, e doença de Huntington, bem como cânceres e doenças inflamatórias.
[0079] Em um aspecto, os compostos e as composições farmacêuticas da invenção visam especificamente α- sinucleína, β-amil0ide, e/ou agregados de proteína tau. Assim, estes compostos e composições farmacêuticas podem ser utilizadas para prevenir, reverter, reduzir ou inibir à agregação de a-sinucleína, β-amil0ide, e/ou proteínas tau, e são utilizados nos métodos da invenção para o tratamento de doenças neurológicas degenerativas relacionadas com ou induzidas por agregação, por exemplo, tais como a agregação de a-sinucleína, β-amil0ide, e/ou proteínas tau. De preferência, os métodos das doenças neurodegenerativas alvo da invenção associadas com agregação de a-sinucleína, β- amilóide, e/ou a proteína tau. Em modalidades preferidas, os métodos de tratamento direcionam-se à doença de Parkinson, doença de Alzheimer, doença de corpos de Lewy, ou atrofia múltipla do sistema. Em outras modalidades, os métodos direcionam-se ao câncer ou melanoma. Os compostos, composições e método da presente invenção também são usados para mitigar os efeitos deletérios que são secundários à agregação de proteínas, tais como a morte de células neuronais.
[0080] Em alguns aspectos, os compostos, composições e métodos da invenção são utilizados para direcionar a agregação de α-sinucleina (SYN). Em aspectos alternativos, os compostos, composições e métodos da invenção são utilizados para direcionar a agregação de Aβ.
[0081] Nos métodos inibidores da invenção, uma "quantidade eficaz" significa uma quantidade suficiente para reduzir, atrasar a progressão de, ou reverter à agregação da proteína ou peptídeo. Medição da quantidade de agregação pode ser realizada por métodos analíticos de rotina, tais como os descritos abaixo. Tal modulação é útil em uma variedade de configurações, incluindo ensaios in vitro. Em tais métodos, a célula é, de preferência, uma célula nervosa.
[0082] Em métodos de tratamento de acordo com a invenção, uma "quantidade eficaz" significa uma quantidade ou dose suficiente para geralmente promover o benefício terapêutico desejado em sujeitos necessitando tal tratamento. As quantidades eficazes ou doses dos compostos da invenção podem ser determinadas através de métodos de rotina, tais como modelagem, escalonamento da dose, ou ensaios clínicos, tendo em conta fatores de rotina, por exemplo, o modo ou rota de administração ou distribuição de fármacos, a farmacocinética do agente, da gravidade e curso da infecção, o estado de saúde do paciente, condição e peso, e o julgamento do médico assistente. Uma dose exemplar está na faixa de cerca de 1 ug a 2 mg de agente ativo por quilograma de peso corporal do sujeito por dia, de preferência, cerca de 0,05 a 100 mg/kg/dia, ou cerca de 1 a 35 mg/kg/dia, ou cerca de 0,1 a 10 mg/kg/dia. Em modalidades alternativas, uma dose exemplar está na faixa de cerca de 1 mg a cerca de 1 g por dia, ou cerca de 1-500, 1-250, 1-100, 1-50, 50-500, ou 250-500 mg por dia. A dosagem total pode ser administrada em unidades de dosagem única ou dividida (por exemplo, BID, TID, QID).
[0083] Uma vez que a melhoria da doença do paciente tenha ocorrido, a dose pode ser ajustada para o tratamento preventivo ou tratamento de manutenção. Por exemplo, a dosagem ou a frequência de administração, ou ambas, podem ser reduzidas como uma função dos sintomas, para um nível em que o efeito terapêutico ou profilático desejado é mantido. Claro que, se os sintomas foram aliviados para um nível adequado, o tratamento pode cessar. Os pacientes podem, contudo, requerer um tratamento intermitente numa base de longo prazo após qualquer recorrência dos sintomas. Os pacientes também podem exigir o tratamento crônico em uma base em longo prazo.
Combinações de fármacos
[0084] Os compostos da invenção aqui descritos podem ser utilizados em composições ou métodos farmacêuticos em combinação com um ou mais ingredientes adicionais ativos no tratamento de perturbações neurodegenerativas. Outros ingredientes ativos adicionais para aplicações de câncer incluem outros terapêuticos ou agentes do câncer mitigando os efeitos adversos de agentes quimioterápicos para câncer. Tais combinações podem servir para aumentar a eficácia, melhorar outros sintomas da doença, reduzir um ou mais efeitos secundários, ou diminuir a dose necessária de um composto da invenção. Os ingredientes ativos adicionais podem ser administrados numa composição farmacêutica separada a partir de um composto da presente invenção ou pode ser incluído com um composto da presente invenção numa única composição farmacêutica. Os ingredientes ativos adicionais podem ser administrados em simultâneo com, antes de, ou após a administração de um composto da presente invenção.
[0085] Os agentes de combinação incluem ingredientes ativos adicionais são aqueles que são conhecidos ou descobertos para ser eficaz no tratamento de perturbações neurodegenerativas, incluindo aqueles ativos contra outro alvo associado com a doença, tal como, mas não limitados aos, a) compostos que direcionam proteína de dobramento incorreto (tais como os fármacos que reduzem a produção destas proteínas, que aumentam sua recarga ou que alteram a sua agregação e/ou propagação); b) compostos que tratam os sintomas de tais distúrbios (por exemplo, terapias de substituição de dopamina); e c) fármacos que atuam como neuroprotetores por mecanismos complementares (por exemplo, aquela autofagia de alvo, aqueles que são antioxidantes, e os que atuam por outros mecanismos, tais como antagonistas de adenosina A2A).
[0086] Por exemplo, as composições e as formulações da invenção, bem como os métodos de tratamento, podem ainda compreender outros medicamentos ou produtos farmacêuticos, como, por exemplo, outros agentes ativos úteis para o tratamento ou paliativo para uma doença neurológica degenerativa relacionada ou causada pela agregação de proteínas, por exemplo, sinucleína, beta-amilóide e/ou agregação de proteínas tau, por exemplo, doença de Parkinson, doença de Alzheimer (AD), doença do corpo de Lewy (LBD) e atrofia múltipla de sistema (MSA), ou sintomas ou condições relacionadas. Por exemplo, as composições farmacêuticas da invenção podem compreender adicionais um ou mais de tais agentes ativos, e métodos de tratamento podem compreender adicionalmente à administração de uma quantidade eficaz de um ou mais de tais agentes ativos. Em certas modalidades, os agentes ativos adicionais podem ser antibióticos (por exemplo, peptídeos antibacterianos ou bacteriostáticos ou proteínas), por exemplo, aqueles eficazes contra bactérias gram positivas ou negativas, fluidos, citoquinas, agentes imunorreguladores, agentes anti-inflamatórios, agentes de ativação complementar, tais como peptídeos ou proteínas que compreendem domínios de do tipo colágeno ou domínios do tipo do fibrinogênio (por exemplo, uma ficolina), domínios de ligação de carboidratos, e semelhantes e suas combinações. Os agentes ativos adicionais incluem aqueles que são úteis em tais composições e métodos incluem fármacos de terapia de dopamina, inibidores de catecol-O-metil-transferase (COMT), inibidores de monoamina oxidase, intensificadores cognitivos (tais como inibidores de acetilcolinesterase ou memantina), antagonistas de receptores de adenosina 2A, inibidores de beta-secretase ou inibidores de gama- secretase. Em modalidades particulares, pelo menos, um composto da presente invenção pode ser combinado numa composição farmacêutica ou um método de tratamento com um ou mais medicamentos selecionados a partir do grupo que consiste em: a tacrina (Cognex), donepezil (Aricept), rivastigmina (Exelon) galantamina (Reminyl), a fisostigmina, neostigmina, Icopezil (CP-118954, 5,7- dihidro-3-[2-[1-(fenilmetil)-4-piperidinil]etil]-6H- pirrolo-[4,5-f-]-1,2-benzisoxazol-6-ona), ER-127528 cloridrato de (4-[(5,6-dimetoxi-2-fluoro-l-indanon)-2- il]metil-1-(3-fluorobenzil)piperidina), zanapezil (TAK-147; fumarato de 3-[1-(fenilmetil)piperidin-4-il]-1-(2,3,4,5- tetrahidro-1H-1-benzazepin-8-il)-1-propano), Metrifonato (T-588; cloridrato de (-)-R-alfa.-[[2- (dimetilamino)etoxi]metil]benzo[b]tiofeno-5-metanol), FK- 960 (N-(4-acetil-1-piperazinil)-p-fluorobenzamida-hidrato), TCH-346 (N-metil-N-2-piropinildibenz)[b,f]oxepina-10- metanamina), SDZ-220-581 ácido ((S)-alfa-amino-5- (fosfonometil)-[1,1'-bifenil]-3-propiônico), memantina (Namenda/Exiba) e 1,3,3,5,5-pentametilciclohexan-1-amina (Neramexano), tarenflurbil (Flurizan), tramiprosato (Alzhemed), clioquinol, PBT-2 (um derivado de 8- hidroxiquinilona), 1-(2-(2-naftil)etil)-4-(3- trifluorometilfenil)-1,2,3,6-tetrahidropiridina, Huperzina A, posatirelin, leuprolida ou seus derivados, isproniclina, ácido (3-aminopropil)(n-butil)fosfínico (SGS-742), N-metil- 5-(3-(5-isopropoxipiridinil))-4-penten-2- amina(isproniclina), 1-decanamínio, N-(2-hidroxi-3- sulfopropil)-N-metil-N-octil-, sal interno de (ZT-1), salicilatos, aspirina, amoxiprina, benorilato, salicilato de colina de magnésio, diflunisal, faislamina, salicilato de metil, salicilato de magnésio, salicilato de salicil, diclofenaco, aceclofenaco, acemetacina, bromfenaco, etodolaco, indometacina, nabumetona, sulindaco, tolmetina, ibuprofeno, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, flurbiprofeno, cetoprofeno, cetorolaco, loxoprofeno, naproxeno, ácido tiaprofênico, suprofeno, ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico, fenilbutazona, azapropazona, metamizol, oxifenbutazona, sulfinprazona, piroxicam, lornoxicam, meloxicam, tenoxicam, celecoxibe, etoricoxibe, lumiracoxibe, parecoxibe, rofecoxibe, valdecoxibe, nimesulida, ácidos arilalcanóicos, ácidos 2-arilpropiônicos (profenos), ácidos N-arilantranílicos (ácidos fenâmicos), derivados de pirazolidina, oxicamos, inibidores COX-2, sulfonanilidas, ácidos graxos essenciais, e Minozac hidrato (2-(4-(4-metil-6-fenilpiridazin-3-il)piperazin-1- il)pirimidina), ou uma combinação dos mesmos.
[0087] Os agentes potenciais de combinação para terapias de câncer podem incluir, por exemplo, inibidores da proteína e lipídio quinase (por exemplo, PI3K, B-Raf, BCR/ABL), intensificadores de tratamento por radiação, ligantes de microtúbulos (por exemplo, taxol, vinblastina), inibidores de metabolismo celular, intercaladores de DNA, inibidores da topoisomerase (por exemplo, doxorrubicina), e agentes alquilantes de DNA.
Ensaios
[0088] Os compostos aqui descritos podem ser utilizados em aplicações de pesquisa, incluindo sistemas experimentais in vitro, in vivo ou ex vivo. Os sistemas experimentais podem incluir, sem limitação, as amostras de células, amostras de tecido, componentes celulares ou misturas de componentes celulares, inteiros ou parciais, órgãos ou organismos. As aplicações de pesquisa incluem, sem limitação, o uso como reagentes de ensaio, elucidação das vias bioquímicas, ou a avaliação dos efeitos de outros agentes no sistema experimental na presença ou ausência de um ou mais compostos aqui descritos.
[0089] Os compostos aqui descritos também podem ser utilizados em ensaios bioquímicos. Em algumas modalidades, um composto aqui descrito pode ser incubado com uma amostra de tecido ou célula a partir de um objeto para avaliar a resposta potencial do sujeito à administração do composto, ou para determinar qual composto aqui descrito produz o efeito ótimo num sujeito específico ou conjunto de sujeitos. Tal ensaio envolveria (a) obter uma amostra de células ou amostra de tecido de um sujeito, em que a modulação de um ou mais biomarcadores pode ser ensaiada; (b) administrar um ou mais compostos aqui descritos para a amostra de células ou amostra de tecido; e (c) determinar a quantidade de modulação de um ou mais biomarcadores após a administração do composto, em comparação com o estado do biomarcador antes da administração do composto. Opcionalmente, após a etapa (c), o ensaio envolveria uma etapa adicional (d) selecionar um composto para uso no tratamento de uma doença ou condição médica associada com a agregação de proteínas com base na quantidade de modulação determinada na etapa (c).
Síntese química
[0090] Exemplos de entidades químicas úteis nos métodos da invenção serão agora descritos por referência aos esquemas ilustrativos de síntese para sua preparação geral abaixo e os exemplos específicos que se seguem. Os artesãos irão reconhecer que, para se obter os vários compostos aqui, os materiais de partida podem ser adequadamente selecionados de modo que os substituintes desejados em última instância serão realizados através do esquema reacional com ou sem proteção, conforme apropriado, para se obter o produto desejado. Alternativamente, pode ser necessário ou desejável empregar, no lugar do substituinte final desejado, um grupo adequado que pode ser realizado através do esquema de reação e substituídos, se apropriado com o substituinte desejado. Além disso, um perito na técnica reconhecerá que as transformações mostradas nos esquemas abaixo podem ser realizadas em qualquer ordem que seja compatível com a funcionalidade dos grupos pendentes particulares. Cada uma das reações descritas nos esquemas gerais é, de preferência, realizada a uma temperatura de cerca de 0°C até à temperatura de refluxo do solvente orgânico utilizado. A menos que especificado em contrário, as variáveis são como definidas acima em referência à Fórmula (I). Os compostos marcados isotopicamente, como aqui descritos são preparados de acordo com os métodos descritos a seguir, utilizando materiais de partida adequadamente rotulados. Tais materiais estão, geralmente, disponíveis a partir de fornecedores comerciais de reagentes químicos marcados radioativamente. Esquema A
Figure img0011
[0091] Os compostos de Fórmula (I) são preparados como mostrados no Esquema A. Os derivados de indol Amino- etil A1 são comercialmente disponíveis ou são preparados de acordo com o Esquema B. Os compostos A1 são acoplados com compostos de acil ativado A2, em que X é, por exemplo, -OH ou -Cl, sob condições convencionais de formação de amida para produzir compostos de Fórmula (I). Esquema B
Figure img0012
[0092] Como se mostra no Esquema B, indóis A1 substituídos são preparados a partir de metil-indols B1 por acilação seguidos por aminação redutiva. Esquema C
Figure img0013
[0093] Compostos heterocíclicos C4 são preparados de acordo com o Esquema C. Certos compostos A, C1, A-CO2R (onde R é H ou alquil C1-4), e C2 estão comercialmente disponíveis. Em algumas modalidades, heterociclos A são halogenados para formar compostos de halogênio C1, e, em seguida, são acilados para formar compostos bis- funcionalizados C2. Em outras modalidades, os compostos A- CO2R são halogenados para formar compostos C2. Acoplamento com aminas HNR3R4 sob condições de acoplamento amida padrão fornece compostos C3. A hidrólise de ésteres de C3 produzem aminoácidos C4, que podem ser usados em reações de acoplamento, como mostrado no Esquema A. Esquema D
Figure img0014
[0094] Como mostrado em Esquema D, os compostos metil-heterocíclico D1 são homologados com, por exemplo, paraformaldeído, para proporcionar compostos de hidroxietil D2. A ativação do grupo hidroxil como, por exemplo, um haleto ou tosilato, e deslocamento com HNR3R4, os produz compostos amino D3. A acilação do anel heterocíclico fornece ésteres D4, e hidrólise gera aminoácidos D5.
Exemplos
[0095] Os exemplos seguintes são oferecidos para ilustrar, mas não para limitar a invenção. Um especialista na técnica irá reconhecer que as seguintes reações sintéticas e esquemas podem ser modificados por escolher os materiais de partida adequados e reagentes a fim de acessar outros compostos de Fórmula (I). Exemplo 1:N- (1- (1H-Indol-3-il)hexan-2-il) -2- (4- metilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida.
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Etapa 1.
Figure img0016
[0096] A uma solução do composto 1A (6 g, 45,8 mmol) em 1,2-dicloroetano seco (80 mL) foi adicionado AlCl3 (18,3 g, 137,4 mmol) a 0°C. A mistura foi aquecida a 25°C e agitada durante 30 min. A mistura foi resfriada a 0°C, e o composto de 1B (6,2 g, 51,3 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada a 25°C durante 48 h. A mistura de reação foi vertida lentamente em água gelada e extraída com diclorometano (DCM, três vezes (3x)). A camada orgânica foi lavada com salmoura (3x), seca sobre Na2SO4 e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna (20:1 de éter de petróleo/EtOAc) para fornecer o composto 1C (4,8 g, 49%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,16 (br s, 1H), 7,39 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,23 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,15 (s, 1H), 3,83 (s, 2H), 2,50 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 1,541,63 (m, 2H), 1,24-1,29 (m, 2H), 0,86 (t, J = 7,6 Hz, 3H). Etapa 2.
Figure img0017
[0097] Uma mistura de composto 1C (4,8 g, 22,3 mmol) em MeOH (150 mL) foi adicionada AcONH4 (3,35 g, 44,6 mmol) e NaBH3CN (2,8 g, 44,6 mmol). A mistura foi submetida ao refluxo durante 24 h. A mistura foi concentrada, e o resíduo foi dissolvido em DCM (150 mL), lavado com salmoura (3x), seco sobre Na2SO4, e concentrado para fornecer o composto bruto 1E (2,4 g, 50%) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,09 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,03-7,18 (m, 2H), 6,98 (s, 1H), 3,01-3,03 (m, 1H), 2,89 (dd, J = 14,0, 4,0 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 14,0, 8,8 Hz, 1H), 1,18-1,50 (m, 8H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Etapa 3.
Figure img0018
[0098] Uma mistura de composto 1E (2,2 g, 10,0 mmol), N-metilpiperazina (1,1 g, 11,0 mmol), e K2CO3 (3,4 g, 24,9 mmol) em acetonitrila (70 mL) foi agitada a 80°C durante 24 h. A mistura foi concentrada e diluída com H2O e extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas e, em seguida, concentradas para fornecer o composto 1G (2,5 g,> 100%) como um sólido castanho. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,85 (s, 1H), 4,28 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,58 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 2,50 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 2,33 (s, 3H), 1,32 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Etapa 4.
Figure img0019
[0099] Uma mistura do composto 1G (2,0 g, 8,3 mmol) em THF (20 mL) foi adicionada solução de NaOH (1,33 g, 33,2 mmol) em H2O (40 mL). A mistura foi agitada durante 24 h a 80°C. A mistura foi concentrada para remover o THF e extraída com n-BuOH. A camada orgânica foi seca e concentrada para fornecer o composto 1H (1,38 g, 66,7%) como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7,55 (s, 1H), 3,49-3,52 (m, 4H), 2,53-2,56 (m, 4H), 2,36 (s, 3H).
[00100] Etapa 5. A uma mistura de composto do 1H (1,1 g, 5,1 mmol) em CH2Cl2 (50 mL) e THF (5 mL) foi adicionado o composto 1D (2 g, 8,09 mmol), seguido de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il- oxitripirrolidinofosfônio (PyBOP, 3,18 g, 6,12 mmol) e DIPEA (2,6 g, 20,4 mmol). Após 24 h a 25°C sob N2, a mistura foi diluída com H2O (40 mL) e extraída com DCM (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, concentradas, e o resíduo purificado por HPLC preparativo (HPLC preparativo Shimadzu LC-8A, coluna C18Luna (2), 26%-56% de acetonitrila em NH4OAc em 20 min em 80 mL/min) para fornecer Exemplo 1 (576 mg, 27%) como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,23 (s, 1H), 7,39 (1H, s), 7,38 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,07-7,21 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 5,50 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,40-4,46 (m, 1H), 3,56 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 3,0-3,1 (m, 2H), 2,52 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,36 (s, 3H), 1,26-1,60 (m, 6H), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS: 100% (M+1+): 426,2.
Síntese Alternativa
[00101] A uma mistura do composto 3A (400 g, 0,98 mol, ver abaixo) e K2CO3 (340 g, 2,5 mol) em CH3CN (3 L) foi adicionado o composto 1F (197 g, 1,97 mol). A mistura foi agitada durante 12h a 80°C sob uma atmosfera de N2. A mistura foi diluída com água (4 L) e extraída com DCM (4 L x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi lavado com 1:1 éter de petróleo/acetato de etil para fornecer Exemplo 1 (200 g, 44%) como um sólido branco. 4M de HCl em acetato de etil (235 mL) foi adicionado a uma solução do Exemplo 1 (200 g, 0,47 mol) em DCM (2 L). A mistura foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente, o solvente foi concentrado, e o resíduo foi recristalizado a partir de metil t-butil éter (1 L). O sólido resultante foi coletado por filtração e seco sob pressão reduzida a 50°C para fornecer o sal de HCl do Exemplo 1 (210 g, 92%). Exemplo 2: N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(4-metilpiperazin-1- il)tiazol-5-carboxamida.
Figure img0020
Etapa 1.
Figure img0021
[00102] Uma solução de NaOH (4,1 g, 102 mmol) em H2O (100 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução do composto 2A (20 g, 84,7 mmol) em tetrahidrofurano (THF, 100 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 10°C durante 1 h. A mistura foi neutralizada com HCl (6 M) e extraída com EtOAc (3x). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, e concentrada para se obter o composto 2B (17,7 g, 100%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,21 (s, 1H). Etapa 2.
Figure img0022
[00103] 1,1-carbonil-diimidazol (2,06 g, 12,75 mmol) foi adicionado a uma mistura do composto 2B (2,6 g, 12,5 mmol) em THF (16 mL). A mistura foi agitada durante 1h à temperatura ambiente, e, em seguida, foi tratada com trietilamina (TEA, 2,53 g, 25 mmol) e o composto 2C (2 g, 12,5 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com 1 M de HCl (2x) e salmoura, depois seca sobre Na2SO4, e concentrada para obter o composto 2D (4,41 g,> 100%) como um sólido amarelo.
[00104] Etapa 3. A uma mistura de composto 2D (1 g, 5,7 mmol) e K2CO3 (1,0 g, 7,2 mmol) em CH3CN (6 mL) foi adicionada N-metilpiperazina (0,6 g, 5,7 mmol). A mistura foi agitada durante 12 h a 80°C sob uma atmosfera de N2. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com DCM (5x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas para fornecer um sólido amarelo (0,8 g), que foi lavado com metil butil terciário éter (5 mL) para fornecer o Exemplo 2 (0,3 g, 29%) como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,37 (m, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,56 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,38-7,35 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 7,07 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,98 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 3,48-3,44 (m, 6H), 2,90 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,42-2,39 (m, 2H), 2,22 (s, 3H). MS: (M+H+): 370. Exemplo 3 : N-(1-(1H-Indol-3 -il)hexan-2-il)-2 -(piperazin-1- il)tiazol-5-carboxamida.
Figure img0023
Etapa 1.
Figure img0024
[00105] 1,1-carbonil-diimidazol (4,04 g, 24,96 mmol) foi adicionado a uma mistura de composto 2B (5,19 g, 24,96 mmol) em THF (40 mL). A mistura foi agitada durante 1 h à temperatura ambiente e, em seguida, foi tratada com TEA (7,56 g, 74,88 mmol) e o composto 1D (5,4 g, 24,96 mmol). Após 12 horas à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com EtOAc, lavada sucessivamente com 1 M de HCl (2x) e salmoura, seca sobre Na2SO4, e concentrada para obter o composto 3A (7,74 g, 76%) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 8,36 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,97 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,95 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,31-4,28 (m, 1H), 3,0-2,97 (m, 1H), 1,75-1,50 (m, 2H), 1,45-1,25 (m, 4H), 2,22 (t, J = 6,8 Hz, 3H). MS: (M+H+): 406, 408. Etapa 2.
Figure img0025
[00106] A uma mistura de composto 3A (2 g, 5,7 mmol) e K2CO3 (1,77 g, 12,8 mmol) em CH3CN (12 mL) foi adicionado o composto 3B (0,92 g, 4,9 mmol). Após 12 h a 80°C sob uma atmosfera de N2, adicionou-se água (30 mL) e a mistura foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, concentradas, e purificadas por cromatografia em coluna (10 a 67% de EtOAc/éter de petróleo) para fornecer o composto 3C (2 g, 79%) como um sólido amarelo. Este composto foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem caracterização.
[00107] Etapa 3. Uma solução do composto 3C (1 g, 2,0 mmol) em metanol (10 mL) foi tratada com HCl (10 mL, 4 M em metanol). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 3 h, o solvente foi removido e o resíduo foi vertido em água gelada (20 mL), ajustado o pH para 9 com NaHCO3, e extraído com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas para fornecer um sólido amarelo (0,45 g). A purificação por cromatografia em coluna (éter de petróleo/DCM/MeOH 50/50/0 a 0/90/10) forneceu o Exemplo 3 (0,32 g, 39%) como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,16 (s, 1H), 7,64 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,39-7,36 (m, 2H), 7,18 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,13 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 5,53 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,46-4,38 (m, 1H), 3,58-3,49 (m, 4H), 3,062,96 (m, 6H), 2,05 (s, 1H), 1,65-1,60 (m, 1H), 1,48-1,32 (m, 5H), 0,90-0,86 (m, 3H). MS: (M+H+): 412. Exemplo 4 :N-(2- (1H-indol-3-il) etil) - 2- (2 - (4- metilpiperazin-1-il)etil)tiazol-5-carboxamida.
Figure img0026
Etapa 1.
Figure img0027
[00108] Uma mistura do composto 4A (50 g, 0,5 mol) e paraformaldeído (50 g) num tubo selado foi agitada a 140°C durante 3h. A mistura de reação foi purificada por cromatografia em coluna (50% DCM/EtOAc) para originar o composto 4b (27 g, 41%) como um óleo amarelo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,62 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 3,91-3,98 (m, 2H), 3,23-3,28 (m, 2H). Etapa 2.
Figure img0028
[00109] A uma solução do composto 4B (27 g, 0,2 mmol) em THF (100 mL) foi adicionada uma solução de NaOH (16,7 g, 0,4 mol) em água (100 mL) a 0°C. Depois de agitar durante 10 minutos, cloreto de 4-metilbenzeno-1-sulfonil (59,5 g, 0,3 mol) foi adicionado em porções. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante um total de 2 h. A mistura foi extraída com EtOAc (3x). A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, concentrada, e purificada por cromatografia em coluna (hexano/EtOAc = 2:1) para fornecer o composto 4C (32 g, 54%) como um óleo incolor. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,75 (2H, d, J = 8 Hz, 2H), 7,65 (1H, d, J = 4 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 4 Hz, 1H), 4,40 (t, J = 8 Hz, 2H), 3,80 (t, J = 8 Hz, 2H), 2,45 (s, 3H). Etapa 3.
Figure img0029
[00110] A uma solução do composto 4C (32 g, 0,11 mol) em acetonitrila(300 mL) foi adicionada N- metilpiperazina (16,9 g, 0,16 mol) e Cs2CO3 (55 g, 0,16 mol) . A mistura foi agitada a 60°C durante a noite, em seguida, a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (DCM/MeOH = 10:1) para fornecer o composto 4D (14 g, 47%) como um óleo amarelo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,67 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,21 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,79 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,59 (s, 4H), 2,50 (s, 4H), 2,31 (s, 3H). Etapa 4.
Figure img0030
[00111] A uma solução do composto 4D (14 g, 66 mmol) em THF anidro (70 mL) foi adicionado n-BuLi (32 mL, 80 mmol) gota a gota a -78°C. A mistura foi agitada a esta temperatura durante 30 min, em seguida, carbonocloridrato de metil (7,52 g, 80 mmol) foi adicionado gota a gota à solução na mesma temperatura. A mistura foi agitada durante 3 h, aquecendo até à temperatura ambiente durante esse tempo. A mistura foi diluída com solução aquosa saturada NH4Cl (50 mL), extraída com EtOAc, lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, e concentrada para fornecer o composto 4E (14 g, 78%). Este produto bruto pode ser utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,26 (s, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,19 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,58 (s, 4H), 2,49 (s, 4H), 2,17 (s, 3H). Etapa 5.
Figure img0031
[00112] A uma solução do composto 4E (14 g, 52 mmol) em MeOH (100 mL) foi adicionada uma solução de NaOH (3,12 mL, 78 mmol) em água (39 mL). Após 3 h à temperatura ambiente, a mistura foi concentrada e lavada com EtOAc (30 mL). A fase aquosa foi ajustada a pH = 5-6 com 1N HCl e extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, e concentradas para fornecer o composto 4F como um sólido cor de laranja (12 g, 92%). Este produto em bruto pode ser utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.
[00113] Etapa 6. Uma solução do composto 4F (0,8 g, 3,1 mmol) em DCM (2 mL) e THF (10 mL) foi tratada com iodeto de 2-cloro-1-metil-piridínio (reagente de Mukaiyama, 1,0 g, 3,8 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (DIPEA, 1,5 g, 16 mmol) e, em seguida, agitada durante 10 min. A mistura foi, então, tratada com 2-(1H-indol-3-il)etanamina (0,5 g, 3,1 mmol) e a mistura foi agitada a 50°C durante 3 h. O precipitado resultante foi separado por filtração e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etil, lavado com água (10 mL) e salmoura (10 mL), seco sobre Na2SO4, e concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Shimadzu LC-8A, Gemini C18, 12-42% de CH3CN em solução aquosa de NH4OH a 0,04% em 20 min a 80 mL/min) para fornecer o Exemplo 4 (200 mg, 16%) como um sólido amarelo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,10 (s, 1H), 7,81 (1H, s, 1H), 7,65 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,21 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,08 (s, 1H), 5,99 (br s, 1H), 3,77 (q, J = 6,2 Hz, 2H), 3,16 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 3,10 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,75 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,58 (br s, 4H), 2,49 (br s, 4H), 2,32 (s, 3H). Exemplo 5 :N- (1- (1H-Indol-3-il)hexan-2-il) -2- (2- (4- metilpiperazin-1-il)etil)tiazol-5 -carboxamida.
Figure img0032
[00114] Uma solução de composto 4F (1,2 g, 5 mmol) em DCM (2 mL) e THF (10 mL) foi tratada com o reagente de Mukaiyama (1,65 g, 6,5 mmol) e DIPEA (1,9 g, 20 mmol) e, em seguida, agitada durante 10 min. A mistura foi, em seguida, tratada com o composto de 1D (1,2 g, 5 mmol) e foi agitada a 50°C durante 3h. O precipitado resultante foi separado por filtração e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etil (30 mL), lavado com água (10 mL) e salmoura (10 mL), seco sobre Na2SO4, e concentrado. A purificação por HPLC preparativa (Shimadzu LC-8A, 25-55% de CH3CN em solução aquoso de NH4OH a 0,04% em 20 min a 80 mL/min Gemini C-18,) forneceu o Exemplo 5 (250 mg, 14%) como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,10 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,64 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,19-7,21 (m, 1H), 7,13-7,14 (m, 1H), 5,13 (br s, 1H), 4,41-4,45 (m, 1H), 3,13-3,18 (m, 1H), 3,05-3,09 (m, 1H), 2,74-2,77 (m, 1H), 2,58 (br s, 4H), 2,49 (br s, 4H), 2,32 (s, 3H), 1,63-1,70 (m, 1H), 1,49-1,54 (m, 1H), 1,34-1,39 (m, 4H), 0,89 (t, J = 4 Hz, 3H). Exemplo 6 :N- (1- (1H-Indol-3-il)hexan-2-il) -2- (4- metilpiperazin-1-il)oxazol-5 -carboxamida.
Figure img0033
Etapa 1.
Figure img0034
[00115] A uma solução do composto 6A (15,0 g, 106 mmol) em THF (150 mL) foi adicionada gota a gota hexametil dissilazida de lítio (178 mL, 170 mmol) a -60°C. A solução foi agitada a -50°C durante 1 h. Em seguida, o hexacloroetano (37,8 g, 160 mmol) foi adicionado à solução. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h. A reação foi resfriada instantaneamente por solução aquosa saturada de NH4Cl (50 mL) e extraída com EtOAc (50 mL). A camada orgânica foi separada, seca sobre Na2SO4, concentrada sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto 6B (10 g, 56%) como um óleo incolor. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,71 (s, 1H), 3,39 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,38 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Etapa 2.
Figure img0035
[00116] Uma mistura do composto 6B (5,5 g, 31,3mmol), N-metilpiperazina (9,4 g, 94 mmol), e K2CO3 (17,3 g, 125,2 mmol) em acetonitrila (80 mL) foi aquecida em refluxo a 80°C durante 2h. A mistura foi diluída com H2O e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca sobre Na2SO4, e concentrada sob vácuo para fornecer o composto 6C (7 g, 94%) como um óleo castanho. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,52 (s, 1H), 4,32 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,66 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,48 (q, J = 4,8 Hz, 4H), 2,34 (s, 3H), 1,34 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Etapa 3.
Figure img0036
[00117] Uma mistura do composto 6C (2,0 g, 8,4 mmol) e NaOH (0,33 g, 8,4 mmol) em THF (10 mL) e H2O (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi concentrada sob vácuo para fornecer o composto 6D (3,0 g, bruto) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,26 (s, 1H), 3,51 (s, 4H), 2,49 (s, 4H), 2,23 (s, 3H).
[00118] Etapa 4. Uma mistura do composto 6D (2,0 g, 9,5 mmol), composto 1D (1,64 g, 7,6 mmol), 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida (EDC, 3,63 g, 19 mmol), 1- hidroxi-benzotriazol (HOBt, 2,57 g, 19 mmol), e TEA (1,92 g, 19 mmol) em DMF (30 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, lavada com água (3x), salmoura, seca sobre Na2SO4, e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (2-10% MeOH/DCM) para fornecer o Exemplo 6 (220 mg, 6%) como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz CDCl3) δ 8,16 (s, 1H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,39 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,10 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,08 (s, 1H), 5,69 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,47 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 3,47 (d, J = 2,0 Hz, 4H), 3,08-2,98 (m, 2H), 2,49 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 2,36 (s, 3H), 1,66-1,51 (m, 1H), 1,51-1,49 (m, 1H), 1,39-1,27 (m, 4H), 0,90 (d, J = 7,2 Hz, 3H). Exemplo 7 :N- (1- (1H-Indol-3-il)hexan-2-il) -5- (4- metilpiperazin-1-il)-1,3,4-tiadiazol-2-carboxamida.
Figure img0037
[0120] Etapa 1.
Figure img0038
[00119] Uma solução de composto 7A (60 g, 0,313 mol), K2CO3 (130 g, 0,94 mol), e metil piperazina em DMF (300 mL) foi agitada a 40°C durante 3 h. A mistura de reação foi vertida em água e extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre Na2SO4, e concentrada para fornecer o composto 7B (58,5 g, 73%) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,37-4,47 (m, 2H), 3,60-3,71 (m, 4H), 2,47-2,60 (m, 4H), 2,34 (s, 3H),1,35-1,47 (m, 3H). Etapa 2.
Figure img0039
[00120] A uma solução de composto 7B (5,0 g, 19,53 mmol) em THF (30 mL) foi adicionado solução aquosa de 1N de NaOH (30 mL) à temperatura ambiente e a mistura foi agitada durante 3 h. A mistura foi concentrada para remover o THF, ajustada a pH 8 com solução aquosa de 1N de HCl, e depois liofilizada para fornecer ácido bruto 7C (5,25 g, 100%) como um sólido amarelo (incluindo NaCl), o qual foi utilizado na etapa seguinte sem qualquer purificação. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 3,68 (m, 4H), 2,91 (m, 4H), 2,57 (s, 3H).
[00121] Etapa 3. A uma solução de composto 7C (450 mg, 2 mmol) em DMF (15 mL) e DCM (5 mL) foi adicionado EDC (400 mg, 2 mmol) e HOBt (310 mg, 2 mol) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 30 min. Composto 1D (500 mg, 2 mmol) foi adicionado a 0°C. A mistura foi agitada durante a noite a 40°C. A mistura foi diluída com H2O e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 e concentrada para fornecer o produto bruto, o qual foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/DCM/MeOH 50/50/0 a 0/10/1) e recristalizado (MeOH) para fornecer o Exemplo 7 (230 g, 15%, 2 bateladas) como um sólido amarelado. 1H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.74 (s, 1H), 8.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,05-7,02 (m, 1H), 6,96-6,93 (m, 1H), 4,14 (s, 1H), 3,50 (s, 4H), 2,99-2,84 (m, 2H), 2,42 (s, 4H), 2,21 (s, 3H), 1,57 (s, 2H), 1,251,21 (m, 4H), 0,80 (s, 3H). Exemplo 8 :N- (1- (1H-Indol-3-il)hexan-2-il) -5- (4- metilpiperazin-1-il)-4H-1,2,4-triazol-3 -carboxamida.
Figure img0040
Etapa 1.
Figure img0041
[00122] A uma mistura agitada do composto 8A (4,5 g, 35 mmol) em 1M de ácido sulfúrico (70 mL, 70 mmol) foi adicionada uma solução de nitrito de sódio (2,41 g, 52,5 mmol) em água (20 mL) gota a gota a 0°C, seguido por mais água (35 mL). Após 25 min, uma solução de KBr (8,33 g, 70 mmol) e brometo de cobre (I) (4,51 g, 10,5 mmol) em água (35 mL) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada a 20°C durante 3 h e a mistura foi extraída com acetato de etil (3x) e os extratos combinados foram lavados com salmoura (30 mL), secos sobre Na2SO4, e concentrados até à secura para fornecer o composto 8B (2,9 g, 43%) como um sólido branco. ES-API Encontrado: 191,9, 189,9. Etapa 2.
Figure img0042
[00123] A uma solução do composto 8B (2,9 g, 15 mmol) numa mistura de DCM (5 mL) e THF (15 mL) foi adicionado reagente de Mukaiyama (5 g, 19,5 mmol) e DIPEA (5,8 mL). Depois de se agitar durante 10 min, cloridrato de 1-(1H-indol-3-il)hexan-2-amina 1E (3,3 g, 15 mmol) foi adicionado à mistura. A mistura foi agitada a 50°C durante 3 h. A mistura foi diluída com DCM e lavada com água. A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4 e concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (20:1 DCM/MeOH) para fornecer o composto 8C (2,7 g, 47%) como um sólido amarelo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,96 (br s, 1H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,07-7,11 (m, 2H), 7,01-7,04 (m, 1H), 6,96 (br s, 1H), 4,38 (d, J = 4 Hz, 1H), 2,95 (d, J = 4 Hz, 1H), 1,61 (br s, 1H), 1,39-1,46 (m, 1H), 1,19-1,28 (m, 4H), 0,78 (s, 3H).
[00124] Etapa 3. Uma mistura do composto 8C (778 mg, 2 mmol) e N-metilpiperazina (1 g, 10 mmol) foi agitada num tubo selado a 120°C durante a noite. Adicionou-se acetato de etil (20 mL) e o sólido precipitado foi separado por filtração. O filtrado foi lavado com água e salmoura. A solução foi seca sobre Na2SO4, concentrada, e purificada por TLC preparativa (10: 1 DCM/MeOH) para fornecer o Exemplo 8 (184 mg, 18%) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,43 (br s, 1H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,05 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96-7,00 (m, 3H), 4, 32 (d, J = 4 Hz, 1H), 3,42 (s, 4H), 2,28-2,29 (m, 2H), 2 ,50 (s, 4H), 2,28 (s, 3H), 1,56-1,62 (m, 1H), 1,41-1,46 (m, 1H), 1,22 1,33 (m, 4H), 0,79 (t, J = 8,0 Hz, 3H). Exemplo 9 :N- (1- (1H-Indol-3-il)hexan-2-il) -2- (4- metilpiperazin-1-il)-1H-imidazol-5 -carboxamida.
Figure img0043
Etapa 1.
Figure img0044
[00125] A uma solução de imidazol 9A (20 g, 294 mmol) em THF (200 mL) e TEA (40 g, 400 mmol) foi adicionado cloreto de dimetilsulfamoil (55 g, 383 mmol) lentamente a 0°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi vertida em 300 mL de água e extraída com acetato de etil (3x). A solução foi lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4, em seguida, concentrada até à secura para fornecer o composto 9B (42 g, 89%) como um óleo incolor, o qual solidificou após repouso à temperatura ambiente durante 1h. O material sólido foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,86 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 2,82 (s, 6H). Etapa 2.
Figure img0045
[00126] A uma solução de composto 9B (10 g, 57 mmol) em THF anidro (100 mL) foi adicionado n-BuLi (27,3 mL, 68 mmol) gota a gota a -78°C. A solução foi agitada a esta temperatura durante 30 min. Perbromometano (20,5 g, 62,7 mmol) foi, então, adicionado a -78°C e a mistura foi deixada subir até à temperatura ambiente ao longo de um período de 3 horas seguido por agitação contínua à temperatura ambiente (25°C) durante a noite. A mistura foi diluída com solução aquosa saturada de NH4Cl (50 mL) e extraída com DCM (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, e concentradas, e o resíduo foi purificado por MPLC (hexano/DCM 1:1) para fornecer o composto 9C (8,4 g, 57%) como um óleo leve. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,41 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 3,01 (s, 6H). Etapa 3.
Figure img0046
[00127] Uma mistura de composto 9C (10 g, 39 mmol) e N-metilpiperazina (12 g, 118 mmol) em dioxano (100 mL) foi agitado a 90°C durante a noite. A solução foi vertida em água e extraída com DCM (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (10:1 DCM/MeOH 10:1) para fornecer o composto 9D (3,6 g, 34%) como um sólido castanho. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,27 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 3,43 (m, 8H), 2,97 (s, 3H), 2,91 (s, 6H). Etapa 4.
Figure img0047
[00128] A uma solução de composto 9D (3,6 g, 13 mmol) em THF anidro (40 mL) foi adicionado n-BuLi (6,3 mL, 16 mmol) gota a gota a -78°C. A solução foi agitada a esta temperatura durante 30 min, e, em seguida, foi adicionado carbonocloridrato de metil (1,48 g, 16 mmol). A mistura foi agitada durante 3 h a -78°C, e, em seguida, foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com solução aquosa saturada NH4Cl (50 mL) e extraída com DCM (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (60:1 DCM/MeOH) para fornecer o composto 9E (1,5 g, 54%) como um óleo espesso castanho. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,29 (s, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,50 (m, 4H), 2,77 (s, 6H), 2,51 (m, 4H), 2,28 (s, 3H). Etapa 5.
Figure img0048
[00129] Uma mistura do composto 9E (1,5 g, 4,5 mmol) e HCl concentrado (7,5 mL) foi agitada a 60°C durante a noite. A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi tratado com MeOH (10 mL). O sólido branco que precipitou foi coletado por filtração e seco sob vácuo para fornecer o composto 9F (800 mg, 84%) na forma de um sal cloridrato. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,53 (s, 1H), 4,09 (d, J = 14 Hz, 2H), 3,67 (t, J = 12,4 Hz, 2H), 3,59 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,31 (t, J = 12,4 Hz, 2H), 2,97 (s, 3H).
[00130] Etapa 6. A uma solução de composto 9F (1,05 g, 5 mmol) em DCM (2 mL) e THF (10 mL) foi adicionado reagente de Mukaiyama (1,65 g, 6,5 mmol) e DIPEA (1,9 g, 20 mmol). Depois de se agitar durante 10 min, 1-(1H-indol-3- il)hexan-2-amina 1D (1,1 g, 5 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada a 50°C durante 3 h. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi diluído com acetato de etil e lavado com água e salmoura, seco sobre Na2SO4, e concentrado. O resíduo foi purificado duas vezes por TLC preparativa (10:1 DCM/MeOH) para fornecer o Exemplo 9 (200 mg, 8,3%) como um sólido amarelo claro. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7,59 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,08-7,04 (m, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,98-6,94 (m, 1H), 4,33-4,26 (m, 1H), 3,40-3,35 (m, 4H), 2,99-2,97 (m, 2H), 2,70-2,68 (m, 4H), 2,44 (s, 3H), 1,68-1,60 (m, 1H), 1,55-1,45 (m, 1H) 1,38-1,28 (m, 4H), 0,86 (t, J = 7 Hz, 3H). Exemplo 10: N-(1-(5-Fluoro-1H-indol-3-il)hexan-2-il)-2-(2- morfolinoetil)tiazol-5-carboxamida.
Figure img0049
Etapa 1.
Figure img0050
[00131] Uma solução do composto 4C (12,7 g, 44,8 mmol) em acetonitrila (127 mL) foi tratada com morfolina (5,6 g, 65 mmol) e Cs2CO3 (21,3 g, 65 mmol) e foi agitada a 50°C durante a noite. A mistura foi filtrada, o filtrado foi concentrado, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (CH2Cl2/MeOH = 10:1) para fornecer o composto 10A (5,6 g, 63%) como um óleo amarelo claro. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7,66 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 3,72 (m, 4H), 3,22 (m, 2H), 2,77 (m, 2H), 2,52 (m, 4H). Etapa 2.
Figure img0051
[00132] A uma solução do composto 10A (5,6 g, 28 mmol) em THF anidro (56 mL) foi adicionado n-BuLi (13,6 mL, 17 mmol) gota a gota a -78°C. A mistura foi agitada a esta temperatura durante 30 min e, em seguida, carbonocloridrato de metil (3,2 g, 17 mmol) foi adicionado gota a gota à solução à temperatura de -78°C. A mistura foi agitada durante 3 h. Durante este período, a temperatura é deixada subir até à temperatura ambiente (25°C). A solução aquosa saturada de NH4Cl (50 mL) foi adicionada para resfriar instantaneamente a reação. A mistura foi extraída com EtOAc, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada para fornecer o composto 10B (4,0 g, 60%). Este produto bruto foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,27 (s, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,72-3,76 (m, 4H), 3,21 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,54 (s, 4H). Etapa 3.
Figure img0052
[00133] A uma soluço do composto 10B (3 g, 11,7 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado NaOH (0,7 g, 17 mmol) em água (9 mL). A mistura foi agitada a 25°C durante 3 h. O MeOH foi removido em vácuo e a solução foi lavada com EtOAc (30 mL). A fase aquosa foi ajustada a pH = 5-6 com 1 N de HCl e extraída com EtOAc (50 mL x 3). A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada até estar seca para fornecer o composto 10C como um sólido cor de laranja (3 g, 100%). Este produto bruto foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. Etapa 4.
Figure img0053
[00134] A uma solução do composto 10-D (3,5 g, 18 mmol) em CH2Cl2 (35 mL) foi adicionado CDI (3,52 g, 21,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e, em seguida, cloridrato de N,O-dimetilhidroxilamina (2,3 g, 26 mmol) foi adicionado à mistura. A mistura foi agitada durante 4h à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 2). A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio, concentrada para se obter o composto 10E (4,5 g, 100%) como óleo castanho. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,33 (s, 1H), 7,15-7,30 (m, 3H), 6,90-6,92 (m, 1H), 3,87 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,28 (s, 3H). Etapa 5.
Figure img0054
[00135] A uma solução de composto 10E (3,57 g, 15 mmol) em THF anidro (72 mL) foi adicionado gota a gota n- BuLi (46 mL, 91 mmol) a -78°C. A mistura foi agitada a esta temperatura durante 10 min. Solução aquosa de HCl (1 M, 30 mL) foi adicionada para resfriar instantaneamente a reação. A mistura foi extraída com EtOAc, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada para fornecer o composto 10F (3,5 g, 70%). Este produto bruto foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. Etapa 6.
Figure img0055
[00136] A uma solução de AcONH4 (46 g, 0,6 mol) e NaBH3CN (9,5 g, 0,15 mol) em MeOH (140 mL) e THF (30 mL) foi adicionado o composto 10F (3,5 g, 15 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. MeOH e THF foram removidos em vácuo e solução saturada de NaHCO3 foi adicionada ao resíduo. A solução foi extraída com EtOAc (100 mL x 2). A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada para proporcionar o composto 10G (4,0 g, 100%) como óleo castanho. Este produto bruto foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.
[00137] Etapa 7. A uma solução do composto 10C (1,6 g, 6,6 mmol) em diclorometano (6,4 mL) e THF (16 mL) foi adicionado reagente de Mukaiyama (2,2 g, 8,6 mmol) e DIPEA (1,6 g, 6,6 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 10 min. Composto 10G (1,6 g, 6,8 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada a 40°C durante 2 h. O precipitado resultante foi separado por filtração e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etil (30 mL), lavado com água (10 mL) e salmoura (10 mL), seco sobre sulfato de sódio e concentrado. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (HPLC preparativa Shimadzu LC-8A, Luna(2) coluna C18, 25%-55% de acetonitrila em 10 mM de solução aquosa de NH4HCO3 em 20 min a 80 mL/min) para fornecer o Exemplo 10 (300 mg, 9,8%) como um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,16 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,81-6,86 (m, 1H), 5,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,63 (s, 4H), 3,05 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,89-2,94 (m, 2H), 2,64-2,66 (m, 2H), 2,43 (s, 4H), 1,55-1,58 (m, 1H), 1,42-1,44 (m, 1H), 1,22-1,31(m, 4H), 0,80 (t, J = 6,8 Hz, 3H). Exemplo 11:N- (1- (1H-Indol-3-il)hexan-2-il) -2- morfolinotiazol-5-carboxamida.
Figure img0056
[00138] A uma mistura de composto 3A (200 mg, 0,49 mmol) e DIPEA (171 μL, 0,98 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado morfolina (42 μL, 0,49 mmol). A mistura foi agitada durante 1,5 h a 170°C num reator Q-tubo selado por pressão. Foi adicionada morfolina adicional (42 μL, 0,49 mmol) e a mistura foi aquecida durante 0,5 h a 170°C num reator Q-tubo selado por pressão. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (05% de MeOH/DCM) para fornecer o composto Exemplo 11 (148 mg, 73%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,08 (br s, 1H), 7,64 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,39 (s,1H), 7,37 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 7,5 Hz, 1H), 7,12 (dd, J = 7,5 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 2 Hz, 1H), 5,57 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,39-4,42 (m, 1H), 3,80 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,51 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,06 (dd, J = 14,5, 5,5 Hz, 1H), 3,01 (dd, J = 14,5, 5,5 Hz, 1H), 1,26-1,64 (m, 6H), 0,87 (t, J = 7 Hz, 3H). ESMS+: 413,6 [M+1].
[00139] Os exemplos 12-26 podem ser preparados de acordo com os métodos descritos acima. Exemplo 27 :(S) -N- (1- (1H-Indol-3-il)hexano-2-il) -2- (4- metilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida e Exemplo 28 :(R) -N- (1- (1H-Indol-3-il)hexano-2-il) -2- (4- metilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida.
Figure img0057
[00140] Os enantiômeros foram separados numa SFC preparativa THAR 80 utilizando uma coluna Chiralpak AD-H (250x30mm; 5μM ID) . O racemato foi dissolvido em metanol (50 mg/mL) e 45 mg de racemato foi carregado por injeção. A separação foi conseguida utilizando uma fase móvel de 40% de 2-propanol (aditivo: 0,05% NH3H2O) em CO2 a uma taxa de fluxo de 70 g/min e uma contrapressão do sistema de 100 bar (10000 KPa). A temperatura da coluna foi mantida a 40°C e os picos foram detectados a 220 nm. Tempo total do ciclo foi de 6 minutos. Exemplo 27 ((S)-N-(1-(1H-Indol-3- il)hexano-2-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)tiazol-5- carboxamida): LCMS (Xtimate C18, 2,1X30mm, 3μM id): Pico 1 RT: 2,036 (100%) MS: 426,2; Rotação Ótica (Dichrom Polaraizer, 589 nm) -0,143 (sd = 0,0004); verificação de pureza Quiral (OJ-H, 40% de MeOH (0,05% de DEA)) Pico 1 RT: 3,61 (99,87%), Pico 2 de RT: 5,3 (0,13%). Exemplo 28 ((R)- N-(1-(1H-Indol-3-il)hexan-2-il)-2-(4-metilpiperazin-1- il)tiazol-5-carboxamida): LCMS (Xtimate C18, 2,1X30mm, 3μM id): Pico 1RT: 2,035 (98,77%) MS: 426,2. Pico 2RT: 2,373 (1,23%), MS: 427,2; Rotação Ótica (Dichrom Polaraizer, 589 nm) 0,160 (sd = 0,0003); verificação de pureza Quiral (OJ- H, 40% de MeOH (0,05% de DEA)) Pico 1 RT: 3,6 (0,18%), Pico 2 de RT: 5,23 (99,82%).
Exemplo Biológico 1: Ensaio de Polarização de Fluorescência In-vitro com Fragmento Peptídeo de alfa-sinucleína (4F).
[00141] O ensaio de polarização de fluorescência testa a capacidade dos compostos para inibir a autoagregação de fragmentos peptídicos de a-sinucleína. Os peptídeos foram incubados durante 60 min à temperatura ambiente na presença ou ausência de compostos de teste (concentrações do composto foram 33,3-0,3 μM). As amostras foram lidas num leitor de placas BMG Pherastar no modo de polarização de fluorescência utilizando excitação a 485 nm e emissão a 520 nm. Os dados foram analisados utilizando um ajuste logístico de quatro parâmetros (XLFit, IDBS Software). Peptídeo 4F (CTGFVKKDQLGK (SEQ ID NO: 1)) foi preparado por American Peptide. Amostras frescas de peptídeos foram reconstituídas em água purificada a 5 mM e diluídas em 50 mM de HEPES, pH 7,4 com 50 mM de NaCl a concentração final de 100 nM. Os compostos sólidos foram dissolvidos em DMSO (10 mM), e depois diluídos em tampão.
[00142] Os dados para os compostos testados são apresentados na Tabela 1. Compostos Comparativos A e B foram também testados.
Figure img0058
Comparador A:
Figure img0059
Comparador B: Tabela 1
Figure img0060
Figure img0061
*n = 1 salvo indicação em contrário §n = 2 ¥n = 3 ± SEM
Exemplo Biológico 2: Ensaios in vivo farmacocinéticas
[00143] A farmacocinética e distribuição cerebral dos compostos aqui descritos foram determinadas em camundongos C57BL/6, machos, após a administração de dose única intravenosa ou oral. Um grupo de 54 camundongos machos foram divididos em dois grupos de 27 camundongos. Os animais do Grupo 1 (i.v.) e Grupo 2 (p.o.) foram dosados com os compostos de teste a 10 mg/kg (i.v.) ou de 2 mg/kg (p.o.). As amostras de sangue foram coletadas antes da dose e em 0,08, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, e 24 h pós-dose (i.v.), e pré-dose e em 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 e 24 h pós-dose (p.o.). O sangue foi coletado a partir de conjuntos de três camundongos em cada ponto de tempo, em tubos de microcentrífuga marcados contendo K2EDTA como anticoagulante. As amostras de plasma foram separadas por centrifugação de sangue total e armazenadas abaixo de -70°C até bioanálise. Após a coleta de amostras de sangue, os camundongos foram humanamente eutanasiados por asfixia CO2 e o cérebro foi coletado nos mesmos pontos de tempo. Após a coleta, as amostras de tecido cerebral foram lavadas em tampão gelada de fosfato salino (pH 7,4), suavemente secas em papel de filtro, pesadas e colocadas em tubos de polipropileno. Outras amostras de tecido cerebral foram homogeneizadas utilizando tampão fosfato salino pH 7,4, e o volume total foi homogeneizado três vezes o peso do cérebro. As amostras foram, então, armazenadas abaixo de - 70°C até bioanálise. Todas as amostras foram processadas para análise por precipitação das proteínas usando acetonitrila e analisados com o método de ajuste para a finalidade de LC/MS/MS (LLOQ: 1,01 ng/mL para o plasma e cérebro). Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados usando a ferramenta de análise não compartimental de Phoenix WinNonlin (Versão 6.3).
[00144] Os dados obtidos a partir deste ensaio são apresentados na Tabela 2. Tabela 2
Figure img0062
Figure img0063
*em 10 mg/kg ** em 2 mg/kg NC = Sem composto detectado (abaixo do limite de detecção) ND = Não determinado
Exemplo Biológico 3: Ensaio RMN para o efeito dos compostos de teste em interação de alfa-sinucleína com membranas lipídicas
[00145] Para se medir a interação dos compostos de teste com ASYN de comprimento completo na presença de membranas lipídicas, foi realizado um ensaio de RMN. As medições de RMN foram realizadas em 20 mM de fosfato, pH = 7,4, 100 mM de NaCl em espectrômetros Direct Drive Varian 600MHz e Varian Inova 800MHz com 10% D2O como solvente de bloqueio. Os espectros foram processados usando RMNPipe (ver F. Delaglio, S. Grzesiek, G. W. Vuister, G. Zhu, J. Pfeifer, A. Bax, J Biomol NMR 1995, 6, 277-293). A α- sinucleína foi utilizada a 0,12 mm, enquanto 1-palmitoil-2- oleoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POPG)-liposomas foram adicionados a 0,8 mg/mL, quando presente. Todos espectros de correlação 1H-15N foram gravados com uma sequência de impulsos SOFAST (ver P. Schanda, E. Kupce, B. Brutscher, J Biomol NMR 2005, 33, 199-211). A atribuição de ressonância em condições fisiológicas perto estava prontamente disponível a partir de uma publicação anterior (BMRB ID 16300, ver J. N. Rao, Y. E. Kim, L. S. Park, T. S. Ulmer, J Mol Biol 2009, 390, 516-529). Para a titulação do ligante do Exemplo 1 foi adicionado gradualmente até a mistura de lipossoma/ASYN. Os espectros de correlação 15N-1H foram registrados para cada etapa e as intensidades de sinal foram referenciados para a forma livre de ASYN enquanto representando os efeitos de diluição. Para reduzir o ruído nos dados disponíveis, a razão de intensidade para várias posições amida de ASYN foi em média de duas regiões escolhidas para corresponder aos modos de ligação SL1 e SL2 observados anteriormente (ver C.R. Bodner, A.S. Maltsev, C.M. Dobson, A. Bax, Biochemistry 2010, 49, 862-871).
[00146] Como se mostra na Figura 1, a intensidade de sinal para espectroscopia de única coerência quântica heteronuclear (HSQC) para ASYN é atenuada quando ASYN é embutida nas membranas lipídicas. Esta atenuação induzida por lipídios do sinal de HSQC foi revertida pelo Exemplo 1, demonstrando, assim, a capacidade do composto teste para romper a associação de ASYN com membrana lipídica. A Figura 1A mostra a atenuação de sinal como função de resíduos ASYN na presença de lipossomas POPG. O eixo Y (I/Io) é a razão entre as intensidades de sinal de espectroscopia HSQC para ASYN na presença (I) ou ausência (Io) de membranas lipídicas. Na Figura 1B, a razão média de I/Io de resíduos ASYN 3-23 foi representada graficamente como uma função da concentração do exemplo 1 adicionado. Este gráfico mostra que o Exemplo 1 inverteu a interação de ASYN com lipossomas 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POPG) (0,8 mg/mL) de um modo dependente da concentração. Resultados semelhantes foram obtidos quando os resíduos 66-76 de ASYN foram analisados.
Exemplo Biológico 4: Efeito de Compostos de Teste em Oligômeros Anulares em membranas lipídicas
[00147] A microscopia eletrônica foi utilizada para visualizar diretamente o efeito dos compostos de ensaio sobre a formação de oligômeros ASYN em membranas lipídicas. As grades de Formvar com a monocamada de lipídios foram contrastadas com uma solução saturada de acetato de uranil em 50% de EtOH durante 25 minutos. As grades foram, então, flutuadas sobre uma gota de 2% de subnitrato de bismuto durante 10 minutos, e novamente cuidadosamente enxaguadas com água duplamente destilada três vezes e deixadas secar completamente. Grades foram fotografadas usando um microscópio eletrônico de transmissão Zeiss EM10. De cada grade de amostra, foram obtidas 5-10 micrografias eletrônicas em 10.000 vezes de ampliação e 5-10 imagens em 40.000x. Os melhores negativos foram escaneados e analisados com o programa ImageJ 1,43 para estimar o número de oligômeros anulares por campo de maior potência (100 x 100 nm) (Rasband, W.S., ImageJ, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, http://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2014).
[00148] No presente estudo, o Exemplo 1 foi encontrado para reduzir drasticamente o acúmulo de formas oligoméricas semelhantes a anéis anelar de ASYN em uma membrana lipídica, enquanto que os pequenos agregados não anulares foram ainda observados. A figura 2A mostra imagens microscópicas de elétrons de oligômeros ASYN formados em grades de Formvar revestidas de lipídios na ausência e na presença do Exemplo 1. A Figura 2B é um gráfico que reflete a quantificação das imagens microscópicas de elétrons. Exemplo 1 reduziu o número de oligômeros anulares de ASYN detectados nas grades de Formvar com concentrações tão baixas como 10 nM (média ± SEM para 20 medições). Exemplo 1 atingiu estes efeitos em concentrações subestequiométricas em relação ao ASYN. Estes resultados foram consistentes com a modelagem dinâmica molecular, mostrando que Exemplo 1 estabiliza conformações de ASYN menos prováveis para formar oligômeros em forma de anel em membranas lipídicas.
[00149] Estes resultados sugerem que o Exemplo 1 interage com formas ligadas em lipídios e oligoméricas de ASYN de uma maneira que reduz a afinidade de oligômeros de ASYN para a membrana lipídica. Exemplo 1 era capaz de interferir com oligomerização de ASYN, a ligação de ASYN para membranas lipídicas, e a formação de oligômeros em forma de anel anular ("poros") nestas membranas. Estes resultados também sugerem que o Exemplo 1 altera a agregação de ASYN e impede a formação de estruturas oligoméricas específicas que se acredita contribuir para a neurotoxicidade de ASYN dobrada incorretamente e oligomerizada na doença de Parkinson.
Exemplo Biológico 5: Efeito de Compostos de Teste na alfa- sinucleína em Células
[00150] Estudou-se o efeito do Exemplo 1 sobre o acúmulo de ASYN em células de neuroblastoma de B103 sobre- expressando ASYN humana. Um sistema de expressão lentiviral foi utilizado para expressar GFP-ASYN marcada nestas células. Quarenta e oito horas após a expressão ser iniciada, veículo ou Exemplo 1 (0,1 ou 1,0 μM) foi adicionado durante mais 24 horas. A quantidade acumulada de GFP-ASYN foi, então, visualizada. Como mostrado na Figura 3, o Exemplo 1 reduziu a intensidade da fluorescência de GFP nestas células a 1,0 μM (*p <0,05 vs grupo de controle de veículo). Exemplo 1 foi, portanto, encontrado para reduzir as concentrações de ASYN-GFP em células sobre- expressando ASYN.
Exemplo Biológico 6: Estudos de eficácia In vivo
[00151] A doença de Parkinson (PD) é caracterizada pelo acúmulo anormal de formas oligoméricas de alfa- sinucleína (ASYN). Supõe-se que estas formas tóxicas de ASYN contribuem para a disfunção e morte celular neuronal observada na doença de Parkinson e outros sinucleinopatias, em parte, embora a formação de estruturas semelhantes aos poros nas membranas celulares. Os compostos aqui descritos foram concebidos para melhorar os sintomas e patologia relacionados com a PD por bloquear seletivamente a formação e acúmulo de espécies tóxicas de ASYN.
A) Modelo de Camundongo transgênico da doença de Parkinson
[00152] Exemplo 1 foi avaliado num modelo de camundongo transgênico de PD sobre-expressando ASYN humana de tipo selvagem sob o promotor de Thy-1 (também referido como ao camundongo transgênico ASYN na Linha 61), através da administração de Exemplo 1 aTant 0, 1, ou 5 mg/kg (i.p.) uma vez por dia (cinco dias por semana) por três meses e, em seguida, avaliar o desempenho sensório-motor relevante de PD, alterações bioquímicas e alterações neuropatológicas em ASYN e proteínas relacionadas.
[00153] A tarefa de feixe circular foi utilizada para avaliar deficiências sensório-motores, usando o número de decaimentos como o desfecho primário (Figura 4). Para confirmar a viabilidade do modelo de camundongo transgênico, camundongo transgênico e camundongo não transgênico ASYN foram testados, e o número de decaimentos de indivíduos transgênicos tratados com veículo foi de forma estatística significativamente mais elevado do que no grupo de controle não transgênicos tratados com veículo (**** p <0,0001). Os camundongos transgênicos tratados com o Exemplo 1 em ambas as doses de teste tinham de forma estatísticas significativamente as reduções nos decaimentos em comparação com camundongo transgênico tratado com veículo (#p <0,05 e ##p <0,01 vs. camundongos transgênicos ASYN tratados com veículo).
[00154] A análise Western Blot de homogenatos de cérebro do hipocampo e de cérebro cortical revelou reduções estatisticamente significativas nos níveis de proteína ASYN transgênica. As avaliações bioquímicas de proteínas oligoméricas utilizando método dot blot de anticorpo A11 foram realizadas (incluindo ASYN) em homogenatos de córtex. O modelo de camundongo transgênico foi verificado, como avaliação dot blot de anticorpo A11 de oligômeros em homogenatos corticais mostrou um aumento estatisticamente significativo em imunocoloração A11 na fração citosólica do córtex frontal de camundongo transgênico ASYN tratados com veículo em relação ao camundongo de controle não transgênico tratado com veículo (Figura 5; *p <0,05). O tratamento com o Exemplo 1 (5 mg/kg) produziu uma diminuição estatisticamente significativa em oligômeros na fração citosólica a partir da região do córtex frontal de camundongos em relação a camundongo transgênicos ASYN tratado com veículo (Figura 5; ###P <0,001).
B) Modelos de camundongo transgênico de ASYN na Linha 61
[00155] Estudos anteriores por imunomarcação Masliah e colegas demonstraram aumentos estatisticamente significativos na imunomarcação ASYN neuropil cortical no camundongo transgênico ASYN na Linha 61 (Masliah E. et al., Science, 2000, 287(5456):1265-9). Estas descobertas neuropatológicas foram reconfirmadas no estudo atual usando os métodos descritos por Masliah e colegas. Exemplo 1 administração (1 e 5 mg/kg de dosagem) produziu reduções estatisticamente significativas em níveis ASYN, como determinado pelos efeitos sobre ASYN imunomarcação (Figuras 6 e 7). Houve um aumento estatisticamente significativo na imunomarcação ASYN com o anticorpo anti-alfa-sinucleína Millipore na neurópil cortical (****p <0,0001) (Figura 6A) e em corpos celulares neuronais de camundongos transgênicos ASYN (**p <0,01) (Figura 6B) em relação aos controles/veículo não-transgênicos. Exemplo 1, a administração (1 e 5 mg/kg) produziu reduções estatisticamente significativas na imunomarcação de alfa- sinucleína em neuropil cortical (Figura 6A) (####p<0,0001 vs. camundongos transgênicos ASYN tratados com veículo), e uma diminuição não estatisticamente significativa no número de corpos celulares neuronais immunomarcados de ASYN a 5 mg/kg (Figura 6B).
[00156] Além disso, a normalização de marcadores relacionados com a neurodegeneração, incluindo a tirosina hidroxilase, NeuN, e GFAP foram observadas.
[00157] Como se mostra na Figura 8, foi estudado o efeito do Exemplo 1 em 0,5 mg/kg e 1 mg/kg, em insuficiência sensório-motora em camundongos transgênicos da ASYN na linha 61, utilizando o ensaio de Desempenho Motor Feixe Circular acima descrito. Um aumento estatisticamente significativo no número de decaimentos foi observado em camundongos de controle transgênicos ASYN tratados com veículo, em comparação com indivíduos de controle não transgênicos tratados com veículo (****p <0,0001). Em 1 mg/kg, o Exemplo 1 tratamento produziu uma melhora estatisticamente significativa (redução dos decaimentos) em camundongos transgênicos ASYN relativos aos camundongos transgênicos ASYN tratado com veículo (##p <0,01). A 0,5 mg/kg, Exemplo 1, produziu uma diminuição estatisticamente não significativa em decaimentos.
[00158] Em conjunto, estes resultados demonstram que o Exemplo 1 melhora significativamente resultados sensório- motores, bioquímicos, e neuropatológicos em um modelo de camundongo transgênico. Estes resultados confirmaram que a administração do Exemplo 1 produz melhoras em medidas comportamentais, bioquímicas e neuropatológicas em um modelo de camundongo transgênico da doença de Parkinson/demência com corpos de Lewy (PD/DLB).
Exemplo Biológico 7: Desenvolvimento de marcadores biológicos A) Contagens Fecal Boli
[00159] Nos esforços voltados para o desenvolvimento de biomarcadores funcionais e bioquímicas traduzíveis, avaliações adicionais foram realizadas, incluindo uma avaliação das contagens fecais boli produzidas num ambiente novo e os níveis cardíacos pós-mortem de ASYN.
[00160] A constipação crônica em pacientes com Parkinson tem uma prevalência de 50-80%, e pode preceder o diagnóstico por mais de 20 anos (Awad, R.A. World J. Gastroenterol. 2011, 17(46), 5035-5048; Kim, J.S. et al., J. Neurol. Sci. 2011, 310(1-2), 144-151). Os sintomas associados incluem diminuição do tempo de trânsito e anormalidades EMG (esfíncter, reflexos inibitórios retoanal), e são acompanhados por descobertas patológicas principais, incluindo corpos de Lewy em núcleos parassimpático e nervos, e diminuem neurônios dopaminérgicos. Esta disfunção intestinal é composta por níveis de atividade diminuída, mudanças na dieta (alimentos e água), e efeitos de medicamentos de Parkinson.
[00161] Um estudo publicado anteriormente incluiu um relatório que camundongos transgênicos na Linha 61 de ASYN diminuíram a motilidade do cólon, saída fecal, e peso (Wang, L. et al. Neurogastroenterol. Motil. 2012, 24(9), e425-436). Para o presente estudo, uma avaliação das contagens de fecal boli foi conduzida em conjunto com uma sessão de teste de atividade locomotora espontânea. Na conclusão de uma sessão de teste de cinco minutos, o experimentador contou o número de fecal boli presentes na câmara de ensaio, e os resultados são apresentados na Figura 9. Camundongos transgênicos ASYN tratados com veículo tiveram reduções estatisticamente significativas na fecal boli produzida num ambiente novo em relação aos camundongos de controle não transgênicos tratados com veículo (*p <0,05). Exemplo 1 não teve efeito no número de boli produzido em camundongos não transgênicos, mas restaurou a função em camundongos transgênicos ASYN em 0,5 mg/kg (#p<0,05 vs camundongos transgênicos ASYN tratados com veículo) e 1 mg/kg (###p<0,001 em comparação com camundongos transgênicos ASYN tratados com veículo).
B) Função Cardíaca
[00162] Tal como disfunção do intestino, alterações na função cardíaca e bioquímica podem preceder o diagnóstico da doença de Parkinson por 20 anos ou mais. As alterações funcionais bem caracterizadas em pacientes com PD incluem variabilidade alterada da frequência cardíaca e hipotensão ortostática (Kaufmann, H. et al., Handbook Clin. Neurol. 2013, 117, 259-278; Jain, S. et al., Neurobiol. Dis. 2012, 46(3), 572-580; Senard, J.M. et al., Rev. Neurol. (Paris) 2010, 166(10), 779-784; Post, K.K. et al., Parkinsonism Relat. Disord. 2008, 14(7), 524-531). Essas alterações funcionais são acompanhadas por alterações patológicas de perda de inervação noradrenérgica do miocárdio e a presença de agregados de ASYN nos nervos autonômicos cardíacos (Jellinger, K.A., J. Neurol. Sci. 2011, 310(1-2), 107-111). As caracterizações anteriores de função cardíaca e bioquímica em camundongos transgênicos na Linha 61 de ASYN demonstraram a presença de hASYN nas paredes ventriculares e auriculares do coração localizadas dentro de fibras noradrenérgicos (Fleming, S.M., J. Parkinsons Dis. 2011, 1(4), 321-327). Para o presente estudo, as avaliações dos métodos de Western blot pós- mortem de ASYN cardíaca por meio de análise de Western blot foram realizadas para confirmar a presença no tecido cardíaco de ASYN transgênicos e para avaliar os efeitos do Exemplo 1 sobre os níveis cardíacos de ASYN transgênicos (Figura 10). Houve um aumento estatisticamente significativo nos níveis cardíacos de ASYN detectados em camundongos transgênicos de ASYN tratados com veículo relativamente aos camundongos de controle não transgênicos tratados com veículo (***p<0,001). Foram normalizações estatisticamente significativas de níveis ASYN em camundongos transgênicos ASYN tratados com 0,5 ou 1 mg/kg do Exemplo 1 em relação aos camundongos transgênicos ASYN tratados com veículo (#### p <0,0001).
C) Imagem da retina
[00163] O acúmulo anormal de uma proteína neuronal alfa-sinucleína (ASYN) foi a hipótese para morte celular neuronal intrínseca e sináptica disfuncional na doença de Parkinson (PD), demência com corpos de Lewy (DLB). Os compostos que interferem seletivamente com as dinâmicas de dobramento da proteína alfa-sinucleína e evitam a formação de dímeros de propagação têm sido desenvolvidos e, ainda, avaliados em modelos animais. As alterações na função visual estão presentes em doentes de Parkinson (Botha, H. et al., Parkinsonism Relat. Disord. 2012, 18(6), 742-747; Bodis-Wollner, I. et al., Behav. Neurosci. 2013, 127(2), 139-150; Bodis-Wollner, I., Parkinsonism Relat. Disord. 2013, 19(1), 1-14; Javaid, M.A. et al., Parkinsonism Relat. Disord. 2012, 18(Suppl. 1), S100-3) e relatórios recentes têm apresentado potenciais alterações patológicas da retina PD. Os estudos de tomografia de coerência ótica (OCT) têm demonstrado uma camada de fibras nervosas da retina diminuída em pacientes de Parkinson (Yu, J.G. et al., PLoS One 2014, 9(1), e85718). As avaliações pós-mortem revelaram depósitos ASYN em PD da retina (Bodis-Wollner, I. et al., Ann. Neurol. 2014, 75(6), 964-6).
[00164] A viabilidade das avaliações repetidas da imagem da retina longitudinal de e-GFP ASYN no modelo de camundongo transgênico PDNG78 de DCL/PD foi previamente demonstrada como um método para avaliar e controlar a progressão das alterações neurodegenerativas em modelos animais de doença de Parkinson (Rockenstein et al., “Retinal scanning evaluations of alpha-synuclein-eGFP deposition in a transgenic mouse model of PD/DLB,” Society for Neurosciences, Annual Meeting, 2013, Abstract No. 329.06). As características patológicas progressivas na retina PDNG78 foram mostradas para espelhar patologia SNC, proporcionando, assim, um meio para intervenções não invasivas e avaliar repetidamente as intervenções terapêuticas potenciais em um modelo de camundongo transgênico de PD/DLB.
[00165] Este estudo foi realizado para determinar o efeito do Exemplo 1 (3 meses de administração de i.p. em 0 e 5 mg/kg) na presença e na progressão da alfa-sinucleína (ASYN) patologia da retina num estudo de imagem da retina longitudinal num modelo de camundongo transgênico da doença de Parkinson/Demência de Corpos de Lewy (PD/DLB). Os camundongos transgênicos em questão sobre-expressam a alfa- sinucleína-GFP fundida (proteína fluorescente verde) sob o promotor PDGF-beta e são comumente referidos como camundongos transgênicos PDNG78 (Rockenstein, E. et al., J. Neurosci. Res. 2005, 80, 247-259). Os camundongos transgênicos PDNG78 expressam ASYN-GFP fundida nos níveis 2-5 vezes maiores dos níveis do que os camundongos de controle não transgênicos. Os níveis de expressão do SNC de ASYN são mais elevados no sistema límbico, incluindo as regiões do neocórtex e do hipocampo de camundongos transgênicos PDNG78. As distribuições celulares de características relevantes de sinucleinopatia de espelho ASYN-GFP, incluindo acumulações nos corpos celulares neuronais, coloração difusa do neuropil, marcação ponteada sináptica, e os depósitos perivasculares.
[00166] Um total de quatro sessões de imagens foi realizado, incluindo um parâmetro antes dos tratamentos de partida e as três sessões de imagem subsequentes com intervalos de aproximadamente um mês. Análise de imagens da retina para percentagem de imagem com ASYN-GFP (Figura 11) mostrou aumentos estatisticamente significativos na porcentagem de áreas de imagem com ASYN-GFP na retina de camundongos transgênicos no início do estudo antes do início dos tratamentos (**p<0,01 vs. camundongos não transgênicos tratados com veículo) e para cada verificação posterior (*p<0,05 e ***p<0,001 em comparação com camundongos não transgênicos tratados com veículo). A percentagem de área positiva ASYN-GFP diminuiu em camundongos transgênicos tratados com o Exemplo 1 (5 mg/kg) após aproximadamente 60 dias de tratamento e que persiste através do ponto de tempo de imagem de 90 dias (###p<0,001 vs. Camundongos transgênicos tratados com veículo ASYN).
[00167] Análise de contagens de partículas de ASYN- GFP positiva (Figura 12) revelou aumento e perivascular persistente e proteína de marcação fluorescente verde terminal do nervo (GFP) em camundongos transgênicos, mas não os camundongos não transgênicos. Verificaram-se aumentos estatisticamente significativos em contagens totais ASYN-GFP de partícula na retina de camundongos transgênicos em parâmetros antes do início dos tratamentos (*p<0,05 vs. camundongos não transgênicos tratados com veículo) e para as verificações a partir de cerca de 60 dias de tratamentos (**p<0,01 vs. camundongos não transgênicos tratados com veículo). O número de partículas ASYN GFP-positivas foi reduzido em camundongos transgênicos tratados com ASYN com Exemplo 1 (5 mg/kg) após aproximadamente 60 dias de tratamento e que persiste através do ponto de tempo de imagem 90 dias (##p<0,01 vs. com camundongos transgênicos ASYN tratados com veículo).
[00168] Os resultados deste estudo demonstram que a administração do Exemplo 1 (5 mg/kg por dia, por 3 meses) produz mudanças benéficas na patologia da retina ASYN de camundongos transgênicos com superexpressão de ASYN como um modelo de PD/DLB. Estes dados também fornecem medida de evidências adicionais de efeitos benéficos do Exemplo 1 por um método de imagem potencialmente traduzível.

Claims (19)

1. Composto CARACTERIZADO por ser de Fórmula (I):
Figure img0064
em que R1 é H, halogênio, alquil C1-4, ou CF3; R2 é -CF3 ou alquil C1-4 não substituído ou substituído com halogênio ou -CF3; A é um anel heteroaril de 5 membros possuindo um a três átomos de anel heteroátomo selecionados do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre; Y está ausente ou é alquileno C1-4; em que, quando Y está ausente, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam um anel heterocicloalquil monociclíco, não substituído ou substituído com alquil C1-4; e quando Y é alquileno C1-4, R3 e R4 tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam um anel heterocicloalquil monociclíco, não substituído ou substituído com alquil C1-4; ou R3 e Y, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual R3 está ligado, formam um anel heterocicloalquil monociclíco, e R4 é H ou alquil C1-4; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste desde que o composto de Fórmula (I) não seja (R)-N- (1-(1H-Indol-3-il)hexan-2-il)-2-(4-metilpiperazin-1- il)tiazol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é H, flúor, cloro, bromo, metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, sec-butil ou terc- butil.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que: R2 é -CF3; ou R2 é metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, ou terc-butila, cada substituído ou não substituído com fluoro, cloro, bromo, ou -CF3; ou R2 é alquil C1-4 opcionalmente substituído com halogênio ou -CF3; ou R2 é alquil C3-4, não substituído ou substituído com fluoro ou -CF3; ou R2 é butila; ou R2 é propila substituída com -CF3.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que: A é um anel heteroaril de 5 membros com dois ou três átomos de anel heteroátomo selecionado do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre; ou A é um anel heteroaril de 5 membros com dois átomos de anel heteroátomo não-adjacente selecionado do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre; ou A é tiazol, tiadiazol, oxazol, imidazol, ou triazol, ou A é triazol ou tiadiazol; ou A é tiazol.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que: Y está ausente, ou Y é -CH2-, -CH2CH2-, -CH(CH3)-, -(CH2)3-, -C(CH3)2-, — (CH2)4-, -CH((CH2)2CH3)-, -CH(CH(CH3)2)-, -CH(CH2CH3)CH2- , -CH(CH3)CH(CH3)-, -CH(CH3)(CH2)2-, ou -CH2CH(CH3)CH2-; ou Y é -CH2-, -CH2CH2-, ou -CH(CH3)-; ou Y é -CH2CH2-.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que: R3 e R4, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel heterocicloalquil monociclíco, não substituído ou substituído com alquil C1-4; ou R3 e R4, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam azetidina, pirrolidina, piperidina, azepina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, ou 1,1-dioxo-tiomorfolina, cada não substituído ou substituído com C1-4 alquila; ou R3 e R4, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam piperazina, morfolina, ou pirrolidina, cada não substituído ou substituído com C1-4 alquila; ou R3 e R4, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam piperazina ou morfolina, cada não substituído ou substituído com C1-4 alquila; ou R3 e R4, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam piperazina, não substituído ou substituído com C1-4 alquila; ou R3 e R4, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam piperazina ou 4-metil- piperazina.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que: Y é alquileno C1-4, e R3 e Y, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual R3 está ligado, formam um anel heterocicloalquil monociclíco, e R4 é H ou alquil C1-4; ou Y é C1-4 alquileno, R3 e Y, tomados em conjunto com nitrogênio ao qual R3 é ligado, formam pirrolidina ou piperidina.
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que R4 é H ou metil.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é H, R2 é alquil C1-4, A é tiazol, Y está ausente ou é etileno, e R3 e R4, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam N- metilpiperazina.
10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 está numa configuração estereoquímica "R" ou R2 está numa configuração esteroquímica “S”.
11. Composto CARACTERIZADO por ser selecionado a partir do grupo consistindo em:
Figure img0065
Figure img0066
Figure img0067
e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
12. Composto CARACTERIZADO por ser selecionado a partir do grupo consistindo em:
Figure img0068
Figure img0069
e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
13. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é
Figure img0070
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
14. Composição farmacêutica CARACTERIZADA por compreender (a) pelo menos um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, e (b) um excipiente farmaceuticamente aceitável.
15. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende (a) pelo menos um composto ou sal farmaceuticamente aceitável deste conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, e (b) um excipiente farmaceuticamente aceitável, em que R2 está numa configuração estereoquímica "R".
16. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende (a) pelo menos um composto ou sal farmaceuticamente aceitável deste conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, e (b) um excipiente farmaceuticamente aceitável, em que R2 está numa configuração estereoquímica "S".
17. Uso de um composto ou sal farmaceuticamente aceitável, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADO por ser na preparação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição médica associada com a agregação de proteínas.
18. Uso, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença ou condição médica associada com a agregação de proteínas é a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, demência fronto-temporal, demência com corpos de Lewy (doença do corpo de Lewy), doença de Parkinson com demência, atrofia múltipla dos sistemas, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, câncer, melanoma, ou uma doença inflamatória.
19. Método de interferir com o acúmulo de agregados da proteína ou peptídeo numa célula, ou prevenir, retardar, inverter, ou inibir à agregação da proteína ou peptídeo numa célula, CARACTERIZADO por compreender o contato da célula com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto ou sal farmaceuticamente aceitável, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, e/ou com a composição farmacêutica, como definida na reivindicação 14, em que o contato é in vitro ou ex vivo.
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